CN117343048A - 反式-1,4-环己二胺类化合物及其药用组合物和应用 - Google Patents

反式-1,4-环己二胺类化合物及其药用组合物和应用 Download PDF

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丁克
阳建章
常玉
阿鲁·钦奈延
王孝举
黄维雪
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Abstract

本发明公开了通式I所示的一种新化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子以及含有所述化合物的药物组合物，R1、R2、R3、R4、X、Y、Z、Linker等具有在说明书中给出的含义。本发明还涉及此类化合物及其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子的用途，特别是在制备用于预防和/或治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物中的用途。

Description

反式-1,4-环己二胺类化合物及其药用组合物和应用
技术领域
本发明属于化学医药领域，特别是涉及反式-1,4-环己二胺类化合物及其药用组合物和应用。
背景技术
蛋白激酶是细胞功能的关键调节分子，构成了最大且功能最多样的基因家族之一。蛋白激酶通过底物蛋白的磷酸化，指导许多蛋白的活动、定位以及总体功能，并且参与几乎所有细胞活动。蛋白激酶的表达、活化、定位等异常，与多种疾病的发生、发展密切相关，是肿瘤、炎症等多种疾病的重要驱动因子。截止到2020年12月31日，FDA共计批准了62个激酶抑制剂药物上市。研宄发现，蛋白的非激酶功能在肿瘤等疾病中发挥重要作用。文献已经报道了CDK6、FAK、EGFR、PIPK3、PDK1、BRAF、CRAF、CHK2、ZAP70、AKT、Aurora A等激酶的非激酶功能。因此，单纯抑制激酶的活性无法完全抑制激酶的非激酶功能，从而带来疗效低、耐药等潜在不利影响。因此，开发蛋白降解剂有望全面抑制激酶的酶活和非激酶功能，发挥强效治疗作用。而基于PROTAC原理的蛋白降解剂是目前最为成功和成熟的蛋白降解策略，并成功用于多个激酶及其他靶标的降解剂开发。
PROTAC特指一类可以特异性识别并诱导降解靶蛋白的小分子化合物；分子结构由
靶蛋白识别配体、Linker和E3识别配体三部分组成。PROTAC的优点是不但有效抑制靶蛋白的激酶活性，而且可以快速降解清除靶蛋白。理论上只需要催化量的药物，就可以降解细胞内几乎所有的蛋白质(包括膜蛋白)，故具有较高的安全性、耐药性和广阔的应用前景。目前已经开发成功了针对ERR、ABL、BET、CDK4/6等靶蛋白的降解剂，结果表明其不但能治疗基因驱动型肿瘤的增殖，也能克服抑制剂耐药。2018年，辉瑞公司宣布投资8.3亿美元进行基于PROTAC技术的蛋白降解剂药物研发。2019年3月，药明康德的合作伙伴Arinas公司宣布，其开发的针对雄激素受体的蛋白降解剂ARV-110进入临床研宄；这是全球首个进入临床研宄阶段的蛋白降解剂。
CDK12/13(Cyclin-dependent kinase 12/13)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDKs)的成员，与Cyclin K形成复合物发挥生物学功能。CDK12/13分别含有1490、1512个氨基酸，且享有46％的同源性，激酶区域由300个氨基酸组成其同源性高达92％。CDK12/13与Cyclin K形成复合物通过磷酸化RNA聚合酶II(RNA PolII)C端结构域(CTD)，CTD由YSPTSPS七个氨基酸组成的高度重复序列，在人类中，CTD包括一个52重复单元。CDK12/13主要对Ser2进行磷酸化从而调节转录，及转录后的mRNA的加工。遗传研究表明，CDK12通过抑制内含子聚腺苷酸化位点的切割，促进转录出全长基因的产物，许多同源重组修复基因(如：BRCA1/2、ATM、ATR、FANCD2、FANCI等)包含更多的内含子多腺苷化位点，因此，这些基因的表达对CDK12的丢失或抑制更为敏感。与其他转录CDKs相比CDK12/13的N末端含有额外的精氨酸/富含丝氨酸(RS)基序，RS基序常见于参与前mRNA剪接的蛋白质中。Proline-rich motifs(PRIM)的基序也见于N-和C-末端，可能作为SH3，WW或含有肌动蛋白结合蛋白(profilin)结构域的蛋白质的结合位点。这些结构提示CDK12/13可能存在非激酶功能(如:蛋白-蛋白相互作用)在mRNA剪接，mRNA 3'末端加工发挥着重要作用。因此，仅使用CDK12/13的激酶抑制剂做为研究CDK12/13生物学功能的探针工具分子是远远不够的。利用蛋白水解靶向嵌合体(PROTACs)诱导CDK12/13降解，同时抑制其激酶功能和非激酶功能，在研究CDK12/13的生物学功能和疾病治疗当中具有巨大的潜力，近年来引起了科学家越来越大的兴趣。
发明内容
基于此，本发明提供了一类反式-1,4-环己二胺类化合物及其作为CDK12/13降解剂的应用，该类化合物能够有效地、高选择性地降解CDK12/13蛋白激酶，且能抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。
在本发明的第一方面中，提供一种反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，所述化合物具有式(I)所示的结构：
其中，R1选自下组：H、氰基、卤素、卤代甲基、卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代乙基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷氧基；
X选自下组：CH2或CO；
Y选自下组：N、CH或C-卤素；
Z选自下组：N或CH；
R2选自下组：-C(R6)2R7、-(CH2)nR7；其中，n选自：0、1或2；
各个R6各自独立选自下组：氢、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、卤代甲基、甲氧基、卤代甲氧基、乙基、卤代乙基、乙氧基、卤代乙氧基、含O、S或N的3-8元杂环；或者两个R6通过相连的C或杂原子一同形成含n个杂原子的3-7杂环；其中n＝0、1、2或3，杂原子选自下组：O、N、S；
R7选自下组：
1)氰基、C1-C5烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3～C10环烷基、取代或未取代的含O、S或N的3-8元芳环或饱和环、含n个杂原子的8-12元稠环、螺环或桥环；其中n＝1、2或3，杂原子选自下组：O、N、S；
2)
其中，A、B、C、D、E各自独立选自下组：CH、N或CR8；
R8选自下组：卤素、氰基、羟基、氨基、硝基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基、C3-C8环烷基；
R10选自下组：H、C1-C4烷基；
R3、R4独立选自：H、卤素、三氟甲基、羟基；
Linker选自下组： 其中n＝0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12；其中上述各个结构书写时不具有方向，即，例如，/>意在包括/>
上述各式中，所述的碳环或杂环可以是单环、稠环、桥环或螺环，且可以为饱和或者部分不饱和的形式。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，
其中X选自下组：CH2或CO；
Y选自下组：CH；
Z选自下组：N或CH。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其中R1选自下组：H、氰基、卤素、卤代甲基、卤代甲氧基。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其中所述的R2选自：-C(R6)2R7；
其中，各个R6各自独立选自下组：氢、卤素、甲基、卤代甲基、羟基、氨基、甲氧基；
R7选自下组：
1)C1-C5烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3～C10环烷基、取代或未取代的含O、S或N的3-8元杂芳环或饱和杂环；
2)
其中A、B、C、D、E分别独立地选自：CH、N或CR8；
R8选自下组：卤素、氰基、羟基、氨基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其中R3和R4各自独立选自下组：H、F、Cl。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其中Linker选自下组： 其中n＝0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。
在一些实施方式中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，其特征在于，具有式(II)所示结构：
其中，R1的定义如前所述；
X，U各自独立选自下组：CH2或CO；
V选自下组：NH或O；
n选自下组：0、1、2或3；
R3任选自下组：H、F、Cl。
在其中一些实施例中，所述的反式-1,4-环己二胺类化合物或者其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：
1)2-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)乙酰胺；
2)3-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丙酰胺；
3)4-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丁酰胺；
4)5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)五酰胺；
5)6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)己酰胺；
6)7-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)庚酰胺；
7)8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)八酰胺；
8)9-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)壬酰胺；
9)10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)癸酰胺；
10)2-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)乙酰胺；
11)3-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙胺；
12)5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)五酰胺；
13)6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)己酰胺；
14)8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)八酰胺；
15)10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)癸酰胺；
16)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
17)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
18)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
19)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
20)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
21)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
22)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((E)-3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙烯酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
23)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
24)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
25)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
26)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
27)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲；
28)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲；
29)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲；
30)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲；
31)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基嘧啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
32)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
33)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
34)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
35)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-((2-(1-甲基-2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨酸)哌嗪-1-基)苯基)尿素。
在本发明的第二方面中，提供一种本发明第一方面所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备CDK12/13降解剂中的应用。
