CN117241681A - 用于改善免疫应答的半乳寡糖 - Google Patents

Abstract

本发明涉及β1,3’‑半乳糖基乳糖用于改善食物污染物对适应性免疫应答的有害影响的用途，该适应性免疫应答是如疫苗接种应答或对病原体的应答。

Description

用于改善免疫应答的半乳寡糖

技术领域

本发明属于婴儿和/或学步儿营养领域。特别地，本发明涉及含有半乳寡糖的营养物，其用于在抵消食物毒素(如真菌毒素)对针对病原体或抗原的免疫应答的降低作用中使用。

背景技术

人和动物暴露于环境因素如食品添加剂、药物、工业化学品以及细菌和真菌代谢物(特别是在生命早期)会对健康产生不利影响。已知免疫系统对化学物质诱导的毒性最敏感。真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是一种非常普遍的食物污染物，已知会引起人和动物的免疫毒性。DON是由镰刀菌属(Fusarium)真菌物种产生的次级代谢产物，在全球范围内污染人类食物，尤其是谷物和谷类产品。急性和慢性DON暴露会对生长和食物消耗产生显著影响，并对肠道、神经和生殖系统产生负面影响。免疫系统对DON极为敏感，因为摄入极低水平即可诱导免疫调节作用。

人乳中含有人乳寡糖(HMO)，其为婴儿提供健康益处，如改善肠道微生物群、肠道屏障和先天粘膜免疫系统。不可消化的寡糖(如半乳寡糖(GOS)，其包含半乳糖基乳糖(GL)，如3’-GL、4’-GL和6’-GL，这些半乳糖基乳糖通过乳糖与另外的半乳糖残基的延伸形成，这形成了不同的半乳糖基乳糖)可具有与(HMO)相似的功能特性。通过反式糖基化生成的这些GL的组成很大程度上取决于所选择的酶源和技术。

WO 2020/229690显示，GOS/GL在体外对人肠上皮细胞具有抗炎特性，并且具有GL-特异性的改善肠道屏障作用。

WO 2013/172714披露了一种包含不可消化的寡糖的组合物，其用于在治疗、预防或减轻个体因暴露于单端孢霉烯族真菌毒素而导致的病症中使用，其中不可消化的寡糖具有2-10的聚合度(DP)。

WO 2016/013935披露了一种组合物，其用于在降低婴儿(其每天食用谷物或含谷物产品，并且与真菌毒素暴露相关的乳清蛋白过敏的风险增加)发生与真菌毒素暴露相关的乳清蛋白过敏的风险或用于预防该婴儿的与真菌毒素暴露相关的乳清蛋白过敏中使用，所述组合物包含不可消化的寡糖。WO 2016/013935未提及DON对针对病原体或疫苗或抗原的系统性和适应性免疫应答的任何影响。

Varasteh等人,JPGN[儿科胃肠病学与营养杂志]2019,第68卷,增刊1,第1049-1050页披露了针对暴露于DON的细胞培养物中β1,3’-半乳糖基乳糖对肠道屏障完整性的影响的研究。EP 2 440 073涉及包含β1,3半乳寡糖和β1,4和/或1,6半乳寡糖的组合的营养组合物，并证明了其对免疫系统的优异效果。US2017/209472涉及不可消化的寡糖用于为食物过敏风险增加的婴儿提供营养的用途。优选地，婴儿发生真菌毒素暴露的风险增加，例如因食用谷物。Akbari等人,J Nutr[营养学杂志]2015,第145卷,第1604-1613页涉及评估GOS对Caco-2细胞和小鼠中DON诱导的上皮功能障碍的影响的研究。US2015/164931披露了一种包含不可消化的寡糖(包括GOS)的组合物，用于治疗、预防或减轻真菌毒素暴露相关的病症。

发明内容

已知真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)会破坏肠道屏障并诱导免疫毒性。因此，在鼠流感疫苗接种模型中，研究了具有富含β3’-GL(β1,3’-半乳糖基乳糖)的反式半乳糖基寡糖(GOS)的饮食干预对DON诱导的免疫毒性的影响。小鼠接受含有DON、GOS或这两种的组合的饮食。

DON暴露减少了脾脏中的Tbet⁺Th1细胞，并在离体再刺激后诱导脾细胞IFN-γ分泌显著减少。在DON污染的饮食中添加GOS增加了Tbet⁺Th1细胞的频率和再刺激脾细胞的IFN-γ分泌，并因此防止接种疫苗的动物中DON诱导的1型免疫应答降低。此外，食用DON污染的饮食导致接种疫苗的小鼠脾脏中的B细胞频率显著下降，这对应于这些动物中疫苗特异性IgG产生减少。在DON暴露小鼠的饮食中添加GOS可使B细胞百分比恢复至对照组的值。

因此发现，补充包含β3’-GL的GOS可以恢复DON暴露小鼠脾脏中的B细胞并改善疫苗接种反应性。

具体实施方式

因此，本发明涉及用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的方法，该方法包括向该受试者施用半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。特别地，本发明的方法用于治疗性预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低。

本发明还可以表述为半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其用于在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

本发明还可以表述为半乳寡糖用于制造营养组合物以在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用的用途，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

如果预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低被认为不一定是治疗性的，则本发明还可以表述为用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的非治疗性方法，该非治疗性方法包括向该受试者施用半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

根据本发明，β1,3’-半乳糖基乳糖被视为用于实现预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的有效效果的活性组分。因此，可替代地，本发明可以表述为用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的方法，该方法包括向该受试者施用β1,3’-半乳糖基乳糖。

同样，本发明可以表述为β1,3’-半乳糖基乳糖，其用于在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用。

可替代地，本发明可以表述为β1,3’-半乳糖基乳糖用于制造营养组合物以在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用的用途。

如果预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低被认为不一定是治疗性的，则本发明还可以表述为用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的非治疗性方法，该非治疗性方法包括向该受试者施用β1,3’-半乳糖基乳糖。

