CN117203339A - 抗病毒核酸 - Google Patents
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Abstract
本发明的课题是提供针对SARS‑CoV‑2SARS‑CoV‑2、SARS‑CoV‑1或MERS‑CoV的抗病毒核酸等、和/或使用该核酸等的病毒感染症的治疗和/或预防方法。本发明涉及抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向SARS‑CoV‑2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、nsp3区域、3C‑样蛋白酶区域、nsp9区域、RNA依赖性RNA聚合酶区域、解旋酶区域、3’至5’外切核酸酶区域、2’‑O‑核糖甲基转移酶区域、包括S1区域及S2区域的S区域、E区域、M区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列，病毒为SARS‑CoV‑2、SARS‑CoV‑1或MERS‑CoV。
Description
技术领域
本发明涉及：针对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV的抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物(以下也记作“上述核酸等”)；包含上述核酸等的载体；包含上述核酸等或上述载体的药物组合物；或者，包括将上述核酸等、上述载体或上述药物组合物给药于对象的工序的病毒感染症的治疗和/或预防方法。
背景技术
COVID-19(Coronavirus disease-2019)是在2020年3月被WHO宣告大流行的以肺炎为特征的新型感染症(非专利文献1)。该COVID-19的病因为新型病毒，2020年1月鉴定其致病病毒为重症急性呼吸综合征冠状病毒-2(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2,SARS-CoV-2)。SARS-CoV-2与2003年流行的严重急性呼吸综合征(SARS)的致病病毒SARS-CoV在进化上为近缘，与SARS-CoV同属于冠状病毒科β冠状病毒属(非专利文献2)。
SARS-CoV-2的病毒基因组由约30,000个碱基的单链正链RNA构成。因此认为，SARS-CoV-2的病毒基因组可成为RNA干扰的切割底物，并且对SARS-CoV-2的病毒基因组发挥敲除活性的siRNA作为抗SARS-CoV-2药，可期待用作COVID-19治疗药。需要说明的是，到目前为止已公开了针对SARS-CoV-2的基因组的若干siRNA的序列信息(专利文献1及2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:CN111139241A
专利文献2:CN111139242A
非专利文献
非专利文献1:World Health Organization(WHO)(Press release).11March2020
非专利文献2:Nat Microbiol.2020Apr；5(4):536-544
发明内容
对于SARS-CoV-2，提出了应用现有的抗病毒剂等，但是其效果至今未获得临床上的验证，尚未建立治疗方法。另外，对于与SARS-CoV-2同样属于β冠状病毒属、可导致病毒感染症的SARS-CoV-1及MERS-CoV，也未建立治疗方法。
本发明的课题在于，提供针对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV的抗病毒核酸等、和/或使用该核酸等的病毒感染症的治疗和/或预防方法。
本发明人发现，靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、nsp3区域、3C-样蛋白酶区域、nsp9区域、RNA依赖性RNA聚合酶区域、解旋酶区域、3’至5’外切核酸酶区域、2’-O-核糖甲基转移酶区域、包括S1区域及S2区域的S区域、E区域、M区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列的抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物可发挥针对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV的抗病毒效果，从而完成了本发明。
本发明包括以下的实施方式。
(1)一种抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、nsp3区域、3C-样蛋白酶区域、nsp9区域、RNA依赖性RNA聚合酶区域、解旋酶区域、3’至5’外切核酸酶区域、2’-O-核糖甲基转移酶区域、包括S1区域和S2区域的S区域、E区域、M区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列，
病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
(2)根据(1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，靶序列为靶区域内的连续的16～30个碱基的序列。
(3)根据(1)或(2)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，病毒为SARS-CoV-2或SARS-CoV-1。
(4-1)根据(3)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第69位、第242位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6427位、第10406位～第10431位、第10484位～第10506位、第12839位～第12867位、第12898位～第12922位、第12965位～第12990位、第13481位～第13502位、第13762位～第13790位、第13894位～第13916位、第14290位～第14312位、第14654位～第14687位、第14750位～第14777位、第14824位～第14846位、第14878位～第14909位、第14953位～第14990位、第14992位～第15026位、第15037位～第15061位、第15063位～第15140位、第15172位～第15198位、第15278位～第15299位、第15454位～第15479位、第15496位～第15518位、第15622位～第15644位、第15829位～第15859位、第15929位～第15950位、第15985位～第16011位、第16051位～第16085位、第16189位～第16220位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第18196位～第18218位、第18253位～第18278位、第19568位～第19595位、第20888位～第20909位、第21502位～第21524位、第22814位～第22836位、第23093位～第23113位、第23956位～第23976位、第24302位～第24324位、第24467位～第24489位、第24620位～第24651位、第24662位～第24684位、第24962位～第24982位、第25104位～第25128位、第25364位～第25384位、第26287位～第26325位、第26574位～第26604位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(4-2)根据(4-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第44～64位、第45位～第65位、第46位～第66位、第47位～第67位、第48位～第68位、第49位～第69位、第242位～第262位、第243位～第263位、第244位～第264位、第245位～第265位、第246～266位、第247位～第267位、第248位～第268位、第249位～第269位、第250位～第270位、第251位～第271位、第252位～第272位、第253位～第273位、第254位～第274位、第255位～第275位、第256位～第276位、第257位～第277位、第258位～第278位、第259位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第6407位～第6427位、第10406位～第10426位、第10407位～第10427位、第10408位～第10428位、第10409位～第10429位、第10410位～第10430位、第10411位～第10431位、第10484位～第10504位、第10485位～第10505位、第10486位～第10506位、第12839位～第12859位、第12840位～第12860位、第12841位～第12861位、第12842位～第12862位、第12843位～第12863位、第12844位～第12864位、第12845位～第12865位、第12846位～第12866位、第12847～12867位、第12898位～第12918位、第12899位～第12919位、第12900位～第12920位、第12901位～第12921位、第12902位～第12922位、第12965位～第12985位、第12966位～第12986位、第12967位～第12987位、第12968位～第12988位、第12969位～第12989位、第12970位～第12990位、第13481位～第13501位、第13482位～第13502位、第13762位～第13782位、第13763位～第13783位、第13764位～第13784位、第13765位～第13785位、第13766位～第13786位、第13767位～第13787位、第13768位～第13788位、第13769位～第13789位、第13770位～第13790位、第13894位～第13914位、第13895位～第13915位、第13896位～第13916位、第14290位～第14310位、第14291位～第14311位、第14292位～第14312位、第14654位～第14674位、第14655位～第14675位、第14656位～第14676位、第14657位～第14677位、第14658位～第14678位、第14659位～第14679位、第14660位～第14680位、第14661位～第14681位、第14662位～第14682位、第14663位～第14683位、第14664位～第14684位、第14665位～第14685位、第14666位～第14686位、第14667位～第14687位、第14750位～第14770位、第14751位～第14771位、第14752位～第14772位、第14753位～第14773位、第14754位～第14774位、第14755位～第14775位、第14756位～第14776位、第14757位～第14777位、第14824位～第14844位、第14825位～第14845位、第14826位～第14846位、第14878位～第14898位、第14879位～第14899位、第14880位～第14900位、第14881位～第14901位、第14882位～第14902位、第14883位～第14903位、第14884位～第14904位、第14885位～第14905位、第14886位～第14906位、第14887位～第14907位、第14888位～第14908位、第14889位～第14909位、第14953位～第14973位、第14954位～第14974位、第14955位～第14975位、第14956位～第14976位、第14957位～第14977位、第14958位～第14978位、第14959位～第14979位、第14960位～第14980位、第14961位～第14981位、第14962位～第14982位、第14963位～第14983位、第14964位～第14984位、第14965位～第14985位、第14966位～第14986位、第14967位～第14987位、第14968位～第14988位、第14969位～第14989位、第14970位～第14990位、第14992位～第15012位、第14993位～第15013位、第14994位～第15014位、第14995位～第15015位、第14996位～第15016位、第14997位～第15017位、第14998位～第15018位、第14999位～第15019位、第15000位～第15020位、第15001位～第15021位、第15002位～第15022位、第15003位～第15023位、第15004位～第15024位、第15005位～第15025位、第15006位～第15026位、第15037位～第15057位、第15038位～第15058位、第15039位～第15059位、第15040位～第15060位、第15041位～第15061位、第15063位～第15083位、第15064位～第15084位、第15065位～第15085位、第15066位～第15086位、第15067位～第15087位、第15068位～第15088位、第15069位～第15089位、第15070位～第15090位、第15071位～第15091位、第15072位～第15092位、第15073位～第15093位、第15074位～第15094位、第15075位～第15095位、第15076位～第15096位、第15077位～第15097位、第15078位～第15098位、第15079位～第15099位、第15080位～第15100位、第15081位～第15101位、第15082位～第15102位、第15083位～第15103位、第15084位～第15104位、第15085位～第15105位、第15086位～第15106位、第15087位～第15107位、第15088位～第15108位、第15089位～第15109位、第15090位～第15110位、第15091位～第15111位、第15092位～第15112位、第15093位～第15113位、第15094位～第15114位、第15095位～第15115位、第15096位～第15116位、第15097位～第15117位、第15098位～第15118位、第15099位～第15119位、第15100位～第15120位、第15101位～第15121位、第15102位～第15122位、第15103位～第15123位、第15104位～第15124位、第15105位～第15125位、第15106位～第15126位、第15107位～第15127位、第15108位～第15128位、第15109位～第15129位、第15110位～第15130位、第15111位～第15131位、第15112位～第15132位、第15113位～第15133位、第15114位～第15134位、第15115位～第15135位、第15116位～第15136位、第15117位～第15137位、第15118位～第15138位、第15119位～第15139位、第15120位～第15140位、第15172位～第15192位、第15173位～第15193位、第15174位～第15194位、第15175位～第15195位、第15176位～第15196位、第15177位～第15197位、第15178位～第15198位、第15278位～第15298位、第15279位～第15299位、第15454位～第15474位、第15455位～第15475位、第15456位～第15476位、第15457位～第15477位、第15458位～第15478位、第15459位～第15479位、第15496位～第15516位、第15497位～第15517位、第15498位～第15518位、第15622位～第15642位、第15623位～第15643位、第15624位～第15644位、第15829位～第15849位、第15830位～第15850位、第15831位～第15851位、第15832位～第15852位、第15833位～第15853位、第15834位～第15854位、第15835～15855位、第15836位～第15856位、第15837位～第15857位、第15838位～第15858位、第15839位～第15859位、第15929位～第15949位、第15930位～第15950位、第15985位～第16005位、第15986位～第16006位、第15987位～第16007位、第15988位～第16008位、第15989位～第16009位、第15990位～第16010位、第15991位～第16011位、第16051位～第16071位、第16052位～第16072位、第16053位～第16073位、第
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(4-3)根据(4-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第10410位～第10430位、第10411位～第10431位、第10486位～第10506位、第12898位～第12918位、第13763位～第13783位、第13765位～第13785位、第13895位～第13915位、第14883位～第14903位、第14887位～第14907位、第14955位～第15015位、第15002位～第15022位、第15077位～第15097位、第15079位～第15099位、第15105位～第15125位、第15107位～第15127位、第15110位～第15130位、第15113位～第15133位、第15116位～第15136位、第15498位～第15518位、第15623位～第15643位、第15838位～第15858位、第15987位～第16007位、第16061位～第16081位、第16063位～第16083位、第16193位～第16213位、第16430位～第16450位、第16825位～第16845位、第17022位～第17042位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17257位～第17277位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第19570位～第19590位、第21504位～第21524位、第22815位～第22835位、第22816位～第22836位、第23956位～第23976位、第24303位～第24323位、第24624位～第24644位、第24625位～第24645位、第24630位～第24650位、第24664位～第24684位、第25364位～第25384位、第26291位～第26311位、第26303位～第26323位、第26579位～第26599位、第26583位～第26603位、第26584位～第26604位、第28746位～第28766位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(4-4)根据(4-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第10486位～第10506位、第12898位～第12918位、第13765位～第13785位、第13895位～第13915位、第14883位～第14903位、第14887位～第14907位、第14955位～第15015位、第15002位～第15022位、第15077位～第15097位、第15079位～第15099位、第15105位～第15125位、第16061位～第16081位、第16063位～第16083位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第21504位～第21524位、第24630位～第24650位、第26583位～第26603位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(5-1)根据(1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、解旋酶区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(5-2)根据(5-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第69位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(5-3)根据(5-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第16430位～第16450位、第16825位～第16845位、第17022位～第17042位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17257位～第17277位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第28746位～第28766位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
