CN117224550A - 一种用于治疗急性髓系白血病的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗急性髓系白血病的药物组合物，具体公开了一种同时包含UNC0379和维奈克拉的用于治疗急性髓系白血病的药物组合物，本发明首次发现UNC0379联合维奈克拉对治疗急性髓系白血病具有显著的协同增效的作用，为解决临床上急性髓系白血病耐药与复发难题提供了一种新的治疗方案。

Description

一种用于治疗急性髓系白血病的药物组合物

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地，本发明涉及一种用于治疗急性髓系白血病的药物组合物。

背景技术

急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)是一类髓系造血干/祖细胞分化受阻，白血病细胞恶性克隆性增殖的血液系统恶性肿瘤，是成人血液恶性肿瘤中最常见的类型，其发病中位年龄在67-70岁之间。AML的主要临床表现为感染、出血、贫血和组织器官浸润等，自然病程短、病情进展快、病死率极高，给家庭和社会带来了沉重的疾病和经济负担。近年来，随着化疗和支持治疗等水平的不断进步以及新型靶向药物的应用，AML患者的预后得到了一定的改善，但是其长期生存率依然很低，5年生存率仅为20-30％。AML患者极易复发，且复发后对化疗药物丧失敏感性，最终导致患者死于耐药及各种并发症。

维奈克拉(Venetoclax，ABT-199)是一种新型的Bcl-2选择性抑制剂，又名维奈托克、维奈妥拉。美国FDA批准维奈托克用于治疗初诊的且无法耐受高强度常规化疗的老年AML患者(75岁及以上)，该药需要和阿扎胞苷、地西他滨或低剂量阿糖胞苷联合使用。虽然维奈克拉表现出良好的临床抗AML活性，然而，仍有部分AML患者在接受维奈克拉治疗后会出现复发、耐药并最终死亡。对维奈克拉表现出天然耐药或获得性耐药，这是临床应用维奈克拉治疗AML的巨大障碍。因此，进一步探讨维奈克拉的耐药机制，寻找新型的治疗策略，增强维奈克拉的抗AML活性，对于提高AML的治愈率具有特殊的重要性和迫切性。

发明内容

有鉴于此，为了解决目前本领域存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种用于治疗急性髓系白血病的药物组合物，本发明利用新型小分子抑制剂UNC0379来增强维奈克拉的抗AML活性，以达到治疗AML并延长AML患者长期生存率的目的。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种用于治疗白血病的联合用药物组合物。

进一步，所述药物组合物包含UNC0379和维奈克拉。

进一步，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料；

优选地，所述药学上可接受的载体和/或辅料包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

进一步，所述药物组合物为单一的复方制剂或两种单独的单方制剂的组合；

优选地，所述复方制剂为包含UNC0379和维奈克拉的复方制剂；

优选地，所述单方制剂的组合为包含UNC0379的单方制剂和包含维奈克拉的单方制剂的组合；

更优选地，所述单方制剂的组合中两种单方制剂的施用方式为同时施用或依次施用。

进一步，所述药物组合物的剂型包括非经胃肠道给药剂型、经肠胃道给药剂型；

优选地，所述非经胃肠道给药剂型包括注射给药剂型、呼吸道给药剂型、腔道给药剂型、粘膜给药剂型、皮肤给药剂型；

优选地，所述经肠胃道给药剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、干混悬剂、散剂、缓释剂、泡腾片、乳剂、混悬剂、糖浆剂、滴剂、咀嚼片。

进一步，所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、慢性粒-单核细胞白血病、骨髓增殖性肿瘤。

进一步，所述药物组合物中UNC0379和维奈克拉的浓度比例为(31.25nM-20000nM)：(3.125nM-800nM)。

进一步，所述药物组合物中UNC0379能够提高维奈克拉抗白血病活性。

在本发明中，所述治疗是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少特定疾病的症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况，因此，本发明所述的治疗白血病包括预防、缓解和/或治疗白血病。

