CN117321052A - 作为hpk1抑制剂的炔烃类化合物及其应用 - Google Patents

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CN117321052A CN202280031484.9A CN202280031484A CN117321052A CN 117321052 A CN117321052 A CN 117321052A CN 202280031484 A CN202280031484 A CN 202280031484A CN 117321052 A CN117321052 A CN 117321052A
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Abstract

本发明提供了式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、药物组合物及其制备方法，以及作为HPK1抑制剂的用途。

Description

作为HPK1抑制剂的炔烃类化合物及其应用
本公开要求2021年4月29日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202110476694.6，发明名称为“作为HPK1抑制剂的炔烃类化合物及其应用”的中国专利申请的优先权。上述在先申请的全文通过引用的方式结合于本公开中。
技术领域
本公开涉及一种新型的炔烃类化合物或其药学可接受的盐，含有它们的药物组合物以及作为HPK1抑制剂在预防或治疗相关疾病中的用途。
背景技术
癌症的一个主要特征是具有免疫逃避能力。肿瘤细胞通过多种复杂机制抑制机体免疫系统对其识别和攻击。为解除这种免疫抑制设计了多项肿瘤免疫治疗的策略，包括干扰负调控效应T细胞功能的机制，例如PD1/PDL1免疫检查点抑制剂，通过阻断PD1和PDL1相互作用，在高表达PDL1的癌症细胞中解除对T淋巴细胞的免疫抑制，针对PD1或PDL1抑制剂抗体开发，在多种癌症类型中临床获益亦已得到证实。另外，阻断CD80/CD86同T细胞共抑制受体(CTLA-4)间相互作用的治疗性抗体，能够促进各级淋巴组织内T细胞扩增。除了这些细胞表面相关蛋白，研究发现细胞内信号也参与免疫负调控，其中造血细胞内特异表达的HPK1(造血祖细胞激酶1，又称MAP4K1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，主要参与细胞内免疫负调控。
研究发现人和小鼠细胞内HPK1失活常常伴随自身免疫疾病的发生，表明HPK1调控机体免疫耐受。比如，银屑病关节炎患者的外周单个核细胞(PBMC)以及系统性红斑狼疮患者的T细胞均发现HPK1表达下调(J Autoimmun 2011,37(3),180-9)；小鼠模型实验发现HPK1缺失的小鼠更易发生自体免疫性脑膜炎(Nat Immunol 2007,8(1),84-91)。体外研究证实，以抗原刺激来源于HPK1缺失的T和B淋巴细胞，有更强的激活效果(Cancer Immunol.Immunother.2010,59(3),419-429)，表明HPK1负调控T和B淋巴细胞功能。此外，HPK1缺失的树突状细胞(DC细胞)表现出更有效的抗原递呈和T细胞激活特性，表明HPK1同样参与DC细胞的免疫调控。
T细胞受体(TCR)和B细胞受体(BCR)活化后，胞质HPK1被募集到细胞膜附近被激活,活化的HPK1磷酸化衔接蛋白SLP76或LAT，以此激活SLP76作为负调节蛋白14-3-3π的停靠位点，介导SLP76泛素化降解，最终导致TCR信号复合物的不稳定，从而下调TCR信号(J.Cell Biol.2011,195(5),839-853)。研究还发现，HPK1可以被PGE2(前列腺素E2)以PKA依赖的方式激活，甚至也可能由肿瘤细胞表达的免疫抑制因子激活(Blood 2003,101(9),3687-3689)。
同野生型相比，HPK1 -/-小鼠对接种的同基因型肺癌肿瘤生长表现出较强的抑制生长作用。通过对T细胞移植小鼠模型的抗肿瘤免疫反应研究证实HPK -/-敲除的强抗肿瘤效应至少部分是T细胞依赖性的。而树突细胞在抗肿瘤活性上的贡献也通过来源于HPK1 -/-缺陷的小鼠骨髓的DC细胞移植实验得以证实(J.Immunol.2009,182(10),6187-61)。近来，研究发现同野生型HPK转基因小鼠相比，催化酶失活的HPK1转基因小鼠同样能有效抑制胶质母细胞瘤GL261生长，以及能够增强抗PD1治疗MC38肿瘤的药效。因此，HPK1是一个潜在的抗肿瘤治疗靶点，开发针对HPK1激酶的小分子抑制剂无论作为单药还是联合其它免疫调控治疗策略在抗肿瘤治疗上的效果值得期待。
发明内容
本公开提供一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
L 1选自化学键或C(R 2)(R 3)；
R 2、R 3独立地选自H或C 1-C 6烷基；
R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、4-10元杂环基、C 6-C 10芳基氧基、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基、C 1-C 6烷基-C(＝O)NH、C 1-C 6烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 6烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2；
R 4、R 5独立地选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a4取代；
R 6选自H、卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a6取代；
环A选自
R 7选自4-14元杂环基，所述4-14元杂环基任选被R a7取代；
X 1、X 4独立地选自CR 9或N；
X 2、X 3独立地选自C(R 10)(R 11)或NR 12；
R 8、R 9、R 10、R 11独立地选自H、卤素、CN、OH、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a8取代；
R 12选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a12取代；
q选自0、1、2、3或4；
m、n独立地选自0、1或2；
每一个R a1、R a4、R a6、R a7、R a8、R a12独立地选自卤素、CN、＝O或任选被R b取代的以下基团：OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基、4-7元杂环基；
每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2。
在一些实施方案中，R 2、R 3独立地选自H或C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R 2、R 3独立地选自H或甲基。
在一些实施方案中，L 1选自化学键、CH 2或C(CH 3) 2。
在一些实施方案中，R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 6烷 基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、4-7元杂环基、苯氧基、5-6元杂芳基、C 1-C 3烷基-C(＝O)NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2。
在一些实施方案中，R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 3烷氧基、C 3-C 6环烷基、6-7元杂环基、苯氧基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、C 1-C 3烷基-C(＝O)NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2。
在一些实施方案中，R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 3烷氧基、环丁基、环戊基、6-7元杂环基、苯氧基、噻唑基、吡唑基、C 1-C 3烷基-C(＝O)NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2。
在一些实施方案中，R 4、R 5独立地选自C 1-C 3烷基或C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 4、R 5独立地选自C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R 4、R 5均选自甲基。
在一些实施方案中，R a1选自卤素、CN或任选被R b取代的以下基团：OH、NH 2、C 1-C 3烷基、4-7元杂环基。
在一些实施方案中，R b选自C 1-C 3烷基或OH。
在一些实施方案中，R a1选自CN、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、N(C 1-C 3烷基) 2、O(C 1-C 3烷基)或5-6元杂环基，所述C 1-C 3烷基任选被OH取代。
在一些实施方案中，R a1选自CN、OH、NH 2、甲基、N(CH 3) 2、甲氧基、 或羟甲基。
在一些实施方案中，R 1选自OH、NH 2、 甲氧基、 苯氧基、 CH 3C(O)NH、CH 3S(O) 2NH、
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，R 6选自H、卤素、CN、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基。
在一些实施方案中，R 6选自H。
在一些实施方案中，X 1选自CH或N。
在一些实施方案中，R 7选自5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a7取代。
在一些实施方案中，R 7选自哌嗪基、吗啉基或四氢吡喃基，所述哌嗪基、吗啉基或四氢吡喃基任选被R a7取代。
在一些实施方案中，R 7选自哌嗪基或吗啉基，所述哌嗪基或吗啉基任选被R a7取代。
在一些实施方案中，R a7选自C 1-C 3烷基或5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R b取代。
在一些实施方案中，R a7选自甲基、哌啶基或四氢吡喃基，所述哌啶基或四氢吡喃基任选被R b取代。
在一些实施方案中，R a7选自甲基、哌嗪基、哌啶基或四氢吡喃基，所述哌嗪基、哌啶基或四氢吡喃基任选被R b取代。
在一些实施方案中，R b选自C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R b选自甲基。
在一些实施方案中，R a7选自甲基、四氢吡喃基或
在一些实施方案中，R a7选自C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R a7选自甲基。
在一些实施方案中，R 7选自
在一些实施方案中，R 7选自
在一些实施方案中，R 7选自
在一些实施方案中，R 7选自
在一些实施方案中，R 8选自任选被N(CH 3) 2取代的C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R 8选自C 1-C 3烷基。
在一些实施方案中，R 8选自CH 2N(CH 3) 2或甲基。
在一些实施方案中，R 8选自甲基。
在一些实施方案中，q选自1或2。
在一些实施方案中，q选自2。
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，X 4选自CH或C-OCH 3。
在一些实施方案中，X 2、X 3独立地选自CH 2或NCH 3。
在一些实施方案中，m、n独立地选自1。
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，结构单元 选自
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化合物或其药学可接受的盐，选自以下化合物或其药学可接受的盐：
本公开还提供药物组合物，其包含式(I)所示化合物或其药学可接受的盐和药学上可接受的辅料。
进一步，本公开涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备预防或者治疗HPK1相关疾病的药物中的用途。
进一步，本公开涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在预防或者治疗HPK1相关疾病中的用途。
进一步，本公开涉及预防或者治疗HPK1相关疾病的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本公开还涉及治疗HPK1相关疾病的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本公开所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
进一步，本公开涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
进一步，本公开涉及式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在抗肿瘤中的用途。
进一步，本公开涉及抗肿瘤的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本公开还涉及治疗肿瘤的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本公开所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
在一些实施方案中，所述HPK1相关疾病选自肿瘤。
术语定义和说明
除非另有说明，本申请中所用的术语具有下列含义，本申请中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
本文中 表示连接位点。
本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚楔键 表示一个立体中心的绝对构型，用黑实键和虚键 表示一个立体中心的相对构型(如脂环化合物的顺反构型)。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。 本申请化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本申请包含化合物的所有互变异构形式。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和非对映异构体。
本申请的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键，因此本申请的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。特定的几何或立体异构体形式可以是顺式和反式异构体、E型和Z型几何异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，以及其外消旋混合物或其它混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，以上所有这些异构体以及它们的混合物都属于本申请化合物的定义范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子，所有取代基中涉及到的这些异构体以及它们的混合物，也均包括在本申请化合物的定义范围之内。本申请的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来，光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以是重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH 2CH 3)、单取代的(如CH 2CH 2F、CH 2CH 2Cl等)、多取代的(如CHFCH 2F、CH 2CHF 2、CHFCH 2Cl、CH 2CHCl 2等)或完全被取代的(CF 2CF 3、CF 2CCl 3、CCl 2CCl 3等)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
