CN117279879A - 通过与错误折叠或聚集的蛋白质结合来检测系统性淀粉样变性的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于确定患者是否患有系统性淀粉样变性的方法和组合物，其包括检测该患者的组织中错误折叠或聚集的蛋白质的存在，其中该检测包括使错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白与本文所述的化合物接触。在一些实施方案中，该错误折叠或聚集的蛋白质是转甲状腺素蛋白。

Description

通过与错误折叠或聚集的蛋白质结合来检测系统性淀粉样变 性的方法

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2021年3月12日提交的美国临时申请号63/160,602的权益，该美国临时申请据此全文以引用方式并入。

背景技术

系统性淀粉样变性是一种当被称为淀粉样蛋白的异常蛋白质在器官中堆积并干扰其正常功能时发生的疾病。淀粉样蛋白可由许多不同类型的蛋白质中的任一种形成。可能受影响的器官包括心脏、肾、肝、脾、神经系统和消化道。一些种类的淀粉样变性可导致威胁生命的器官衰竭。患者可能在病状晚期才出现淀粉样变性的症状和体征。

转甲状腺素蛋白是一种由肝脏制造的蛋白质，其有助于在血液中携带甲状腺激素和维生素A。转甲状腺素蛋白(TTR)的错误折叠和聚集与许多病状相关。家族性淀粉样多发性神经病(FAP)，也被称为转甲状腺素蛋白淀粉样蛋白多发性神经病，是由外周神经和其他组织周围的蛋白质或淀粉样蛋白的异常沉积物引起的罕见的、遗传性的和进行性的疾病。FAP是由TTR基因中使TTR四聚体去稳定的突变引起的。FAP于1952年首次在葡萄牙的几个家庭中发现。在葡萄牙北部的一些地区，每500人中就有1人患有FAP，并且该疾病在世界各地都有发生。在一些情况下，需要进行肝脏移植。目前还没有治愈FAP的方法。

另一种重要的病症是被称为淀粉样蛋白转甲状腺素蛋白(ATTR)淀粉样变性的进行性系统性病症。在ATTR淀粉样变性中，蛋白质沉积在心脏和/或神经以及其他器官和组织中。ATTR淀粉样变性是一种缓慢进行性病状，其特征在于，一种被称为淀粉样蛋白的蛋白质的异常沉积物(淀粉样变性)在身体器官和组织中的堆积。

需要一种用于检测系统性淀粉样变性的安全且方便的方法。

发明内容

在一些实施方案中，提供了一种用于确定患者是否患有系统性淀粉样变性，例如家族性淀粉样多发性神经病(FAP)或转甲状腺素蛋白(ATTR)淀粉样变性的方法，该方法包括向受试者的眼睛施用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，并检测错误折叠或聚集的蛋白质的存在或不存在。错误折叠或聚集的蛋白质可以是错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白(TTR)。该化合物可以是式I的化合物或可以是本文所述的任何化合物。在某些实施方案中，检测淀粉样蛋白，其中该淀粉样蛋白不包含淀粉样蛋白β肽。

在一些实施方案中，提供了一种用于诊断系统性淀粉样变性的方法，该方法包括向有需要的受试者的眼睛施用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，并检测错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的存在或不存在。

在一些实施方案中，本文提供了一种具有以下结构的化合物：

或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了用于诊断系统性淀粉样变性的化合物1。在一些实施方案中，本文提供了用于确定患者是否患有系统性淀粉样变性的化合物1。在一些实施方案中，本文提供了用于对患者进行系统性淀粉样变性诊断的准备的化合物1，其中将化合物1局部施用于该患者的眼睛。

本公开提供了用于检测系统性淀粉样变性的简单且非侵入性的方法，方式是将淀粉样蛋白结合性化合物施加至受试者的眼睛表面并直接检测由此产生的荧光。在ATTR和其他系统性淀粉样变性中，淀粉样蛋白的形成是由TTR四聚体解离形成易于聚集的单体而引发的，该易于聚集的单体自缔合形成小的寡聚体、无定形聚集体和/或原纤维。另一方面，淀粉样蛋白β包含从淀粉样蛋白前体蛋白切割的36-43个氨基酸的肽。突变型和野生型TTR都会形成聚集体和原纤维，并且形成是通过知之甚少的复杂机制发生的。因此，本公开令人惊讶地允许通过对TTR淀粉样蛋白的表面检测来诊断系统性淀粉样变性，该表面检测是通过将某些化合物施加至眼睛表面以用于其荧光检测而进行的。

附图说明

图1展示了在存在和不存在聚集的TTR的情况下化合物1的荧光光谱。

图2展示了在存在恒定浓度的聚集的TTR的情况下荧光强度与化合物1的浓度之间的关系。

具体实施方式

定义

以下描述阐述了本技术的示例性实施方案。然而，应当认识到，此描述并非旨在限制本公开的范围，而是作为示例性实施方案的描述而提供。

如本说明书中所使用，以下词语、短语和符号通常旨在具有如以下阐述的含义，但其所使用的上下文中另有指示的程度除外。

除非另外说明，否则术语“烷基”本身或作为另一个取代基的一部分，意指直链(即非支链)或支链或其组合，其可以是完全饱和的、单不饱和或多不饱和的，并且可以包含具有指定碳原子数的二价和多价基团(即，C₁-C₁₀意指一个至十个碳)。饱和烃自由基的示例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、(环己基)甲基等基团；例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等的同系物和异构体。不饱和烷基是具有一个或多个双键或三键的基团。不饱和烷基的示例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基以及更高级的同系物和异构体。烷氧基是通过氧接头(—O—)连接到分子其余部分的烷基。

术语“亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分，意指衍生自烷基的二价基团，如但不限于通过—CH₂CH₂CH₂CH₂—所例示的，并且进一步包含下文描述为“杂亚烷基”的那些基团。通常，烷基(或亚烷基)将具有1个至24个碳原子，其中具有10个或更少碳原子的那些基团是优选的。“低级烷基”或“低级亚烷基”是通常具有八个或更少碳原子的短链烷基或亚烷基。

除非另外说明，否则术语“杂烷基”本身或与另一个术语组合，意指由至少一个碳原子和至少一个选自由O、N、P、Si和S组成的组的杂原子组成的稳定直链或支链或环状烃基或其组合。氮和硫原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂原子O、N、P和S以及Si可以置于杂烷基的任何内部位置或烷基连接到分子其余部分的位置。示例包括但不限于—CH₂—CH₂—O—CH₃、—CH₂—CH₂—NH—CH₃、—CH₂—CH₂—N(CH₃)—CH₃、—CH₂—S—CH₂—CH₃、—CH₂—CH₂、—S(O)—CH₃、—CH₂—CH₂—S(O)₂—CH₃、—CH═CH—O—CH₃、—Si(CH₃)₃、—CH₂—CH═N—OCH₃、CH═CH—N(CH₃)—CH₃、O—CH₃、—O—CH-₂-CH₃和—CN。至多两个杂原子可以是连续的，诸如例如，—CH₂—NH—OCH₃。类似地，术语“杂亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分，意指衍生自杂烷基的二价基团，如但不限于通过—CH₂—CH₂—S—CH₂—CH₂—和—CH₂—S—CH₂—CH₂—NH—CH₂—所例示的。对于杂亚烷基，杂原子还可以占据链末端(例如，亚烷基氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)中的任一者或两者。仍进一步地，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，连接基团的式书写的方向并不暗示连接基团的朝向。例如，式—C(O)₂R'—表示—C(O)₂R'—和—R'C(O)₂—。如上所述，如本文所用的杂烷基包括通过杂原子连接到分子其余部分的那些基团，诸如—C(O)R'、—C(O)NR'、—NR'R”、—OR'、—SR'和/或—SO₂R'。在叙述“杂烷基”随后叙述特定杂烷基，诸如—NR'R”等的情况下，应当理解术语杂烷基和—NR'R”不是冗余的或相互排斥的。相反，叙述特定的杂烷基是为了增加清晰性。因此，术语“杂烷基”在本文中不应解释为排除特定杂烷基，诸如—NR'R”等。R'和R″各自如下文关于“取代基”所定义。

除非另外说明，否则术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其他术语组合，分别表示“烷基”和“杂烷基”的环状型式。另外，对于杂环烷基，杂原子可以占据杂环连接至分子的其余部分的位置。环烷基的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环烷基的示例包括但不限于1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。“亚环烷基”和“杂亚环烷基”单独或作为另一个取代基的一部分，意指分别衍生自环烷基和杂环烷基的二价基团。

除非另外说明，否则术语“卤基”或“卤素”本身或作为另一个取代基的一部分，意指氟、氯、溴或碘原子。另外，“卤代烷基”等术语意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”意在包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。

术语“酰基”意指C(O)R，其中R为经取代或未取代的烷基、经取代或未取代的环烷基、经取代或未取代的杂烷基、经取代或未取代的杂环烷基、经取代或未取代的芳基或经取代或未取代的杂芳基。