食物污染物

真菌毒素是由霉菌和真菌产生的次级代谢产物，会污染谷物以及饲草、水果、饲料和食物产品以及环境(例如土壤、水和空气(通过气溶胶获得真菌毒素)等)。真菌毒素可能对人和动物健康产生危险影响。特别值得注意的是单端孢霉烯族真菌毒素，这是由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)物种产生的一类化合物。这一大家族的倍半萜环氧化物密切相关，并因基本化学结构的羟基化和取代的位置和数量而不同。由禾谷镰刀菌产生的主要单端孢霉烯是脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)，也称为呕吐毒素，因为其具有诱导呕吐的能力。以下中研究了DON对人肠上皮细胞营养吸收的影响：Maresca等人“The mycotoxindeoxynivalenol affects nutrient absorption in human intestinal epithelialcells[真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人肠上皮细胞营养吸收的影响]”J Nutr[营养学杂志].第132卷(2002)2723-2731，以及Avantaggiato等人“Evaluation of the intestinalabsorption of deoxynivalenol and nivalenol by an in vitro gastrointestinalmodel,and the binding efficacy of activated carbon and other absorbentmaterials[通过体外胃肠道模型的脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的肠吸收的评估，以及活性炭和其他材料的结合效力]”Food and Chemical Toxicology[食品与化学毒理学]第42卷(2004)817-824。

真菌毒素可能因植物产品(例如饲草、谷物、植物蛋白、加工谷物副产品、粗饲料和糖蜜产品)的真菌感染而出现在食物链中，并且可被人类直接食用或通过污染的谷物、牲畜或其他动物饲料引入。由于DON经常以毒理学相关浓度出现在谷类和谷物中，因此对于食用包含谷类和/或谷物的饮食的所有人和动物来说，DON可以说是一个真正的问题。这是针对婴儿特别关注的问题，考虑到这一点，食品污染物法典委员会(CCCF)一直致力于规定生谷物(如小麦和大麦)和婴儿配方乳粉中仍被认为可接受的脱氧雪腐镰刀菌烯醇水平的最大限值。食用DON污染的饮食的哺乳期母亲产生的乳汁中也可能存在DON。

现已发现，在食用DON污染的饮食后，观察到接种疫苗的小鼠脾脏中B细胞的频率显著下降。B细胞频率下降与疫苗特异性IgG产生减少相对应。向DON暴露小鼠的饮食中添加包含β1,3’-半乳糖基乳糖的GOS使B细胞百分比恢复。饮食中的DON污染也会诱导接种疫苗的小鼠脾脏中的Tbet⁺Th1细胞减少。向饮食中添加包含β1,3'-半乳糖基乳糖的GOS使DON暴露小鼠脾脏中的Tbet⁺Th1细胞百分比增加，并使IFN-γ产生恢复。因此，使用包含β1,3’-半乳糖基乳糖的GOS减轻了DON对系统性适应性免疫应答的不良影响。

β1,3’-半乳糖基乳糖

本发明涉及β1,3’-半乳糖基乳糖(本文也称为β3’-GL)，其用于在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用。此β1,3’-半乳糖基乳糖可以以原样、在合适的基质中或在营养组合物中施用。例如，β1,3’-半乳糖基乳糖可以是半乳寡糖(GOS)(优选地β-半乳寡糖(βGOS))混合物的一部分。β1,3’-半乳糖基乳糖是Gal-(β1,3)-Gal-(β1,4)-Glc，其中Gal代表半乳糖，Glc代表葡萄糖。

在优选的实施例中，β1,3’-半乳糖基乳糖原样使用。在另一个优选的实施例中，β1,3’-半乳糖基乳糖存在于营养组合物中。在一个实施例中，本发明涉及半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其用于在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖作为活性成分。

根据本发明使用的包含β1,3’-半乳糖基乳糖的营养组合物或包含含有β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖的营养组合物在本文中也称为本发明的营养组合物，或者根据本发明的营养组合物或最终营养组合物。根据本发明的营养组合物不是人乳。

如上所述，β1,3’-半乳糖基乳糖可以是半乳寡糖(GOS)(优选地β-半乳寡糖(βGOS))混合物的一部分。

形成GOS的合适方法是用β-半乳糖苷酶处理乳糖。根据所用酶的特异性，半乳糖单元从乳糖中水解出来并通过β-键与另一个乳糖单元偶联，形成三糖。半乳糖单元还可以与另一单个半乳糖单元偶联，形成二糖。随后半乳糖单元偶联，形成寡糖。大多数这样形成的寡糖具有7或更低的聚合度(DP)。根据酶的不同，半乳糖残基之间的这些键可能主要是β1,4’、β1,6’或β1,3’。

产生β1,3’-半乳糖基乳糖的合适方法是使用来自嗜热链球菌(S.Thermophilus)的β-半乳糖苷酶。特别适合的是使用如FR2723960的实例4或EP 0778885的实例6中披露的过程中的来自菌株CNCM I-1470和/或CNCM I-1620的β-半乳糖苷酶。嗜热链球菌CNCM I-1620由达能日尔维公司(Compagnie Gervais Danone)于1995年8月23日根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物菌种保藏中心(CollectionNationalede Cultures de Microorganisms van Institute Pasteu)。嗜热链球菌菌株CNCM I-1620也称为嗜热链球菌菌株ST065。嗜热链球菌CNCM I-1470由达能日尔维公司于1994年8月25日根据布达佩斯条约保藏在法国巴黎巴斯德研究所国家微生物菌种保藏中心。两种菌株也已发表于WO 96/06924中。LeForestier等人,2009Eur J Nutr[欧洲营养杂志],48:457-464以及WO 2020/229690的实例3中也更详细地描述了此GOS的组成。基于总半乳寡糖(不包括乳糖、半乳糖和葡萄糖)，此GOS制剂中β1,3’-半乳糖基乳糖的量在60-65wt％范围内。另一种优选的β1,3’-半乳糖基乳糖来源是可商购的富含β1,3和β1,6半乳寡糖的GOS，包括来自Clasado公司的Bimuno或来自GTC Nutrition公司的Purimune。如本领域已知的，可以例如通过尺寸排阻色谱法从这些GOS混合物中富集或纯化β1,6’-和β1,3’-半乳糖基乳糖。可替代地，可商购纯β1,3'-半乳糖基乳糖(卡博森斯有限公司(CarbosynthLtd)，英国康普顿)。

GOS(包括βGOS)是不可消化的。人消化酶(包括人乳糖酶)不能水解GOS。因此，GOS在食用后可完整地到达大肠，并可被肠道微生物群发酵。

优选地，根据本发明的营养组合物包含至少250mg GOS/100ml、更优选地至少400甚至更优选地至少600mg/100ml。优选地，该组合物每100ml包含不超过2500mg的GOS、优选地不超过1500mg、更优选地不超过1000mg。更优选地，根据本发明的营养组合物包含250至2500mg/100ml的量、甚至更优选地400至1500mg/100ml的量、甚至更优选地600至1000mg/100ml的量的GOS。