在本发明的第三方面中，提供一种本发明第一方面的反式-1,4-环己二胺类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备预防和/或治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物中的应用。
在一些实施方式中，所述的CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病优选为：前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尤文肉瘤、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤中的任一种。
在本发明的第四方面中，提供一种预防和/或治疗肿瘤的药用组合物，包括活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分包括本发明第一方面的反式-1,4-环己二胺类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的反式-1,4-环己二胺类化合物，可以有效地降解CDK12蛋白激酶，可以用于制备预防或者治疗由CDK12蛋白激酶介导的疾病的药物，比如前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尤文肉瘤、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤等，同时具有较强的降解活性、蛋白激酶降解选择性的特点。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了本发明代表性化合物对MDA-MB-231细胞中CDK12/13降解活性测试的结果
图2显示了本发明化合物对多种三阴性乳腺癌细胞增殖的抑制活性与浓度关系的折线图
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现本发明的反式-1,4-环己二胺类化合物具有出色的CDK12蛋白激酶降解活性，从而进行了一系列合成和生物活性试验。在此基础上完成了本发明。
本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R10、R11等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C8烷基”中“C1-C8”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的基团。术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2,2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基、环己基等。
本文所用术语“烷氧基”代表烷基-氧基基团，其中烷基的定义如上所示。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”意指包括氯、氟、溴和碘。
本发明包括式(I)化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐、其立体异构体及其前药分子。术语“游离形式”指以非盐形式的化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式(I)化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等制备的盐，也包括得自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
Berg等，“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.’1977：66：1-19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。
本发明的化合物具有至少一个不对称或手性中心，因此都以立体异构体的形式存在。每一个手性中心为“R”或“S”构型，具体取决于手性碳原子周围取代基的构型。本文所使用的术语“R”和“S”是如IUPAC1974，E部分的建议，基本立体化学(Recommendations forSection E,Fundamental Stereochemistry),纯粹与应用化学(PureAppl.Chem.),1976,45:13-30中定义的构型。各种具体立体异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体，以及对映异构体或非对映异构体的混合物。化合物的单个立体异构体可以由含有不对称或手性中心的市售起始材料合成制备，或通过制备外消旋混合物然后应用本领域普通技术人员熟知的拆分方法制备。这些拆分方法的示例如下：(1)将对映异构体混合物连接到手性助剂上，通过重结晶或色谱分离所得非对映异构体混合物，并任选从助剂中释放光学纯产物，如Furniss、Hannaford、Smith和Tatchell，沃格尔实用有机化学教科书(Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry)，第5版(1989)，朗文科技(Longman Scientific&Technical)，埃塞克斯CM202JE，英格兰，中所述；(2)在手性色谱柱上直接分离光学对映体混合物；(3)分级再结晶法。
本发明的化合物可以以不同的互变异构形式存在，并且所有这些形式都包括在本发明的范围内。
本发明的化合物也可以是前药形式。如本文所用，术语“前药”是指在代谢时(例如，在体内或体外)产生活性化合物的化合物。在一些实施方式中，前药可以是无活性的，或具有比游离药物低的活性，但可以提供有利于处理、给药或代谢的特性。本发明的示例性前药部分可以通过核苷酸的羟基、氨基、磷酸酯或硫代磷酸酯主链与游离药物连接，并且可以包含酯、氨基甲酸酯、羰基、硫酯、酰胺、异氰酸酯、脲、硫脲或其他生理上可接受的代谢不稳定部分。在一些实施方式中，前药通过酶水解被激活。
本发明还包括同位素标记的化合物，其与式(I)或式(II)中列举的那些相同，但是其中一个或多个原子被一个原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子所取代。适合包含在本公开的化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯，例如但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O、31P、35S、18F和36Cl。用较重的同位素(例如氘，即2H)进行取代可以提供某些治疗优势，这些优势源于更高的代谢稳定性，例如体内半衰期增加或剂量要求降低，因此在某些情况下可能是优选的。该化合物可以结合正电子发射同位素用于医学成像的和用于正电子发射断层扫描(PET)研究以确定受体分布。适合掺入式(I)或(II)化合物中的正电子发射同位素是11C、13N、15O和18F。同位素标记的式(I)或(II)化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术制备，或通过类似于本文所述的方法，使用合适的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂制备。
本发明的化合物可以与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等以溶剂化和非溶剂化形式存在，并且本公开旨在涵盖溶剂化和非溶剂化形式。在一个实施方式中，该化合物是无定形的。在一个实施方式中，该化合物是单一的多晶型物。在另一个实施方式中，该化合物是多晶型物的混合物。在另一个实施方式中，该化合物是结晶形式。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的CDK12降解活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解与CDK12活性或表达异常相关的疾病。
本发明的药物组合物包含有效量范围内的，例如，安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。“有效量”是指足以引发所需生物反应(例如，治疗病症)的量。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-3000(活性剂量范围3-30mg/kg)mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-2000mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选6～600mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
治疗用途和方法
如上所述，本发明的化合物具有优异的CDK12降解活性，因此所述化合物或包含所述化合物的组合物可用于治疗、预防和缓解与CDK12活性或异常表达相关的疾病。在一些实施方式中，本发明公开的是本发明公开的反式-1，4-环己二胺化合物(例如，式(I)或式(II)的化合物)或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药分子在制备用于预防和/或治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物中的用途。在一些实施方式中，本发明公开的是本发明公开的反式-1，4-环己二胺化合物(例如，式(I)或式(I I)的化合物)或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药分子，在用于预防和/或治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病中的用途。在一些实施方式中，本发明公开了一种在有需要的受试者中治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的方法，包括向受试者施用有效量的本发明的反式-1，4-环己二胺化合物(例如，式(I)或式(II)的化合物)或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药分子。在一些实施方式中，由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病包括：前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尤文肉瘤、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠道间质瘤、白血病、组织细胞淋巴瘤、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌和神经胶质瘤。
当用于本发明所公开的方法中时，所公开的化合物和组合物可以与其他已知疗法组合使用。如本文所用，“联合”施用是指在受试者患有疾病的过程中向受试者递送两种(或多种)不同的治疗，例如，两种或多种治疗是在受试者被诊断患有疾病之后和疾病已经治愈或消除，或者治疗因其他原因停止之前进行的。在一些实施方式中，当第二种治疗开始递送时，一种治疗的递送仍在进行，因此在给药方面存在重叠。这有时在本文中被称为“同时”或“同时递送”。在其他实施方式中，一种治疗的递送在另一种治疗的递送开始之前结束。在任一情况的一些实施方式中，由于联合给药，治疗更有效。例如，第二次治疗更有效，例如，与在没有施用第一次治疗的情况下施用第二次治疗相比，第二次治疗的施用量更少可以看到相同的效果，或者第二次治疗在更大程度上减轻了症状；或者在第一次治疗中看到了相似的效果。在一些实施方案中，递送使得与病症相关的症状或其他参数的减少程度大于在不存在另一种治疗的情况下仅递送一种治疗时所观察到的。两种处理的效果可以是部分相加的、完全相加的或大于相加的。递送可以使得递送的第一种治疗的效果在递送第二种治疗时仍然可检测到。
本文公开的化合物或组合物和至少一种另外的治疗剂可以同时在相同或分开的组合物中给药，或者顺序给药。对于顺序给药，可以首先给药本文所述的化合物，然后可以给药另外的药剂，或者可以颠倒给药顺序。
在一些实施方式中，本文所述的化合物与其他治疗性治疗方式组合施用，包括手术、放射、移植(例如，干细胞移植、骨髓移植)、化学疗法、免疫疗法、冷冻疗法和/或热疗法。这样的联合疗法使允许施用的药剂和/或其他药剂的剂量更低，从而避免与各种疗法相关的可能的毒性或并发症。
在一些实施方式中，本文所述的化合物与至少一种另外的治疗剂如化疗剂一起施用。在某些实施方式中，本文所述的化合物与一种或多种另外的化学治疗剂组合施用。化疗剂可以是在美国国家癌症研究所公布的“癌症药物A到Z清单(A to Z List of CancerDrugs)”中确定的化疗剂。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。本发明中用到的起始原料未经特别说明，均为商业购买。
实施例1：2-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)乙酰胺(YJZ7059)
步骤1：4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物2)的制备
将磷酸钾(31g,146mmol)、反式环己烷-1,4-二胺(29.3g,256.4mmol)、4-(4-溴苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1(25g,73.26mmol)、CuI(1.39g 7.3mmol)和D-脯氨酸(843mg,7.3mmol)溶于无水DMSO(500mL)中。然后将所得悬浮氩气保护，置换三次。然后将反应混合物在100℃加热搅拌10小时后，使用硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤滤渣2-3次。减压蒸发滤液后并通过硅胶柱纯化，得到目标化合物12g，为灰白色固体(产率44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.74(d,J＝8.8Hz,2H),6.49(d,J＝8.9Hz,2H),4.88(d,J＝8.2Hz,1H),3.42(t,J＝5.1Hz,4H),3.03(s,1H),2.83(t,J＝5.1Hz,4H),2.76(s,1H),1.95(d,J＝12.8Hz,2H),1.85(d,J＝12.4Hz,2H),1.41(s,9H),1.26(q,J＝10.9Hz,2H),1.11(q,J＝11.6Hz,2H).HRMS(ESI)for C21H34N4O2[M+H]+,calcd:375.2755,found:375.2739.