当任何变量(例如R a、R b)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被2个R b所取代，则每个R b都有独立的选项。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH 2) 0-，表示该连接基团为键。
当其中一个变量选自化学键或不存在时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键时表示该结构实际上是A-Z。
当本文中涉及到的连接基团若没有指明其连接方向，则其连接方向是任意的。例如当结构单元 中的L 1选自“C 1-C 3亚烷基-O”时，此时L 1既可以按照与从左到右的读取顺序相同的方向连接环Q和R 1构成“环Q-C 1-C 3亚烷基-O-R 1”，也可以按照从左到右的读取顺序相反的方向连接环Q和R 1构成“环Q-O-C 1-C 3亚烷基-R 1”。
当一个取代基的键交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元 表示R 5可在苯环上的任意一个位置发生取代。
本文中的C m-C n，是指具有m-n范围中的整数个碳原子。例如“C 1-C 10”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子或10个碳原子。
术语“烷基”是指通式为C nH 2n+1的烃基，该烷基可以是直链或支链的。术语“C 1-C 10烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。 所述烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；术语“C 1-C 6烷基”指含有1至6个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等)；术语“C 1-C 3烷基”指甲基、乙基、正丙基、异丙基。
本文所述“C 1-C 10烷基”可以包含“C 1-C 6烷基”或“C 1-C 3烷基”等范围，所述“C 1-C 6烷基”可以进一步包含“C 1-C 3烷基”。
术语“烷氧基”可理解为“烷基氧基”或“烷基-O-”，指直链状或支链状醇类失去羟基上的氢原子产生的一价基团。例如术语“C 1-C 6烷氧基”可理解为“C 1-C 6烷基氧基”或“C 1-C 6烷基-O-”；“C 1-C 6烷氧基”可以包含“C 1-C 3烷氧基”等范围。
术语“环烷基”指完全饱和的且以单环、并环、桥环或螺环等形式存在的碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。例如，术语“C 3-C 10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其具有3～10个碳原子。环烷基具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基，降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基、螺[4.5]癸烷等。螺环烷基指以螺环存在的环烷基。术语“C 3-C 10环烷基”可以包含“C 3-C 6环烷基”，术语“C 3-C 6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子，具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“环烷基氧基”可理解为“环烷基-O-”。
术语“杂环基”是指完全饱和的或部分饱和的(整体上不是具有芳香性的杂芳族)单环、并环、螺环或桥环基团，其环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) 2-、-S(＝O)-、-P(＝O) 2-、-P(＝O)-、-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等。术语“4-14元杂环基”是指环原子数目为4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的杂环基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团，例如1-3个选自N、O、S、S(O)或S(O) 2的杂原子或杂原子团。本发明“4-14元杂环基”可以包含“4-10元杂环基”、“4-7元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“6-8元杂环基”等。其中，4元杂环基的具体实例包括但不限于氮杂环丁烷基或氧杂环丁烷基；5元杂环基的具体实例包括但不限于四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、4,5-二氢噁唑基或2,5-二氢-1H-吡咯基；6元杂环基的具体实例包括但不限于四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、三噻烷基、四氢吡啶基或4H-[1,3,4]噻二嗪基；7元杂环基的具体实例包括但不限于二氮杂环庚烷基。所述杂环基还可以是双环基，其中，5,5元双环基的具体实例包括但不限于六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基；5,6元双环基的具体实例包括但不限于六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基或5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基。任选地，所述杂环基可以是上述4-7元杂环基的苯并稠合环基，具体实例包括但不限于二氢异喹啉基等。“4-10元杂环基”可以包含“4-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“6-7元杂环基”、“4-10元杂环烷基”、“4-7元杂环烷基”、“5-6元杂环烷基”、“6-7元杂环烷基”等范围，“4-7元杂环基”进一步可以包含“5-6元杂环基”、“6-7元杂环基”、“4-7元杂环烷基”、“5-6元杂环烷基”、“6-7元杂环烷基”等范围。本申请中尽管有些双环类杂环基部分地含有一个苯环或一个杂芳环，但所述杂环基整体上仍是无芳香性的。
术语“杂环基氧基”可理解为“杂环基-O-”。
术语“杂环烷基”是指完全饱和的且以单环、并环、桥环或螺环等形式存在的一价环状基团，除非另有指示，该杂环的环原子中含有1-5个杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子 (P)、硼原子(B)、-S(＝O) 2-、-S(＝O)-、-P(＝O) 2-、-P(＝O)-、-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等。术语“4-10元杂环烷基”意指环原子数目为4、5、6、7、8、9或10的杂环烷基，且其环原子中含有1-5个独立选自上文所述的杂原子或杂原子团。任选地，“4-10元杂环烷基”包括“4-7元杂环烷基”，其中，4元杂环烷基的实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基，5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基，6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基，7元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基。
术语“杂环烷基氧基”可理解为“杂环烷基-O-”。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如，芳基可以具有6-20个碳原子，6-14个碳原子或6-12个碳原子。术语“C 6-C 10芳基”应理解为具有6～10个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的全碳单环或双环基团。特别是具有6个碳原子的环(“C 6芳基”)，例如苯基；或者具有9个碳原子的环(“C 9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者具有10个碳原子的环(“C 10芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基。
术语“芳基氧基”可理解为“芳基-O-”。
术语“杂芳基”是指具有芳香性的单环或稠合多环体系，其中含有至少一个选自N、O、S的环原子，其余环原子为C的芳香环基。术语“5-10元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环或双环芳族环系：其具有5、6、7、8、9或10个环原子，特别是5或6或9或10个环原子，且其包含1-5个，例如1-3个独立选自N、O和S的杂原子特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。术语“5-6元杂芳基”指具有5或6个环原子的芳族环系，且其包含1-3个，例如1-2个独立选自N、O和S的杂原子，实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基。
术语“杂芳基氧基”可理解为“杂芳基-O-”。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“巯基”指-SH基团。
术语“氨基”指-NH 2基团。
术语“硝基”指-NO 2基团。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的酸或碱的盐，包括化合物与无机酸或有机 酸形成的盐，以及化合物与无机碱或有机碱形成的盐。
术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 123I、 125I和 36Cl等。
某些同位素标记的本申请化合物(例如用 3H及 14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即 3H)和碳-14(即 14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如 15O、 13N、 11C和 18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。
本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到200mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。
附图说明
图1为测试例6中CT26荷瘤小鼠模型各治疗组对小鼠肿瘤体积的影响结果图。
具体实施方式
下面通过实施例对公开进行详细描述，但并不意味着对本公开任何不利限制。本文已经详细地描述了本公开，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本公开精神和范围的情况下针对本公开具体实施方式进行各种改变和改进将是显而易见的。本申请所使用的所有试剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
除非另作说明，混合溶剂表示的比例是体积混合比例。
除非另作说明，否则，％是指wt％。
化合物经手工或 软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移的单位为10 -6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)；“IC 50”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。实施例1、4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基-3-炔-2-醇(化合物1)的合成
化合物1-2：
将4-溴-2,6-二甲基苯胺(15g)溶于二甲苯(74mL)中，在氮气的保护下，加入2-氯-N-(2-氯乙基)-N-甲基乙胺盐酸盐(21.65g)和对甲苯磺酸(285.22mg)。反应液升温至140℃搅拌17小时后，LCMS监测反应完成。向反应液中加水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，并用乙酸乙酯(200mL)萃取三次，水相用饱和的碳酸钠溶液调节pH＝8，并向水相加入乙酸乙酯(300mL)萃取三次，合并乙酸乙酯有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤浓缩。残留物经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)，得到产物1-(4-溴-2,6-二甲基苯基)-4-甲基哌嗪(1-2)(3.8g)。
LCMS m/z(ESI):283.1,285.1[M+H]。
化合物1-3：
将化合物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5.45g)和中间体1-2(6.00g)溶于二氧六环(60mL)和去离子水(6mL)中，依次加入碳酸铯(20.79g)和Pd(dppf)Cl 2·CH 2Cl 2(0.87g)。氮气保护下，反应于100℃搅拌16h，TLC检测反应完毕，反应液冷至30℃，过滤，滤液减压浓缩，柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得中间体5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-3)(5.00g)。
化合物1-4：
将中间体1-3(3.00g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入氢氧化钾(2.00g)，反应液于25℃搅拌15min，然后加入碘(2.85g)，反应液于25℃搅拌3h，LCMS检测反应完毕。0℃将反应液倒入100mL饱和亚硫酸钠水溶液中，1N盐酸溶液调pH至8-9，过滤，滤饼烘干得中间体5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-4)(4.00g)。
LCMS(ESI):m/z＝447[M+H]。
化合物1：
将中间体1-4(300.00mg)分散在THF(5mL)中，依次加入2-甲基-2-丁炔醇(84.86mg)，三乙胺(136.10mg)，碘化亚铜(38.42mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(94.40mg)。氮气保护下，反应液于25℃搅拌16h。TLC检测反应完毕，过滤，滤液浓缩后采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；流动相:使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物(化合物1)(7.10mg)。
LCMS(ESI):m/z＝403[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.97(s,1H),8.44(d,J＝2.2Hz,1H),7.95(d,J＝2.2Hz,1H),7.69(s,1H),7.25(s,2H),5.37(s,1H),2.98(t,J＝4.7Hz,4H),2.36(t,J＝4.5Hz,4H),2.29(s,6H),2.18(s,3H),1.44(s,6H).