在优选的实施例中，根据本发明使用的包含半乳寡糖的营养组合物包含至少1wt％半乳寡糖(基于营养组合物的干重)。优选地，根据本发明的营养组合物包含至少1.75wt.％的GOS(基于营养组合物的干重)、更优选地至少2.8wt.％、甚至更优选地至少4.2wt.％(全部基于营养组合物的干重)。优选地，营养组合物包含不超过17.5wt.％的GOS(基于营养组合物的干重)、更优选地不超过10.5wt.％、甚至更优选地不超过7wt％。根据本发明的营养组合物优选地包含1.75至17.5wt.％的量、更优选地2.8至10.5wt.％的量、最优选地4.2至7wt.％的量的GOS(全部基于营养组合物的干重)。

优选地，根据本发明的营养组合物包含至少0.35g GOS/100kcal，更优选地至少0.6g、甚至更优选地至少0.8g/100kcal。优选地，组合物包含不超过3.7g GOS/100kcal、优选地不超过2.5g/100kcal、更优选地不超过1.5g/100kcal。更优选地，根据本发明的营养组合物包含0.35至3.7g/100kcal的量、甚至更优选地0.6至2.5g/100ml的量、甚至更优选地0.8至1.5g/100ml的量的GOS。较少量导致组合物的效果较差，而存在太大量的GOS可能会导致副作用，如渗透紊乱、腹痛、腹胀(bloating)、气体形成和/或肠胃气胀。

在优选的实施例中，根据本发明使用的包含半乳寡糖的营养组合物包含至少20％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于半乳寡糖总重量)，优选地包含半乳寡糖的营养组合物包含至少25％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于半乳寡糖总重量)。

除了特定的β1,3’-半乳糖基乳糖外，在本发明的营养组合物中存在一般的GOS是有利的。具有不同大小和不同键的GOS的混合物将对微生物群产生增加的有益作用，并改善短链脂肪酸的生产，从而进一步改善对免疫功能的有益作用。

本发明的营养组合物定义的GOS的总量包括β1,3’-半乳糖基乳糖的量。

在优选的实施例中，根据本发明的营养组合物包含0.25至2.5g半乳寡糖/100ml，其中10mg至500mg/100ml半乳寡糖是β1,3’-半乳糖基乳糖。在另一个优选的实施例中，根据本发明的营养组合物包含0.25至2.5g半乳寡糖/100ml，其中β1,3’-半乳糖基乳糖的量大于20wt％(基于总半乳寡糖)、优选地大于25wt％(基于总半乳寡糖)。在另一个优选的实施例中，根据本发明的营养组合物包含0.25至2.5g半乳寡糖/100ml，其中β1,3’-半乳糖基乳糖的量的范围为10-500mg/100ml。在另一个优选的实施例中，根据本发明的营养组合物包含0.25至2.5g半乳寡糖/100ml，其中β1,3’-半乳糖基乳糖的量大于20wt％(基于总半乳寡糖)、优选地大于25wt％(基于总半乳寡糖)，并且其中β1,3’-半乳糖基乳糖的量在150mg与250mg/100ml之间。

在优选的实施例中，根据本发明的营养组合物包含0.07至3.75wt.％、更优选地0.1至2wt.％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于营养组合物的干重)。在优选的实施例中，营养组合物包含0.07至0.375wt％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于营养组合物的干重)。在另一个优选的实施例中，营养组合物包含1.125至1.725wt％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于营养组合物的干重)。

根据本发明的营养组合物优选地包含15至750mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100kcal营养组合物。在优选的实施例中，营养组合物包含15至75mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100kcal营养组合物。在另一个优选的实施例中，营养组合物包含225至375mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100kcal营养组合物。

根据本发明的营养组合物优选地包含10至500mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100ml营养组合物。在优选的实施例中，营养组合物包含10至75mg、优选地10至50mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100ml营养组合物。在另一个优选的实施例中，营养组合物包含150至250mgβ1,3’-半乳糖基乳糖/100ml营养组合物。

当β1,3’-半乳糖基乳糖原样使用时以及当其存在于营养组合物中时，优选地β1,3’-半乳糖基乳糖以至少0.075g、优选地至少0.10g或0.15g的日剂量施用。优选地，最大日剂量为6g，优选地1.5g、1.3g或0.5g。优选地，β1,3’-半乳糖基乳糖以0.1至1.3g、更优选地0.1g至0.5g的日剂量施用。

优选地，根据本发明的营养组合物包含0.07至3.75wt％、更优选地0.1至2wt.％β1,3’-半乳糖基乳糖(基于营养组合物的干重)，并且β1,3’-半乳糖基乳糖以0.10至6g的日剂量施用。优选地，β1,3’-半乳糖基乳糖以0.1至1.3g、更优选地0.1至0.5g的日剂量施用。

优选地，根据本发明的营养组合物还包含果寡糖(FOS)，如下文更详细描述的。

优选地，根据本发明的营养组合物进一步包含蛋白质源、脂类源以及可消化的碳水化合物源，如下文更详细描述的。

当β1,3’-半乳糖基乳糖存在于营养组合物中时，在优选的实施例中，营养组合物是婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。

营养组合物

优选地，β1,3’-半乳糖基乳糖存在于营养组合物中。根据本发明的营养组合物不是人乳。根据本发明的营养组合物不是天然乳，例如牛乳。营养组合物优选地是合成营养组合物。

本发明的营养组合物优选地肠内施用，更优选地口服施用。

本发明的营养组合物优选地是婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。幼儿配方乳粉的实例是学步儿乳、学步儿配方乳粉和成长乳。更优选地，营养组合物是较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。婴儿配方乳粉被定为用于婴儿的配方乳粉，例如可以是适用于0至6个月或0至4个月大的婴儿的起始配方乳粉。较大婴儿配方乳粉适用于4或6个月至12个月大的婴儿。在这个年龄段，婴儿开始断奶吃其他食物。幼儿配方乳粉、或学步儿童或成长乳或配方乳粉适用于12个月以上大(优选地最大36个月大)的儿童。优选地，本发明的营养组合物是较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。

