CN117157298A - 一类白介素-1受体相关激酶4的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法、药用组合物和用途 - Google Patents

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CN117157298A CN202380008533.1A CN202380008533A CN117157298A CN 117157298 A CN117157298 A CN 117157298A CN 202380008533 A CN202380008533 A CN 202380008533A CN 117157298 A CN117157298 A CN 117157298A
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Abstract

一种式(I)所示的白介素‑1受体相关激酶4(IRAK4)的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法、药用组合物和用途，其通过招募IRAK4到泛素连接酶，从而促进IRAK4的泛素化及蛋白酶体对其的降解。研究结果显示，这些化合物表现出较好的IRAK4降解活性，可用于治疗由IRAK4介导的疾病。

Description

一类白介素-1受体相关激酶4的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法、药用组合物和用途
相关申请的引用
本发明要求2022年03月31日在中国提交的，名称为“一类白介素-1受体相关激酶的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法和用途”、申请号为202210334860.3的发明专利申请和2022年09月28日在中国提交的，名称为“一类白介素-1受体相关激酶的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法和用途”、申请号为202211214397.5的发明专利申请的优先权，通过引用的方式将上述专利申请的全部内容并入本文。
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种白介素-1受体相关激酶4(IRAK4)的双功能嵌合体杂环化合物及其制备方法、药用组合物和用途。
背景技术
白细胞介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4，IRAK4)属于IRAK家族(包括IRAK1、IRAK2、IRAK3和IRAK4)，由IRAK4基因编码，定位在12号染色体上。IRAK4作为一种苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶，由460个氨基酸组成，包含一个激酶域和一个死亡域，并与IRAK1、IRAK2、IRAK3(IRAKM)和Pelle激酶具有高度同源性。IRAK4是家族中最独特的一种，它缺少C末端结构域，在其他成员的上游发挥作用。IRAK4在人体的多个组织中都有表达，但主要分布于肝和肺组织。
IRAK4是白细胞介素-1受体(IL-1R)和toll样受体(Toll-Like Receptors，TLRs)信号通路下游的关键调节因子。其通过IL-1R/TLRs信号通路引起促炎细胞因子基因的转录和表达，触发先天性免疫反应，而异常的IL-1R/TLRs传导涉及多种自身免疫性疾病，因此IRAK4成为自身免疫疾病的有效靶点；且MyD88作为IL-1R/TLRs信号通路的关键调节因子，使得IRAK4在MyD88突变的肿瘤中发挥重要作用。
在先天性免疫反应中，IL-1R/TLRs两种受体都依赖MyD88作为调节因子激活下游的炎症信号通路。当IL-1R/TLRs与配体集合后招募MyD88因子，MyD88因子形成二聚体并通过其N末端的死亡结构域进一步募集IRAK4，IRAK4通过自身磷酸化发挥激酶活性并激活底物IRAK1，IRAK1随即发生构型改变并与TNF受体相关因子6(TRAF6)形成复合物。TRAF6经转接蛋白TAK1等激活NF-κB，使得活化的NF-κB进入细胞核，引起促炎细胞因子基因的转录和表达。TRAF6也可以使p38和JNK活化，从而激活AP1通路。IRAK4除了在IL-1R/TLRs通路中作为激活下游NF-κB和AP1等转录因子的关键分子以外，IRAK4的过表达可增强LPS诱导的NADPH氧化酶的活性，从而影响下游的MAPK信号传导。因此，IRAK4可通过IRAK1/TRAF6/NF-κB/AP1和NADPH/MAPK/AP1等多种途径引发炎症反应。最近，人们认识到TLR/IL-1R通路中蛋白质的突变都可能导致过度活跃的信号和增加NF-κB活性，并促进癌症。IRAK4作为降解靶点可为治疗自身免疫性疾病、炎症和肿瘤相关的疾病提供新的治疗方案。
近几年，蛋白降解靶向嵌合体(PROTACs)作为能够诱导靶蛋白降解(Targeted protein degradation，TPD)的双功能小分子受到了广泛关注。IRAK4的特异性降解可通过应用能够诱导靶蛋白降解的PROTACs双功能小分子招募IRAK4到泛素连接酶，从而促进IRAK4的泛素化及蛋白酶体对其的降解。例如沙利度胺衍生物、来那度胺和泊马度胺可以招募蛋白底物到一种泛素连接酶复合物脑蛋白cereblon(CRBN)从而对蛋白底物产生降解作用。
目前，Kymera Therapeutics公司开发的KT-474(SAR444656)和KT-413 PROTAC双功能小分子分别作为口服和静脉注射的IRAK4降解剂，处于临床I期。该公司的其它部分PROTAC双功能小分子(见WO2020264499A1、WO2020113233A1和WO2022027058A1)在动物实验中也表现出良好的PK和PD。
Nurix公司也开发了一类靶向IRAK4的PROTAC双功能小分子降解剂(见WO2021168197A1)，但目前还没有临床报道。
另外，辉瑞公司开发的高选择性、可口服的IRAK4抑制剂PF-06650833(见WO2015150995A1)，对类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫类疾病具有治疗作用，目前处于临床II期。
Aurigene公司和Curis公司开发的IRAK4/FLT3抑制剂CA-4948(见WO2015104688Al)具有良好的抗肿瘤活性，目前处于临床II期。
因此，研发出一种能够有效降解IRAK4蛋白激酶的双功能嵌合体杂环化合物，在治疗IRAK4介导的相关疾病上具有良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过泛素蛋白酶体途径作为IRAK4降解物的双功能嵌合体杂环化合物，及其药用组合物、制备方法和用途。
第一方面，本发明提供了一种如下式(I)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
其中，
X、Z1各自独立地选自CH或N；
Z2选自O或S；
环A、环B各自独立地选自3-12元杂环基、C6-14芳基或5-12元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、-NO2、-ORa1、-SRa1、-N(Ra1)2、-S(O)2Ra1、-S(O)2N(Ra1)2、-S(O)Ra1、-S(O)(NRa1)Ra1、-P(O)(ORa1)2、-P(O)(N(Ra1)2)2、-CF2(Ra1)、-CF3、-CR2(ORa1)、-CR2(N(Ra1)2)、-C(O)Ra1、-C(O)ORa1、-C(O)N(Ra1)2、-C(O)N(Ra1)ORa1、-OC(O)Ra1、-OC(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)C(O)ORa1、-N(Ra1)C(O)Ra1、-N(Ra1)C(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)S(O)2Ra1、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、C6-12芳基或5-12元杂芳基；
m选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
每一Ra1各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、苯基、C4-7环烷基、C3-6环烯基、4-7元杂环烷基或5-6元杂芳基；其中，所述杂环烷基或杂芳基具有1-4个选自N、O、S的杂原子；
R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-OC1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、-O-C1-6烷基可被一个或多个F原子取代；
L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基、5-12元杂芳基、C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基、-O-C2-12亚烯基、-O-C2-12 亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基和5-12元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-12亚烷基、C2-12亚烯基和C2-12亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
Rb选自氢或C1-6烷基；
每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rc1、-C(O)-Rc1、-C(O)O-Rc1、-C(O)-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)C(O)O-Rc1、-N(Rc1)C(O)-Rc1、-N(Rc1)C(O)N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2O(Rc1)、-OC(O)Rc1、-OC(O)N(Rc1)(Rc1)、-Si(Rc1)、-S-Rc1、-S(O)Rc1、-S(O)(NH)Rc1、-S(O)2Rc1或-S(O)2N(Rc1)(Rc1)；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rc2取代；
每一Rc1各自独立地选自H或C1-6烷基；
每一Rc2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
n、p各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
表示单键或双键；
LBM为连接酶结合部分。
在本发明的一个优选实施方式中，如式(I)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
其中，
X、Z1各自独立地选自CH或N；
Z2选自O或S；
环A、环B各自独立地选自3-12元杂环基、C6-14芳基或5-12元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、-NO2、-ORa1、-SRa1、-N(Ra1)2、-S(O)2Ra1、-S(O)2N(Ra1)2、-S(O)Ra1、-S(O)(NRa1)Ra1、-P(O)(ORa1)2、-P(O)(N(Ra1)2)2、-CF2(Ra1)、-CF3、-CR2(ORa1)、-CR2(N(Ra1)2)、-C(O)Ra1、-C(O)ORa1、-C(O)N(Ra1)2、-C(O)N(Ra1)ORa1、-OC(O)Ra1、-OC(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)C(O)ORa1、-N(Ra1)C(O)Ra1、-N(Ra1)C(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)S(O)2Ra1、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、C6-12芳基或5-12元杂芳基；
m选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
每一Ra1各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、苯基、C4-7环烷基、C3-6环烯基、4-7元杂环烷基或5-6元杂芳基；其中，所述杂环烷基或杂芳基具有1-4个选自N、O、S的杂原子；
R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-O C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、-O-C1-6烷基可被一个或多个氟原子取代；
L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基、5-12元杂芳基、C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基和5-12元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-12亚烷基、C2-12亚烯基和C2-12亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
Rb选自氢或C1-6烷基；
每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rc1、-C(O)-Rc1、-C(O)O-Rc1、-C(O)-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)C(O)O-Rc1、-N(Rc1)C(O)-Rc1、-N(Rc1)C(O)N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2O(Rc1)、-OC(O)Rc1、-OC(O)N(Rc1)(Rc1)、-Si(Rc1)、-S-Rc1、-S(O)Rc1、-S(O)(NH)Rc1、-S(O)2Rc1或-S(O)2N(Rc1)(Rc1)；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rc2取代；
每一Rc1各自独立地选自H或C1-6烷基；
每一Rc2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
n、p各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
表示单键或双键；
LBM为连接酶结合部分。
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B各自独立地选自部分饱和的4-8元杂环基、5-8元杂芳基或C6-10芳基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B各自独立地选自部分饱和的4-6元杂环基、5-6元杂芳基或C6-8芳基。
在本发明的一个优选实施方式中，环A选自部分饱和的5元杂环基或5元杂芳基，环B选自苯基或6元杂芳基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
其被m个R1所取代。
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
其被m个R1所取代。
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、羟基、氨基、-C(O)C1-6烷基、-COOH、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NH2、-C(O)N(C1-6烷基)2或7-9元杂环烷基；m选自0、1或2。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、Br、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-COOH、-C(O)OCH2CH3、-C(O)OCH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7元杂环烷基；m选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、-C(O)NH2或7元杂环烷基；m选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、羟基、氨基、-C(O)C1-6烷基、-COOH、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NH2、-C(O)N(C1-6烷基)2；m选自0、1或2。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、Br、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-COOH、-C(O)OCH2CH3、-C(O)OCH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2；m选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2；m选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述每一R1各自独立地选自氢或氰基；m选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R1选自7-9元杂环烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R1选自7元杂环烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R1选自
在本发明的一个优选实施方式中，所述R1选自
在本发明的一个优选实施方式中，所述R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-O-C1-6烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R2选自氢、C1-3烷基、C4-6环烷基、4-6元杂环烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基、氨基或-O-C1-3烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R2选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氨基、甲氧基或乙氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R2选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氨基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述R2为甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-7环烷基、C6-8芳基、3-12元杂环基、5-8元杂芳基、C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-7环烷基、C6-8芳基、3-12元杂环基和5-8元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，C1-6亚烷基、C2-8亚烯基和C2-8亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
Rb选自氢或C1-6烷基；
每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基或3-8元杂环基；
每一Rd分别独立选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
n、p各自独立地选自0、1、2、3、4或5。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基、5-8元杂芳基、C1-3亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-C(O)-N(Rb)-；其中，所述C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基和5-8元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，C1-3烷基、C2-3烯基和C2-4炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
Rb选自氢或C1-6烷基；
每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基、3-8元杂环基；
每一Rd分别独立选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-3烷基或C4-8环烷基；
Rh选自氢、C1-3烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
n选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基、5-8元杂芳基、C1-3亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)2-或-C(O)-N(Rb)-；Rb选自氢或C1-6烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-11元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-7元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-7元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-，且L1、L2、L3、L4和L5中至少2个不选自键。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-7元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-，且L1、L2、L3、L4和L5中至少2个不选自键，至少1个选自C4-6环烷基或4-7元杂环基。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中L5连接LBM，所述的L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-11环烷基、3-12元杂环基、C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、-O-C2-8亚烯基、-O-C2-8亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-C(O)-N(Rb)-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-11环烷基和3-12元杂环基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，C1-6亚烷基、C2-8亚烯基和C2-8亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
Rb选自氢或C1-6烷基；
每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基或3-8元杂环基；
每一Rd分别独立选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
n、p各自独立地选自0、1、2、3、4或5。
在本发明的一个优选实施方式中，L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中L5连接LBM，所述的L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-11环烷基(优选C3-9环烷基，更优选C3-7环烷基)、4-11元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-O-C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-NH-、-C(O)-NH-或-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-，且L1、L2、L3、L4和L5中至少2个不选自键，至少1个选自C3-11环烷基(优选C3-9环烷基，更优选C3-7环烷基)或4-11元杂环基；
Rb选自氢、甲基或乙基；
n选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自C3-11环烷基或4-11元杂环基，其中所述C3-11环烷基包含C3-11单环烷基、7-11元螺环烷基，优选C3-7单环烷基、7-9元螺环烷基，进一步优选C3-6单环烷基、7元螺环烷基；
L2选自C1-3亚烷基、-C(O)-NH-、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-或5-6元杂环基；
L3选自键或5-10元杂环基；
L4选自键、C1-3亚烷基、-C(O)-或-C(O)-(CH2)n-；
L5选自键、5-6元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-N(Rb)-(CH2)n-、-O-C2-4亚炔基或-C(O)-(CH2)n-；
Rb选自氢、甲基或乙基；
n选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自C3-7单环烷基、7-9元螺环烷基或4-11元杂环基；
L2选自C1-3亚烷基、-C(O)-NH-、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-或5-6元杂环基；
L3选自键或5-10元杂环基；
L4选自键、C1-3亚烷基、-C(O)-或-C(O)-(CH2)n-；
L5选自键、5-6元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-N(Rb)-(CH2)n-、-O-C2-4亚炔基或-C(O)-(CH2)n-；
Rb选自氢、甲基或乙基；
n选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述L1选自C3-6单环烷基、7元螺环烷基或4-11元杂环基；
L2选自C1-3亚烷基、-C(O)-NH-、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-或5-6元杂环基；
L3选自键或5-10元杂环基；
L4选自键、亚甲基、亚乙基、亚正丙基、-C(O)-或-C(O)-(CH2)n-；
L5选自键、5-6元杂环基、亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、-N(Rb)-(CH2)n-、-O-亚乙炔基、-O-亚丙炔基或-C(O)-(CH2)n-；
Rb选自氢、甲基或乙基；
n选自0、1或2。
在本发明的一个优选实施方式中，所述L选自如下所示的结构及其立体异构体：
在本发明的一个优选实施方式中，所述L选自如下所示的结构及其立体异构体：
在本发明的一个优选实施方式中，上述L基团右侧连接LBM。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(II)化合物：
其中，
W选自C(Re)或N；
表示单键或双键，当表示单键时，W1选自C(Re)2或NH，当表示双键时，W1选自C(Re)或N；
Re选自氢或C1-6烷基；
Cy1、Cy2各自独立地选自不存在、C6-12芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，其中所述的芳基、杂芳基或杂环基可被1-5个Rf取代，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
每一Rf各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rf1、-C(O)-Rf1、-C(O)O-Rf1、-C(O)-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)C(O)O-Rf1、-N(Rf1)C(O)-Rf1、-N(Rf1)C(O)N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2O(Rf1)、-OC(O)Rf1、-OC(O)N(Rf1)(Rf1)、-Si(Rf1)、-S-Rf1、-S(O)Rf1、-S(O)(NH)Rf1、-S(O)2Rf1或-S(O)2N(Rf1)(Rf1)，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rf2取代；
每一Rf1各自独立地选自氢或C1-6烷基；
每一Rf2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-6烷基、C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(II)化合物，其中，
W、W1选自C(Re)或N；
Re选自氢或C1-6烷基；
Cy1、Cy2各自独立地选自不存在、C6-12芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基，其中所述的芳基、杂芳基或杂环基可被1-5个Rf取代，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
每一Rf各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rf1、-C(O)-Rf1、-C(O)O-Rf1、-C(O)-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)C(O)O-Rf1、-N(Rf1)C(O)-Rf1、-N(Rf1)C(O)N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2O(Rf1)、-OC(O)Rf1、-OC(O)N(Rf1)(Rf1)、-Si(Rf1)、-S-Rf1、-S(O)Rf1、-S(O)(NH)Rf1、-S(O)2Rf1或-S(O)2N(Rf1)(Rf1)，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rf2取代；
每一Rf1各自独立地选自氢或C1-6烷基；
每一Rf2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-6烷基、C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
表示单键或双键。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIa)化合物：
其中，
W选自C(Re)或N；
Re选自氢或C1-6烷基；
每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-O-C1-4烷基；
q选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIa’)化合物：
其中，
每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或-O-C1-4烷基；优选地，Rf选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或-O-C1-4烷基；
q选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIa’)化合物，其中，
Rf选自F、Cl、Br、硝基、氰基、羟基、甲基或甲氧基；
q选自0或1。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIb)化合物：
其中，
W选自C(Re)或N；
Re选自氢或C1-6烷基；
每一Rf各自独立地选自F、Cl、Br、硝基、氰基、羟基、甲基或甲氧基；
q选自0、1、2或3。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIb’)化合物或式(IIb”)化合物，
其中，Rf为F。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIb’)化合物：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc)化合物：
其中，
W选自C(Re)或N；
Re选自氢或C1-6烷基；
环C、D和E各自独立地选自C6-8芳基、5-6元杂芳基或4-7元饱和或部分饱和的杂环基，其中所述的芳基、杂芳基或杂环基可被1-3个Ri取代；
每一Ri各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Ri1、-C(O)-Ri1、-C(O)O-Ri1、-C(O)-N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)C(O)O-Ri1、-N(Ri1)C(O)-Ri1、-N(Ri1)C(O)N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2O(Ri1)、-OC(O)Ri1、-OC(O)N(Ri1)(Ri1)、Si(Ri1)、-S-Ri1、-S(O)Ri1、-S(O)(NH)Ri1、-S(O)2Ri1或-S(O)2N(Ri1)(Ri1)，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Ri2取代；
每一Ri1各自独立地选自氢或C1-6烷基；
每一Ri2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基，其中所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
Rg选自C1-6烷基、C4-12环烷基；
Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-1)化合物：
其中，W、Y1和Y2各自独立地选自CH或N。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-2)化合物：
其中，W和Y2各自独立地选自CH或N；
Ri可选自F、Cl、硝基、氰基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-3)化合物：
其中，W、M2和M3独立地选自CH或N；M1选自O或S；
Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、硝基、氰基、羟基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-3’)化合物：
其中，W选自CH或N；Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-3”)化合物或式(IIc-3”’)化合物：
其中，W选自CH或N；Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-4)化合物：
其中，W、M2和M3独立地选自CH或N；
M1选自O或S。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-4’)化合物：
其中，W、M2和M3独立地选自CH或N。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-5)化合物：
其中，W和M4独立地选自CH或N；
表示单键或双键；
当表示单键时，W与X1相连时，Rf与X3相连；W与X3相连时，Rf与X1相连，X1、X3各自独立地选自CH或N，X2选自-C(O)-；
当表示双键时，W与X3相连，X1选自O或S，X2选自CH或N，X3选自C；
Rf选自氢、卤素、氰基、羟基、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-5’)化合物：
其中，W和M4独立地选自CH或N；
Rf选自氢、卤素、氰基、羟基、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-5”)化合物：
其中，Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIc-6)化合物：
其中，W和M4独立地选自CH或N。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId)化合物：
其中，
W选自CH或N；
表示单键或双键，当表示单键时，W1选自CH2或NH，当表示双键时，W1选自CH或N；
Cy2选自6-8元芳基、5-6元杂芳基或7-10元杂环基，其中所述的芳基、杂芳基或杂环基可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId)化合物，其中，
W选自CH或N；
表示单键或双键，当表示单键时，W1选自CH2或NH，当表示双键时，W1选自CH或N；
Cy2选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或吡咯基，其中所述的苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或吡咯基可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自F、Cl、Br、硝基、氰基、羟基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId)化合物，其中，
W选自CH或N；
表示单键或双键，当表示单键时，W1选自CH2或NH，当表示双键时，W1选自CH或N；
Cy2选自苯基、嘧啶基或吡啶基，其中所述的苯基、嘧啶基或吡啶基可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自F、Cl、Br、羟基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId’)化合物：
其中，表示单键或双键，当表示单键时，W1选自CH2，当表示双键时，W1选自N；
Cy2选自苯基、嘧啶或吡啶，其中所述的苯基、嘧啶或吡啶可被Rf取代；
Rf选自F、Cl、溴、羟基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(II)化合物，其中，
W、W1选自CH或N；
Cy1不存在，Cy2选自5-6元杂芳基或7-10元杂环基，其中所述的杂芳基或杂环基可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId)化合物，其中，
W、W1选自CH或N；
Cy2选自苯基、吡啶、吡唑、咪唑、噻唑或吡咯，其中所述的苯基、吡啶、吡唑、咪唑、噻唑或吡咯可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自F、Cl、溴、硝基、氰基、羟基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IId)化合物，其中，
W、W1选自CH或N；
Cy2选自苯基或吡啶，其中所述的苯基或吡啶可被1-2个Rf取代；
每一Rf各自独立地选自F、Cl、溴、羟基或甲基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIe)化合物：
其中，
W选自CH或N；
环F选自5-6元杂环基，其中所述的杂环基具有1-3个独立的选自N、O、S的杂原子。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIe’)化合物：
其中，X4、X5各自独立地选自O或S。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIf)化合物：
其中，W选自CH或N；
Rf可选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-O-C1-4烷基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIf’)化合物：
其中，Rf可选自甲基、乙基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM为：
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(III)化合物：
其中，R11选自氢、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
在本发明的一个优选实施方式中，所述LBM是式(IIIa)化合物或式(IIIb)化合物：
其中，R11选自氢、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
在本发明的一个优选实施方式中，所述所述LBM选自：
在本发明的一个优选实施方式中，式(I)化合物如下式(I’)化合物所示：
其中，环A、环B、R1、m、R2、X、Z1、L和LBM如上述式(I)化合物所述。
在本发明的一个优选实施方式中，所述式(I’)化合物中，环A选自5元杂环基或5元杂芳基，环B选自苯基或6元杂芳基；
R1选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
m选自0或1；
X、Z1各自独立地选自CH或N；
R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基，其中，C1-3烷基优选甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一个优选实施方式中，式(I)化合物如下式(I”)化合物所示：
其中，R1、m、R2、X、L和LBM如上述式(I)化合物中所定义。
在本发明的一个优选实施方式中，所述式(I”)化合物中，R1选自氢、氰基、甲基、F、Cl、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
m选自0、1或2；
X选自CH或N；
R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基。
在本发明的一个优选实施方式中，式(I)化合物如下式(I”’)化合物所示：
其中，R1、m、R2、L和LBM如上述式(I)化合物中所定义。
在本发明的一个优选实施方式中，所述式(I”’)化合物中，R1选自氢、氰基、甲基、F、Cl、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
m选自0、1或2；
R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基。
第二方面，本发明提供了具有如下结构的化合物，及其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
表1
第三方面，本发明还提供一种药用组合物，其包含本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物。
本发明还提供一种药用组合物，其包含本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，以及药学上可接受的辅料。
第四方面，本发明的目的还包括提供本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物在制备预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的药物中的用途。
本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物在用于制备预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的药物时，其可单独使用或与其他药物活性成分组合使用。
第五方面，本发明的目的还包括提供一种降解和/或抑制患者或生物样品中IRAK蛋白激酶(优选IRAK4)的方法，其包括给予所述患者本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物，或使所述生物样品与本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物接触。
本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物在降解和/或抑制患者或生物样品中IRAK蛋白激酶(优选IRAK4)时，其可单独使用或与其他药物组合使用。
第六方面，本发明的目的还包括提供一种预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向患者施用预防和/或治疗有效剂量的本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或本发明所述药物组合物。
本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或者本发明所述药用组合物在预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况时，其可单独使用或与其他药物组合使用。