实施例2、2-((3-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)氧基)乙烷-1-胺甲酸盐(化合物2)的合成
化合物2-2：
将5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5g，25.38mmol)，联硼酸频哪醇酯(7.73g，30.45mmol)和乙酸钾(7.98g，50.75mmol)溶于二氧六环(100mL)中，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(414.47mg，507.53μmol)。反应液在80℃搅拌反应16h。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(200mL)，用乙酸乙酯(300mL)萃取两次，有机层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干。经柱层析色谱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得化合物5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(2-2)(5.12g)。
LCMS m/z(ESI):245.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.75(br s,1H),8.46(d,J＝1.5Hz,1H),8.27-8.16(m,1H),7.51-7.43(m,1H),6.52-6.39(m,1H),1.31(s,12H)。
化合物2-3：
将化合物2-2(3.24g，13.27mmol)，7-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(2g，8.85mmol)和磷酸钾(3.76g，17.69mmol)溶于无水二氧六环(80mL)和水(20mL)中，氮气保护下加入[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷(722.33mg，884.52μmol)。反应液在100℃搅拌反应4小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(300mL)，用乙酸乙酯(300mL)萃取三次。有机层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干。经柱层析色谱纯化(石油醚：四氢呋喃＝1：2)得化合物2-甲基-7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(2-3)(17g)。
LCMS m/z(ESI):264.1[M+H]；
化合物2-4：
将化合物2-3(1.4g，5.32mmol)溶于乙腈(30mL)中，加N-碘代琥珀酰亚胺(1.2g，5.32mmol)。反应液在25℃搅拌反应2小时。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩至干。加入水(60mL)，用乙酸乙酯(180mL)萃取三次。有机层用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干得粗品7-(3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(2-4)(1.7g)。
LCMS m/z(ESI):390.1[M+H]；
化合物2：
25℃将化合物2-4(150.0mg)溶于四氢呋喃(7mL)中，依次加入化合物2-(丙-2-炔-1-氧基)乙烷-1-胺(76.4mg)，Pd(pph 3) 2Cl 2(54.0mg)，碘化亚铜(22.0mg)和三乙胺(116.8mg)。氮气保护，反应液在40℃搅拌5h。LCMS检测反应完毕，过滤，滤液减压浓缩，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，水洗有机层，有机层无水硫酸钠干燥，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，采用高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得到2-((3-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)氧)乙烷-1-胺甲酸盐(化合物2)(4.9mg)。
LCMS(ESI):m/z＝361[M+H]；
1H NMR:(400MHz,D 2O)δ(ppm):8.56-8.18(m,3H),7.98(s,1H),7.59(s,1H),7.34(d,J＝7.8Hz,1H),7.21–7.11(m,2H),4.47(s,2H),4.37-4.09(m,2H),3.81(t,J＝5.1Hz,2H),3.70-3.45(m,2H),3.16(t,J＝5.0Hz,2H),3.08-2.97(m,2H),2.94(s,3H).
实施例3、N-(3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)乙酰胺(化合物3)的合成
化合物3-2：
将化合物丙-2-炔-1-胺(300.0mg)和三乙胺(827.2mg)溶于二氯甲烷(15mL)中，氮气保护，在0℃下滴加乙酰氯(471.4mg)，反应液于0℃搅拌30min。TLC板检测反应完全，减压蒸出溶剂，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，过滤，滤液浓缩，得中间体N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(3-2)(460.3mg)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ(ppm):5.87(s,1H),4.05(dd,J＝5.3,2.6Hz,2H),2.24(t,J＝2.6Hz,1H),2.02(s,3H).
化合物3：
将中间体3-2(131.0mg)溶于四氢呋喃(10mL)中，依次加入化合物1-4(200.2mg)，Pd(pph 3) 2Cl 2(62.9mg)，碘化亚铜(25.6mg)和三乙胺(136.1mg)。氮气保护下反应液在25℃搅拌15h。LCMS检测反应完毕。过滤，滤液减压浓缩，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，水洗(10ml×2)，有机层无水硫酸钠干燥，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，采用高效液相色谱(色谱柱:YMC-Actus Triart C18，流动相：使用水(含有0.05％NH 4Cl)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物(化合物3)(19.1mg)。
LCMS(ESI):m/z＝416[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):12.09(s,1H),8.53(d,J＝2.2Hz,1H),8.41(s,1H),8.05(d,J＝2.1Hz,1H),7.81(s,1H),7.34(s,2H),4.16(d,J＝5.3Hz,2H),3.08-3.02(m,4H),2.45-2.41(m,4H),2.36(s,6H),2.24(s,3H),1.86(s,3H).
实施例4、5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲氧基-丙-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物4)的合成
化合物4:
将化合物1-4(100.0mg)和3-甲氧基丙-1-炔(31.4mg)溶于四氢呋喃(3mL)中，依次加入三乙胺(68.5mg)、碘化亚铜(12.8mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(31.4mg)，氮气保护下，反应液于45℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕，减压蒸出溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到粗品50mg，再采用高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲氧基-丙-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物4)(6.0mg)。LCMS(ESI):m/z＝389[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):12.14(brs,1H),8.54(d,J＝2.2Hz,1H),8.05(d,J＝2.2Hz,1H),7.88(s,1H),7.35(s,2H),4.38(s,2H),3.33(s,3H),3.06～3.04(m,4H),2.44-2.42(m,4H),2.35(s,6H),2.24(s,3H)。
实施例5、4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-胺甲酸盐(化合物5)的合成
化合物5：
将化合物1-4(200.0mg)分散在四氢呋喃(5mL)中，依次加入化合物2-甲基丁-3-炔-2-胺(55.9mg)，三乙胺(90.73mg)，碘化亚铜(25.92mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(62.94mg)。氮气保护下，反应液于35℃搅拌3h。TLC检测反应完毕，过滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；流动相：使用水(含有0.1％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-胺甲酸盐(化合物5)(8.70mg)。
LCMS(ESI):m/z＝402[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.08(s,1H),8.51(d,J＝2.2Hz,1H),8.08(d,J＝2.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.32(s,2H),3.04(s,4H),2.44(d,J＝5.1Hz,4H),2.36(s,6H),2.25(s,3H),1.50(s,6H).
实施例6、N-(3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)甲磺酰胺(化合物6)的合成
化合物6-2：
将化合物丙-2-炔-1-胺(0.50g)和三乙胺(1.00g)溶于二氯甲烷(30mL)中，氮气保护，0℃缓慢滴加入甲磺酸酐(1.74g)，反应液于10℃搅拌2.5h。TLC检测反应完毕。减压蒸出溶剂，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，得中间体N-(丙-2-炔-1-基)甲磺酰胺(6-2)(1.35g)。直接用于下一步反应。
化合物6：
将中间体6-2(179.0mg)和化合物1-4(300.0mg)溶于四氢呋喃(15mL)中，依次加入三乙胺(203.4mg)，碘化亚铜(38.3mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(94.1mg)。氮气保护下，反应液于45℃搅拌12h。TLC检测反应完毕。反应液冷至25℃，二氯甲烷(30mL)稀释，经硅藻土过滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，采用高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物N-(3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)甲磺酰胺(化合物6)(14.0mg)。
LCMS(ESI):m/z＝452[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm):12.14(s,1H),8.53(d,J＝2.1Hz,1H),8.08(d,J＝2.1Hz,1H),7.86(s,1H),7.64(brs,1H),7.33(s,2H),4.12(s,2H),3.08-3.02(m,7H),2.46-2.40(m,4H),2.36(s,6H),2.24(s,3H).
实施例7、2-((3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)氧基)乙-1-胺甲酸盐(化合物7)的合成
化合物7：
将化合物1-4(200.0mg)分散在四氢呋喃(5mL)中，依次加入化合物2-(丙-2-炔-1-氧基)乙烷-1-胺(88.9mg)，三乙胺(90.7mg)，碘化亚铜(25.9mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(62.9mg)。 氮气保护下，反应液于40℃搅拌3h。LCMS检测反应完毕，过滤，采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；流动相：使用水(含有0.1％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物2-((3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)氧基)乙-1-胺甲酸盐(化合物7)(41.0mg)。
LCMS(ESI):m/z＝418[M+H]；
1H NMR(400MHz,D 2O)δ(ppm):8.67-8.04(m,2H),7.73(s,1H),7.56(s,1H),6.93(s,1H),6.84(s,1H),4.46(s,2H),3.80(t,J＝4.96Hz,2H),3.45-3.25(m,4H),3.18-3.04(m,4H),2.89-2.75(m,5H),2.06(s,6H).
实施例8、4-(3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)吗啉甲酸盐(化合物8)的合成
化合物8：
将化合物1-4(50mg)溶于二氧六环(2mL)，在氮气氛围下，将4-(丙-2-炔-1-基)吗啉(30.85mg)，三乙胺(56.68mg)，碘化亚铜(2.13mg)和二(三苯基磷)氯化钯(3.93mg)加入反应体系中，并用氮气置换三次。反应液升高温度至50℃，并搅拌16个小时。LCMS监测反应完成后，反应液过滤浓缩后，经板层析纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/2)得到粗产物残液。将粗产物残液经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱，使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化得到产品4-(3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)吗啉甲酸盐(化合物8)(4mg)。
LCMS m/z(ESI):444.4[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.06(br s,1H),8.53(s,1H),8.20(s,0.697H,FA),8.04(s,1H),7.81(s,1H),7.34(br d,J＝3.1Hz,2H),3.64-3.62(m,4H),3.57(s,2H),3.07-3.06(m,4H),2.57-2.55(m,4H),2.48-2.44(m,4H),2.36(s,6H),2.28(s,3H).
实施例9、2-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)噻唑甲酸盐(化合物9)的合成
化合物9-2：
将乙炔基(三甲基)硅烷(1.44g)，2-溴噻唑(2g)，碘化亚铜(464.32mg)，四(三苯基膦)钯(704.31mg)，三乙胺(3.70g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(35mL)中，氮气置换三次后反应液60℃搅拌反应3小时。将反应液冷却至25℃，过滤浓缩至干，倒入水(350mL)稀释，乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。然后柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝8/1)纯化得到产物三甲基(2-噻唑-2-基乙炔基)硅烷(184.1mg)。
1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δ7.82(d,J＝3.3Hz,1H),7.35(d,J＝3.3Hz,1H),0.29(m,9H).
化合物9：
将化合物1-4(0.1g)，2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)噻唑(89.38mg)，二氯双(三苯基膦)钯(II)(7.86mg)，四丁基氟化铵(1M)，碘化亚铜(4.27mg)和三乙胺(4.27mg)溶于二氧六环(1mL)中，用氮气流鼓泡置换三次后，反应液在50℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成后，将反应溶液冷却至室温，减压浓缩，残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化得到2-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)噻唑甲酸盐(化合物9)(1.40mg)。
LCMS m/z(ESI):428.1[M+H]；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ8.54(d,J＝1.9Hz,1H),8.31(d,J＝1.9Hz,1H),7.92(s,1H),7.89(d,J＝3.4Hz,1H),7.69(d,J＝3.3Hz,1H),7.37(s,2H),3.31-3.29(m,4H),2.93-2.91(m,4H),2.62(s,3H),2.45(s,6H).
