CN117210409A - 一种药物组合及其应用 - Google Patents
一种药物组合及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117210409A CN117210409A CN202210560221.9A CN202210560221A CN117210409A CN 117210409 A CN117210409 A CN 117210409A CN 202210560221 A CN202210560221 A CN 202210560221A CN 117210409 A CN117210409 A CN 117210409A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vaccinia virus
- oncolytic vaccinia
- recombinant oncolytic
- temozolomide
- pharmaceutical
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims abstract description 72
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 claims abstract description 63
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 35
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 28
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 19
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027193 Meningioma malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 208000030316 grade III meningioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- -1 pellicle Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 claims 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 7
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 6
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 5
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 5
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 description 5
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 231100000226 haematotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 4
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 206010059282 Metastases to central nervous system Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108010041388 Ribonucleotide Reductases Proteins 0.000 description 2
- 102000000505 Ribonucleotide Reductases Human genes 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 206010002224 anaplastic astrocytoma Diseases 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 201000007983 brain glioma Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013400 design of experiment Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 208000006735 Periostitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 208000024055 brain glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000011609 brain glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000003460 periosteum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种药物组合及其应用,特别涉及一种含有重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂和含有替莫唑胺的药物制剂的组合及其应用;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK‑RR‑双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合,特别涉及一种含有重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂和含有替莫唑胺的药物制剂的组合及其应用;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