在一些实施方案中，所述复方制剂是指具有两种或两种以上活性药物成分制成的制剂，例如本发明中联合用药物组合物为复方制剂时，可代表其同时包含UNC0379和维奈克拉。在一些实施方案中，所述单方制剂是指具有单一活性药物成分制成的制剂，例如本发明中联合用药物组合物为单方制剂组合时，可代表其为分别包含UNC0379的单方制剂、包含维奈克拉的单方制剂的组合。

在一些实施方案中，当所述单方制剂的组合中两种单方制剂的施用方式为依次施用时，施用方式包括：先施用包含UNC0379的单方制剂、再施用包含维奈克拉的单方制剂；先施用包含维奈克拉的单方制剂、再施用包含UNC0379的单方制剂。

在一些实施方案中，所述注射给药剂型包括但不限于：静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂及腔内注射剂等多种注射剂；所述呼吸道给药剂型包括但不限于：喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等；所述腔道给药剂型包括但不限于：栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂等，用于在直肠、阴道、尿道、鼻腔、耳道等；所述粘膜给药剂型包括但不限于：滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片剂、贴膜剂等；所述皮肤给药剂型包括但不限于：外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂等。

在一些实施方案中，所述药学上可接受的载体和/或辅料包括任何适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(例如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。可用于本发明所述药物组合物中的药学上可接受的载体和/或辅料是常规的，适合的药学上可接受的载体和/或辅料在Remington'sPharmaceutical Sciences(19th ed.,1995)中有详细的记载。

在一些实施方案中，所述药学上可接受的载体和/或辅料根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高其活性或其生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。如此配制得到的药物组合物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的施用方式将药物进行给药，使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明所述的药物组合物施用于人。

在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物的适合的给药剂量根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性之类的因素而可以进行多种处方，熟练的医生通常能够容易地决定处方及所希望的对治疗有效的给药剂量。

在一些实施方案中，所述药物组合物中还可包含其它用于治疗白血病的药物，所述药物并无特别限制，只要其能够对白血病产生预期的治疗效果均在本发明的保护范围内，所述其它用于治疗白血病的药物包括但不限于：全反式维甲酸、亚砷酸、midostaurin、enasidenib、地西他滨、阿扎胞苷和人源化重组抗CD33单克隆抗体gemtuzumab、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、卡培他滨、氟尿苷、氟达拉滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞等、或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明所述药物组合物中的UNC0379和维奈克拉与所述其它用于治疗白血病的药物可以同时给药或依次给药，当依次给药时，给药方式包括：同时给药UNC0379和维奈克拉后、再给药其它用于治疗白血病的药物；同时给药UNC0379和其它用于治疗白血病的药物后、再给药维奈克拉；同时给药维奈克拉和其它用于治疗白血病的药物后、再给药UNC0379；以UNC0379、维奈克拉、所述其它用于治疗白血病的药物的给药顺序依次给药；以UNC0379、所述其它用于治疗白血病的药物、维奈克拉的给药顺序依次给药；以维奈克拉、UNC0379、所述其它用于治疗白血病的药物的给药顺序依次给药；以维奈克拉、所述其它用于治疗白血病的药物、UNC0379的给药顺序依次给药；以所述其它用于治疗白血病的药物、UNC0379、维奈克拉的给药顺序依次给药；以所述其它用于治疗白血病的药物、维奈克拉、UNC0379的给药顺序依次给药。

在一些实施方案中，包含除UNC0379之外的其它的SETD8抑制剂和维奈克拉联合组成的药物组合物同样包含在本发明的保护范围内，所述SETD8抑制剂包括任何能够下调SETD8的表达或活性的试剂，优选地，所述试剂包括但不限于：抑制SETD8基因表达或转录的干扰分子、抑制SETD8蛋白活性的试剂、靶向SETD8的小分子抑制剂。

