CN117224419A - 番泻苷c在制备皮肤美白淡斑护肤品中的应用及相关产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了番泻苷C在制备皮肤美白淡斑护肤品中的应用及相关产品,属于化妆品技术领域,具体为番泻苷C在制备美白和/或淡斑护肤品中的应用,提供了一种美白淡斑护肤品,有效成分包括番泻苷C;还提供了一种美白淡斑精华液、一种美白淡斑面霜及一种美白淡斑面膜;本发明首次发现番泻苷C可通过抑制酪氨酸酶的活性发挥抑制黑色素生成的能力,具有美白淡斑的作用;本发明提供的含番泻苷C的美白淡斑精华液、面霜与面膜具有美白淡斑的功效,且具有较高的安全性。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及番泻苷C在制备皮肤美白淡斑护肤品中的应用及相关产品。
背景技术
随着生活水平的不断提高,人们对皮肤美容的需求越来越大。具有美白祛斑功效的化妆品更是深受广大女性的热爱。皮肤长斑或肤色暗淡与表皮细胞的黑色素水平有关。黑色素是人类头发、眼睛和皮肤等色素系统的关键成分,由人体表皮基底层黑色素细胞通过酪氨酸酶以酪氨酸为底物合成。黑色素的异常积累会导致众多皮肤问题,如:雀斑、黄褐斑和癌症等。
酪氨酸酶是一种多功能含铜氧化酶,广泛存在于微生物、动植物及人体中,是调控黑色素生成的关键限速酶。酪氨酸酶决定了哺乳动物皮肤和毛发的颜色,这种酶的过量表达会导致黑色素的异常积累进而诱发皮肤病。此外,市售的大多数美白剂大都是酪氨酸酶抑制剂。因此,酪氨酸酶抑制剂的发现对于皮肤病及化妆品领域具有重大的意义。
许多酪氨酸酶抑制剂具有一定的副作用,例如:接触性皮炎和高毒性,并且还表现出较差的皮肤渗透性。最近的大量研究集中在植物来源产品上,一些植物来源的天然分子已被证明可以影响黑色素的生成,改善肤色的亮度,例如熊果苷等,但是天然的美白因子普遍存在价格高昂等问题,大多都应用于高档奢侈化妆产品中,从天然植物发现更多的更安全的美白成分,仍旧非常迫切。
现有技术中,关于番泻苷C的应用主要集中在其泻下活性方面,尚无美白淡斑功效的报道。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供了番泻苷C在制备皮肤美白淡斑护肤品中的应用及相关产品。
本发明首次发现番泻苷C能够有效抑制黑色素生成,具有美白淡斑护肤的作用。
本发明技术方案如下:
番泻苷C在制备美白和/或淡斑护肤品中的应用,所述番泻苷C具有如式Ⅰ所示结构:
式Ⅰ。
根据本发明优选的,所述应用中,番泻苷C具有抑制皮肤黑色素形成的作用。
进一步优选的,番泻苷C能与酪氨酸酶有效结合。
更优选的,番泻苷C能作用于酪氨酸酶的GLU-256、MET-280、GLU-322、HIS-61、HIS-85、HIS-94、HIS-259、HIS-260、HIS-263、HIS-296、ASN-260, ARG-268残基位点。
一种美白淡斑护肤品,有效成分包括番泻苷C。
根据本发明优选的,所述护肤品包括精华液、面霜、面膜、乳液、爽肤水、原液。
根据本发明优选的,一种美白淡斑精华液,包括以下按质量百分含量计的组分:卡波姆0.1-0.5%,透明质酸钠0.3-0.7%,甘油3-5%,1,3-丙二醇5-7%,丁二醇3-5%,甜菜碱1-3%,三乙醇胺0.4-0.6%,抗坏血酸磷酸酯镁0.1-0.3%,辛甘醇0.4-0.6%,番泻苷C 1-3%,烟酰胺1-3%,余量为去离子水。
进一步优选的,所述美白淡斑精华液的制备方法,包括如下步骤:将所述配方量的卡波姆、透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱以及去离子水置入容器中加热到80-85℃,搅拌保温至完全溶解,加入三乙醇胺,逐步冷却至40-45℃然后再加入抗坏血酸磷酸酯镁搅拌均匀,最后加入番泻苷C、烟酰胺和辛甘醇后搅拌保温15-20分钟,得到美白淡斑精华液。