除非另外说明，否则术语“芳基”意指多元不饱和的芳香族烃取代基，其可以是单环或稠合在一起(即，稠环芳基)或共价连接的多个环(优选地，1个至3个环)。稠环芳基是指稠合在一起的多个环，并且稠环中的至少一个是芳基环。术语“杂芳基”是指含有一个至四个选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)。氮原子和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。因此，术语“杂芳基”包括稠环杂芳基(即，稠合在一起的多个环，其中稠环中的至少一个环是杂芳基环)。5,6-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有5元并且另一个环具有6元，并且其中至少一个环是杂芳基环。同样，6,6-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有6元并且另一个环具有6元，并且其中至少一个环是杂芳基环。并且6,5-稠环杂亚芳基是指稠合在一起的两个环，其中一个环具有6元并且另一个环具有5元，并且其中至少一个环是杂芳基环。杂芳基可以通过碳或杂原子连接至分子的其余部分。芳基和杂芳基的非限制性示例包括：苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喏啉基、5-喹喏啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。以上所指出的芳基和杂芳基环系统中的每一个的取代基选自下文所描述的可接受取代基的基团。“亚芳基”和“杂亚芳基”单独或作为另一个取代基的一部分，意指分别衍生自芳基和杂芳基的二价基团。

为简洁起见，术语“芳基”在与其他术语(例如，芳氧基、芳基硫氧基、芳基烷基)组合使用时包括如上文所定义的芳基环和杂芳基环两者。因此，术语“芳基烷基”意在包括其中芳基连接到烷基(例如，苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)的那些基团，该烷基包括其中碳原子(例如，亚甲基)已经被例如氧原子替代的那些烷基(例如，苯氧基甲基、2-吡啶基氧基甲基、3-(1-萘氧基)丙基等)。

如本文所用，术语“氧代”意指与碳原子双键键合的氧。

如本文所用，术语“烷基磺酰基”意指具有式—S(O₂)—R'的部分，其中R'是如上文所定义的烷基。R'可以具有指定数量的碳(例如，“C₁-C₄烷基磺酰基”)。

上述术语中的每一个术语(例如，“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)意在包括所示基团的经取代和未取代的形式两者。下文提供了针对每种类型的基团的优选取代基。

烷基和杂烷基(包括通常被称作亚烷基、烯基、杂亚烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的那些基团)的取代基可以是选自但不限于以下的多种基团中的一个或多个：—OR'、═O、═NR'、═N—OR'、—NR'R”、—SR'、-卤素、—SiR'R”R”'、—OC(O)R'、—C(O)R'、—CO₂R'、—CONR'R”、—OC(O)NR'R”、—NR”C(O)R'、—NR'—C(O)NR”R”'、—NR”C(O)₂R'、—NR—C(NR'R”R”')═NR””、—NR—C(NR'R”)═NR”'、—S(O)R'、—S(O)₂R'、—S(O)₂NR'R”、—NRSO₂R'、—CN和—NO₂，数量在零到(2m'+1)的范围内，其中m'是此类基团中的碳原子的总数。R'、R”、R”'和R””各自优选地独立地指代氢、经取代或未取代的杂烷基、经取代或未取代的环烷基、经取代或未取代的杂环烷基、经取代或未取代的芳基(例如，用1-3个卤素取代的芳基)、经取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基或芳烷基。例如，当本文公开的化合物包含多于一个R基团时，例如，如当存在多于一个这些基团时独立地选择每个R'基团、R”基团、R'和R”基团那样，独立地选择R基团中的每一个。当R'和R”连接在同一氮原子上时，其可以与氮原子组合以形成4元、5元、6元或7元环。例如，—NR'R”意在包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。根据以上对取代基的讨论，本领域技术人员将理解术语“烷基”意在包括含有与除氢基团以外的基团结合的碳原子的基团，诸如卤代烷基(例如，—CF₃和—CH₂CF₃)和酰基(例如，—C(O)CH₃、—C(O)CF₃、—C(O)CH₂OCH₃等)。

类似于针对烷基所述的取代基，芳基和杂芳基的取代基是变化的，并且选自例如：卤素、—OR'、—NR'R”、—SR'、—卤素、—SiR'R”R”'、—OC(O)R'、—C(O)R'、—CO₂R'、—CONR'R”、—OC(O)NR'R”、—NR”C(O)R'、—NR'—C(O)NR”R”'、—NR”C(O)₂R'、—NR—C(NR'R”R”')═NR””、—NR—C(NR'R”)═NR”'、—S(O)R'、—S(O)₂R'、—S(O)₂NR'R”、—NRSO₂R'、—CN和—NO₂、—R'、—N₃、—CH(Ph)₂、氟(C₁-C₄)烷氧基和氟(C₁-C₄)烷基，其数量范围为零至芳基环系统上的开放化合价的总数；并且其中R'、R”、R”'和R””优选地独立地选自氢、经取代或未取代的烷基、经取代或未取代的杂烷基、经取代或未取代的环烷基、经取代或未取代的杂环烷基、经取代或未取代的芳基和经取代或未取代的杂芳基。例如，当本文公开的化合物包含多于一个R基团时，例如，如当存在多于一个这些基团时独立地选择每个R'基团、R”基团、R'和R””基团那样，独立地选择R基团中的每一个。

芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个取代基可以任选地形成式-T-C(O)—(CRR')_q—U—的环，其中T和U独立地为—NR—、—O—、—CRR'—或单键，并且q为0至3的整数。另选地，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可以任选地被式-A-(CH₂)_r—B—的取代基替换，其中A和B独立地为—CRR'—、—O—、—NR—、—S—、—S(O)—、—S(O)₂—、—S(O)₂NR'—或单键，并且r为1至4的整数。如此形成的新环的单键中的一个可以任选地被双键替换。另选地，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个取代基可以任选地用式—(CRR')_s—X'—(C”R”')_d—的取代基替代，其中s和d独立地为0至3的整数，并且X'为—O—、—NR'—、—S—、—S(O)—、—S(O)₂—或S(O)₂NR'—。取代基R、R'、R”和R”'优选地独立地选自氢、经取代或未取代的烷基、经取代或未取代环烷基、经取代或未取代的杂环烷基、经取代或未取代的芳基和经取代或未取代的杂芳基。

如本文所用，术语“杂原子”或“环杂原子”意在包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。

如本文所用，“取代基基团”意指选自以下部分的基团：

·(A)—OH、—NH₂、—SH、—CN、—CF₃、—NO₂、氧代、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基和

·(B)被选自以下的至少一个取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基：

ο(i)氧代、—OH、—NH₂、—SH、—CN、—CF₃、—NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基和，和

ο(ii)被选自以下的至少一个取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基：

■(a)氧代、—OH、—NH₂、—SH、—CN、—CF₃、—NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基和

■(b)被选自以下的至少一个取代基取代的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基：氧代、—OH、—NH₂、—SH、—CN、—CF₃、—NO₂、卤素、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基和未取代的杂芳基。

如本文所用，“大小受限的取代基”或“大小受限的取代基基团”意指选自上文针对“取代基基团”所描述的所有取代基的基团，其中每个经取代或未取代的烷基是经取代或未取代的C₁-C₂₀烷基，每个经取代或未取代的杂烷基是经取代或未取代的2元至20元杂烷基，每个经取代或未取代的环烷基是经取代或未取代的C₄-C₈环烷基，并且每个经取代或未取代的杂环烷基是经取代或未取代的4元至8元杂环烷基。

如本文所用，“低级取代基”或“低级取代基基团”意指选自上文针对“取代基基团”所描述的所有取代基的基团，其中每个经取代或未取代的烷基是经取代或未取代的C₁-C₈烷基，每个经取代或未取代的杂烷基是经取代或未取代的2元至8元杂烷基，每个经取代或未取代的环烷基是经取代或未取代的C₅-C₇环烷基，并且每个经取代或未取代的杂环烷基是经取代或未取代的5元至7元杂环烷基。

术语“药学上可接受的盐”意在包括根据本文所述化合物上发现的特定取代基用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本文公开的化合物含有相对酸性的官能团时，可以通过使中性形式的此类化合物与足够量的期望的碱(纯净的或于合适的惰性溶剂中)接触来获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐的示例包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机胺盐或镁盐或类似盐。当本文公开的化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使中性形式的此类化合物与足够量的期望的酸(纯净的或于合适的惰性溶剂中)接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的示例包括衍生自无机酸(如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等)的那些酸加成盐和衍生自相对无毒的有机酸(如乙酸、丙酸、异丁酸、顺丁烯二酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、杏仁酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯基磺酸、柠檬酸、酒石酸、乙二酸、甲烷磺酸等)的盐。还包括精氨酸盐等氨基酸的盐，以及葡糖醛酸或半乳糖醛酸等有机酸的盐(参见，例如，Berge等人,“Pharmaceutical Salts”,Journal of PharmaceuticalScience,1977,66,1-19)。本文公开的某些特定化合物含有允许这些化合物转化为碱加成盐或酸加成盐的碱性官能团和酸性官能团两者。

因此，本文公开的化合物可以以盐(诸如具有药学上可接受的酸)的形式存在。此类盐的示例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如，(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或它们的混合物，包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐和具有氨基酸(诸如谷氨酸)的盐。这些盐可以通过本领域的技术人员已知的方法制备。

化合物的中性形式优选地通过使盐与碱或酸接触并且以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式在某些物理性质方面不同于各种盐形式，诸如在极性溶剂中的溶解度。