(6)根据(1)～(5-3)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，核酸为siRNA或shRNA。
(7-1)根据(6)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制上述靶区域的功能且包含有义链及反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
(7-2)根据(7-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其包含：
包含选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列的有义链、及
包含与选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列互补的碱基序列的反义链。
(8-1)根据(7-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制上述靶区域的功能且包含有义链及反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
(8-2)根据(8-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其包含：
包含选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列的有义链、及
包含与选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列互补的碱基序列的反义链。
(9-1)根据(8-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制上述靶区域的功能且包含有义链和反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
(9-2)根据(9-1)所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其包含：
包含选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列的有义链、及
包含与选自由3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列互补的碱基序列的反义链。
(10)根据(1)～(9-2)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，构成上述核酸的至少1个核苷酸的糖部分和/或磷酸键部分经过了修饰。
(11)根据(1)～(10)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，构成上述核酸的至少1个核苷酸为核糖，上述核糖的2’位的-OH基被F或OCH3置换、和/或
核酸为包含突出末端(overhang)的siRNA，突出末端部分的核苷酸的糖部分包含脱氧核糖，上述脱氧核糖的2’位的-H基任选被F或OCH3置换。
(12)一种载体，其包含(1)～(11)中任一项所述的核酸、或编码该核酸的DNA。
(13)一种药物组合物，其包含(1)～(11)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、或者(12)所述的载体。
(14)一种药物组合物，其为用于治疗和/或预防病毒感染症的(13)所述的药物组合物，病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
(15)一种治疗和/或预防病毒感染症的方法，其包括将有效量的(1)～(11)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、(12)所述的载体、或者(13)～(14)中任一项所述的药物组合物给药于对象的工序，病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
(16)(1)～(11)中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、(12)所述的载体、或者(13)所述的药物组合物在制造用于治疗和/或预防病毒感染症的药物中的应用。
根据本发明，提供针对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV的抗病毒核酸。
具体实施方式
一实施方式中，本发明涉及针对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV的抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物(以下，也将抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物一并记作“本发明的抗病毒核酸等”)。
本发明的核酸以核苷酸为构成单元，核苷酸可以为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或修饰核苷酸中的任意者。
修饰核苷酸是指：构成核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的核酸碱基、糖部分及磷酸键部分中的全部或一部分进行了修饰的核苷酸。
本说明书中，作为核酸碱基，可列举例如腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶或它们的修饰碱基。作为所述修饰碱基，可列举例如假尿嘧啶、3-甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、5-烷基胞嘧啶(例如5-甲基胞嘧啶)、5-烷基尿嘧啶(例如5-乙基尿嘧啶)、5-卤代尿嘧啶(5-溴尿嘧啶)、6-氮杂嘧啶、6-烷基嘧啶(6-甲基尿嘧啶)、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5’-羧甲基氨基甲基-2-硫代尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、1-甲基腺嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、2,2-二甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲氧基氨基甲基-2-硫代尿嘧啶、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲基羰基甲基尿嘧啶、5-甲基氧基尿嘧啶、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸、2-硫代胞嘧啶、嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、异鸟嘌呤、吲哚、咪唑、黄嘌呤等，但是不限于这些。
一实施方式中，构成本发明的核酸的至少1个核苷酸的糖部分和/或磷酸键部分进行了修饰。
本说明书中，作为糖部分的修饰，可列举例如核糖的2’位的修饰及糖的其它部分的修饰。作为核糖的2’位的修饰，可列举例如将核糖的2’位的-OH基置换为OR、R、R’OR、SH、SR、NH 2、NHR、NR 2、N 3、CN、F、Cl、Br、I的修饰。在此，R表示烷基或芳基。R’表示亚烷基。
作为糖的其它部分的修饰，可列举例如将核糖或脱氧核糖的4’位的O置换为S、使糖的2’位与4’位进行交联、例如LNA(Locked Nucleic Acid，锁核酸)或ENA(2’-O，4’-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids，2’-O，4’-C-亚己基-桥接核酸)等，但是不限于这些。
一实施方式中，构成本发明的核酸的至少1个核苷酸为核糖，上述核糖的2’位的-OH基被F或OCH3置换。一实施方式中，核酸为包含突出末端的siRNA，突出末端部分的核苷酸的糖部分包含脱氧核糖，上述脱氧核糖的2’位的-H基任选被F或OCH3置换。
作为磷酸键部分的修饰，可列举例如将磷酸二酯键置换为硫代磷酸酯键、二硫代磷酸酯键、烷基膦酸酯键、亚磷酰胺键、硼代磷酸酯键(Enya et al:Bioorganic&MedicinalChemistry,2008,18,9154-9160)的修饰(例如，参照日本专利再公表公报第2006/129594号及第2006/038608号)。
本说明书中，作为烷基，优选直链状或支链状的碳数1～6的烷基。具体而言，可列举例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基。该烷基可以被取代，作为所述取代基，可列举例如卤素、烷氧基、氰基、硝基，可以被1～3个这些基团取代。
本说明书中，作为环烷基，优选碳数5～12的环烷基。具体而言，可列举例如环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基。
本说明书中，作为卤素，可列举氟、氯、溴、碘。
作为烷氧基，可列举直链状或支链状的碳数1～6的烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、正己氧基、异己氧基等。尤其优选碳数1～3的烷氧基。
本说明书中，作为芳基，优选碳数6～10的芳基。具体而言，可列举例如苯基、α-萘基、β-萘基。尤其优选苯基。该芳基可以被取代，作为所述取代基，可列举例如烷基、卤素、烷氧基、氰基、硝基，可以被1～3个这些基团取代。
本说明书中，作为亚烷基，优选直链状或支链状的碳数1～6的亚烷基。具体而言，可列举例如亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基、五亚甲基、六亚甲基、2-(乙基)三亚甲基、1-(甲基)四亚甲基。
本说明书中，作为酰基，可列举直链状或支链状的烷酰基或芳酰基。作为烷酰基，可列举例如甲酰基、乙酰基、2-甲基乙酰基、2,2-二甲基乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、2,2-二甲基丙酰基、己酰基等。作为芳酰基，可列举例如苯甲酰基、甲苯甲酰基、萘甲酰基。所述芳酰基可以在可取代的位置处被取代，可以被烷基取代。
本发明的核酸可以通过公知的方法来合成(例如，参照Nucleic Acids Research,12:4539-4557,1984)。另外，本发明的核酸可以使用各种自动合成装置(例如AKTAoligopilot plus 10/100(GE Healthcare))容易地合成，或者，也可以委托第三方机构(例如Promega公司、Takara公司、或日本BIO SERVICE公司)等来制作。
作为本发明的抗病毒核酸的药学上能接受的盐的例子，可列举：钠盐、钾盐、锂盐之类的碱金属盐；钙盐、镁盐之类的碱土金属盐；铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等金属盐；铵盐；叔辛基胺盐、二苄基胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、二环己基胺盐、N,N’-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基-苯乙基胺盐、哌嗪盐、四甲基铵盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐之类的有机胺盐；氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐之类的氢卤酸盐；硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸盐；甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐之类的低级烷烃磺酸盐；苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐之类的芳基磺酸盐；乙酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等有机酸盐；甘氨酸盐、赖氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐之类的氨基酸盐等。这些盐可以通过公知的方法来制造。或者，本发明的抗病毒核酸或其盐可以为其水合物的形态。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等对SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV、例如SARS-CoV-2或SARS-CoV-1、例如SARS-CoV-2具有抗病毒效果。本说明书中，SARS-CoV-2包括具有由NC_045512.2的碱基序列(序列号1)构成的基因组RNA序列的病毒或其突变株。SARS-CoV-1包括具有由NC_004718.3的碱基序列构成的基因组RNA序列的病毒或其突变株。MERS-CoV包括具有由NC_019843.3的碱基序列构成的基因组RNA序列的病毒或其突变株。
这里，突变株是指：在病毒基因复制过程中，通过由于局部发生读取错误、重组而遗传信息发生部分变化、即突变而形成的具有新的性质的后代。突变株虽然受到发生变化的遗传信息的影响而部分性质发生变化，但是原本的病毒种属不变。需要说明的是，对于冠状病毒科而言，若保存的复制酶区域的氨基酸序列的90％以上是共用的，则认为属于同一病毒种(参照ICTV 9th report(2011)之nidovirales(套式病毒目)、Coronaviridae(冠状病毒科)的项目(https://talk.ictvonline.org/ictv-reports/ictv_9th_report/positive-sense-rna-viruse s-2011/w/posrna_viruses/222/coronaviridae))。
一实施方式中，抗病毒效果是指抑制病毒的增殖、和/或降低病毒的感染性的效果。本发明的抗病毒核酸等是否具有抗病毒效果可以如本申请说明书的实施例的记载那样来测试。例如，有无抗病毒效果可以如下来测定：制作表达包含靶序列的核酸的质粒，将该质粒和本发明的抗病毒核酸等导入细胞，将细胞所表达的包含靶序列的核酸的量与导入阴性对照的核酸的情况进行比较，调查其是否减少(例如5％以上、10％以上、或20％以上)。或者，抗病毒效果的有无可以如下测定：将病毒及本发明的抗病毒核酸等导入细胞并进行培养后，将细胞内或细胞培养上清中的病毒量或源自其的核酸与导入阴性对照核酸时进行比较，调查是否减少(例如5％以上、10％以上、或20％以上)。
本发明的抗病毒核酸等靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、nsp3区域、3C-样蛋白酶区域、nsp9区域、RNA依赖性RNA聚合酶区域、解旋酶区域、3’至5’外切核酸酶区域、2’-O-核糖甲基转移酶区域、包括S1区域及S2区域的S区域、E区域、M区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
SARS-CoV-2的基因组RNA的序列及基因组RNA中的各区域的序列可以参照数据库(例如ncbi)容易地确定。例如SARS-CoV-2的基因组RNA的序列可以为NC_045512.2的碱基序列(序列号1)。另外，序列号1的碱基序列中，5’UTR区域可以为序列号1的第1位～第265位的碱基序列、nsp3区域可以为序列号1的第2720位～第8554位的碱基序列、3C-样蛋白酶区域可以为序列号1的第10055位～第10972位的碱基序列、nsp9区域可以为序列号1的第12686位～第13024位的碱基序列、RNA依赖性RNA聚合酶区域可以为序列号1的第13442位～第16236位的碱基序列、解旋酶区域可以为序列号1的第16237位～第18039位的碱基序列、3’至5’外切核酸酶区域可以为序列号1的第18040位～第19620位的碱基序列、2’-O-核糖甲基转移酶区域可以为序列号1的第20659位～第21552位的碱基序列、S区域可以为序列号1的第21563位～第25384位的碱基序列(S1区域可以为序列号1的第21599位～第23617位的碱基序列、S2区域可以为序列号1的第23618位～第25381位的碱基序列)、E区域可以为序列号1的第26245位～第26472位的碱基序列、M区域可以为序列号1的第26523位～第27191位的碱基序列、及N区域可以为序列号1的第28274位～第29533位的碱基序列。