根据本发明优选的,一种美白淡斑面霜,包括以下按质量百分含量计的组分:甜杏仁油3-5%,橄榄油3-5%,葡萄酒籽油3-5%,维生素E 0.3-0.5%,大豆卵磷脂2-5%,甘油3-5%,玻尿酸4-6%,冰晶0.3-0.5%,番泻苷C 0.3-0.5%,余量为去离子水。
进一步优选的,所述美白淡斑面霜的制备方法,包括如下步骤:按所述配方量称取甜杏仁油、橄榄油、葡萄酒籽油、维生素E和大豆卵磷脂进行混合,搅拌均匀,加热到45-50℃,冷却到室温后得到油相原料;按所述配方量称取甘油、玻尿酸、冰晶、番泻苷C和去离子水加入到上述油相原料中,搅拌均匀,加热到40-45℃,冷却到室温后静置,均质至完全乳化均匀得到美白淡斑面霜。
根据本发明优选的,一种美白淡斑面膜,包括以下按质量百分含量计的组分:羧甲基纤维素纳0.05-0.2%,黄原胶0.05-0.2%,丁二醇0.4-1.8%,1,2已二醇0.4-1.8%,葡萄籽油0.4-1.0%,甘油0.4-1.0%,透明质酸钠0.3-0.7%,山梨坦倍半油酸酯0.2-0.4%,肌肽0.2-0.5%,维生素C乙基醚0.2-0.5%,虾青素0.5-1.0%,烟酰胺0.3-0.5%,番泻苷C 0.3-0.5%,乙二胺四乙酸二钠0.8-1.4%,加入柠檬酸调节pH值至5.8-6.5,余量为去离子水。
进一步优选的,所述美白面膜的制备方法,包括如下步骤:按配比称取各成分原料;将去离子水加热到50-60℃,然后加入羧甲基纤维素纳、黄原胶;再将水温继续加热到80-90℃,加入丁二醇、1,2已二醇,搅拌;将水温降低到40-50℃,加入葡萄籽油、甘油、透明质酸钠、山梨坦倍半油酸酯,搅拌;保持水温不变,加入肌肽、维生素C乙基醚、虾青素、烟酰胺、番泻苷C,搅拌至完全溶解;保持水温不变,加入乙二胺四乙酸二钠,搅拌至完全溶解均匀;加入柠檬酸调节pH值至5.8-6.5,得到精华液;将面膜纸浸入制好的精华液中,待充分吸取精华液后,得到美白淡斑面膜。
本发明的有益技术效果如下:
1、本发明首次发现番泻苷C能够有效抑制黑色素生成,具有美白淡斑护肤的作用。
2、本发明得到的美白淡斑精华液质地清透不粘腻,易于涂抹和吸收;在本发明中:透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱配伍作为保湿组分,抗坏血酸磷酸酯镁、番泻苷C、烟酰胺配伍作为美白淡斑组分,在实现美白淡斑功效的同时,还可保持肌表水分,提升皮肤水润度;同时,本发明提供的美白淡斑精华液刺激性小,使用安全,制备方法简单,可操作性强,适合工业化生产。
3、本发明提供的美白淡斑面霜具有良好的美白功能,此外,在配方的内部加设玻尿酸等物质,可增加面霜对皮肤的修复性。
4、本发明提供的美白淡斑面膜中添加的虾青素等物质可以有效地增强肌肤活性,提高肌肤的抗氧化能力;葡萄籽油、透明质酸钠等物质可以有效地增强肌肤的补水保湿功能;烟酰胺、番泻苷C等物质可以有效地抑制黑色素生成,淡化色斑,极大地增强美白、祛斑功效。
附图说明
图1为番泻苷C与蘑菇酪氨酸酶的分子对接示意图。
图2为番泻苷C对斑马鱼模型黑色素形成的实验图;
图中,A为实验方案,B为不同处理组斑马鱼尾部黑色素沉积结果图,C为各组黑色素含量统计结果。
具体实施方式
为了更好地理解本发明,下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。
实施例1
番泻苷C与靶点蛋白酪氨酸酶的分子对接与分子动力学模拟
从PubChem数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下载番泻苷C的二维结构sdf格式文件,然后将其转换为三维结构sdf格式文件,运用LigPrep对结构进行优化;从RCSB蛋白数据库(https://www.rcsb.org/)下载蘑菇酪氨酸酶晶体结构文件(PDB ID:2Y9X)。2Y9X是一种含有4个相同催化结构域的四聚体蛋白。使用PyMOL软件去除冗余结构域并保留催化结构域用于后续药物筛选。Maestro软件用于蛋白质的处理,包括缺失残基的补充、残基优化、水分子去除和能量优化,所有其他参数均选择默认值。选择共晶分子2Y9X进行对接网格的生成,网格盒大小为10 × 10 × 10 Å。PyMOL软件进行可视化分析,Maestro软件分析配体与蛋白的相互作用。
酪氨酸酶和化合物的对接复合体以PDB格式保存。发明人使用Maestro软件创建蛋白质-配体复合物,使用Prime软件弥补缺失的残基,最终的系统构建步骤包括优化、除水和最小化过程。采用Desmond软件的system builder功能构建仿真系统;复合物在周期截断八面体盒中与TIP3P水分子溶剂化,使其壁距溶质至少10 Å。加入离子以中和系统的电荷。分子动力学模拟使用OPLS3力场、NPT系统合成和100 ns的300K模拟,每100 ps记录一次轨迹,共1000帧。所有其他参数都是默认选择的。使用Desmond软件和PyMOL软件进行可视化,使用GraphPad Prism软件进行图形表示。
本研究结果显示番泻苷C能够与酪氨酸酶具有良好的抑制活性,整体对接评分为-10.408,Glide 超精度对接评分-10.408,氢键能力为-4.365,均显示了良好的结合性能,见表1。图1中2Y9X-SC为番泻苷C与蘑菇酪氨酸酶的对接的模式图,番泻苷C主要通过ASN-81、GLU-322、HIS-244的氨基酸残基形成氢键并锚定在2Y9X的活性口袋。同时利用分子动力学模拟发现番泻苷C能与酪氨酸酶的残基GLU-256、MET-280及GLU-322形成氢键;与HIS-61、85、94、259、260、263、296形成离子键结合;与HIS-85残基形成π-π键结合;与HIS-85,ASN-260,ARG-268等三个位点形成水分子桥作用,见表2,图1。
表1 番泻苷C的分子对接得分
表2 番泻苷C与蛋白靶点结合位点分析结果
实施例2
番泻苷C对斑马鱼模型黑色素形成的抑制作用
选取健康的成年AB系斑马鱼,按雌雄2:1配对放入配种缸中,并用隔板将雌雄斑马鱼隔开,次日早上亮灯后,抽离隔板,雌雄鱼自由交配2 h后,收集胚胎,放置28±0.5℃恒温培养箱进行孵育。取受精后8 h(8hpf)发育正常的斑马鱼胚胎置6孔板中,每孔20枚。分别加入25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL浓度的番泻苷C(SC)药液处理至32 hpf,同时设置正常对照组(Control)、溶剂对照组(DMSO)、阳性对照组(PTU)同样处理;正常对照组加入水,不加任何药物,溶剂对照组加入质量浓度为0.5%的二甲基亚砜,阳性对照组加入浓度为200 μM的苯硫脲;实验结束后于体视显微镜下观察和拍照,采用Image J软件进行分析每一个胚胎黑色素颗粒分布的光密度值,利用SPSS进行单因素方差分析。
结果表明番泻苷C在25-100 μg/mL对斑马鱼黑色素的生成有明显的抑制作用,具有显著的美白活性,见图2;图2中的A为实验方案,图2中的B为不同处理组斑马鱼尾部黑色素沉积结果图,图2中的C为各组黑色素含量统计结果。
实施例3
番泻苷C的酪氨酸酶抑制活性测定
参考T/SHRH 015—2018《化妆品-酪氨酸酶抑制实验方法》,将样品溶液加入10 mL容量瓶中,用pH 6.8的磷酸缓冲盐溶液(PBS)将样品质量浓度稀释为0.01、0.05、0.20、0.50、0.80 mg/mL,加样:分别吸取0.5 mL 样品溶液和0.5 mL 100 μg/mL 酪氨酸酶溶液于5 mL离心管中,混匀后于37℃水浴10 min,向离心管中加入1.0 mg/mL的左旋多巴溶液2mL,静置反应5 min,即刻在475 nm处测定吸光值,记作A;用0.5 mL PBS代替酪氨酸酶溶液,测定吸光度,记作B;用0.5 mL PBS代替样品溶液,测定吸光度,记作C;吸取1 mL PBS代替样品和酪氨酸溶液,测定器吸光值,记作D,计算酪氨酸酶抑制率,见表3。酪氨酸酶抑制率公式见下式:
表3 番泻苷C对酪氨酸酶的抑制作用
结果表明,番泻苷C表现出显著的对体外酪氨酸酶活性的抑制作用,且呈浓度依赖性。
实施例4
一种美白淡斑精华液,由以下原料按质量百分含量计制备而成:卡波姆0.1%,透明质酸钠0.3%,甘油3%,1,3-丙二醇5%,丁二醇5%,甜菜碱1%,三乙醇胺0.4%,抗坏血酸磷酸酯镁0.1%,辛甘醇0.6%,番泻苷C 1%,烟酰胺3%,余量为去离子水。
所述美白淡斑精华液的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的卡波姆、透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱以及去离子水置入容器中加热到80℃,搅拌保温至完全溶解;加入三乙醇胺,逐步冷却至40℃;加入抗坏血酸磷酸酯镁搅拌均匀;加入番泻苷C、烟酰胺和辛甘醇后搅拌保温20分钟,抽真空消泡后出料,得精华液,制备得到样品1。
实施例5
一种美白淡斑精华液,由以下原料按质量百分含量计制备而成:卡波姆0.3%,透明质酸钠0.5%,甘油4%,1,3-丙二醇6%,丁二醇4%,甜菜碱2%,三乙醇胺0.5%,抗坏血酸磷酸酯镁0.2%,辛甘醇0.5%,番泻苷C 2%,烟酰胺2%,余量为去离子水。
所述美白淡斑精华液的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的卡波姆、透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱以及去离子水置入容器中加热到83℃,搅拌保温至完全溶解;加入三乙醇胺,逐步冷却至43℃;加入抗坏血酸磷酸酯镁搅拌均匀;加入番泻苷C、烟酰胺和辛甘醇后搅拌保温18分钟,抽真空消泡后出料,得精华液,制备得到样品2。
实施例6
一种美白淡斑精华液,由以下原料按质量百分含量计制备而成:卡波姆0.5%,透明质酸钠0.7%,甘油7%,1,3-丙二醇7%,丁二醇3%,甜菜碱3%,三乙醇胺0.6%,抗坏血酸磷酸酯镁0.3%,辛甘醇0.4%,番泻苷C 3%,烟酰胺1%,余量为去离子水。
所述美白淡斑精华液的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的卡波姆、透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱以及去离子水置入容器中加热到85℃,搅拌保温至完全溶解;加入三乙醇胺,逐步冷却至45℃;加入抗坏血酸磷酸酯镁搅拌均匀;加入番泻苷C、烟酰胺和辛甘醇后搅拌保温15分钟,抽真空消泡后出料,得精华液,制备得到样品3。
实施例7
一种美白淡斑面霜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:甜杏仁油3%,橄榄油3%,葡萄酒籽油3%,维生素E 0.5%,大豆卵磷脂2%,甘油3%,玻尿酸4%,冰晶0.3%,番泻苷C0.3%,余量为去离子水。
所述美白淡斑面霜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的甜杏仁油、橄榄油、葡萄酒籽油、维生素E和大豆卵磷脂混合,搅拌均匀,加热到50℃,冷却到室温后得到油相原料;称取甘油、玻尿酸、冰晶、番泻苷C和去离子水加入到上述油相原料中,搅拌均匀,加热到45℃,冷却到室温后静置,均质至完全乳化均匀,制备得到样品4。
实施例8
