CN117180127A - 一种肽类复合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种肽类复合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种肽类复合物及其制备方法与应用，属于化妆品技术领域。提供了一种肽类复合物，包括以下组分：七肽‑6、寡肽‑1、寡肽‑3、酵母菌多肽类；还包括肌肽、芋螺肽、九肽‑1、谷胱甘肽、乙酰基八肽‑3、透明质酸钠、甘露糖醇、海藻糖和水。本发明的肽类复合物由无菌基料和活性物混合液无菌过滤液混匀、补水、灌装、加塞，然后真空冷冻干燥制备得到，可应用于美妆护肤产品中，发挥协同作用，显著改善皮肤基底层损伤细胞的修复效果，且温和不刺激保质期长。

Description

一种肽类复合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种肽类复合物及其制备方法与应用。
背景技术
现有的修复类功效的护肤产品，多以对角质层含水率或皮肤屏障的修复为主，一般为制备基础基料，然后添加必须的辅料，如香精、色素、防腐剂等，再添加相应的活性成分，制备出具有相应功效的产品，比如修复霜，修复乳液等。所用到的活性成分的功效大多集中在提高角质层含水量和修复角质层屏障方面，对部分由基底皮肤细胞引发的问题，没有更好的解决方法。
并且，较多产品选用神经酰胺、植物提取物、皮脂膜油脂等同类成分，只能做到修复角质层问题，无法解决皮肤基底细胞层面出现的问题。市面上制备的剂型多以膏霜乳液精华等为主，为了产品货架期的稳定，不可避免需要加入一些防腐抑菌成分，或为了更好的感官感受，需加入一些香精色素等，不可避免地引入一些风险性物质。当前，受越来越多的外界因素影响，消费者的肌肤敏感度越来越高，越来越容易被护肤品中风险性因素影响，刺激性成分的加入，可能造成更大的皮肤损害。
因此，研发出一种由温和、无刺激的成分组成的，可作用于基底细胞的修复类产品，具有较好的市场应用前景；需要避免引入风险性物质物质，降低敏感性肌肤使用的风险，同时具有较好的渗透皮肤和细胞吸收效果、以达到从细胞层面修复皮肤损伤的功效。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种肽类复合物及其制备方法与应用。本发明提供的肽类复合物能在较低的用量下快速发挥协同作用，促进基底细胞增殖，有效修复损伤的皮肤细胞。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种肽类复合物，包括以下重量份的组分：0.01-1份七肽-6、0.01-0.05份寡肽-1、0.01-1份寡肽-3、0.01-1份酵母菌多肽类、0.2-0.5份肌肽、0.01-0.05份芋螺肽、0.01-0.05份九肽-1、0.1-0.3份谷胱甘肽、0.01-0.05份乙酰基八肽-3。
在上述的重量份范围内，七肽-6、寡肽-1、寡肽-3和酵母菌多肽类能够组合发挥良好的皮肤细胞修复作用：迅速渗透肌肤表皮，作用于皮肤基底细胞，直接被细胞吸收或作用于细胞间结构，在较低的浓度范围内，即可达很好的修复效果，起到快速修复损伤细胞、改善皮肤的整体状态的作用。提高各组分的用量，在高浓度下，各组分组合反而会使细胞损伤修复作用减弱。
在其他的肽类复合物组分中，芋螺肽能淡化肌肉表面褶皱，使皮肤平滑；乙酰基八肽-3可减弱肌肉收缩，防止皱纹的形成；上述组分范围内，芋螺肽和乙酰基八肽-3的组合使用，可达到较好的抗皱功效，辅助用以改善肌肤状态。此外，上述重量份的肌肽、谷胱甘肽和九肽-1组合使用，具有滋养肌肤、美白的效果。在较低的含量下，各组分即可组合发挥良好的综合肌肤护理作用。
本发明所提供的肽类复合物可在较低的功能性组分含量下显著提升细胞增殖速度、在较短时间内快速修复损伤细胞，具有显著的细胞损伤修复功效，同时具有良好的抗皱等护肤功效。所含组分能够直接作用于基底细胞，并共同发挥作用；且该肽类复合物中不合防腐剂，也不具有细胞毒性，用量范围内组分作用十分温和、不具有刺激性，对敏感性肌肤也同样适用。
