CN117205130B - 滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用，提供一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡在用于制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为108~1012Particles/mL；所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡来源于滨海刺芹愈伤组织培养液。提取方法为从培养液中分离获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液，浓缩，纯化，获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡。本发明获得的滨海刺芹愈伤组织类囊泡能够抑制ROS生成，有较好的抗氧化功效。本发明获得的滨海刺芹愈伤组织类囊泡能抑制COX‑2表达，说明有较好的抗炎功效。
Description
技术领域
本发明属于护肤品或药品技术领域，涉及一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用，皮肤产品包括：氧化或抗炎皮肤产品。
背景技术
滨海刺芹，属伞形科刺芹属，是一种欧洲原生的海岸植物，生长于海岸沙地和卵石滩等地，长期承受土壤养分含量低、霜冻、强碱风、高温和日晒等极端环境，使其进化成为一种生命力极其强大的盐生植物，富含高活性类黄酮、多酚、多元醇脂肪酸等。在医学上，经常被用作镇痛消炎的药物，且其强大的抗氧化能力，也受到了大量化妆品的青睐。
类囊泡是由细胞分泌释放到外部环境中，直径为40-150nm的纳米级囊泡，具有磷脂双分子层结构，内含mRNA、miRNA、蛋白质等。能够参与细胞间通讯，调节受体细胞的基因表达、刺激信号通路等作用。随着研究的深入，也发现了植物类囊泡，通过透射电镜检测，其形态结构与动物来源外泌体类似，同样具有磷脂双分子层结构，含有mRNA、miRNA和蛋白质等成分。植物源性类囊泡不仅来源广泛，安全无毒，并且免疫原性低，同样能够促进物种间的生物信息交流。
目前，植物类囊泡的提取主要通过对整株植物的功效部位或者愈伤组织经过破碎后提取获得。但这种方法效率低，需要大量的整株植物的功效部位，并且通过破碎后获得植物类囊泡的纯度也较低。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法及其在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用。
本发明采用一种使用切向流柱层析方法从滨海刺芹愈伤组织培养液中提取滨海刺芹愈伤组织类囊泡，并对类囊泡进行了抗氧化和抗炎功效评价，探索其在护肤品中应用的可能性。
本发明的发明人发现愈伤组织培养液中含有大量愈伤组织分泌的类囊泡，相比处理整株植物或愈伤组织，获得的类囊泡纯度更高，且不含有机溶剂，对皮肤刺激小。通过验证发现滨海刺芹愈伤组织类囊泡与其愈伤组织或提取物相比，具有更好的抗氧化或美白功效。
解决方案
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
第一方面，本发明提供一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用，可选地，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡来源于滨海刺芹愈伤组织培养液。
进一步地，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为108~1012Particles/mL，可选地为109~1012Particles/mL，可选地为1010~1012Particles/mL，可选地为1011~1012Particles/mL。
进一步地，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡能抑制COX-2表达和/或抑制ROS生成，可选地，抗氧化或抗炎皮肤产品为抑制COX-2表达和/或抑制ROS生成的产品。
进一步地，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡采用如下方法制备：
1）将滨海刺芹愈伤组织进行光照培养，收集培养液；
2）从步骤1）的培养液中分离获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液，浓缩，纯化，获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡。