第七方面，本发明的目的还包括提供本发明所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或本发明所述药物组合物，其用于预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况。
在本发明的一些实施方案中，所述由IRAK4介导的疾病、病症或病况为癌症、神经退化性疾病、病毒性疾病、自身免疫疾病、炎症性病症、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关的病况、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或中枢神经系统(CNS)病 症。
在本发明的一些实施方案中，所述癌症包括：良性或恶性肿瘤、实体肿瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、胃肿瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、宫颈癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、皮肤癌、骨癌、甲状腺癌、肉瘤、神经胶母细胞瘤、神经母细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、结肠直肠腺瘤、颈部和头部的肿瘤、表皮过度增生、前列腺增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、腺瘤、腺癌、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏或非霍奇金氏淋巴瘤、滤泡癌、未分化性瘤、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、IL-1驱动病症、MyD88驱动病症、冒烟型或惰性多发性骨髓瘤以及血液恶性肿瘤。
在本发明的一些实施方案中，所述血液恶性肿瘤包括：白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、急性淋巴细胞性白血病、B细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(WM)、脾边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤或血管内大B细胞淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、霍奇金氏淋巴瘤、原发性皮肤T细胞淋巴瘤以及惰性多发性骨髓瘤。
在本发明的一些实施方案中，所述神经退化性疾病包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、脑缺血以及由创伤性损伤、谷氨酸神经毒性、低氧症、癫痫症、糖尿病治疗、代谢综合征、肥胖、器官移植和移植物抗宿主疾病造成的神经退化性疾病；
在本发明的一些实施方案中，所述炎症性病症包括：眼过敏、结膜炎、干燥性角膜结膜炎、春季结膜炎、过敏性鼻炎；溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血、特发性血小板减少或其中涉及自身免疫反应或具有自身免疫组分或病因的其它疾病：全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉牙肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯蒂文强森综合征、特发性脂肪泻、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病或其它自身免疫炎症性肠病、肠易激综合征、乳糜泻、牙周炎、透明膜病、肾病、肾小球疾病、酒精性肝病、内分泌眼病变、格雷夫斯病、结节病、肺泡炎、慢性过敏性肺炎、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎(前葡萄膜炎和后葡萄膜炎)、舍格伦综合征、春季角膜结膜炎、肺间质纤维化、牛皮癣性关节炎、全身性青少年性特发性关节炎、肾炎、憩室炎、间质性膀胱炎、肾小球肾炎(具有和不具有肾病综合征，任选地包括特发性肾病综合征或微小变化肾病变)、慢性肉芽肿病、子宫内膜异位症、钩端螺旋体病肾病、青光眼、视网膜病、胰腺炎、遗传性周期性发热综合征、哮喘(过敏性、非过敏性、轻度、中度、重度、支气管炎或锻炼诱发的)、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征、嗜酸性粒细胞增多症、超敏反应、过敏反应、鼻窦炎、二氧化硅诱导的疾病、慢性阻塞性肺病COPD(包括COPD引起的减少损伤、气道炎症、支气管高反应性、重塑或疾病进展等症状)、肺病、囊性纤维化、酸诱导的肺损伤、肺高血压、多发性神经病、白内障、肌肉炎症伴随全身性硬化症、包涵体肌炎、重症肌无力、甲状腺炎、爱迪生氏病、扁平苔癣、阑尾炎、异位性皮肤炎、过敏、睑缘炎、细支气管炎、支气管炎、滑囊炎、子宫颈炎、胆管炎、胆囊炎、慢性移植排斥、结肠炎、结膜炎、膀胱炎、泪腺炎、皮肤炎、皮肌炎、脑炎、心内膜炎、子宫内膜炎、肠炎、小肠结肠炎、上髁炎、附睾炎、筋膜炎、纤维组织炎、胃炎、肠胃炎、过敏性紫癜、肝炎、化脓性汗腺炎、免疫球蛋白A型肾病、间质性肺病、喉炎、乳腺炎、脑膜炎、脊髓炎、心肌炎、肌炎、肾炎、卵巢炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、胰脏炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、静脉炎、肺炎、多发性肌炎、直肠炎、前列腺炎、肾盂肾炎、鼻炎、咽鼓管炎、鼻窦炎、口腔炎、滑膜炎、肌腱炎、扁桃体炎、阴道炎、血管炎、外阴炎、斑秃、多形红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白斑病、超敏性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、寻常天疱疮、落叶型天疱疮、副肿瘤性天疱疮、获得性大疱性表皮松解症、急慢性痛风、慢性痛风性关节炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、冷吡啉相关周期性综合征(CAPS)和骨关节炎。
在本发明的一些优选实施方案中，所述炎症性病症包括涉及自身免疫反应或具有自身免疫组分或病因的其它疾病：全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉牙肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯蒂文强森综合征、特发性脂肪泻、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、银屑病、特应性皮炎、化脓性汗腺炎、痛风、哮喘、慢性阻 塞性肺病以及慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉。
第八方面，本发明还提供了本发明化合物的以下2种通用制备方法：
合成方案1
i)化合物I-a1发生化学转化得到化合物I-a2；
如以化合物I-a1和甲胺或NH2-R2等为基本原料，得到化合物I-a2；
ii)化合物I-a2发生化学转化得到化合物I-a3；
如以化合物I-a2和水合肼等为基本原料，得到化合物I-a3；
iii)化合物I-a3发生化学转化得到化合物I-a4；
如以化合物I-a3和羧酸等为基本原料，反应得到化合物I-a4；
iv)化合物I-a4发生化学转化得到化合物I-a5；
如化合物I-a4和劳森试剂等反应得到化合物I-a5；
v)化合物I-a5和I-a6发生化学转化得到化合物I-a7；
如以化合物I-a5和I-a6为基本原料，发生耦联反应得到化合物I-a7；
vi)化合物I-a7发生化学转化得到通式化合物I；
如以化合物I-a7和连接酶结合部分等为基本原料，通过缩合、还原胺化等反应得到通式化合物I。
合成方案2
i)化合物I-b1发生化学转化得到化合物I-b2；
如以化合物I-b1和甲胺或NH2-R2等为基本原料，得到化合物I-b2；
ii)化合物I-b2发生化学转化得到化合物I-b3；
如以化合物I-b2和NIS等为基本原料，得到化合物I-b3；
iii)化合物I-b3发生化学转化得到化合物I-b4；
如以化合物I-b3和硼酸频那醇酯等为基本原料，反应得到化合物I-b4；
iv)化合物I-b4和I-b5发生化学转化得到化合物I-b6；
如化合物I-b4和I-b5等发生耦联反应得到化合物I-b6；
v)化合物I-b6和I-b7发生化学转化得到化合物I-b8；
如以化合物I-b6和I-b7为基本原料，发生耦联反应得到化合物I-b8；
vi)化合物I-b8发生化学转化得到通式化合物I；
如以化合物I-b8和连接酶结合部分等为基本原料，通过缩合、还原胺化等反应得到通式化合物I。
第九方面，本发明还提供了可作为E3配体的式(III)化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
其中，
W、M2和M3各自独立地选自CH或N；
当M3为CH时，R12选自氢、卤素(优选F、Cl或Br)、叔丁氧羰基、苄基、苄氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基或C1-3烷基；
当M3为N时，R12选自氢、叔丁氧羰基、苄基、苄氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基或C1-3烷基；
M1选自O或S；
Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、硝基、氰基、羟基或甲氧基。
在本发明的一些实施方案中，所述式(III)化合物是式(III’)化合物：
其中，
R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
W选自CH或N；
Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
在本发明的一些实施方案中，所述式(III)化合物是式(III”)化合物或式(III”’)化合物：
其中，
R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
W选自CH或N；
Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
在本发明的一些实施方案中，所述式(III)化合物选自：
其中，R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3。
本发明还提供了可作为E3配体的式(IV)化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
其中，
R13选自氢、卤素、氨基、羟基、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-NH-叔丁氧羰基、-NH-苄基、-NH-苄氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C3-12环烷基、3-12元杂环烷基、C6-12芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基；
W和M4各自独立地选自CH或N；
Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一些实施方案中，所述式(IV)化合物是式(IV’)化合物：
其中，
R13选自氢、F、Cl、Br、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在本发明的一些实施方案中，所述式(IV)化合物选自：
其中，R13选自F、Cl或Br。
本发明的有益效果为：
本发明设计了一类白介素-1受体相关激酶4(IRAK4)的双功能嵌合体杂环化合物，为IRAK4降解剂类药物的发展提供了一个新的方向。IRAK4降解实验研究显示，这些化合物对IRAK4具有较强的降解作用，可作为治疗IRAK4相关的疾病的前景化合物。并且该类化合物对TNF-α和IL-6具有优异的体外抑制活性，在小鼠和大鼠体内吸收好，生物利用度高。此外，本发明研究了该类化合物的特定的合成方法，该合成方法工艺简单，操作便捷，利于规模化工业生产和应用。
具体实施方式
[术语解释]
术语“可”、“任选”、“任意”、“任选地”或“任意地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
除另有规定外，术语“烷基”指一价饱和脂肪族烃基团，包含1至20个碳原子的直链或支链基团，例如“C1-12烷基”、“C1-10烷基”、“C1-8烷基”、“C1-6烷基”、“C1-3烷基”指的是该基团为烷基，且碳链上的碳原子数量分别在1-12、1-10、1-8、1-6、1-3之间。包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。
除另有规定外，术语“环烷基”指的是具有特定碳原子数的单环、双环或者多环饱和脂烃基。在不特别指明的情况下，本申请包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形，包括C3-15环烷基，优选C3-12环烷基，优选C3-11环烷基，进一步优选C3-9环烷基，进一步优选C3-8环烷基，更进一步优选C3-7环烷基；优选C4～12环烷基，优选C4～8环烷基，进一步优选C5-7环烷基，或C4-6环烷基。单环通常指的是优选C3～12单环烷基，更优选C3-10单环烷基，进一步优选C3-8单环烷基，C3-7单环烷基，C3-6单环烷基，其实例包括但不限于：环丙基、环己基、甲基环丙基、2-乙基-环戊基、二甲基环丁基等。稠环环烷基包括螺环烷基、并环烷基、桥环烷基。螺环烷基可以为7-12元螺环烷基，优选7-11元螺环烷基，进一步优选7-9元螺环烷基，其实例包括但不限于：
基。并环烷基可以为6-11元并环烷基，优选7-10元并环烷基，其代表性例子包括但不限于 基。桥环烷基可以是6-10元桥环烷基，优选7-10元桥环烷基，其实例包括但不限于： 基。
除另有规定外，术语“烷氧基”指-O-烷基，所述烷基如上文所定义。优选地，具有1～10个碳原子，优选1～6个碳原子。代表的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基、戊氧基、1-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、1,1-二甲基丙氧基、1,2-二甲基丙氧基、2,2-二甲基丙氧基、1-乙基丙氧基等。
除另有规定外，术语“卤素”或“卤代”是指F(氟)、Cl(氯)、Br(溴)、I(碘)。术语“卤代烷基”是指本文所定义的烷基中一个、两个或多个氢原子被卤素取代。卤代烷基的代表性例子包括-CCl3、-CF3、-CHCl2、CH2Cl、CH2Br、CH2I、-CH2CF3、-CF2CF3等。
除另有规定外，术语“杂环基”或“杂环”指具有环碳原子和1到4个环杂原子的饱和或部分饱和单环或多环环状非芳香族取代基，包含3～20个环原子(“3-20元杂环基”)，其中1个、2个、3个或更多个环原子选自N、O或S，其余环原子为C，杂原子优选1-4个，更优选1-3个(即1个、2个或3个)。优选包含3～14个环原子(“3-14元杂环基”)，进一步优选包含3～12个环原子(“3-12元杂环基”)，进一步优选包含4～11个环原子(“4-11元杂环基”)，或优选包含3～8个环原子(“3-8元杂环基”)，进一步优选包含4～8个环原子(“4-8元杂环基”)，进一步优选包含4～7个环原子(“4-7元杂环基”)，更进一步优选包含4-6个环原子(“4-6元杂环基”)，或优选地包含5-10个环原子(“5-10元杂环基”)，进一步优选包含5-8个环原子(“5-8元杂环基”)，更进一步优选包含5-6个环原子(“5-6元杂环基”)，更进一步优选包含5个环原子(“5元杂环基”)或6个环原子(“6元杂环基”)；杂原子数量优选1、2个或3个。“杂环基”可以是单环的(“单环杂环基”)或一种稠合的(“稠杂环基”或“杂稠环基”)、桥接的(“杂桥环基”或“桥环杂环基”)或螺接-稠合(“杂螺环基”或“螺环杂环基”)的环系统，如一个双环系统(“双环杂环基”)，并且可以是饱和的或可以是部分不饱和的。杂环基双环系统可以在一个或两个环中包括一个或多个杂原子。“杂环基”还包括如上所定义的杂环基环被一个或多个碳环基或杂芳基基团稠合的环系统，或者如上所定义的杂环基环被一个或多个芳基或杂芳基基团稠合的环系统，并且在此类情况下，环成员的数目为该杂环基稠合后的环系统中的所有环成员的数目。在某些实施例中，杂环基的每个例子各自独立地被任选取代，例如，未取代的(一种“未取代的杂环基”)或被一个或多个取代基取代的(一种“取代的杂环基”)。
含有1个杂原子的示例性3元杂环基基团包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基(oxiranyl)和硫杂环丙烷基(thiorenyl)。含有1个杂原子的示例性4元杂环基基团包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基。含有1个杂原子的示例性5元杂环基基团包括但不限于四氢呋喃基、 二氢呋喃基、四氢苯硫基、二氢苯硫基、吡咯烷基、二氢吡咯基以及吡咯基-2,5-二酮。含有2个杂原子的示例性5元杂环基基团包括但不限于咪唑烷基、二氧戊环基、氧杂硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基以及噁唑烷-2-酮。含有3个杂原子的示例性5元杂环基基团包括但不限于三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基。含有1个杂原子的示例性6元杂环基基团包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基以及硫杂环己烷基(thianyl)。含有2个杂原子的示例性6元杂环基基团包括但不限于哌嗪基、吗啉基、二硫杂环己烷基以及二氧杂环己烷基。含有3个杂原子的示例性6元杂环基基团包括但不限于三氮杂环己烷基、氧杂二嗪烷基、噻二嗪烷基、氧杂噻嗪烷基以及二氧杂氮杂环己烷基(dioxazinanyl)。含有1个杂原子的示例性7元杂环基基团包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。含有1个杂原子的示例性8元杂环基基团包括但不限于氮杂环辛烷基、氧杂环辛烷基和硫杂环辛烷基。稠合到一个C6芳基环上的示例性5元杂环基基团(在此又称为一种5,6-双环杂环)包括但不限于二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、苯并噁唑啉酮基等。稠合到一个芳基环上的示例性6元杂环基基团(在此又称为一种6,6-双环杂环)包括但不限于四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。所述杂环基环被一个或多个碳环基或杂芳基基团稠合的环系统的示例性结构包括但不限于以下结构：
除另有规定外，“杂环烷基”是指单环或双环、饱和或部分饱和的如上文定义的“杂环基”或“杂环”，环原子定义同上，即包含3-20个环原子(“3-20元杂环烷基”)，杂原子数量为1个、2个、3个或4个(1-4个)，优选1个、2个或3个(1-3个)，其中杂原子各自独立地选自N、O或S。优选包含3～14个环原子(“3-14元杂环烷基”)，更优选包含3-12个环原子(“3-12元杂环烷基”)，进一步优选包含3-10个环原子(“3-10元杂环烷基”)，更进一步优选包含3～8个环原子(“3-8元杂环烷基”)，或者更进一步优选包含3～7个环原子(“3-7元杂环烷基”)，或者更进一步优选包含4-8个环原子(“4-8元杂环烷基”)，或者更进一步优选包含4-7个环原子(“4-7元杂环烷基”)，或者更进一步优选地包含5-10个环原子(“5-10元杂环烷基”)，或者更进一步优选包含5-6个环原子(“5-6元杂环烷基”)。在某些实施例中，杂环烷基的每个例子各自独立地被任选取代，例如，未取代的(一种“未取代的杂环烷基”)或被一个或多个取代基取代的(一种“取代的杂环烷基”)。上文“杂环基”或“杂环”部分已给出了部分示例性的“杂环烷基”，还包括但不限于氧杂环己烷基、硫代吗啉基、氧杂硫杂环己基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡唑烷基、咪唑啉啶等。“杂环烷基”还包含桥接的(“杂桥环烷基”或“桥环杂环烷基”)或螺接-稠合(“杂螺环烷基”或“螺环杂环烷基”)的环系统，并且可以是饱和的或可以是部分不饱和的，在上述杂环烷基的基础上，优选7-9元杂环烷基，进一步优选7元杂环烷基，示例性结构包括但不限于以下结构：
除另有规定外，术语“芳基”或“芳环基”表示含有6-16个碳原子(C6-16芳基)，或6-14个碳原子(C6-14芳基)，或6-12个碳原子(C6-12芳基)，或6-10个碳原子(C6-10芳基)或6-8个碳原子(C6-8芳基)的单环、双环或三环的芳香碳环体系，术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。芳基基团的实例可以包括苯基、萘基、蒽基、菲基或芘基等。
除另有规定外，术语“杂芳基”或“杂芳环基”表示含有5-14元结构(5-14元杂芳基)，或5-12元结构(5-12元杂芳基)，或5-10元结构(5-10元杂芳基)，优选5-8元结构(5-8元杂芳基)，更优选5-6元结构(5-6元杂芳基)的芳香单环或者多环环状系统，其中至少一个环原子为杂原子且其余原子为碳，杂原子独立地选自O、N或S，杂原子数量优选为1个、2个或3个。杂芳基的实例包括呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、苯并咪唑基、苯并酞嗪基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基等。
除另有规定外，术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的一价不饱和脂肪族烃基。烯基可以包含2-20个碳原子，优选包含2-12个碳原子(即C2-12烯基)，更优选包含2-10个碳原子(即C2-10烯基)，进一步优选包含2-8个碳原子(C2-8烯基)，更进一步优选包含2-6个碳原子(即C2-6烯基)、2-5个碳原子(即C2-5烯基)、2-4个碳原子(即C2-4烯基)、2-3个碳原子(即C2-3烯基)或2个碳原子(即乙烯基)，例如“C2-6烯基”指的是该基团为烯基，且碳链上的碳原子数量在2-6之间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。烯基的非限制性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、异丁烯基和1,3-丁二烯基等。
除另有规定外，术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个叁键的一价不饱和脂肪族烃基。炔基可以包含2-20个碳原子，优选包含2-12个碳原子(即C2-12炔基)，更优选包含2-10个碳原子(即C2-10炔基)，进一步优选包含2-8个碳原子(C2-8炔基)，更进一步优选包含2-6个碳原子(即C2-6炔基)、2-5个碳原子(即C2-5炔基)、2-4个碳原子(即C2-4炔基)、2-3个碳原子(即C2-3炔基)或2个碳原子(即乙炔基)，例如“C2-6炔基”指的是该基团为炔基，且碳链上的碳原子数量在2-6之间(具体地为2个、3个、4个、5个或6个)。炔基的非限制性实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基和1-丁炔基等。
除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚烷基”(其与“亚烷基链”可互换使用)是指由碳和氢原子组成的直链或支链的二价饱和烃基团。术语“Cx-y亚烷基”(x及y各自为整数)是指含有x至y个碳原子的直链或支链的亚烷基，包括C1-30亚烷基，优选为C1-15亚烷基，C1-12亚烷基，C1-8亚烷基，C1-6亚烷基，C1-5亚烷基，C1-4亚烷基，C1-3亚烷基。代表性实例包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲丁基、亚叔丁基、亚戊基、亚异戊基、亚新戊基、亚特戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、亚十一烷基、亚十二烷基、亚十三烷基、亚十四烷基、亚十五烷基、亚十六烷基、亚十七烷基、亚十八烷基、亚十九烷基、亚二十烷基、亚二十一烷基、亚二十二烷基、亚二十三烷基、亚二十四烷基、亚二十五烷基、亚二十六烷基、亚二十七烷基、亚二十八烷基、亚二十九烷基和亚三十烷基。
除另有规定外，所述“亚烷基”是被任选取代的，取代基优选一或多个选自羟基、氨基、巯基、卤素、氰基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、三氟甲基、杂环基或其组合的取代基。
除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚炔基”是指具有一个或多个碳碳叁键的包含2至12个(C2-12亚炔基)，优选2至8个(C2-8亚炔基)，更优选2至6个(C2-6亚炔基)，更进一步优选2至4个(C2-4亚炔基)碳原子的直链或支链二价烃基。优选亚炔基的实例包括但不限于亚乙炔基、1-丙炔亚基、1-丁炔亚基和1,3-丁二炔亚基。
除另有规定外，单独或组合使用的术语“亚烯基”是指具有一个或多个碳碳双键的包含2至12个(C2-12亚烯基)，优选2至8个(C2-8亚烯基)，更优选2至6个(C2-6亚烯基)，更进一步优选2至4个(C2-4亚烯基)碳原子的直链或支链二价烃基。优选亚烯基的实例包括但不限于亚乙烯基(例如-CH＝CH-)、1-丙烯亚基、1-丁烯亚基。
除另有规定外，“环烯基”是指由子基团单环烃环、双环烃环或螺-烃环构成，然而，体系是不饱和的，即存在至少一个碳碳双键但没有芳香性。优选地包含3-12个碳原子(即C3-12环烯基)，更优选 包含3-10个碳原子(C3-10环烯基)，进一步优选3-6个碳原子(C3-6环烯基)、4-6个碳原子(C4-6环烯基)或5-6个碳原子(C5-6环烯基)。
除另有规定外，所述“氧代”或“氧代基”是指相同取代位的两个H被同一个O替代形成双键。
除另有规定外，术语“药学上可接受的盐”、“药用盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物(特别是人)的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等，并与合理的效益/风险比相称的盐，比如胺、羧酸和其他类型化合物的药学上可接受的盐在所属领域中是被熟知的。
除另有规定外，术语“盐”包含由无机酸制备的盐，也包括由有机酸制备的盐。如果本发明的化合物为酸性的，则药学上可接受的无毒碱包括由无机碱及有机碱制备的盐。
除另有规定外，术语“溶剂合物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。
除另有规定外，术语“同位素标记的类似物”、“同位素衍生物”或“同位素标记物”是指化合物中被同位素标记的分子，从而提供可能具有改善的药理活性的同位素标记的类似物。通常用作同位素标记的同位素包括：氢同位素：氘(2H)和氚(3H)；碳同位素：11C、13C和14C；氯同位素：35Cl和37Cl；氟同位素：18F；碘同位素：123I和125I；氮同位素：13N和15N；氧同位素：15O、17O和18O；以及，硫同位素35S。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。尤其是氘和碳13C，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如重氢(2H)，的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术像合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。本发明所述化合物包含其同位素标记物，如氘代物。在本发明的一些实施方案中，所述化合物的同位素标记物即为其氘代物。
除另有规定外，术语“光学异构体”是指分子结构完全相同，物理化学性质相近，但旋光性不同的物质。
除另有规定外，术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等。所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
除另有规定外，术语“前药”是指在体内转化为母体药物的药物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易给药。例如，它们可以通过口服而被生物利用，而母体则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中的溶解度也有所提高。前药的一个例子，但不限于此，可以是任何式(I)的化合物，其作为酯(“前药”)给药，以促进穿过细胞膜的传递，其中水溶性对迁移性有害，但一旦进入细胞内水溶性是有益的，其随后被代谢水解成羧酸，即活性实体。前药的另一个例子可以是与酸基团结合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以显示活性部分。
除另有规定外，术语“任选取代”指所述基团的可取代位点的氢未被取代，或被一个或多个取代基所取代，所述取代基优先选自下组的取代基：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、氧代基、羧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、C3-10环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、C6-14芳基或5-10元杂芳环基，其中，所述C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、C3-10环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、C6-14芳基或5-10元杂芳环基可任选地被选自卤素、羟基、 氨基、氰基、C1-6烷基或C1-6烷氧基中的一个或多个所取代。
[实施例]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或者按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域专业人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法之中。文中所示的较佳实施方法与材料仅做示范之用。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)或/和液相色谱(HPLC)来确定的。NMR的测定使用的仪器是Bruker AVANCE III 600MHz，LC-MS使用的仪器是Waters arc/QDa；HPLC使用的仪器是Waters e2695_2998。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
制备实施例、实施例、试验例及本文其他地方使用的缩写词和全称是： DCM 二氯甲烷 TEA 三乙胺 DIEA/DIPEA N,N-二异丙基乙胺 DMF N,N-二甲基甲酰胺 EtOAc/EA 乙酸乙酯 h 小时 mL 毫升 MeOH 甲醇 NaH 氢化钠 TFA 三氟乙酸 NBS N-溴代丁二酰亚胺 NIS N-碘代丁二酰亚胺 THF 四氢呋喃 Pd(dppf)Cl2 [1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II) TBTU 2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯 DMSO-d6 氘代二甲基亚砜 Toluene 甲苯 DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯 HATU 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 CDI N,N'-羰基二咪唑 SEMCl 2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯 NMP N-甲基吡咯烷酮 PE 石油醚 FBS 胎牛血清 PBS 磷酸盐缓冲液
中间体制备例1：叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：6-氯-4-(甲氨基)烟酸甲酯的合成
在反应瓶中加入乙腈(320mL)和水(9.6mL)，然后室温下向反应瓶中加入4,6-二氯烟酸甲酯(16.00g，77.66mmol)和盐酸甲胺(26.22g，388.29mmol)，再向反应瓶中加入DBU(59.10g，388.29mmol)，加入完毕后在25℃下搅拌3小时。将反应液减压蒸馏以除去大部分溶剂，将反应体系倒入冰水(300mL)中，室温搅拌10分钟，析出，过滤得白色滤饼，滤饼用水(50mL×3)淋洗后干燥，得到6-氯-4-(甲氨基)烟酸甲酯(10.00g)。
步骤2：6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼的合成
在反应瓶中加入EtOH(250mL)，然后室温下向反应瓶中加入6-氯-4-(甲氨基)烟酸甲酯(24.00g，119.63mmol)和水合肼(47.91g，957.04mmol)。加入完毕后80℃搅拌3小时。将反应液减压蒸馏除去大部分溶剂，反应液倒入冰水(500mL)，EA(300mL×4)萃取水相，有机相合并后用水(300mL)和盐水(300mL)各洗一次，经无水硫酸钠干燥后，旋干，得到6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(24.00g)。
步骤3：叔丁基((1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲基氨基)烟酰基)肼羰基)环己基)氨基甲酸酯的合成
在反应瓶中加入DMF(250mL)和6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(24.00g，119.62mmol)，室温搅拌下加入反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸(53.22g，131.58mmol)、DIEA(37.10g，288mmol)和HATU(43.70g，115.2mmol)。加入完毕后室温下搅拌2小时。将反应液倒入冰水(2L)，有固体析出，过滤得到滤饼，用DCM洗涤数次后旋干，得到叔丁基((1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲基氨基)烟酰基)肼羰基)环己基)氨基甲酸酯(24.00g)
步骤4：叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯的合成
在反应瓶中加入甲苯(600mL)，室温下加入叔丁基((1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲基氨基)烟酰基)肼羰基)环己基)氨基甲酸酯(20.00g，46.96mmol)，向上述溶液中加入劳森试剂(20.89g，51.66mmol)，加入完毕后将反应体系温度升至120℃，回流2h。将反应体系倒入水(500mL)中，用DCM(400mL×4)萃取，并用饱和氯化钠水(500mL)洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，旋干，得到粗品。用EA打浆，得到叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(7.00g)。ESI-MS(m/z):424.15[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.37-1.25(m,2H),1.47(d,J＝3.1Hz,9H),1.72(dt,J＝28.5,12.9Hz,2H),2.36–2.14(m,4H),3.03(d,J＝4.9Hz,2H),3.15(d,J＝12.0Hz,1H),3.55(s,1H),3.92-3.72(m,1H),4.47(s,1H),6.66(s,1H),8.41(s,1H),9.00(s,1H)。
中间体制备例2：2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
步骤1：叔丁基4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(0.50g，1.8mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.34g，1.8mmol)、三乙胺(0.46g，4.5mmol)、和二甲基亚砜(10mL)。反应液在90℃反应6h。LCMS检测反应结束后，反应液冷却至室温，随后向其中加入水和乙酸乙酯进行萃取分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，得到叔丁基4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯粗品(0.77g)。ESI-MS(m/z):442.19[M+H]+。
步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
在100mL的反应瓶中加入4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯粗品(0.77g)、2M盐酸乙醇(22mL)和二氯甲烷(16mL)。反应液在室温下反应2h。LCMS检测反应结束后，减压浓缩溶剂至干，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮粗品(0.60g)。ESI-MS(m/z):342.13[M+H]+。
步骤3：叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯的合成
在100mL的反应瓶中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮粗品(1.00g)、2-溴乙酸叔丁酯(0.67g，3.4mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.19g，9.2mmol)和乙腈(50mL)。反应液在70℃下反应8h。LCMS检测反应结束后，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM:MeOH＝92:8)，得到叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(1.21g)。ESI-MS(m/z):456.20[M+H]+。
步骤4：2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(1.21g，2.7mmol)、三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)。反应液在25℃下反应5h。浓缩至干，得到2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品(1.05g)。ESI-MS(m/z):400.14[M+H]+。
中间体制备例3：1-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
步骤1：叔丁基4-(5-氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在100mL氢化瓶中依次加入叔丁基4-(5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(10.00g，32.43mmol)、 乙酸乙酯(100mL)、四氢呋喃(100mL)和Pd/C(7.00g，10％)。该反应液在30℃、氢气氛围下(压力20psi)搅拌16小时。TLC(PE:EA＝1:1)显示反应完毕。将反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，滤液减压浓缩，得到叔丁基4-(5-氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(9.20g)。ESI-MS(m/z):279.17[M+H]+。
步骤2：3-((6-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)氨基)丙酸的合成
在500mL反应瓶中加入叔丁基4-(5-氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(5.00g，17.96mmol)和甲苯(120mL)，然后加入丙烯酸(1.42g，19.76mmol)。该反应液加热至110℃并且搅拌反应16小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示原料消失。反应液减压浓缩，得到3-((6-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)氨基)丙酸(6.50g)。ESI-MS(m/z):351.20[M+H]+。
步骤3：1-(6-(4-乙酰哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在250mL反应瓶中，加入3-((6-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)氨基)丙酸(6.50g，18.55mmol)、尿素(3.34g，55.65mmol)和乙酸(70ml)。该反应液在120℃搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，得到1-(6-(4-乙酰哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮粗品(14.00g)。ESI-MS(m/z):318.15[M+H]+。
步骤4：1-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在250mL反应瓶中加入1-(6-(4-乙酰哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮粗品(13.00g)和HCl(70mL，3N)。该反应液在50℃搅拌反应16小时。反应液减压浓缩得到固体，用碳酸氢钠水溶液稀释，溶液pH＝7-8。该溶液经中压反向制备得到1-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.32g)。
ESI-MS(m/z):276.14[M+H]+；1H NMR(400MHz,D2O)δ:7.97(s,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),6.86(d,J＝9.2Hz,1H),3.72(t,J＝6.8Hz,2H),3.40(s,4H),2.91(s,4H),2.75(t,J＝6.8Hz,2H)。
中间体制备例4：叔丁基(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：叔丁基(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的合成
在250mL的反应瓶中加入2,5-二溴-1,3,4-噻二唑(2.5g,10.0mmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.1g,10.0mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(20mL)和三乙胺(2.1g,20mmol)。反应液在90℃下反应3h。反应完毕后，反应液冷却至0℃，加入H2O(20mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物通过硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝3:1)，得到叔丁基(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(3.5g)。ESI-MS(m/z):363.0/365.0[M+H]+。
中间体制备例5：叔丁基(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的合成
步骤1：2-氯-N-甲基吡啶-4-胺的合成
在100mL的反应瓶中加入2-氯-4-氟吡啶(2g,15.0mmol)、甲胺盐酸盐(1.1g,16.7mmol)，二甲基亚砜(20mL)和N,N-二异丙基乙胺(5.9g,45mmol)。反应液在90℃下反应4h。反应完毕后， 反应液冷却至0℃，加入H2O(20mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到2-氯-N-甲基吡啶-4-胺(1.8g)。ESI-MS(m/z):143.0/145.0[M+H]+。
步骤2：2-氯-5-碘-N-甲基吡啶-4-胺的合成
在100mL的反应瓶中加入2-氯-N-甲基吡啶-4-胺(1g)、N-碘代丁二酰亚胺(1.7g,7.7mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。反应液在90℃下反应4h。反应液冷却至0℃，加入H2O(10mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物通过硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝5:1)得到2-氯-5-碘-N-甲基吡啶-4-胺(0.68g)。ESI-MS(m/z):268.9[M+H]+。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),6.44(s,1H),2.97(d,J＝5.1Hz,3H).