步骤2：4-(4-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物3)的制备
tert-butyl
4-(4-(((1r,4r)-4-((5-cyanopyridin-2-yl)amino)cyclohexyl)amino)phenyl)piperazine-1-carboxylate(3)
将4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯2(9g,24mmol)溶于DMF(40mL)中的溶液中，加入5-氰基-2-氟吡啶(2.94g，24mol)，Cs2CO3(9.4g，28.9mol)，混合物在室温下搅拌3h。然后过滤反应液，并减压旋蒸浓缩滤液。经柱层析纯化，得到白色固体10.6g(产率92％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(d,J＝2.3Hz,1H),7.63(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.52(d,J＝7.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.6Hz,2H),6.52(dd,J＝9.0,3.4Hz,3H),4.92(d,J＝8.3Hz,1H),3.76(s,1H),3.42(t,J＝5.2Hz,4H),3.12(d,J＝8.3Hz,1H),2.84(t,J＝5.1Hz,4H),1.98(t,J＝11.7Hz,4H),1.41(s,9H),1.32(t,J＝12.2Hz,2H),1.22(t,J＝13.3Hz,2H).HRMS(ESI)for C27H36N6O2[M+H]+,calcd:477.2973,found:477.2949.
步骤3：24-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物4)的制备
tert-butyl
4-(4-(3-benzyl-1-((1r,4r)-4-((5-cyanopyridin-2-yl)amino)cyclohexyl)ureido)phenyl)piperazine-1-carboxylate(4)
将4-(4-(((1r,4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯3(10.6g,22.25mmol)，DIPEA(8.6g，66.76mmol)，异氰酸苄酯(8.9g，66.76mmol)溶于15mL DMF中。混合物在95℃搅拌4小时。减压除去溶剂，柱层析纯化得白色固体7.1g(产率52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.60(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,2H),7.17(t,J＝8.4Hz,3H),7.06–6.96(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),4.31–4.21(m,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.46(t,J＝5.2Hz,5H),3.16(t,J＝5.2Hz,4H),1.90(d,J＝11.7Hz,2H),1.77(d,J＝12.1Hz,2H),1.42(s,9H),1.31(q,J＝12.1,11.6Hz,2H),1.09(q,J＝12.2,11.6Hz,2H).HRMS(ESI)for C21H34N4O2[M+H]+,found:610.3505.
步骤4：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物5)的制备
将4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯4(7g，11.5mmol)溶于DCM(20mL)中，加入TFA(10mL)，并在50℃下搅拌回流过夜。然后在减压下将反应混合物浓缩，并通过柱层析纯化所得白色固体4.6g(产率79％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.60(d,J＝6.7Hz,1H),7.53(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝12.7,7.3Hz,3H),7.03–6.93(m,4H),6.49(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.2Hz,1H),4.26(tt,J＝12.0,3.0Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.51(s,1H),3.10(t,J＝5.0Hz,4H),2.83(t,J＝5.0Hz,4H),1.91(d,J＝12.2Hz,2H),1.77(d,J＝10.5Hz,2H),1.31(q,J＝13.8,12.9Hz,2H),1.24(s,1H),1.10(q,J＝11.4Hz,2H).13CNMR(151MHz,DMSO-d6)δ159.71,157.27,153.55,151.202,141.80,131.92,128.47(5C),127.14(4C),126.68,119.59,115.74,94.41,53.36,49.16(2C),46.07(2C),43.93,40.52,31.77(2C),30.66(2C).HRMS(ESI)for C30H35N7O[M+H]+,calcd:510.2976,found:510.2956.
步骤5：2-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)乙酰胺(化合物YJZ7059)的制备
将KHCO3(36mg，0.36mmol)加入混有化合物5(62mg，0.12mmol)、化合物6(94mg，0.24mmol)的DMF(8mL)中。在80℃搅拌5小时后，过滤反应液。减压旋蒸浓缩滤液通过柱层析纯化得白色固体的31mg(产率31％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),11.03(s,1H),8.82(d,J＝8.5Hz,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.87(dd,J＝8.5,7.3Hz,1H),7.61(d,J＝7.3Hz,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(t,J＝5.6Hz,3H),7.02(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.61(t,J＝6.2Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.27(t,J＝12,3.6Hz,1H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.50(s,1H),3.38–3.35(m,4H),3.32(d,J＝20.7Hz,2H),2.90–2.81(m,1H),2.74(h,J＝6.7Hz,4H),2.60–2.52(m,2H),2.06(m,1H),1.92(d,J＝11.9Hz,2H),1.78(d,J＝11.9Hz,2H),1.32(q,J＝12.1,11.3Hz,2H),1.11(q,J＝12.5Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.19,170.46,170.30,168.55,167.28,159.69,157.32,153.54,150.34,141.73,136.92,136.81,132.04,131.78,128.68,128.50(4C),127.13(4C),126.72,124.71,119.57,118.46,116.24,115.90,94.46,61.76,60.25,53.41(2C),49.35,49.02,47.96(2C),43.92,40.42,31.76(2C),31.30,30.67,22.33,21.23.HRMS(ESI)forC45H46N10O6[M+H]+,calcd:823.3675,found:823.3652.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),11.77min,100％purity.
实施例2：3-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丙酰胺(化合物YJZ8026)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),10.47(s,1H),8.56(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.9Hz,1H),7.65–7.57(m,2H),7.53(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(t,J＝7.4Hz,3H),7.08–6.90(m,4H),6.49(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.1Hz,1H),5.11(dd,J＝12.5,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝17.4,4.8Hz,2H),4.15(d,J＝6.3Hz,2H),3.51(s,1H),3.25(q,J＝5.2Hz,4H),3.17(d,J＝5.1Hz,2H),2.91–2.79(m,1H),2.76–2.66(m,4H),2.66–2.57(m,4H),2.10–2.00(m,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.77(d,J＝11.6Hz,2H),1.38–1.25(m,2H),1.18–1.02(m,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.19,171.88,170.26,167.83,167.12,159.72,157.26,153.56,150.67,141.79,136.92,136.52,132.03,131.94,128.63,128.48(4C),127.15(4C),126.91,126.68,119.61,118.72,117.28,115.87,94.38,53.77,53.41,53.00(2C),49.32,49.04,47.68(2C),43.93,40.52,34.36,31.76(2C),31.27,30.65,22.45.HRMS(ESI)for C46H48N10O6[M+H]+,calcd:837.3831,found:837.3802.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),7.34min,97.7％purity.
实施例3：4-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丁酰胺(化合物YJZ7058)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.71(s,1H),8.50(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.84–7.80(m,1H),7.59(dd,J＝11.4,7.6Hz,2H),7.49(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝13.1,7.3Hz,3H),7.02–6.91(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.56(t,J＝6.2Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.0Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.14(t,J＝5.0Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.64–2.54(m,2H),2.52(s,2H),2.52–2.50(m,4H),2.41(t,J＝7.1Hz,2H),2.10–2.04(m,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.84(p,J＝7.1Hz,2H),1.77(d,J＝11.5Hz,2H),1.31(q,J＝13.0Hz,2H),1.09(q,J＝14.0,13.3Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.22,172.53,170.25,168.24,167.12,159.70,157.27,153.55,150.61,141.76,137.13,136.59,131.92,131.86,128.58,128.49(4C),127.14(4C),126.70,126.61,119.58,118.66,117.24,115.77,94.44,57.36,53.38,53.11(2C),49.37,49.08,48.05(2C),43.93,40.49,35.18,31.77(2C),31.39,30.65,22.48,22.43.HRMS(ESI)for C47H50N10O6[M+H]+,calcd:851.3988,found:851.3970.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),8.58min,100％purity.
实施例4：5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)五酰胺(化合物YJZ8005)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.71(s,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.89–7.80(m,1H),7.61(t,J＝7.9Hz,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝12.7,7.3Hz,3H),7.04–6.93(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.57(t,J＝6.2Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12.0,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝5.0Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.64–2.53(m,2H),2.53–2.49(m,6H),2.36(t,J＝7.2Hz,2H),2.10-2.04(m 1H),1.91(d,J＝9.9Hz,2H),1.77(d,J＝10.8Hz,2H),1.67(p,J＝7.4Hz,2H),1.54(p,J＝7.3Hz,2H),1.31(q,J＝13.5,12.4Hz,2H),1.10(q,J＝12.5,12.0Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.25,172.51,170.25,168.15,167.13,159.69,157.30,153.54,150.62,141.73,136.99,136.60,131.93,128.54,128.48(4C),127.14(4C),126.78,126.71,119.58,118.80,117.45,115.78,94.43,7.23,57.85,56.51,53.37,53.23(2C),49.36,49.06,48.06(2C),43.92,40.43,36.82,31.75(2C),31.37,30.65,26.06,23.24,22.46.HRMS(ESI)for C48H52N10O6[M+H]+,calcd:865.4144,found:865.4133.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),10.69min,97.9％purity.