实施例10、-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲基-3-(甲磺酰)丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶甲酸盐(化合物10)的合成
化合物10-2：
将甲基亚磺酸钠(3.58g)和氯化亚铜(289.58mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，然后逐滴加入3-氯-3-甲基-丁-1-炔(3g)，反应液在40℃搅拌16小时。TLC监测反应完成。过滤，减压浓缩至干,得到产物3-甲基-3-(甲磺酰)丁-1-炔(780mg，粗品),直接用于下一步。化合物10：
将化合物1-4(80mg)，3-甲基-3-(甲磺酰)丁-1-炔(262.06mg)，二氯双(三苯基膦)钯(II)(6.29mg)，碘化亚铜(3.41mg)和三乙胺(90.69mg)溶于二氧六环(1mL)中，用氮气流鼓泡置换三次后，反应液在50℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成后，将反应溶液冷却至室温后，反应液用水(3mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得到5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲基-3-(甲磺酰)丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶甲酸盐(化合物10)(16.9mg)。
LCMS m/z(ESI):465.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ8.48(s,0.596H,FA),8.48(s,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.73(s,1H),7.34(s,2H),3.39-3.36(m,4H),3.20-3.13(m,7H),2.80(s,3H),2.46(s,6H),1.79(s,6H).
实施例11、3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(化合物11)的合成
化合物11-2：
将化合物1-4(300mg)和化合物丙-2-炔-1-基乙酸酯(132mg)，Pd(PPh 3) 2Cl 2(94.3mg)，CuI(38.4mg)，三乙胺(204mg)溶于四氢呋喃(15mL)中。置换氩气三次，25℃反应15h。反应液过滤，滤液旋干后柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到中间体(11-2)(130mg)。化合物11：
将中间体11-2(100mg)溶于氨甲醇溶液中(3mL)，室温下搅拌2h。LCMS检测有产物生成。浓缩后高效液相色谱(色谱柱:YMCC18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得到3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(化合物11)(11.4mg)。
LCMS m/z(ESI):375[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.15(s,1H),8.60(d,J＝2.2Hz,1H),8.12(d,J＝2.2Hz,1H),7.88(s,1H),7.41(s,2H),5.35(t,J＝5.9Hz,1H),4.42(d,J＝5.8Hz,2H),3.14–4.08(m,4H),2.52–2.47(m,4H),2.42(s,6H),2.31(s,3H).
实施例12、1-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)环丁醇甲酸盐(化合物12)的合成
化合物12-2：
将环丁酮(2g)滴加到乙炔基溴化镁(0.5M,85.60mL)的四氢呋喃溶液中，氮气保护下反应 液在0℃搅拌15分钟。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2:1，高锰酸钾显色)监测反应完成。加入水(100mL)淬灭反应，乙酸乙酯(100mL)萃取2次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干得化合物1-乙炔基环丁醇(1.10g，粗品)。
化合物12：
将1-乙炔基环丁醇(344.60mg)，5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-4)(80mg)，二氯双(三苯基膦)钯(II)(6.29mg)，碘化亚铜(3.41mg)和三乙胺(90.69mg)溶于二氧六环(1mL)中，用氮气流鼓泡置换三次后，反应液在50℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成，将反应溶液冷却至室温后，反应液用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL)萃取两次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得到1-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)环丁醇甲酸盐(化合物12)(4.50mg)。
LCMS m/z(ESI):415.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ8.46(s,1H),8.18(d,J＝2.1Hz,1H),7.62(s,1H),7.30(s,2H),3.22-3.20(m,4H),2.66-2.61(m,4H),2.59-2.51(m,2H),2.44(s,6H),2.40(s,3H),2.39-2.36(m,2H),1.98-1.89(m,2H).
实施例13、((3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫烷(化合物13)的合成
化合物13-2:
将3-溴丙-1-炔(766.26mg，纯度80％)，二甲基亚磺酰亚胺(0.4g)，碳酸氢钠(541.14mg)溶于乙腈(20mL)，反应液在80℃搅拌16小时。TLC监测反应完成。过滤，减压浓缩至干得到产物二甲基(丙-2-炔-1-基亚氨基)-λ6-硫烷(13-2)(0.6g，粗品)。
化合物13:
将化合物13-2(293.95mg)，5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1-4)(100mg)，二氯双(三苯基膦)钯(II)(7.86mg)，碘化亚铜(4.27mg)和三乙胺(113.36mg)溶于二氧六环(1mL)中，用氮气流鼓泡置换三次后，反应液在50℃下搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成，将反应溶液冷却至室温后，反应液经过减压浓缩，残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得到((3-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丙-2-炔-1-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫烷(化合物13)(2.80mg)。
LCMS m/z(ESI):450.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ8.50-8.44(m,1H),8.22(d,J＝2.1Hz,1H),7.61(s,1H),7.35(s,2H),4.19(s,2H),3.38(br s,4H),3.22(br s,10H),2.86(s,3H),2.46(s,6H).
实施例14、2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-醇(化合物14)的合成
化合物14-2：
将2-甲基丁-3-炔-2-醇(10g)溶于四氢呋喃(50mL)中，N 2保护下，在0℃加入叔丁醇钠(22.85g)，搅拌0.5h后再加入溴乙酸乙酯(23.82g)，继续搅拌15h。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)显示反应完毕。加水(100mL)和乙酸乙酯(300mL)稀释，水洗(150mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)得到中间体(14-2)(5.00g)。
化合物14-3：
将化合物14-2(1.5g)溶于四氢呋喃(10mL)中。在N 2保护下，0℃加入LiAlH 4(367.93mg)，反应液继续搅拌1h。反应物加入1N NaOH水溶液淬灭后，过滤，浓缩后得到中间体(14-3)(600mg，粗品)，直接用于下一步反应。
化合物14：
将化合物14-3(100mg)溶于四氢呋喃(10mL)中，在室温加入化合物1-4(86.15mg)，碘化亚铜(12.80mg)，Pd(PPh 3) 4(25.89mg)和三乙胺(68.02mg)。氮气保护下，反应液于室温下搅拌15h。LC-MS检测反应完毕。反应液冷却至25℃，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，滤液浓缩后采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-醇(化合物14)(13.3mg)。
LCMS(ESI):m/z＝447[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm)：δ12.07(s,1H),8.52(d,J＝2.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.1Hz,1H),7.82(s,1H),7.33(s,2H),4.60(t,J＝5.6Hz,1H),3.65(t,J＝5.6Hz,2H),3.54(q,J＝5.6Hz,2H),3.05(t,J＝4.6Hz,4H),2.43(t,J＝4.8Hz,4H),2.36(s,6H),2.24(s,3H),1.54(s,6H).
实施例15、N-(4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)甲磺酰胺(化合物15)的合成
化合物15-2：
将2-甲基丁-3-炔-2-胺(500.00mg)分散在二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(1.22g)，降温至0℃，滴加甲基磺酰氯(826.77mg)。滴毕，反应液于0℃搅拌3h，TLC检测反应完(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，反应液倒入20mL饱和氯化铵溶液中，分液，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得化合物N-(2-甲基丁-3-炔-2-基)甲磺酰胺(15-2)(0.68g，粗品)，直接用于下一步。
化合物15：
将化合物1-4(100.00mg)分散在THF(5mL)中，加入化合物15-2(54.18mg)，三乙胺(45.34mg)，碘化亚铜(12.80mg)和Pd(PPh 3) 4(77.67mg)。氮气保护下，反应液于25℃搅拌16h。反应液过滤，滤液浓缩后，采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物N-(4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)甲磺酰胺(化合物15)(36.5mg)。
LCMS(ESI)：m/z＝480[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.04(s,1H),8.45(d,J＝2.2Hz,1H),8.01(d,J＝2.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.43(s,1H),7.24(s,2H),3.03(s,3H),3.01-2.95(m,4H),2.38-2.34(m,4H),2.29(s,6H),2.18(s,3H),1.56(s,6H).
实施例16、2-[2-[5-[3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基-乙炔基环戊醇(化合物16)的合成
化合物16-2：
在-78℃时，将三甲基硅乙炔(3.5g)溶于四氢呋喃(45mL)中，缓慢滴加正丁基锂(14.27mL，2.5M)。在该温度下，搅拌10分钟以后，逐渐加入三氟化硼乙醚(4.40mL)，继续搅拌10分钟，向该反应体系中加入氧化环戊烯(2.07mL)。反应液在零下78℃下搅拌5小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)显示反应完成。在-78℃下，逐渐滴加饱和氯化铵水溶液(15mL)淬灭正丁基锂。向反应液中加水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)，并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并乙酸乙酯有机相，用无水硫酸镁干燥有机相，过滤浓缩得到浓缩残液。浓缩液经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到2-乙炔基环戊氧基-三甲基硅烷(化合物16-2)(1g)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ4.18-4.04(m,1H),2.63-2.50(m,1H),2.16-2.01(m,1H),2.00-1.90(m,1H),1.78-1.68(m,2H),1.68-1.61(m,1H),1.59-1.48(m,2H),0.14-0.10(m,9H).
化合物16-3：
将化合物(16-2)(400mg)溶于甲醇(40mL)，并加入碳酸钾(909.6mg)，反应液在25℃下搅拌反应16个小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)监测反应完成。反应液过滤浓缩后，经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到2-乙炔基环戊醇(16-3)(90mg)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ4.17-4.10(m,1H),2.58-2.51(m,1H),2.39(d,J＝2.5Hz,1H),2.14-1.93(m,2H),1.80-1.61(m,4H).
化合物16：
将中间体1-4(35mg)、化合物16-3(51.8mg)溶于二氧六环(1mL)中，并加入三乙胺(39.68mg)，碘化亚铜(1.49mg)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(2.75mg)。反应液用氮气置换三次，并加热到50℃下搅拌16小时，LCMS监测反应完成。反应液过滤浓缩后，溶于DMF(1.5mL)，将粗产物残液经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.225％HCOOH)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得2-[2-[5-[3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基[乙炔基]环戊醇(化合物16)(4.17mg)。
LCMS m/z(ESI):429.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ8.47(br s,1H),8.13(s,1H),7.54(s,1H),7.33(s,2H),4.31-4.22(m,1H),3.39-3.31(m,4H),3.24-3.22(m,4H),2.86(s,4H),2.46(s,6H),2.24-2.16(m,1H),2.10-2.08(m,1H),1.88-1.79(m,3H),1.68-1.61(m,1H).