背景技术
现代研究发现,天然病毒株感染人体后能溶解破坏肿瘤细胞,引起肿瘤的消退。科学家将这类病毒称为溶瘤病毒。这些天然病毒株经过基因改造优化后,具有肿瘤选择性杀伤的特异性,这些可以被应用于抗肿瘤的病毒包括麻疹病毒、脊髓灰质炎病毒、痘苗病毒、腺病毒、单纯胞疹病毒、牛痘病毒等等。
溶瘤病毒发挥对肿瘤细胞的杀伤作用主要通过以下途径:
(1)直接裂解肿瘤细胞;
(2)病毒感染的肿瘤细胞表达相关信号并释放大量细胞因子造成免疫细胞对肿瘤细胞浸润;
(3)裂解的肿瘤细胞释放特异性抗原和免疫相关因子,诱发机体产生抗肿瘤免疫反应;
(4)溶瘤病毒可以作为载体携带肿瘤抑制基因、促凋亡基因、抗血管生成基因、自杀基因和免疫调节基因,调控肿瘤免疫耐受微环境。
经过基因工程技术处理过的溶瘤病毒已经失去了病源性,但是仍保留感染性,可以只针对肿瘤细胞进行感染,裂解癌细胞,因此在人体内是安全的,有强大的杀瘤效果,既可以应用于全身也可以用于局灶治疗。
本申请的重组溶瘤痘苗病毒是以野生型哥本哈根株痘苗病毒为基础,通过敲除其部分胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK)基因(J2R)和部分核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotide Reductase,RR)基因(I4L),既保留了痘苗病毒在肿瘤细胞中的复制能力,又明显降低了其在正常细胞上的复制能力,同时,插入的外源基因(AF312392)是一种自杀基因,增加了其肿瘤杀伤效果。有关本申请的重组溶瘤痘苗病毒的结构和制备方法等见中国专利:CN102703389。本申请的重组溶瘤痘苗病毒优选使用Hela悬浮细胞作为生产用细胞基质,采用无血清的培养基进行细胞培养和病毒扩增。在扩增后通过过滤、超滤和层析等步骤纯化而得到的。
本申请的重组溶瘤痘苗病毒可以被制备成注射剂形式,也可以根据使用方式的不同,改变其剂型,如局部给药或灌注给药。
替莫唑胺(TMZ)为一种已经上市的抗肿瘤剂,其结构式如下:
现有替莫唑胺有口服和注射制剂形式,如胶囊剂和注射剂,主要用于治疗胶质母细胞瘤(GBM)或间变性星形细胞瘤(AA)。目前,替莫唑胺胶囊的服用方法为:每一疗程28天,最初剂量为按体表面积口服一次150mg/㎡,一日1次,在28天为一治疗周期内连续服用5天。如果治疗周期内,第22天与第29天(下一周期的第一天)测得的绝对中性粒细胞数(ANC)≥1.5×109/L,血小板数为≥100×109/L时,下一周期剂量为按体表面积口服一次200mg/㎡,一日1次,在28天的治疗周期内连续服用5天。在治疗期间,第22天(首次给药后的21天)或其后48小时内检测病人的全血数,之后每星期测定一次,直到测得的绝对中性粒细胞数(ANC)≥1.5×109/L,血小板数≥100×109/L时,再进行下一周期的治疗。除出现毒性外,以后治疗的剂量维持在每日治疗期间200mg/㎡。如血常规检查不满足以上标准或出现符合CTCAE5.0标准的非血液学毒性(脱发、恶心和呕吐除外),需暂停TMZ给药至毒性恢复。如出现血液学毒性如绝对中性粒细胞数(ANC)≤1.5×109/L或血小板数≤50×109/L,需按照提莫唑胺说明书要求进行减量至100mg/㎡或更低,如果降低剂量给药后仍出现同样的血液学毒性或符合CTCAE 5.0标准的非血液学毒性(脱发、恶心和呕吐除外)应终止治疗。
联合用药是治疗肿瘤的一种常用方式,但不同药物联合的效果差异较大,找到具有协同增效作用的联合用药方式需要大量的试验研究。
发明内容
本发明在试验的基础上,发明一种药物组合,所述药物为重组溶瘤痘苗病毒和替莫唑胺。其中,本发明所述的重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒(以下简称为本申请的重组溶瘤痘苗病毒)。
本发明所述的药物组合,包括含有本申请的重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂和含有替莫唑胺的药物制剂的组合或联合其他治疗如放疗等组合应用。
本发明所述的药物组合,包括将两种药物包装在一起,作为组合包装,所述组合包装中含有本申请的溶瘤痘苗病毒的注射剂。所述组合包装中含有替莫唑胺的药物制剂选自任何一种可服用的药物剂型。如选自:注射剂,片剂,胶囊剂,颗粒剂,滴丸剂,膜剂,粉剂,膏剂。优选:注射剂,片剂,胶囊剂。
本发明所述的药物组合,其中,所述组合中,包括1-5次临床用量的本申请的重组溶瘤痘苗病毒药物制剂和1-5次临床用量的替莫唑胺药物制剂。
如1瓶本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂和1瓶替莫唑胺药物制剂,组合成一套药物,两种药物可分别使用,也可以混合后使用,分别使用时,可以同时应用,也可以错时应用,以取得良好疗效为准。
本发明进一步提供本申请的重组溶瘤痘苗病毒和替莫唑胺的组合在制备治疗原发性和继发性中枢神经系统肿瘤的药物中的组合应用。
其中,所述原发性中枢神经系统肿瘤包括但不限于恶性脑胶质瘤、恶性脑膜瘤、颅内恶性淋巴瘤。所述继发性中枢神经系统肿瘤,包括但不限于肺癌脑转移、乳腺癌脑转移等。
所述应用,包括本申请的重组溶瘤痘苗病毒和替莫唑胺两种药物联合应用,其中应用时,两种药物活性成份的使用量分别为两者具有协同作用的剂量。
本发明所述的药物组合应用,包括本申请的溶瘤痘苗病毒药物制剂和替莫唑胺不同剂型联合应用。其中,所述的本申请的重组溶瘤痘苗病毒药物制剂中含有本申请的重组溶瘤痘苗病毒1×106pfu/mL-1×1010pfu/mL,替莫唑胺药物制剂中含有替莫唑胺100-400mg。