第二方面，提供一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡的提取方法，包括如下步骤：
1）将滨海刺芹愈伤组织进行光照培养，收集培养液；
2）从步骤1）的培养液中分离获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液，浓缩，纯化，获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡。
上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液的方式包括离心、取离心上清液过滤获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液。
上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，中空纤维的截留分子量≥100KD，可选地为100KD~800KD，可选地为100KD~750KD，可选地为100KD~300KD。
上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，过滤方法采用0.2μm至1μm间不同孔径（可选地孔径为0.6μm~1μm，可选地孔径为0.8μm~1μm，优选孔径为1μm）的深层过滤器。
上述第一方面或第二方面中，步骤2）中，浓缩倍数为50~200倍或80~150倍或100~150倍。
上述第一方面或第二方面中，所述滨海刺芹愈伤组织通过将滨海刺芹植株的部分组织诱导获得。
上述第一方面或第二方面中，滨海刺芹植株的部分组织包括植株的顶端和腋生组织中的一种或两种。
上述第一方面或第二方面中，所述滨海刺芹愈伤组织经诱导获得，诱导培养基包括：固体MS培养基，还添加有0.5-2mg/L3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸和0.5-2mg/L噻苯隆。具体地：
可选地，叶腋分支的方法获得外植体茎芽，通过培养获得外植体，外植体培养基以MS培养基为基础，还含有琼脂7.6g/L，6-苄基腺嘌呤（BAP）2.0mg/L，II吲哚乙酸（IAA）1mg/L和赤霉素（GA3）2mg/L。
可选地，培养条件为：55±2μmol/m2s光子照度，16±2h光照/8±2h黑暗的光照循环，保持温度在21±2℃的条件下培养。
可选地，外植体茎芽培养40天后，获得大量新生的外植体，取其叶片置于50mL固体MS培养基（添加1mg/L3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸和1mg/L噻苯隆）培养3周，得到愈伤组织块。
上述第一方面或第二方面中，步骤1）中，光照培养采用悬浮培养基，悬浮培养基包括：1.0-4.0mg/L2,2-双(3-氨基-4-羟基苯基)丙烷（BAP），1-5mg/L吲哚-3-乙酸（IAA）、1-5mg/L赤霉素（GA3）和100mg/L聚乙烯吡咯烷酮，可选地为1.0-4.0mg/L2,2-双(3-氨基-4-羟基苯基)丙烷（BAP），0.5-2.0mg/L吲哚-3-乙酸（IAA）、1-4mg/L赤霉素（GA3）和80-120mg/L聚乙烯吡咯烷酮。可选地，继续继代培养，培养条件为：55±2μmol/m2s光子照度,16±2h光照/8±2h黑暗的光照循环，保持温度在25±2℃的条件下培养。
第三方面，提供一种含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的抗氧化或抗炎皮肤产品，包括第二方面的提取方法提取的滨海刺芹愈伤组织类囊泡。
进一步地，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为108~1012Particles/mL或1010~1012Particles/mL。
有益效果
1）本发明从滨海刺芹愈伤组织培养液中利用切向流超滤和色谱法结合，提取培养液中的类囊泡，实现大规模滨海刺芹愈伤组织类囊泡工业化生产。且本发明的滨海刺芹愈伤组织类囊泡对细胞没有毒性，因此可以选择提取到的最高浓度，提高其应用安全性。
2）本发明获得的滨海刺芹愈伤组织类囊泡能够抑制ROS生成，有较好的抗氧化功效。
3）本发明获得的滨海刺芹愈伤组织类囊泡能抑制COX-2表达，说明有较好的抗炎功效。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1：本发明的滨海刺芹愈伤组织类囊泡提取工艺流程图。
图2：本发明的测试例1的实施例1~4的滨海刺芹愈伤组织类囊泡电镜图。