一种美白淡斑面霜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:甜杏仁油4%,橄榄油4%,葡萄酒籽油4%,维生素E 0.4%,大豆卵磷脂3%,甘油4%,玻尿酸5%,冰晶0.4%,番泻苷C0.4%,余量为去离子水。
所述美白淡斑面霜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的甜杏仁油、橄榄油、葡萄酒籽油、维生素E和大豆卵磷脂混合,搅拌均匀,加热到48℃,冷却到室温后得到油相原料;称取甘油、玻尿酸、冰晶、番泻苷C和去离子水加入到上述油相原料中,搅拌均匀,加热到43℃,冷却到室温后静置,均质至完全乳化均匀,制备得到样品5。
实施例9
一种美白淡斑面霜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:甜杏仁油5%,橄榄油5%,葡萄酒籽油5%,维生素E 0.3%,大豆卵磷脂5%,甘油5%,玻尿酸6%,冰晶0.5%,番泻苷C0.5%,余量为去离子水。
所述美白淡斑面霜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的甜杏仁油、橄榄油、葡萄酒籽油、维生素E和大豆卵磷脂混合,搅拌均匀,加热到45℃,冷却到室温后得到油相原料;称取甘油、玻尿酸、冰晶、番泻苷C和去离子水加入到上述油相原料中,搅拌均匀,加热到40℃,冷却到室温后静置,均质至完全乳化均匀,制备得到样品6。
实施例10
一种美白淡斑面膜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:羧甲基纤维素纳0.05%,黄原胶0.05%,丁二醇0.4%,1,2已二醇0.4%,葡萄籽油0.4%,甘油0.4%,透明质酸钠0.3%,山梨坦倍半油酸酯0.2%,肌肽0.2%,维生素C乙基醚0.2%,虾青素0.5%,烟酰胺0.3%,番泻苷C 0.3%,乙二胺四乙酸二钠0.8%,加入柠檬酸调节pH值至5.8,余量去离子水。
所述美白淡斑面膜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的去离子水加热到60℃,然后加入羧甲基纤维素纳、黄原胶;再将水温继续加热到90℃,加入丁二醇、1,2已二醇,搅拌;将水温降低到50℃,加入葡萄籽油、甘油、透明质酸钠、山梨坦倍半油酸酯,搅拌;保持水温不变,加入肌肽、维生素C乙基醚、虾青素、烟酰胺、番泻苷C,搅拌至完全溶解;保持水温不变,加入乙二胺四乙酸二钠,搅拌至完全溶解均匀;加入柠檬酸调节pH值至5.8,得到精华液;将面膜纸浸入制好的精华液中,待充分吸取精华液后,制备得到样品7。
实施例11
一种美白淡斑面膜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:羧甲基纤维素纳0.1%,黄原胶0.1%,丁二醇1.5%,1,2已二醇1.5%,葡萄籽油0.5%,甘油0.5%,透明质酸钠0.5%,山梨坦倍半油酸酯0.3%,肌肽0.3%,维生素C乙基醚0.3%,虾青素0.8%,烟酰胺0.4%,番泻苷C 0.4%,乙二胺四乙酸二钠1.0%,加入柠檬酸调节pH值至6.0,余量去离子水。
所述美白淡斑面膜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的去离子水加热到55℃,然后加入羧甲基纤维素纳、黄原胶;再将水温继续加热到85℃,加入丁二醇、1,2已二醇,搅拌;将水温降低到45℃,加入葡萄籽油、甘油、透明质酸钠、山梨坦倍半油酸酯,搅拌;保持水温不变,加入肌肽、维生素C乙基醚、虾青素、烟酰胺、番泻苷C,搅拌至完全溶解;保持水温不变,加入乙二胺四乙酸二钠,搅拌至完全溶解均匀;加入柠檬酸调节pH值至6.0,得到精华液;将面膜纸浸入制好的精华液中,待充分吸取精华液后,制备得到样品8。
实施例12