步骤3：2-氯-N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-4-胺的合成
在100mL的反应瓶中加入2-氯-5-碘-N-甲基吡啶-4-胺(0.68g,2.5mmol)、联硼酸频那醇酯(0.97g，3.8mmol)、DPPF二氯化钯(0.19g，0.25mmol)、醋酸钾(0.75g，0.75mmol)和二氧六环(10ml)，氮气置换3次，然后将反应加热到90℃反应5h。反应完毕后，加入H2O(10mL)，乙酸乙酯萃取，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物通过硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝3:1(v/v))，得到2-氯-N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-4-胺(0.68g)。ESI-MS(m/z):268.9[M+H]+。
步骤4：叔丁基(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯的合成
在20mL的微波反应瓶中加入2-氯-N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶-4-胺(340mg,1.3mmol)、(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(551mg，1.5mmol)、四(三苯基膦)钯(293mg，0.26mmol)、醋酸钾(375mg，3.9mmol)、二氧六环(10ml)和水(2ml)，在氮气保护下，微波120℃反应2h。反应完毕后，加入水和乙酸乙酯萃取，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物通过硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝1:1(v/v))，得到叔丁基(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(100mg)。ESI-MS(m/z):425.1[M+H]+。
中间体制备例6：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羧酸的合成
步骤1：哌啶-4-羧酸的合成
在50mL的反应瓶中加入1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羧酸(550mg,2.4mmol)和4M二氧六环盐酸溶液(10mL)。反应液在25℃下反应3h。浓缩至干，得到粗品哌啶-4-羧酸(550mg)。ESI-MS(m/z):130.1[M+H]+。
步骤2：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羧酸的合成
在50mL的反应瓶中加入哌啶-4-羧酸粗品(200mg)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮(428mg，1.5mmol)、N,N-二异丙基乙胺(400mg，3.0mmol)和二甲基亚砜(5mL)。将反应液在90℃下反应3h。LCMS监控反应完毕，反应液冷却至0℃，加入H2O(20mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羧酸(360mg)。ESI-MS(m/z):386.1[M+H]+。
中间体制备例7：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羧酸的合成
参照化合物中间体制备例6制备方法，仅将步骤2中2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮替换为2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羧酸(330mg)。ESI-MS(m/z):386.1[M+H]+。
中间体制备例8：1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔1-基)哌啶-4-羧酸的合成
步骤1：叔丁基1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸酯的合成
在100mL反应瓶中加入二氯甲烷(30mL)、哌啶-4-甲酸叔丁酯盐酸盐(2.40g，10.8mmol)和溴丙炔(1.93g，16.2mmol)，然后再向反应瓶中加入三乙胺(3.28g，32.4mmol)，加入完毕后反应体系在室温下搅拌16小时。LCMS检测反应结束后，向反应液中加入水淬灭反应，EA萃取反应液，收集有机相，干燥后过滤，滤液经减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(EA:PE＝1:5)，得到产物叔丁基1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-甲酸酯(1.41g,6.3mmol)。ESI-MS(m/z):224.03[M+H]+。
步骤2：叔丁基1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸酯(500mg，2.2mmol)、3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(480mg，1.5mmol)、双三苯基磷二氯化钯(420mg，0.6mmol)、碘化亚铜(110mg，0.6mmol)、三乙胺(1210mg，12.0mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。反应体系在氮气保护下80℃反应10h。LCMS检测反应结束后，将反应液冷却至室温，随后反应液经硅藻土过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤。收集滤液，减压浓缩溶剂至干。浓缩物经硅胶柱纯化(DCM:MeOH＝50:1)，得到叔丁基1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸酯(510mg,1.1mmol)。ESI-MS(m/z):466.11[M+H]+。
步骤3：1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸的合成
在25mL的反应瓶中加入叔丁基1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸酯(90mg，0.2mmol)、三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(2mL)。反应液在室温下反应3h。LCMS检测反应结束后，将反应液浓缩至干，得到粗品1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-羧酸(80mg)。ESI-MS(m/z):410.08[M+H]+。
中间体制备例9：1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
步骤1：叔丁基4-(2-(6-氯-4-(甲胺基)烟酰基)肼-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入1-Boc-4-哌啶甲酸(0.69g，3.0mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。在冰浴下加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.48g，3.9mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.16g，9.0mmol)。搅拌半小时后加入6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(0.60g，3.0mmol)。反应体系升至室温下反应3h。LCMS检测反应结束后，向反应体系中加水进行淬灭，反应液用EA萃取，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝25:1)，得到叔丁基4-(2-(6-氯-4-(甲胺基)烟酰基)肼-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯(0.95g,2.3mmol)。ESI-MS(m/z):412.07[M+H]+。
步骤2：叔丁基4-(5-(6-氯-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在250mL反应瓶中加入甲苯(50mL)、叔丁基4-(2-(6-氯-4-(甲胺基)烟酰基)肼-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯(0.85g，2.1mmol)，随后加入劳森试剂(1.00g，2.5mmol)，将反应体系升温至110℃，回流反应1h。LCMS检测反应结束后，向反应体系中加入饱和碳酸氢钠水溶液，EA萃取，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM:MeOH＝30:1)，得到叔丁基4-(5-(6-氯-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(0.65g,1.6mmol)。ESI-MS(m/z):410.02[M+H]+。
步骤3：叔丁基4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基4-(5-(6-氯-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(0.53g，1.3mmol)、5-氰基-7-氮杂吲哚(0.22g，1.5mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(0.36g，0.4mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.23g，0.4mmol)、碳酸铯(1.27g，3.9mmol)和1,4-二氧六环(16mL)。反应体系在氮气保护下105℃反应16h。LCMS检测反应结束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓缩溶剂至干。浓缩物经硅胶柱纯化(DCM:MeOH＝50:1)，得到叔丁基4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(0.61g,1.2mmol)。ESI-MS(m/z):517.11[M+H]+。
步骤4：1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(0.10g，0.2mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(4mL)。反应液在室温下反应3h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干，得到1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈粗品(0.08g)。ESI-MS(m/z):417.07[M+H]+。
中间体制备例10：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛的合成
步骤1：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮的合成
在250mL反应瓶中加入4,5-二氟苯二甲酸酐(9.00g，48.89mmol)、乙酸(100mL)、3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(8.05g，48.89mmol)和乙酸钾(9.59g，97.77mmol)，将反应体系升温到85℃，反应4小时。LCMS检测反应结束后，将反应体系冷却至室温，反应液倒入水中(300mL)，有固体析出，抽滤，滤饼在50℃下烘干，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮粗品(10g)。ESI-MS(m/z):295.0[M+H]+。
步骤2：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
在50mL反应瓶中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.00g)、二异丙基乙基胺(0.88g,6.8mmol)、4-羟甲基哌啶(0.43g,3.7mmol,)和二甲基亚砜(10mL)，将反应体系升温至90度，反应5小时。LCMS检测反应结束后，将反应液将至室温后倒入水中(50mL)，加入EA萃取(20mL x 3)，合并有机相后用无水硫酸钠干燥过滤，减压浓缩有机相至干，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮粗品(1g)。ESI-MS(m/z):390.1[M+H]+。
步骤3：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛的合成
在100mL反应瓶中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g)和二氯甲烷(15mL)，随后加入戴斯马丁氧化剂(1.63g,3.85mmol)，反应体系在室温下反应16小时。LCMS检测反应结束后，向反应体系中加入水(50mL)，二氯甲烷萃取(20mL x 3)，收集有机相加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩有机相至干。浓缩物用硅胶柱层析进行纯化(DCM：MeOH＝50：1)，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(600mg)。ESI-MS(m/z):388.1[M+H]+。
中间体制备例11：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛的合成
参照化合物中间体制备例10制备方法，仅将步骤2中2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮替换为2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(0.5g)。ESI-MS(m/z):370.13[M+H]+。
中间体制备例12：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-甲醛的合成
参照化合物中间体制备例10制备方法，仅将步骤2中2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮替换为2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3- 二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-甲醛(0.8g)。ESI-MS(m/z):370.13[M+H]+。
中间体制备例13：1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-甲酸的合成
在50mL的反应瓶中加入4-哌啶甲酸(0.31g)、中间体制备例12(0.89g,2.4mmol)和N-甲基吡咯烷酮(5mL)。反应体系在室温下反应5h。LCMS检测反应结束后，加水用EA萃取，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝40：1)，得1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-甲酸(0.83g,1.7mmol)。ESI-MS(m/z):482.22[M+H]+。
中间体制备例14：叔丁基4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-羧酸酯的合成
步骤1：N-(4-甲氧基苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺合成
在500mL反应瓶中加入5-氧代四氢呋喃-2-羧酸(19.70g，151.42mmol)，随后缓慢滴加氯化亚砜(45.04g，378.55mmol)，滴加完毕，将反应体系加热至85℃，搅拌反应三小时后减压浓缩除去剩余氯化亚砜。向浓缩物中加入二氯甲烷(150mL)，缓慢加入对甲氧基苄胺(16.62g，121.14mmol)，三乙胺(30.64g，302.84mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液后，在室温条件下搅拌反应2小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)确认反应结束。反应液经水(50mL x 3)，稀盐酸(1N，50mL)，饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物经重结晶(DCM：PE＝1:5)进行纯化，得到N-(4-甲氧基苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(21.00g)。ESI-MS(m/z):250.1[M+H]+。
步骤2：3-羟基-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮合成
将N-(4-甲氧基苄基)-5-氧代四氢呋喃-2-甲酰胺(21.00g，84.25mmol)溶于四氢呋喃(500mL)中，冷却至-78℃，缓慢滴加叔丁醇钾(7.56g，67.4mmol.)。滴加结束后反应1小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)确认反应结束。反应液中加入饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，自然升温至室温，乙酸乙酯(100mL)萃取三次，收集有机相。有机相经饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物经硅胶色谱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)进行纯化，得到3-羟基-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮(18.80g)。ESI-MS(m/z):250.1[M+H]+。
步骤3：1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧代哌啶-3-基三氟甲磺酸酯合成
将3-羟基-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮(6.20g，24.87mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，将体系降温至-15℃，加入吡啶(3.94g，49.75mmol)，随后缓慢滴入三氟甲磺酸酐(10.53g，37.31mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液，约0.5小时滴加完成。滴加过程中温度维持在-15-0℃之间。滴加完成后保温-15℃反应1.5小时，反应结束后，减压除去溶剂，浓缩物经柱层析分离(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得到1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧代哌啶-3-基三氟甲磺酸酯(6.20g)。ESI-MS(m/z):382.0[M+H]+。
步骤4：叔丁基4-(丙-2-炔-1-基氧基)哌啶-1-羧酸酯合成
在250mL反应瓶中加入N-Boc-4-羟基哌啶(5.00g，24.8mmol)和四氢呋喃(50mL)，在冰浴条件下，加入氢化钠(1.49g，37.3mmol)反应30min，随后加入溴丙炔(2.956g，24.8mmol)，自然升温至室温，反应16小时。反应结束后，向反应体系中加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，随后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，浓缩物经柱层析分离(PE:EA＝10:1-5:1)，得到叔丁基4-(丙-2-炔-1-基氧基)哌啶-1-羧酸酯(3.6g)。ESI-MS(m/z):240.2[M+H]+。
步骤5：2-溴-N-甲基-6-硝基苯胺合成
将2-氟-3-溴硝基苯(25.00g，113.64mmol)，甲胺盐酸盐(9.21g，136.36mmol)，碳酸钾(62.82g，454.55mmol)悬浮于乙腈(230.00mL)中，室温下反应16h。TLC监测(PE:EA＝10:1)反应进行，反应完成后将体系溶剂浓缩至干，将浓缩物加入200mL水中，用乙酸乙酯(100mLx2)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，加无水硫酸钠干燥，过滤，有机相经减压浓缩至干，得2-溴-N-甲基-6-硝基苯胺粗品(22g)，冷冻后为固体。ESI-MS(m/z):231.0[M+H]+。
步骤6：6-溴-N1-甲基苯-1,2-二胺合成
将2-溴-N-甲基-6-硝基苯胺(20.00g)溶于乙酸(90.00mL)、乙酸乙酯(180.00mL)、水(10.00mL)的混合溶剂中，反应体系升温至50℃，加入还原铁粉(4.83g，86.56mmol)，随后升温至回流反应2h，TLC监测反应完成(PE:EA＝10:1)，反应体系降至室温，过滤，滤液加入水(50mLx4)洗涤，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。减压浓缩溶剂至干，得6-溴-N1-甲基苯-1,2-二胺粗品(18.98g)。ESI-MS(m/z):201.0[M+H]+。
步骤7：7-溴-1-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮合成
将6-溴-N1-甲基苯-1,2-二胺(12.00g，59.68mmol)，N,N'-羰基二咪唑(14.52g，89.53mmol)溶于乙腈(150.00mL)中，升温至85℃反应16h，反应过程中有大量固体析出，反应结束后，冷却至室温，将反应液减压浓缩至干，浓缩物加入20mL水打浆1h，过滤，干燥滤饼，得到7-溴-1-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(6.2g)。ESI-MS(m/z):227.0[M+H]+。
步骤8：3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮合成
将7-溴-1-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(6.20g，27.31mmol.)溶于300mL无水四氢呋喃中，在0℃条件下，加入氢化钠(0.98g，40.96mmol)，反应体系保持0℃反应30min，随后缓慢加入1-(4-甲氧基苄基)-2,6-二氧代哌啶-3-基三氟甲磺酸酯(10.41g，27.31mmol)。TLC监测无原料(PE:EA＝1：1)，将反应液倒入500mL饱和氯化铵水溶液中，搅拌20min。减压除去四氢呋喃后，用乙酸乙酯萃取(200mL)浓缩液。收集有机相，饱和氯化钠水溶液洗涤后，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩有机相至干，得到3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮粗品(13.50g)，不经纯化直接进行下一步反应。ESI-MS(m/z):458.1[M+H]+。
步骤9：3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮合成
将3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-(4-甲氧基苄基)哌啶-2,6-二酮(13.50g)、甲磺酸(15.10g，157.10mmol)、甲苯(200mL)加入反应瓶中，升温至回流反应4小时，TLC监测(DCM:MeOH＝20:1)原料反应完全。减压除去甲苯后将残留物倒入300mL冰水中，随后用乙酸乙酯萃取，减压浓缩有机相至干。浓缩物加入30mL乙酸乙酯打浆，抽滤后滤饼烘干得3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(5.4g)。ESI-MS(m/z):338.0[M+H]+。
步骤10：叔丁基4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-羧酸酯合成
将叔丁基4-(丙-2-炔-1-基氧基)哌啶-1-羧酸酯(250.0mg，1.04mmol)，3-(4-溴-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(351.8mg，1.04mmol)，碳酸铯(1.36g，4.16mmol)，PdCl2(PPh3)2(20.23mg，0.11mmol)，碘化亚铜(48.55mg，0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，氮气置换三次后，反应体系升温至85℃反应4小时。LCMS检测反应完成后将反应体系降温至室温，过滤，滤液加入50mL水中，使用混合溶剂(DCM:MeOH＝9:1)进行萃取，有机相经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至干，浓缩物经中压制备(快速制备液相色谱仪，型号：BiotageSelekt)，得到叔丁基4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基氧基)哌啶-1-羧酸酯(95mg)。ESI-MS(m/z):497.2[M+H]+。
中间体制备例15：1-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸的合成
步骤1：6-溴苯并[cd]吲哚-2(1H)-酮合成
将1,8-萘内酰亚胺(5.00g，29.55mmol)溶于二氯甲烷(100mL)，在冰浴下滴加溴素(7.08g，44.33mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液，滴加结束后将反应体系升温至15℃并搅拌反应16小时。TLC(DCM:MeOH＝20:1)确认反应结束后，反应液加入10％硫代硫酸钠溶液(50mL)进行淬灭，过滤，收集滤饼，得到6-溴苯并[cd]吲哚-2(1H)-酮(7.00g)。ESI-MS(m/z):248/250[M+H]+
步骤2：2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛合成
将6-溴苯并[cd]吲哚-2(1H)-酮(6g，24.2mmol)溶解于四氢呋喃(60mL)中，反应体系冷却至-78℃，缓慢滴加1M的正丁基锂四氢呋喃溶液(31.5ml，31.5mmol)，-78℃下反应0.5h。控温在-78℃到-60℃，缓慢滴入N,N-二甲基甲酰胺(3.5g，48.4mmol)，将反应体系缓慢升温至5℃反应1小时。LCMS监控反应结束。在5℃条件下，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(50mL)，随后将反应体系升至室温，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取，收集有机相。有机相经饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩溶剂至干。浓缩物经硅胶色谱层析(DCM:MeOH＝30:1)进行纯化，得到2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛(2.4g)。ESI-MS(m/z):198[M+H]+
步骤3：1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛合成
将到2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛(2.4g，12.2mmol)溶于四氢呋喃中，降温至0℃，加入氢化钠(4.9g，122mmol)，并在0℃条件下反应30min，之后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(2.6g，13.4mmol)，将反应体系升温至65℃，反应3小时。反应完成后，向反应液加入饱和氯化铵淬灭反应，随后用乙酸乙酯(50mLx2)萃取，收集有机相，硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经柱层析分离(DCM:MeOH＝15:1)，得到1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛(0.4g)。ESI-MS(m/z):309[M+H]+。
步骤4：叔丁基1-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯合成
将1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-甲醛(270mg，0.9mmol)溶于二氯甲烷(5.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入哌啶-4-甲酸叔丁酯盐酸盐(222mg，1.0mmol)和冰乙酸(105mg，1.8mmol)，室温下搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(371mg,1.8mmol)，随后反应体系在室温下反应2小时。LCMS监控反应结束，向反应体系中加入水(2mL)淬灭。减压 浓缩溶剂至干，浓缩物经柱层析(DCM:MeOH＝15:1)纯化得到叔丁基1-((1-(2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯(340mg)。ESI-MS(m/z):478.2[M+H]+。
步骤5：1-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸合成
将叔丁基1-((1-(2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯(125mg)溶于二氯甲烷(4mL)，滴入三氟乙酸(2mL)。反应体系在室温下反应6h。LCMS监控反应结束，减压浓缩溶剂至干，得到1-((1-(2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-羧酸粗品(100mg)，产物直接用于下一步。ESI-MS(m/z):422.2[M+H]+。
中间体制备例16：叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步骤1：叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
参照中间体制备例4的合成方法，将其中原料哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯替换为2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯得到叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(520mg)。ESI-MS(m/z):391.05[M+H]+。
步骤2：叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
参照中间体制备例5的制备方法，仅将中间体制备例5第4步中叔丁基(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)氨基羧酸酯替换为叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(340mg，0.87mmol)。得到叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(45mg)。ESI-MS(m/z):451.16[M+H]+。
中间体制备例17：叔丁基(6-(5-(6-氯-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)氨基甲酸酯的合成
参照化合物中间体制备例1制备方法，仅将步骤3中反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为6-(Boc-氨基)螺[3.3]庚烷-2-羧酸，得到叔丁基(6-(5-(6-氯-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)氨基甲酸酯(550mg)。ESI-MS(m/z):436.15[M+H]+。
中间体制备例18：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-腈的合成
步骤1：叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(4-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入中间体制备例1(0.40g，0.9mmol)、4-氰基-7-氮杂吲哚(0.15g，1.0mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(0.35g，0.4mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.22g，0.4mmol)、碳酸铯(0.92g，2.8mmol)和1,4-二氧六环(16mL)。反应体系在氮气保护下105℃反应16h。LCMS检测反应结束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓缩溶剂至干。浓缩物经硅胶柱纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(4-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.41g，0.8mmol)。ESI-MS(m/z):531.22[M+H]+。
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-腈的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(4-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.47g，0.8mmol)、三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应3h。LCMS检测反应结束后，浓缩溶剂至干，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-腈粗品(0.32g)。ESI-MS(m/z):431.17[M+H]+。
中间体制备例19：(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
步骤1：叔丁基(S)-10-溴-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
在100mL反应瓶中依次加入1-溴-2,3-二氟-5-硝基苯(2.2g,9.28mmol)、(S)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪 (2.2g,10.2mmol)、DMSO(30mL)和氢氧化钾(1.5g,27.8mmol)，室温反应3小时，然后将反应体系升温到40℃继续反应3小时。LCMS显示反应完毕，将反应液加入水(100mL)中淬灭，随后用乙酸乙酯(200mL)萃取，分液，收集有机相。得到的有机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，浓缩物经中压制备(PE:EA＝10:1)得到叔丁基(S)-10-溴-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(2.1g,5.08mmol)。ESI-MS(m/z):414.06[M+H]+。
步骤2：叔丁基(S)-10-甲基-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
在250mL反应瓶中依次加入叔丁基(S)-10-溴-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(2.1g,5.08mmol)、碳酸钾(1.4g,10.2mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(370mg,0.51mmol)、三甲基环三硼氧烷(3.8g,15.24mmol)、二氧六环(40mL)和水(10mL)；反应体系在氮气环境下80℃反应3小时。LCMS显示反应完毕，将反应体系降至室温，随后向其中缓慢加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，分液，得到的有机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，浓缩物经中压制备(PE:EA＝8:1)得到叔丁基(S)-10-甲基-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(0.9g,2.58mmol)。ESI-MS(m/z):350.16[M+H]+。
步骤3：叔丁基(S)-8-氨基-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
在100mL氢化瓶中依次加入叔丁基(S)-10-甲基-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(0.9g,2.58mmol)、四氢呋喃(10mL)甲醇(10mL)和Pd/C(450mg)。该反应液在氢气氛围下室温搅拌2小时。LCMS显示反应完毕，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，收集滤液，减压浓缩至干，得到叔丁基(S)-8-氨基-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯粗品(0.8g)。ESI-MS(m/z):320.19[M+H]+。
步骤4：(S)-3-((3-(叔丁氧羰基)-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸的合成
在50mL反应瓶中加入(S)-8-氨基-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(0.8g)和甲苯(20mL)，然后加入丙烯酸(180mg,2.5mmol)。将反应液加热至110℃搅拌反应6小时。LCMS显示反应完毕，将反应液冷却至室温，随后减压浓缩溶剂至干，得到(S)-3-((3-(叔丁氧羰基)-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸粗品(1.05g)。ESI-MS(m/z):378.20[M+H]+。
步骤5：(S)-1-(3-乙酰基-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在50mL反应瓶中加入(S)-3-((3-(叔丁氧羰基)-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸粗品(1.05g)、尿素(450mg,7.5mmol)和乙酸(10mL)。反应体系在120℃搅拌8小时。LCMS显示反应完毕，将反应液减压浓缩至干，浓缩物经中压制备纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到(S)-1-(3-乙酰基-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(160mg,0.45mmol)。ESI-MS(m/z):359.16[M+H]+。
步骤6：(S)-1-(10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在50mL反应瓶中加入(S)-1-(3-乙酰基-10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(160mg,0.45mmol)和HCl(5mL，3N)，反应体系在50℃搅拌反应6h。LCMS显示反应完毕，将反应液减压浓缩至干，得到(S)-1-(10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐粗品(160mg)。ESI-MS(m/z):317.15[M+H]+。
步骤7：叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯的合成
在25mL的反应瓶中加入(S)-1-(10-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮盐酸盐粗品(160mg)、2-溴乙酸叔丁酯(109mg,0.49mmol)、乙腈(4mL)和 N,N-二异丙基乙胺(231mg,1.79mmol)。反应液在80℃条件下反应3h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干，浓缩物经中压制备纯化(DCM:MeOH＝25:1)，得到叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯(100mg,0.23mmol)。ESI-MS(m/z):431.22[M+H]+。
步骤8：(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
在25mL的反应瓶中加入叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯(100mg,0.23mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(1mL)。反应液在25℃反应2h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干，得到(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸粗品(120mg)。ESI-MS(m/z):375.16[M+H]+。
中间体制备例20：(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
步骤1：叔丁基(S)-4-(2-氟-4-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在250mL反应瓶中依次加入1,2-二氟-4-硝基苯(5.00g，31.43mmol)、(S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.50g，34.68mmol)、DMSO(50mL)和DIPEA(8.20g，63.44mmol)，将反应液升温至120℃反应8h。LCMS显示反应完毕，向反应液中加入水(100mL)，有固体析出，过滤得滤饼。滤饼经柱层析纯化(PE:EA＝3:1)，得到叔丁基(S)-4-(2-氟-4-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯(9.9g)。ESI-MS(m/z):356.15[M+H]+。
步骤2：叔丁基(S)-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
在250mL反应瓶中依次加入叔丁基(S)-4-(2-氟-4-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯(9.5g，26.76mmol)、DMF(55mL)，将反应液降温至0℃以下，缓慢加入60％NaH(1.3g，51.17mmol)，加入完毕，恢复室温反应0.5h。LCMS显示反应完毕后，向反应液中缓慢加入水(100mL)淬灭反应，然后用乙酸乙酯(200mL)萃取，分液，收集有机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤一次后，减压浓缩有机相至干，得到叔丁基(S)-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(9.20g)。ESI-MS(m/z):336.15[M+H]+。
步骤3：叔丁基(S)-8-氨基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
在250mL氢化瓶中依次加入叔丁基(S)-8-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(5.0g，14.92mmol)、甲醇(50mL)和Pd/C(2g)。该反应液在25℃、氢气氛围下(压力20psi)搅拌8小时。LCMS显示反应完毕后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，滤液减压浓缩至干，得到叔丁基(S)-8-氨基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(4.7g)。ESI-MS(m/z):306.17[M+H]+。
步骤4：(S)-3-((3-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸的合成
在250mL反应瓶中加入叔丁基(S)-8-氨基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(4.7g，15.40mmol)和甲苯(50mL)，然后加入丙烯酸(1.25g，17.36mmol)。反应液加热至110℃搅拌反应8小时。LCMS显示反应完毕后，直接将反应液减压浓缩至干，得到(S)-3-((3-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸粗品(6.9g)。ESI-MS(m/z):378.20[M+H]+。
步骤5：(S)-1-(3-乙酰基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在250mL反应瓶中加入(S)-3-((3-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)氨基)丙酸(6.50g)、尿素(3.2g)和乙酸(60mL)。反应液在120℃搅拌12小时。LCMS显示反应完毕，将反应液减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(DCM:MeOH＝20:1)，得到(S)-1-(3-乙酰基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3.4g)。ESI-MS(m/z):345.15[M+H]+。
步骤6：(S)-1-(1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在250mL反应瓶中加入(S)-1-(3-乙酰基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3.4g，9.88mmol)和HCl(20mL，3N)，将反应液在50℃搅拌反应8h。LCMS显示反应完毕，反应液直接减压浓缩至干得到(S)-1-(1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮粗品(2.9g)。ESI-MS(m/z):303.14[M+H]+。
步骤7：叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯的合成
在100mL的反应瓶中加入(S)-1-(1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-8-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.0g，6.62mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(1.55g，7.95mmol)、乙腈(50mL)和N,N-二异丙基乙胺(4.28g，33.1mmol)。反应液在80℃下反应3h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM:MeOH＝30:1)，得到叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯(1.44g)。ESI-MS(m/z):417.21[M+H]+。
步骤8：(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
在250mL的反应瓶中加入叔丁基(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3-(4H)-基)乙酸酯(1.44g，3.46mmol)、三氟乙酸(10mL)和二氯甲烷(10mL)。反应液在25℃下反应2h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干得到(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸粗品(1.52g)。ESI-MS(m/z):361.14[M+H]+。
中间体制备例21：(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-氟-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成。
参照化合物中间体制备例20制备方法，仅将步骤1中1,2-二氟-4-硝基苯替换为1,2,3-三氟-5-硝 基苯，得到(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-氟-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸(320mg,0.85mmol)。ESI-MS(m/z):379.13[M+H]+。
中间体制备例22：2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
步骤1：叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌嗪-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(0.5g，1.66mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.9g，2.40mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.3g，5.00mmol)。反应半小时后加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，1.66mmol)。反应液在25℃下反应2h，LC-MS监测反应完全，加入水进行萃取分液。收集有机相，浓缩上硅胶柱分离(DCM：MeOH＝40:1)，得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌嗪-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-羧酸酯(0.7g)。ESI-MS(m/z):471.29[M+H]+。
步骤2至步骤4的操作同中间体制备例2的步骤2至步骤4，得到2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)乙酸(0.68g)。ESI-MS(m/z):429.13[M+H]+。
中间体制备例23：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸的合成
步骤1：二叔丁基2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)丙二酸酯的合成
将4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(10.00g,43.65mmol)溶于甲苯(100mL)中，随后加入丙二酸二叔丁酯(18.88g,87.30mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(2.00g,2.18mmol)、三叔丁基膦(883.1mg,4.36mmol)、磷酸钾(27.80g,130.95mmol)，反应体系经氮气置换三次，升温至85℃反应16h，TLC(PE:EA＝20:1)监测反应结束。向体系中加入水(500mL)并加入乙酸乙酯萃取(200mL x 3)，收集有机相，经无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩至干。浓缩物经柱层析进行纯化(PE:EA＝50:1-10:1)，得到产物二叔丁基2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)丙二酸酯(2.30g)。ESI-MS(m/z):365.44[M+H]+。
步骤2：2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)乙酸的合成
将二叔丁基2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)丙二酸酯(2.70g,7.41mmol)溶于甲苯(10mL)和三氟乙酸(3mL)中，反应体系经氮气置换三次，升温至100℃反应16h，TLC(PE:EA＝20:1)监测原料反应完毕。反应体系减压浓缩后，浓缩物经过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-0:1)，得到产物2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)乙酸(900.0mg)。ESI-MS(m/z):209.21[M+H]+。
步骤3：甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-甲基苯甲酸酯的合成
将2-(4-(甲氧羰基)-3-甲基苯基)乙酸(1.00g,4.80mmol)溶于乙腈(15mL)中，向上述体系中加 入溴化苄(985.7mg,5.76mmol)和碳酸钾(995.7mg,7.2mmol)，升温至80℃反应2小时，TLC(PE:EA＝5:1)监测原料转化完毕。反应体系减压浓缩，浓缩物经过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-1:1)，得到产物甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-甲基苯甲酸酯(1.0g)。ESI-MS(m/z):299.34[M+H]+。
步骤4：甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯的合成
将甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-甲基苯甲酸酯(1.00g,3.35mmol)溶于1,2-二氯乙烷(20mL)中，向上述体系中加入N-溴代丁二酰亚胺(894.9mg,5.03mmol)和偶氮二异丁腈(55.0mg,0.34mmol)，升温至80℃反应2h，TLC(PE:EA＝5:1)监测原料部分剩余。反应体系减压浓缩后，浓缩物经过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-1:1)，得到产物甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-(溴甲基)苯甲酸酯(350.0mg)。ESI-MS(m/z):377.03[M+H]+。
步骤5：苄基2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸酯的合成
将甲基4-(2-(苄氧基)-2-氧乙基)-2-(溴甲基)苯甲酸酯(2.00g,5.30mmol)溶于乙腈(10mL)，向上述体系中加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1.05g,6.36mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.06g,15.91mmol)，在80℃下反应16h，TLC(PE:EA＝1:1)监测原料转化完毕。反应体系减压浓缩后，浓缩物经过柱层析纯化(PE:EA＝10:1-0:1)，得到产物苄基2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸酯(700.0mg)。ESI-MS(m/z):393.41[M+H]+。
步骤6：2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸的合成：
将苄基2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸酯(700.0mg,1.78mmol)溶于THF(4mL)，并加入钯碳(264.1mg)，反应体系在氢气氛围下室温反应6h。TLC(PE:EA＝0:1)监测原料转化完毕。反应体系经过滤，滤液减压浓缩至干。浓缩物经过制备板纯化(PE:EA＝0:1)，得到产物2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸(516.8mg)。ESI-MS(m/z):333.29[M+H]+。
中间体制备例24：(1R,4R)-5-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-2-基)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷的合成