实施例5：6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)己酰胺(化合物YJZ7057)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.71(s,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.9Hz,1H),7.64–7.56(m,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝13.2,7.3Hz,3H),7.02–6.93(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.57(t,J＝6.1Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12.0,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.51(s,1H),3.16(t,J＝4.8Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.65–2.52(m,2H),2.50–2.45(m,6H),2.32(t,J＝7.4Hz,2H),2.11–2.04(m,1H),1.91(d,J＝8.7Hz,2H),1.77(d,J＝10.8Hz,2H),1.67(p,J＝7.5Hz,2H),1.51(p,J＝7.5Hz,2H),1.37(p,J＝7.9Hz,2H),1.30(q,J＝12.4Hz,2H),1.10(q,J＝12.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.24,172.51,170.25,168.16,167.13,159.69,157.29,153.55,150.63,141.75,137.00,136.58,131.93,131.90,128.55,128.48(4C),127.14(4C),126.74,126.70,119.58,118.78,117.42,115.77,94.44,58.15,53.37,53.28(2C),49.3,49.07,48.09(2C),43.92,40.47,36.96,31.76(2C),31.39,30.65,26.90,26.41,25.20,22.46.HRMS(ESI)for C49H54N10O6[M+H]+,calcd:879.4301,found:879.4284.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),13.27min,98.8％purity.
实施例6：7-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)庚酰胺(化合物YJZ8002)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.71(s,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.9Hz,1H),7.65–7.56(m,2H),7.47(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝13.2,7.3Hz,3H),7.03–6.92(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.2Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12.0,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.16(t,J＝4.8Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.64–2.52(m,2H),2.50–2.43(m,6H),2.31(t,J＝7.5Hz,2H),2.10–2.04(m,1H),1.90(d,J＝10.0Hz,2H),1.76(d,J＝10.5Hz,2H),1.64(p,J＝7.3Hz,2H),1.47(p,J＝7.1Hz,2H),1.41–1.26(m,6H),1.10(q,J＝12Hz,2H,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.25,172.54,170.25,168.14,167.13,159.69,157.31,153.54,150.61,141.73,136.99,136.59,131.93,131.89,128.53,128.49(4C),127.14(4C),126.77,126.71,119.58,118.80,117.45,115.78,94.44,58.28,53.37,53.28(2C),49.37,49.04,48.05(2C),43.92,40.43,36.97,31.75(2C),31.38,30.65,28.88,27.15,26.53,25.23,22.45.HRMS(ESI)for C50H56N10O6[M+H]+,calcd:893.4457,found:893.4446.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),17.68min,99.6％purity.
实施例7：8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)八酰胺(化合物YJZ7061)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),9.71(s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.86–7.81(m,1H),7.61(t,J＝7.2Hz,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝14.6,7.2Hz,3H),7.04–6.92(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝4.9Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.64–2.52(m,2H),2.49–2.45(m,6H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),2.10–2.04(m,1H),1.90(d,J＝8.5Hz,2H),1.76(d,J＝10.6Hz,2H),1.63(p,J＝7.2Hz,2H),1.46(p,J＝7.1Hz,2H),1.38–1.20(m,8H),1.10(q,J＝12.9Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.24,172.53,170.25,168.15,167.13,159.70,157.28,153.56,150.63,141.77,136.99,136.58,131.94,131.91,128.56,128.48(4C),127.14(4C),126.77,126.70,119.59,118.79,117.45,115.78,94.44,58.34,53.36,53.31(2C),49.37,49.06,48.09(2C),43.92,40.48,36.95,31.76(2C),31.39,30.65,29.08,28.90,27.28,26.65,25.20,22.46.HRMS(ESI)for C51H58N10O6[M+H]+,calcd:907.4614,found:907.4589.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),9.31min,98.8％purity.
实施例8：9-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)壬酰胺(化合物YJZ7152)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),9.70(s,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(t,J＝7.9Hz,1H),7.61(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝13.1,7.3Hz,3H),7.02–6.93(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.2Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝4.9Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.64–2.52(m,2H),2.49–2.44(m,6H),2.29(t,J＝7.5Hz,2H),2.10–2.03(m,1H),1.91(d,J＝11.9Hz,2H),1.76(d,J＝12.3Hz,2H),1.63(p,J＝7.1Hz,2H),1.45(p,J＝7.2Hz,2H),1.36–1.27(m,10H),1.10(q,J＝11.8,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.22,172.50,170.24,168.14,167.12,159.70,157.26,153.55,150.62,141.80,137.01,136.57,131.94,131.92,128.58,128.47(4C),127.14(4C),126.74,126.68,119.58,118.76,117.44,115.77,94.43,58.39,53.36,53.32(2C),49.37,49.07,48.11(2C),43.93,40.52,36.99,31.77(2C),31.40,30.66,29.30,29.16,28.93,27.41,26.73,25.24,22.46.HRMS(ESI)for C52H60N10O6[M+H]+,calcd:921.4770,found:921.4754.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),20.02min,99.0％purity.
实施例9：10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)癸酰胺(化合物YJZ7091)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),9.70(s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(dd,J＝8.4,7.3Hz,1H),7.61(t,J＝6.9Hz,2H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.16(dd,J＝7.9,6.5Hz,3H),6.98(q,J＝9.0Hz,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.57(t,J＝6.2Hz,1H),5.15(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.14(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝5.0Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.65–2.52(m,2H),2.49–2.44(m,6H),2.29(t,J＝7.5Hz,2H),2.10–2.03(m,1H),1.90(d,J＝11.7Hz,2H),1.76(d,J＝11.9Hz,2H),1.63(p,J＝7.3Hz,2H),1.45(p,J＝7.4Hz,2H),1.34–1.26(m,12H),1.10(q,J＝12.6Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.25,172.54,170.25,168.14,167.13,159.69,157.30,153.55,150.63,141.74,136.98,136.58,131.94,131.90,128.54,128.49(4C),127.14(4C),126.77,126.70,119.58,118.79,117.45,115.78,94.44,58.38,53.36,53.29(2C),49.36,49.07,48.07(2C),43.92,40.45,36.98,31.75(2C),31.39,30.65,29.37,29.30,29.14,28.91,27.42,26.71,25.24,22.45.HRMS(ESI)for C53H62N10O6[M+H]+,calcd:935.4927,found:935.4903.HPLC analysis:MeOH-H2O(85:15),8.70min,99.6％purity.
实施例10：2-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)乙酰胺(化合物YJZ8048)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),10.48(s,1H),8.31(d,J＝1.8Hz,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),8.04(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.89(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝8.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝13.2,7.2Hz,3H),7.05–6.96(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.57(t,J＝6.1Hz,1H),5.13(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.49(s,1H),3.30(s,2H),3.28(t,J＝4.8Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.70(t,J＝4.8Hz,4H),2.64–2.52(m,2H),2.10–2.03(m,1H),1.91(d,J＝11.5Hz,2H),1.77(d,J＝9.6Hz,2H),1.31(q,J＝11.3,9.8Hz,2H),1.10(q,J＝12.6Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.26,170.38,169.88,167.46,167.22,159.69,157.31,153.55,150.62,144.95,141.71,133.15,131.96,128.65,128.50(4C),127.14(4C),126.72,125.62,125.07,124.54,119.59,115.96,113.91,94.44,62.04,53.38,53.14(2C),49.45,49.07,48.01(2C),43.93,40.43,31.75(2C),31.40,30.66,22.51.HRMS(ESI)for C45H46N10O6[M+H]+,calcd:823.3675,found:823.3665.HPLCanalysis:MeOH-H2O(75:25),6.81min,98.3％purity.
实施例11：3-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙胺(化合物YJZ8113)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.81(s,1H),8.29(dd,J＝10.6,2.0Hz,2H),7.96–7.85(m,2H),7.61(d,J＝8.9Hz,1H),7.49(s,1H),7.31–7.25(m,2H),7.20–7.14(m,3H),7.08–6.97(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.62–5.56(m,1H),5.13(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.30–4.23(m,1H),4.15(d,J＝6.5Hz,2H),3.49(s,1H),3.20(t,J＝4.9Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.74(t,J＝7.1Hz,2H),2.63(t,J＝7.2Hz,2H),2.62–2.52(m,6H),2.09–2.03(m,1H),1.91(s,2H),1.77(d,J＝12.2Hz,2H),1.35–1.27(m,2H),1.10(q,J＝11.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.24,171.79,170.39,167.49,167.22,159.70,157.28,153.55,150.57,145.49,141.76,133.26,131.95,128.64,128.48(4C),127.14(4C),126.70,125.28,125.17,124.02,119.59,115.87,113.32,94.44,53.89,53.37,52.97(2C),49.43,49.08,48.26,48.13,43.92,40.47,34.82,31.76(2C),31.41,30.66,22.52.HRMS(ESI)for C46H48N10O6[M+H]+,calcd:837.3831,found:837.3818.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),5.94min,98.8％purity.
