CN117285596A - 一种具有降尿酸功能的六肽rl6及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有降尿酸功能的六肽RL6及其应用，属于生物技术领域。所述六肽RL6的氨基酸序列为RGAGPL，如序列表SEQ ID NO：2所示，具有体内降尿酸活性。该六肽RL6从海参酶解液中提取得到，与黄嘌呤氧化酶具有潜在相互作用，能显著降低高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸、血清肌酐和血清尿素氮含量，主要抑制尿酸合成途径基因转录和蛋白表达，具有体内降尿酸活性，可以有效地用于降尿酸药物或降尿酸功能食品中。
Description
技术领域
本发明涉及一种小分子肽及其应用，具体涉及一种具有降尿酸功能的六肽RL6及其在降尿酸药物或功能食品中的应用，属于生物技术领域。
背景技术
高尿酸血症（Hyperuricemia，HUA）是一种血尿酸浓度异常升高引起的综合代谢性疾病。尿酸过量产生或排泄不足都可能引发HUA，尿酸合成中的关键酶是黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase，XOD）。XOD是一种含钼的复合黄素酶，由两个相同的亚基组成。在嘌呤代谢过程中，XOD既能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，进而生成尿酸，又能直接催化黄嘌呤生成尿酸。由于现代人类生活水平的提高，饮食中嘌呤的含量在增加，HUA在人群中已变得普遍。通过抑制XOD来降低血清尿酸水平一直是治疗HUA的重要方法。有许多已知的天然XOD酶活抑制剂，包括萜烯、酚酸和类黄酮，但制备成本非常高。临床使用的药物别嘌呤醇和非布索坦都表现出优异的抑制活性，但会引起副作用和耐药性。因此，选择来源于食源性蛋白酶解的活性肽抑制XOD，是缓解HUA的好策略。相比传统降尿酸药物，生物活性肽具有特异性高、毒副作用小、疗效好、可用药剂量更大等优点。
目前，有通过乳类、坚果类、牲畜类、海产品类等食物性蛋白为原料，通过酶解方式制备降尿酸肽的研究（黄嘌呤氧化酶肽类抑制剂的研究进展，袁禛、程述震、吴迪等，食品科学，2022，43（11）：355-363）。不同来源的蛋白原料，在不同的酶解工艺中，会获得不同酶解液，酶解液是一系列结构各异、序列多样和功能各有侧重的活性肽集合。具有XOD抑制和降尿酸功能的活性肽氨基酸组成和结构差别很大，没有固定或统一氨基酸组成，且食物中蛋白酶解产物成分相当复杂，其分离提取难度大大增加。
降尿酸肽的检测方法主要有体外检测和体内实验两种。体外活性是通过XOD抑制率表征的，XOD抑制率越高，则其潜在的降尿酸活性越好。体内检测一般使用饮食诱导型高尿酸血症模型小鼠，基于血尿酸、肌酐和尿酸氮浓度表征活性肽的降尿酸功能，这三个参数值越低，则活性肽的降尿酸功能越好。
Haitao Wan等在文章《Comparisons of protective effects between two seacucumber hydrolysates against diet induced hyperuricemia and renalinflammation in mice》、Chenyang Lu等在文章《Apostichopus japonicus oligopeptideinduced heterogeneity in the gastrointestinal tract microbiota and alleviatedhyperuricemia in a microbiota-dependent manner》中均报道了海参酶解液在小鼠水平的降尿酸作用，海参酶解液均采用4%胰蛋白酶和碱性蛋白酶混合物（比例2:1）、55℃下酶解4h的条件进行制备。但均未进一步筛选分离其中的活性肽单体，也未进一步进行降尿酸功能实验。