本发明的营养组合物优选地包含脂质、蛋白质和碳水化合物并且优选地以液体形式施用。本发明的营养组合物也可以呈干食品形式，优选地呈粉末形式，其附有将所述干食品(优选地粉末)与适合的液体(优选的水)混合的说明书。因此，本发明的营养组合物可以呈粉末形式，适合用水复溶，以提供即饮营养组合物，优选地即饮婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉，更优选地即饮较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。根据本发明的营养组合物优选地包含其他部分，如维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素，以使其成为完整的营养组合物。优选地，根据国际指令，婴儿配方乳粉包含维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。

本发明的营养组合物优选地包含脂质、蛋白质和可消化的碳水化合物，其中脂质占总热量的25％至65％，蛋白质占总热量的6.5％至16％，并且可消化的碳水化合物占总热量的20％至80％。优选地，在本发明的营养组合物中，脂质占总热量的30％至55％，蛋白质占总热量的7％至9％，并且可消化的碳水化合物占总热量的35％至60％。在计算蛋白质的总热量的％时，需要考虑蛋白质、肽和氨基酸提供的能量总量。

优选地，脂质提供3至7g脂质/100kcal、优选地3.5至6g/100kcal营养组合物，蛋白质提供1.6至4g/100kcal、优选地1.7至2.3g/100kcal营养组合物，并且可消化的碳水化合物提供5至20g/100kcal、优选地8至15g/100kcal营养组合物。优选地，本发明的营养组合物包含提供3.5至6g/100kcal营养组合物的脂质、提供1.7至2.3g/100kcal营养组合物的蛋白质以及提供8至15g/100kcal营养组合物的可消化的碳水化合物。

优选地，脂质提供2.5至6.5g脂质/100ml、优选地2.5至4g/100ml营养组合物，蛋白质提供1至3g/100ml、优选地1至1.5g/100ml营养组合物，并且可消化的碳水化合物提供3至13g/100ml、优选地5至10g/100ml营养组合物。优选地，本发明的营养组合物包含提供2.0至6.5g/100ml营养组合物的脂质、提供1至3g/100ml营养组合物的蛋白质以及提供5至10g/100ml营养组合物的可消化的碳水化合物。

优选地，脂质占15至45wt.％、优选地20至30wt.％(基于组合物的干重)，蛋白质占8至20wt.％、优选地8.5至11.5wt.％(基于组合物的干重)，并且可消化的碳水化合物占25至90wt.％、优选地40至75wt.％(基于组合物的干重)。优选地，本发明的营养组合物包含占20至30wt.％的脂质、占8.5至11.5wt.％的蛋白质以及占40至75wt.％的可消化的碳水化合物(全部基于组合物的干重)。

本发明的组合物优选地包含脂质。优选地，本发明的组合物包含选自由植物脂质组成的组的至少一种脂质。优选地，本发明的组合物包含植物脂质和至少一种选自由以下组成的组的油的组合：鱼油、藻油(algae oil)、真菌油和细菌油。优选地，脂质包含必需脂肪酸α-亚麻酸(ALA)、亚油酸(LA)和/或长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。LC-PUFA、LA和/或ALA可以以游离脂肪酸、甘油三酯形式、甘油二酯形式、甘油单酯形式、磷脂形式或以上中的一种或多种的混合物提供。优选地，本发明的营养组合物包含选自由以下组成的组的至少一种、优选地至少两种脂质来源：菜籽油(rape seed oil)(如菜籽油(colza oil)、低芥酸菜籽油和油菜籽油)、高油酸葵花籽油、高油酸红花油、橄榄油、海洋油(marine oil)、微生物油、椰子油、棕榈仁油。

本发明的营养组合物优选地包含长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。LC-PUFA是长度为20至24个碳原子、优选地20或22个碳原子的脂肪酸或脂肪酰基链，其包含两个或更多个不饱和键。优选地，组合物包含n3-LCPUFA。优选地至少一种(优选地两种)LC-PUFA选自二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)。这些n3-LC-PUFA被认为支持免疫功能，并且因此可以特别有利地与β1,3’-半乳糖基乳糖组合，以支持预防或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低。这种组合具有意想不到的有利效果，并且优选地协同作用。LC-PUFA可以以游离脂肪酸、甘油三酯形式、甘油二酯形式、甘油单酯形式、磷脂形式或以上中的一种或多种的混合物提供。这些LC-PUFA的合适来源是例如鱼油和来自高山被孢霉(Mortierellaalpina)的油。

本发明的营养组合物中LC-PUFA的优选含量不超过总脂肪酸的15wt.％、优选地不超过10wt.％、甚至更优选地不超过5wt.％。优选地，本发明的组合物包含总脂肪酸的至少0.2wt.％、优选地至少0.25wt.％、更优选至少0.35wt.％、甚至更优选地至少0.5wt.％的LC-PUFA，更优选地DHA。

本发明的营养组合物优选地包含蛋白质。营养组合物中使用的蛋白质优选地选自由以下组成的组：非人动物蛋白，优选地乳蛋白、植物蛋白，如优选地大豆蛋白和/或大米蛋白，及其混合物。本发明的营养组合物优选地包含酪蛋白和/或乳清蛋白，更优选地牛乳清蛋白和/或牛酪蛋白。因此，在一个实施例中，本发明的营养组合物中的蛋白质包含选自由以下组成的组的蛋白质：乳清蛋白和酪蛋白，优选地乳清蛋白和酪蛋白，优选地乳清蛋白和/或酪蛋白来自牛乳。优选地，蛋白质包含小于5wt.％(基于总蛋白质)的游离氨基酸、二肽、三肽或水解的蛋白质。本发明的营养组合物优选地包含酪蛋白和乳清蛋白，酪蛋白:乳清蛋白的重量比为10:90至90:10、更优选地20:80至80:20、甚至更优选地35:65至55:45。

本发明的营养组合物的基于干重的蛋白质wt％根据凯氏定氮法，通过测量总氮并使用6.38的换算系数(在酪蛋白的情况下)或6.25的换算系数(对于酪蛋白以外的其他蛋白质)来计算。如本发明中使用的，术语‘蛋白质’或‘蛋白质组分’是指蛋白质、肽和游离氨基酸的总和。