本申请的重组溶瘤痘苗病毒,优选采用HeLa-F细胞法生产,具体制备过程如下:HeLa-F细胞,加入培养液和痘苗病毒,离心,收获细胞,破碎细胞,离心,取上清;其中,所述培养液为EMEM培养液,加入痘苗病毒时,MOI为0.05-0.15,所述培养的方法是:36~38℃、3%~10%CO2条件下培养24~96小时。
本发明的技术方案是通过试验获得的,有关试验如下:
本申请的重组溶瘤痘苗病毒瘤内注射单药或联合替莫唑胺治疗脑胶质瘤的体内抗肿瘤活性研究
1、实验目的
本试验的目的是评价测试药物本申请的重组溶瘤痘苗病毒单药或与替莫唑胺(TMZ)联用在原位脑胶质瘤肿瘤模型中的体内抗肿瘤活性。
2、实验设计
表1:实验设计
注:IT,瘤内注射;IP,腹腔注射;Q1,单次给药;QD,一次给药/天。
3、实验材料
BALB/c Nude小鼠,雌性,8-10周(肿瘤细胞接种时的小鼠周龄),体重约20g。本实验使用所有BALB/c Nude小鼠均通过有实验动物生产许可证的单位订购,委托有实验动物使用许可证的单位进行饲养及实验。
4、供试品
本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射液,包装规格:1.0×108pfu/0.5mL/支,注射液,-20℃密封保存。
TMZ,使用商品化的TMZ(原料药),4℃保存,呈粉末状,使用时用PBS配制,超声溶解。
PBS,由武汉普诺赛公司生产(WH1021R281),4℃保存。
5、实验方法和步骤
细胞来源:U87-luci-mcherry细胞,可稳定表达萤光素酶以及荧光蛋白mcherry,其中U87细胞为人脑胶质母细胞瘤细胞,是目前胶质母细胞瘤体外以及体内模型构建最常见的细胞。
细胞培养条件:所有细胞培养在37℃细胞培养箱中,5%CO2,湿度饱和。U87-luci-mcherry细胞使用DMEM完全培养基培养,每两天换一次液,按常规流程传代,每天观察细胞生长状态至细胞指数增长期。
细胞冻存:细胞消化下来,离心弃上清后用细胞冻存液重悬后放入细胞冻存管中,并放入-80℃保存,如长期保存则放入液氮中保存。
细胞复苏:将细胞从-80℃冰箱/液氮取出后迅速放入37℃水浴锅中解冻,解冻后取细胞液至入15mL离心管中离心后用DMEM完全培养基重悬,放入培养皿中培养。
肿瘤种植前细胞准备:
(1)待细胞在指数生长期时,按照常规流程消化细胞(0.25%胰酶消化两分钟)。细胞消化后,用5mL完全培养基停止消化,并1200rmp离心4分钟。
(2)弃上清后,用少量无血清培养基重悬细胞沉淀(用量视细胞量以及拟接种动物量决定)。
(3)重悬细胞稀释后,用细胞计数板计数,计算出每只裸鼠注射50万个细胞需要注射的体积量。
(4)将细胞转移到1.5mL EP管后,放入冰盒,并且带入动物房。
肿瘤移植:
(1)完成手术前准备(立体定位仪摆设,热毯预热,器械消毒)。
(2)腹腔注射avertin(300-375mg/kg)将小鼠麻醉。
(3)小鼠固定于立体定位仪中,垫热毯以保持体温。
(4)消毒后切开皮肤暴露颅骨,并刮去骨膜。
(5)找到前囟,并以前囟为参考点往后在颅骨上钻孔。
(6)摇匀细胞悬液,用微量进样器吸取5-10μL的细胞悬液,并将注射器使用针头固定,从脑皮层缓慢进针。
(7)缓慢注射细胞注射完把针留在颅内滞留一定时间。
(8)缓慢退针,用缝合线缝合伤口,放于热毯中复苏。
(9)待其全部苏醒后放于笼内正常饲养。
动物分组及实验步骤:
(1)术前禁食水。
(2)裸鼠随机分组,分组当天进行给药。
(3)腹腔注射avertin(300-375mg/kg)将小鼠麻醉。
(4)麻醉以后,将小鼠固定于立体定位仪,热毯维持体温。
(5)皮肤消毒后切开头皮,暴露颅骨。
(6)以前囟为参考点在颅骨上钻孔。
(7)微量进样器吸取5-10μL的病毒悬液,并将进样器使用针头固定,从脑皮层缓慢进针。缓慢注射病毒,注射完毕后。缓慢退针,用缝合线缝合,放于热毯中复苏。待其全部苏醒后放于笼内正常饲养。
(8)每天称量体重,观察小鼠状态。
6、实验观察
给药后监测包括了药物对动物正常行为的影响,生存情况。实验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。
7、实验终点
肿瘤种植后进行45天的监测,期间若出现体重减少超过原体重的15%或出现肿瘤信号强度超过4×109photon/sec、生存状态差等情况则提前结束实验监测,对实验动物进行安乐死。
8、统计分析
所有实验结果以肿瘤活体成像荧光定量数值±SEM(平均标准误差)表示。不同组间的统计分析选择最后3次成像的荧光定量值。单因素方差分析和Kruskal-Wallis检验用于比较各组之间组内差异。采用Kaplan-Meier法计算生存曲线及分析,差异的比较采用Log-rank检验。
所有的数据均用SPSS 21.0进行分析。p<0.05为具有显著性差异。
9、实验结果
PBS组、肿瘤增长较快且存活时间较短,如图1所示,12天实验动物死亡/安乐终点,图2、图3为肿瘤荧光强度,图4为小鼠生存情况。表2为治疗第12天的TGI(目标群体指数)及统计分析情况,表3为生存期统计分析情况,从表中可以得出TMZ单药组TGI为98.43%(p<0.01),本申请的重组溶瘤痘苗病毒TGI为98.25%(p<0.01),本申请的重组溶瘤痘苗病毒联合TMZ组TGI为99.99%(p<0.01),联合用药组与本申请的重组溶瘤痘苗病毒单药相比明显延长生存期,且联合用药组可实现肿瘤消退。
表2:TGI、T/C值统计分析
注:中SEM表示标准误差,给药后12天;IT,瘤内给药;IP,腹腔给药。
表3:生存期统计分析
注:P≤0.05,生存期统计分析结果有统计学意义。
10、结论
本申请的重组溶瘤痘苗病毒瘤内给药单药、TMZ单药对颅内胶质瘤肿瘤生长均有明显抑制作用,TMZ与本申请的重组溶瘤痘苗病毒联用有明显的协同作用,明显延长了小鼠的生存期,实现小鼠肿瘤消退。