图3：本发明的测试例1的cck-8检测滨海刺芹愈伤组织类囊泡/提取物的安全浓度。
图4：本发明的测试例1的滨海刺芹愈伤组织类囊泡的SEC分析色谱图。
图5：本发明的试验例1的各组ROS流式检测结果。各条曲线代表不同组的荧光强度，其中A为实施例3，B为对比例5，C为实施例3和对比例5的ROS抑制率结果。
图6：本发明的试验例2的各组Raw264.7细胞COX-2的表达情况。
具体实施方式
为更好的说明本发明，现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施案例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。除非特殊说明，以下所用到的各种试剂均为商品化试剂，其中所用的化学试剂不低于分析纯。
以下实施例中，滨海刺芹愈伤组织的培养方法可以为：
I）滨海刺芹愈伤组织培养：
将滨海刺芹植株的顶端和腋生组织用于外植体培养。分离收集后，在流动水中冲洗30min，在70%乙醇中浸泡30s，用含有2滴tween(吐温) 20的5%的次氯酸钠溶液冲洗8min，再用ddH2O清洗3遍，置于含有50mLMS培养基的锥形瓶中。55μmol/m2s光子照度，16h光照/8h黑暗的光照循环，保持温度在21±2℃的条件下培养。通过叶腋分支的方法获得外植体茎芽，置于含有50mL固体MS培养基（含有琼脂7.6g/L，6-苄基腺嘌呤（BAP）2.0mg/L，II吲哚乙酸（IAA）1mg/L和赤霉素（GA3）2mg/L）的250mL锥形瓶中培养。40天后，获得大量新生的外植体，取其叶片置于50mL固体MS培养基（添加1mg/L3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸和1mg/L噻苯隆）培养3周，得到愈伤组织块。
2）滨海刺芹愈伤组织的大规模培养：
将滨海刺芹愈伤组织分成3mm2的大小进行悬浮培养，调节PH为5.8，在转速120r/min条件下。初始培养基体积为150mL（含有2.0mg/LBAP，1mg/LIAA、2mg/LGA3和100mg/L聚乙烯吡咯烷酮）的悬浮培养基中，每20d进行一次继代培养。培养条件为55μmol/m2s光照强度，16h光照/8h黑暗的光照循环，温度25℃。
Ⅱ)滨海刺芹愈伤组织类囊泡提取
将收集的滨海刺芹愈伤组织培养液经0.2μm至1μm间不同孔径的深层过滤器得到澄清液。使用切向流法将其浓缩，使用截流分子量为100Kd的中空纤维或截流分子量为300Kd的中空纤维或截流分子量为500Kd的中空纤维或截流分子量为750Kd的中空纤维浓缩到一定的体积后（浓缩倍数为50~200倍），使用该体积5-10倍的1×PBS进行换液，得到浓缩液。最后将得到的浓缩液通过SEC柱纯化得到所需滨海刺芹愈伤组织类囊泡。
滨海刺芹愈伤组织类囊泡安全浓度
将得到的滨海刺芹愈伤组织类囊泡及提取物用完全培养基稀释10、100、1000倍后，加到HaCaT细胞中共孵育24h。加入cck-8，能够被线粒体内脱氢酶还原成橙黄色甲臜产物。细胞增殖越多颜色越深，毒性越大，则颜色越浅。通过结果得到滨海刺芹愈伤组织类囊泡及提取物的最大安全浓度，根据cck8实验结果，本发明的滨海刺芹愈伤组织类囊泡对细胞没有毒性，因此可以选择提取到的最高浓度；而滨海刺芹提取物在浓度时5%对细胞有毒性，所以选择0.5%的提取物浓度作为最大安全浓度，作为后续功效实验的剂量。
滨海刺芹愈伤组织类囊泡抗氧化功效评价
通过H2O2对人角质形成细胞（HaCaT）进行刺激，提高细胞内活性氧（ROS）的含量，会对细胞造成氧化损伤。而当细胞经过滨海刺芹愈伤组织类囊泡预处理后，ROS的含量明显低于没有处理过的细胞，说明滨海刺芹愈伤组织类囊泡能够抑制ROS生成，有较好的抗氧化功效。
滨海刺芹愈伤组织类囊泡抗炎功效评价
在LPS诱导Raw264.7细胞炎症模型上，通过Western Blot实验验证滨海刺芹愈伤组织类囊泡对细胞环氧化酶-2（COX-2）表达的影响，发现其能抑制COX-2表达，说明有较好的抗炎功效。
将愈伤组织培养液按照不同的方法分离获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡，部分实施例如下。
实施例1
一次性收集滨海刺芹愈伤组织的培养液5L，使用1μm的深层过滤器得到澄清液。将澄清液通过截流分子量为100Kd的中空纤维浓缩至50mL，使用250mL的1×PBS换液，最后将50mL浓缩液通过SEC柱纯化，得到滨海刺芹愈伤组织类囊泡50mL。NTA(纳米颗粒跟踪分析仪)测量滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
实施例2