海参属于棘皮动物门，是一种重要的海洋食物和药物，由于其丰富的功能组成，各种海参物种在食品和制药领域得以开发。海参是具有生物活性的天然食品和医药功能材料，其富含蛋白质（40.7%-63.3%）。海参多肽的制备和生物活性得到广泛关注，已经发现并评估的海参多肽生物活性包括抗氧化、抗糖尿病、ACE抑制、免疫调节、抗癌、抗疲劳、抗衰老、神经保护和微量金属螯合等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种筛选自海参酶解液、具有降尿酸功能、可以应用于降尿酸药物或降尿酸功能食品中的六肽RL6。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种具有降尿酸功能的六肽RL6，所述六肽RL6的氨基酸序列为RGAGPL，如序列表SEQ ID NO：2所示，具有体内降尿酸活性。
前述具有降尿酸功能的六肽RL6在降尿酸药物或降尿酸功能食品中的应用。
当前述具有降尿酸功能的六肽RL6应用在降尿酸药物中时，所述六肽RL6通过固相合成获得，固相合成方法具体如下：采用Fmoc固相合成策略，以Fmoc保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照精氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸的顺序，使肽链从C端向N端延伸，固相合成六肽RL6。
当前述具有降尿酸功能的六肽RL6应用在降尿酸功能食品中时，所述六肽RL6通过酶解海参获得，酶解海参的方法具体如下：
（1）取海参，按照0.5％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为55℃，pH值为8，酶解时间为6h，得到酶解产物，其中，所述复合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照1:1的质量比混合而成；
（2）酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液；
（3）冻干上述多肽酶解液，得到海参肽样品，所述海参肽样品中含有较多的六肽RL6。
本发明的有益之处在于：本发明得到的降尿酸六肽RL6从海参酶解液中提取得到，与黄嘌呤氧化酶具有潜在相互作用，能显著降低高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸、血清肌酐和血清尿素氮含量，主要抑制尿酸合成途径基因转录和蛋白表达，具有体内降尿酸活性，可以有效地用于降尿酸药物或降尿酸功能食品中。
附图说明
图1是小鼠体重增量情况图；
图2是高尿酸血症关键性指标变化情况图，其中，A是小鼠血清尿酸含量变化情况图，B是小鼠血清肌酐含量变化情况图，C是小鼠血清尿素氮含量变化情况图；
图3是高尿酸血症小鼠基因转录情况图，其中，A是基因ada转录情况图，B是基因xod转录情况图，C是基因glut9转录情况图，D是基因abcg2转录情况图；
图4是高尿酸血症小鼠蛋白表达情况图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一、制备海参肽样品
将碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照1:1的质量比混合，得到复合酶。
取海参，按照0.5％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为55℃，pH值为8，酶解时间为6h。
酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液。
冻干上述多肽酶解液，得到海参肽样品。
二、获得海参肽样品中的多肽序列
将前面得到的海参肽样品采用LC-MS/MS进行质谱测定，质谱测定的结果采用质谱分析软件进行分析，获得若干多肽序列。
LC-MS/MS测定条件为：
（1）液相方法：色谱柱为C18，3μm，250mm×75μm（Eksigent），A相为水，0.1%甲酸；B相为乙腈，0.1%甲酸，流速为300nL/min，进样体积为4μL，60min色谱梯度，具体洗脱梯度为：0-48min，A相从95%均匀减少到60%；48-55min，A相从60%均匀减少到30%，55-56min，A相从30%均匀减少到0；56-60min，保持0%A相。
（2）质谱方法：Orbitrap Exploris 480（Thermofisher），正离子检测模式，一级分辨率为120000，AGC设置为300，扫描范围200-1600m/z。MIPS mode为peptide，选择价态1-5，二级分辨率为15000，分离窗口1.6m/z。
