CN117157317A - 用于治疗异常子宫出血的IL-11或IL-11Ra的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及能够结合IL‑11和/或IL‑11RA并抑制或拮抗IL‑11和/或IL‑11RA作用的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，所述异常子宫出血包括大量月经出血、长期出血、出血模式改变、痛经以及潜在疾病平滑肌瘤和子宫内膜异位症，以及所述药剂抑制月经的用途。此外，本发明提供了新的IL‑11抗体。

Description

用于治疗异常子宫出血的IL-11或IL-11Ra的抑制剂
技术领域
本发明提供了用于治疗和/或预防异常子宫出血的白介素-11(IL-11)和/或白介素-11受体α(IL-11RA)的抑制剂和拮抗剂形式的药剂，包括变构抑制剂和拮抗剂。本发明提供了抗体、其片段和衍生物、抗体模拟物、核酸、适体或小分子形式的抑制剂或拮抗剂。本发明还提供了用于发现此类药剂的测定法和筛选技术。
此外，本发明提供了结合人白介素-11的分离的抗体或其抗原结合片段、包含所述分离的抗体或其抗原结合片段的药物组合物和组合，以及所述分离的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防疾病(特别是哺乳动物中的疾病)的药物组合物中的用途，例如但不限于异常子宫出血(AUB)，例如大量月经出血和月经过多(menorrhagia)以及与AUB相关的痛经(dysmenorrhea)。
背景技术
当妇女经历月经失血(MBL)的变化，或者MBL的程度或阴道出血模式不同于年龄匹配的一般女性人群经历的情况时，可以诊断为异常子宫出血(AUB)(国家妇女和儿童健康协作中心(NCCWCH)：National Institute for Clinical Excellence(NICE)guidelines.CG44 heavy menstrual bleeding:full guideline.2007年1月24日)。正常月经发生周期为28±7天，持续4±2天，平均MBL为40±20ml。AUB表现出一系列异常月经出血模式，包括不规则、大量月经出血或长期月经出血或改变的出血模式。AUB可能与排卵或无排卵周期有关。使用的术语是功能失调性子宫出血(DUB)、月经过多(以规律的间隔异常大量月经出血，期限也可能延长)、血崩症(metrorrhagia)(以不规律的间隔子宫出血，特别是在预期的月经期之间)和子宫不规则出血过多(metromenorrhagia)(两者的组合)。AUB是全科医生和妇科医生观察到的最常见的妇科疾病之一。
大量月经出血(HMB)在医学文献中被广泛定义为每个月经期80ml或更多的月经失血(MBL)(Hallberg&Nilsson 1964，Hallberg等人(1966))。在本发明的含义内，HMB被定义为每个周期60ml或更多，例如每个周期60至80ml，特别是每个周期超过80ml的月经失血。根据NICE的说法，HMB在临床目的应被定义为过度月经失血，它干扰了女性的身体，情感，社会和物质生活质量，可以单独发生或与其他症状结合发生。任何干预措施都应以提高生活质量为目标。基于18项流行病学研究，HMB的全球患病率范围为4％至52％(Fraser等人2009)。不同的评估方法和每项研究使用的人口样本可以解释这种广泛的变化。已经发现使用主观评估的研究中的患病率始终较高，而直接测量MBL的研究中的患病率为9-11％。然而，估计30％患有HMB的女性似乎更具代表性(El-Hemaidi等人2007)。HMB在生育年龄谱极端的妇女中更普遍(即青春期女孩和接近或经历更年期的妇女)(Shapley等人(2004))。
潜在的器质性原因可能被诊断，例如良性子宫瘤，特别是子宫颈和子宫内膜息肉和平滑肌瘤，子宫腺肌症和子宫颈和子宫内膜恶性肿瘤。实际上，AUB和HMB的最突出原因是平滑肌瘤，并且相当大比例患有症状性平滑肌瘤的女性经历HMB。
大量月经出血通常是潜在出血性疾病的表现症状，例如血友病(hemophilia)和血管性血友病(von Willebrand’s disease)，血小板疾病/功能障碍，如格兰茨曼血小板机能不全和血小板减少症以及纤溶酶原激活物抑制剂1PAI-1缺乏症，并且可以是女性中唯一的出血症状。尽管对妇女的健康有很大影响，但AUB和HMB的治疗方法仍然是未满足的医疗需求。
平滑肌瘤(也称为子宫肌瘤或肌瘤)是育龄妇女最常见的良性妇科肿瘤。大约5-10％的育龄妇女有子宫肌瘤的症状并需要治疗。平滑肌瘤由生长在子宫壁中或子宫壁周围的肌肉细胞和其他组织组成。它们通常以大量月经出血、疼痛和体积巨大等症状为特征。症状可以从轻微到严重，并有可能影响女性的日常生活。平滑肌瘤是妇科疾病住院的主要原因之一，也是子宫切除术的主要适应症。子宫切除术是适合于不希望保留其生育能力或子宫的妇女的唯一的平滑肌瘤永久性治疗。存在微创手术干预，但与复发风险相关并需要额外干预。手术干预与并发症风险相关。目前的医学治疗选择仅限于短期缓解症状。目前缺乏长期使用现有药物的持续获益证据，并且一些治疗与显著不良事件相关。避免平滑肌瘤的手术或侵入性操作需要有效的长期医疗选择，这仍然是未满足的医疗需求。
痛经，也称为疼痛期(painful period)，或月经痉挛(menstrual cramps)，是月经期间的疼痛。它通常发生在月经开始的时候。症状通常持续不到三天。疼痛通常在盆腔或下腹部。其他症状可能包括背痛、腹泻或恶心。(Osayande&Mehulic(2014))。它是最常见的月经症状，根据研究，在育龄妇女中的患病率在16％至91％之间变化，其中2％-29％为严重疼痛(Ju等人(2014))。痛经通常是由于潜在问题，如平滑肌瘤或子宫内膜异位症(继发性痛经)，后者占所有痛经患者中70％的潜在原因(Janssen等人(2013))。此外，痛经在月经量大、月经不规律或月经起始于12岁之前的女性中更常见(维基百科：https://en.wikipedia.org/wiki/dysmenorrhea)。
前列腺素和其他炎性介质在月经期间由于月经周期结束时子宫内膜细胞的破坏而释放(Lethaby等人(2013))。这些因素导致子宫肌层收缩(Wright&Solange(2003))。当子宫肌肉收缩时，它们限制了对子宫内膜组织的血液供应，子宫内膜组织继而分解并进一步死亡。总之，这些收缩和由此产生的对附近组织的暂时缺氧是造成月经期间经历的疼痛或“痉挛”的原因。
目前的治疗选择是用于缓解原发性痛经疼痛的非甾体类消炎药(NSAID)(Marjoribanks等人(2015))。然而，它们可能具有恶心、消化不良、消化性溃疡和腹泻的副作用。
痛经的其他治疗选择是复方口服避孕药。然而，Wong等人(2009)的系统综述描述了有限的证据表明，含有低剂量或中剂量雌激素的复方口服避孕药可缓解痛经相关的疼痛。仅孕激素的激素治疗可能更有效，因为通常实现了月经的衰减(Power等人(2007)；Sachedina&Todd(2020))。然而，连续的仅孕激素应用非常经常地导致具有不可预测的时间模式的斑点产生，也限制了生活质量和接受度。更好和更被接受的治疗选择是必要的，对于那些对激素治疗犹豫不决的患者也是如此。
子宫内膜异位症是一种慢性妇科疾病，其定义为子宫外存在子宫内膜组织(病变)(例如，在腹膜腔中)，其诱导慢性炎症反应，导致慢性盆腔疼痛和不育(Giudice&Kao(2004))。子宫内膜异位症的患病率约为女性群体的5-10％，估计影响全球1.76亿女性(Adamson等人(2010))。子宫内膜异位症会对女性的生活产生严重影响。对于许多人来说，症状非常严重，以至于她们平均每年卧床18天(Kjerulff等人(1996))。病变是激素反应性的，可能在月经期间大出血。
患有子宫内膜异位症的女性可能患有慢性、周期性盆腔疼痛(痛经)和/或非周期性盆腔疼痛，生育能力受损，并且在性交期间经历疼痛(性交困难)。其中，痛经通常被报道为最常见的症状(Sinaii等人(2008))。其他症状可能包括胃肠道紊乱、泌尿问题和疲劳。关于子宫内膜异位症如何发生的最普遍接受的理论是，在月经期间，子宫内膜组织通过输卵管脱落并植入腹膜表面(Sampson(1927)，Giudice(2010))。在接受腹腔镜诊断之前，患有子宫内膜异位症的女性通常用非甾体消炎药(NSAID)、阿片类药物和/或凭经验用复方口服避孕药(COC)或孕激素治疗。COC的使用是超适应症(off-label)的，而一些孕激素已在一些国家获得用于该适应症的许可。其他基于激素的疗法涉及促性腺激素释放激素(GnRH)类似物或拮抗剂。虽然基于激素的治疗可以减弱病变生长，但它们通常具有有限的功效或潜在的副作用(DiVasta&Laufer(2013))。对于安全性问题，没有GnRH类似物或GnRH拮抗剂长期连续治疗的选择，也没有目前使用的疼痛抑制剂，例如布洛芬。手术切除病变是另一种选择；然而，症状通常两年内在高达75％的妇女中复发(Olive(2002))。避免手术或侵入性手术治疗子宫内膜异位症需要一种有效的长期医疗选择，这仍然是一个未满足的医疗需求。
对于治疗异常子宫出血(如大量月经出血、月经过多和痛经)和潜在疾病(如平滑肌瘤和子宫内膜异位症)存在未满足的医疗需求。本发明的目的是提供能够治疗上述疾病的手段。
白细胞介素-11(IL-11)和IL-11RA信号转导的生理作用仍有争议。IL-11(白细胞介素11UniProtKB-P20809)也称为AGIF，被描述为基质细胞衍生的细胞因子，其属于多效和冗余细胞因子家族，其在其高亲和力多亚基受体复合物(细胞因子的gp130家族)中使用白细胞介素6信号转导子(IL6ST)/糖蛋白130(gp130)转导亚基。IL-11细胞因子显示出刺激产生免疫球蛋白的B细胞的T细胞依赖性发育。还发现其支持造血干细胞和巨核细胞祖细胞的增殖，并诱导巨核细胞成熟，导致血小板产生增加(Paul等人(1990))。IL-11还促进肝细胞响应于肝损伤的增殖。与其受体IL-11RA或sIL-11RA和gp130的结合激活促进细胞增殖的信号级联(Harmegnies等人(2003年))。信号传导导致细胞内蛋白激酶的活化和“信号转导子和转录激活子3”(STAT3)的磷酸化。对于IL11基因，已经发现了编码不同同种型的可变剪接转录变体。
IL-11RA(白细胞介素-11受体α(A)，UniProtKB-Q14626)也称为CRSDA，是白细胞介素-11的受体，其是造血细胞因子受体家族的成员。在结构上，该特定受体类似于睫状神经营养因子受体，因为两者都含有由免疫球蛋白样结构域和细胞因子受体样结构域组成的2-结构域结构的胞外区。白细胞介素6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、制瘤素M(OSM)、睫状神经营养因子(CNTF)、IL-11和心肌营养素1(CT1)的受体系统可以利用IL6ST启动信号传递。已发现该基因存在多个选择性剪接转录物变体。在啮齿动物中存在人IL-11RA的两种直系同源物，IL-11RA1和IL-11RA2。膜结合的IL-11RA受体可以被切割，导致可溶性同种型sIL-11RA的释放。与膜结合的IL-11RA/IL-11/IL6ST的经典信号传导(顺式信号传导)相反，可溶性IL-11RA可以介导反式信号传导：在IL-11与受体结合后，IL-11/sIL-11RA复合物与表达膜结合的IL6ST的细胞结合，并且IL-11R/sIL-11RA/IL 6ST复合物可以启动与经典膜结合的IL-11RA相当的细胞内信号传导。对于反式信号传导，在靶细胞中不需要IL-11RA的表达(Lokau等人,2017)。
Cork等人2002描述了IL-11在子宫内膜中由基质细胞和上皮细胞产生，并且基质细胞的产生在蜕膜化期间增加。此外，IL-11RA存在于人子宫内膜中，在整个月经周期中受体表达几乎没有变化。专利申请WO9603143A1公开了出血性疾病(如血管性血友病)、凝血疾病或具有无法解释的出血时间延长的患者应当用IL-11细胞因子治疗。Ragni等人2011年报道了在患有轻度血管性血友病的女性中进行的临床试验，其使用人重组IL-11治疗。治疗降低了71％的受试者的月经出血严重程度。因此，现有技术描述了通过应用IL-11可以减少月经出血。然而，在现有技术中没有证据表明通过拮抗或抑制IL-11或IL-11RA来治疗异常子宫出血或月经。
已经显示，在几种其他去调节因子中，IL-11的表达在平滑肌瘤组织中上调(Luo等人(2005))，并且其表达可能是平滑肌瘤的相关诊断标志物或用于监测平滑肌瘤治疗的诊断标志物(WO2005/098041A2)。然而，文献中没有迹象表明IL-11和/或IL-11RA的抑制或拮抗可能是一种治疗选择。
对于子宫内膜异位症，关于IL-11和/或IL-11RA的表达的数据是有争议的，一项研究描述了与可生育妇女相比，患有子宫内膜异位症的不孕妇女的子宫内膜中IL-11和IL-11RA的失调(Dimitriadis等人(2006))。然而，这一发现是关于不孕症发病机理的讨论，而非子宫内膜异位症本身。此外，该发现不能在单独的独立研究中证实(Mikolajczyk等人(2006))。另一项研究描述了子宫内膜异位症妇女和对照组妇女腹腔液中分泌的IL-11；然而，显示出与子宫内膜异位症或子宫内膜异位症病期没有相关性(Gazvani等人(2000))。此外，Gazvani等人指出没有证据表明IL-11在盆腔子宫内膜异位症发病机制中的作用。
IL-11的功能封闭抗体或拮抗IL-11的重组蛋白，例如来源于IL-11RA的受体-抗体(receptor-bodies)已经在科学和专利文献中描述，然而，它们并非用于治疗和/或预防异常子宫出血，如大量月经出血、长期出血或出血模式改变以及痛经，以及潜在疾病平滑肌瘤和子宫内膜异位症和月经。
作为IL-11信号传导拮抗剂起作用的抑制性受体-抗体的实例描述于专利申请WO9959608中。作为IL-11和IL-11信号传导的拮抗剂起作用的抑制性抗体的实例描述于专利申请WO2018109170、WO2018109174、WO2017103108、WO2019238882和WO2019238884中。人和小鼠IL-11的功能封闭抗体由商业供应商提供，例如，来自R&D Systems,Inc的MAB 218和Mab 418。
发明内容
本发明的一个方面是通过抑制白细胞介素11(IL-11)或其受体(IL-11RA)的作用和信号传导，非激素治疗、预防或缓解患有或不患有平滑肌瘤的妇女的异常子宫出血，如大量月经出血、月经过多和痛经。本发明的另一方面是平滑肌瘤的非激素治疗、预防或缓解。本发明的另一方面是子宫内膜异位症的非激素治疗、预防或缓解。本发明的另一方面是痛经的非激素治疗、预防或缓解。本发明的另一方面是月经本身的非激素预防或缓解。
此外，本发明涉及新的抗体或其抗原结合抗体片段，其对人、小鼠、大鼠和/或食蟹猴(marcaca)IL-11蛋白表现出高亲和力并抑制IL-11介导的信号传导。本发明的一些IL-11抗体或其抗原结合抗体片段抑制IL-11与IL-11Ra的相互作用和IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成。本发明的其他抗体或其抗原结合抗体片段抑制IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成，并且不抑制IL-11与IL-11Ra的相互作用。此外，本发明涉及新的双特异性抗体或其抗原结合抗体片段，其对人、小鼠、大鼠和/或食蟹猴IL-11蛋白表现出高亲和力并抑制IL-11介导的信号传导。此外，本发明的抗体或其抗原结合抗体片段不结合IL-2Ra。
本发明的高度优选的IL-11抗体描述于表9和10中，并通过其结构特征表征。
本发明还涉及编码本发明的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、表达本发明的抗体或其抗原结合片段的细胞、用于产生本发明的抗体或其抗原结合片段的方法。本发明还涉及分离的核酸序列，其各自可编码前述抗体或其抗原结合片段。本发明的核酸适用于抗体或抗原结合抗体片段的重组产生。因此，本发明还涉及含有本发明的核酸序列的载体和宿主细胞。
本发明的抗体或其抗原结合抗体片段适用于治疗、预防或缓解患有或不患有平滑肌瘤的妇女的异常子宫出血，如大量月经出血、月经过多和痛经，治疗、预防或缓解平滑肌瘤和子宫内膜异位症。此外，本发明的抗体或其抗原结合抗体片段适用于预防或缓解月经。
本发明的组合物可用于治疗或预防应用。因此，本发明包括包含本发明的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
上述和进一步的目的通过根据本发明的独立权利要求的方法和手段来满足。从属权利要求涉及具体实施方案。
具体实施方式
应当理解，本发明不限于所描述的装置或组合物的特定组成部分或结构特征或所描述的方法的工艺步骤，因为所述装置和方法可以变化。还应当理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在限制。在相互不同的从属权利要求中记载某些方法的纯粹事实并不指示这些方法的组合不能被有利地使用。权利要求中的任何附图标记不应被解释为限制范围。此外，应当理解，在给出由数值界定的参数范围的情况下，该范围被认为包括这些限制值。
还应当理解，本文公开的实施方案不意味着被理解为彼此不相关的单独实施方案。一个实施方案讨论的特征意在还结合本文所示的其他实施方案来公开。在一种情况下，如果具体特征未在一个实施方案中而是在另一个实施方案中公开，则技术人员将理解，这不一定意味着所述特征不意味着在所述另一个实施方案中公开。本领域技术人员将理解，本申请的要点是也针对其他实施方案公开所述特征，但这仅仅是为了清楚的目的并且保持本说明书的长度可控。还应当理解，本文中提及的现有技术文献的内容通过引用纳入本文，例如为了实现目的，即例如，当讨论了一种方法，在所述现有技术文献中描述了该方法的细节。这种方法有助于保持本说明书的长度可控。
定义
除非另有定义，否则说明书、附图和权利要求书中使用的所有科学和技术术语具有其本领域普通技术人员通常理解的普通含义。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过全文引用纳入本文。在冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。如果通过引用纳入的两个或更多个文献包括相对于彼此冲突和/或不一致的公开内容，则以具有较晚生效日期的文献为准。材料、方法和实施例仅是说明性的，并不旨在限制。
除非另有说明，否则本文件(包括说明书和权利要求书)中使用的以下术语具有以下给出的定义。
术语“包含”、“包括”、“含有”、“具有”等应被广泛地或开放式地理解，而不受限制。当在说明书中使用时，该术语包括“由……组成”。
单数形式如“一个”、“一种”或“所述”包括复数指代，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“单克隆抗体”包括单个单克隆抗体以及相同或不同的多种单克隆抗体。类似地，提及“细胞”包括单个细胞以及多个细胞。
如本文所用的表述“约”或“～”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内的值，其将部分取决于如何测量或确定该值，即测量系统的局限性。例如，根据本领域的实践，“约”可以意指在1个或多于1个标准偏差内。术语“约”还用于表示所讨论的量或值可以是指定的值或近似相同的一些其他值。该短语旨在传达类似值促进如本文所述的等效结果或效果。在此上下文中，“约”可以指高于和/或低于高达10％的范围。无论何时术语“约”被指定用于某个试验或实施方案，该定义适用于特定上下文。
如本文所用的术语“氨基酸”或“氨基酸残基”通常是指天然存在的氨基酸。单字母代码在本文中用于指代相应的氨基酸。如本文所用，“带电荷的氨基酸”是带负电荷或带正电荷的氨基酸。“带负电荷的氨基酸”是天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。“带正电荷的氨基酸”是精氨酸(R)、赖氨酸(K)和组氨酸(H)。“极性氨基酸”是作为供体或受体形成氢键的所有氨基酸。这些都是带电荷的氨基酸，以及天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)和半胱氨酸(C)。“极性不带电氨基酸”是天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)和半胱氨酸(C)。“两亲氨基酸”是色氨酸(W)、酪氨酸(Y)和甲硫氨酸(M)。“芳香族氨基酸”是苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。“疏水性氨基酸”是甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、甲硫氨酸(M)和半胱氨酸。“小氨基酸”是甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、脯氨酸(P)、苏氨酸(T)、天冬氨酸(D)和天冬酰胺(N)。
如本文所用，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，并且是指由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽必须含有至少两个氨基酸，并且对氨基酸的最大数目没有限制。多肽包括包含通过肽键彼此连接的两个或多个氨基酸的任何肽或蛋白质。如本文所用，该术语是指短链(其在本领域中通常也被称为例如肽、寡肽和寡聚体)和长链(其在本领域中通常被称为蛋白质，其存在许多类型)。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同二聚体、异二聚体、多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽或其组合。
当提及广泛提及来自某些物种(如小鼠)的基因或蛋白质时，如果没有另外说明或明显不相容，则应同样意指来自人的类似物。这特别适用于生物标志物的情况。
术语“分离的”当应用于核酸、多肽、蛋白质或抗体时，表示核酸、多肽、蛋白质或抗体基本上不含在天然状态下与其缔合的其他细胞组分。其优选处于均质状态。其可以是干燥物或水溶液。纯度和均一性通常使用分析化学技术(如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法)测定。作为制剂中存在的主要种类的蛋白质、多肽或抗体是基本上纯化的。特别地，分离的基因与位于基因侧翼并编码除目的基因之外的蛋白质的开放阅读框分离。然而，分离的多肽可以被固定，例如在珠粒或颗粒上，例如通过合适的连接体。
术语“纯化的”表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中基本上产生一个条带。特别地，这意味着核酸或蛋白质是至少85％纯的，更优选至少95％纯的，并且最优选至少99％纯的。
如本文所用，关于例如合成核酸分子或合成基因或合成肽的术语“合成的”是指通过重组方法和/或通过化学合成方法产生的核酸分子或多肽分子。如本文所用，通过使用重组DNA方法的重组方法产生是指使用众所周知的分子生物学方法来表达由克隆DNA编码的蛋白质。
“翻译后修饰”(PTM)是指肽或蛋白质的共价修饰，其在天然条件下的蛋白质生物合成后引入。该术语包括但不限于糖基化、磷酸化、酰化、腺苷酸化、法尼基化、泛素化和硫酸化。翻译后修饰可影响肽或蛋白质的活性。
“序列同一性”或“百分比同一性”是描述查询序列与靶序列的相似度，更确切而言每个序列中有多少字符在比对后是相同的。计算序列同一性最流行的工具是BLAST(基本局部比对搜索工具，https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/)，其进行序列对之间的比较，搜索局部相似性区域。合适的比对方法是本领域已知的，例如，Needleman-Wunsch算法用于全局-全局比对，使用BLOSUM62矩阵，空位开放罚分为11，空位延伸罚分为1。之后，可以对比对的相同残基对进行计数，然后除以比对的总长度(包括内部和外部的空位)以得到同一性百分比值。
对于“百分比相似性”或“序列相似性”值，可以使用与百分比同一性值相同的方法，除了计数的是具有非负(即≥0)BLOSUM62值的比对残基对，而不是相同残基对。
“同种型对照”是不结合靶标但具有与识别靶标的参考抗体或片段相同的类别和类型的抗体或片段。
如果抗体或片段结合来自两种或多种不同物种的抗原，例如，KD值为1.0E-07M或更小，更优选小于1.0E-08M，甚至更优选小于1.0E-09M，甚至更优选小于1.0E-10M，则抗体或片段被称为“交叉反应性的”。
本文关于抗体使用的术语“特异性结合”、“特异性针对”或“特异性识别”是指识别特异性抗原但基本上不识别或结合样品中其他分子的抗体：以基本非特异性结合为特征的抗体将缺乏治疗适用性，使得这些实施方案被排除。然而，如本领域已知的，抗体或结合剂的特异性结合不一定排除抗体或结合剂与其他抗原/靶分子结合。特异性结合来自一个物种的抗原的抗体也可以结合来自一个或多个其他物种的抗原。这种跨物种反应性本身不改变抗体作为特异性的分类。
在一些情况下，术语“特异性结合”或“特异性结合”可用于指抗体、蛋白质或肽与第二化学物质的相互作用，意指该相互作用取决于化学物质上特定结构(例如抗原决定簇或表位)的存在；例如抗体识别并结合特定的蛋白质结构，而不是一般的蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离的，未标记的A)的分子的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。
术语“脱靶结合”是指抗体结合不同于预期靶标的单个蛋白质的能力，例如靶标蛋白质家族的蛋白质。脱靶结合可以使用本领域已知的商业测定法(例如Retrogenix脱靶分析测定法)来评估。简而言之，在含有单独表达几千个人膜蛋白和分泌蛋白的HEK293细胞的微阵列上测试抗体。抗体与潜在脱靶的结合必须使用过表达潜在脱靶的细胞通过FACS确认。
术语“亲和力”是本领域的术语，其描述结合剂、抗体或抗体片段与靶标之间的结合强度。抗体及其片段对靶标的“亲和力”可以使用本领域周知的或本文所述的技术来确定，例如通过ELISA、等温滴定量热法(ITC)、表面等离子体共振(SPR)、流式细胞术或荧光偏振测定。优选地，亲和力以解离常数KD提供。
“解离常数”或“KD”或“KD”具有摩尔单位[M]，并且对应于在平衡时一半靶蛋白被占据的结合剂/抗体的浓度。解离常数越小，结合剂或抗体与其靶标之间的亲和力越高。
“半数最大有效浓度”或“EC50”或“EC50”是指在指定的孵育时间后诱导基线和最大值之间的半数响应的药物、抗体、片段、缀合物或分子的浓度。因此，在抗体结合的情况下，EC50反映了半数最大结合所需的抗体浓度。如果拐点可以通过剂量-响应曲线(描述了施用的药物、抗体、片段、缀合物或分子浓度与信号之间的关系)的数学建模(例如，非线性回归)确定，则可以确定EC50。例如，如果剂量-响应曲线遵循S形曲线，则可以确定EC50。当反应为抑制时，EC50称为半数最大抑制浓度(IC50)。
术语“抗体”(Ab)是指特异性结合特定抗原或与特定抗原免疫反应的免疫球蛋白分子(例如但不限于人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgD、IgE、IgA1、IgA2、小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3、IgA、IgD、IgE或IgM、大鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgA、IgD、IgE或IgM、兔IgA1、IgA2、IgA3、IgE、IgG、IgM、山羊IgA、IgE、IgG1、IgG2、IgE、IgM或鸡IgY)。抗体或抗体片段在轻链和重链可变结构域两者中包含互补决定区(CDR)，也称为高变区。可变结构区更高度保守的部分被称为框架(FR)。如本领域已知的，描述抗体高变区的氨基酸位置/边界可以变化，这取决于上下文和本领域已知的各种定义。如本文所用，免疫球蛋白氨基酸残基的编号根据Kabat等人的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统进行。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区。每条链中的三个CDR通过FR区紧密结合在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于抗体的抗原结合位点的形成，参见Kabat,E.A.,等人"Sequences ofProteins of Immunological Interest(Natl.Inst.Health,Bethesda,MD),GPO Publ."No165-462(1987)。除非另有明确说明，否则如本文所用的术语抗体还指抗体片段。取决于相应的上下文，术语抗体还可以指具有免疫球蛋白样功能的任何蛋白质结合分子。
术语“CDR”是指抗体的互补决定区。如本领域已知的，互补决定区(CDR)是抗体和T细胞受体中可变链的一部分。一组CDR构成互补位。CDR对于抗原特异性的多样性至关重要。通常有六个CDR可以共同与抗原接触。轻链的CDR是LCDR1、LCDR2和LCDR3。重链的CDR被称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。HCDR3是最可变的互补决定区(参见例如Chothia,Cyrus和ArthurM.Lesk."Canonical structures for the hypervariable regions ofimmunoglobulins."Journal of molecular biology196.4(1987):901-917.；Kabat,E.A.,等人"Sequences of proteins of immunological interest.Bethesda,MD:USDepartmentof Health and Human Services."Public Health Service,National Institutes ofHealth(1991):103-511.)。
“恒定区”是指赋予效应子功能的抗体分子部分。重链恒定区可以选自五种同种型中的任一种：alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(g)或mu(μ)。
如本文所用，术语“Fc结构域”、“Fc区”或“Fc部分”是指抗体重链的C末端区，其含有恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。例如，人IgG重链Fc区可以从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。
根据本发明的抗体或结合片段可以被修饰以改变至少一种恒定区介导的生物效应子功能。例如，在一些实施方案中，抗体可以被修饰以相对于未修饰的抗体降低或增强至少一种恒定区介导的生物效应子功能，例如，降低或增强与Fc受体(FcγR)的结合。FcγR结合可降低，例如，通过在FcγR相互作用所必需的特定区域突变抗体的免疫球蛋白恒定区片段(参见例如Canfield,Stephen M.和Sherie L.Morrison."The binding affinity ofhuman IgG for its high affinity Fc receptor is determined by multiple aminoacids in the CH2 domain and is modulated by the hinge region."The Journal ofexperimental medicine 173.6(1991):1483-1491；and Lund,John,等人"Human Fc gammaRI and Fc gamma RII interact with distinct but overlapping sites on humanIgG."The Journal of Immunology 147.8(1991):2657-2662.)。FcγR结合可增强，例如通过去岩藻糖基化。降低FcγR结合还可以降低依赖于FcγR相互作用的其他效应子功能，例如调理作用、吞噬作用和抗原依赖性细胞毒性(“ADCC”)。
此外，解决Fc与FcRn的相互作用允许在体内调节抗体的半衰期。通过例如引入突变H435A取消相互作用，其导致半衰期极短，因为抗体不再被FcRn再循环保护以免于溶酶体降解。在根据所有方面的一些优选的实施方案中，根据本发明的抗体包含突变H435A或已经以其他方式工程化以缩短半衰期。
术语“抗IL-11抗体”或“IL-11抗体”和“结合IL-11的抗体”是指能够以足够的亲和力结合IL-11的抗体，使得该抗体可用作靶向IL-11的诊断剂和/或治疗剂。根据本发明，抗体优选具有小于1.0E-08M(作为KD值)、更优选小于1.0E-09M、甚至更优选小于5.0E-10M、甚至更优选小于1.0E-10M、甚至更优选小于5.0E-11M、甚至更优选小于2.5E-11M、甚至更优选小于1.0E-11M的靶亲和力。KD值可以优选地通过表面等离子体共振光谱法的方式测定，例如如本文其他位置所述。在某些实施方案中，IL-11抗体结合在来自不同物种的IL-11中保守的IL-11表位。
术语“抗IL-11Ra抗体”或“IL-11Ra抗体”和“结合IL-11Ra的抗体”是指能够以足够的亲和力结合IL-11Ra的抗体，使得该抗体可用作靶向IL-11Ra的诊断剂和/或治疗剂。根据本发明，抗体优选具有至少1.0E-07M(作为KD值)，更优选至少1.0E-08M，甚至更优选在1.0E-09M至1.0E-10M范围内的靶亲和力。KD值可以优选地通过表面等离子体共振光谱法或ELISA的方式测定。
如本文所用的抗体的“片段”需要基本上保留全长抗体的所需亲和力。因此，例如抗人IL-11抗体的合适的片段将保留例如与人IL-11受体结合的能力。抗体的片段包含全长抗体的一部分，通常是其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、单链抗体分子、双抗体和结构域抗体，参见Holt,Lucy J.,等人"Domainantibodies:proteins for therapy."Trends in biotechnology 21.11(2003):484-490。
“Fab片段”含有轻链的恒定区和重链的第一恒定区(CH2)。
“Fab’片段”与Fab片段的不同之处在于在重链CH2结构域的羧基末端添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。
“F(ab’)片段”通过切割F(ab’)2胃蛋白酶消化产物的铰链半胱氨酸处的二硫键产生。抗体片段另外的化学偶联是本领域普通技术人员已知的。Fab和F(ab’)2片段缺乏完整抗体的Fc片段，可更快地从动物循环中清除，并且可能具有比完整抗体更少的非特异性组织结合，参见例如Wahl,Richard L.,Charles W.Parker和Gordon W.Philpott."Improvedradioimaging and tumor localization with monoclonal F(ab')2."Journal ofnuclear medicine:official publication,Society of Nuclear Medicine 24.4(1983):316-325。
“Fv片段”是含有完整靶识别和结合位点的抗体的最小片段。该区域由紧密非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体(VH-VL二聚体)组成。正是在这种构型中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以限定VH-VL二聚体表面上的抗原结合位点。通常，六个CDR赋予抗体抗原结合特异性。然而，在一些情况下，即使单个可变结构域(或仅包含三个对靶标特异性的CDR的Fv的一半)也可以具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段在单个多肽链中包含抗体的VH和VL结构域。通常，Fv多肽还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。
“双特异性抗体”是对相同或不同抗原上的至少两个不同表位具有结合特异性的单克隆抗体。在本公开内容中，结合特异性可以针对例如IL-11的两种不同表位。还可能的是，结合特异性之一可以针对例如IL-11，另一个可以针对任何其他抗原，例如但不限于细胞表面蛋白、受体、受体亚基、组织特异性抗原、病毒衍生蛋白、病毒编码的包膜蛋白、细菌衍生蛋白或细菌表面蛋白。
“衍生化抗体”通常通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、硫酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、连接至细胞配体或其他蛋白质来修饰。多种化学修饰中的任一种可以通过已知技术进行，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，衍生物可含有一种或多种非天然氨基酸，例如使用ambrx技术，参见例如Wolfson,Wendy."Amber codon flashing ambrx augments proteins withunnatural amino acids."Chemistry&biology 13.10(2006):1011-1012。根据本发明的抗体可以是衍生的，例如糖基化或硫酸化。
如本文所用，术语“衍生物”应指在结构上不同于一般抗体概念，但仍与其具有一些结构关系的蛋白质构建体，例如，scFv、Fab和/或F(ab)2，以及双特异性、三特异性或更高特异性的抗体构建体，并且进一步保留IL-11或IL-11RA结合能力。
本领域技术人员已知的其他抗体衍生物是双抗体、骆驼抗体、纳米抗体、结构域抗体、具有由scFv组成的两条链的二价同二聚体、IgA(由J链和分泌组分连接的两个IgG结构)、鲨鱼抗体、由新世界灵长类动物框架加上非新世界灵长类动物CDR组成的抗体、包含CH3+VL+VH的二聚化构建体和抗体缀合物(例如，与毒素、细胞因子、放射性同位素或标记物连接的抗体或片段或衍生物)。这些类型在文献中有详细的描述，并且可以由技术人员基于本公开内容使用，同时增加进一步的创造性活动。
如本文所用，术语“抗体模拟物”涉及有机分子，最常见的是特异性结合靶蛋白的蛋白质，类似于抗体，但在结构上与抗体无关。抗体模拟物通常是具有约3至20kDa摩尔质量的人工肽或蛋白质。该定义尤其涵盖亲和体分子、affilins、affimers、affitins、α抗体、anticalins、高亲和性多聚体、DARPin、fynomers、kunitz结构域肽、单抗体(monobodies)和纳米CLAMP。
“单克隆抗体”是结合特定抗原的抗体的基本同质群体。单克隆免疫球蛋白可以通过本领域技术人员周知的方法获得(参见例如Georges和Cesar Milstein."Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefinedspecificity."nature 256.5517(1975):495-497.和美国专利号4,376,110)。具有特异性结合亲和力的免疫球蛋白或免疫球蛋白片段可以从原核生物或真核生物中分离、富集或纯化。本领域技术人员已知的常规方法能够在原核生物和真核生物中产生免疫球蛋白或免疫球蛋白片段和具有免疫球蛋白样功能的蛋白质结合分子。根据本发明的抗体优选是单克隆的。
“人源化抗体”含有衍生自非人物种(例如小鼠)的CDR区，其例如已与任何必要的框架回复突变一同移植到人序列衍生的V区中。因此，在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区残基被来自非人物种(供体抗体)的高变区残基替换，所述非人物种如具有所需特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物。参见例如美国专利号5,225,539；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,859,205，各自通过引用纳入本文。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架残基被相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。进行所述修饰以进一步改进抗体性能(例如，以获得期望的亲和力)。通常，人源化抗体将包含基本上所有可变结构域的至少一个，并且通常为两个，其中所有或基本上所有的高变区对应于非人免疫球蛋白的高变区，并且所有或基本上所有的框架区是人免疫球蛋白序列的框架区。人源化抗体任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。进一步细节参见Peter T.,等人"Replacing the complementarity-determining regions in a humanantibody with those from a mouse."Nature 321.6069(1986):522-525.；Riechmann,Lutz,等人"Reshaping human antibodies for therapy."Nature 332.6162(1988):323-327.；和Presta,Leonard G."Antibody engineering."Current Opinion in StructuralBiology 2.4(1992):593-596，各自通过引用纳入本文。
全人抗体(人抗体)包含人源CDR，即人源的CDR。优选地，根据本发明的全人抗体是与最接近的人VH种系基因具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％序列同一性的抗体(例如，从推荐列表中选取序列并在IMGT/Domain-gap-align中分析)。
如通常命名系统(如直到2017年有效的INN物种子系统)所接受的，与基于IMGT数据库(http://www.imgt.org,2019年11月29日)确定的最接近的人种系参考相比，全人抗体可以包含少量的种系偏差。例如，与最接近的人种系参照相比，根据本发明的全人抗体可以在CDR中包含多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14或15个种系偏差。全人抗体可以通过克隆技术结合细胞富集或永生化步骤由人源B细胞开发。然而，临床应用中的大多数全人抗体是从人IgG基因座转基因的免疫小鼠或通过噬菌体展示从复杂的组合文库中分离的(Brüggemann,Marianne,等人"Human antibody production in transgenic animals."Archivum immunologiae et therapiae experimentalis 63.2(2015):101-108.；Carter,Paul J."Potent antibody therapeutics by design."Nature reviews immunology 6.5(2006):343-357.；Frenzel,André,Thomas Schirrmann和Michael Hust."Phage display-derived human antibodies in clinical development and therapy."MAbs.Vol.8.No.7.Taylor&Francis,2016.；Nelson,Aaron L.,Eugen Dhimolea和JaniceM.Reichert."Development trends for human monoclonal antibody therapeutics."Nature reviews drug discovery 9.10(2010):767-774.)。
几种技术可用于产生全人抗体或产生包含人源CDR的抗体(参见：WO2008112640)。Cambridge Antibody Technologies(CAT)和Dyax已经从免疫人群中分离的外周B细胞中获得抗体cDNA序列，并且设计了用于鉴定具有特定特异性的人可变区序列的噬菌体展示文库。简言之，抗体可变区序列与M13噬菌体的基因III或基因VIII结构融合。这些抗体可变区序列在携带相应序列的噬菌体的尖端表达为Fab或单链Fv(scFv)结构。通过使用不同水平的抗原结合条件(严格性)的多轮淘选过程，可以筛选和分离表达对目标抗原特异性的Fab或scFv结构的噬菌体。然后，可以使用标准测序程序阐明所选噬菌体的抗体可变区cDNA序列。然后，这些序列可以用于使用已建立的抗体工程技术重建具有所需同种型的全抗体。根据该方法构建的抗体被认为是全人抗体(包括CDR)。为了提高所选抗体的免疫反应性(抗原结合亲和力和特异性)，可以引入体外成熟过程，包括不同重链和轻链的组合缔合、重链和轻链CDR3处的缺失/添加/突变(以模拟V-J和V-D-J重组)和随机突变(以模拟体细胞超突变)。通过该方法产生的“全人”抗体的实例是抗肿瘤坏死因子α抗体Humira(阿达木单抗)。
术语“多核苷酸”是指重组或合成产生的聚合脱氧核糖核苷酸或其类似物，或修饰的多核苷酸。该术语包括双链和单链DNA或RNA。多核苷酸可以被整合，例如，转化为微环、质粒、粘粒、微型染色体或人工染色体。多核苷酸可以被分离或整合到另一个核酸分子中，例如在真核宿主细胞的表达载体或染色体中。
如本文所用，术语“载体”是指能够繁殖与其连接的核酸分子的核酸分子。该术语还包括质粒(非病毒)和病毒载体。某些载体能够指导与其可操作地连接的核酸或多核苷酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。用于真核应用的表达载体可以通过将编码至少一种目标蛋白(POI)的多核苷酸序列插入合适的载体骨架中来构建。载体骨架可以包含确保载体维持所必需的元件，以及如果需要的话提供宿主内的扩增所必需的元件。对于病毒载体，例如，除了慢病毒或逆转录病毒载体之外，可能需要另外的病毒特异性元件，例如结构元件或其他元件，并且这些元件是本领域周知的。这些元件可以例如以顺式(在同一质粒上)或反式(在单独的质粒上)提供。病毒载体可能需要辅助病毒或包装系用于大规模转染。载体可以包含另外的元件，例如，增强子元件(例如，病毒的、真核的)、内含子和用于在哺乳动物细胞中复制的质粒复制的病毒起点。根据本发明，表达载体通常具有驱动POI表达的启动子序列。POI和/或选择性标志物蛋白的表达可以是组成型的或受调控的(例如，可通过添加或除去小分子诱导剂诱导)。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调控序列包括指导POI在哺乳动物细胞中高水平表达的病毒元件，如源自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)，腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子Ad LP)或多瘤病毒的调控元件、启动子和/或增强子。为了进一步描述病毒调控元件及其序列，参见例如U.S.5,168,062、U.S.4,510,245和U.S.4,968,615。
“宿主细胞”是用于接收、维持、复制和扩增载体的细胞。宿主细胞也可用于表达多肽，例如，由载体编码的抗体或其片段。当宿主细胞分裂时，载体中包含的核酸被复制，从而扩增核酸。优选的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如CHO细胞或HEK细胞。
“多肽的接头”可以通过酰胺键或任何其他功能残基连接。多肽的接头可以连接在多肽的N末端或C末端，或者可以通过反应性官能团或氨基酸侧链连接。多肽可偶联至例如生物素、蛋白质(如人血清白蛋白(HSA))、载体蛋白(如钥孔血蓝蛋白(KLH))，卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白、荧光染料、短氨基酸序列(如Flag标签、HA标签、Myc标签或His标签)、反应性标签(如马来酰亚胺、碘乙酰胺、烷基卤化物、3-巯基丙基或4-叠氮基丁酸)或各种其他合适的部分。合适的接头的非限制性实例，例如，用于多肽的缀合，包括β-丙氨酸、4-氨基丁酸(GABA)、(2-氨基乙氧基)乙酸(AEA)、5-氨基戊酸(Ava)、6-氨基己酸(Ahx)、PEG 2间隔区(8-氨基-3,6-二氧杂辛酸)、PEG3间隔区(12-氨基-4,7,10-三氧杂十二烷酸)、PEG4间隔区(15-氨基-4,7,10,13-四氧杂十五烷酸)和Ttds(三氧杂十三烷-琥珀酰胺酸)。在一些情况下，接头可由活性部分衍生而来，例如马来酰亚胺、碘乙酰胺、烷基卤化物、3-巯基丙基或4-叠氮丁酸。在一些情况下，接头可包含聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇或聚丙二醇的共聚物。
“治疗”受试者的疾病或“治疗”患有疾病的受试者是指使受试者经受药物治疗，例如，药物的给药，以使疾病的至少一种症状减弱或防止恶化。
术语“预防(prevent、preventing、prevention)”等是指降低受试者发展疾病、病症或症状的可能性，所述受试者不患有疾病、病症或症状，但处于发展疾病、病症或症状的风险中或易于发展疾病、病症或症状。
术语“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，是指足以实现特定生物学结果或调节或改善受试者的症状或症状发作的时间的量。对于治疗大量月经出血、异常子宫出血或继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症的大量月经出血，典型的有效量是导致减少至少约35％，通常至少约50％，优选至少约60％，或更优选至少约70％出血的用量。用于特定受试者的有效量可以根据如所治疗的病症、受试者的总体健康状况、给药的方法、途径和剂量以及副作用的严重程度等因素而变化。当组合时，有效量与组分的组合成比例，并且效果不限于单独的单个组分。
抗体、片段或缀合物的“药物组合物”(也称为“治疗制剂”)可以通过将具有所需纯度的抗体与任选地生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备。例如根据Remington’s Pharmaceutical Sciences(18th ed.；Mack Pub.Co.:Eaton,Pa.,1990)，以冻干制剂或水溶液的形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属配合物(例如，Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，如或聚乙二醇(PEG)。
根据本发明的典型“受试者”包括人和非人受试者。受试者可以是哺乳动物，如小鼠、大鼠、猫、狗、灵长类动物和/或人。
如本文所用，术语“异常子宫出血”(AUB)定义为女性月经失血(MBL)或MBL程度或阴道出血模式的变化，其不同于与年龄匹配的一般女性群体所经历的变化。异常子宫出血包括大量月经出血或月经过多，常伴有痛经。
如本文所用，术语“子宫内膜异位症”定义为(i)外子宫内膜异位症，其含有子宫内膜腺体(子宫内膜上皮细胞)的子宫内膜组织和子宫外的子宫内膜间质(子宫内膜异位病变)，通常存在于但不限于腹膜腔内，以及(ii)内子宫内膜异位症，也称为子宫腺肌症(adenomyosis)，其子宫内膜组织含有子宫内膜腺体(子宫内膜上皮细胞)和子宫肌层内的子宫内膜基质。
如本文所用，术语“平滑肌瘤”(也称为子宫纤维瘤或子宫肌瘤)是育龄妇女的最常见的良性妇科肿瘤，定义为在子宫壁中和子宫壁周围或子宫生长的肌细胞和其他组织。
如本文所用，术语“痛经”，也称为疼痛期或月经痛，定义为月经期间的疼痛。
如本文所用，术语“白介素11”、“IL-11”或“IL11”，也称为AIGF(脂肪生成抑制因子)，是指具有UniProt IDs P20809(人)、P47873(小鼠)、P20808(食蟹猴(Macacafascicularis/Cynomolgus monkey))或Q99MF5(大鼠)的蛋白质，如表1中所列。IL-11是属于IL-6型细胞因子家族的细胞因子，其基于其共同共受体gp130的使用而区分。人IL-11以两种同种型表达(表1)，并且人IL-11基因被剪接成至少两种主要变体(表2)。人、小鼠、食蟹猴和大鼠的典型白细胞介素11mRNA序列的NCBI参考标识符示于表2中。
表1：IL-11蛋白序列标识符
表2：IL-11mRNA序列标识符
如本文所用，术语“IL-11RA”或“IL-11Ra”(UniProt Q14626(人)P70225(小鼠))是白细胞介素11受体的亚基，也称为CRSDA、白细胞介素11受体α亚基、白细胞介素11受体亚基α。白细胞介素11受体是结合白细胞介素11的I型细胞因子受体。它是由白细胞介素11受体α亚基和信号转导亚基gp130组成的异二聚体。膜结合的IL-11RA受体可被切割，导致可溶性同种型sIL-11RA的释放。IL-11RA以2种同种型表达(表3)。人IL-11RA基因剪接成若干变体，其中变体3与编码的蛋白质同种型相关(表4)。存在两种鼠IL-11Ra基因：Il11ra1(人IL-11RA的同源物)和Il11ra2(在人内不存在同源物)和编码的蛋白质示于表3中。对于Ilra1，存在三种转录物变体，它们都编码相同的蛋白质，仅Ilra1的转录变体2在表4中给出。对于食蟹猴IL11RA，不存在UniProt ID。因此，我们使用NCBI参考蛋白ID(表3)，其显示与人IL11Ra(Uniprot ID Q14626-1)以及相应的食蟹猴IL11RA NCBI参考mRNA ID(表4)的最高同源性。
表3：IL-11受体α蛋白序列标识符
表4：IL-11受体α核酸序列标识符
术语“gp130”是指糖蛋白gp130，也称为白介素-6-信号转导子、IL6ST、CD130、CDW130、GP130或IL-6RB(UniProt.P40189(人)；Q00560(小鼠))。Gp130是一种跨膜蛋白，形成IL-6受体家族内I型细胞因子受体的一个亚基。其通常是指普通gp130亚基，并且对于细胞因子参与后的信号转导是重要的。与其他I型细胞因子受体一样，gp130具有WSXWS氨基酸基序，其确保正确的蛋白质折叠和配体结合。其与Janus激酶相互作用以在受体与其配体相互作用后引发细胞内信号。在结构上，gp130由五个纤连蛋白III型结构域和一个免疫球蛋白样C2型(免疫球蛋白样)结构域在其细胞外部分组成。IL-11结合IL-11Ra。然后，这两种蛋白质的复合物与gp130结合。然后，这3种蛋白质的复合物同源二聚化以形成可以产生下游信号的六聚体复合物。gp130没有固有的酪氨酸激酶活性。相反，其在与其他蛋白质复合后在酪氨酸残基上磷酸化。磷酸化导致与JAK/Tyk酪氨酸激酶和STAT蛋白转录因子相关。特别地，STAT-3被激活，其导致许多下游基因的激活。
表5：不同物种的白介素6信号转导蛋白序列的UniProt/NCBI RefSeq标识符
表6：不同物种的白细胞介素6信号转导子mRNA序列的NCBI RefSeq标识符
如本文所用，术语“IL-11介导的信号传导”是指在IL-11与IL-11RA和gp130结合时引发的信号转导，促进涉及gp130：IL-11：IL-11RA复合物二聚体的更高级结构的形成。这允许例如gp130相关的下游Janus激酶(JAK)激活、STAT介导的转录活性、非典型MAPK/ERK依赖性信号传导的激活和ERK依赖性转录活性。可溶性或膜结合的IL-11Ra可以与IL-11形成复合物。因此，IL-11可能在结合细胞表面gp130之前结合可溶性IL-11Ra，其促进表达gp130但不表达IL-11Ra的细胞中IL-11介导的信号传导(Lokau等人，2016Cell Reports 14，1761-1773)。因为IL-11Ra表达仅在少数细胞类型中观察到，而gp130在广泛的细胞类型中表达，所以所谓的IL-11反式信号传导可能是IL-11介导的信号传导的最常见形式。
术语“IL-11功能封闭抗体”、“抗IL-11功能封闭抗体”是指抑制IL-11介导的信号转导的IL-11抗体。
异常子宫出血的治疗和/或预防
已经发现，通过功能封闭性IL-11抗体对IL-11信号传导途径的抑制显示出对大量月经出血(例如，实施例1，图2；实施例5，图6；实施例6，图7；实施例7，图8；实施例10，图11；实施例11，图13；实施例12，图14；实施例13，图15)和子宫重量(例如，实施例2，图3；实施例10，图12)的极强影响。这些出人意料的结果导致以下结论，与IL-11和/或IL-11RA结合并抑制或拮抗IL-11信号传导缓解月经和异常子宫出血，包括大量月经出血。
此外，已经发现IL-11显著诱导VEGF-A分泌。这被IL-11功能封闭抗体的额外处理完全抑制。VEGF-A是周知的促血管生成介质，IL-11的诱导可能导致平滑肌瘤血管化增加和平滑肌瘤生长增强(实施例3，图4)。
另外，已经发现，与用对照抗体处理的动物相比，用IL-11抗体处理的患有HMB的动物显示出月经期间体重减轻的缓解(实施例4，图5)，并且与用对照抗体处理的动物相比，IL-11抗体处理的动物显示出探索行为增强，如在行进距离和直立中所观察(实施例8；图9)。这表明用IL-11功能封闭抗体处理导致经处理的患有HMB的动物在月经期间的活动和健康状况增强。
因此，IL-11和/或IL-11RA药剂的抑制或拮抗作用导致异常子宫出血(如大量月经出血、月经过多和痛经)以及潜在疾病(如平滑肌瘤和子宫内膜异位症或月经本身)的缓解是出人意料和令人惊讶的。
根据第一方面，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的用途。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂在治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的方法中的用途。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂在制备用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的药物组合物(优选药物)中的用途。
根据另一方面，本发明涵盖使用有效量的能够结合IL-11和IL-11RA和/或抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位的方法。
根据本发明所有方面的一个实施方案，涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血是大量月经出血、长期出血或出血模式改变的出血。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血是大量月经出血，并且其中大量月经出血继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血与痛经相关。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血与继发于子宫肌瘤或子宫内膜异位症的痛经有关。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂用于抑制或调节月经的用途。
根据本发明的一个实施方案，能够结合并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA的作用的药剂是变构抑制剂或拮抗剂。如本文所用，术语“变构抑制剂”或“变构拮抗剂”涉及通过结合靶蛋白的变构位点改变靶标的活性位点中的蛋白构象，并因此改变活性位点的形状的药剂。因此，靶标(例如配体)不再保持能够结合其特异性受体，或结合其受体的能力降低。
根据本发明的一个实施方案，能够结合并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA的作用的试剂是单克隆抗体或保留IL-11和/或IL-11RA结合能力的IL-11和/或IL-11RA结合片段或其衍生物，或特异性结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的抗体模拟物。
药剂
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症，其中所述试剂是变构抑制剂或拮抗剂。
变构抑制剂或拮抗剂包括但不限于
·IL-11或IL-11RA抗体或IL-11或IL-11RA抗体片段或其衍生物
·核酸分子，例如但不限于siRNA(小干扰RNA)或shRNA(短发夹RNA)
·特异性结合IL-11或IL-11RA的适体
·特异性结合IL-11或IL-11RA的小分子
根据本发明的抗体、抗体片段、抗体模拟物或其衍生物
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的试剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中所述试剂是IL-11和/或IL-11RA抗体、IL-11和/或IL-11RA抗体片段、IL-11和/或IL-11RA抗体-模拟物或其衍生物。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的试剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中所述试剂是IL-11单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体以解离常数(KD)≤1.0E-08M、≤1.0E-09M、≤5.0E-10M、≤1.0E-10M、≤5.0E-11M、≤2.5E-11M或≤1.0E-11M与人IL-11结合。
IL-11和/或IL-11RA抗体已经在科学或专利文献中描述，但并非用于治疗异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据本发明，IL-11和/或IL-11RA抗体包括但不限于在科学和专利文献中描述的IL-11和/或IL-11RA抗体，例如特异性结合IL-11和/或IL-11RA的重组抗体。
人和小鼠IL-11和/或IL-11RA的功能封闭抗体由商业供应商提供。已知的抗IL-11抗体的实例包括单克隆抗体克隆6D9A(Abbiotec或Genetex)、克隆KT8(Abbiotec或LS-bio)、克隆M3103F11(BioLegend)、克隆1F1(Merck)、克隆3C6(Abnova Corporation)、克隆GF1(LifeSpan Biosciences)、克隆22616(Thermo Fisher Scientific)、克隆9T27(Genetex)、克隆12(Thermo Fisher Scientific)、未知克隆(LS-bio，#LS-C104441)、克隆9(Thermo Fisher Scientific)、克隆13455(Source BioScience)和克隆22626(R&DSystems，用于Bockhorn等人(2013)；单克隆小鼠IgG2A；目录号MAB218；R&D Systems，MN，USA)。已知的抗IL-11RA抗体的实例包括单克隆抗体克隆025(Sino Biological)、克隆EPR5446(Abcam)、克隆473143(R&D Systems)、US2014/0219919 A1中描述的克隆8E2和8E4以及Blanc等人(2000)中描述的单克隆抗体。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中所述药剂是IL-11和/或IL-11RA单克隆抗体，或保留IL-11和/或IL-11RA结合能力的IL-11和/或IL-11RA结合抗体片段或其衍生物，或特异性结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的抗体模拟物。
如上所述，IL-11和/或IL-11RA被充分规定以使技术人员能够制备针对其的单克隆抗体。常规方法包括杂交瘤、嵌合/人源化、噬菌体展示/转基因哺乳动物和其他抗体工程技术。
用于产生杂交瘤细胞的方法公开于和Milstein(1975)中。本质上，例如，在B细胞分离和与骨髓瘤细胞融合后，用人IL-11和/或IL-11RA蛋白免疫小鼠。
用于产生和/或筛选嵌合或人源化mAb的方法是本领域已知的。本质上，例如，不参与IL-11和/或IL-11RA结合的来自鼠抗IL-11和/或IL-11RA抗体的蛋白质序列被相应的人序列取代。例如，Genentech的US6331415描述了嵌合抗体的产生，而Medical ResearchCouncil的US6548640描述了CDR移植技术，Celltech的US5859205描述了人源化抗体的产生。
用于产生和/或筛选全人mAb的方法是本领域已知的。这些方法可以涉及使用人IL-11和/或IL-11RA免疫的转基因动物，或使用合适的展示技术，如酵母展示、噬菌体展示、B细胞展示或核糖体展示，其中在稳定期针对人IL-11和/或IL-11RA筛选来自文库的抗体。
体外抗体文库尤其公开于MorphoSys的US6300064和MRC/Scripps/Stratagene的US6248516中。噬菌体展示技术例如公开于Dyax的US5223409中。转基因哺乳动物平台例如描述于TaconicArtemis的EP1480515 A2中。
IgG、scFv、Fab和/或F(ab)2是技术人员周知的抗体形式。相关的使能技术可从相应的教科书中获得。
修饰的抗体形式是例如双特异性或三特异性抗体构建体、基于抗体的融合蛋白、免疫缀合物等。这些类型在文献中有详细的描述，并且可以由技术人员在本公开内容的基础上使用，并增加进一步的创造性活动。
因此，找到能够作为IL-11和/或IL-11RA的抑制剂或拮抗剂的合适的抗体或片段或衍生物是技术人员的常规问题，例如，基于不同的IL-11和/或IL-11RA同种型的氨基酸序列的公开可用性，通过结合IL-11RA、IL-11或IL 6ST相互作用位点。
用于科学研究的针对IL-11和/或IL-11RA的多克隆抗体是可商购的，例如，来自R&D Systems,Inc.，强调本领域技术人员也能够制备针对所述靶标的治疗性抗体。
核酸
根据本发明的一个实施方案，能够结合并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的试剂包含特异性结合第二核酸分子的第一核酸分子，其中第二核酸分子编码IL-11和/或IL-11RA蛋白。
所述第二核酸分子可以是由编码IL-11和/或IL-11RA蛋白的基因转录的mRNA。所述第二核酸缺乏内含子，但由于选择性剪接，由编码IL-11和/或IL-11RA蛋白的基因转录的不同mRNA可以彼此不同。在这种情况下，第一核酸分子可以是siRNA(小干扰RNA)或shRNA(短发夹RNA)。
siRNA是短的人工RNA分子，其可以被化学修饰以增强稳定性。因为siRNA是双链的，所以“正义”和“反义”链的原理也适用。正义链具有与转录mRNA相同的碱基序列，反义链具有互补序列。从技术上讲，给予患者的siRNA分子与称为Argonaut的胞内酶结合以形成所谓的RNA诱导沉默复合物(RISC)。siRNA的反义链将RISC引导至靶mRNA，其中反义链与靶mRNA杂交，然后靶mRNA被RISC切割。以这种方式，相应mRNA的翻译被中断。然后RISC可以切割另外的mRNA。递送技术例如在Xu和Wang(2015)中公开。基于IL-11和/或IL-11R的不同mRNA同种型的公开可用性，找到siRNA的合适序列是技术人员的常规问题。
shRNA是具有紧密发夹转角的人工RNA分子，其可用于通过RNA干扰(RNAi)使靶基因表达沉默。shRNA可以递送至细胞，例如，通过质粒方法或通过病毒或细菌载体。shRNA是RNAi的有利介导物，因为它具有相对低的降解和转换速率。各个质粒包含合适的启动子以表达shRNA，如聚合酶III启动子(如U6和H1)或聚合酶II启动子。一旦质粒或载体整合到宿主基因组中，shRNA就在细胞核中转录。该产品模拟pri-microRNA(pri-miRNA)并由Drosha加工。所得的pre-shRNA通过Exportin 5从细胞核输出。然后将该产物通过Dicer加工并装载到RNA诱导的沉默复合物(RISC)中，之后进行与siRNA中相同的沉默。基于IL-11或IL-11RA的不同mRNA同种型的公开可用性，找到shRNA的合适序列是技术人员的常规问题。
所述第二核酸分子也可以是包含在编码IL-11和/或IL-11RA蛋白的基因中的基因组DNA。所述基因包含若干非编码内含子，因此其序列不同于本文公开的mRNA或cDNA的序列。
在这种情况下，第一核酸分子可以是CRISPR Cas系统的指导RNA(参见例如Jinek等人(2012))，其中指导RNA包含能够与IL11和/或IL11RA基因的基因组链杂交的靶特异性crRNA(“小干扰CRISPR RNA”)(或第一核酸分子可以是单独的crRNA)。指导RNA/crRNA能够将作为核酸内切酶的Cas酶引导至IL11和/或IL11RA基因，其中Cas酶进行序列特异性链断裂。通过产生一个或多个双链断裂，IL11和/或IL11RA基因可以因此被沉默。使用所述系统用于IL11和/或IL-11RA的体内基因沉默(例如在子宫内膜组织的不同细胞中)需要专用的递送技术，其包括递送载体，例如脂质纳米颗粒，如Yin等人(2016)中所述。基于IL-11和/或IL-11RA基因的基因组序列的公开可用性，找到包含在指导RNA中的crRNA的合适序列是技术人员的常规问题。
在另一个实施方案中，所述第一核酸分子也可以是CRISPR Cpf系统的指导RNA(Zetsche等人(2015))，其中指导RNA包含靶特异性crRNA(“小干扰CRISPR RNA”)。与CRISPRCas类似，指导RNA能够将作为核酸内切酶的Cpf酶引导至IL11和/或IL11RA基因。关于技术考虑，例如，用于体内给药的递送和发现第一核酸分子的合适序列，适用与CRISPR Cas类似的方面。
CRISPR技术的其他实施方案目前正在开发中，其具有不同的核酸内切酶。然而，所有所述方法使用与靶序列杂交的靶特异性RNA(如CRISPR Cas中的指导RNA或crRNA)。在所有所述情况下，靶特异性RNA符合本文讨论的优选实施方案含义中的第一核酸分子。关于技术考虑，例如，用于体内给药的递送和发现第一核酸分子的合适序列，适用与CRISPR Cas类似的方面。
根据本发明的一个实施方案，能够结合并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的药剂是特异性结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的适体。
适体是对预定靶标具有特异性结合性质的寡核苷酸。它们通过名为SELEX(“指数富集的配体系统进化技术”)的组合方法从含有多达1015个不同序列的随机合成文库中获得。适体性质由其3D形状决定，3D形状由其基本序列驱动的分子内折叠产生。适体3D结构通过氢键、静电和堆积相互作用精细地适应于其同源靶标识别。适体通常显示高亲和力(Kd对于小分子为微摩尔，对于蛋白质为皮摩尔)。
例如Blind and Blank(2015)中给出了关于产生靶特异性适体的技术库的概述。适体也可以递送到细胞内空间中，如Thiel&Giangrande(2010)中所公开。
因此，找到能够作为IL-11和/或IL-11RA的抑制剂或拮抗剂的合适的适体是技术人员的常规问题，例如，基于不同IL-11和/或IL-11RA同种型的氨基酸序列的公开可用性，通过与其活性中心或变构位点结合。