一次性收集滨海刺芹愈伤组织的培养液5L，使用1μm的深层过滤器得到澄清液。将澄清液通过截流分子量为300Kd的中空纤维浓缩至50mL，使用250mL的1×PBS换液，最后将50mL浓缩液通过SEC柱纯化，得到滨海刺芹愈伤组织类囊泡50mL。NTA测量滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
实施例3
一次性收集滨海刺芹愈伤组织的培养液5L，使用1μm的深层过滤器得到澄清液。将澄清液通过截流分子量为500Kd的中空纤维浓缩至50mL使用250mL的1×PBS换液，最后将50mL浓缩液通过SEC柱纯化，得到滨海刺芹愈伤组织类囊泡50mL。NTA测量滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
实施例4
一次性收集滨海刺芹愈伤组织的培养液5L，使用1μm的深层过滤器得到澄清液。将澄清液通过截流分子量为750Kd的中空纤维浓缩至50mL，使用250mL的1×PBS换液，最后将50mL浓缩液通过SEC柱纯化，得到滨海刺芹愈伤组织类囊泡50mL。NTA测量滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
对比例1
与实施例1的区别在于，使用0.2μm的深层过滤器得到澄清液，其余操作条件与实施例1相同。NTA测量对比例1的滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
对比例2
与实施例2的区别在于，使用0.2μm的深层过滤器得到澄清液，其余操作条件与实施例2相同。NTA测量对比例2的滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
对比例3
与实施例3的区别在于，使用0.2μm的深层过滤器得到澄清液，其余操作条件与实施例3相同。NTA测量对比例3的滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
对比例4
与实施例4的区别在于，使用0.2μm的深层过滤器得到澄清液，其余操作条件与实施例4相同。NTA测量对比例4的滨海刺芹愈伤组织类囊泡的粒子数。
对比例5（滨海刺芹提取物）
将上述培养的滨海刺芹愈伤组织细胞冷冻干燥得到滨海刺芹愈伤组织细胞粉末，取10g的滨海刺芹的组织细胞粉末加入200mL的50%乙醇溶液中处理12h，再加入1%的果胶酶，1%的纤维素酶，在温度50℃，利用柠檬酸和氢氧化钠调节PH为4，酶解3h，酶解后，100℃热回流3h，冷却后，过0.45μm的滤膜，收集滤液即为滨海刺芹愈伤组织提取物。
测试例1
将实施例1~4、对比例1~4提取的类囊泡进行透镜电镜观察，结果如图2。实施例1~4、对比例1~4纯化后获得的类囊泡粒子浓度如表1。
表1和图2的结果表明，在实验过程中选用1μm的深层过滤器效果更佳，选用0.2μm的深层过滤器会导致类囊泡粒子浓度降低。
表1实施例1~4、对比例1~4纯化后获得的类囊泡粒子浓度：
。
滨海刺芹愈伤组织类囊泡的安全浓度评价
1）细胞培养
HaCaT细胞（购自ATCC细胞库）按照1×104/孔接种到96孔板中，放回CO2培养箱培养24h，待细胞贴壁。
2）配制含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡外泌体/提取物的培养基
将各组滨海刺芹愈伤组织类囊泡和提取物使用0.22μm滤膜过滤后，实施例1-4、对比例1-4的滨海刺芹愈伤组织类囊泡用PBS稀释至1011Particles/mL，1010Particles/mL，109Particles/mL，再用完全培养基分别10倍稀释，浓度分别为1010Particles/mL，109Particles/mL，108Particles/mL。对比例5用完全培养基分别稀释成5%，0.5%，0.05%（v/v）含有滨海刺芹提取物的培养基。
3）滨海刺芹愈伤组织类囊泡和提取物与HaCaT细胞共孵育
24h后，观察到HaCaT细胞贴壁，弃去原培养基。将完全培养基稀释的步骤2）中的各组滨海刺芹愈伤组织类囊泡和提取物加入到96孔板，置于CO2培养箱共孵育24h。
4）cck-8检测细胞活力
24h后，向96孔板细胞中加入cck-8，在37℃培养1h，使用酶标仪在450nm处测量吸光值。结果如图3所示。结果说明实施例1-4、对比例1-4各组滨海刺芹愈伤组织类囊泡对细胞活力没有影响，对比例5滨海刺芹提取物在5%浓度时对细胞有毒性，稀释到0.5%时，对细胞活力没有影响，因此功效评价选用对比例5的滨海刺芹提取物0.5%的浓度作功效评价。
计算公式：
。