靶序列的长度没有限定，例如可以为靶区域内的连续的16个碱基以上、17个碱基以上、18个碱基以上、19个碱基以上或20个碱基以上的序列，可以为30个碱基以下、28个碱基以下、26个碱基以下、24个碱基以下或22个碱基以下的序列。一实施方式中，靶序列为靶区域内的连续的16～30个碱基、18个碱基～26个碱基、20～22个碱基或21个碱基的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向SARS-CoV-2的基因组RNA和SARS-CoV-1的基因组RNA的序列中的保守区域，因此能够对包括SARS-CoV-2、SARS-CoV-1及MERS-CoV在内的β冠状病毒属发挥抗病毒效果。例如，本发明的抗病毒核酸等靶向选自由序列号1的第43位～第69位、第242位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6427位、第10406位～第10431位、第10484位～第10506位、第12839位～第12867位、第12898位～第12922位、第12965位～第12990位、第13481位～第13502位、第13762位～第13790位、第13894位～第13916位、第14290位～第14312位、第14654位～第14687位、第14750位～第14777位、第14824位～第14846位、第14878位～第14909位、第14953位～第14990位、第14992位～第15026位、第15037位～第15061位、第15063位～第15140位、第15172位～第15198位、第15278位～第15299位、第15454位～第15479位、第15496位～第15518位、第15622位～第15644位、第15829位～第15859位、第15929位～第15950位、第15985位～第16011位、第16051位～第16085位、第16189位～第16220位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第18196位～第18218位、第18253位～第18278位、第19568位～第19595位、第20888位～第20909位、第21502位～第21524位、第22814位～第22836位、第23093位～第23113位、第23956位～第23976位、第24302位～第24324位、第24467位～第24489位、第24620位～第24651位、第24662位～第24684位、第24962位～第24982位、第25104位～第25128位、第25364位～第25384位、第26287位～第26325位、第26574位～第26604位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向上述靶区域中的连续的21个碱基所构成的序列，例如选自由区域序列号1的第43位～第63位、第44位～第64位、第45位～第65位、第46位～第66位、第47位～第67位、第48位～第68位、第49位～第69位、第242位～第262位、第243位～第263位、第244位～第264位、第245位～第265位、第246～266位、第247位～第267位、第248位～第268位、第249位～第269位、第250位～第270位、第251位～第271位、第252位～第272位、第253位～第273位、第254位～第274位、第255位～第275位、第256位～第276位、第257位～第277位、第258位～第278位、第259位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第6407位～第6427位、第10406位～第10426位、第10407位～第10427位、第10408位～第10428位、第10409位～第10429位、第10410位～第10430位、第10411位～第10431位、第10484位～第10504位、第10485位～第10505位、第10486位～第10506位、第12839位～第12859位、第12840位～第12860位、第12841位～第12861位、第12842位～第12862位、第12843位～第12863位、第12844位～第12864位、第12845位～第12865位、第12846位～第12866位、第12847～12867位、第12898位～第12918位、第12899位～第12919位、第12900位～第12920位、第12901位～第12921位、第12902位～第12922位、第12965位～第12985位、第12966位～第12986位、第12967位～第12987位、第12968位～第12988位、第12969位～第12989位、第12970位～第12990位、第13481位～第13501位、第13482位～第13502位、第13762位～第13782位、第13763位～第13783位、第13764位～第13784位、第13765位～第13785位、第13766位～第13786位、第13767位～第13787位、第13768位～第13788位、第13769位～第13789位、第13770位～第13790位、第13894位～第13914位、第13895位～第13915位、第13896位～第13916位、第14290位～第14310位、第14291位～第14311位、第14292位～第14312位、第14654位～第14674位、第14655位～第14675位、第14656位～第14676位、第14657位～第14677位、第14658位～第14678位、第14659位～第14679位、第14660位～第14680位、第14661位～第14681位、第14662位～第14682位、第14663位～第14683位、第14664位～第14684位、第14665位～第14685位、第14666位～第14686位、第14667位～第14687位、第14750位～第14770位、第14751位～第14771位、第14752位～第14772位、第14753位～第14773位、第14754位～第14774位、第14755位～第14775位、第14756位～第14776位、第14757位～第14777位、第14824位～第14844位、第14825位～第14845位、第14826位～第14846位、第14878位～第14898位、第14879位～第14899位、第14880位～第14900位、第14881位～第14901位、第14882位～第14902位、第14883位～第14903位、第14884位～第14904位、第14885位～第14905位、第14886位～第14906位、第14887位～第14907位、第14888位～第14908位、第14889位～第14909位、第14953位～第14973位、第14954位～第14974位、第14955位～第14975位、第14956位～第14976位、第14957位～第14977位、第14958位～第14978位、第14959位～第14979位、第14960位～第14980位、第14961位～第14981位、第14962位～第14982位、第14963位～第14983位、第14964位～第14984位、第14965位～第14985位、第14966位～第14986位、第14967位～第14987位、第14968位～第14988位、第14969位～第14989位、第14970位～第14990位、第14992位～第15012位、第14993位～第15013位、第14994位～第15014位、第14995位～第15015位、第14996位～第15016位、第14997位～第15017位、第14998位～第15018位、第14999位～第15019位、第15000位～第15020位、第15001位～第15021位、第15002位～第15022位、第15003位～第15023位、第15004位～第15024位、第15005位～第15025位、第15006位～第15026位、第15037位～第15057位、第15038位～第15058位、第15039位～第15059位、第15040位～第15060位、第15041位～第15061位、第15063位～第15083位、第15064位～第15084位、第15065位～第15085位、第15066位～第15086位、第15067位～第15087位、第15068位～第15088位、第15069位～第15089位、第15070位～第15090位、第15071位～第15091位、第15072位～第15092位、第15073位～第15093位、第15074位～第15094位、第15075位～第15095位、第15076位～第15096位、第15077位～第15097位、第15078位～第15098位、第15079位～第15099位、第15080位～第15100位、第15081位～第15101位、第15082位～第15102位、第15083位～第15103位、第15084位～第15104位、第15085位～第15105位、第15086位～第15106位、第15087位～第15107位、第15088位～第15108位、第15089位～第15109位、第15090位～第15110位、第15091位～第15111位、第15092位～第15112位、第15093位～第15113位、第15094位～第15114位、第15095位～第15115位、第15096位～第15116位、第15097位～第15117位、第15098位～第15118位、第15099位～第15119位、第15100位～第15120位、第15101位～第15121位、第15102位～第15122位、第15103位～第15123位、第15104位～第15124位、第15105位～第15125位、第15106位～第15126位、第15107位～第15127位、第15108位～第15128位、第15109位～第15129位、第15110位～第15130位、第15111位～第15131位、第15112位～第15132位、第15113位～第15133位、第15114位～第15134位、第15115位～第15135位、第15116位～第15136位、第15117位～第15137位、第15118位～第15138位、第15119位～第15139位、第15120位～第15140位、第15172位～第15192位、第15173位～第15193位、第15174位～第15194位、第15175位～第15195位、第15176位～第15196位、第15177位～第15197位、第15178位～第15198位、第15278位～第15298位、第15279位～第15299位、第15454位～第15474位、第15455位～第15475位、第15456位～第15476位、第15457位～第15477位、第15458位～第15478位、第15459位～第15479位、第15496位～第15516位、第15497位～第15517位、第15498位～第15518位、第15622位～第15642位、第15623位～第15643位、第15624位～第15644位、第15829位～第15849位、第15830位～第15850位、第15831位～第15851位、第15832位～第15852位、第15833位～第15853位、第15834位～第15854位、第15835～15855位、第15836位～第15856位、第15837位～第15857位、第15838位～第15858位、第15839位～第15859位、第15929位～第15949位、第15930位～第15950位、第15985位～第16005位、第15986位～第16006位、第15987位～第16007位、第15988位～第16008位、第15989位～第16009位、第15990位～第16010位、第15991位～第16011位、第16051位～第16071位、第16052位～第16072位、第16053位～第16073位、第16054位～第16074位、第16055位～第16075位、第16056位～第16076位、第16057位～第16077位、第16058位～第16078位、第16059位～第16079位、第16060位～第16080位、第16061位～第16081位、第16062位～第16082位、第16063位～第16083位、第16064位～第16084位、第16065位～第16085位、第16189位～第16209位、第16190位～第16210位、第16191位～第16211位、第16192位～第16212位、第16193位～第16213位、第16194位～第16214位、第16195位～第16215位、第16196位～第16216位、第16197位～第16217位、第16198位～第16218位、第16199位～第16219位、第16200位～第16220位、第16430位～第16450位、第16431位～第16451位、第16822位～第16842位、第16823位～第16842位、第16823位～第16843位、第16824位～第16844位、第16825位～第16845位、第17015位～第17035位、第17016位～第17036位、第17017位～第17037位、第17018位～第17038位、第17019位～第17039位、第17020位～第17040位、第17021位～第17041位、第17022位～第17042位、第17023位～第17043位、第17024位～第17044位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17027位～第17047位、第17028位～第17048位、第17029位～第17049位、第17030位～第17050位、第17031位～第17051位、第17080位～第17100位、第17081位～第17101位、第17082位～第17102位、第17083位～第17103位、第17254位～第17274位、第
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25107位～第25127位、第25108位～第25128位、第25364位～第25384位、第
26287位～第26307位、第26288位～第26308位、第26289位～第26309位、第
26290位～第26310位、第26291位～第26311位、第26292位～第26312位、第26293位～第26313位、第26294位～第26314位、第26295位～第26315位、第26296位～第26316位、第26297位～第26317位、第26298位～第26318位、第26299位～第26319位、第26300位～第26320位、第26301位～第26321位、第26302位～第26322位、第26303位～第26323位、第26304位～第26324位、第26305位～第26325位、第26574位～第26594位、第26575位～第26595位、第29576位～第29596位、第26577位～第26597位、第26578位～第26598位、第26579位～第26599位、第26580位～第26600、26581位～第26601位、第26582位～第26602位、第26583位～第26603位、第26584位～第26604位、第28273位～第28293位、第28274位～第28294位、第28397位～第28417位、第28398位～第28418位、第28509位～第28529位、第28510位～第28530位、第28511位～第28531位、第28512位～第28532位、第28513位～第28533位、第28514位～第28534位、第28515位～第28535位、第28516位～第28536位、第28517位～第28537位、第28518位～第28538位、第28744位～第288764位、第28745位～第28765位、第28746位～第28766位、第28747位～第28767位、第28748位～第28768位、第28749位～第28769位、第28750位～第28770位、第28751位～第28771位、第28752位～第28772位、第28753位～第28773位、第28754位～第28774位、第28755位～第28775位、第28756位～第28776位、第28757位～第28777位、第28758位～第28778位、第28759位～第28779位、第28760位～第28780位、第28761位～第28781位、第28762位～第28782位、第28763位～第28783位、第28764位～第28784位、第28799位～第28819位、第28800位～第28820位、第28946位～第28966位、第28947位～第28967位、第28948位～第28968位、第28949位～第28969位、第28950位～第28970位、第28951位～第28971位、第28952位～第28972位、第29010位～第29030位、第29011位～第29031位、第29102位～第29122位、第29103位～第29123位、第29104位～第29124位、第29105位～第29125位、第29106位～第29126位、第29107位～第29127位、第29108位～第29128位、第29109位～第29129位、第29110位～第29130位、第29174位～第29194位、第29175位及第29176位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域或该靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第10410位～第10430位、第10411位～第10431位、第10486位～第10506位、第12898位～第12918位、第13763位～第13783位、第13765位～第13785位、第13895位～第13915位、第14883位～第14903位、第14887位～第14907位、第14955位～第15015位、第15002位～第15022位、第15077位～第15097位、第15079位～第15099位、第15105位～第15125位、第15107位～第15127位、第15110位～第15130位、第15113位～第15133位、第15116位～第15136位、第15498位～第15518位、第15623位～第15643位、第15838位～第15858位、第15987位～第16007位、第16061位～第16081位、第16063位～第16083位、第16193位～第16213位、第16430位～第16450位、第16825位～第16845位、第17022位～第17042位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17257位～第17277位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第19570位～第19590位、第21504位～第21524位、第22815位～第22835位、第22816位～第22836位、第23956位～第23976位、第24303位～第24323位、第24624位～第24644位、第24625位～第24645位、第24630位～第24650位、第24664位～第24684位、第25364位～第25384位、第26291位～第26311位、第26303位～第26323位、第26579位～第26599位、第26583位～第26603位、第26584位～第26604位、第28746位～第28766位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域或该靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向选自由序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第3352位～第3372位、第6406位～第6426位、第10486位～第10506位、第12898位～第12918位、第13765位～第13785位、第13895位～第13915位、第14883位～第14903位、第14887位～第14907位、第14955位～第15015位、第15002位～第15022位、第15077位～第15097位、第15079位～第15099位、第15105位～第15125位、第16061位～第16081位、第16063位～第16083位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第21504位～第21524位、第24630位～第24650位、第26583位～第26603位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域或该靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、解旋酶区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向SARS-CoV-2的基因组RNA和SARS-CoV-1的基因组RNA的序列中的保存区域，例如选自由序列号1的第43位～第69位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的抗病毒核酸等靶向上述靶区域中的连续的21个碱基所构成的序列，例如选自由区域序列号1的第43位～第63位、第48位～第68位、第16430位～第16450位、第16825位～第16845位、第17022位～第17042位、第17025位～第17045位、第17026位～第17046位、第17081位～第17101位、第17255位～第17275位、第17257位～第17277位、第17565位～第17585位、第17567位～第17587位、第28746位～第28766位、第28749位～第28769位、第28752位～第28772位及第28952位～第28972位组成的组中的至少一个靶区域或该靶区域中的序列。
一实施方式中，本发明的核酸为siRNA或shRNA、或者编码它们的DNA。siRNA是指能序列特异性地诱导RNA干扰的、包含有义链及反义链的双链RNA。本说明书中，RNA干扰是指：通过双链RNA而序列特异性地导致具有靶序列的核酸被分解的现象。shRNA是发夹型的RNA，包含有义链、反义链以及通过共价键而将上述有义链和上述反义链键合的单链环序列(发夹序列)。shRNA如果被导入细胞内，则受到Dicer的加工而形成siRNA。作为编码siRNA的DNA的例子，可列举包含2个启动子(例如U6启动子)、编码有义链的碱基序列及编码反义链的碱基序列的串联型DNA。
本说明书中，“有义链”是指与对应的反义链的至少一部分部分性互补或完全互补的核苷酸链。有义链可以包含与靶序列具有同源性的核酸序列。本说明书中，“反义链”是指与靶核酸序列的至少一部分部分性互补或完全互补的核苷酸链。
有义RNA和反义RNA的各3’末端可以具有2～5个核苷酸、例如2个核苷酸的突出末端。据称，突出末端可能与RISC发生相互作用，另外有助于提高对于由核酸酶所致的分解的稳定性，为了不影响对靶序列的特异性，可以使用任意的序列(例如多聚T序列)。