本发明的营养组合物优选地包含可消化的碳水化合物。优选的可消化的碳水化合物是乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉和麦芽糖糊精。乳糖是人乳中存在的主要可消化的碳水化合物。本发明的营养组合物优选地包含乳糖。优选地，本发明的营养组合物不包含大量除乳糖之外的碳水化合物。与具有高血糖指数的可消化的碳水化合物(如麦芽糖糊精、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和其他可消化的碳水化合物)相比，乳糖的血糖指数较低，因此是优选的。本发明的营养组合物优选地包含可消化的碳水化合物，其中至少35wt％、更优选地至少50wt％、更优选地至少60wt％、更优选地至少75wt％、甚至更优选地至少90wt％、最优选地至少95wt％的可消化的碳水化合物是乳糖。基于干重，本发明的营养组合物优选地包含至少25wt％乳糖、优选地至少40wt％、更优选地至少50wt％乳糖。

本发明的营养组合物优选地包含不可消化的寡糖(NDO)。如本文所用的，术语“寡糖”是指聚合度(DP)为2至250，优选地DP为2至100、更优选地2至60、甚至更优选地2至10的糖。如果本发明的营养组合物中包含DP为2至100的寡糖，则这导致组合物可能含有DP为2至5、DP为50至70和/或DP为7至60的寡糖。如本发明中使用的，术语“不可消化的寡糖”(NDO)是指在人上消化道(例如，小肠和胃)中存在的酸或消化酶的作用下在肠道中不被消化但优选地由人肠道微生物群发酵的寡糖。例如，蔗糖、乳糖、麦芽糖和麦芽糖糊精被认为是可消化的。

优选地，本发明的不可消化的寡糖是可溶性的。如本文所用的，当涉及多糖、纤维或寡糖时，术语“可溶的”意指根据L.Prosky等人,J.Assoc.Off.Anal.Chem.[官方分析化学家协会杂志]71,1017-1023(1988)描述的方法，该物质至少是可溶的。

β1,3’-半乳糖基乳糖被认为是不可消化的寡糖，更特别地不可消化的半乳寡糖。如上所述，β1,3’-半乳糖基乳糖可以原样或作为半乳寡糖(GOS)(优选地β-半乳寡糖(BGOS))混合物的一部分存在于根据本发明的营养组合物中。在优选的实施例中，β1,3’-半乳糖基乳糖作为半乳寡糖混合物的一部分存在。

上文更详细地描述了半乳寡糖以及包含半乳寡糖的本发明的营养组合物的优选的实施例。

优选地，本发明的营养组合物还包含果寡糖(FOS)。如本发明中使用的，术语“果寡糖”是指由超过50％(优选地超过65％)果糖单元(基于单体亚单元)组成的碳水化合物，其中至少50％、更优选地至少75％、甚至更优选地至少90％的果糖单元通过β-糖苷键、优选地β-2,1糖苷键连接在一起。葡萄糖单元可以存在于果糖单元链的还原端。优选地，果寡糖的DP或平均DP的范围为2至250、更优选地2至100、甚至更优选地10至60。术语“果寡糖”包含左聚糖(levan)、水解的左聚糖、菊糖、水解的菊糖和合成果寡糖。优选地，制剂包含平均DP大于20的长链果寡糖。适合在本发明的组合物中使用的果寡糖也容易商购获得，例如RaftilineHP(Orafti)。优选地，根据本发明的营养组合物包含至少25mg FOS/100ml、更优选地至少40甚至更优选地至少60mg。优选地，组合物包含不超过250mg FOS/100ml、更优选地不超过150mg/100ml、并且最优选地不超过100mg/100ml。FOS的量为优选地25至250g果寡糖/100ml、优选地40至150g/100ml、更优选地60至100g/100ml。优选地，根据本发明的营养组合物包含至少0.15wt.％FOS(基于干重)、更优选地至少0.25wt.％、甚至更优选地至少0.4wt.％。优选地，组合物包含不超过1.5wt.％FOS(基于总组合物的干重)、更优选地不超过2wt.％。FOS的存在显示对微生物群及其SCFA产生的进一步改善的影响。DP或平均DP在10至60的范围内的果寡糖的存在进一步改善了疫苗接种应答。据信，DP或平均DP在10至60的范围内的果寡糖与β1,3’-半乳糖基乳糖在改善疫苗接种应答方面协同作用。

优选地，本发明的营养组合物包含半乳寡糖(包括β1,3’-半乳糖基乳糖)和果寡糖的混合物。优选地，半乳寡糖和果寡糖的混合物以1/99至99/1、更优选地1/19至19/1、更优选地1/1至19/1、更优选地2/1至15/1、更优选地5/1至12/1、甚至更优选地8/1至10/1的重量比、甚至更优选地约9/1的比率存在。当半乳寡糖具有较低的平均DP且果寡糖具有相对高的DP时，此重量比特别有利。最优选的是平均DP低于10、优选地低于6的半乳寡糖和平均DP高于7、优选地高于11、甚至更优选地高于20的果寡糖的混合物。

本发明的营养组合物优选地包含1.75至17.5wt％的总不可消化的寡糖、更优选地2.8至10.5wt％、最优选地4.2至7wt％(基于营养组合物的干重)。基于100ml，本发明的营养组合物优选地包含0.25至2.5g总不可消化的寡糖、更优选地0.4至1.5g、最优选地0.6至1g(基于100ml的营养组合物)。较少量的不可消化的寡糖在改善肠道屏障功能方面效果较差，而太大量将导致腹胀和腹部不适的副作用。不可消化的寡糖的总量包括半乳寡糖(包括β1,3’-半乳糖基乳糖)、果寡糖和可能进一步存在于组合物中的任何另外的不可消化的寡糖。

同样重要的是，根据本发明的营养组合物不具有过高的热量密度，但仍提供足够的热量来喂养受试者。因此，液体食品的热量密度优选地在0.1与2.5kcal/ml之间、更优选地热量密度在0.5与1.5kcal/ml之间、甚至更优选地在0.6与0.8kcal/ml之间、并且最优选地在0.65与0.7kcal/ml之间。

根据本发明的婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉用于为婴儿或幼儿，优选地婴儿提供营养。

应用

发现包含β1,3'-半乳糖基乳糖的半乳寡糖出乎意料地能够减轻脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对系统适应性免疫应答的不良影响。因此，包含β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖或包含含有β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖的营养组合物可用于预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低。

因此，本发明涉及半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其用于在预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。换言之，本发明涉及用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的方法，该方法包括向该受试者施用半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