一些化合物以互变异构体形式存在。互变异构体彼此平衡。例如，含酰胺的化合物可以与亚胺酸互变异构体平衡存在。不管示出了哪个互变异构体，并且不管互变异构体之间的平衡的性质如何，本领域的普通技术人员应将化合物理解为包括酰胺和亚胺酸互变异构体两者。因此，含酰胺的化合物应被理解为包括它们的亚胺酸互变异构体。同样，含亚胺酸的化合物应被理解为包括它们的酰胺互变异构体。

本文给出的任何式或结构还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出的式所描绘的结构，不同之处在于一个或多个原子被具有所选原子质量或质量数的原子替代。可掺入本公开化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如但不限于²H(氘，D)、³H(氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl和¹²⁵I。本公开的各种同位素标记的化合物，例如掺有放射性同位素(诸如³H和¹⁴C)的那些化合物。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，诸如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包含药物或底物组织分布测定，或适用于患者的放射性治疗。

本公开还包括式I的化合物的“氘代类似物”，其中与碳原子连接的1个至n个氢被氘替代，其中n是分子中的氢的数量。在施用于哺乳动物、尤其是人时，此类化合物展现出增加的代谢耐性，并且因此可用于增加任何式I的化合物的半衰期。参见，例如，Foster,“Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism,”TrendsPharmacol.Sci.5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域中众所周知的手段合成，例如通过采用一个或多个氢已被氘替代的起始材料。

本公开的氘标记的或经氘取代的治疗性化合物可以具有改进的DMPK(药物代谢和药代动力学)性质，其涉及分布、代谢和排泄(ADME)。用较重的同位素(诸如氘)进行的取代可以提供由更大的代谢稳定性引起的某些治疗优点，例如增加体内半衰期和减少剂量需求和/或提高治疗指数。¹⁸F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。本公开的同位素标记的化合物和其前药通常可以通过执行方案或示例中公开的程序以及以下描述的制备，通过用易于获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。应当理解，此上下文中的氘被认为是本文描述的化合物中的取代基。

此较重同位素，具体地氘的浓度可以由同位素富集因子定义。在本公开的化合物中，未具体指定为特定同位素的任何原子意在表示该原子的任何稳定同位素。除非另有说明，否则当一个位置被具体指定为“H”或“氢”时，该位置应被理解为具有按照其天然丰度同位素组成的氢。因此，在本公开的化合物中，具体指定为氘(D)的任何原子意在表示氘。

在许多情况下，本公开的化合物由于存在氨基和/或羧基或与其类似的基团而能够形成酸和/或碱盐。

还提供了本文所述的化合物的药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、互变异构形式、多晶型物和前药。“药学上可接受的”或“生理上可接受的”是指可用于制备适用于兽医或人药物用途的药物组合物的化合物、盐、组合物、剂型和其他材料。

给定化合物的术语“药学上可接受的盐”是指保留给定化合物的生物有效性和性质并且不是生物学上或以其他方式不期望的盐。“药学上可接受的盐”或“生理上可接受的盐”包含例如具有无机酸的盐和具有有机酸的盐。另外，如果获得了呈酸加成盐形式的本文所描述的化合物，则可以通过对酸盐的溶液进行碱化来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以根据用于从碱性化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸对该溶液进行处理来制造加成盐，具体地药学上可接受的加成盐。本领域的技术人员将认识到可以用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸制备。衍生自无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。同样，药学上可接受的碱加成盐可以由无机和有机碱制备。衍生自无机碱的盐包括例如钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的盐，这些胺诸如为烷基胺(即，NH₂(烷基))、二烷基胺(即，HN(烷基)₂)、三烷基胺(即，N(烷基)₃)、经取代的烷基胺(即，NH₂(经取代的烷基))、二(经取代的烷基)胺(即，HN(经取代的烷基)₂)、三(经取代的烷基)胺(即，N(经取代的烷基)₃)、烯基胺(即，NH₂(烯基))、二烯基胺(即，HN(烯基)₂)、三烯基胺(即，N(烯基)₃)、经取代的烯基胺(即，NH₂(经取代的烯基))、二(经取代的烯基)胺(即，HN(经取代的烯基)₂)、三(经取代的烯基)胺(即，N(经取代的烯基)₃、单、二或三环烷基胺(即，NH₂(环烷基)、HN(环烷基)₂、N(环烷基)₃)、单、二或三芳基胺(即，NH₂(芳基)、HN(芳基)₂、N(芳基)₃)或混合的胺等。合适的胺的具体示例包括例如异丙胺、三甲基胺、二乙胺、三(异丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、哌嗪、哌啶、吗啉、N-乙基哌啶等。

如本文所用，“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂以及吸收延缓剂等。此类介质和药剂用于药学活性物质的用途在本领域中是公知的。除非任何常规介质或药剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗性组合物中的用途。还可以将补充性活性成分掺入到组合物中。

“溶剂化物”通过溶剂和化合物的相互作用形成。还提供了本文所述化合物的盐的溶剂化物。还提供了本文所述化合物的水合物。

错误折叠或聚集的蛋白质

一些系统性淀粉样变性，特别是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)和ATTR淀粉样变性，与错误折叠的转甲状腺素蛋白的释放和/或积累有关。可通过与本文所述的化合物接触来检测错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白，其中该接触在被光激活时引起可检测信号的发射。通常，本文所述的组合物和方法可用于检测患者的任何组织中的错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白。然而，错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白可在患者的眼中积累。特别地，错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白可在眼睛的结膜中积累。视网膜中这种错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的存在可以用与错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白结合的化合物来检测，该结合然后可以通过诸如激光激活的视网膜荧光扫描等手段来检测。

转甲状腺素蛋白(“TTR”、“TTR蛋白”或“TBPA”)是血清和脑脊髓液中携带甲状腺激素甲状腺素(T4)和与视黄醇结合的视黄醇结合性蛋白的转运蛋白。肝脏将转甲状腺素蛋白分泌到血液中，并且脉络丛将TTR分泌到脑脊髓液中。TTR也可以被称为前白蛋白或甲状腺素结合性前白蛋白。

TTR是在一些条件下在肝细胞、视网膜色素上皮细胞、脉络丛上皮、胰腺α-细胞、施万细胞和神经元中合成的独特的人蛋白。它是血清中带有视黄醇的视黄醇结合性蛋白(RBP)的载体，并且是甲状腺激素前体甲状腺素(T4)在通过组织脱碘酶转化为生理学上更具活性的三碘甲状腺原氨酸(T3)之前的次要载体。仅小部分循环性TTR携带T4，而25％至50％负载有RBP-视黄醇。然而，在脑脊液脉络丛中，合成的TTR是主要的T4载体。晶体结构显示出两重对称轴。其以围绕中心通道的二聚体中的二聚体形式组装，该中心通道主要是疏水性的并且含有两个T4结合位点。第一位点中的T4结合诱导变构变化，该变构变化使得第二位点较难接触到其天然配体。当蛋白质的不同部分结合T4和RBP时，两者都稳定四聚体结构，从而降低其解离的倾向。

TTR由18号染色体上的单个基因编码，该基因涵盖约19Kb的DNA，其中4个外显子包含在7Kb、6Kb的上游(5')序列和6Kb的下游内，该下游含有允许转录后正常mRNA加工的常规3'非编码序列。启动子近端2Kb似乎含有该基因的组织特异性表达所需的所有序列。转甲状腺素蛋白同种型序列包括NP_000362.1。转甲状腺素蛋白序列可以是变体或突变体。变体或突变体可以是任何已知的形式，包括但不限于以下形式：

G6S、C10R、L12P、M13I、D18N、D18G、D18E、A19D、V20I、R21Q、S23N、P24S、A25S、A25T、V28M、V28S、V30M、V30A、V30G、V30L、V32A、V32G、F33I、F33L、F33V。F33C、R34G、R34T、K35N、K35T、A36D、A36P、D38A、D38V、D39V。W41L、E42G、E42D、F44Y、F44S、F44L、A45S、A45T、A45D、A45G、G47R、G47A、G47E、G47V、T49A、T49P、T49I、T49S、S50R、S50I、E51G、S52P、G53R、G53E、G53A、E54L、E54K、E54G、E54D、E54Q、L55Q、L55R、L55P、H56R、G57R、L58R、L58H、T59R、T59K、T60A、E61K、E61G、E62K、F64I、F64L、F64S、G67R、G67E、I68L、Y69H、Y69I、K70N、V71A、E72G、I73V、D74H、S77F、S77Y、Y78F、A81T、A81V、G83R、I84N、I84S、I84T、H88R、E89Q、E89K、H90N、H90D、A91S、E92K、V93M、V94A、A97S、A97G、G101S、P102R、R103S、R104C、R104H、I107V、I107F、I107M、A109S、A109T、A109V、L111M、S112I、P113T、Y114C、Y114H、Y114S、Y116S、T119M、A120S、V122A、V122I、P125S。

TTR是一种非二硫键连接的同源四聚体，其中成熟多肽单体在切割前导序列后含有127个氨基酸。四聚体通常是稳定的，其中Ka＝1.1×10²⁴M^-3。TTR四聚体的解离可导致蛋白质在组织中的沉积以及淀粉样蛋白的形成。错误折叠或聚集的TTR蛋白可以是N-寡聚体。TTR可以是野生型TTR，或者可以是其变体或突变体。

在一些实施方案中，错误折叠的或聚集的蛋白质可以是β2巨球蛋白、白细胞趋化因子2、载脂蛋白AIV、载脂蛋白CII、载脂蛋白CIII或溶菌酶，或其突变体或变体，其中每一种都是本领域已知的。错误折叠或聚集的蛋白质可以是其淀粉样蛋白。