本发明的核酸的碱基长度没有限定，例如在siRNA时，可以为16bp以上、17bp以上、18bp以上、19bp以上或20bp以上的序列，可以为30bp以下、28bp以下、26bp以下、24bp以下或22bp以下的序列。一实施方式中，为目标区域内的连续的16～30bp、18bp～26bp、20～22bp、或21bp的序列。shRNA的情况下，核酸的碱基长度可以为在上述双链序列上加上(例如2～15个碱基的)茎环序列的长度，例如可以为34～75个碱基长度。
siRNA或shRNA可以基于靶序列进行设计。例如，靶序列为靶区域中的连续的21个碱基所构成的序列时，作为有义链，可以使用包含由该序列的5’末端侧的19个碱基构成的序列及突出末端的核酸。另外，作为反义链，可以使用与靶区域中的连续的21个碱基所构成的序列互补的序列(其中，在3’末端侧(例如3’末端侧的2个碱基)为突出末端时，突出末端可以为任意的序列)。
一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA包含有义链及反义链，所述有义链包含：(a)选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列、(b)在选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或(c)相对于选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列具有80％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、或99％以上的序列同一性的碱基序列，所述反义链包含与上述有义链中的上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
本说明书中，添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列中的数个是指2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个。
本说明书中，碱基序列的“同一性”是指对2个碱基序列进行比对时一致的碱基的比例。序列同一性可以使用FASTA(Science 227(4693):1435-1441,(1985))、Karlin及Altschul开发的算法BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 872264-2268,1990；Proc Natl Acad Sci USA 90:5873,1993)来确定。已开发出基于BLAST算法的被称为blastn、blastx、tblastn、tblastx的程序(Altschul SF,et al:J Mol Biol 215:403,1990)。使用blastn分析碱基序列时，参数例如设为评分(score)＝100、字长(wordlength)＝12。使用BLAST和Gapped BLAST程序时，使用各程序的默认参数。
一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA包含有义链及反义链，所述有义链包含：(a)选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列、(b)在选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或(c)相对于选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列具有880％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、或99％以上序列同一性的碱基序列，所述反义链包含与有义链中的上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA包含有义链及反义链，所述有义链包含：(a)选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列、(b)在选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或(c)相对于选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列具有80％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、或99％以上的序列同一性的碱基序列，所述反义链包含与有义链中的上述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA中的有义链包含上述(a)～(c)的序列及突出末端或者由它们构成。一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA中的反义链包含与有义链中的上述(a)～(c)的序列互补的碱基序列及突出末端或者由它们构成。
一实施方式中，本发明的siRNA或shRNA抑制靶区域的功能。本说明书中，“抑制靶区域的功能”包括下述中的一种以上：与靶区域结合而将包含靶区域的基因组RNA和/或亚基因组RNA切割、抑制包含靶区域的基因组RNA和/或亚基因组RNA的复制、抑制包含靶区域的基因组RNA和/或亚基因组RNA的转录、及在翻译靶区域时抑制其翻译。本说明书中，“亚基因组RNA”是指如下RNA：将以(+)链的基因组RNA为模板由RNA依赖性RNA聚合酶合成的(-)链的RNA的一部分作为模板由RNA依赖性RNA聚合酶合成，比基因组RNA短，作为用于病毒蛋白合成(翻译)的mRNA起作用的RNA。
本发明的siRNA或shRNA可以包含多个靶向不同区域的有义链序列及反义链序列。例如，本发明的siRNA中的有义链可以包含多个上述(a)～(c)中记载的序列，另外本发明的siRNA中的反义链可以包含多个与有义链中的上述(a)～(c)中记载的序列互补的碱基序列。
一实施方式中，本发明涉及载体，其包含本发明的核酸或编码该核酸的DNA。载体可以通过常规方法制备。例如，本发明的包含编码siRNA的串联型DNA的载体可以如下制备：通过PCT利用引物扩增包含有义链序列、反义序列的核酸，将扩增片段用限制酶切割后插入载体的启动子(例如U6启动子)的下游，从而制备。本发明的包含编码shRNA的DNA的载体可以如下制备：合成包含有义链序列、环序列及反义链序列的核酸后使其退火，插入载体的启动子(例如U6启动子)的下游，从而制备。作为载体的例子，可列举质粒、病毒载体(例如腺相关病毒、逆转录病毒及慢病毒)及人工染色体等。
一实施方式中，本发明涉及包含本发明的核酸等或载体的药物组合物。本发明的药物组合物可以包含多种本发明的核酸等或载体。
本发明的药物组合物中，除了本发明的核酸等或载体以外还可以包含药学上能接受的载体(赋形剂、增量剂、结合剂、润滑剂等)和/或公知的添加剂(缓冲剂、等渗剂、螯合剂、着色剂、保存剂、香料、风味剂、甜味剂等)。
本发明的药物组合物可以包括：利用阳离子性脂质或中性脂质等脂质将本发明的核酸等或载体脂质体化者、或在本发明的核酸等或载体上通过共价键键合有阳离子化脂质或中性脂质等脂质者。
本发明的组合物的给药方式只要是药学上能接受的给药方式则没有特别限制，可以根据治疗方法来选择，可列举气管内给药、静脉内给药、动脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、经口给药、组织内给药、经皮给药等。另外，作为本发明的组合物可采取的剂型，没有特别限制，可列举例如吸入剂、各种注射剂、经口剂、点滴剂、软膏剂、洗剂等。
本发明的药物组合物的给药方式优选为气管内给药，作为本发明的组合物可采取的剂形，优选为吸入剂，具体而言例如吸入液剂(例如用喷雾器给药)、粉末吸入剂(例如用DPI(干粉吸入器)给药)、气溶胶剂，优选吸入液剂。
作为给药本发明的组合物时的用量，可以在考虑含有的本发明的种类、组合物的剂形、年龄和体重等患者状态、给药途径、疾病的性质和症状的基础上进行调整，以本发明的核酸的量计，例如可以设为每1天0.1mg～10g/人的范围内、例如1mg～1g/人的范围内、例如10mg～100mg/人的范围内。给药次数及给药频率没有限定，例如可以以1天1次至2、3次的给药次数，间隔1天至2、3天而给药。另外，例如也可以仅给药1次，也可以在数日后再给药一次而合计给药2次。
一实施方式中，本发明涉及病毒感染症的治疗和/或预防方法，其包括将有效量的本发明的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、载体或药物组合物给药于对象的工序，其中，病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。病毒例如为SARS-CoV-2或SARS-CoV-1，优选SARS-CoV-2。
本发明的核酸等、载体或药物组合物的给药对象可列举例如哺乳动物，例如人等灵长类；大鼠、小鼠及褐家鼠等实验动物；猪、牛、马、及绵羊等家畜动物等，优选人。
本说明书中，病毒感染症的治疗包括：因上述病毒而产生的疾病或其症状(例如呼吸困難、发热、干咳、头痛、恶寒及肌肉痛中的一种以上)的缓和、改善及缓解中的一种以上。本说明书中，病毒感染症的预防包括：降低因上述病毒而产生的疾病或其症状的发生风险。
一实施方式中，本发明涉及：本发明的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、或者载体用于制造治疗和/或预防病毒感染症的药物的应用。
实施例
＜实施例1：使用SARS-CoV-2表达质粒的siRNA的敲除活性的测定＞
对SARS-CoV-2(参考序列；NC_045512.2)(序列号1)的基因组RNA与SARS-CoV-1(参考序列；NC_004718.3)的基因组RNA的序列进行比较，确定两种间保存的区域。作为两种间保存的区域，发现了序列号1的第43位～第69位、第242位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6427位、第10406位～第10431位、第10484位～第10506位、第12839位～第12867位、第12898位～第12922位、第12965位～第12990位、第13481位～第13502位、第13762位～第13790位、第13894位～第13916位、第14290位～第14312位、第14654位～第14687位、第14750位～第14777位、第14824位～第14846位、第14878位～第14909位、第14953位～第14990位、第14992位～第15026位、第15037位～第15061位、第15063位～第15140位、第15172位～第15198位、第15278位～第15299位、第15454位～第15479位、第15496位～第15518位、第15622位～第15644位、第15829位～第15859位、第15929位～第15950位、第15985位～第16011位、第16051位～第16085位、第16189位～第16220位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第18196位～第18218位、第18253位～第18278位、第19568位～第19595位、第20888位～第20909位、第21502位～第21524位、第22814位～第22836位、第23093位～第23113位、第23956位～第23976位、第24302位～第24324位、第24467位～第24489位、第24620位～第24651位、第24662位～第24684位、第24962位～第24982位、第25104位～第25128位、第25364位～第25384位、第26287位～第26325位、第26574位～第26604位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位的碱基序列。以该保存区域中所含的序列为靶标，制作受试物质siRNA No.1～59(分别包含由序列号2～60所示的碱基序列及2个碱基的突出末端区域构成的有义链以及由序列号61～119所示的碱基序列构成的反义链)。将靶序列及受试物质siRNA No.1～59的序列等示于以下的表1-1。有义链及反义链分别在3’末端包含2个碱基的突出末端区域，有义链侧的突出末端区域的序列已省略，反义链侧的突出末端区域用小写字母示出。需要说明的是，反义链的包含突出末端区域在内的序列的互补序列与靶序列相同，实际上与有义链形成双链的部分是对于siRNA活性而言重要的区域，因此突出末端区域不需要与靶序列互补，可以使用任意的序列。
[表1-1]
*1…包含靶序列的核酸或该核酸所编码的蛋白质的功能
将293T细胞(由ACTT获得)以5.0×104个细胞/孔播种于24孔板。次日，使用Lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher Scientific)将SARS-CoV-2表达质粒、萤火虫荧光素酶(Fluc)表达质粒(对照质粒)及受试物质siRNA或阴性对照siRNA导入到细胞中。受试物质siRNA以30或100nM来使用，Lipofectamine 3000转染试剂以1.5μL/孔来使用。SARS-CoV-2表达质粒使用了：将SARS-CoV-2的基因组RNA分成了9份(表1-2)并以DNA人工基因形式进行合成后，亚克隆到表达质粒pcDNA3.1中而得的物质。人工基因合成和向表达质粒中的亚克隆委托Thermo Fisher Scientific实施。其中，质粒No.4未能获得，因此在一部分siRNA的活性评价中，使用SARS-CoV-2(2019-nCoV)3C-样蛋白酶/3CLpro Gene ORF cDNA克隆表达质粒(Sino Biological)。对照质粒使用pGL4.50[luc2/CMV/Hygro]Vector(Promega)。受试物质siRNA委托日本BIO SERVICE来合成。阴性对照siRNA使用MISSIONsiRNA通用阴性对照(Sigma-Aldrich)。
在导入siRNA及对应的质粒起2天后，使用NucleoSpin RNA(Macherey-Nagel)从细胞中分离RNA，使用含有RNase抑制剂的高效cDNA逆转录试剂盒(Thermo FisherScientific)及试剂盒附带的随机引物进行逆转录(RT)反应。使用Fast SYBR GreenMaster Mix(Thermo Fisher Scientific)，按照制造商的规程以RT反应液为模板进行qPCR，测定SARS-CoV-2表达质粒来源的SARS-CoV-2 RNA表达量。将SARS-CoV-2表达质粒来源的SARS-CoV-2 RNA的检测中使用的引物示于表1-2。SARS-CoV-2 RNA表达量用对照质粒来源的Fluc RNA表达量或管家基因的PPIB RNA表达量进行了校正。将Fluc RNA或PPIB RNA的检测中使用的引物示于表1-3。计算导入受试物质siRNA时的SARS-CoV-2 RNA表达量相对于导入阴性对照siRNA时的SARS-CoV-2 RNA表达量的比率，分析受试物质siRNA的敲除活性。将结果示于表1-4。
[表1-2]
/>
[表1-3]
表1-3 SARS-CoV-2表达量的校正中使用的基因及检测用引物
[表1-4]
表1-4使用SARS-CoV-2表达质粒的siRNA的敲除活性
*1…包含靶序列的核酸或该核酸所编码的蛋白质的功能
<实施例2：使用SARS-CoV-2病毒的siRNA的敲除活性测定(第一次筛选)＞
将终浓度为30或100nM的受试物质siRNA或阴性对照siRNA与Lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher Scientific,0.3μL/孔)的混合物添加到96孔板中，向其中以3.0×104个细胞/孔播种使人ACE2表达慢病毒载体感染293T细胞而制作的人ACE2稳定表达细胞(293T-ACE2)。作为阴性对照siRNA，使用MISSION siRNA通用阴性对照(Sigma-Aldrich)。次日，以MOI＝0.01添加SARS-CoV-2病毒液，使细胞感染病毒。SARS-CoV-2病毒使用了重组SARS-CoV-2病毒(rSARS-CoV-2-ORF8-Nluc)，其如下得到：以由国立感染症研究所获得的WK521株为基础，使用与文献(Terada et al.2019.J Virol 93:e01208-19.https://doi.org/10.1128/JVI.01208-19.)中记载的方法同样的方法使Nano-luciferase基因整合于辅助(accessory)蛋白ORF8的编码区。在添加病毒液起1h后通过培养基交换除去培养基中的病毒。病毒感染起24h后回收培养上清，对于细胞，使用Passive裂解液(Promega)而制备细胞溶解液。使用荧光素酶分析系统(Promega)按照附带的规程测定细胞溶解液中的荧光素酶活性，评价细胞内的SARS-CoV-2病毒量。另外，将回收的培养上清5μL添加到另行以3.0×104个细胞/孔播种有293T-ACE2细胞的96孔板中，使培养上清中的病毒感染细胞。利用培养上清进行感染起24h后，通过与最初的病毒感染同样的方法评价细胞内的SARS-CoV-2病毒量，评价培养上清中的感染性病毒颗粒量。进而从回收的培养上清中使用QIAampViral RNA Mini Kit(Qiagen)分离RNA，使用THUNDERBIRD Probe One-step qRT-PCR Kit(Toyobo)进行用于定量SARS-CoV-2病毒RNA的一步法qPCR。引物及探针使用了国立感染症研究所的“病原体检测指南2019-nCoV Ver.2.9.1”(https://www.niid.go.jp/niid/ja/labo-manual.html#class0)中记载的N组No.2(正向引物5’-AAATTTTGGGGACCAGGAAC-3’(序列号160),反向引物5’-TGGCAGCTGTGTAGGTCAAC-3’(序列号161),探针5’-FAM-ATGTCGCGCATTGGCATGGA-TAMRA-3’(序列号162))。将结果示于表2。
[表2]
＜实施例3：使用SARS-CoV-2病毒的siRNA的敲除活性的测定(第二次筛选)＞
实施例2中，在导入siRNA后再使病毒进行感染，本实施例中在病毒感染后导入siRNA。
具体而言，将293T-ACE2细胞以3.0×104个细胞/孔播种于96孔板。次日，以MOI＝0.01添加SARS-CoV-2病毒液，使病毒感染细胞。作为SARS-CoV-2病毒，与实施例2同样使用SARS-CoV-2病毒(rSARS-CoV-2-ORF8-Nluc)。在添加病毒液起1h后通过培养基交换除去培养基中的病毒，向其中添加受试物质siRNA或阴性对照siRNA与Lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher Scientific,0.1μL/孔)的混合物，从而将siRNA导入细胞。siRNA的终浓度设为3或10nM。病毒感染起24h或48h后，回收培养上清，对于细胞，使用Passive裂解液(Promega)制备细胞溶解液。使用荧光素酶分析系统(Promega)按照附带的规程测定细胞溶解液中的荧光素酶活性，评价细胞内的SARS-CoV-2病毒量。另外，将回收的培养上清添加到另行以3.0×104个细胞/孔播种有293T-ACE2细胞的96孔板中，使培养上清中的病毒感染细胞。利用培养上清进行感染起24h后，通过与最初的病毒感染同样的方法评价细胞内的SARS-CoV-2病毒量，评价培养上清中的感染性病毒颗粒量。将结果示于表3。
[表3]
表3使用SARS-CoV-2病毒的siRNA的敲除活性测定(第二次筛选)
*1…包含靶序列的核酸或该核酸所编码的蛋白质的功能
序列表
<110> 日本新药株式会社（NIPPON SHINYAKU CO., LTD.）
国立大学法人群马大学（National University Corporation GunmaUniversity）
<120> 抗病毒核酸
<130> G2857WO
<150> JP2021-076521
<151> 2021-04-28
<160> 162
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29903
<212> DNA