实施例17、2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)-N,N-二甲基乙烷-1-胺(化合物17)的合成
化合物17-2：
将化合物14-3(1.00g)溶于二氯甲烷(15mL)，加入三乙胺(947.40mg)，0℃滴加MsCl(983.13mg)，滴毕，13℃反应2h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1，Rf＝0.45)显示原料反应完全。反应液过滤，旋干，加水(20mL)，甲基叔丁基醚萃取(20mL X 3)，有机相干燥，过滤，浓缩得到中间体2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙基甲磺酸酯17-2(1.40g)。
化合物17-3：
将化合物17-2(300.0mg)溶于二甲胺水溶液(6mL)，加入乙醇(0.3mL)催化，23℃反应10h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5：1，Rf＝0.1)显示原料反应完全。反应液用甲基叔丁基醚萃取(50mL X 3)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到中间体N,N-二甲基-2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-胺17-3(200mg)。
化合物17：
将化合物1-4(100.0mg)溶于THF(925.00μL)，依次加入中间体17-3(139.12mg)，CuI(12.80mg)，Pd(PPh 3) 2Cl 2(15.73mg)和三乙胺(68.02mg)，室温反应16h。LCMS显示原料反应完全。反应液加三聚硫氰酸的钠盐水溶液(4mL)除钯，过滤，旋干，用高效液 相色谱制备(色谱柱:YMCC18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)得到2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)-N,N-二甲基乙烷-1-胺(化合物17)(8.0mg)。
LCMS(ESI)：m/z＝474[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.11(brs,1H),8.53(d,J＝1.88Hz,1H),8.00(d,J＝2.00Hz,1H),7.83(s,1H),7.32(s,2H),3.71-3.74(m,2H),3.05-3.06(t,J＝4.2Hz,4H),2.44-2.48(m,6H),2.36(s,6H),2.25(s,3H),2.17(s,6H),1.54(s,6H)。
实施例18、2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-胺三氟乙酸盐(化合物18)的合成
化合物18-2：
将化合物17-2(500mg)溶于EtOH(2mL)中，加入到氨水(20mL)中，反应液于60℃搅拌反应3h。TLC检测反应完毕。反应液冷却至25℃，用甲基叔丁基醚(10×3mL)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得产物2-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-胺(18-2)(201mg)。
1H NMR:(400MHz,Chloroform-d)δppm 3.59(t,J＝5.2Hz,2H),2.86(t,J＝5.2Hz,2H),2.41(s,1H),1.48(s,6H).
化合物18：
将化合物18-2(56.99mg)，化合物1-4(100mg)，三乙胺(45.25mg)溶于THF(10mL)中，加入碘化亚铜(12.80mg)，Pd(PPh 3) 2Cl 2(31.45mg)，反应液加热至40℃搅拌反应12h，LCMS检测反应完毕。反应液过滤，浓缩滤液得到的粗品用高效液相色谱(色谱柱:YMCC18；流动相：使用水(含有0.1％TFA)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得到2-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙烷-1-胺三氟乙酸盐(化合物18)(12mg)。
LCMS(ESI):m/z＝444[M-H]；
1H NMR:(400MHz,DMSO-d 6)δppm 12.16(d,J＝2.7Hz,1H),9.75(s,1H),8.53(d,J＝2.1Hz, 1H),8.03(d,J＝2.1Hz,1H),7.89–7.78(m,4H),7.42(s,1H),7.33(s,1H),3.78(t,J＝5.3Hz,2H),3.69–3.31(m,4H),3.24–3.16(m,2H),3.12–3.00(m,4H),2.91(d,J＝4.0Hz,3H),2.38(s,6H),1.59(s,6H).
实施例19、5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲基-3-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物19)的合成
化合物19-2：
将化合物17-2(0.4g)溶于乙醇(6mL)中，依次加入三乙胺(981.2mg)及四氢吡咯(413.8mg)。反应液于60℃搅拌反应6h。TLC检测反应完毕(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)。反应液冷却至室温，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，水洗有机层(10mL)，有机相经无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩至干，得化合物19-2(350.0mg)。
化合物19：
将反应物化合物1-4(70.5mg)，化合物19-2(85.9mg)溶于四氢呋喃(3mL)中，依次加入三乙胺(48.0mg)，碘化亚铜(9.0mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(22.2mg)。反应液于氮气保护下，20℃搅拌反应12h。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)稀释，加入三聚硫氰酸的钠盐水溶液搅拌1h。经硅藻土抽滤，滤液减压浓缩至干，再经高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得化合物5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲基-3-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物19)(2.0mg)。
LCMS:m/z＝500.4[M+H]；
1H NMR:(400MHz,Chloroform-d)δppm 9.46(s,1H),8.46(s,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.18–7.15(m,2H),3.90–3.81(m,2H),3.12(s,4H),2.75(m,6H),2.49(s,4H),2.36(s, 6H),2.32(s,3H),1.55(s,6H),1.22(m,4H).
实施例20、1-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙烷-2-醇(化合物20)的合成
化合物20-2：
将化合物1-4(500mg)溶于四氢呋喃(15mL)中，氮气保护，0℃加入氢化钠(53.77mg)搅拌0.5h，加入对甲苯磺酰氯(256.29mg)搅拌5h。LCMS检测反应完全。加水(20mL)，加入乙酸乙酯(30mL)稀释，水洗(15mL×3)，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-碘-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶(20-2)(500mg)。
LCMS(ESI):m/z＝601[M+H]；
化合物20-3：
将化合物3-氯-3-甲基丁-1-炔(1g)，1,2-丙二醇(741.93mg)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸银(2.69g)，在80℃下搅拌反应15h。反应液冷却至室温，过滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)分离纯化，得到化合物1-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙烷-2-醇(20-3)(500mg)。
化合物20-4：
将化合物20-3(94.72mg)和化合物20-2(200mg)溶于四氢呋喃(15mL)中，加入CuI(19.03mg)，Pd(PPh) 3Cl 2(46.75mg)和三乙胺(101.10mg)，氮气保护下室温搅拌反应15h。加入水(20mL)淬灭，再加入二氯甲烷(20mL X 3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，收集滤液，减压蒸出溶剂，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化(SiO 2,二氯甲烷/甲醇＝10/1)分离纯化得到化合物1-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙烷-2-醇(20-4)(180mg)。
化合物20：
将化合物20-4(140mg)溶于叔丁醇(5mL)中，加入氢氧化钾(38.33mg)，在30℃下搅拌反应1h。LCMS检测反应完毕。待反应液冷却至室温，逐次滴加醋酸调PH至7，用二氯甲烷(20mL X 3)和水(10mL)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，再经pre-HPLC(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得到1-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙烷-2-醇(化合物20)(8.1mg)。LCMS(ESI):m/z＝461[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(ppm)：δ12.10(s,1H),8.54(d,J＝2.2Hz,1H),8.03(d,J＝2.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.34(s,2H),4.60(d,J＝4.6Hz,1H),3.76(dd,J＝6.2,4.9Hz,1H),3.57(dd,J＝8.9,5.8Hz,1H),3.43(d,J＝6.1Hz,1H),3.06(t,J＝4.6Hz,4H),2.48–2.42(m,4H),2.37(s,6H),2.26(s,3H),1.54(s,6H),1.11(d,J＝6.2Hz,3H).
实施例21、3-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙腈(化合物21)的合成
化合物21-2：
将2-甲基丁-3-炔-2-醇(1.0g)溶于水(4mL)中，加入45％的KOH水溶液(2mL)，0℃下缓慢滴加丙烯腈(630.9mg)。反应液自然升温至20℃，搅拌反应12h后，加入二氯甲烷(30mL)稀释，水洗有机层，收集有机相经无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩至干，得化合物 21-2(1.0g)。
化合物21：
将化合物1-4(50.0mg)，化合物21-2(46.1mg)，溶于四氢呋喃(3mL)中，依次加入三乙胺(34.0mg)，CuI(6.4mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(15.7mg)。反应液于氮气保护下，20℃搅拌反应12h。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入二氯甲烷(10mL)稀释，加入三聚硫氰酸的钠盐水溶液搅拌1h。经硅藻土抽滤，滤液减压浓缩至干，再经高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相：使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得3-((4-(5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)丙腈(化合物21)(1.3mg)。
LCMS:m/z＝456.2[M+H]；
1H NMR:(400MHz,Chloroform-d)δppm 9.34(s,1H),8.54(d,J＝2.1Hz,1H),8.09(d,J＝2.0Hz,1H),7.54(d,J＝2.2Hz,1H),7.28(s,2H),3.90(t,J＝6.5Hz,2H),3.49–3.10(m,4H),2.94–2.63(m,6H),2.53(s,3H),2.44(s,6H),1.63(s,6H).
实施例22、(1-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)环丁基)甲醇(化合物22)的合成
化合物22-2：
在0℃下，将[1-(羟甲基)环丁基]甲醇(2g)溶于四氢呋喃(10mL)，在氮气氛围下，将氢化钠(688.65mg)加入到反应体系，用氮气置换三次。反应液在0℃下反应30分钟，然后将溶在四氢呋喃(20mL)中的叔丁基二苯基氯硅烷(4.73g)注射到反应液中，并升高温度至25℃搅拌13个小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5/1)监测反应完成。反应液加水(30mL)淬灭反应后，用乙酸乙酯(30mL)分别萃取两次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后减压浓缩干，浓缩液经柱层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到(1-(((叔-丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)环丁基)甲醇(22-2)(3.8g)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ7.73-7.66(m,4H),7.46-7.35(m,6H),3.65(s,2H),3.62(s, 2H),1.87-1.76(m,6H),1.06(s,9H).
化合物22-3:
在-78℃下，将二甲亚砜(2.51g)溶于二氯甲烷(20mL)中，并加入草酰氯(2.04g)，用氮气置换三次，反应液78℃下搅拌半个小时之后，将化合物22-2(3.8g)溶于二氯甲烷(20mL)中，并用注射器注射到反应液中，搅拌半小时之后，向反应液中注射三乙胺(5.42g)。反应液逐渐升温至25℃，并搅拌3小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝5/1)监测反应完成后，向反应液中加入水(30mL)，并用二氯甲烷(30mL)分别萃取两次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥后减压浓缩，得到1-(((叔-丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)环丁烷-1-甲醛(22-3)(3.48g)。
化合物22-4：
将化合物22-3(3.48g)溶于甲醇(15mL)中，将(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(2.84g)和碳酸钾加入到反应体系中，反应液在25℃下搅拌反应13个小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)检测反应完成后，减压浓缩，粗残液经过板层析纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到叔丁基((1-乙炔基环丁基)甲氧基)二苯基硅烷(22-4)(1.94g)。
1H NMR 400MHz,METHANOL-d 4)δ7.75-7.69(m,4H),7.49-7.39(m,6H),3.65(s,2H),2.57(s,1H),2.31-1.80(m,6H),1.09(s,9H).