因此，根据本公开的一些实施方案，提供了一种用于确定患者是否患有系统性淀粉样变性的方法。该方法需要通过使受试者的组织与本文所述的化合物接触来检测受试者的组织(诸如眼睛)中错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的存在。接触可以是体内或离体的。接触可以通过局部施用。据设想，错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的积累可发生在眼睛的结膜中。因此，通过局部施用于眼睛表面，该检测可以靶向结膜中错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白。当局部施用时，可以将化合物配制成眼科学上可接受的配制品。

在另一个实施方案中，提供了一种用于对患者进行系统性淀粉样变性，特别是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)或ATTR淀粉样变性诊断的准备的方法，该方法包括向患者施用特异性结合至错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的化合物。化合物可以施用于患者的眼睛。一旦将化合物施用于患者，就可以用任何方法(包括本文所述的方法)检测该化合物与错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的结合，这种结合指示错误折叠的转甲状腺素蛋白的积累，该积累是系统性淀粉样变性的征兆。

错误折叠或聚集的蛋白质结合性化合物

本公开还提供了一种能够结合至错误折叠或聚集的蛋白质的化合物。在一些实施方案中，该化合物能够结合至错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白。在一个实施方案中，该化合物可选自国际公开号WO 2011/072257或美国专利9,551,722中所述的那些化合物，这些文献的全部内容通过引用并入本文。化合物的合成可以通过本领域已知的方法进行，包括在并入的参考文献中描述的那些方法。

在一些实施方案中，本公开提供式I的化合物或其盐或溶剂化物：

其中

EDG是：

R¹取代或未取代的烷基、R¹取代或未取代的环烷基、R¹取代或未取代的杂烷基、R¹取代或未取代的杂环烷基、R¹取代或未取代的芳基、R¹取代或未取代的杂芳基、OR²NR⁴C(O)R³、-NR⁴R⁵、-SR⁶或PR⁷R⁸，

其中

R¹是卤素、-OR⁹、-NR¹⁰R¹¹、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R⁴和R⁵任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R⁹和R¹⁰独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R¹⁰和任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R¹²是卤素、-OR¹³、-NR¹⁴R¹⁵、R¹⁶取代或未取代的烷基、R¹⁶取代或未取代的杂烷基、R¹⁶取代或未取代的环烷基、R¹⁶取代或未取代的杂环烷基、R¹⁶取代或未取代的芳基或R¹⁶取代或未取代的杂芳基；

R¹³、R¹⁴和R¹⁵独立地为氢或未取代的烷基；并且

R¹⁶为未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

其中

πCE具有下式：

-L¹-(A¹)_q-L²-(A²)_r-L³-或-L¹-(A¹)_q-L⁴-A³-L²-(A²)_r-L³-，

其中

q和r独立地为0或1，其中q或r中的至少一者为1；

A¹、A²和A³独立地为R¹⁷取代或未取代的亚芳基或R¹⁷取代或未取代的杂亚芳基；

L¹、L²、L³和L⁴独立地为键或具有下式的连接基团：

其中x为1至50的整数；

R¹⁷为卤素、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为氢、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环

烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R²¹为卤素、-OR²²、-NR²³R²⁴、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²²、R²³和R²⁴独立地为氢或未取代的烷基；并且

其中

WSG为R²⁵取代或未取代的烷基、R²⁵取代或未取代的杂烷基、R²⁵取代或未取代的环烷基、R²⁵取代或未取代的杂环烷基、R²⁵取代或未取代的芳基、R²⁵取代或未取代的杂芳基；

其中

R²⁵为卤素、-OR²⁶、-NR²⁷R²⁸、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁶、R²⁷和R²⁸独立地为氢、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基，其中R²⁷和R²⁸任选地连接在一起形成R²⁹取代或未取代的杂环烷基或R²⁹取代

或未取代的杂芳基；

R²⁹为卤素、-OR³⁰、-NR³¹R³²、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；并且

R³⁰、R³¹和R³²独立地为氢或未取代的烷基；

在某些实施方案中，该化合物是

或其药学上可接受的盐。

或其药学上可接受的盐。

疾病和病症及其治疗

本文提供了用于确定患者是否患有疾病或病症的方法，该方法包括检测受试者的眼睛中错误折叠或聚集的蛋白质的存在，其中该检测包括使该错误折叠或聚集的蛋白质与本文所述的化合物接触。错误折叠或聚集的蛋白质可以是错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白。疾病或病症可以是系统性淀粉样变性。系统性淀粉样变性可以是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)。系统性淀粉样变性可以是ATTR淀粉样变性。化合物可以是本文所述的化合物。接触可以是体内的。组织可以是眼组织。组织可以是手腕、椎管、心脏或泪腺。

系统性淀粉样变性的症状可以包括：脚踝和/或腿部肿胀、严重疲劳、虚弱、呼吸短促、麻木、手或脚麻木、刺痛或疼痛、手腕疼痛(腕管综合征)、腹泻、血便、便秘、无意中体重减轻(例如，超过10磅(4.5千克))、舌头肿大、舌头呈波纹状、皮肤增厚、瘀伤、眼睛周围的紫斑、心律不齐和/或吞咽困难。

系统性淀粉样变性可以是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)、ATTR淀粉样变性、TTR心脏淀粉样变性、TTR淀粉样蛋白心肌病(ATTR-CM)、家族性或遗传性ATTR淀粉样变性(ATTRv或ATTRm)、老年系统性淀粉样变性(SSA或ATTRwt)、AL淀粉样变性、AA(血清淀粉样蛋白A淀粉样变性)、由感染引起的炎症导致的AA淀粉样变性、风湿病、获得性或遗传性的自身炎症和自身免疫疾病、癌症或肿瘤、纤维蛋白原α链淀粉样变性、载脂蛋白A-1和A-2淀粉样变性、凝溶胶蛋白淀粉样变性、Ab2M(β2巨球蛋白)淀粉样变性、ALECT2(白细胞趋化因子2)淀粉样变性、AApoAIV(载脂蛋白AIV)淀粉样变性、AApoCII(载脂蛋白CII)淀粉样变性、AApoCIII(载脂蛋白CIII)淀粉样变性、ALys(溶菌酶)淀粉样变性。

在一些实施方案中，系统性淀粉样变性是家族性淀粉样蛋白多发性神经病(TTR-FAP或FAP)。FAP，也被称为转甲状腺素蛋白淀粉样蛋白多发性神经病，是由外周神经和其他组织周围的蛋白质或淀粉样蛋白的异常沉积物引起的罕见的、遗传性的和进行性的疾病。FAP是由TTR基因中使TTR四聚体去稳定的突变引起的。迄今为止，已经报道了该基因中超过100种不同的突变。FAP的症状包括进行性感觉运动和自律神经性神经病，包括当控制非自愿身体机能(诸如血压、温度控制和消化)的神经受损时，早期可能表现为腿脚感觉异常(诸如麻木、刺痛或烧灼感)的周围神经病以及自律神经性神经病。运动纤维的退化可引起进行性虚弱和步态障碍。FAP的一种治疗是肝脏移植。其他治疗包括基因疗法、免疫接种、TTR聚集体的溶解、自由基清除剂和葡甲胺的施用。

在一些实施方案中，系统性淀粉样变性是AL淀粉样变性(免疫球蛋白轻链淀粉样变性)。发达国家最常见类型的淀粉样变性，即AL淀粉样变性，也被称为原发性淀粉样变性。它通常影响心脏、肾、肝和神经。

在一些实施方案中，系统性淀粉样变性是AA淀粉样变性。也被称为炎症性淀粉样变性，这种淀粉样变性通常由炎症性疾病(诸如类风湿性关节炎)触发。对严重炎症性病状的治疗可以治疗或预防AA淀粉样变性。它通常影响肾、肝和脾。

在一些实施方案中，系统性淀粉样变性是局部淀粉样变性。与影响多个器官系统的淀粉样变性相比，这种类型的淀粉样变性通常预后较好。局部淀粉样变性的典型部位包括膀胱、皮肤、咽喉或肺。正确的诊断非常重要，这样才能避免影响全身的治疗。

在一些实施方案中，系统性淀粉样变性是ATTR淀粉样变性。ATTR淀粉样变性可以是TTR心脏淀粉样变性、TTR淀粉样蛋白心肌病(ATTR-CM)、家族性或遗传性ATTR淀粉样变性(ATTRv或ATTRm)、或老年系统性淀粉样变性(ATTRwt)。

ATTRm淀粉样变性是一种累及心血管、外周和自律神经的多系统病症，其由于表型异质性而难以诊断。ATTRm淀粉样变性是具有不同临床表现的罕见疾病，这些临床表现部分地由基因型决定。考虑到这种复杂性，对于ATTRm表现出周围神经病的患者而言，从症状发作开始可有长达4年的诊断延迟，并且对于表现出心肌病的患者而言，可有长达8年的诊断延迟。腕管综合征(CTS)可能是多达33％患者的早期症状，在临床上累及其他器官之前平均时间为4年至6年。随后，患者通常发展为外周和自律神经性神经病，并且经常累及心脏。由于TTR也在脉络丛和视网膜上皮中产生，因此中枢神经系统(CNS)表现也很少发生，并且对于一些对CNS具有偏好的引起疾病的突变(诸如ATTRL12P)更常见。其他临床表现包括外周神经病和自律神经性神经病。V30M是最常见的ATTR突变，但其他突变可能是潜在的，包括ATTRV122I和ATTRL12P，或如本文所述的变体或突变体。