根据本发明的一个实施方案，能够结合并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的药剂是特异性结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的一种或多种同种型的小分子(SMol)。
用于鉴定和/或筛选和/或优化合适的抑制性或拮抗性小化学分子(SMol)的方法是本领域已知的。这些方法可以涉及但不限于以下方法，例如所述SMol或SMol文库与人或非人或修饰的人或修饰的非人IL-11和/或IL-11RA的结合测定或置换测定，例如通过测量，例如在IL-11/IL-11RA募集中的荧光共振能量转移(FRET)或时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)。
所有所述分子都具有作为IL-11和/或IL-11RA的抑制剂或拮抗剂的潜力，用于治疗和/或预防异常子宫出血，例如大量月经出血或月经过多、痛经，以及潜在疾病平滑肌瘤和子宫内膜异位症和月经。
根据本发明的一个实施方案，拮抗剂或抑制剂可以通过IL-11/IL-11RA结合测定、抑制测定、募集测定或活化测定来发现。
根据本发明的一个实施方案，抗体、片段或衍生物、抗体模拟物、适体或小分子所结合的IL-11和/或IL-11RA蛋白包含SEQ IDs No 1-4、8、9中任一个所包含的序列。
根据本发明的一个实施方案，编码IL-11和/或IL-11RA蛋白的第二核酸分子包含SEQ ID No 5-7、10、11或其衍生物中任一个所包含的核苷酸序列。
药物组合物
根据本发明的另一个方面，提供了根据上述描述能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的药剂(用于制备药物)在治疗被诊断为或患有异常子宫出血、大量月经出血、痛经，以及潜在疾病平滑肌瘤和子宫内膜异位症和月经的人类受试者中的用途。
根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，其包含根据上述描述的能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA的作用的药剂和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明还提供了药物组合物，其包含根据上述描述的能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA的作用的药剂和至少一种或多于一种其他活性成分，特别是用于治疗和/或预防上述病症的活性成分。所述其他活性成分的优选实例包括但不限于：选择性雌激素受体调节剂(SERM)、雌激素受体(ER)拮抗剂、芳香酶抑制剂、17β-HSD1抑制剂、类固醇硫酸酯酶(STS)抑制剂、GnRH激动剂和拮抗剂、吻蛋白受体(KISSR)拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂(SARM)、雄激素、5α-还原酶抑制剂、选择性孕酮受体调节剂(SPRM)、孕激素、抗孕激素、口服避孕药、促分裂原活化蛋白(MAP)激酶抑制剂和MAP激酶抑制剂(Mkk 3/6、Mek 1/2、Erk 1/2)、蛋白激酶B抑制剂(PKBα/β/γ；Akt 1/2/3)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK 1/2)抑制剂、缺氧诱导的信号传导途径抑制剂(HIF1α抑制剂、脯氨酰羟化酶激活剂)、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、前列腺素F受体(FP)(PTGFR)拮抗剂和非甾体炎症抑制剂(NSAID)。
例如，本发明的药剂可以与已知的抗过度增殖、细胞抑制或细胞毒性物质组合用于治疗癌症。此外，本发明的药剂还可以与放射疗法和/或手术干预组合使用。
合适的组合活性成分的实例包括但不限于：
131I-chTNT、阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龙(abiraterone)、阿克拉霉素(aclarubicin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维A酸(alitretinoin)、六甲蜜胺(altretamine)、氨格鲁米特(aminoglutethimide)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、阿格拉宾(arglabin)、arsentrioxidas、天门冬酰胺酶(asparaginase)、阿扎胞苷(azacitidine)、巴利昔单抗(basiliximab)、RDEA 119、倍罗替康(belotecan)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、(bleomycin)、博来霉素(bortezomib)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、亚叶酸钙(calcium folinate)、左亚叶酸钙(calcium levofolinate)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡妥索单抗(catumaxomab)、塞来昔布(celecoxib)、西莫白介素(celmoleukin)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯化孕酮(chlormadinone)、氮芥(chlormethine)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯膦酸(clodronic acid)、氯法拉滨(clofarabine)、天冬酰胺酶(crisantaspase)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、阿法达依泊汀(darbepoetin alfa)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地诺单抗(denosumab)、德舍瑞林(deslorelin)、二溴螺氯铵(dibrospidium chloride)、多西他赛(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、阿霉素(doxorubicin)、阿霉素+雌酮(doxorubicin+oestrone)、依库珠单抗(eculizumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依利醋铵(elliptinium acetate)、艾曲波帕(eltrombopag)、内皮抑素(endostatin)、依诺他滨(enocitabine)、表柔比星(epirubicin)、硫雄甾醇(epitiostanol)、阿法依泊汀(epoetin alfa)、倍他依泊汀(epoetin beta)、依铂(eptaplatin)、艾日布林(eribulin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌二醇(oestradiol)、雌莫司汀(oestramustine)、依托泊苷(etoposide)、依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、非格司亭(filgrastim)、氟达拉滨(fludarabine)、氟脲嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、福美司坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、氟维司群(fulvoestrant)、硝酸钙(gallium nitrate)、加尼瑞克(ganirelix)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥单抗(gemtuzumab)、谷胱甘肽(glutoxim)、戈舍瑞林(goserelin)、组胺二盐酸盐(histamine dihydrochloride)、组氨瑞林(histrelin)、硫酸羟脲(hydroxycarbamide)、I-125颗粒、伊班膦酸(ibandronicacid)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、柔红霉素(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、英丙舒凡(improsulfan)、干扰素α(interferon alfa)、干扰素β(interferon beta)、干扰素γ(interferon gamma)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、兰瑞肽(lanreotide)、拉帕替尼(lapatinib)、来那度胺(lenalidomide)、来格司亭(lenograstim)、香菇多糖(lentinan)、来曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、麦角乙脲(lisuride)、洛铂(lobaplatin)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、马索罗酚(masoprocol)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美法仑(melphalan)、美雄烷(mepitiostan)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、氨基乙酰丙酸甲酯(methylaminolevulinate)、甲睾酮(methyltestosterone)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米铂(miriplatin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托瓜酮(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奈达铂(nedaplatin)、奈拉滨(nelarabine)、尼洛替尼(nilotinib)、尼鲁米特(nilutamide)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、尼莫司汀(nimustine)、二胺硝吖啶(nitracrine)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥美拉挫(omeprazole)、奥沙利铂(oxaliplatin)、p53基因治疗、紫杉醇(paclitaxel)、帕利夫明(palifermin)、钯-103颗粒、帕米磷酸(pamidronic acid)、帕尼单抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培门冬酶(pegaspargase)、(pEG-依泊汀β(甲氧基PEG-依泊汀β))、培非格司亭(pegfilgrastim)、聚乙二醇干扰素α-2b(peginterferon alfa-2b)、培美曲塞(pemetrexed)、喷他佐辛(pentazocine)、喷司他丁(pentostatin)、培洛霉素(peplomycin)、培磷酰胺(perfosfamid)、毕西巴尼(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、普乐沙福(plerixafor)、普卡酶素(plicamycin)、壳聚糖(poliglusam)、聚磷酸雌二醇(polyoestradiolphosphate)、多糖-K(polysaccharide-K)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、甲基苄肼(procarbazine)、喹高利特(quinagolide)、氯化镭-223(radium-223chloride)、雷洛昔芬(raloxifen)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司汀(ranimustine)、雷佐生(razoxane)、瑞戈非尼(regorafenib)、利塞膦酸(risedronic acid)、利妥昔单抗(rituximab)、罗米地辛(romidepsin)、罗米司亭(romiplostim)、沙格司亭(sargramostim)、普罗文奇(sipuleucel-T)、裂褶菌多糖(sizofiran)、sobuzoxan、甘氨双唑钠(sodium glycididazole)、索拉非尼(sorafenib)、链脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉泊芬钠(talaporfin)、他米巴罗汀(tamibarotene)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索尔明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、替加氟(tegafur)、替加氟+吉美嘧啶+奥替拉西(tegafur+gimeracil+oteracil)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、坦罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾酮(testosterone)、替曲膦(tetrofosmin)、沙利度胺(thalidomide)、噻替哌(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、硫鸟嘌呤(tioguanine)、托珠单抗(tocilizumab)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲贝替定(trabectedin)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲奥舒凡(treosulfan)、维生素A酸(tretinoin)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林(triptorelin)、曲磷胺(trofosfamide)、色氨酸(tryptophan)、乌苯美司(ubenimex)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、维莫非尼(vemurafenib)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏立诺他(vorinostat)、伏氯唑(vorozole)、钇-90玻璃微珠(yttrium-90glass microspheres)、净司他丁(zinostatin)、净司他丁苯马聚合物(zinostatin stimalamer)、唑来膦酸(zoledronic acid)、佐柔比星(zorubicin)。
本发明优选涉及药物，其包含至少一种根据上述描述的能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂和一种或多种以下活性成分，尤其用于治疗和/或预防类固醇受体依赖性增殖性疾病：
-LHRH(黄体生成素释放激素)激动剂，
-LHRH(黄体生成素释放激素)拮抗剂，
-C(17,20)-裂合酶抑制剂，
-I型5-α-还原酶抑制剂，
-II型5-α-还原酶抑制剂，
-混合I/II型5-α-还原酶抑制剂，
-用于治疗骨转移癌的α-辐射放射性药物，例如氯化镭-223，
-细胞抑制剂，
-VEGF(血管内皮生长因子)激酶抑制剂，
-抗促孕激素，
-抗雌激素，
-EGF抗体，
-激素或
-聚(ADP-核糖)聚合酶I抑制剂，或
-偶联至细胞表面蛋白的双特异性T细胞衔接子(BiTE)，例如前列腺特异性膜抗原(PSMA)。
根据另一方面，本发明涵盖药物组合，其包含：
(a)一种或多种根据上述描述的能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11介导的信号传导的药剂，和
(b)一种或多种其他活性成分。
本发明的另一个方面是用于鉴定用于治疗和/或预防患有异常子宫出血、处于异常子宫出血发展风险的患者的药剂的方法，所述方法包括在合适的测定中筛选一种或多种测试药剂。
根据一个实施方案，所述方法还包括创建和/或提供测试化合物文库的在先步骤。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖用于确定人或动物受试者是否适合用根据上述描述的药剂、药物组合物或组合治疗的方法，所述方法包括
a.提供来自所述受试者的组织或液体样本，以及
b.确定所述样本的特征是否在于IL-11和/或IL-11RA的表达或过表达。
根据本发明的另一方面，提供了用于治疗或预防异常子宫出血的方法，其包括向需要其的受试者给予有效量的根据上述描述的能够抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的药剂、药物组合物或组合。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖用于确定人或动物受试者是否适合用根据上述描述的药剂、药物组合物或组合治疗的方法，所述方法包括
a.提供来自所述受试者的组织或液体样本，以及
b.确定所述样本的特征是否在于IL-11和/或IL-11RA的表达或过表达，其中所述IL-11表达的测定
i.在mRNA水平(例如，RT-PCR、原位PCR和/或荧光原位杂交(FISH))，
ii.在蛋白质水平(例如，免疫组织化学、免疫印迹、ELISA等)
根据本发明的另一方面，提供了用于根据上述描述的方法的伴随诊断剂，其中所述伴随诊断剂包含至少一种选自能够与编码IL-11和/或IL-11RA蛋白的核酸(DNA或RNA)杂交的核酸探针或引物的药剂
a.能够结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的抗体，和/或
b.能够结合IL-11和/或IL-11RA蛋白的适体。
筛选和靶标抑制测定
用于鉴定和/或筛选和/或优化能够结合IL-11和/或IL-11RA并抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA作用的合适的药剂的方法是本领域已知的。这些方法可以涉及但不限于以下方法，例如能够抑制或拮抗IL-11和/或IL-11RA对人或非人或修饰的人或修饰的非人IL-11和/或IL-11RA作用的所述药剂的结合测定。存在技术人员已知的多种类型的配体结合测定，放射性和非放射性测定均存在。药剂的结合可以通过以下方法测定：使用例如，固定的IL-11或IL-11RA和标记的药剂，例如，通过用放射性同位素进行放射性标记或添加例如荧光部分，在肽试剂的情况下，可以添加另外的标签，例如Fc(免疫球蛋白的片段可结晶区)-标签或Avi-标签(链霉亲和素-标签)。此外，结合测定可以涉及但不限于以下方法，例如置换测定，如抑制或拮抗天然或人工结合配偶体(例如在人或非人IL-11RA或其衍生物上募集人或非人IL-11或其衍生物)的募集。募集和募集抑制可以由技术人员通过几种方法测量，例如，测量例如，在这种IL-11/IL-11RA募集的荧光共振能量转移(FRET)或时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)。在一个实施方案中，可以测量IL6ST募集至IL-11或IL-11RA或IL-11/IL-11RA复合物的抑制和/或拮抗。在另一个实施方案中，募集的结合或抑制/拮抗可以通过细胞测定在天然表达IL-11RA(或IL-11RA和IL6ST)的人或非人细胞中或在表达重组人或非人IL-11RA(或IL-11RA和IL6ST)或其衍生物的细胞中测量。
根据本发明的一个实施方案，拮抗剂或抑制剂可以通过IL-11和/或IL-11RA抑制测定或活化测定来发现。在一个实施方案中，所述方法可以包括但不限于通过分析IL-11/IL-11RA信号传导途径的下游标志物来测量IL-11信号传导的抑制或拮抗的细胞测定，例如Janus激酶(JAK)或信号转导子和转录激活蛋白(STATs)到IL-11/IL-11RA/IL6ST信号传导复合物的募集，例如使用MSD(mesescale)市售的测定‘磷酸化-STAT3(Tyr705)测定碱基试剂盒’或Stat 3依赖性报告物测定，例如Biocompare的“通过荧光素酶的STAT3报告基因测定”。在另一个实施方案中，STAT3或MEK/ERK激酶的磷酸化可以通过例如以下方法测量：在天然表达IL-11RA和IL6ST的人或非人细胞中或在表达重组人或非人IL-11RA(或IL-11RA和IL 6ST)或其衍生物的细胞中的ELISA技术。
用于IL-11的新型治疗性抗体及其医学用途
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段能够减少异常子宫出血期间的失血。
通过分离的抗体或其抗原结合片段减少月经期间的失血可以在鼠HMB模型中分析，如实施例1中所述。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段使月经期间的失血减少至少约35％，或至少约50％，或优选至少约60％，或更优选至少约70％的出血减少。
能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段能够降低子宫分化，如实施例2中所述。在所述子宫出血动物模型中诱导的子宫分化在除去孕酮后导致月经和子宫出血。所述鼠HMB模型在第12天子宫重量的减少可以解释为预测如在实施例2中所述的鼠HMB模型中在第12天和第15天之间测量的子宫出血的减少。
大量月经出血或月经通常以健康状况降低为特征。避免或缓解月经和大量月经出血是治疗原发性和继发性痛经的有效方法。能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段能够缓解健康状况降低的迹象，如减少如实施例4中所述的月经期间体重减轻和大量月经出血，或缓解如实施例8中所示的月经时探索行为减少和大量月经出血。
鼠HMB模型中出血减少的另一替代标志物是如实施例9中所示的在第12天分化的子宫中活化受体复合物下游IL-11介导的Stat3磷酸化的减弱。
根据另一方面，本发明涵盖能够抑制纤维瘤组织分泌VEGF-A的分离的抗体或其抗原结合片段。
分离的抗体或其抗原结合片段对纤维瘤组织分泌VEGF-A的抑制可以如实施例3中所述进行分析。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段以解离常数(KD)≤1.0E-08M、≤1.0E-09M、≤5.0E-10M、≤1.0E-10M、≤5.0E-11M、≤2.5E-11M或≤1.0E-11M与人IL-11结合。
分离的抗体或其抗原结合片段与IL-11的结合可以通过Biacore系统的表面等离子体共振(SPR)进行分析，如实施例16中所述，或通过ELISA方法分析，如实施例23和24中所述。测定分离的抗体或其抗原结合片段与IL-11的结合的其他方法包括但不限于使用经由mesoscalediscovery(MSD)的电化学发光方法(ELC)、Luminex平台、免疫-PCR(Lasseter HC等人,2020,Cytokine X；28；2)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、热位移测定、LC-MS检测、以及来自Octet system的生物层干涉法(BLI)、以及动力学排阻测定技术，例如/>(Sapidyne Instruments,Inc.,Boise,ID)。KinExA提供了一个平台，允许使用溶液相中的未修饰分子测量平衡结合亲和力和动力学。这是通过使用固相固定化分子在给予足够的时间达到平衡后(亲和力测量)或在预平衡条件下(动力学)探测一种相互作用组分的自由浓度来实现的(Darling RJ等人(2004).ASSAY and Drug DevelopmentTechnologies.2(6):647-657)。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段以≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤1nM、≤0.5nM或≤0.1nM的IC50抑制人IL-11介导的信号传导。
体外IL-11功能封闭测定可以是如实施例17中所述的测定。此外，在文献中描述了其他的体外IL-11功能封闭测定。IL-11信号传导和功能封闭抗体对其信号传导的抑制可以通过STAT3的下游磷酸化来测量和定量，具体为：其在固有表达IL-11Ra和gp130之一的原代细胞或细胞系中通过重组或诱导的IL-11诱导下游信号传导后，或在编码相应受体的DNA瞬时或稳定转染并导致这些受体在转染细胞中表达后，通过在基于蛋白质印迹法的测定中分析磷酸化STAT3与总STAT3进行比较的量。合适的原代细胞是例如，健康供体的PBMC，如在Sumida等人,2015中所述。在用重组IL-11(例如，10ng/ml)总STAT3、磷酸化STAT3(pSTAT3)和对照蛋白(例如α-微管蛋白)诱导后，可以通过使用特异性抗体的免疫印迹法评估。
此外，体外IL-11功能封闭测定可以以剂量依赖的方式测量和量化例如人或鼠IL-11在T11小鼠浆细胞瘤细胞系中诱导的细胞增殖，如R&D Systems所述(https://www.rndsystems.com/products/human-il-11-antibody_af-218-na or Nordan,R.P.等人(1987)J.Immunol.139:813)。重组IL-11(例如，1ng/mL)诱导的增殖可以被功能封闭抗体抑制。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11与IL-11RA的相互作用，并且其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11RA/gp130复合物的形成。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段以IC50≤1000nM、≤100nM、≤10nM抑制IL-11与IL-11RA的相互作用(通过使用双复合物ELISA测定)，并且其中所述分离的抗体或其抗原结合片段以IC50≤1000nM、≤100nM、≤10nM抑制IL-11/IL-11RA/gp130复合物的形成(通过使用三复合物ELISA测定)。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11与IL-11RA的相互作用，并且其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11RA/gp130复合物的形成。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段以IC50≤1000nM、≤100nM、≤10nM抑制IL-11/IL-11RA/gp130复合物的形成(通过使用三复合物ELISA测定)，并且其中因此所述分离的抗体或其抗原结合片段不抑制IL-11与IL-11Ra的相互作用(通过使用双复合物ELISA测定)。
IL-11信号传导的抑制可以是由于IL-11与IL-11RA的相互作用位点的封闭或由于IL-11：IL-11RA复合物与细胞膜结合的gp130相互作用时gp130活化的抑制。复合的IL-11：IL-11Ra可以包含可溶性或膜结合的IL-11Ra。
抗体或其抗原结合片段对IL-11与可溶性或膜结合的IL-11Ra相互作用的抑制可通过各种分析方法进行分析。方法包括但不限于例如ELISA、FACS、经由mesoscalediscovery(MSD)的电化学发光方法(ELC)、Luminex平台、免疫-PCR(Lasseter HC等人,2020,Cytokine X；28；2)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、热位移测定、LC-MS检测、以及来自Octet system的生物层干涉法(BLI)、以及动力学排阻测定技术，例如/>一种优选的测定形式是ELISA，其中可溶性IL-11Ra在存在或不存在IL-11抗体的情况下与固定的IL-11结合，并且IL-11：IL-11Ra复合物的形成可以通过标记的检测试剂(例如，与IL-11Ra结合的抗体-酶缀合物)检测。干扰IL-11Ra：IL11复合物形成的抗体将降低测定中的最终读出信号。为了促进检测试剂的结合，IL-11Ra可以用作融合蛋白，其中IL-11Ra已经通过重组DNA技术融合到例如，抗体的Fc部分或小肽序列，其特别适合于被检测试剂识别，检测试剂例如，cMyc标签、His标签或其他标签。IL-11Ra也可以是化学修饰的(例如生物素化)，以便允许通过特异性识别化学修饰的试剂进行检测，例如链霉亲和素-辣根过氧化物酶。使用IL-11Ra-Fc融合蛋白的ELISA形式描述于实施例18中。为了允许测试人IgG以及鼠IgG对IL-11：IL-Ra复合物形成的抑制，使用两种不同的IL11Ra-Fc融合蛋白。当测试鼠IgG时，使用与人Fc融合的犬IL-11Ra(Sino Biological；#70078-D02H)，当测试人IgG时，使用与小鼠Fc融合的小鼠IL-11Ra(R&D System,#7405-MR)。显然，由于物种之间的高IL-11Ra同源性，犬IL-11Ra可用于与人IL-11(SEQ ID NO:1,aa 22-199；例如Invigate,例如批号#C121021-19)或鼠IL-11(SEQ ID NO：16；aa 22-199,例如Invigate,例如批号#C210819-09)形成复合物，鼠IL-11Ra可用于与人IL-11(SEQ ID NO：1；aa 22-199,例如Invigate,例如批号#C121021-19)或鼠IL-11(SEQ ID NO：16；aa 22-199,例如Invigate,例如批号#C210819-09)形成复合物。图17(a，b)中示出了双复合物测定形式的示意图。
IL-11结合抗体或其抗原结合片段对IL-11：IL-11Ra复合物与gp130的相互作用的特异性抑制可以通过检测如上所述的IL-11：IL-11Ra双复合物形成的抑制的测定和检测IL11Ra：IL-11：gp130三复合物形成的抑制的测定的组合来分析。如果抗体在三复合物测定中干扰IL-11Ra：IL 11：gpl30三复合物形成，但在双复合物测定中不干扰IL-11：IL-11Ra双复合物形成，因此得出结论，抗体结合IL-11上与IL-11和gp130的相互作用相关但与IL-11和IL-11Ra的相互作用不相关的表位。相比之下，预期在双复合物测定中干扰IL-11：IL-11Ra复合物形成的抗体也在三复合物测定中干扰IL-11Ra：IL-11：gp130复合物形成。重要的是，由于抗体干扰双复合物形成，因此得出结论，抗体结合IL-11上与IL-11和IL-11Ra的相互作用相关的表位。
抗体或其抗原结合片段对IL-11：IL-11Ra复合物与可溶性或膜结合gp130相互作用的抑制可以通过各种分析方法进行分析。方法包括但不限于例如ELISA、FACS、经由mesoscalediscovery(MSD)的电化学发光方法(ELC)、Luminex平台、免疫-PCR(Lasseter HC等人,2020,Cytokine X；28；2)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、热位移测定、LC-MS检测、来自Octet system的生物层干涉法(BLI)、以及均相时间分辨荧光(HTRF)测定。一种优选的测定形式是ELISA，其中可溶性IL-11RaFc(例如R&D Systems,#7405-MR)、人IL-11(例如Invigate,例如批号#C121021-19)或鼠IL-11(例如Invigate,例如批号#C210819-09)、以及鼠(例如R&D Systems,#468-MG)或人gp130-Fc(例如R&DSystems,#671-GP)在存在或不存在IL-11抗体的情况下混合。通过固定的抗小鼠Fc或抗人Fc捕获试剂捕获形成的IL-11Ra：IL-11：gp130的三复合物，其取决于是否检测人或鼠IL-11抗体对三复合物形成的抑制。最后，在检测人IL-11IgG抑制三复合物形成的测定中，通过针对人或小鼠gp130的生物素化抗体检测捕获的三复合物。当检测小鼠IL-11IgG对三复合物形成的抑制时，使用针对鼠IL-11Ra的生物素化抗体作为检测试剂。在两种测定形式中，对于人和小鼠IgG，生物素化检测试剂的存在通过链霉亲和素-POD试剂和底物可见。如果检测的抗体抑制三复合物形成，则读出信号将较低。图18(a，b)中示出了三复合物测定形式的示意图。
抗体TPP-16478、TPP-18068、TPP-27159、TPP-29386、TPP-29528、TPP 29536在双复合物和三复合物ELISA中均显示活性。此外，竞争性抗体TPP-23552和TPP-23580以及所有检测的具有至少一些功能活性的市售抗体在双复合物和三复合物ELISA中也是有活性的。
检测的市售抗体和竞争性抗体TPP-23552和TPP-23580在三复合物ELISA中均未显示活性，但在双复合物ELISA中显示活性。相比之下，抗体TPP-18087、TPP-29519、TPP-29520、TPP-29521、TPP-29522、TPP-29523、TPP-29680、TPP-30000、TPP-30001、TPP-30002、TPP-30003、TPP 31325和TPP-31385在三复合物ELISA中显示活性，但在双复合物ELISA中不显示活性，表明这些抗体识别IL-11上与gp130相互作用相关但与IL-11Ra不相关的新表位。
另外，在实施例39中可以显示，增加竞争性抗体TPP-29536的浓度(TPP-18068的衍生物)(在双复合物和三复合物ELISA两者中有活性)完全封闭TPP-18068与IL-11的结合，而TPP-29680(TPP-18087的衍生物)(在三复合物ELISA中有活性但在双复合物ELISA中没有活性)没有作用(图21a)。此外，增加竞争性抗体TPP 29680的浓度完全封闭TPP-18087与IL-11的结合，而TPP-29536没有作用(图21b)。这些数据表明TPP-18068(在双复合物和三复合物ELISA两者中有活性)及其衍生物的表位与TPP-18087(在三复合物ELISA中有活性但在双复合物ELISA中没有活性)及其衍生物的表位是不同的并且不重叠。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同的IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段，并且其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11与IL-11Ra的结合，并且其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成。
本发明的分离的抗体或其抗原结合片段在双复合物ELISA和三复合物ELISA中的不同活性表明这些抗体或其抗原结合片段形成结合不同IL-11表位的两类IL-11抗体。因此，每一类抗体可与结合两种不同IL-11表位的双特异性抗体组合。所述双特异性抗体包含抑制IL-11与IL-11Ra相互作用的抗体的CDR和抑制IL-11：IL-11Ra复合物与gp130相互作用的抗体的CDR。所述抗体的实例是TPP-20489、TPP-26195、TPP-29603和TPP-29697。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同的IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段，并且其中双特异性抗体或其抗原结合片段包含第一单链片段(scFv)和第二单链片段(scFv)，其中第一单链片段包含针对第一IL-11表位的第一结合位点，第二单链片段包含针对第二IL-11表位的第二结合位点。每个scFv片段可以通过接头(例如肽接头(例如GG GGSGGGGSGG GGSG(例如SEQ ID NO：74，aa 240-256)))与单独的Fc结构域(例如IgG Fc结构域)融合。一个Fc结构域可以包含杵突变，另一个Fc结构域可以包含相应的臼突变(同样参见图20)。当两条链在宿主细胞中表达时，形成双特异性抗体，其可以通过常规方法从培养上清液中纯化。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段，并且其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
i)第一条链和第二条链，第一条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：33的H-CDR1、含有SEQ ID NO：34的H-CDR2和含有SEQID NO：35的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：37的L-CDR1、含有SEQ ID NO：38的L-CDR2和含有SEQ ID NO：39的L-CDR3，以及
第二条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：55的H-CDR1、含有SEQ ID NO：56的H-CDR2和含有SEQ ID NO：57的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：59的L-CDR1、含有SEQ ID NO：60的L-CDR2和含有SEQID NO：61的L-CDR3；或
ii)第一条链和第二条链，第一条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：121的H-CDR1、含有SEQ ID NO：122的H-CDR2和含有SEQ ID NO：123的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：125的L-CDR1、含有SEQ IDNO：126的L-CDR2和含有SEQ ID NO：127的L-CDR3，以及
第二条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：107的H-CDR1、含有SEQ ID NO：108的H-CDR2和含有SEQ ID NO：109的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：111的L-CDR1、含有SEQ ID NO：112的L-CDR2和含有SEQ ID NO：113的L-CDR3。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段，并且其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
i)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：32，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：36，以及
第二条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQID NO：54，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：58，以及；或
ii)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：120，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：124，以及
第二条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQID NO：106，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：110，以及。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段，并且其中所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含：
i)第一条链和第二条链，其中第一条链包含SEQ ID NO：74，第二条链包含SEQ IDNO：75；或
ii)第一条链和第二条链，其中第一条链包含SEQ ID NO：132，第二条链包含SEQID NO：133。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述人IL-11具有序列SEQ ID NO：1，aa22-199；其中所述人IL-11Ra具有序列SEQ ID NO：3和/或其中所述人gp130是序列SEQ ID：12。
根据另一个方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段与小鼠、大鼠和食蟹猴IL-11交叉反应，特别是对食蟹猴IL-11具有小于100倍、小于30倍、小于15倍或小于5倍不同于其对人IL-11的亲和力。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述IL-11是人IL-11，特别是具有序列SEQID NO：1，aa 22-199的人IL-11。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述IL-11是鼠IL-11，特别是具有序列SEQID NO：16，aa 22-199的鼠IL-11。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述IL-11是食蟹猴IL-11，特别是具有序列SEQ ID NO：17，aa 22-199的食蟹猴IL-11。
分离的抗体或其抗原结合片段与IL-11的结合可以通过Biacore系统的表面等离子体共振(SPR)进行分析，如实施例16中所述，或通过ELISA方法分析，如实施例23和24中所述。测定分离的抗体或其抗原结合片段与IL-11的结合的其他方法包括但不限于使用经由mesoscalediscovery(MSD)的电化学发光方法(ELC)、Luminex平台、免疫-PCR(Lasseter HC等人,2020,Cytokine X；28；2)、放射免疫测定(RIA)、荧光免疫测定(FIA)、热位移测定、LC-MS检测、以及来自Octet system的生物层干涉法(BLI)、以及动力学排阻测定技术，例如/>(Sapidyne Instruments,Inc.,Boise,ID)。KinExA提供了一个平台，允许使用溶液相中的未修饰分子测量平衡结合亲和力和动力学。这是通过使用固相固定化分子在给予足够的时间达到平衡后(亲和力测量)或在预平衡条件下(动力学)探测一种相互作用组分的自由浓度来实现的(Darling RJ等人(2004).ASSAY and Drug DevelopmentTechnologies.2(6):647-657)。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段不与IL2 Ra结合。
如实施例20和26中所示，一些IL-11抗体显示出与IL-2受体α(IL-2Ra或IL-2Ra)的交叉反应性。然而，根据本发明的抗体不与IL2Ra结合，特别是TPP-29603、TPP-29697、TPP-18087、TPP-29536、TPP-29528、TPP-29519、TPP-29520、TPP-29521、TPP-29522、TPP-29523和TPP-23580(参见实施例33)。
根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段可以表现出上述特征的任何组合。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
i.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：33的H-CDR1、含有SEQ ID NO：34的H-CDR2和含有SEQ ID NO：35的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：37的L-CDR1、含有SEQ ID NO：38的L-CDR2和含有SEQ ID NO：39的L-CDR3；或
ii.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：43的H-CDR1、含有SEQ ID NO：44的H-CDR2和含有SEQ ID NO：45的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：47的L-CDR1、含有SEQ ID NO：48的L-CDR2和含有SEQ ID NO：49的L-CDR3；或
iii.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：55的H-CDR1、含有SEQ ID NO：56的H-CDR2和含有SEQ ID NO：57的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：59的L-CDR1、含有SEQ ID NO：60的L-CDR2和含有SEQ ID NO：61的L-CDR3；或
iv.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：65的H-CDR1、含有SEQ ID NO：66的H-CDR2和含有SEQ ID NO：67的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：69的L-CDR1、含有SEQ ID NO：70的L-CDR2和含有SEQ ID NO：71的L-CDR3；或
v.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：83的H-CDR1、含有SEQ ID NO：84的H-CDR2和含有SEQ ID NO：85的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：87的L-CDR1、含有SEQ ID NO：88的L-CDR2和含有SEQ ID NO：89的L-CDR3；或
vi.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：107的H-CDR1、含有SEQ ID NO：108的H-CDR2和含有SEQ ID NO：109的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：111的L-CDR1、含有SEQ ID NO：112的L-CDR2和含有SEQ IDNO：113的L-CDR3；或
vii.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：121的H-CDR1、含有SEQ ID NO：122的H-CDR2和含有SEQ ID NO：123的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：125的L-CDR1、含有SEQ ID NO：126的L-CDR2和含有SEQ IDNO：127的L-CDR3；或
viii.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：137的H-CDR1、含有SEQ ID NO：138的H-CDR2和含有SEQ ID NO：139的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：141的L-CDR1、含有SEQ ID NO：142的L-CDR2和含有SEQ IDNO：143的L-CDR3；或
ix.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：149的H-CDR1、含有SEQ ID NO：150的H-CDR2和含有SEQ ID NO：151的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：153的L-CDR1、含有SEQ ID NO：154的L-CDR2和含有SEQ IDNO：155的L-CDR3；或
x.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：161的H-CDR1、含有SEQ ID NO：162的H-CDR2和含有SEQ ID NO：163的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：165的L-CDR1、含有SEQ ID NO：166的L-CDR2和含有SEQ IDNO：167的L-CDR3；或
xi.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：173的H-CDR1、含有SEQ ID NO：174的H-CDR2和含有SEQ ID NO：175的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：177的L-CDR1、含有SEQ ID NO：178的L-CDR2和含有SEQ IDNO：179的L-CDR3；或
xii.重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ IDNO：185的H-CDR1、含有SEQ ID NO：186的H-CDR2和含有SEQ ID NO：187的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：189的L-CDR1、含有SEQ ID NO：190的L-CDR2和含有SEQ IDNO：191的L-CDR3。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
i.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：32，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：36；或
ii.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：42，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：46；或
iii.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：54，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：58；或
iv.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：64，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：68；或
v.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：82，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：86；或
vi.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：106，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：110；或
vii.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：120，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：124；或
viii.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：136，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：140；或
xi.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：148，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：152；或
x.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：160，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：164；或
xi.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：172，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：176；或
xii.重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：184，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：188。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
i.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：40，轻链包含SEQ ID NO：41；或
ii.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：90，轻链包含SEQ ID NO：91；或
iii.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：92，轻链包含SEQ ID NO：33；或
iv.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：116，轻链包含SEQ ID NO：117；或
v.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：130，轻链包含SEQ ID NO：131；或
vi.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：146，轻链包含SEQ ID NO：147；或
vii.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：158，轻链包含SEQ ID NO：159；或
viii.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：170，轻链包含SEQ ID NO：171；或
ix.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：182，轻链包含SEQ ID NO：183；或
x.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：192，轻链包含SEQ ID NO：193；或
xi.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：194，轻链包含SEQ ID NO：195；或
xii.重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：196，轻链包含SEQ ID NO：197。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是IgG抗体，特别是IgG1或IgG4抗体。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是scFv、Fab、Fab’片段或F(ab’)2片段。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是人、人源化或嵌合抗体或其抗原结合片段，更特别是全人抗体或其抗原结合片段。
根据另一方面，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段与根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段竞争结合IL-11。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是结合IL-11和至少一种其他抗原的单特异性抗体或多特异性抗体，例如双特异性、三特异性或四特异性抗体。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段竞争结合IL-11。
表7：市售抗体的简要描述：
表8：抗体的简要描述：
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通过电子申请与本申请一起提供的序列表全文包括在本文中。SEQ ID NO：1至SEQID NO：31涉及IL-11、IL-11Ra和白细胞介素-6信号转导子(参见表1-6)。SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：80至SEQ ID NO：197涉及本发明的抗体(参见表9-12)。SEQ IDNO：76至SEQ ID NO：79涉及竞争性抗体(参见表9)。
根据本发明的优选单特异性抗体的氨基酸序列列于表8中，根据本发明的优选双特异性抗体的氨基酸序列列于表9中。
表9：根据本发明的优选单特异性抗体的氨基酸序列
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表10：根据本发明的优选双特异性抗体的氨基酸序列
根据本发明的优选抗体的核酸序列列于表11中。
表11：根据本发明的优选抗体的核酸序列
肽变体
本发明的抗体或抗原结合片段不限于本文提供的特定肽序列。相反，本发明还体现了这些多肽的变体。参考本公开内容和常规可用的技术和参考文献，技术人员将能够制备、测试和利用本文公开的抗体的功能变体，同时认识到所述具有结合IL-11能力的变体落入本发明的范围内。
变体可以包括例如相对于本文公开的肽序列具有至少一个改变的互补决定区(CDR)(高变)和/或框架(FR)(可变)结构域/位置的抗体。
通过改变CDR或FR区中的一个或多个氨基酸残基，技术人员常规地可以产生突变的或多样化的抗体序列，其可以针对抗原筛选，例如筛选新的或改善的性质。
本发明的另一个优选实施方案是抗体或抗原结合片段，其中如表8中所示选择VH和VL序列。技术人员可以使用表8中的数据来设计在本发明范围内的肽变体。优选的是，通过改变一个或多个CDR区内的氨基酸来构建变体；变体还可以具有一个或多个改变的框架区。也可以在骨架区中进行改变。例如，肽FR结构域可以在与种系序列相比残基存在偏差的情况下进行改变。
或者，技术人员可以通过将本文公开的氨基酸序列与相同类别的此类抗体的已知序列进行比较来进行相同的分析，使用，例如所述过程例如描述于Knappik A.,等人,JMB2000,296:57-86。
此外，变体可以通过使用一种抗体作为进一步优化的起始点，所述进一步优化通过使抗体中的一个或多个氨基酸残基(优选一个或多个CDR中的氨基酸残基)多样化，并且通过筛选所得抗体变体集合中具有改善的性质的变体来获得。特别优选的是VL和/或VH的CDR3中的一个或多个氨基酸残基的多样化。可以例如通过使用三核苷酸诱变(TRIM)技术合成DNA分子的集合进行多样化(B.等人,Nucl.Acids Res.1994,22:5600.)。抗体或其抗原结合片段包括具有修饰/改变的分子，其包括但不限于例如，导致半衰期改变的修饰(例如，Fc部分或其他连接分子(例如PEG)的修饰)、结合亲和力的改变或ADCC或CDC活性的改变。/>
保守氨基酸变体
可以制备保留本文所述的抗体肽序列的整体分子结构的多肽变体。鉴于单个氨基酸的性质，技术人员将认识到一些合理的取代。氨基酸取代，即“保守取代”，可以例如基于所涉及残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性的相似性来进行。
例如，(a)非极性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；(b)极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；(c)带正电荷的(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸；以及(d)带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。取代通常可以在基团(a)-(d)内进行。此外，甘氨酸和脯氨酸可以基于它们破坏α-螺旋的能力而彼此取代。类似地，某些氨基酸，例如丙氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸和赖氨酸更常见于α-螺旋中，而缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和苏氨酸更常见于β折叠片层中。甘氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺和脯氨酸通常常见于转角中(turn)。一些优选的取代可以在以下组中进行：(i)S和T；(ii)P和G；以及(iii)A、V、L和I。鉴于已知的遗传密码以及重组和合成DNA技术，熟练的科学家可以容易地构建编码保守氨基酸变体的DNA。
糖基化变体
在抗体包含Fc区的情况下，可以改变与其连接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支的双触角寡糖，其通常使用Fc区的CH2结构域的Kabat EU编号通过N-键连接至Asn297，参见例如Wright等人Trends Biotechnol.15:26-32(1997)。
在某些实施方案中，改变本文提供的抗体以增加或降低抗体糖基化的程度。抗体添加或缺失糖基化位点可以通过改变表达系统(例如，宿主细胞)和/或通过改变氨基酸序列使得产生或除去一个或多个糖基化位点来方便地实现。
在本发明的一个实施方案中，通过在原核宿主中表达来制备效应子功能降低的无糖基抗体或抗体衍生物。合适的原核宿主包括但不限于大肠杆菌(E.coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)以及假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)和葡萄球菌属(Staphylococcus)内的各种物种。
在一个实施方案中，提供了效应子功能降低的抗体变体，其特征在于在所述抗体的Fc部分的CH2结构域中的保守N-连接位点处的修饰。在本发明的一个实施方案中，修饰包括在重链糖基化位点处的突变以防止该位点处的糖基化。因此，在本发明的一个优选实施方案中，无糖基抗体或抗体衍生物通过重链糖基化位点的突变(即，使用Kabat EU编号的N297的突变)并在适当的宿主细胞中表达来制备。
在本发明的另一个实施方案中，无糖基抗体或抗体衍生物的效应子功能降低，其中在所述抗体或抗体衍生物的Fc部分的CH2结构域中的保守N连接位点处的修饰包括除去CH2结构域聚糖(即，去糖基化)。这些无糖基抗体可以通过常规方法产生，然后酶促去糖基化。用于抗体的酶促去糖基化的方法是本领域周知的(例如Winkelhake&Nicolson(1976),JBiol Chem.251(4):1074-80)。
在本发明的另一个实施方案中，可以使用糖基化抑制剂衣霉素实现去糖基化(Nose&Wigzell(1983),Proc Natl Acad Sci USA,80(21):6632-6)。换言之，所述修饰是防止所述抗体的Fc部分的CH2结构域中的保守N-连接位点处的糖基化。
在一个实施方案中，提供了具有碳水化合物结构的抗体变体，所述碳水化合物结构缺乏(直接或间接)连接在Fc区的岩藻糖。例如，此类抗体中岩藻糖的量可以为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。岩藻糖的量通过计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量相对于通过MALDI-TOF质谱法测量的连接至Asn 297的所有糖结构的总和(例如，复合物，杂交和高甘露糖结构)来确定，例如描述于WO 2008/077546。Asn 297是指位于Fc区中约位置297处的天冬酰胺残基(Fc区残基的Eu编号)；然而，由于抗体中的微小序列变异，Asn297也可以位于位置297上游或下游约±3个氨基酸，即，在位置294和300之间。此类岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能。
与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺陷”抗体变体相关的出版物的实例包括Okazaki等人J Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。
能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13CHO细胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；和WO 2004/056312)，以及敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因、FUT8、敲除CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006))。
还提供了具有二等分寡糖的抗体变体，例如，其中连接至抗体Fc区的双触角寡糖被GlcNAc二等分。此类抗体变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如WO 2003/011878；美国专利号6,602,684；和US2005/0123546。
还提供了在连接至Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可具有改善的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO1997/30087；WO1998/58964；和WO1999/22764。
FC区变体
在某些实施方案中，一个或多个氨基酸修饰(例如，取代)可以引入本文中提供的抗体的Fc区(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，从而产生Fc区变体。
在某些实施方案中，本发明涵盖具有一些但并非全部效应子功能的抗体变体，这使得其成为一些应用的理想候选物，所述应用中抗体在体内的半衰期是重要的但某些效应子功能(例如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消耗。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合能力(因此可能缺乏ADCC活性)但保留FcRn结合能力。在一些实施方案中，在Fc区中进行改变，其导致改变的(即，增加或减少)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在一些实施方案中，根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段在抗体的Fc部分中包含沉默突变。抗体的Fc部分中的此类沉默突变是例如但不限于E233P、L234V、L235A、ΔG236、D265G、A327Q、或A330S或更优选地E233P、L234V、L235A、ΔG236、D265G、A327Q、和A330S(Durben等人,2015,Mol Ther.2015Apr；23(4):648-55和EP2794658)。其他Fc工程化实例包括人IgG4变体L235E或F234A/L235A和人IgG1变体L234A/L235A(“LALA”；Xu等人,Cell Immunol 2000Feb25；200(1):16-26)。另一种旨在降低效应子功能的早期方法是用突变(例如N297A、N297Q和N297G)使N297处的糖基化位点突变(“aglycosylation”；Bolt等人,Eur J Immunol.1993Feb；23(2):403-11；Tao和Morrison,J Immunol.1989Oct 15；143(8):2595-601；Walker等人,Biochem J.1989Apr 15；259(2):347-53；Leabman等人,MAbs Nov-Dec2013；5(6):896-903)。另一种变化是降低效应子功能的交叉亚类方法，如批准的抗C5治疗性依库珠单抗所例示，其携带来自IgG2的CH1和铰链区，但携带来自IgG4的CH2和CH3。其他实例包括人IgG1中的L234F/L235E/P331S(“FES”；Oganesyan等人,Acta Crystallogr DBiol Crystallogr.2008Jun；64(Pt 6):700-4)、人IgG1中的P329G/L234A/L235A(“PG-LALA”；Schlothauer等人,Protein Eng Des Sel 2016Oct；29(10):457-466)、“IgG1sigma”(L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S,Tam等人,Antibodies(Basel)2017Sep1；6(3):12)、“IgG1-NNAS”(S298N/T299A/Y300S,Zhou等人,MAbs Jan-Dec 2020；12(1):1814583)(根据Eu命名法编号；Edelman et al.,Proc Natl Acad Sci USA.1969May；63(1):78-85；Kabat等人,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEdition.U.S.Department of Health and Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health,NIH Publication No.91-3242)。
在一些实施方案中，根据本发明的分离的双特异性抗体或抗原结合片段在抗体的Fc部分中包含相应的杵/臼(杵臼结构)突变。杵臼方法是通过在每个半抗体的CH3结构域中用突变驱动异源二聚化来产生双特异性抗体的有效方式，所述突变例如但不限于使数个CH3氨基酸残基突变，即苏氨酸(T)366突变为色氨酸(W)作为“杵”半抗体，苏氨酸(T)366突变为丝氨酸(S)，亮氨酸(L)368突变为丙氨酸(A)，酪氨酸(Y)407突变为缬氨酸(V)作为“臼”半抗体。