在一些实施方案中，所述抑制SETD8表达或转录的干扰分子包括但不限于：靶向SETD的siRNA、shRNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸中的至少一种，或能表达或形成所述siRNA、shRNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物；所述抑制SETD8蛋白活性的试剂包括但不限于：靶向SETD8的抗体或其片段、靶向SETD8的多肽、SETD8结合蛋白片段；所述靶向SETD8的小分子抑制剂包括但不限于：UNC0379、BVT948、Ryuvidine、UNC0379 TFA。

本发明的第二方面提供了一种体外非治疗目的地抑制白血病细胞生长、促进白血病细胞凋亡的方法。

进一步，所述方法包括如下步骤：采用本发明第一方面所述的药物组合物处理白血病细胞；

优选地，所述白血病细胞包括急性髓系白血病细胞、急性淋巴细胞白血病细胞、慢性淋巴细胞白血病细胞、慢性髓系白血病细胞、慢性粒细胞白血病细胞、慢性粒-单核细胞白血病细胞、骨髓增殖性肿瘤细胞。

进一步，所述白血病细胞包括SKNO-1细胞、Kasumi-1细胞、KG-1α细胞、OCI-Aml-3细胞、U937细胞、MOLM-13细胞、THP-1细胞、HL-60细胞；

优选地，所述白血病细胞为SKNO-1细胞、Kasumi-1细胞。

在本发明的具体实施方案中，本发明通过细胞实验证明了所述联合用药物组合物具有显著协同抑制白血病细胞(尤其是急性髓系白血病细胞)生长和增殖的作用，因此，所述联合用药物组合物能够作为一种以非治疗目的地抑制白血病细胞生长、增殖的抑制剂，以用于科研领域，例如更深入地研究急性髓系白血病细胞生长和代谢机制或行为、筛选治疗急性髓系白血病的潜在药物等等。

本发明的第三方面提供了如下任一方面的应用：

(1)UNC0379在制备用于提高维奈克拉抗白血病活性的药物中的应用；

(2)UNC0379和维奈克拉联合在制备用于治疗白血病的药物组合物中的应用；

(3)本发明第一方面所述的药物组合物在制备用于治疗白血病的产品中的应用；

(4)本发明第一方面所述的药物组合物在制备用于体外抑制白血病细胞生长、促进白血病细胞凋亡的试剂中的应用；

优选地，所述UNC0379和维奈克拉的浓度比例为(31.25nM-20000nM)：(3.125nM-800nM)；

优选地，所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、慢性粒-单核细胞白血病、骨髓增殖性肿瘤。

此外，本发明还提供了一种用于治疗白血病的方法，所述方法包括如下步骤：给有需要的受试者施用有效量的本发明第一方面所述的药物组合物。

在本发明中，所述有效量是指有效产生理想预防、缓解或治疗效果的化合物的量。根据化合物、症状及其严重程度、被治疗哺乳动物的年龄等因素的不同，达到有效量的本发明所述的药物组合物的量也会随之变化，但可由本领域普通技术人员根据其所掌握的本领域的知识结合本发明公开内容惯常地确定具体用量。

在一些实施方案中，可以经由口服给药、注射给药或局部给药向患者施用药物组合物。例如，该方法可以包括向受试者施用药物组合物一天三次、一天一次、每两天一次等。在一些实施例中，注射给药可以包括皮下注射、肌内注射、静脉内注射等。在一些实施例中，注射给药可以包括将药物组合物直接注射到病灶或靠近病灶的区域中，在一些实施例中，局部给药可以包括直肠给药、鼻腔给药、耳部给药、髓内给药、关节内给药、胸膜内给药等，或其任何组合。在一些实施例中，可以经由不同给药方式的组合向受试者施用所述药物组合物。

在一些实施方案中，所述药物组合物的受试者为动物，优选为哺乳动物(人类和非人类动物)，所述哺乳动物包括但不限于：人、非人灵长类动物(特别是高等灵长类动物，例如猕猴、食蟹猴、短尾猴、熊猴、平顶猴、金丝猴和树鼩)、绵羊、狗、啮齿类动物(例如小鼠或大鼠)、豚鼠、山羊、猪、猫、兔、牛、任何家畜或宠物等，在优选的实施方案中，所述受试者优选为人。