三、筛选丰度>0.001%且氨基酸数量≤6的活性寡肽
从前面获得的若干多肽序列中，最终筛选出了33条丰度>0.001%且氨基酸数量≤6的活性寡肽，筛选结果具体见表1。
表1 海参肽样品中丰度>0.001%且氨基酸数量≤6的活性寡肽序列
四、筛选与XOD蛋白结合能力强且氨基酸数量≤6的活性寡肽
从前面获得的若干多肽序列中挑选出氨基酸数量≤6的多肽序列，利用DiscoveryStudio软件将这些氨基酸数量≤6的多肽序列分别与XOD蛋白进行分子对接，在对接之前通过能量最小化将多肽的2D结构转换为3D结构，筛选得到与XOD蛋白结合能力强的多肽序列。
蛋白质XOD的3D结构可从RCSB蛋白质数据库（PDB ID：1FIQ）下载。对接结果以对接分值（-CiE）表示，-CiE值越大，则多肽与XOD结合能力越强，也越有可能抑制XOD活性。从这些氨基酸数量≤6的多肽序列中，筛选了30条对接分值较大的活性寡肽，筛选结果具体见表2。
表2 海参肽组分与XOD相互作用预测结果
五、分子对接分析
在所有测试活性肽中，LNAGR（记为五肽LR5，SEQ ID NO:1）和RGAGPL（记为六肽RL6，SEQ ID NO:2）的-CiE均大于100，但由于LNAGR和RGAGPL的-CiE差别不是很显著，并且LNAGR的丰度（<0.001%）远远低于RGAGPL的丰度（0.0027%），所以选取RGAGPL进行进一步的分子对接分析。
经分析，六肽RL6与XOD的分子对接情况具体如下：
六肽RL6与XOD之间形成7个H-H键相互作用、3个C-H键相互作用、5个静电相互作用，有32个氨基酸残基参与六肽RL6与XOD之间的相互作用，两者之间的范德华力为-15.58kcal/mol。
六、评价六肽RL6的体内降尿酸功能
1、固相合成六肽RL6
采用Fmoc固相合成策略，以Fmoc保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照精氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸的顺序，使肽链从C端向N端延伸，固相合成六肽RL6（纯度>90%）。
2、动物实验
4-5周龄的ICR小鼠适应性喂养一周，随机分为3组，分别是：对照组（control）、模型组（HUA）和RGAGPL处理组（RL6）。
在实验的第1-3天，RGAGPL处理组小鼠每天灌胃10mg/kg 前述固相合成的六肽RL6（溶解于200μL生理盐水中），对照组小鼠和模型组小鼠每天均灌胃200μL生理盐水。
从实验的第4天开始，RGAGPL处理组小鼠每天灌胃10mg/kg 前述固相合成的六肽RL6（溶解于200μL生理盐水中），1小时后再腹腔注射250mg/kg氧嗪酸钾和150mg/kg次黄嘌呤（氧嗪酸钾和次黄嘌呤同时溶解于200μL浓度为0.25wt%的CMC-Na溶液中），对照组小鼠和模型组小鼠每天均灌胃200μL生理盐水，1小时后对照组小鼠再腹腔注射200μL浓度为0.25wt%的CMC-Na溶液、模型组小鼠再腹腔注射250mg/kg氧嗪酸钾和150mg/kg次黄嘌呤（氧嗪酸钾和次黄嘌呤同时溶解于200μL浓度为0.25wt%的CMC-Na溶液中）。
3、样本收集与处理
在动物实验进行的第14天：
上午，称量各组小鼠的体重，然后收集各组小鼠的眼眶血于肝素锂抗凝管中；
下午，收集各组小鼠的眼球血于1.5mL无菌离心管中，在4℃静置过夜，取上层血清于新的无菌试管中（若上层有沉淀，则需进行适当离心）；
收集完眼眶血和眼球血后，立即处死各组小鼠，取肝脏和肾脏于无RNA酶的EP管中，并迅速置于-80℃中保存，等待进一步处理。
4、比较体重增量以及检测血清尿酸、血清肌酐和血清尿素氮含量
（1）比较各组小鼠体重增量
各组小鼠体重增量情况见图1。由图1可知，与对照组（体重增量为3.58±1.61g）相比，模型组小鼠体重增量（1.21±0.84g）显著减少（p<0.01）；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠体重增量（3.42±1.46g）显著提升（p<0.01）。
可见，六肽RL6处理可显著提升高尿酸血症模型小鼠的体重增量。
（2）检测各组小鼠血清尿酸含量