在某些实施方案中，本发明涵盖半衰期增加或减少的抗体变体。半衰期增加并且与新生儿Fc受体(FcRn)的结合增强的抗体，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人,JImmunol.117:587(1976)和Kim等人,J Immunol.24:249(1994))，描述于US2005/0014934(Hinton等人)。所述抗体包含其中具有一个或多个取代的Fc区，所述取代增强Fc区与FcRn的结合。例如但不限于，突变“YTE”(M252Y/S254T/T256E)和等同突变，已经显示出通过临床前物种以及人类的核内体中更有效地再循环从而显著延长半衰期。消除FcRn与抗体的Fc部分之间的相互作用，例如，H435A导致半衰期极短，因为抗体不再被FcRn再循环保护而免于溶酶体降解。
根据另一方面，本发明涵盖抗体缀合物，其包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段。
抗体产生
本发明的抗体可以衍生自重组抗体文库，所述重组抗体文库基于已经从大量健康志愿者的抗体中例如使用技术分离的氨基酸序列，将全人CDR重组成新的抗体分子(Carlson&/>Expert Rev Mol Diagn.2001May；1(1):102-8)。或者可替代地，例如抗体文库作为在Hoet RM等人,Nat Biotechnol 2005；23(3):344-8中描述的全人抗体噬菌体展示文库用于分离IL-1特异性抗体。从人抗体文库分离的抗体或抗体片段在本文中被认为是人抗体或人抗体片段。
人抗体可以通过向转基因动物给予免疫原来进一步制备，所述转基因动物已经被修饰以响应抗原攻击产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，其替代内源性免疫球蛋白基因座，或其存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。例如，基因工程小鼠的免疫特别可以进行hMAb小鼠(例如或/>)的免疫。/>
可以使用杂交瘤技术(例如参见和Milstein Nature.1975Aug7；256(5517):495-7)产生另外的抗体，产生例如鼠、大鼠或兔抗体，其可转化为嵌合或人源化抗体。人源化抗体及其制备方法综述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)，并且进一步描述于例如Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；Queen等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述特异性决定区(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“重铺”)；Dall'Acqua等人,Methods 36:43-60(2005)(描述“FR重排”)；以及Osboum等人,Methods 36:61-68(2005)；以及Klimka等人,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR重排的“引导选择”方法)。
提供了使用重组抗体文库产生抗体的实例。
根据本发明的DNA分子
根据另一方面，本发明涵盖编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸序列。
根据另一方面，本发明涵盖包含根据本发明的核酸序列的载体。
本发明还涉及编码根据本发明的抗体或抗原结合片段的分离的核酸序列。编码根据本发明的抗体或抗原结合片段的分离的核酸序列可以例如通过Sambrook等人,1989和Ausubel等人,1989中描述的技术产生，或者通过化学合成(例如OligonucleotideSynthesis(1984,Gait,ed.,IRL Press,Oxford)中描述的技术)产生。用于表达抗体的DNA序列在表2中给出。这些序列在某些情况下被优化用于哺乳动物表达。本发明的DNA分子不限于本文公开的序列，还包括其变体。本发明的DNA变体可通过参考它们在杂交中的物理性质来描述。本领域技术人员将认识到，DNA可用于鉴定其互补物，并且由于DNA是双链的，因此可使用核酸杂交技术鉴定其等同物或同源物。他们还将认识到，杂交可以以小于100％的互补性发生。然而，在适当选择条件的情况下，杂交技术可用于基于DNA序列与特定探针的结构相关性来区分DNA序列。有关此类条件的指导，参见Sambrook等人,1989supra和Ausubel等人,1995(Ausubel,F.M.,Brent,R.,Kingston,R.E.,Moore,D.D.,Sedman,J.G.,Smith,J.A.,&Struhl,K.eds.(1995).Current Protocols in Molecular Biology.NewYork:John Wiley and Sons)。
两个多核苷酸序列之间的结构相似性可以表示为两个序列可以彼此杂交的条件的“严格性”的函数。如本文所用，术语“严格性”是指条件不利于杂交的程度。严格条件极度不利于杂交，并且只有结构上最相关的分子在此类条件下可以彼此杂交。相反，非严格条件有利于显示较低程度结构相关性的分子杂交。因此，杂交严格性与两个核酸序列的结构关系直接相关。
杂交严格性是多种因素的函数，包括总DNA浓度、离子强度、温度、探针尺寸和破坏氢键的试剂的存在。促进杂交的因素包括高DNA浓度、高离子强度、低温、较长的探针尺寸和不存在破坏氢键的试剂。杂交通常分两个阶段进行：“结合”阶段和“洗涤”阶段。
功能等同的DNA变体
本发明范围内的另一类DNA变体可参考其编码的产物进行描述。这些功能等同的多核苷酸的特征在于由于遗传密码的简并性而编码相同的肽序列。
应当认识到，本文提供的DNA分子的变体可以以几种不同的方式构建。例如，其可以被构建为完全合成的DNA。有效合成寡核苷酸的方法是广泛可用的。参见Ausubel等人,section 2.11,Supplement 21(1993)。重叠寡核苷酸可以以Khorana等人,J.Mol.Biol.72:209 217(1971)首先报道的方式进行合成和组装；同样参见Ausubel等人,supra,Section8.2。合成DNA优选地设计有在基因的5’和3’末端工程化的方便的限制性位点，以便于克隆到适当的载体中。
如文所示，产生变体的方法是从本文公开的DNA之一开始，然后进行定点诱变。参见Ausubel等人,supra,chapter 8,Supplement 37(1997)。在典型的方法中，将靶DNA克隆到单链DNA噬菌体载体中。分离单链DNA并与含有所需核苷酸改变的寡核苷酸杂交。合成互补链，并将双链噬菌体引入宿主。所得后代中的一些将含有所需突变，这可以使用DNA测序来确认。此外，可以使用各种方法增加子代噬菌体将是所需突变体的概率。这些方法是本领域技术人员周知的，并且用于产生此类突变体的试剂盒是市售可得的。
重组DNA的构建与表达
根据另一方面，本发明涵盖包含根据本发明的核酸序列的载体。
根据另一方面，本发明涵盖表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段的分离的细胞，其包含根据本发明的核酸或根据本发明的载体。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖表达根据本发明的抗体或其抗原结合片段的分离的细胞，其包含根据本发明的核酸或根据本发明的载体，其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。
根据另一方面，本发明涵盖产生根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的方法，包括培养根据本发明的细胞和任选地纯化所述抗体或抗原结合片段的方法。
本发明进一步提供了包含一种或多种根据本发明的核苷酸序列的重组DNA构建体。本发明的重组构建体可以与载体(例如质粒、噬菌粒、噬菌体或病毒载体)结合使用，其中插入编码本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体的DNA分子。
因此，在一个方面，本发明涉及包含根据本发明的核酸序列的载体。
本文提供的抗体、抗原结合部分或其变体可通过在宿主细胞中重组表达编码轻链和重链或其部分的核酸序列来制备。为了重组表达抗体、抗原结合部分或其变体，可以用一种或多种携带编码轻链和/或重链或其部分的DNA片段的重组表达载体转染宿主细胞，使得轻链和重链在宿主细胞中表达。标准重组DNA方法用于制备和/或获得编码重链和轻链的核酸，将这些核酸掺入重组表达载体中，并将载体引入宿主细胞中，所述方法例如描述于Sambrook,Fritsch和Maniatis(eds.),Molecular Cloning；A Laboratory Manual,SecondEdition,Cold Spring Harbor,N.Y.,(1989),Ausubel,F.M.等人(eds.)CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates,(1989)和Boss等人的美国专利号4,816,397。
此外，编码重链和/或轻链可变区的核酸序列可转化为例如编码全长抗体链、Fab片段的核酸序列或scFv。编码VL或VH的DNA片段可以可操作地连接(使由两个DNA片段编码的氨基酸序列在框内)至编码例如抗体恒定区或柔性接头的另一DNA片段。人重链和轻链恒定区的序列是本领域已知的(参见例如Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteinsof Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)，并且包含这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。
为了产生编码scFv的多核苷酸序列，编码VH和VL的核酸可操作地连接至编码柔性接头的另一片段，使得VH和VL序列可表达为连续单链蛋白，其中VL和VH区通过柔性接头连接(参见例如Bird等人(1988)Science 242:423-426；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；McCafferty等人,Nature(1990)348:552-554)。
为了表达抗体、其抗原结合片段或其变体，可以使用标准重组DNA表达方法(参见例如Goeddel；Gene Expression Technology.Methods in Enzymology 185,AcademicPress,San Diego,Calif.(1990))。例如，可将编码所需多肽的DNA插入表达载体中，然后将其转染到合适的宿主细胞中。合适的宿主细胞是原核和真核细胞。原核宿主细胞的实例是例如，细菌，真核宿主细胞的实例是酵母、昆虫和昆虫细胞、植物和植物细胞、转基因动物或哺乳动物细胞。将重组构建体引入宿主细胞可以使用标准技术进行，例如磷酸钙转染、DEAE葡聚糖介导的转染、电穿孔、转导或噬菌体感染。
在一些实施方案中，将编码重链和轻链的DNA插入单独的载体中。在其他实施方案中，将编码重链和轻链的DNA插入相同载体中。应当理解，表达载体的设计，包括调控序列的选择，受到例如宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平以及表达是组成型还是诱导型的因素的影响。
因此，在另一方面，本发明涉及表达根据本发明的抗体或抗原结合片段和/或包含根据本发明的核酸或根据本发明的载体的分离的细胞。
分离的细胞实际上可以是表达载体可用的任何细胞。分离的细胞可以是例如高等真核宿主细胞，例如哺乳动物细胞，低等真核宿主细胞，例如酵母细胞，并且可以是原核细胞，例如细菌细胞。
在另一方面，本发明涉及产生根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的方法，其包括培养根据本发明的细胞。在具体实施方案中，在适合抗体表达的条件下培养根据本发明的细胞，并回收抗体或抗原结合片段。在具体实施方案中，将抗体或抗原结合片段纯化，特别是纯化至按重量计至少95％的均质性。
细菌表达
用于细菌用途的有用的表达载体通过将编码所需蛋白质的DNA序列与合适的翻译起始和终止信号一起插入具有功能性启动子的可操作阅读相中来构建。载体将包含一个或多个表型选择标记和复制起点，以确保载体的维持，并且如果需要，以提供宿主内的扩增。用于转化的合适的原核宿主包括但不限于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌以及假单胞菌属、链霉菌属和葡萄球菌属内的各种物种。
细菌载体可以是例如基于噬菌体、质粒或噬菌粒的。这些载体可以含有选择标记和细菌复制起点，其来源于通常含有众所周知的克隆载体pBR322(ATCC 37017)元件的市售质粒。在转化合适的宿主菌株并使宿主菌株生长至合适的细胞密度后，通过合适的方法(例如，温度变化或化学诱导)阻遏/诱导所选择的启动子，并将细胞再培养一段时间。通常通过离心收获细胞，通过物理或化学手段破碎，并保留所得粗提取物用于进一步纯化。
在细菌系统中，可根据所表达的蛋白质的预期用途有利地选择多种表达载体。例如，当需要产生大量的所述蛋白质时，为了产生抗体或筛选肽文库，例如，易于纯化的指导融合蛋白产物的高水平表达的载体可能是期望的。
因此，本发明的一个实施方案是包含编码本发明的新型抗体的核酸序列的表达载体。
本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体包括天然纯化的产物、化学合成方法的产物和通过重组技术从原核宿主(包括例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌以及假单胞菌属、链霉菌属和葡萄球菌属内的各种物种，优选来自大肠杆菌细胞)产生的产物。
哺乳动物表达
用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调控序列包括指导哺乳动物细胞中高水平蛋白质表达的病毒元件，例如启动子和/或增强子，其源自巨细胞病毒的(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒。抗体的表达可以是组成型的或受调控的(例如，可通过添加或除去小分子诱导剂(例如四环素)与Tet系统联合诱导)。为了进一步描述病毒调控元件及其序列，参见例如Stinski的U.S.5,168,062、Bell等人U.S.4,510,245和Schaffner等人U.S.4,968,615。重组表达载体还可以包括复制起点和选择标记(参见例如U.S.4,399,216,4,634,665和U.S.5,179,017)。在已经引入载体的宿主细胞上，合适的选择性标记包括赋予对药物(例如G418、嘌呤霉素、潮霉素、杀稻瘟菌素、博来霉素或甲氨蝶呤的)抗性的基因，或利用营养缺陷型的选择性标记(例如谷氨酰胺合成酶)(Bebbington等人,Biotechnology(NY).1992Feb；10(2):169-75)。例如，二氢叶酸还原酶(DHFR)基因赋予对甲氨蝶呤的抗性，neo基因赋予对G418的抗性，来自土曲霉(Aspergillus terreus)的bsd基因赋予对杀稻瘟菌素的抗性，嘌呤霉素N-乙酰转移酶赋予对嘌呤霉素的抗性，Sh ble基因产物赋予对博莱霉素的抗性，以及对潮霉素的抗性由大肠杆菌潮霉素抗性基因(hyg或hph)赋予。选择性标记(如DHFR或谷氨酰胺合成酶)也可用于与MTX和MSX结合的扩增技术。
可以使用标准技术将表达载体转染到宿主细胞中，例如电穿孔、核转染、磷酸钙沉淀、脂质转染、基于聚阳离子的转染(例如基于聚乙烯亚胺(PEI)的转染)和DEAE-葡聚糖转染。
用于表达本文提供的抗体、其抗原结合片段或其变体的合适哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)，例如CHO-K1、CHO-S、CHO-K1SV[包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220和Urlaub等人,Cell.1983Jun；33(2):405-12，其与DHFR选择标记(例如描述于R.J.Kaufman和P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159:601-621)和其他敲除细胞(例示于Fan等人,BiotechnolBioeng.2012Apr；109(4):1007-15)一起使用]，NS0骨髓瘤细胞、COS细胞、HEK293细胞、HKB11细胞、BHK21细胞、CAP细胞、EB66细胞和SP2细胞。
在表达系统中的表达也可能是瞬时的或半稳定的，例如HEK293、HEK293T、HEK293-EBNA、HEK293E、HEK293-6E、HEK293-Freestyle、HKB11、Expi293F、293EBNALT75、CHOFreestyle、CHO-S、CHO-K1、CHO-K1SV、CHOEBNALT85、CHOS-XE、CHO-3E7或CAP-T细胞(例如Durocher等人,Nucleic Acids Res.2002Jan 15；30(2):E9)。
在一些实施方案中，表达载体被设计为使表达的蛋白质分泌到宿主细胞在其中生长的培养基中。抗体、其抗原结合片段或其变体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。
纯化
本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体可以通过众所周知的方法从重组细胞培养物中回收和纯化，所述方法包括但不限于硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、蛋白A层析、蛋白G层析、阴离子或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羟基磷灰石层析和凝集素层析。高效液相色谱(“HPLC”)也可用于纯化，参见例如Colligan,Current Protocols in Immunology,or Current Protocols in Protein Science,JohnWiley&Sons,NY,N.Y.,(1997-2001)，例如1、4、6、8、9、10章，每章节全文通过引用纳入本文。
本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体包括天然纯化的产物、化学合成方法的产物和通过重组技术从真核宿主(包括例如酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)产生的产物。取决于重组生产方法中使用的宿主，本发明的抗体可以是糖基化的或可以是非糖基化的。在许多标准实验室手册中描述了所述方法，例如Sambrook，如上所述，17.37-17.42节；Ausubel，如上所述，10、12、13、16、18和20章。
在优选的实施方案中，抗体被纯化(1)至大于按抗体重量计95％，其例如通过Lowry法、UV-Vis光谱法或通过SDS毛细管凝胶电泳(例如在Caliper LabChip GXII、GX 90或Biorad Bioanalyzer装置上)测定，并且在进一步优选的实施方案中大于按重量计99％，(2)至足以获得N末端或内部氨基酸序列至少15个残基的程度，或(3)通过在还原或非还原条件下使用考马斯亮蓝或优选银染色的SDS-PAGE测定均一性。分离的天然存在的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。
治疗方法
治疗方法涉及向需要治疗的受试者给予治疗有效量的本发明涵盖的抗体或其抗原结合片段或其变体。“治疗有效的”量在此定义为抗体或其抗原结合片段的量，其量足以减少在大量月经出血、异常子宫出血或继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症的大量月经出血期间的失血-其作为单剂量或根据多剂量方案，单独或与导致不良状况的减轻的其他药剂组合，但其量是毒理学可耐受的。受试者可以是人或非人动物(例如兔、大鼠、小鼠、狗、猴或其他低级灵长类动物)。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段，或包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的缀合物，或包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的药物组合物，其用于治疗或预防疾病。
根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段可用作多种IL-11相关病症和/或与异常子宫出血相关的疾病的治疗或诊断工具。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段或根据本发明的抗体缀合物用作诊断剂的用途。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的用途，其用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的用途。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段在治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的方法中的用途。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段用于制备药物组合物(优选药剂)的用途，所述药物组合物用于治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据另一方面，本发明涵盖使用有效量的根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段治疗和/或预防异常子宫出血、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的方法。
根据本发明的所有方面的一个实施方案，涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血是大量月经出血、长期出血或出血模式改变的出血。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血是大量月经出血，并且其中大量月经出血继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血与痛经相关。
根据所有方面的另一个实施方案，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段，其用于治疗和/或预防异常子宫出血，其中异常子宫出血与继发于子宫平滑肌瘤或子宫内膜异位症的痛经相关。
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段或根据本发明的缀合物或根据本发明的药物组合物用于抑制或调节月经的用途。
根据本发明的抗体或抗原结合片段或其变体可以与已知药物共同给药，并且在一些情况下，抗体或其抗原结合片段本身可以被修饰。例如，抗体或其抗原结合片段或其变体可以与药物或另一种肽或蛋白质缀合以潜在地进一步增加功效。
本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体可以作为单一药剂或与一种或多种另外的治疗剂组合给药，其中所述组合不引起不可接受的不良作用。
因此，在另一方面，本发明涉及根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段或根据本发明的缀合物或根据本发明的药物组合物，其用于与一种或多种其他治疗活性化合物同时、分开或顺序组合使用。
所述其他活性化合物的优选实例包括但不限于：选择性雌激素受体调节剂(SERM)，雌激素受体(ER)拮抗剂、芳香酶抑制剂、17β-HSD1抑制剂、类固醇硫酸酯酶(STS)抑制剂、GnRH激动剂和拮抗剂、吻蛋白受体(KISSR)拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂(SARM)、雄激素、5α-还原酶抑制剂、选择性孕酮受体调节剂(SPRM)、孕激素、抗孕激素、口服避孕药、促分裂原活化蛋白(MAP)激酶抑制剂和MAP激酶抑制剂(Mkk 3/6、Mek 1/2、Erk 1/2)、蛋白激酶B抑制剂(PKBα/β/γ；Akt 1/2/3)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK 1/2)抑制剂、缺氧诱导的信号传导途径抑制剂(HIF1α抑制剂、脯氨酰羟化酶激活剂)、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、前列腺素F受体(FP)(PTGFR)拮抗剂和非甾体炎症抑制剂(NSAID)。
例如，本发明的抗体或其片段可以与已知的抗过度增殖、细胞抑制或细胞毒性物质组合用于治疗癌症。此外，本发明的药剂还可以与放射疗法和/或手术干预组合使用。
合适的组合活性成分的实例包括但不限于：
131I-chTNT、阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龙(abiraterone)、阿克拉霉素(aclarubicin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维A酸(alitretinoin)、六甲蜜胺(altretamine)、氨格鲁米特(aminoglutethimide)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、阿格拉宾(arglabin)、arsentrioxidas、天门冬酰胺酶(asparaginase)、阿扎胞苷(azacitidine)、巴利昔单抗(basiliximab)、RDEA 119、倍罗替康(belotecan)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、(bleomycin)、博来霉素(bortezomib)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、亚叶酸钙(calcium folinate)、左亚叶酸钙(calcium levofolinate)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡妥索单抗(catumaxomab)、塞来昔布(celecoxib)、西莫白介素(celmoleukin)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、氯化孕酮(chlormadinone)、氮芥(chlormethine)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯膦酸(clodronic acid)、氯法拉滨(clofarabine)、天冬酰胺酶(crisantaspase)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、阿法达依泊汀(darbepoetin alfa)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地诺单抗(denosumab)、德舍瑞林(deslorelin)、二溴螺氯铵(dibrospidium chloride)、多西他赛(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、阿霉素(doxorubicin)、阿霉素+雌酮(doxorubicin+oestrone)、依库珠单抗(eculizumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依利醋铵(elliptinium acetate)、艾曲波帕(eltrombopag)、内皮抑素(endostatin)、依诺他滨(enocitabine)、表柔比星(epirubicin)、硫雄甾醇(epitiostanol)、阿法依泊汀(epoetin alfa)、倍他依泊汀(epoetin beta)、依铂(eptaplatin)、艾日布林(eribulin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌二醇(oestradiol)、雌莫司汀(oestramustine)、依托泊苷(etoposide)、依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、非格司亭(filgrastim)、氟达拉滨(fludarabine)、氟脲嘧啶(fluorouracil)、氟他胺(flutamide)、福美司坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、氟维司群(fulvoestrant)、硝酸钙(gallium nitrate)、加尼瑞克(ganirelix)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥单抗(gemtuzumab)、谷胱甘肽(glutoxim)、戈舍瑞林(goserelin)、组胺二盐酸盐(histamine dihydrochloride)、组氨瑞林(histrelin)、硫酸羟脲(hydroxycarbamide)、I-125颗粒、伊班膦酸(ibandronicacid)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、柔红霉素(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、英丙舒凡(improsulfan)、干扰素α(interferon alfa)、干扰素β(interferon beta)、干扰素γ(interferon gamma)、伊匹木单抗(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、兰瑞肽(lanreotide)、拉帕替尼(lapatinib)、来那度胺(lenalidomide)、来格司亭(lenograstim)、香菇多糖(lentinan)、来曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、麦角乙脲(lisuride)、洛铂(lobaplatin)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、马索罗酚(masoprocol)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美法仑(melphalan)、美雄烷(mepitiostan)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、氨基乙酰丙酸甲酯(methylaminolevulinate)、甲睾酮(methyltestosterone)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米铂(miriplatin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托瓜酮(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奈达铂(nedaplatin)、奈拉滨(nelarabine)、尼洛替尼(nilotinib)、尼鲁米特(nilutamide)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、尼莫司汀(nimustine)、二胺硝吖啶(nitracrine)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥美拉挫(omeprazole)、奥沙利铂(oxaliplatin)、p53基因治疗、紫杉醇(paclitaxel)、帕利夫明(palifermin)、钯-103颗粒、帕米磷酸(pamidronic acid)、帕尼单抗(panitumumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、培门冬酶(pegaspargase)、(pEG-依泊汀β(甲氧基PEG-依泊汀β))、培非格司亭(pegfilgrastim)、聚乙二醇干扰素α-2b(peginterferon alfa-2b)、培美曲塞(pemetrexed)、喷他佐辛(pentazocine)、喷司他丁(pentostatin)、培洛霉素(peplomycin)、培磷酰胺(perfosfamid)、毕西巴尼(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、普乐沙福(plerixafor)、普卡酶素(plicamycin)、壳聚糖(poliglusam)、聚磷酸雌二醇(polyoestradiolphosphate)、多糖-K(polysaccharide-K)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、甲基苄肼(procarbazine)、喹高利特(quinagolide)、氯化镭-223(radium-223chloride)、雷洛昔芬(raloxifen)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司汀(ranimustine)、雷佐生(razoxane)、瑞戈非尼(regorafenib)、利塞膦酸(risedronic acid)、利妥昔单抗(rituximab)、罗米地辛(romidepsin)、罗米司亭(romiplostim)、沙格司亭(sargramostim)、普罗文奇(sipuleucel-T)、sizofiran、sobuzoxan、甘氨双唑钠(sodium glycididazole)、索拉非尼(sorafenib)、链脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉泊芬钠(talaporfin)、他米巴罗汀(tamibarotene)、他莫昔芬(tamoxifen)、他索尔明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、替加氟(tegafur)、替加氟+吉美嘧啶+奥替拉西(tegafur+gimeracil+oteracil)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、坦罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾酮(testosterone)、替曲膦(tetrofosmin)、沙利度胺(thalidomide)、噻替哌(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、硫鸟嘌呤(tioguanine)、托珠单抗(tocilizumab)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲贝替定(trabectedin)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲奥舒凡(treosulfan)、维生素A酸(tretinoin)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林(triptorelin)、曲磷胺(trofosfamide)、色氨酸(tryptophan)、乌苯美司(ubenimex)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、维莫非尼(vemurafenib)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏立诺他(vorinostat)、伏氯唑(vorozole)、钇-90玻璃微珠(yttrium-90glass microspheres)、净司他丁(zinostatin)、净司他丁苯马聚合物(zinostatin stimalamer)、唑来膦酸(zoledronic acid)、佐柔比星(zorubicin)。
本发明优选涉及药物，其包含至少一种根据本发明的抗体或其抗体片段和一种或多种以下活性成分，尤其用于治疗和/或预防类固醇受体依赖性增殖性疾病：
-LHRH(黄体生成素释放激素)激动剂，
-LHRH(黄体生成素释放激素)拮抗剂，
-C(17,20)-裂合酶抑制剂，
-I型5-α-还原酶抑制剂，
-II型5-α-还原酶抑制剂，
-混合I/II型5-α-还原酶抑制剂，
-用于治疗骨转移癌的α-辐射放射性药物，例如氯化镭-223，
-细胞抑制剂，
-VEGF(血管内皮生长因子)激酶抑制剂，
-抗促孕激素，
-抗雌激素，
-EGF抗体，
-激素或
-聚(ADP-核糖)聚合酶I抑制剂，或
-偶联至细胞表面蛋白的双特异性T细胞衔接子(BiTE)，例如前列腺特异性膜抗原(PSMA)。
根据另一个方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段或包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的缀合物或包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的药物组合物，其用于与一种或多种其他治疗活性化合物同时、分开、或顺序组合使用。
组合疗法包括给予包含根据本发明的抗体或抗原结合片段或其变体和一种或多种另外的治疗剂的单一药物剂量制剂，以及给予根据本发明的抗体或抗原结合片段和单一药物剂量制剂中的每种另外的治疗剂。例如，本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体和治疗剂可以在单一液体组合物中一起给予患者，或每种药剂可以在单一剂量制剂中给药。
在使用分开的剂量制剂的情况下，根据本发明的抗体或抗原结合片段或其变体和一种或多种另外的治疗剂可以在基本上相同的时间(例如，同时地)或在分开交错的时间(例如，顺序地)给药。
根据本发明的抗体或其抗原结合片段或其变体可与手术干预组合使用，所述手术干预例如但不限于肌瘤切除术、子宫动脉栓塞或子宫内膜异位病变的腹腔镜或常规手术，尤其是用于此类手术干预后的治疗。
诊断方法
根据另一方面，本发明涵盖根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段或包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段的缀合物，其用作诊断剂。
此外，根据本发明的抗体或抗原结合片段可以以原样或在组合物中、在研究和诊断中或作为分析参考标准等使用。IL-11抗体或其抗原结合片段可用于检测IL-11的存在。
药物组合物和给药
根据另一方面，本发明涵盖药物组合物，其包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段或根据本发明的抗体缀合物和任选地一种或多种药学上可接受的赋形剂。
为了治疗任何前述病症，根据本发明使用的药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体、赋形剂或助剂以任何常规方式配制。关于配制和给药技术的进一步细节可以在最新版的Remington's Pharmaceutical Sciences(Ed.Maack Publishing Co,Easton,Pa.)中找到。
根据本发明的抗体或抗原结合片段可以通过任何合适的方式给药，所述方式可以根据所治疗病症的类型而变化。可能的给药途径包括口服、肠胃外和局部给药。肠胃外递送的方法包括但不限于动脉内、肌内、皮下、髓内、鞘内、心室内、静脉内、腹膜内、眼内或鼻内给药。此外，根据本发明的抗体或抗原结合片段可以例如以降低的抗体剂量通过脉冲注射给药。优选地，通过注射给药，最优选通过静脉内或皮下注射，其部分取决于给药是短期的还是长期的。待给药的量将取决于多种因素，例如临床症状、个体的体重、是否给予其他药物等。本领域技术人员将认识到，给药途径将根据待治疗的病症或病况而变化。
根据本发明的药物组合物包含根据本发明的抗体或抗原结合片段，其单独或与至少一种其它药剂(例如稳定化合物)组合。根据本发明的抗体或其抗原结合片段可以在任何无菌的生物相容性药物载体中给药，所述载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖和水。在具体实施方案中，根据本发明的药物组合物可以包含一种或多种其他药学活性化合物，特别是适合于治疗IL-11相关病症和/或与异常子宫出血相关的病症的一种或多种其他药学活性化合物。所述药剂中的任一种可单独或与其它药剂或药物组合以药物组合物形式给予患者，其中所述药物组合物与赋形剂或药学上可接受的载体混合。在具体实施方案中，药学上可接受的载体是药学上惰性的。
用于口服给药的药物组合物可以使用本领域众所周知的药学上可接受的载体以适合于口服给药的剂量配制。所述载体使药物组合物能够被配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供患者摄取。
用于口服使用的药物制剂可以通过将活性化合物与固体赋形剂组合来获得，如果需要，任选地研磨所得混合物，并在添加合适的助剂(如果需要)后加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂是碳水化合物或蛋白质填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来自玉米、小麦、水稻、马铃薯或其它植物的淀粉；纤维素，例如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；以及凝胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及蛋白质，例如明胶和胶原。如果需要，可以添加崩解剂或增溶剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或其盐，例如藻酸钠。
糖衣丸芯可以提供合适的包衣，例如浓缩糖溶液，其还可以含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可加入片剂或糖衣丸包衣中用于产品鉴定或表征活性化合物的量(即剂量)。
可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入式胶囊，以及由明胶和包衣(例如甘油或山梨醇)制成的软密封胶囊。推入式胶囊可含有与填充剂或粘合剂(例如乳糖或淀粉)、润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)和任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇，其含有或不含有稳定剂。
用于肠胃外给药的药物制剂包括活性化合物的水溶液。对于注射，本发明的药物组合物可以配制在水溶液中，优选配制在生理学相容的缓冲液中，例如Hank溶液、Ringer溶液或生理缓冲盐水。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。另外，活性化合物的悬浮液可以制备为适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油(例如芝麻油)，或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)，或脂质体。任选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度以允许制备高度浓缩溶液的试剂。
对于局部或经鼻给药，在制剂中使用适合于待渗透的具体屏障的渗透剂。所述渗透剂通常是本领域已知的。
本发明的药物组合物可以以本领域已知的方法制备，例如通过常规的混合、溶解、造粒、制糖衣、研磨、乳化、包封、包埋或冻干方法。
药物组合物可以作为盐提供，并且可以用酸制成，所述酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于更易溶于相应游离碱形式的水性或其它质子溶剂中。在其他情况下，优选的制剂可以是在1mM-50mM组氨酸或磷酸盐或Tris、0.1％-2％蔗糖和/或2％-7％甘露醇中的冻干粉末，pH范围为4.5至7.5，任选地包含额外的物质，如聚山梨醇酯，其在使用前与缓冲液组合。
在制备包含配制在可接受载体中的本发明化合物的药物组合物后，可以将它们置于适当的容器中并标记用于治疗指定病症。对于IL-11抗体或其抗原结合片段的给药，所述标记将包括给药的量、频率和方法。
治疗有效量
适用于根据本发明使用的药物组合物包括组合物，所述组合物包含有效量的活性成分以实现预期目的，例如，治疗以局部或完全血管闭塞引起的缺血事件为特征的具体疾病状态。
有效剂量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。确定本发明的新型抗体或其抗原结合片段或其变体的治疗有效量将在很大程度上取决于具体的患者特征、给药途径和所治疗的病症的性质。一般的指导可以在例如国际人用药品注册技术协调会出版物和REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES，27和28章，484-528页中(18th ed.,AlfonsoR.Gennaro,Ed.,Easton,Pa.:Mack Pub.Co.,1990)找到。更具体地，确定治疗有效量将取决于例如药物的毒性和功效等因素。毒性可以使用本领域众所周知的并且在前述参考文献中发现的方法来确定。功效可以利用相同的指导结合下文实施例中描述的方法来确定。
对于任何化合物，治疗有效剂量可以在细胞培养测定中或在动物模型(通常是小鼠、兔、狗、猪或猴)中初步估计。动物模型还用于实现期望的浓度范围和给药途径。然后可以使用所述信息来确定用于人类给药的有用剂量和途径。
治疗有效剂量是指改善症状或病况的抗体或其抗原结合片段的量。此类化合物的治疗功效和毒性可通过标准药学方法在细胞培养物或实验动物中测定，例如，ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)和LD50(对50％的群体致死的剂量)。治疗效果和毒性效果之间的剂量比是治疗指数，并且其可以表示为比率ED50/LD50。表现出大治疗指数的药物组合物是优选的。从细胞培养测定和动物研究中获得的数据用于配制供人使用的剂量范围。此类化合物的剂量优选在包括ED50的循环浓度范围内，具有极少毒性或没有毒性。剂量在该范围内变化，其取决于所采用的剂型、患者的敏感性和给药途径。
精确剂量由个体医师鉴于待治疗的患者来选择。调整剂量和给药以提供足够水平的活性部分或维持所需效果。可以考虑的其他因素包括疾病状态的严重程度、患者的年龄、体重和性别；饮食、给药时间和频率、药物组合、反应敏感性和对治疗的耐受性/响应。长效药物组合物可以例如每3至4天、每周、每两周一次或每三周一次给药，其取决于特定制剂的半衰期和清除率。
正常剂量可以从0.1至100,000微克变化，直至约10g的总剂量，其取决于给药途径。文献中提供了关于具体剂量和递送方法的指导。参见美国专利号4,657,760；5,206,344；或5,225,212。
试剂盒
根据另一方面，本发明试剂盒包含根据本发明的分离的抗体或抗原结合片段或根据本发明的抗体缀合物或根据本发明的药物组合物和使用说明书。
在具体实施方案中，试剂盒包含一个或多个容器，所述容器填充有本发明的前述组合物的一种或多种成分。与所述容器相关的可以是由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定形式的通知，反映该机构批准制造、使用或销售用于人类给药的产品。
实施例和附图
虽然已经在附图和前面的描述中详细说明和描述了本发明，但所述的说明和描述被认为是说明性的或示例性的而非限制性的；本发明不限于所公开的实施方案。通过研究附图、公开内容和所附权利要求，本领域技术人员在实施所要求保护的发明时可以理解和实现所公开的实施方案的其他变型。任何附图标记不应被解释为限制范围。本文公开的所有氨基酸序列从N末端至C末端示出；本文公开的所有核酸序列显示为5’->3’。
实施例
本文所示的实验清楚地支持IL-11和/或IL-11RA作为靶标，其抑制效果(包括变构抑制)为异常子宫出血(如大量月经出血、长期出血或改变的出血模式)以及与AUB相关的平滑肌瘤、子宫内膜异位症或月经和痛经提供了治疗选择。
实施例1：用AF418处理的鼠HMB模型中的出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中，测试了功能封闭IL-11抗体对月经的影响。用雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Scid beige小鼠[Charles River Sulzfeld,Deutschland]接受每周两次9mg/kg皮下(s.c.)注射对照抗体或IL-11功能封闭多克隆抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA]持续16天。卵巢切除术后一周，雌性Scid beige小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
结果示于图2中。与对照抗体组TPP-12904(失血76.4μl+/-17.9μl SD)相比，可以确定功能封闭抗体处理组AF418(失血17.9μl+/-12.7μl SD)中失血的显著减少(双尾t检验，p<0.0001)。
实施例2：用AF418处理的鼠HMB模型中子宫重量的减少
在月经的小鼠模型中，测试了功能封闭IL-11抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA]对子宫重量的影响。用雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段。组织的蜕膜化用子宫内油应用进一步诱导，其描述于文献(例如Menning(2012))，并在图1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Scid beige小鼠接受每周两次9mg/kg皮下(s.c.)注射对照抗体或IL-11功能封闭抗体持续16天。卵巢切除术后一周，雌性Scid beige小鼠连续三天接受皮下注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。四天后在实验结束时(第15天)处死小鼠，称重并收获子宫用于进一步分析。
对子宫重量的影响结果如图3所示。与对照抗体组[来自R&D Systems,Inc.的AB-108-C]相比，确定功能封闭抗体处理组中子宫重量的显著降低(70.1mg+/-25.5mg SD(AF418)相对于297.9mg+/-162.1mg SD(AB-108-C(TPP12904)))。
通过功能封闭IL-11抗体抑制IL-11/IL-11RA信号传导途径[AF-418-NA，来自R&DSystems，Inc.]对于大量月经出血(实施例1，图2)和子宫重量(实施例2，图3)显示出非常强的作用。因此，这些出人意料的结果导致IL-11/IL-11RA功能封闭强烈减弱月经的结论。因此，对于子宫内膜异位症的逆行性月经模型(Sampson，1927)，逆行性月经是子宫内膜异位症发病机制的先决条件。此外，逆行性月经也不例外，其在月经中正常发生。然而，已经显示并怀疑大量月经也显示出逆行性月经增加，因此与发生子宫内膜异位症的更高风险相关(综述参见Laux-Biehlmann等人,2015)。除了在子宫内膜异位症发病机制中的重要性外，逆行性月经还导致腹膜炎症、疼痛和炎性疼痛。可以想象的是，月经的减少或完全抑制也将极大减少逆行性月经，从而减少子宫内膜异位症和子宫内膜异位症相关症状。此外，对于子宫内膜异位症而言众所周知的是，在腹膜腔内异位子宫内膜的活动性病变(例如，红色病变)也受月经周期调节。这种异位组织使子宫内膜脱落，并显示出腹腔内出血(Burney&Lathi,2009)。因此，“腹膜内月经”除逆行性月经外，进一步导致腹膜炎症、疼痛和炎性疼痛(Laux-Biehlmann等人,2015)。“腹膜内月经”可进一步传播腹膜腔内的新异位病变。通过抑制IL-11/IL-11RA信号传导，可以极大防止逆行性月经和“腹膜内月经”。随后，腹膜中新病变的建立以及子宫内膜异位症相关的腹膜炎症和炎性疼痛将缓解。事实上，目前可用的促性腺激素释放激素(GnRH)类似物或拮抗剂的短期治疗干预也消除了月经，这有助于其总体有益效果。然而，对例如骨代谢的强烈副作用使得其禁止长期治疗。相反，IL-11/IL-11RA的拮抗剂或抑制剂将不具有所述限制。
实施例3：用AF418处理的原发性人纤维瘤切片测定中VEGF-A分泌的抑制
在原发性人纤维瘤切片测定中，测试了IL-11[来自R&D Systems,Inc.的218-IL]和功能封闭IL-11抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA]对血管生成介质的影响。诱导血管生成增强了血管化，其可能有助于增进平滑肌瘤生长。用Krumdick组织切片机将来自41岁患者的原发性人纤维瘤组织切成0.4mm切片(直径5mm)，并在PBS中洗涤。将切片在含有5％胎牛血清(FCS)的细胞培养基w/o L-Tryp中孵育过夜。将切片在48孔板中的400μl培养基中与IL-11[来自R&D Systems,Inc.的218-IL]、对照抗体[来自R&D Systems,Inc.的AB-108-C]或IL-11功能封闭抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA]一起进一步孵育24小时。
结果示于图4中。IL-11显著诱导VEGF-A的分泌(72.2ng/mg蛋白+/-29.8ng/mg蛋白SD)，其被IL-11功能封闭抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA](17.3ng/mg蛋白+/-6.4ng/mg蛋白SD)的额外处理完全抑制。VEGF-A是一种众所周知的促血管生成介质，其受IL-11诱导，可导致平滑肌瘤血管化增加和平滑肌瘤生长增强。统计检验：用于多重比较的Bonferroni校正的普通单因素方差分析(*＊＊*p<0.0001)。
实施例4：用AF418处理的鼠HMB模型中的动物重量
如实施例1和2中所指出的，通过功能封闭IL-11抗体抑制IL-11信号传导途径对大量月经出血(图2)和子宫重量(图3)两者显示出显著影响。因此，所述结果得出结论，IL-11功能封闭极大缓解月经并导致闭经。对于专家来说，避免或缓解月经和诱发闭经是治疗原发性和继发性痛经的有效方法，与持续应用孕激素所证明的(Power等人,2007；Sachedina&Todd,2020)。因此，能够结合并抑制或拮抗IL-11作用的药剂将是原发性和继发性痛经的有效治疗。为了验证这一假设，在大量月经出血模型(图1)中测量月经开始前(第12天)和出血期结束时(第15天)的动物体重作为健康状况的标志物。
如图5所示，与TPP-12904对照-抗体处理的动物(21％+/-4.5％SD。统计检验：双尾t检验，*＊＊*p<0.0001)相比，AF414 IL-11拮抗性抗体处理的动物显示出体重损失的缓解(12.1％+/-2.4％SD)。
实施例5：用AF418和MAB218处理的鼠HMB模型中的出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中，测试了市售功能封闭IL-11抗体对月经的影响。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Scid beige小鼠[Charles River Sulzfeld,Deutschland]接受每周两次20mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体[来自R&DSystems,Inc.的Mab-218]或小鼠IgG2A对照抗体[TPP-10748]、IL-11功能封闭单克隆抗体[来自R&D Systems,Inc.的Mab-418]或其大鼠IgG2A对照抗体[TPP-10750]，或每周两次5mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭多克隆抗体[来自R&D Systems,Inc.的AF-418-NA]持续16天。卵巢切除术后一周雌性Scid beige小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
结果示于图6中。在MAb218人IL-11功能封闭抗体治疗组中，大量月经出血(HMB)显著缓解(45μl+/-18μl SD，相对于对照组(mAb)TPP-10748的86μl+/-43μl SD；p<0.05)，但在Scid beige小鼠中Mab418小鼠IL-11功能封闭抗体处理组中没有缓解(79μl+/-18μl SD，相对于对照组(rAb)TPP-10750的99μl+/-36μl SD)。多克隆AF-418小鼠IL-11功能封闭抗体再次显示出强抑制(23μl+/-10μl SD，相对于对照组(rAb)TPP-10750的99μl+/-36μl SD；p<0.0001)。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析进行检验。
实施例6：用TPP-18068和TPP-18063处理的鼠HMB模型中的出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中，测试了功能封闭IL-11抗体对月经的影响。这些抗体通过抗体淘选鉴定，并显示不同的体外活性，例如对重组IL-11的结合效力。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次20mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体TPP-18063或TPP-18068或小鼠IgG1对照抗体[TPP-10159]持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图7示出了单克隆抗体对Balb/c小鼠月经出血的抑制，与同种型对照抗体TPP-10159(失血50μl+/-29μl SD)相比，IL-11功能封闭抗体TPP-18068显著抑制月经出血(失血17μl+/-12μl SD)，但IL-11功能封闭抗体TPP-18063没有抑制(失血36μl+/-28μl SD)。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析进行检验(**p<0.01)。
实施例7：用TPP-18068处理的鼠HMB模型中的剂量依赖性出血减少
实施例7示出了活性IL-11功能封闭抗体TPP-18068与同种型对照抗体(TPP-10159)相比对月经出血的剂量依赖性作用。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，与20mg/kgIgG对照抗体[TPP-10159]相比，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次20mg/kg、5mg/kg或1mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体TPP-18068持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图8示出了在Balb/c小鼠的大量月经出血模型中，IL-11功能封闭抗体TPP-18068对月经出血的剂量依赖性抑制，与20mg/kg对照抗体TPP-10159(失血37μl+/-12μl SD)相比，每周两次皮下注射1mg/kg的TPP-18068没有抑制(失血39μl+/-14μl SD)，但5mg/kg(失血19μl+/-11μl SD)或20mg/kg(失血19μl+/-9μl SD)有显著抑制作用。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析进行检验(**p<0.01)。
实施例8：用TPP-18068处理的鼠HMB模型的动物活性
如实施例1和2中所指出的，通过功能封闭IL-11抗体抑制IL-11信号传导途径对大量月经出血(图2)和子宫重量(图3)两者显示出显著影响。因此，所述结果得出结论，IL-11功能封闭极大缓解月经并减少出血，甚至导致闭经。对于专家来说，避免或缓解月经和诱发闭经是治疗原发性和继发性痛经的有效方法，与持续应用孕激素所证明的(Power等人,2007；Sachedina&Todd,2020)。因此，能够结合并抑制或拮抗IL-11作用的药剂将是原发性和继发性痛经的有效治疗。除如实施例4中所述的体重测量之外，还可以在旷场分析中评价运动和探索的主要行为测试中进行健康的测量(Murbach等人,2014)。将动物暴露于旷场环境中的新环境。在ActiMoT(TSE系统)中监测水平和垂直活动。压力小、痛苦少或健康状况良好的动物更活跃。
在大量月经出血的小鼠模型中，评价了功能封闭IL-11抗体在旷场分析中对运动和探索的影响。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Balb/c小鼠[Janvier Labs]接受每周两次20mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体TPP-18068或IgG1对照抗体[TPP-10159]持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。P4停药后两天，在ActiMoT(TSE系统)中在5分钟的时间段内监测水平和垂直活动。
如图9所示，用IL-11拮抗性抗体TPP-18068处理的9只动物更活跃。它们表现出探索行为增强，如在行进距离(每5分钟以米为单位的水平活动)(30.6m/5min+/-11.6m/5minSD；双尾t检验：*p<0.05)和站立(垂直活动，5分钟内的站立次数)(26.4/5min+/-12.2/5min；双尾t检验：**p<0.01，分别地)中所观察的，与TPP-10159对照Ab处理的动物相比(水平活动19.1m/5min+/-3.6m/5min；直立12.5/5min+/-7.0/5min)，两者均显著增加，这表明压力更小、痛苦更少或总体上健康状况增强。
实施例9：用TPP-18068处理的动物(鼠HMB模型)的蜕膜化子宫角中的Stat 3磷酸化
IL-11与IL-11受体结合。二聚体与负责进一步下游信号传导的Gp130结合。信号传导导致细胞内蛋白激酶的活化和“信号转导和转录激活因子3”(STAT3)的磷酸化(Harmegnies等人(2003))。在子宫内膜分化中IL-11的活化增强STAT3的磷酸化。其在导致鼠子宫内膜分化的大量月经出血的改良小鼠模型中进行分析。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括在鼠子宫的仅一角用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次20mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体TPP-18063或TPP-18068或IgG1对照抗体[TPP-10159]持续13天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出子宫，称重并分离子宫角。分离后立即将蜕膜化子宫角和未蜕膜化子宫角的片段分别转移到含有具有磷酸和总蛋白封闭试剂(cisbiocat#64KB1AAD)的裂解缓冲液(cisbio cat#64KL1FDF)的小管中，并在液氮中快速冷冻。对于样品制备，将组织在冰上解冻并均质化。使用裂解/封闭缓冲液确定蛋白质浓度以产生2mg/ml蛋白质稀释液。随后，根据制造商方案，通过使用来自cisbio的磷酸化STAT3(Tyr705)细胞试剂盒#62AT3PEG和总STAT3细胞试剂盒#64NT3PEG测量磷酸化Stat3和总Stat3。
图10示出了子宫内膜分化对子宫Stat3磷酸化的影响和通过IL-11封闭对该信号传导的抑制。与用对照抗体TPP-10159处理的未分化子宫角(相对值1.18+/-0.03SD)相比，在用对照抗体TPP-10159处理的动物的分化子宫角(相对值2.07+/0.13SD)中Stat3磷酸化在第12天显著增加。与对照抗体TPP-10159(相对值2.07+/0.13SD)相比，IL-11功能封闭抗体TPP-18068降低了蜕膜化子宫角中的Stat3磷酸化(TPP-18068处理的动物中的相对值1.56+/-0.25SD，与TPP-10159处理的动物中的相对值2.07+/0.13SD相比)，但第12天时在HMB模型中的未蜕膜化子宫角中无降低(TPP-18068处理的动物中的相对值1.2+/-0.04，相对于TPP-10159处理的动物中的相对值1.18+/0.03SD)。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析进行检验(**p<0.01；*＊*p<0.001)。
实施例10：用TPP-18068或TPP-26195处理的鼠HMB模型中的出血减少和子宫重量减少
IL-11功能封闭抗体TPP-18068对鼠大量月经出血模型中小鼠的大量月经出血、子宫内IL-11信号传导和健康状况迹象的缓解显示出剂量依赖性显著作用，如实施例6-9中所示。作为经典IgG抗体，该抗体具有用于IL-11结合的两个相同结合位点。通过与不同表位的结合位点组合，产生双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195，如实施例34所示。单特异性TPP-18068和衍生的双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195对月经出血的影响在Balb/cAnN小鼠[Janvier]的鼠大量月经出血模型中进行测试，与其各自的对照IgG抗体和另外在WO2019238882中描述为IL-11功能封闭，在本文中命名为BSN 3C6 2.2-2.1-mIgG1Kappa(TPP-23580)的小鼠IgG1形式的IL-11抗体进行比较。
此外，在用IL-11功能封闭双抗原位点抗体TPP-26195或对照抗体处理四只动物的大量月经出血模型的第12天准备子宫。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，与15mg/kg IgG其各自的IgG对照抗体[TPP-10159和TPP-27360]相比，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次15mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭单克隆抗体TPP-18068或TPP-26195持续16天。此外，测试了WO2019238882中描述为IL-11功能封闭，在本文中命名为BSN 3C62.2-2.1-mIgG1Kappa(TPP-23580)的小鼠IgG1形式的IL-11抗体。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图11示出了与其对照IgG抗体TPP-10159(失血36.8μl+/-12.2SD)或TPP-27360(失血41.2μl+/-17.0μl)相比，在Balb/c小鼠中分别每周两次皮下给药15mg/kg IL-11功能封闭抗体TPP-18068(失血20.7μl+/-5.6μl SD；**p<0.01)和衍生的双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195(失血16.4μl+/-1.2μl SD；*p<0.001)对月经出血的显著缓解。与对照IgG抗体TPP-10159(失血36.8μl+/-12.2μl SD)相比，WO2019238882中描述为IL-11功能封闭，在本文中命名为BSN 3C6 2.2-2.1-mIgG1Kappa(TPP-23580)的小鼠IgG1形式的IL-11抗体(失血30.8μl+/-19μl SD)显示出在所选的每周两次皮下给药15mg/kg对大量月经出血没有显著影响。显著性通过双尾Mann-Whitney检验确定。
图12示出了与对照IgG抗体相比，在Balb/c小鼠中双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195对子宫分化的减弱，其通过测量鼠大量月经出血模型(n＝4)第12天的子宫重量得出。与对照抗体TPP-27360处理组(454.8mg+/-339.8mg SD)相比，双抗原位点抗体TPP-26195强烈抑制子宫内膜分化，其通过子宫重量极大降低(55.6mg+/-20.8mg SD)表明。显著性通过单尾t检验确定：*p<0.05。
实施例11：用TPP-26195处理的鼠HMB模型中的剂量依赖性出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中，与其小鼠IgG1对照抗体相比，剂量依赖性地测试了双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195对月经的影响。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次10mg/kg或3mg/kg或0.3mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭双抗原位点抗体TPP-26195或每周两次10mg/kg其小鼠IgG1对照抗体[TPP-27360]持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图13示出了与每周两次用10mg/kg对照IgG抗体TPP-27360(失血41.8μl+/-26.8μlSD)处理的组相比，在Balb/c小鼠中每周两次皮下给药10mg/kg(失血14.4μl+/-7.0μlSD；**p<0.01)、3mg/kg(失血11.7μl+/-1.1μl SD；*＊*p<0.001)、1mg/kg(失血17.4μl+/-9.2μl SD；**p<0.01)和0.3mg/kg(失血27.5μl+/-21.9μl SD)双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195对月经出血的剂量依赖性缓解，在每周两次皮下给药10、3或1mg/kg表现出显著抑制。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析进行计算。