一种美白淡斑面膜,由以下原料按质量百分含量计制备而成:羧甲基纤维素纳0.2%,黄原胶0.2%,丁二醇1.8%,1,2已二醇1.8%,葡萄籽油1.0%,甘油1.0%,透明质酸钠0.7%,山梨坦倍半油酸酯0.4%,肌肽0.5%,维生素C乙基醚0.5%,虾青素1.0%,烟酰胺0.5%,番泻苷C 0.5%,乙二胺四乙酸二钠1.4%,加入柠檬酸调节pH值至6.5,余量去离子水。
所述美白淡斑面膜的制备方法,包括以下步骤:
将所述配方量的去离子水加热到50℃,然后加入羧甲基纤维素纳、黄原胶;再将水温继续加热到80℃,加入丁二醇、1,2已二醇,搅拌;将水温降低到40℃,加入葡萄籽油、甘油、透明质酸钠、山梨坦倍半油酸酯,搅拌;保持水温不变,加入肌肽、维生素C乙基醚、虾青素、烟酰胺、番泻苷C,搅拌至完全溶解;保持水温不变,加入乙二胺四乙酸二钠,搅拌至完全溶解均匀;加入柠檬酸调节pH值至6.5,得到精华液;将面膜纸浸入制好的精华液中,待充分吸取精华液后,制备得到样品9。
对比例1
一种美白淡斑精华液,除不含有番泻苷C外,其它组分与制备方法均与实施例4相同,制成对比样品1。
对比例2
一种美白淡斑精华液,除不含有烟酰胺外,其它组分与制备方法均与实施例6相同,制成对比样品2。
效果例1
美白淡斑功效评价
美白淡斑精华液对斑马鱼黑色素形成的抑制作用
选取健康的成年AB系斑马鱼,按雌雄2:1配对放入配种缸中,并用隔板将雌雄斑马鱼隔开,次日早上亮灯后,抽离隔板,雌雄鱼自由交配2 h后,收集胚胎,放置28±0.5℃恒温培养箱进行孵育。取8 hpf发育正常的斑马鱼胚胎置6孔板中,每孔20枚。分别加入50 μg/mL的样品1、样品2、样品3、对比样品1和对比样品2处理至32 hpf,同时设置空白对照组同样处理,空白对照组加入水,实验结束后于体视显微镜下观察和拍照,采用Image J软件进行分析每一个胚胎黑色素颗粒分布的光密度值,实验结果见表4。
表4 美白淡斑精华液抑制斑马鱼黑色素合成实验结果
由上表可知,本发明实施例4-6制得的美白淡斑精华液具有良好的抑制黑色素合成的效果,有显著的美白功能。
效果例2
美白淡斑精华液的酪氨酸酶抑制活性测定
测定方法同实施例3,不同的是:样品溶液的配制:取实施例5精华液样品适量,用PBS稀释成一系列浓度梯度备用,以100 μg/mL维生素C水溶液为对照,实验结果见表5。
表5 美白淡斑精华液体外抑制酪氨酸酶活力结果
结果显示本发明精华液在体外能够抑制酪氨酸酶活性,精华液抑制酪氨酸酶活力与维生素C相当,表现出较强的酪氨酸酶抑制能力。当稀释倍数加大时,抑制酪氨酸酶活力的能力有一定程度的下降。
效果例3
皮肤色度及黑色素指数测试:
受试物:实施例5制备的美白淡斑精华液;
阴性对照:黑化区不做任何处理作为空白对照;
阳性对照:质量分数为7%的抗坏血酸(维生素C)水溶液;
受试者:共30人,男12人,女18人,年龄18-32岁,符合受试者志愿入选标准。
检测方法:按照化妆品安全技术规范(2015年版)第一法的具体要求进行检验;受试者进入建立人体皮肤黑化模型阶段,首先应确定每位受试者试验部位的最小红斑量(MED),然后在试验部位选定各测试区,用人工模拟太阳仪在相同照射点按0.75倍MED剂量每天照射1次,连续照射4天。照射结束后的4天为皮肤黑化期,不做任何处理。照射结束后第5天,对各测试区皮肤颜色进行检测。当天开始在各黑化测试区根据随机表涂抹相应受试物。连续涂抹受试物至少4周,在涂抹1周、2周、3周和4周对皮肤颜色进行检测并记录。
皮肤颜色测试探头:在各个访视时点,用皮肤颜色测试探头分别测量各测试区域的ITA°值,每个区域测试三次,并记录;ITA°值越大,肤色越浅,反之肤色越深。
皮肤黑色素和血红素测试探头:在各访视时点,用皮肤黑色素和血红素测试探头分别测量各测试区域的MI值,每个测试区测试三次,并记录;MI值越小,表示皮肤黑素含量越低,反之皮肤黑素含量越高。