实施例12：5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)五酰胺(化合物YJZ8125)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),10.69(s,1H),8.29(d,J＝5.7Hz,2H),7.94(d,J＝8.4Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,2H),7.17(dd,J＝13.8,7.3Hz,3H),6.99(q,J＝8.7Hz,4H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.26(t,J＝11.7Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.18(t,J＝4.9Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.64–2.53(m,2H),2.51–2.47(m,4H),2.45(t,J＝7.4Hz,2H),2.35(t,J＝7.2Hz,2H),2.10–2.02(m,1H),1.90(d,J＝12.1Hz,2H),1.76(d,J＝12.0Hz,2H),1.66(p,J＝7.3Hz,2H),1.53(p,J＝7.3Hz,2H),1.35–1.27(m,2H),1.10(q,J＝10.6,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.25,172.84,170.39,167.51,167.24,159.70,157.29,153.55,150.63,145.64,141.77,133.23,131.94,128.57,128.48(4C),127.14(4C),126.69,125.15,125.12,123.96,119.59,115.79,113.30,94.43,57.98,53.37(2C),53.28,49.42,49.07,48.10(2C),43.92,40.48,36.82,31.76(2C),31.41,30.65,26.24,23.28,22.52.HRMS(ESI)for C44H43N9O6[M+H]+,calcd:794.3409,found:794.3370.HPLC analysis:MeOH-H2O(73:27),8.71min,99.2％purity.
实施例13：6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)己酰胺(化合物YJZ8051)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),10.59(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),8.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.91(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝6.5Hz,0H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.20–7.13(m,3H),7.03–6.92(m,4H),6.46(d,J＝8.9Hz,1H),5.57(t,J＝6.1Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.25(tt,J＝12,3.0Hz,1H),4.14(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.16(t,J＝4.8Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.63–2.53(m,2H),2.49(t,J＝4.9Hz,4H),2.41(t,J＝7.4Hz,2H),2.32(t,J＝7.4Hz,2H),2.10–2.02(m,1H),1.90(d,J＝11.8Hz,2H),1.76(d,J＝11.9Hz,2H),1.65(p,J＝7.5Hz,2H),1.50(p,J＝7.3Hz,2H),1.35(p,J＝8.1Hz,2H),1.31(q,J＝11.3,9.8Hz,2H),1.10(q,J＝11.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.26,172.86,170.38,167.50,167.23,159.68,157.31,153.54,150.62,145.57,141.72,133.23,131.93,128.53,128.49(4C),127.13(4C),126.71,125.18,125.15,123.97,119.58,115.78,113.29,94.43,58.18,53.36,53.27(2C),49.42,49.06,48.06(2C),43.91,40.42,36.97,31.74(2C),31.39,30.65,27.00,26.45,25.26,22.52.HRMS(ESI)for C49H54N10O6[M+H]+,calcd:879.4301,found:879.4287.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),10.3min,98.7％purity.
实施例14：8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)八酰胺(化合物YJZ8054)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.58(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),8.26(d,J＝1.8Hz,1H),7.91(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.19–7.14(m,3H),7.02–6.93(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝5.0Hz,4H),2.92–2.84(m,1H),2.63–2.52(m,2H),2.47(t,J＝5.0Hz,4H),2.40(t,J＝7.4Hz,2H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),2.10–2.02(m,1H),1.90(d,J＝12.8Hz,2H),1.76(d,J＝10.9Hz,2H),1.62(p,J＝7.1Hz,2H),1.46(p,J＝7.1Hz,2H),1.35–1.27(m,8H),1.10(q,J＝11.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.23,172.85,170.37,167.49,167.23,159.70,157.27,153.55,150.63,145.60,141.77,133.24,131.94,128.56,128.47(4C),127.14(4C),126.69,125.16,125.13,123.93,119.58,115.77,113.27,94.44,58.34,56.49,55.37,53.36,53.32,49.42,49.07,48.10,43.92,40.49,36.99,31.76,31.40,30.65,29.14,29.01,27.28,26.67,25.22,22.52,19.02.HRMS(ESI)for C51H58N10O6[M+H]+,calcd:907.4614,found:907.4602.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),7.73min,95.8％purity.
实施例15：10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)癸酰胺(化合物YJZ8088)的制备
合成方法与实施例1中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),10.80(s,1H),8.29(d,J＝2.1Hz,2H),7.95(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.60(d,J＝9.6Hz,1H),7.52(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝13.2,7.3Hz,3H),6.98(q,J＝8.9Hz,4H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.2Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.0Hz,1H),4.14(d,J＝6.1Hz,2H),3.51(s,1H),3.17(t,J＝4.7Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.63–2.53(m,2H),2.47(t,J＝5.0Hz,4H),2.41(t,J＝7.4Hz,2H),2.29(t,J＝7.5Hz,2H),2.10–2.02(m,1H),1.90(d,J＝11.8Hz,2H),1.76(d,J＝11.9Hz,2H),1.62(t,J＝7.0Hz,2H),1.44(t,J＝7.3Hz,2H),1.34–1.22(m,12H),1.10(q,J＝10.8Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.23,173.02,170.38,167.53,167.27,159.72,157.25,153.54,150.50,145.87,141.79,133.16,131.95,128.68,128.47(4C),127.14(4C),126.67,125.01(2C),123.94,119.61,115.87,113.30,94.36,58.14,53.38(2C),53.10,49.40(2C),49.03,47.88,43.92,40.52,36.93,31.75(2C),31.42,30.66,29.31,29.20,29.04,27.77,27.33,26.63,25.34,22.54.HRMS(ESI)for C53H62N10O6[M+H]+,calcd:935.4927,found:935.4915.HPLCanalysis:MeOH-H2O(80:20),13.61min,99.5％purity.
实施例16：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8123)的制备
Scheme 2.Synthesis of Compounds 10a-10c,11a-11f and 12a-12c.
Reagents and conditions:(a)DMSO,DIEA,120℃,5h,53％.
将2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮19(42.9mg,0.16mmol)溶在6mL DMSO中，在室温下加入DIPEA(25.1mg,0.19mmol)和化合物8(66mg，0.13mmol)。将所得混合物在120℃搅拌8小时。反应结束后在真空下除去溶剂，通过柱色谱纯化得到深红色固体状化合物62mg(产率63％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.10(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.72(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(s,1H),7.41(s,1H),7.33(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.18(dd,J＝10.1,7.5Hz,3H),7.05(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.0Hz,1H),5.09(dd,J＝12.8,5.5Hz,1H),4.28(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.63(t,J＝4.9Hz,4H),3.51(s,1H),3.40(t,J＝4.9Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.64–2.52(m,2H),2.08–2.00(m,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.78(d,J＝11.8Hz,2H),1.31(q,J＝11.9Hz,2H),1.11(d,J＝12.5Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.28,170.55,168.00,167.46,159.70,157.27,155.49,153.56,150.19,141.76,134.32,132.08,128.94,128.49(4C),127.16(4C),126.71,125.41,119.59,119.00,118.36,115.99,108.47,94.44,53.39,49.26,49.07,47.67(2C),47.20(2C),43.94,40.49,31.76(2C),31.45,30.67,22.65.HRMS(ESI)for C43H43N9O5[M+H]+,calcd:766.3460,found:766.3431.HPLC analysis:MeOH-H2O(73:27),9.53min,98.6％purity.
实施例17：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8124)的制备
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-羧酸(35.9mg,0.12)、HATU(45.1mg,0.12mmol)、DIPEA(21.3mg,0.16mmol)和化合物8(55mg，0.11mmol)溶于DMF(6mL)中。混合物在室温下搅拌15分钟后，将反应液减压旋转蒸发，通过硅胶柱色谱纯化，得到目标化合物，为白色固体64mg(产率75％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.93(dd,J＝7.6,1.4Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝13.6,7.2Hz,3H),7.02(q,J＝9.1Hz,4H),6.46(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),5.19(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.26(tt,J＝12,3.0Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.81(s,2H),3.51(s,1H),3.48(s,2H),3.34(s,2H),3.19(s,2H),2.93–2.84(m,1H),2.66–2.52(m,2H),2.13–2.04(m,1H),1.90(d,J＝10.6Hz,2H),1.77(d,J＝10.2Hz,2H),1.30(q,J＝11.2Hz,2H),1.09(q,J＝12.0Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.26,170.26,167.54,167.07,167.03,159.67,157.28,153.54,150.30,142.57,141.66,133.77,132.17,132.05,132.02,129.17,128.50(4C),127.14(4C),126.73,124.35,122.19,119.58,116.49,94.44,55.33,53.39,49.59,49.05,48.43,47.30,43.92,42.04,40.40,31.73(2C),31.37,30.65,22.41.HRMS(ESI)forC44H43N9O6[M+H]+,calcd:794.3409,found:794.3384.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),4.48min,97.7％purity.
实施例18：4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺(化合物YJZ8126)的制备
将化合物8(60mg,1.12mmol)溶于CH3CN和DMF(2:1,12mL)中，加入苯基(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氨基甲酸酯20(55.5mg,1.4mmol),DMAP(14mg,1.12mmol),N,N-二异丙基乙胺(18mg,1.4mmol)。将混合物在60℃加热4小时后。反应冷却至室温，并在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱纯化，得到白色固体42mg(产率44％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),9.36(s,1H),8.30(d,J＝2.4Hz,1H),8.14(d,J＝1.9Hz,1H),7.90(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.20–7.13(m,3H),7.05(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝5.9Hz,1H),5.11(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.27(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.66(t,J＝5.1Hz,4H),3.49(s,1H),3.28(t,J＝5.2Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.64–2.52(m,2H),2.08–2.02(m,1H),1.91(d,J＝11.6Hz,2H),1.78(d,J＝11.1Hz,2H),1.31(q,J＝12.2,2H),1.11(q,J＝12.2Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.27,170.46,167.70,167.41,159.69,157.27,154.70,153.55,150.40,147.39,141.74,133.08,132.04,129.07,128.49(4C),127.16(4C),126.72,124.80,123.79,123.71,119.58,116.32,113.46,94.45,53.39,49.35,49.06,48.16(2C),44.17(2C),43.94,40.47,31.76(2C),31.42,30.67,22.56.HRMS(ESI)for C44H44N10O6[M+H]+,calcd:809.3518,found:809.3490.HPLC analysis:MeOH-H2O(80:20),5.39min,98.1％purity.