根据NTA检测粒子数和电镜图的结果，各组实施例和对比例都能够获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡，但粒子数量和粒径范围有所差异。经过100kD和300kD中空纤维过滤后，粒径分布差别不大，粒子数明显少于500kD和750kD中空纤维过滤。而750kD中空纤维过滤后获得的类囊泡粒子数并没有显著提升，但粒径相对别组较大，导致类囊泡的均一性稍差。因此，最终选择实施例3和对比例5进行抗氧化和抗炎的功效评价。图4为实施例3经过SEC柱的纯化结果，表明实施例3提取的类囊泡纯度可达100%。
采用实施例3所得的类囊泡进行功效试验：
功效实验
试验例1：滨海刺芹愈伤组织类囊泡对角质形成细胞（HaCaT）活性氧（ROS）抑制实验
皮肤的抗氧化能力与衰老密切相关，当皮肤受到压力刺激或抗氧化能力减弱时，过量的ROS在细胞内堆积，导致氧化损伤。因此，检测ROS的表达水平，可以判断细胞的抗氧化能力。
（1）配制待测样本
将细胞分组，每组3个重复：
实施例3组：将实施例3过0.22μm无菌滤膜过滤后，浓度为1.2×1011Particles/mL，再用完全培养基将其10倍稀释为1.2×1010Particles/mL的待测液。
对比例5组：对比例5使用0.5%的浓度。
阳性对照组、空白对照组和阴性对照组均为加入相同体积的完全培养基。
（2）细胞培养
HaCaT细胞按照2×105/孔接种到6孔板中。24h后，细胞融合率达到40%，吸出培养基，用PBS清洗1遍。
（3）共孵育
PBS清洗完毕后，将配制好的待测样本加到6孔板中，2mL/孔。放回CO2培养箱孵育24h。
（4）装载探针
孵育结束后，使用0.25%胰蛋白酶/EDTA消化细胞，400μL/孔。显微镜下观察，当细胞变圆脱离培养板底部时，加入1mL完全培养基终止消化，并收集到离心管中。500g离心5min离心后，弃掉上清液。除空白组外，其余各组的每支EP管中加入100μLDCFH-DA探针（DCFH-DA工作液用PBS稀释，终浓度为10μmol/L，购自索莱宝）。
将EP管放回37℃培养箱孵育30min，孵育过程中，每10min混匀一次使探针和细胞充分接触。孵育结束后，向每支EP管加900μLPBS洗涤细胞，500g离心5min。重复此步骤2遍，充分去除未进入细胞内的DCFH-DA探针。
（5）刺激诱导细胞
洗涤细胞结束后，弃掉上清液，除空白组和阴性对照组，实施例3组、对比例5组和阳性对照组的细胞均加入100μL的200μMH2O2刺激细胞，37℃孵育20min。空白组和阴性对照组加入100μLPBS，同样37℃孵育20min。孵育结束后，加入PBS洗涤各孔细胞，500g离心5min，重复此步骤2遍，去除残留H2O2。加入500μLPBS重悬细胞后，进行流式细胞仪检测，由于空白组未加入DCFH-DA探针，在流式上机时用于确认细胞群。
（6）流式细胞仪检测
根据流式细胞仪（BD CSampler Plus）操作规程清洗流式细胞仪后，将细胞充分混匀，在FL1-H通道（FITC通道）进行上机检测。结果如图5所示。
（7）计算结果
ROS抑制率计算公式：
。
式中：T—受试样品平均荧光强度；C—阳性对照组的平均荧光强度；C0—阴性对照组的平均荧光强度。
图5的结果表明，阳性对照组HaCaT细胞未经预处理，仅H2O2刺激后，细胞内ROS含量大幅上升，平均荧光强度变强。而预先经过滨海刺芹愈伤组织类囊泡或提取物预处理的细胞，其平均荧光强度低于阳性对照组，说明对ROS生成有抑制作用。并且实施例3对ROS的抑制率达到了40%以上，说明有很好的抗氧化作用。
试验例2滨海刺芹愈伤组织类囊泡对Raw264.7细胞环氧化酶-2（COX-2）的抑制情况
环氧化酶-2(COX-2)在正常组织中较少表达的诱导酶，而当细胞受到炎症刺激时大量表达。由于COX-2可以快速应答一系列促炎介质和细胞因子，因此长久以来一直被认为在炎症发生的病理过程中扮演重要角色。
Raw264.7细胞按照2×105/孔接种到6孔板，在37℃、5%CO2的培养箱中培养24h贴壁后，细胞融合度达到45%~60%。将细胞分为空白组、对照组、实施例3组、对比例5组，每组3个重复，其中空白组不加脂多糖，其余组每孔加入终浓度1μg/mL的脂多糖（LPS），刺激结束后，PBS清洗3遍。
然后配制各组培养基：
空白组、对照组：PBS经培养基10倍稀释；
实施例3组：经0.22μm滤膜过滤后，得到1.2×1011Particles/mL浓度滨海刺芹愈伤组织类囊泡，再用完全培养基将其10倍稀释；
对比例5组：经0.22μm滤膜过滤后，将对比例5用培养基稀释到0.5%的浓度。
