CN117297089A - 包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及制备方法 - Google Patents

包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及其制备方法。本发明以桑叶、菊花、金银花为主要原料，通过采用特定的工艺从中提取多酚提取物和低聚糖提取物，将二者按照特定比例复配后能够有效促进益生菌的增殖及活性，降低脂滴、甘油三酯、LDL‑C、HDL‑C、Lee’Index等水平或指标，具有显著的降脂功效。且二者复配后相对于单独使用各成分具有更为显著的降脂效果，表明本发明所制备得到的包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物具有协同的减肥降脂相互作用。除此以外，本发明所使用的原料均选自药食同源的天然产物，来源分布广泛、成本低廉、安全性好、生产制备工艺简单，具有广阔的应用价值和前景。

Description

包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及制备方法
技术领域
本发明属于功能性产品技术领域，具体涉及一种包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及其制备方法。
背景技术
因生活方式和饮食习惯的改变，世界范围内脂代谢紊乱及相关慢性综合疾病如血脂异常、脂肪性肝损伤、肥胖症和慢性低度炎症等的发病率逐渐攀升，该疾病的预防和治疗已上升为21世纪的首要公共健康问题。脂代谢紊乱是指调控脂代谢的酶与激素的水平及活性异常，并伴随着组织、器官的生理与病理变化。高脂膳食是引起脂代谢紊乱及其相关代谢综合征的重要诱因。药物治疗加膳食干预已成为公认的防治策略，开展降脂减肥功能食品研究与开发符合社会发展的趋势，具有广阔的应用前景。
传统用于饲养家蚕的桑叶，作为一种健康蔬菜，已越来越受人们喜爱，在民见食疗养生中的应用十分广泛。当前，减肥降脂功能食品的研发和机制探讨主要突出单一组分的功效性，而忽略了不同功能组分之间的相互作用。基于复杂组分在体内的相互作用来评价其健康效应是当代营养组学、代谢组学等前沿交叉学科的研究热点，因此有必要针对天然药食两用活性植物成分进入深入研究，开发出效果更好、安全性更优的降脂减肥产品。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中所存在的问题，提供了一种包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物及其制备方法，通过以桑叶为主要原料，复配菊花和金银花等天然药食两用活性植物资源，通过对活性成分多酚、低聚糖的富集和复配制备功能性产品，二者可发生相互作用影响各自的吸收，提高生物利用度，促进功能活性的发挥达到降脂减肥的突出效果。
为达到上述目的，本发明是通过如下手段得以实现的：
本发明第一方面提供了一种降脂组合物，包含多酚提取物和低聚糖提取物；
所述多酚提取物通过如下方法制备而得：
(1.1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(1.2)将提取液进行浓缩并静置后进行离心，随后干燥处理即得；
所述低聚糖提取物通过如下方法制备而得：
(2.1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(2.2)将残渣置于溶剂中高压差低温连续式提取，取提取液进行浓缩后加入无水乙醇醇沉静置过夜；
(2.3)将醇沉静置过夜后的沉淀物进行离心，得到多糖粗提物，随后加入半纤维素酶进行酶解，即得。
作为优选地，所述多酚提取物和低聚糖提取物的质量比为1：1-20；最优选地，所述多酚提取物和低聚糖提取物的质量比为1：16。
作为优选地，步骤(1.1)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
作为优选地，步骤(1.1)和步骤(2.1)中桑叶、菊花、金银花的质量比为4.5：3：2.5。
作为优选地，步骤(1.1)和步骤(2.1)中桑叶、菊花、金银花在混合前任选地可进行晒干、打粉和过筛操作。
作为优选地，步骤(1.1)和步骤(2.1)中所述溶剂选自乙醇；最优选地，所述溶剂选自浓度为70％的乙醇。
作为优选地，步骤(1.2)中所述浓缩的温度为30-60℃，静置的时间为10-60min；最优选地，所述浓缩的温度为55℃，静置的时间为30min。
作为优选地，步骤(1.2)中所述离心的转速为1000-10000rpm，时间为5-30min；最优选地，所述离心的转速为5000rpm，时间为10min。
作为优选地，步骤(2.1)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
作为优选地，步骤(2.2)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
作为优选地，步骤(2.3)中所述离心的转速为3000-8000rpm，时间为5-20min；最优选地，所述离心的转速为5000rpm，时间为15min。
作为优选地，步骤(2.3)中所述半纤维素酶的酶活为60U/mL。