实施例19：4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺(化合物YJZ1014)
合成方法与实施例18中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.87(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.96(d,J＝2.0Hz,1H),7.71(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),7.61(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,2H),7.28(dd,J＝8.5,6.5Hz,2H),7.21–7.14(m,3H),7.05(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.59(t,J＝6.1Hz,1H),5.09(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39(d,J＝16.9Hz,1H),4.32–4.21(m,2H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.64(t,J＝4.9Hz,4H),3.48(s,1H),3.27(d,J＝4.9Hz,4H),2.91(ddd,J＝17.7,13.2,5.1Hz,1H),2.65–2.56(m,1H),2.40(dd,J＝13.1,4.6Hz,1H),2.02(d,J＝6.0Hz,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.78(d,J＝11.6Hz,2H),1.31(q,J＝13.6,12.8Hz,2H),1.11(d,J＝11.8Hz,2H).
实施例20：4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺(化合物YJZ1016)
合成方法与实施例18中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),9.01(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(s,1H),7.59(q,J＝8.5Hz,3H),7.48(d,J＝7.6Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,2H),7.22–7.13(d,J＝7.6Hz,3H),7.04(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.59(t,J＝6.1Hz,1H),5.08(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.40(d,J＝17.1Hz,1H),4.33–4.22(m,2H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.64(t,J＝4.8Hz,4H),3.48(s,1H),3.27(d,J＝5.0Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.60(d,J＝17.4Hz,1H),2.39(tt,J＝14.1,7.1Hz,1H),2.06–1.95(m,2H),1.91(d,J＝11.6Hz,2H),1.78(d,J＝11.7Hz,2H),1.31(q,J＝12.2Hz,2H),1.14–1.05(m,2H).
实施例21：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9132)的制备
将3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙炔酸叔丁酯18a(57mg,0.15mmol)溶于DCM(6mL)中,加入三氟乙酸(3mL)。室温搅拌2小时后，反应混合物用水淬灭，乙酸乙酯萃取3次。在减压下将合并的有机相浓缩。将所得粗产品加入到溶有中间体8(51mg，0.1mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(39mg，0.3mmol)的DMF(10mL)中。将混合物在室温下搅拌15分钟，然后真空蒸发浓缩，通过硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体62mg(产率75％)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),8.25(s,1H),8.15(dd,J＝7.7,1.4Hz,1H),8.05–8.00(m,1H),7.63–7.57(m,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝11.1,7.4Hz,3H),7.08–7.00(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.61(t,J＝5.8Hz,1H),5.20(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.27(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.97(t,J＝5.1Hz,2H),3.71(t,J＝5.2Hz,2H),3.51(s,1H),3.33(t,J＝5.3Hz,2H),3.27(t,J＝5.4Hz,2H),2.94–2.84(m,1H),2.65–2.52(m,2H),2.12–2.06(m,1H),1.91(d,J＝12.0Hz,2H),1.78(d,J＝10.6Hz,2H),1.31(q,J＝11.0Hz,2H),1.11(q,J＝11.0Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.19,170.15,166.78,166.65,159.69,157.22,153.56,151.71,150.20,141.77,139.12,132.45,132.24,132.12,129.37,128.48(4C),127.38,127.17(4C),126.70,126.30,124.37,119.58,116.58,94.45,87.89,84.67,53.40,49.68,49.06,48.74,48.15,46.77,43.95,41.58,40.52,31.77(2C),31.38,30.67,22.37.HRMS(ESI)for C46H43N9O6[M+H]+,calcd:818.3409,found:818.3375.HPLCanalysis:MeOH-H2O(75:25),5.35min,98.9％purity.
实施例22：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((E)-3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙烯酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9122)的制备
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),8.47(s,1H),8.29(d,J＝2.2Hz,1H),8.18(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(s,2H),7.60(d,J＝8.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.21–7.14(m,3H),7.05(s,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.1Hz,1H),5.19(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.27(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.94(s,2H),3.75(s,2H),3.49(s,1H),3.27(d,J＝14.4Hz,4H),2.94–2.84(m,1H),2.65–2.52(m,2H),2.14–2.02(m,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.78(d,J＝11.7Hz,2H),1.31(q,J＝12.4Hz,2H),1.11(q,J＝12.2,11.5Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.24,170.29,167.40,167.21,164.43,159.69,157.25,153.55,150.35,142.25,141.75,140.12,135.35,132.57,132.06,131.64,129.14,128.48(4C),127.16(4C),126.70,124.36,122.84,122.61,119.58,116.35,94.45,53.39,49.56,49.07,48.90,48.25,45.36,43.94,42.17,40.49,31.76(2C),31.41,30.67,22.45.HRMS(ESI)for C46H45N9O6[M+H]+,calcd:820.3566,found:820.3551.HPLC analysis:MeOH-H2O(75:25),5.32min,99.5％purity.
实施例23：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9153)的制备
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,1H),7.71–7.66(m,1H),7.66–7.63(m,1H),7.60(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,2H),7.21–7.11(m,3H),6.99(dd,J＝8.9,2.9Hz,2H),6.91(d,J＝8.7Hz,2H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.55(t,J＝6.0Hz,1H),5.10(dd,J＝12.7,5.4,Hz,1H),4.25(tt,J＝12,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.82–3.71(m,1H),3.70–3.61(m,1H),3.55–3.40(m,3H),3.30–3.20(m,1H),3.16–3.05(m,1H),2.92–2.73(m,3H),2.73–2.64(m,1H),2.63–2.52(m,3H),2.08–2.198(m,1H),1.90(d,J＝11.7Hz,2H),1.82–1.71(m,3H),1.41(td,J＝8.1,4.9Hz,1H),1.36–1.27(m,2H),1.08(q,J＝12.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.18,170.31,167.63,167.44,166.79,159.70,157.22,153.54,150.25,146.72,141.75,135.16,132.00,131.54,129.37,129.18,128.48(4C),127.13(4C),126.69,123.39,122.92,119.59,116.37,94.44,53.41,49.40,49.05,48.87,48.35,45.01,43.93,41.72,40.50,31.76(2C),31.39,30.63,24.48,24.28,22.48,11.58.HRMS(ESI)for C47H47N9O6[M+H]+,calcd:834.3722,found:834.3688.HPLC analysis:MeOH-H2O(70:30),6.81min,100％purity.
实施例24：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9127)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.86(s,1H),7.83(d,J＝7.7Hz,1H),7.78(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(d,J＝6.7Hz,1H),7.49(s,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝11.6,7.4Hz,3H),7.01(q,J＝9.0Hz,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.2Hz,1H),5.14(dd,J＝12.9,5.5Hz,1H),4.26(tt,J＝11.7,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.60(t,J＝5.2Hz,4H),3.49(s,1H),3.17(dt,J＝17.2,5.2Hz,4H),3.04(t,J＝7.4Hz,2H),2.95–2.84(m,1H),2.81(t,J＝7.5Hz,2H),2.64–2.52(m,2H),2.10–2.01(m,1H),1.90(d,J＝11.9Hz,2H),1.77(d,J＝9.6Hz,2H),1.31(q,J＝13.2,11.2Hz,2H),1.09(q,J＝12.1,11.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.24,170.35,170.08,167.77,167.58,159.69,157.24,153.55,150.35,150.24,141.74,135.47,132.03,131.98,129.47,129.07,128.48(4C),127.15(4C),126.70,124.04,123.79,119.58,116.28,94.44,53.39,49.43,49.06,48.48,48.19,45.04,43.94,41.46,40.49,33.72,31.76(2C),31.42,31.17,30.66,22.50.HRMS(ESI)for C46H47N9O6[M+H]+,calcd:822.3722,found:822.3692.HPLCanalysis:MeOH-H2O(75:25),4.99min,99.4％purity.
实施例25：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8148)的制备
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.84(d,J＝8.3Hz,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.47(d,J＝2.3Hz,1H),7.37(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.17(dd,J＝12.6,7.3Hz,3H),7.03(s,4H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.3Hz,1H),5.20(s,2H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.26(tt,J＝12.0,3.6Hz,1H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.62(t,J＝4.9Hz,4H),3.51(s,1H),3.30(t,J＝5.1Hz,2H),3.22(t,J＝5.1Hz,2H),2.94–2.84(m,1H),2.63–2.52(m,2H),2.09–2.01(m,1H),1.91(d,J＝11.9Hz,2H),1.78(d,J＝11.8Hz,2H),1.31(q,J＝10.2Hz,2H),1.10(q,J＝11.9Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.26,170.40,167.40,167.24,165.66,164.14,159.69,157.26,153.55,150.31,141.73,134.16,132.06,129.14,128.49(4C),127.15(4C),126.71,125.63,123.69,121.68,119.59,116.37,109.56,94.43,66.60,53.39,49.44,49.06,48.35,48.15,44.26,43.93,41.62,40.46,31.75(2C),31.41,30.66,22.51.HRMS(ESI)for C45H45N9O7[M+H]+,calcd:824.3515,found:824.3475.HPLCanalysis:MeOH-H2O(78:22),4.92min,98.9％purity.