已经在TTR蛋白中的127个氨基酸中的77个中发现引起常染色体显性临床病症家族性淀粉样多发性神经病(感觉-运动和自律多发性神经病)和家族性淀粉样心肌病的淀粉样原性蛋白变体。已发现四十个残基具有单个淀粉样原性突变，而十五个残基具有2个淀粉样原性突变、六个残基具有3个淀粉样原性突变、五个残基具有4个淀粉样原性突变，并且一个残基具有5个淀粉样原性突变。五十个氨基酸没有突变，并且已经描述了12个突变，这些突变不导致临床可检测的淀粉样变性，尽管所涉及的残基中的两个残基具有淀粉样原性和非淀粉样原性取代。随着年龄的增长，野生型TTR淀粉样蛋白沉积在心脏、腕管和消化道中的频率增加，目前认为这与合成后(可能是氧化)变化有关，这些变化可能使得野生型蛋白较不稳定，但也可能是其他尚未确定的机制造成的。在突变的情况下，似乎它们都形成四聚体，四聚体在生理条件下是动力学或热力学上不稳定的，从而导致解离增强，从而释放对快速错误折叠、聚集和原纤维形成敏感的单体。这些观察表明，单体在功能上彼此“陪衬”。

“治疗”是用于获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。有益的或期望的临床结果可以包括以下的一项或多项：a)抑制疾病或病状(例如，减少由疾病或病状引起的一种或多种症状，和/或降低疾病或病状的程度)；b)改善、减缓或阻止与疾病或病状相关联的一种或多种临床症状的发展(例如，稳定疾病或病状、预防或延迟疾病或病状的恶化或进展和/或预防或延迟疾病或病状的扩散(例如，转移))；和/或c)缓解疾病，即引起临床症状消退(例如，改善疾病状态、提供疾病或病状的部分或完全缓解、增强另一种药品的效果、延迟疾病的进展、提高生活质量和/或延长生存期)。

“预防”意指对疾病或病状进行的导致疾病或病状的临床症状不发展的任何治疗。在一些实施方案中，该方法允许将本文所述的化合物施用于有患疾病或病状的风险或具有疾病或病状的家族史的患者(包括人)。

“受试者”是指已经是或将是治疗、观察或实验的对象的动物，诸如哺乳动物(包括人)。本文所述的方法可用于人类疗法和/或兽医应用。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人。

本文所述的化合物的术语“治疗有效量”或“有效量”是指当施用于受试者时足以实现治疗，以提供症状改善或疾病进展减慢等治疗益处的量。例如，治疗有效量可以是足以减少系统性淀粉样变性的疾病或病状的症状的量。治疗有效量可以根据受试者和所治疗的疾病或病状、患者的体重和年龄、疾病或病状的严重度以及施用方式而变化，该治疗有效量可以由本申请领域的普通技术人员容易地确定。

本文所述的方法可以体内或离体应用于细胞群体。“体内”意指在活的个体内，如在动物或人体内。在此上下文中，本文所述的方法可以治疗性地用于个体。“离体”意指在活的个体之外。离体细胞群体的示例包括体外细胞培养物和生物样品，包括从个体获得的液体或组织样品。此类样品可以通过本领域众所周知的方法获得。示例性生物流体样品包括血液、脑脊髓液、尿液和唾液。在此上下文中，本文所述的化合物和组合物可用于多种目的，包括治疗和实验目的。例如，可以针对给定适应症、细胞类型、个体和其他参数离体使用本文所述的化合物和组合物，以确定本公开的化合物的施用的最佳时间表和/或剂量。从此用途搜集的信息可以用于实验目的或在临床中用于设置体内治疗的方案。本文所述的化合物和组合物可能适合的其他离体用途在以下进行了描述，或者对于本领域的技术人员而言将变得显而易见。所选化合物可以进一步被表征为检查人类或非人类患者的安全剂量或耐受剂量。此类性质可以使用本领域的技术人员通常已知的方法检查。

在一些实施方案中，错误折叠或聚集的蛋白质不是淀粉样蛋白β(Aβ)肽、α-突触核蛋白、朊病毒肽、亨廷顿蛋白、血清淀粉样蛋白A、溶菌酶、淀粉纤维素、免疫球蛋白轻链、精液衍生的病毒感染增强剂、PAB、SEM1、protegrin-1、CsgA-R5和CsgA-R1、超氧化物歧化酶、胰岛素或p53。在一些实施方案中，错误折叠或聚集的蛋白质不包括淀粉样蛋白β(Aβ)肽。在一些实施方案中，疾病或病症不是先兆子痫。

错误折叠或聚集的蛋白质的检测

本文提供了用于诊断疾病或病症的方法，该方法包括向受试者的眼睛局部施用本文所述的化合物。疾病或病症可以是系统性淀粉样变性。系统性淀粉样变性可以是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)。系统性淀粉样变性可以是ATTR淀粉样变性。该方法可以包括检测化合物与错误折叠或聚集的蛋白质的结合。该方法可以包括检测化合物与错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的结合。在被光激活时，结合可以引起可检测信号的发射。该信号可以是荧光或红外信号。施用可以是局部施用和/或可以定位于眼睛的结膜处。

错误折叠或聚集的蛋白质的检测可以用选择性地结合至错误折叠或聚集的蛋白质的化合物进行。在一个实施方案中，当结合至错误折叠或聚集的蛋白质时，该化合物可通过其在被激光激活时发出的荧光信号来检测。

可使用成像装置促进对蛋白质结合性探针(例如，本文所述的化合物)与患者眼中的错误折叠或聚集的蛋白质的结合的原位检测。成像装置可以是手持式的或便携式的。成像装置可以包括透镜和图像传感器，以及任选的激光光源。当光源向组织(例如，结膜)发射激光时，如果错误折叠或聚集的蛋白质在该组织处积累并且已经结合至当结合时发出荧光的化合物，则可以通过收集和感测荧光信号的透镜和图像传感器容易地检测和定量该积累。

用于确定患者是否患有诸如系统性淀粉样变性等疾病或病症的方法可以以本文所述的或本领域已知的任何方式进行。在一些实施方案中，该接触在被光激活时引起可检测信号的发射。在一些实施方案中，可检测信号是荧光信号。在一些实施方案中，错误折叠或聚集的蛋白质作为原纤维存在于组织中。在一些实施方案中，错误折叠或聚集的蛋白质作为斑块存在于组织中。在一些实施方案中，该方法不包括确定荧光衰减。在一些实施方案中，该方法不包括基于与参考的比较来确定荧光衰减。

在一些实施方案中，提供了一种用于监测对患有系统性淀粉样变性的受试者的治疗的响应的方法，该方法包括：(i)通过使有效量的本文所述的化合物与受试者的眼睛接触来形成可检测复合物；以及(ii)检测该可检测复合物的形成，其中与治疗前相比可检测复合物的减少表明受试者对治疗有反应。在一些实施方案中，将化合物局部施加至眼睛。

施用和药物组合物

在一些实施方案中，将本文所述的化合物的药物组合物施用于受试者的眼睛。在一些实施方案中，将化合物递送至眼表面。在一些实施方案中，将化合物作为滴眼剂施用。施用可以是局部施用。

该化合物可以在宽剂量范围内有效。在一些实施方案中，在对成人的应用中，每天0.01mg至1000mg、0.5mg至100mg、1mg至50mg以及5mg至40mg的剂量是所使用的剂量的示例。示例性剂量为每天10mg至30mg。在对青少年的应用中，剂量可以与成人剂量相同或小于成人剂量。在一些实施方案中，化合物的有效量对应于约50mg至500mg化合物/成人患者。确切剂量将取决于施用途径、化合物施用形式、要治疗的患者、要治疗的患者的体重以及主治医师的偏好和经验。

在一些实施方案中，化合物的有效量对应于约0.01mg至1000mg化合物/人类患者/剂。在一些实施方案中，化合物的有效剂量为50mg至500mg/人/剂。在一些实施方案中，有效量对应于约0.01mg至100mg、0.01mg至200mg、0.01mg至300mg、0.01mg至400mg、0.01mg至500mg、0.01mg至600mg、0.01mg至700mg、0.01mg至800mg、0.01mg至900mg、0.01mg至1000mg、0.1mg至100mg、0.1mg至200mg、0.1mg至300mg、0.1mg至400mg、0.1mg至500mg、0.1mg至600mg、0.1mg至700mg、0.1mg至800mg、0.1mg至900mg、0.1mg至1000mg、1mg至100mg、1mg至200mg、1mg至300mg、1mg至400mg、1mg至500mg、1mg至600mg、1mg至700mg、1mg至800mg、1mg至900mg、100mg至200mg、100mg至300mg、100mg至400mg、100mg至500mg、100mg至600mg、100mg至700mg、100mg至800mg、100mg至900mg、100mg至1000mg、200mg至300mg、200mg至400mg、200mg至500mg、200mg至600mg、200mg至700mg、200mg至800mg、200mg至900mg、200mg至1000mg、300mg至400mg、300mg至500mg、300mg至600mg、300mg至700mg、300mg至800mg、300mg至900mg、300mg至1000mg、400mg至500mg、400mg至600mg、400mg至700mg、400mg至800mg、400mg至900mg、400mg至1000mg、500mg至600mg、500mg至700mg、500mg至800mg、500mg至900mg、500mg至1000mg、600mg至700mg、600mg至800mg、600mg至900mg、600mg至1000mg、700mg至800mg、700mg至900mg、700mg至1000mg、800mg至900mg、800mg至1000mg或约900mg至1000mg/人/剂。在一些实施方案中，有效量对应于每个成人每剂量约50mg至100mg、50mg至400mg、50mg至500mg、100mg至200mg、100mg至300mg、100mg至400mg、100mg至500mg、200mg至300mg、200mg至400mg、200mg至500mg、300mg至400mg、300mg至500mg或400mg至500mg/成人/剂。