相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果：

本发明首次发现UNC0379联合维奈克拉具有协同抗AML活性。本发明通过细胞实验证明UNC0379和维奈克拉两者联合应用对治疗AML具有显著的协同增效的作用。通过联合UNC0379和维奈克拉用药的方式显著提高了对AML的治疗效果，为解决临床上AML耐药与复发难题提供了一种新的治疗方案。

附图说明

图1为流式细胞术检测不同药物对AML细胞系SKNO-1和Kasumi-1生长情况影响的结果图，其中，A图：流式细胞术检测细胞凋亡代表图，横轴为Annexin V-FITC，竖轴为PI，Annexin V-FITC阳性代表细胞凋亡；B图：对不同药物浓度下的细胞凋亡进行统计得到的柱状图，***代表p<0.001，用calcusyn软件计算协同系数(CI，CI<1表示两药联合具有协同效果)；

图2为采用AML细胞系SKNO-1和Kasumi-1评估UNC0379和维奈克拉的联合效果，其中，图中的点表示：在维奈克拉的一定浓度下，UNC0379的IC50值，图中“点”落在斜线下方代表两药联合具有协同效果，落在斜线上代表两药联合具有叠加效果，落在斜线外代表两药联合具有拮抗效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。

实施例1UNC0379联合Venetoclax(维奈克拉)协同诱导AML细胞发生凋亡

1、实验材料

AML细胞株Kasumi-1来源于ATCC，货号为CRL-2724。

AML细胞株SKNO-1来源于DSMZ，货号为ACC-690。

UNC0379购自于瀚香生物科技公司，货号为1620401-82-2。

Venetoclax购自于瀚香生物科技公司，货号为1257044-40-8。

2、实验方法

本实施例通过AnnexinV/PI染色及流式细胞术检测不同药物对AML细胞凋亡的影响，具体实验方法如下：

分别用ctrl(未做处理)、UNC0379(2.5、5、10μM)、Venetoclax(25、50、100nM)、UNC+VEN(5μM+50nM、5μM+100nM、10μM+50nM、10μM+100nM)处理AML细胞系Kasumi-1(3×10⁵/mL)细胞48h后，收集细胞，2000rpm离心5分钟，弃上清，用1mL预冷的PBS洗涤细胞沉淀，转移至1.5mL EP管中，2000rpm离心5分钟，尽可能弃除上清。向1.5mL EP管中加入50μL结合缓冲液，再加入5μL Annexin-FITC和5μL碘化丙碇(PI)并混匀，室温避光染色15分钟。加入450μL结合缓冲液终止反应，将样品用双层200目尼龙网过滤后，1小时内用流式细胞仪检测并保存数据文件，用FlowJo 7.6做出图像，用GraphPad Prism软件进行数据处理。

分别用ctrl(未做处理)、UNC0379(2.5、5、10μM)、Venetoclax(0.5、1、2μM)，UNC+VEN(5μM+1μM、5μM+2μM、10μM+1μM、10μM+2μM)处理AML细胞系SKNO-1(3×10⁵/mL)细胞48h，采用如前所述相同的方法检测细胞的凋亡情况。

3、实验结果

结果如图1A-B所示，结果显示，相较于单独的UNC0379组和Venetoclax组而言，UNC0379和Venetoclax两药联合组能够显著提高AML细胞的凋亡率，并且不同浓度下的UNC0379和Venetoclax联合时的CI<1，可见两药联合具有协同效果。以上结果表明UNC0379联合Venetoclax能够协同诱导AML细胞发生细胞凋亡，两药联合具有协同抗AML的活性。

实施例2UNC0379联合Venetoclax(维奈克拉)对抑制AML具有协同效果

1、实验材料

同实施例1中所述。

2、实验方法

本实施例通过MTT法测定两种药物的联合效果，具体实验方法如下：

用培养基将UNC0379进行倍比稀释(0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20μM)，按照药物的溶解度，将Venetoclax也进行倍比稀释(0、100、200、400、800、1600nM)，分别将0μL的药物加入到96孔板对应的孔中，单药孔补加10μL对应的溶剂，对照孔补加20μL对应的溶剂。在每个孔中加入80ΜlSKNO-1细胞悬液(10000个/孔)，培养68h后，加入10μL MTT，处理4h后，加入裂解液过夜裂解。用酶标仪读取OD590值。用GraphPad Prism软件计算出在一定浓度的Venetoclax下，UNC0379的IC50值(对细胞达到50％抑制时的药物浓度)，并做出标准等效线图，以评估两种药物的联合效果。

在Kasumi-1细胞实验中，Venetoclax的浓度为0、3.125、6.25、12.5、25、50nM，其它实验步骤如前所述。

3、实验结果

结果如图2所示，结果显示，图中的“点”(在一定浓度的venetoclax下，UNC0379的IC50值)均落在斜线下方，可见UNC0379和Venetoclax联合具有协同效果(UNC0379和维奈克拉的比例为(31.25nM-20000nM)：(3.125nM-800nM))，以上结果表明UNC0379联合Venetoclax能够协同抑制AML细胞的增殖和生长，两药联合具有协同抗AML的活性。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种用于治疗白血病的联合用药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含UNC0379和维奈克拉。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体和/或辅料；

优选地，所述药学上可接受的载体和/或辅料包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为单一的复方制剂或两种单独的单方制剂的组合；

优选地，所述复方制剂为包含UNC0379和维奈克拉的复方制剂；

优选地，所述单方制剂的组合为包含UNC0379的单方制剂和包含维奈克拉的单方制剂的组合；

更优选地，所述单方制剂的组合中两种单方制剂的施用方式为同时施用或依次施用。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型包括非经胃肠道给药剂型、经肠胃道给药剂型；

优选地，所述非经胃肠道给药剂型包括注射给药剂型、呼吸道给药剂型、腔道给药剂型、粘膜给药剂型、皮肤给药剂型；

优选地，所述经肠胃道给药剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、干混悬剂、散剂、缓释剂、泡腾片、乳剂、混悬剂、糖浆剂、滴剂、咀嚼片。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、慢性粒-单核细胞白血病、骨髓增殖性肿瘤。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中UNC0379和维奈克拉的浓度比例为(31.25nM-20000nM)：(3.125nM-800nM)。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中UNC0379能够提高维奈克拉抗白血病活性。

8.一种体外非治疗目的地抑制白血病细胞生长、促进白血病细胞凋亡的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：采用权利要求1-7中任一项所述的药物组合物处理白血病细胞；

优选地，所述白血病细胞包括急性髓系白血病细胞、急性淋巴细胞白血病细胞、慢性淋巴细胞白血病细胞、慢性髓系白血病细胞、慢性粒细胞白血病细胞、慢性粒-单核细胞白血病细胞、骨髓增殖性肿瘤细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述白血病细胞包括SKNO-1细胞、Kasumi-1细胞、KG-1α细胞、OCI-Aml-3细胞、U937细胞、MOLM-13细胞、THP-1细胞、HL-60细胞；

优选地，所述白血病细胞为SKNO-1细胞、Kasumi-1细胞。

10.如下任一方面的应用，所述应用包括：

(1)UNC0379在制备用于提高维奈克拉抗白血病活性的药物中的应用；

(2)UNC0379和维奈克拉联合在制备用于治疗白血病的药物组合物中的应用；

(3)权利要求1-7中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗白血病的产品中的应用；

(4)权利要求1-7中任一项所述的药物组合物在制备用于体外抑制白血病细胞生长、促进白血病细胞凋亡的试剂中的应用；

优选地，所述UNC0379和维奈克拉的浓度比例为(31.25nM-20000nM)：(3.125nM-800nM)；

优选地，所述白血病包括急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、慢性粒-单核细胞白血病、骨髓增殖性肿瘤。