附图说明
图1:小鼠原位肿瘤活体成像图:从做至右分别为:PBS组、TMZ组、本申请的重组溶瘤痘苗病毒组、本申请的重组溶瘤痘苗病毒+TMZ组
图2:小鼠肿瘤荧光强度均值(标注为23天组间对比)
图3:小鼠肿瘤荧光强度定量结果柱状图
图4:小鼠生存曲线
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。
实施例1
组合包装
一瓶本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,规格1.0×108pfu/0.5mL/支,替莫唑胺胶囊剂20粒,规格100mg/粒,组合包装在一个包装盒中,包装盒中还包括药品说明书。
实施例2
药物组合
五瓶本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,规格1.0×106pfu/0.5mL/支,替莫唑胺胶囊剂10粒,规格100mg/粒,作为一套组合药物应用,附药品说明书。
实施例3
一瓶本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,规格1.0×1010pfu/0.5mL/支,替莫唑胺胶囊剂40粒,规格50mg/粒,组合包装在一个包装盒中,包装盒中还包括,药品说明书。
实施例4
一瓶本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,规格1.0×108pfu/0.5mL/支,替莫唑胺胶囊剂100粒,规格20mg/粒,组合包装在一个包装盒中,包装盒中还包括药品说明书。
实施例5
采用本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂和替莫唑胺胶囊剂联合用药治疗胶质母细胞瘤(GBM)。
瘤内注射本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,注射量为实施例1-4中治疗的组合剂量,注射当天,按照说明书口服替莫唑胺胶囊100-200mg/m2,每日1次,持续5天,一个疗程为28天。
实施例6
采用本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂和替莫唑胺胶囊剂联合用药治疗间变性星形细胞瘤(AA)。
瘤内注射本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,注射量为实施例1-4中治疗的组合剂量,注射当天,按照说明书口服替莫唑胺胶囊100-200mg/m2,每日1次,持续5天,一个疗程为28天。
实施例7
采用本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂和替莫唑胺胶囊剂联合用药治疗继发性中枢神经系统肿瘤:肺癌脑转移。
瘤内注射本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,注射量为实施例1-4中治疗的组合剂量,注射当天,按照说明书口服胶囊100-200mg/m2,每日一次,持续5天,一个疗程为28天。
实施例8
采用本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂和替莫唑胺胶囊剂联合用药治疗继发性中枢神经系统肿瘤:乳腺癌脑转移。
瘤内注射本申请的重组溶瘤痘苗病毒注射剂,注射量为实施例1-4中治疗的组合剂量,注射当天,按照说明书口服替莫唑胺胶囊100-200mg/m2每日1次,5天,一个疗程为28天。
Claims (10)
1.一种药物组合,所述药物为重组溶瘤痘苗病毒和替莫唑胺;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
2.根据权利要求1所述的药物组合,包括含有重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂和含有替莫唑胺的药物制剂的组合;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
3.根据权利要求1所述的药物组合,包括含有重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂和含有替莫唑胺的药物制剂的联合应用,或者与放疗,化疗药物在抗肿瘤治疗中的联合应用;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
4.根据权利要求2或3所述的药物组合,其中,所述组合包装中含有重组溶瘤痘苗病毒的药物制剂为重组溶瘤痘苗病毒注射液;其中,所述组合包装中含有替莫唑胺的药物制剂选自任何一种可服用的药物剂型;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒注射液为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
5.根据权利要求4所述的药物组合,所述组合包装中含有替莫唑胺的药物制剂选自:注射剂,片剂,胶囊剂,颗粒剂,滴丸剂,膜剂,粉剂,膏剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合,所述组合包装中含有替莫唑胺的药物制剂选自:注射剂,片剂,胶囊剂。
7.根据权利要求2所述的药物组合,其中,所述组合包装中,包括1-5次临床用量的重组溶瘤痘苗病毒药物制剂和1-5次临床用量的替莫唑胺药物制剂;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
8.根据权利要求2所述的药物组合,其中,所述1次临床用量的重组溶瘤痘苗病毒药物制剂中含有重组溶瘤痘苗病毒1×106pfu/ml-1×1010pfu/ml,1次临床用量的替莫唑胺药物制剂中约含有替莫唑胺100-400mg;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