按照分组，加到各组中培养，24h后收集细胞。采用细胞裂解缓冲液(0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)、1％NP40、150mMNaCl、0.5％脱氧胆酸钠、50mMTris-HCl(PH7.5))使细胞溶出，利用BCA(bicinchoninic acid)定量法测定出蛋白质量。每组分别取20μg相同量的蛋白质（根据检测的蛋白质量换算而来），用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离后，移动到PVDF膜上。然后用含有5％脱脂乳的TBST(10mMTrisHCl，pH8.0，150mMNaCl，0.1％Tween(吐温)20)缓冲液使上述PVDF膜反应1小时后，再与一抗COX-2 (购自CST)（稀释倍数1：1000）进行4℃过夜反应。再使用辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG抗体(购自Santa Cruz，USA)作为二抗（稀释倍数1：5000），并使其常温下反应1小时。然后，用TBST缓冲液洗涤30min，通过ECL（电化学发光）显色后进行分析COX-2的情况，如图6所示。
如图6中可知，对照组和空白组相比，空白组在没有LPS刺激时不表达COX-2；在脂多糖（LPS）刺激下Raw264.7细胞COX-2生成，即细胞产生了炎症；加入实施例3后，COX-2表达下降，说明炎性被抑制；而对比例5中加入滨海刺芹提取物后，COX-2的表达稍有下降，说明滨海刺芹提取物也有抑制炎症的作用，但抗炎效果不如滨海刺芹愈伤组织类囊泡明显。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施案例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施案例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (13)
1.一种滨海刺芹愈伤组织类囊泡在制备抗氧化或抗炎皮肤产品中的应用；
所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡来源于滨海刺芹愈伤组织培养液；
所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡采用如下方法制备：
1）将滨海刺芹愈伤组织进行光照培养，收集培养液；
2）从步骤1）的培养液中分离获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液，浓缩，纯化，获得滨海刺芹愈伤组织类囊泡；浓缩采用中空纤维，中空纤维的截留分子量100KD~750KD；过滤方法采用0.2μm至1μm间不同孔径的深层过滤器。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为108~1012Particles/mL。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滨海刺芹愈伤组织类囊泡在产品中的浓度为1010~1012Particles/mL。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述皮肤产品为能抑制COX-2表达和/或抑制ROS生成的皮肤产品。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤2）中，获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液的方式包括离心、取离心上清液过滤获得含有滨海刺芹愈伤组织类囊泡的上清液；
和/或，光照培养采用悬浮培养基，悬浮培养基包括：1.0-4.0mg/L的2，2-双(3-氨基-4-羟基苯基)丙烷，1-5mg/L吲哚-3-乙酸、1-5mg/L赤霉素和100mg/L聚乙烯吡咯烷酮。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中，中空纤维的截留分子量为100KD~300KD。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中，步骤2）中，过滤方法采用0.6μm至1μm间不同孔径的深层过滤器。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中，浓缩倍数为50~200倍。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中，浓缩倍数为80~150倍。
10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2）中，浓缩倍数为100~150倍。