实施例12：用TPP-29603、TPP-29528和TPP-29519处理的鼠HMB模型中的出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中测试了与小鼠IgG1对照抗体(TPP-10159)相比，双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603或IL-11功能封闭抗体TPP-29528或TPP-29519对月经的影响。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，与每周两次1.4mg/kg小鼠IgG1对照抗体[TPP-10159]相比，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次等摩尔皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭双抗原位点抗体TPP-29603(1mg/kg)或每周两次分别注射IL-11功能封闭抗体TPP-29528(1.39mg/kg)或TPP-29519(1.4mg/kg)或更低剂量抗体TPP-29519(0.42mg/kg)持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图14示出了与对照IgG-抗体TPP-10159(失血35.5μl+/-27.2μl SD)相比，在Balb/c小鼠中通过等摩尔给药双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603(失血13.8μl+/-4.1μlSD)和抗体TPP-29528(失血26.5μl+/-20.2μl SD)和TPP-29519(失血12.7μl+/-2.4μl SD)缓解月经出血。此外，还示出了较低剂量的抗体TPP-29519(失血33.5μl+/-19.0μl SD)。该实验证明IL-11功能封闭抗体TPP-29603和TPP-29519在等摩尔剂量下显著抑制月经出血。显著性通过用于多重比较的Dunnett校正的单因素方差分析进行计算(对数标准化值)：**P<0.01。
实施例13：用TPP-29523处理的鼠HMB模型中的剂量依赖性出血减少
在大量月经出血的小鼠模型中剂量依赖性测试了与其小鼠IgG1对照抗体(TPP-10159)和极低剂量的双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603相比，IL-11功能封闭抗体TPP-29523对月经的影响。通过雌二醇(E2)和孕酮(P4)补充/停药方案诱导卵巢切除小鼠的人工月经周期阶段，包括用子宫内油应用诱导蜕膜化，其例如描述于Menning(2012)，并在图1和实施例1中概述。简言之，在卵巢切除术后6天开始，雌性Balb/cAnN小鼠[Janvier]接受每周两次2mg/kg或0.7mg/kg或0.3mg/kg皮下(s.c.)注射IL-11功能封闭抗体TPP-29523或2mg/kg其小鼠IgG1对照抗体TPP-10159或每周两次0.143mg/kg双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603持续16天。卵巢切除术后一周雌性Balb/c小鼠连续三天接受皮下(s.c.)注射100ng 17α-雌二醇(E2)的乙醇/花生油(1：9)溶液(图1)。3天休息后，在小鼠背部皮下植入释放孕酮(P4)的硅胶管(0.5mg P4/天)，随后连续三天进一步给予5ng E2。在最后一次E2治疗的同时，向一个子宫角注射50μl芝麻油以诱导蜕膜化。4天后，取出P4植入物以开始P4停药。为了定量失血的总量，在P4停药时将棉塞样棉垫(4-4.8mm直径，Roeko,Coltene/Whaledent,Altstatten,Switzerland)插入小鼠阴道中。每天更换棉塞两次，并分别为每只小鼠收集三天。血容量通过其他文献(Hallberg&Nilsson,1964)报道的碱性血红素法定量。简言之，将棉塞在室温下干燥。将血红素色原溶解于1000μl 5％NaOH(w/v)中并在室温下旋转过夜。在ELISA Reader中在546nm的波长下测量洗脱液的光密度。基于从静脉血制备的标准品的回归曲线计算棉拭子中所含的血容量。
图15示出了与给药2mg/kg(失血43.5.8μl+/-27.9μl SD)的对照IgG-抗体TPP-10159相比，在Balb/c小鼠中每周两次皮下注射给药2mg/kg(失血22.9μl+/-1.5μl SD)、0.7mg/kg(失血21.0μl+/-3.1μl SD)和0.3mg/kg(失血24.5μl+/-3.5μl SD)IL-11功能封闭抗体TPP-29523对月经出血的剂量依赖性缓解。此外，测试了每周两次皮下注射给药0.143mg/kg双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603(失血43.11μl+/-7.9μl SD)。在所有每周两次给药的测试中，数据已经证明IL-11功能封闭抗体TPP-29523对月经出血的显著抑制(**p<0.01)。显著性通过用于多重比较的单因素方差分析和Dunnett事后检验进行计算。
实施例14-20示出了TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528的产生和表征
实施例14：从BioInvent抗体文库产生TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528
使用全人抗体噬菌体展示文库(BioInvent n-CoDeR Fabλ文库)通过针对可溶性生物素化IL11抗原的选择来分离人单克隆抗体。使用来自市售来源的IL-11：人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)、鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819-09)、食蟹猴IL-11(Invigate，例如，批号#C290621-19)。使用Sulfo-NHS-LC-生物素试剂盒(ThermoScientificTM；目录号A39257)对抗原进行生物素化。通过用适当的缓冲液透析从反应中除去游离生物素。
对于图16中示意性示出的淘选程序，应用以下方案：将链霉亲和素偶联的免疫磁珠M-280(InvitrogenTM)在室温(RT)下分别用生物素化抗原(1管)和生物素化脱靶物(3管)包被1小时。洗涤Dynabeads，随后在室温下通过翻滚式旋转封闭1小时。为了消耗脱靶结合剂，将封闭的噬菌体文库添加到封闭的脱靶物装载的免疫磁珠中，并在室温下通过翻滚式旋转孵育10分钟。重复该消耗步骤2次。将耗尽的噬菌体文库添加到封闭的靶标装载的免疫磁珠中，并在室温下通过翻滚式旋转孵育60分钟。经过严格洗涤(3x封闭缓冲液和9x PBS(150mM NaCl；8mM Na2HPO4；1.5mM KH2PO4；调节至pH＝7.4-7.6)，0.05％Tween-20)后，具有特异性结合到包被的靶标的Fab-噬菌体的免疫磁珠被直接用于感染大肠杆菌菌株HB101。随后，使用M13K07辅助噬菌体(InvitrogenTM)在大肠杆菌菌株HB 101中扩增噬菌体。在随后的选择轮次中，降低靶标浓度以增加对高亲和力结合剂的选择压力。在该文库的淘选期间，进行两种不同的选择策略以鉴别显示针对人、小鼠和/或食蟹猴IL-11的交叉反应性的抗体。在第一策略中，人靶标用于前两轮淘选，而在第二策略中，鼠靶标用于前两轮淘选。在两种策略中，第二轮的扩增噬菌体随后在第三轮中针对人、鼠和食蟹猴IL-11进行平行淘选。
对于第一次定性评估，随机挑取来自每个克隆池的88个Fab-噬菌体克隆并接种到填充有补充100μg/ml氨苄青霉素和1％葡萄糖的100μg/ml LB培养基的平底96孔板中。在37℃过夜培养后，用5μl过夜培养物接种到填充有补充100μl氨苄青霉素的100μl LB培养基的新平底96孔板。将接种的板在37℃下孵育3小时。3小时后，添加补充有100μl/ml氨苄青霉素、200μM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和M13KO7辅助噬菌体(6×109噬菌斑形成单位/ml)的100μl LB培养基，并将板在37℃下进一步孵育30分钟，然后在30℃下孵育过夜。第二天，测试包含表达的Fab-噬菌体分子的上清液以与淘选之前使用的相应靶标(人、小鼠和食蟹猴IL-11)的结合。“结合剂”已被定义为Fab-噬菌体分子，其在ELISA测定(参见下文)中显示出至少为非结合对照Fab-噬菌体分子的平均信号强度加10倍标准偏差(非靶标结合Fab-噬菌体的平均值+10×标准偏差)的信号强度。ELISA测定如下进行：将384孔链霉亲和素板(Greiner)在4℃下用生物素化的人或小鼠IL-11(30μl的1μg/ml PBS溶液)或生物素化的非靶标对照蛋白(30μl的1μg/ml PBS溶液)包被过夜。弃去包被溶液，使用包含0.05％Tween(PBST)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤板，随后使用溶解在PBST中的3％无脂奶粉封闭1小时。在使用PBST的单个洗涤步骤之后，添加30μl/孔来自表达培养物的含有Fab-噬菌体的上清液，并将板在室温(RT)下孵育1小时。在使用PBST的另一个单个洗涤步骤之后，将30μl溶解于PBST中的1/5000稀释的与辣根过氧化物酶(GE Healthcare)缀合的抗M13抗体添加到每个孔中，随后在室温下孵育1小时。在使用PBST的最后一次洗涤步骤之后，添加30μl底物溶液(Amplex Red，Invitrogen)。在室温下避光孵育15分钟步骤后，在荧光酶标仪(Tecan)中使用535nm的激发和590nm的发射检测测量荧光信号。
提取并纯化来自第三轮的6个池中显示出显著命中率的质粒-DNA。然后用限制性内切酶方法从质粒上切下基因III，再次连接质粒并转化到大肠杆菌TOP10。通过去除基因III，表达形式从Fab-噬菌体变为可溶性Fab。如下制备可溶Fab：从转化板挑取单个细菌菌落并接种到填充有补充100μg/ml氨苄青霉素和1％葡萄糖的50μL LB培养基的平底384孔板中，随后是在37℃下孵育过夜的步骤。第二天，将2μl/孔过夜培养物转移到新的预填充有50μl/孔补充有100μg/ml氨苄青霉素和200μM IPTG的LB培养基的平底384孔表达板中。将表达板在30℃下孵育过夜。第二天，在基于ELISA的高通量筛选(HTS-ELISA)中分别对人和鼠IL-11测试10μl Fab表达培养物。HTS-ELISA的结构和实施类似于先前描述的Fab-噬菌体ELISA并具有以下变化。使用Smart Block(Candor)作为封闭试剂，使用抗c-myc抗体辣根过氧化物酶缀合物(Bethyl)作为检测抗体。
实施例15：重组DNA构建体和全长抗体的表达、纯化和定量
从淘选活动中，选择两种潜在的抗体候选物用于进一步表征。将相应的Fab片段重新格式化为全长鼠IgG1分子。将重链和轻链克隆到pTT5载体系统(National ResearchCouncil Canada,NRC file 11266)中，并使用标准瞬时转染程序在HEK293细胞中表达。简言之，对于小规模转染，在转染两天前，用F17培养基(Invitrogen,#A13835-01)将HEK293细胞稀释至0.5×106细胞/mL，F17培养基(Invitrogen,#A13835-01)用10mL/L 10％PluronicF68(Invitrogen；#24040-32)溶液补充至125mL聚碳酸酯锥形摇瓶中的总体积22.5mL。转染当天的细胞密度应为1.7×106细胞/mL。在转染当天，将25μg DNA在1.25mL转染培养基(F17培养基+Pluoronic，如上所述)和50μl 1mg/mL的聚乙烯亚胺(Polysciences，#23966)中解冻，即，将50μg加入另一个1.25ml转染培养基中。涡旋两种溶液，随后将聚乙烯亚胺(PEI)溶液转移至DNA溶液。将混合物再次涡旋并在室温下孵育15分钟。在将DNA-PEI混合物添加至细胞并立即旋转烧瓶之后，将细胞在加湿培养箱中在37℃、5％CO2下孵育5天。
收集上清液，并依次通过蛋白A色谱法和尺寸排阻色谱法纯化抗体。收获后，将上清液浓缩并过滤(孔径0.2μm)并装载到HiTrap MabSelect SuRe柱(Cytiva)上。将柱在DPBS(pH 7.4)中平衡，偶联至Pure25系统(Cytiva)。用10CV洗涤柱，并用6CV洗脱缓冲液(50mM乙酸+50mM NaCl，pH 3.0)进行洗脱。合并峰级分，并使用3M Tris pH 9.0中和。浓缩合并物(Vivaflow 200 30kDa膜[Hydrosart 30kDa])并通过0.2μm过滤器过滤。通过分析型SEC(SEC样品用DPBS pH 7.4稀释至2mg/ml)分析捕获步骤合并物。接着，使用偶联至/>Pure 25系统的Superdex 200SEC柱(Cytiva)进行制备型SEC运行。使用2CV DPBS(pH 7.4)平衡SEC柱，装载样品，并用1.5CV DPBS(pH 7.4)洗脱柱。合并峰级分。浓缩峰级分并无菌过滤(孔径0.2μm)。使用Nanodrop UV分光光度计(Thermo)在280nm处的吸光度测定抗体溶液的最终浓度。将抗体等分，在液氮中速冻并储存在-80℃。
最后，获得所得抗体TPP-18063、TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528。
实施例16：通过SPR分析的TPP-18063、TPP-18068、TPP 18087和TPP-19528的结合亲和力
以测定TPP-18068、TPP-18087、TPP-19528以及市售IL-11抗体TPP-14250(R&DSystems，#MAB218)的结合亲和力的基于SPR的实验在Biacore T200仪器(GE Healthcare)上在25℃下使用测定缓冲液HBS EP+、300mM NaCl、1mg/ml BSA、0.05％NaN3运行。通过抗小鼠Fc IgG(“小鼠抗体捕获试剂盒”，订单号BR100383，Cytiva)共价胺偶联至Series S CM5传感器芯片(Cytiva)捕获抗体。根据制造商的说明书，使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和乙醇胺HCl(pH 8.5)(“胺偶联试剂盒”BR-1000-50，Cytiva)进行胺偶联。人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)和鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819-09)用作分析物。首先，使用200nM IL-11进行单浓度结合实验以确定大致的亲和力。基于该实验，选择IL-11浓度范围以最佳地确定多循环动力学模式中抗IL-11抗体的动力学和亲和力。在每次抗原注射后，用甘氨酸pH 1.7再生传感器表面。将获得的传感图进行双重参考(减去参考流动池信号和缓冲液注射)，并使用BiacoreT200评估软件或Biacore Insight软件将获得的传感图拟合至1：1Langmuir结合模型以导出动力学数据。结果示于表E1中。
表E1：TPP-18063、TPP-18068、TPP 18087、TPP-19528和TPP-14250的结合亲和力
抗体 KD[M]:人IL11 KD[M]:小鼠IL11
TPP-14250 1.9E-08 3.8E-09
TPP-18063 5.3E-08 1.0E-08
TPP-18068 4.8E-08 7.2E-10
TPP-18087 5.3E-08 4.2E-08
TPP-19528 1.1E-08 9.0E-09
实施例17：通过使用报告基因测定，用TPP-18063、TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528抑制IL-11介导的信号传导
在报告基因测定中测量TPP-18063、TPP-18068、TPP-18087、TPP-19528、市售IL-11抗体TPP-14250(MAB218)和同种型对照TPP-10159对人IL-11和小鼠IL-11介导的Stat3信号传导的封闭活性。简言之，先前通过重组DNA技术产生的相应的人IL11RA(SEQ ID NO：7)或小鼠Il11ra(SEQ ID NO：10)表达质粒与报告基因质粒(pNL[NlucP/SIE/Hygro]Vector，Promega#CS189701)共转染到HEK 293F细胞中。将每孔10000个转染细胞接种到平底384孔板(Corning，#354660)中，然后在37℃、5％CO2下孵育过夜。第二天，在细胞培养基中制备4E-7至5.5E-10[M](最终测定稀释度)的TPP-18068、TPP-18087、TPP-19528、TPP 14250和TPP-10159的系列稀释液，所述细胞培养基含有固定浓度的0.78[nM]人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)或3.13[nM]鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819-09)。固定的人/鼠IL11浓度应等于报告基因测定中人/鼠IL剂量反应治愈的EC40值并已预先确定。将抗体/抗原的混合物在室温下孵育30分钟。作为阴性对照，同样在不存在抗体和IL11的情况下孵育细胞。此后，弃去细胞上方的培养基，每孔加入25μl混合物，并与细胞在37℃下孵育5小时。此后，将25μl/孔的在Nano-Luc缓冲液(Promega，N1120)中稀释(1：50)的Nano-Luc底物(Promega，N1120)添加到板中。将板在室温下避光孵育3分钟，然后通过微量滴定板读数器测量发光。使用来自剂量反应的信号通过GraphPad Prism(GraphPad Software，SanDiego)计算IC50值。功效计算为[(在不存在抗体的情况下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在不存在抗体的情况下的信号-在不存在IL11的情况下测量的信号)。结果示于表E2中。
表E2：TPP-18063、TPP-18068、TPP 18087和TPP-19528对IL-11介导的信号传导的抑制
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)；
*功效计算为[(在不存在抗体的情况下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在不存在抗体的情况下的信号-在不存在IL11的情况下测量的信号)。
实施例18：在双复合物ELISA中分析的TPP-18063、TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528对IL-11和IL-11Ra的相互作用的抑制
在双复合物ELISA形式中，测试抗IL-11抗体干扰由固定的鼠IL-11组成的复合物形成的能力(Invigate，例如，批号#C210819-09)或人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)和鼠IL11RA-Fc融合蛋白或犬IL11RA-人-FC融合蛋白(图17a，b)。
为了测试鼠IL-11抗体干扰固定的鼠或人IL-11与犬IL11RA-人-Fc融合蛋白的复合物形成的能力，如下所述用犬IL11RA-Fc(Sino Biological，#70078-D02H)和抗人-POD(Sigma，#A0170)进行测定，以允许检测。
为了测试人IL-11抗体干扰固定的鼠或人IL-11与鼠IL11 RA-Fc融合蛋白的复合物形成的能力，如下所述进行测定，除了用鼠IL11 RA-Fc融合蛋白(R&D System，#7405-MR)代替犬IL11RA-Fc融合蛋白，允许用抗鼠IgG(Fc特异性)-过氧化物酶(Jackson，#715-035-)代替抗人POD进行检测。
使用链霉亲和素包被的微量滴定板(Greiner bio-one,#781997)进行测定。在第一步中，将10nM生物素化的小鼠IL-11(Invigate,Germany,例如，批号#C210819-09)或人IL-11(Invigate,Germany,例如，批号#C121021-19)在25μl PBS中在板上于4℃下包被过夜。第二天，将板用50μl PBST洗涤三次，然后在室温(RT)下用50μl SmartBlock(Candor，#113125)封闭1小时。在用PBST另外洗涤三次之后，将25μl鼠抗IL-11抗体和重组犬IL11RA-Fc融合蛋白(Sino Biological，#70078-D02H)的混合物的PBS-T溶液、10％ Smartblock同时加入至板中，并在室温下孵育1小时。为了产生剂量反应，针对2nM犬IL11RA-Fc将抗体从1E-07滴定至1.6E-10[M]，其大约是在不存在抗体的情况下受体与固定的IL-11结合的剂量反应滴定的EC50。在用PBS-T另外洗涤三次后，加入25μl抗人-POD(Sigma，#A0170)的PBS-T溶液、10％Smartblock并在室温下孵育1小时。在用PBS-T最后洗涤三次后，加入25μlAmplexRed(Fisher Scientific,A12222)的1/1000的PBS溶液、0,003％H2O2作为底物，并在室温下避光孵育15分钟。然后，用酶标仪在535/595nm下测量荧光。来自剂量反应的信号用于计算IC50值(GraphPad Prism)。功效计算为[(在最低抗体浓度下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在最低抗体浓度下测量的信号-在不存在IL11Ra的情况下测量的信号)。结果示于表E3中。
表E3：在双复合物ELISA中分析的TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528对人IL-11和人IL-11RA的相互作用的抑制
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)；
*功效计算为[(在最低抗体浓度下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在最低抗体浓度下测量的信号-在不存在IL11Ra的情况下测量的信号)。
**鼠IgG1-IL-11抗体
实施例19：在三复合物ELISA中分析的TPP-18063、TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528对IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
在三复合物ELISA形式中，测试抗IL-11抗体抑制由鼠或人gp130-Fc融合蛋白、鼠或人IL-11和鼠IL11RA-Fc融合蛋白组成的复合物形成的能力。根据图18(a，b)调整测定形式，其取决于是否测试鼠或人IL-11IgG抗体。
使用高结合微量滴定板(Greiner,#781077)进行测定。在第一步中，将25μl 1：1000稀释的山羊抗人IgG(Sigma，#12136)在包被缓冲液(Candor,#121125)中在板上于4℃下包被过夜。第二天，将板用50μl PBST洗涤一次，然后在室温(RT)下用50μl SmartBlock(Candor，#113125)封闭1小时。同时，将浓度范围为2.5E-07[M]至4.1E-10[M]的鼠IL-11抗体和固定浓度的人IL11(例如Invigate,Germany[8nM]，例如批号#C121021-19)或鼠IL-11(例如Invigate,Germany[8nM]，例如批号#C210819-09)、人gp130-人-Fc(R&D Systems,#671-GP,[2NM])或鼠gp130-人-Fc(R&D Systems,#468-MG,[2nM])和重组鼠IL11RA-鼠Fc融合蛋白(R&D System,#7405-MR,[2nM])的混合物的PBS-T溶液、10％ SmartBlock在96孔微量滴定板(Nunc,#267334)中在室温下预孵育1小时。用PBS-T对包被和封闭的微量滴度板进行另外三次洗涤后，加入每种混合物25μl，测定板在室温下孵育1小时。在另外洗涤三次之后，加入抗小鼠gp130生物素化抗体(R&D，#BAF468)或抗人gp130生物素化抗体(R&D，#BAF228)1：1000的10％SmartBlock PBS-T溶液，并在室温下孵育1小时。在另外洗涤三次之后，加入链霉亲和素过氧化物酶缀合物(Sigma，#S5512)1：1000的SmartBlock PBS-T溶液并在室温下孵育1小时。在最后洗涤三次后，加入AmplexRed(Fisher Scientific，A12222)的1/1000的PBS溶液、0.003％H2O2作为底物，并在室温下避光孵育15分钟。然后，用酶标仪在535/595nm下测量荧光。来自剂量反应的信号用于计算IC50值(使用GraphPad Prism软件)。功效计算为[(在最低抗体浓度下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在最低抗体浓度下测量的信号-在不存在抗体的情况下在IL11浓度为8.2E-11[M]时测量的信号)。结果示于表E4中。
表E4：在三复合物ELISA中分析的TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528对人IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)；
*功效计算为[(在最低抗体浓度下测量的信号-在最高抗体浓度下测量的信号)×100]除以(在最低抗体浓度下测量的信号-在不存在抗体的情况下在IL11浓度为8.2E-11[M]时测量的信号)。
实施例20：通过ELISA分析的TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528与IL2Ra的结合
我们测试了TPP-18068、TPP-18087和TPP-19528与一组蛋白质的结合，并发现TPP-18068对人IL2Ra的特异性结合，其在人IL2Ra直接结合ELISA中进一步分析。IL2RA(Peprotech,Germany,#200-02RC)在384孔微量滴定板(Maxisorb,Nunc,#460518)上以每孔1或0μg/ml(缓冲液仅作对照)在30μl包被缓冲液(Candor,#113500)中在4-8℃下包被过夜。用50μl/孔洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween,pH 7.4)洗涤两次后，将板与50μl/孔SmartBlock(Candor,#113500)在室温下孵育2小时。封闭后，将板用洗涤缓冲液洗涤三次。然后，将相应抗体的PBS+0.05％Tween、10％ SmartBlock溶液的稀释系列(1E-7[M]至2E-13[M])以30μl加入微量滴定板中，并在室温下孵育90分钟。在另外洗涤三次后，每孔加入30μl抗小鼠IgGHRP缀合的抗体(Biotechne，HAF007)1：1000稀释的PBS+0.05％ Tween(pH 7.4)溶液并孵育1小时。在另外洗涤三次后，以每孔30μl加入Amplex red(Invitrogen，#12222，10mM储备溶液的DMSO溶液)1：1000稀释的PBS溶液与H2O2(30％，Merck，#107209)1：10000稀释的PBS溶液的混合物作为底物，并避光孵育20分钟。用微量滴定板读数器在535/590nm处测量相对荧光。
TPP-18068相对于同种型对照TPP-10159，在3.3E-7[M]的抗体浓度下获得的信号的比率计算为256，着表明TPP-18068与hIL2Ra强且显著的结合，而TPP-18087和TPP-19528分别仅显示2.4和0.8的比率，这表明没有显著的结合。
实施例21-24示出了种系化、序列优化(TPP-18087的PTM去除和亲和力成熟)。
实施例21：TPP-18087的第一轮种系化(单突变)和PTM去除
对抗体TPP-18087进行先导优化程序，目的是(i)优化其亲和力，(ii)增加其功能效率，(iii)降低基于序列的免疫原性的风险和(iv)提高与下游开发过程的相容性。
种系化设计、PTM去除设计和质粒构建
将亲本抗体的序列与IMGT的人种系序列库(Lefranc 2003)比对。选择相对于TPP-18087在框架和CDR中的对应位置处具有最少数量氨基酸差异的人种系序列作为种系化模板。TPP-18087的VL序列与人种系基因具有最高水平的同一性：hIGLV1-47*01种系基因。TPP-18087的VH序列与人种系基因具有最高水平的同一性：hIGHV3-30*03种系基因。选择非人种系位置上的单个回复突变以构成第一轮种系化变体。
扫描TPP-18087的序列以寻找以下类型的关键翻译后修饰(PTM)位点：CDR中的天冬酰胺脱酰胺(Asn-Gly和Asn-Ser)、CDR中的天冬氨酸异构化(Asp-Gly)、CDR和框架中的未配对Cys以及CDR和框架中的N-连接的糖基化位点(Asn-Xxx-Ser/Thr，其中Xxx可以是除Pro之外的任何氨基酸)。TPP-18087在VL中具有一个Asn-Gly(NG)位点，在VH中具有一个Asp-Gly(DG)位点。为了去除NG位点，进行了三个单突变：天冬酰胺转化为谷氨酰胺或丝氨酸，而甘氨酸转化为丙氨酸。为了去除DG位点，进行三个单突变：天冬氨酸转化为谷氨酸，而甘氨酸转化为丙氨酸或丝氨酸。对于TPP-18087，确定了TPP-18087的两个PTM热点：VL中的一个Asn-Gly(NG)位点和VH中的一个Asp-Gly(DG)位点。NG位点突变为QG、SG和NA。DG位点突变为EG、DA和DS。使用WT和单突变的所有组合来组合探测两个PTM风险位点。
嵌合抗体的质粒经密码子优化用于哺乳动物表达，然后在Genewiz(SouthPlainfield,NJ,USA)合成。将亲本抗体和种系化变体的V-基因克隆到人IgG表达载体(WuXi,China)中以产生所需同种型的人IgG构建体(VH结构域与人IgG4 SPLE变体融合，VL结构域与人IgλCL结构域融合)。每个构建体含有相同的恒定片段，但赋予不同的VH或VL结构域以及不同的位点突变。
抗体产生
将含有VH和VL基因的质粒共转染到Expi293F细胞中。将细胞培养5天，并收集上清液用于使用蛋白A柱进行一步蛋白纯化(GE Healthcare，Cat.175438)。使用Nanodrop 2000通过A280/消光系数测定洗脱液中的蛋白质浓度。纯化36种抗体，包括1种嵌合抗体、20种种系化抗体变体和15种PTM抗体变体，通过SDS-PAGE和HPLC-SEC分析，然后储存在-80℃或用于后续测定。
SPR法测定对人/小鼠IL-11的亲和力
使用Biacore 8K检测抗体对hIL-11(Invigate,Germany,例如，批号#C121021-19)和mIL-11(Invigate,Germany,例如，批号#C210819-09)的结合亲和力。将每种抗体捕获在抗人IgG Fc抗体固定的CM5传感器芯片(GE)上。将不同浓度(0、5、15.82和50nM)的hIL-11和mIL-11的1×HBS-EP+(pH7.4)(GE healthcare)溶液以30μL/min的流速注射到传感器芯片上，结合相为120秒，随后为200秒解离相。然后在每个结合循环后，用10mM甘氨酸(pH 1.5)再生芯片。
从测试传感图中删去空白表面和缓冲液通道的传感图。使用Langmiur分析法对实验数据进行1：1模型拟合。使用19.3kDa的分子量来计算人和小鼠IL-11的摩尔浓度。第1轮种系化和PTM突变体的SPR结果示于表E5中。
表E5：人/小鼠IL-11的第1轮种系化和PTM去除突变体的SPR结果
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*使用氨基酸残基的连续编号
与WT抗体相比，下划线＝增强的对人/小鼠抗原的结合亲和力；斜体＝相当的结合；粗体＝显著降低的结合；星号(*)＝稍微降低的结合亲和力(降低1.5～2.5倍)
种系化突变体TPP-31277至TPP-31296根据它们在人和小鼠IL-11结合亲和力方面的变化分为四类。与WT抗体相比，下划线突出显示的突变体显示出增强的对人/小鼠抗原的结合亲和力。
与WT抗体相比，以斜体突出显示的突变体显示出相当的对人/小鼠抗原的结合亲和力。与WT抗体相比，粗体突出显示的突变体显示出显著降低的对人/小鼠抗原的结合亲和力。与WT抗体相比，用星号(*)标记的突变体显示出稍微降低的结合亲和力(降低1.5～2.5倍)。
对于第一轮PTM去除突变体TPP-31297至TPP-31311，根据SPR结果，TPP-31300(VH-D54E)是PTM去除的15种变体中对人/小鼠抗原的结合亲和力的最佳克隆(表E5)。TPP-31298克隆的突变位点是VL-N97S，其也是种系突变位点，并且与TPP-31312相比，该克隆显示出相当的对人/小鼠抗原的结合亲和力(表E5)。包括两个突变位点VH-D54E/VL-N97S的TPP-31302克隆显示出增强的对人和小鼠IL11的结合，因此两个突变位点VH-D54E/VL-N97S参与第二轮CDR种系化。
人和小鼠IL-11RGA测定
如实施例17中所述，在人和小鼠IL-11RGA测定中测试纯化的抗体，不同之处在于RGA测定进行两次。第1轮种系化突变体和PTM去除突变体的人和小鼠IL-11RGA测定结果总结于表E6中。所有突变体在SPR结合亲和力和RGA效力方面显示出一致的趋势。
表E6：针对人/小鼠IL-11的第一轮种系化和PTM去除突变体的RGA结果
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NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)；
*使用氨基酸残基的连续编号；
与WT抗体相比，下划线＝增强的对人/小鼠抗原的结合亲和力；斜体＝相当的结合；粗体＝显著降低的结合；星号(*)＝稍微降低的结合亲和力(降低1.5～2.5倍)
实施例22：TPP-18087的第二轮种系化(组合突变)
种系化设计、PTM去除设计和质粒构建
基于第一轮种系化的结果，12个种系单位点突变体VH-E1Q、VH-L5V、VH-L11V、VH-G16R、VH-N35H、VH-L37V、VH-G49A、VH-F63S、VL-N31S、VL-A33Y、VL-L55R和VL-S90A显示SPR结合亲和力<1.9E-08M和RGA效力(平均值)<1.7E-07M。将这12个突变位置组合以产生用于第二轮种系化的模板，称为基本骨架(FB)。为了评价每个种系化突变对FB活性的影响，在FB上构建了12个单位置回复突变变体(FB-1)。另外两个突变体(VH-F59Y和VL-D53N)显示出SPR结合活性和RGA效价稍微降低。这两个位点也进行组合探测。因此，选择总共16个利用PTM抛光的骨架(VH-D54E/VL-N97S)的突变体以构成第二轮种系化变体。针对哺乳动物表达对第二轮种系化抗体变体的DNA进行密码子优化，然后在Genewiz(South Plainfield,NJ,USA)合成。将编码亲本抗体和种系化变体的可变区的基因克隆到人IgG表达载体(WuXi,China)中以产生所需同种型的人IgG构建体(VH结构域与人IgG4 SPLE变体融合，并且VL结构域与人IgλCL结构域融合)。
通过SPR测定对人/小鼠IL-11的亲和力
如实施例21中所述产生16个AB，并如实施例21中所述使用SPR分析纯化的AB与人和小鼠IL-11的结合。第二轮种系化突变体的SPR结果总结于表E7中。
表E7：人/小鼠IL-11的第二轮种系化突变体的SPR测定结果
抗体 KD[M]:hIL-11 KD[M]:mIL-11 突变位点
TPP-31312 5.3E-09 9.3E-09 WT
TPP-31313 8.9E-10 6.4E-10 FB
TPP-31314 8.7E-10 5.9E-10 FB-1,回复突变VH-Q1E
TPP-31315 8.7E-10 6.5E-10 FB-1,回复突变VH-V5L
TPP-31316 8.5E-10 6.2E-10 FB-1,回复突变VH-V11L
TPP-31317 8.3E-10 5.8E-10 FB-1,回复突变VH-R16G
TPP-31318 8.9E-10 3.0E-10 FB-1,回复突变VH-H35N
TPP-31319 8.3E-10 5.9E-10 FB-1,回复突变VH-V37L
TPP-31320 9.5E-10 5.6E-10 FB-1,回复突变VH-A49G
TPP-31321 8.5E-10 6.7E-10 FB-1,回复突变VH-S63F
TPP-31322 8.1E-10 6.9E-10 FB-1,回复突变VL-S31N
TPP-31323 2.4E-09 1.7E-09 FB-1,回复突变VL-Y33A
TPP-31324 7.9E-10 5.0E-10 FB-1,回复突变VL-R55L
TPP-31325 5.9E-10 3.5E-10 FB-1,回复突变VL-A90S
TPP-31326 1.7E-09 1.2E-09 FB+1,加VH-F59Y
TPP-31327 1.0E-09 8.5E-10 FB+1,加VL-D53N
TPP-31328 1.8E-09 1.8E-09 FB+2,加H-F59Y&VL-D53N
*使用氨基酸残基的连续编号
TPP-31325(具有回复突变VL-A90S的FB)显示出针对hIL-11和mIL-11的最高结合亲和力，因此作为骨架模板参与第二轮亲和力优化。
人和小鼠IL-11RGA测定
使用如实施例21中所述的纯化的第2轮种系化突变体抗体进行人和小鼠IL-11RGA测定，不同之处在于仅进行一次RGA运行，结果总结于表E8中。
表E8：针对人/小鼠IL-11的第二轮种系化突变体的RGA结果
实施例23：TPP-18087的第一轮亲和力成熟(单氨基酸突变)
亲和优化设计与突变体构建
抗体TPP-18087进行旨在优化其亲和力并增加其功能效率的先导优化程序。使用定点诱变方法将亲本TPP-18087克隆的6个互补决定区(CDR)的每个氨基酸单独突变为所有的20个氨基酸。使用含有编码20个氨基酸的NNS密码子的DNA引物将突变引入每个靶向的CDR位置。简并引物用于定点诱变反应。简言之，每个简并引物被磷酸化。PCR条件为，94℃持续2分钟，(94℃持续30秒，55℃持续30秒，72℃持续5分钟)，16个循环，72℃持续10分钟。将PCR产物纯化，然后转化到BL21中，用于产生含有c-Myc-标签随后是His-标签的scFv片段。周质提取物用于进一步表征。
第一轮筛选ELISA
第一轮筛选ELISA设置如下：将96孔Maxisorp免疫板的各孔用100μl的0.25μg/ml山羊抗c-myc抗体的包被缓冲液溶液(PBS，pH 7.4)在4℃下包被过夜。第二天，将板用300μl洗涤缓冲液(PBS-T)洗涤三次，并用200μl含1％酪蛋白的PBS溶液在25℃下封闭1小时。在另外洗涤三次后，将TPP-18087文库scFv的周质提取物(PE)用1％酪蛋白在体积比为1：1的PBS/0.05％Tween 20溶液稀释，并以100μl/孔加入至板中，在25℃下孵育1小时。同时，将0.5μg/ml的hIL-11或mIL-11抗原和1.875μg/ml的IL11抗体TPP-31391在25℃下预混合1小时。TPP-31391含有可变结构域，其在双复合物ELISA中具有活性并且不与抗体TPP-18087竞争与IL-11结合。用300μl洗涤缓冲液洗涤测定板三次后，将100μl hIL-11/TPP-31391或mIL11/TPP-31391混合物加入孔中，在25℃下孵育1小时。在另外洗涤三次后，随后在25℃下与100μl/孔抗hFc-IgG-辣根过氧化物酶(HRP)缀合物(1：5000的PBS-T溶液)孵育1小时。用300μl洗涤缓冲液最后洗涤六次后，用四甲基联苯胺(TMB)底物检测HRP活性，并用2M HCl淬灭反应。在450nM下读取板。与表达为scFv抗体的野生型抗体TPP-18087相比，进行筛选ELISA的5368个克隆中的187个显示出ELISA OD450信号增加5～6倍。187个克隆的DNA测序显示出24个克隆在12个CDR氨基酸位置具有独特序列。这些克隆通过scFv捕获ELISA进一步证实。
scFv捕获ELISA
通过使用scFv捕获ELISA测定来自TPP-18087文库初筛的24个选中物(hits)的EC50值。简言之，将100μl的1ug/ml IL-11单克隆抗体TPP-31391的PBS溶液(pH 7.4)添加到96孔Maxisorp免疫板的各孔中，并将测定板在4℃下孵育过夜。第二天，将板在25℃下用1％酪蛋白封闭1小时。然后将2ug/ml hIL-11或mIL-11加入到板中并在25℃下孵育1小时。然后将来自TPP-18087文库初步筛选的24个选中物的周质提取物用1％酪蛋白的PBS/0.05％Tween 20溶液连续稀释3.16倍，加入至板中并在25℃下孵育1小时。随后与山羊抗c-mycHRP缀合物的PBS-T溶液在25℃下孵育1小时。用TMB底物检测HRP活性，并用2M HCl淬灭反应。在450nm读取板，并用GraphPad Prism测定EC50值。
选择通过scFv捕获ELISA显示出对hIL-11和mIL-11的结合均增强的8个突变体用于组合文库设计(图19)。
实施例24：第2轮亲和力成熟(组合突变)
组合文库构建
在初步筛选中鉴定并在图19中示出的亲和力增强的突变用于组合文库构建。
具有最终种系TPP-31325(在PTM去除和第二轮种系化之后)质粒的CJ236菌株用于产生尿嘧啶化的单链DNA(ssDNA)，其用作TPP-18087组合文库构建的模板。简言之，合成编码沿野生型氨基酸特定CDR位置处的所有鉴定的突变的引物，并以等摩尔比混合。对于含有多于一个突变位点的引物，合成含有引物区内所有可能的突变组合的引物，并以等摩尔比混合。为了构建组合文库，进行Kunkel反应。简言之，将混合物加热至85℃持续5分钟，然后从64℃冷却至55℃持续1小时。此后，加入T4连接酶和T4 DNA聚合酶并混合。然后在37℃孵育1.5小时。通常，将200ng的组合文库DNA电穿孔到BL21中，用于产生含有c-Myc标签随后是His标签的scFv片段。
第二轮筛选捕获scFvELISA
筛选构建的文库以鉴定在结合改善中产生协同效应的突变的组合。通过捕获scFvELISA用生物素化的hIL-11和mIL-11筛选总共1848个克隆。简言之，将96孔Maxisorp免疫板的孔用0.2μg/ml山羊抗c-myc抗体的包被缓冲液PBS溶液(pH 7.4)在4℃下包被过夜。第二天，将板用300μl洗涤缓冲液(PBS-T)洗涤三次，然后在25℃下用200μl 1％酪蛋白的PBS溶液封闭1小时。在另外洗涤三次之后，将组合突变的scFv克隆的周质(PE)用1％酪蛋白的0.05％Tween 20溶液根据1：1体积比稀释，然后将100μl加入到板中并在25℃下孵育1小时。洗涤三次后，将0.25μg/ml生物素化的hIL-11或mIL-11加入孔中，并在25℃下孵育1小时。洗涤三次后，随后在25℃下与SA-辣根过氧化物酶(HRP)缀合物孵育1小时。最后洗涤六次后，用四甲基联苯胺(TMB)底物检测HRP活性，并用2M HCl淬灭反应。在450nM下读取板。对在450nm处表现出比未突变的最终种系scFv变体TPP-31466大2倍的光密度(OD)信号的克隆进行测序并通过SPR进一步确认。
通过koff排序SPR确认组合scFv突变体文库
使用Biacore 8K测定20个scFv选中物与hIL-11和mIL-11结合的kd(1/s)。将来自周质提取物的每种scFv抗体经由预固定的抗his抗体和抗c-Myc抗体的混合物捕获到CM5传感器芯片上。将5nM hIL-11或mIL-11的1×HBS-EP+(pH 7.4)缓冲液溶液以30uL/min的流速注射到传感器芯片上，结合相为120秒，随后为600秒解离相。然后在每个结合循环后用10mM甘氨酸(pH 1.5)再生芯片。从测试传感图中删去参考通道和缓冲液通道的传感图。使用Langmiur分析法对实验数据进行1：1模型拟合。使用19.3kDa的分子量计算分析物的摩尔浓度。TPP-31466(其是最终种系变体TPP-31325的scFv形式)以及scFv选中物TPP-31413至TPP-31432的来自SPR实验的ka、kd和kD值示于表E9中。
表E9：来自第二次亲和力成熟的20个筛选选中物的SPR结果
IgG转化
将编码来自第二轮亲和力成熟的五个scFv的可变区的基因克隆到鼠IgG1表达载体pTT5中(VH结构域与鼠IgG1变体融合，VL结构域与鼠IgλCL结构域融合)以产生用于TPP-29519、TPP-29520、TPP-29521、TPP-29522和TPP-29523的鼠IgG1表达载体。此外，将五种scFv克隆到人表达载体中以产生TPP-29680、TPP-30000、TPP-30001、TPP-30002和TPP-30003的所需同种型的人IgG构建体(VH结构域与人IgG1 HS变体融合，其中引入Fc沉默突变(E233P/L234V/L235A/DG236/D265G/A327Q/A330)，并且VL结构域与人IgλCL结构域融合)。
实施例25-27示出了TPP-18068的种系化、序列优化(PTM去除)和亲和力成熟
实施例25：TPP-18068的种系化和PTM去除
对抗体TPP-18068进行先导优化程序，目的是(i)优化其亲和力，(ii)增加其功能效率，(iii)降低基于序列的免疫原性的风险和(iv)提高与下游开发过程的相容性。
对于TPP-18068(mIgG1)和TPP-16478(hIgG1)的种系化和序列优化过程，选择轻链和重链最接近的种系家族，并仔细检查潜在的CMC相关残基。CDR区和FW区中与最接近的人种系的偏差以及CDR区中潜在的CMC相关残基通过遵循标准分子方案的定点诱变进行调整或购自DNA合成提供商。产生的DNA构建体如实施例15中所述通过哺乳动物细胞的瞬时转染表达并纯化。然后如实施例16中所述通过SPR测试抗体的人IL-11和鼠IL-11结合。测量的KD值示于表E10中。
表E10：TPP-18068的第一轮种系化和PTM去除的SPR结果
*使用氨基酸残基的连续编号
对于第2轮种系化，然后在DNA水平上组合单一回复，如实施例15中所述进行表达和纯化，并如实施例16中所述通过SPR测试。测量的KD值示于表E11中。
表E11：TPP-18068的第2轮种系化和PTM去除的SPR结果
*使用氨基酸残基的连续编号
此外，如实施例17中所述，在人和鼠IL-11报告基因测定中测试第二轮种系化和PTM去除的变体，不同之处在于使用固定浓度的1,9[nM]人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)和5.6[nM]鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819 -09)。结果示于表E12中。
表E12：TPP-18068的第2轮种系化和PTM去除的RGA结果
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
SPR和RGA结果的分析导致最终种系化和序列优化的分子TPP-27159。与TPP-18068相比，TPP-27159在轻链可变区中携带回复T23S、A31S和N98S，在重链中携带回复S49A。
实施例26：第一轮亲和力和效力成熟
亲和力优化设计和突变体构建
亲和力成熟通过第一个单突变收集轮，随后在种系化和序列优化的抗体骨架中重组最大亲和力和效力增加的氨基酸交换来完成。
对于突变收集NNK(N＝A或G或C或T，K＝G或T)，使用包括NNK的合成寡核苷酸进行密码子多样化，通过定点诱变产生以下单个氨基酸位置处的随机化。对于TPP-18068，分析以下区域对亲和力和效力的影响：SYGMH(SEQ ID NO:32VH的残基31至35)、VISYDGSYKYYADSVKG(SEQ ID NO:32VH的残基50至66)、GVPDY(SEQ ID NO:32VH的残基99至103)、TGSSSNIGAGYDVH(SEQ ID NO:36VL的残基23至36)、SNNERPS(SEQ ID NO:36VL的残基52至58)和AAWDDSLNGPV(SEQ ID NO:36VL的残基91至101)。
对所得单个NNK文库进行测序，并鉴定TPP-18068的约800个单个氨基酸交换变体。
亲本克隆TPP-18068的突变变体以μ级形式的表达
为了在基于ELISA的测定设置中测试亲本克隆的突变变体，通过瞬时转染哺乳动物细胞来表达这些变体产生的DNA pTT5构建体。为了转染细胞，将7.5μl的重链(HC)和轻链(LC)编码质粒(各25μg/ml在Opti-MEM[Invitrogen,#11058-02]细胞培养基中稀释)各自移液到96孔聚苯乙烯圆底板(ThermoFisher Scientific,#268152)的每个孔中，随后加入15μl/孔转染素(ThermoFisher Scientific,cat#12347019)(1:12.5在Opti-MEM(ThermoFisher Scientific,cat#12347019)中稀释)，并在室温下孵育20分钟。将人胚肾(HEK)细胞在补充有2mM GlutaMAX(ThermoFisher Scientific，cat#35050061)和0.1％Pluronic F-68(ThermoFisher Scientific，cat#35050061)的FreeStyle F17培养基(Gibco)中稀释至1E6细胞/ml的细胞计数。将380μl/孔的稀释细胞转移到1ml深孔板(Hj-Bioanalytik，#750289)中。随后，将来自圆底板的20μl DNA混合物添加至深孔板中的细胞，随后进行4小时孵育步骤(37℃，5％CO2，70％湿度，700转/分钟振荡)。孵育后，青霉素(终浓度：100U/ml)链霉素(终浓度：100μg/ml)和明胶蛋白胨N3(OrganoTechnie，#19554，终浓度：0.25％)加入到每个孔中。随后是5天的孵育期，之后将板离心(5分钟，1000xg)，并除去含有表达的抗体的上清液并储存在4℃下用于进一步测试。
用于测试抗IL-11先导优化变体的测定设置
使用以下基于ELISA的测定设置来测试亲本克隆的突变变体与其靶标的结合。384孔板在4℃下用20μl/孔的1μg/ml抗小鼠IgG(Fc特异性)溶液(包被缓冲液：Candor，抗小鼠IgG：Sigma#M3534)包被过夜。第二天，将板用50μl/孔PBST洗涤三次，随后使用50μl 100％smart block(Candor)在室温下封闭一小时，然后如前所述再次进行三次洗涤步骤。随后，加入20μl/孔待测试的突变变体(1μg/ml的10％smart block的PBST溶液中)或亲本对照TPP-18068，并将板在室温下孵育1小时。将板再洗涤三次，然后加入25μl/孔的生物素化的IL-11溶液(0.5nM人IL-11(Invigate，例如，批号C121021 -19)；0.3nM鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819-09))并在室温下孵育板1小时。随后是三次洗涤步骤，并且随后加入25μl/孔链霉亲和素辣根过氧化物酶缀合物(Sigma，1：1000稀释于10％smart block的PBST溶液)。使用PBST的最后三次洗涤步骤之后加入30μl底物溶液(Amplex Red，Invitrogen)。在室温下避光孵育15分钟步骤后，在荧光酶标仪(Envision)中使用535nm的激发和590nm的发射检测测量荧光信号。计算每个突变体变体得到的OD值与TPP-16478WT抗体的OD之间的比率，TPP-16478WT抗体已经表达为文库的一部分。高比率表明与人IL-11和小鼠IL-11的结合增强。
用于检测IL-2Rα结合的试验设置
使用以下基于ELISA的测定设置来测试亲本克隆的突变变体与IL-2Rα的特异性结合(Peprotech，Germany，#200-02RC)。IL-2Ra在384孔微量滴定板(Maxisorb，Nunc，#460518)上以每孔0.5μg/ml在30μl包被缓冲液(Candor，#113500)中在4℃下包被过夜。用50μl/孔洗涤缓冲液PBST洗涤三次后，将板在室温下用50μl/孔SmartBlock(Candor，#113500)孵育1小时。封闭后，用洗涤缓冲液洗涤板三次。加入30μl/孔(4μg/ml PBS+0.05％Tween，10％SmartBlock的溶液)待测试抗体，随后在室温下孵育60分钟。然后，在另外洗涤三次后，每孔加入30μl抗小鼠IgG HRP缀合的抗体(Sigma，A0168，在PBST中1：1000稀释)并孵育1小时。使用PBST的最后三次洗涤步骤之后加入30μl底物溶液(Amplex Red，Invitrogen)。在室温下避光孵育15分钟步骤后，在荧光酶标仪(Envision)中使用535nm的激发和590nm的发射检测测量荧光信号。计算每个突变体变体得到的OD值与同种型对照抗体的OD之间的比率，同种型对照抗体已经表达为文库的一部分(阴性对照)。低比率表明IL-2Ra结合的缺失。
来自第一亲和力成熟和IL2Ra结合的选中物的表达和表征
选择来自IL-11和IL-2Ra筛选分析的42个选中物，如实施例15中所述通过瞬时转染哺乳动物细胞表达并纯化。然后如实施例16中所述通过SPR测试抗体的人IL-11和鼠IL-11结合。测量的KD值示于表E13中。表E13：来自第一轮亲和力成熟筛选的42个选中物的SPR结果
/>
此外，通过如实施例17中所述的报告基因测定测试了42个选中物对人IL-11和鼠IL-11介导的Stat3信号传导的抑制。如实施例17中所述计算效力(IC50[M])和功效(％)，值示于表E14中。
表E14：来自第一轮亲和力成熟筛选的42个选中物的RGA结果
/>
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
来自第一轮亲和力成熟的所选42种抗体的IL-2Ra结合
接着，如实施例20中所述对42种抗体进行IL2Ra结合ELISA。计算IL-2Ra结合相对于同种型对照的比率，并示于表E15中。
表E15：来自第一轮亲和力成熟筛选的42个选中物的IL2Ra结合结果
/>
与野生型抗体TPP-18068相比，几种突变体表现出强烈降低的IL2RA结合，例如TPP-26301、TPP-26317、TPP-26327、TPP-26328和TPP-26332。
实施例27：第二轮亲和力成熟(组合突变)
对于TPP-18068的最终重组文库，选择了在NNK文库筛选步骤中表现出增强的的亲和力、功能效率或降低的IL-2Ra结合的12个单取代变体。将VL突变G30W、G32Y、G32D、Y33L、N54E、A91S、D95F、D95P、D95S和S98Y以及VH区中的突变M34G、V50L组合在最终种系TPP-27159(连续氨基酸命名法，参考是如由SEQ ID NOs:XX-VH和XX-VL定义的TPP-27159)的一个重组文库中。)
对于TPP-27159，产生寡核苷酸以在每个所选的位置引入所选的突变或相应的野生型氨基酸。使用标准重叠延伸PCR的连续轮次进行文库构建(Sambrook J,Russell DW(2001)Molecular cloning:a laboratory manual,3rd edn.Sambrook)。
以所述方式产生TPP-27159的超过800种独特的组合氨基酸交换变体，如实施例26中所述通过瞬时转染哺乳动物细胞来表达，并且如实施例26中所述筛选所得表达上清液的鼠和人IL-11结合和IL-2Ra结合。
如实施例15中所述选择具有最高的人和小鼠IL-11结合但具有最低的IL-2Ra结合的18个选中物用于小规模表达和纯化。然后如实施例16中所述通过SPR测试抗体的人IL-11和鼠IL-11结合。测量的KD值示于表E16中。
表E16：第二轮亲和力成熟后18个人IgG1选中物的SPR结果
此外，如实施例17中所述通过报告基因测定测试18个命中物的人IL-11和鼠IL-11结合。如实施例17中所述计算效力(IC50[M])和功效(％)。结果示于表E17中。
表E17：第2轮亲和力成熟后18个人IgG1选中物的RGA结果
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
基于这些测定中的结果，将突变体与野生型抗体TPP-16478进行比较，并且分类为“增强的”或“未增强的”，并且最终选择了侯选物TPP-29386(hIgG1)SEQ ID NO:92，重链和SEQ ID NO:93，轻链。
IgG转化
将编码来自第二轮亲和力成熟的TPP-29386可变区的基因克隆到鼠IgG1表达载体pTT5中(VH结构域与鼠IgG1变体融合，并且VL结构域与鼠IgλCL结构域融合)以产生用于TPP-29528的鼠IgG1表达载体。此外，将编码TPP-29386可变区的基因克隆到人表达载体pTT5中以产生TPP-29536所需同种型的人IgG构建体(VH结构域与其中引入Fc沉默突变(E233P/L234V/L235A/DG236/D265G/A327Q/A330)的人IgG1 HS变体融合，并且VL结构域与人IGλCL结构域融合)。
实施例28-31描述了由TPP-18068和TPP-18087的优化产生的IgG转化的抗体的体外表征
实施例28：抗体产生
对于TPP-29519、TPP-29520、TPP-29521、TPP-29522、TPP-29523、TPP-29528、TPP29680、TPP-30000、TPP-30001、TPP-30002、TPP-30003和TPP-29536，将含有各自VH和VL基因的质粒共转染到Expi293F细胞中。将细胞培养5天，并收集上清液用于使用蛋白A柱(GEHealthcare，Cat.175438)纯化。使用Nanodrop 2000通过A280/消光系数测定来自洗脱液的蛋白质浓度。通过SDS-PAGE和HPLC-SEC分析纯化的抗体，然后储存在-80℃。
实施例29：通过SPR测定对人/小鼠/食蟹猴和大鼠IL-11的亲和力
为了评估抗IL-11抗体的结合动力学和亲和力以及它们的物种交叉反应性特征，使用表面等离子体共振(SPR)进行结合测定。在Biacore T200仪器上或在Biacore 8K+仪器(Cytiva)上在37℃下使用测定缓冲液HBS EP+、300mM NaCl、1mg/ml BSA、0.05％NaN3进行结合测定。抗体通过抗人Fc IgG(“人抗体捕获试剂盒”，订单号：BR100839，Cytiva)或通过抗小鼠Fc IgG(“小鼠抗体捕获试剂盒”，订单号：BR100383，Cytiva)共价胺偶联至S系列CM5传感器芯片(Cytiva)进行捕获(其取决于同种型)。根据制造商的说明书使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和乙醇胺HCl，pH 8.5(“胺偶联试剂盒”BR-1000-50，Cytiva.)进行胺偶联。将人、小鼠、食蟹猴或大鼠IL-11以0.05-200nM浓度范围内的若干稀释度用作分析物。对于仅具有一种浓度的结合测定，使用200nM IL-11。在每次抗原注射后，传感器表面用pH 1.7的甘氨酸再生。将获得的传感图进行双重参考(减去参考流动池信号和缓冲液注射)，并使用Biacore T200评估软件或Biacore Insight软件拟合至1：1Langmuir结合模型以导出动力学数据。结果示于表E18中。如果未报告值，则为无结合或结合极低以及多相结合行为。低于1E-12的值被认为低于仪器的动态范围，并设置为<1E-12。
表E18：与亲本(TPP-18068和TPP-18087)和竞争者(TPP-23552和TPP-23580)抗体相比，由TPP-18068和TPP-18087的优化产生的IgG转化的抗体的SPR结果
实施例30：人、小鼠、食蟹猴和大鼠IL-11报告基因测定
Stat3报告基因HEK293细胞(BPS Biosciences，#79800-P)在生长培养基1N(BPSBiosciences，#79801)中生长。在第1天，将细胞以每孔50μl的体积接种在生长培养基1N中的白色384er细胞培养板(BD BioCoatTM聚-D-赖氨酸384孔，#354660)中，每孔含有40.000个细胞。
在同一天，根据待测试的IL-11种类，脂质转染通过稀释人受体质粒(PJF-2813；TPP-14223；SEQ ID:no)或小鼠受体质粒(PJF-2809-1；TPP-14189；SEQ ID:no)或大鼠受体质粒(PJF 2811；TPP-14222；SEQ ID:no)至0.2μg/ml的Optimem(Invitrogen，#11058-02)溶液而完成。接着，LF2000(Invitrogen，11668-027)以1：50稀释于Optimem中。将相应稀释的质粒和稀释的LF2000以1：1的比例混合。在室温下孵育20分钟后，将每孔25μl复合混合物加入至细胞中，并将板在37℃、5％CO2下孵育过夜。
第二天，将人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)、小鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C210819-09)、食蟹猴IL-11(Invigate，批号#C290621-19)或大鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C301019-19)在生长培养基1N中稀释至恒定终浓度6nM。此外，在1N生长培养基中制备待测抗IL11抗体的最终测定系列稀释液，从100[nM]开始，以3倍降至0.137[nM]，包括不含任何抗体的阴性对照。将IL11和抗体系列稀释液以1：1的比例混合，并在室温下在微量滴定板中孵育30分钟。然后，除去细胞上方的细胞培养基，并将25μl/孔的混合物添加至细胞中。此后，将板在37℃、5％CO2下孵育5小时。最后，加入25μL/孔的荧光素酶底物Bright Glo(Promega；#E2620)至细胞中，并将板在室温下避光孵育3分钟，然后在读板器上测量发光。如实施例17中所述使用来自剂量反应的信号来计算功效和IC50值。结果示于表E19中。
表E19：与亲本(TPP-18068和TPP-18087)和竞争者(TPP-23552和TPP-23580)抗体相比，由TPP-18068和TPP-18087的优化产生的IgG转化的抗体的RGA结果
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
实施例31：在双复合物ELISA中分析的IgG转化的抗体对IL-11和IL-11Ra的相互作用的抑制
对IgG转化的抗体进行如实施例18中所述的实验测定程序。相应地分别计算IC50[M]、功效(％)，结果示于表E20中。
表E20：在双复合物ELISA中分析的IgG转化的抗体对人IL-11和人IL-11Ra的相互作用的抑制
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
TPP-18068、TPP-29536、TPP-23552、TPP-29528、TPP-23580和TPP-14250在双复合物ELISA中显示出活性，而TPP-18087、TPP-29680、TPP-30000、TPP-30001、TPP 30002、TPP-30003、TPP-29519、TPP-29520、TPP-29521、TPP-29522和TPP-29523未显示出活性。
实施例32：在三复合物ELISA中分析的IgG转化的抗体对IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
对IgG转化的抗体进行如实施例19中所述的实验测定程序，相应地分别计算IC50[M]、功效(％)。结果示于表E21中。
表E21：在三复合物中分析的IgG转化的抗体对人IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
所有测试的抗体在三复合物ELISA中是有活性的。
实施例33：优化的和IgG转化的抗体与IL2Ra的结合
如实施例20中所述测试IgG转化的抗体TPP-与IL2Ra的结合。计算IgG转化的抗体相对于同种型对照TPP-10159在抗体浓度3.3E-7[M]下获得的信号的比率，并示于表E22中。
表E22：IgG转化的抗体的IL-2R结合相对于同种型对照抗体结合的比率
所有测试的抗体不结合IL2RA，TPP-18068除外。
实施例34：双特异性IL-11抗体的产生
双复合物和三复合物ELISA数据表明TPP-18068和TPP-18087结合IL-11上的两个不同表位。为了产生能够结合两个表位的抗体，产生了由TPP-18068和TPP 18087各自的一条臂组成的双特异性scFv-kih构建体。因此，通过使用标准重组DNA技术将TPP-18068和TPP-18087的可变区转移为scFv形式(Sambrook,J.等人eds.,MOLECULAR CLONING:ALABORATORY MANUAL(2d Ed.1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY.Vols.1-3)。VH序列通过15个氨基酸的GGGGS GGGGSGGGGS(例如，SEQ ID NO:74,aa 114-129)接头连接至相应VL序列。通过序列GG GGSGGGGSGGGGSG(例如，SEQ ID NO:74,aa240-256)由TPP-18068产生的scFv与含有杵突变(knob mutation)的人IgG Fc结构域融合，由TPP-18087产生的scFv与含有臼突变(hole mutation)的人IgG Fc结构域融合(图20)。如实施例15中所述将所得构建体均克隆到载体pTT5中，用于使用标准瞬时转染程序在HEK293-6E细胞中表达，并将所得人IgG抗体TPP-20489通过蛋白A和尺寸排阻色谱法从细胞培养上清液中纯化。对于相应的鼠变体TPP-26195，使用具有杵和臼突变的鼠IgG Fc结构域。
以类似的方式，通过组合来源于TPP-29528(基于TPP-18086的优化抗体)和TPP-29519(基于TPP-18087的优化抗体)的抗IL11 scFv产生TPP-29603和TPP-29697。TPP-29603具有含杵臼突变的鼠IgG1形式，而TPP-29697具有人IgG1形式，其中Fc包含在杵臼突变之后的沉默突变(E233P/L234V/L235A/DG236/D265G/A327Q/A330S突变)。
实施例35：通过SPR测定的双特异性抗体的亲和力
为了评估抗IL-11双特异性抗体的结合动力学和亲和力以及它们的物种交叉反应性特征，使用表面等离子体共振(SPR)进行结合测定。在Biacore T200仪器上或在Biacore8K+仪器(Cytiva)上，TPP-26195和TPP-20489在25℃下且TPP-29603和TPP-29697在37℃下使用测定缓冲液HBS EP+、300mM NaCl、1mg/ml BSA、0.05％NaN3进行结合测定。抗体通过抗人Fc IgG(“人抗体捕获试剂盒”，订单号：BR100839，Cytiva)或通过抗小鼠Fc IgG(“小鼠抗体捕获试剂盒”，订单号：BR100383，Cytiva)共价胺偶联至S系列CM5传感器芯片(Cytiva)进行捕获(其取决于同种型)。根据制造商的说明书使用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和乙醇胺HCl，pH 8.5(“胺偶联试剂盒”BR-1000-50，Cytiva.)进行胺偶联。将人、小鼠、食蟹猴或大鼠IL-11以0.05-200nM浓度范围内的若干稀释度用作分析物。对于仅具有一种浓度的结合测定，使用200nM IL-11。在每次抗原注射后，传感器表面用pH 1.7的甘氨酸再生。将获得的传感图进行双重参考(减去参考流动池信号和缓冲液注射)，并使用Biacore T200评估软件或Biacore Insight软件拟合至1：1Langmuir结合模型以导出动力学数据。
TPP-26195和TPP-20489的结果示于表E23中，TPP-29603和TPP-29697的结果示于表E24中。如果未报告值，则为无结合或结合极低以及多相结合行为。
表E23：由非优化的亲本抗体TPP-18068和TPP-18087产生的双特异性抗体的SPR结果。SPR实验在25℃下进行。
*在稳定状态下测定
表E24：由优化的抗体TPP-29528和TPP-29519产生的双特异性抗体的SPR结果。SPR实验在37℃下进行。
实施例36：用于通过双特异性IL-11抗体封闭人/小鼠IL-11的报告基因测定
在实施例17中所述的Stat3报告基因测定中测试非优化的双特异性抗体TPP-20489和TPP-26195相较于现有技术抗体TPP-14250、TPP-23580和TPP-23552对IL-11介导的信号传导的抑制。使用GraphPad Prism计算效力值(IC50[M])。如实施例17中所述计算功效。结果示于表E25中。
表E25：由非优化的亲本抗体TPP-18068和TPP-18087产生的双特异性抗体TPP-20489和TPP-26195的RGA结果
最后，在实施例17中所述的Stat3报告基因测定中测试优化的双特异性抗体TPP-29603和TPP-29697对IL-11介导的信号传导的抑制，不同之处在于食蟹猴IL-11(Invigate，例如，批号#C290621-19)和大鼠IL-11(Invigate，例如，批号#C301019-19)也经过测试，并且在测定中所有抗原均以6[nM]使用。为了比较，现有技术抗体TPP-23580和TPP-23552也包括在测定中。结果示于表E26中。
表E26：由优化的亲本抗体TPP-29528和TPP-29519产生的双特异性抗体TPP-29603和TPP-29697的RGA结果。
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NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
实施例37：在双复合物ELISA中分析的双特异性IL-11抗体对IL-11和IL-11Ra的相互作用的抑制
对双特异性抗体进行实施例18中所述的实验测定程序，相应地分别计算IC50[M]、功效(％)。结果示于表E27中。
表E27：在双复合物ELISA中分析的双特异性抗体对人IL-11和人IL-11Ra的相互作用的抑制
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
实施例38：在三复合物ELISA中分析的双特异性抗体对IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
对双特异性抗体进行实施例19中所述的实验测定程序，相应地分别计算IC50[M]、功效(％)。结果示于表E28中。
表E28：在三复合物ELISA中分析的双特异性抗体对人IL-11/IL-11Ra/gp130复合物形成的抑制
实施例39：双特异性IL-11抗体与IL2Ra的结合
对双特异性抗体进行实施例20中所述的实验测定程序。计算在1E-07[M]的抗体浓度下由相应双特异性抗体产生的信号相对于同种型对照抗体产生的信号的比率，并示于表E29中。双特异性抗体显示出与IL-2Ra无结合。
表E29：双特异性抗体的IL-2R结合相对于同种型对照抗体的结合的比率
抗体 抗体/同种型对照IL-2Ra结合信号的比率
TPP-26195 146.4
TPP-20489 851.9
TPP-29603 1.9
TPP-29697 0.8
TPP-29603和TPP-29697不结合IL2Ra。
实施例40：通过SPR、RGA、双复合物和三复合物ELISA对另外的市售抗体的表征
根据实施例16、17和18中所述的实验程序，在SPR、RGA和ELISA测定中分析记载识别人IL-11的市售抗体(参见表E30)。
表E30：在SPR、RGA、双复合物和三复合物ELISA中测试的另外的市售抗IL-11抗体的列表
如实施例16中所述使表E30中列出的市售抗体进行SPR，不同之处在于仅在200[nM]的单一浓度下测量人、相应小鼠IL-11。结果示于表E31中。
表E31：通过SPR测试的市售抗体
在SPR中，只有四种测试的市售抗体显示出与人或小鼠IL-11结合(GTX52814、LS-C104441、MA5-23711和LS-C193526)。
如实施例17中所述，对表E30中列出的市售抗体进行RGA。结果示于表E32中。
表E32：通过RGA测试的市售抗体
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
如实施例18中所述，对表E30中列出的市售抗体进行双复合物ELISA。结果示于表E33中。
表E33：通过双复合物ELISA测试的市售抗体
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
如实施例19中所述，对表E30中列出的市售抗体进行三复合物ELISA。结果示于表E34中。
表E34：通过三复合物ELISA测试的市售抗体
NM＝无意义(＝如果功效<20％或不能计算IC50值，则不报告值)
在所有测定中测试的市售抗体在SPR和RGA测定中无活性(GTX34009、MA5-30696和MA5-30695)，或在SPR、RGA、双复合物ELISA和三复合物ELISA中有活性(GTX52814、LS-C104441、MA5-23711、LS-C193526)。所测试的市售抗体在三复合物ELISA中均无活性，但在双复合物ELISA中有活性，如针对根据本发明的抗体所述。
实施例39：TPP-18068或TPP-18087在其浓度增加的亲和力成熟衍生物存在下与IL-11的结合
将25μl/孔的20[nM]生物素化的人IL-11(Invigate，例如，批号#C121021-19)的包被缓冲液pH9.6(Candor，#121125)溶液加入到链霉亲和素包被的384孔微量滴定板(Greiner bio-one，#781997)中，并在室温下孵育1小时。用50μl/孔PBS-t洗涤三次后，用50μl/孔SmartBlock溶液(Candor，#113125)封闭板，并在室温下再次孵育1小时。用PBS-T另外洗涤三次后，将人IgG的稀释系列(即，TPP-29536、TPP-29680或同种型对照抗体TPP-5657的10％ SmartBlock的PBS-T溶液，范围为2.5E-07[M]至1.6E-11[M])在恒定浓度1E-08[M]的鼠IgG TPP-18068或TPP 18087存在下以25μl/孔加入到板中，并在室温下孵育1小时。另外三次洗涤后，将在10％SmartBlock PBS-T中1：5000稀释的25μl抗小鼠-POD(Jackson，#715-035150)添加到板中并在室温下孵育1小时。最后洗涤三次后，加入25μl在PBS中1：1000稀释的AmplexRed溶液(Fisher Scientific，#VXA12222)，0.003％H2O2，并在室温下避光孵育15分钟。用酶标仪在535/595nm处测量相对荧光，并将信号转移至GraphPad Prism用于分析。
如图21a)中所示，浓度增加的竞争性抗体TPP-29536，TPP-18068的衍生物(在双复合物和三复合物ELISA中有活性)完全封闭TPP-18068与IL-11的结合，而TPP-29680，TPP-18087的衍生物(在三复合物ELISA中有活性，但在双复合物ELISA中无活性)没有该效果。此外，浓度增加的竞争性抗体TPP-29680完全封闭TPP-18087与IL-11的结合，而TPP-29536没有该效果(图21b)。这些数据表明，TPP-18068(在双复合物和三复合物ELISA中有活性)及其衍生物的表位与TPP-18087(在三复合物ELISA中有活性，但在双复合物ELISA中无活性)及其衍生物的表位不同并且不重叠。
附图说明
图1描述了大量月经出血的小鼠模型。其示出了如实施例1中所述的在诱导子宫内膜分化以模拟月经和月经子宫出血的卵巢切除的和雌激素和孕酮替代的小鼠中的孕酮(P4)停药。通过分析棉塞中的血液含量来监测出血量。通过分析子宫重量或组织学或组织降解标志物的表达与例如增殖标志物比较来监测对月经的其他影响。1)卵巢切除术；2)雌激素替代；3)孕酮/雌激素替代；4)子宫内应用油；5)孕酮停药(在第12天)；6)解剖(在第16天)。
图2示出了实施例1的实验的结果：其证明了功能阻断多克隆IL-11抗体(IL 11-fbAb AF 418；三角形)相对于同种型对照抗体(ctrl-Ab；TPP-12904；圆形)在HMB小鼠模型中对月经的影响。与同种型对照抗体组相比，IL-11抗体处理组中的出血[μL]显著缓解(双尾t检验，*p<0.0001)。
图3示出了实施例2的实验的结果：其证明了功能阻断IL-11抗体(多克隆IL 11-fbAb AF 418；三角形)相对于同种型对照抗体(ctrl-Ab；TPP-12904；圆形)在HMB小鼠模型中对子宫重量的影响。与同种型对照抗体组相比，IL-11功能封闭抗体组中的子宫重量[mg]显著减少(双尾t检验，*p<0.001)。
图4示出了实施例3的结果：3ng/ml人IL-11(hIL-11[218-IL来自R&D Systems,Inc.]，空心三角形)和1μg/ml人IL-11功能封闭抗体(hIL11-fbAb AF418；正方形)相对于同种型对照抗体(ctrl-Ab；TPP-12904；圆形)在原代人子宫肌瘤切片测定中对血管内皮生长因子(VEGF；ng VEGF/mg组织)分泌的影响。示出了血管生成IL-11的关键介质VEGF。通过用IL-11功能封闭抗体AF418(实心三角形)额外处理完全抑制了hIL-11显著诱导的血管生成介质VEGF-A的分泌。统计检验：单因素方差分析，*＊＊*p<0.0001。
图5示出了实施例4的实验的结果：功能封闭IL-11抗体(IL 11-fbAb；AF418；三角形)相对于同种型对照抗体(ctrl-Ab；TPP-12904；圆形)在HMB小鼠模型中在月经期间对体重变化百分比(％；d12/d16)的影响。与同种型对照抗体处理组相比，IL-11抗体处理组中的体重减轻显著(双尾t检验，*＊＊*p<0.0001)缓解。
图6示出了实施例5的实验的结果：与多克隆功能封闭抗体AF418(菱形)相比，市售单克隆IL-11功能封闭抗体Mab-218(实心三角形)与其IgG对照抗体TPP-10748(圆形)相比和Mab-418(空心三角形)与其IgG对照抗体TPP-10750(正方形)相比对ScidBeige小鼠月经的影响。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析检验(*p<0.05；*＊＊*p<0.0001)。
图7：单克隆抗体对Scid beige小鼠月经出血的效力依赖性抑制。示出了与同种型对照抗体TPP-10159(圆形)相比，IL-11功能封闭抗体TPP-18068(三角形)对月经失血的显著影响，而IL-11功能封闭抗体TPP-18063(正方形)无影响。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析检验(**p<0.01)。
图8：Balb/c小鼠的大量月经出血模型中月经出血的剂量依赖性抑制，其中1mg/kg的TPP-18068(正方形)无抑制，但5mg/kg(三角形)或20mg/kg(菱形)相对于20mg/kg对照抗体TPP-10159(圆形)有显著抑制。显著性通过用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析检验(**p<0.01)。
图9：与对照抗体TPP-TPP10159(正方形)相比，功能封闭IL-11抗体(TPP-18068，圆形)在月经期间通过行进距离(水平活动)和直立(垂直活动)测量的对自发活动的影响。A：水平活动为5分钟内以米为单位的行进距离；B：5分钟内垂直活动(直立)次数。在A和B中用IL-11拮抗性抗体TPP-18068处理的动物更活跃(双尾t检验，分别为*p<0.05，**p<0.01)。
图10：与对照抗体TPP-10159在蜕膜化(圆形)和未蜕膜化子宫角(正方形)中相比，IL-11功能封闭抗体TPP-18068在第12天在HMB模型的蜕膜化(三角形)子宫角中降低Stat3磷酸化，但在未蜕膜化(菱形)子宫角中无影响。统计检验：用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析，**p<0.01；*＊*p<0.001。
图11：通过单克隆抗体缓解Balb/c小鼠的月经出血。TPP-18068(实心三角形)、TPP-26195(菱形)和TPP-23580(空心三角形)。与它们各自的对照IgG抗体TPP-27360(正方形)和TPP-10159(圆形)相比。TPP-18068和TPP-26195在15mg/kg剂量每周两次时显示出对大量月经出血的显著影响，而TPP-23580无影响。统计检验：双因素Mann-Whitney检验，*＊*p<0.001；**p<0.01；ns＝不显著。
图12示出了与对照IgG-抗体(正方形)相比，在Balb/c小鼠中双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195(圆形)以每周两次的15mg/kg剂量缓解子宫分化，如通过鼠大量月经出血模型的第12天的子宫重量所测量。统计检验：单尾t检验，*p<0.05。
图13示出了与10mg/kg的对照IgG-抗体TPP-27360(正方形)相比，在Balb/c小鼠中，双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-26195以每周两次的10mg/kg(圆形)、3mg/kg(菱形)、1mg/kg(实心三角形)和0.3mg/kg(空心三角形)剂量对月经出血的剂量依赖性缓解，已经证明以每周两次的1mg/kg剂量通过该IL-11功能封闭抗体的显著抑制(p<0.01)。统计检验：用于多重比较的Bonferroni校正的单因素方差分析，**p<0.01；*＊*p<0.001；ns＝不显著。
图14示出了与对照IgG抗体TPP-10159(正方形)相比，通过在Balb/c小鼠中等摩尔给药双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603(圆形)和抗体TPP 29528(菱形)和TPP-29519(实心三角形)对月经出血的缓解。此外，还示出了较低剂量的抗体TPP-29519(空心三角形)。该实验证明了对月经出血的显著抑制，尤其是通过等摩尔剂量的IL-11功能封闭抗体TPP-29603和TPP 29519。显著性检验：用于多重比较的Dunnett事后检验的单因素方差分析(对数标准化值)，**p<0.01。
图15示出了在Balb/c小鼠中，与每周两次皮下注射给药2mg/kg对照IgG抗体TPP-10159(正方形)和0.143mg/kg剂量的双抗原位点IL-11功能封闭抗体TPP-29603(空心三角形)相比，每周两次皮下注射给药2mg/kg(圆形)、0.7mg/kg(菱形)和0.3mg/kg(实心三角形)IL-11功能封闭抗体TPP-29523对月经出血的剂量依赖性缓解，这证明了在所有测试剂量下IL-11功能封闭抗体TPP-29523的显著抑制(**p<0.01)。统计检验：用于多重比较的Dunnett事后检验的单因素方差分析。
图16：用于引导发现的淘选策略：描述了选择生物素化抗原的2种主要策略。在每轮选择之前，包括对不相关的生物素化蛋白质的消耗步骤。
图17：用于测试人抗IL-11抗体(a)或鼠抗IL-11抗体(b)的双复合物ELISA的示意图。图a)示出了当竞争性IL-11抗体具有人IgG形式时的双复合物测定原理。首先，生物素化的人或鼠IL-11被固定在微量滴定板表面上的链霉亲和素捕获。鼠IL-11Ra-小鼠-Fc融合蛋白将与捕获的生物素化的IL-11结合，除非竞争性抗体以IL-11Ra的结合位点被封闭的方式与IL-11结合。用抗小鼠-POD试剂和底物检测与IL-11结合的鼠IL-11Ra-小鼠-Fc的相对量。图b)示出了当竞争性IL-11抗体具有鼠IgG形式时的双复合物测定原理。首先，生物素化的人或鼠IL-11被固定在微量滴定板表面上的链霉亲和素捕获。犬IL-11Ra-人-Fc融合蛋白将与捕获的生物素化的IL-11结合，除非竞争性抗体以IL-11Ra的结合位点被封闭的方式与IL-11结合。用抗小鼠-POD试剂和底物检测与IL-11结合的犬IL-11Ra-小鼠-Fc的相对量。
图18：用于测试人抗IL-11抗体(a)或鼠抗IL-11抗体(b)的三复合物测定形式的示意图。图a)示出了当竞争性IL-11抗体具有人IgG形式时的三复合物测定原理。首先，将抗小鼠Fc抗体作为捕获试剂包被在微量滴定板的表面上。接着，将小鼠IL-11Ra-小鼠-Fc融合蛋白、小鼠或人IL-11、小鼠或人gp130-人-Fc融合蛋白和竞争性IL-11抗体的混合物添加到板中。根据测试的是小鼠或人IL-11，使用物种匹配的小鼠或人gp130融合蛋白。小鼠-IL-11Ra、小鼠或人IL-11和小鼠或人gp130将形成三分子复合物，其将被包被的抗小鼠Fc抗体捕获并被标记的抗小鼠或人gp130抗体(通过生物素化和链霉亲和素-POD标记)检测。然而，在封闭小鼠IL-11Ra和IL-11之间的相互作用或gp130和IL-11之间的相互作用的方式与小鼠或人IL-11结合的竞争性抗体存在下，将不产生三分子复合物，并且由链霉亲和素过氧化物酶产生的信号将减弱。值得注意的是，gp130融合蛋白中的人Fc标签未用于该测定形式。
图b)示出了当竞争性IL-11抗体具有鼠IgG形式时的三复合物测定原理。首先，将抗人Fc抗体作为捕获试剂包被在微量滴定板的表面上。接着，将小鼠IL-11Ra-小鼠-Fc融合蛋白、小鼠或人IL-11、小鼠或人gp130-人-Fc融合蛋白和竞争性IL-11抗体的混合物加入到板中。根据测试的是小鼠或人IL-11，使用物种匹配的小鼠或人gp130-人-Fc融合蛋白。小鼠-IL-11Ra、小鼠或人IL-11和小鼠或人gp130将形成三分子复合物，其将被包被的抗人Fc抗体捕获并被标记的抗小鼠或IL-11Ra抗体(通过生物素化和链霉亲和素-POD标记)检测。然而，在封闭小鼠IL-11Ra和IL-11之间的相互作用或gp130和IL-11之间的相互作用的方式与小鼠或人IL-11结合的竞争性抗体存在下，将不产生三分子复合物，并且由链霉亲和素过氧化物酶产生的信号将减弱。值得注意的是，小鼠IL-11Ra融合蛋白中的小鼠Fc标签未用于该测定形式。
图19：第二轮亲和力成熟TPP-18087的组合文库设计的图示。所选的突变在VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1和VLCDR3的序列下方示出。
图20：如实施例34中产生的双特异性抗体的一般组成。第一抗体的可变区(例如TPP-18068)转移至scFv，所述scFv融合至含有杵突变的人IgG Fc结构域。第二抗体的可变区(例如TPP-18087)转移至scFv，所述scFv融合至含有臼突变的人IgG Fc结构域。当两条链在宿主细胞中表达时，形成双特异性抗体，其可以通过常规方法从培养上清液中纯化。
图21：在双复合物和三复合物ELISA中有活性的IL-11抗体与在三复合物ELISA中有活性但在双复合物ELISA中没有活性的IL-11抗体之间缺乏竞争。图a)示出了通过TPP-18068与包被在微量滴定板上的人IL-11结合产生的相对荧光，随后通过抗小鼠Fc抗体-POD缀合物检测。在含量增加的TPP-29536(TPP-18068的亲和力成熟且含有人Fc的衍生物)存在下，信号减弱并且在最高抗体浓度下完全封闭。TPP-18068和TPP-29536在双复合物ELISA和三复合物ELISA中具有活性。相比之下，TPP-29680(TPP-18087的亲和力成熟且含有人Fc的衍生物)浓度的增加不会导致信号强度的显著降低。TPP-18087和TPP-29680在三复合物中有活性，但在双复合物ELISA中无活性。图b)示出了通过TPP-18087与包被在微量滴定板上的人IL-11结合产生的相对荧光，随后通过抗小鼠Fc抗体-POD缀合物检测。在含量增加的TPP-29680存在下，信号减弱并且在最高抗体浓度下完全封闭。相比之下，TPP-29536浓度的增加不会导致信号强度的显著降低。
序列表
IL-11、IL-11Ra和gp130的序列
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抗体序列
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参考文献
在本说明书中引用了以下文章。为了实现本发明的目的，其内容通过引用纳入本文。
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WO2018109170,
WO2017103108,
WO2019238882,
WO2019238884
US 2014/0219919
EP2794658
序列表
<110> 拜耳有限责任公司
<120> 用于治疗异常子宫出血的IL-11或IL-11Ra的抑制剂
<130> BHC213043
<160> 197
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro
1 5 10 15
Asp Thr Ala Val Ala Pro Gly Pro Pro Pro Gly Pro Pro Arg Val Ser
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
Pro Ala Asp Gly Asp His Asn Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met
65 70 75 80
Ser Ala Gly Ala Leu Gly Ala Leu Gln Leu Pro Gly Val Leu Thr Arg
85 90 95
Leu Arg Ala Asp Leu Leu Ser Tyr Leu Arg His Val Gln Trp Leu Arg
100 105 110
Arg Ala Gly Gly Ser Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Thr
115 120 125
Leu Gln Ala Arg Leu Asp Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met
130 135 140
Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Pro Pro Pro Asp Pro Pro Ala Pro Pro
145 150 155 160
Leu Ala Pro Pro Ser Ser Ala Trp Gly Gly Ile Arg Ala Ala His Ala
165 170 175
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<213> 智人
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Arg Arg Ala Gly Gly Ser Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 智人
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Arg Ser Pro Ser Thr Gly Pro Trp Pro Cys Pro Gln Asp Pro Leu Gly
165 170 175
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180 185 190
Ile Asn Val Thr Glu Val Asn Pro Leu Gly Ala Ser Thr Arg Leu Leu
195 200 205
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210 215 220
Arg Val Glu Ser Val Pro Gly Tyr Pro Arg Arg Leu Arg Ala Ser Trp
225 230 235 240
Thr Tyr Pro Ala Ser Trp Pro Cys Gln Pro His Phe Leu Leu Lys Phe
245 250 255
Arg Leu Gln Tyr Arg Pro Ala Gln His Pro Ala Trp Ser Thr Val Glu
260 265 270
Pro Ala Gly Leu Glu Glu Val Ile Thr Asp Ala Val Ala Gly Leu Pro
275 280 285
His Ala Val Arg Val Ser Ala Arg Asp Phe Leu Asp Ala Gly Thr Trp
290 295 300
Ser Thr Trp Ser Pro Glu Ala Trp Gly Thr Pro Ser Thr Gly Thr Ile
305 310 315 320
Pro Lys Glu Ile Pro Ala Trp Gly Gln Leu His Thr Gln Pro Glu Val
325 330 335
Glu Pro Gln Val Asp Ser Pro Ala Pro Pro Arg Pro Ser Leu Gln Pro
340 345 350
His Pro Arg Leu Leu Asp His Arg Asp Ser Val Glu Gln Val Ala Val
355 360 365
Leu Ala Ser Leu Gly Ile Leu Ser Phe Leu Gly Leu Val Ala Gly Ala
370 375 380
Leu Ala Leu Gly Leu Trp Leu Arg Leu Arg Arg Gly Gly Lys Asp Gly
385 390 395 400
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cctgccctgg ggaacccctg gccctgtggg gacatgaact gtgtttgccg cctggtcctg 180
gtcgtgctga gcctgtggcc agatacagct gtcgcccctg ggccaccacc tggcccccct 240
cgagtttccc cagaccctcg ggccgagctg gacagcaccg tgctcctgac ccgctctctc 300
ctggcggaca cgcggcagct ggctgcacag ctgagggaca aattcccagc tgacggggac 360
cacaacctgg attccctgcc caccctggcc atgagtgcgg gggcactggg agctctacag 420
ctcccaggtg tgctgacaag gctgcgagcg gacctactgt cctacctgcg gcacgtgcag 480
tggctgcgcc gggcaggtgg ctcttccctg aagaccctgg agcccgagct gggcaccctg 540
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ggcatcaggg ccgcccacgc catcctgggg gggctgcacc tgacacttga ctgggccgtg 720
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ctgtgcctta tttatactta tttatttcag gagcaggggt gggaggcagg tggactcctg 960
ggtccccgag gaggagggga ctggggtccc ggattcttgg gtctccaaga agtctgtcca 1020
cagacttctg ccctggctct tccccatcta ggcctgggca ggaacatata ttatttattt 1080
aagcaattac ttttcatgtt ggggtgggga cggaggggaa agggaagcct gggtttttgt 1140
acaaaaatgt gagaaacctt tgtgagacag agaacaggga attaaatgtg tcatacatat 1200
ccacttgagg gcgatttgtc tgagagctgg ggctggatgc ttgggtaact ggggcagggc 1260
aggtggaggg gagacctcca ttcaggtgga ggtcccgagt gggcggggca gcgactggga 1320
gatgggtcgg tcacccagac agctctgtgg aggcagggtc tgagccttgc ctggggcccc 1380
gcactgcata gggccttttg tttgtttttt gagatggagt ctcgctctgt tgcctaggct 1440
ggagtgcagt gaggcaatct gaggtcactg caacctccac ctcccgggtt caagcaattc 1500
tcctgcctca gcctcccgat tagctgggat cacaggtgtg caccaccatg cccagctaat 1560
tatttatttc ttttgtattt ttagtagaga cagggtttca ccatgttggc caggctggtt 1620
tcgaactcct gacctcaggt gatcctcctg cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag 1680
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tatggctgtg ttcaccatag caaactggaa acaatctaga tatccaacag tgagggttaa 1860
gcaacatggt gcatctgtgg atagaacgcc acccagccgc ccggagcagg gactgtcatt 1920
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aagtccaaga gttcgagacc ggcctgcgag acatggcaaa accctgtctc aaaaaagaaa 2100
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<210> 8
<211> 432
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 8
Met Ser Ser Ser Cys Ser Gly Leu Thr Arg Val Leu Val Ala Val Ala
1 5 10 15
Thr Ala Leu Val Ser Ser Ser Ser Pro Cys Pro Gln Ala Trp Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Val Gln Tyr Gly Gln Pro Gly Arg Pro Val Met Leu Cys Cys
35 40 45
Pro Gly Val Ser Ala Gly Thr Pro Val Ser Trp Phe Arg Asp Gly Asp
50 55 60
Ser Arg Leu Leu Gln Gly Pro Asp Ser Gly Leu Gly His Arg Leu Val
65 70 75 80
Leu Ala Gln Val Asp Ser Pro Asp Glu Gly Thr Tyr Val Cys Gln Thr
85 90 95
Leu Asp Gly Val Ser Gly Gly Met Val Thr Leu Lys Leu Gly Phe Pro
100 105 110
Pro Ala Arg Pro Glu Val Ser Cys Gln Ala Val Asp Tyr Glu Asn Phe
115 120 125
Ser Cys Thr Trp Ser Pro Gly Gln Val Ser Gly Leu Pro Thr Arg Tyr
130 135 140
Leu Thr Ser Tyr Arg Lys Lys Thr Leu Pro Gly Ala Glu Ser Gln Arg
145 150 155 160
Glu Ser Pro Ser Thr Gly Pro Trp Pro Cys Pro Gln Asp Pro Leu Glu
165 170 175
Ala Ser Arg Cys Val Val His Gly Ala Glu Phe Trp Ser Glu Tyr Arg
180 185 190
Ile Asn Val Thr Glu Val Asn Pro Leu Gly Ala Ser Thr Cys Leu Leu
195 200 205
Asp Val Arg Leu Gln Ser Ile Leu Arg Pro Asp Pro Pro Gln Gly Leu
210 215 220
Arg Val Glu Ser Val Pro Gly Tyr Pro Arg Arg Leu His Ala Ser Trp
225 230 235 240
Thr Tyr Pro Ala Ser Trp Arg Arg Gln Pro His Phe Leu Leu Lys Phe
245 250 255
Arg Leu Gln Tyr Arg Pro Ala Gln His Pro Ala Trp Ser Thr Val Glu
260 265 270
Pro Ile Gly Leu Glu Glu Val Ile Thr Asp Ala Val Ala Gly Leu Pro
275 280 285
His Ala Val Arg Val Ser Ala Arg Asp Phe Leu Asp Ala Gly Thr Trp
290 295 300
Ser Ala Trp Ser Pro Glu Ala Trp Gly Thr Pro Ser Thr Gly Pro Leu
305 310 315 320
Gln Asp Glu Ile Pro Asp Trp Ser Gln Gly His Gly Gln Gln Leu Glu
325 330 335
Ala Val Val Ala Gln Glu Asp Ser Pro Ala Pro Ala Arg Pro Ser Leu
340 345 350
Gln Pro Asp Pro Arg Pro Leu Asp His Arg Asp Pro Leu Glu Gln Val
355 360 365
Ala Val Leu Ala Ser Leu Gly Ile Phe Ser Cys Leu Gly Leu Ala Val
370 375 380
Gly Ala Leu Ala Leu Gly Leu Trp Leu Arg Leu Arg Arg Ser Gly Lys
385 390 395 400
Asp Gly Pro Gln Lys Pro Gly Leu Leu Ala Pro Met Ile Pro Val Glu
405 410 415
Lys Leu Pro Gly Ile Pro Asn Leu Gln Arg Thr Pro Glu Asn Phe Ser
420 425 430
<210> 9
<211> 432
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 9
Met Ser Ser Ser Cys Ser Gly Leu Thr Arg Val Leu Val Ala Val Ala
1 5 10 15
Thr Ala Leu Val Ser Ser Ser Ser Pro Cys Pro Gln Ala Trp Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Val Gln Tyr Gly Gln Pro Gly Arg Pro Val Met Leu Cys Cys
35 40 45
Pro Gly Val Ser Ala Gly Thr Pro Val Ser Trp Phe Arg Asp Gly Asp
50 55 60
Ser Arg Leu Leu Gln Gly Pro Asp Ser Gly Leu Gly His Arg Leu Val
65 70 75 80
Leu Ala Gln Val Asp Ser Pro Asp Glu Gly Thr Tyr Val Cys Gln Thr
85 90 95
Leu Asp Gly Val Ser Gly Gly Met Val Thr Leu Lys Leu Gly Phe Pro
100 105 110
Pro Ala Arg Pro Glu Val Ser Cys Gln Ala Val Asp Tyr Glu Asn Phe
115 120 125
Ser Cys Thr Trp Ser Pro Gly Gln Val Ser Gly Leu Pro Thr Arg Tyr
130 135 140
Leu Thr Ser Tyr Arg Lys Lys Thr Leu Pro Gly Ala Glu Ser Gln Arg
145 150 155 160
Glu Ser Pro Ser Thr Gly Pro Trp Pro Cys Pro Gln Asp Pro Leu Glu
165 170 175
Ala Ser Arg Cys Val Val His Gly Ala Glu Phe Trp Ser Glu Tyr Arg
180 185 190
Ile Asn Val Thr Glu Val Asn Pro Leu Gly Ala Ser Thr Cys Leu Leu
195 200 205
Asp Val Arg Leu Gln Ser Ile Leu Arg Pro Asp Pro Pro Gln Gly Leu
210 215 220
Arg Val Glu Ser Val Pro Gly Tyr Pro Arg Arg Leu His Ala Ser Trp
225 230 235 240
Thr Tyr Pro Ala Ser Trp Arg Arg Gln Pro His Phe Leu Leu Lys Phe
245 250 255
Arg Leu Gln Tyr Arg Pro Ala Gln His Pro Ala Trp Ser Thr Val Glu
260 265 270
Pro Ile Gly Leu Glu Glu Val Ile Thr Asp Thr Val Ala Gly Leu Pro
275 280 285
His Ala Val Arg Val Ser Ala Arg Asp Phe Leu Asp Ala Gly Thr Trp
290 295 300
Ser Ala Trp Ser Pro Glu Ala Trp Gly Thr Pro Ser Thr Gly Leu Leu
305 310 315 320
Gln Asp Glu Ile Pro Asp Trp Ser Gln Gly His Gly Gln Gln Leu Glu
325 330 335
Ala Val Val Ala Gln Glu Asp Ser Leu Ala Pro Ala Arg Pro Ser Leu
340 345 350
Gln Pro Asp Pro Arg Pro Leu Asp His Arg Asp Pro Leu Glu Gln Val
355 360 365
Ala Val Leu Ala Ser Leu Gly Ile Phe Ser Cys Leu Gly Leu Ala Val
370 375 380
Gly Ala Leu Ala Leu Gly Leu Trp Leu Arg Leu Arg Arg Ser Gly Lys
385 390 395 400
Glu Gly Pro Gln Lys Pro Gly Leu Leu Ala Pro Met Ile Pro Val Glu
405 410 415
Lys Leu Pro Gly Ile Pro Asn Leu Gln Arg Thr Pro Glu Asn Phe Ser
420 425 430
<210> 10
<211> 1761
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 10
tattggcgct gggaggagcc gcccccactg cctgcgctca gcactggagg gagcagaggc 60
cggggcagag ggtgagggcg gagggcgctg gcggcggctg ccgcagaaga tgagcagcag 120
ctgctcaggg ctgaccaggg tcctggtggc cgtggctaca gccctggtgt cttcctcctc 180
cccctgcccc caagcttggg gtcctccagg ggtccagtat ggacaacctg gcaggcccgt 240
gatgctgtgc tgccccggag tgagtgctgg gactccagtg tcctggtttc gggatggaga 300
ttcaaggctg ctccagggac ctgactctgg gttaggacac agactggtct tggcccaggt 360
ggacagccct gatgaaggca cttatgtctg ccagaccctg gatggtgtat cagggggcat 420
ggtgaccctg aagctgggct ttcccccagc acgtcctgaa gtctcctgcc aagcggtaga 480
ctatgaaaac ttctcctgta cttggagtcc aggccaggtc agcggtttgc ccacccgcta 540
ccttacttcc tacaggaaga agacgctgcc aggagctgag agtcagaggg aaagtccatc 600
caccgggcct tggccgtgtc cacaggaccc tctggaggcc tcccgatgtg tggtccatgg 660
ggcagagttc tggagtgagt accggatcaa tgtgaccgag gtgaacccac tgggtgccag 720
cacgtgccta ctggatgtga gattacagag catcttgcgt cctgatccac cccaaggact 780
gcgggtggaa tccgtacctg gttacccgag acgcctgcat gccagctgga cataccctgc 840
ctcctggcgt cgccaacccc actttctgct caagttccgg ttgcaatacc gaccagcaca 900
gcatccagcc tggtccacgg tggagcccat tggcttggag gaagtgataa cagatgctgt 960
ggctgggctg ccacacgcgg tacgagtcag tgccagggac tttctggatg ctggcacctg 1020
gagcgcctgg agcccagagg cctggggtac tcctagcact ggtcccctgc aggatgagat 1080
acctgattgg agccagggac acggacagca gctagaggca gtagtagctc aggaggacag 1140
cccggctcct gcaaggcctt ccttgcagcc ggacccaagg ccacttgatc acagggaccc 1200
cttggagcaa gtagctgtgt tagcgtctct gggaatcttc tcttgccttg gcctggctgt 1260
tggagctctg gcactggggc tctggctgag gctgagacgg agtgggaagg atggaccgca 1320
aaaacctggg ctcttggcac ccatgatccc ggtggaaaag cttccaggaa ttccaaacct 1380
gcagaggacc ccagagaact tcagctgatt tcatctgtaa cccggtcaga cttgggtggt 1440
taaaaggaca ggcagaaaga ggcggggcag tggatccctg tggatggagg tctcagctga 1500
aagtctgagc tcttttcttt gacacctata ctccaaactt gctgccggct gaaggctgtc 1560
tggacttccg atgtcctgag gtggaagtcc acctgaggaa tgtgtacaga agtctgtgtt 1620
cctgtgatcg tgtgtgtatg tgagacaggg agcaaaagtt ctctgcatgt gtgtacagat 1680
gattggagag tgtgtgcggt cttgggcttg gcccttctgg gaagtgtgaa gagttgaaat 1740
aaaagagacg gaagtttttg g 1761
<210> 11
<211> 2680
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 11
gactcagtcc agaccccttc ccccccgcct ggggtcaggg ctggacaggg aggagaagcg 60
agctccttgc aagacgagtt ggggacgaga tagctagtga ccctggcctt ggctgacccg 120
aaagaggcct ggagacatct gtcctcaaag gattgtccac ttccggtgac tccctgctgc 180
tgataatagg gcccatgttt cccagaaggc ccgaggttat cccaagactg cttctctccc 240
ttcacctccc atggcttcat tcctgaagag cctgtgatca cttagggtca gaaatagacg 300
gatgagcagc agctgctcag ggctgaccag ggtcctggtg gccgtggcta cagccctggt 360
gtcttcctcc tccccctgcc cccaagcttg gggtcctcca ggggtccagt atggacaacc 420
tggcaggccc gtgatgctgt gctgccccgg agtgagtgct gggactccag tgtcctggtt 480
tcgggatgga gattcaaggc tgctccaggg acctgactct gggttaggac acagactggt 540
cttggcccag gtggacagcc ctgatgaagg cacttatgtc tgccagaccc tggatggtgt 600
atcagggggc atggtgaccc tgaagctggg ctttccccca gcacgtcctg aagtctcttg 660
ccaagcggta gactatgaaa acttctcctg tacttggagt ccaggccagg tcagcggttt 720
gcccacccgc taccttactt cctacaggaa gaagacgctg ccaggagctg agagtcagag 780
ggaaagtcca tccaccgggc cttggccgtg tccacaggac cctctggagg cctcccgatg 840
tgtggtccat ggggcagagt tctggagtga gtaccggatc aatgtgaccg aggtgaaccc 900
actgggtgcc agcacgtgcc tactggatgt gagattacag agcatcttgc gtcccgatcc 960
accccaagga ctgcgggtgg aatccgtacc tggttaccca agacgcctgc atgccagctg 1020
gacataccct gcctcctggc gtcgccaacc ccactttctg ctcaagttcc ggttgcaata 1080
ccgaccagca cagcatccag cctggtccac ggtggagccc attggcttgg aggaagtgat 1140
aacagatact gtggctgggc tgccccacgc ggtacgagtc agtgccaggg actttctgga 1200
tgctggcacc tggagcgcct ggagcccaga ggcctggggt actcctagca ctggtctcct 1260
gcaggatgag atacctgatt ggagccaggg acatggacag cagctagagg cagtagtagc 1320
tcaggaggac agcctggctc ctgcaaggcc ttccttgcag ccagacccaa ggccacttga 1380
tcacagggat cccttggagc aagtagctgt gttagcatct ctgggaatct tctcttgcct 1440
tggcctggct gttggagccc tggcactggg gctctggctg aggctgagac ggagtgggaa 1500
ggaaggaccg caaaaacctg ggctcttggc acccatgatc ccggtggaaa agcttccagg 1560
aattccaaac ctgcagagga ccccagagaa cttcagctga tttcatctgt aacccggtca 1620
gacttgggtg gttaaaagga caggcagaaa gaggcggggc agtggatccc tgtggatgga 1680
ggtctcagct ggaagtctga gctcttttct ttgacaccta tactccaaac ttgctgccgg 1740
ctgaaggctg tctggacttc tgatgtcctg aggtggaagt ccacctgagg aatgtgtaca 1800
gaagtctgtg ttcctgtgat cgtgtgtgta tgtgagacag ggagcaaaag ttctctgcat 1860
gtgtgtacac atgattggag agtgtgtgcg gtcttgggct tggcccttct ggggagtgtg 1920
aagagttgaa ataaaagaga cggaagtttt tggagattgt cgtctaatgt tgctttatta 1980
gttttgctgt tgggggtgtg agtacatttt cttttgtagt accagattta aactgggtac 2040
agttccttgg agccttttcc cttggcgttc taaccaccga gccaggctgc ggttctgggg 2100
atgaacacag acactgcgcc gagccaggtg aagcctgaga agggaaaagt ccaaagctag 2160
gctcacattt gggggatgag cttaggtagg gttcaggggt taggggtaaa agcccgatga 2220
aaatccgggt aggtattaga gttagtaaag gggctaggga tgaatattgg gggttcggac 2280
tgagggcaga gttagaggta tcaaagttgg gggcagagct cacacgacag cctggaggtg 2340
acagtcccca tcagcctcct gcagttccat gtggacaatc ctcctcagca gcctgcttgg 2400
gagtggctgt ctatagagct gagtacagca gctagtgctg gagggcagag gcaaggctgg 2460
agaacaatag ggccacactt cagagaggtc tggacccaca agctgctctg attacatagc 2520
tagaggtcca actttctggg ccctgttccc tgtagtcccc tcgctcagca ttcattctat 2580
ggcctctgag aacttacctg cttcaggagc cgggctcaga agcaacagta acagcgggag 2640
gctgctggcg ggggagagcc cctccatcat gctcactcag 2680
<210> 12
<211> 918
<212> PRT
<213> 智人
<400> 12
Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu
1 5 10 15
Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser
20 25 30
Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr
50 55 60
Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr
65 70 75 80
Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser
85 90 95
Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu
100 105 110
Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys
115 120 125
Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys
130 135 140
Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu
145 150 155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg
165 170 175
Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val
180 185 190
Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr
195 200 205
Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro
210 215 220
Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu
225 230 235 240
Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys
245 250 255
Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile
260 265 270
Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp
275 280 285
Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu
290 295 300
Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile
305 310 315 320
Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile
325 330 335
Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val
355 360 365
Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala
370 375 380
Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu
385 390 395 400
Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile
405 410 415
Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala
420 425 430
Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu
435 440 445
Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala
450 455 460
Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr
465 470 475 480
Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val
485 490 495
Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala
500 505 510
Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys
515 520 525
Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val
530 535 540
Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr
545 550 555 560
Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu
565 570 575
Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met
580 585 590
Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe
595 600 605
Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro
610 615 620
Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys
625 630 635 640
Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro
645 650 655
Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro
660 665 670
Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe
675 680 685
Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe
690 695 700
Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn
705 710 715 720
Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser
725 730 735
Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn
740 745 750
Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg
755 760 765
His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln
770 775 780
Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp
785 790 795 800
His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys
805 810 815
Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu
820 825 830
Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu
835 840 845
Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln
850 855 860
Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly
865 870 875 880
Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala
885 890 895
Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln
900 905 910
Gly Gly Tyr Met Pro Gln
915
<210> 13
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人
<400> 13
Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu
1 5 10 15
Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser
20 25 30
Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr
50 55 60
Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr
65 70 75 80
Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser
85 90 95
Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu
100 105 110
Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys
115 120 125
Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys
130 135 140
Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu
145 150 155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg
165 170 175
Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val
180 185 190
Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr
195 200 205
Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro
210 215 220
Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu
225 230 235 240
Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys
245 250 255
Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile
260 265 270
Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp
275 280 285
Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu
290 295 300
Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile
305 310 315 320
Thr Tyr Glu Asp Asn Ile Ala Ser Phe
325
<210> 14
<211> 9027
<212> DNA
<213> 智人
<400> 14
ggatctgaca gtgttccgga gccggggcga gcagccaaaa ggcccgcgga gtcgcgctgg 60
gccgccccgg cgcagctgaa ccgggggccg cgcctgccag gccgacgggt ctggcccagc 120
ctggcgccaa ggggttcgtg cgctgtggag acgcggaggg tcgaggcggc gcggcctgag 180
tgaaacccaa tggaaaaagc atgacattta gaagtagaag acttagcttc aaatccctac 240
tccttcactt actaattttg tgatttggaa atatccgcgc aagatgttga cgttgcagac 300
ttggctagtg caagccttgt ttattttcct caccactgaa tctacaggtg aacttctaga 360
tccatgtggt tatatcagtc ctgaatctcc agttgtacaa cttcattcta atttcactgc 420
agtttgtgtg ctaaaggaaa aatgtatgga ttattttcat gtaaatgcta attacattgt 480
ctggaaaaca aaccatttta ctattcctaa ggagcaatat actatcataa acagaacagc 540
atccagtgtc acctttacag atatagcttc attaaatatt cagctcactt gcaacattct 600
tacattcgga cagcttgaac agaatgttta tggaatcaca ataatttcag gcttgcctcc 660
agaaaaacct aaaaatttga gttgcattgt gaacgagggg aagaaaatga ggtgtgagtg 720
ggatggtgga agggaaacac acttggagac aaacttcact ttaaaatctg aatgggcaac 780
acacaagttt gctgattgca aagcaaaacg tgacaccccc acctcatgca ctgttgatta 840
ttctactgtg tattttgtca acattgaagt ctgggtagaa gcagagaatg cccttgggaa 900
ggttacatca gatcatatca attttgatcc tgtatataaa gtgaagccca atccgccaca 960
taatttatca gtgatcaact cagaggaact gtctagtatc ttaaaattga catggaccaa 1020
cccaagtatt aagagtgtta taatactaaa atataacatt caatatagga ccaaagatgc 1080
ctcaacttgg agccagattc ctcctgaaga cacagcatcc acccgatctt cattcactgt 1140
ccaagacctt aaacctttta cagaatatgt gtttaggatt cgctgtatga aggaagatgg 1200
taagggatac tggagtgact ggagtgaaga agcaagtggg atcacctatg aagatagacc 1260
atctaaagca ccaagtttct ggtataaaat agatccatcc catactcaag gctacagaac 1320
tgtacaactc gtgtggaaga cattgcctcc ttttgaagcc aatggaaaaa tcttggatta 1380
tgaagtgact ctcacaagat ggaaatcaca tttacaaaat tacacagtta atgccacaaa 1440
actgacagta aatctcacaa atgatcgcta tctagcaacc ctaacagtaa gaaatcttgt 1500
tggcaaatca gatgcagctg ttttaactat ccctgcctgt gactttcaag ctactcaccc 1560
tgtaatggat cttaaagcat tccccaaaga taacatgctt tgggtggaat ggactactcc 1620
aagggaatct gtaaagaaat atatacttga gtggtgtgtg ttatcagata aagcaccctg 1680
tatcacagac tggcaacaag aagatggtac cgtgcatcgc acctatttaa gagggaactt 1740
agcagagagc aaatgctatt tgataacagt tactccagta tatgctgatg gaccaggaag 1800
ccctgaatcc ataaaggcat accttaaaca agctccacct tccaaaggac ctactgttcg 1860
gacaaaaaaa gtagggaaaa acgaagctgt cttagagtgg gaccaacttc ctgttgatgt 1920
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<210> 15
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<213> 智人
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actatgcata tttgtaacag catttatcat tagtggtgtt agctaaataa gcatcttagt 7380
gtaaatgaga tgcttcgtgt gggttttgtg acattttaaa tgacataatg gaatgtgatt 7440
taaaagaaaa ccagtacact atcttggtct taataacata gaatggagat ggcaaattta 7500
tccactagtt ttccagattt actatttaat agctgaggtc tgaaatcgta gcatcctccc 7560
tcctagtgga cattaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaacct acttggttgt caagagccca 7620
agtatggagg tgctgcgcca tcttgtggcc tgtctgtgcc caccctgcac tctgctggag 7680
tctccatcct tgttgcagtg agacttgaag ttcaagattg atacatggca tcctcctgct 7740
acttcttgag gttactaagt agtatatgaa actaatcagt cagcaagtcc acctggaagg 7800
aaaagaaaat ctcaactatt aatgtgcctt cacattgtga ttttgtctaa aaaaatgtag 7860
tgagtcaaaa aacccacaag ccagccaaca gtaactcctt cacatatata ccagagttta 7920
tagaaataac atgtcagctt tgggctatgt gctcctttgt ttaaaatctt ctatttggtt 7980
atggcttgta taggctcaag cctgatttct ttaaggtgtg gtggctcatc ttatcctaat 8040
gtgtatgata gatacagtcc atcctgcttt ggaaaagatt atgtaactcc ttgagagcat 8100
actctttctc tagcccaaag gcagtgagag agttttcttg ttcaggattg cttaactttc 8160
catttaagct ttttcttttt aaattaatac aaacttctac actttcaaaa tacgaaatat 8220
attacaactg cgtataggct cttccatact taagtccagt gcttgggcaa gttaatggag 8280
tgaaagacta caagcaaaga ggaactgagg tagaaaaaga agaatgtgtg aaagcagcag 8340
gaagctcagc caactcgaaa gcagggtgaa cagcttgagt cctgttgctg ctgatcgggg 8400
ttggctcttg gacaacttag taagatcatg gaaaggctgc ttgggttctc catagaaaag 8460
ttctgtctcc atcaagggag gaaaatgtac ctttcaactc aaaattcaat atttgttttt 8520
aaatatagct attttcccca accgctaaag attttcaaca gatacgaagc cagagcttag 8580
ttttagaaac ctgtggacat tcaaacctga ttctttattc cctgtgacta tggttatgtc 8640
attttacatg tcaaaaaagt gtatctagaa ttgtcatttc ttatttttga gcttttttta 8700
gtgagaatta tcccctcact taaatggctt tttatttaaa catctgtgca ttctgtatga 8760
aattgtagtc tttctgggat aacatggtga gctatatggt ggtaatccac acacacaaaa 8820
ataaaagcca aaaaaaaacc aaaa 8844
<210> 16
<211> 199
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 16
Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro
1 5 10 15
Asp Arg Val Val Ala Pro Gly Pro Pro Ala Gly Ser Pro Arg Val Ser
20 25 30
Ser Asp Pro Arg Ala Asp Leu Asp Ser Ala Val Leu Leu Thr Arg Ser
35 40 45
Leu Leu Ala Asp Thr Arg Gln Leu Ala Ala Gln Met Arg Asp Lys Phe
50 55 60
Pro Ala Asp Gly Asp His Ser Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met
65 70 75 80
Ser Ala Gly Thr Leu Gly Ser Leu Gln Leu Pro Gly Val Leu Thr Arg
85 90 95
Leu Arg Val Asp Leu Met Ser Tyr Leu Arg His Val Gln Trp Leu Arg
100 105 110