在100mL的反应瓶中加入2-氯-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶(1g,6.54mmol)、(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷盐酸盐(975mg,7.19mmol)、二甲基亚砜(20mL)和三乙胺(2.6g,26.16mmol)。反应液在150℃下反应12h。反应完毕后，反应液冷却至室温，加入水(20mL)搅拌15min，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩溶剂至干，浓缩物通过硅胶柱层析进行纯化(DCM:MeOH＝30:1)得到(1R,4R)-5-(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-2-基)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(780mg)。ESI-MS(m/z):217.10[M+H]+。
中间体制备例25：叔丁基4-(4-(5-(6-溴-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
参照中间体制备例5的合成方法，得到叔丁基4-(4-(5-(6-溴-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯(167mg，0.37mmol)，ESI-MS(m/z):591.16/593.16[M+H]+。
中间体制备例26：1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
步骤1：甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(10.0g，49.84mmol)，反式-1,4-环己烷二甲酸单甲酯(9.28g，49.84mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，然后加2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(22.74g，59.81mmol)，维持反应体系在0-5℃条件下滴加N,N-二异丙基乙胺(19.32g，149.52mmol)，滴加完毕缓慢升温至20℃搅拌2小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)确认反应完全。将反应液倒入水(400mL)中，搅拌半小时，析出，过滤，滤饼真空干燥得甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯(13.60g)。
步骤2：甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯(5.70g，15.45mmol)溶解于四氢呋喃(100mL)中，加入劳森试剂(10.94g，27.04mmol)。反应液于65℃搅拌1小时。TLC(DCM:MeOH＝15:1)确认反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)中，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相用盐水(100mL)洗涤两次，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝200:1-100:1)纯化后加乙酸乙酯(50mL)打浆得到甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(1.80g,4.91mmol)。
步骤3：甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(4.75g，12.95mmol)和5-氰基-7-氮杂吲哚(1.85g，12.95mmol)溶解于N,N-二甲基乙酰胺(50mL)，随后加入碳酸铯(12.65g，38.84mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.50g，2.59mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(1.18g，1.29mmol)。反应体系在氮气保护下升温至140℃搅拌反应16小时。LCMS确认反应结束，反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，收集有机相倒入水(200mL)中，分出有机相，水相继续用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤两次，干燥，浓缩溶剂至干。浓缩物经过硅胶柱色谱法(PE:EA＝10:1–2:1)纯化，得到甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(2.20g，4.65mmol)。
步骤4：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(1.20g，2.53mmol)加入到四氢呋喃(60mL)中，然后加入硼氢化锂(82.79mg，3.8mmol)，反应体系在20℃条件下搅拌6小时后升温至65℃搅拌10小时，TLC(DCM:MeOH＝15:1)确认反应完全。将反应液倒入饱和氯化铵溶液中(200mL)中，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相用饱和盐水(50mL)洗涤有机相，干燥，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶柱色谱纯化(DCM:MeOH＝150:1-90:1)得1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.16g,0.36mmol)。
步骤5：1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-5-腈(0.15g，0.34mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(0.21g，0.51mmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS确认反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，干燥，浓缩溶剂至干，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.10g,0.23mmol)。ESI-MS(m/z):444[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:9.71(s，1H)，8.91(d，1H，J＝4.4Hz)，8.69(d，1H，J＝2.0Hz)，8.55(d，1H，J＝2.0Hz)，8.46(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，1H，J＝2.0Hz)，6.73(d，1H，J＝4.0Hz)，8.42(d，3H，J＝4.8Hz)，2.35-2.42(m,3H)，2.23(dd，2H，J＝17.2Hz),1.69-1.79(m，2H),1.46-1.59(m，3H)。
中间体制备例27：(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
参照中间体制备例20的合成方法，将步骤1中的(S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯替换为(R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，得到(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸粗品(1.32g)。ESI-MS(m/z):361.14[M+H]+。
中间体制备例28：2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
参照中间体制备例2的合成方法，将步骤1中的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮替换为2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(3.5g)。ESI-MS(m/z):419.13[M+H]+。
中间体制备例29：叔丁基6-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-羧酸酯的合成
参照中间体制备例1的合成方法，将步骤3中的反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为2-Boc-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸，得到叔丁基6-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-羧酸酯(2.8g)。ESI-MS(m/z):422.13[M+H]+。
中间体制备例30：1-(4-(甲氨基)-5-(5-(吡咯烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
步骤1：叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)吡咯烷-1-羧酸酯的合成
将6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(5.00g，24.9mmol)溶于DMF(80mL)加入1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-羧酸(5.90g，27.41mmol)，二异丙基乙基胺(9.66g，74.76mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(568.5mg，1.50mmol)。加料完毕在20℃反应2h。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应完毕。反应液加入到500mL水中，加入乙酸乙酯进行萃取(300mL x 3)，有机相经硫酸钠干燥后减压浓缩至干。浓缩物经柱层析(PE：EA＝100：1～1：1)纯化得到叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)吡咯烷-1-羧酸酯(10g，crude)。
步骤2：叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯的合成
将叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)吡咯烷-1-羧酸酯(4.50g，11.31mmol)溶于四氢呋喃(80mL)，加入劳森试剂(9.15g，22.62mmol)。升至60℃反应1小时。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应完毕。反应液慢慢倒入饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)用乙酸乙酯萃取(100mL x 2)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用柱层析(PE：EA＝100：1～0：1)纯化得到叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.95g，21.2％)。
步骤3：叔丁基3-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯的合成
将叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯(1.35g，3.41mmol)和5-氰基-7-氮杂吲哚(0.63g，4.43mmol)溶到二氧六环(30mL)里，依次加入碳酸铯(3.33g，10.23mmol)，XantPhos(0.79g，1.36mmol)和Pd2(dba)3(1.25g，1.36mmol)。在氮气保护下将反应体系升至100℃反应16小时。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应完成。将反应液降至室温倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL x 2)。有机相合并后用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用柱层析(PE：EA＝50：1-1：1)纯化得到叔丁基3-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯(1.10g，64.1％)。
步骤4：1-(4-(甲氨基)-5-(5-(吡咯烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将叔丁基3-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯(1.00g，1.99mmol)溶到二氯甲烷(5mL)里，加入三氟乙酸(1mL，8.77mmol)。加完反应16小时。LCMS显示反应完毕。将反应液直接减压浓缩得到粗品-(4-(甲氨基)-5-(5-(吡咯烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.80g)。
中间体制备例31：叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯的合成
步骤1：叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯的合成
将6-氯-4-(甲氨基)烟酰肼(5.00g，24.92mmol)和1-Boc-3-羧基氮杂环丁烷(5.01g，24.92mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，然后室温下依次加入N,N-二异丙基乙胺(9.66g，74.76mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(11.37g，29.91mmol)，然后反应液室温下搅拌反应2小时。TLC(EA:MeOH＝10:1)显示反应完毕。将反应液倒入冰水(180mL)中，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相合并后用水(100mL)洗三次，盐水(50mL)洗一次，经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱(DCM：MeOH＝200:1-20:1)纯化后得到粗品叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(9.00g)。
步骤2：叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯的合成
将叔丁基3-(2-(6-氯-4-(甲氨基)烟酰)肼羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(3.10g，8.08mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，然后室温下加入劳森试剂(3.59g，8.88mmol)，该反应液加热至65℃，搅拌反应30分钟。LCMS检测反应结束。反应液减压浓缩后倒入碳酸氢钠水溶液(50mL)中，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取后，经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱(DCM：MeOH＝200:1-50:1)纯化后得到叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(0.70g)。ESI-MS(m/z):382.1[M+H]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:8.81(s，1H)，8.34(s，1H)，6.65(s，1H)，4.40-4.50(m，2H)，4.20-4.24(m，3H)，3.02(d，J＝4.8Hz，3H)，1.46(s，9H)。
中间体制备例32：(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成。
参照中间体制备例19的合成方法，将步骤1中的(S)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪替换为(R)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪，得到(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸。ESI-MS(m/z):375.16[M+H]+。
中间体制备例33：叔丁基(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丙基)氨基甲酸酯的合成
参照中间体制备例1的合成方法，将步骤3中的反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为Boc-1-氨基环丙基甲酸，得到叔丁基(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丙基)氨基甲酸酯。ESI-MS(m/z):312.10[M+H]+。
中间体制备例34：1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈的合成
步骤1：6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酸甲酯的合成
将4,6-二氯烟酸甲酯(15.00g，72.81mmol)和氘代甲胺盐酸盐(25.60g，362.91mmol)溶于乙腈和水(体积比25:1)的混合溶剂(200mL)中，搅拌状态下滴加DBU(53.11g，348.86mmol)，滴加完毕，室温25℃反应3h，TLC(PE:EA＝5:1)确认反应完全。将反应液浓缩至干后加入冰水搅拌1h，逐渐析出白色固体，过滤，滤饼用水洗涤、烘干，得6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酸甲酯(12.00g)。
步骤2：6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰肼的合成
将6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酸甲酯(12.00g，58.93mmol)和80％水合肼(23.60g，472.00mmol)溶于150mL乙醇中，加热至80℃反应3h，TLC(PE:EA＝5:1)确认反应完全。反应液减压浓缩至干，有大量白色固体析出，加入甲基叔丁基醚50mL搅拌、过滤，洗涤滤饼，烘干得6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰肼(5.81g)。
步骤3：甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰肼(5.81g，28.53mmol)，反式-1,4-环己烷二甲酸单甲酯(5.31g，28.53mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，然后加2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(11.93g，31.38mmol)，维持反应体系在0-5℃条件下滴加N,N-二异丙基乙胺(11.06g，85.59mmol)，滴加完毕，缓慢升温至20℃搅拌2小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)确认反应完全。将反应液倒入水(400mL)中，搅拌半小时，析出白色固体，过滤，滤饼真空干燥得甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯(5.90g)。
步骤4：甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将甲基(1r,4r)-4-(2-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)烟酰基)肼-1-羰基)环己烷-1-羧酸酯(5.90g，15.86mmol)溶解于四氢呋喃(100mL)中，加入劳森试剂(7.38g，18.25mmol)。反应液于65℃搅拌1小时。TLC(DCM:MeOH＝15:1)确认反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)中，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，有机相用盐水(100mL)洗涤两次，减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝200:1-100:1)纯化后，加乙酸乙酯(50mL)打浆，得到甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(1.20g,4.91mmol)。
步骤5：甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯的合成
将甲基(1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(1.20g， 3.24mmol)和5-氰基-7-氮杂吲哚(0.56g，3.91mmol)溶解于N,N-二甲基乙酰胺(50mL)，随后加入碳酸铯(2.11g，6.47mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.38g，0.65mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0.30g，0.33mmol)。反应体系在氮气保护下升温至130℃进行微波反应1.5h。LCMS确认反应结束，反应液经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(100mL)淋洗，收集有机相倒入水(200mL)中，分出有机相，水相继续用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤两次，干燥，减压浓缩至干。浓缩物经过硅胶柱色谱法(PE:EA＝10:1–2:1)纯化，得到甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(0.68g)。
步骤6：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈的合成
将甲基(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己烷-1-羧酸酯(0.68g，1.52mmol)加入到四氢呋喃(60mL)中，然后加入四氢铝锂(115.5mg，3.03mmol)，反应体系在20℃条件下搅拌2小时，TLC(DCM:MeOH＝15:1)确认反应完全。将20％NaOH溶液滴入反应液中进行淬灭，随后用EA(50mL×3)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤有机相，干燥，减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱色谱纯化(DCM:MeOH＝150:1-90:1)，得1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(0.30g)。
步骤7：1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈的合成
将1-(5-(5-((1r,4r)-4-(羟甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(0.30g，0.67mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(0.64g，1.51mmol)。反应液于25℃搅拌2小时。LCMS确认反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，干燥，减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱色谱纯化(DCM:MeOH＝90:1-60:1)，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-((甲基-d3)氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(0.20g)。ESI-MS(m/z):447.55[M+H]+；1H NMR(600MHz，CDCl3)δ:9.71(s，1H)，8.91(d，1H，J＝4.4Hz)，8.69(d，1H，J＝2.0Hz)，8.55(d，1H，J＝2.0Hz)，8.43(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，1H，J＝2.0Hz)，6.83(d，1H，J＝4.0Hz)，2.45-2.62(m，3H)，2.33(dd，2H，J＝17.2Hz),1.69-1.79(m，2H)，1.48-1.61(m，3H)。
中间体制备例35：1-(1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烷-1-酮的合成
参照化合物中间体制备例18制备方法,仅将步骤1中4-氰基-7-氮杂吲哚替换为1-(1H吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烷-1-酮,得到1-(1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烷-1-酮(0.30g,0.5mmol)。ESI-MS(m/z):448.17[M+H]+。
中间体制备例36：1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸的合成。
步骤1：1-(5-硝基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯的合成
在100mL反应瓶中依次加入2-氯-5-硝基嘧啶(2.00g,12.5mmol)、哌啶-4-羧酸叔丁酯(2.32g,12.5mmol)、三乙胺(5.08g,50.2mmol)和DMF(20mL),90℃反应6h，LCMS显示反应完毕，减压浓缩，浓缩物经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝1:1)得到1-(5-硝基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯(1.72g,5.6mmol)。ESI-MS(m/z):309.12[M+H]+。
步骤2：1-(5-氨基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯的合成
在100mL反应瓶中依次加入1-(5-硝基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯(1.72g,5.6mmol)、铁粉(1.25g,22.3mmol)、氯化胺(1.19g,22.3mmol)、乙醇(10mL)和水(1mL)，80℃反应6h。LCMS显示反应完毕，反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到1-(5-氨基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯粗品(1.42g)。ESI-MS(m/z):279.17[M+H]+。
步骤3：3-((2-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氨基)丙酸的合成
在100mL反应瓶中加入1-(5-氨基嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯(1.42g)和甲苯(30mL)，然后加入丙烯酸(0.47g,6.6mmol)。该反应液加热至110℃并且搅拌反应16小时。LCMS显示反应完毕，反应液减压浓缩得到3-((2-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氨基)丙酸(1.78g,5.1mmol)。ESI-MS(m/z):351.18[M+H]+。
步骤4：1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯的合成
在100mL反应瓶中加入3-((2-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)氨基)丙酸(1.78g,5.1mmol)和乙酸(10mL)，然后加入尿素(0.91g,15.2mmol)。该反应液加热至120℃并且搅拌反应12小时。LCMS显示反应完毕，反应液减压浓缩，浓缩物经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝1:50)，得到1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯(1.02g,2.7mmol)。ESI-MS(m/z):376.19[M+H]+。
步骤5：1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸的合成
在50mL的反应瓶中加入1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸叔丁酯(0.10g,0.3mmol)、三氟乙酸(2mL)、二氯甲烷(2mL)。反应液在25℃下反应3h。LCMS检测反应结束后，减压浓缩得到1-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸粗品(0.09g)。ESI-MS(m/z):320.13[M+H]+
中间体制备例37：5-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚-1,3-二酮的合成
参照化合物中间体制备例2中合成2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的制备方法，仅将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯，2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮代替2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到5-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚-1,3-二酮(0.5g)。ESI-MS(m/z):375.14[M+H]+。
中间体制备例38：(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸的合成
步骤1：(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯的合成
在250mL反应瓶中依次加入反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸(3.00g，12.33mmol)、DMF(50mL)、碳酸钾(1.80g，13.02mmol)，室温搅拌下加入碘甲烷(1.84g，12.96mmol)，加入完毕，继续室温反应3h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入水(100mL)，有固体析出，过滤得(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.7g)。ESI-MS(m/z):258.16[M+H]+。
步骤2：(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯的合成
在250mL反应瓶中依次加入(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.7g，10.51mmol)、DMF(50mL)，冰浴条件下，加入60％NaH(0.84g，21.01mmol)，加入完毕，撤除冰浴，自然升至室温搅拌0.5h。然后加入氘代碘甲烷(1.83g，12.61mmol)，加入完毕，继续室温反应3h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)、乙酸乙酯(100mL)，搅拌分液，有机相减压浓缩至干，得到(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.5g)。ESI-MS(m/z):275.20[M+H]+。
步骤3：(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸的合成
在250mL反应瓶中依次加入(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.5g，9.12mmol)、THF(10mL)、水(10mL)、甲醇(5mL)和氢氧化钠(0.73g，18.25mmol)，将反应液在室温下反应3h，LCMS显示反应完毕。后处理，6N盐酸调节溶液pH为5，然后加入水(100mL)，乙酸乙酯(100mL)，萃取，分液，将有机相减压浓缩至干，得到(1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)(甲基-d3)氨基)环己烷-1-甲酸(2.2g)。ESI-MS(m/z):261.18[M+H]+。
中间体制备例39：(R)-2-(8-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-异丙基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
参照中间体制备例19制备方法，仅将步骤1中(S)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪替换为(R)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪，步骤2中的三甲基环三硼氧烷替换为异丙烯基三氟硼酸钾，得到(R)-2-(8-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-异丙基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸粗品(320mg)。ESI-MS(m/z):403.19[M+H]+。
中间体制备例40:((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-环丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成
参照中间体制备例1和中间体制备例18的制备方法，仅将中间体制备例1步骤1中盐酸甲胺替换为环丙基胺，将中间体制备例18中的4-氰基-7-氮杂吲哚替换为5-氰基-7-氮杂吲哚，得到 ((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-环丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(210mg)。ESI-MS(m/z):557.24[M+H]+。
中间体制备例41:1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羧酸的合成
参照中间体制备例7的制备方法，仅将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮替换为2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羧酸(810mg)。ESI-MS(m/z):404.12[M+H]+。
中间体制备例42:叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
步骤1：叔丁基4-(3-溴-4-(甲氧羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将2-溴-4-氟苯甲酸甲酯(39.50g，169.50mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(47.36g，254.20mmol)溶于二甲基亚砜(600mL)，然后加入碳酸钾(46.85g，339.01mmol)。加完后，于110℃下搅拌反应12小时。将反应液倒入冰水(1.2L)中，然后用乙酸乙酯(500mL x 3)萃取，有机相合并后，水(500mL)洗三次，饱和氯化钠水溶液(500mL)洗一次，然后经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯粗品(70.00g)。
步骤2：2-溴-4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸的合成
将叔丁基4-(3-溴-4-(甲氧羰基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(35.00g)溶于甲醇(120ml)、水(120ml)和四氢呋喃(120ml)中，然后加入氢氧化钠(14.03g，350.63mmol)。加入完毕后，室温下搅拌反应16小时。LCMS检测反应结束后，将反应液倒入冰水(300mL)，然后用乙酸乙酯(200mL x3)萃取，水相用稀盐酸调pH至2-3，然后用乙酸乙酯(300mL x3)萃取，有机相合并后用水(400mL)和饱和氯化钠水溶液(400mL)分别洗一次，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，得到2-溴-4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(21.00g，54.51mmol)。
步骤3：4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-甲酰基苯甲酸的合成
将2-溴-4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯甲酸(5.00g，12.98mmol)置于氮气中加入四氢呋喃(75mL)。反应液冷却至-78℃后，缓慢滴加甲基锂(1.6M)(8.1mL，12.98mmol)，滴加完毕后，-78℃搅拌30分钟，然后滴加正丁基锂(2.5M)(6.2ml，15.50mmol)，并继续搅拌30分钟。随后在-78℃滴加N,N-二甲基甲酰胺(2.85g，38.94mmol)，-78℃搅拌反应1小时，将反应液缓慢升至室温，并继续搅拌1小时。LCMS检测反应完毕。将反应液缓慢倒入饱和氯化铵溶液(30mL)中进行淬灭，2N稀盐酸调节反应液pH至4-5，然后用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取，有机相用水(100mL)和盐水(100mL)分别洗一次，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，得到4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-甲酰基苯甲酸粗品。粗品用(石油醚：乙酸乙酯＝1：3)打浆后过滤得到滤饼，滤饼干燥后，得 到4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-甲酰基苯甲酸(2.5g，7.48mmol)。
步骤4：4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)甲基)苯甲酸的合成
将3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(1.55g，9.44mmol)溶于甲醇(50mL)中，并向其中加入无水乙酸钠(1.29g，15.73mmol)，室温下搅拌反应30分钟。随后将4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-甲酰基苯甲酸(2.63g，7.87mmol)加入到反应液中，继续搅拌反应30分钟后，将氰基硼氢化钠(0.97g，15.73mmol)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。LCMS显示原料反应完全，将反应液倒入水中，然后用2N稀盐酸调节反应液pH至4-5，乙酸乙酯(100mL x 3)萃取水相三次，收集有机相用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤一次。有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干，浓缩物通过打浆(乙酸乙酯：石油醚＝1:3)得到4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)甲基)苯甲酸粗品(3.00g)。
步骤5：叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)甲基)苯甲酸(3.00g)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.61g，20.16mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(3.06g，8.06mmol)，室温下反应2小时。TLC(二氯甲醇:甲醇＝10:1)检测反应完毕。将反应液倒入冰水中(100mL)，用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，合并有机相后用水(40mL x 3)洗涤三次，再用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗一次，有机相经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至干，得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯粗品。粗品经硅胶柱(二氯甲烷：甲醇＝300:1～50:1)分离纯化后，再经甲基叔丁基醚(20mL x2)打浆纯化后，得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(0.95g，2.22mmol)。ESI-MS(m/z):429.1[M+1]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:10.95(s，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.07(d，J＝8.4Hz，2H)，5.02-5.07(m，1H)，4.18-4.35(m，2H)，3.40-3.50(m，4H)，3.20-3.30(m，4H)，2.80-2.90(m，1H)，2.52-2.60(m，1H)，2.30-2.40(m，1H)，1.94-1.99(m，1H)，1.42(s，9H)。
中间体制备例43:叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
步骤1：甲基4,5-二氟-2-甲基苯甲酸酯的合成
将4,5-二氟-2-甲基苯甲酸(15.00g，87.1mmol)溶于甲醇(150mL)中，加入浓硫酸(1.71g，17.4mol)，65℃下反应16小时。TLC(PE/EA＝10/1)检测反应完毕后，将反应液减压浓缩至干，浓缩物加入碳酸氢钠溶液调pH至8，水相用乙酸乙酯(100mLx3)萃取，合并有机相经饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至干，得到甲基4,5-二氟-2-甲基苯甲酸酯(14.00g)。
步骤2：甲基2-(溴乙基)-4,5-二氟甲基苯甲酸酯的合成
将甲基4,5-二氟-2-甲基苯甲酸酯(14.00g)溶于氯仿(140mL)，25℃下搅拌至溶解，随后加入N-溴代丁二酰亚胺(14.72g，82.73mmol)和过氧化苯甲酰(0.73g，3.01mmol)，70℃下反应16小时。TLC(PE/EA＝20/1)监测反应完成。将反应液减压浓缩至干，向浓缩物中加入水(100mL)，用DCM(50mLx3)萃取，合并有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥， 减压浓缩至干，得到甲基2-(溴乙基)-4,5-二氟-甲基苯甲酸酯粗品。粗品经硅胶柱层析(PE/EA＝50/1-30/1)分离纯化得甲基2-(溴乙基)-4,5-二氟甲基苯甲酸酯(10.00g，37.7mmol)。
步骤3：3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌嗪-2,6-二酮的合成
将甲基2-(溴乙基)-4,5-二氟甲基苯甲酸酯(10.00g，37.7mmol)溶于二甲基亚砜(80mL)，随后加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(6.21g，37.7mmol)和二异丙基乙基胺(29.23g，226.1mmol)，反应液在80℃反应6小时。LCMS检测反应完成。将反应液倒入水(200mL)中，用DCM(150mLx3)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌嗪-2,6-二酮粗品。粗品经硅胶柱层析(PE/EA＝10/1-1/1)纯化得到3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌嗪-2,6-二酮(3.20g，11.4mmol)。
步骤4：叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌嗪-2,6-二酮(500.0mg，1.78mmol)和N-Boc-哌嗪(334.1mg，1.78mmol.)溶于二甲基亚砜(5mL)，加入N,N-二异丙基乙基胺(276.7mg，2.14mmol)，130℃反应16小时。LCMS检测反应完毕，将反应液倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(15mLx3)萃取，合并有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤一次。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯粗品。粗品经高压制备得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(106.0mg，0.24mmol)。ESI-MS(m/z):447.20[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:10.98(s，1H)，7.46(d，J＝11.4Hz，1H)，7.27(d，J＝7.5Hz，1H)，5.08(dd，J＝13.3，5.1Hz，1H)，4.37(d，J＝17.2Hz，1H)，4.24(d，J＝17.1Hz，1H)，3.50(s，4H)，3.07(d，J＝4.8Hz，4H)，2.94–2.83(m，1H)，2.65–2.55(m，1H)，2.43–2.30(m，1H)，2.07–1.89(m，1H)，1.43(s，9H)。
中间体制备例44:叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
步骤1：4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮的合成
将7-溴-1-甲基-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮(3.00g,13.3mmol)，溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，0℃下分批加入氢化钠(1.06g，26.6mmol)，室温下反应0.5小时，随后0℃度下加入2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(2.7g，16.0mmol)，室温下反应过夜。反应液降至0℃后，慢慢加水淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取(30mL x 2)，合并有机相后水洗，饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥过滤，并减压浓缩，浓缩物通过硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝10：1)得到4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮(3.8g)。ESI-MS(m/z):357.1[M+H]+。
步骤2：叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将4-溴-3-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮(2g，5.6mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.25g，6.7mmol)、三(二亚苄-BASE丙酮)二钯(0)(513mg，0.56mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(261mg，0.56mmol)和叔丁醇钠(107mg，1.12mmol)溶于二氧六环(20mL)中，氮气置换体系后，升温至90℃反应6小时。反应完成后，将体系降温至室温，乙酸乙酯萃取，有机相经硫酸钠干燥后，减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱层析进行纯化(PE:EA＝2：1)，得到叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(2.3g)。ESI-MS(m/z):463.3[M+H]+。
步骤3：叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(2.3g，5mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入四丁基氟化铵(25mL，25mmol，1M)，升温至65℃反应14h。反应完成后将体系降温至室温，乙酸乙酯萃取，有机相经硫酸钠干燥 后，减压浓缩至干，浓缩物经硅胶柱层析进行纯化(DCM:MeOH＝120:1)，得到叔丁基4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(1.17g，71％)。ESI-MS(m/z):333.2[M+H]+。
中间体制备例45:(R)-2-(9-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基l-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸的合成
步骤1：(R)-叔丁基4-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在100mL反应瓶中依次加入1-溴-2,3-二氟-5-硝基苯(2.2g,9.28mmol)、(R)-1-Boc-3-羟甲基哌嗪(2.2g,10.2mmol)、DMSO(30mL)和DIEA(0.528g,27.8mmol)，升温至120℃反应16小时。LCMS显示反应完毕，将反应液加入水(100mL)中淬灭，随后用乙酸乙酯(300mL)萃取，分液，收集有机相。得到的有机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，浓缩物经中压制备(DCM:MeOH＝30:1)，得到(R)-叔丁基4-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯(2.7g,6.12mmol)。ESI-MS(m/z):434.06/436.06[M+H]+。
步骤2：(R)-叔丁基7-溴-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
将(R)-叔丁基4-(3-溴-2-氟-5-硝基苯基)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸酯溶于DMF中，冰浴下搅拌30分钟后缓慢加入NaH，随后将反应体系缓慢升至室温，继续搅拌反应16h。LCMS显示反应完毕，将反应液加入水(100mL)中淬灭，随后用乙酸乙酯(300mL)萃取，分液，收集有机相。得到的有机相分别用水以及饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，浓缩物经中压制备(PE:EA＝10:1)，得到(R)-叔丁基7-溴-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(1.5g,3.62mmol)。ESI-MS(m/z):414.06/416.06[M+H]+。
步骤3：(R)-叔丁基7-甲基-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
将(R)-叔丁基7-溴-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(1.00g，0.0024mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，依次加入氯化锂(0.20g，0.0048mol.)，四甲基锡(0.86g，0.0048mol)，四三苯基膦钯(0.14g，0.0004mol)，氮气保护，95℃下反应16小时。LCMS监测反应完全，将反应液过滤，滤液经减压浓缩至干，浓缩物经制备板(PE/EA＝5/1)分离纯化，得到(R)-叔丁基7-甲基-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(750.0mg，2.15mmol)。
步骤4：(R)-叔丁基9-氨基-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯的合成
将(R)-叔丁基7-甲基-9-硝基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(750.0mg，2.15mmol)溶于二氧六环(8mL)，加入Pd/C(672.8mg)，在氢气氛围下，25℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完成，将反应液用硅藻土过滤，滤液经减压浓缩至干，得到(R)-叔丁基9-氨基-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(600.0mg，1.88mmol)。
步骤5：(R)-3-((3-(叔丁氧羰基)-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)氨基)丙酸的合成
将(R)-叔丁基9-氨基-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-羧酸酯(600.0mg，1.88mmol)溶于甲苯(6mL)，加入丙烯酸(269.9mg，3.74mmol)，110℃下反应16小时。LCMS监测反应完成，将反应液减压浓缩至干得到(R)-3-((3-(叔丁氧羰基)-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)氨基)丙酸粗品(400.0mg)。
步骤6：(R)-1-(3-乙酰基-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
将(R)-3-((3-(叔丁氧羰基)-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)氨基)丙酸(400.0mg，1.02mmol，1.00equiv)溶于乙酸(10mL)，加入尿素(306.0mg，5.09mmol，5.00equiv.)，120℃下反应16小时。LCMS检测反应完成，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯(15mLx3)萃取，有机相用盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，旋干有机相。经层析制备板(DCM/MeOH＝10/1)分离纯化，得到(R)-1-(3-乙酰基-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(120.0mg，0.33mmol。
步骤7：(R)-1-(7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
将(R)-1-(3-乙酰基-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(120.0mg，0.33mmol，1.00equiv.)溶于稀盐酸(2mL，3M)中，65℃下反应6小时。LCMS检测反应完成。将反应液减压浓缩至干，得到(R)-1-(7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(69.0mg，0.22mmol)。1H NMR(400MHz，D2O)δ：6.77(t，J＝8.5Hz，1H)，6.70–6.58(m，1H)，4.41–4.24(m，1H)，4.05(dt，J＝20.3，10.1Hz，1H)，4.01(s，1H)，3.76(dt，J＝13.8，6.7Hz，2H)，3.51–3.38(m，2H)，3.12(dtd，J＝15.2，13.0，2.7Hz，2H)，2.95(t，J＝12.3Hz，1H)，2.77(t，J＝6.9Hz，2H)，2.19–2.04(m，3H).MS:m/z＝317.36[M+1]+.