在一些实施方案中，化合物以单剂量施用。在一些实施方案中，化合物以多剂量施用。在一些实施方案中，给药为约每天一次、两次、三次、四次、五次、六次或多于六次。在一些实施方案中，给药为约每月一次、每两周一次、每周一次或每隔一天一次。在另一种情况下，化合物和另一种药剂约每天一次至约每天6次一起施用。在一些实施方案中，化合物和药剂的施用持续少于约7天。在又另一种情况下，施用持续多于约6天、10天、14天、28天、两个月、六个月或一年。在一些实施方案中，实现连续给药，并且连续给药持续所需时长。

在一些实施方案中，化合物每天施用一次至十次、一次至四次或一次。在一些实施方案中，化合物每天施用1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次。在一些实施方案中，化合物作为滴剂施用。在一些实施方案中，所施用的滴剂的大小在约10μL至100μL、约10μL至90μL、约10μL至80μL、约10μL至70μL、约10μL至60μL、约10μL至50μL、约10μL至40μL、约10μL至30μL、约20μL至100μL、约20μL至90μL、约20μL至80μL、约20μL至70μL、约20μL至60μL、约20μL至50μL、约20μL至40μL或约20μL至30μL的范围内。本公开的一个示例以约10μL至约30μL的范围施用滴剂。本公开的一个示例以约10μL至约100μL的范围施用滴剂。本公开的一个示例以约20μL至约50μL的范围施用滴剂。本公开的一个示例以约20μL至约40μL的范围施用滴剂。本公开的一个示例以约10μL至约60μL的范围施用滴剂。在一些实施方案中，每次施用数滴本公开的眼用配制品，例如每次1滴至3滴、每次1滴至3滴、每次1滴至4滴、每次1滴至5滴、每次1滴至6滴、每次1滴至7滴、每次1滴至8滴、每次1滴至9滴、每次1滴至10滴、每次3滴至4滴、每次3滴至5滴、每次3滴至6滴、每次3滴至7滴、每次3滴至8滴、每次3滴至9滴、每次3滴至10滴、每次5滴至6滴、每次5滴至7滴、每次5滴至8滴、每次5滴至9滴、每次5滴至10滴、每次7滴至8滴、每次7滴至9滴或每次9滴至10滴。在一个示例中，每次施用约一滴本公开的配制品，并且每天施用1次至6次。

药物组合物/配制品

在一些实施方案中，将本文所述的化合物配制成药物组合物。在一些实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制药物组合物，该生理学上可接受的载体包括赋形剂和助剂，这些赋形剂和助剂促进将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂。适当的配制品取决于所选择的施用途径。任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂都适用于配制本文所述的药物组合物：Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.编辑,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,NewYork,N.Y.,1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版(Lippincott Williams&Wilkins 1999)。

本文提供了包含如本文所述的化合物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物。在某些情况下，本文所述的化合物作为药物组合物施用，其中一种或多种化合物与其他活性成分混合，如在组合疗法中。在特定情况下，药物组合物包含一种或多种本文所述的化合物。

如本文所用的药物组合物是指本文所述的化合物与其他化学组分(诸如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。在某些情况下，在某些情况下，药物组合物有助于向生物体施用化合物。在实践本文提供的治疗方法或用途的一些实施方案中，将治疗有效量的一种或多种本文所述的化合物以药物组合物的形式施用于患有待检测、诊断或治疗的疾病或病状的哺乳动物。在特定情况下，哺乳动物是人。在某些情况下，治疗有效量根据疾病的严重程度、患者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其他因素而变化。本文所述的化合物单独使用，或作为混合物的组分与一种或多种治疗剂组合使用。

在一些实施方案中，一种或多种化合物在水溶液中配制。在特定情况下，水溶液选自例如生理学相容的缓冲液，诸如汉克溶液、林格氏溶液、乙酸盐水缓冲液、柠檬酸盐水缓冲液、碳酸盐水缓冲液、磷酸盐水缓冲液或生理盐水缓冲液。

在一些实施方案中，本文所述的化合物被配制用于眼部施用。在一些实施方案中，眼部配制品是液体(呈溶液、悬浮液、用于重构的粉末、溶胶至凝胶系统的形式)、半固体(软膏和凝胶)、固体(眼部插入物)和眼内剂型(注射剂、冲洗溶液和植入物)。该化合物可被配制用于局部施用，例如，施用于眼睛。

本文提供了包含本文所述的化合物和眼科学上可接受的组分的眼用配制品。眼用配制品可以以适于眼部药物施用的任何形式施用，例如，作为溶液、悬浮液、软膏、凝胶、脂质体分散液、胶体微粒悬浮液等，或以眼部插入物形式施用，例如，以任选的可生物降解的控释聚合物基质形式施用。

“药学上可接受的”或“眼科学上可接受的”组分意指不是生物学上或其他方面不期望的组分，即，该组分可掺入本公开的眼用配制品中并局部施用于患者的眼睛，而不引起任何不期望的生物效应或以有害方式与包含该组分的配制品组合物中的任何其他组分相互作用。当术语“药学上可接受的”用于指不同于药理学活性剂的组分时，意味着该组分已满足所需的毒理学和制造测试标准，或者该组分包含在美国食品和药物管理局(U.S.Foodand Drug Administration)制定的非活性成分指南(Inactive Ingredient Guide)中。参见，例如，Kaur等人,Drug Development and Industrial Pharmacy(2002)28(5),473-493。

眼用配制品可以适于以悬浮液或乳液的形式局部施用于眼睛。眼用配制品可以包含眼科学上可接受的载体。此类载体包括例如水、水的混合物(例如，磷酸缓冲液、硼酸、氯化钠和硼酸钠)和水混溶性溶剂(诸如低级醇、芳基醇、聚亚烷基二醇、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和肉豆蔻酸异丙酯)。眼用配制品还可以包含一种或多种赋形剂，诸如乳化剂、防腐剂、润湿剂、稠化剂。例如，眼用配制品可以包括：聚乙二醇200、300、400和600；卡波蜡1,000、1,500、4,000、6,000和10,000；抗菌组分，诸如季铵化合物、苯汞盐、硫柳汞、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、苯甲醇、苯乙醇；缓冲剂，诸如硼酸钠、乙酸钠、葡萄糖酸缓冲剂；以及其他药剂，诸如脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺、油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、琥珀酸二异辛酯磺酸钠、单硫代甘油、硫代山梨糖醇和乙二胺四乙酸。眼用配制品可以是等渗的。眼用配制品还可以包括表面活性剂或稳定剂。表面活性剂包括稳定剂包括亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠和硫代硫酸钠。

配制品可以包括有效量的渗透增强剂，其促进配制品组分渗透通过细胞膜、组织和细胞外基质，包括角膜。配制品可渗透眼睛表面至结膜。渗透增强剂的“有效量”表示足以使一种或多种配制品组分通过膜、组织和细胞外基质的渗透可测量地增加的浓度，如刚才所述。合适的渗透增强剂包括，例如，甲磺酰甲烷(MSM；也被称为甲基砜)、MSM与二甲亚砜(DMSO)的组合，或在不太优选的实施方案中，MSM与DMSO的组合，其中特别优选MSM。

试剂盒和包装件

本文还提供了试剂盒和包装件，其包含本公开的化合物、视网膜成像装置和任选合适的包装。在一个实施方案中，试剂盒进一步包含使用说明书。

视网膜成像装置可以包括用于检测所发射的信号的透镜和图像传感器(因此形成合适的视网膜扫描仪)。在一些实施方案中，视网膜成像装置检测荧光信号。在一些实施方案中，视网膜成像装置还包括可用于激活荧光信号的激光光源。

实施例

包括了以下实施例以证明本公开的具体实施方案。本领域技术人员应当理解，以下实施例中所公开的技术表示在本公开的实践中很好地起作用并且因此可以被认为构成其实践的具体模式的技术。然而，根据本公开，本领域的技术人员应当理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对所公开的具体实施方案进行许多改变并且仍然获得相同或类似的结果。

实施例1：体内系统性淀粉样蛋白沉积物的成像

饲养三只小鼠并使其老化，用于成像。研究小鼠的淀粉样蛋白积累的活体成像。将本文所述的化合物施加至眼睛表面(配制品：200μL的10mg/mL本文所述的化合物，于20％DMSO/80％丙二醇中)，这允许TTR的可视化。