将装有小鼠眼眶血的肝素锂抗凝管在4℃、3000×g下离心10min，取10μL上清液与40μL甲醇振荡混合均匀。在常温下10000×g高速离心10min，吸出30μL上清液12000×g常温高速离心10min后取出适量混合液，用高效液相色谱对血尿酸含量进行定量。
采用ZORBAX Original Phenyl（5μm，4.6×250mm）色谱柱，流动相A相为含有0.52mM 1-戊烷磺酸钠和0.20M磷酸氢二钾的超纯水，用磷酸溶液将pH值调至4.0，流动相B相为高效液相色谱级的乙腈。等度洗脱条件为A相：B相= 85:15（V/V），25℃下流速为1.0mL/min，进样量10μL，检测波长290nm，运行时间15min。进样前至少用流动相平衡色谱柱30min。
各组小鼠血清尿酸含量变化情况见图2A。由图2A可知，与对照组（血清尿酸浓度为22.2±4.6μM）相比，模型组小鼠血清尿酸含量（236.6±16.6μM）显著上升（p<0.001）；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠血清尿酸含量（108.8±10.9μM）显著降低（p<0.001）。
可见，六肽RL6处理可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸含量。
（3）检测各组小鼠血清肌酐和血清尿素氮含量
使用商业化试剂盒对血清中的肌酐和尿素氮含量进行检测。
各组小鼠血清肌酐含量变化情况见图2B。由图2B可知，与对照组（血清肌酐浓度为131.7±19.6μM）相比，模型组小鼠血清中肌酐含量（540.0±45.5μM）显著上升（p<0.001）；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠血清中肌酐含量（280.0±75.9μM）显著降低（p<0.001）。
可见，六肽RL6处理可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清中的肌酐含量。
各组小鼠血清尿素氮含量变化情况见图2C。由图2C可知，与对照组（血清尿素氮浓度为3.3±0.4mM）相比，模型组小鼠血清中尿素氮含量（9.6±1.3mM）显著上升（p<0.001；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠血清中尿素氮含量（6.2±1.0mM）显著降低（p<0.001）。
可见，六肽RL6处理可显著降低高尿酸血症模型小鼠血清中尿素氮含量。
5、实时荧光定量PCR检测
（1）设计引物
选择尿酸合成途径重要基因xod和腺苷脱氨酶（ada）、尿酸重吸收重要基因葡萄糖转运蛋白9（glut9）以及尿酸排泄重要基因abcg2。利用NCBI网站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）和加拿大Premier公司的Primer 5软件进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）引物设计，设计得到的引物信息具体见表3。
表3 实时荧光定量PCR引物序列
（2）组织总RNA提取
取肝脏或肾脏组织100mg于液氮预冷过的无菌研钵中，加入液氮快速充分研磨，之后加入1mL TrasZol Up试剂，然后转移到无DNA酶的1.5mL离心管中，同时加入0.2mL氯仿，充分斡旋30s后，静置10min。4℃、12000×g离心15min，取上清到另一无RNA酶的1.5mL离心管中。加入0.5mL异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。再次4℃、12000×g离心10min后弃去上清，加入1mL用无RNA酶水配制的75%乙醇，轻轻洗涤沉淀，再4℃、7500×g离心5min后弃上清。打开离心管盖，使乙醇挥发干净后加入100μL无RNA酶水。然后用NanoDrop 2000c快速测定样品总RNA的浓度及质量。将RNA分装于无RNA酶的离心管后保存于-80℃。
（3）cDNA模板合成
取1µg组织总RNA，利用TransScript All-in-One First-Strand cDNA SynthesisSuperMix for qPCR（One-Step gDNA Removal）试剂盒合成cDNA模板。
（4）基因表达检测