步骤8：叔丁基(R)-2-(9-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯的合成
在25mL的反应瓶中加入(R)-1-(7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(69mg，0.22mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(43mg,0.22mmol)、乙腈(4mL)和N,N-二异丙基乙胺(85mg,0.66mmol)。反应液在80℃条件下反应3h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干，浓缩物经中压制备纯化(DCM:MeOH＝25:1)，得到叔丁基(R)-2-(9-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯(52mg,0.12mmol)。ESI-MS(m/z):431.22[M+H]+。
步骤9：(R)-1-(7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-9-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成
在25mL的反应瓶中加入叔丁基(R)-2-(9-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯(52mg,0.12mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(1mL)。反应液在25℃反应2h。LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩至干，得到叔丁基(R)-2-(9-(2,4-二氧四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸酯粗品(35mg)。ESI-MS(m/z):375.16[M+H]+。
中间体制备例46：3-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在250mL反应瓶中依次加入5-氰基-7-氮杂吲哚(2.00g，13.97mmol)、DMF(30mL)和N-氯 代丁二酰亚胺(1.87g，13.97mmol)，将反应液升温至55℃反应3h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入水(100mL)，有固体析出，过滤，滤饼烘干，得到3-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(2.0g)。ESI-MS(m/z):178.01[M+H]+。
中间体制备例47：7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲醛的合成
步骤1：7-(叔丁基)-2-甲基7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯的合成
在100mL反应瓶中依次加入7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(1.00g，3.7mmol)、DMF(20mL)和碳酸钾(0.57g，4.1mmol)，室温搅拌下加入碘甲烷(0.58g，4.1mmol)，加入完毕，继续室温反应3h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入水(100mL)，有固体析出，过滤，滤饼烘干，得7-(叔丁基)-2-甲基7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸酯(1.1g)ESI-MS(m/z):284.37[M+H]+。
步骤2：叔丁基2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
在100mL反应瓶中加入7-(叔丁基)-2-甲基7-氮杂螺[3.5]壬烷-2,7-二羧酸羧酸酯(1.1g，3.9mmol)，无水四氢呋喃(20mL)，降温，0℃以下加入四氢铝锂(0.32g，8.4mmol)，加入完毕，室温搅拌0.5h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入2N氢氧化钠水溶液淬灭反应，然后反应液通过硅藻土过滤后，将滤液减压浓缩至干，得到叔丁基2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(1.0g)。ESI-MS(m/z):256.36[M+H]+。
步骤3：(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲醇的合成
在100mL反应瓶中加入叔丁基2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(1g，3.9mmol)、DCM(10mL)和三氟乙酸(2mL)，将反应液在室温下反应3h，LCMS显示反应完毕。后处理，减压浓缩至干，得到(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲醇(1g)，产品不经过纯化，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):156.24[M+H]+。
步骤4：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
在250mL反应瓶中依次加入(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲醇(1g)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟吲哚-1,3-二酮(1g，3.4mmol)、DMSO(20mL)和三乙胺(1g，9.9mmol)，将反应液升温至90℃反应3h。LCMS显示反应完毕，后处理，加入水(100mL)，有固体析出，过滤，将滤饼烘干，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.8g)。ESI-MS(m/z):430.45[M+H]+。
步骤5：7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲醛的合成
在100mL反应瓶中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(2-(羟甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.8g)、DCM(20mL)和戴斯-马丁试剂(1.2g，2.8mmol)，加入完毕，室温搅拌3h。LCMS显示反应完毕，后处理，将反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，饱和氯化钠水溶液洗涤一次，将有机相减压浓缩至干，浓缩物经柱层析纯化(DCM:MeOH＝50:1(v/v))，得到7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲醛(0.5g)ESI-MS(m/z):428.43[M+H]+。
实施例1：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物1)的合成
步骤1：叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.40g，0.9mmol)、5-氰基吲哚(0.15g，1.0mmol)、三二亚苄基丙酮二钯(0.35g，0.4mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.22g，0.4mmol)、碳酸铯(0.92g，2.8mmol)和1,4-二氧六环(16mL)。反应体系在氮气保护下105℃反应16h。LCMS检测反应结束后，将反应液冷却至室温，随后经硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。收集滤液，减压浓缩溶剂至干。浓缩物经硅胶柱纯化(DCM：MeOH＝10:1)，得到叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.47g)。ESI-MS(m/z):530.23[M+H]+。
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-5-腈的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.47g，0.8mmol)、三氟乙酸(5mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应3h。浓缩至干，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-5-腈粗品(0.32g)。ESI-MS(m/z):430.17[M+H]+。
步骤3：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺的合成
在50mL的反应瓶中加入2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品(0.36g)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.29g，0.9mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.34g，2.6mmol)。反应半小时后加入1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)5-氰基吲哚(0.32g，0.8mmol)。反应液在25℃下反应6h。加入水进行萃取分液，收集有机相，浓缩上硅胶柱分离(DCM：MeOH＝92:8)，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.15g)。ESI-MS(m/z):812.30[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:1.222-1.309(m,2H),1.379-1.471(m,2H),1.764-1.869(m,2H),2.109-2.172(m,1H),2.206(d,J＝10.16Hz,2H),2.336(d,J＝12.21Hz,2H),2.707-2.728(m,4H),2.778-2.860(m,2H),3.093-3.108(m,3H),3.154-3.180(m,2H),3.456-3.472(m,4H),3.913-3.953(m,1H),4.949(dd,J＝5.40 Hz,J＝12.55Hz,1H),6.667(s,1H),6.783(d,J＝3.39Hz,1H),6.974(d,J＝8.40Hz,1H),7.096(dd,J＝2.26Hz,J＝8.54Hz,1H),7.312(d,J＝2.17Hz,1H),7.528(dd,J＝1.46Hz,J＝8.66Hz,1H),7.725(d,J＝8.48Hz,1H),7.811(d,J＝3.48Hz,1H),7.998-8.016(m,1H),8.345(d,J＝8.67Hz,1H),8.546(s,1H),8.978(d,J＝4.84Hz,1H)。
实施例2：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物2)的合成
参照实施例1制备方法，仅将实施例1步骤1中5-氰基吲哚替换为5-氰基-7-氮杂吲哚，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.05g)。ESI-MS(m/z):813.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.420-1.478(m 2H),1.843(q,2H),2.160-2.182(m,1H),2.228(d,J＝10.3Hz,2H),2.357(d,J＝12.7Hz,2H),2.745-2.759(m,4H),2.824-2.943(m,2H),3.133(s,2H),3.20(t,J＝4.66Hz,2H),3.491(s,4H),3.730(s,1H),3.970(m,1H),4.978(dd,J＝12.5,5.3Hz,1H),6.749(d,J＝3.8Hz,1H),7.000(d,J＝8.3Hz,1H),7.123(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),7.340(d,J＝1.8Hz,1H),7.751(d,J＝8.5Hz,1H),8.113(s,1H),8.268(d,J＝1.7Hz,1H),8.323(s,1H),8.490(s,1H),8.574(d,J＝3.8Hz,1H),8.708(d,J＝1.6Hz,1H),8.919(d,J＝4.7Hz,1H)。
实施例3：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物3)的合成
参照实施例1制备方法，仅将实施例1步骤1中5-氰基吲哚替换为1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-腈，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.04g)。ESI-MS(m/z):814.29[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:1.232-1.316(m,2H),1.376-1.448(m,2H),1.784-1.875(m,2H),2.1110-2.169(m,1H),2.181-2.434(m,2H),2.314-2.379(m,2H),2.708-2.757(m,2H),2.729-2.938(m,2H),3.108(s,1H),3.151(d,J＝4.92Hz,1H),3.468(t,4H),3.856-3.999(m,1H),4.934(dd,J＝5.28,12.68Hz,1H),6.966(d,J＝8.28Hz,1H),7.071-7.115(m,1H),7.315(d,J＝2.26Hz,1H),7.618(s,1H),7.728(d,J＝8.45Hz,1H),7.922(s,1H),8.389(s,1H),8.507(d,J＝1.99Hz,1H),8.669(s,1H),8.968(d,J＝2.0Hz,1H),8.985(s,1H)。
实施例4:N-((1r,3r)-3-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二 唑-2-基)环丁基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物4)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,3r)-3-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丁基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(52mg)。ESI-MS(m/z):785.23[M+H]+。
实施例5:2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-N-((1r,3r)-3-(5-(4-(甲氨基)-6-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丁基)乙酰胺(化合物5)的合成
参照实施例4的制备方法，仅将实施例4中5-氰基吲哚替换为7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，得到2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-N-((1r,3r)-3-(5-(4-(甲氨基)-6-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丁基)乙酰胺(80mg)。ESI-MS(m/z):761.19[M+H]+。
实施例6:N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物6)的合成
参照实施例1制备方法，仅将实施例1步骤3中2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸替换为2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(15mg)。ESI-MS(m/z):745.24[M+H]+。
实施例7:N-((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氰基吡咯并[1,2-b]哒嗪-7-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]噁嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物7)的合成
步骤1：7-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-3-腈的合成：
在50mL反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氰基吡咯并[1,2-b]哒嗪-7-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(200mg,0.377mmol)和三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(2mL)溶液，室温反应1.5h，TLC监测反应完全；减压浓缩，残留物为7-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-3-腈三氟乙酸盐粗品，未纯化直接用于下步反应。ESI-MS(m/z):431.17[M+H]+。
步骤2：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氰基吡咯并[1,2-b]哒嗪-7-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]噁嗪-3(4H)-基)乙酰胺的合成：
将7-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)吡咯并[1,2-b]哒嗪-3-腈三氟乙酸盐粗品、2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]噁嗪-3(4H)-基)乙酸(163mg,0.45mmol)、DIPEA(244mg,1.87mmol)的DMF(5mL)溶液降温至0℃，向反应液中加入TBTU(145mg,0.45mmol)，反应5h，LC-MS监测反应完全；向反应液中加入EA(50mL)和水(50mL)，混合搅拌，分液，水相用EA(10mL×2)萃取，并用盐水(30mL)洗涤合并的有机相，减压浓缩；浓缩物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂DCM:MeOH＝50:1-20:1，减压浓缩，得N-((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氰基吡咯并[1,2-b]哒嗪-7-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]噁嗪-3(4H)-基)乙酰胺(65mg)。ESI-MS(m/z):773.28[M+H]+。
实施例8：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物8)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.04g)。ESI-MS(m/z):745.31[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.482-1.520(m 3H),1.650-1.710(m,3H),1.919(d,J＝10.8Hz,2H),2.190(d,J＝12Hz,2H),2.596(s,3H),2.670-2.692(m, 2H),2.985(s,2H),3.096-3.104(m,3H),3.668-3.710(m,4H),3.819(s,3H),6.945(d,J＝8.4Hz,2H),7.156(d,J＝8.4Hz,2H),7.651-7.684(m,1H),7.731-7.748(m,1H),8.229(s,1H),8.560(s,2H),8.667(s,1H),8.736-8.743(m,1H),8.839(s,1H),10.259(s,1H)。
实施例9：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物9)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.06g)。ESI-MS(m/z):747.32[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.465-1.522(m3H),1.643-1.682(m,3H),1.922(d,J＝9.6Hz,2H),2.001(s,1H),2.181(d,J＝10.8Hz,2H),2.606(s,3H),2.683-2.704(m,2H),2.994(s,2H),3.014-3.022(m,3H),3.168-3.192(m,5H),3.702-3.723(m,3H),4.334-4.362(m,2H),6.985(d,J＝8.4Hz,2H),7.169(d,J＝8.4Hz,2H),7.663(d,J＝8.4Hz,1H),7.787(s,1H),8.131(s,1H),8.444-8.480(m,2H),8.567(s,1H),10.271(s,1H)。
实施例10：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉)-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物10)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉)-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.05g)。ESI-MS(m/z):815.31[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.478-1.518(m 2H),1.639-1.677(m,2H),1.913-1.920(m,2H),2.000-2.041(m,2H),2.170-2.189(m,2H),2.516-2.605(m,5H),2.874-2.897(m,1H),3.007-3.015(m,5H),3.139-3.168(m,3H),3.506(s,4H),3.702-3.715(m,1H),4.316-4.345(m,2H),5.070-5.101(m,1H),7.273-7.287(m,1H),7.366(s,1H),7.689-7.703(m,2H),7.861(s,1H),8.103(s,1H),8.414(s,1H),8.462(d,J＝4.8Hz,1H),8.548(s,1H),11.091(s,1H)。
实施例11：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物11)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(5-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.03g)。ESI-MS(m/z):746.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.745-1.536(m 3H),1.665-1.724(m,3H),1.920-1.943(m,2H),2.196-2.215(m,2H),2.558(s,3H),2.702-2.724(m,2H),2.995(s,2H),3.111-3.119(m,3H),3.543(s,4H),3.706-3.728(m,3H),6.875(d,J＝8.4Hz,1H),6.920-6.926(m,1H),7.517-7.536(m,1H),7.693(d,J＝8.4Hz,1H),8.083-8.087(m,1H),8.244(s,1H),8.573-8.577(m,2H),8.693-8.695(m,1H),8.752-8.759(m,1H),8.855-8.857(m,1H),10.359(s,1H)。
实施例12：1-(5-(5-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物12)的合成
参照实施例1制备方法，得到1-(5-(5-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.02g)。ESI-MS(m/z):813.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.163-1.187(m 1H),1.989-2.015(m,2H),2.544-2.597(m,7H),2.760(s,2H),2.859-2.925(m,1H),2.998-3.048(m,4H),3.125-3.165(m,2H),3.449-3.457(m,3H),3.875-3.941(m,2H),4.014-4.047(m,2H),4.028(s,1H),4.314-4.354(m,3H),5.052-5.089(m,1H),7.241-7.266(m,1H),7.346(d,J＝6.0Hz,1H),7.666-7.692(m,1H),7.869(s,1H),8.108-8.111(m,1H),8.145-8.443(m,2H),8.549(s,1H),11.075(s,1H)。
实施例13：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物13)的合成
参照实施例1制备方法，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.06g)。ESI-MS(m/z):831.29[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.254(s,1H),1.480-1.516(m,2H),1.655-1.693(m,2H),1.922-1.940(m,2H),2.032-2.050(m,1H),2.184-2.204(m,2H),2.614-2.641(m,5H),2.867-2.891(m,1H),3.013(s,2H),3.096-3.104(m,3H),3.175-3.319(m,5H),3.695-3.720(m,1H),5.096-5.127(m,1H),6.902-6.909(m,1H),7.480(d,J＝7.2Hz,1H),7.687(d,J＝7.2Hz,1H),7.737(d,J＝12.6Hz,1H),8.223(s,1H),8.552-8.561(m,2H),8.672-8.676(m,1H),8.732-8.740 (m,1H),8.835-8.838(m,1H),11.110(s,1H)。
实施例14：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-6-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-甲酰胺(化合物14)的合成
步骤1：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(120mg，0.23mmol)、二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(5mL)。反应液在25℃下反应3h。LC-MS监控反应完毕后，减压浓缩至干，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(120mg)。ESI-MS(m/z):431.17[M+H]+。
步骤2：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-6-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-甲酰胺的合成
在50mL的反应瓶中依次加入1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈粗品(100mg)、N,N-二甲基甲酰胺(10mL)、三乙胺(116mg，1.15mmol)和CDI(40.5mg，0.25mmol)，反应液在25℃下反应1h。随后加入4-((2-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(99.1mg，0.25mmol)，将该反应液继续在25℃下反应2h。LC-MS监控反应完毕后，加入水和乙酸乙酯进行萃取分液，收集有机相，有机相减压浓缩溶剂至干，浓缩物通过柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1，v/v)，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-6-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-2-甲酰胺(50mg)。ESI-MS(m/z):853.33[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:0.874-0.886(m,3H),1.385-1.406(m,3H),1.632-1.671(m,5H),1.814-1.828(m,2H),1.847-1.886(m,2H),1.903-2.164(m,1H),2.177-2.189(m,3H),2.250-2.283(m,2H),2.875-2.901(m,1H),3.110-3.118(m,3H),3.686(s,2H),3.792(s,2H),4.148-4.156(m,1H),5.096-5.127(m,1H),6.080(d,J＝8.4Hz,1H),6.505(s,1H),6.923-6.929(m,1H),7.037(d,J＝7.2Hz,1H),7.089(d,J＝9.6Hz,1H),7.586-7.612(m,1H),7.691-7.710(m,1H),8.247(s,1H),8.573-8.579(m,1H),8.696(s,1H),8.858(s,1H),8.862(s,1H),11.105(s,1H)。
实施例15：N-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4)-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物15)的合成
参照实施例1制备方法，仅将实施例1步骤3中1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)5-氰基吲哚变为1-(5-(5-(4-氨基哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈，得到N-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4)-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(14mg)。ESI-MS(m/z):814.30[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.09(s,1H),8.85(d,J＝1.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.8Hz,1H),8.63(d,J＝4.7Hz,1H),8.55(d,J＝3.8Hz,1H),8.37(s,1H),8.17(s,1H),7.83(s,1H),7.74–7.65(m,2H),7.37(s,1H),7.28(s,1H),6.91(d,J＝3.8Hz,1H),5.08(dd,J＝12.7,5.1Hz,1H),4.17–4.12(m,1H),3.97(s,1H),3.92(d,J＝13.1Hz,2H),3.49(s,3H),3.07(t,J＝11.8Hz,3H),3.02(s,2H),2.88(dd,J＝18.7,7.2Hz,1H),2.63–2.56(m,4H),2.02(s,1H),1.86(s,2H),1.69–1.54(m,4H)。
实施例16：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-甲酰胺(化合物16)的合成
参照实施例2制备方法，仅将2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸变为1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羧酸，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-甲酰胺(60mg)。ESI-MS(m/z):798.30[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.79(s,1H),8.69(s,1H),8.63(s,1H),8.53(d,J＝3.2Hz,1H),8.48(s,1H),8.17(s,1H),7.80(d,J＝7.3Hz,1H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,2H),6.87(d,J＝3.3Hz,1H),5.10(dd,J＝12.5,5.3Hz,1H),3.72(d,J＝9.8Hz,2H),3.64(d,J＝7.1Hz,1H),3.17(t,J＝11.4Hz,1H),3.08(d,J＝4.2Hz,3H),2.89(s,3H),2.62–2.52(m,2H),2.31(s,1H),2.18(d,J＝10.8Hz,2H),2.07–1.98(m,1H),1.93(d,J＝10.2Hz,2H),1.79(s,4H),1.65(dd,J＝23.3,11.5Hz,2H),1.40(dd,J＝22.7,11.2Hz,2H),1.22(s,1H)。
实施例17：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺(化合物17)的合成
参照实施例2制备方法，仅将2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸变为1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-羧酸，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺(40mg)。ESI-MS(m/z):798.30[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.08(s,1H),8.84(s,1H),8.74(s,1H),8.67(s,1H),8.55(s,2H),8.22(s,1H),7.81(d,J＝7.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),6.91(s,1H),5.12–5.01(m,1H),4.08(d,J＝11.5Hz,2H),3.61(s,1H),3.19(s,1H),3.10(d,J＝3.6Hz,3H),3.00(t,J＝11.6Hz,2H), 2.88(d,J＝15.7Hz,1H),2.63–2.54(m,2H),2.42(s,2H),2.18(d,J＝11.1Hz,2H),2.02(s,1H),1.92(d,J＝10.0Hz,2H),1.76(d,J＝10.7Hz,2H),1.71–1.56(m,4H),1.39(d,J＝11.7Hz,2H)。
实施例18：3-(5-(5-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基吡唑[1,5-a]嘧啶-6-腈(化合物47)的合成
步骤1：叔丁基4-(4-(5-(6-(6-氰基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-(异丙胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-腈(200mg,0.336mmol)、中间体制备例25(167mg，0.37mmol)、四(三苯基膦)钯(78mg，0.067mmol)、醋酸钾(99mg，1.01mmol)，二氧六环(10mL)和水(2mL)，120℃反应6h。反应完毕后，加入水和乙酸乙酯萃取，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物通过硅胶柱层析进行纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到叔丁基4-(4-(5-(6-(6-氰基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-(异丙胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯(38mg,0.058mmol)。ESI-MS(m/z):658.30[M+H]+。
步骤2：3-(4-(异丙基氨基)-5-(5-(4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-腈的合成
在10mL的反应瓶中加入叔丁基4-(4-(5-(6-(6-氰基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-(异丙胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-羧酸酯(38mg，0.058mmol)，后加入二氯甲烷(3mL)使其溶解，搅拌下加入三氟乙酸(0.3mL)，室温下搅拌1h。反应完毕后，旋除溶剂和三氟乙酸，得3-(4-(异丙基氨基)-5-(5-(4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-腈(32mg)，ESI-MS(m/z):558.24[M+H]+
步骤3：3-(5-(5-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-腈的合成
在25mL的反应瓶中加入3-(4-(异丙基氨基)-5-(5-(4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)吡唑[1,5-a]嘧啶-6-腈(32mg，0.058mmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(24mg，0.086mmol),N,N-二异丙基乙胺(34mg，0.258mmol)和二甲基亚砜(5mL)。将反应液在90℃下反应3h。LCMS监控反应完毕，反应液冷却至0℃，加入H2O(15mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯萃取三次，并用水和饱和氯化钠水溶液洗3次，取有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，浓缩柱层析色谱(二氯甲烷：甲醇＝15：1)分离，得到3-(5-(5-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-腈(13mg)。ESI-MS(m/z):814.29[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:1.43(d,J＝6.30Hz,6H),1.92(d,J＝10.92Hz,4H),2.15(d,J＝9.84Hz,4H),3.09(dd,J＝20.78,10.69Hz,3H),3.63(s,3H),3.76(s,4H),3.87(s,4H),4.02(dd,J＝12.86,5.74Hz,2H),7.22(d,J＝8.22Hz,1H),7.42(d,J＝8.22Hz,1H),7.60-7.63(m,1H),7.84(s,1H),7.96(s,1H),8.49(s,1H),8.74(d,J＝1.95Hz,1H),9.06(s,1H),9.12(d,J＝1.98Hz,1H)。
实施例19：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酰胺(化合物49)的合成
步骤1：3-(3-甲基-2-氧代-4-(3-(哌啶-4-基氧基)丙-1-炔-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮合成
将叔丁基4-(3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(500mg，1.0mmol)、溶于二氯甲烷(10mL)，滴入三氟乙酸(2mL)。反应液在25℃下反应3h。LCMS监控反应结束，浓缩旋干，得到粗品3-(3-甲基-2-氧代-4-(3-(哌啶-4-基氧基)丙-1-炔-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(1g，粗品)。ESI-MS(m/z):397.2[M+H]+。
步骤2：叔丁基2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸酯合成
将3-(3-甲基-2-氧代-4-(3-(哌啶-4-基氧基)丙-1-炔-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(1g，粗品)溶于乙腈(20mL)中，加入溴乙酸叔丁酯(236mg,12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(455mg，3.5mmol)。反应液在70℃下反应3h。LCMS检测反应结束后，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM:MeOH＝30:1)，得到叔丁基2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸酯(450mg)。ESI-MS(m/z):511.2[M+H]+。
步骤3：2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸合成
将叔丁基2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸酯(180mg)溶于二氯甲烷(6mL)，滴入三氟乙酸(2mL)。反应液在25℃下反应3h。LCMS监控反应结束，浓缩旋干，得到粗品2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸(400mg，粗品)。ESI-MS(m/z):455.2[M+H]+。
步骤4：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酰胺合成
将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(300mg，粗品)和2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酸(400mg，粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(174mg，0.46mmol)，滴入N,N-二异丙基乙胺调节pH值为7-8。室温下反应2h。LCMS检测反应结束，向反应体系中加入水(30mL)淬灭反应，室温下搅拌0.5h，抽滤，滤饼经过柱层析纯化(DCM:MeOH＝15:1)得产物N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-基)乙酰胺(40mg)。ESI-MS(m/z):867.8[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),8.86(s,1H),8.76(d,J＝4.5 Hz,1H),8.70(s,1H),8.59–8.57(m,1H),8.25(s,1H),7.74–7.67(m,1H),7.59(s,1H),7.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.13(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(t,J＝7.7Hz,1H),6.93(d,J＝3.8Hz,1H),5.41(dd,J＝12.8,5.1Hz,1H),4.50(s,2H),4.18–4.12(m,1H),3.66(s,2H),3.12(d,J＝4.7Hz,3H),2.89(d,J＝12.7Hz,3H),2.72(d,J＝12.9Hz,3H),2.64(d,J＝17.7Hz,2H),2.24(s,1H),2.20(d,J＝11.0Hz,2H),2.07–1.99(m,2H),1.92(s,3H),1.73–1.62(m,4H),1.53–1.45(m,3H),1.25(s,2H).
实施例20：1-(5-(5-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物50)的合成
参照实施例12的制备方法，仅将2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮替换为5-氰基-7-氮杂吲哚和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮，得到1-(5-(5-(2-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.04g)。ESI-MS(m/z):829.27[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:2.041-2.051(m 1H),2.559-2.619(m,8H),2.770-2.816(m,2H),2.870-2.921(m,1H),3.051-3.105(m,5H),3.263-3.279(m,4H),3.899(s,1H),3.957-3.985(m,1H),4.038(s,1H),4.233(s,1H),4.377(s,1H),5.097-5.136(m,1H),6.901(d,J＝3.6Hz,1H),7.463-7.491(m,1H),7.714-7.744(m,1H),8.218(s,1H),8.528-8.557(m,2H),8.665-8.717(m,2H),8.830(s,1H),11.114(s,1H)。
实施例21：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物51)的合成
参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中5-氰基吲哚替换为5-氰基-7-氮杂吲哚，步骤3中的2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品替换为2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)乙酸粗品，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)乙酰胺(53mg)。ESI-MS(m/z):841.32[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.16(s,1H),8.85(d,J＝1.8Hz,1H),8.75(d,J＝4.6Hz,1H),8.69(d,J＝1.8Hz,1H),8.57(s,2H),8.24(s,1H),8.01(d,J＝7.6Hz,1H),7.93–7.86(m,2H),7.70(s,1H),6.92(d,J＝3.8Hz,1H),5.20(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.21(d,J＝11.9Hz,1H),3.11(d,J＝4.7Hz,3H),2.99(s,2H),2.95–2.87(m,1H),2.63(d,J＝17.7Hz,1H),2.55(dd,J＝13.3,3.9Hz,2H),2.45(s,2H),2.20(d,J＝12.2Hz,2H),2.12–2.05(m,1H),1.92(d,J＝10.2Hz,2H),1.68(dd,J＝22.8,12.4Hz,2H),1.48(dd,J＝22.4,11.9Hz,2H),1.24(s,1H),1.19(t,J＝7.3Hz,2H)。
实施例22：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基) 乙酰胺(化合物52)的合成
参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中5-氰基吲哚替换为5-氰基-7-氮杂吲哚，步骤3中的2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品替换为2-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸粗品，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰胺(40mg)。ESI-MS(m/z):853.33[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.86(d,J＝1.9Hz,1H),8.75(d,J＝4.6Hz,1H),8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.57(d,J＝4.7Hz,1H),8.24(s,1H),7.73(dd,J＝5.6,3.3Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.35(s,2H),7.27(d,J＝8.7Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.07(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.18–4.10(m,1H),3.76–3.54(m,2H),3.11(d,J＝4.9Hz,3H),2.97–2.83(m,2H),2.68–2.55(m,2H),2.20(d,J＝11.4Hz,3H),2.00(dd,J＝27.3,22.4Hz,2H),1.91(d,J＝11.7Hz,2H),1.80(s,3H),1.68(dd,J＝23.3,12.8Hz,3H),1.54–1.40(m,3H),1.35(d,J＝7.6Hz,1H),1.30–1.26(m,2H),1.23(d,J＝10.3Hz,2H)。
实施例23：1-(5-(5-(1-(2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物53)的合成
在25mL的反应瓶中加入中间体制备例2(0.08g，0.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.07g，0.2mmol)(0.10g，0.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.08g，0.6mmol)。反应半小时后加入中间体制备例9(0.08g，0.2mmol)。反应液在25℃下反应3h。LCMS检测反应结束，相反应液中加入水并用EA萃取进行分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到1-(5-(5-(1-(2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(0.04g,0.1mmol)。ESI-MS(m/z):799.31[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.822-1.985(m,2H),2.044-2.216(m,2H),2.240-2.341(m,2H),2.670-2.766(m,4H),2.799-2.962(m,4H),3.178(d,J＝4.75Hz,3H),3.239-3.325(m,2H),3.356-3.420(m,2H),3.422-3.501(m,4H),4.673(d,J＝14.38Hz,1H),4.938(dd,J＝5.55Hz,J＝12.69Hz,1H),6.731(d,J＝3.80Hz,1H),7.075(d,J＝8.56Hz,1H),7.296(d,J＝2.32Hz,1H),7.704(d,J＝8.51Hz,1H),7.927(s,1H),8.249(d,J＝1.98Hz,1H),8.322(s,1H),8.467(s,1H),8.547(d,J＝3.88Hz, 1H),8.693(d,J＝1.97Hz,1H),8.860(d,J＝5.00Hz,1H)。
实施例24：N-(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-甲酰胺(化合物54)的合成
将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-5-腈(50mg，0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入三乙胺调节pH为7-8，加入N,N'-羰基二咪唑(31mg,0.19mmol)，室温下反应1h，随后加入3-(3-甲基-2-氧代-4-(3-(哌啶-4-基氧基)丙-1-炔-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(46mg，0.12mmol)，室温下反应3h。LCMS监测反应结束，加水(10mL)淬灭，室温下搅拌0.5h，抽滤，滤饼进行TLC纯化，得到N-(1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-4-((3-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)哌啶-1-甲酰胺(23mg)。ESI-MS(m/z):853.7[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),8.86(d,J＝1.8Hz,1H),8.76(d,J＝4.7Hz,1H),8.70(d,J＝1.9Hz,1H),8.58(d,J＝5.3Hz,1H),8.25(s,1H),7.74–7.68(m,1H),7.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.05(t,J＝7.9Hz,1H),6.93(d,J＝3.9Hz,1H),6.30(d,J＝7.5Hz,1H),5.42(dd,J＝12.9,5.2Hz,1H),4.52(s,2H),4.14(dd,J＝14.6,8.4Hz,1H),3.76–3.70(m,2H),3.66(s,2H),3.53(d,J＝7.4Hz,1H),3.16(d,J＝12.0Hz,1H),3.12(d,J＝4.9Hz,2H),3.01–2.95(m,2H),2.94–2.86(m,1H),2.72(dt,J＝17.5,10.9Hz,1H),2.64(d,J＝19.7Hz,1H),2.19(d,J＝11.5Hz,2H),2.06–2.01(m,1H),1.94(d,J＝10.3Hz,2H),1.86(d,J＝9.7Hz,2H),1.65(dd,J＝23.5,12.1Hz,2H),1.47–1.34(m,4H),1.25(s,2H).
实施例25:1-(5-(5-(1-(2-(4-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物60)的合成
步骤1：1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中,将叔丁基4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(150mg)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)。室温反应2h，LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩溶剂至干得到粗品1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(150mg)。ESI-MS(m/z):417.15[M+H]+。
步骤2：叔丁基4-(2-(4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在25mL的反应瓶中,将1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-5-腈(150mg)和2-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)乙酸(57mg)溶于DMF(3mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.1mL)和HATU(110mg)。室温反应2h,LCMS检测反应结束后,将反应液倒入水中析出固体过滤收集固体，烘干得到叔丁基4-(2-(4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯(100mg)。ESI-MS(m/z):643.28[M+H]+。
步骤3：1-(4-(甲胺基)-5-(5-(1-(2-(哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中,将叔丁基4-(2-(4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯(100mg)溶于甲酸(2mL)中，室温反应2h，LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩溶剂至干得到粗品1-(4-(甲胺基)-5-(5-(1-(2-(哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(100mg)。ESI-MS(m/z):543.23[M+H]+。
步骤4：1-(5-(5-(1-(2-(4-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中,将1-(4-(甲胺基)-5-(5-(1-(2-(哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(100mg)和1-(2,6-二氧哌啶-3-基)-2-氧-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-碳醛(48mg)溶于NMP(2mL)中，室温反应4天，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(100mg)，继续反应1h，LCMS检测反应结束后，将反应液倒入水中，过滤收集固体，烘干进行TLC制备(DCM:MeOH＝10:1),得到1-(5-(5-(1-(2-(4-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(13mg)。ESI-MS(m/z):835.32[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),8.83(d,J＝1.8Hz,1H),8.73(d,J＝4.8Hz,1H),8.67(d,J＝1.8Hz,1H),8.60–8.54(m,2H),8.51(d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.09(d,J＝6.9Hz,1H),7.88–7.79(m,1H),7.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.08(d,J＝7.2Hz,1H),6.91(d,J＝3.8Hz,1H),5.45(dd,J＝12.6,4.8Hz,1H),4.41(d,J＝12.5Hz,1H),4.17(d,J＝12.3Hz,1H),3.90–3.81(m,2H),3.58–3.49(m,1H),3.45–3.36(m,3H),3.28(d,J＝13.3Hz,1H),3.24–3.16(m,1H),3.11(d,J＝4.8Hz,3H),3.04(d,J＝13.3Hz,1H),3.00–2.90(m,1H),2.86–2.71(m,2H),2.66(d,J＝16.8Hz,1H),2.48–2.29(m,5H),2.21–2.05(m,3H),1.87–1.76(m,1H),1.66–1.54(m,1H).
实施例26：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物61)的合成
步骤1：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在50mL的反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(50mg，0.09mmol)、三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(5mL)。反应液在25℃下反应3h。LCMS监控反应结束，浓缩旋干，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.1g，粗品)。 ESI-MS(m/z):431.2[M+H]+。
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(100mg，粗品)溶于二氯甲烷(2mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入三乙胺调节pH到7-8。室温下搅拌5min，随后加入冰醋酸调pH到4-5，将1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(35mg，0.09mmol)加入到反应体系中，室温下搅拌30min，随后再加入三乙酰氧基硼氢化钠(40mg,1.8mmol)，室温下度反应2h，LCMS监控反应结束。向体系中加入水(1mL)淬灭。浓缩旋干，粗品经pre-TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(22mg)。ESI-MS(m/z):784.3[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.86(s,1H),8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.57(s,2H),8.24(s,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(s,1H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),6.92(d,J＝3.6Hz,1H),5.08(dd,J＝12.6,5.4Hz,1H),4.07(d,J＝11.8Hz,2H),3.19(s,2H),3.11(d,J＝4.5Hz,3H),2.98(t,J＝11.4Hz,2H),2.93–2.85(m,1H),2.59(d,J＝33.8Hz,3H),2.19(d,J＝11.8Hz,2H),2.06(s,3H),1.84(d,J＝12.3Hz,2H),1.73(s,1H),1.62(d,J＝11.7Hz,2H),1.23(d,J＝18.9Hz,6H).
实施例27：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物65)的合成
参照实施例26制备方法，仅将步骤2中1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(35mg，0.09mmol)变为1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(37mg，0.09mmol)，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(20mg)。ESI-MS(m/z):802.3[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.84(s,1H),8.75(s,1H),8.68(s,1H),8.56(d,J＝4.0Hz,2H),8.23(s,1H),7.71(d,J＝11.1Hz,1H),7.46(d,J＝6.8Hz,1H),6.92(s,1H),5.15–5.08(m,1H),3.63(d,J＝10.6Hz,2H),3.19(s,1H),3.11(d,J＝3.7Hz,3H),2.88(d,J＝11.2Hz,3H),2.61(d,J＝18.6Hz,4H),2.19(d,J＝11.0Hz,2H),2.06(s,3H),1.87(d,J＝10.4Hz,2H),1.62(d,J＝11.7Hz,3H),1.30(dd,J＝33.7,22.3Hz,5H).
实施例28：1-(5-(5-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物68)的合成
参照实施例1制备方法，将步骤1中的叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-氯-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯5-氰基吲哚替换为叔丁基3-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯和5-氰基-7-氮杂吲哚得到1-(5-(5-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡 咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(58mg)。ESI-MS(m/z):771.83[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ：11.08(s,1H),8.86(d,J＝1.9Hz,1H),8.73(d,J＝4.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.26(s,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.37(s,1H),7.27(d,J＝8.6Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.08(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.78(t,J＝8.7Hz,1H),4.53(dd,J＝8.9,5.7Hz,1H),4.50–4.45(m,1H),4.42(t,J＝9.1Hz,1H),4.21–4.15(m,1H),3.49(s,3H),3.12(d,J＝4.9Hz,4H),2.93–2.84(m,1H),2.60(d,J＝16.7Hz,4H),2.06–1.97(m,1H),1.31–1.18(m,3H),0.91–0.81(m,1H)。
实施例29：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-甲酰胺(化合物69)的合成
参照实施例25制备方法，将步骤1中的叔丁基4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯替换为1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-5-腈，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-((1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢苯并[cd]吲哚-6-基)甲基)哌啶-4-甲酰胺(40mg)。ESI-MS(m/z):834.3[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.14(s,1H),8.82(s,1H),8.72(s,1H),8.66(s,1H),8.54(dd,J＝11.9,7.8Hz,2H),8.21(s,1H),8.11(d,J＝6.7Hz,1H),7.87(t,J＝7.2Hz,1H),7.72(d,J＝6.4Hz,1H),7.39(s,1H),7.08(d,J＝6.2Hz,1H),6.90(d,J＝3.4Hz,1H),5.46(d,J＝7.5Hz,1H),3.84(s,2H),3.60(s,1H),3.16(d,J＝11.7Hz,1H),3.09(d,J＝4.4Hz,3H),2.95(d,J＝18.7Hz,3H),2.81–2.73(m,1H),2.70–2.62(m,1H),2.22–2.06(m,4H),1.99(d,J＝7.2Hz,2H),1.90(d,J＝10.3Hz,2H),1.69–1.54(m,5H),1.41–1.31(m,2H),1.22(d,J＝22.7Hz,1H).
实施例30：1-(5-(5-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物70)的合成
步骤1：2-氯-4-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶的合成
将2-氯-4-氟-吡啶(1.72g，13.08mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，向反应体系中分别加入双联频哪醇硼酸酯(4.98g，19.62mmol)、甲氧基(环辛二烯)合铱二聚体(472.8mg，0.65mmol)和4,4'-二叔丁基-2,2'-二吡啶(351.1mg，1.31mmol)，氮气置换三次，升温至65℃反应16小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)检测显示反应完毕。将反应液减压浓缩至干，向浓缩物中加入水(20mL)，乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用柱层析(PE：EA＝3:1)纯化得到产物2-氯-4-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(2.45g，72.7％)。
步骤2：叔丁基4-(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将1-Boc-4-(哌啶-4-基)-哌嗪(4.00g，14.85mmol)溶于二氧六环(50mL)中，随后加入二异丙基乙基胺(5.76g，44.55mmol)和2,5-二溴-1,3,4-噻二唑(3.62g，14.85mmol)。反应体系在80℃反应12小时。LCMS显示大部分原料消耗，产物生成。将体系降温至室温，过滤后将滤液加入200mL水中，用乙酸乙酯(100mL x 3)进行萃取，有机相经硫酸钠干燥后减压浓缩至干。浓缩物经柱层析(PE：EA＝10：1-0：1)纯化得到产物叔丁基4-(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(4.00g，62.3％)。
步骤3：叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基4-(1-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(200.0mg，0.46mmol)和2-氯-4-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(177.6mg，0.69mmol)加入到微波管，依次加入碳酸铯(449.6mg，1.38mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(53.2mg，0.09mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(10.4mg，0.05mmol)。氮气鼓泡1分钟，在微波下120℃反应1小时。LCMS显示反应完成。反应降至室温倒入15mL水中，用乙酸乙酯(10mL x 3)进行萃取，有机相经硫酸钠干燥后减压浓缩至干。浓缩物经制备薄层板(乙酸乙酯)纯化得到叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(70.0mg，31.5％)。
步骤4：叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(210.0mg，0.43mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(2.00mL)，加入二异丙基乙基胺(168.6mg，1.30mmol)和甲胺盐酸盐(44.0mg，0.65mmol)。升至60℃反应12小时。LCMS显示反应完毕。反应液倒入水(20mL)中，经乙酸乙酯(10mL x 2)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用薄层制备板(乙酸乙酯)纯化得到叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(100.0mg，47.0％)。
步骤5：叔丁基4-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基4-(1-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(155.0mg，0.31mmol)和5-氰基-7-氮杂吲哚(67.4mg，0.47mmol)溶到二氧六环(8mL)里，依次加入碳酸铯(306.7mg，0.94mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(72.6mg，0.13mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(114.9mg，0.13mmol)。将反应体系升至100℃在氮气保护下反应16小时。LCMS显示反应完成。反应液降至室温后倒入水中(30mL)，用乙酸乙酯(15mL x 2)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用薄层制备板(PE：EA＝1：1)纯化得到叔丁基4-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(80.0mg，42.9％)。
步骤6：1-(4-(甲氨基)-5-(5-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将叔丁基4-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(100mg，0.17mmol)溶到二氯甲烷(2mL)里，加入三氟乙酸(19.0mg，0.17mmol)。反应体系在室温反应1小时。LCMS显示反应完毕。将反应液减压浓缩至干得到1-(4-(甲氨基)-5-(5-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(80.0mg， 粗品)，直接用于下一步反应。
步骤7：1-(5-(5-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将1-(4-(甲氨基)-5-(5-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(80.0mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入二异丙基乙基胺(69.08mg，0.53mmol)，搅拌30分钟后加入到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羧酸(40.39mg，0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和二异丙基乙基胺(69.1mg，0.53mmol)及HATU(60.97mg，0.16mmol)的溶液里。加完在20℃反应1小时。LCMS检测反应结束，将反应液倒入水中(20mL)，用二氯甲烷(10mL x 5)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干。浓缩物用制备薄层板纯化得到1-(5-(5-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-羰基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(10.0mg，9.8％)。LC-MS(m/z):785.4[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.17(s，1H)，8.84(s，1H)，8.69(s，1H)，8.61(d，J＝3.9Hz，1H)，8.54(d，J＝3.5Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.17(s，1H)，8.04(d，J＝7.7Hz，2H)，7.94(d，J＝7.5Hz，1H)，6.91(d，J＝3.5Hz，1H)，5.20(dd，J＝12.8，5.0Hz，1H)，4.05(d，J＝10.0Hz，2H)，3.30–3.20(m，4H)，3.08(m，5H)，2.98–2.80(m，2H)，2.62(d，J＝18.1Hz，4H)，2.09(d，J＝6.7Hz，4H)，1.76(m，3H)。
实施例31：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺的合成(化合物71)
步骤1：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成：
在50mL反应瓶中加入叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(0.17g,0.32mmol)和三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(2mL)溶液，室温反应1.5h，TLC监测反应完全；减压浓缩，残留物为1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈粗品，不经纯化直接用于下步反应。ESI-MS(m/z):431.17[M+H]+。
步骤2：叔丁基4-(2-(((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在50mL的反应瓶中加入2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙酸(0.10g，0.40mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.16g，0.42mmol) 和N,N-二异丙基乙胺(0.13g，1.00mmol)。反应半小时后加入1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(138mg)。反应液在25℃下反应3h。LC-MS监测反应完全，加水搅拌10分钟后析出。过滤得白色滤饼，滤饼用薄层色谱制备板进行分离(DCM：MeOH＝20:1)纯化得叔丁基4-(2-(((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯(50mg)。ESI-MS(m/z):657.81[M+H]+
步骤3：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺的合成：
在50mL反应瓶中叔丁基4-(2-(((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸酯(50g,0.08mmol)和三氟乙酸(2mL)的二氯甲烷(2mL)溶液，室温反应1.5h，TLC监测反应完全；减压浓缩，残留物为N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺粗品(45mg)，不经纯化直接用于下步反应。ESI-MS(m/z):556.70[M+H]+。
步骤4：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺的合成
在50mL的反应瓶中加入2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)乙酸(24mg，0.08mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(40mg，0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(51mg，0.39mmol)。反应半小时后加入N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺粗品(45mg)。反应液在25℃下反应3h。LC-MS监测反应完全，加入水进行萃取分液。收集有机相，浓缩后用薄层色谱制备板进行分离(DCM：MeOH＝15:1)，浓缩得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺(10mg)。ESI-MS(m/z):841.33[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.00(s,1H),8.86(d,J＝1.9Hz,1H),8.75(d,J＝4.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.58(s,2H),8.24(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H),7.47(s,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.12(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.45(d,J＝17.2Hz,1H),4.32(d,J＝17.2Hz,1H),3.88(s,2H),3.69(d,J＝8.0Hz,2H),3.11(d,J＝4.9Hz,3H),2.98–2.89(m,3H),2.20(d,J＝11.5Hz,2H),2.06–1.97(m,2H),1.91(d,J＝11.4Hz,2H),1.68(dd,J＝23.8,11.2Hz,3H),1.48(dd,J＝24.1,12.2Hz,3H),1.41–1.29(m,3H),1.26(d,J＝15.4Hz,4H)。
实施例32：1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物74)的合成
步骤1：叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸的合成
将2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(500.0mg，2.21mmol)溶于二氧六环(5mL)中，向上述体系中分别加入DIEA(856.9mg，6.63mmol)和2，5-二溴-1，3，4-噻二唑(539.0mg，2.21mmol)，然后于25℃反应16小时。TLC(PE：EA＝1：1)检测反应完毕。将反应液倒入水(25mL)中，用乙酸乙酯(25mL x 3)萃取。有机相合并后经水洗，硫酸钠干燥，浓缩得粗品，再经柱层析纯化(PE：EA＝3：1)得叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸(0.75g，1.93mmol，87.20％)。
步骤2：叔丁基2-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
将叔丁基2-(5-溴-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸(200.0mg，0.51mmol)，2-氯-4-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(264.6mg，1.03mmol)，醋酸钯(118.7mg，0.10mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(57.9mg，0.10mmol)和碳酸钾(213.0mg，1.54mmol)溶于二氧六环(1.2mL)和水(0.2mL)的混合溶剂中，反应液在100℃氮气氛围下搅拌反应6小时。将反应液倒入水中(20mL)，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，有机相合并后经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩至干。浓缩物经制备板(PE：EA＝1：1)纯化得到叔丁基2-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(60.0mg，0.14mmol，26.74％)。
步骤3：叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
将叔丁基2-(5-(6-氯-4-氟吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(20.0mg，0.05mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(1mL)，然后加入一甲胺盐酸盐(4.6mg，0.07mmol)和N，N-二异丙基乙胺(17.6mg，0.14mmol)。氮气置换三次，然后将反应液加热到60℃并且搅拌4小时。TLC(DCM：MeOH＝20:1)监测反应完全。将反应液冷却室温后倒入水中(5mL)，继续搅拌15分钟，过滤，滤饼用水(5mL)淋洗3次，然后石油醚(10mL)淋洗，收集固体，真空干燥，得到叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(11.3mg，0.03mmol，50.11％)。
步骤4：叔丁基2-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
将叔丁基2-(5-(6-氯-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(129.0mg，0.29mmol)和5-氰基-7-氮杂吲哚(45.0mg，0.31mmol)加入二氧六环(10mL)中， 继续加入碳酸铯(279.6mg，0.86mmol)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(66.2mg，0.11mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(104.8mg，0.11mmol)。将反应液升温至100℃并且在氮气氛围下搅拌16小时，LCMS监测反应完全，并且有产物生成。向反应液中加入水(10mL)，过滤，滤饼用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合并有机相用饱和盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤后，滤液减压浓缩至干，浓缩物经薄层制备板(PE：EA＝1:1)纯化得到叔丁基2-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(43.5mg，0.08mmol，27.3％)。
步骤5：1-(5-(5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将原料叔丁基2-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯(40.0mg，0.07mmol)溶解到二氯甲烷(1.5mL)中，降温至零度，加入三氟乙酸(0.3mL)。然后反应液28度下搅拌3小时，TLC(DCM：MeOH＝5:1)检测反应完全。将反应液减压浓缩得到1-(5-(5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(40.0mg，粗品)。
步骤6：叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
向溶有2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(4.50g，16.29mmol)的二甲基亚砜(60mL)溶液中加入三乙胺(4.95g，48.87mmol)和N-Boc-哌嗪(3.03g，16.29mmol)，90℃搅拌16小时。LCMS检测反应结束后，反应体系冷却至室温后倒入水中，固体析出后过滤，真空干燥得到叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(6.50g，14.69mmol，90.18％)。
步骤7：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(6.00g，13.56mmol)溶于二氯甲烷(60mL)溶液中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，30mL)，于25℃搅拌反应16小时。将反应液减压浓缩后得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.10g，粗品)。
步骤8：叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.50g，16.07mmol)和溴乙酸叔丁酯(3.13g，16.07mmol)溶于乙腈(50mL)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(6.23g，48.2mmol)。反应液于70摄氏度下搅拌反应6小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示原料消失。将反应液浓缩后，经硅胶柱(二氯甲烷：甲醇＝50:1～20:1)纯化后得到叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(4.00g，8.76mmol)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(s，1H)，7.69(d，J＝8.5Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.06(d，J＝8.5Hz，1H)，4.94(dd，J＝12.0，5.2Hz，1H)，3.55–3.41(m，4H)，3.20(d，J＝9.3Hz，2H)，2.96–2.80(m，2H)，2.74(dd，J＝15.7，10.9Hz，5H)，2.19–2.06(m，J＝14.6，7.2Hz，1H)，1.48(s，9H)。
步骤9：2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
向溶有叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(90mg，0.2mmol)的DCM(2mL)中加入三氟乙酸(0.5mL)，于20℃搅拌3小时。反应体系旋干得到粗品2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(100mg，粗品)。
步骤10：1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将原料2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(40.0mg，0.1mmol)和1-(5-(5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(45.7mg，0.1mmol)加入DMF(3mL)中，搅拌条件下加入N，N-二异丙基乙胺(51.7mg，0.4mmol)。反应液搅拌30min后，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(57.0mg，0.15mmol)。反应液在室温下搅拌16小时。反应结束后将反应液液倒入水中(20mL)，然后用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，有机相合并后，水(10mL)洗有机相两次，饱和氯化钠水溶 液洗一次，硫酸钠干燥，过滤减压浓缩至干。浓缩物经薄层制备板(DCM：MeOH＝15:1)纯化得到产物1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(9.8mg，0.01mmol)。MS:m/z＝840.3[M+1]+，1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:11.09(s，1H)，8.85(s，1H)，8.69(s，1H)，8.62(m，1H)，8.54(d，J＝3.6Hz，1H)，8.38(s，1H)，8.17(s，1H)，7.71(br s，1H)，7.37(s，1H)，7.28(s，1H)，6.91(d，J＝3.6Hz，1H)，5.07(m，1H)，3.95(s，4H)，3.40-3.65(m，8H)，3.23(s，2H)，3.08(d，J＝4.8Hz，3H)，2.85-2.90(m，2H)，2.50-2.55(m，4H)，2.00-2.03(m，2H)，1.86(s，2H)，1.76(s，2H).
实施例33：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-甲酰胺(化合物78)的合成
在25mL的反应瓶中加入中间体制备例8(0.08g，0.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0℃环境下加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.10g，0.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.08g，0.6mmol)。反应半小时后加入1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.08g，0.2mmol)。反应液在25℃下反应3h。LCMS检测反应结束后，向反应体系中加入水，用EA萃取进行分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝12：1)，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-甲酰胺(0.05g,0.1mmol)。ESI-MS(m/z):822.34[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.654-1.713(m,4H),1.896-1.915(m,1H),1.972-2.021(m,2H),2.063-2.112(m,1H),2.163-2.210(m,4H),2.889-2.940(m,4H),3.093-3.108(m,3H),3.107(d,J＝4.92Hz,4H),3.171-3.210(m,2H),3.507-3.613(m,1H),4.353(d,J＝17.44Hz,1H),4.473(d,J＝17.44Hz,1H),5.124(dd,J＝5.04Hz,J＝13.30Hz,1H),6.917(d,J＝3.87Hz,1H),7.562(d,J＝7.76Hz,1H),7.686(s,1H),7.728(d,J＝7.76Hz,2H),8.236(s,1H),8.562(s,1H),8.571(s,1H),8.688(d,J＝2.01Hz,1H),8.750(d,J＝5.06Hz,1H),8.851(d,J＝2.01Hz,1H),11.001(s,1H)。
实施例34：1-(5-(5-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物80)的合成
参照实施例26的制备方法，将步骤2中的1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲 氨基)吡啶-2-基)-1H-吲哚-5-腈替换为1-(5-(5-(氮杂环丁烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈得到1-(5-(5-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(52mg)。ESI-MS(m/z):742.26[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:11.08(s,1H),8.84(d,J＝1.9Hz,1H),8.74(d,J＝4.9Hz,1H),8.68(d,J＝1.9Hz,1H),8.59(s,1H),8.57(d,J＝3.9Hz,1H),8.24(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(s,1H),7.25(s,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.07(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.05(dd,J＝14.7,7.7Hz,3H),3.65(d,J＝19.6Hz,2H),3.11(d,J＝4.9Hz,3H),2.97(s,2H),2.92–2.84(m,1H),2.59(d,J＝18.5Hz,2H),2.39(s,2H),2.00(s,2H),1.82(d,J＝11.0Hz,2H),1.64(s,1H),1.19(dd,J＝17.0,9.9Hz,3H)。
实施例35：N-((1r,4S)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((S)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物82)的合成
参照实施例1制备方法，将2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸替换为中间体制备例20，得到N-((1r,4S)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((S)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(0.04g)。ESI-MS(m/z):773.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.499(d,J＝10.8Hz,2H),1.659-1.698(m,2H),1.946-1.982(m,3H),2.193-2.210(m,2H),2.339-2.355(m,1H),2.675-2.736(m,3H),2.877(d,J＝9.6Hz,1H),2.892(d,J＝9.6Hz,1H),3.014(s,2H),3.107-3.143(m,5H),3.678-3.738(m,4H),3.897-3.928(m,1H),4.268(d,J＝9.6Hz,1H),6.710(s,1H),6.757(d,J＝7.2Hz,1H),6.874(d,J＝8.4Hz,1H),6.920(s,1H),7.772(d,J＝7.2Hz,1H),8.235(s,1H),8.565(s,2H),8.687(s,1H),8.751(s,1H),8.849(s,1H),10.261(s,1H)。
实施例36：N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物83)的合成
参照实施例35制备方法，将中间体制备例20替换为(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]噁嗪-3(4H)-基)乙酸得到N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(0.03g)。ESI-MS(m/z):773.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.497(d,J＝10.8Hz,2H),1.658-1.696(m,2H),1.946-1.982(m,3H),2.191-2.208(m,2H),2.321-2.355(m,1H),2.676-2.743(m,3H),2.868-2.952(m,2H),3.014(s,2H),3.103-3.195(m,5H),3.678-3.738(m,4H),3.897-3.928(m,1H),4.268(d,J＝9.6Hz,1H), 6.709(s,1H),6.757(d,J＝7.2Hz,1H),6.874(d,J＝8.4Hz,1H),6.909(s,1H),7.721(d,J＝7.2Hz,1H),8.226(s,1H),8.550-8.561(m,2H),8.677(s,1H),8.737(s,1H),8.839(s,1H),10.261(s,1H)。
实施例37：1-(5-(5-(1-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物84)的合成
在25mL的反应瓶中加入中间体制备例13(0.08g，0.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.06g，0.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.08g，0.6mmol)。反应半小时后加入中间体制备例9(0.06g，0.2mmol)。反应液在25℃下反应3h。加入水用EA萃取进行分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝12：1)，收集有机相，浓缩上硅胶柱分离，得到1-(5-(5-(1-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.09g,0.1mmol)。ESI-MS(m/z):881.41[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:1.455-1.653(m,4H),1.717-1.818(m,4H),2.128-2.175(m,4H),2.535-2.576(m,4H),2.577-2.651(m,2H),2.773-2.795(m,2H),2.843-2.873(m,4H),3.054(d,J＝5.23Hz,1H),3.112(d,J＝4.91Hz,3H),3.285(d,J＝5.24Hz,4H),3.521-3.595(m,1H),3.701(d,J＝11.59Hz,2H),4.473(d,J＝12.98Hz,1H),5.099(dd,J＝5.54Hz,J＝12.79Hz,1H),6.919(d,J＝3.89Hz,1H),7.318(d,J＝7.08Hz,1H),7.341(d,J＝8.44Hz,1H),7.671(t,J＝7.76Hz,1H),8.248(s,1H),8.570(d,J＝3.91Hz,1H),8.582(s,1H),8.689(d,J＝2.05Hz,1H),8.748(d,J＝5.14Hz,1H),8.851(d,J＝2.02Hz,1H),11.080(s,1H)。
实施例38:1-5-5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物87)的合成
在50mL的反应瓶中将实施例26(化合物61)(120mg)和多聚甲醛(40mg)溶于二氯甲烷(3mL)和甲醇(1mL)的混合溶液中。反应液在45℃下反应2h。然后将反应液降至室温，加入氰基硼氢化钠(29mg)继续反应1h。反应完成后浓缩进行TLC制备(DCM：MeOH＝14:1)，得到1-5-5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环 己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(42mg)。ESI-MS(m/z):798.32[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.83(d,J＝1.8Hz,1H),8.73(d,J＝4.7Hz,1H),8.67(d,J＝1.8Hz,1H),8.64–8.51(m,2H),8.22(d,J＝12.0Hz,1H),7.65(t,J＝11.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.24(d,J＝8.6Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),5.08(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.05(d,J＝12.4Hz,2H),3.27–3.06(m,4H),2.98(t,J＝11.9Hz,2H),2.93–2.80(m,1H),2.57(dd,J＝26.6,12.1Hz,2H),2.42(d,J＝30.6Hz,1H),2.27(d,J＝6.3Hz,2H),2.22(d,J＝16.6Hz,3H),2.18(t,J＝13.5Hz,2H),2.02(dd,J＝12.4,7.2Hz,1H),1.88–1.78(m,4H),1.74(s,1H),1.59(dd,J＝23.9,12.0Hz,2H),1.49–1.40(m,2H),1.16(dd,J＝34.1,9.0Hz,2H)。
实施例39：N-((1r,4S)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((S)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物88)的合成
参照实施例35制备方法，将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈替换为1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈得到N-((1r,4S)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((S)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(0.05g)。ESI-MS(m/z):775.32[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.495(s,2H),1.659(s,2H),1.938(s,3H),2.175(s,2H),2.339(s,1H),2.671-2.733(m,3H),2.874(s,1H),2.915(s,1H),3.102(s,5H),3.150-3.162(m,4H),3.683-3.716(m,4H),3.907-3.917(m,1H),4.256-4.267(m,1H),4.327-4.340(m,2H),6.706-6.713(m,1H),6.758(s,1H),6.861-6.886(m,1H),7.713(s,1H),7.862-7.869(m,1H),8.102-8.113(m,1H),8.413-8.424(m,1H),8.465(s,1H),8.547-8.555(m,1H),10.257-10.267(m,1H)。
实施例40：N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物89)的合成
参照实施例39制备方法，将(S)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸替换为(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸得到N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(0.06g)。ESI-MS(m/z):775.32[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.473-1.493(m,2H),1.675(s,2H),1.918-1.979(m,3H),2.168-2.187(m,2H), 2.336(s,1H),2.662-2.684(m,2H),2.733(s,1H),2.863-2.881(m,1H),2.930-2.947(m,1H),3.008-3.015(m,5H),3.157-3.171(m,4H),3.674-3.719(m,4H),3.893-3.925(m,1H),4.258-4.275(m,1H),4.320-4.349(m,2H),6.704-6.708(m,1H),6.746-6.749(m,1H),6.863-6.878(m,1H),7.705-7.718(m,1H),7.870(s,1H),8.111(s,1H),8.422(s,1H),8.463-8.470(m,1H),8.554(s,1H),10.258(s,1H)。
实施例41：1-(5-(5-(1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-羰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物93)的合成
步骤1：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中,将叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(150mg,0.28mmol)溶于甲酸(3mL)。室温反应2h，LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩溶剂至干得到粗品1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(150mg)。ESI-MS(m/z):431.17[M+H]+。
步骤2：苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在25mL的反应瓶中,将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(150mg)和4-甲酰基哌啶-1-甲酸苄酯(70mg,0.28mmol)溶于NMP(2mL)中，室温反应过夜后加入三乙酰氧基硼氢化钠(150mg,0.56mmol)，继续室温反应2h，LCMS检测反应结束后，将反应液倒入水中析出固体过滤收集固体，烘干得到苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(90mg)。ESI-MS(m/z):662.29[M+H]+。
步骤3：苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯的合成
在25mL的反应瓶中,苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(90mg)和多聚甲醛(12mg)溶于二氯甲烷(3mL)和甲醇(1mL)的混合溶液中，45℃下反应2小时，然后加入氰基硼氢化钠(34mg,0.56mmol)室温反应1h，LCMS检测反应结束后，将反应液减压浓缩拌样，中压制备(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，得到苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(80mg,0.12mmol)。ESI-MS(m/z):676.31[M+H]+。
步骤4：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈合成
在25mL的反应瓶中,苄基4-((((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸酯(80mg,0.12mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三甲基硅咪唑(71mg,0.36mmol)室温反应4小时，LCMS检测反应结束后，过 滤收集固体，烘干得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(60mg)。ESI-MS(m/z):542.27[M+H]+
步骤5：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-羰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中,1-(5-(5-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(60mg,0.11mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-羧酸(32mg,0.11mmol)溶于DMF(2mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(43mg,0.33mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(84mg,0.22mmol)，室温反应2小时，LCMS检测反应结束后，将反应液倒入水中，过滤收集固体，烘干进行TLC制备(D:M＝15:1),得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-羰基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的(24mg)。ESI-MS(m/z):812.34[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.82(s,1H),8.71(d,J＝4.3Hz,1H),8.66(s,1H),8.55(d,J＝3.6Hz,1H),8.51(s,1H),8.20(s,1H),7.81(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝3.4Hz,1H),5.77(s,1H),5.15(dd,J＝13.2,4.8Hz,1H),4.65–4.46(m,2H),4.46–4.34(m,1H),3.58–3.51(m,1H),3.09(d,J＝4.4Hz,4H),2.98–2.86(m,2H),2.83(s,1H),2.80–2.59(m,2H),2.46–2.38(m,2H),2.38–2.06(m,7H),2.06–2.01(m,1H),1.92–1.52(m,7H),1.49–1.36(m,1H),1.15–1.03(m,1H).
实施例42：(R)-1-(5-(5-(1-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物95)的合成
在25mL的反应瓶中加入中间体制备例27(0.06g，0.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.07g，0.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.06g，0.5mmol)。反应半小时后加入中间体制备例9(0.07g，0.2mmol)。反应液在25℃下反应3h。加入水用EA萃取进行分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝12：1)，得到(R)-1-(5-(5-(1-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(0.04g,0.1mmol)。ESI-MS(m/z):759.30[M+H]+；1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:1.528-1.732(m,2H),1.764-1.994(m,2H),2.091-2.212(m,2H),2.241-2.394(m,2H),2.642(s,4H),2.839-2.954(m,4H),3.248(t,J＝11.95Hz,3H),3.522(s,1H),3.655(s,2H),3.756-3.909(m,2H),4.122(s,1H),4.274-4.432(m,2H),6.694(s,1H),6.744(d,J＝8.72Hz,1H),6.863(s,2H),8.160(s,1H),8.460(s,1H),8.508(s,1H),8.611(s,1H),8.662(s,1H),8.775(s,1H),10.238(s,1H)。
实施例43:1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4- 基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物96)的合成
参照实施例38制备方法，仅将实施例26终产物替换为实施例27终产物，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(28mg)。ESI-MS(m/z):816.31[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.79(t,J＝8.3Hz,1H),8.71(d,J＝4.7Hz,1H),8.64(d,J＝1.7Hz,1H),8.54(d,J＝3.8Hz,1H),8.49(s,1H),8.18(s,1H),7.68(t,J＝11.0Hz,1H),7.43(d,J＝7.3Hz,1H),6.89(d,J＝3.8Hz,1H),5.11(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),3.61(d,J＝11.1Hz,2H),3.15–3.07(m,4H),2.89(t,J＝11.1Hz,3H),2.61(d,J＝17.4Hz,1H),2.54(d,J＝4.6Hz,1H),2.45(s,1H),2.30(s,2H),2.24(s,3H),2.19(d,J＝11.3Hz,2H),2.07–2.01(m,1H),1.85(s,4H),1.70–1.54(m,4H),1.45(dd,J＝22.7,11.5Hz,2H),1.28–1.21(m,2H).
实施例44:1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物97)的合成
参照实施例2制备方法，将反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸得到1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(27mg)。ESI-MS(m/z):839.31[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.83(d,J＝1.6Hz,1H),8.73(d,J＝4.7Hz,1H),8.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.59–8.54(m,1H),8.52(d,J＝3.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.69(dd,J＝8.4,5.8Hz,1H),7.36(d,J＝5.6Hz,1H),7.26(t,J＝7.0Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),5.15–5.04(m,1H),4.12–4.03(m,1H),3.52(d,J＝20.0Hz,1H),3.50–3.42(m,6H),3.39(s,1H),3.22(d,J＝13.6Hz,2H),3.10(d,J＝3.9Hz,3H),2.90(dd,J＝22.7,9.2Hz,1H),2.59(d,J＝24.3Hz,6H),2.43(d,J＝31.9Hz,2H),2.18(dd,J＝16.2,9.8Hz,2H),2.06–1.98(m,1H),1.75(s,1H),1.68–1.58(m,2H),1.52(s,1H).
实施例45:1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物98)的合成
参照实施例13制备方法，将反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为7-(叔丁氧基羰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸得到1-(5-(5-(7-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-5-腈(24mg)。ESI-MS(m/z):857.30[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.82(d,J＝1.8Hz,1H),8.72(d,J＝4.8Hz,1H),8.66(d,J＝1.9Hz,1H),8.55(d,J＝3.7Hz,1H),8.52(s,1H),8.21(s, 1H),7.73(dd,J＝11.3,4.6Hz,1H),7.48(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),5.12(dt,J＝12.6,4.6Hz,1H),4.14–4.03(m,1H),3.60–3.37(m,5H),3.30–3.22(m,6H),3.10(d,J＝4.8Hz,3H),2.89(t,J＝14.8Hz,1H),2.68–2.57(m,6H),2.49–2.40(m,2H),2.18(dd,J＝18.8,8.4Hz,2H),2.10–2.01(m,1H),1.76(s,1H),1.68–1.59(m,2H),1.53(s,1H).
实施例46:1-(5-(5-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物99)的合成
将中间体制备例2终产物(150.0mg，0.37mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后依次加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(142.5mg，0.37mmol)和中间体制备例30终产物(149.3mg，0.37mmol)，再加入N,N-二异丙基乙胺(48.4mg，0.37mmol)。反应液在25℃下搅拌反应3小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示原料消失。反应液倒入冰水(10mL)中，将析出的固体过滤得到滤饼，滤饼经薄层制备板(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化得到1-(5-(5-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(1.35mg，0.46％)。MS:m/z＝785[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(s，1H)，8.82(s，1H)，8.71–8.69(m，1H)，8.66(s，1H)，8.55–8.53(m，1H)，8.51–8.48(m，1H)，8.22–8.16(m，1H)，7.67-7.57(m，1H)，7.24-7.34(m，1H)，7.19(dd，J＝36.1，8.4Hz，1H)，6.87-6.90(m，1H)，5.09–4.98(m，1H)，4.12-4.11(m，1H)，4.07–3.93(m，2H)，3.89-3.76(m，1H)，3.73-3.58(m，2H)，3.45(s，2H)，3.26-3.17(dd，2H)，3.10-3.05(m，4H)，2.95–2.79(m，1H)，2.63-2.54(m，5H)，2.27-2.22(m，2H)，2.00-1.91(m，2H)。
实施例47:N-(6-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物102)的合成
参照实施例2制备方法，将中间体制备例1终产物替换为中间体制备例17终产物得到N-(6-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(93mg)。ESI-MS(m/z):825.30[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.81(d,J＝1.7Hz,1H),8.70(d,J＝4.7Hz,1H),8.65(d,J＝1.7Hz,1H),8.54(d,J＝3.8Hz,1H),8.50(s,1H),8.19(s,1H),7.99(d,J＝7.9Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.36(s,1H),7.27(d,J＝8.6Hz,1H),6.89(d,J＝3.8Hz,1H),5.08(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),4.23–4.14(m,1H),3.98–3.88(m,1H),3.50(s,4H),3.09(d,J＝4.8Hz,3H),2.97(s,2H),2.93–2.86(m,1H),2.70–2.64(m,1H),2.62–2.54(m,6H),2.50–2.47(m,2H),2.44–2.33(m,2H),2.31–2.23(m,1H),2.17–2.10(m,1H),2.03(dt,J＝18.2,11.9Hz,2H).
实施例48：(R)-1-(5-(5-(2-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物104)的合成
参照实施例7制备方法，将中间体制备例1终产物和2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸替换为中间体制备例29终产物和(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸(中间体制备例27)得到(R)-1-(5-(5-(2-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)-2-氮杂螺环[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.03g)。ESI-MS(m/z):771.29[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.880-1.910(m,1H),2.868-2.531(m,1H),2.554-2.586(m,2H),2.665-2.675(m,3H),2.788(s,2H),2.880(s,1H),2.941(s,1H),3.006-3.115(m,6H),3.663-3.694(m,3H),3.878-3.909(m,2H),3.923-3.977(m,1H),3.986-4.034(s,1H),4.223(s,1H),4.252-4.282(m,1H),4.371(s,1H),6.699(d,J＝6Hz,1H),6.753(d,J＝6Hz,1H),6.848-6.874(m,1H),6.921(d,J＝3.6Hz,1H),8.243(s,1H),8.569(s,2H),8.693(s,1H),8.734(s,1H),8.854(s,1H),10.253(d,J＝3.6Hz,1H)。
实施例49:N-(6-(5-(5-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物105)的合成
参照实施例13制备方法，将中间体制备例1终产物替换为中间体制备例17终产物得到N-(6-(5-(5-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)螺环[3.3]庚烷-2-基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(20mg)。ESI-MS(m/z):825.30[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.12(s,1H),8.83(d,J＝1.5Hz,1H),8.72(d,J＝4.6Hz,1H),8.67(d,J＝1.6Hz,1H),8.55(d,J＝3.8Hz,1H),8.53(s,1H),8.21(s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(d,J＝11.4Hz,1H),7.48(d,J＝7.3Hz,1H),6.90(d,J＝3.8Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.26–4.12(m,1H),4.00–3.89(m,1H),3.33–3.29(m,4H),3.10(d,J＝4.8Hz,3H),2.98(s,2H),2.93–2.85(m,1H),2.71–2.65(m,1H),2.65–2.58(m,5H),2.57–2.52(m,2H),2.49–2.47(m,1H),2.45–2.35(m,2H),2.31–2.23(m,1H),2.16–2.10(m,1H),2.08–2.00(m,2H).
实施例50：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物109)的合成
步骤1：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚-1,3-二酮(1.00g,3.62mmol)，二异丙基乙基胺(1.40g,10.86mmol)和4-羟甲基哌啶(625.4mg,5.43mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(10mL)中，80度反应16小时，TLC(DCM：MeOH＝20：1)显示反应完毕。反应液降至室温后倒入水中(50mL)，加入EA萃取(20mL x 3)，合并有机相后用无水硫酸钠干燥过滤，并减压浓缩，得到产物2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，74.4％)。
步骤2：1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(900.0mg,2.42mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中并加入戴斯马丁氧化剂(1.50g,3.54mmol)，25℃反应16小时，TLC(DCM：MeOH＝10：1)显示反应完毕。向体系中加入水(50mL)并加入二氯甲烷萃取(20mL x 3)，有机相加入无水硫酸钠干燥后过滤，并减压浓缩得到粗品。粗品用柱层析进纯化(PE：EA＝10：1-0：1)得到1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(500.0mg，55.9％)。
步骤3：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛(65.0mg,0.18mmol)和1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(75.9mg,0.18mmol)溶于1,2-二氯乙烷(2mL)中，室温反应2小时，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(74.6mg,0.35mmol)后室温反应2小时，TLC(DCM：MeOH＝10：1)显示反应完毕。向体系中加入水(10mL)并加入二氯甲烷萃取(10mL x 3)，有机相加入无水硫酸钠干燥后过滤，并减压浓缩至干。浓缩物经高压制备液相纯化得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(2.5mg)。LC-MS:m/z＝785.2[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),9.05(d,J＝4.8Hz,1H),8.83-8.78(m,2H),8.64(d,J＝2.0Hz,1H),8.46(d,J＝4.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.29-7.23(m,1H),6.90(d,J＝4.0Hz,1H),5.31(s,1H),5.10-5.02(m,1H),4.10(d,J＝12.8Hz,2H),3.21(d,J＝4.8Hz,3H),3.13-3.08(m,1H),2.98(s,2H),2.88(s,2H),2.55(d,J＝7.2Hz,2H),2.22(s,4H),2.04-1.96(m,3H),1.86(d,J＝10.8Hz,2H),1.68-1.51(m,4H),1.42(d,J＝17.2Hz,2H).
实施例51：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(4-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基乙酰胺(化合物110)的合成
在25mL的反应瓶中加入中间体制备例28终产物(0.07g，0.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0℃环境下加入O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(0.07g，0.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.06g，0.5mmol)。反应半小时后加入中间体制备例18终产物(0.07g，0.2mmol)。反应液在25℃下反应3h。加入水用DCM萃取进行分液，收集有机相，减压浓缩溶剂至干，浓缩物经硅胶色谱柱纯化(DCM：MeOH＝10：1)，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(4-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲胺基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基乙酰胺(0.05g,0.1mmol)。ESI-MS(m/z):831.31[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.426-1.534(m,2H),1.608-1.726(m,2H),1.895-1.960(m,2H),2.132-2.212(m,2H),2.525-2.602(m,2H),2.672-2.605(m,4H),2.841-2.929(m,2H),3.010(s,2H),3.076(d,J＝4.85Hz,3H),3.166(t,J＝11.94Hz,1H),3.297(s,4H),3.662-3.753(m,1H),5.109(dd,J＝5.42Hz,J＝12.91Hz,1H),6.898(s,1H),7.468(d,J＝7.24Hz,1H),7.683(d,J＝8.08Hz,1H),7.721(d,J＝11.62Hz,1H),7.740(d,J＝6.65Hz,1H),8.200(s,1H),8.483(s,1H),8.603(d,J＝4.77Hz,1H),8.627(d,J＝3.82Hz,1H),8.684(s,1H),11.110(s,1H)。
实施例52：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物111)的合成
将2-(2,6-二甲氧基哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90.0mg)溶于THF(6mL)并且加入三乙胺(34.2mg，0.34mmol)，该反应液25摄氏度搅拌10分钟。将中间体制备例26终产物(75.0mg，0.17mmol)加入反应液中，25℃搅拌反应1小时。向反应液中加入无水乙酸(30.5mg，0.51mmol)和三乙酰基硼氢化钠(89.6mg，0.42mmol)。加入完毕后，25℃搅拌反应3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示原料消失。将反应液倒入碳酸氢钠水溶液(20mL)，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取， 有机相用饱和氯化钠水溶液洗一次，然后用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。浓缩物经制备板纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(13.8mg，0.017mmol)。ESI-MS(m/z):770.3[M+1]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:8.90-8.95(m，1H)，8.69(s，1H)，8.55(d，J＝4.0Hz，1H)，8.48(s，1H)，8.29(s，1H)，8.25(d，J＝1.6Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.06(d，J＝8.8Hz，1H)，6.73(d，J＝4.0Hz，1H)，4.92-5.00(m，1H)，3.44(s，4H)，3.18(d，J＝5.2Hz，3H)，2.70-2.95(m，4H)，2.59(s，4H)，2.25-2.35(m，3H)，2.10-2.16(m，1H)，2.00-2.09(m，2H)，1.60-1.75(m，4H)，1.10-1.20(m，2H)。
实施例53：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物112)的合成
步骤1：3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮的合成
将叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(1.51g，3.52mmol)溶于二氯甲烷(21mL)，然后室温下加入三氟乙酸(7mL)。加入完毕后室温搅拌反应3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示原料消失。将反应液减压浓缩至干得到3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮粗品(2.40g)。
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
将3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(43.9mg)溶于四氢呋喃(3mL)并且加入三乙胺(18.3mg，0.18mmol)，该反应液在室温搅拌10分钟。将中间体制备例26终产物(40.0mg，0.09mmol)加入反应液中，搅拌反应1小时。向反应液中加入醋酸(16.3mg，0.27mmol)和三乙酰基硼氢化钠(47.8mg，0.23mmol)。加入完毕后，室温搅拌反应3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示原料消失，将反应液倒入碳酸氢钠水溶液(20mL)，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL)洗一次，然后用无水硫酸钠干燥后减压浓缩至干。浓缩物经制备板纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到类1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(5.2mg，0.01mmol)。ESI-MS(m/z):756.2[M+1]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ:8.95(s，1H)，8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.55(d，J＝3.6Hz，1H)，8.48(s，1H)，8.29(s，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.01(d，J＝6.4Hz，1H)，6.89(s，1H)，6.73(d，J＝4.4Hz，1H)，5.18-5.22(m，1H)，4.42(d，J＝15.2Hz，1H)，4.26(d，J＝15.6Hz，1H)，3.40-3.70(m，3H)，3.35(s，3H)，3.17(d，J＝4.8Hz，3H)，2.80-2.90(m，2H)，2.59(s，3H)，2.10-2.40(m，5H)，1.90-2.05(m，2H)，1.65-1.70(m，2H)，1.47-1.49(m，2H)，1.13-1.17(m，2H)。
实施例54：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物118)的合成
参照实施例1制备方法，将实施例1步骤1中5-氰基吲哚替换为5-氰基-7-氮杂吲哚，步骤3中的2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品替换为2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸粗品，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺合成(23mg)。ESI-MS(m/z):799.32[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:10.96(s,1H),8.84(d,J＝1.7Hz,1H),8.74(d,J＝4.8Hz,1H),8.68(d,J＝1.8Hz,1H),8.58–8.53(m,2H),8.23(s,1H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.10(s,2H),6.91(d,J＝3.8Hz,1H),5.06(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.33(s,1H),4.24(s,1H),3.77–3.69(m,1H),3.19(t,J＝11.6Hz,1H),3.11(d,J＝4.8Hz,3H),3.01(s,2H),2.95–2.87(m,1H),2.62(s,5H),2.38(ddd,J＝26.2,13.0,4.1Hz,1H),2.19(s,2H),1.92(s,4H),1.69(dd,J＝24.1,11.8Hz,3H),1.51(dd,J＝23.0,11.4Hz,2H),1.24(s,2H)。
实施例55:(R)-1-(5-(5-(7-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物120)的合成
参照实施例44制备方法，将中间体制备例2终产物替换为中间体制备例32终产物得到(R)-1-(5-(5-(7-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基-4-(甲胺基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(35mg)。ESI-MS(m/z):799.32[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.25(d,J＝3.3Hz,1H),8.84(s,1H),8.74(d,J＝4.5Hz,1H),8.68(d,J＝1.9Hz,1H),8.55(dd,J＝9.7,3.2Hz,2H),8.23(s,1H),6.91(d,J＝3.9Hz,1H),6.88–6.81(m,1H),6.78–6.72(m,1H),6.70(s,1H),4.32–4.24(m,1H),4.11–4.03(m,1H),3.91(dd,J＝15.0,9.8Hz,1H),3.78–3.71(m,1H),3.68(dd,J＝11.3,6.3Hz,2H),3.58–3.43(m,4H),3.27–3.20(m,2H),3.11(d,J＝3.3Hz,3H),3.06–2.99(m,1H),2.94(t,J＝10.2Hz,1H),2.91–2.86(m,1H),2.72–2.63(m,4H),2.46–2.39(m,2H),2.31–2.23(m,1H),2.21–2.13(m,2H),1.94–1.85(m,1H),1.75(s,1H),1.69–1.57(m,2H),1.56–1.48(m,1H).
实施例56：(S)-1-(5-(5-(7-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶)-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物122)的合成
参照实施例55制备方法，将中间体制备例32终产物替换中间体制备例19终产物得到(S)-1-(5-(5-(7-(2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶)-1(2H)-基)-10-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪 -3(4H)-基)乙酰基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(14mg)。ESI-MS(m/z):813.33[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.29(d,J＝5.3Hz,1H),8.83(d,J＝1.7Hz,1H),8.73(d,J＝4.7Hz,1H),8.67(d,J＝1.7Hz,1H),8.56(d,J＝3.8Hz,1H),8.53(s,1H),8.22(s,1H),6.91(d,J＝3.8Hz,1H),6.67(dd,J＝14.6,6.4Hz,2H),4.53–4.41(m,1H),4.17–4.01(m,2H),3.75–3.66(m,2H),3.62–3.53(m,1H),3.51–3.42(m,2H),3.21–3.03(m,8H),2.93(t,J＝11.4Hz,1H),2.84–2.73(m,2H),2.70–2.62(m,2H),2.35–2.31(m,1H),2.26–2.12(m,6H),1.79–1.67(m,2H),1.65–1.58(m,2H),1.58–1.41(m,2H).
实施例57：N-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丙基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物123)的合成
参照实施例13制备方法，将中间体制备例1终产物替换为中间体制备例33终产物得到N-(1-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丙基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.05g)。ESI-MS(m/z):789.24[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:1.453-1.456(m,2H),1.661(s,2H),2.026-2.044(m,2H),2.581-2.611(m,5H),2.690(s,4H),2.853-2.914(m,1H),3.090-3.103(m,5H),5.091-5.121(m,1H),6.911(d,J＝3.6Hz,1H),7.388(s,1H),7.492(d,J＝7.2Hz,1H),7.740(d,J＝10.8Hz,1H),8.228(s,1H),8.558(s,1H),8.684-8.700(m,2H),8.847-8.849(m,1H),9.129(s,1H),11.106(s,1H)。
实施例58：N-(1r,4r)-4-(5-(6-(2-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物127)的合成
参照实施例13的制备方法，将5-氰基-7-氮杂吲哚替换为中间体制备例24终产物得到N-(1r,4r)-4-(5-(6-(2-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺。ESI-MS(m/z):904.34[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.47(m,2H),1.64(d,J＝12.14Hz,2H),1.92(d,J＝8.62Hz,3H),2.00(d,J＝8.46Hz,1H),2.04-2.06(m,1H),2.16(d,J＝10.8Hz,2H),2.60-2.64(m,5H),2.87-2.93(m,1H),3.02(s,5H),3.10(d,J＝10.8Hz,2H),3.30(s,4H),3.5(d,J＝9.78Hz,1H),3.59(s,1H),3.70(d,J＝7.92Hz,2H),3.84(d,J＝6.52Hz,1H),4.72(s,1H),5.00(s,1H),5.12((dd,J＝12.88,5.38Hz,1H),6.58((d,J＝3.68Hz,1H),7.47((d,J＝7.14Hz,1H),7.68-7.72(m,2H),8.00(t,J＝3.78Hz,1H),8.26(s,1H),8.34-8.37(m,1H),8.60-8.65(m,2H),11.13(s,1H)。
实施例59：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺(化合物131)的合成
步骤1：叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氨基甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯的合成
将叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(200.0mg，0.38mmol)溶于二甲基亚砜(5mL)中，加入H2O2(64.1mg，1.88mmol)，碳酸钾(122.5mg，0.76mmol)，保持体系不超过25℃，反应16小时。LCMS检测反应完成，将反应体系加入水(20mL)，加入乙酸乙酯(20mL)萃取，有机相经水(20mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥后减压浓缩得到叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氨基甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(220.0mg，粗品)
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺的合成
将叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氨基甲酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯(200.0mg)悬浮于盐酸二氧六环(4N，5mL)中控温在25℃，反应3小时，LCMS检测反应完成。将反应体系减压浓缩至干，浓缩物加入2mL甲基叔丁基醚打浆，过滤得1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺(150.0mg)。
步骤3：叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-5,6-二氟-异吲哚-1,3-二酮(2.00g，6.80mmol)溶于二甲基亚砜(20mL)，加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.66g，8.80mmol)，二异丙基乙基胺(1.76g，13.60mmol)升温到110℃，反应16小时。薄层监测(PE:EA＝1:1)反应完成。反应液冷却至室温，加入水(100mL)，加入乙酸乙酯(50mLx3)萃取，有机相经饱和氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥蒸干后得到粗品，粗品经柱层析(PE:EA＝5：1-1：1)分离纯化得叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(3.60g，7.80mmol)。
步骤4：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将叔丁基4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(3.60g，7.80mmol)溶于盐酸二氧六环(4N，30mL)中，25℃反应3小时，LCMS检测反应完成。减压浓缩得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.00g)。
步骤5：叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.00g，5.60mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入溴乙酸叔丁酯(1.09g，5.60mmol)和三乙胺(2.27g，22.40mmol)，在70℃下搅拌反应6小时，LCMS监测原料消失。旋干反应液，残余物倒入水中(50ml)，加入(30mLx3)乙酸乙酯萃取，有机相经饱和氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥后减压浓缩至干，浓缩物经柱层析(PE:EA＝5:1-1:1)分离纯化得叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(2.00g，3.80mmol)。
步骤6：2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸的合成
将叔丁基2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸酯(100.0mg，0.07mmol)溶于盐酸二氧六环(4N，2mL)中，常温下搅拌3小时。LCMS检测反应完成，反应液减压浓缩至干，得黄色粗品2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(100mg)。
步骤7：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺的合成
将2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(100.0mg，0.24mmol)，1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺(107.2mg，0.24mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(109.1mg，0.29mmol)，缓慢加入二异丙基乙基胺(61.8mg，0.48mmol),滴加完成后，25℃反应16小时。LCMS检测反应完成。将反应体系加入水(5mL)中，加入乙酸乙酯(10mL)萃取，有机相干燥后减压浓缩至干。浓缩物经高压制备分离即得1-(5-(5-((1r,4r)-4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺(3.0mg，0.0034mmol)。LC-MS:m/z＝881.0[M+1]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90(d，1H，J＝2.1Hz)，8.87(s，1H)，8.49(d，1H，J＝3.9Hz)，8.48(s，1H)，8.44(d，1H，J＝2.1Hz)，8.42(s，1H)，7.97(s，1H)，7.51(d，1H，J＝11.2Hz)，7.41(d，1H，J＝7.3Hz)，6.99(d，1H，J＝8.1Hz)，6.73(d，1H，J＝3.9Hz)，4.94(dd，2H，J＝12.4，5.3Hz)，3.32(s，4H)，3.18(d，3H，J＝4.9Hz)，3.11(s，2H)，2.75(d，4H，J＝3.9Hz)，2.34(d，2H，J＝11.9Hz)，2.24–2.11(m，4H)，1.82(dd，3H，J＝23.8，10.7Hz)，1.43(d，3H，J＝15.7Hz)。
实施例60：N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-异丙基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(化合物141)的合成
参照实施例2制备方法，仅将2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸替换为中间体制备例39终产物，制备得到N-((1r,4R)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-((R)-8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-10-异丙基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酰胺(18mg，0.022mmol)。ESI-MS(m/z):815.35[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:10.29(s,1H),8.85(d,J＝1.8Hz,1H),8.75(d,J＝4.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.8Hz,1H),8.57(s,1H),8.57(s,1H),8.24(s,1H),7.55(d,J＝8.2Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),6.63(d,J＝2.2Hz,1H),4.73(t,J＝10.7Hz,1H),4.14–4.00(m,1H),3.73(t,J＝6.7Hz,2H),3.40–3.36(m,2H),3.25–3.16(m,1H),3.11(d,J＝4.8Hz,4H),3.01(t,J＝13.9Hz,2H),2.95–2.86(m,3H),2.81(d,J＝9.9Hz,1H),2.68(t,J＝6.6Hz,2H),2.65–2.58(m,2H),2.48–2.45(m,1H),2.25–2.16(m,2H),2.00–1.91(m,2H),1.76–1.64(m,2H),1.52–1.46(m,1H),1.23(d,J＝6.9Hz,3H),1.11(d,J＝6.7Hz,3H).
实施例61：1-(5-(5-(2-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物145)的合成
参照实施例48制备方法，仅将(R)-2-(8-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪[1,2-d][1,4]恶嗪-3(4H)-基)乙酸替换为中间体制备例41终产物，得到1-(5-(5-(2-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(11mg，0.013mmol)。ESI-MS(m/z):815.35[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.85(d,J＝1.9Hz,1H),8.75–8.71(m,1H),8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.61–8.55(m,2H),8.24(s,1H),7.72(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.19–5.06(m,1H),4.37(s,1H),4.24(s,1H),4.06–3.95(m,2H),3.88(s,1H),3.64(s,2H),3.12(d,J＝4.8Hz,3H),2.99–2.77(m,5H),2.65–2.55(m,4H),2.48–2.44(m,1H),2.09–2.01(m,1H),1.89–1.73(m,2H),1.70–1.58(m,2H).
实施例62：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物146)的合成
步骤1：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
参照化合物实施例26的步骤2的制备方法，分别将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈和1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛替换为中间体制备例26终产物和中间体制备例37终产物得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.05g)。ESI-MS(m/z):802.30[M+H]+。
步骤2：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
参照化合物实施例38制备方法，将实施例26(化合物61)替换为1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.03g)。ESI-MS(m/z):816.31[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.86(s,1H),8.76(s,1H),8.70(s,1H),8.58(s,1H),8.24(s,1H),7.72(d,J＝ 11.4Hz,1H),7.60(d,J＝42.9Hz,1H),7.46(s,1H),6.93(s,1H),5.11(s,1H),3.67(s,2H),3.12(s,2H),2.91(s,3H),2.22(d,J＝26.2Hz,6H),2.10–1.89(m,4H),1.81(s,2H),1.60(s,4H),1.22(d,J＝34.9Hz,6H),1.09(s,2H).
实施例63：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基氨基吡啶-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物148)的合成
步骤1：叔丁基4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-甲酸酯的合成
在50mL的反应瓶中，将中间体制备例44终产物(400mg,1.2mmol)溶于DMF(6mL)中，加入氢化钠(193mg,4.8mmol)，室温下搅拌30min，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(463mg,2.4mmol)，80℃下反应3h。向反应液中加入氯化铵溶液淬灭，EA萃取三次，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，拌样进行柱层析(PE:EA＝2:1)纯化，得到叔丁基4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-甲酸酯(60mg,0.14mmol)。ESI-MS(m/z):444.22[M+H]+。
步骤2：3-(3-甲基-2-氧代-4-(哌嗪-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基]哌啶-2,6-二酮合成
在25mL的反应瓶中,4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.14mmol)溶于甲酸(2mL)中，室温反应3h，将反应液减压浓缩至干，得到3-(3-甲基-2-氧代-4-(哌嗪-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基]哌啶-2,6-二酮粗品(60mg)。ESI-MS(m/z):344.16[M+H]+。
步骤3：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基氨基吡啶-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈的合成
在25mL的反应瓶中，将3-(3-甲基-2-氧代-4-(哌嗪-1-基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基]哌啶-2,6-二酮粗品(60mg)和1-(5-(5-((1r,4r)-4-甲酰基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基]-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(60mg,0.14mmol)溶于NMP(2mL)中，室温反应过夜。将反应液滴入碳酸氢钠溶液中析出固体，过滤收集固体，将固体进行TLC制备(DCM:MeOH＝15:1)，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-((4-(1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)哌嗪-1-基)甲基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-甲基氨基吡啶-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(2.1mg，0.003mmol)。ESI-MS(m/z):771.92[M+H]+。
实施例64：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(环丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物157)的合成
参照实施例2制备方法，仅将叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吲哚-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯和2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸分别替换为中间体制备例40终产物和中间体制备例28终产物，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(环丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(22mg，0.026mmol)。ESI-MS(m/z):857.3[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.95–8.87(m,1H),8.84(d,J＝2.0Hz,1H),8.73(s,1H),8.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.56(d,J＝3.9Hz,1H),8.54(d,J＝4.5Hz,1H),7.79–7.64(m,2H),7.47(d,J＝11.4Hz,1H),6.90(d,J＝3.9Hz,1H),5.17–5.06(m,1H),3.76–3.67(m,1H),3.77–3.67(m,1H),3.32–3.28(m,4H),3.20–3.15(m,1H),3.02(s,2H),2.94–2.86(m,1H),2.78–2.74(m,1H),2.69–2.59(m,6H),2.21–2.13(m,2H),2.08–2.02(m,1H),1.96–1.90(m,2H),1.67(dd,J＝23.8,11.6Hz,2H),1.56–1.42(m,2H),1.07–0.99(m,2H),0.72–0.64(m,2H).