<213> 与严重急性呼吸综合征有关的冠状病毒（Severe acute respiratorysyndrome-related coronavirus）
<400> 1
attaaaggtt tataccttcc caggtaacaa accaaccaac tttcgatctc ttgtagatct 60
gttctctaaa cgaactttaa aatctgtgtg gctgtcactc ggctgcatgc ttagtgcact 120
cacgcagtat aattaataac taattactgt cgttgacagg acacgagtaa ctcgtctatc 180
ttctgcaggc tgcttacggt ttcgtccgtg ttgcagccga tcatcagcac atctaggttt 240
cgtccgggtg tgaccgaaag gtaagatgga gagccttgtc cctggtttca acgagaaaac 300
acacgtccaa ctcagtttgc ctgttttaca ggttcgcgac gtgctcgtac gtggctttgg 360
agactccgtg gaggaggtct tatcagaggc acgtcaacat cttaaagatg gcacttgtgg 420
cttagtagaa gttgaaaaag gcgttttgcc tcaacttgaa cagccctatg tgttcatcaa 480
acgttcggat gctcgaactg cacctcatgg tcatgttatg gttgagctgg tagcagaact 540
cgaaggcatt cagtacggtc gtagtggtga gacacttggt gtccttgtcc ctcatgtggg 600
cgaaatacca gtggcttacc gcaaggttct tcttcgtaag aacggtaata aaggagctgg 660
tggccatagt tacggcgccg atctaaagtc atttgactta ggcgacgagc ttggcactga 720
tccttatgaa gattttcaag aaaactggaa cactaaacat agcagtggtg ttacccgtga 780
actcatgcgt gagcttaacg gaggggcata cactcgctat gtcgataaca acttctgtgg 840
ccctgatggc taccctcttg agtgcattaa agaccttcta gcacgtgctg gtaaagcttc 900
atgcactttg tccgaacaac tggactttat tgacactaag aggggtgtat actgctgccg 960
tgaacatgag catgaaattg cttggtacac ggaacgttct gaaaagagct atgaattgca 1020
gacacctttt gaaattaaat tggcaaagaa atttgacacc ttcaatgggg aatgtccaaa 1080
ttttgtattt cccttaaatt ccataatcaa gactattcaa ccaagggttg aaaagaaaaa 1140
gcttgatggc tttatgggta gaattcgatc tgtctatcca gttgcgtcac caaatgaatg 1200
caaccaaatg tgcctttcaa ctctcatgaa gtgtgatcat tgtggtgaaa cttcatggca 1260
gacgggcgat tttgttaaag ccacttgcga attttgtggc actgagaatt tgactaaaga 1320
aggtgccact acttgtggtt acttacccca aaatgctgtt gttaaaattt attgtccagc 1380
atgtcacaat tcagaagtag gacctgagca tagtcttgcc gaataccata atgaatctgg 1440
cttgaaaacc attcttcgta agggtggtcg cactattgcc tttggaggct gtgtgttctc 1500
ttatgttggt tgccataaca agtgtgccta ttgggttcca cgtgctagcg ctaacatagg 1560
ttgtaaccat acaggtgttg ttggagaagg ttccgaaggt cttaatgaca accttcttga 1620
aatactccaa aaagagaaag tcaacatcaa tattgttggt gactttaaac ttaatgaaga 1680
gatcgccatt attttggcat ctttttctgc ttccacaagt gcttttgtgg aaactgtgaa 1740
aggtttggat tataaagcat tcaaacaaat tgttgaatcc tgtggtaatt ttaaagttac 1800
aaaaggaaaa gctaaaaaag gtgcctggaa tattggtgaa cagaaatcaa tactgagtcc 1860
tctttatgca tttgcatcag aggctgctcg tgttgtacga tcaattttct cccgcactct 1920
tgaaactgct caaaattctg tgcgtgtttt acagaaggcc gctataacaa tactagatgg 1980
aatttcacag tattcactga gactcattga tgctatgatg ttcacatctg atttggctac 2040
taacaatcta gttgtaatgg cctacattac aggtggtgtt gttcagttga cttcgcagtg 2100
gctaactaac atctttggca ctgtttatga aaaactcaaa cccgtccttg attggcttga 2160
agagaagttt aaggaaggtg tagagtttct tagagacggt tgggaaattg ttaaatttat 2220
ctcaacctgt gcttgtgaaa ttgtcggtgg acaaattgtc acctgtgcaa aggaaattaa 2280
ggagagtgtt cagacattct ttaagcttgt aaataaattt ttggctttgt gtgctgactc 2340
tatcattatt ggtggagcta aacttaaagc cttgaattta ggtgaaacat ttgtcacgca 2400
ctcaaaggga ttgtacagaa agtgtgttaa atccagagaa gaaactggcc tactcatgcc 2460
tctaaaagcc ccaaaagaaa ttatcttctt agagggagaa acacttccca cagaagtgtt 2520
aacagaggaa gttgtcttga aaactggtga tttacaacca ttagaacaac ctactagtga 2580
agctgttgaa gctccattgg ttggtacacc agtttgtatt aacgggctta tgttgctcga 2640
aatcaaagac acagaaaagt actgtgccct tgcacctaat atgatggtaa caaacaatac 2700
cttcacactc aaaggcggtg caccaacaaa ggttactttt ggtgatgaca ctgtgataga 2760
agtgcaaggt tacaagagtg tgaatatcac ttttgaactt gatgaaagga ttgataaagt 2820
acttaatgag aagtgctctg cctatacagt tgaactcggt acagaagtaa atgagttcgc 2880
ctgtgttgtg gcagatgctg tcataaaaac tttgcaacca gtatctgaat tacttacacc 2940
actgggcatt gatttagatg agtggagtat ggctacatac tacttatttg atgagtctgg 3000
tgagtttaaa ttggcttcac atatgtattg ttctttctac cctccagatg aggatgaaga 3060
agaaggtgat tgtgaagaag aagagtttga gccatcaact caatatgagt atggtactga 3120
agatgattac caaggtaaac ctttggaatt tggtgccact tctgctgctc ttcaacctga 3180
agaagagcaa gaagaagatt ggttagatga tgatagtcaa caaactgttg gtcaacaaga 3240
cggcagtgag gacaatcaga caactactat tcaaacaatt gttgaggttc aacctcaatt 3300
agagatggaa cttacaccag ttgttcagac tattgaagtg aatagtttta gtggttattt 3360
aaaacttact gacaatgtat acattaaaaa tgcagacatt gtggaagaag ctaaaaaggt 3420
aaaaccaaca gtggttgtta atgcagccaa tgtttacctt aaacatggag gaggtgttgc 3480
aggagcctta aataaggcta ctaacaatgc catgcaagtt gaatctgatg attacatagc 3540
tactaatgga ccacttaaag tgggtggtag ttgtgtttta agcggacaca atcttgctaa 3600
acactgtctt catgttgtcg gcccaaatgt taacaaaggt gaagacattc aacttcttaa 3660
gagtgcttat gaaaatttta atcagcacga agttctactt gcaccattat tatcagctgg 3720
tatttttggt gctgacccta tacattcttt aagagtttgt gtagatactg ttcgcacaaa 3780
tgtctactta gctgtctttg ataaaaatct ctatgacaaa cttgtttcaa gctttttgga 3840
aatgaagagt gaaaagcaag ttgaacaaaa gatcgctgag attcctaaag aggaagttaa 3900
gccatttata actgaaagta aaccttcagt tgaacagaga aaacaagatg ataagaaaat 3960
caaagcttgt gttgaagaag ttacaacaac tctggaagaa actaagttcc tcacagaaaa 4020
cttgttactt tatattgaca ttaatggcaa tcttcatcca gattctgcca ctcttgttag 4080
tgacattgac atcactttct taaagaaaga tgctccatat atagtgggtg atgttgttca 4140
agagggtgtt ttaactgctg tggttatacc tactaaaaag gctggtggca ctactgaaat 4200
gctagcgaaa gctttgagaa aagtgccaac agacaattat ataaccactt acccgggtca 4260
gggtttaaat ggttacactg tagaggaggc aaagacagtg cttaaaaagt gtaaaagtgc 4320
cttttacatt ctaccatcta ttatctctaa tgagaagcaa gaaattcttg gaactgtttc 4380
ttggaatttg cgagaaatgc ttgcacatgc agaagaaaca cgcaaattaa tgcctgtctg 4440
tgtggaaact aaagccatag tttcaactat acagcgtaaa tataagggta ttaaaataca 4500
agagggtgtg gttgattatg gtgctagatt ttacttttac accagtaaaa caactgtagc 4560
gtcacttatc aacacactta acgatctaaa tgaaactctt gttacaatgc cacttggcta 4620
tgtaacacat ggcttaaatt tggaagaagc tgctcggtat atgagatctc tcaaagtgcc 4680
agctacagtt tctgtttctt cacctgatgc tgttacagcg tataatggtt atcttacttc 4740
ttcttctaaa acacctgaag aacattttat tgaaaccatc tcacttgctg gttcctataa 4800
agattggtcc tattctggac aatctacaca actaggtata gaatttctta agagaggtga 4860
taaaagtgta tattacacta gtaatcctac cacattccac ctagatggtg aagttatcac 4920
ctttgacaat cttaagacac ttctttcttt gagagaagtg aggactatta aggtgtttac 4980
aacagtagac aacattaacc tccacacgca agttgtggac atgtcaatga catatggaca 5040
acagtttggt ccaacttatt tggatggagc tgatgttact aaaataaaac ctcataattc 5100
acatgaaggt aaaacatttt atgttttacc taatgatgac actctacgtg ttgaggcttt 5160
tgagtactac cacacaactg atcctagttt tctgggtagg tacatgtcag cattaaatca 5220
cactaaaaag tggaaatacc cacaagttaa tggtttaact tctattaaat gggcagataa 5280
caactgttat cttgccactg cattgttaac actccaacaa atagagttga agtttaatcc 5340
acctgctcta caagatgctt attacagagc aagggctggt gaagctgcta acttttgtgc 5400
acttatctta gcctactgta ataagacagt aggtgagtta ggtgatgtta gagaaacaat 5460
gagttacttg tttcaacatg ccaatttaga ttcttgcaaa agagtcttga acgtggtgtg 5520
taaaacttgt ggacaacagc agacaaccct taagggtgta gaagctgtta tgtacatggg 5580
cacactttct tatgaacaat ttaagaaagg tgttcagata ccttgtacgt gtggtaaaca 5640
agctacaaaa tatctagtac aacaggagtc accttttgtt atgatgtcag caccacctgc 5700
tcagtatgaa cttaagcatg gtacatttac ttgtgctagt gagtacactg gtaattacca 5760
gtgtggtcac tataaacata taacttctaa agaaactttg tattgcatag acggtgcttt 5820
acttacaaag tcctcagaat acaaaggtcc tattacggat gttttctaca aagaaaacag 5880
ttacacaaca accataaaac cagttactta taaattggat ggtgttgttt gtacagaaat 5940
tgaccctaag ttggacaatt attataagaa agacaattct tatttcacag agcaaccaat 6000
tgatcttgta ccaaaccaac catatccaaa cgcaagcttc gataatttta agtttgtatg 6060
tgataatatc aaatttgctg atgatttaaa ccagttaact ggttataaga aacctgcttc 6120
aagagagctt aaagttacat ttttccctga cttaaatggt gatgtggtgg ctattgatta 6180
taaacactac acaccctctt ttaagaaagg agctaaattg ttacataaac ctattgtttg 6240
gcatgttaac aatgcaacta ataaagccac gtataaacca aatacctggt gtatacgttg 6300
tctttggagc acaaaaccag ttgaaacatc aaattcgttt gatgtactga agtcagagga 6360
cgcgcaggga atggataatc ttgcctgcga agatctaaaa ccagtctctg aagaagtagt 6420
ggaaaatcct accatacaga aagacgttct tgagtgtaat gtgaaaacta ccgaagttgt 6480
aggagacatt atacttaaac cagcaaataa tagtttaaaa attacagaag aggttggcca 6540
cacagatcta atggctgctt atgtagacaa ttctagtctt actattaaga aacctaatga 6600
attatctaga gtattaggtt tgaaaaccct tgctactcat ggtttagctg ctgttaatag 6660
tgtcccttgg gatactatag ctaattatgc taagcctttt cttaacaaag ttgttagtac 6720
aactactaac atagttacac ggtgtttaaa ccgtgtttgt actaattata tgccttattt 6780
ctttacttta ttgctacaat tgtgtacttt tactagaagt acaaattcta gaattaaagc 6840
atctatgccg actactatag caaagaatac tgttaagagt gtcggtaaat tttgtctaga 6900
ggcttcattt aattatttga agtcacctaa tttttctaaa ctgataaata ttataatttg 6960
gtttttacta ttaagtgttt gcctaggttc tttaatctac tcaaccgctg ctttaggtgt 7020
tttaatgtct aatttaggca tgccttctta ctgtactggt tacagagaag gctatttgaa 7080
ctctactaat gtcactattg caacctactg tactggttct ataccttgta gtgtttgtct 7140
tagtggttta gattctttag acacctatcc ttctttagaa actatacaaa ttaccatttc 7200
atcttttaaa tgggatttaa ctgcttttgg cttagttgca gagtggtttt tggcatatat 7260
tcttttcact aggtttttct atgtacttgg attggctgca atcatgcaat tgtttttcag 7320
ctattttgca gtacatttta ttagtaattc ttggcttatg tggttaataa ttaatcttgt 7380
acaaatggcc ccgatttcag ctatggttag aatgtacatc ttctttgcat cattttatta 7440
tgtatggaaa agttatgtgc atgttgtaga cggttgtaat tcatcaactt gtatgatgtg 7500