qRT-PCR体系的配制：将cDNA模板适当稀释后取5μL加入到总体系中，分别取0.4μL正向引物和反向引物加入到总体系中，再取10μL 2×TransStartTM Green qPCR SuperMix（含SYBR Green染料）以及4.2μL无酶水加入到总体系中，总体系为20μL。
qRT-PCR三步法：94℃变性10min，扩增反应为40个循环，94℃变性15s，50℃退火15s，72℃延伸45s，总延伸10min。
经检测，基因ada的转录情况见图3A，基因xod的转录情况见图3B，基因glut9的转录情况见图3C，基因abcg2的转录情况见图3D。
由图3可知，与对照组相比，模型组小鼠显著上调肝脏中尿酸合成相关基因ada（p<0.01）和xod（p<0.001）的表达，增加了肝脏中尿酸合成；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠显著下调肝脏中尿酸合成相关基因ada（p<0.001）和xod（p<0.001）的表达。也就是说，六肽RL6处理可以显著下调高尿酸血症模型小鼠肝脏中ada和xod的表达。与对照组相比，模型组小鼠显著上调肾脏中尿酸重吸收基因glut9的表达（p<0.05），而显著下调肾脏中尿酸外排基因abcg2的表达（p<0.05）；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠既没有显著上调肾脏中尿酸重吸收基因glut9的表达（p>0.05），也没有显著下调肾脏中尿酸外排基因abcg2的表达（p>0.05）。也就是说，六肽RL6处理对高尿酸血症模型小鼠肾脏中glut9和abcg2的表达均没有显著性调节作用。
6、蛋白免疫检测
（1）制备组织蛋白样品
提取蛋白操作在冰上进行。
将RIPA Lysis Buffer裂解液在冰上预冷，然后加入磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂（蛋白酶抑制剂在加样前2min加入），RIPA Lysis Buffer裂解液、磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的体积比为100：1：1，得到混合裂解液。
取100mg小鼠肝脏组织于4mL离心管中，将肝脏组织剪碎，加入1mL上述混合裂解液。用电动均浆机将小鼠肝脏组织充分匀浆，冰上孵育20min，使细胞充分裂解。14000×g、离心10min，转移上清液至新管中。提取的蛋白为总蛋白，用BCA试剂盒检测蛋白浓度。将蛋白储存于-80℃冰箱备用。
接着对蛋白样品进行预变性，每个蛋白样品总量30μg，与6mL loading buffer混合制成混合上样液，充分震荡均匀后置于100℃金属浴变性10min。待混合上样液冷却至室温后再次震荡均匀并离心，得到上样蛋白。
（2）蛋白分离
（a）配制电泳凝胶
电泳凝胶的配制方法具体如下：
（i）将玻璃板、样品梳、制胶架上的橡胶垫用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干；
（ii）将两块洗净的玻璃板放入制胶架上，将制胶架平放在桌面上；
（iii）配制12%蛋白分离胶，具体的，取干净烧杯，加入6mL 浓度为30wt%的聚丙烯酰胺溶液、3.8mL浓度为1.5mol/L的Tris-HCL缓冲液、150μL浓度为10wt%的十二烷基硫酸钠（SDS）溶液、150μL浓度为10wt%的过硫酸铵溶液、6μL四甲基乙二胺（TEMED）和5mL去离子水，混合均匀；
（iv）向玻璃板间灌入上述12%蛋白分离胶，立即覆一层双蒸水，大约30min后胶即可聚合；
（v）配制5%浓缩胶，具体的，取干净烧杯，加入0.85mL浓度为30wt%的聚丙烯酰胺溶液、0.65mL浓度为1.5mol/L的Tris-HCL缓冲液、50μL浓度为10wt%的SDS溶液、50μL浓度为10wt%的过硫酸铵溶液、5μL TEMED和3.4mL去离子水，混合均匀；
（vi）将蛋白分离胶上的双蒸水倒去，灌入上述5%浓缩胶，插入样品梳。
（b）蛋白电泳
将预先制备好的上样蛋白加入到各个泳道对应的孔中，同时加入高分子量蛋白marker。接通电源，先用80V低电压使蛋白样品通过浓缩胶，当蛋白marker达到浓缩胶与分离胶的交界处时，将电压调至120V，使蛋白通过分离胶。当蛋白样品中的溴酚蓝指示剂达到胶块底部时即为蛋白分离结束，停止电泳。