优选地，肽类复合物包括以下重量份的组分：0.01-0.02份七肽-6、0.01-0.02份寡肽-1、0.01-0.02份寡肽-3、0.01-0.02份酵母菌多肽类、0.2-0.5份肌肽、0.01-0.05份芋螺肽、0.01-0.05份九肽-1、0.1-0.3份谷胱甘肽、0.01-0.05份乙酰基八肽-3。上述重量份范围内，肽类复合物的促成纤维细胞增殖能力强，相对促细胞增殖率达33％以上；同时，对损伤细胞的修复能力强，模拟修复中24h的划痕相对恢复面积在87％以上。效果优于更高浓度下的细胞修复效果。
进一步优选地，肽类复合物包括以下重量份的组分：0.02份七肽-6、0.01份寡肽-1、0.02份寡肽-3、0.01份酵母菌多肽类、0.4份肌肽、0.02份芋螺肽、0.02份九肽-1、0.1份谷胱甘肽、0.02份乙酰基八肽-3。该组分比例下，七肽-6、寡肽-1、寡肽-3和酵母菌多肽类能发挥协同增效作用，促进细胞修复：促进纤维细胞增殖能力显著增强，相对促细胞增殖率高达115.5％；同时，模拟修复中24h的划痕相对恢复面积在99％以上。同时还兼顾有减少皮肤皱纹和松弛、滋养美白的综合护肤效果，此时肽类复合物的浓度低易吸收、组分温和、不刺激，适用于敏感性肌肤，在急性肌肤损伤的修复护理中有较高的应用潜力。
优选地，本发明所提供的肽类复合物还包括以下重量份的组分：0.01-0.07份透明质酸钠、3-8份甘露糖醇、0.8-2份海藻糖、90-95份水。透明质酸钠、甘露糖醇和海藻糖本身具有一定的皮肤保湿、滋养作用，广泛应用于美妆护肤产品中；水为溶剂，加足量水充分混匀各组分，可使多种肽更好地组合作用。在该用量下，甘露糖醇还作为基料，在本发明肽类复合物的冻干粉制剂中起到填充作用、帮助加快成型；海藻糖可作为稳定剂，可提供玻璃基质对功能性组分起保护作用；透明质酸钠可使冻干后的粉体更结实、稳固性高，为肽类复合物的冻干粉剂型提供了可行性。
进一步优选地，肽类复合物包括以下重量份的组分：0.02份七肽-6、0.01份寡肽-1、0.02份寡肽-3、0.01份酵母菌多肽类、0.4份肌肽、0.02份芋螺肽、0.02份九肽-1、0.1份谷胱甘肽、0.02份乙酰基八肽-3、0.05份透明质酸钠、6份甘露糖醇、1份海藻糖、92.33份水。该配比下，肽类复合物可发挥最优的细胞修复效果，且制备冻干粉的效率高、成型快，且冻干粉的外观饱满、平滑、不粗糙，适用于对粉体状态要求较高的美妆护肤产品。
第二方面，本发明还提供了上述肽类复合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)向透明质酸钠、甘露糖醇、海藻糖加水至溶解、混匀，灭菌，得到无菌基料；
(2)向七肽-6、寡肽-1、寡肽-3、酵母菌多肽类、肌肽、芋螺肽、九肽-1、谷胱甘肽、乙酰基八肽-3中加水至溶解、混匀，过滤除菌，得到活性物混合液无菌过滤液；
(3)将步骤(1)得到的无菌基料和步骤(2)得到的活性物混合液无菌过滤液混匀、补充无菌水，配制成原液；
(4)进行真空冷冻干燥，得到肽类复合物。
上述制备步骤在百级洁净环境中、并对材料充分灭菌，保证无菌状态，并通过制备冻干粉，延长保质期；步骤(3)加水至符合上述肽类复合物的重量份，各组分充分混合、更好地形成均匀的产品发挥作用。制备得到肽类复合物的冻干粉剂型，外观符合美妆护肤产品的要求、复溶性好、且复溶后的浓度在100μg/mL时即可发挥很好的细胞损伤修复功效。
优选地，步骤(4)的真空冷冻干燥过程包括：预冻、一次干燥、二次干燥。通过预冻、一次干燥、二次干燥以及真空压塞的步骤进行真空冷冻干燥，可减少冻干时间、提高工作效率、降低能耗，制备得到的粉体形貌好、符合要求。
第三方面，本发明所提供的肽类复合物可应用于修复、抗皱类的美妆护肤产品中：