化合物22-5:
将化合物22-4(1g)于四氢呋喃(10mL)中，将四丁基氟化铵(2.25g)加入到反应体系中，反应液在25℃下搅拌反应13个小时，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)检测反应完成后，减压浓缩，残留物经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到(1-乙炔基环丁基)甲醇(22-5)(210mg)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ3.57(s,2H),2.59-2.53(m,1H),2.20-2.13(m,4H),2.10-1.85(m,2H).
化合物22-6：
将化合物20-2(120mg)，化合物22-5(110.06mg)，三乙胺(101.10mg)溶于二氧六环(5mL)，在氮气氛围下将二氯双(三苯基膦)钯(7.01mg)和碘化亚铜(3.81mg)加入该反应体系，用氮气置换三次。反应液在50℃下搅拌反应16个小时。LCMS监测反应完成。反应液用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取，收集到的有机相用硫酸钠干燥后减压浓缩干，然后经薄层色谱纯化(二氧化硅，石油醚/四氢呋喃＝1/1)得到(1-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)环丁基)甲醇(22-6)(100.00mg)。
LCMS m/z(ESI):583.3[M+H]。
化合物22：
将化合物22-6(150mg)溶于叔丁醇(5mL)，将氢氧化钾(43.32mg)加入该反应体系。反应液在25℃下搅拌反应2小时。LCMS检测反应完成后，将反应溶液冷却至室温后，加入醋酸调节反应体系pH值为4-5后，减压浓缩，向残留物中加入水(5mL)至残留物完全溶解，加入乙酸乙酯(10mL)萃取，收集到的有机相用硫酸钠干燥后减压浓缩干。残留物经过制备液相色谱(Phenomenex Gemini-NX柱；使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)纯化，得到(1-((5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙炔基)环丁基)甲醇(27.56mg)(化合物22)。
LCMS m/z(ESI):429.3[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(br s,1H),8.49(d,J＝2.1Hz,1H),8.02(d,J＝2.1Hz,1H),7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.33(s,2H),5.07(t,J＝5.9Hz,1H),3.56(d,J＝5.9Hz,2H),3.06-3.04(m,4H),2.45-2.43(m,4H),2.36(s,6H),2.25(s,3H),2.23-2.17(m,4H),2.06-1.83(m,2H).
参考本文实施例的合成方法，还合成了如下化合物，其结构和表征数据为：
实施例39、2-甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丁-3-炔-2-醇(化合物39)的合成
将化合物2-4(250.0mg)溶于四氢呋喃(5mL)中，依次加入2-甲基-3-丁炔-2-醇(108.0mg)，三乙胺(195.0mg)，Pd(PPh 3) 2Cl 2(45.1mg)，碘化亚铜(24.5mg)，氮气保护下25℃反应12小时。LCMS检测反应完毕。向反应液中加入二氯甲烷(15mL)稀释，经硅藻土抽滤，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝5:1)，再经高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相:使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液),得化合物2-甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丁-3-炔-2-醇(化合物39)(3.0mg)。
LC-MS:(SIM-H-129):m/z＝346.1[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.54(d,J＝2.2Hz,1H),8.05(d,J＝2.2Hz,1H),7.77(s,1H),7.47(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.22(d,J＝7.9Hz,1H),5.43 (s,1H),3.57(s,2H),2.86(t,J＝5.9Hz,2H),2.62(t,J＝5.9Hz,2H),2.36(s,3H),1.51(s,6H).
实施例40、2-((2-甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丁-3-炔-2基)氧基)乙-1-醇(化合物40)的合成
将化合物2-4(180.00mg)分散在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入化合物14-3(177.81mg)，三乙胺(93.59mg)，碘化亚铜(26.42mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(64.92mg)。氮气保护下，反应于25℃搅拌4h。LCMS检测反应完毕，反应液倒入30mL水中，二氯甲烷(50mL*5)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后采用高效液相色谱(色谱柱:Gemini NX-C18；使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得化合物2-((2-甲基-4-(5-(2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)丁-3-炔-2基)氧基)乙-1-醇(40)(6.0mg)。
LC-MS(ESI):m/z＝390.1[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.09(s,1H),8.55(d,J＝2.2Hz,1H),8.04(d,J＝2.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.48(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),7.41(d,J＝1.9Hz,1H),7.22(d,J＝7.9Hz,1H),4.59(t,J＝5.6Hz,1H),3.65(t,J＝5.6Hz,2H),3.59–3.51(m,4H),2.86(t,J＝5.9Hz,2H),2.62(t,J＝5.9Hz,2H),2.36(s,3H),1.54(s,6H).
实施例41、5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物41)的合成
化合物41-2：
将2-甲基-3-丁炔-2-醇(1.0g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，0℃下加入钠氢(475.5mg,含量60％)，0℃下搅拌30分钟，然后0℃下把硫酸二甲酯(1.50g)滴入反应液中，滴毕，升温至25℃并搅拌反应过夜。薄层层析检测反应完毕，用水(100mL)稀释，用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤反应液，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得化合物3-甲氧基-3-甲基丁-1-炔(41-2)(220.0mg)。
化合物41-3：
将化合物20-2(100.0mg),三乙胺(50.6mg)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入碘化亚铜(6.3mg)，Pd(PPh 3) 2Cl 2(11.7mg)，氮气氛围下，搅拌反应20min后，加入2(32.7mg)的四氢呋喃溶液(2mL)，继续搅拌反应过夜。LC-MS检测反应完毕。反应液以二氯甲烷(50mL)稀释，水洗有机层三次(40mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩至干，柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，得5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(41-3)(94.0mg)。
化合物41：
将化合物41-3(92.0mg)溶于叔丁醇(5mL)中，加入氢氧化钾(27.1mg)，25℃搅拌反应2h，LC-MS检测反应完毕。用醋酸调节反应液pH值至中性，浓缩滤液得到的粗品用高效液相色谱(色谱柱:YMC C18；流动相:使用水(含有0.1％氨水)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得到5-(3,5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-3-(3-甲氧基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(41)(12.5mg)。
LC-MS(ESI):m/z＝417.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.08(s,1H),8.51(d,J＝2.2Hz,1H),7.99(d,J＝2.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.32(s,2H),3.35(s,3H),3.07–3.02(m,4H),2.45–2.40(m,4H),2.36(s,6H),2.24(s,3H),1.52(s,6H)。
实施例42、4-(5-(3-((二甲基氨基)甲基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-醇(化合物42)的合成
化合物42-2：
将起始物料2-溴-5-硝基苯甲醛(5.00g)溶于甲醇(100mL)中，加入原甲酸三甲酯(3.46g)，一水合对甲苯磺酸(413.49mg)，于70℃搅拌10h。LCMS检测反应完毕，反应液冷却至30℃，减压浓缩至干，残留物饱和碳酸钠水溶液调节pH至8-9，用二氯甲烷(100mL*3) 萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得1-溴-2-(二甲氧基甲基)-4-硝基苯(42-2)(6.00g)。
化合物42-3：
将化合物42-2(6.00g)分散在二氧六环(100mL)/水(10mL)中，加入2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(5.48g)，Pd(dppf)Cl 2(889.57mg)，碳酸钾(9.01g)，氮气保护下反应于80℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕，反应液冷却至30℃，倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取(200mL*3)，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液制砂过柱(石油醚:乙酸乙酯＝5:1-2:1)得4-(2-(二甲氧基甲基)-4-硝基苯基)-3,6-二氢-2H-吡喃(42-3)(5.5g)。
化合物42-4：
将化合物42-3(5.30g)分散在二氧六环(100mL)中，加入3M盐酸水溶液(25mL)，反应于25℃搅拌2h。LCMS检测反应完毕，向反应液加入100mL乙酸乙酯，分液，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-5-硝基苯甲醛(42-4)(5.85g)，直接用于下一步。
化合物42-5：
将化合物42-4(5.85)分散在二氯甲烷(100mL)中，加入二甲胺的四氢呋喃溶液(25.08mL，2M)，25℃搅拌0.5h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(10.63g)，乙酸(1.66g)，25℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕，反应液用饱和碳酸钠水溶液调pH至9，分液，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得1-(2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-5-硝基苯基)-N,N-二甲基甲胺(42-5)(5.60g)。
化合物42-6：
将化合物42-5(1.00g)分散在甲醇(10mL)/乙酸(10mL)中，加入PtO 2/C(100.00mg)，常压氢气酚条件下25℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕，反应液用饱和碳酸钠水溶液调pH至9-10，二氯甲烷(100mL*4)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得3-((二甲氨基)甲基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯胺(42-6)(0.85g)。
化合物42-7的制备：
将氢溴酸(5mL)冷却至0℃，将化合物42-6(0.40g)溶解在其中，滴加亚硝酸钠(129.56mg)的水溶液(5mL)，保持温度0-5℃反应0.5h，将溴化亚铜(134.67mg)溶于HBr(5mL)，保持温度0-5℃滴加进反应液，滴毕100℃搅拌2h。LCMS检测反应完毕，反应液冷却至30℃，饱和碳酸钠水溶液调pH至9-10，乙酸乙酯(100mL*3)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得1-(5-溴-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(42-7)(0.50g)。
化合物42-8：
将化合物42-7(500.00mg)分散在二氧六环(10mL)/水(1mL)中，加入7-氮杂吲哚-5-硼酸频哪醇酯(5.48g)，Pd(dppf)Cl 2(122.68mg)，K 2CO 3(695.18mg)，氮气保护下反应于90℃搅拌16h。LCMS检测反应完毕，反应液冷却至30℃，直接制砂过柱(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得1-(5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(42-8)(346.00mg)。
化合物42-9：
将化合物42-8(346.00mg)分散在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入氢氧化钾(258.72mg)，反应于25℃搅拌0.5h，加入碘(314.16mg)，反应于25℃搅拌4h。LCMS检测反应完毕，向反应液加入50mL饱和亚硫酸钠水溶液，浓盐酸调pH至8，过滤，滤饼烘干得1-(5-(3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(42-9)(0.32g)。
化合物42：
将化合物42-9(100.00mg)分散在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-甲基-3-丁炔-2-醇(36.47mg)，三乙胺(43.87mg)，碘化亚铜(12.38mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(30.43mg)。氮气保护下，反应于25℃搅拌4h。LCMS检测反应完毕，反应液倒入30mL水中，二氯甲烷(50mL*5)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后采用高效液相色谱(色谱柱:流动相:使用水(含有0.1％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备，得4-(5-(3-((二甲基氨基)甲基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-醇(42)(2.40mg)。
LC-MS(ESI):m/z＝418.2[M+H]；
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.06(s,1H),8.54(d,J＝2.2Hz,1H),8.05(d,J＝2.2Hz,1H),7.77(s,1H),7.60(dd,J＝8.0,2.1Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),5.43(s,1H),4.01–3.94(m,2H),3.53–3.40(m,4H),3.28–3.17(m,1H),2.20(s,6H),1.82–1.59(m,4H).