9.重组溶瘤痘苗病毒和替莫唑胺的组合在制备治疗原发性中枢神经系统肿瘤如恶性脑胶质瘤、恶性脑膜瘤、颅内恶性淋巴瘤和继发性中枢神经系统肿瘤如肺癌脑转移、乳腺癌脑转移的药物中的应用;其中,所述重组溶瘤痘苗病毒为TK-RR-双敲除的,并且插入外源基因AF312392的溶瘤痘苗病毒。
10.权利要求1-9中所述的重组溶瘤痘苗病毒,采用HeLa-F细胞法生产,具体制备过程如下:HeLa-F细胞,加入培养液和痘苗病毒,离心,收获细胞,破碎细胞,离心,取上清;其中,所述培养液为EMEM培养液,加入痘苗病毒时,MOI为0.05-0.15,所述培养的方法是:36~38℃、3%~10%CO2条件下培养24~96小时。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210560221.9A CN117210409A (zh) | 2022-05-23 | 2022-05-23 | 一种药物组合及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210560221.9A CN117210409A (zh) | 2022-05-23 | 2022-05-23 | 一种药物组合及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117210409A true CN117210409A (zh) | 2023-12-12 |
Family
ID=89039425
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210560221.9A Pending CN117210409A (zh) | 2022-05-23 | 2022-05-23 | 一种药物组合及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117210409A (zh) |
-
2022
- 2022-05-23 CN CN202210560221.9A patent/CN117210409A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110934873B (zh) | 靶向组织微环境中衰老细胞的抗衰老药物d/s及其应用 | |
CN111084787A (zh) | 一种抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用 | |
CN105338973A (zh) | 使用辅酶q10联合疗法治疗癌症 | |
US20190307794A1 (en) | Method for inducing transdifferentiation of immune cells based on exosomes | |
CN110934879A (zh) | 靶向组织微环境中衰老细胞的抗衰老药物d/a及其应用 | |
US20210128639A1 (en) | Cell preparation for treating brain tumor | |
CN116769723B (zh) | 一种gd2嵌合抗原受体修饰的t细胞及其应用 | |
AU2020435555A1 (en) | Drug for preventing and/or treating brain tumor and application thereof | |
JP2020504077A (ja) | 光誘発性ウイルス療法の遠隔制御 | |
CN117210409A (zh) | 一种药物组合及其应用 | |
CN109793727A (zh) | 一种有效抗恶性肿瘤的药物组合物及其应用 | |
CN102526038B (zh) | 替莫唑胺的脑靶向药物组合物及其应用 | |
CN115177618A (zh) | Flt3抑制剂在制备治疗急性髓系白血病药物中的应用 | |
CN111249274B (zh) | 银杏内酯b在制备胶质瘤细胞活性抑制剂中的应用 | |
KR102236038B1 (ko) | 신규 프리오노이드병용 치료약 | |
CN116983310B (zh) | 一种治疗肝癌的药物组合物及其应用 | |
WO2017036284A1 (zh) | Epac直接或间接激动剂与溶瘤病毒的联合应用 | |
WO2022127788A1 (zh) | 乐伐替尼和Aurora-A激酶抑制剂在制备抑制癌症的药物中的应用 | |
AU2019101780A4 (en) | Use of SPHK2 inhibitor as drug for repairing bone marrow hematopoietic system injury or treating bone marrow hematopoietic dysfunction | |
CN102188413A (zh) | 特丁基对苯二酚在制备治疗地中海贫血的药物中的用途 | |
WO2019151514A1 (ja) | アルベンダゾール含有単球分化誘導剤 | |
CA3190683A1 (en) | Method and composition of upregulating rna interference process | |
CN106366080A (zh) | 一种抗黑色素瘤的化合物及其应用 | |
CN117159525A (zh) | Cert抑制剂在制备治疗急性髓系白血病的药物中的应用 | |
CN115869340A (zh) | 一种胶质瘤治疗性小胶质细胞亚群及其诱导方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication |