CN117177958A - 用于治疗肺疾病的肺泡2型细胞增殖的小分子调节剂 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及抑制二肽基肽酶IV(DPP4)的化合物及其药物组合物。所述化合物选择性地促进肺泡2型细胞(AEC2)的增殖，并且可用于治疗疾病的治疗方法，所述疾病的病因例如来源于上皮变性和适应不良性重塑，例如肺疾病如特发性肺纤维化(IPF)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和婴儿呼吸窘迫综合征(IRDS)。

Description

用于治疗肺疾病的肺泡2型细胞增殖的小分子调节剂
本申请要求于2021年1月21日提交的美国临时专利申请No.63/139,956的优先权权益，该申请的全部内容并入本文，如同在本文充分阐述一样。
背景技术
下气道修复的药理学刺激对于治疗多种病症具有重要潜力，在所述病症中，肺泡破坏和适应不良性重塑是疾病的起因。肺泡(哺乳动物气体交换的主要单位)由两种上皮细胞类型构成：大鳞状肺泡1型细胞(alveolar type 1cell，AEC1)，其为气体交换提供表面积；和立方形肺泡2型细胞(alveolar type 2cell，AEC2)，其分泌表面活性剂1。另外，AEC2已被鉴定为是负责使肺泡上皮细胞再生的主要祖细胞类型2。AEC2在成年期克隆增殖，不对称分裂以产生AEC1和AEC22。另外已表明特发性肺纤维化(idiopathic pulmonaryfibrosis，IPF)是由AEC2的干细胞能力耗尽引起的3。AEC2增殖减少导致肺泡基底膜脱落，其最终促进增生性上气道来源上皮细胞和分泌胞外基质的肌成纤维细胞对下气道的定植3。另外，已表明在IPF小鼠模型中，通过用外源性因子(IL-6或透明质酸)处理来恢复AEC2增殖抑制了疾病严重程度4。除IPF之外，急性呼吸窘迫综合征(acute respiratorydistress syndrome，ARDS)——肺泡上皮屏障功能的急性损失——是由AEC2细胞损伤和AEC2细胞修复性生长不足引起的5。
发明概述
在多个实施方案中，本公开内容提供了可用于例如促进AEC2相对于肺中其他细胞类型的特异性增殖的化合物。在一些实施方案中，化合物是式(I)或其可药用盐：
在式(I)中，每个---代表单键，其在任选地存在时形成稠合环丙基环。
L1A是-NHCH2-或-CH(NH2)-。
X1选自-O-、-S-、-S(O)-、S(O)2-和-NH-。L1B是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z1选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。
下标m1是当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1的整数。下标n1是选自0、1、2和3的整数。
R1选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。R2是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。
或者，根据另外的实施方案，化合物是式(II)或其可药用盐：
在式(II)中，W是CH或N。
下标o是选自1、2和3的整数。
R3选自C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基和-(CH2CH2O)xH(其中x是选自1、2、3、4和5的整数)。R4是C2-C8炔基。
R5a、R5b、R5c和R5d独立地选自H、C1-C6烷基、卤素、-NRARB(其中RA和RB独立地选自H和C1-C10烷基)、-C(O)OH、-B(OH)2、-C(O)NRARB、-C(O)ORA和-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2。L2是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z2选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。R5a、R5b、R5c和R5d中的至少一者不是H。
R6选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。R7是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。
下标m2是整数，当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1。下标n2是选自0、1、2和3的整数。
此外，当W是CH时，则R5a和R5d不选自-C(O)OH、-C(O)OMe和C(O)OEt。
或者，根据另外的实施方案，化合物是式(III)或其可药用盐：
在式(III)中，X3是-O-或-NH-。L3是键或C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z3选自H、-N3、C6-C10芳基、5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)和3至14元杂环烷基(其中1至4个环成员独立地选自N、O和S)。杂芳基和杂环烷基任选被1至6个选自卤素、NO2、OH、CN和C1-C6卤代烷基的取代基取代。
下标m3是整数，当Z3是H或-N3时其为0，并且当Z3不是H或-N3时其为1。下标n3是选自0、1、2和3的整数。
R8选自H、C1-C10烷基或-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。R9是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。R10是C1-C6卤代烷基。每个R11独立地选自H、C1-C6烷基和卤素。
下标o3是选自0、1、2和3的整数。下标p3是选自0、1、2和3的整数。下标q3是选自0、1、2和3的整数。
本公开内容的化合物不包括任何以下化合物：
在另一个实施方案中，本公开内容提供了包含如本文中所述的化合物或其可药用盐的药物组合物。
在一个实施方案中，本公开内容还提供了用于在有此需要的对象中选择性提高立方形肺泡2型(AEC2)细胞的增殖，或用于在有此需要的对象中恢复减弱的AEC2细胞增殖的方法。所述方法包括向所述对象施用如本文中所述的化合物或其可药用盐。
在一个实施方案中，本公开内容提供了用于在有此需要的对象中抑制二肽基肽酶IV(DPP4)的方法。所述方法包括向所述对象施用本文中所述的化合物或其可药用盐。
本公开内容的另一个实施方案是用于在患肺疾病的对象中治疗该肺疾病的方法。所述方法包括向所述对象施用如本文中所述的化合物或其可药用盐。
在多个实施方案中还提供了如本文中所述的化合物或其可药用盐，其用于在有此需要的对象中选择性地提高立方形肺泡2型(AEC2)细胞的增殖，或用于在有此需要的对象中恢复减弱的AEC2细胞增殖。
在另外的实施方案中，本公开内容提供了如本文中所述的化合物或其可药用盐，其用于在有此需要的对象中抑制二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV，DPP4)。
在另外的实施方案中，本公开内容提供了如本文中所述的化合物或其可药用盐，其用于在患肺疾病的对象中治疗该肺疾病。
附图简述
图1.化合物46的AEC2增殖-浓度曲线。
图2.瑞格列汀(retagliptin)和化合物46的小鼠药代动力学的比较，其中IT(气管内)给药为2mg/kg。
图3A至图3E.在小鼠中博来霉素诱导的肺纤维化模型中化合物46显示出效力。(A)体重测量结果和用于气管内施用化合物46的给药方案(每四天0.5mg/kg)。研究结束时的BALF(B)、纤维化面积测量结果(C)、改良的Ashcroft评分(D)和代表性Masson三色染色组织学切片(E)；**，P<0.005；***，P<0.0005。
图4A至图4D.在小鼠中博来霉素诱导的纤维化模型中，与标准治疗IPF的药物尼达尼布(Nintedanib)组合的化合物46显示出协同效力。(A)来自小鼠中博来霉素诱导的肺纤维化模型的治疗和体重测量结果的图例。化合物46，0.5mg/kg IT，E4D，在研究结束时的BALF蛋白质水平(B)、改良的Ashcroft评分(C)和代表性Masson三色染色组织学切片(D)。*，P<0.05；**，P<0.005；***，P<0.0005；NS＝没有统计学意义。
图5A至图5C.在小鼠中化合物46选择性扩增AEC2。(A)UMAP图示出了在小鼠肺中识别出的多个细胞群，其中突出了主要的目的群。(B)UMAP图示出了哪些细胞表达与增殖状态一致的转录谱。除增殖性AEC2之外的另一些群体是免疫细胞。(C)在用化合物46处理之后在指定时间点时的总增殖细胞的定量。
发明详述
本公开内容满足了对刺激肺干细胞和祖细胞群的修复性增殖的类药性化合物的长期需要。相对于肺中其他细胞类型(例如，肺成纤维细胞)，本公开内容的化合物促进了AEC2的特异性增殖，并从而在许多下气道疾病中表现出疾病改善效力。此外，该化合物可用作二肽基肽酶IV(DPP4)的抑制剂。
定义
“烷基”是指包含1至约20个碳原子的直链或支链烃基。例如，烷基可以具有1至10个碳原子或1至6个碳原子。示例性的烷基包括直链烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等，并且还包括直链烷基的支链异构体，例如但不限于
等。因此，烷基包含伯烷基、仲烷基和叔烷基。烷基可以是未经取代的或任选地被一个或更多个如本文中所述的取代基取代的。
术语“卤代烷基”是被1、2、3、4、5或6个卤素取代的如本文所限定的烷基。示例性的卤代烷基是-CF3。
术语“卤素”、“卤化物”和“卤代”中的每一者是指-F或氟、-Cl或氯、-Br或溴、或者-I或碘。
“炔烃”或“炔基”是指具有指定的碳原子数和至少一个三键的直链或支链不饱和碳氢化合物。(C2-C8)炔基的实例包括但不限于乙炔、丙炔、1-丁炔、2-丁炔、1-戊炔、2-戊炔、1-己炔、2-己炔、3-己炔、1-庚炔、2-庚炔、3-庚炔、1-辛炔、2-辛炔、3-辛炔和4-辛炔。炔基可以是未经取代的或任选地被一个或更多个如本文中所述的取代基取代的。
“芳基”当单独使用或者作为另一术语的一部分使用时意指具有指定的碳原子数或者如果未指定数目则具有至多14个碳原子的任选地稠合碳环芳族基团，例如C6-C14芳基或C6-C10芳基。示例性的芳基是苯基、萘基、联苯基、菲基、并四苯基(naphthacenyl)等(参见例如Lang’s Handbook of Chemistry(Dean,J.A.编辑)第13版.表7-2[1985])。示例性的芳基是苯基。“芳基”可以为任选地与如本文所限定的环烷基环稠合。芳基可以是未经取代的或任选地被一个或更多个如本文中所述的取代基取代的。
术语“杂原子”是指N、O和S。含N或S原子的本公开内容的化合物可以任选地被氧化成相应的N-氧化物、亚砜或砜化合物。
单独的“杂芳基”或与本文中所述的任何其他部分组合的“杂芳基”，是指含有5至10个(例如5或6个)环原子的单环芳族环结构或者具有8至10个原子的双环芳族基团，其含有一个或更多个(例如1至4、1至3或1至2个)独立地选自O、S和N的杂原子。杂芳基还旨在包括氧化的S或N，例如亚磺酰基、磺酰基以及叔环氮的N氧化物。碳或杂原子是杂芳基环结构的连接点，从而产生稳定的化合物。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、喹喔啉基、吲哚嗪基、苯并[b]噻吩基、喹唑啉基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、唑基、噻唑基、噻吩基、异/>唑基、/>唑噻二唑基(oxathiadiazolyl)、异噻唑基、四唑基、咪唑基、三唑基、呋喃基、苯并呋喃基、和吲哚基。杂芳基可以是未经取代的或任选地被一个或更多个如本文中所述的取代基取代的。
“杂环烷基”是饱和或部分不饱和的非芳族单环、二环、三环或多环环系统，任选地螺稠合，其具有3至14个(例如3至6个)原子，其中环中的1至3个碳原子被O、S或N杂原子替代。杂环烷基任选地与5至6个环成员的芳基或杂芳基稠合，并且包括氧化的S或N，例如亚磺酰基、磺酰基和叔环氮的N-氧化物。杂环烷基环的连接点在碳或杂原子处，使得稳定的环得以保持。杂环烷基的实例包括但不限于吗啉代、四氢呋喃基、二氢吡啶基、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、二氢苯并呋喃基和二氢吲哚基。杂环烷基可以是未经取代的或任选地被一个或更多个如本文中所述的取代基取代的。
术语“腈”或“氰基”可互换使用并且是指与杂芳基环、芳基环和杂环烷基环的碳原子结合的-CN基团。
术语“氧代”是指与作为饱和或不饱和部分的一部分的原子结合的＝O原子。因此，＝O原子可以与作为环状或无环状部分的一部分的碳、硫或氮原子结合。
“羟基(hydroxyl)”或“羟基(hydroxy)”是指-OH基团。
取代基-CO2H可以被生物等排替代物替代，例如：
等，其中R与如本文所限定的RA具有相同的限定。参见，例如，The Practice ofMedicinal Chemistry(Academic Press:New York,1996),第203页。
本文中所述的化合物可以以多种异构体形式(包括构型异构体、几何异构体和构象异构体(包括例如顺式或反式构象))存在。所述化合物还可以以一种或更多种互变异构形式(包括单一互变异构体和互变异构体的混合物二者)存在。术语“异构体”旨在涵盖本公开内容的化合物的所有异构形式，包括化合物的互变异构形式。本公开内容的化合物还可以以开链或环化形式存在。在一些情况下，一种或更多种的环化形式可由失水产生。开链和环化形式的具体组成可取决于如何分离、储存或施用化合物。例如，化合物在酸性条件下可能主要以开链形式存在，但在中性条件下可能环化。所有形式都包含在本公开内容中。
本文中所述的一些化合物可以具有不对称中心，并因此以不同的对映体和非对映体形式存在。如本文中所述的化合物可以呈光学异构体或非对映异构体的形式。因此，本公开内容涵盖了如本文中所述的呈光学异构体、非对映异构体及其混合物(包括外消旋混合物)形式的化合物及其用途。本公开内容的化合物的光学异构体可以通过已知技术(例如不对称合成、手性色谱、模拟移动床技术)获得，或者经由通过使用光学活性拆分剂对立体异构体进行化学分离获得。
除非另有指示，否则术语“立体异构体”意指化合物的一种立体异构体，其基本上不含所述化合物的其他立体异构体。因此，具有一个手性中心的立体异构纯化合物将基本上不含所述化合物的相反对映异构体。具有两个手性中心的立体异构纯化合物将基本上不含所述化合物的其他非对映异构体。典型的立体异构纯化合物包含按重量计大于约80％的所述化合物的一种立体异构体和按重量计小于约20％的所述化合物的其他立体异构体，例如按重量计大于约90％的所述化合物的一种立体异构体和按重量计小于约10％的所述化合物的其他立体异构体，或按重量计大于约95％的所述化合物的一种立体异构体和按重量计小于约5％的所述化合物的其他立体异构体，或按重量计大于约97％的所述化合物的一种立体异构体和按重量计小于约3％的所述化合物的其他立体异构体，或按重量计大于约99％的所述化合物的一种立体异构体和按重量计小于约1％的所述化合物的其他立体异构体。如上所述的立体异构体可以被视为包含以本文中所述的其各自的重量百分比存在的两种立体异构体的组合物。
如果所示结构与该结构的给定名称之间存在差异，则以所示的结构为准。另外，如果结构或结构的一部分的立体化学未用例如粗线或虚线表示，则结构或结构的一部分应解释为涵盖其所有立体异构体。然而，在一些情况下，在存在多余一个手性中心的情况下，结构和名称可以表示为单一对映体，以帮助描述相对立体化学。有机合成领域的技术人员将知道化合物是否由用于制备它们的方法制备为单一对映体。
本文中使用的，并且除非另有相反说明，否则术语“化合物”是包含性的，即其涵盖化合物或其可药用盐、立体异构体和/或互变异构体。因此，例如，本公开内容的化合物包含该化合物的互变异构体的可药用盐。
在本说明书中，“可药用盐”是本文中所述化合物的可药用有机或无机酸或碱盐。代表性的可药用盐包括例如，碱金属盐、碱土盐、铵盐、水溶性和水不溶性盐，例如乙酸盐、氨茋磺酸盐(amsonate)(4,4-二氨基二苯乙烯-2,2-二磺酸盐)、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、钙、依地酸钙、樟磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、克拉维酸盐(clavulariate)、二盐酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、延胡索酸盐(fiunarate)、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐(gluconate)、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、六氟磷酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘酸盐、碘化物、异硫氰酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、黏液酸盐(mucate)、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、3-羟基-2-萘甲酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(1,1-亚甲基-双-2-羟基-3-萘甲酸盐，恩贝酸盐(einbonate))、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、苦味酸盐、多聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、对甲苯磺酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次醋酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐(sulfosaliculate)、苏拉酸盐(suramate)、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、甲苯磺酸盐、三乙碘化物(triethiodide)和戊酸盐。可药用盐在其结构中可以具有多于一个带电荷原子。在该实例中，可药用盐可以具有多个反离子。因此，可药用盐可以具有一个或更多个带电荷原子和/或一个或多个反离子。
术语“治疗”及其变化形式是指改善或根除疾病或与疾病相关的症状。在某些实施方案中，这样的术语是指因将一种或更多种预防剂或治疗剂施用于患有这样的疾病的患者而导致的疾病的传播或恶化最小化。
术语“预防”及其变化形式是指因施用预防剂或治疗剂而导致的对患者中疾病的发作、复发或扩散的预防。
术语“有效量”是指足以在疾病的治疗或预防中提供治疗或预防性益处或使与疾病相关的症状延迟或最小化的如本文中所述的化合物或其他活性成分的量。此外，本文中所述化合物的治疗有效量意指单独的治疗剂或与其他治疗组合的治疗剂在疾病的在治疗或预防中提供治疗性益处的量。与本文中所述的化合物结合使用时，该术语可涵盖改善疾病的整体治疗、减轻或避免疾病症状或原因、或者增强另一治疗剂的治疗效力或与另一治疗剂协同作用的量。
“患者”或“对象”包括动物，例如人、牛、马、绵羊、羔羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠。根据一些实施方案，动物是哺乳动物，例如非灵长类和灵长类(例如，猴和人)。在一个实施方案中，患者是人，例如人婴儿、儿童、青少年或成人。在本公开内容中，术语“患者”和“对象”可互换使用。
“抑制剂”意指阻止或降低DPP4的表达、催化活性和/或定位(即，局部浓度)的化合物。
化合物
如上文一般性描述，本公开内容提供了式(I)化合物或其可药用盐：
在式(I)中，每个---代表单键，其在任选地存在时形成稠合环丙基环。
L1A是-NHCH2-或-CH(NH2)-。
X1选自-O-、-S-、-S(O)-、S(O)2-和-NH-。L1B是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z1选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。
下标m1是当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1的整数。下标n1是选自0、1、2和3的整数。
R1选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。
R2是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。在多个实施方案中，R2被1、2、3、4、5或6个-OH取代。以下示出了说明性的R2及其数种非对映异构体的一个实例：
分别为
在多个实施方案中，L1A是-NHCH2。在另一些实施方案中，L1A是-CH(NH2)-。
在一些实施方案中，X1是O。
在另外的实施方案中，Z1是H。在另一些实施方案中，Z1是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。根据一个实施方案，C6-C10芳基的实例是苯基。根据另一个实施方案，杂芳基的实例是三唑基。
在多个实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，n1是1或2。
在另外的实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R1是任选被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。例如，在一个说明性实施方案中，R1是C1-C6烷基。
在另外的实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R2是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基，或R2是被三至五个-OH取代的C2-C6烷基。在一个示例性实施方案中，R2是：
另外的实施方案提供了式(I)化合物，其中：
Z1是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n1是1或2；
R1是C1-C10烷基；并且
R2是R2是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
在一些实施方案中，由“---”表示的任选的单键不存在。在另一些实施方案中，它们存在以形成稠合环丙基环。这些实施方案通过以下结构举例说明：
分别为
如本文中所述，部分L1B是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-基团任选且独立地被-O-、C(O)-和-NH-替代。在一些实施方案中，1、2、3、4或5个-CH2-基团被替代。应当理解，根据化学原理，替代仅是形成稳定的化合物，例如当替代发生在相邻的-CH2-基团处时。L1B的实例包括以下：
在另一些实施方案中，化合物是式(II)或其可药用盐：
在式(II)中，W是CH或N。
下标o是选自1、2和3的整数。
R3选自C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基和-(CH2CH2O)xH(其中x是选自1、2、3、4和5的整数)。R4是C2-C8炔基。
R5a、R5b、R5c和R5d独立地选自H、C1-C6烷基、卤素、-NRARB(其中RA和RB独立地选自H和C1-C10烷基)、-C(O)OH、-B(OH)2、-C(O)NRARB、-C(O)ORA和-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2。L2是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z2选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。R5a、R5b、R5c和R5d中的至少一者不是H。
另外，当W是CH时，则R5a和R5d不选自-C(O)OH、-C(O)OMe和C(O)OEt。
R6选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。R7是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。在多个实施方案中，R7被1、2、3、4、5或6个-OH取代。以下示出了说明性的R7及其数种非对映异构体的一个实例：
分别为
下标m2是整数，当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1。下标n2是选自0、1、2和3的整数。
在一些实施方案中，W是CH。在另一些实施方案中，W是N。
在多个实施方案中，R5a、R5b、R5c和R5d中的一者、两者或三者是H。在一些实施方案中，R5b和R5d各自是H。在另一些实施方案中，R5c是卤素，例如氯。在另一些实施方案中，R5a是-C(O)OH或-C(O)ORA。在另一些实施方案中，R5a是-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2。所有这些实施方案及其组合均被考虑在内。
关于其中R5a、R5b、R5c和R5d中的一者(例如R5a)是-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2的实施方案，另外的实施方案提供了Z2为苯基或三唑基。在一些示例性实施方案中，Z2是三唑基。
在另外的实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，n2是1或2。
在另一些实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R6是任选地被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。在一个实施方案中，R6是C1-C6烷基。
在另外的实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R7是被一至五个-OH或三至五个-OH取代的C2-C6烷基。例如，在一些说明性实施方案中，R7是：
在另一些实施方案中，本公开内容提供了式(II)化合物，其中：
R5a、R5b、R5c和R5d中的一者是-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2；
Z2是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n2是1或2；
R6是C1-C10烷基；并且
R7是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
如本文中所述，在多个实施方案中，部分L2是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-基团任选且独立地被-O-、C(O)-和-NH-替代。在一些实施方案中，1、2、3、4或5个-CH2-基团被替代。应当理解，根据化学原理，替代仅是形成稳定的化合物，例如当替代发生在相邻的-CH2-基团处时。L2的实例包括以下：
在多个实施方案中，o是1或2。在一个特定实施方案中，o是1。
任选地与任何其他实施方案组合的是其中Z2是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)的多个实施方案。在一个实施方案中，Z2是C6-C10芳基，例如苯基。
在另外的实施方案中，化合物是式(III)或其可药用盐：
在式(III)中，X3是-O-或-NH-。L3是键或C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代。Z3选自H、-N3、C6-C10芳基、5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)和3至14元杂环烷基(其中1至4个环成员独立地选自N、O和S)。杂芳基和杂环烷基任选被1至6个选自卤素、NO2、OH、CN和C1-C6卤代烷基的取代基取代。
下标m3是整数，当Z3是H或-N3时其为0，并且当Z3不是H或-N3时其为1。下标n3是选自0、1、2和3的整数。
R8选自H、C1-C10烷基或-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代。R9是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。R10是C1-C6卤代烷基。每个R11独立地选自H、C1-C6烷基和卤素。
下标o3是选自0、1、2和3的整数。下标p3是选自0、1、2和3的整数。下标q3是选自0、1、2和3的整数。
在一些实施方案中，X3是O。在另一些实施方案中，X3是-NH-。
如本文中所述，部分L3是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-基团任选且独立地被-O-、C(O)-和-NH-替代。在一些实施方案中，部分L3是C5-C12烷基、C5-C10烷基、C7-C12烷基、C8-C12烷基或C9-C12烷基。在一些实施方案中，任选地与本文中所述的任何实施方案组合，1、2、3、4或5个-CH2-基团被替代。应当理解，根据化学原理，替代仅是形成稳定的化合物，例如当替代发生在相邻的-CH2-基团处时。L3的实例包括以下：
/>
在多个实施方案中，Z3是-N3。因此，在这些实施方案中，m3是0。
在另一些实施方案中，Z3是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。举例说明性的Z3是苯基或三唑基。
在一些实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，n3是1或2。
在另一些实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R8是任选被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。在一个说明性实施方案中，R8是C1-C6烷基。
在另外的实施方案中，任选地与本文中所述的任何其他实施方案组合，R9是被一至五个-OH、例如三至五个-OH取代的C2-C6烷基。在一个示例性实施方案中，R9是：
在一些实施方案中，本公开内容提供了式(III)化合物，其中：
Z3是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n3是1或2；
R8是C1-C10烷基；并且
R9是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
应当理解，尽管有本文中所述的一般限定，但化合物不包括以下化合物中的任一者：
/>
在另外的实施方案中，本公开内容提供了如在下表1-4中示出的特定化合物或其可药用盐。
表1：式(I)化合物的实例
/>
/>
表2：式(II)化合物的实例
/>
表3：式(III)化合物的实例
/>
药物组合物
本公开内容还提供了药物组合物，其包含与可药用载体混合的治疗有效量的一种或更多种本文中所述的化合物或其可药用盐、立体异构体和/或互变异构体。在一些实施方案中，根据药物调剂(pharmaceutical compounding)的认可惯例(accepted practice)，组合物还包含一种或更多种另外的治疗剂、可药用赋形剂、稀释剂、辅料、稳定剂、乳化剂、防腐剂、着色剂、缓冲剂、风味赋予剂。
在一个实施方案中，药物组合物包含选自本文中所公开的任何表格中所举例说明那些中的化合物或其可药用盐、立体异构体和/或互变异构体，以及可药用载体。
本公开内容的药物组合物以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。在本上下文中考虑的因素包括所治疗的具体病症，所治疗的具体对象，对象的临床病症、障碍的原因、药剂的递送部位、施用的方法、施用的时间安排以及医学实践者已知的其他因素。
施用的化合物或其可药用盐、立体异构体和/或互变异构体的“治疗有效量”由这样的考虑因素支配，并且是再生AEC2细胞增殖或抑制DPP4或这二者所需的最小量。这样的量可以低于对正常细胞或作为整体的对象有毒的量。一般而言，施用的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)的初始治疗有效量为约0.01至约200mg/kg或约0.1至约20mg/kg患者体重/天，其中典型的初始范围为约0.3至约15mg/kg/天。经口单位剂型(例如片剂和胶囊剂)可包含约0.1mg至约1000mg的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)。在另一个实施方案中，这样的剂型包含约50mg至约500mg的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)。在另一个实施方案中，这样的剂型包含约25mg至约200mg的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)。在另一个实施方案中，这样的剂型包含约10mg至约100mg的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)。在另一个实施方案中，这样的剂型包含约5mg至约50mg的本公开内容的化合物(或其可药用盐、立体异构体或互变异构体)。在任意前述实施方案中，剂型可每天一次或每天两次施用。
本公开内容的组合物可以以剂量单位制剂经口、表面、肠胃外、通过吸入或喷雾或者经直肠施用。本文中使用的术语肠胃外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。
如本文中所述的合适的经口组合物包括但不限于片剂、糖锭剂(troche)、锭剂(lozenge)、水性或油性混悬剂、可分散的散剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、糖浆剂或酏剂。
在另一个方面中，还涵盖了适合于单一单位剂量的包含本公开内容的化合物或其可药用立体异构体、盐或互变异构体以及可药用载体的药物组合物。
适合于经口使用的本公开内容的组合物可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备。例如，本公开内容的化合物的液体制剂包含一种或更多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的试剂以提供化合物的药学上适口的制剂。
对于片剂组合物，本公开内容化合物与无毒的可药用赋形剂混合用于制备片剂。这样的赋形剂的实例包括但不限于惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；黏合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可以是未包衣的，或者可以通过已知的包衣技术对其进行包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并从而在期望的时间段内提供持续的治疗作用。例如，可以使用时间延迟物质，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
用于经口使用的制剂还可以制成硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或者制成软明胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
对于水性混悬剂，将本公开内容的化合物与适合于维持稳定混悬剂的赋形剂混合。这样的赋形剂的实例包括但不限于羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶。
经口混悬剂还可包含分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如，十七碳乙烯氧基十六烷醇，或环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯，或环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯。水性混悬剂还可以包含一种或更多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或更多种着色剂，一种或更多种矫味剂，以及一种或更多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。
可通过将本公开内容的化合物混悬在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中，或者在矿物油(例如液体石蜡)中来配制油性混悬剂。所述油性混悬剂可包含增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。
可以添加甜味剂(例如如上所示的那些)和矫味剂以提供适口的经口制剂。这些组合物可通过添加抗氧化剂(例如抗坏血酸)来保存。
适合于通过添加水来制备水性混悬剂的可分散的散剂和颗粒剂提供了与分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或更多种防腐剂混合的本公开内容的化合物。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂通过上面已经提及的那些来例示。还可以存在另外的赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本公开内容的药物组合物还可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)，或者矿物油(例如液体石蜡)，或者这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶(例如阿拉伯胶或黄蓍胶)，天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)，以及来源于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇一油酸酯和所述偏酯与环氧乙烷的缩合反应产物(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇一油酸酯))。乳剂还可以包含甜味剂和矫味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)配制。这样的制剂还可以包含缓和剂(demulcent)、防腐剂以及矫味剂和着色剂。药物组合物可以是无菌可注射剂、水性混悬剂或油性混悬剂的形式。该混悬剂可以根据已知技术使用上面已经提及的那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌可注射制剂还可以是无毒的、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液剂。在可用的载剂和溶剂中，可使用水、林格溶液(Ringer’ssolution)和等张氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸(例如油酸)可用于制备可注射剂。
本公开内容的化合物还可以以用于经直肠施用的栓剂的形式施用。这些组合物可通过将化合物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述合适的非刺激性赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，并因此将在直肠中融化以释放化合物。这样的物质是可可脂和聚乙二醇。
用于肠胃外施用的组合物在无菌介质中施用。取决于所使用的载剂和浓度(制剂中化合物的浓度)，肠胃外制剂可以是混悬剂或含有溶解的化合物的溶液剂。还可以将辅料(例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂)添加至肠胃外组合物。
方法
本公开内容的化合物可用作DPP4的抑制剂。它们还可用于选择性促进AEC2细胞增殖，而不影响肌成纤维细胞活化或增殖(这在大多数疾病背景中是不期望的)。在多个实施方案中，化合物促进肺泡修复作为对来源于上皮变性和适应不良性重塑的病因的疾病的治疗。示例性适应证包括但不限于特发性肺纤维化(IPF)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和婴儿呼吸窘迫综合征(infant respiratory distress syndrome，IRDS)。
本公开内容的化合物的优点之一是其能够调节AEC2细胞的再生能力。针对该特性的是批准用于IPF的药物，例如，所述药物抑制病变肺中瘢痕组织产生之来源的肺成纤维细胞和肌成纤维细胞的活化和增殖。相比之下，本公开内容的化合物通过直接靶向IPF中的疾病来源来促进肺泡的修复：这是受损AEC2细胞的无效自我更新。因此，本公开内容的靶向AEC2化合物作为单一药剂或作为与批准的IPF药物(例如，吡非尼酮(Pirfenidone))的组合治疗提供了另外的疾病缓解效力。
因此，在多个实施方案中，本公开内容提供了用于在有此需要的对象中选择性提高立方形肺泡2型(AEC2)细胞的增殖，或者用于在有此需要的对象中恢复已降低的AEC2细胞增殖的方法。该方法包括向对象施用本文公开的化合物或可药用盐。
在另一个实施方案中还提供了用于在有此需要的对象中抑制二肽基肽酶IV(DPP4)的方法。该方法包括向对象施用本文公开的化合物或可药用盐。
在多个实施方案中，本公开内容提供了用于治疗患有疾病或病症的对象的方法，所述疾病或病症的病因来源于上皮变性、适应不良性重塑和/或受损AEC2细胞的无效自我更新。在一些实施方案中，疾病是肺疾病或肺病症。在另外的实施方案中，疾病或病症包括选自以下的那些：特发性肺纤维化(IPF)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)、肺气肿、硅沉着病、石棉沉着病、肺尘埃沉着病、矾土肺、铁钒土纤维化、铍中毒、铁沉着病、锡尘肺、滑石肺、拉布拉多尔肺(Labrador lung)(混合性粉尘肺尘埃沉着病)、结节病、过敏性肺炎(hypersensitivitypneumonitis，HP)/外源性变应性肺泡炎(extrinsic allergic alveolitis，EAA)、慢性支气管炎、脱屑性间质性肺炎(desquamative interstitial pneumonia，DIP)、呼吸性细支气管炎间质性肺疾病(respiratory bronchiolitis interstitial lung disease，RBILD)、急性间质性肺炎(acute interstitial pneumonia，AIP)、非特异性间质性肺炎(nonspecific interstitial pneumonia，NSIP)、隐源性机化性肺炎(cryptogenicorganizing pneumonia，COP＝特发性BOOP)、继发性机化性肺炎(BOOP)、淋巴样间质性肺炎(lymphoid interstitial pneumonia，LIP)、特发性间质性肺炎:非特定(Idiopathicinterstitial pneumonia:unspecified)、嗜酸性粒细胞增多性肺疾病(Hypereosinophilic lung disease)、结核病(tuberculosis，TB)、肺水肿、间质性肺疾病、支气管肺发育不良(Bronchopulmonary Dysplasia，BPD)、冠状病毒,COVID-19、隐源性机化性肺炎(Cryptogenic Organizing Pneumonia，COP)、囊性纤维化(Cystic Fibrosis，CF)、电子烟或雾化产品使用相关肺损伤(E-cigarette or Vaping Use-Associated LungInjury，EVALI)、汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrome，HPS)、组织胞浆菌病、流行性感冒、军团病、MAC肺疾病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、曲霉病、淋巴管平滑肌瘤病(lymphangioleiomyomatosis，LAM)、中东呼吸综合征(Middle Eastern RespiratorySyndrome，MERS)、非结核分枝杆菌肺疾病(Nontuberculous Mycobacterial LungDisease，NTM)、肺癌、肺栓塞、古德帕斯丘综合征(goodpasture syndrome)、特发性肺含铁血黄素沉着症、起因不确定的肺泡出血综合征、起因确定的肺泡出血综合征、偶发性肺淋巴管平滑肌瘤病(sporadic pulmonary lymphangioleiomyomatosis，S-LAM)、结节性硬化症中的肺淋巴管平滑肌瘤病(TSC-LAM)、肺泡蛋白沉积症、肺淀粉样变、原发性肺淋巴瘤、原发性纤毛运动不良症(不伴或伴内脏反位)、罕见原因的过敏性肺炎(除农民肺疾病和鸽饲养者肺疾病之外的所有原因)、遗传性出血性毛细血管扩张症(hereditary hemorrhagictelangiectasia，HHT)中的肺动静脉畸形、系统性硬化症中的间质性肺疾病、类风湿性关节炎中的间质性肺疾病、特发性炎性肌病(多发性肌炎、皮肌炎、抗合成酶综合征)中的间质性肺疾病、舍格伦综合征中的间质性肺疾病、混合性结缔组织病(mixed connective tissuedisease，MCTD)中的间质性肺疾病、重叠综合征中的间质性肺疾病、未分化结缔组织病中的间质性肺疾病、和闭塞性细支气管炎(在未经移植的患者中)。
在另一些实施方案中，疾病选自炎性疾病以及其他疾病和病症。所述疾病或病症包括选自以下的那些：感染性结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病(Crohn’s disease)、缺血性结肠炎、放射性结肠炎、消化性溃疡、肠癌、肠梗阻、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、桥本甲状腺炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、格雷夫斯病(Graves’Disease)、1型糖尿病、银屑病、强直性脊柱炎、硬皮病、肌炎、痛风、抗磷脂抗体综合征(Antiphospholipid AntibodySyndrome，APS)、血管炎、扩张型心肌病、肥厚型心肌病、限制型心肌病、左侧心力衰竭、右侧心力衰竭、收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭(射血分数保留的心力衰竭)、房间隔缺损、房室隔缺损、主动脉缩窄、双出口右心室、d型大动脉转位(d-Transposition of the GreatArtery)、埃布斯坦异常(Ebstein Anomaly)、左心发育不良综合征、主动脉弓中断、肺动脉瓣闭锁、单心室、法洛四联症(Tetralogy of Fallot)、全肺静脉异位回流、三尖瓣闭锁、动脉干、室间隔缺损、多囊肾病、尿崩症、古德帕斯丘病(Goodpasture’s Disease)、IgA血管炎、IgA肾病、狼疮性肾炎、成人肾病综合征、儿童肾病综合征、溶血尿毒症综合征、海绵肾、肾发育不良、肾动脉狭窄、肾血管性高血压、肾小管性酸中毒、奥尔波特综合征(Alportsyndrome)、韦氏肉芽肿病(Wenger’s granulomatosis)、阿拉日耶综合征(Alagillesyndrome)、胱氨酸病、法布里病(Fabry disease)、局灶性节段性肾小球硬化症(focalsegmental glomerulosclerosis，FSGS)、肾小球肾炎、aHUS(非典型溶血尿毒症综合征)、溶血尿毒症综合症(hemolytic uremic syndrome，HUS)、肯诺克-肖林紫癜(Henoch-purpura)、IgA肾病(贝格尔病，Berger’s disease)、间质性肾炎、微小变化疾病(Minimal change disease)、肾病综合征、血栓性血小板减少性紫癜(thromboticthrombocytopenic purpura，TTP)、肉芽肿性多血管炎(granulomatosis withpolyangiitis，GPA)、湿疹、银屑病、蜂窝织炎、脓疱病、特应性皮炎、大疱性表皮松解症、苔藓硬化、鱼鳞病、白癜风、肢端剥离性皮肤综合征、Blau综合征(Blau syndrome)、原发性皮肤淀粉样变、皮肤脓肿、压力性溃疡、脸缘炎、疖病、完全或部分厚度烧伤、毛细血管炎、蜂窝织炎、角膜擦伤、角膜糜烂、干燥病、扁平苔藓、慢性单纯性苔藓、静脉性溃疡(淤积性溃疡)、成人斯蒂尔病(adult Still’s disease)、无丙种球蛋白血症、斑秃、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性自主神经功能障碍、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睾丸炎、自体免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病变、自身免疫性荨麻疹、轴突和神经元神经病(AMAN)、巴洛病(Balódisease)、大疱性类天疱疮、乳糜泻、慢性复发性多灶性骨髓炎(chronic recurrent multifocal osteomyelitis，CRMO)、许尔许斯特劳斯综合征(Churg-Strauss Syndrome，CSS)或嗜酸性肉芽肿(Eosinophilic Granulomatosis，EGPA)、瘢痕性类天疱疮、Cogan综合征(Cogan’ssyndrome)、冷凝集素病、柯萨奇病毒性心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST综合征、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克病(Devic’s disease)(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、嗜酸性食管炎(eosinophilic esophagitis，EoE)、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、原发性混合性冷球蛋白血症、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肉芽肿性多血管炎、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本甲状腺炎、肯诺克-肖林紫癜(Henoch-Schonleinpurpura，HSP)、妊娠疱疹或妊娠类天疱疮(pemphigoid gestationis，PG)、低丙种球蛋白血症、IgG4相关硬化性疾病、免疫性血小板减少性紫癜(Immune thrombocytopenic purpura，ITP)、包涵体肌炎(inclusion body myositis，IBM)、兰伯特-伊顿综合征(Lambert-Eatonsyndrome)、白细胞碎裂性血管炎、线状IgA病(Linear IgA disease，LAD)、显微镜下多血管炎(Microscopic polyangiitis，MPA)、混合性结缔组织病(mixed connective tissuedisease，MCTD)、蚕蚀性角膜溃疡(Mooren’s ulcer)、Mucha-Habermann病(Mucha-Habermann disease)、多灶性运动神经病(Multifocal Motor Neuropathy，MMN)或MMNCB、多发性硬化、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、新生儿狼疮、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性类天疱疮、视神经炎、复发性风湿病(palindromic rheumatism，PR)、PANDAS、副肿瘤性小脑变性(paraneoplastic cerebellar degeneration，PCD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)、帕里-龙贝格综合征(ParryRomberg syndrome)、睫状体扁平部炎(中间葡萄膜炎)、Parsonage-Turner综合征、天疱疮、周围神经病、静脉周围脑脊髓炎、恶性贫血(pernicious anemia，PA)、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I、II、III型多腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、纯红细胞再生障碍(pure red cell aplasia，PRCA)、坏疽性脓皮病、雷诺现象(Raynaud’s phenomenon)、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、复发性多软骨炎、下肢不宁综合征(restless legs syndrome，RLS)、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、施密特综合征(Schmidt syndrome)、巩膜炎、硬皮病、舍格伦综合征、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征(stiff person syndrome，SPS)、亚急性细菌性心内膜炎(subacute bacterial endocarditis，SBE)、Susac综合征(Susac’s syndrome)、交感性眼炎(sympathetic ophthalmia，SO)、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(thrombocytopenic purpura，TTP)、甲状腺眼病(thyroid eye disease，TED)、阿拉日耶综合征、酒精相关肝病、自身免疫性肝炎、胆道闭锁、肝硬化、溶酶体酸性脂肪酶缺乏症(Lysosomal Acid Lipase Deficiency，LAL-D)、肝囊肿、肝癌、新生儿黄疸、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis，PBC)、进行性家族性肝内胆汁淤积(Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis，PFIC)、骨质疏松症、佩吉特病(Paget’s Disease)、骨坏死、骨关节炎、低骨密度、痛风、纤维性结构不良、马方综合征(Marfan Syndrome)、和成骨不全。
前述部分中的编号参考文献如下：
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本公开内容的另外的实施方案在以下非限制性实施例中阐述。本公开内容的所有化合物均通过类似于以下举例说明的那些的程序来制备。
实施例
中间体化合物
(2R，3R，4R，5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1，2，3，4，5-五醇(Int-1)的合成
步骤1.(2R,3R,4R,5S)-6-(己基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇
在室温下，向己烷-1-胺(2.0g，19.76mmol)和D-葡萄糖(3.56g，19.76mmol)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液添加雷尼镍(1.2g)。将反应混合物在H2气压(160psi)下在65℃下加热16小时。在起始物质消耗之后，将反应混合物通过硅藻土床过滤。将滤液在减压下浓缩以得到4.5g作为灰白色固体的(2R,3R,4R,5S)-6-(己基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.2]。
步骤2.(2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-1)：
向(2R,3R,4R,5S)-6-(己基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(1.0g，3.77mmol)在THF(15mL)中的搅拌溶液添加3-溴丙-1-炔(在甲苯中的80％溶液，0.84mL，5.65mmol)并将反应混合物在80℃下搅拌16小时。在起始物质消耗之后，将反应混合物过滤并将滤液在减压下浓缩以得到0.5g作为黄色胶状物的(2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(Int-2)
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
将(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(200g，659mmol，1.00当量)和(Boc)2O(165g，758mmol，1.15当量)在THF(400mL)和t-BuOH(400mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并随后在N2气氛下将混合物在70℃下搅拌12小时。将溶液在减压下浓缩，并添加MTBE(200mL)。将混合物过滤以得到作为白色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(239g，592mmol，89.8％产率，99.7％纯度)。TLC体系：PE:EA(0:1)；Rf：0.40。
步骤2.(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(Int-2)：
在0至10℃下，向化合物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(230g，570mmol，1.00当量)和N,N,N’,N’-四甲基-1,6-己二胺(216g，1.25mol，2.20当量)在DCM(2.30L)中并冷却到0至10℃的溶液添加甲磺酰氯(97.9g，855mmol，1.50当量)。将反应在15至20℃下搅拌2小时。将反应混合物通过在0℃下添加冰水(1.00L)来猝灭，并用EA(2.00L)萃取。将合并的有机层用1.00L盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到作为浅黄色油状物的(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷)-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(440g，粗制物)。TLC体系：PE:EA(10:1)；Rf：0.60)。
((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-3)的合成
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(3.58g，7.43mmol)和2,2’-氧基双(乙烷-1-醇)(35.2mL，371.67mmol)在乙腈(10mL)中的搅拌溶液添加分子筛(4g)，并将混合物在70℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(500mL)稀释并将所得混合物用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制物。然后将粗制物通过硅胶柱色谱(230至400目)使用二氯甲烷中的3％甲醇纯化以得到作为棕色胶状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.7g)。TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.4。
步骤2.2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯：
在-10℃下，向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.7g，5.49mmol)在二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(1.67g，16.47mmol)随后是在二氯甲烷(5mL)中的甲磺酰氯(1.26g，10.98mmol)。将所得混合物在-10℃下搅拌1小时。在完成之后，将反应混合物用水(100mL)稀释并将所得混合物用二氯甲烷(2×300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为淡黄色泡沫状固体的2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯(3.1g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf：0.4(TLC洗脱2次)。
步骤3.((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-3)：
向2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯(3.1g，5.44mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的搅拌溶液添加叠氮化钠(0.71g，10.88mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为黄色胶状物的((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf:0.3(TLC洗脱2次)。
(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)(Int-4)的合成
向(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(2.0g，11.08mmol)、丙-2-炔-1-胺(0.3g，5.54mmol)和乙酸(2.0mL)在甲醇(16mL)中的混合物添加氰基硼氢化钠(0.7g，11.08mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测反应)，将反应混合物蒸发，并且将剩余物用甲醇(2×20mL)、乙醚(2×20mL)洗涤并干燥以得到作为灰白色固体的(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)(1.3g)。
((1S,3R,5S)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-5)的合成
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，1.94mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌溶液添加三苯基膦(0.76g，2.9mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物蒸发，将剩余物通过硅胶柱色谱(通过三乙胺碱化)使用在二氯甲烷中的6％甲醇纯化以得到作为淡黄色固体的((1S,3R,5S)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.28g)。TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.2。
(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(Int-6)的合成
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(15g，49.44mmol)在甲苯(150mL)中的搅拌混悬液添加三乙胺(13.78mL，98.88mmol)和二碳酸二叔丁酯(17.0mL，74.16mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物蒸发以得到粗制剩余物，然后将所述粗制剩余物通过硅胶(230至400目)柱色谱使用在二氯甲烷的3％甲醇纯化以得到作为灰白色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷)-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(17.0g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf：0.2(TLC洗脱2次)。
步骤2.(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯：
在-10℃下，向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.5g，1.24mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.38g，3.72mmol)，然后是在二氯甲烷(2.5mL)中的甲磺酰氯(0.21g，1.86mmol)。将反应混合物在-10℃下搅拌30分钟。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并将所得混合物用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为淡黄色泡沫状固体的(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(0.59g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf：0.3(TLC洗脱2次)。
步骤3.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(Int-6)：
向(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(3.58g，7.43mmol)和2,2’-氧基双(乙烷-1-醇)(35.2mL，371.67mmol)在乙腈(10mL)中的搅拌溶液添加分子筛(4g)，并将混合物在70℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(500mL)稀释并将所得混合物用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制产物。然后将粗制物通过硅胶柱色谱(230至400目)使用在二氯甲烷中的3％甲醇纯化以得到作为棕色胶状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.7g)。TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.4。
(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(2-氨基乙氧基)苯乙基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-7)的合成
步骤1.4-(2-(己基氨基)乙基)苯酚：
向4-(2-氨基乙基)苯酚(15g，109mmol)和己醛(10g，100mmol)在EtOH(100mL)中的溶液添加AcOH(1滴)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。然后添加NaBH4(2g，54mmol)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物用水稀释并用EtOAc(200mL×2)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥。在过滤之后，将滤液在真空下浓缩以得到粗制产物。将粗制产物通过快速柱色谱用(CH2Cl2/MeOH，从0％至10％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的4-(2-(己基氨基)乙基)苯酚(6g，24％产率)。ES MS M/Z＝222(M+1)。
步骤2.苄基己基(4-羟基苯乙基)氨基甲酸酯：
在0℃下，向4-[2-(己基氨基)乙基]苯酚(6.2g，28mmol)和DIEA(5.41g，42mmol)在DCM(100mL)中的溶液添加CbzCl(4.29g，25mmol)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。然后将混合物用H2O(100mL)稀释并用DCM(100mL×2)萃取。将DCM相经Na2SO4干燥并浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用(PE/EtOAc，5％至20％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的苄基己基(4-羟基苯乙基)氨基甲酸酯(7.63g，76％产率)。ES MS M/Z＝356(M+1)。
步骤3.(4-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)苯乙基)(己基)氨基甲酸苄酯：
在N2气氛下在25℃下，向苄基己基(4-羟基苯乙基)氨基甲酸酯(8.63g，24.3mmol)、2-(2-羟基乙基)异吲哚-1,3-二酮(4.64g，24.3mmol)、PPh3(12.73g，48.6mol)在THF(50mL)中的混合物添加ADDP(12.24g，48.6mmol)在THF(30mL)中的溶液。将反应混合物在N2气氛下在70℃下搅拌12小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用(PE/EtOAc，10％至50％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的(4-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)苯乙基)(己基)氨基甲酸苄酯(10.4g，81％产率)。ES MSM/Z＝529(M+1)。
步骤4.2-(2-(4-(2-(己基氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮：
向(4-(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙氧基)苯乙基)(己基)氨基甲酸苄酯(4.86g，9.20mmol)在MeCN(10mL)中的溶液添加TMSI(5g，35.7mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌10分钟。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱纯化并用(CH2Cl2/MeOH，5％至10％)洗脱以得到作为黄色固体的2-(2-(4-(2-(己基氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.56g，70％产率)。ES MS M/Z＝395(M+1)。
步骤5.2-(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮：
向2-(2-(4-(2-(己基氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.92g，7.41mmol)和(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(4.00g，22.23mmol)在MeOH(20mL)中的溶液添加AcOH(10滴)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后添加NaBH3CN(1.86g，29.64mmol)，并将反应混合物在50℃下搅拌12小时。每隔12小时向反应混合物添加(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(1.33g，14.82mmol)，直至2-(2-(4-(2-(己基氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮消失(将总共约4当量的(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛添加至反应混合物中，总反应时间为约3天)。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱纯化并用(DCM/MeOH，5％至10％)洗脱以得到作为无色油状物的不纯的2-(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(4g，87％产率)。ES MS M/Z＝559(M+1)。
步骤6.(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(2-氨基乙氧基)苯乙基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-7)：
向2-(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.5g，6.27mmol)在EtOH(20mL)中的溶液添加水合肼(10mL)。将反应混合物在80℃下搅拌4小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱纯化并用(MeOH/DCM，20％至50％)洗脱以得到作为无色油状物的(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(2-氨基乙氧基)苯乙基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(2.5g，93％产率)。ESMS M/Z＝429(M+1)。
(2R,3R,4R,5S)-6-(丙-2-炔-1-基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-8)的合成
在0℃下，向甲醇(20mL)中的乙酸(1.0mL)和(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(1.0g，5.54mmol)、丙-2-炔-1-胺(0.61g，11.08mmol)的混合物添加氰基硼氢化钠(0.35g，5.54mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测反应)，将反应混合物蒸发，并且将剩余物用乙醚(2×20mL)洗涤并干燥以得到作为灰白色固体的(2R,3R,4R,5S)-6-(丙-2-炔-1-基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(1.0g，粗制物)。
((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-9)的合成
步骤1.((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
在0℃下，向(1S,3S,5S)-2-((2S)-2-氨基-2-((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲腈(2g，6.34mmol)在二氯甲烷(40mL)中的搅拌混悬液添加三乙胺(1.8mL，12.68mmol)，随后是二碳酸二叔丁酯(2.2mL，9.51mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在完成之后，将反应混合物蒸发以得到粗制剩余物，然后将所述粗制剩余物通过硅胶(230至400目)柱色谱使用在二氯甲烷中的3％甲醇纯化以得到作为灰白色固体的((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf：0.4。
步骤2.(1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯：
在-10℃下，向((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-羟基金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g，6.02mmol)在二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(2.5mL，18.06mmol)，随后是在二氯甲烷(2.5mL)中的甲磺酰氯(1.03g，9.03mmol)，并将混合物搅拌30分钟。在完成之后，向反应混合物添加水(50mL)并用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为白色泡沫状固体的(1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(3.2g)粗制物。TLC体系：100％EtOAc；Rf：0.4。
步骤3.((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-9)：
向(1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(3.2g，6.48mmol)和乙烷-1,2-二醇(18.2mL，324.13mmol)在乙腈(30mL)中的搅拌溶液添加分子筛(3.5g)，将所得混合物在70℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物浓缩并且将粗制物通过布氏漏斗过滤，用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为灰白色泡沫状固体的((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g)粗制物。TLC体系：100％EtOAc，Rf：0.3。
根据相同的路线制备((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(Int-9B)。
(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-10)的合成
在0℃下，向N-己基-D-葡糖胺(840mg，1.05当量)和碳酸钾(594mg，1.5当量)在甲醇(8mL)中的混悬液分批添加4-(溴甲基)苄基氨基甲酸叔丁酯(820mg，1.0当量)。在室温下搅拌4小时之后，将反应混合物通过硅藻土垫和二氯甲烷过滤。然后将滤液通过水洗涤并在真空下浓缩以提供作为黄色油状物的粗制产物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。在0℃下，将上述粗制物(700mg)用在二氧六环(4.5mL)和甲醇(0.5mL)中的4M HCl溶解。在室温下搅拌3小时之后，将挥发物在减压下除去以得到(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇盐酸盐的白色粉末，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
1-叠氮基-2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙烷(Int-11)的合成：
步骤1.2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯：
在室温下在氮气氛下，向化合物2,2’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-1-醇)(15g，99.88mmol)在DCM(150mL)中的搅拌溶液添加氧化银(27.7g，119.85mmol)，随后是碘化钾(1.6g，9.98mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌10分钟。添加p-TsCl(19g，99.88mmol)并将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱使用硅胶(230至400目)用10％EtOAC-石油醚洗脱进行纯化，以得到11g作为无色液体的化合物5。[TLC体系：EtOAC:石油醚(2:8)；Rf值：0.5]。
步骤2.2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇：
在室温下，向化合物2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(11g，36.14mmol)在DMF(200mL)中的搅拌溶液添加叠氮化钠(4.7g，72.28mmol)。将所得反应混合物在120℃下加热6小时。通过TLC监测反应进程。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物溶解在乙醚(150mL)中，并通过硅藻土垫过滤除去固体沉淀物。将滤液收集，并在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱使用硅胶(230至400目)用10％EtOAC-石油醚洗脱进行纯化，以得到5g作为灰白色固体的化合物6。[TLC体系：EtOAC:石油醚(3:7)；Rf值：0.3]。
步骤3.1-叠氮基-2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙烷(Int-11)：
向CBr4(4.1g，12.56mmol)在DCM(40mL)中的搅拌溶液添加Ph3P(3.3g，12.56mmol)。将反应混合物冷却至0℃，将化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(2g，11.42mmol)用DCM(15mL)稀释，并缓慢逐滴添加至反应混合物。将反应混合物在室温下搅拌8小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用水(20mL)猝灭并用DCM(2×50mL)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱使用硅胶(230至400目)用15％EtOAC-石油醚洗脱进行纯化，以得到1.2g作为无色液体的Int-11。[TLC体系：EtOAC:石油醚(1:1)；Rf值：0.7]。
(R)-(1-(7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-8-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(Int-13)的合成
步骤1.8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮：
在室温下，向化合物8-溴-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮(10.0g，40.81mmol)在DMF(100mL)中的搅拌溶液分批添加DIPEA(7.13mL，40.81mmol)和1-溴丁-2-炔(5.43g，40.81mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到9.3g作为灰白色固体的化合物8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.7]。
步骤2.(R)-(1-(7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-8-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(Int-13)：
向8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮(4.5g，15.15mmol)在DMF(45mL)中的搅拌溶液添加(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(3.33g，16.66mmol)和K2CO3(6.28g，45.45mmol)，并将反应混合物在90℃下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭，并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到5.0g作为灰白色固体的(R)-(1-(7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-8-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:1)；Rf值：0.3]。
(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯(Int-14)的合成
步骤1.6-氟-2-甲基烟酸甲酯：
在0℃下，向6-氟-2-甲基烟酸(3.0g，19.34mmol)在THF(36mL)和甲醇(9mL)中的搅拌溶液添加在甲苯中的2M TMS重氮甲烷溶液(12.57mL，25.14mmol)，并使反应混合物在2小时内升温至室温。在反应完成之后，将挥发物在减压下除去以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱(使用硅胶100至200目，在石油醚中的0％至10％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到1.6g作为无色液体产物的化合物6-氟-2-甲基烟酸甲酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(3:7)；Rf值：0.8]。
步骤2.2-(溴甲基)-6-氟烟酸甲酯：
向6-氟-2-甲基烟酸甲酯6-氟-2-甲基烟酸甲酯(1.6g，9.46mmol)在1,2-二氯乙烷(16mL)中的搅拌溶液分批添加N-溴琥珀酰亚胺(1.68g，9.46mmol)，随后是催化的苯甲酰基过氧化物(0.11g，0.47mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将溶剂在减压下蒸发，用水(100mL)猝灭并用二氯甲烷(100mL×2)萃取化合物。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱(使用硅胶230至400目，在石油醚中的0％至4％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到1.2g作为无色液体产物的化合物2-(溴甲基)-6-氟烟酸甲酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:9)；Rf值：0.7]。
步骤3.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯(Int-14)：
向2-(溴甲基)-6-氟烟酸甲酯2-(溴甲基)-6-氟烟酸甲酯(0.6g，2.42mmol)在DMF(6mL)中的搅拌溶液添加化合物(R)-(1-(7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-8-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.01g，2.42mmol)和K2CO3(0.33g，2.42mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到1g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:1)；Rf值：0.4]。
(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸(Int-15)的合成
步骤1.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸甲酯：
/>
向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯(1.1g，1.88mmol)在DMF(11mL)中的搅拌溶液添加K2CO3(0.39g，2.82mmol)，随后是化合物甲烷胺(1.1mL，2.26mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。在起始物质完成之后(TLC监测)，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到0.82g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸甲酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:9)；Rf值：0.3]。
步骤2.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸(Int-15)：
在0℃下，向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸甲酯(0.6g，1.01mmol)在MeOH(3mL)、THF(3mL)和水(1mL)中的搅拌溶液添加NaOH(0.081g，2.02mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。在起始物质完成之后(TLC监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物用水稀释，用1N HCl酸化。将沉淀的固体滤出并在真空下干燥以得到0.g作为灰白色固体的化合物。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.1]。
7-叠氮基庚烷-1-胺(Int-16)的合成
步骤1.1,7-二氮杂庚烷：
在室温下，向化合物1,7-二溴庚烷(10g，38.76mmol)在DMF(100mL)中的溶液分批添加NaN3(5.04g，77.52mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。在反应完成之后(TLC监测)，将反应混合物用水(300mL)稀释并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制物。将所得粗制物通过硅胶(100至200目)柱色谱使用在石油醚中的3％EtOAc纯化以得到作为无色油状化合物的1,7-二氮杂庚烷(6.5g)。[TLC体系：EtOAC:石油醚(1:9)；Rf值：0.8]。
步骤2.7-叠氮基庚烷-1-胺(Int-16)：
向化合物1,7-二氮杂庚烷(6.5g，35.67mmol)在1N HCl(100mL)中的溶液添加EtOAc(32.5mL)和Et2O(32.5mL)，随后是TPP(4.68g，17.84mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后(TLC监测)，将反应混合物用水(200mL)稀释并用Et2O(200mL)洗涤。将水层用饱和NaHCO3碱化并用EtOAc(2×300mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到作为无色油状化合物的7-叠氮基庚烷-1-胺(2.5g)。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.1]。
(1R,1’R,2S,2’S)-3,3’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(1-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙烷-1,2-二醇)(Int-17)的合成：
向化合物丙-2-炔-1-胺(0.2g，1.81mmol)和(2R,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙醛(0.97g，3.62mmol)在MeOH(20mL)中的溶液添加AcOH(0.1mL)，并将反应混合物在60℃下搅拌1小时。使反应混合物达到室温，并随后在0℃下分批添加NaCNBH3(0.68g 10.86mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。在反应完成之后(TLC监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制化合物用Et2O(50mL)洗涤并在真空下干燥以得到作为灰白色固体的化合物(1R,1’R,2S,2’S)-3,3’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(1-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二/>烷-4-基)丙烷-1,2-二醇)(0.9g)。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.1]。
6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(Int-18)的合成/>
步骤1.(R)-6-((7-叠氮基庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯：
向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯(3.5g，6.00mmol)在DMF(30mL)中的溶液添加化合物3(1.41g，9.00mmol)和K2CO3(1.24g，9.00mmol)，并将反应混合物在80℃下搅拌16小时。在反应完成之后(TLC监测)，将反应混合物用水(100mL)稀释，并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制物。将获得的粗制物通过硅胶(100至200目)柱色谱使用在石油醚中的30％EtOAc纯化以得到作为灰白色固体的(R)-6-((7-叠氮基庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(2.8g)。[TLC体系：EtOAC:石油醚(1:1)；Rf值：0.5]。
步骤2.6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(Int-18)：
向化合物(R)-6-((7-叠氮基庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(0.5g，0.69mmol)和(1R,1’R,2S,2’S)-3,3’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(1-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙烷-1,2-二醇)(0.97g 3.62mmol)在t-BuOH(10mL)和H2O(1mL)中的溶液添加CuSO4.5H2O(0.207g，0.83mmol)和抗坏血酸钠(0.204g，1.03mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后(TLC监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制化合物用Et2O(50mL)洗涤并在真空下干燥以得到作为灰白色固体的化合物6-((7-(4-((双((2S,3R))-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二/>烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(0.9g)。粗制化合物无需进一步纯化即可进入下一步骤。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.1]。
2-(溴甲基)-5-氯苯甲酸甲酯(Int-19)的合成
向5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯(10.0g，54.16mmol)在1,2-二氯乙烷(100mL)中的搅拌溶液分批添加N-溴琥珀酰亚胺(9.64g，54.16mmol)和催化的苯甲酰基过氧化物(0.66g，2.71mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌5小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下蒸发，用水猝灭并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将有机层用盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱(使用硅胶230至400目，100％石油醚作为洗脱剂)纯化以得到8g作为无色液体的化合物2-(溴甲基)-5-氯苯甲酸甲酯。[TLC体系：石油醚；Rf值：0.7]。
(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸(Int-20)的合成
步骤1.8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮：
在室温下，向化合物8-溴-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮(10.0g，40.81mmol)在DMF(100mL)中的搅拌溶液分批添加DIPEA(7.13mL，40.81mmol)和1-溴丁-2-炔(5.43g，40.81mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到9.3g作为灰白色固体的化合物8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.7]。
步骤2.2-((8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸甲酯：
向化合物8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮(2.0g，6.73mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液添加化合物2-(溴甲基)-5-氯苯甲酸甲酯(1.77g，6.73mmol)和K2CO3(2.79g，20.19mmol)，并将反应混合物在50℃下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到2.5g作为灰白色固体的化合物2-((8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸甲酯。[TLC体系：EtOAC:石油醚(1:1)；Rf值：0.7]。
步骤3.乙基甲基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯：
向化合物2-((8-溴-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸甲酯(2.5g，5.21mmol)在DMF(25mL)中的搅拌溶液添加化合物(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.25g，6.25mmol)和K2CO3(2.16g，15.63mmol)，并将反应混合物在65℃下搅拌8小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到2.0g作为灰白色固体的化合物乙基甲基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯。[TLC体系：EtOAC:石油醚(1:1)；Rf值：0.3]。
步骤4.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸(Int-20)：
在0℃下，向化合物乙基甲基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(0.5g，0.83mmol)在MeOH(5mL)和水(1mL)中的搅拌溶液添加LiOH.H2O(0.11g，2.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物用水稀释，用1N HCl酸化。将沉淀的固体滤出并在真空下干燥以得到0.4g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
(R)-7-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(Int-21)的合成
步骤1.(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸甲酯
向化合物(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸(1.35g，4.05mmol)在DCM(20mL)中的搅拌混悬液添加Et3N(1.69mL，12.15mmol)和BOP-Cl(1.54g，6.07mmol)，然后是化合物3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸甲酯(1.0g，4.05mmol)。将反应在室温下搅拌16小时，并通过TLC监测反应进程。在反应完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以获得粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱在硅胶(Davisil)上(使用在石油醚中的0％至60％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到1.6g作为白色固体的化合物(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸甲酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(6:4)；Rf值：0.5]。
步骤2.(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(Int-21)：
在0℃下，向化合物(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸甲酯(0.5g，0.88mmol)在MeOH(10mL)和THF(10mL)中的溶液添加4M NaOH溶液(2.7mL，5.5V)。然后将反应在室温下搅拌2小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩并将剩余物用10％HCl酸化至pH-4，然后将反应混合物浓缩以得到剩余物，其通过与ACN和甲苯共蒸发而干燥以得到0.450g作为灰白色固体的化合物(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸。
2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(Int-22)的合成
向化合物(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.45g，0.81mmol)在DCM(10mL)中的搅拌混悬液添加Et3N(0.341mL，2.45mmol)和BOP-Cl(0.312g，1.22mmol)，随后是化合物2-(2-(2-叠氮氧基)乙氧基)乙烷-1-醇(0.214g，1.22mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。在反应完成之后，将反应混合物浓缩以获得粗制化合物，所述粗制化合物通过柱色谱在硅胶(Davisil)上(使用在石油醚中的0％至60％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到0.4g作为无色胶状物的化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(7:3)；Rf值：0.7]。
2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(Int-23)的合成
在0℃下，向2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.45g，0.64mmol)在1,4-二氧六环(4.5mL)中的搅拌溶液逐滴添加在1,4-二氧六环(1mL)中的4M HCl，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以获得粗制化合物。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.1g作为灰白色固体的化合物Int-23。[TLC体系：EtOAc:石油醚(7:3)；Rf值：0.2]。
本公开内容的示例性化合物
实施例1.(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氨基甲酸庚酯(1)的合成
步骤1.(3-氨基金刚烷-1-基)氨基甲酸庚酯：
将金刚烷-1,3-二胺二盐酸盐[500mg，2.09mmol]、氯甲酸庚酯[336mg，1.88mmol]和TEA[316mg，3.14mmol]添加至DCM[15mL]。将反应混合物在N2下在室温下搅拌2小时。将混合物过滤并用DCM(5mL)洗涤三次。将滤液浓缩以得到作为白色固体的6-氯-4-甲氧基哒嗪-3-羧酸甲酯(270mg，14％产率)。ES MS M/Z＝309(M+1)。
步骤2.(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氨基甲酸庚酯(1)：
将N-(3-氨基金刚烷-1-基)氨基甲酸庚酯[300mg，0.97mmol]、(2S)-1-(2-氯乙酰基)吡咯烷-2-甲腈[150mg，0.87mmol]、K2CO3[402mg，2.91mmol]和碘化钾[161mg，0.97mmol]添加至MeCN[10mL]。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩并且将剩余物通过柱色谱在硅胶上用(DCM:MeOH＝20:1)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氨基甲酸庚酯(1，160mg，90％产率)。
实施例2.(2S)-1-((3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(2)的合成：
步骤1.(3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯：
在0℃下，向3-氨基金刚烷-1-醇(5g，29.9mmol)和DIEA(5.79g，44.9mmol)在DCM(20mL)中的溶液添加CbzCl(5.08g，29.9mmol)在DCM(20mL)中的溶液。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用DCM(100mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，并在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用(MeOH/DCM，5％至10％)洗脱进行纯化，以得到作为白色固体的(3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯(8.5g，94％产率)。ES MS M/Z＝302(M+1)。
步骤2.3-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯：
在0℃下，向(3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯(3.01g，10mmol)和三乙胺(3g，30mmol)在DCM(20mL)中的溶液添加甲磺酰氯(1.71g，15mmol)在DCM(2mL)中的溶液。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物用水稀释并用DCM(30mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，并在30℃下在压力下浓缩以得到作为白色固体的3-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(3.3g，87％产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ES MS M/Z＝402(M+23)。
步骤3.S-(3-氨基金刚烷-1-基)乙硫醇酯：
将3-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(2.5g，6.59mmol)在硫代乙酸(15mL)中的溶液在100℃下搅拌12小时。将反应混合物在45℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用MeOH/DCM(5％至10％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色固体的S-(3-氨基金刚烷-1-基)乙硫醇酯(1g，67％产率)。ES MS M/Z＝226(M+1)。
步骤4.S-(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)乙硫醇酯：
向S-(3-氨基金刚烷-1-基)乙硫醇酯(113mg，0.5mmol)、K2CO3(207mg，1.5mmol)和KI(8mg，0.05mmol)在MeCN(5mL)中的混合物添加2-氯-1-(吡咯烷-1-基)乙烷-1-酮(58mg，0.4mmol)。将反应混合物在75℃下搅拌6小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用MeOH/DCM(5％至10％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的S-(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)乙硫醇酯(128mg，71％产率)。ES MS M/Z＝362(M+1)。
步骤5.(2S)-1-((3-巯基金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈：
向S-(3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)乙硫醇酯(1g，2.77mmol)在MeOH/H2O(V/V＝20:1，10mL)中的溶液添加K2CO3(1.14g，8.31mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌30分钟。将反应混合物经Na2SO4干燥，并在35℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用MeOH/DCM(10％至20％)洗脱进行纯化，以得到作为黄色油状物的(2S)-1-((3-巯基金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(300mg，33％产率)。ES MS M/Z＝320(M+1)。
步骤6.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-巯基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
将(2S)-1-((3-巯基金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(400mg，1.25mmol)、Boc2O(545mg，2.5mmol)和TEA(631mg，6.25mmol)在甲苯(10mL)中的混合物在回流下搅拌12小时。将混合物浓缩。将剩余物通过快速柱色谱用MeOH/DCM(5％至10％)洗脱进行纯化，以得到作为无色油状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-巯基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，76％产率)。ES MS M/Z＝442(M+23)。
步骤7.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
/>
将(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-巯基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.40mmol)、1-碘庚烷(138mg，0.61mmol)和碳酸钾(224mg，1.62mmol)在MeCN(3mL)中的混合物在50℃下搅拌15小时。将混合物浓缩，并将剩余物通过柱色谱在硅胶上用(PE:EtOAc＝2:1)洗脱进行纯化，以得到作为黄色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，27％产率)。ES MS M/Z＝540(M+23)。
步骤8.(2S)-1-((3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(2)：
将(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.10mmol)在TFA/DCM(V/V＝1:3，4mL)中的溶液在室温下搅拌30分钟。将混合物浓缩并将剩余物通过制备型HPLC(Gemini-C18 150×21.2mm，5um，流动相：ACN-H2O，梯度：30％至70％)纯化以得到作为白色固体的(2S)-1-((3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(32mg，80％产率)。
实施例3.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(庚基亚磺酰基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(3)的合成
在-40℃下在氮气氛下，向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(庚基硫基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.03mmol)在DCM(3mL)中的溶液逐滴添加3-氯过苯甲酸(10mg，0.05mmol)。将反应混合物在-40℃下搅拌30分钟。缓慢添加TFA(1mL)。将反应混合物在室温下搅拌另外的30分钟。将反应混合物在压力下浓缩。然后将粗制产物通过Genal制备型HPLC(Gemini-C18 150×21.2mm，5μm，流动相：ACN-H2O，0.1％FA，梯度：5％至50％)纯化以得到作为白色固体的产物(2S)-1-((3-(庚基亚磺酰基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(6.5mg，38.9％)。MS(ESI)：C24H39N3O2S的质量计算值433.66，m/z实测值433.8[M+H]+。
实施例4.2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)硫代)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(4)的合成
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-羟基乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-巯基金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.83mmol)和K2CO3(572mg，4.15mmol)在MeCN(15mL)中的混合物添加2-碘乙醇(1.42g，8.3mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物在压力下浓缩。将剩余物通过快速色谱纯化，并用CH2Cl2/MeOH(10:1)洗脱以得到作为黄色油状物的产物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-羟基乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(340mg，88％)。MS(ESI)：C24H37N3O4S的质量计算值463.25，m/z实测值486.2[M+Na]+。
步骤2.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-羟基乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(340mg，0.73mmol)和Et3N(221mg，2.19mmol)在DCM(20mL)中的混合物添加4-硝基苯基氯甲酸酯(220mg，1.09mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3小时。添加H2O(20mL)。将剩余物用DCM(30mL)萃取。将DCM相浓缩以得到作为黄色油状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，粗制物)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。MS(ESI)：C31H40N4O8S的质量计算值628.26，m/z实测值629.7[M+H]+。
步骤3.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-((2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯
向(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(2-氨基乙氧基)苯乙基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(410mg，0.95mmol)在THF(15mL)中的溶液添加TEA(303mg，3mmol)，随后是(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)(3-((2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(903mg，1.43mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在25℃下搅拌4小时。将反应混合物在压力下浓缩。将剩余物通过快速色谱纯化，并用CH2Cl2/MeOH(5:1)洗脱以得到作为黄色油状物的产物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-((2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)-氨基甲酸叔丁酯。MS(ESI)：C47H75N5O11S的质量计算值917.52，m/z实测值918.4[M+H]+。
步骤4.2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)硫代)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-((2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙基)硫代)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，0.43mmol)在DCM(15mL)中的溶液添加ZnBr2(1086mg，4.8mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌8小时。将溶液过滤，将滤液浓缩并通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH)＝(5:1)纯化以得到不纯的产物，然后将不纯的产物通过Genal制备型HPLC(Gemini-C18 150×21.2mm，5um，流动相：ACN-H2O，0.1％FA，梯度：5％至50％)纯化以得到作为白色固体的产物2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)硫基)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(V2209613)(20mg，5％)。MS(ESI)：C42H67N5O9S的质量计算值817.47，m/z实测值818.4[M+H]+。
实施例5.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(5)的合成
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(Int-2，0.59g，1.22mmol)和乙烷-1,2-二醇(3.8g，61.25mmol)在乙腈(3.0mL)中的搅拌溶液添加分子筛(2.0g)，并将所得混合物在70℃下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制产物。然后将粗制物通过硅胶柱色谱使用在二氯甲烷中的3％甲醇纯化，并通过RP-HPLC使用以下条件进一步纯化：柱/尺寸：X-BRIDGE-C18(19*250，5um)，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液，流动相B：ACN梯度(时间/％B)：00/10、3/10、7/35、20/75、20.1/100、22/100、22.1/10、24/10，流量：17ml/分钟。将所需级分蒸发以得到作为灰白色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g)。TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.4。
步骤2.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(5)：
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.09g，0.2mmol)在乙腈(5mL)中的搅拌混悬液添加在庚烷中的1M氯化锡(IV)(0.8mL，0.8mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。在完成之后，将反应混合物蒸发，将剩余物与甲醇(10mL)共蒸发并用乙醚(2×5mL)洗涤以得到粗制产物。然后将粗制产物通过C-18柱色谱使用在10mM碳酸氢铵水溶液中的30％甲醇纯化。将所需级分冻干以得到作为灰白色固体的(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.055g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf：0.1。
实施例7.((3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(7)的合成：
步骤1.(3-((甲基硫基)甲氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯：
将(3-羟基金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯(3g，9.97mmol)和Ac2O(35.1g，29.9mmol)在DMSO(30mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释并用水(30mL×3)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗制产物通过柱色谱在硅胶上用(PE/EtOAc＝8/1)洗脱进行纯化，以得到作为淡黄色油状物的(3-((甲基硫基)甲氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯(2.6g，72.2％产率)。ES MS M/Z＝384(M+23)。
步骤2.((3-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯：
在0℃下，向(3-((甲基硫基)甲氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸苄酯(2.5g，6.93mmol)在CDCl3(20mL)中的溶液缓慢添加SOCl2(1.99g，13.86mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟。将混合物浓缩并溶解在THF(20mL)中。向该溶液添加TEA(1.40g，13.86mmol)和辛酸(1.99g，13.86mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(50mL)稀释并用水(20mL×2)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗制产物通过柱色谱在硅胶上用(PE/EtOAc＝8/1)洗脱进行纯化，以得到作为淡黄色油状物的((3-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(1.9g，60％产率)。ES MS M/Z＝480(M+23)。
步骤3.((3-氨基金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯：
向-(((苄基氧基)羰基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(1.7g，3.72mmol)在MeOH(10mL)中的溶液添加Pd/C(500mg)。将反应混合物在H2气氛下在室温下搅拌过夜。将混合物过滤，并将滤液在减压下蒸发以得到作为无色油状物的((3-氨基金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(1.1g，91.4％产率)。ES MS M/Z＝324(M+1)。
步骤4.((3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(7)：
将((3-氨基金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(1g，3.1mmol)、(S)-1-(2-氯乙酰基)吡咯烷-2-甲腈(533mg，3.1mmol)、碳酸钾(513mg，3.72mmol)和碘化钾(257mg，1.55mmol)在乙腈(15mL)中的混合物在N2气氛下在50℃下搅拌5小时。将混合物用EtOAc(30mL)稀释并用水(10mL×2)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗制产物通过柱色谱在硅胶上用(PE/EtOAc＝6/1)洗脱进行纯化，以得到作为淡黄色油状物的((3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)辛酸甲酯(mCMP694)(400mg，28％产率)。
实施例8.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(8)的合成：
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向化合物(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(137g，285mmol，1.00当量)在THF(1.40L)中的溶液添加TEA(66.1g，653mmol，2.29当量)和2,2’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-1-醇)(722g，4.81mol，16.8当量)。将反应加热至70℃持续48小时。将反应混合物用H2O(2.00L)稀释并用EA(2.00L×2)萃取。将合并的有机层用5％枸橼酸水溶液(2.00L)洗涤，然后将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液(2.00L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在<45℃下在减压下浓缩。将剩余物通过柱色谱(SiO2，PE/EA＝1/1至0/1)纯化以得到作为浅黄色油状物的化合物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(175g，327mmol，57.4％产率，N/A纯度)。TLC体系：仅EA；Rf：0.15。
步骤2.2-(2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯：
在0至10℃下，向化合物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(162g，302mmol，1.00当量)和N,N,N’,N’-四甲基-1,6-己二胺(115g，667mmol，2.21当量)在DCM(1600mL)中的溶液添加MsCl(54.9g，479mmol，37.1mL，1.59当量)。将反应在0至10℃下搅拌2小时。将反应混合物通过添加0℃下的冰水(1.00L)来猝灭，并随后用5％枸橼酸水溶液(2.00L)滴定直至pH＝5至6，并用EA(3.00L)萃取。将合并的有机层用NaHCO3(1.00L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到作为淡黄色油状物的化合物2-(2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯(180g，粗制物)。TLC体系：EA；Rf：0.30。
步骤3.((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
在N2下在20至30℃下，向化合物2-(2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙氧基)甲烷磺酸乙酯(90.0g，146mmol，1.00当量)在DMF(1.00L)中的溶液添加NaN3(22.3g，343mmol，2.34当量)，然后将混合物在70℃下搅拌12小时。将反应添加至饱和Na2CO3水溶液(2.00L)，然后用EA 2.00L萃取。将合并的有机层用2.00L盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到作为浅黄色固体的化合物((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(153g，粗制物)。TLC体系：EA；Rf：0.30。
步骤4.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-(4-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
将化合物((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(152g，271mmol，1.00当量)、(2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-戊醇(98.8g，325mmol，1.20当量)和CuI(6.84g，35.9mmol，0.13当量)在THF(1.52L)中的混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物用H2O(2.00L)稀释并用EA(2.00L)萃取。将合并的有机层用盐水(1.00L)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗制产物通过反相HPLC(0.1％NH3·H2O)纯化以得到作为黄色油状物的化合物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(100g，115mmol，42.7％产率，41.3％纯度)。TLC体系：DCM:MeOH＝5:1；Rf：0.20。
步骤5.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(8)：
在0℃下，向化合物(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(40.0g，46.3mmol，1.00当量)在ACN(320mL)中的溶液添加HCl(1M，560mL，12.1当量)。将反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物用DCM(1.00L×2)萃取。通过饱和NaHCO3和K2CO3将水相调至pH值9至10，并用DCM(1.00L×2)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到作淡黄色油状物的13(24.5g，31.0mmol，66.9％产率，96.7％纯度)。
类似地，由Int-1和Int-5制备化合物15。根据化合物8的路线，由沙格列汀制备化合物20和21。
实施例9.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(9)的合成
步骤1.((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
将((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.6g，1.16mmol)、(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-(丙-2-炔-1-基氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)(0.66g，1.74mmol)、五水合硫酸铜(0.35g，1.39mmol)和抗坏血酸钠(0.34g，1.74mmol)在叔丁醇(10mL)与水(2mL)混合物中的混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物通过硅藻土过滤并用甲醇和水(1:1)(100mL)洗涤，并且将滤液蒸发以得到粗制产物。然后将粗制物通过反相C18柱色谱使用在0.1％甲酸水溶液中的50％甲醇纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为灰白色固体的((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.46g，44％)。
步骤2.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(9)：
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.35g，0.39mmol)在乙腈(15mL)中的搅拌混悬液添加在庚烷中的1M氯化锡(IV)(1.55mL，1.55mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在完成之后(通过LCMS监测反应)，将反应混合物蒸发并将剩余物与甲醇(10mL)共蒸发，用乙醚(2×5mL)洗涤以得到粗制产物。然后将粗制物通过C-18柱色谱使用在10mM碳酸氢铵水溶液中的30％甲醇纯化。将所需级分冻干以得到作为淡黄色固体的(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.076g)。
实施例10.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(10)的合成：
步骤1.((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.21g，0.43mmol)、(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(0.19g，1.07mmol)和乙酸(1.0mL)在甲醇(10mL)中的混合物添加氰基硼氢化钠(0.034g，0.52mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌24小时。在反应完成之后(通过LCMS监测反应)，将反应混合物蒸发以得到粗制物。将获得的粗制物通过反相C18柱色谱使用在0.1％甲酸水溶液中的50％甲醇纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为无色胶状物的((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.28g)。
步骤2.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(10)：
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.27mmol)在水(5mL)中的搅拌溶液添加2N盐酸水溶液，并将反应混合物在室温下搅拌24小时。在反应完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化：柱/尺寸：X-BRIDGE(19*150)，5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液(aq)，流动相B：ACN，梯度(时间/％B)：0/2、3/2、16/36、16.1/100、18/100、18.1/2、20/2，流量：17ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为灰白色固体的(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.14g，72.5％)。
实施例11.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(11)的合成：
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.45mmol)、(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(0.081g，0.45mmol)和乙酸(1.0mL)在甲醇(50mL)中的混合物添加氰基硼氢化钠(0.03g，0.45mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌24小时。在完成之后(通过LCMS监测反应)，将混合物在减压下蒸发以得到粗制产物。然后将粗制物通过反相制备型HPLC使用以下条件纯化：柱/尺寸：X-BRIDGE(19*150)，5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液(aq)，流动相B：ACN，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、20/50、20.10/95、22.10/95、22.20/10、24/10，流量：17ml/分钟。将所需的级分收集并冻干以得到作为灰白色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.035g)。
步骤2.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(11)：
在0℃下，向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.03g，0.046mmol)在二氯甲烷(1mL)中的搅拌混悬液添加三氟乙酸，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物在减压下蒸发以得到粗制产物。然后将粗制物通过反相制备型HPLC使用以下条件纯化：柱/尺寸：X-BRIDGE(19*150)，5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液(aq)，流动相B：ACN，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、11/45.20、11.10/95、13.10/95、13.20/10、15/10，流量：17mL/分钟。将所需级分冻干以得到作为灰白色固体的(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.012g，47.2％)。
实施例12.2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(12)的合成：
步骤1.(2R,3R,4R,5S)-6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇：
向(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(5g，2.77mmol)和THF中之2M乙胺(20mL，41.6mmol)在甲醇(150mL)中的混合物添加雷尼镍(5g)，并将反应混合物在150psi氢气下在70℃下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇(50mL)洗涤。将滤液蒸发以得到固体，将所述固体用乙醚(50mL)研磨并干燥以得到作为灰白色固体的(2R,3R,4R,5S)-6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(5g，86％)。
步骤2.(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯：
在0℃下，向(2R,3R,4R,5S)-6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(1.0g，4.78mmol)在甲醇(10mL)中的溶液分批添加碳酸钾(0.99g，7.17mmol)，随后是(4-(溴甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.44g，4.78mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物蒸发以得到粗制物。然后将粗制产物通过反相C18快速柱色谱使用18％的在水中的0.1％甲酸和甲醇作为流动相进行纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为无色泡沫状固体的叔丁基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(1.3g)。
步骤3.(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(乙基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇盐酸盐：
在0℃下，向叔丁基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(0.25g，0.527mmol)在甲醇(2.5mL)中的搅拌溶液缓慢添加在1,4-二氧六环中的4M盐酸，并将所得混合物在室温下搅拌2小时。在完成之后(通过LCMS监控)，将反应混合物蒸发以得到作为绿色半固体的(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(乙基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇盐酸盐(0.19g，粗制物)。
步骤4.2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-硝基苯基)碳酸酯：
在-10℃下，向(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.2g，0.407mmol)在二氯甲烷(4mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.164g，1.628mmol)，随后是在二氯甲烷(1mL)中的4-硝基苯基氯甲酸(0.09g，0.447mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。在完成之后，将反应混合物按原样用于下一步骤。
步骤5.2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯：
在0℃下，向(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(乙基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇盐酸盐(0.17g，0.47mmol)在乙腈(5mL)中的搅拌混悬液添加三乙胺(0.24g，2.34mmol)，随后是在二氯甲烷(5mL)中的2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-硝基苯基)碳酸酯(0.26g，0.39mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物蒸发以得到粗制物，然后将所述粗制物通过反相C18柱色谱使用40％的在水中的0.1％甲酸和乙腈作为流动相进行纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为黄色半固体的2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(0.3g，粗制物)。
步骤6.2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(12-甲酸盐)：
在0℃下，向2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(0.29g，0.34mmol)在二氯甲烷(4mL)中的搅拌混悬液添加三氟乙酸，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物浓缩，并且将剩余物用乙醚(3×10mL)洗涤并干燥以得到粗制产物。然后将粗制产物通过反相制备型HPLC使用以下条件纯化：柱/尺寸：SUNFIREC18(19*150*5μ)，流动相A：0.1％FA水溶液(aq)，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/5、2/5、10/20、10.1/100、14/100、14.1/5、16/5，流量：17mL/分钟。将所需级分冻干以得到作为灰白色固体的2-(2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(0.038g)。
实施例13.2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(13)的合成：
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(1R,3S,5S)-3-((叔丁氧基羰基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基甲烷磺酸酯(1.25g，2.59mmol)在MeCN(5mL)中的溶液添加乙烷-1,2-二醇(8.04g，129.6mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱纯化并用(MeOH/DCM，1％至10％)洗脱以得到作为黄色油状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(860mg，74％产率)。ES MS M/Z＝470(M+23)。
步骤2.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(860mg，1.92mmol)和TEA(1000mg，10mmol)在DCM(20mL)中的溶液添加4-硝基苯基氯甲酸酯(800mg，4mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物用H2O(20mL)猝灭并用DCM(30mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，并在30℃下在压力下浓缩以得到作为黄色油状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，粗制物)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ES MS M/Z＝635(M+23)。
步骤2.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(2-氨基乙氧基)苯乙基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇在THF(10mL)中的溶液添加TEA(210mg，2.1mmol)，随后是(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(428mg，0.7mmol)在THF(1mL)中的溶液。将反应混合物在25℃下搅拌4小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩。将剩余物通过快速柱色谱纯化并用(MeOH/DCM，10％至50％)洗脱以得到作为黄色油状物的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(436mg，69％产率)。ES MS M/Z＝902(M+1)。
步骤3.2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(13)：
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(((2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(436mg，0.48mmol)在DCM(15mL)中的溶液添加ZnBr2(1086mg，4.8mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物过滤，并将滤液在35℃下在压力下浓缩。将剩余物通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝5:1)纯化以得到不纯的产物，将所述不纯的产物通过Genal制备型HPLC(Gemini-C18 150×21.2mm，5μm，流动相：ACN-H2O，0.1％FA，梯度：5％至50％)纯化为作为白色固体的2-(((1R,3S,5S)-3-((2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(2-(4-(2-(己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)乙基)苯氧基)乙基)氨基甲酸酯(13)(50mg，12％产率)。
实施例14.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(14)的合成：
步骤1.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯和((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-(氨基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯的混合物：
将((1S,3R,5S)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，1.94mmol)、(2R,3R,4R,5S)-6-(丙-2-炔-1-基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(0.64g，2.90mmol)、五水合硫酸铜(II)(0.58g，2.33mmol)和抗坏血酸钠(0.58g，2.91mmol)在叔丁醇(10mL)与水(2mL)的混合物中的混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物通过硅藻土过滤并用甲醇和水(1:1)(100mL)洗涤，并且将滤液蒸发以得到粗制物。然后将粗制物通过反相C18柱色谱使用在0.1％甲酸水溶液中的50％甲醇纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为棕色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯和((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-(氨基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.59g，粗制物)的混合物。
步骤2.(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
向((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-(氨基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.44g，0.77mmol)、(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(0.11g，0.61mmol)和乙酸(0.5mL)在甲醇(25mL)中的混合物添加氰基硼氢化钠(0.048g，0.77mmol)，并将混合物在60℃下搅拌6小时。在完成之后，将反应混合物蒸发以得到粗制产物，然后将所述粗制产物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X-BRIDGE C18(19*250)5um，流动相A：10mM ABC水溶液(aq)，流动相B：100％ACN，梯度(时间/％B)：0/20、3/20、18/40、18.1/100、20/100、20.1/20、24/20，流量：17mL/分钟。将含有所需产物的级分蒸发以得到作为灰白色固体的(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g)。
步骤3.(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(14)：
向(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.122mmol)在乙腈与水(1:1)混合物(4mL)中的搅拌溶液添加2N盐酸水溶液(1.22mL，2.44mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌24小时。在反应完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物蒸发以得到粗制物。将获得的粗制物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X BRIDGE C18(19×250mm)，5μ，流动相A：10mMABC水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/5、4/5、12/75、12.1/5、15/5。流量：16ml/分钟。将所需的峰级分冻干以得到作为灰白色固体的(2S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)甘氨酰基)吡咯烷-2-甲腈(0.063g，73.3％)。
实施例15.(1S,3S,5S)-2-((2S)-2-氨基-2-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲腈(16)的合成：
在0℃下，向((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.65mmol)、DCM(3mL)的搅拌溶液逐滴添加TFA(3mL)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在反应完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物浓缩并用乙醚(2×50mL)洗涤并蒸发以得到粗制物。将所得粗制物用NaHCO3(20mL)碱化并用DCM(3×50mL)萃取，经无水Na2SO4干燥并浓缩。将粗制物通过反相C-18柱色谱使用27％ACN和10mM ABC水溶液纯化。将含有所需产物的级分收集并冻干以得到作为灰白色固体的(1S,3S,5S)-2-((2S)-2-氨基-2-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲腈(0.053g)。
实施例16.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苯基)甘氨酸酯(19)的合成：
在0℃下，向((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(36mg，1.0当量)在二氯甲烷(0.21mL)中的溶液添加三乙胺(0.04mL，4.0当量)和4-硝基苯基氯甲酸酯(17.1mg在0.13mL二氯甲烷中)。在室温下搅拌4小时之后，在0℃下将混合物添加至(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(己基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(46mg，1.2当量)和三乙胺(0.08mL，6.0当量)在乙腈(0.2mL+0.05mL*2次洗涤)中的溶液。将反应搅拌12小时，然后添加饱和NaHCO3水溶液。然后将混合物用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，并在真空下浓缩以得到粗制物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。将上述粗制物用三氟乙酸(0.1mL)和二氯甲烷(0.2mL)处理。在搅拌4小时之后，在减压下除去挥发物。将粗制物通过C18反相制备型HPLC纯化以得到作为白色粉末的2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苯基)甘氨酸酯的甲酸盐(17.4mg，25％)。ES MS M/Z＝501.56(M+1-金刚烷)
类似地，由Int-9合成化合物17和18。
实施例17.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸三氟乙酸盐(22)的合成：
步骤1.(4-(叠氮基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯：
在室温下，向(4-(溴甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g，6.66mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液添加叠氮化钠(0.86g，13.33mmol)，并将反应混合物在80℃下搅拌2小时。在完成之后，将反应混合物用冰冷的水猝灭，将固体通过布氏漏斗过滤并干燥以得到作为灰白色固体的(4-(叠氮基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g)。TLC体系：EtOAc:石油醚(0.3:0.7)；Rf：0.4。
步骤2.(4-(氨基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯：
向(4-(叠氮基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，4.95mmol)在甲醇(15mL)中的搅拌溶液添加三苯基膦(1.9g，7.43mmol)，并将反应混合物在80℃下搅拌2小时。在完成之后，将反应混合物蒸发，并通过grace柱色谱使用在DCM中的8％至10％MeOH纯化以得到作为胶状物的(4-(氨基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(0.9g)。TLC体系：MeOH:DCM(0.1:0.9)Rf：0.2。
步骤3.(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯：
在0℃下，向(4-(氨基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(0.88g，3.72mmol)和(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(1.6g，9.30mmol)在甲醇(26mL)中的搅拌溶液添加乙酸(0.8mL)，并将所得混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下添加氰基硼氢化钠(0.49g，7.81mmol)，并将反应混合物在80℃下加热16小时。在完成之后，将反应混合物浓缩并通过RP柱色谱使用25％MeOH和0.1％FA水溶液进行纯化。将纯的级分蒸发以得到作为白色固体的4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g)。
步骤4.(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-((4-(氨基甲基)苄基)氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)盐酸盐：
在0℃下，向叔丁基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(0.8g，1.41mmol)在甲醇(4.0mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(8.0mL)中的4M盐酸，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物蒸发以得到作为白色胶状固体的(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-((4-(氨基甲基)苄基)氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)盐酸盐(0.95g，粗制物)。
步骤5.((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
在-10℃下，向((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.8g，1.74mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液添加三乙胺(0.9mL，1.91mmol)，并随后是在二氯甲烷(2mL)中的4-硝基苯基氯甲酸酯(0.38g，6.96mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后，将反应混合物按原样用于下一步骤。
步骤6.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯：
在0℃下，向(2R,2’R,3R,3’R,4R,4’R,5S,5’S)-6,6’-((4-(氨基甲基)苄基)氮烷二基)双(己烷-1,2,3,4,5-五醇)盐酸盐(0.96g，1.92mmol)在ACN(10mL)中的搅拌溶液添加TEA(1.3mL，9.60mmol)。然后在0℃下将((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g，1.60mmol)逐滴添加至反应混合物，并在80℃下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩并通过RP C18柱色谱使用25％MeOH和0.1M FA水溶液进行纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以得到作为黄色胶状物的2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(0.8g)。
步骤7.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸三氟乙酸盐(22)：
在0℃下，向2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(0.80g，0.84mmol)、DCM(8mL)的搅拌溶液逐滴添加TFA(4mL)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在反应完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物浓缩，并且用乙醚(2×100mL)洗涤并蒸发以得到粗制物。将获得的粗制物通过RP SUNFIRE-C18(150*19*5μ)使用20％ACN和0.1％TFA水溶液进行纯化。将含有所需产物的级分收集并冻干以得到作为灰白色固体的2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸三氟乙酸盐(0.184g)。
实施例18.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(23)的合成：
步骤1.((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯：
在-10℃下，向((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-羟基乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.8g，1.74mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液逐滴添加TEA(0.9mL，6.96mmol)，随后是在DCM(0.5mL)中的4-硝基苯基碳酰氯(0.38g，1.91mmol)，在室温下搅拌2小时。在完成之后，将反应混合物进行下一步骤以得到作为黄色溶液的((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g)。TLC体系：100％EtOAc，Rf：0.4。
步骤2.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯：
在0℃下，向叔丁基(2R,3R,4R,5S)-6-((4-(氨基甲基)苄基)(乙基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇盐酸盐(0.81g，2.24mmol)在ACN(10mL)中的搅拌溶液添加TEA(1.5mL，11.22)。然后在0℃下将((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-1-((1S,3R,5S)-3-(2-((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)金刚烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g，1.87mmol)逐滴添加至反应混合物，并在80℃下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩并通过RP C18柱色谱使用27％ACN和0.1M FA水溶液纯化。将含有所需产物的级分收集并蒸发以作为黄色胶状物的2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(1.0g)。
步骤3.2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(23)：
在0℃下，向2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯(1g，1.22mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液逐滴添加TFA(10mL)，并将所得反应混合物在室温下搅拌1小时。在完成之后(通过LCMS监测)，将反应混合物浓缩并用乙醚(2×100mL)洗涤以得到粗制产物。然后将获得的粗制物通过RP色谱使用C-18柱和20％CAN:0.1M FA水溶液作为洗脱剂进行纯化。将含有所需产物的级分收集并冻干以得到作为灰白色固体的2-(((1R,3S,5S)-3-((S)-1-氨基-2-((1S,3S,5S)-3-氰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-基)-2-氧代乙基)金刚烷-1-基)氧基)乙基(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸酯甲酸酯(0.59g)。
实施例21.(R)-(2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)苯基)硼酸(27)的合成：
步骤1.(R)-(2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)苯基)硼酸：
向(R)-(1-(7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-8-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.24mmol)和(2-(溴甲基)苯基)硼酸(0.08g，0.36mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液添加K2CO3(0.03g，0.24mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，用水(20mL)和盐水溶液(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制剩余物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.06g作为灰白色固体的(R)-(2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)苯基)硼酸。[TLC体系：EtOAC:石油醚(8:2)；Rf值：0.5]。
步骤2.(R)-(2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)苯基)硼酸(27)：
在0℃下，向(R)-(2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)苯基)硼酸(0.06g，0.11mmol)在1,4-二氧六环(0.6mL)中的搅拌溶液逐滴添加在1,4-二氧六环中的4M HCl，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩并用乙醚研磨以得到0.025g作为灰白色固体的化合物27(HCl盐)。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.2]。
实施例22.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯(30)的合成：
步骤1.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸
在0℃下，向(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸甲酯(0.9g，1.56mmol)在THF(9mL)和水(2mL)中的搅拌溶液添加LiOH.H2O(0.129g，3.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以获得粗制化合物。将粗制化合物用水稀释，用1N HCl酸化。将沉淀的固体滤出并在真空下干燥以得到0.72g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
步骤2.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯：
向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸(0.72g，1.26mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液添加C6H13Br(0.25g，1.51mmol)和K2CO3(0.52g，3.78mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到0.3g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:1)；Rf值：0.8]。
步骤3.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯(30)：
在0℃下，向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯(0.30g，0.46mmol)在1,4-二氧六环(3mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(2mL)中的4MHCl，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.181g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-氟烟酸己酯。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
实施例23.己基(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸(31)的合成：
在0℃下，向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸(0.5g，0.86mmol)在1,4-二氧六环(3mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(2mL)中的4MHCl，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.157g作为灰白色固体的化合物己基(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
实施例24.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸己酯(32)的合成：
步骤1.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸：
向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸(1.0g，1.72mmol，与mCMT478共享相同的中间体)在DMF(10mL)中的搅拌溶液添加C6H13Br(0.34g，2.06mmol)和K2CO3(0.71g，5.16mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到0.7g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.8]。
步骤2.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸己酯(32)
在0℃下，向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸己酯(0.41g，0.62mmol)在1,4-二氧六环(4mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(3mL)中的4M HCl，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.161g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-(甲基氨基)烟酸己酯。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
实施例25.2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-((7-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)烟酸甲酯(34)的合成
在0℃下，向化合物6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶)-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(0.9g，0.70mmol)在H2O(10mL)中的溶液随后添加浓HCl(2mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后(LCMS监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制物通过RP-HPLC纯化以得到作为灰白色固体的化合物2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-((7-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)烟酸甲酯(0.041g)。
实施例26.2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-((7-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)烟酸(35)的合成
步骤1.6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸：
向化合物6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸甲酯(0.350g，0.27mmol)在MeOH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液添加NaOH(0.054g，1.35mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后(LCMS监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制化合物用Et2O(50mL)洗涤，并在真空下干燥以得到作为灰白色固体的化合物6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二/>烷-4-基)丙基)氨基)-甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸(0.3g)。将凝固的化合物用于下一步骤。
步骤2.2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-((7-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)烟酸(35)：
在0℃下，向化合物6-((7-(4-((双((2S,3R)-2,3-二羟基-3-((4R,5R)-5-羟基-2-苯基-1,3-二烷-4-基)丙基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)烟酸(0.3g，0.24mmol)在H2O(10mL)中的溶液添加浓HCl(0.6mL)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后(LCMS监测)，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制物通过RP制备型HPLC纯化以得到作为灰白色固体的化合物2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-6-((7-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚基)氨基)烟酸(0.014g)。
实施例27.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯(37)的合成：
步骤1.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸异丙酯：
向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸(0.5g，0.85mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液添加2-溴丙烷(0.15g，1.28mmol)和K2CO3(0.35g，2.56mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始材料完成之后，将反应混合物用冷水猝灭。将沉淀的固体滤出，在真空下干燥并用乙醚洗涤以得到0.4g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸异丙酯。[TLC体系：EtOAC:石油醚(3:7)；Rf值：0.7]。
步骤2.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸异丙酯(37)：
在0℃下，向化合物(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸异丙酯(0.4g，0.64mmol)在1,4-二氧六环(4mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(4mL)中的4MHCl，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.19g作为灰白色固体的化合物(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸异丙酯。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.2]。
类似地，合成了(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸己酯(38)。
实施例28.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯(39)的合成:
步骤1.(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯：
向(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸(0.35g，0.6mmol)在DMF(3.5mL)中的搅拌溶液添加1-溴壬烷(0.15g，0.72mmol)和K2CO3(0.25g，1.8mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭。将沉淀的固体滤出，在真空下干燥并用乙醚洗涤以得到0.25g作为灰白色固体的(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯。[TLC体系：ETOAC:石油醚(1:1)；Rf值：0.7]。
步骤2.(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯(39)：
在0℃下，向(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯(0.35g，0.49mmol)在1,4-二氧六环(2mL)中的搅拌溶液添加在1,4-二氧六环(2mL)中的4M HCl，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制物质。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.13g作为棕色固体的(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸壬酯(39)。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.3]。
类似地，合成了(R)-2-((8-(3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯-N-戊基苯甲酰胺(40)。
实施例29.2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙基2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(41)的合成：
步骤1.2-(2-溴乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯：
向(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸(1.0g，1.71mmol)和1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(1.98g，8.55mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液添加K2CO3(0.71g，5.13mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用冷水猝灭并将沉淀的固体滤出，在真空下干燥以得到1.0g作为灰白色固体的2-(2-溴乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(3:7)；Rf值：0.6]。
步骤2.2-(2-叠氮基乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯：
向2-(2-溴乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(3)(1.0g，1.36mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液添加NaN3(0.44g，6.79mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用水猝灭并用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱(使用硅胶100至200目，在石油醚中的30％乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化以得到0.7g作为灰白色固体的2-(2-叠氮基乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(1:1)；Rf值：0.4]。
步骤3.2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙基2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯：
向2-(2-叠氮基乙氧基)乙基(R)-2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(0.3g，0.43mmol)和(2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-戊醇5(0.26g，0.86mmol)在DCM与水的混合物(6mL，1:1)中的搅拌溶液添加CuSO4.5H2O(0.13g，0.52mmol)和抗坏血酸钠(0.13g，0.65mmol)。将反应混合物在室温下搅拌8小时。在起始物质完成之后，将反应混合物用水猝灭并用DCM(3×20mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供0.45g作为黄色固体的粗制物2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)-乙基2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.5]。该粗制化合物无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤4.2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙基2-((8-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-7-(丁-2-炔-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(41)：
在0℃下，向2-(2-(4-((己基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙基2-((7-(丁-2-炔-1-基)-8-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-甲基-2,6-二氧代-2,3,6,7-四氢-1H-嘌呤-1-基)甲基)-5-氯苯甲酸酯(0.45g，0.45mmol)在1,4-二氧六环(4.5mL)中的搅拌溶液逐滴添加在1,4-二氧六环(1mL)中的4M HCl，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在起始物质完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过反相制备型HPLC纯化以得到0.1g作为灰白色固体的化合物41(HCl盐)。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.2]。
实施例30.2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(42)的合成：
在0℃下，向化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.4g，0.565mmol)在DCM(10mL)中的溶液添加在1,4-二氧六环中的4M HCl。然后将反应在室温下搅拌3小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩，并且将剩余物用饱和NaHCO3溶液碱化并用EtOAc(20mL×2)萃取并经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到粗制物，将所述粗制物通过柱色谱在硅胶(Davisil)上(使用在DCM中的0％至8％MeOH作为洗脱液)纯化以得到30mg作为淡棕色胶状物的2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。[TLC体系：MeOH:DCM(1:9)；Rf值：0.5]。
实施例31.2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(44)的合成：
步骤1.2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
向化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.6g，0.847mmol)和化合物6-(丙-2-炔-1-基氨基)己烷-1,2,3,4-五醇(0.371g，1.695mmol)在t-BuOH(5mL)和水(1mL)中的搅拌溶液添加CuSO4,5.H2O(0.254g，1.017mmol)和抗坏血酸钠(0.251g，1.271mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤。将滤液在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过RP制备型HPLC纯化以得到60mg作为棕色黏性固体的化合物2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。
制备型HPLC纯化的方法：
柱/尺寸：X-bridge苯基(19*250*5μ)
流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液
流动相B：乙腈
梯度(时间/％B)：0/10、1/10、27/75、27.10/95、29.10/95、31.20/10、35/10
流量：18ml/分钟。溶解性ACN+水。
步骤2.2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(44)：
向化合物2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.060g，0.064mmol)在DCM(1mL)中的溶液添加在1,4-二氧六环(0.6mL)中的4M HCl。将反应混合物在室温下搅拌3小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过RP制备型HPLC纯化以得到0.0157g作为灰白色固体的2-(2-(2-(4-((((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。
制备型HPLC纯化的方法：
色谱柱/尺寸：X BRIDGE C18(19mm*250mm*5μ)
流动相A：10mM ABC水溶液
流动相B：乙腈
梯度(时间/％B)：0/10、1/10、18/44、18.10/95、20.10/95、20.20/10、22/10。
实施例32.2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(45)的合成:
步骤1.6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇：
向化合物2,3,4,5,6-五羟基己醛(5.0g，27.75mmol)和化合物乙胺(20.8mL，41.62mmol)在MeOH(30mL)中的溶液添加雷尼镍(5.0g)。将反应混合物在H2气氛(150psi)下在60℃下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物通过硅藻土床过滤，并将滤液浓缩以得到5.0g作为灰白色固体的化合物6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(粗制物)，其无需纯化即可用于下一步骤。
步骤2.6-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇：
向化合物6-(乙基氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(2.0g，9.563mmol)的溶液添加在THF(30mL)中的化合物3-溴丙-1-炔(0.85mL，11.47mmol)，并将反应混合物在60℃下加热16小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并将滤液浓缩以得到0.450g作为棕色黏性化合物的6-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇，其无需纯化即可用于下一步骤。
步骤3.2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
向化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.6g，0.847mmol)和化合物6-(乙基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(0.420g，169mmol)在t-BuOH(10mL)和水(2mL)中的溶液添加CuSO4,5.H2O(0.254g，1.017mmol)和抗坏血酸钠(0.251g，1.271mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过制备型HPLC纯化以得到0.240g作为棕色黏性化合物的化合物2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。
制备型HPLC方法：
柱/尺寸：X BRIDGE C8(19*250*5um)
流动相A：10MM ABC水溶液
流动相B：乙腈(org)
梯度(时间/％B)：0/20、1/20、9/50、14/50、14.1/98、18/98、18.1/20、21/20
流量：17ml/分钟，溶解性乙腈+THF+水。
步骤4.2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(45)：
向化合物2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-羧酸酯(0.240g，0.280mmol)在DCM(3mL)中的溶液添加在1,4-二氧六环(2.4mL)中的4M HCl。将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过使用乙醚研磨来纯化以得到175mg作为灰白色固体的2-(2-(2-(4-((乙基((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。
实施例33.2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(46)的合成
步骤1.2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
向2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(460mg，0.65mmol)在THF(3mL)中的溶液添加2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(在实施例9步骤4中制备)(295mg，0.97mmol)、抗坏血酸钠(193mg，0.97mmol)、CuSO4·5H2O(242.5mg，0.97mmol)和H2O(2mL)。将混合物在室温下搅拌19小时。将反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC(Gemini-C18150×21.2mm，5um，流动相：ACN(0.1％FA)至H2O(0.1％FA)，梯度：20％至70％)纯化以得到作为黄色固体的2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(140mg，21.2％)。MS(ESI)：C44H64F6N8O12的质量计算值1010.45，m/z实测值1011[M+1]。
步骤2.2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(46)：
向在DCM(5mL)中的2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯添加TFA(0.5mL)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在40℃下在压力下浓缩，并将剩余物通过制备型HPLC(Gemini-C18 150×21.2mm，5um，流动相：ACN(0.1％FA)至H2O(0.1％FA)，梯度：20％至70％)纯化以得到作为黄色固体的2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(65.4mg，51.8％)。MS(ESI)：化学式C39H56F6N8O10的质量计算值910.40，m/z实测值911.4[M+1]。
以下描述了化合物(46)的替代合成。
2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯酒石酸盐(46盐)的合成
步骤1.2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯
在室温下，向2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(Int-22，300g，424mmol)在乙酸乙酯(1L)中的溶液添加在乙酸乙酯中的HCl(4M，1L)。将混合物搅拌2小时并浓缩以得到粗制剩余物。将其重新溶解在EA(1.00L)中，用NaHCO3水溶液猝灭以调节pH＝8，将有机层分离，经Na2SO4干燥，过滤并将滤液浓缩以得到作为黄色油状物的化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(720g，1.12mol，88.1％产率，94.5％纯度)。
步骤2.2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(46)
制备了化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(240g，395mmol，1.00当量)和(2R,3R,4R,5S)-6-(己基(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(Int-1，144g，474.63mmol，1.20当量)在THF(2.00L)和H2O(1.00L)中的溶液。在10至25℃下，将CuSO4.5H2O(99.0g，396mmol，1.00当量)和抗坏血酸钠(78.9g，398mmol，1.01当量)添加至混合物，并将混合物在25℃下搅拌10小时。将三批混合物用NH3.H2O/NaCl水溶液＝1V/2V(1.50L)稀释，用EA(1.50L×2)萃取，用NH3.H2O/NaCl水溶液＝1V/2V(1.50L×3)洗涤，直至水相颜色由无色转变为蓝色。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并将滤液在减压下浓缩以得到剩余物。将粗制产物通过反相HPLC(0.1％FA条件)纯化，将混合物浓缩以除去MeCN，并随后用NaHCO3猝灭以调节pH＝9，用EA(10.0L×2)萃取，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液在减压下浓缩以得到作为黄色固体的2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(46)(290g，306mmol，25.9％产率，96.3％纯度)。MS(ESI)：化学式：C39H56F6N8O10的质量计算值910.40，m/z实测值911.5[M+1]。
步骤3.2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯酒石酸盐
向2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(260g，285mmol)在乙醇(1L)中的溶液添加在乙醇(1L)中的酒石酸(43.7g，291mmol，1.02当量)。将混合物在60℃下搅拌5小时。将混合物在减压下浓缩以得到作为黄色固体的2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯酒石酸盐(293.3g，93.7％产率，96.8％纯度)。
实施例34.7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(47)的合成
步骤1.(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-2,1-二基)双(4-甲基苯磺酸酯)的合成
在0℃下，向2,2’-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-1-醇)(15.0g，99.88mmol)在DCM(300mL)中的搅拌溶液添加Et3N(55.58mL，399.54mmol)，随后是甲苯磺酰氯(76.16g，399.54mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物用冷水(500mL)猝灭并用CH2Cl2(2×500mL)萃取。将合并的有机层用冷水(500mL)、盐水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱在硅胶(100至200目)上(使用在石油醚中的0％至50％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到37.0g作为灰白色固体的(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-2,1-二基)双(4-甲基苯磺酸酯)。[TLC体系：EtOAc:石油醚(4:6)；Rf值：0.6]。
步骤2.1,2-双(2-叠氮基乙氧基)乙烷的合成
向(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙烷-2,1-二基)双(4-甲基苯磺酸酯)(5.0g，10.90mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液添加叠氮化钠(2.83g，43.61mmol)。然后将反应混合物在70℃下加热16小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩，并将剩余物在乙醚中搅拌并过滤。将滤液浓缩以得到2.0g作为无色油状物的1,2-双(2-叠氮基乙氧基)乙烷。[TLC体系：EtOAc:石油醚(2:8)；Rf值：0.6]。
步骤3.2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺盐酸盐
向1,2-双(2-叠氮基乙氧基)乙烷(3.0g，14.98mmol)在Et2O(22mL)和THF(4.4mL)中的剧烈搅拌溶液添加1N HCl(17.6mL)溶液，随后是在Et2O(22mL)中的PPh3(3.9g，14.98mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。在反应完成之后，将水层分离并用乙醚(2×100mL)洗涤。将水层浓缩，并将剩余物与乙腈共蒸发(2至3次)以得到2.0g作为无色油状物的2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺盐酸盐。[TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf值：0.4]。
步骤4.(R)-(4-(1-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(2.9g，5.27mmol)和2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺盐酸盐(1.66g，7.90mmol)在DMF(30mL)中的搅拌溶液添加HATU(3.0g，7.90mmol)溶液，随后是DIPEA(3.39mL，26.35mmol)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟。通过TLC监测反应进程。在反应完成之后，将反应混合物用冷水(2×50mL)猝灭并用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用冷水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过柱色谱在硅胶(Davisil)上(使用在石油醚中的0％至70％EtOAc作为洗脱剂)纯化以得到3.0g作为灰白色固体的(R)-(4-(1-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯。[TLC体系：EtOAc:石油醚(7:3)；Rf值：0.5]。
步骤5.(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺
在0℃下，向(R)-(4-(1-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.4g，3.339mmol)在CH2Cl2(24mL)中的溶液添加在1,4-二氧六环(24.0mL)中的4M HCl。将反应混合物在室温下搅拌6小时。在反应完成之后，将反应混合物浓缩并且将剩余物用饱和NaHCO3溶液碱化并用在DCM(2×200mL)中的10％MeOH萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并浓缩以得到2.2g作为油状物的(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺。[TLC体系：MeOH:DCM(0.5:9.5)；Rf值：0.4]。
步骤6.7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺
向(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(2.2g，3.627mmol)和化合物8(1.65g，5.440mmol)在t-BuOH(66mL)和水(22mL)中的溶液添加CuSO4,5.H2O(1.08g，4.352mmol)和抗坏血酸钠(1.07g，5.440mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过RP制备型HPLC纯化，得到0.573g作为灰白色固体的7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-(2-(4-((己基(2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺。
RP制备型HPLC纯化方法：
柱：X BRIDGE C18(19×250mm)
流动相A：10MM ABC水溶液
流动相B：乙腈
溶解性：ACN+水+THF
梯度％B：0/10、1/30、18.5/45.4、18.6/95、20.5/95、20.6/10、22/10。
实施例35.2-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(48)的合成：
向化合物2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.1g，0.164mmol)和化合物(2R,3R,4R,5S)-6-(((2R,3S,4S,5S)-2,3,4,5,6-五羟基己基)(丙-2-炔-1-基)氨基)己烷-1,2,3,4,5-五醇(0.126g，0.329mmol)在t-BuOH(3.0mL)和水(0.6mL)中的溶液添加CuSO4,5.H2O(0.05g，0.197mmol)和抗坏血酸钠(0.048g，0.246mmol)。然后将反应在室温下搅拌16小时。在反应完成之后，将反应混合物过滤并浓缩以得到粗制化合物。将粗制化合物通过RP制备型HPLC纯化以得到20mg作为灰白色固体的化合物2-(2-(2-(4-((双((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基7-((R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯。
RP制备型HPLC纯化条件：
柱/尺寸：X BRIDGE C18(19×250mm)，5μ流动相A：10MM ABC(pH)水溶液，流动相B：乙腈。
梯度(时间/％B)：0/10、1/10、11/50、12.6/50、12.7/98、16/98、16.1/10、19/10。
流量：16ml/分钟。
实施例36.(R)-4-(1-((2-吗啉代乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3S)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(49)的合成：
步骤1.2-吗啉代乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.5g，0.91mmol)在1,2二氯乙烷(10mL)和三乙胺(0.37g，3.64mmol)中的搅拌溶液添加双(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(0.46g，1.82mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下添加2-吗啉代乙烷-1-醇(0.24g，1.82mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为梯度进行纯化以得到作为灰白色固体的2-吗啉代乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.51g，84.7％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.2-吗啉代乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向2-吗啉代乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.51g，0.77mmol)在1,4二氧六环(5.1mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(5.1mL)中的4.0M氯化氢溶液，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制产物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X-BRIDGE-C18(19*250)5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/5、1/5、8/40、13.5/40、13.51/100、18/100、18.1/5、20.5/5，流量：18ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为灰白色半固体的2-吗啉代乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.25g，57.7％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((2-吗啉代乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3S)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯-酒石酸盐(49)：
将2-吗啉代乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.25g，0.44mmol)和L(+)-酒石酸(0.73g，0.49mmol)在去离子水(2.5mL)中的混合物进行超声处理以得到澄清溶液。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((2-吗啉代乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3S)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.32g)。
实施例37.(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(50)的合成：
步骤1.(R)-(4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.4g，0.73mmol)、2-(2-吗啉代乙氧基)乙烷-1-胺(0.127g、(1-[双(二甲基氨基))亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸盐(0.334g，0.8mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的搅拌溶液缓慢添加N,N-二异丙基乙胺(0.47g，3.65mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为梯度进行纯化以得到作为棕色固体的(R)-(4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.4g，78％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺：
在0℃下，向(R)-(4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.4g，0.566mmol)在1,4二氧六环(4mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(4mL)中的4.0M HCl，并将混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：柱/尺寸：X-select C18(19*250mm)，5um，流动相A：10MM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、10/40、15.51/61.5、15.6/100、18/100、18.1/10、20/10，流量：17ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为无色胶状物的(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(0.16g，46.6％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(50)：
向(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(0.16g，0.26mmol)在二氯甲烷(4mL)与甲醇(1mL)混合物中的搅拌溶液添加L(+)酒石酸(0.039g，0.26mmol)，将混合物在室温下搅拌6小时。将溶剂在减压下蒸发，然后将剩余物用正戊烷(2×5mL)和再溶解的去矿物质水(1.4mL)洗涤。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.175g)。
实施例38.(R)-4-(1-((3-吗啉代丙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(51)的合成：
步骤1.3-吗啉代丙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.3g，0.545mmol)在1,2二氯乙烷(6mL)和三乙胺(0.165g，1.63mmol)中的搅拌溶液添加双(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(0.207g，0.817mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下添加3-吗啉代丙烷-1-醇(0.119g，0.817mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为梯度进行纯化以得到作为灰白色固体的3-吗啉代丙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.21g，57.2％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.3-吗啉代丙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向3-吗啉代丙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.21g，0.31mmol)在1,4二氧六环(2mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(2mL)中的4.0M，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。将获得的粗制物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X select C18(19*250mm)5u，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0.01/25、1/25、9/40、13/40、13.1/100、18/100、18.1/25、20/25，流量：18ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为无色胶状物的3-吗啉代丙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.125g，69.8％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((3-吗啉代丙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(51)：
向3-吗啉代丙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.125g，0.216mmol)在二氯甲烷(4mL)和甲醇(1.0mL)的混合物中的搅拌溶液添加L(+)-酒石酸(0.032g，0.216mmol)，并将混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物浓缩，用正戊烷(2×5mL)洗涤。将所得剩余物溶解在水中并冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((3-吗啉代丙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.077g)。
实施例39.(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(52)的合成：
步骤1.2-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-的搅拌溶液向1-羧酸(0.3g，0.54mmol)在1,2二氯乙烷(6mL)和三乙胺(0.27g，2.7mmol)中的混合物添加双(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(0.28g，1.09mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下添加2-(2-吗啉代乙氧基)乙烷-1-醇(0.191g，1.09mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为梯度进行纯化以得到作为灰白色固体的22-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.32g，83.1％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.2-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向2-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.32g，0.45mmol)在1,4-二氧六环(3.2mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(3.2mL)中的4.0M HCl，并将混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将粗制产物通过反相制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X-bridge-C18(19*250mm)5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/5、1/5、12/75、14/75、14.05/98、16.50/98、16.51/5、19/5，流量：18ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为无色胶状物的2-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.14g，51.1％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(52)：
将2-(2-吗啉代乙氧基)乙基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.14g，0.23mmol)和L(+)-酒石酸(0.038g，0.25mmol)在去矿物质水(1.4mL)中的混合物超声处理以得到澄清溶液。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((2-(2-吗啉代乙氧基)乙氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.172g)。
实施例40.(R)-4-(1-(((5-吗啉代戊基)氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(53)的合成：
步骤1.5-吗啉代戊基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酸(1.0g，1.82mmol)在1,2二氯乙烷(20mL)和三乙胺(1.27g，9.1mmol)中的搅拌溶液添加双(2-氧代-3-唑烷基)次膦酰氯(0.93g，3.64mmol)，并将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下添加5-吗啉代戊烷-1-醇(0.94g，5.45mmol)，并将混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为梯度进行纯化以得到作为无色胶状物的5-吗啉代戊基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.6g，46.9％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.5-吗啉代戊基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向5-吗啉代戊基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.6g，0.85mmol)在1,4-二氧六环(6mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(6mL)中的4.0M HCl，并将混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将粗制产物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X select C18(19*250mm)5um，流动相A：10mM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/20、1/20、12/50、16.5/50、16.6/100、19/100、19.1/20、21/20，流量：18ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为无色胶状物的5-吗啉代戊基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.29g，56.3％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-(((5-吗啉代戊基)氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(53)：
将5-吗啉代戊基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.19g，0.31mmol)和L(+)-酒石酸(0.052g，0.34mmol)在去矿物质水(1.9mL)中的混合物超声2分钟以得到澄清溶液。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-(((5-吗啉代戊基)氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.23g)。
实施例41.(R)-4-(1-((4-吗啉代丁氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(54)的合成：
步骤1.4-吗啉代丁基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.5g，0.91mmol)在1,2二氯乙烷(10mL)和三乙胺(0.37g，3.64mmol)中的搅拌溶液添加双(2-氧代)-3-唑烷基)次膦酰氯(0.35g，1.36mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下添加4-吗啉代丁烷-1-醇(0.22g，1.36mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在完成之后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷溶液中的4％甲醇作为洗脱剂进行纯化以得到作为灰白色固体的4-吗啉代丁基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.45g，71.6％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.4-吗啉代丁基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯：
在0℃下，向4-吗啉代丁基(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.45g，0.65mmol)在1,4二氧六环(4.5mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(4.5mL)中的4.0M HCl，并将混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将粗制产物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X-bridge C 18(19*250mm)5μ，流动相A：10MM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈(org)，梯度(时间/％B)：0/20、2/20、10/45、14/45、14.10/100、16/100、16.10/20、18/20，流量：17ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为无色胶状物的4-吗啉代丁基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.16g，41.7％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((4-吗啉代丁氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(54)：
/>
将5-吗啉代戊基4-吗啉代丁基(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸酯(0.09g，0.15mmol)和L(+)-酒石酸(0.025g，0.167mmol)在去矿物质水(1mL)中的混合物超声处理以得到澄清溶液。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((4-吗啉代丁氧基)羰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.115g)。
实施例42.(R)-4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(55)的合成：
步骤1.(R)-(4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯：
在0℃下，向(R)-7-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-羧酸(0.5g，0.91mmol)、2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-胺盐酸盐(0.18g，0.91)、(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸盐(0.415g，0.1.09mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的搅拌溶液缓慢添加N,N-二异丙基乙胺(0.59g，4.55mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制剩余物通过柱色谱在硅胶(230至400目)上使用在二氯甲烷中的4％甲醇作为洗脱剂进行纯化以得到作为灰白色固体的(R)-(4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.3g，50.2％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.3。
步骤2.(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺：
在0℃下，向(R)-(4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.3g，0.45mmol)在1,4二氧六环(3mL)中的搅拌溶液添加在二氧六环(3mL)中的4.0M HCl，并将混合物在室温下搅拌4小时。在完成之后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗制产物。然后将获得的粗制物通过RP制备型HPLC使用以下条件纯化。柱/尺寸：X-select C 18(19*250mm)5μ，流动相A：10MM碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈(org)，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、10/40、16/63.2、16.1/100、19/100、19.1/10、22/10，流量：17ml/分钟。将所需级分冻干以得到作为灰白色固体的(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(0.09g，35.4％)。TLC体系.MeOH:DCM(1:9)；Rf：0.05。
步骤3.(R)-4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(酒石酸盐)(55)：
/>
向(R)-7-(3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基)-N-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-甲酰胺(0.14g，0.25mmol)在二氯甲烷(4mL)与甲醇(1mL)混合物中的混合物添加L(+)酒石酸(0.038g，0.25mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物浓缩，将剩余物用正戊烷(2×5mL)洗涤并将剩余物溶解于去矿物质水(3mL)。将所得溶液冻干以得到作为灰白色固体的(R)-4-(1-((2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-氧代-1-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-2-铵(2R,3R)-3-羧基-2,3-二羟基丙酸酯(0.155g)。
实施例45：体外和另外的表征数据
DPP4活性测定.使用DPP4活性测定试剂盒(Sigma-Aldrich，MAK088)根据制造商的使用说明获得人DPP4活性测定数据。简言之，将10μL DPP4测定缓冲液转移至低容量384孔板中的每个孔，然后转移溶解在DPP4测定缓冲液中的10μL测试化合物。向每个孔添加5μL包含荧光底物的Master Reaction Mix，所述底物在被酶切割后变为有荧光的。使用Envision多模式读板仪(PerkinElmer)在20分钟时间内以1分钟的时间间隔记录荧光强度测量结果。结果在下表4中示出。
AEC2增殖测定.将原代人AEC2以1,500个细胞/孔的密度平板接种在涂有10ug/mL层黏连蛋白(Life Technologies)的黑色384孔板(Greiner)中的不含EGF、视黄酸和含5％BPE的50μL小气道上皮细胞生长培养基(Lonza)中。然后使用配有pintool头(V&PScientific)的Biomek FX仪器(Beckman Coulter)递送溶解在DMSO中的100nL测试化合物。在37℃下生长96小时之后，将细胞用4％多聚甲醛固定，用PBS洗涤3次，并随后在4℃下针对KI-67阳性(1:1000，Abcam，ab15580)进行免疫染色过夜。在另外的洗涤3次之后，将细胞与第二AlexaFluor缀合的二抗一起在室温下孵育1小时，并随后暴露于10μg/mL Hoechst33342(Life Technologies)。将板密封，并随后在CellInsight CX5 HCS仪器(ThermoFisher)上进行定量的高内涵成像。化合物46的ACE2增殖浓度曲线在图1中示出。
表4：化合物表征和DPP4抑制数据(IC50)。
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实施例46.药代动力学谱分析
为了评估本文公开的化合物的血浆和肺暴露的时间进程，用本公开内容的示例性化合物对啮齿动物进行IT给药。在不同时间点采集血浆和肺样品。通过LCMS测量药物水平。
当对小鼠进行IT给药时，与瑞格列汀相比，化合物46表现出显著更高的血浆和肺暴露谱(图2)。此外，化合物在肺中保留7天，而在48小时之后瑞格列汀水平在肺中非常低。
表5示出了化合物46在小鼠和大鼠中的药代动力学参数。
表5.化合物46在小鼠和大鼠中气管内或吸入递送的PK数据
/>
实施例47.体内效力研究
ALI模型的实验方法
使用来自大肠杆菌(E.coli)I111:B4(Sigma)的LPS来在小鼠中诱导急性肺损伤。选择9至11周龄的体重匹配(19克至22克)的雌性C57BL/6J小鼠以用于ALI模型。
对于经口递送，将DPP4抑制剂溶解在PBS中产生澄清溶液。将载剂对照或DPP4抑制剂基于PK谱选择的一天一次或两次通过经口灌饲以10ml/kg给药。对于气管内递送的DPP4抑制剂，将化合物溶解在PBS中产生澄清溶液。将载剂对照或DPP4抑制剂每隔一天通过22g柔性导管以2ml/kg给药。
在第0天将LPS(1.5mg/kg对于测试经口递送的DPP4抑制剂，以及1.2mg/kg对于测试气管内递送的DPP4抑制剂)或假手术组中的PBS气管内注射到小鼠肺中。从LPS注射之前一天(第-1天)开始对小鼠给予DPP4抑制剂或载剂对照。
在LPS注射之后第3.5天处死所有动物。使用标准方法回收支气管肺泡灌洗液。使用1ml 4％福尔马林以使肺膨胀，随后将其在4％福尔马林中固定24小时，并在70％EtOH中保存直至组织学过程。
对于读出，使用BCA测定对BALF中的总蛋白质含量进行定量；使用H&E染色评估肺炎症和损伤。
博来霉素模型的实验方法
使用博来霉素(Hospira)以诱导小鼠肺纤维化。选择10至12周龄的体重匹配(24克至28克)的雄性C57BL/6J小鼠以用于博来霉素模型。
对于经口递送，将DPP4抑制剂溶解在PBS中产生澄清溶液。将载剂对照或DPP4抑制剂基于PK谱选择的一天一次或两次通过经口灌饲以10ml/kg给药。对于气管内递送的DPP4抑制剂，将化合物溶解在PBS中产生澄清溶液。将载剂对照或DPP4抑制剂每四天通过22g柔性导管以2ml/kg给药。
在第0天将0.5U/kg博来霉素或假手术组中的PBS气管内注射到小鼠肺中。从博来霉素注射之前一天(第-1天)开始对小鼠给予DPP4抑制剂或载剂对照。
在博来霉素注射之后第20天处死所有动物。使用标准方法回收支气管肺泡灌洗液。使用1ml 4％福尔马林以使肺膨胀，随后将其在4％福尔马林中固定24小时，并在70％EtOH中保存直至组织学过程。
对于读出，每天测量体重；使用BCA测定对BALF中的总蛋白质含量进行定量；使用马森三色染色评估肺纤维化。
在小鼠ALI模型中，化合物46显示出每隔一天通过气管内施用的最小有效剂量为0.02mg/kg。在博来霉素诱导的肺纤维化模型中化合物46也有效，显示出包括体重、BALF蛋白质含量、纤维化面积和组织学评分的关键指标的挽救(图3)。在每四天气管内给药方案中最小有效剂量为0.5mg/kg。
在啮齿动物博来霉素模型中与标准治疗药物尼达尼布组合来确定化合物46效力的另外的评估(图4)。如通过在BALF蛋白质含量指标的Bliss独立性计算和纤维化严重程度的Ashcroft评分确定的，化合物46与尼达尼布的组合显示出令人印象深刻和协同的效力。
对小鼠肺进行单细胞RNA测序以了解哪些细胞类型响应于化合物46治疗而增殖。在用化合物(0.5mg/kg IT，在给药之后2天和4天处死动物)处理之后，仅循环和过渡AEC2被诱导以在其他细胞群中增殖，所述细胞群包括其他上皮细胞类型，但不包括活跃扩增的免疫细胞(图5A，B)。此外，数据表明在用化合物处理之后，AEC2出现时间依赖性积累。

Claims (54)

1.式(I)化合物：
其中
每个---代表单键，其在任选地存在时形成稠合环丙基环；
L1A是-NHCH2-或-CH(NH2)-；
X1选自-O-、-S-、-S(O)-、S(O)2-和-NH-；
L1B是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代；
Z1选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
m1是当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1的整数；
n1是选自0、1、2和3的整数；
R1选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代；
R2是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基；
或者
式(II)化合物：
其中
W是CH或N；
o是选自1、2和3的整数；
R3选自C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基和-(CH2CH2O)xH(其中x是选自1、2、3、4和5的整数)；
R4是C2-C8炔基；
R5a、R5b、R5c和R5d独立地选自H、C1-C6烷基、卤素、-NRARB(其中RA和RB独立地选自H和C1-C10烷基)、-C(O)OH、-B(OH)2、-C(O)NRARB、-C(O)ORA和-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2，其中
L2是C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代；
Z2选自H、C6-C10芳基和5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
R6选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代；
R7是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基；
m2是整数，当Z1是H时其为0，并且当Z1不是H时其为1；并且
n2是选自0、1、2和3的整数；
其中R5a、R5b、R5c和R5d中的至少一者不是H；并且
其中当W是CH时，则R5a和R5d不选自-C(O)OH、-C(O)OMe和C(O)OEt；
或者
式(III)化合物：
其中
X3是-O-或-NH-；
L3是键或C2-C12烷基，其中一个或更多个-CH2-任选且独立地被选自-O-、-C(O)-和-NH-的部分替代；
Z3选自H、-N3、C6-C10芳基、5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)和3至14元杂环烷基(其中1至4个环成员独立地选自N、O和S)，
其中杂芳基和杂环烷基任选被1至6个选自卤素、NO2、OH、CN和C1-C6卤代烷基的取代基取代；
m3是整数，当Z3是H或-N3时其为0，并且当Z3不是H或-N3时其为1；
n3是选自0、1、2和3的整数；
R8选自H、C1-C10烷基和-C1-C10烷基-(C6-C10芳基)，并且任选被一至六个-OH取代；
R9是被一至六个-OH取代的C1-C10烷基；
R10是C1-C6卤代烷基；
每个R11独立地选自H、C1-C6烷基和卤素；
o3是选自0、1、2和3的整数；
p3是选自0、1、2和3的整数；
q3是选自0、1、2和3的整数；
或者其可药用盐，
前提是不包括以下化合物：
2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物具有式(I)。
3.根据权利要求2所述的化合物或其可药用的，其中L1A是-NHCH2。
4.根据权利要求2所述的化合物或其可药用的，其中L1A是-CH(NH2)-。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的化合物或其可药用的，其中X1是O。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z1是H。
7.根据权利要求2至5中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z1是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。
8.根据权利要求2至5和7中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z1是苯基。
9.根据权利要求2至5和7中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z1是三唑基。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的化合物或其可药用的，其中n1是1或2。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R1是任选被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R1是C1-C6烷基。
13.根据权利要求7至12中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R2是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
14.根据权利要求7至13中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R2是被三至五个-OH取代的C2-C6烷基。
15.根据权利要求7至14中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R2是：
16.根据权利要求2所述的化合物，其中：
Z1是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n1是1或2；
R1是C1-C10烷基；并且
R2是R2是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
17.根据权利要求1或2所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物选自下表中的一者：
18.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物具有式(II)。
19.根据权利要求18所述的化合物或其可药用的，其中W是CH。
20.根据权利要求18所述的化合物或其可药用的，其中W是N。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R5b和R5d各自是H。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R5a是-C(O)OH或-C(O)ORA。
23.根据权利要求18至21中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R5a是-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2。
24.根据权利要求18至23中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z2是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。
25.根据权利要求18至24中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z2是苯基或三唑基。
26.根据权利要求18至25中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z2是三唑基。
27.根据权利要求18至26中任一项所述的化合物或其可药用的，其中n2是1或2。
28.根据权利要求18至27中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R6是任选被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。
29.根据权利要求18至28中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R6是C1-C6烷基。
30.根据权利要求18至29中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R7是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
31.根据权利要求18至30中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R7是被三至五个-OH取代的C2-C6烷基。
32.根据权利要求18至31中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R7是：
33.根据权利要求18所述的化合物，其中：
R5a、R5b、R5c和R5d中的一者是-C(O)-L2-Z2-[(CH2)n2-NR6R7]m2；
Z2是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n2是1或2；
R6是C1-C10烷基；并且
R7是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
34.根据权利要求1或18所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物选自下表中的一者：
35.根据权利要求1所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物具有式(III)。
36.根据权利要求35所述的化合物或其可药用的，其中X3是O。
37.根据权利要求35所述的化合物或其可药用的，其中X3是-NH-。
38.根据权利要求35至37中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z3是-N3。
39.根据权利要求35至37中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z3是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)。
40.根据权利要求35至39中任一项所述的化合物或其可药用的，其中p3和q3各自是1。
41.根据权利要求35至40中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z3是苯基或三唑基。
42.根据权利要求35至41中任一项所述的化合物或其可药用的，其中Z3是三唑基。
43.根据权利要求35至42中任一项所述的化合物或其可药用的，其中n3是1或2。
44.根据权利要求35至43中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R8是任选被一至六个-OH取代的C1-C10烷基。
45.根据权利要求35至44中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R8是C1-C6烷基。
46.根据权利要求35至45中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R9是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
47.根据权利要求35至46中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R9是被三至五个-OH取代的C2-C6烷基。
48.根据权利要求35至47中任一项所述的化合物或其可药用的，其中R9是：
49.根据权利要求35所述的化合物，其中：
Z3是C6-C10芳基或5至10元杂芳基(其中1至4个杂芳基成员独立地选自N、O和S)；
n3是1或2；
R8是C1-C10烷基；并且
R9是被一至五个-OH取代的C2-C6烷基。
50.根据权利要求1或35所述的化合物或其可药用的，其中所述化合物选自下表中的一者：
/>
51.药物组合物，其包含根据权利要求1至50中任一项所述的化合物或其可药用盐，以及可药用载体。
52.用于在有此需要的对象中选择性提高立方形肺泡2型(AEC2)细胞的增殖，或用于在有此需要的对象中恢复减弱的AEC2细胞增殖的方法，其包括向所述对象施用根据权利要求1至50中任一项所述的化合物或其可药用盐。
53.用于在有此需要的对象中抑制二肽基肽酶IV(DPP4)的方法，其包括向所述对象施用根据权利要求1至50中任一项所述的化合物或其可药用盐。
54.用于在患肺疾病的对象中治疗该肺疾病的方法，其包括向所述对象施用根据权利要求1至50中任一项所述的化合物或其可药用盐。
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