使用在Zeiss Stemi 2000-C显微镜上建模的光学成像系统。在显微镜的轴附近递送输入光。用干涉滤光片对荧光激发或远红外线输入进行光谱整形。将荧光发射带通滤光片靠近集成照相机放置。输入源基于邻近球面镜定位的短弧、连续氙灯，该球面镜捕获部分能量并将其聚集到小直径光纤电缆(1.4mm直径，NA约0.5)中。灯的光谱输出提供从400nm至700nm的相对均匀的宽带光源，其中功率为约1mW/cm²。光学系统对光束的光斑尺寸进行整形，以避免过度填充瞳孔，并提供光从照明器到小鼠瞳孔的有效能量传递。RIS设计光学系统的结果导致通过仅一个光学元件的调制以范围从1mm至2mm的可调节光斑尺寸聚焦到放大的瞳孔平面上的窄光束。

获得并分析结膜的荧光图像。本文所述的化合物在与TTR蛋白聚集体接触时发荧光，这表明此类化合物可以作为系统性淀粉样变性的指示物用于体内视网膜成像。

实施例2：TTR聚集体制备

使用如下所述的不同条件制备几个聚集的TTR样品。

通过将TTR重悬于pH约3.6的50mM甘氨酸缓冲液中并进一步将其在室温下温育24小时来制备聚集体A。

通过将TTR重悬于pH约7.4的水中，并在维持于37℃的搅拌(200rpm)下将其进一步温育7天来制备聚集体B1。

通过将TTR重悬于pH约7.4的水中，并在维持于37℃的搅拌(200rpm)下将其进一步温育14天来制备聚集体B2。

实施例3：化合物I与TTR聚集体的光谱性质

在1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中使用或不使用聚集体B1制备化合物1(4μM)。获取两个样品的吸收、荧光和激发光谱。将激发波长优化为440nm。相对于空白溶剂对照调节由此接收的发射光谱，以获得作为波长的函数的相对荧光强度(RFI)。如图1所示，在聚集体B1的存在下，化合物1的RFI增加约3.2倍。

进一步地，当在440nm下激发时，分别获得化合物I(4μM)与聚集体A、B1或B2(各自浓度为5μM)的混合物在565nm的发射波长下的荧光光谱。计算RFI相对于单独的化合物1的增加，并示于表1中：

表1.在TTR聚集体的存在下化合物1的荧光强度增加

实施例4：化合物1与聚集的TTR的结合亲和力

制备DMSO/PBS溶液(6μL DMSO，于144μL PBS中，pH 7.4)作为空白对照。进一步地，制备250μM化合物1于DMSO中的溶液。然后一式三份地制备以下样品，同时保持4％DMSO/PBS中5μM TTR浓度不变：

表2.分析样品的荧光以确定结合常数

在445nm至700nm范围内，获得每个样品的发射光谱，并针对空白对照进行调节。确定每个样品在λmax(em)处的RFI。然后使用一个位点特异性结合算法，在0μM至10μM的范围内将RFI相对于化合物1的递增浓度作图。将结合亲和力(K_d)确定为0.3+/-0.1μM。这在图2中示出。

实施例5：ATTR尸眼的染色

采用以下方案对福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织进行染色：

1.对组织切片进行脱蜡和水合：

-在60℃下预热1小时

-将载玻片放置在支架中，并用澄清剂二甲苯(石蜡溶剂)和一系列梯度乙醇(EtOH)处理，如下所示：

i.100％二甲苯–5分钟

ii.100％二甲苯–5分钟

iii.50％/50％二甲苯/100％EtOH–3分钟

iv.100％EtOH–3分钟

v.95％EtOH–3分钟

vi.70％EtOH–3分钟

vii.50％EtOH–3分钟

viii.水–2×3分钟。

2.抗原回收：在99％甲酸中温育5分钟。

3.用蒸馏水洗涤5分钟。重复该步骤两次。

4.将10mM柠檬酸盐缓冲液pH 6.0预热至沸腾。

5.将载玻片置于具有加热的柠檬酸盐缓冲液的染色室中20分钟。

6.在水浴中冷却。用蒸馏水洗涤5分钟。重复该步骤两次。

7.在1x PBS中平衡15分钟。

8.在室温(RT)下在含5％正常山羊血清(NGS)的PBST(含Tween 20的PBS)中封闭1小时。

9.在4℃下在初级抗体O/N中温育(2.5％NGS，于PBST中)。

10.将组织在PBST洗涤缓冲液中洗涤3×10分钟。

11.在RT下在二级抗体(1:500，于PBST中)中温育1小时–从该点开始保持在黑暗中。

12.将组织在PBST中洗涤3×10分钟。

13.在RT下用化合物(60μM)染色30分钟。

-使化合物升温至RT(约30分钟)。

-将5mg化合物溶解在3.75ml DMSO中–保持在黑暗中。

-将100μl化合物溶液稀释在5ml PBS中。

14.将组织在PBST中洗涤3×10分钟。

15.用Hoechst(2:1000，1mg/ml稀释于PBS中)将细胞核染色10分钟。

16.将组织在PBST中洗涤3×10分钟。

17.使用Prolong Glass封固介质封固组织，用夹子固定并干燥ON。

18.用指甲油密封边缘。

实施例6：化合物1与人组织中的TTR的结合

使用Amydis视网膜示踪剂来标记眼睛中的TTR聚集体，以便使用标准眼部成像设备进行非侵入性检测，并且因此促进ATTR的诊断和监测。

将来自具有已知TTR突变的玻璃状淀粉样蛋白的组织(石蜡包埋的组织块)和具有玻璃状淀粉样蛋白的尸检眼球(石蜡包埋的器官)的切片分别用苏木精和伊红(H&E)和刚果红染色，以标记具有淀粉样变性的区域。使用实施例5中描述的优化方案，用化合物1和TTR特异性抗体对相邻切片进行共染色。收集并比较免疫荧光图像。确定来自化合物1的超荧光区域对应于使用刚果红和H&E染剂所定义的淀粉样变性区域。据设想，化合物1与人组织中的TTR沉积物结合并且经历荧光发射的增加，其方式类似于其在聚集的TTR的存在下在体外的荧光增加，如先前实施例中所述。

***

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

本文说明性地描述的公开内容可以在不存在本文未具体公开的任何一个或多个要素、一种或多种限制的情况下适当实践。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应被扩展地理解并且不受限制。另外，本文所用的术语和表述已被用作描述而非限制性的术语，并且无意使用此类术语和表述来排除所示和所述特征的任何等效物或其部分，但应认识到，在所要求保护的本公开的范围内可以进行各种修改。

本文提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用整体明确地并入，如同每一个单独地通过引用并入。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包括定义)为准。

应当理解，虽然已经结合上述实施方案描述了本公开，但前述描述和实施例旨在说明而非限制本公开的范围。本公开的范围内的其他方面、优点和修改对于本公开所属领域的技术人员而言将是显而易见的。

Claims (22)

1.一种用于确定受试者是否患有系统性淀粉样变性的方法，所述方法包括向所述受试者的眼睛施用式I的化合物或其药学上可接受的盐，并检测错误折叠或聚集的蛋白质的存在或不存在：

其中

EDG是：

R¹取代或未取代的烷基、R¹取代或未取代的环烷基、R¹取代或未取代的杂烷基、R¹取代或未取代的杂环烷基、R¹取代或未取代的芳基、R¹取代或未取代的杂芳基、OR²NR⁴C(O)R³、-NR⁴R⁵、-SR⁶或PR⁷R⁸，

其中

R¹是卤素、-OR⁹、-NR¹⁰R¹¹、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R⁴和R⁵任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R⁹和R¹⁰独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R¹⁰和任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R¹²是卤素、-OR¹³、-NR¹⁴R¹⁵、R¹⁶取代或未取代的烷基、R¹⁶取代或未取代的杂烷基、R¹⁶取代或未取代的环烷基、R¹⁶取代或未取代的杂环烷基、R¹⁶取代或未取代的芳基或R¹⁶取代或未取代的杂芳基；

R¹³、R¹⁴和R¹⁵独立地为氢或未取代的烷基；并且

R¹⁶为未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

其中

πCE具有下式：

-L¹-(A¹)_q-L²-(A²)_r-L³-或-L¹-(A¹)_q-L⁴-A³-L²-(A²)_r-L³-，

其中

q和r独立地为0或1，其中q或r中的至少一者为1；

A¹、A²和A³独立地为R¹⁷取代或未取代的亚芳基或R¹⁷取代或未取代的杂亚芳基；

L¹、L²、L³和L⁴独立地为键或具有下式的连接基团：

其中x为1至50的整数；

R¹⁷为卤素、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为氢、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R²¹为卤素、-OR²²、-NR²³R²⁴、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²²、R²³和R²⁴独立地为氢或未取代的烷基；并且

其中

WSG为R²⁵取代或未取代的烷基、R²⁵取代或未取代的杂烷基、R²⁵取代或未取代的环烷基、R²⁵取代或未取代的杂环烷基、R²⁵取代或未取代的芳基、R²⁵取代或未取代的杂芳基；

其中

R²⁵为卤素、-OR²⁶、-NR²⁷R²⁸、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁶、R²⁷和R²⁸独立地为氢、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基，其中R²⁷和R²⁸任选地连接在一起形成R²⁹取代或未取代的杂环烷基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁹为卤素、-OR³⁰、-NR³¹R³²、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；并且