实施例43、2-((4-(5-(5-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙-1-醇(化合物43)的合成
化合物43-2：
将6-溴-8-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(500.0mg)溶于甲醛(4mL)和甲酸(2mL)中，升至80℃反应4小时。LCMS显示原料反应完全，反应液用碳酸钠水溶液调节pH＝8-9，二氯甲烷(50mL*3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得6-溴-8-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(43-2)(450.0mg)。
化合物43-3：
将化合物43-2(350.0mg)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(366.90mg)溶于二氧六环(1mL)和水(0.3mL)中，加入碳酸钾(566.55mg)和Pd(dppf)Cl 2(99.98mg)，氮气置换后，升至100℃反应4小时。LCMS显示原料反应完全，反应液静置，分液，有机相干燥，浓缩制砂过柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到8-甲氧基-2-甲基-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(化合物43-3)(390.0mg)。LC-MS(ESI):m/z＝294.15[M+H] +。
化合物43-4：
将化合物43-3(390.0mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，加入氢氧化钾(333.45mg)，再加入碘(404.90mg)，20℃反应2小时。LCMS显示原料反应完全，反应液泼入亚硫酸钠水溶液(30mL)中，过滤，滤饼烘干得到7-(3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉(43-4)(374.0mg)。
LC-MS(ESI):m/z＝420.05[M+H] +。
化合物43：
将化合物43-4(101.70mg)和化合物14-3(93.27mg)溶于四氢呋喃(5mL)中，依次加入三乙胺(49.09mg),碘化亚铜(13.86mg)和Pd(PPh 3) 2Cl 2(34.05mg),氮气保护下25℃反应过夜。LCMS显示原料反应完全，反应液硅藻土过滤，旋干制砂过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1)得到粗品160.0mg。采用高效液相色谱分离(色谱柱:YMCC18；流动相:使用水(含有0.05％氨水)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液)制备得到2-((4-(5-(5-甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-7-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-2-甲基丁-3-炔-2-基)氧基)乙-1-醇(化合物43)(6.2mg)。
LCMS(ESI)：m/z＝420.3[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),8.21(d,J＝2.1Hz,1H),7.84(s,1H),7.78(d,J＝2.1Hz,1H),6.70(s,2H),4.54(brs,1H),3.75(s,3H),3.60(t,J＝5.6Hz,2H),3.55–3.47(m,4H),2.57–2.50(m,4H),2.31(s,3H),1.50(s,6H).
生物学活性及相关性质测试例
测试例1：HPK1激酶活性测定
实验材料:
HPK1(MAP4K1)35948购于Signalchem，#M23-11G
MBP 35951购于Signalchem，#M42-51N
ADP-GLO购于Promega，#V9102
DMSO购于Sigma
384-well assay plate购于Perkin Elmer#6007290
384-well assay plate购于LABCYTE
MgCl 2,MnCl 2,DTT,Tween-20,HEPES,BSA购于Sigma
实验仪器:
纳升级声波移液系统： LIQUID HANDLERS(LABCYTE,USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
实验方法：
本实验采用Promega公司开发的一种发光法激酶检测方式(ADP-Glo TM)检测所合成的化合物对HPK1激酶的抑制活性。具体方法：化合物用ECHO650进行梯度稀释，并以50nL/孔转移至反应板内(384孔白板，Perkin Elmer#6007290)，化合物起始浓度为100nM，3倍梯度稀释，10个浓度点；HPK1用激酶反应缓冲液(50mM HEPES(pH 7.5),0.01％Tween-20,5mM MgCl 2,0.01％BSA和0.05mM DTT)稀释至合适浓度，各反应孔加入3μl酶(终浓度50nM)或酶反应缓冲液，将反应板置于离心机内，1000转/分钟离心30秒，冰上孵育30分钟。加入2μl/孔2.5 X ATP(62.5μM)/底物混合物(250μg/mL)，1000转/分钟离心30秒，室温孵育60分钟。加入5μL/孔ADP-Glo混合均匀，室温反应40分钟。加入检测底物，10μL/孔，再室温孵育30分钟。置于酶标仪内(Envision，Perkin Elmer)读取化学发光信号。按公式计算受试化合物抑制率(n＝2)：抑制率％＝(最大信号值-各孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100％。最大信号值为只含DMSO的酶反应活性最强孔读值；最小信号值为不含酶的反应孔读值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC 50/X)^HillSlope)，根据拟合曲线计算IC 50。
测试结果见表1。
表1、HPK1酶学抑制活性
化合物编号 HPK1 IC 50(nM)
1 1.99
2 14.77
3 18.34
4 4.98
5 19.03
6 12.98
7 1.26
8 10.37
9 1.19
10 2.35
11 7.76
12 1.58
13 13.27
14 1.2
15 6.46
16 6.04
17 3.29
18 0.89
19 5.37
20 3.03
21 10.83
22 3.33
23 15.77
24 10.43
25 5.42
26 5.45
27 2.33
28 10.32
29 24.98
30 11.62
32 51.45
39 21.68
40 3.96
41 5.57
42 4.52
测试例2：激酶家族选择性测定
实验材料:
激酶：AMPK(V1921)，Aurora-a(V1931)，BMPR2(VA7387)，CAMK4(V2951)，CHK1(V1941)，CK2α1(V4482)，ERK2(V1961)，GSK3b(V1991)，IRAK4(V2621)，LTK(VA7483)，Mer(V3541)，PI3Ka(V1721)，TrkA(V2931)购于Promega；JAK3(08-046)，BTK(08-180)，CDK2/CycE1(04-165) 购于Carna Bioscience；EGFR(E10-112G-10)，GLK(M25-11G)，HGK(M26-11G-10)，IKKb(I03-18G-10)，KDR(K01-11G-10)，LCK(L03-10G-10)，LOK(S29-10G-10)，MEK1(M02-10G-10)，PDGFRa(P12-18G)，PKAcα(P51-10G-10)，ROCK1(R10-11G-10)购于Signalchem
ADP-GLO购于Promega，#V9102
DMSO购于Sigma
384-well assay plate购于Perkin Elmer#6007290或LABCYTE
实验仪器:
纳升级声波移液系统： LIQUID HANDLERS(LABCYTE,USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
实验方法：
本实验采用Promega公司开发的一种发光法激酶检测方式(ADP-Glo TM)检测所合成的化合物对激酶的抑制活性。具体方法：化合物用ECHO650进行梯度稀释，并以50nL/孔转移至反应板内(384孔白板，Perkin Elmer#6007290)，化合物起始浓度为10μM，3～4倍梯度稀释，8～10个浓度点；各激酶用对应的反应缓冲液稀释至合适浓度，各反应孔加入3μl酶或酶反应缓冲液，将反应板置于离心机内，1000转/分钟离心30秒，冰上孵育30分钟。加入2μl/孔2.5 X ATP/底物混合物，1000转/分钟离心30秒，室温孵育60分钟。加入5μL/孔ADP-Glo混合均匀，室温反应40分钟。加入检测底物，10μL/孔，再室温孵育30分钟。置于酶标仪内(Envision，Perkin Elmer)读取化学发光信号。按公式计算受试化合物抑制率(n＝2)：抑制率％＝(最大信号值-各孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100％。最大信号值为只含DMSO的酶反应活性最强孔读值；最小信号值为不含酶的反应孔读值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC 50/X)^HillSlope)，根据拟合曲线计算IC 50。
测试结果：
见表2，结果表明，相对于其它激酶，化合物42对于HPK1激酶(IC 50＝4.52nM)的选择性至少大于45倍。
表2、化合物42的激酶家族选择性测定
激酶 化合物42 IC 50(nM)
CDK2/CycE1 >10000
GSK3b >10000
CHK1 >10000
Aurora-a >10000
BMPR2 >10000
IRAK4 >10000
TrkA 1185.04
BTK >10000
JAK3 >10000
LTK 2743.28
ERK2 >10000
CK2α1 >10000
CAMK4 >10000
PI3Ka >10000
EGFR >10000
PKAcα >10000
AMPK >10000
Mer 604.14
ROCK1 >10000
HGK 1722.65
IKKb >10000
GLK 207.08
LOK >10000
MEK1 >10000
PDGFRa 897.26
KDR 4427.84
LCK >10000
测试例3：GLK激酶活性测定
丝裂原活化蛋白激酶(MAP4Ks)家族包括MAP4K1/HPK1,MAP4K2/GCK,MAP4K3/GLK,MAP4K4/HGK,MAP4K5/KHS,以及MAP4K6/MINK，各成员蛋白具有高度相似的蛋白结构，包括一个n端激酶结构域、几个脯氨酸丰富区域和一个c端香橼同源结构。MAP4Ks通过非JNK通路依赖参与调节免疫细胞反应。研究表明HPK1和HGK在T细胞活化和炎症反应中起负面作用；而GLK则在T细胞活化和自身免疫反应中发挥积极作用。因此，特异性抑制HPK1活性，同时对MAP4K其他家族成员家族尤其是GLK无抑制作用，可以更有效性实现T细胞最大程度激活。本测试例检测了HPK1抑制剂对GLK酶的抑制活性，表征HPK1抑制剂的靶点选择性。
实验材料:
GLK(MAP4K3)35949购于Signalchem，#M25-11G
MBP 35951购于Signalchem，#M42-51N
ADP-GLO购于Promega，#V9102
DMSO购于Sigma
384-well assay plate购于Perkin Elmer#6007290或LABCYTE
MgCl 2,MnCl 2,DTT,Tween-20,HEPES,BSA购于Sigma
实验仪器:
纳升级声波移液系统： LIQUID HANDLERS(LABCYTE,USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
实验方法：
本实验采用Promega公司开发的一种发光法激酶检测方式(ADP-Glo TM)检测所合成的化合物对GLK激酶的抑制活性。具体方法：化合物用ECHO650进行梯度稀释，并以50nL/孔转移至反应板内(384孔白板，Perkin Elmer#6007290)，3倍梯度稀释，10个浓度点，化合物起始浓度为1000nM-0.061nM，GLK用激酶反应缓冲液(50mM HEPES(pH 7.5),0.01％ Tween-20,5mM MgCl 2,0.01％BSA和0.05mM DTT)稀释至合适浓度，各反应孔加入3μl酶(终浓度10nM)或酶反应缓冲液，将反应板置于离心机内，1000转/分钟离心30秒，冰上孵育30分钟。加入2μl/孔2.5 X ATP(62.5μM)/底物混合物(250μg/mL)，1000转/分钟离心30秒，室温孵育60分钟。加入5μL/孔ADP-Glo混合均匀，室温反应40分钟。加入检测底物，10μL/孔，再室温孵育30分钟。置于酶标仪内(Envision，Perkin Elmer)读取化学发光信号。按公式计算受试化合物抑制率(n＝2)：抑制率％＝(最大信号值-各孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100％。最大信号值为只含DMSO的酶反应活性最强孔读值；最小信号值为不含酶的反应孔读值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC 50/X)^HillSlope)，根据拟合曲线计算IC 50。测试结果见表3。HPK1/GLK选择性表示GLK酶学抑制活性与HPK1酶学抑制活性的比值。