（c）凝胶电泳蛋白质转膜配制转膜液：取100mL 10×Transfer Buffer和150mL甲醇，混合后加水定容至 1000mL。
根据蛋白所在的位置和蛋白样品的数目切下含有目的蛋白的凝胶条并剪出所需的滤纸和PVDF膜，将滤纸浸泡在电泳液中备用，PVDF膜需提前在甲醇中完全浸泡15-30s。PVDF膜变成半透明状后将PVDF膜放在转膜液中平衡3min。采用三明治叠放法将凝胶条和PVDF膜紧贴在一起并赶出PVDF膜与凝胶条间的气泡，接着将板夹紧让蛋白胶靠近负极放入电泳槽中，加入电泳液，电压调至70V，冰浴下转膜90min，得到蛋白膜。
（3）蛋白免疫检测
（a）封闭
配制5%（W/V）脱脂奶，将上述蛋白膜浸泡于脱脂奶中，并在常温下置于摇床缓慢摇晃1h，对蛋白膜上其他未结合蛋白的位置进行封闭。
（b）孵育一抗
根据说明书上建议的一抗稀释比例，利用5%（W/V）脱脂奶将一抗进行合理的稀释。加入一抗后，将蛋白膜放置于4℃环境下过夜。
（c）清洗
孵育过夜的蛋白膜已经结合上一抗，倾去一抗，加入1×PBS覆盖蛋白膜，置于摇床上缓慢摇晃10min，反复三次以洗去未结合在蛋白膜上的多余一抗。
（d）孵育二抗
根据一抗的来源选择二抗。二抗用1×PBS配置，稀释比例为1:3000。加入二抗后，将蛋白膜置于摇床，室温缓慢摇晃1h。
（e）清洗与显影
显影液A液与B液按照1:1体积比配制好备用。
用1×PBS覆盖并清洗蛋白膜3次。将配制好的显影液均匀地覆盖在蛋白膜上，静置1min后用BIO-RAD凝胶成像仪进行蛋白条带的成像，并保存图片。
（f）蛋白条带灰度分析
用ImageJ软件对蛋白成像图片进行灰度处理，并计算待测蛋白（腺苷脱氨酶ADA和黄嘌呤氧化酶XOD）与Actin之间的灰度比。
蛋白成像图片的处理结果以及待测蛋白（ADA和XOD）与Actin之间的灰度比的计算结果见图4。
由图4可知，与对照组相比，模型组小鼠肝脏中ADA和XOD的表达增加；与模型组相比，RGAGPL处理组小鼠肝脏中ADA和XOD的表达降低。也就是说，高尿酸血症建模过程增加了小鼠肝脏中ADA和XOD的表达，促进了肝脏合成尿酸；六肽RL处理可以降低高尿酸血症模型小鼠肝脏中ADA和XOD的表达。
综上，本发明筛选获得的六肽RL6（序列为RGAGPL），具有体内降尿酸活性，可以应用于降尿酸药物或降尿酸功能食品中。
需要说明的是，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明技术方案所引申出的显而易见变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (6)
1.一种具有降尿酸功能的六肽RL6，其特征在于，所述六肽RL6的氨基酸序列为RGAGPL，如序列表SEQ ID NO：2所示，具有体内降尿酸活性。
2.权利要求1所述的具有降尿酸功能的六肽RL6在降尿酸药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述六肽RL6通过固相合成获得。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述六肽RL6的固相合成方法具体如下：采用Fmoc固相合成策略，以Fmoc保护的氨基酸为原料，选用聚苯乙烯树脂作为固相载体，按照精氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸的顺序，使肽链从C端向N端延伸，固相合成六肽RL6。
5.权利要求1所述的具有降尿酸功能的六肽RL6在降尿酸功能食品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述六肽RL6通过酶解海参获得，酶解海参的方法具体如下：
（1）取海参，按照0.5％的酶底比加入复合酶进行酶解，酶解温度为55℃，pH值为8，酶解时间为6h，得到酶解产物，其中，所述复合酶由碱性蛋白酶和中性蛋白酶按照1:1的质量比混合而成；
（2）酶解结束后，用八层纱布对酶解产物进行过滤，去除残渣，得到澄清的多肽酶解液；
（3）冻干上述多肽酶解液，得到海参肽样品，所述海参肽样品中含有较多的六肽RL6。
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