Arg Ala Gly Gly Pro Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Ala
115 120 125
Leu Gln Ala Arg Leu Glu Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met
130 135 140
Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Ala Ala Pro Asp Gln Pro Val Ile Pro
145 150 155 160
Leu Gly Pro Pro Ala Ser Ala Trp Gly Ser Ile Arg Ala Ala His Ala
165 170 175
Ile Leu Gly Gly Leu His Leu Thr Leu Asp Trp Ala Val Arg Gly Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Lys Thr Arg Leu
195
<210> 17
<211> 199
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）
<400> 17
Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro
1 5 10 15
Asp Thr Ala Val Ala Pro Gly Pro Pro Pro Gly Ser Pro Arg Ala Ser
20 25 30
Pro Asp Pro Arg Ala Glu Leu Asp Ser Thr Val Leu Leu Thr Arg Ser
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Thr Arg Gln Leu Thr Ile Gln Leu Lys Asp Lys Phe
50 55 60
Pro Ala Asp Gly Asp His Asn Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met
65 70 75 80
Ser Ala Gly Ala Leu Gly Ala Leu Gln Leu Pro Ser Val Leu Thr Arg
85 90 95
Leu Arg Ala Asp Leu Leu Ser Tyr Leu Arg His Val Gln Trp Leu Arg
100 105 110
Arg Ala Met Gly Ser Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Thr
115 120 125
Leu Gln Thr Arg Leu Asp Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met
130 135 140
Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Leu Pro Pro Asp Pro Pro Ala Pro Pro
145 150 155 160
Leu Ala Pro Pro Ser Ser Thr Trp Gly Gly Ile Arg Ala Ala His Ala
165 170 175
Ile Leu Gly Gly Leu His Leu Thr Leu Asp Trp Ala Val Arg Gly Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Lys Thr Arg Leu
195
<210> 18
<211> 199
<212> PRT
<213> 大鼠（Rattus norvegicus）
<400> 18
Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro
1 5 10 15
Asp Arg Val Val Ala Pro Gly Pro Pro Ala Gly Ser Pro Arg Val Ser
20 25 30
Ser Asp Pro Arg Ala Asp Leu Asp Ser Ala Val Leu Leu Thr Arg Ser
35 40 45
Leu Leu Ala Asp Thr Arg Gln Leu Ala Ala Gln Met Arg Asp Lys Phe
50 55 60
Pro Ala Asp Gly Asp His Asn Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met
65 70 75 80
Ser Ala Gly Thr Leu Gly Ser Leu Gln Leu Pro Gly Val Leu Thr Arg
85 90 95
Leu Arg Val Asp Leu Met Ser Tyr Phe Arg His Val Gln Trp Leu Arg
100 105 110
Arg Ala Ala Gly Pro Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Ala
115 120 125
Leu Gln Ala Arg Leu Glu Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met
130 135 140
Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Ala Ala Pro Asp Gln Pro Ala Val Pro
145 150 155 160
Leu Gly Pro Pro Ala Ser Ala Trp Gly Ser Ile Arg Ala Ala His Ala
165 170 175
Ile Leu Gly Gly Leu His Leu Thr Leu Asp Trp Ala Val Arg Gly Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Lys Thr Arg Leu
195
<210> 19
<211> 1949
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 19
tgcctggccc ttgctgctca cactcacaaa cctcccctcc ccaggccgag gcccagctga 60
ccccctgggt cccccggcag cggacaggga agggttaaag cccccccccc cggctccctg 120
ccccctgccc tggggaaccc ctggcctgtg gggacatgaa ctgtgtttgt cgcctggtcc 180
tggtggtgct gagcctctgg ccagatagag tcgttgcccc tgggccacca gctggctccc 240
ctcgagtctc ttcagaccct cgagcagatc tggacagcgc tgttctccta acccgatccc 300
tcctggcaga cacacggcaa ctagctgcac agatgagaga caaattccca gctgacggag 360
atcacagtct ggactccctg cccaccttgg ccatgagcgc tgggacattg ggatctttgc 420
agcttcctgg tgtgctgaca aggcttcgag tagacttgat gtcctacctc cggcatgtac 480
aatggctgcg ccgtgcaggt ggtccttccc taaagactct ggagccagag ctgggtgccc 540
tgcaagcccg actggaacgg ctactccgcc gtttacagct cttgatgtct cgcctggcct 600
tgccccaggc agccccagac caacctgtga tccccctggg ccctcctgcc tcagcctggg 660
gaagcatccg ggcagctcat gccatcctag gagggctgca cctgaccttg gactgggccg 720
tgcggggcct gctgttgtta aagactcgac tgtgactcgg gactgaaaac caccatcgat 780
accgcccttt aaaaccagat cttatttatt tatttatttt ggtacttgga ggggggcatg 840
atgatcaggg gcatgccaca ccccaaacaa ccgccccaca cccagctaga cagtctttcc 900
agtagacctg ggtgaggggg atcacctgtg gcttatttat acttatttat ttaaacaatt 960
ggggggtggg tgggtgcatc tgagaccctg aagagcaggg aactgagatc ctgggttctg 1020
gggtctctat gaaatctgtt cacagtgtct tcctcacttc ctacattatt tattaaacga 1080
ttacttttta tattaagagg aggaaggagg gaagccgggc gtggtggcgc atgcctttaa 1140
tcccagcact cgggaggcag aggcaggcag atttctgagt tcgaggccag cctggtctaa 1200
gagtgagttc gtgagttcca ggacagccag ggctacacag agaaaccctg tctcgaaaaa 1260
ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagaggagg aaggaggggg aaaaaggaag cctggggttt 1320
tataccaaaa tgtgagtttt tttttgtgag tcagagaagt gagaggattt aaatacatat 1380
ctatttagag gttattagca ggagtatgcc gaaaggatcg gagtctaaac tggtacccta 1440
gcatttcaaa ggtcctcaac agatacttaa caaaaagttc cagagcatca ccttataact 1500
aatagcacct gtatggtaca gagctgtaag gtacaaggtt ttttgtttca gcaaaattca 1560
cgatgaccaa tgggaaacaa tctaggcttt ctggggggcg ggcaggggat ggatgaataa 1620
agctagggat acatccgcat gatgaagttc tagctcgcca accataaaaa ggcaagttcc 1680
aggcgaagac tgctttagat attgaacgtc tctgcgaccc aggagcagca gatggtagaa 1740
ctactctccc tatacatgag tatggactgt ttggtttttc aaaatggaaa caccatgatg 1800
ttgacgatag ctgcctcagg gctgaaaaca agcaatggca cagtgggtga ctgttactgt 1860
ttgtgtttgc attttccaga gttttcacca tgactgtatt ttgcaggaca catttataaa 1920
cattaataaa cactattttt agaaaaaaa 1949
<210> 20
<211> 2550
<212> DNA
<213> 食蟹猴
<400> 20
cgaccacccc cccctttccc ttttcaactt ttccaacttt tccttccgtg ccctcctccg 60
agcgcggcgg cgtgagccct gcaaggcagc cgctccgtgt gaatggaaaa ggcaggcagg 120
gagggtgagt caggatgtgt caggccgccc tcccctgccg cctgcccccc gcccgcccgc 180
cccagccccc tatataaccc cccaggcgtc cacactccct cactgcctcg gccctgctgc 240
tgacgggcac atgcctcccc tccccaggcc gcggcccagc tgacccccgg ggctcccccg 300
gcagcggaca gggaagggtt aaaggccccc ggctccctgc cccctgccct ggggaacccc 360
tggccctgcg gggacatgaa ctgtgtttgc cgcctggtcc tggtcgtgct gagcctgtgg 420
ccagatacag ctgttgcccc tgggccacca cctggctccc ctcgagcttc cccagaccct 480
cgggccgagc tggacagcac cgtgctcctg acccgctctc tcctggagga cacgcggcag 540
ctgactatac agctgaagga caaattccca gctgacgggg accacaacct ggattccctg 600
cccaccctgg ccatgagcgc gggggcactg ggagctctac agctcccgag tgtgctgaca 660
aggctgcgag cggacctact gtcctacctg cggcatgtgc agtggctgcg tcgggcaatg 720
ggctcttccc tgaagaccct ggagcctgag ctgggcaccc tgcagacccg gctggaccgg 780
ctgctgcgcc ggctgcagct cctgatgtcc cgcctggccc tgccccagct gcccccagac 840
ccgccggcgc ccccgctggc gcccccctcc tcaacctggg ggggcatcag ggccgcccac 900
gccatcctgg gggggctgca cctgacactt gactgggccg tgagggggct actgctgctg 960
aagactcggc tgtgacccga ggcccagagc caccaccgtc cttccaaagc cacatcttat 1020
ttatttattt atttcggtac tgggggcgaa acagccaggt gatccccctg cctttatctc 1080
cccctagtta gagacagtcc ttccgtgagg ctggggggca tctgtgcctt atttatactt 1140
atttatttca ggagcggggg tgggctcctg ggtccccgag gaggagggag ttggggtccc 1200
ggattcttgt gtccacagac ttctgccctg gctcctcccg ctcgaggcct gggcaggaat 1260
acatactatt tatttaagca attacttttc atgttggggt ggggagggag gggaaaggga 1320
agcctgggtt tttgtacaaa aatgtgagaa acctttgtga gacgaagaac aaggaattaa 1380
atgtgtcata catatccact tgagggcgac ttgtctgaga gctggggctg gatgctcggg 1440
taactggggc agggcaggtg gaggtcccga gtgggcgggg cagggactgg gagatgggtc 1500
agtcacccag acagctctgg ggaggcagag tttgagcctc gcctggggcc ccacactgca 1560
cagggctctt tgttttttga gatggagact ggctctgttg cctaggttgg agtgcagtgg 1620
cgcaatctaa actcactgca acctccacct cccgggttta atcgattctc ctgcctcagc 1680
ctcccgatta gctgggatca caggcgtgca ccaccacgcc cggctaatta tttatttctt 1740
ttgtattttc agtagagaca aggtttcacc atgttgacca ggctggtttc gaactcctga 1800
cctcaggtga tcctcctgcc ttggcctccc aaagtgctgg gattacaggt gtgagccacc 1860
gcacctgacc tatataggtc ttcaataaat atttaatgga aggttccaga agtcaccctg 1920
cgattaacgg tacccgtatg tgacaaagct gcaaggtcaa gatggttcat tatggctgtg 1980
ttgaccgtag caaattggaa acaatccaga tatccaacag gtgagggtta agcaacatgg 2040
tgcatcggtg gatggaatgc cacccggcca cccagagcag ggactagcat tcagggaggc 2100
taaggagaga ggcctgcttc ggatatagaa agatagcctg acattggcca ggcatggtgg 2160
tcacgcctgt aatcctagca ctctgggagg acgaagcaag tggatcactg aagtccaata 2220
gtttgagacc agcctgggag acgtggcgaa accctgtctc aaaagagaaa aaacgatgtc 2280
ctgacgtgaa acagctacaa aaccactgca tgatgcgatt ccaatttttg tgtttttctt 2340
tctatatatg gattaaaaaa aaaaaaaaaa ccctaaaggg aaataagcca aatgttgaca 2400
aggactgtct ccaggtcaaa ggagagaggt gggattgtgg gtgacttttg atgtttatga 2460
ttgtctgtat tttacagaat ttctgccatg actgtgtatt ttgcatgaca tattttaaaa 2520
ataataaaca ctatttttag aagaacagaa 2550
<210> 21
<211> 1675
<212> DNA
<213> 大鼠
<400> 21
gccgaggccc agctgacccc ctgggctccc ccggcagcgg acagggaagg gttaaaggcc 60
ccctcccccc ggctccctgc cccctgccct ggggaacccc tggcctgtgg ggacatgaac 120
tgtgtttgtc acctggtcct ggtggtgctg agcctctggc cagatagagt cgttgcccct 180
gggccaccag ctggctcccc tcgagtgtct tcagaccctc gtgcagatct ggatagcgct 240
gtcctcttga ccaggtccct cctggcagac acacggcaac tagctgcaca gatgagagac 300
aaattcccag ctgatggaga ccacaatctg gactccctac ctaccttggc catgagcgct 360
gggacactgg gatctttgca gcttcctgga gtgctgacaa ggcttcgagt agacttaatg 420
tcctacttcc gacatgtaca gtggttgcgc cgggcagctg gtccttccct aaagactctg 480
gagccagagc tgggtgccct gcaagcccga ctggaacggc tacttcgtcg cttacagctc 540
ttgatgtctc gcctagcctt gccccaggca gccccggacc aacctgcggt ccctctgggc 600
cctcctgcct cggcctgggg aagcatccgg gcagctcatg ccatcctagg agggctgcac 660
ctgaccttgg actgggccgt gcggggcctg ctgttgttaa agactcggct gtaactcagg 720
actgaaagcc accatcgaca tcgtccttta aagccagatc ttatttattt atttattttg 780
gtacttggag cgggggagca tgatgaacag gggcatgcca caccccaaac agccacaccc 840
agctagataa agtccttcca ggagacctgg gtgagggggc tcacctgtgg cttatttata 900
cttatttatt taaagaattg gggtgggtgc atctgagacc ctgaggagca gggaactgag 960
atcctgggtc ctgggtcttt acgaagtcta ttcacagtgt cttcctcact tttttattat 1020
ttattaaaca attacttttt atattaggag gatggagggg gggaaaggaa gcctggggtt 1080
tttataccaa aatgtgattt tttttttgtg acacagagaa gtggggtatt taactattaa 1140
tgtggggtat ataactattt agaggttatt agcaggaata ttccaaaggg atctgagtgt 1200
aaaccggtac cctagcactt caaaggtcct caacagatac ttagcaaacg gaccgaaaca 1260
cctcatgtct aacagcacct gcatggtaca gagatagcaa ggttcaaggt gtttcagcaa 1320
gagtcacgca ccctggcaaa tgggaaacaa cttaggtttt cggggggggg gggggggcag 1380
gggacggatg aatctagtta gggaagttcc aggcaaagac ttctttagat gttgaacgtc 1440
cctgtgcccc gagagcagca gaggatagaa cctctctttc tatacatgga tatagatttt 1500
ttttgttttt caaaatggaa acaccaaaat gttgacaaca gctgcctcag ggttgaaaac 1560
aagagatggc actgtgggtg actgttattg tttgtgcttg cattttccag agtttccacc 1620
atgactgtat tttgcatgac acgtttacaa acaataataa acactatttt tagaa 1675
<210> 22
<211> 455
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 22
Met Ser Ser Gly Cys Ser Gly Leu Ser Arg Val Leu Val Ala Val Ala
1 5 10 15
Thr Ala Leu Val Ser Ala Ser Ser Ser Cys Pro Gln Ala Trp Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Val Gln Tyr Gly Gln Pro Gly Arg Ser Val Lys Leu Cys Cys
35 40 45
Pro Gly Val Thr Ala Gly Asp Pro Val Ser Trp Phe Arg Asp Gly Glu
50 55 60
Pro Arg Leu Leu Gln Gly Pro Asp Ser Gly Leu Gly His Glu Leu Val
65 70 75 80
Leu Thr Gln Ala Asp Ser Thr Asp Glu Gly Thr Tyr Ile Cys Gln Thr
85 90 95
Leu Asp Gly Ala Leu Gly Gly Thr Val Thr Leu Gln Leu Gly Tyr Pro
100 105 110
Pro Ala Arg Pro Val Val Ser Cys Gln Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Phe
115 120 125
Ser Cys Thr Trp Ser Pro Ser Gln Ile Ser Gly Leu Pro Thr Arg Tyr
130 135 140
Leu Thr Ser Tyr Arg Lys Lys Thr Val Leu Gly Ala Asp Ser Gln Arg
145 150 155 160
Arg Ser Pro Ser Thr Gly Pro Trp Pro Cys Pro Gln Asp Pro Leu Gly
165 170 175
Ala Ala Arg Cys Val Val His Gly Ala Glu Phe Trp Ser Gln Tyr Arg
180 185 190
Ile Asn Val Thr Glu Val Asn Pro Leu Gly Ala Ser Thr Arg Leu Leu
195 200 205
Asp Val Ser Leu Gln Ser Ile Leu Arg Pro Asp Pro Pro Gln Gly Leu
210 215 220
Arg Val Glu Ser Val Pro Gly Phe Pro Arg Arg Leu Arg Ala Ser Trp
225 230 235 240
Thr Tyr Pro Ala Ser Trp Pro Arg Gln Pro His Phe Leu Leu Lys Phe
245 250 255
Arg Leu Gln Tyr Arg Pro Ala Gln His Pro Ala Trp Ser Thr Val Arg
260 265 270
Pro Gly Val Glu Pro Ala Gly Leu Glu Glu Met Ile Thr Asp Ala Val
275 280 285
Ala Gly Leu Pro His Ala Val Arg Val Ser Ala Arg Asp Phe Leu Asp
290 295 300
Ala Gly Thr Trp Ser Thr Trp Ser Pro Glu Ala Trp Gly Thr Pro Ser
305 310 315 320
Thr Gly Thr Val Pro Lys Glu Val Pro Ala Trp Gly Gln Leu His Met
325 330 335
Gln Pro Glu Val Glu Pro Gln Val Asp Ser Pro Ala Pro Pro Ser Pro
340 345 350
Ser Leu Gln Pro His Pro Arg Leu Leu Asp His Arg Asp Ser Val Glu
355 360 365
Gln Val Ala Val Leu Ala Ser Leu Gly Ile Leu Ser Phe Leu Gly Leu
370 375 380
Met Ala Gly Ala Leu Ala Leu Gly Leu Trp Ser Ser Lys Pro Ile Glu
385 390 395 400
Asp Pro Gly Gly Leu Arg Gln Ser Pro Leu Ile Ile Leu Ser Cys Trp
405 410 415
Cys Gly Trp Met Asp Ser Arg Ser Leu Trp Leu Gly Leu Ser Trp Lys
420 425 430
Phe Cys Leu Glu Pro Ile Ser Val Arg Pro Cys Ile Ser Asn Leu Pro
435 440 445
Ala Glu Arg Cys Leu Tyr Leu
450 455
<210> 23
<211> 431
<212> PRT
<213> 大鼠
<400> 23
Met Ser Ser Ser Arg Ser Gly Leu Thr Arg Val Leu Val Ala Val Ala
1 5 10 15
Thr Ala Leu Val Ser Ser Ser Thr Pro Cys Pro Gln Ala Trp Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Val Gln Tyr Gly Gln Pro Gly Arg Pro Val Met Leu Cys Cys
35 40 45
Pro Gly Val Asn Ala Gly Thr Pro Val Ser Trp Phe Arg Asp Gly Asp
50 55 60
Ser Arg Leu Leu Gln Gly Pro Asp Ser Gly Leu Gly His Arg Leu Val
65 70 75 80
Leu Ala Gln Val Asp Ser Arg Asp Glu Gly Thr Tyr Val Cys Arg Thr
85 90 95
Leu Asp Gly Val Phe Gly Gly Met Val Thr Leu Lys Leu Gly Ser Pro
100 105 110
Pro Ala Arg Pro Glu Val Ser Cys Gln Ala Val Asp Tyr Glu Asn Phe
115 120 125
Ser Cys Thr Trp Ser Pro Gly Arg Val Ser Gly Leu Pro Thr Arg Tyr
130 135 140
Leu Thr Ser Tyr Arg Lys Lys Thr Leu Pro Gly Ala Glu Ser Gln Arg
145 150 155 160
Glu Ser Pro Ser Thr Gly Pro Trp Pro Cys Pro Gln Asp Pro Leu Glu
165 170 175
Ala Ser Arg Cys Val Val His Gly Ala Glu Phe Trp Ser Glu Tyr Arg
180 185 190
Ile Asn Val Thr Glu Val Asn Pro Leu Gly Ala Ser Thr Cys Leu Leu
195 200 205
Asp Val Arg Leu Gln Arg Ile Leu Arg Pro Asp Pro Pro Gln Gly Leu
210 215 220
Arg Val Glu Ser Val Pro Gly Tyr Pro Arg Arg Leu His Ala Ser Trp
225 230 235 240
Thr Tyr Pro Ala Ser Trp Arg Arg Gln Pro His Phe Leu Leu Lys Phe
245 250 255
Arg Leu Gln Tyr Arg Pro Ala Gln His Pro Ala Trp Ser Thr Val Glu
260 265 270
Pro Ile Gly Leu Glu Glu Leu Ile Thr Asp Ala Val Ala Gly Leu Pro
275 280 285
His Ala Val Arg Val Ser Ala Arg Asp Phe Leu Asp Ala Gly Thr Trp
290 295 300
Ser Ala Trp Ser Pro Glu Ala Trp Gly Thr Pro Ser Thr Gly Pro Leu
305 310 315 320
Arg Asp Glu Val Pro Asp Gly Ser Arg Gly His Glu Gln Lys Leu Glu
325 330 335
Ala Ala Ala Gln Glu Asp Ser Pro Ala Pro Pro Ser Pro Ser Leu Gln
340 345 350
Pro Asp Pro Arg Pro Leu Asp His Arg Asp Pro Leu Glu Gln Val Ala
355 360 365
Val Leu Ala Ser Leu Gly Ile Phe Ser Phe Leu Gly Leu Ala Val Gly
370 375 380
Ala Leu Ala Leu Gly Leu Trp Leu Arg Leu Arg Arg Ser Gly Lys Asp
385 390 395 400
Gly Pro Gln Lys Pro Gly Phe Leu Ala Pro Met Ile Pro Gly Asp Lys
405 410 415
Leu Pro Gly Ile Pro Asn Leu Gln Arg Thr Pro Glu Asn Phe Ser
420 425 430
<210> 24
<211> 3389
<212> DNA
<213> 食蟹猴
<400> 24
agagggcgag ggcagagggc gctggcggca gcggccgcgg aaggtgaggc ctggtgtaga 60
cgccaaagtc ttgtcacgag tgggcggggc agggtgatgt atgatctgaa aggccgagag 120
tgactgacga ctgtcagtgt gtgtgtgcct gtgagtctgt gtctgtgtga cagtatcatt 180
gtgtgcgatt ctgagtgtca cttggtgcag ctgtcagcta atgtgactgc gtgtgtcagt 240
gtgcatggag ctggggctgc atgtggctgt gcaagtgtgg gattatgtgt gtatctgtca 300
atgcacattt ttggtgggac tgggttgtgt gtttgtgtga gagggactgt gaccacatta 360
gggaatgtgt tttgggaagg tctctgtggg gtttgagacc atgtctgcca gcatgagagt 420
gggtggctgg ctttgtgtgt gccaatgtgt gacttcagca gtagcagagc aaaagtgagg 480
tttgtgacta tgtgtgtgtg ctgggtccta acttaaaccg tgtgggagta cagctgtatt 540
catgtattgg gggacctact tcaagagccc ataggactga cctttctctt aagtgtccag 600
catggacgga cacacccaca acacacgtgg cttcccctcc ttcttcctct gctcaagaat 660
ccccagcatc aggtctactg ctccttactt tctgtttccc tgcttgactc agtttccctt 720
acatgccgtt ttctctccct gttgctgtct tactagggat atctctgcgt gtttcttcat 780
agctttgttc ccctggtctc tgtgtggtgc atttccagtt ttgcctctcc tgtctctttg 840
tttctccctg tgcccctatg cctgccttcc ctgctgatct tgatctcttt ggctagttgg 900
gggcctgtaa cagtgatgag atgcaggtct gccactgcta agagctccct gagagagggg 960
gcttagaccg tgatgaggag ttgcttttag gcggtgctgt gagccctggt agggggctgt 1020
gtatgtgtgt gactgcgtga gtttatgaat atgtgtaagt gtatctgagt ctgaggctgt 1080
gtggctgtgc ctgtgtgact gtgagtgacc gcatgtgaga gtgtgtaagt ctgagggtaa 1140
ctgtgggtct tgtgtatctg gcaccaaggg accaaaggca tttcctggtg ctggggccca 1200
aagagtggag ggggaggtga gaaatggctg gaacttccag gggaggggga actgcactct 1260
ctggcctctc cttatatccc ccaacttggg gcctgctttc ccctggaagc acagccagct 1320
gtgccctaag gaaacatttg gtgaggagtg aaaagaggag gagtttatat ctgatttttc 1380
atttgattgt gtccacgtgt gttcaaaggc atgccctttt gttaactgtg cgtcatgagt 1440
ccatgtgtga atgtgactat gtctggctgt gtgaaaacac agggcatctc tcactgacag 1500
ggacataagt attagccacc ctcttttccc tcttgctggc cttggctgtg tctgtggctt 1560
cctttccaga cttgggggag gcctcttccc ttcacagggc cttgggtggg agggaaggag 1620
ggaggaggca gaagcgggga gggggcctgg ctaggggcgg cggagctcca gggcttagag 1680
ggggcggggc agggaagggg aaggagggga tggctttggg gtcccagaac tgagtggagt 1740
aggagacagg ggctgtagct ggtgagaagt cctggaggcc atggacactc tgctgctggg 1800
atcaccgaga tgagcagcgg ctgctcaggg ctgagcaggg tcctggtggc cgtggctaca 1860
gccctggtgt ctgcctcctc ctcctgcccc caggcctggg gccccccagg ggtccagtat 1920
gggcagcccg gcaggtccgt gaagctgtgt tgtcctggag tgactgctgg ggacccagtg 1980
tcctggtttc gggacgggga gccaaggctg ctccagggac ctgactctgg gctagggcat 2040
gaactggtcc tgacccaggc agacagcact gatgagggca cctacatctg ccagacgctg 2100
gatggtgcac ttgggggcac agtgaccctg cagctgggct accctccagc ccgccctgtt 2160
gtctcctgcc aagcagctga ctatgagaac ttctcttgca cttggagtcc cagccagatc 2220
agcggtttac ccacccgcta cctcacctcc tacaggaaga agacagttct aggagctgat 2280
agccagagga ggagtccatc cacagggccc tggccatgcc cacaggatcc cttaggtgct 2340
gcccgctgtg ttgtccacgg ggctgagttc tggagccagt accggattaa tgtgactgag 2400
gtgaacccac tgggcgccag cacacgcctg ctggatgtga gcttgcagag catcttgcgc 2460
cctgacccac cccagggcct gcgggtagag tcggtaccag gtttcccccg acgcctgcga 2520
gccagctgga cataccctgc ctcctggccg cgccagcccc atttcctgct caagttccgt 2580
ttgcagtacc gtccggcaca gcatccagcc tggtccacgg tgaggcctgg agtggagcca 2640
gctggactgg aggagatgat cacagatgct gtggctgggc tgccccatgc cgtacgagtc 2700
agtgcccggg actttctgga tgctggcacc tggagcacct ggagcccgga ggcctgggga 2760
actccgagca ctgggaccgt accaaaggag gtaccagctt ggggccagct acacatgcag 2820
ccagaggtgg agcctcaggt ggacagccct gctcctccaa gcccctccct ccaaccacac 2880
cctcggctac ttgatcacag ggactctgtg gagcaggtag ctgtgctggc gtctttggga 2940
atcctttctt tcctgggact gatggctgga gccctggcac tggggctctg gagctccaaa 3000
cctatagagg acccaggagg gcttcggcag agtccactta taattctgtc ttgctggtgt 3060
ggatggatgg acagtagatc cctatggttg ggtctcagct ggaagttctg tttggagccc 3120
atttctgtga gaccctgtat ttcaaatttg ccagctgaaa ggtgcctgta cctctgattt 3180
caccccagag ttggagttct gctcgaggaa tgtgtgtaat gtgtacatct gtgtccatgt 3240
gtgaccatgt gtctgtgagg cagggaacat atattctctg catgcatgta tgtaggtgcc 3300
tggggagtgt gtgtgggtcc ttggctcttg gcctttcccc ttgcaggggt tgcgcaggtg 3360
tgaataaaga gaataaggaa gttcttgga 3389
<210> 25
<211> 1713
<212> DNA
<213> 大鼠
<400> 25
ctcctgtagg agggagtctt ggaggccatg agcactcagt cactgtgatt ttcaagatga 60
gcagcagccg ctcagggctg accagggtcc tggtggccgt ggctacagcc ctggtgtctt 120
cctccacccc ctgcccccaa gcttggggtc ctccaggggt ccagtatggg cagcctggca 180
ggcccgtgat gctgtgctgc cccggagtga atgctgggac tccggtgtcc tggtttcggg 240
atggggactc gaggctgctc cagggacctg actctggact aggacacaga ctggtcttgg 300
cccaggtgga cagccgtgac gagggcactt acgtctgtcg gacgctggat ggtgtatttg 360
ggggcatggt gaccctgaag ctgggctccc ccccagctcg gccggaggtc tcctgccaag 420
cagtagacta tgaaaacttt tcttgtactt ggagtccagg ccgggtcagc ggtttgccca 480
cccgctacct tacttcctac aggaagaaga ccctgccagg agctgagagt cagagggaga 540
gtccgtctac cgggccttgg ccatgcccac aagaccccct ggaggcttcc cgatgtgtgg 600
tccacggggc agagttctgg agtgaatacc ggatcaatgt gactgaggtg aacccactgg 660
gcgccagcac gtgcctactg gatgtgagat tacagaggat cttacgtcct gatccacccc 720
aagggctgcg ggtggaatca gtacctggct acccgagacg cctgcatgcc agctggacat 780
accctgcctc ctggcgtcgc cagccccact tcctgctcaa gttccggttg caataccgtc 840
cagcacagca tccagcctgg tccacggtgg agcccattgg cttggaggag ttgataacag 900
atgccgtggc tgggctgccc catgcggtac gagtcagcgc cagggacttt ctggatgctg 960
gcacctggag tgcttggagc ccagaggcct ggggtactcc tagcaccggt cccctgcggg 1020
atgaggtacc tgatgggagc cggggacacg aacagaagct agaggcagca gctcaggagg 1080
acagccccgc tcctccaagc ccttccttgc agccagaccc aaggccactt gatcacaggg 1140
accccttgga gcaagtggct gtgttagcat ctctgggaat cttctctttc cttggcctgg 1200
ctgttggagc cctggctctg gggctctggc tgaggctgag gcggagtggg aaggacgggc 1260
ctcaaaagcc tggcttcttg gcaccaatga tcccagggga caagcttcca ggaatcccaa 1320
acctgcagag gaccccagag aacttcagct gatctcatct gcaaccctgt cagactgggg 1380
tggttaaatg gacaggcagg aggaggcagg acagcggatc cctatggatg gaggtctcag 1440
ttcgaagtct ggagcacttt tctttgacac ctgaactcca aacttgctgc cagctgctca 1500
ctctctggac ctctgatgcc gtccttgagg tggaagtccg cctgaggagc gtgtatcgaa 1560
gtctgtgtcc ctgtgactgt gtgtgtgtgt gatggggaga gcacgttctc cgtatgtgtg 1620
tgtatagatg attggagagt gtgtgtgtgg tcttgggctt ggctctcctg gggagcatgg 1680
agcgtgaaat aaagaggcgg acgtttttgg aaa 1713
<210> 26
<211> 917
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 26
Met Ser Ala Pro Arg Ile Trp Leu Ala Gln Ala Leu Leu Phe Phe Leu
1 5 10 15
Thr Thr Glu Ser Ile Gly Gln Leu Leu Glu Pro Cys Gly Tyr Ile Tyr
20 25 30
Pro Glu Phe Pro Val Val Gln Arg Gly Ser Asn Phe Thr Ala Ile Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Ala Cys Leu Gln His Tyr Tyr Val Asn Ala Ser Tyr
50 55 60
Ile Val Trp Lys Thr Asn His Ala Ala Val Pro Arg Glu Gln Val Thr
65 70 75 80
Val Ile Asn Arg Thr Thr Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Val Val Leu
85 90 95
Pro Ser Val Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Ser Phe Gly Gln Ile Glu
100 105 110
Gln Asn Val Tyr Gly Val Thr Met Leu Ser Gly Phe Pro Pro Asp Lys
115 120 125
Pro Thr Asn Leu Thr Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Asn Met Leu Cys
130 135 140
Gln Trp Asp Pro Gly Arg Glu Thr Tyr Leu Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
145 150 155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr Glu Lys Phe Pro Asp Cys Gln Ser Lys His
165 170 175
Gly Thr Ser Cys Met Val Ser Tyr Met Pro Thr Tyr Tyr Val Asn Ile
180 185 190
Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Ser Ser Glu
195 200 205
Ser Ile Asn Phe Asp Pro Val Asp Lys Val Lys Pro Thr Pro Pro Tyr
210 215 220
Asn Leu Ser Val Thr Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu Lys Leu
225 230 235 240
Ser Trp Val Ser Ser Gly Leu Gly Gly Leu Leu Asp Leu Lys Ser Asp
245 250 255
Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ile Gln Val Pro Leu
260 265 270
Glu Asp Thr Met Ser Pro Arg Thr Ser Phe Thr Val Gln Asp Leu Lys
275 280 285
Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Ser Ile Lys Asp Ser Gly
290 295 300
Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Thr Thr Tyr
305 310 315 320
Glu Asp Arg Pro Ser Arg Pro Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Thr Asn Pro
325 330 335
Ser His Gly Gln Glu Tyr Arg Ser Val Arg Leu Ile Trp Lys Ala Leu
340 345 350
Pro Leu Ser Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val Ile Leu
355 360 365
Thr Gln Ser Lys Ser Val Ser Gln Thr Tyr Thr Val Thr Gly Thr Glu
370 375 380
Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Val Ala Ser Leu Ala Ala
385 390 395 400
Arg Asn Lys Val Gly Lys Ser Ala Ala Ala Val Leu Thr Ile Pro Ser
405 410 415
Pro His Val Thr Ala Ala Tyr Ser Val Val Asn Leu Lys Ala Phe Pro
420 425 430
Lys Asp Asn Leu Leu Trp Val Glu Trp Thr Pro Pro Pro Lys Pro Val
435 440 445
Ser Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Glu Asn Ala Pro Cys
450 455 460
Val Glu Asp Trp Gln Gln Glu Asp Ala Thr Val Asn Arg Thr His Leu
465 470 475 480
Arg Gly Arg Leu Leu Glu Ser Lys Cys Tyr Gln Ile Thr Val Thr Pro
485 490 495
Val Phe Ala Thr Gly Pro Gly Gly Ser Glu Ser Leu Lys Ala Tyr Leu
500 505 510
Lys Gln Ala Ala Pro Ala Arg Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys Lys Val
515 520 525
Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Ala Trp Asp Gln Ile Pro Val Asp Asp
530 535 540
Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Ser Ile Ser Tyr Arg Thr Ser Val
545 550 555 560
Gly Lys Glu Met Val Val His Val Asp Ser Ser His Thr Glu Tyr Thr
565 570 575
Leu Ser Ser Leu Ser Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met Ala Ala
580 585 590
Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe Thr Thr
595 600 605
Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro Val Cys
610 615 620
Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys Phe Asn
625 630 635 640
Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro Asp Pro
645 650 655
Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro Arg His
660 665 670
Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe Thr Asp
675 680 685
Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asn Lys Lys Pro Cys Pro Asp
690 695 700
Asp Leu Lys Ser Val Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Val Ser Thr Glu
705 710 715 720
Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser Ser Arg
725 730 735
Pro Ser Ile Ser Ser Asn Glu Glu Asn Glu Ser Ala Gln Ser Thr Ala
740 745 750
Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg His Gln
755 760 765
Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln Pro Leu
770 775 780
Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp Ser Val
785 790 795 800
Asp Gly Gly Asp Glu Ile Leu Pro Arg Gln Ser Tyr Phe Lys Gln Asn
805 810 815
Cys Ser Gln Pro Glu Ala Cys Pro Glu Ile Ser His Phe Glu Arg Ser
820 825 830
Asn Gln Val Leu Ser Gly Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu Lys Gln
835 840 845
Gln Gln Val Ser Asp His Ile Ser Gln Pro Tyr Gly Ser Glu Gln Arg
850 855 860
Arg Leu Phe Gln Glu Gly Ser Thr Ala Asp Ala Leu Gly Thr Gly Ala
865 870 875 880
Asp Gly Gln Met Glu Arg Phe Glu Ser Val Gly Met Glu Thr Thr Ile
885 890 895
Asp Glu Glu Ile Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln Gly
900 905 910
Gly Tyr Met Pro Gln
915
<210> 27
<211> 924
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 27
Met Lys Tyr Pro His Lys Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Val Val Gln
1 5 10 15
Ala Leu Phe Ile Phe Leu Thr Thr Glu Ser Ile Gly Glu Leu Leu Asp
20 25 30
Pro Cys Gly Tyr Ile Ser Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser
35 40 45
Asn Phe Thr Ala Val Cys Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe
50 55 60
His Val Asn Ala Asn Tyr Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile
65 70 75 80
Pro Lys Glu Gln Tyr Thr Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr
85 90 95
Phe Thr Asp Ile Ser Ser Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu
100 105 110
Thr Phe Gly Gln Leu Glu Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser
115 120 125
Gly Leu Pro Pro Glu Lys Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu
130 135 140
Gly Lys Lys Met Arg Cys Glu Trp Asn Arg Gly Arg Glu Thr His Leu
145 150 155 160
Glu Thr Asn Phe Thr Leu Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala
165 170 175
Asp Cys Lys Ala Lys Arg Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr
180 185 190
Ser Thr Val Tyr Phe Val Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn
195 200 205
Ala Leu Gly Lys Val Thr Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr
210 215 220
Lys Val Lys Pro Asn Pro Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu
225 230 235 240
Glu Leu Ser Ser Ile Leu Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys
245 250 255
Ser Val Ile Arg Leu Lys Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala
260 265 270
Ser Thr Trp Ser Gln Ile Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser
275 280 285
Ser Phe Thr Val Gln Asp Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg
290 295 300
Ile Cys Cys Met Lys Glu Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser
305 310 315 320
Glu Glu Ala Asn Gly Ile Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro
325 330 335
Ser Phe Trp Tyr Lys Ile Asp Pro Ser His Ala Gln Gly Tyr Arg Thr
340 345 350
Val Gln Leu Met Trp Lys Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys
355 360 365
Ile Leu Asp Tyr Glu Val Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln
370 375 380
Asn Tyr Thr Val Asn Asp Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp
385 390 395 400
Arg Tyr Val Ala Thr Leu Thr Ala Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp
405 410 415
Ala Ala Val Leu Thr Ile Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro
420 425 430
Val Met Asp Leu Lys Ala Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu
435 440 445
Trp Thr Thr Pro Arg Glu Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys
450 455 460
Val Leu Ser Asp Lys Ala Pro Cys Ile Ala Asp Trp Gln Gln Glu Asp
465 470 475 480
Gly Thr Val His Arg Thr His Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys
485 490 495
Cys Tyr Leu Ile Thr Val Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser
500 505 510
Pro Glu Ser Ile Lys Ala Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly
515 520 525
Pro Thr Val Arg Thr Lys Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu
530 535 540
Trp Asp Gln Leu Pro Val Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr
545 550 555 560
Thr Ile Phe Tyr Arg Thr Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val
565 570 575
Asp Ser Ser His Thr Glu Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr
580 585 590
Leu Tyr Met Val Arg Met Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp
595 600 605
Gly Pro Glu Phe Thr Phe Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile
610 615 620
Glu Ala Ile Val Val Pro Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu
625 630 635 640
Leu Gly Val Leu Phe Cys Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His
645 650 655
Ile Trp Pro Asn Val Pro Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp
660 665 670
Ser Pro His Thr Pro Pro Arg His Asn Phe Ser Ser Lys Asp Gln Met
675 680 685
Tyr Ser Asp Gly Asn Phe Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala
690 695 700
Asn Asp Lys Lys Pro Phe Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe
705 710 715 720
Lys Lys Glu Lys Ile Asn Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly
725 730 735
Ser Ser Cys Met Ser Ser Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu
740 745 750
Asn Glu Ser Ser Gln Asn Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val
755 760 765
Val His Ser Gly Tyr Arg His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser
770 775 780
Arg Ser Glu Ser Thr Gln Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu
785 790 795 800
Asp Leu Gln Leu Val Asp His Val Asp Gly Ser Asp Asp Ile Leu Pro
805 810 815
Arg Gln Gln Tyr Phe Lys Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro
820 825 830
Asp Ile Ser His Phe Glu Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu
835 840 845
Glu Asp Phe Val Arg Leu Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln
850 855 860
Ser Cys Gly Ser Gly Glu Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala
865 870 875 880
Asp Pro Phe Gly Pro Gly Thr Glu Gly Gln Ile Glu Arg Phe Glu Thr
885 890 895
Ile Gly Met Glu Ala Ala Ile Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu
900 905 910
Pro Gln Thr Val Arg Gln Gly Gly Tyr Met Pro Gln
915 920
<210> 28
<211> 918
<212> PRT
<213> 大鼠
<400> 28
Met Ser Ala Leu Arg Ile Trp Leu Met Gln Ala Leu Leu Ile Phe Leu
1 5 10 15
Thr Thr Glu Ser Ile Gly Gln Leu Val Glu Pro Cys Gly Tyr Ile Tyr
20 25 30
Pro Glu Phe Pro Val Val Gln Arg Gly Ser Asn Phe Thr Ala Thr Cys
35 40 45
Val Leu Lys Glu Lys Cys Leu Gln Val Tyr Ser Val Asn Ala Thr Tyr
50 55 60
Ile Val Trp Lys Thr Asn His Val Ala Val Pro Lys Glu Gln Val Thr
65 70 75 80
Val Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Val Val Phe
85 90 95
Gln Asn Val Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Ser Phe Gly Gln Ile Glu
100 105 110
Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Leu Ser Gly Tyr Pro Pro Asp Ile
115 120 125
Pro Thr Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Asn Met Leu Cys
130 135 140
Gln Leu Asp Pro Gly Arg Glu Thr Tyr Leu Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
145 150 155 160
Lys Ser Glu Trp Ala Thr Glu Lys Phe Pro Asp Cys Arg Thr Lys His
165 170 175
Gly Thr Ser Ser Cys Met Met Gly Tyr Thr Pro Ile Tyr Phe Val Asn
180 185 190
Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Asn Val Ser Ser
195 200 205
Glu Pro Ile Asn Phe Asp Pro Val Asp Lys Val Lys Pro Ser Pro Pro
210 215 220
His Asn Leu Ser Val Thr Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu Lys
225 230 235 240
Leu Ala Trp Val Asn Ser Gly Leu Asp Ser Ile Leu Arg Leu Lys Ser
245 250 255
Asp Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ile Gln Val Pro
260 265 270
Leu Glu Asp Thr Val Ser Pro Arg Thr Ser Phe Thr Val Gln Asp Leu
275 280 285
Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Ser Ile Lys Glu Asn
290 295 300
Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Thr Thr
305 310 315 320
Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Val Asn
325 330 335
Ala Asn His Pro Gln Glu Tyr Arg Ser Ala Arg Leu Ile Trp Lys Thr
340 345 350
Leu Pro Leu Ser Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val Val
355 360 365
Leu Thr Gln Ser Lys Ser Val Ser Gln Thr Tyr Thr Val Asn Gly Thr
370 375 380
Glu Leu Ile Val Asn Leu Thr Asn Asn Arg Tyr Val Ala Ser Leu Ala
385 390 395 400
Ala Arg Asn Val Val Gly Lys Ser Pro Ala Thr Val Leu Thr Ile Pro
405 410 415
Gly Ser His Phe Lys Ala Ser His Pro Val Val Asp Leu Lys Ala Phe
420 425 430
Pro Lys Asp Asn Leu Leu Trp Val Glu Trp Thr Pro Pro Ser Lys Pro
435 440 445
Val Asn Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Glu Asn Ser Pro
450 455 460
Cys Ile Pro Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val Asn Arg Thr His
465 470 475 480
Leu Arg Gly Ser Leu Leu Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val Thr
485 490 495
Pro Val Phe Pro Gly Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Met Lys Ala Tyr
500 505 510
Leu Lys Gln Ala Ala Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys Lys
515 520 525
Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp His Leu Pro Val Asp
530 535 540
Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Ser Ile Ser Tyr Arg Thr Ser
545 550 555 560
Val Gly Lys Glu Met Val Val Arg Val Asp Ser Ser His Thr Glu Tyr
565 570 575
Thr Leu Ser Ser Leu Ser Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val His Met Ala
580 585 590
Ala Tyr Thr Glu Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe Thr
595 600 605
Thr Leu Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro Val
610 615 620
Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys Phe
625 630 635 640
Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro Asp
645 650 655
Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro Arg
660 665 670
His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Ala Asn Phe Thr
675 680 685
Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asn Lys Lys Pro Cys Pro
690 695 700
Asp Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Ser Thr
705 710 715 720
Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser Ser
725 730 735
Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Glu Glu Asn Glu Ser Ala Gln Ser Thr
740 745 750
Ala Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg His
755 760 765
Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln Pro
770 775 780
Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp Ser
785 790 795 800
Val Asp Ser Gly Asp Glu Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys Gln
805 810 815
Ser Cys Ser Gln Pro Gly Ala Ser Pro Asp Val Ser His Phe Gly Arg
820 825 830
Ser Ser Gln Val Pro Ser Gly Ser Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu Lys
835 840 845
Gln Gln Gln Val Ser Asp His Ile Ser Glu Pro Tyr Gly Ser Glu Gln
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<211> 7509
<212> DNA
<213> 食蟹猴
<400> 30
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ttctgaagcc aatgggaaga tcttggatta tgaagtggtt cttacacagt ccaagtcagt 1140
ttcgcaaact tacacagtta acggcacaga gttgatagta aacctcacca ataaccgcta 1200
tgtagcgtct ctagcagcaa gaaatgtggt cggcaagtcc cctgcaaccg tcctcaccat 1260
ccccggctcc cacttcaaag cttctcaccc cgtagtggat cttaaagcat ttccaaaaga 1320
taacctgctc tgggtagaat ggacaccgcc atctaaacct gtgaacaaat acatactaga 1380
gtggtgtgtg ttgtcagaga actcaccctg catcccagac tggcagcaag aagatggcac 1440
tgtgaatcgg acccacttaa gaggaagcct actggagagc aagtgctatc tgatcacagt 1500
aaccccagtg tttcccggtg ggcctggaag ccctgagtcc atgaaggcgt acctcaaaca 1560
agcagctcct tctaaaggac cgactgttcg gacaaagaaa gtggggaaaa atgaagctgt 1620
cttagagtgg gaccatcttc ctgttgatgt ccagaacgga ttcattagaa actactccat 1680
atcttataga accagtgttg gaaaagaaat ggttgtgcgt gtggattctt ctcacacaga 1740
atacacactg tcctctttga gtagcgatac actgtacatg gtccacatgg cagcatacac 1800
agaagaaggt gggaaggatg ggccggaatt cacttttaca acactaaagt ttgctcaagg 1860
agaaatcgaa gccatagtcg tgcctgtgtg cttagctttc ctcctgacaa cgctgctggg 1920
agtcttgttc tgctttaata aacgagacct aattaaaaaa cacatctggc cgaatgtccc 1980
agatccttca aagagtcata ttgcccagtg gtcacctcac acccccccaa ggcacaattt 2040
taactccaaa gatcagatgt actcagatgc caatttcact gacgtaagcg ttgtggaaat 2100
agaagcaaac aacaaaaagc cttgtccaga tgacctgaaa tccttggacc tgttcaagaa 2160
ggagaaaata agtacagaag ggcacagcag tggcattggg gggtcctcgt gcatgtcctc 2220
ttctaggccc agcatctcca gcagtgagga gaacgagtct gctcagagca ccgcaagcac 2280
ggtgcagtac tccaccgtgg tgcacagcgg ctacaggcac caggtgccgt cagtgcaagt 2340
gttctcaagg tctgagtcca cccagcccct gctagactcc gaggagcggc cagaggacct 2400
gcagctggtg gatagtgtgg acagcggtga cgagatctta cccaggcaac agtatttcaa 2460
acaaagctgc agtcagcctg gagccagtcc agatgtttca cacttcgaaa ggtcaagcca 2520
ggttccgtca ggcagtgagg aggattttgt cagactgaaa cagcagcagg tttcagatca 2580
catttcagag ccctatggct ccgagcaacg gaggctgttt caggaaggtt ctgtggcaga 2640
tgctcttggc acagggactg atggacagat agagagattc gaatctgttg gaatggagac 2700
agcgatggat gaagacattt ccaaaagtta cttgccacag actgtaagac aaggtggcta 2760
catgccacag tgagggaccg gctcctgcgg gacctcagcg ggactgcgaa gtaaagctaa 2820
aatgctcgtg acttcagatg ggaaataatc ttcagtccct gatgataacc attgccttta 2880
aggacaaagt cacaactggg ccatctccat tccagagtat ctgggattct ccttcaagca 2940
ctacatgaac tgactttatc ctctgaatag ctggaggact ctgcgctgtt tcagaatgtt 3000
tgcactgctg aaaactaagt gtgtctgagt ttgtaaagct tttgttttgc tccatagaaa 3060
gtggggaatt taaatgagcc gagccgagcc atggcgtcgc tcagctgtgc tggtggtgag 3120
actgaccatt cagatgccgg gagcaaaggt ctaaccctcc tcagccagca gcttcatgtc 3180
agagttcccc gggcagactg cccagattgt gtcacctatc aaaaaaaaaa aaaaaagagt 3240
ggagggggca gggtggctca tttctgggtt tgttattaga gaatcttggc ttgtttggtg 3300
ccgttggtat cgatgcttcc agttattact gaagaaaagg acgaactttc aagagaagca 3360
gcatagaaga acccattacc ttatattcac ctaaaacctc acagaaacct gcttattagt 3420
gataacattt ttcaaagtca gtttcaccaa cactctagtg gaccgggctg gcctcaaact 3480
cacagagatt tgtctgcctc agcctccgga gtactggggt taaaggcatg taccaccacc 3540
accacttgac ttaaaaattt gctgttttta aagacttaag ttgctgacat ttttctgaac 3600
gtatataaac acaccaggga cagatgattc cagatgttgg tggaggaagc actttatcca 3660
gaatgtcttc aactgtacat tactttaatt gactccacct tgtttttgtt tttaagacta 3720
gcaaggtgtt tgctgaaggg tggcattgcc cagaggctca ggcgagtccc agagctcacg 3780
caccgatgtc tgtgaccacc accgtggcag aagtcctcct acaaagctga cgaagccgtg 3840
agggttttgt tagtttgctg ggcggggatt gagcccacag ccttgtacat gctagacact 3900
accactgagc tcacctacac atctcactat gttatgtagg ctcaagcgat cctcctgtct 3960
cagcttcctg agtgttggga cttcgggtgt gcgctgccac acacccgacc aggtagtttt 4020
aatatctgcc atttatgagg tagagtttta cacaggattt aggactatct taaacctgtt 4080
ccttaggttg ctttgttaag gaatagcctg gacatccggt gtttagcact aaagccatta 4140
tgtatgcgcc taactttcca gtgacatgtc ctgggtgggc aggagttgac tgagcgccat 4200
tagtggttga ttaccaccaa gtgtgcgcac aggaaaagga ttaaagtttc agaacatggc 4260
ccttaatcat tcatagccgc tgccccacgg tggctgagga ggagttgatg tgcactgagc 4320
tggatgtggt tttgccgttc actcagagga ctgtttatac tctacttgtg atgtgttatc 4380
gttatatttt tatactaggt aatcctgttc tgagtccttt cacgtgtata atcctcatgg 4440
gactgtacgt gctttgctct ggtattcagt tgccttcttg gcaaaaccag cctagaattg 4500
ctaaaatgcc aggattgaag ttagatgatg aaagtcgggc acaggaaggc caggtcaggg 4560
tcagagagac cagaattcac actacaaggc tggcaccatc accattcaag ttgggcatgg 4620
aagcctgggc ccggcaggac tgagctccct atgtatgtgt atctgccagg aaattaacac 4680
ttgctaaatt tcccatcctc tcacagcgag cagtgtacct gtgcgctgct gtgaacgttg 4740
tagtgtgaag tctgtcctgg ggtagggagt taccagcgtg aggtcaggga tgaacacagc 4800
tcactgaaga cgagcctggt ggaagagagt ttgccattgt gcccactgca tgaacattcc 4860
ctcgggggat gtatcatgga gcacctctct ttgctctaag aaagagtctt agaattcatc 4920
ttaaatacag actttgctac agcatgttta agaataatct ggatgcacgt aacttgtatt 4980
ttaggtaggc agagaaacta atctggctgc tttctgtaaa accagtctaa taaagctaat 5040
tctatacatg ttcttttctt ctctcgtgtg taaaactgta gtttaaggca atcagaaaac 5100
aacctatctt gtggccaaaa ctagttcact gtagtttaag gcaatcagaa aacaacctat 5160
cttgtggcca aaactagttc actgcttctg atgcagttgc ctgcttagga gtcatagaca 5220
aagaaggttt aatgtaatca atattaccaa acagagttcc catcttttac tcaccaaaca 5280
aagtcagtcc ttcgaaaagc ataagtcagt actggcggac acagagaagc caaagtagga 5340
aaagtgcaac cccatcctgg ttctcctgtc tacagttcat tcagcttctg catagttcct 5400
gaactgtagg gttttttgct tttcgggttt tttttgtttt gttttggggt ttgtttgttt 5460
gttttgtttt tggggatttt gggggggtgt ttttggtttt ttaagatagg gtttctctgt 5520
gtggccttgg ctgtcctgga tctgccagcc tggtgtgcca ccactgtctg gtgagaccat 5580
agttcttact gtgaacttaa agggctgaag aggtagaagg gcttatggga cggactgcag 5640
cttctaattt tttctcaacc ctactttaat aatggttctt aaatgcttta accttccttc 5700
tagcccacca cccattaggg gtagtggaaa agagaggata caggtgaagt ggacctgttt 5760
agaaatggtt ctttggagca aatcctgtct gcactgtcag gaaatcagca gttcggttca 5820
ctggtcagca gtggcagccc cactcgagaa cacacttcct ggatgcacca gcagtccagt 5880
tcagtagtgt cgggagagca gcagcggtgg cccgacctag caggagtggc caggcctcag 5940
cctcagcaca agtcagcaga aagaaccaga agttctcagc tgtgcctctc agtgaaatga 6000
aaatatccaa gactgttgag tcctatatat actgcctcca aatatcatgt gtccgtgggt 6060
gtggtctccc cacgtgtctt gcctcagtat gtgagtctgt atcagctgac atgactgcca 6120
atcgacccag gtcaaggaat tcgcaagaag ccaccagaac acacgttttt tggtgtttct 6180
ctttatggag tcctgacaaa tggcgcacaa tgatacatgt gaggcaaacc aatatgtgtg 6240
ttattacaaa gaatccttca tcatgtgtcc tttcgaatgc tttctgtagc aaaatatcct 6300
ttcacctgtg tctgctttag caaaacaccg tccaacacaa ctgactttcc aaagaacctt 6360
aagtttccat tccacaggac actgtcaaag ccaggactgc taacgtccca ttagacatcg 6420
cactgttttt aaagctgtct tctttttcct gcccacagaa ttagagctac agcattcctc 6480
agtgtttgtc atagacatgt attaaccagg tagaacaagc caggaggttt tagactatta 6540
agtttactct cctgcttcat gttactgagt ttcctttaaa agcaagcttt taacacaact 6600
tctggttagt agagattttc atgacatgag tagaatcagt gagctgcaaa aaaaagtgta 6660
aaggtgaatt gttaaaaata accccttggg ctagctctgc tctaggcact gttgttacat 6720
tacccaggta agattacgtt ttaaaatgtg cctttctatg agttagaaaa cacactatat 6780
ggcaaactat ataattaatt catagacaaa gtcttctcaa gccagatgta ctatctctca 6840
ggttcatggt ttgttctgtc acatgcaggt tagcctatgc tcactccggt aaagctaaaa 6900
cggtgatggc tgtaggtgtt actcgctcta acttttttag ggctttttgt caccagtaag 6960
ctcccacaga ctggtcagtt ttttgtttgt tttttgtttg tttgttttaa ttagttgtca 7020
acaccagtga gggggtcagc atgaaaacgc accaggccgg ttgggtagag attcttagtc 7080
ctgtgatcac cagcttagtc tggtaaccac agactgcaaa tgctgttacg taactagaaa 7140
catgggacgt atcagaacaa ggggatgcta cacaggtgtt tgtgtaatat acagtgcacc 7200
ttgctgctag tgtgacagta ggcattccct gtggcccctt atgcctttgc tctcctgtac 7260
tccacgtgag ccctgttctc tcaactctgc cccacccacc catgcagctt cacatgggaa 7320
gcttgcccgt gttagcgctg tagtaagttg catgtgctga gtataaccaa agctatcatt 7380
tttatgttga ccctgtcata aatgtcttac tatatcagct ctaatccttt ttaaataaat 7440
ttgagaaaga aact 7454
<210> 32
<211> 114
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 32
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 33
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 34
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 35
Gly Val Pro Asp Tyr
1 5
<210> 36
<211> 111
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 36
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 37
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 38
Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 39
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 40
<211> 443
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 40
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 41
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 41
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 42
<211> 116
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 42
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Asp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 43
Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 44
Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 45
Trp Asp Gly Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 46
<211> 111
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 46
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Gly Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 47
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 48
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1 5
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 49
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Gly Gly Ser Val
1 5 10
<210> 50
<211> 440
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 50
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Trp Asp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp
165 170 175
Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro
180 185 190
Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile
210 215 220
Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val
260 265 270
Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala
305 310 315 320
Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro
325 330 335
Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala
340 345 350
Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu
355 360 365
Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr
370 375 380
Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe
405 410 415
Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys
420 425 430
Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 51
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 51
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Gly Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val
145 150 155 160
Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg
180 185 190
His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 52
<211> 438
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 52
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly
115 120 125
Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr
165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu
180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr
210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
225 230 235 240
Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp
245 250 255
Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp
260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp
290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro
305 310 315 320
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala
325 330 335
Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp
340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile
355 360 365
Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn
370 375 380
Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
385 390 395 400
Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys
405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu
420 425 430
Ser His Ser Pro Gly Lys
435
<210> 53
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 53
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val
145 150 155 160
Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg
180 185 190
His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 54
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 54
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 55
His Tyr Asp Met Asn
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 56
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 57
Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 58
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 58
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 59
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 59
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 60
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1 5
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 61
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Val Val
1 5 10
<210> 62
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 62
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
210 215 220
Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
370 375 380
Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
420 425 430
Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 63
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 63
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
145 150 155 160
Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
180 185 190
Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 64
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 64
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Asp Thr Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asn Trp Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 65
Ile Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 66
Ser Ile Ser Asp Thr Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 67
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 67
Ser Asn Trp Gly Ser Leu Asp Tyr
1 5
<210> 68
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 68
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 69
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 69
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr
1 5 10
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 70
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1 5
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 71
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val
1 5 10
<210> 72
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 72
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Asp Thr Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asn Trp Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
210 215 220
Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
370 375 380
Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
420 425 430
Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 73
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 73
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
145 150 155 160
Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
180 185 190
Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 74
<211> 479
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 74
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly
130 135 140
Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala
145 150 155 160
Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp
210 215 220
Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
245 250 255
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260 265 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275 280 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290 295 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305 310 315 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325 330 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340 345 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355 360 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370 375 380
Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys
385 390 395 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405 410 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420 425 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435 440 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450 455 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470 475
<210> 75
<211> 481
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 75
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp
210 215 220
Asp Asp Ser Leu Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
260 265 270
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
275 280 285
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
290 295 300
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
305 310 315 320
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
325 330 335
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
340 345 350
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
355 360 365
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys
370 375 380
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
385 390 395 400
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
405 410 415
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
420 425 430
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
435 440 445
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
450 455 460
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
465 470 475 480
Gly
<210> 76
<211> 449
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Pro Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Leu Gly His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 77
<211> 218
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 77
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Leu Glu Glu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 78
<211> 443
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Pro Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Leu Gly His Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys
210 215 220
Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser
260 265 270
Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile
290 295 300
Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn
305 310 315 320
Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
325 330 335
Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu
340 345 350
Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe
355 360 365
Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala
370 375 380
Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr
385 390 395 400
Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly
405 410 415
Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His
420 425 430
Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 79
<211> 218
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 79
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Leu Glu Glu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120 125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
145 150 155 160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185 190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200 205
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 80
<211> 479
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 80
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly
130 135 140
Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala
145 150 155 160
Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp
210 215 220
Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
245 250 255
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr
275 280 285
Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu
290 295 300
Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln
305 310 315 320
Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser
325 330 335
Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys
340 345 350
Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro
370 375 380
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Trp Cys Met
385 390 395 400
Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr
420 425 430
Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn
435 440 445
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu
450 455 460
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 81
<211> 481
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 81
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp
210 215 220
Asp Asp Ser Leu Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr
275 280 285
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp
290 295 300
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
305 310 315 320
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser
325 330 335
Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
370 375 380
Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Ser
385 390 395 400
Cys Ala Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln
405 410 415
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met
420 425 430
Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Val Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys
435 440 445
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu
450 455 460
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
465 470 475 480
Lys
<210> 82
<211> 114
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 82
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 83
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 83
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 84
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 84
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 85
Gly Val Pro Asp Tyr
1 5
<210> 86
<211> 111
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 86
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 87
<211> 14
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 87
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 88
Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 89
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val
1 5 10
<210> 90
<211> 444
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 90
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 91
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 91
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 92
<211> 444
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 92
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 93
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 93
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 94
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 94
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
210 215 220
Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
370 375 380
Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
420 425 430
Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 95
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 95
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
145 150 155 160
Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
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Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 96
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 96
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
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Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
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Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
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Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
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Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 97
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 97
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
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Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
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Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 98
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
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Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
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Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
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275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
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Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
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Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
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Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 99
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 99
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
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Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
145 150 155 160
Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
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Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 100
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
210 215 220
Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn
370 375 380
Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
420 425 430
Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
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<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 101
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
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Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
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Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
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Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr
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Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr
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Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His
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Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 102
<211> 441
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 102
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
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Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys
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Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe
260 265 270
Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala
305 310 315 320
Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg
325 330 335
Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met
340 345 350
Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro
355 360 365
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370 375 380
Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu
420 425 430
Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 103
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 103
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 104
<211> 438
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 104
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu
180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr
210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
225 230 235 240
Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp
245 250 255
Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp
260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp
290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro
305 310 315 320
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala
325 330 335
Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp
340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile
355 360 365
Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn
370 375 380
Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
385 390 395 400
Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys
405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu
420 425 430
Ser His Ser Pro Gly Lys
435
<210> 105
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 105
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val
145 150 155 160
Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg
180 185 190
His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
210 215
<210> 106
<211> 114
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 106
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 107
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 108
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 108
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 109
Gly Val Pro Asp Tyr
1 5
<210> 110
<211> 111
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 110
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 111
<211> 14
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 111
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 112
Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 113
Ser Ala Trp Asp Ser Ser Leu Ser Gly Pro Val
1 5 10
<210> 114
<211> 342
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 114
gaagttcagc tgctggaatc tggcggcgga ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctatggca tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtcgccgtg atcagctacg acggcagcta caagtactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc tgctggcgtg 300
ccagattact ggggccaggg aacactggtc acagtgtcat ca 342
<210> 115
<211> 333
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 115
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagctc caacatcggc agcgactatg acgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca cagcccctaa actgctgatc tacagcaacg aggaacggcc tagcggcgtg 180
cccgatagat tttctggcag caagagcggc acaagcgcca gcctggctat ctctggactg 240
agatctgagg acgaggccga ctactactgc agcgcctggg attcttctct gtctggccct 300
gtttttggcg gaggcaccaa gctgacagtg cta 333
<210> 116
<211> 443
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 116
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 117
<211> 217
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 117
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 118
<211> 481
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp
210 215 220
Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr
275 280 285
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp
290 295 300
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
305 310 315 320
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser
325 330 335
Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
370 375 380
Ile Pro Pro Cys Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Trp
385 390 395 400
Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln
405 410 415
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met
420 425 430
Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys
435 440 445
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu
450 455 460
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
465 470 475 480
Lys
<210> 119
<211> 479
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 119
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly
130 135 140
Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser
210 215 220
Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
245 250 255
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr
275 280 285
Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu
290 295 300
Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln
305 310 315 320
Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser
325 330 335
Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys
340 345 350
Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Cys Thr Ile Pro
370 375 380
Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Ser Cys Ala
385 390 395 400
Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr
420 425 430
Asp Gly Ser Tyr Phe Val Val Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn
435 440 445
Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu
450 455 460
His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 120
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 121
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 121
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 122
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 122
Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 123
Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 124
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 124
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 125
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 125
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 126
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 127
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 127
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 128
<211> 351
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 128
caggttcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagaag cctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc cactacgata tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtcgccgtg atcagctacc acggcagcgt gaagttctac 180
gccgactccg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaacaccc 300
ggcttccact tcgactattg gggccaggga accctggtca cagtctcttc a 351
<210> 129
<211> 330
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 129
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagctc caacatcggc agcaactacg tgtcctggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac tacgacgacc tgcggcctag cggcgtgcca 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatg atagcctgtc cggcgttgtg 300
tttggcggag gcacaaagct gacagtgcta 330
<210> 130
<211> 446
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 130
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 131
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 131
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 132
<211> 481
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 132
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr His Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn
145 150 155 160
Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp
210 215 220
Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
275 280 285
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp
290 295 300
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
305 310 315 320
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
325 330 335
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
340 345 350
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys
355 360 365
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
370 375 380
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
385 390 395 400
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
405 410 415
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
420 425 430
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
435 440 445
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
450 455 460
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465 470 475 480
Lys
<210> 133
<211> 479
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 133
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly
130 135 140
Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Glu Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Ser
210 215 220
Ser Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
245 250 255
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275 280 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290 295 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305 310 315 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325 330 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340 345 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro
370 375 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
385 390 395 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420 425 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435 440 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450 455 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 134
<211> 1443
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 134
caggtgcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagatc cctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttcagc cactacgata tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gattggaatg ggtcgccgtg atctcctacc acggctccgt gaagttctac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc tagaacccct 300
ggcttccact tcgactattg gggccagggc acactggtca cagtttctag cggaggcgga 360
ggaagtggcg gcggaggatc tggcggtggt ggttctcagt ctgtgctgac ccaacctcct 420
tccgcttctg gcacacctgg ccagagagtg accatctctt gctccggctc ctcctccaac 480
atcggctcca attacgtgtc ctggtatcag cagctgcccg gcacagctcc caaactgctg 540
atctactacg acgacctgcg gccttctggc gtgcccgata gattctccgg ctctaagtct 600
ggcacctctg ccagcctggc tatctccgga ctgagatctg aggacgaggc cgactactac 660
tgctctgcct gggacgattc tctgtccggc gttgtgtttg gcggaggcac caaactgaca 720
gtgctcggag gtggtggctc tggtggcgga ggaagtggcg gaggcggttc tggtgttgaa 780
tgtcctccat gtcctgctcc tccagtggct ggcccttccg tgtttctgtt ccctccaaag 840
cctaaggaca ccctgatgat ctctcggacc cctgaagtga cctgtgtggt cgtgggagtg 900
tctcacgagg atcccgaagt gaagttcaat tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac 960
gccaagacca agcctagaga ggaacagtac aactccacct acagagtggt gtccgtgctg 1020
accgtgctgc accaggattg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 1080
cagctgccct ctccaatcga aaagaccatc tccaaggcca agggacagcc cagagaaccc 1140
caggtgtaca cactgcctcc atgcagagat gagctgacca agaaccaggt gtccctgtgg 1200
tgtctggtca agggcttcta cccctccgat atcgccgtgg aatgggagtc taatggccag 1260
cctgagaaca actacaagac cacacctcct gtgctggact ccgacggctc attcttcctg 1320
tactccaagc tgacagtgga caagtccaga tggcagcagg gcaacgtgtt ctcctgctcc 1380
gtgatgcacg aggccctgca caatcactac acccagaagt ccctgtctct gtcccctggc 1440
aag 1443
<210> 135
<211> 1437
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 135
gaagtgcagc tgctggaatc tggcggagga ttggttcagc ctggcggctc tctgagactg 60
tcttgtgccg cttccggctt caccttctcc agctacggaa tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gattggaatg ggtcgccgtg atctcctacg acggctccta caagtactac 180
gccgactccg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc tgctggcgtg 300
ccagattact ggggccaggg aacactggtc acagtgtcta gcggcggagg tggaagcgga 360
ggcggaggtt ctggtggtgg tggatctcag tctgtgctga cccagcctcc ttctgcttct 420
ggcacacctg gccagagagt gaccatctct tgctccggct cctcctccaa catcggctct 480
gactacgacg tgcactggta tcagcagctc cctggcacag ctcccaaact gctgatctac 540
tccaacgagg aacggcctag cggcgtgccc gatagattct ccggatctaa gtccggcacc 600
tctgccagcc tggctatctc tggcctgaga tctgaggacg aggccgacta ctactgctcc 660
gcctgggact cttctctgtc tggccctgtt tttggcggag gcaccaagct gacagtgctc 720
ggaggtggtg gctctggtgg cggaggaagt ggcggaggcg gttctggtgt tgaatgtcct 780
ccatgtcctg ctcctccagt ggctggccct tccgtgtttc tgttccctcc aaagcctaag 840
gacaccctga tgatctctcg gacccctgaa gtgacctgtg tggtcgtggg agtgtctcac 900
gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 960
accaagccta gagaggaaca gtacaactcc acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg 1020
ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caagcagctg 1080
ccctctccaa tcgaaaagac catctccaag gccaagggac agccccggga acctcaagtc 1140
tgtaccttgc ctcctagccg ggacgagctg accaagaatc aggtgtccct gtcctgtgcc 1200
gtgaagggct tctacccttc cgatatcgcc gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag 1260
aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg gactccgacg gctcattctt cctggtgtcc 1320
aagctgacag tggacaagtc cagatggcag cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg 1380
cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagtccctga gcctgtctcc tggcaag 1437
<210> 136
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 136
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 137
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 138
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 138
Val Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 139
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 139
Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 140
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 140
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 141
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 141
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Asn
1 5 10
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 142
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 143
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 143
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 144
<211> 351
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 144
caggttcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagaag cctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc cactacgata tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtcgccgtg atcagctaca gcggcagcgt gaagttctac 180
gccgactccg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaacacct 300
ggcagccact tcgactattg gggccaggga acactggtca ccgttagctc a 351
<210> 145
<211> 330
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 145
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagctc caacatcggc agcaactacg tgaactggta tcagcagctg 120
cccggcacag cccctaaact gctgatctac tacgacgacc tgcggcctag cggcgtgcca 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatg atagcctgtc cggcgttgtg 300
tttggcggag gcacaaagct gacagtgcta 330
<210> 146
<211> 446
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 147
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 147
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 148
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 149
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 149
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 150
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 150
Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 151
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 151
Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 152
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 152
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 153
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 153
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 154
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 154
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 155
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 156
<211> 351
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 156
caggttcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagaag cctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc cactacgata tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtcgccgtg atcagctacg agggcagcaa caagttctac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaacaccc 300
ggcttccact tcgactattg gggccaggga accctggtca cagtctcttc a 351
<210> 157
<211> 330
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 157
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagctc caacatcggc agcaactacg tgtcctggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac tacgacgacc tgcggcctag cggcgtgcca 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatg atagcctgtc cggcgttgtg 300
tttggcggag gcacaaagct gacagtgcta 330
<210> 158
<211> 446
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 159
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 159
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 160
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 161
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 161
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 162
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 162
Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 163
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 163
Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 164
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 164
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 165
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 165
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Asn
1 5 10
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 166
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 167
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 168
<211> 351
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 168
caggttcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagaag cctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc cactacgata tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtcgccgtg atcagctacg agggcagcaa caagttctac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaacaccc 300
ggcttccact tcgactattg gggccaggga accctggtca cagtctcttc a 351
<210> 169
<211> 330
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 169
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
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cccggcacag cccctaaact gctgatctac tacgacgacc tgcggcctag cggcgtgcca 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatg atagcctgtc cggcgttgtg 300
tttggcggag gcacaaagct gacagtgcta 330
<210> 170
<211> 446
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 171
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 171
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 172
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 172
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 5
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 173
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 174
Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 175
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 175
Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 176
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 176
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 177
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 177
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Asn
1 5 10
<210> 178
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 178
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 179
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 179
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 180
<211> 351
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 180
caggttcagc tggtggaatc tggtggcgga gttgtgcagc ctggcagaag cctgagactg 60
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ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaacaccc 300
ggcttccact tcgactattg gggccaggga accctggtca cagtctcttc a 351
<210> 181
<211> 330
<212> DNA
<213> 抗体序列
<400> 181
cagtctgttc tgacacagcc tcctagcgcc tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagctc caacatcggc agcaactacg tgaactggta tcagcagctg 120
cccggcacag cccctaaact gctgatctac tacgacgacc tgcggcctag cggcgtgcca 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatg atagcctgtc cggcgttgtg 300
tttggcggag gcacaaagct gacagtgcta 330
<210> 182
<211> 446
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 182
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Val Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Phe His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Gly Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gln Leu Pro Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 183
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 183
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 184
<211> 117
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 184
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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<213> 抗体序列
<400> 185
His Tyr Asp Met His
1 5
<210> 186
<211> 17
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 186
Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 187
<211> 8
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 187
Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 188
<211> 110
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 188
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 189
<211> 13
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 189
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Asn
1 5 10
<210> 190
<211> 7
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 190
Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 191
<211> 11
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 191
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 192
<211> 444
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 193
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 193
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 194
<211> 444
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 194
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Asp Met Asn Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 195
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 195
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 196
<211> 444
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 196
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Asp Thr Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asn Trp Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 197
<211> 216
<212> PRT
<213> 抗体序列
<400> 197
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215

Claims (37)

1.能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段能够减少异常子宫出血期间的失血。
2.根据权利要求1所述的能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段以解离常数(KD)≤1.0E-08M、≤1.0E-09M、≤5.0E-10M、≤1.0E-10M、≤5.0E-11M、≤2.5E-11M或≤1.0E-11M与人IL-11结合。
3.根据权利要求1-2所述的能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段以≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤1nM、≤0.5nM或≤0.1nM的IC50抑制人IL-11介导的信号传导。
4.根据权利要求1-3所述的能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11与IL-11Ra的相互作用，并且
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成。
5.根据权利要求1-3所述的能够结合IL-11并抑制IL-11介导的信号传导的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成，并且
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段不抑制IL-11与IL-11Ra的相互作用。
6.根据权利要求1-3所述的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段是能够结合两个不同IL-11表位的双特异性抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求6所述的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11与IL-11Ra的结合，并且
其中所述分离的抗体或其抗原结合片段抑制IL-11/IL-11Ra/gp130复合物的形成。
8.根据权利要求1-7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，
其中所述人IL-11具有序列SEQ ID NO：1，aa 22–199；
其中所述人IL-11Ra具有序列SEQ ID NO：3；和/或
其中所述人gp130是序列SEQ ID：12。
9.根据权利要求1-3所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段不与IL-2Ra结合。
10.根据权利要求1-9任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
i)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：33的H-CDR1、含有SEQ ID NO：34的H-CDR2和含有SEQ ID NO：35的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：37的L-CDR1、含有SEQ ID NO：38的L-CDR2和含有SEQ ID NO：39的L-CDR3；或
ii)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：43的H-CDR1、含有SEQ ID NO：44的H-CDR2和含有SEQ ID NO：45的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：47的L-CDR1、含有SEQ ID NO：48的L-CDR2和含有SEQ ID NO：49的L-CDR3；或
iii)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：55的H-CDR1、含有SEQ ID NO：56的H-CDR2和含有SEQ ID NO：57的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：59的L-CDR1、含有SEQ ID NO：60的L-CDR2和含有SEQ ID NO：61的L-CDR3；或
iv)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：65的H-CDR1、含有SEQ ID NO：66的H-CDR2和含有SEQ ID NO：67的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：69的L-CDR1、含有SEQ ID NO：70的L-CDR2和含有SEQ ID NO：71的L-CDR3；或
v)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：83的H-CDR1、含有SEQ ID NO：84的H-CDR2和含有SEQ ID NO：85的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：87的L-CDR1、含有SEQ ID NO：88的L-CDR2和含有SEQ ID NO：89的L-CDR3；或
vi)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：107的H-CDR1、含有SEQ ID NO：108的H-CDR2和含有SEQ ID NO：109的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：111的L-CDR1、含有SEQ ID NO：112的L-CDR2和含有SEQ ID NO：113的L-CDR3；或
vii)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：121的H-CDR1、含有SEQ ID NO：122的H-CDR2和含有SEQ ID NO：123的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：125的L-CDR1、含有SEQ ID NO：126的L-CDR2和含有SEQ ID NO：127的L-CDR3；或
viii)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：137的H-CDR1、含有SEQ ID NO：138的H-CDR2和含有SEQ ID NO：139的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：141的L-CDR1、含有SEQ ID NO：142的L-CDR2和含有SEQ ID NO：143的L-CDR3；或
ix)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：149的H-CDR1、含有SEQ ID NO：150的H-CDR2和含有SEQ ID NO：151的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：153的L-CDR1、含有SEQ ID NO：154的L-CDR2和含有SEQ ID NO：155的L-CDR3；或
x)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：161的H-CDR1、含有SEQ ID NO：162的H-CDR2和含有SEQ ID NO：163的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：165的L-CDR1、含有SEQ ID NO：166的L-CDR2和含有SEQ ID NO：167的L-CDR3；或
xi)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：173的H-CDR1、含有SEQ ID NO：174的H-CDR2和含有含SEQ ID NO：175的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：177的L-CDR1、含有SEQ ID NO：178的L-CDR2和含有SEQ ID NO：179的L-CDR3；或
xii)重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：185的H-CDR1、含有SEQ ID NO：186的H-CDR2和含有SEQ ID NO：187的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：189的L-CDR1、含有SEQ ID NO：190的L-CDR2和含有SEQ ID NO：191的L-CDR3。
11.根据权利要求1-10任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
xiii)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：32，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：36；或
xiv)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：42，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：46；或
xv)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：54，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：58；或
xvi)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：64，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：68；或
xvii)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：82，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：86；或
xviii)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：106，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：110；或
xix)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：120，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：124；或
xx)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：136，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：140；或
xxi)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：148，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：152；或
xxii)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：160，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：164；或
xxiii)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：172，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：176；或
xxiv)重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：184，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：188。
12.根据权利要求1-11任一项所述的分离的抗体，
其是IgG抗体，特别是IgG1或IgG4抗体。
13.根据权利要求1-9任一项所述的分离的抗体，其包含：
xxv)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：40，轻链包含SEQ ID NO：41；或
xxvi)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：90，轻链包含SEQ ID NO：91；或
xxvii)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：92，轻链包含SEQ ID NO：33；或
xxviii)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：116，轻链包含SEQ ID NO：117；或
xxix)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：130，轻链包含SEQ ID NO：131；或
xxx)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：146，轻链包含SEQ ID NO：147；或
xxxi)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：158，轻链包含SEQ ID NO：159；或
xxxii)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：170，轻链包含SEQ ID NO：171；或
xxxiii)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：182，轻链包含SEQ ID NO：183；或
xxxiv)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：192，轻链包含SEQ ID NO：193；或
xxxv)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：194，轻链包含SEQ ID NO：195；或
xxxvi)重链和轻链，其中重链包含SEQ ID NO：196，轻链包含SEQ ID NO：197。
14.根据权利要求6或7所述的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含：
xxxvii)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中所述重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：33的H-CDR1、含有SEQ ID NO：34的H-CDR2和含有SEQ ID NO：35的H-CDR3，轻链抗原结合区含有包含：含有SEQ ID NO：37的L-CDR1、含有SEQ ID NO：38的L-CDR2和含有SEQ ID NO：39的L-CDR3，以及
第二条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQID NO：55的H-CDR1、含有SEQ ID NO：56的H-CDR2和含有SEQ ID NO：57的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：59的L-CDR1、含有SEQ ID NO：60的L-CDR2和含有SEQ ID NO：61的L-CDR3；或
xxxviii)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：121的H-CDR1、含有SEQ ID NO：122的H-CDR2和含有SEQ ID NO：123的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：125的L-CDR1、含有SEQ ID NO：126的L-CDR2和含有SEQ ID NO：127的L-CDR3，以及
第二条链包含重链抗原结合区和轻链抗原结合区，其中重链抗原结合区包含：含有SEQID NO：107的H-CDR1、含有SEQ ID NO：108的H-CDR2和含有SEQ ID NO：109的H-CDR3，轻链抗原结合区包含：含有SEQ ID NO：111的L-CDR1、含有SEQ ID NO：112的L-CDR2和含有SEQ IDNO：113的L-CDR3。
15.根据权利要求6、7或14所述的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含：
xxxix)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：32，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：36，以及
第二条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ IDNO：54，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：58，以及；或
xl)第一条链和第二条链，其中，第一条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：120，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：124，以及
第二条链包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ IDNO：106，轻链可变结构域包含SEQ ID NO：110。
16.根据权利要求6、7、14或15的所述分离的双特异性抗体，其包含：
xli)第一条链和第二条链，其中第一条链包含SEQ ID NO：74，第二条链包含SEQ IDNO：75；或
xlii)第一条链和第二条链，其中第一条链包含SEQ ID NO：132，第二条链包含SEQ IDNO：133。
17.根据权利要求1-11或14-15任一项所述的抗原结合片段，
其是scFv、Fab、Fab’片段或F(ab’)2片段。
18.根据权利要求1-16任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，
其是单克隆抗体或抗原结合片段。
19.根据权利要求1-18任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，
其是人、人源化或嵌合抗体或其抗原结合片段。
20.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与根据权利要求1-19任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段竞争结合IL-11。
21.一种抗体缀合物，其包含根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段。
22.一种分离的核酸序列，其编码根据权利要求1-20任一项所述的抗体或抗原结合片段。
23.一种载体，其包含根据权利要求22所述的核酸序列。
24.一种分离的细胞，其表达根据权利要求1-20任一项所述的抗体或抗原结合片段和/或包含根据权利要求22所述的核酸或根据权利要求23所述的载体。
25.根据权利要求24所述的分离的细胞，
其中所述细胞是原核细胞或真核细胞。
26.一种用于产生根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段的方法，其包括培养根据权利要求24或25任一项所述的细胞，以及任选地纯化抗体或抗原结合片段。
27.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的抗体缀合物，以及任选地一种或多种药学上可接受的赋形剂。
28.根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，其用于治疗或预防疾病。
29.根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的抗体缀合物，其用作诊断剂。
30.根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，其用于治疗或预防异常子宫出血(AUB)、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
31.根据权利要求30所述的用于治疗或预防异常子宫出血(AUB)、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，
其中异常子宫出血是大量月经出血、长期出血或出血模式改变。
32.根据权利要求30或31所述的用于治疗或预防异常子宫出血(AUB)、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，
其中异常子宫出血是大量月经出血，以及
其中大量月经出血继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症。
33.根据权利要求30-31任一项所述的用于治疗或预防异常子宫出血(AUB)、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，
其中异常子宫出血与痛经相关。
34.根据权利要求30-33任一项所述的用于治疗或预防异常子宫出血(AUB)、痛经、平滑肌瘤或子宫内膜异位症的根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，
其中异常子宫出血与继发于平滑肌瘤或子宫内膜异位症的痛经相关。
35.根据权利要求1-20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物用于抑制或调节月经的用途。
36.根据权利要求1至20中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物，其用于与一种或多种其他治疗活性化合物同时、分开或顺序组合使用。
37.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至20任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段或根据权利要求21所述的缀合物或根据权利要求27所述的药物组合物以及使用说明书。
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