ttacaaacgt aatagagcaa caagagtcga atgtacaact attgttaatg gtgttagaag 7560
gtccttttat gtctatgcta atggaggtaa aggcttttgc aaactacaca attggaattg 7620
tgttaattgt gatacattct gtgctggtag tacatttatt agtgatgaag ttgcgagaga 7680
cttgtcacta cagtttaaaa gaccaataaa tcctactgac cagtcttctt acatcgttga 7740
tagtgttaca gtgaagaatg gttccatcca tctttacttt gataaagctg gtcaaaagac 7800
ttatgaaaga cattctctct ctcattttgt taacttagac aacctgagag ctaataacac 7860
taaaggttca ttgcctatta atgttatagt ttttgatggt aaatcaaaat gtgaagaatc 7920
atctgcaaaa tcagcgtctg tttactacag tcagcttatg tgtcaaccta tactgttact 7980
agatcaggca ttagtgtctg atgttggtga tagtgcggaa gttgcagtta aaatgtttga 8040
tgcttacgtt aatacgtttt catcaacttt taacgtacca atggaaaaac tcaaaacact 8100
agttgcaact gcagaagctg aacttgcaaa gaatgtgtcc ttagacaatg tcttatctac 8160
ttttatttca gcagctcggc aagggtttgt tgattcagat gtagaaacta aagatgttgt 8220
tgaatgtctt aaattgtcac atcaatctga catagaagtt actggcgata gttgtaataa 8280
ctatatgctc acctataaca aagttgaaaa catgacaccc cgtgaccttg gtgcttgtat 8340
tgactgtagt gcgcgtcata ttaatgcgca ggtagcaaaa agtcacaaca ttgctttgat 8400
atggaacgtt aaagatttca tgtcattgtc tgaacaacta cgaaaacaaa tacgtagtgc 8460
tgctaaaaag aataacttac cttttaagtt gacatgtgca actactagac aagttgttaa 8520
tgttgtaaca acaaagatag cacttaaggg tggtaaaatt gttaataatt ggttgaagca 8580
gttaattaaa gttacacttg tgttcctttt tgttgctgct attttctatt taataacacc 8640
tgttcatgtc atgtctaaac atactgactt ttcaagtgaa atcataggat acaaggctat 8700
tgatggtggt gtcactcgtg acatagcatc tacagatact tgttttgcta acaaacatgc 8760
tgattttgac acatggttta gccagcgtgg tggtagttat actaatgaca aagcttgccc 8820
attgattgct gcagtcataa caagagaagt gggttttgtc gtgcctggtt tgcctggcac 8880
gatattacgc acaactaatg gtgacttttt gcatttctta cctagagttt ttagtgcagt 8940
tggtaacatc tgttacacac catcaaaact tatagagtac actgactttg caacatcagc 9000
ttgtgttttg gctgctgaat gtacaatttt taaagatgct tctggtaagc cagtaccata 9060
ttgttatgat accaatgtac tagaaggttc tgttgcttat gaaagtttac gccctgacac 9120
acgttatgtg ctcatggatg gctctattat tcaatttcct aacacctacc ttgaaggttc 9180
tgttagagtg gtaacaactt ttgattctga gtactgtagg cacggcactt gtgaaagatc 9240
agaagctggt gtttgtgtat ctactagtgg tagatgggta cttaacaatg attattacag 9300
atctttacca ggagttttct gtggtgtaga tgctgtaaat ttacttacta atatgtttac 9360
accactaatt caacctattg gtgctttgga catatcagca tctatagtag ctggtggtat 9420
tgtagctatc gtagtaacat gccttgccta ctattttatg aggtttagaa gagcttttgg 9480
tgaatacagt catgtagttg cctttaatac tttactattc cttatgtcat tcactgtact 9540
ctgtttaaca ccagtttact cattcttacc tggtgtttat tctgttattt acttgtactt 9600
gacattttat cttactaatg atgtttcttt tttagcacat attcagtgga tggttatgtt 9660
cacaccttta gtacctttct ggataacaat tgcttatatc atttgtattt ccacaaagca 9720
tttctattgg ttctttagta attacctaaa gagacgtgta gtctttaatg gtgtttcctt 9780
tagtactttt gaagaagctg cgctgtgcac ctttttgtta aataaagaaa tgtatctaaa 9840
gttgcgtagt gatgtgctat tacctcttac gcaatataat agatacttag ctctttataa 9900
taagtacaag tattttagtg gagcaatgga tacaactagc tacagagaag ctgcttgttg 9960
tcatctcgca aaggctctca atgacttcag taactcaggt tctgatgttc tttaccaacc 10020
accacaaacc tctatcacct cagctgtttt gcagagtggt tttagaaaaa tggcattccc 10080
atctggtaaa gttgagggtt gtatggtaca agtaacttgt ggtacaacta cacttaacgg 10140
tctttggctt gatgacgtag tttactgtcc aagacatgtg atctgcacct ctgaagacat 10200
gcttaaccct aattatgaag atttactcat tcgtaagtct aatcataatt tcttggtaca 10260
ggctggtaat gttcaactca gggttattgg acattctatg caaaattgtg tacttaagct 10320
taaggttgat acagccaatc ctaagacacc taagtataag tttgttcgca ttcaaccagg 10380
acagactttt tcagtgttag cttgttacaa tggttcacca tctggtgttt accaatgtgc 10440
tatgaggccc aatttcacta ttaagggttc attccttaat ggttcatgtg gtagtgttgg 10500
ttttaacata gattatgact gtgtctcttt ttgttacatg caccatatgg aattaccaac 10560
tggagttcat gctggcacag acttagaagg taacttttat ggaccttttg ttgacaggca 10620
aacagcacaa gcagctggta cggacacaac tattacagtt aatgttttag cttggttgta 10680
cgctgctgtt ataaatggag acaggtggtt tctcaatcga tttaccacaa ctcttaatga 10740
ctttaacctt gtggctatga agtacaatta tgaacctcta acacaagacc atgttgacat 10800
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acttggacaa tcaaaaagag ttgatttttg tggaaagggc tatcatctta tgtccttccc 24720
tcagtcagca cctcatggtg tagtcttctt gcatgtgact tatgtccctg cacaagaaaa 24780
gaacttcaca actgctcctg ccatttgtca tgatggaaaa gcacactttc ctcgtgaagg 24840
tgtctttgtt tcaaatggca cacactggtt tgtaacacaa aggaattttt atgaaccaca 24900
aatcattact acagacaaca catttgtgtc tggtaactgt gatgttgtaa taggaattgt 24960
caacaacaca gtttatgatc ctttgcaacc tgaattagac tcattcaagg aggagttaga 25020
taaatatttt aagaatcata catcaccaga tgttgattta ggtgacatct ctggcattaa 25080
tgcttcagtt gtaaacattc aaaaagaaat tgaccgcctc aatgaggttg ccaagaattt 25140
aaatgaatct ctcatcgatc tccaagaact tggaaagtat gagcagtata taaaatggcc 25200
atggtacatt tggctaggtt ttatagctgg cttgattgcc atagtaatgg tgacaattat 25260
gctttgctgt atgaccagtt gctgtagttg tctcaagggc tgttgttctt gtggatcctg 25320
ctgcaaattt gatgaagacg actctgagcc agtgctcaaa ggagtcaaat tacattacac 25380
ataaacgaac ttatggattt gtttatgaga atcttcacaa ttggaactgt aactttgaag 25440
caaggtgaaa tcaaggatgc tactccttca gattttgttc gcgctactgc aacgataccg 25500
atacaagcct cactcccttt cggatggctt attgttggcg ttgcacttct tgctgttttt 25560
cagagcgctt ccaaaatcat aaccctcaaa aagagatggc aactagcact ctccaagggt 25620
gttcactttg tttgcaactt gctgttgttg tttgtaacag tttactcaca ccttttgctc 25680
gttgctgctg gccttgaagc cccttttctc tatctttatg ctttagtcta cttcttgcag 25740
agtataaact ttgtaagaat aataatgagg ctttggcttt gctggaaatg ccgttccaaa 25800
aacccattac tttatgatgc caactatttt ctttgctggc atactaattg ttacgactat 25860
tgtatacctt acaatagtgt aacttcttca attgtcatta cttcaggtga tggcacaaca 25920
agtcctattt ctgaacatga ctaccagatt ggtggttata ctgaaaaatg ggaatctgga 25980
gtaaaagact gtgttgtatt acacagttac ttcacttcag actattacca gctgtactca 26040
actcaattga gtacagacac tggtgttgaa catgttacct tcttcatcta caataaaatt 26100
gttgatgagc ctgaagaaca tgtccaaatt cacacaatcg acggttcatc cggagttgtt 26160
aatccagtaa tggaaccaat ttatgatgaa ccgacgacga ctactagcgt gcctttgtaa 26220
gcacaagctg atgagtacga acttatgtac tcattcgttt cggaagagac aggtacgtta 26280
atagttaata gcgtacttct ttttcttgct ttcgtggtat tcttgctagt tacactagcc 26340
atccttactg cgcttcgatt gtgtgcgtac tgctgcaata ttgttaacgt gagtcttgta 26400
aaaccttctt tttacgttta ctctcgtgtt aaaaatctga attcttctag agttcctgat 26460
cttctggtct aaacgaacta aatattatat tagtttttct gtttggaact ttaattttag 26520
ccatggcaga ttccaacggt actattaccg ttgaagagct taaaaagctc cttgaacaat 26580
ggaacctagt aataggtttc ctattcctta catggatttg tcttctacaa tttgcctatg 26640
ccaacaggaa taggtttttg tatataatta agttaatttt cctctggctg ttatggccag 26700
taactttagc ttgttttgtg cttgctgctg tttacagaat aaattggatc accggtggaa 26760
ttgctatcgc aatggcttgt cttgtaggct tgatgtggct cagctacttc attgcttctt 26820
tcagactgtt tgcgcgtacg cgttccatgt ggtcattcaa tccagaaact aacattcttc 26880
tcaacgtgcc actccatggc actattctga ccagaccgct tctagaaagt gaactcgtaa 26940
tcggagctgt gatccttcgt ggacatcttc gtattgctgg acaccatcta ggacgctgtg 27000
acatcaagga cctgcctaaa gaaatcactg ttgctacatc acgaacgctt tcttattaca 27060
aattgggagc ttcgcagcgt gtagcaggtg actcaggttt tgctgcatac agtcgctaca 27120
ggattggcaa ctataaatta aacacagacc attccagtag cagtgacaat attgctttgc 27180
ttgtacagta agtgacaaca gatgtttcat ctcgttgact ttcaggttac tatagcagag 27240
atattactaa ttattatgag gacttttaaa gtttccattt ggaatcttga ttacatcata 27300
aacctcataa ttaaaaattt atctaagtca ctaactgaga ataaatattc tcaattagat 27360
gaagagcaac caatggagat tgattaaacg aacatgaaaa ttattctttt cttggcactg 27420
ataacactcg ctacttgtga gctttatcac taccaagagt gtgttagagg tacaacagta 27480
cttttaaaag aaccttgctc ttctggaaca tacgagggca attcaccatt tcatcctcta 27540
gctgataaca aatttgcact gacttgcttt agcactcaat ttgcttttgc ttgtcctgac 27600
ggcgtaaaac acgtctatca gttacgtgcc agatcagttt cacctaaact gttcatcaga 27660
caagaggaag ttcaagaact ttactctcca atttttctta ttgttgcggc aatagtgttt 27720
ataacacttt gcttcacact caaaagaaag acagaatgat tgaactttca ttaattgact 27780
tctatttgtg ctttttagcc tttctgctat tccttgtttt aattatgctt attatctttt 27840
ggttctcact tgaactgcaa gatcataatg aaacttgtca cgcctaaacg aacatgaaat 27900
ttcttgtttt cttaggaatc atcacaactg tagctgcatt tcaccaagaa tgtagtttac 27960
agtcatgtac tcaacatcaa ccatatgtag ttgatgaccc gtgtcctatt cacttctatt 28020
ctaaatggta tattagagta ggagctagaa aatcagcacc tttaattgaa ttgtgcgtgg 28080
atgaggctgg ttctaaatca cccattcagt acatcgatat cggtaattat acagtttcct 28140
gtttaccttt tacaattaat tgccaggaac ctaaattggg tagtcttgta gtgcgttgtt 28200
cgttctatga agacttttta gagtatcatg acgttcgtgt tgttttagat ttcatctaaa 28260
cgaacaaact aaaatgtctg ataatggacc ccaaaatcag cgaaatgcac cccgcattac 28320
gtttggtgga ccctcagatt caactggcag taaccagaat ggagaacgca gtggggcgcg 28380
atcaaaacaa cgtcggcccc aaggtttacc caataatact gcgtcttggt tcaccgctct 28440
cactcaacat ggcaaggaag accttaaatt ccctcgagga caaggcgttc caattaacac 28500
caatagcagt ccagatgacc aaattggcta ctaccgaaga gctaccagac gaattcgtgg 28560
tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat ttctactacc taggaactgg 28620
gccagaagct ggacttccct atggtgctaa caaagacggc atcatatggg ttgcaactga 28680
gggagccttg aatacaccaa aagatcacat tggcacccgc aatcctgcta acaatgctgc 28740