R³⁰、R³¹和R³²独立地为氢或未取代的烷基；

条件是所述错误折叠或聚集的蛋白质不是淀粉样蛋白β肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述错误折叠或聚集的蛋白质是转甲状腺素蛋白。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述系统性淀粉样变性是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)、ATTR淀粉样变性、TTR心脏淀粉样变性、TTR淀粉样蛋白心肌病(ATTR-CM)、家族性或遗传性ATTR淀粉样变性(ATTRv或ATTRm)、老年系统性淀粉样变性(SSA或ATTRwt)、AL淀粉样变性、AA(血清淀粉样蛋白A淀粉样变性)、由感染引起的炎症导致的AA淀粉样变性、风湿病、获得性或遗传性的自身炎症和自身免疫疾病、癌症或肿瘤、纤维蛋白原α链淀粉样变性、载脂蛋白A-1和A-2淀粉样变性、凝溶胶蛋白淀粉样变性、Ab2M(β2巨球蛋白)淀粉样变性、ALECT2(白细胞趋化因子2)淀粉样变性、AApoAIV(载脂蛋白AIV)淀粉样变性、AApoCII(载脂蛋白CII)淀粉样变性、AApoCIII(载脂蛋白CIII)淀粉样变性、ALys(溶菌酶)淀粉样变性。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用是局部施用于眼睛表面。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用不包括直接施用于眼内。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用不包括注射。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中使所述化合物与所述错误折叠或聚集的蛋白质接触，在被光激活时，引起可检测信号的发射。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述可检测信号是荧光信号。

10.根据权利要求3至9中任一项所述的方法，其中所述错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白是野生型的。

11.根据权利要求3至9中任一项所述的方法，其中所述错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白是突变的。

12.一种用于诊断系统性淀粉样变性的方法，所述方法包括向有需要的受试者的眼睛施用式I的化合物或其药学上可接受的盐，并检测错误折叠或聚集的转甲状腺素蛋白的存在或不存在：

其中

EDG是：

R¹取代或未取代的烷基、R¹取代或未取代的环烷基、R¹取代或未取代的杂烷基、R¹取代或未取代的杂环烷基、R¹取代或未取代的芳基、R¹取代或未取代的杂芳基、OR²NR⁴C(O)R³、-NR⁴R⁵、-SR⁶或PR⁷R⁸，

其中

R¹是卤素、-OR⁹、-NR¹⁰R¹¹、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R⁴和R⁵任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R⁹和R¹⁰独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R¹⁰和任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R¹²是卤素、-OR¹³、-NR¹⁴R¹⁵、R¹⁶取代或未取代的烷基、R¹⁶取代或未取代的杂烷基、R¹⁶取代或未取代的环烷基、R¹⁶取代或未取代的杂环烷基、R¹⁶取代或未取代的芳基或R¹⁶取代或未取代的杂芳基；

R¹³、R¹⁴和R¹⁵独立地为氢或未取代的烷基；并且

R¹⁶为未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

其中

πCE具有下式：

-L¹-(A¹)_q-L²-(A²)_r-L³-或-L¹-(A¹)_q-L⁴-A³-L²-(A²)_r-L³-，

其中

q和r独立地为0或1，其中q或r中的至少一者为1；

A¹、A²和A³独立地为R¹⁷取代或未取代的亚芳基或R¹⁷取代或未取代的杂亚芳基；

L¹、L²、L³和L⁴独立地为键或具有下式的连接基团：

其中x为1至50的整数；

R¹⁷为卤素、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为氢、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R²¹为卤素、-OR²²、-NR²³R²⁴、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²²、R²³和R²⁴独立地为氢或未取代的烷基；并且

其中

WSG为R²⁵取代或未取代的烷基、R²⁵取代或未取代的杂烷基、R²⁵取代或未取代的环烷基、R²⁵取代或未取代的杂环烷基、R²⁵取代或未取代的芳基、R²⁵取代或未取代的杂芳基；

其中

R²⁵为卤素、-OR²⁶、-NR²⁷R²⁸、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁶、R²⁷和R²⁸独立地为氢、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基，其中R²⁷和R²⁸任选地连接在一起形成R²⁹取代或未取代的杂环烷基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁹为卤素、-OR³⁰、-NR³¹R³²、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；并且

R³⁰、R³¹和R³²独立地为氢或未取代的烷基。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

14.根据权利要求12或权利要求13所述的方法，其中所述系统性淀粉样变性是家族性淀粉样多发性神经病(FAP)、ATTR淀粉样变性、TTR心脏淀粉样变性、TTR淀粉样蛋白心肌病(ATTR-CM)、家族性或遗传性ATTR淀粉样变性(ATTRv或ATTRm)、老年系统性淀粉样变性(SSA或ATTRwt)、AL淀粉样变性、AA(血清淀粉样蛋白A淀粉样变性)、由感染引起的炎症导致的AA淀粉样变性、风湿病、获得性或遗传性的自身炎症和自身免疫疾病、癌症或肿瘤、纤维蛋白原α链淀粉样变性、载脂蛋白A-1和A-2淀粉样变性、凝溶胶蛋白淀粉样变性、Ab2M(β2巨球蛋白)淀粉样变性、ALECT2(白细胞趋化因子2)淀粉样变性、AApoAIV(载脂蛋白AIV)淀粉样变性、AApoCII(载脂蛋白CII)淀粉样变性、AApoCIII(载脂蛋白CIII)淀粉样变性、ALys(溶菌酶)淀粉样变性。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中施用是局部的。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述化合物到达眼睛的结膜。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的方法，其中所述施用不包括施用于眼内。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用不包括注射。

19.一种用于对患者进行系统性淀粉样变性诊断的准备的方法，所述方法包括向所述患者的眼睛局部施用式I的化合物：

其中

EDG是：

R¹取代或未取代的烷基、R¹取代或未取代的环烷基、R¹取代或未取代的杂烷基、R¹取代或未取代的杂环烷基、R¹取代或未取代的芳基、R¹取代或未取代的杂芳基、OR²NR⁴C(O)R³、-NR⁴R⁵、-SR⁶或PR⁷R⁸，

其中

R¹是卤素、-OR⁹、-NR¹⁰R¹¹、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R⁴和R⁵任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R⁹和R¹⁰独立地为氢、R¹²取代或未取代的烷基、R¹²取代或未取代的杂烷基、R¹²取代或未取代的环烷基、R¹²取代或未取代的杂环烷基、R¹²取代或未取代的芳基或R¹²取代或未取代的杂芳基，其中R¹⁰和任选地连接在一起形成R¹²取代或未取代的杂环烷基或R¹²取代或未取代的杂芳基；

R¹²是卤素、-OR¹³、-NR¹⁴R¹⁵、R¹⁶取代或未取代的烷基、R¹⁶取代或未取代的杂烷基、R¹⁶取代或未取代的环烷基、R¹⁶取代或未取代的杂环烷基、R¹⁶取代或未取代的芳基或R¹⁶取代或未取代的杂芳基；

R¹³、R¹⁴和R¹⁵独立地为氢或未取代的烷基；并且

R¹⁶为未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

其中

πCE具有下式：

-L¹-(A¹)_q-L²-(A²)_r-L³-或-L¹-(A¹)_q-L⁴-A³-L²-(A²)_r-L³-，

其中

q和r独立地为0或1，其中q或r中的至少一者为1；

A¹、A²和A³独立地为R¹⁷取代或未取代的亚芳基或R¹⁷取代或未取代的杂亚芳基；

L¹、L²、L³和L⁴独立地为键或具有下式的连接基团：

其中x为1至50的整数；

R¹⁷为卤素、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为氢、R²¹取代或未取代的烷基、R²¹取代或未取代的杂烷基、R²¹取代或未取代的环烷基、R²¹取代或未取代的杂环烷基、R²¹取代或未取代的芳基或R²¹取代或未取代的杂芳基；

R²¹为卤素、-OR²²、-NR²³R²⁴、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；

R²²、R²³和R²⁴独立地为氢或未取代的烷基；并且

其中

WSG为R²⁵取代或未取代的烷基、R²⁵取代或未取代的杂烷基、R²⁵取代或未取代的环烷基、R²⁵取代或未取代的杂环烷基、R²⁵取代或未取代的芳基、R²⁵取代或未取代的杂芳基；

其中

R²⁵为卤素、-OR²⁶、-NR²⁷R²⁸、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁶、R²⁷和R²⁸独立地为氢、R²⁹取代或未取代的烷基、R²⁹取代或未取代的杂烷基、R²⁹取代或未取代的环烷基、R²⁹取代或未取代的杂环烷基、R²⁹取代或未取代的芳基或R²⁹取代或未取代的杂芳基，其中R²⁷和R²⁸任选地连接在一起形成R²⁹取代或未取代的杂环烷基或R²⁹取代或未取代的杂芳基；

R²⁹为卤素、-OR³⁰、-NR³¹R³²、未取代的烷基、未取代的杂烷基、未取代的环烷基、未取代的杂环烷基、未取代的芳基或未取代的杂芳基；并且

R³⁰、R³¹和R³²独立地为氢或未取代的烷基。

20.根据权利要求19所述的方法，还包括检测所述化合物与错误折叠或聚集的蛋白质的结合。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述错误折叠或聚集的蛋白质是转甲状腺素蛋白。

22.根据权利要求19所述的方法，其中将所述化合物递送至眼睛的结膜。