更特别地，发现包含β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖出乎意料地能够防止由于存在污染物DON而导致的B细胞减少。因此，在根据本发明的一个实施例中，适应性免疫应答是由B细胞介导的免疫应答。在根据本发明的一个实施例中，适应性免疫应答是对病原体的免疫应答。在一个实施例中，病原体是病毒。在根据本发明的一个实施例中，适应性免疫应答是对病毒的免疫应答。

更特别地，还发现包含β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖出乎意料地能够防止由于存在污染物DON而导致的脾脏中的Tbet⁺Th1细胞减少，并且包含β1,3’-半乳糖基乳糖的半乳寡糖出乎意料地能够防止DON诱导的IFN-γ产生减少。因此，在根据本发明的一个实施例中，适应性免疫应答是对抗原的免疫应答，更优选地适应性免疫应答是对疫苗接种的免疫应答。在根据本发明的一个实施例中，适应性免疫应答是对源自病毒的抗原的免疫应答。换言之，根据本发明，适应性免疫应答是针对病毒的免疫应答。

在根据本发明的优选的实施例中，适应性免疫应答的降低是由真菌毒素诱导的。在优选的实施例中，真菌毒素是脱氧雪腐镰刀菌烯醇。在根据本发明的优选的实施例中，适应性免疫应答的降低是由脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的。

在根据本发明的优选的实施例中，将半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物施用于婴儿或幼儿，优选地断奶婴儿或幼儿。在本发明的上下文中，婴儿被定义为年龄为0至12个月的人，并且幼儿被定义为年龄为13至36个月的人。断奶通常在婴儿约4至6个月时开始。这样的婴儿和幼儿的免疫系统特别容易受到食物污染物的影响，因为适应性免疫系统仍在发育中，且食物污染物的水平具有更大的影响，因为婴儿和幼儿的体重较低并且与成人相比，基于体重的日剂量将较高。因此，尤其是婴儿和幼儿将受益于本发明。

在根据本发明的优选的实施例中，将半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物与谷物或含谷物产品一起施用或食用，或在食用谷物或含谷物产品之前或之后不久施用或食用。之前或之后不久意指优选地4小时的时间段，因此本发明的营养组合物优选地在食用谷物之前4小时或更短时间食用，或在食用谷物或含谷物产品之后4小时或更短时间食用。优选地，本发明的营养组合物在食用谷物或含谷物产品之前2小时或更短时间食用，或在食用谷物或含谷物产品之后2小时或更短时间食用。优选地，本发明的营养组合物在食用谷物或含谷物产品之前1小时或更短时间食用，或在食用谷物或含谷物产品之后1小时或更短时间食用。

在优选的实施例中，根据本发明使用的营养组合物是婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉，优选地较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。幼儿配方乳粉是适用于年龄为12至36个月以上的儿童的营养品。较大婴儿配方乳粉是适用于开始断奶至12个月的婴儿的营养品。在优选的实施例中，根据本发明的方法或用途用于健康婴儿。

在另外优选的实施例中，根据本发明使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物用于暴露于食物污染物的受试者，更优选地暴露于食物污染物的婴儿或幼儿。在又另外优选的实施例中，根据本发明的方法或用途用于食用谷物或含谷物产品的受试者。在另外优选的实施例中，根据本发明的方法或用途用于食用谷物的婴儿或用于食用谷物或含谷物产品的幼儿。

在本发明的上下文中，术语“预防”意指“降低风险”或“降低严重程度”。

在本文件及其权利要求中，动词“包含”及其变体以其非限制性意义使用以表示包括该词之后的项，但不排除未特别提及的项。另外，通过不定冠词“一个/一种”(“a”或“an”)指代要素并不排除存在多于一个/一种要素的可能性，除非上下文明确要求存在一个/一种并且仅一个/一种要素。因此，不定冠词“一个/一种”(“a”或“an”)通常意指“至少一个/一种”。

实例

实例1：包含β3’-GL的半乳寡糖(GOS)的产生

使用嗜热链球菌ST065(CNCM I-1620)β-半乳糖苷酶制备包含β3’-GL的GOS，然后通过冷冻干燥获得寡糖。干粉含有β3’-GL(22g/100g)、乳糖(45.5g/100g)、葡萄糖(15.6g/100g)、半乳糖(5.1g/100g)和其他寡糖(11.7g/100g)。这主要包括二糖、三糖和四糖。在FR2723960的实例4中给出了关于GOS产生和组成的更多细节。

表1：GOS粉末的组成。

实例2：富含β3’-GL的饮食GOS改善DON暴露小鼠的疫苗特异性细胞和体液应答，并 且增加Th1细胞活化并减弱DON诱导的改变(脾脏T细胞群中)。

材料与方法：

6周龄雌性C57Bl/6JOlaHsd小鼠购自Envigo公司(荷兰霍斯特)。到达后，将小鼠在无特定病原体(SPF)条件下常规饲养，其中光照/黑暗周期为12h/12h(7.00am-7.00pm光照)，控制相对湿度(相对湿度为50％-55％)和温度(21℃±2℃)，可随意获取食物和自来水。在乌得勒支大学的动物设施中，将动物随机分组为每笼3只小鼠，置于具有木屑垫料(Tecnilab-BMI公司，荷兰索默伦)的顶部有过滤器的模克隆笼(makrolon cage)(22cm×16cm×14cm，占地面积350cm2，Tecnilab-BMI公司，荷兰索默伦)中，并提供纸巾(VWR公司，荷兰)作为笼丰容。实验开始前，动物在到达动物设施后接受标准饮食(颗粒食物，AIN-93G，Ssniff 公司，德国索斯特)和常规护理一周。本研究按照乌得勒支大学动物伦理委员会制定的实验动物护理和使用机构指南进行，并且与研究目的相关的所有动物程序均经国家主管部门许可批准，确保完全符合针对用于科学目的的动物使用的欧盟指令2010/63/EU。

半纯化的基于AIN-93G大豆蛋白的饮食由不同浓度的DON(FERMENTEK公司(FERMENTEK Ltd)，以色列耶路撒冷)和/或实例1的包含β3’-GL的GOS(Ssniff公司(Ssniff/>GmbH)，德国索斯特)组成和混合。