aatcgtgcta caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa ggcttctacg cagaagggag 28800
cagaggcggc agtcaagcct cttctcgttc ctcatcacgt agtcgcaaca gttcaagaaa 28860
ttcaactcca ggcagcagta ggggaacttc tcctgctaga atggctggca atggcggtga 28920
tgctgctctt gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag cttgagagca aaatgtctgg 28980
taaaggccaa caacaacaag gccaaactgt cactaagaaa tctgctgctg aggcttctaa 29040
gaagcctcgg caaaaacgta ctgccactaa agcatacaat gtaacacaag ctttcggcag 29100
acgtggtcca gaacaaaccc aaggaaattt tggggaccag gaactaatca gacaaggaac 29160
tgattacaaa cattggccgc aaattgcaca atttgccccc agcgcttcag cgttcttcgg 29220
aatgtcgcgc attggcatgg aagtcacacc ttcgggaacg tggttgacct acacaggtgc 29280
catcaaattg gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca 29340
tattgacgca tacaaaacat tcccaccaac agagcctaaa aaggacaaaa agaagaaggc 29400
tgatgaaact caagccttac cgcagagaca gaagaaacag caaactgtga ctcttcttcc 29460
tgctgcagat ttggatgatt tctccaaaca attgcaacaa tccatgagca gtgctgactc 29520
aactcaggcc taaactcatg cagaccacac aaggcagatg ggctatataa acgttttcgc 29580
ttttccgttt acgatatata gtctactctt gtgcagaatg aattctcgta actacatagc 29640
acaagtagat gtagttaact ttaatctcac atagcaatct ttaatcagtg tgtaacatta 29700
gggaggactt gaaagagcca ccacattttc accgaggcca cgcggagtac gatcgagtgt 29760
acagtgaaca atgctaggga gagctgccta tatggaagag ccctaatgtg taaaattaat 29820
tttagtagtg ctatccccat gtgattttaa tagcttctta ggagaatgac aaaaaaaaaa 29880
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 29903
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 2
gaucucuugu agaucuguu 19
<210> 3
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 3
cuuguagauc uguucucua 19
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 4
guuauuuaaa acuuacuga 19
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 5
cugaagaagu aguggaaaa 19
<210> 6
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 6
gguucaccau cugguguuu 19
<210> 7
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 7
guucaccauc ugguguuua 19
<210> 8
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 8
gugguagugu ugguuuuaa 19
<210> 9
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 9
cuuguagguu uguuacaga 19
<210> 10
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 10
gacaugguac cacauauau 19
<210> 11
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 11
caugguacca cauauauca 19
<210> 12
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 12
gaugaugauu auuucaaua 19
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 13
guuacgaugg uggcuguau 19
<210> 14
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 14
cgaugguggc uguauuaau 19
<210> 15
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 15
gaguuaugag gaucaagau 19
<210> 16
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 16
gaggaucaag augcacuuu 19
<210> 17
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 17
gccauuagug caaagaaua 19
<210> 18
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 18
cauuagugca aagaauaga 19
<210> 19
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 19
ccguagcugg ugucucuau 19
<210> 20
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 20
guagcuggug ucucuaucu 19
<210> 21
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 21
gcuggugucu cuaucugua 19
<210> 22
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 22
ggugucucua ucuguagua 19
<210> 23
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 23
gucucuaucu guaguacua 19
<210> 24
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 24
cugcuuaugc uaauagugu 19
<210> 25
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 25
gagugucucu auagaaaua 19
<210> 26
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 26
gacugagacu gaccuuacu 19
<210> 27
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 27
cagaugguac acuuaugau 19
<210> 28
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 28
caggaguaug cugaugucu 19
<210> 29
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 29
ggaguaugcu gaugucuuu 19
<210> 30
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 30
gaguuuuaug aggcuaugu 19
<210> 31
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 31
ggagguauga gcuauuauu 19
<210> 32
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 32
guacaccuuu gaaaaaggu 19
<210> 33
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 33
cuagcaaugu ugcaaauua 19
<210> 34
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 34
gcaauguugc aaauuauca 19
<210> 35
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 35
caauguugca aauuaucaa 19
<210> 36
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 36
ccaccuggua cugguaaga 19
<210> 37
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 37
gaguguuuug auaaauuca 19
<210> 38
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 38
guguuuugau aaauucaaa 19
<210> 39
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 39
guccugcuga aauuguuga 19
<210> 40
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 40
ccugcugaaa uuguugaca 19
<210> 41
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 41
caaacaauuu gauacuuau 19
<210> 42
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 42
gagaaaacaa cagaguugu 19
<210> 43
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 43
gcugauuaua auuauaaau 19
<210> 44
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 44
cugauuauaa uuauaaauu 19
<210> 45
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 45
guuuuaauuu uucacaaau 19
<210> 46
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 46
guucucuaug agaaccaaa 19
<210> 47
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 47
gcuaaucuug cugcuacua 19
<210> 48
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 48
cuaaucuugc ugcuacuaa 19
<210> 49
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 49
cuugcugcua cuaaaaugu 19
<210> 50
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 50
gacaaucaaa aagaguuga 19
<210> 51
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 51
caaauuacau uacacauaa 19
<210> 52
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 52
guacuucuuu uucuugcuu 19
<210> 53
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 53
cuugcuuucg ugguauucu 19
<210> 54
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 54
ggaaccuagu aauagguuu 19
<210> 55
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 55
ccuaguaaua gguuuccua 19
<210> 56
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 56
cuaguaauag guuuccuau 19
<210> 57
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 57
cuacaacuuc cucaaggaa 19
<210> 58
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 58
caacuuccuc aaggaacaa 19
<210> 59
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 59
cuuccucaag gaacaacau 19
<210> 60
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 60
gaaccagcuu gagagcaaa 19
<210> 61
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 61
aacagaucua caagagaucg a 21
<210> 62
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 62
uagagaacag aucuacaaga g 21
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 63
ucaguaaguu uuaaauaacc a 21
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 64
uuuuccacua cuucuucaga g 21
<210> 65
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 65
aaacaccaga uggugaacca t 21
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 66
uaaacaccag auggugaacc a 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 67
uuaaaaccaa cacuaccaca t 21
<210> 68
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 68
ucuguaacaa accuacaagg t 21
<210> 69
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 69
auauaugugg uaccauguca c 21
<210> 70
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 70
ugauauaugu gguaccaugt c 21
<210> 71
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 71
uauugaaaua aucaucauca c 21
<210> 72
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 72
auacagccac caucguaaca a 21
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 73
auuaauacag ccaccaucgt a 21
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 74
aucuugaucc ucauaacuca t 21
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 75
aaagugcauc uugauccuca t 21
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 76
uauucuuugc acuaauggca t 21
<210> 77
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 77
ucuauucuuu gcacuaaugg c 21
<210> 78
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 78
auagagacac cagcuacggt g 21
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 79
agauagagac accagcuacg g 21
<210> 80
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 80
uacagauaga gacaccagct a 21
<210> 81
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 81
uacuacagau agagacacca g 21
<210> 82
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 82
uaguacuaca gauagagaca c 21
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 83
acacuauuag cauaagcagt t 21
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 84
uauuucuaua gagacacuca t 21