本发明提供一种美妆护肤产品，包括本发明提供的上述肽类复合物和溶剂、保湿剂、增稠剂、防腐剂、润肤剂、增溶剂、芳香剂中的一种或两种以上。
本发明所提供的肽类复合物可复溶于水后直接使用，也可进一步与其他制备原料进行复配，根据产品剂型、使用需求加入保湿剂、增稠剂、防腐剂、润肤剂、增溶剂或者芳香剂，用于制备精华液、乳液、乳霜等美妆护肤产品，起到修复损伤细胞的功效，并辅助提供抗皱、滋养、美白效果。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明通过多肽组合和适量配比，达到从细胞层面修复皮肤损伤的功效，同时具备一定抗皱、滋养、美白的作用。且本发明提供的肽类复合物可通过冻干粉剂型提供，不需添加防腐剂，可长期保存；其配方简单温和，不引入可能引起皮肤敏感的刺激源，更适用于消费者的多种类型肌肤。
附图说明
图1为实施例1肽类复合物对斑马鱼幼鱼发育的影响结果图；
图2为实施例2肽类复合物对斑马鱼幼鱼发育的影响结果图；
图3为实施例3肽类复合物对斑马鱼幼鱼发育的影响结果图；
图4为实施例4肽类复合物对斑马鱼幼鱼发育的影响结果图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径获得的试剂和材料。
下述实施例与对比例中，模拟细胞修复性能通过将制备得到的肽类复合物复溶于水的待检测样品，分别进行促成纤维细胞增殖能力测试和细胞划痕实验进行评估。
下述实施例与对比例中，促成纤维细胞增殖能力的测试方法如下：
(1)BALB/c 3T3细胞接种于96孔细胞培养板中(5000个细胞/孔)，37℃，5％CO2细胞培养箱培养24h；
(2)换用DMEM无血清培养基继续培养12h；
(3)以100ug/孔的添加量分别加入待检测样品以及PBS(阴性对照组)，每个样品和对照组设置3个平行样板，继续培养48-72h；
(4)每孔加入10μL CCK-8试剂，37℃，5％CO2细胞培养箱孵育2h后取出；
(5)用酶标仪读取96孔板在450nm和630nm的吸光值，以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果。求取平均值，代入公式进行计算：
相对促细胞增殖率＝(A1-A0)/A0×100％
其中A1为待测样品在450nm处的吸光值，A0为阴性对照组在450nm处的吸光值。
下述实施例与对比例中，细胞划痕实验方法如下：
(1)在6孔板中接种2-3代的表皮细胞，待细胞铺满后，制备80μm宽的划痕并标记，作为细胞迁移的基点；
(2)用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入培养基，在试验组的培养基中加入100ug/ml的待检测样品，对照组不添加；
(3)置于37℃、5％CO2培养箱继续培养，于12、24h观察，计算划痕的相对恢复面积，以评估实验结果。
下述实施例1-4中，模拟刺激性、毒性测试采用斑马鱼幼鱼发育毒性实验方法，步骤如下：采用野生型斑马鱼产的鱼蛋，用2mg/mL的链霉蛋白酶作为破膜剂对鱼蛋进行破膜。将破膜得到的斑马鱼幼鱼进行随机分为空白组和实施例1-4组(每组分10μg/mL、100μg/mL和1000μg/mL 3个浓度，每个浓度3个复孔)。
待检测样品以低中高3个浓度梯度给药，给药后每间隔24小时，通过显微镜对各组斑马鱼幼鱼进行拍照，观察和记录斑马鱼幼鱼发育情况。在给药48小时后，通过显微镜收集各组斑马鱼幼鱼的心率和体长数据。
实施例1-6和对比例1-7
实施例1-6和对比例1-7肽类复合物的组分如表1-1、表1-2所示。
实施例1-6对比例1-7的肽类复合物的制备方法为：
(1)将透明质酸钠、甘露糖醇、海藻糖按照表1-1或表1-2的重量份加水溶解、混匀，121℃湿热灭菌30分钟，得到无菌基料；
(2)将肽类组分按照表1-1或表1-2的重量份加水溶解、混匀，经0.22μm或0.45μm滤膜或滤器过滤除菌，得到活性物混合液无菌过滤液；