检测结果见表6、表7、表8。
表6 实施例5产品组ITA°值及MI值统计表
注:正态性检验p值>0.05,说明该数据服从正态分布,采用配对t检验,如不服从正态分布则采用秩和检验;
*,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组ITA°值显著性升高;
#,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组MI值显著性降低。
表7 阴性对照组ITA°值及MI值统计表
注:正态性检验p值>0.05,说明该数据服从正态分布,采用配对t检验,如不服从正态分布则采用秩和检验;
*,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组ITA°值显著性升高;
#,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组MI值显著性降低。
ns,表示p>0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组ITA°值或MI值无显著性变化。
表8 阳性对照组ITA°值及MI值统计表
注:正态性检验p值>0.05,说明该数据服从正态分布,采用配对t检验,如不服从正态分布则采用秩和检验;
*,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组ITA°值显著性升高;
#,表示p<0.05,与使用前相比,在使用样品1周、2周、3周和4周后试验产品组MI值显著性降低。
结果显示:本发明的美白淡斑精华液具有美白淡斑功效,且试验期间无受试者出现异常现象。
效果例4
人体皮肤斑贴试验
受试物:实施例5制备的美白淡斑精华液
阴性对照:去离子水
受试者:共30人,男10人,女20人,年龄18-32岁,符合受试者志愿入选标准。
斑贴方法:选用合格的斑试器材,以封闭式斑贴试验方法,将受试物和阴性对照0.025 mL置于斑试器内,外用低致敏胶带贴敷于受试者前臂曲侧,24小时后去除受试物,分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应,按《化妆品安全技术规范》(2015年版)中皮肤反应分级标准记录其结果。试验结果见表9:
表9人体皮肤斑贴试验结果
人体皮肤斑贴试验结果显示:30人中0例出现皮肤不良反应;说明本发明的美白淡斑精华液使用安全。
效果例5
美白淡斑面霜对斑马鱼黑色素形成的抑制作用
选取健康的成年AB系斑马鱼,按雌雄2:1配对放入配种缸中,并用隔板将雌雄斑马鱼隔开,次日早上亮灯后,抽离隔板,雌雄鱼自由交配2 h后,收集胚胎,放置28±0.5℃恒温培养箱进行孵育。取8 hpf发育正常的斑马鱼胚胎置6孔板中,每孔20枚。分别加入10 μg/mL的样品4、样品5和样品6处理至32 hpf,同时设置空白对照组同样处理,空白对照组加入水,实验结束后于体视显微镜下观察和拍照,采用Image J软件进行分析每一个胚胎黑色素颗粒分布的光密度值,实验结果见表10。
表10 美白淡斑面霜抑制斑马鱼黑色素合成实验结果
由上表可知,本发明实施例7-9制得的美白淡斑面霜具有良好的抑制黑色素合成的效果,有显著的美白功能。
效果例6
受试物:实施例12制备的美白淡斑面膜
受试者:共30人,男8人,女22人,年龄18-32岁,符合受试者志愿入选标准。
对照《化妆品功效宣称评价试验技术导则》中的消费者使用测试实验,选取30位测试者,使用该产品每天晚上临休息前20分钟用面膜,为期28天,通过问卷调查方式,由测试者自评产品美白淡斑效果,结果见表11。
表11 实施例12产品组美白淡斑效果测试结果
由上表可知,本发明制得的美白淡斑面膜具有良好的美白淡斑效果,在受试者中得到了较高的满意度。