表3、HPK1/GLK选择性
测试例4：T细胞激活实验
HPK1是TCR信号的关键负反馈调节因子，抑制HPK1可以增强TCR信号对T细胞激活水平，比如T细胞激活的重要标志细胞因子IL-2分泌水平增加。因此，通过检测T细胞分泌的IL-2水平，表征T细胞的激活强度，从而来评价化合物对T细胞内HPK1抑制活性。
实验材料:
Jurkat T细胞购于ATCC
RPMI1640购于Gibco(ThermoFisher，USA)
FBS购于Gibco(ThermoFisher，USA)
抗CD3单克隆抗体(OKT3)购于BD Biosciences#566685
抗CD28单克隆抗体(CD28.2)购于BD Biosciences#555725
人IL-2 ELISA检测试剂盒购于BD Biosciences#555190
96孔细胞培养板购于Corning
实验仪器:
CO 2细胞培养箱：ThermoFisher(USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
细胞计数仪：Vi-CELL(Beckman，USA)
实验方法：
抗CD3抗体包被96孔细胞培养板预处理，抗CD3抗体用PBS稀释至2μg/mL,每孔加入100μL，37℃孵育4h，然后用PBS洗涤1～2次，甩干待用；收集Jurkat T细胞，采用细胞计数仪计数，调整细胞密度，以每孔1x10 5细胞数种板。所合成化合物用DMSO溶解并做梯度稀释，加入细胞培养板各对应孔，使DMSO终浓度控制在0.1％以下，最终化合物处理起始浓度为10μM，3倍梯度稀释，8个浓度点；T细胞同化合物预孵育在37℃下1h。然后将孵育完成的T细胞转移至CD3抗体包被的细胞培养板，100μL/孔，细胞数1x10 5；加入抗CD28抗体，终浓度1μg/mL；细胞培养板置于二氧化碳培养箱培养48h。取细胞培养上清，进行适量稀释，采用ELISA的方法检测其中人IL-2的含量。根据标准品的量进行定量换算。IL-2产生的倍数计数：倍数＝IL-2产生量/最小IL-2产生量(DMSO空白处理孔)。
测试结果见表4。
表4、IL-2最大激活倍数
测试例5：T细胞杀伤实验
化合物可能会对靶细胞产生非特异性细胞毒副作用，本试验通过检测化合物处理后T细胞的活力来评估该类化合物的细胞毒作用。
实验材料:
Jurkat T细胞购于ATCC
RPMI1640购于Gibco(ThermoFisher，USA)
FBS购于Gibco(ThermoFisher，USA)
抗CD3单克隆抗体(OKT3)购于BD Biosciences#566685
抗CD28单克隆抗体(CD28.2)购于BD Biosciences#555725
Luminescent Cell Viability Assay购于Promega#G7573
96孔细胞培养板购于Corning
实验仪器:
CO 2细胞培养箱：ThermoFisher(USA)
多标记检测分析仪：Envision Multilabel Reader(PerkinElmer,USA)
细胞计数仪：Vi-CELL(Beckman，USA)
实验方法：
抗CD3抗体用PBS稀释至2μg/mL,每孔加入100μL，37℃孵育4小时，然后用PBS洗涤1～2次，甩干待用；收集Jurkat T细胞，采用细胞计数仪计数，调整细胞密度，以每孔1x10 5细胞数种板。所合成化合物用DMSO溶解并做梯度稀释，加入细胞培养板各对应孔，使DMSO终浓度控制在0.5％以下，3倍梯度稀释，8个浓度点，最终化合物处理起始浓度为10μM-0.0046μM；T细胞同化合物预孵育在37℃下1小时。然后将孵育完成的T细胞转移至CD3抗体包被的细胞培养板，100μL/孔，细胞数1x10 5；加入抗CD28抗体，终浓度1μg/mL；细胞培养板置于二氧化碳培养箱培养48小时。取细胞培养上清。加50μL的 Reagent到细胞培养板中。置于酶标仪内(Envision，Perkin Elmer)读取化学发光信号。按公式计算受试化合物抑制率(n＝2)：抑制率％＝(最大信号值-各孔信号值)/(最大信号值-最小信号值)*100％。最大信号值为只含DMSO的细胞孔读值；最小信号值为不含细胞孔读值。将数据导入MS Excel并使用XLFit excel add-in version 5.4.0.8进行曲线拟合：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC 50/X)^HillSlope)，根据拟合曲线计算IC 50。
测试结果见表5。
表5、T细胞杀伤实验结果
测试例6：CT-26小鼠体内药效实验
实验方法：
动物信息：BALB/c小鼠，雌性，5-6周，体重约16-20克，动物购自上海灵畅生物科技有限公司，将小鼠饲养在SPF级的环境中，每个笼位单独送排风，所有动物都可以自由获取标准认证的商业实验室饮食和自由饮水。
细胞培养：小鼠结直肠癌CT-26细胞株(ATCC CRL-2638)体外培养，培养条件为RPMI1640(细胞培养液,Gibco，cat：22400-105)中加入10％胎牛血清(Gibco，cat：10099-141C)，1％青链霉素溶液(Gibco，cat：15140-122)，37℃、5％CO 2孵箱。一周两次用0.25％胰酶-EDTA消化液(Gibco，cat：25200-072)进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为85％-90％，数量达到要求时，收取细胞，计数。
细胞接种：将0.1ml/(含1×10 6)CT-26细胞悬液皮下接种于每只小鼠的右侧部。在接种后第8天，测量肿瘤平均体积达到约75mm 3时，依据肿瘤体积采用随机分层分组方法开始分 组给药。每组6只，共4组，分别为：溶媒对照组(vehicle)(0.5％MC/0.25％Tween80 in water，P.O.，QD)、Anti-mouse PD-1(BioXcell，cat：BE0146，10mg/kg，I.P.Q2D)、化合物42(75mg/kg，P.O.，QD)、Anti-mouse PD-1联合化合物42组(10mg/kg+75mg/kg，I.P.+P.O.，Q2D+QD)。
给药：Anti-mouse PD1的给药剂量为10mg/kg，腹腔注射给药(IP)，每两天一次给药(Q2D)x17天；化合物42的给药剂量为75mg/kg，PO，每天一次给药(QD)x17天。每组6只小鼠。
肿瘤测量和实验指标：
每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a x b 2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。每周两次测量小鼠体重。
化合物的抑瘤疗效用肿瘤生长抑制率TGI(％)来评价。TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]x100％。
实验结果：
见表6，图1。实验过程中无小鼠发病或死亡。
实验结论：
与溶媒对照组相比，一天一次口服给予75mg/kg化合物42相较于溶媒组显著减少肿瘤体积，在CT26结肠癌小鼠模型上化合物42和anti-mouse PD-1联合体现出较好的抑制肿瘤生长的作用。
表6、CT26荷瘤小鼠各实验组肿瘤体积

Claims (14)

  1. 一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
    其中，
    L 1选自化学键或C(R 2)(R 3)；
    R 2、R 3独立地选自H或C 1-C 6烷基；
    R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、4-10元杂环基、C 6-C 10芳基氧基、5-6元杂芳基、5-6元杂芳基氧基、C 1-C 6烷基-C(＝O)NH、C 1-C 6烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 6烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2；
    R 4、R 5独立地选自C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a4取代；
    R 6选自H、卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a6取代；
    环A选自
    R 7选自4-14元杂环基，所述4-14元杂环基任选被R a7取代；
    X 1、X 4独立地选自CR 9或N；
    X 2、X 3独立地选自C(R 10)(R 11)或NR 12；
    R 8、R 9、R 10、R 11独立地选自H、卤素、CN、OH、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a8取代；
    R 12选自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R a12取代；
    q选自0、1、2、3或4；
    m、n独立地选自0、1或2；
    每一个R a1、R a4、R a6、R a7、R a8、R a12独立地选自卤素、CN、＝O或任选被R b取代的以下基团：OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基、4-7元杂环基；
    每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2。
  2. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R 1选自OH、NH 2、 或任选被R a1取代的以下基团：C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、4-7元杂环基、苯氧基、5-6元杂芳基、C 1-C 3烷基-C(＝O)NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2NH、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2NH、C 1-C 3烷基-S(＝O) 2、C 3-C 6环烷基-S(＝O) 2，所述R 4、R 5独立地选自C 1-C 3烷基或C 3-C 6环烷基。
  3. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R a1选自卤素、CN或任选被R b取代的以下基团：OH、NH 2、C 1-C 3烷基、4-7元杂环基，所述R b选自C 1-C 3烷基或OH；或者，
    R a1选自CN、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、N(C 1-C 3烷基) 2、O(C 1-C 3烷基)或5-6元杂环基，所述C 1-C 3烷基任选被OH取代；或者，
    R a1选自CN、OH、NH 2、甲基、N(CH 3) 2、甲氧基、 或羟甲基。
  4. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R 1选自OH、NH 2、 甲氧基、 苯氧基、 CH 3C(O)NH、 CH 3S(O) 2NH、
  5. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，L 1选自化学键、CH 2或C(CH 3) 2。
  6. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R 6选自H、卤素、CN、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基。
  7. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，X 1选自CH或N。
  8. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R 7选自5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被甲基、四氢吡喃基或 取代；或者，
    R 7选自
  9. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R 8选自任选被N(CH 3) 2取代的C 1-C 3烷基，q选自1或2。
  10. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，X 4选自CH或C-OCH 3，X 2、X 3独立地选自CH 2或NCH 3，m、n独立地选自1。
  11. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，环A选自
  12. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
  13. 一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至12任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
  14. 权利要求1至12任一项的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求13所述的药物组合物在制备预防或者治疗HPK1相关疾病的药物中的用途。
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