(3)将步骤(1)得到的无菌基料和步骤(2)得到的活性物混合液无菌过滤液置于百级洁净环境中，混匀、按表1-1或表1-2中的重量份补充无菌水配制成原液；
(4)在洁净环境下对步骤(3)得到的原液灌装、加塞，然后真空冷冻干燥，经预冻、一次干燥、二次干燥和真空压塞，得到肽类复合物。
对比例8
对比例8与实施例2的不同之处在于：将组分中的芋螺肽替换为类蛇毒肽、用量不变，其他组分和制备步骤与实施例2相同。所制备的肽类复合物的辅助抗皱作用较弱。
对比例9
对比例9与实施例2的不同之处在于：将组分中的芋螺肽替换为类蛇毒肽、用量不变；乙酰基八肽-3替换为乙酰基六肽-8、用量不变，其他组分和制备步骤与实施例2相同。所制备的肽类复合物的辅助抗皱作用较弱。
表1-1
表1-2
重量份数 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6 对比例7
七肽-6 5 0 0 0 0.02 0.02 0.02
寡肽-1 1 0 0 0.01 0 0.01 0.01
寡肽-3 5 0.02 0 0.02 0.02 0 0.02
酵母菌多肽类 5 0 0.02 0.01 0.01 0.01 0
肌肽 5 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
芋螺肽 1 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
九肽-1 1 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
谷胱甘肽 5 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
乙酰基八肽-3 1 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
透明质酸钠 0 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
甘露糖醇 10 6 6 6 6 6 6
海藻糖 5 1 1 1 1 1 1
纯水 56 92.37 92.37 92.27 92.26 92.27 92.26
促细胞增值率 17.25％ 21.07％ 29.54％ 24.84％ 26.61％ 28.32％ 27.02％
12h划痕相对恢复面积 71.28 68.23 75.36 74.25 75.36 72.32 74.69
24h划痕相对恢复面积 81.34 79.56 84.21 84.69 85.21 86.56 87.17
外观 粗糙不结实 稳固平滑 稳固平滑 稳固平滑 稳固平滑 稳固平滑 稳固平滑
实施例1-6和对比例1-7的肽类复合物促成纤维细胞增殖能力测试和细胞划痕实验结果以及外观评价如表1-1、表1-2，实施例1-4的模拟刺激性、毒性测试结果如图1-4。综合实施例和对比例结果，可以得出以下几点：
(1)由表1-1、1-2及对比例8、9可知：与对比例相比，各实施例的促细胞增值率更高，且12h和24h的划痕恢复面积较多，同时具有一定的辅助抗皱效果。本发明的肽类复合物能够在较低的用量下达到更好的促细胞增殖能力和模拟细胞修复能力，并具有辅助抗皱作用，综合护肤效果显著好于更高用量的复合物。
(2)从实施例1-4结果可以看出，在特定的用量范围内，肽类复合物的促细胞增值率可达33％以上；12h和24h的划痕恢复面积分别为75％和87％以上，显著优于对比例。