11.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤2）中，纯化采用SEC柱纯化。
12.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滨海刺芹愈伤组织通过将滨海刺芹植株的部分组织诱导获得。
13.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述滨海刺芹愈伤组织经诱导获得，诱导培养基包括：固体MS培养基，还添加有0.5-2mg/L的3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸和0.5-2mg/L噻苯隆。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130124044A (ko) * | 2012-05-04 | 2013-11-13 | 세원셀론텍(주) | 항염증 또는 항알러지 효과가 있는 토마토 캘러스 추출물, 토마토 캘러스의 대량배양생산방법, 및 토마토 캘러스 추출물의 제조방법 |
| CN106924316A (zh) * | 2015-12-30 | 2017-07-07 | 生物Fd&C株式会社 | 含高山火绒草植物细胞培养提取物的皮肤外用剂组合物及其制造方法 |
| CN112941010A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-06-11 | 湖北嘉弘福科技有限责任公司 | 一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法 |
| KR20220040363A (ko) * | 2020-09-22 | 2022-03-30 | 주식회사 바이오솔루션 | 식물 유래 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법 |
| CN115697368A (zh) * | 2020-06-04 | 2023-02-03 | 韩国外泌体生技有限公司 | 用于抗炎、伤口愈合或促进伤口愈合的包含玫瑰干细胞来源外排体作为活性成分的组合物 |
| CN116035982A (zh) * | 2023-02-27 | 2023-05-02 | 山东药品食品职业学院 | 一种海洋生物活性修复霜 |
| CN116115659A (zh) * | 2022-11-25 | 2023-05-16 | 安赛搏(重庆)生物技术有限公司 | 一种滨海刺芹愈伤组织提取物的提取方法和应用 |
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20130124044A (ko) * | 2012-05-04 | 2013-11-13 | 세원셀론텍(주) | 항염증 또는 항알러지 효과가 있는 토마토 캘러스 추출물, 토마토 캘러스의 대량배양생산방법, 및 토마토 캘러스 추출물의 제조방법 |
| CN106924316A (zh) * | 2015-12-30 | 2017-07-07 | 生物Fd&C株式会社 | 含高山火绒草植物细胞培养提取物的皮肤外用剂组合物及其制造方法 |
| CN115697368A (zh) * | 2020-06-04 | 2023-02-03 | 韩国外泌体生技有限公司 | 用于抗炎、伤口愈合或促进伤口愈合的包含玫瑰干细胞来源外排体作为活性成分的组合物 |
| KR20220040363A (ko) * | 2020-09-22 | 2022-03-30 | 주식회사 바이오솔루션 | 식물 유래 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법 |
| CN112941010A (zh) * | 2021-01-30 | 2021-06-11 | 湖北嘉弘福科技有限责任公司 | 一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法 |
| CN116115659A (zh) * | 2022-11-25 | 2023-05-16 | 安赛搏(重庆)生物技术有限公司 | 一种滨海刺芹愈伤组织提取物的提取方法和应用 |
| CN116035982A (zh) * | 2023-02-27 | 2023-05-02 | 山东药品食品职业学院 | 一种海洋生物活性修复霜 |
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