作为优选地，步骤(2.3)中所述酶解的条件为：温度为40-60℃，时间为4-10h，pH为4.5-5.5；最优选地，所述酶解的条件为：温度为50℃，时间为8h，pH为5.0。
进一步地，所述降脂组合物中任选地还包含有益生菌。
作为优选地，所述益生菌用量为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5-2％；最优选地，所述益生菌用量为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的1％。
作为优选地，所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌、肠膜明串珠菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种；最优选地，所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌、肠膜明串珠菌。
本发明第二方面提供了上述降脂组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(2)将步骤(1)中提取液进行浓缩并静置后进行离心，随后干燥处理得到多酚提取物；
(3)将步骤(1)中残渣置于溶剂中进行高压差低温连续式提取，将提取液进行浓缩后加入无水乙醇醇沉静置过夜；
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物进行离心，得到多糖粗提物，随后加入半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物进行混合，即得。
作为优选地，步骤(1)中桑叶、菊花、金银花的质量比为4.5：3：2.5。
作为优选地，步骤(1)桑叶、菊花、金银花在混合前任选地可进行晒干、打粉和过筛操作。
作为优选地，步骤(1)中所述溶剂选自乙醇；最优选地，所述溶剂选自浓度为70％的乙醇。
作为优选地，步骤(1)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
作为优选地，步骤(2)中所述浓缩的温度为30-60℃，静置的时间为10-60min；最优选地，所述浓缩的温度为55℃，静置的时间为30min。
作为优选地，步骤(2)中所述离心的转速为1000-10000rpm，时间为5-30min；最优选地，所述离心的转速为5000rpm，时间为10min。
作为优选地，步骤(3)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
作为优选地，步骤(4)中所述离心的转速为3000-8000rpm，时间为5-20min；最优选地，所述离心的转速为5000rpm，时间为15min。
作为优选地，步骤(4)中所述半纤维素酶的酶活为60U/mL。
作为优选地，步骤(4)中所述酶解的条件为：温度为40-60℃，时间为4-10h，pH为4.5-5.5；最优选地，所述酶解的条件为：温度为50℃，时间为8h，pH为5.0。
作为优选地，步骤(5)中所述多酚提取物和多糖提取物的质量比为1：1-20；最优选地，所述多酚提取物与多糖提取物的质量比为1：16。
进一步地，步骤(5)在进行混合时任选地还可加入益生菌。
作为优选地，所述益生菌用量为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5-2％；最优选地，所述益生菌用量为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的1％。
作为优选地，所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌、肠膜明串珠菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种；最优选地，所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌、肠膜明串珠菌。
本发明第三方面提供了一种用于降脂的功能性产品，包括上述降脂组合物以及天然营养物质。
作为优选地，所述天然营养物质选自抗性糊精、甜菊糖苷中的一种或多种。
作为优选地，所述功能性产品选自食品、保健品中的一种或多种。
本发明相对于现有的技术，具有如下有益效果：
本发明以桑叶、菊花、金银花为主要原料，通过采用特定的工艺从中提取多酚提取物和低聚糖提取物，将二者按照特定比例复配后能够有效促进益生菌的增殖及活性，降低脂滴、甘油三酯、LDL-C、HDL-C、Lee’Index等水平或指标，具有显著的降脂功效。且二者复配后相对于单独使用各成分具有更为显著的降脂效果，表明本发明所制备得到的包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物具有协同的减肥降脂相互作用。除此以外，本发明所使用的原料均选自药食同源的天然产物，来源分布广泛、成本低廉、安全性好、生产制备工艺简单，具有广阔的应用价值和前景。
附图说明
图1为不同浓度多酚提取物/低聚糖提取物对鼠李糖乳杆菌增殖促进作用结果示意图。
图2为实施例1-4多酚提取物与低聚糖提取物不同配比条件下对鼠李糖乳杆菌增殖促进作用结果示意图。