实施例26：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9101)的制备
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),8.30(d,J＝2.5Hz,1H),7.60(t,J＝9.4Hz,2H),7.50(s,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,2H),7.20–7.12(m,5H),7.04(m,5H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.61(t,J＝6.2Hz,1H),5.05(dd,J＝12.8,5.5Hz,1H),4.27(tt,J＝11.9,3.6Hz,1H),4.21(d,J＝5.1Hz,2H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.68(dt,J＝14.7,5.3Hz,4H),3.51(s,1H),3.30(d,J＝4.9Hz,2H),3.22(t,J＝5.2Hz,2H),2.93–2.83(m,1H),2.62–2.53(m,2H),2.05–1.98(m,1H),1.91(d,J＝11.9Hz,2H),1.78(d,J＝11.8Hz,2H),1.31(q,J＝11.1Hz,2H),1.11(q,J＝12.5Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.29,170.63,168.21,167.67,167.32,159.70,157.24,154.49,153.56,150.35,141.76,134.48,132.07,129.15,128.49(4C),127.16(4C),126.70,125.24,119.59,117.13,116.37(2C),94.44,53.39,49.11,48.42,48.18,44.75,44.29,43.94,41.81,40.88,40.50,31.76(2C),31.45,30.67,22.70.HRMS(ESI)for C45H46N10O6[M+H]+,calcd:823.3675,found:823.3671.HPLCanalysis:MeOH-H2O(80:20),5.00min,100％purity.
实施例27：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲(化合物YJZ1004)的制备
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.94(s,1H),8.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.60(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.32–7.24(m,3H),7.21–7.13(m,3H),7.09–6.99(m,5H),6.93(d,J＝2.2Hz,1H),6.49(d,J＝8.9Hz,1H),5.97(t,J＝5.1Hz,1H),5.59(t,J＝6.0Hz,1H),5.08(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.28(d,J＝16.3Hz,2H),4.20–4.13(m,3H),4.06(d,J＝5.0Hz,2H),3.68(d,J＝17.6Hz,4H),3.48(s,1H),3.28(s,2H),3.21(s,2H),2.94–2.84(m,1H),2.63–2.55(m,1H),2.37(m,1H),1.98(m,1H),1.91(d,J＝11.8Hz,2H),1.78(d,J＝11.8Hz,2H),1.32(q,J＝12.7,12.2Hz,2H),1.11(q,J＝13.5,12.6Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.38,171.61,169.25,168.22,159.71,157.24,153.56,150.37,148.92,141.78,132.97,132.06,130.07,129.14,128.48(4C),127.16(4C),126.70,123.91,119.60,118.38,116.35,104.98,94.41,53.40,52.06,49.05,48.49,48.20,47.07,45.31,44.31,43.94,41.77,40.51,31.76(2C),31.71,30.67,23.01.HRMS(ESI)forC45H48N10O5[M+H]+,calcd:809.3882,found:809.3865.HPLC analysis:MeOH-H2O(70:30),6.29min,96.2％purity.
实施例28：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲(化合物YJZ1006)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.92(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.60(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.31–7.24(m,2H),7.22–7.13(m,3H),7.07–6.99(m,4H),6.82(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.77(s,1H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),6.38(t,J＝5.1Hz,1H),5.58(t,J＝6.1Hz,1H),5.02(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.33–4.22(m,2H),4.20–4.12(m,3H),4.08(d,J＝5.0Hz,2H),3.66(s,4H),3.49(s,1H),3.29(s,2H),3.22(s,2H),2.96–2.82(m,1H),2.63–2.54(m,1H),2.36(qd,J＝13.1,4.4Hz,1H),2.00–1.85(m,3H),1.78(d,J＝11.5Hz,2H),1.32(q,J＝11.3Hz,2H),1.11(q,J＝12.4Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ173.43,171.86,169.14,167.85,159.70,157.23,153.56,152.06,150.35,144.72,141.77,132.06,129.15,128.49(4C),127.16(4C),126.70,124.26,119.87,119.59,116.36(2C),113.47,105.59,94.45,53.39,51.77,49.08,48.42,48.18,47.25,44.94,44.30,43.94,41.79,40.51,31.76(3C),30.67,23.09.HRMS(ESI)forC45H48N10O5[M+H]+,calcd:809.3882,found:809.3897.HPLC analysis:MeOH-H2O(70:30),5.87min,97.7％purity.
实施例29：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲(化合物YJZ9135)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(s,1H),7.27(t,J＝7.5Hz,2H),7.20–7.14(m,4H),7.08(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),7.06–6.99(m,4H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.2Hz,1H),5.08(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),5.03(s,2H),4.40(d,J＝17.2Hz,1H),4.30–4.23(m,2H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.62(s,4H),3.50(s,1H),3.29(s,2H),3.21(s,2H),2.94–2.84(m,1H),2.60(d,J＝15.4Hz,1H),2.38(ddd,J＝26.3,13.2,4.4Hz,1H),2.01–1.96(m,1H),1.91(d,J＝12.0Hz,2H),1.78(d,J＝11.9Hz,2H),1.31(q,J＝12.3,11.5Hz,2H),1.15–1.06(m,2H).
实施例30：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲(化合物YJZ9128)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.99(s,1H),8.30(dd,J＝2.3,0.7Hz,1H),7.61(J＝8.0Hz,1H),7.53–7.45(m,2H),7.29–7.25(m,3H),7.24(dd,J＝8.3,2.5Hz,1H),7.20–7.15(m,4H),7.06–6.99(m,4H),6.48(d,J＝8.9Hz,1H),5.61(t,J＝6.1Hz,1H),5.11(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),5.02(s,2H),4.38(d,J＝16.8Hz,1H),4.30–4.23(m,2H),4.15(d,J＝6.1Hz,2H),3.64(dt,J＝16.4,5.3Hz,4H),3.51(s,1H),3.31–3.25(m,2H),3.21(t,J＝5.2Hz,2H),2.94–2.84(m,1H),2.64–2.56(m,1H),2.39(qd,J＝13.2,4.5Hz,1H),2.04–1.97(m,1H),1.91(d,J＝11.0Hz,2H),1.78(d,J＝11.7Hz,2H),1.31(q,J＝12.5Hz,2H),1.10(q,J＝12.3Hz,2H).
实施例31：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基嘧啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ9107)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.61(q,J＝3.0Hz,2H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(t,J＝8.6,7.2Hz,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.7Hz,1H),7.28(dd,J＝8.2Hz,2H),7.22–7.14(m,3H),7.03(s,4H),5.60(t,J＝6.1Hz,1H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.30–4.19(m,1H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.61(s,4H),3.50(s,1H),3.31(s,1H),3.22(s,3H),2.96–2.82(m,2H),2.64–2.54(m,2H),2.09–2.00(m,1H),1.86(d,J＝12.0Hz,2H),1.78(d,J＝11.9Hz,2H),1.41(q,J＝12.4Hz,2H),1.08(q,J＝12.6Hz,2H).
实施例33：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8145)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.79(dd,J＝8.5,7.3Hz,1H),7.61(d,J＝8Hz,2H),7.51–7.44(m,2H),7.38(d,J＝8.7Hz,1H),7.31–7.24(m,2H),7.22–7.14(m,3H),7.07–7.00(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.0Hz,1H),5.25(s,2H),5.11(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.27(t,J＝12.2Hz,1H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.61(s,4H),3.51(s,1H),3.30(s,2H),3.23(s,2H),2.95–2.83(m,1H),2.64–2.54(m,2H),2.09–2.00(m,1H),1.91(d,J＝11.7Hz,2H),1.78(d,J＝11.8Hz,2H),1.31(q,J＝12.5Hz,2H),1.10(q,J＝11.4Hz,2H).
实施例35：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8151)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.29(s,1H),7.82(t,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝8.9Hz,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.52–7.42(m,2H),7.32–7.22(m,2H),7.21–7.11(m,3H),7.09–6.92(m,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(d,J＝6.6Hz,1H),5.09(dd,J＝13.5,5.3Hz,1H),4.38–4.20(m,3H),4.15(d,J＝6.0Hz,2H),3.62(s,4H),3.53–3.43(m,1H),3.17(dd,J＝12.3,6.9Hz,4H),2.96–2.81(m,1H),2.65–2.54(m,4H),2.11–1.96(m,3H),1.91(d,J＝12.0Hz,2H),1.77(d,J＝12.0Hz,2H),1.31(q,J＝14.6,13.6Hz,2H),1.19–1.01(m,2H).