适应一周后，将动物随机分为4组(每组n＝9)并接受对照或修改的饮食。形成10个饮食组：

1)用PBS疫苗接种并接受标准啮齿动物饲料(AIN93G)的假接种组(n＝3)，

2)接种疫苗并接受标准啮齿动物饲料的对照组(n＝9)，

3)接种疫苗并接受具有12.5mg/kg饮食的DON的标准啮齿动物饲料的组(n＝9)

4)接种疫苗并接受具有12.5mg/kg饮食的DON和1wt％GOS粉末的标准啮齿动物饲料的组(n＝9)。

开始饮食后2周，使用2015/2016季的Influvac(雅培生物制品有限公司(AbbottBiologicals B.V.)，荷兰韦斯普)进行疫苗接种，如先前所述(Xiao等人，2018，FrontImmunol[免疫学前沿]9：第452篇，https：//doi.org/10.3389/fimmu.2018.00452)。小鼠通过皮下注射100μl未稀释的Influvac(含有三种流感粘液病毒株的血凝素(HA)和神经氨酸酶抗原，剂量相当于每株30μg/mL HA，总计90μg/ml HA)进行初次和加强疫苗接种。在初次疫苗接种后21天进行加强疫苗接种。接受100μl PBS而不是疫苗注射的假接种组(n＝3，阴性对照)用于证明疫苗诱导应答的特异性。

在开始饮食之前(第-14天)和加强疫苗接种之前(第21天)对动物进行称重。使用以下公式计算重量增量：

(第21天的重量)-(第-14天的重量)＝重量增量(g)

实验结束时在麻醉下通过眼眶抽取收集血液，然后通过颈椎脱臼处死动物。将血样离心(10,000rpm，10min)以收集血清，并在-20℃下储存直至分析。为了确定疫苗特异性抗体的血清浓度，进行了酶联免疫吸附测定(ELISA)。将血清样本在预先涂覆PBS中1∶100稀释的Influvac的96孔板(Costar EIA/RIA板，荷兰莱茵河畔阿尔芬)中孵育。最终稀释度为1:2000和1:8000的血清样本分别用于IgG1和IgG2a测量，并添加含有疫苗特异性抗体的合并血清连续稀释液，以用于标准曲线计算。为了封闭非特异性结合，在室温下将板用PBS中的2％BSA(西格玛公司(Sigma)，荷兰兹韦恩德雷赫特)孵育1h。抗IgG1-生物素和抗IgG2a-生物素(贝迪公司(Becton Dickinson)，荷兰海尔许霍瓦德)抗体在稀释缓冲液(含0.5％BSA和0.1％吐温的PBS)中以1:1000稀释。随后将板用以1:20000稀释的链霉亲和素-HRP(Biosource公司，荷兰埃滕-勒尔)孵育，并用Benchmark酶标仪(伯乐公司(BioRad)，美国加利福尼亚州赫拉克勒斯)在490nm波长下测量光密度。相对于标准曲线，计算测试血清中的浓度(任意单位(AU))。

通过在冰上通过70μm的细胞筛网粉碎组织，来从脾脏中分离出新鲜的脾细胞。通过在裂解缓冲液(8.3g NH4Cl、1g KHC3O和37.2mg EDTA，溶于1L除盐水(demi water)中并过滤除菌)中孵育去除红细胞后，对脾细胞计数并将其重悬于含有10％胎牛血清和青霉素(100U/mL)/链霉素(100μg/mL)的RPMI 1640培养基中，以使浓度达到10⁷个细胞/ml。将细胞在PBS/1％ BSA中洗涤，并与抗小鼠CD16/CD32(在PBS/5％ BSA中以1:100稀释；Mouse BDFc Block，BD Pharmingen公司，美国加利福尼亚州圣何塞)一起孵育，以封闭非特异性结合位点。对于表面染色，将细胞在室温下与CD4-Brilliant Violet510、CCR6-PE(生物传奇公司(BioLegend)，美国加利福尼亚州圣地亚哥)、CD69-PE-Cy7、CXCR3-PE、CD25-PerCP-Cy5.5(eBiosciences公司，赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)，美国加利福尼亚州圣地亚哥)、T1ST2-FITC(MD Biosciences公司，美国明尼苏达州圣保罗)孵育1h。用可固定活力染料780(eBioscience公司)区分活细胞。为了检测细胞内转录因子，将细胞首先根据制造商的方案，用Foxp3染色缓冲液组(eBioscience公司)进行固定和渗透，然后用Foxp3-FITC(eBioscience公司)和RorγT-Alexafluor 647(BD Pharmingen公司，美国加利福尼亚州圣何塞)抗体染色。使用BD FACSCanto II流式细胞仪(贝迪公司，美国新泽西州富兰克林湖)收集结果，并用FlowLogic软件(Inivai Technologies公司，澳大利亚维多利亚州曼通)分析。

从健康的11周龄C57BL/6JOlaHsd小鼠的股骨和胫骨分离骨髓细胞。将收集的细胞在补充有10％ FBS和100U/mL青霉素/链霉素、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠和伊格尔最低必需培养基(MEM)非必需氨基酸(全部来自吉布科生命技术公司(Gibco Life Technologies))的RPMI 1640培养基(吉布科公司)(存在10ng/mL GM-CSF(Prosepec公司，荷兰))中培养6天，以获得未成熟的BMDC(iDC)。然后使诱导的iDC以0.9μg/mL的浓度加载Influvac疫苗，并在37℃、5％ CO2下孵育24h，以获得成熟的DC。用培养基处理的iDC用作阴性对照。将从接种疫苗的小鼠中收集的脾细胞与成熟的DC以10:1的比率，在96孔U形底培养板中，在37℃、5％CO2下(补充RPMI 1640培养基(吉布科公司))共培养5天。

在第5天收集细胞培养上清液，并将其在-20℃下储存直至使用，并按照制造商的说明使用ProcartaPlex多重蛋白检测试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，赛默飞世尔科技公司，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)分析白细胞介素(IL)-4、IL-6、IL-10、IL-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2和干扰素(IFN)-γ的浓度。

统计分析

所有数据均通过GraphPad Prism 8.0软件(GraphPad软件公司(GraphPadSoftware)，美国加利福尼亚州圣地亚哥)使用单因素ANOVA，随后Bonferroni多重比较事后检验(针对选择的比较)分析。数据以平均值±SEM表示。*p<0.05、**p<0.01和***p<0.001被认为具有统计学意义。