图3为实施例1降脂组合物对不同益生菌增殖促进结果示意图。
图4为不同组别对脂滴影响结果示意图。
图5为不同组别对甘油三酯影响结果示意图。
图6为实施例1降脂组合物对大鼠体重、LDL-C、HDL-C、Lee’Index等各项指标影响结果示意图。
图7为肝脏细胞HE染色图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
实施例1
一种包含多酚和低聚糖的降脂组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后采用低温高效提取成套装备(HHLSEA-00100A，广州泽力医药科技有限公司)于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：16的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
实施例2
一种包含多酚和低聚糖的降脂组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后于30℃进行高压差低温式提取0.1s，压差值为60MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于30℃进行高压差低温式提取0.1s，压差值为60MPa，提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：2的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
实施例3
一种包含多酚和低聚糖的降脂组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后于23℃进行高压差低温式提取0.5s，压差值为10MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于23℃进行高压差低温式提取0.5s，压差值为10MPa，将提取液趁热过滤，5000rpm离心15min，取上清液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：4的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
实施例4
一种包含多酚和低聚糖的降脂组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，将提取液过滤，5000rpm离心15min，取上清液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应为pH5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：8的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
对比例1
一种包含多酚和低聚糖的组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后于400W功率下超声提取60min，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：16的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
对比例2
一种包含多酚和低聚糖的组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后采用低温高效提取成套装备于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的多糖粗提物按照1：16的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
对比例3
一种包含多酚和低聚糖的组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后采用低温高效提取成套装备于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的α-半乳糖苷酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：16的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
对比例4
一种包含多酚和低聚糖的组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后采用低温高效提取成套装备于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照2：1的质量比混合，再接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物和低聚糖提取物总质量的0.5％，即得。
对比例5
一种包含多酚和低聚糖的组合物，其制备方法包括如下步骤：