(3)实施例1的综合效果最佳：促细胞增值率可达115.50％，12h和24h的划痕相对恢复面积分别为95.29％和99.26％，显著优于实施例2-4，具有最好的促细胞增殖能力和皮肤修复能力，但相比之下，各组分的用量变化微小。与对比例2-7对比可知：去除七肽-6、寡肽-1、寡肽-3或酵母菌多肽类中的任意一种，其细胞修复能力大幅下降；只添加寡肽-3或酵母菌多肽类，促细胞增殖率同样显著下降。所以七肽-6、寡肽-1、寡肽-3和酵母菌多肽类的配比对肽类复合物的促细胞增殖作用影响重大，且只在实施例1的配比下才能发挥协同增效作用，促进细胞增殖、修复细胞损伤。
(4)由图1-4可知：肽类复合物在1000μg/mL浓度以内对斑马鱼幼鱼存活率、心率、体长无明显的影响，说明没有显著的发育毒性，肽类复合物较为温和，不具有刺激性，对敏感性肌肤也同样适用。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种肽类复合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：0.01-1份七肽-6、0.01-0.05份寡肽-1、0.01-1份寡肽-3、0.01-1份酵母菌多肽类、0.2-0.5份肌肽、0.01-0.05份芋螺肽、0.01-0.05份九肽-1、0.1-0.3份谷胱甘肽、0.01-0.05份乙酰基八肽-3。
2.根据权利要求1所述的肽类复合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：0.01-0.02份七肽-6、0.01-0.02份寡肽-1、0.01-0.02份寡肽-3、0.01-0.02份酵母菌多肽类、0.2-0.5份肌肽、0.01-0.05份芋螺肽、0.01-0.05份九肽-1、0.1-0.3份谷胱甘肽、0.01-0.05份乙酰基八肽-3。
3.根据权利要求2所述的肽类复合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：0.02份七肽-6、0.01份寡肽-1、0.02份寡肽-3、0.01份酵母菌多肽类、0.4份肌肽、0.02份芋螺肽、0.02份九肽-1、0.1份谷胱甘肽、0.02份乙酰基八肽-3。
4.根据权利要求1-3任一项所述的肽类复合物，其特征在于，还包括以下重量份的组分：0.01-0.07份透明质酸钠、3-8份甘露糖醇、0.8-2份海藻糖、90-95份水。
5.根据权利要求4所述的肽类复合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：0.02份七肽-6、0.01份寡肽-1、0.02份寡肽-3、0.01份酵母菌多肽类、0.4份肌肽、0.02份芋螺肽、0.02份九肽-1、0.1份谷胱甘肽、0.02份乙酰基八肽-3、0.05份透明质酸钠、6份甘露糖醇、1份海藻糖、92.33份水。
6.权利要求4-5任一项所述肽类复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)向透明质酸钠、甘露糖醇和海藻糖中加水至溶解、混匀，灭菌，得到无菌基料；
(2)向七肽-6、寡肽-1、寡肽-3、酵母菌多肽类、肌肽、芋螺肽、九肽-1、谷胱甘肽、乙酰基八肽-3中加水至溶解、混匀，过滤除菌，得到活性物混合液无菌过滤液；
(3)将步骤(1)得到的无菌基料和步骤(2)得到的活性物混合液无菌过滤液混匀、补充无菌水，配制成原液；
(4)进行真空冷冻干燥，得到所述肽类复合物。
7.根据权利要求6所述肽类复合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)的真空冷冻干燥过程包括：预冻、一次干燥、二次干燥。
8.权利要求1-5任一项所述肽类复合物在修复、抗皱类美妆护肤产品中的应用。
9.一种美妆护肤产品，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述肽类复合物和溶剂、保湿剂、增稠剂、防腐剂、润肤剂、增溶剂、芳香剂中的一种或两种以上。
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