结果：

不同饮食组之间的平均重量增量无显著差异。如通过血清中疫苗特异性免疫球蛋白水平确定的，皮内(i.d.)注射后对Influvac产生抗原特异性应答。

使用流式细胞术研究了已分离的脾脏样本中调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞(Th1和Th2)的频率和活化状态。在接种疫苗的小鼠的饮食中添加DON对CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞的百分比没有显著影响，但与DON暴露组相比，向DON污染的饮食中添加GOS显著提高了这些动物脾脏中Treg细胞的百分比。

没有观察到对CXCR3⁺Th1细胞或T1ST2⁺Th2细胞的显著影响(由于饮食中存在GOS或DON)。

与对照相比，DON污染导致接种疫苗的小鼠脾脏中的Tbet⁺Th1细胞减少(p<0.01)，但出人意料地是，添加GOS增加了DON暴露小鼠脾脏中的Tbet⁺Th1细胞的百分比(p<0.05)，并使其恢复到对照组的值，参见表2。

表2：DON和包含β3’-GL的GOS对Tbet+Th1细胞的影响(以CXCR+CD4+T细胞％记)

#对选择的组使用单因素ANOVA，随后Bonferroni事后检验。

采用流式细胞术研究分离的脾脏样本中B细胞的频率和活化状态。CD19和CD220的表面标志物表达分析表明，DON诱导CD19⁺B220⁺B细胞群显著减少(p<0.01)。向DON污染的饮食中添加GOS显著(p<0.01)增加脾脏中B细胞的百分比，并能恢复DON的作用(参见表3)。

CD27表达用于区分记忆B细胞和初始B细胞。

表3：DON和包含β3’-GL的GOS对脾脏中B细胞％的影响

#对选择的组使用单因素ANOVA，随后Bonferroni事后检验。

为了研究接种疫苗的小鼠中免疫活性细胞生成细胞因子的能力，将收集的脾细胞与添加抗原的树突细胞共培养，对细胞进行离体再刺激。没有观察到饮食GOS或DON对细胞上清液中的IL-4、IL-6、IL-13、TNF-α和MIP-2浓度的显著影响。饮食补充GOS能防止DON诱导的IFN-γ产生减少(参见表4)。

表4：DON和包含β3’-GL的GOS对IFN-γ水平的影响

#对选择的组使用单因素ANOVA，随后Bonferroni事后检验。

如通过疫苗特异性免疫球蛋白产生减少指示的，在接种疫苗的小鼠的饮食中添加DON对B细胞介导的体液免疫具有特别不利的影响。DON暴露还减少了脾脏中的Tbet⁺Th1细胞，并在离体再刺激后诱导脾细胞IFN-γ分泌显著减少。我们的研究结果显示，在DON污染的饮食中添加GOS增加了Tbet⁺Th1细胞的频率和再刺激脾细胞的IFN-γ分泌，并因此防止接种疫苗的动物中DON诱导的1型免疫应答降低。此外，食用DON污染的饮食导致接种疫苗的小鼠脾脏中的B细胞频率显著下降。

总之，暴露于DON会导致对疫苗接种的免疫应答的调节。用包含β3’-GL的寡糖混合物GOS的饮食干预减轻了DON对适应性免疫应答的不良影响。

实例3：较大婴儿配方乳粉

较大婴儿配方乳粉，以包装粉末提供，具有用水复溶为即饮乳的说明书。复溶时，配方乳粉每100ml含：

-68kcal

-约1.4g蛋白质(主要是来自牛的乳清蛋白和酪蛋白)

-约3.2g脂质，其中DHA的量为0.52wt％，EPA为0.11wt％，并且ARA为0.52wt％(基于总脂肪酸)

-约8.1g可消化的碳水化合物(主要是乳糖)

-约720mg半乳寡糖，其中约140mgβ3’-GL(500mg来自Vivinal GOS，220mg来自由嗜热链球菌CNCM-I-1620的β半乳糖苷酶产生的GOS)和约80mg lcFOS(来源RaftilinHP)

矿物质、微量元素、维生素和本领域已知的并符合婴儿配方乳粉的国际指令的其他微量营养素。

Claims (19)

1.一种半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其用于在治疗性预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

2.根据权利要求1所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该适应性免疫应答是对病原体的免疫应答。

3.根据权利要求2所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该病原体是病毒。

4.根据权利要求1所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该适应性免疫应答是对抗原的免疫应答，更优选地其中该适应性免疫应答是对疫苗接种的免疫应答。

5.根据权利要求4所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该抗原源自病毒。

6.根据前述权利要求中任一项所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该适应性免疫应答是由B细胞介导的免疫应答。

7.根据前述权利要求中任一项所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中该食物污染物是真菌毒素。

8.根据权利要求7所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中真菌毒素是脱氧雪腐镰刀菌烯醇。

9.根据前述权利要求中任一项所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中将该半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物施用于婴儿或幼儿，优选地断奶婴儿或幼儿。

10.根据前述权利要求中任一项所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中将该半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物施用于食用谷物或含谷物产品的受试者。

11.根据前述权利要求中任一项所述使用的半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中施用或食用与食用谷物或含谷物产品一起进行，或在食用谷物或含谷物产品之前或之后不久进行。

12.根据前述权利要求中任一项所述使用的包含半乳寡糖的营养组合物，其中这些半乳寡糖包含按这些半乳寡糖的总重量计至少20％的β1,3’-半乳糖基乳糖。

13.根据前述权利要求中任一项所述使用的包含半乳寡糖的营养组合物，其中该营养组合物包含按该营养组合物的干重计至少1wt％的半乳寡糖。

14.根据前述权利要求中任一项所述使用的包含半乳寡糖的营养组合物，其中该营养组合物是婴儿配方乳粉、较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉，优选地较大婴儿配方乳粉或幼儿配方乳粉。

15.一种用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的方法，该方法包括向该受试者施用半乳寡糖或包含半乳寡糖的营养组合物，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

16.半乳寡糖用于制造营养组合物以治疗性预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的用途，其中这些半乳寡糖包含β1,3’-半乳糖基乳糖。

17.一种β1,3’-半乳糖基乳糖，其用于在治疗性预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低中使用。

18.β1,3’-半乳糖基乳糖用于制造营养组合物以治疗性预防和/或改善食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的用途。

19.一种用于预防和/或改善受试者中食物污染物诱导的适应性免疫应答降低的方法，该方法包括向该受试者施用β1,3’-半乳糖基乳糖。