(1)将45g桑叶、30g菊花、25g金银花混合后加入70％乙醇，使得料液质量浓度为0.03g/mL，随后采用低温高效提取成套装备于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，获得提取液和残渣。
(2)将步骤(1)中提取液置于真空旋转蒸发仪中55℃减压浓缩，静置30min后于5000rpm离心10min，随后置于减压旋转蒸发仪中蒸干得到多酚提取物。
(3)将步骤(1)中残渣置于水中，使得残渣质量浓度为0.04g/mL，随后于25℃进行高压差低温式提取0.3s，压差值为30MPa，取提取液进行浓缩后加入4倍体积无水乙醇醇沉静置过夜。
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物于5000rpm离心15min，得到多糖粗提物，随后加入酶活为60U/mL的半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；酶解过程中底物浓度为20mg/mL、反应温度为50℃、反应pH为5.0、反应时间为8h。
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物按照1：16的质量比混合，即得。
验证例1体外益生菌增殖促进实验
分别取实施例1步骤(2)制备得到的多酚提取物以及步骤(4)制备得到的低聚糖提取物配置成不同浓度样品(0％(阴性对照组)，多酚提取物(0.10‰，0.25‰，0.50‰，1.00‰，5.00‰)，低聚糖提取物(0.20％，0.40％，0.80％，1.20％)，过0.22μm滤膜，各组中加入相同的MRS培养液体系(121℃灭菌15min)，随后以1％的接种量Jerusalem鼠李糖乳杆菌(ATCC53013)，于37℃、180rpm摇床中进行增殖培养18h。培养结束后采用稀释平板法进行计数，以阴性对照组活菌总数为100％，计算各组增殖率，结果如图1所示(图1左为多酚提取物组，图1右为低聚糖提取物组)。结果显示，多酚提取物浓度为0.25‰时、低聚糖提取物浓度为0.4％时，各自对鼠李糖乳杆菌的增殖活性最为显著。
随后，分别取实施例1-4制备得到的降脂组合物，按照上述方法进行鼠李糖乳杆菌的增殖促进实验，结果如图2所示。结果显示，当多酚提取物与低聚糖提取物用量比为1：16时对于鼠李糖乳杆菌的增殖效果最为明显。
进一步地，取实施例1制备得到的降脂组合物，过0.22μm滤膜后加入MRS培养液体系(121℃灭菌15min)，随后按照1％的接种量分别接入鼠李糖乳杆菌(ATCC53013)、植物乳杆菌(GIM1.191)、干酪乳杆菌(GIM1.411)、嗜酸乳杆菌(GIM1.321)、肠膜明串珠菌(GIM1.774),于37℃、180rpm摇床中进行增殖培养18h。培养结束后采用稀释平板法进行计数，以阴性对照组(未加入降脂组合物)活菌总数为100％，计算各组增殖率，结果如图3所示。结果显示，本发明实施例1制备得到的降脂组合物对于肠膜明串珠菌和鼠李糖乳杆菌具有显著的增殖促进作用，其中对肠膜明串珠菌的增殖促进活性为300％，对鼠李糖乳杆菌的增殖促进活性为433％。
验证例2体内外降脂实验
向基础培养基中加入10％FBS、1％NEAA、1％双抗溶液配制成高糖DMEM完全培养基。取10-40代HepG2细胞接种完全培养基中，于37℃、5％ CO2的培养箱中培养，细胞贴壁生长汇合率达80％-90％时，用0.25％的胰蛋白酶使得其从培养瓶瓶壁上消化下来，后加入高糖DMEM完全培养基终止消化，按1：3的比例进行传代培养，构建HepG2脂肪肝细胞模型。
将细胞分为六组，记为组1-组6，其中组1阴性对照组(NC)，其细胞全程采用正常培养条件予以培养；组2为模型组(MC)，采用高糖DMEM构建HepG2脂肪肝细胞模型；组3为阳性组(PC)，于构建的HepG2脂肪肝细胞模型中加入(500μg/mL的洛伐他汀)；组4为多酚提取物组(PP)，于构建的HepG2脂肪肝细胞模型中加入实施例1步骤(2)制备得到的多酚提取物(浓度为0.25‰，另接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为多酚提取物总质量的0.5％，)；组5为低聚糖提取物组(PS)，于构建的HepG2脂肪肝细胞模型中加入实施例1步骤(4)制备得到的低聚糖提取物(浓度为0.4％，另接入鼠李糖乳杆菌和肠膜明串珠菌，二者接种量分别为低聚糖提取物总质量的0.5％，)；组6为复配组(PPPS),于构建的HepG2脂肪肝细胞模型中加入实施例1制备得到的降脂组合物(其中多酚提取物浓度为0.025％，低聚糖提取物浓度为0.4％)。按试剂盒中的配比配置红油O染色液，吸弃给药培养24h的HepG2细胞中的培养基，用PBS清洗三次，加入150μL的2.5％的戊二醛固定25min，后用PBS缓冲液清洗，晾干后加入150μL的油红O染色液染色15min，再加入60％的异丙醇清洗，除去多余的杂液，PBS缓冲液清洗并置于显微镜下观察拍照。取细胞上清液，用TG试剂盒测定TG含量。
结果如图4-5所示。结果显示，本发明制备得到的多酚提取物以及低聚糖提取物均能够有效降低脂滴和甘油三酯(TG)。而当将该多酚提取物与低聚糖提取物联合使用时，则能够产生更为显著的降脂效果，证明了二者具备明显的协同降脂相互作用。