综上所述,本发明首次发现番泻苷C可通过抑制酪氨酸酶的活性发挥抑制黑色素生成的能力,具有美白淡斑的作用;本发明提供的含番泻苷C的美白淡斑精华液、面霜与面膜具有美白淡斑的功效,且具有较高的安全性。
Claims (10)
1.番泻苷C的应用,其特征在于,番泻苷C在制备美白和/或淡斑护肤品中的应用,所述番泻苷C具有如式Ⅰ所示结构:
式Ⅰ。
2.如权利要求1所述应用,其特征在于,番泻苷C具有抑制皮肤黑色素形成的作用。
3.一种美白淡斑护肤品,其特征在于,有效成分包括番泻苷C。
4.如权利要求3所述美白淡斑护肤品,其特征在于,所述护肤品包括精华液、面霜、面膜、乳液、爽肤水、原液。
5. 如权利要求3所述美白淡斑护肤品,其特征在于,一种美白淡斑精华液,包括以下按质量百分含量计的组分:卡波姆0.1-0.5%,透明质酸钠0.3-0.7%,甘油3-5%,1,3-丙二醇5-7%,丁二醇3-5%,甜菜碱1-3%,三乙醇胺0.4-0.6%,抗坏血酸磷酸酯镁0.1-0.3%,辛甘醇0.4-0.6%,番泻苷C 1-3%,烟酰胺1-3%,余量为去离子水。
6.如权利要求5所述美白淡斑护肤品,其特征在于,所述美白淡斑精华液的制备方法,包括如下步骤:将所述配方量的卡波姆、透明质酸钠、甘油、1,3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱以及去离子水置入容器中加热到80-85℃,搅拌保温至完全溶解,加入三乙醇胺,逐步冷却至40-45℃然后再加入抗坏血酸磷酸酯镁搅拌均匀,最后加入番泻苷C、烟酰胺和辛甘醇后搅拌保温15-20分钟,得到美白淡斑精华液。
7. 如权利要求3所述美白淡斑护肤品,其特征在于,一种美白淡斑面霜,包括以下按质量百分含量计的组分:甜杏仁油3-5%,橄榄油3-5%,葡萄酒籽油3-5%,维生素E 0.3-0.5%,大豆卵磷脂2-5%,甘油3-5%,玻尿酸4-6%,冰晶0.3-0.5%,番泻苷C 0.3-0.5%,余量为去离子水。
8.如权利要求7所述美白淡斑护肤品,其特征在于,所述美白淡斑面霜的制备方法,包括如下步骤:按所述配方量称取甜杏仁油、橄榄油、葡萄酒籽油、维生素E和大豆卵磷脂进行混合,搅拌均匀,加热到45-50℃,冷却到室温后得到油相原料;按所述配方量称取甘油、玻尿酸、冰晶、番泻苷C和去离子水加入到上述油相原料中,搅拌均匀,加热到40-45℃,冷却到室温后静置,均质至完全乳化均匀得到美白淡斑面霜。
9. 如权利要求3所述美白淡斑护肤品,其特征在于,一种美白淡斑面膜,包括以下按质量百分含量计的组分:羧甲基纤维素纳0.05-0.2%,黄原胶0.05-0.2%,丁二醇0.4-1.8%,1,2已二醇0.4-1.8%,葡萄籽油0.4-1.0%,甘油0.4-1.0%,透明质酸钠0.3-0.7%,山梨坦倍半油酸酯0.2-0.4%,肌肽0.2-0.5%,维生素C乙基醚0.2-0.5%,虾青素0.5-1.0%,烟酰胺0.3-0.5%,番泻苷C 0.3-0.5%,乙二胺四乙酸二钠0.8-1.4%,加入柠檬酸调节pH值至5.8-6.5,余量为去离子水。
10.如权利要求9所述美白淡斑护肤品,其特征在于,所述美白面膜的制备方法,包括如下步骤:按配比称取各成分原料;将去离子水加热到50-60℃,然后加入羧甲基纤维素纳、黄原胶;再将水温继续加热到80-90℃,加入丁二醇、1,2已二醇,搅拌;将水温降低到40-50℃,加入葡萄籽油、甘油、透明质酸钠、山梨坦倍半油酸酯,搅拌;保持水温不变,加入肌肽、维生素C乙基醚、虾青素、烟酰胺、番泻苷C,搅拌至完全溶解;保持水温不变,加入乙二胺四乙酸二钠,搅拌至完全溶解均匀;加入柠檬酸调节pH值至5.8-6.5,得到精华液;将面膜纸浸入制好的精华液中,待充分吸取精华液后,得到美白淡斑面膜。
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