实施例34：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-5-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ8150)
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.29(s,1H),7.84(d,J＝8.3Hz,1H),7.60(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.45(s,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,2H),7.22–7.11(m,3H),7.09–6.93(t,J＝6.7Hz,4H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.58(t,J＝6.3Hz,1H),5.12(dd,J＝13.1,5.4Hz,1H),4.33–4.19(m,3H),4.15(d,J＝5.9Hz,2H),3.62(s,4H),3.53–3.42(m,1H),3.20(d,J＝15.5Hz,4H),2.97–2.81(m,1H),2.64–2.54(m,4H),2.11–1.96(m,3H),1.91(d,J＝12.0Hz,2H),1.77(d,J＝11.7Hz,2H),1.31(q,J＝12.2Hz,2H),1.10(q,J＝12.5Hz,2H).
实施例35：3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-((2-(1-甲基-2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨酸)哌嗪-1-基)苯基)尿素(化合物YJZ1029)的制备
/>
合成方法与实施例21中所示方法相同。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.65–7.55(m,2H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.33–7.23(m,2H),7.22–7.11(m,5H),7.10–6.98(m,5H),6.47(d,J＝8.9Hz,1H),5.60(t,J＝6.1Hz,1H),5.11(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),4.32–4.24(m,1H),4.21(d,J＝5.0Hz,2H),4.16(d,J＝6.0Hz,2H),3.66(s,4H),3.48(s,1H),3.30(s,2H),3.23(s,2H),3.01(s,3H),2.98–2.87(m,1H),2.80–2.71(m,1H),2.61–2.53(m,1H),2.08–1.97(m,1H),1.91(d,J＝11.6Hz,2H),1.78(d,J＝11.5Hz,2H),1.31(q,J＝13.7,13.1Hz,2H),1.11(q,J＝11.5Hz,2H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ172.27,170.38,168.21,167.66,167.31,159.70,157.23,154.51,153.56,150.35,141.77,134.46,132.07,129.16,128.48,127.16,126.70,125.27,119.58,117.11,116.37,94.45,53.39,49.70,49.07,48.42,48.18,44.76,44.29,43.95,41.81,40.52,31.77(2C),31.62,30.67,27.06,21.89.HRMS(ESI)forC46H48N10O6[M+H]+,calcd:837.3831,found:837.3804.HPLC analysis:MeOH-H2O(70:30),10.13min,98.9％purity.
实施例36：代表性化合物对MDA-MB-231细胞中CDK12/13降解活性的测试
实验方法:细胞株:MDA-MB-231细胞株购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)。使用常规Western Blot(免疫印迹法)进行检测，具体如下。将MDA-MB-231按一定数量种于12孔板，培养箱内贴壁培养过夜后，加入一定浓度的化合物作用15h，用裂解液裂解细胞收样。然后取适量样品进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后用半干电转移系统将蛋白转移至硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜置于封闭液(5％脱脂奶粉稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中室温封闭2h，然后将膜分别置于一抗溶液(1:1000稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中4℃孵育过夜。用含0·1％Tween 20的TBS洗涤三次，每次15min。将膜置于二抗溶液(辣根过氧化物酶标记羊抗兔的IgG，1:1000稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中室温反应lh。同上洗膜三次后，用ECLplus试剂发色，Amersham Imager600system拍照。
图1结果表明，化合物可以剂量依赖性降解MDA-MB-231细胞中的CDK12和CDK13蛋白，以YJZ9101的活性最好，在0.111μΜ水平即可显著下调CDK12和CDK13的蛋白水平。
实施例37：化合物YJZ9101对三阴性乳腺癌细胞增殖抑制活性研究
采用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Madison,WI)测定化合物的细胞增殖活性。将细胞接种在其各自培养基中的96孔板上，37℃下在5％CO2的培养箱孵育。孵育过夜后，制备化合物的系列稀释液，并将其添加到96孔板中。加入等于每个孔中存在的细胞培养基体积的CellTiter-Glo试剂的体积(例如，向100微升96孔板细胞的培养基中添加100微升试剂)。在轨道振荡器上混合内容物2分钟以诱导细胞裂解。让96孔板在室温下孵育10分钟以稳定发光信号。记录发光：使用Infinite M1000 Pro读板器(Tecan,Zürich,Switzerland)获取每个孔的发光信号，使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software Inc,La Jolla,CA)分析数据。
图2结果表明，化合物可以剂量依赖性抑制多种乳腺癌细胞的生长，其中对三阴性乳腺癌MFM223细胞系表现最为敏感，IC50＝47nM。对乳腺癌细胞SKBR2和MCF7的IC50分别为698nM和689nM。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (14)

1.一种反式-1,4-环己二胺类化合物、或其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，所述化合物具有式(I)所示的结构：
其中，
R1选自下组：H、氰基、卤素、卤代甲基、卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代乙基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷氧基；
X选自下组：CH2或CO；
Y选自下组：N、CH或C-卤素；
Z选自下组：N或CH；
R2选自下组：-C(R6)2R7、-(CH2)nR7；其中，n选自：0、1或2；
各个R6各自独立选自下组：氢、卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、卤代甲基、甲氧基、卤代甲氧基、乙基、卤代乙基、乙氧基、卤代乙氧基、含O、S或N的3-8元杂环；或者两个R6通过相连的C或杂原子一同形成含n个杂原子的3-7杂环；其中n＝0、1、2或3，杂原子选自下组：O、N、S；
R7选自下组：
1)氰基、C1-C5烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3～C10环烷基、取代或未取代的含O、S或N的3-8元芳环或饱和环、含n个杂原子的8-12元稠环、螺环或桥环；其中n＝1、2或3，杂原子选自下组：O、N、S；
2)
其中，A、B、C、D、E各自独立选自下组：CH、N或CR8；
R8选自下组：卤素、氰基、羟基、氨基、硝基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基、C3-C8环烷基；
R10选自下组：H、C1-C4烷基；
R3、R4独立选自：H、卤素、三氟甲基、羟基；
Linker选自下组： 其中n＝0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12；其中上述各个结构书写时不具有方向，即，例如，/>意在包括/>
上述各式中，所述的碳环或杂环可以是单环、稠环、桥环或螺环，且可以为饱和或者部分不饱和的形式。
2.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，
其中X选自下组：CH2或CO；
Y选自下组：CH；
Z选自下组：N或CH。
3.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，
所述的R1选自下组：H、氰基、卤素、卤代甲基、卤代甲氧基。
4.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，
所述的R2选自：-C(R6)2R7；
其中，各个R6各自独立选自下组：氢、卤素、甲基、卤代甲基、羟基、氨基、甲氧基；
R7选自下组：
1)C1-C5烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3～C10环烷基、取代或未取代的含O、S或N的3-8元杂芳环或饱和杂环；
2)
其中A、B、C、D、E分别独立地选自：CH、N或CR8；
R8选自下组：卤素、氰基、羟基、氨基、C1-C3烷基、卤代C1-C3烷基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基。
5.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，所述R3和R4各自独立选自下组：H、F、Cl。
6.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，所述Linker选自下组： 其中n＝0，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。
7.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子，其特征在于，具有式(II)所示结构：
其中，R1的定义如权利要求1中所述；
X，U各自独立选自下组：CH2或CO；
V选自下组：NH或O；
n选自下组：0、1、2或3；
R3任选自下组：H、F、Cl。
8.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物为选自下组的化合物：
1)2-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)乙酰胺；
2)3-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丙酰胺；
3)4-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)丁酰胺；
4)5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)五酰胺；
5)6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)己酰胺；
6)7-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)庚酰胺；
7)8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)八酰胺；
8)9-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)壬酰胺；
9)10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)癸酰胺；
10)2-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)乙酰胺；
11)3-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙胺；
12)5-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)五酰胺；
13)6-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)己酰胺；
14)8-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)八酰胺；
15)10-(4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)癸酰胺；
16)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
17)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
18)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲基)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
19)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
20)4-(4-(3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)脲)苯基)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酰胺；
21)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
22)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((E)-3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙烯酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
23)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
24)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-(3-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
25)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
26)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
27)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲；
28)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)甘氨基)哌嗪-1-基)苯基)脲；
29)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲；
30)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-3-氧异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)脲；
31)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基嘧啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
32)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(2-((2-(2,6-二氧吡啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
33)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
34)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-(4-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氧基)丁酰基)哌嗪-1-基)苯基)尿素；
35)3-苄基-1-((1r，4r)-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-(4-((2-(1-甲基-2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)甘氨酸)哌嗪-1-基)苯基)尿素。
9.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子的用途，其特征在于，用于制备CDK12/13蛋白激酶降解剂。
10.如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体或其前药分子的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病包括：前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尤文肉瘤、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤。
12.一种药物组合物，其特征在于，包括活性成分和药学上可接受的辅料；其中，所述活性成分包括：如权利要求1所述的反式-1,4-环己二胺类化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体或者其前药分子。
13.一种在有需要的受试者中治疗由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病的方法，包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1所述的化合物。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的由CDK12/13丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶介导的疾病包括：前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尤文肉瘤、肺腺癌、鳞状细胞肺癌、胰腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠道间质瘤、白血病、组织细胞淋巴瘤、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌和神经胶质瘤。
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