随后通过构建营养性肥胖大鼠模型以验证本发明降脂组合物的体内降脂效果，具体步骤如下：将大鼠随机分为正常组(NC)、模型组(MC)，阳性组(奥利司他)(PC)、实验组(给予实施例1制备得到的降脂组合物)(SG)，每组10只。除正常组喂养普通饲料，其他组均喂养高脂饲料，饲养8周。实验结束后分别对各组大鼠体重、LDL-C、HDL-C、Lee’Index进行检测，结果如图6-7所示。结果显示，本发明实施例制备得到的降脂组合物可将肥胖体重减低9％，其他脂质水平指标LDL-C、HDL-C、Lee’Index均得到了显著改善；同时从肝脏细胞HE染色图(图7)可以看出，相较于模型组，在使用本发明降脂组合物后脂肪溶解。表明本发明所制备得到的包含多酚提取物和低聚糖提取物的降脂组合物具有协同的减肥降脂相互作用。
进一步地，将110只大鼠随机分为11组，每组10只，记为组1-组11；其中组1-10均喂养高脂饲料，饲养8周；组11喂养普通饲料作为空白对照组。对组1-组9分别给予实施例1-4以及对比例1-5制备得到的降脂组合物(组1-9每日灌胃0.1g/kg BW样品)，组10(模型组)和组11每日灌胃等体积蒸馏水。8周后分别对各组大鼠体重和甘油三酯水平进行检测，结果如下表1所示。
表1实施例1-4及对比例1-5降脂减肥结果
由上述结果可知，本发明通过将特定工艺制备得到的多酚提取物和低聚糖提取物按照特定比例混合后再加入适宜的益生菌，其中多酚提取物和低聚糖提取物能够起到协同增效的作用，显著促进益生菌的增殖，大幅度提高减重和降低甘油三酯的效果。对比例1中采用常规的超声方式进行多酚提取物的提取，对比例2中未对多糖粗提物进行酶解，对比例3中采用α-半乳糖苷酶进行酶解，对比例4中未采用特定比例对多酚提取物与低聚糖提取物进行混合，相应地所得到额度多酚提取物与低聚糖提取物的组合形式并不能有效促进益生菌的增殖以及减重降脂；对比例5中由于未加入益生菌，尽管通过多酚提取物和低聚糖提取物的复配在一定程度上能够起到降脂减重的作用，但仍然不如本发明实施例。
以上具体实施方式部分对本发明所涉及的分析方法进行了具体的介绍。应当注意的是，上述介绍仅是为了帮助本领域技术人员更好地理解本发明的方法及思路，而不是对相关内容的限制。在不脱离本发明原理的情况下，本领域技术人员还可以对本发明进行适当的调整或修改，上述调整和修改也应当属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种降脂组合物，包含多酚提取物和低聚糖提取物；其特征在于，所述多酚提取物通过如下方法制备而得：
(1.1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(1.2)将提取液进行浓缩并静置后进行离心，随后干燥处理即得；
所述低聚糖提取物通过如下方法制备而得：
(2.1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(2.2)将残渣置于溶剂中高压差低温连续式提取，取提取液进行浓缩后加入无水乙醇醇沉静置过夜；
(2.3)将醇沉静置过夜后的沉淀物进行离心，得到多糖粗提物，随后加入半纤维素酶进行酶解，即得。
2.根据权利要求1所述的降脂组合物，其特征在于，所述多酚提取物和低聚糖提取物的质量比为1：1-20。
3.根据权利要求1所述的降脂组合物，其特征在于，步骤(2.3)中所述酶解的条件为：温度为40-60℃，时间为4-10h，pH为4.5-5.5。
4.根据权利要求1-3任一项所述的降脂组合物，其特征在于，所述降脂组合物中任选地还包含有益生菌。
5.根据权利要求4所述的降脂组合物，其特征在于，所述益生菌选自鼠李糖乳杆菌、肠膜明串珠菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或多种。
6.根据权利要求1-5任一项所述的降脂组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将桑叶、菊花、金银花混合后加入溶剂进行高压差低温连续式提取，获得提取液和残渣；
(2)将步骤(1)中提取液进行浓缩并静置后进行离心，随后干燥处理得到多酚提取物；
(3)将步骤(1)中残渣置于溶剂中进行高压差低温连续式提取，取提取液进行浓缩后加入无水乙醇醇沉静置过夜；
(4)将醇沉静置过夜后的沉淀物进行离心，得到多糖粗提物，随后加入半纤维素酶进行酶解，得到低聚糖提取物；
(5)将步骤(2)得到的多酚提取物和步骤(4)得到的低聚糖提取物进行混合，即得。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(3)中所述高压差低温连续式提取的温度为23-30℃，时间为0.1-0.5s，压差值为-0.1-60Mpa。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述浓缩的温度为30-60℃，静置的时间为10-60min。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述酶解的条件为：温度为40-60℃，时间为4-10h，pH为4.5-5.5。
10.一种用于降脂的功能性产品，其特征在于，包括根据权利要求1-5任一项所述的降脂组合物以及天然营养物质。
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