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 85
aguaagguca gucucagucc a 21
<210> 86
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 86
aucauaagug uaccaucugt t 21
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 87
agacaucagc auacuccuga t 21
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 88
aaagacauca gcauacucct g 21
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 89
acauagccuc auaaaacuca g 21
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 90
aauaauagcu cauaccucct a 21
<210> 91
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 91
accuuuuuca aagguguact c 21
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 92
uaauuugcaa cauugcuaga a 21
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 93
ugauaauuug caacauugct a 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 94
uugauaauuu gcaacauugc t 21
<210> 95
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 95
ucuuaccagu accagguggt c 21
<210> 96
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 96
ugaauuuauc aaaacacuct a 21
<210> 97
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 97
uuugaauuua ucaaaacact c 21
<210> 98
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 98
ucaacaauuu cagcaggaca a 21
<210> 99
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 99
ugucaacaau uucagcagga c 21
<210> 100
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 100
auaaguauca aauuguuugt a 21
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 101
acaacucugu uguuuucuct a 21
<210> 102
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 102
auuuauaauu auaaucagca a 21
<210> 103
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 103
aauuuauaau uauaaucagc a 21
<210> 104
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 104
auuugugaaa aauuaaaacc a 21
<210> 105
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 105
uuugguucuc auagagaaca t 21
<210> 106
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 106
uaguagcagc aagauuagca g 21
<210> 107
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 107
uuaguagcag caagauuagc a 21
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 108
acauuuuagu agcagcaaga t 21
<210> 109
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 109
ucaacucuuu uugauugucc a 21
<210> 110
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 110
uuauguguaa uguaauuuga c 21
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 111
aagcaagaaa aagaaguacg c 21
<210> 112
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 112
agaauaccac gaaagcaaga a 21
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 113
aaaccuauua cuagguucca t 21
<210> 114
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 114
uaggaaaccu auuacuaggt t 21
<210> 115
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 115
auaggaaacc uauuacuagg t 21
<210> 116
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 116
uuccuugagg aaguuguagc a 21
<210> 117
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 117
uuguuccuug aggaaguugt a 21
<210> 118
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 118
auguuguucc uugaggaagt t 21
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(19)
<400> 119
uuugcucuca agcugguuca a 21
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 120
cgtacgtggc tttggagact 20
<210> 121
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 121
tcgagcatcc gaacgtttga 20
<210> 122
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 122
tcatgcctct aaaagcccca 20
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 123
tcgagcaaca taagcccgtt 20
<210> 124
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 124
acctttggaa tttggtgcca c 21
<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 125
ttgtcctcac tgccgtcttg 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 126
ggacaacagc agacaaccct 20
<210> 127
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 127
agttcatact gagcaggtgg tg 22
<210> 128
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 128
gaagaggttg gccacacaga 20
<210> 129
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 129
agcagctaaa ccatgagtag ca 22
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 130
tttgaagaag ctgcgctgtg 20
<210> 131
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 131
gcgagatgac aacaagcagc 20
<210> 132
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 132
cccatctggt aaagttgagg gt 22
<210> 133
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 133
agcatgtctt cagaggtgca 20
<210> 134
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 134
tgctcaaact ggaattgccg 20
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 135
ttggaaagta acacctgagc a 21
<210> 136
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 136
aaggattgtc cagctgttgc 20
<210> 137
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 137
agacgaggtc tgccattgtg 20
<210> 138
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 138
acgtaaccct gcttggagaa a 21
<210> 139
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 139
tgagccctgt gatgaatcaa ca 22
<210> 140
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 140
tgtacgtgca tggattggct 20
<210> 141
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial）
<220>
<223> 合成的
<400> 141
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<213> 人工序列（Artificial）
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catgtctctg ggaccaatgg t 21
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<213> 人工序列（Artificial）
<220>
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atgtcgcgca ttggcatgga 20
Claims (15)
1.一种抗病毒核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、nsp3区域、3C-样蛋白酶区域、nsp9区域、RNA依赖性RNA聚合酶区域、解旋酶区域、3’至5’外切核酸酶区域、2’-O-核糖甲基转移酶区域、包括S1区域和S2区域的S区域、E区域、M区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列，
病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
2.根据权利要求1所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，靶序列为靶区域内的连续的16～30个碱基的序列。
3.根据权利要求1或2所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，病毒为SARS-CoV-2或SARS-CoV-1。
4.根据权利要求3所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向选自由序列号1的第43位～第69位、第242位～第279位、第3352位～第3372位、第6406位～第6427位、第10406位～第10431位、第10484位～第10506位、第12839位～第12867位、第12898位～第12922位、第12965位～第12990位、第13481位～第13502位、第13762位～第13790位、第13894位～第13916位、第14290位～第14312位、第14654位～第14687位、第14750位～第14777位、第14824位～第14846位、第14878位～第14909位、第14953位～第14990位、第14992位～第15026位、第15037位～第15061位、第15063位～第15140位、第15172位～第15198位、第15278位～第15299位、第15454位～第15479位、第15496位～第15518位、第15622位～第15644位、第15829位～第15859位、第15929位～第15950位、第15985位～第16011位、第16051位～第16085位、第16189位～第16220位、第16430位～第16451位、第16822位～第16845位、第17015位～第17051位、第17080位～第17103位、第17254位～第17277位、第17564位～第17600位、第18196位～第18218位、第18253位～第18278位、第19568位～第19595位、第20888位～第20909位、第21502位～第21524位、第22814位～第22836位、第23093位～第23113位、第23956位～第23976位、第24302位～第24324位、第24467位～第24489位、第24620位～第24651位、第24662位～第24684位、第24962位～第24982位、第25104位～第25128位、第25364位～第25384位、第26287位～第26325位、第26574位～第26604位、第28274位～第28294位、第28397位～第28418位、第28509位～第28538位、第28744位～第28784位、第28799位～第28820位、第28946位～第28972位、第29010位～第29031位、第29102位～第29130位及第29174位～第29196位组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
5.根据权利要求1所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其靶向SARS-CoV-2的基因组RNA中的选自由5’UTR区域、解旋酶区域及N区域组成的组中的至少一个靶区域中的序列。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，核酸为siRNA或shRNA。
7.根据权利要求6所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制所述靶区域的功能且包含有义链及反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号2～60组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与所述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
8.根据权利要求7所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制所述靶区域的功能且包含有义链及反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号2、3、4、5、8、9、11～19、28、29、34～37、39、40、42、49、55及58～60组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与所述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
9.根据权利要求8所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其抑制所述靶区域的功能且包含有义链和反义链，
所述有义链包含：
(a)选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列、
(b)在选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列中添加、缺失或置换1个或数个碱基而成的碱基序列、或
(c)相对于选自由序列号3、35、36、58及59组成的组中的碱基序列具有80％以上的序列同一性的碱基序列，
所述反义链包含与所述(a)～(c)中的任意序列互补的碱基序列。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，构成所述核酸的至少1个核苷酸的糖部分和/或磷酸键部分经过了修饰。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物，其中，构成所述核酸的至少1个核苷酸的糖部分为核糖，所述核糖的2’位的-OH基被F或OCH3置换、和/或
核酸为包含突出末端(overhang)的siRNA，突出末端部分的核苷酸的糖部分包含脱氧核糖，所述脱氧核糖的2’位的-H基任选被F或OCH3置换。
12.一种载体，其包含权利要求1～11中任一项所述的核酸、或编码该核酸的DNA。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1～11中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、或者权利要求12所述的载体。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其为用于治疗和/或预防病毒感染症的药物组合物，病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
15.一种治疗和/或预防病毒感染症的方法，其包括将有效量的权利要求1～11中任一项所述的核酸或其药学上能接受的盐或者它们的水合物、权利要求12所述的载体、或者权利要求13～14中任一项所述的药物组合物给药于对象的工序，病毒为SARS-CoV-2、SARS-CoV-1或MERS-CoV。
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