实施例65：1-(4-(环丙基氨基)-5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3)-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(化合物158)的合成
参照实施例38制备方法，分别将叔丁基((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)氨基甲酸酯和1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛替换为中间体制备例40终产物和中间体制备例10终产物，得到1-(4-(环丙基氨基)-5-(5-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3)-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲腈(18mg，0.021mmol)。ESI-MS(m/z):842.33[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.88(s,1H),8.83(s,1H),8.72(s,1H),8.64(s,1H),8.55(d,J＝3.7Hz,1H),8.50(s,1H),7.69(d,J＝11.4Hz,1H),7.43(d,J＝7.2Hz,1H),6.89(d,J＝3.7Hz,1H),5.11(dd,J＝12.8,5.3Hz,1H),3.60(d,J＝11.0Hz,2H),3.08(t,J＝11.5Hz,1H),2.94–2.83(m,3H),2.75(s,1H),2.61(d,J＝18.3Hz,2H),2.48–2.35(m,2H),2.29(s,2H),2.23(s,3H),2.17(d,J＝11.8Hz,2H),2.07–2.00(m,1H),1.83(d,J＝10.2Hz,4H),1.62–1.51(m,2H),1.47–1.39(m,2H),1.32–1.19(m,2H),1.03(d,J＝5.6Hz,2H),0.69(s,2H).
实施例66：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-甲酰胺(化合物159)的合成
参照实施例2制备方法，仅将2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酸替换为中间体制备例41，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-甲酰胺(4.8mg，0.006mmol)。ESI-MS(m/z):816.89[M+H]+。
实施例67：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基-d3)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物160)的合成
参照实施例27制备方法，将反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为中间体制备例38，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基-d3)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.05g)。ESI-MS(m/z):819.33[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.84(d,J＝1.8Hz,1H),8.73(d,J＝4.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.8Hz,1H),8.62–8.50(m,2H),8.24(s,1H),7.74(d,J＝11.3Hz,1H),7.49(d,J＝7.3Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),3.66(d,J＝10.9Hz,2H),3.28(s,1H),3.20(s,1H),3.11(d,J＝4.8Hz,3H),3.02–2.83(m,4H),2.61(d,J＝18.3Hz,3H),2.30(s,3H),2.21(s,1H),2.17(d,J＝12.0Hz,1H),2.12–2.01(m,2H),1.92(d,J＝11.6Hz,1H),1.78(d,J＝24.2Hz,4H),1.42(dd,J＝28.0,11.6Hz,2H).
实施例68：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-N-(甲基-d3)乙酰胺(化合物161)的合成
参照实施例13制备方法，将反式-4-(叔丁氧羰基氨基)环己基羧酸替换为中间体制备例38，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-N-(甲基-d3)乙酰胺(0.04g)。ESI-MS(m/z):848.32[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.11(s,1H),8.85(s,1H),8.75(s,1H),8.69(s,1H),8.57(s,2H),8.23(s,1H),7.74(d,J＝11.3Hz,1H),7.49(d,J＝6.5Hz,1H),6.92(d,J＝3.7Hz,1H),5.11(dd,J＝12.6,5.8Hz,1H),4.37(s,0.5H),4.01(s,0.5H),3.26(d,J＝13.9Hz,5H),3.11(d,J＝ 3.5Hz,3H),2.94–2.82(m,1H),2.64(d,J＝16.6Hz,5H),2.25(s,2H),2.05(s,1H),1.84(s,2H),1.80–1.67(m,3H),1.66(s,1H),1.25(s,2H),0.87(t,J＝6.8Hz,1H).
实施例69：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-甲酰胺(化合物162)的合成
步骤1：叔丁基1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯的合成
在25mL的反应瓶中,将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-甲醛(60mg,0.21mmol)、哌啶-4-羧酸叔丁酯盐酸盐(46mg,0.21mmol)和醋酸钠(34mg,0.42mmol)溶于NMP(3mL)中。室温反应3天，然后向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(89mg,0.42mmol)，继续反应2小时，将反应液滴入碳酸氢钠溶液中析出固体，过滤收集固体。将固体进行TLC制备(DCM:MeOH＝20:1)，得到叔丁基1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯(25mg,0.055mmol)。ESI-MS(m/z):456.21[M+H]+。
步骤2：1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸的合成
在25mL的反应瓶中，将叔丁基1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸酯(25mg,0.055mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)室温反应过夜，将反应液减压浓缩至干，得到1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸粗品(25mg)。ESI-MS(m/z):662.29[M+H]+。
步骤3：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-甲酰胺的合成
在25mL的反应瓶中,将1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-羧酸粗品(25mg)和1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(25mg,0.055mmol)溶于DMF(2mL),加入DIEA(28mg,0.22mmol)和BOP(36mg,0.082mmol)室温反应2h。将反应液滴入水中析出固体，过滤收集固体，将固体进行TLC制备(DCM:MeOH＝15:1)，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)甲基)哌啶-4-甲酰胺(3.7mg，0.004mmol)。ESI-MS(m/z):840.33[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:8.90–8.82(m,2H),8.70(d,J＝1.9Hz,1H),8.55(d,J＝3.9Hz,1H),8.29(s,1H),7.95–7.80(m,3H),7.72(d,J＝7.7Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.16(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.15–4.09(m,1H),4.00–3.90(m,1H),3.68–3.53(m,3H),3.22–3.09(m,3H),2.99–2.80(m,3H),2.68–2.59(m,2H),2.42–2.38(m,1H),2.23–2.14(m,2H),2.04–1.97(m,2H),1.94–1.87(m,2H),1.71–1.58(m,5H),1.43–1.29(m,7H).
实施例70：(R)-1-(5-(5-(2-(2-(9-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪并[1,2-d][1,4]氧嗪-3(4H)-基]乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物163)的合成
参照实施例20制备方法，仅将中间体制备例28终产物替换为中间体制备例45终产物，得到(R)-1-(5-(5-(2-(2-(9-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-7-甲基-1,2,4a,5-四氢苯并[b]吡嗪并[1,2-d][1,4]氧嗪-3(4H)-基]乙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(15mg)。ESI-MS(m/z):785.30[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:10.24(d,J＝5.0Hz,1H),8.85(s,1H),8.72(s,1H),8.68(s,1H),8.56(d,J＝3.6Hz,2H),8.23(s,1H),6.92(d,J＝3.8Hz,1H),6.69(d,J＝5.5Hz,1H),6.50(d,J＝5.4Hz,1H),4.37(s,1H),4.32(t,J＝9.0Hz,1H),4.22(s,1H),4.03(s,1H),3.97(dd,J＝8.2,5.9Hz,1H),3.89(t,J＝9.2Hz,2H),3.67(qd,J＝12.4,5.8Hz,3H),3.14–3.01(m,6H),2.91(d,J＝28.0Hz,3H),2.79(d,J＝5.1Hz,3H),2.67(dd,J＝12.2,6.4Hz,3H),2.27(d,J＝11.2Hz,1H),2.08(d,J＝6.0Hz,3H),1.89(dd,J＝17.5,10.6Hz,1H).
实施例71：1-(5-(5-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)甲基-d)(甲基-d3)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物164)的合成
参照实施例67制备方法，仅最后一步还原胺化过程中，用氰基硼氘化钠代替三乙酰氧基硼氢化钠，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌啶-4-基)甲基-d)(甲基-d3)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.05g)。ESI-MS(m/z):820.34[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.12(s,1H),8.84(s,1H),8.74(s,1H),8.68(s,1H),8.56(d,J＝8.5Hz,2H),8.23(s,1H),7.71(d,J＝11.2Hz,1H),7.45(s,1H),6.92(s,1H),5.11(d,J＝7.4Hz,1H),4.04(d,J＝7.0Hz,1H),3.62(d,J＝10.3Hz,2H),3.13(d,J＝24.5Hz,4H),2.90(s,3H),2.28(s,1H),2.21(s,2H),2.02(d,J＝26.1Hz,2H),1.86(s,3H),1.61(d,J＝12.1Hz,3H),1.46(d,J＝11.1Hz,2H),1.21(d,J＝32.3Hz,4H).
实施例72：1-(5-(5-(2-(1-(2-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物165)的合成
参照实施例23制备方法，将中间体制备例45终产物替换为中间体制备例36终产物，得到1-(5-(5-(2-(1-(2-(5-(2,4-二氧基四氢嘧啶-1(2H)-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.03g,0.04mmol)。ESI-MS(m/z):730.25[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.193-1.286(m,2H),1.647-1.799(m,2H),2.018-2.217(m,2H),2.563-2.631(m,2H),2.677-2.846(m,4H),2.846-2.930(m,2H),2.937-3.013(m,2H),3.056(d,J＝2.81Hz,3H),3.414-3.482(m,1H),3.775(s,1H),3.820-3.886(m,1H),4.034(s,1H),4.101(s,1H),4.251(s,1H),6.911(d,J＝3.86Hz,1H),7.687(d,J＝8.15Hz,1H),8.256(s,1H),8.356(s,2H),8.561(d,J＝3.86Hz,1H),8.690(d,J＝2.07Hz,1H),8.731-8.769(m,1H)8.852(d,J＝2.07Hz,1H),10.432(s,1H)。
实施例73：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氯-5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物168)的合成
参照实施例13制备方法，仅将实施例13中的5-氰基-7-氮杂吲哚替换为中间体制备例46，得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(3-氯-5-氰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.04g)。ESI-MS(m/z):865.25[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.11(s,1H),8.91(s,1H),8.74(d,J＝3.8Hz,1H),8.68(s,1H),8.63(s,1H),8.49(d,J＝5.7Hz,1H),8.10(s,1H),7.78–7.64(m,2H),7.49(d,J＝7.0Hz,1H),5.12(dd,J＝12.9,5.3Hz,1H),3.72(d,J＝7.9Hz,1H),3.20(t,J＝11.7Hz,1H),3.09(d,J＝4.7Hz,3H),3.03(s,1H),2.96–2.81(m,2H),2.74(s,1H),2.65(dd,J＝41.7,21.4Hz,6H),2.21(d,J＝11.5Hz,2H),2.10–2.00(m,1H),1.95(d,J＝10.2Hz,2H),1.69(dd,J＝23.5,11.7Hz,2H),1.55–1.42(m,2H),1.32–1.21(m,2H),0.87(t,J＝6.8Hz,1H).
实施例74：N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-乙酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(化合物171)的合成
参照实施例13，将1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈替换为2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚-5-基)哌嗪-1-基)乙酸(中间体制备例28)，将1-(4-(甲胺基)-5-(5-(哌啶-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈替换为1-(1-(5-(5-((1r,4r)-4-氨基环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙烷-1-酮(中间体制备例35),得到N-((1r,4r)-4-(5-(6-(5-乙酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-4-甲基氨基)吡啶-3-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环己基)-2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶基-3-基)-6-氟-1,3- 二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰胺(0.03g,0.03mmol)。ESI-MS(m/z):848.79[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:1.215-1.267(m,4H),1.439-1.522(m,2H),1.639-1.735(m,2H),1.894-1.975(m,2H),1.987-2.087(m,2H),2.171-2.219(m,2H),2.530-2.658(m,4H),2.705(s,3H),2.814-2.946(m,2H),2.949-3.063(m,2H),3.122(d,J＝4.89Hz,3H),3.175-3.219(m,1H),3.682-3.738(m,1H),5.112(dd,J＝5.47Hz,J＝12.86Hz,1H),6.926(d,J＝3.92Hz,1H),7.488(s,1H),7.705(s,1H),7.745(d,J＝11.33Hz,1H),8.422(s,1H),8.514(d,J＝3.88Hz,1H),8.564(s,1H),8.683(s,1H),8.704-8.758(m,1H),9.059(s,1H),11.112(s,1H)。
实施例75：1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(化合物176)的合成
参照实施例43制备方法，仅将1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲醛替换为中间体制备例47终产物，得到1-(5-(5-((1r,4r)-4-(((7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-腈(0.03g)。ESI-MS(m/z):856.34[M+H]+；1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ:11.11(s,1H),8.86(d,J＝1.8Hz,1H),8.75(d,J＝4.7Hz,1H),8.69(d,J＝1.8Hz,1H),8.57(d,J＝4.2Hz,2H),8.24(s,1H),7.71(d,J＝11.4Hz,1H),7.45(d,J＝7.3Hz,1H),6.92(d,J＝3.9Hz,1H),5.11(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),4.46(d,J＝4.8Hz,1H),4.39(t,J＝5.7Hz,2H),3.43(dt,J＝10.7,5.4Hz,2H),3.40-3.37(m,2H),3.29(dd,J＝10.9,5.5Hz,2H),3.21(s,3H),3.11(d,J＝4.8Hz,4H),2.93-2.85(m,1H),2.62(d,J＝1.8Hz,1H),2.59(s,1H),2.40(s,1H),2.23(s,3H),2.02(dd,J＝25.2,5.5Hz,3H),1.75(s,2H),1.64(s,4H),1.50(s,3H).
参照上述实施例的制备方法，仅替换部分中间体合成得到以下化合物：
试验例1、基于HiBiT法对OCI-LY10细胞中IRAK4体外降解试验
1.细胞系
细胞系来源：南京科佰生物科技有限公司；
细胞类型：人弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY10。
2.试剂和耗材
Nano Glo HiBiT Lytic Detection System(Cat.No.N3030，Promega)；
96孔培养板(Cat.No.3610，Corning Costar)；
胎牛血清(Cat.No.10099-141，GIBCO)；
IMDM培养基(Cat.No.12440053，GIBCO)；
Envision 2104酶标仪。
3.试验方法
收集处于对数生长期的细胞，用完全培养基(IMDM+20％FBS)重新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细胞计数，调整细胞浓度为1.5*106个/mL，接种到96孔板，每孔加50μL的细胞悬液；用DMSO稀释待测化合物成为50mM的储备液，检测前，将储备液用DMSO稀释至10mM作为起始浓度，4 倍梯度稀释8个浓度，由起始浓度开始每个浓度取2μL的待测化合物加入198μL的PBS中稀释100倍，混匀。从起始浓度开始取5.5μL的上述稀释样品溶液或培养基加入到96孔板的细胞悬液中，最终每孔化合物终浓度分别为10000、2500、625、156.3、39.1、9.8、2.4、0.6、0.15和0nM。每个样品浓度设置2个复孔，37℃、5％CO2孵育4小时或24小时；按照Nano Glo HiBiT Lytic Buffer：Substate：Protein比例为100:2:1混合，每孔加入50μL的Nano Glo HiBiT Lytic混合液，室温避光孵育10min；轻微震荡后在Envision 2104酶标仪上进行检测，计算蛋白降解抑制率。
4.数据分析
蛋白降解抑制率％＝(1-As/Ac)×100。
As:样品的OA(细胞+待测化合物)；
Ac:正常生长细胞对照的OA(细胞+DMSO)。
运用软件Graphpad Prism 6并采用计算公式XY-analysis/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response-Inhibition/log(inhibitor)vs.response-Variable slope(four parameters)进行DC50曲线拟合并计算出DC50值，其中inhibitor即为上述蛋白降解抑制率。
5.试验结果
结果如表2所示：
表2本发明化合物对IRAK4蛋白降解活性 注：A代表DC50≤5nΜ；B代表5nΜ<DC50≤50nΜ；
Nurix专利WO2021168197A1中化合物65：
试验结果表明，本发明化合物在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LY10中孵育24小时表现出较好的IRAK4降解活性，和WO2021168197A1中化合物65的降解活性相当或表现出更加优异的降解活性。更进一步地，本发明的某些化合物(如化合物2、化合物74等)在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LY10中仅孵育4小时即表现出较好的IRAK4降解活性，DC50≤5nΜ，Dmax(％)≥85％。
试验例2、基于ELISA法对PBMC细胞中IL-6的体外抑制试验
1.细胞系
PBMC细胞系来源：上海澳能生物技术有限公司；
Donor ID:Z0123或Z0268。
2.试剂和耗材
96-well IL-6Pre-coated ELISA Kit(Cat No.430507，BIOLEGEND)；
LPS(CatNo.L2637，Sigma)；
96孔培养板(Cat No.3599，Corning Costar)；
胎牛血清(Cat No.10099-141，GIBCO)；
RPMI 1640培养基(Cat No.C11875500BT，GIBCO)；
Varioskan Flash荧光酶标仪。
3.试验方法
铺板及给药：完全培养基(1640+1％FBS)重新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细胞计数，调整细胞浓度为2*106个/mL，100uL/孔接种到96孔板，即2x105个细胞/孔；用DMSO溶解待测化合物成为0.4mM储备液，化合物现配现用。用完全培养基将待测化合物储备液稀释至4μM的起始浓度，然后再用完全培养基将化合物由起始浓度以10倍梯度稀释6个浓度，混匀后分别向96孔板每孔的细胞悬液中加入100μL的各浓度样品或培养基；化合物在96孔板中终浓度为2000、200、20、2、0.2、0.02、0.002和0nM，每个药物浓度设置2个复孔，37℃、5％CO2孵育20小时；
LPS诱导：
对于Donor ID为Z0123的PBMC细胞：用PBS溶解配制成浓度为1100ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS 20uL，模型组(0nM)及样品组加入20uL 1100ng/mL LPS，LPS终浓度为100ng/mL，诱导时间为5h。
对于Donor ID为Z0268的PBMC细胞：用PBS溶解配制成浓度2200ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS 20μL，模型组(0nM)及样品组加入20μL 2200ng/mL LPS，LPS终浓度为200ng/mL，诱导时间为5h。
上清液收集：诱导结束后将96孔板在1000rmp离心5min，取上清液于另外一块96孔板上，-80℃保存待试剂盒检测用。
ELISA试剂盒检测：将-80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液严格按照试剂盒说明书进行试剂盒检测。
(1)标准品及样品配制
标准品：30.9ng中加入1.53mL Buffer A配制成20ng/mL的标准储存液，室温放置15～20min，混合均匀。12.5μL标准品储存液+487.5μL Buffer A→500pg/mL为高浓度，2倍往下稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、0(BufferA)pg/mL。
样品：将-80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液稀释用于试剂盒检测。
(2)用每孔不少于300μL的1X洗涤液清洗板4次，然后将剩余的缓冲液倒扣在吸收纸上，将其吸干。然后在每孔中加入50μL用Buffer A。
(3)在每孔中加入50μL标准品稀释液或样品，封口，并在室温下以200转/分钟的转速摇晃2小时。
(4)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入人IL-6检测抗体溶液100μL，封板，室温振荡孵育1小时。
(5)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μL Avidin-HRP A溶液，封板，室温振荡孵育30分钟。
(6)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗5次。最后一次清洗时，将孔浸泡在1X洗涤缓冲液中30秒至1分钟，将有助于背景最小化。每孔加入Substrate Solution F 100μL，避光孵育15分钟，不封板。含人IL-6的孔应呈蓝色，其强度与浓度成比例。
(7)每孔加入Stop Solution 100μL，停止反应。溶液的颜色应由蓝色变为黄色。
(8)在30分钟内读取450nm的吸光度。
4.数据分析
抑制率％＝{1-(Con样品-Con空白)/(Con模型-Con空白)}*100
Con空白：空白孔中IL-6浓度；
Con样品：样品孔中IL-6浓度；
Con模型：模型孔中IL-6浓度。
运用软件Graphpad Prism 5并采用计算公式XY-analysis/Transform X vulues uses X＝Log[X]/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response-Inhibition/log(inhibitor)vs.response-Variable slope(four parameters)进行IC50曲线拟合并计算出IC50值。
5.试验结果：
结果如表3所示：
表3本发明化合物对PBMC细胞中IL-6的体外抑制活性
试验结果表明，本发明化合物对LPS诱导的PBMC细胞中的IL-6具有较强的抑制作用，作用显著优于Curis公司的小分子化合物CA-4948，优于辉瑞公司的小分子化合物PF-06650833或与其相当。
试验例3、基于ELISA法对PBMC细胞中TNF-α的体外抑制试验
1.细胞系
PBMC细胞系来源：上海澳能生物技术有限公司；
Donor ID:Z0123或Z0268。
2.试剂和耗材
96-well TNF-αPre-coated ELISA Kit(Cat No.430207，BIOLEGEND)；
LPS(Cat No.L2637，Sigma)；
96孔培养板(Cat No.3599，Corning Costar)；
胎牛血清(Cat No.10099-141，GIBCO)；
RPMI 1640培养基(Cat No.C11875500BT，GIBCO)；
Varioskan Flash荧光酶标仪。
3.试验方法
铺板及给药：完全培养基(1640+1％FBS)重新悬浮细胞，采用血小板计数器进行细胞计数，调整细胞浓度为2*106个/mL，100μL/孔接种到96孔板，即2x105个细胞/孔；用DMSO溶解待测化合物成为0.4mM储备液，化合物现配现用。用完全培养基将待测化合物储备液稀释至4μM的起始浓度，然后再用完全培养基将化合物由起始浓度以10倍梯度稀释6个浓度，混匀后分别向96孔板的细 胞悬液中每孔加入100μL的各浓度样品或培养基；化合物在96孔板中终浓度为2000、200、20、2、0.2、0.02、0.002和0nM，每个药物浓度设置2个复孔，37℃、5％CO2孵育20小时；
LPS诱导：
对于Donor ID为Z0123的PBMC细胞：用PBS溶解成配制成浓度为1100ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS 20μL，模型组(0nM)及样品组加入20μL 1100ng/mL LPS，LPS终浓度为100ng/mL，诱导时间为5h。
对于Donor ID为Z0268的PBMC细胞：用PBS溶解成配制成浓度为2200ng/mL工作液，药物孵育细胞20h后，空白对照组加入PBS 20μL，模型组(0nM)及样品组加入20μL 2200ng/mL LPS，LPS终浓度为200ng/mL，诱导时间为5h。
上清液收集：诱导结束后将96孔板在1000rmp离心5min，取上清液于另外一块96孔板上，-80℃保存待试剂盒检测用。
ELISA试剂盒检测：将-80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液严格按照试剂盒说明书进行试剂盒检测。
(1)标准品及样品配制
标准品：11.2ng中加入0.56mL Buffer A配制成20ng/mL的标准储存液，室温放置15～20min，混合均匀。25μL标准品储存液+475μL Buffer A→1000pg/mL为高浓度，2倍往下稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625、0(Buffer A)pg/mL。
样品：将-80℃的细胞上清液解冻，细胞上清液稀释用于试剂盒检测。
(2)用每孔不少于300μL的1X洗涤液清洗板4次，然后将剩余的缓冲液倒扣在吸收纸上，将其吸干。然后在每孔中加入50μL用Buffer A。
(3)在每孔中加入50μL标准品稀释液或样品，封口，并在室温下以200转/分钟的转速摇晃2小时。
(4)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入人TNF-α检测抗体溶液100μL，封板，室温振荡孵育1小时。
(5)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗4次。每孔加入100μL Avidin-HRP A溶液，封板，室温振荡孵育30分钟。
(6)将孔中的液体甩掉，然后用1X洗涤缓冲液清洗5次。最后一次清洗时，将孔浸泡在1X洗涤缓冲液中30秒至1分钟，将有助于背景最小化。每孔加入Substrate Solution F 100μL，避光孵育15分钟，不封板。含人TNF-α的孔应呈蓝色，其强度与浓度成比例。
(7)每孔加入Stop Solution 100μL，停止反应。溶液的颜色应由蓝色变为黄色。
(8)在30分钟内读取450nm的吸光度。
4.数据分析
抑制率％＝{1-(Con样品-Con空白)/(Con模型-Con空白)}*100
Con空白：空白孔中TNF-α浓度；
Con样品：样品孔中TNF-α浓度；
Con模型：模型孔中TNF-α浓度。
运用软件Graphpad Prism 5并采用计算公式XY-analysis/Transform X vulues uses X＝Log[X]/Nonlinear regression(curve fit)/Dose response-Inhibition/log(inhibitor)vs.response-Variable slope(four parameters)进行IC50曲线拟合并计算出IC50值。
5.试验结果：
结果如表4所示：
表4本发明化合物对PBMC细胞中TNF-α的体外抑制活性 注：1.A代表IC50≤10nΜ；B代表10nΜ<IC50≤30nΜ； 2.带*化合物使用的PBMC Donor ID为Z0268，其余化合物使用的PBMC Donor ID为Z0123。
试验结果表明，本发明化合物对LPS诱导的PBMC细胞中的TNF-α具有显著的抑制作用。
试验例4、小鼠药代动力学试验
1.试验方法：
血浆样品进行PK检测：ICR小鼠以10mg/kg灌胃或2mg/kg静脉给予化合物，于给药后的不同时间点(灌胃组：0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h；静脉组：0.083h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h)，由小鼠眼眶采血100μL(采用预肝素化100μL毛细采血管)置于肝素钠抗凝管中，2h内3000g离心10min分离得到小鼠血浆样品，采用甲醇蛋白沉淀，用HPLC-MS/MS法测定给药后小鼠血浆中的药物浓度，绘制药-时曲线并计算药代动力学参数，通过非房室模型统计矩参数描述化合物给药后小鼠体内的药代动力学行为。
全血样品进行PK检测：ICR小鼠以10mg/kg灌胃或2mg/kg静脉给予化合物，于给药后的不同时间点(灌胃组：0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h；静脉组：0.083h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h)，由小鼠眼眶静脉取血100μL(采用预肝素化100μL毛细采血管)置于肝素钠抗凝管中，即刻取小鼠眼眶静脉血50μL加入含有150μL甲醇(含0.2％甲酸)的1.5mL离心管中涡旋混匀后，用HPLC-MS/MS法测定给药后小鼠全血中的药物浓度，绘制药-时曲线并计算药代动力学参数，通过非房室模型统计矩参数描述化合物给药后小鼠体内的药代动力学行为。
2.试验结果：
对本发明化合物进行了上述药代动力学试验，结果见表5。
表5本发明化合物的小鼠药代动力学试验 注：1.NC表示未计算； 2.*表示灌胃组溶媒为2％DMSO+10％solutol+30％PEG400+58％水，其余化合物灌胃组溶媒为 2％DMSO+10％CrEL+88％水； 3.以上化合物静脉组溶媒均为5％DMSO+95％水。
试验结果表明，本发明化合物在小鼠体内吸收均较好。

Claims (53)

  1. 一种如式(I)所示的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
    其中，
    X、Z1各自独立地选自CH或N；
    Z2选自O或S；
    环A、环B各自独立地选自3-12元杂环基、C6-14芳基或5-12元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
    每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、-NO2、-ORa1、-SRa1、-N(Ra1)2、-S(O)2Ra1、-S(O)2N(Ra1)2、-S(O)Ra1、-S(O)(NRa1)Ra1、-P(O)(ORa1)2、-P(O)(N(Ra1)2)2、-CF2(Ra1)、-CF3、-CR2(ORa1)、-CR2(N(Ra1)2)、-C(O)Ra1、-C(O)ORa1、-C(O)N(Ra1)2、-C(O)N(Ra1)ORa1、-OC(O)Ra1、-OC(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)C(O)ORa1、-N(Ra1)C(O)Ra1、-N(Ra1)C(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)S(O)2Ra1、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、C6-12芳基或5-12元杂芳基；
    m选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
    每一Ra1各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、苯基、C4-7环烷基、C3-6环烯基、4-7元杂环烷基或5-6元杂芳基；其中，所述杂环烷基或杂芳基具有1-4个选自N、O、S的杂原子；
    R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、-O-C1-6烷基可被一个或多个F原子取代；
    L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基、5-12元杂芳基、C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基、-O-C2-12亚烯基、-O-C2-12亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基和5-12元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-12亚烷基、C2-12亚烯基和C2-12亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
    Rb选自氢或C1-6烷基；
    每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rc1、-C(O)-Rc1、-C(O)O-Rc1、-C(O)-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)C(O)O-Rc1、-N(Rc1)C(O)-Rc1、-N(Rc1)C(O)N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2O(Rc1)、-OC(O)Rc1、-OC(O)N(Rc1)(Rc1)、-Si(Rc1)、-S-Rc1、-S(O)Rc1、-S(O)(NH)Rc1、-S(O)2Rc1或-S(O)2N(Rc1)(Rc1)；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rc2取代；
    每一Rc1各自独立地选自H或C1-6烷基；
    每一Rc2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
    n、p各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
    表示单键或双键；
    LBM为连接酶结合部分。
  2. 如权利要求1所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
    其中，
    X、Z1各自独立地选自CH或N；
    Z2选自O或S；
    环A、环B各自独立地选自3-12元杂环基、C6-14芳基或5-12元杂芳基，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
    每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、-NO2、-ORa1、-SRa1、-N(Ra1)2、-S(O)2Ra1、-S(O)2N(Ra1)2、-S(O)Ra1、-S(O)(NRa1)Ra1、-P(O)(ORa1)2、-P(O)(N(Ra1)2)2、-CF2(Ra1)、-CF3、-CR2(ORa1)、-CR2(N(Ra1)2)、-C(O)Ra1、-C(O)ORa1、-C(O)N(Ra1)2、-C(O)N(Ra1)ORa1、-OC(O)Ra1、-OC(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)C(O)ORa1、-N(Ra1)C(O)Ra1、-N(Ra1)C(O)N(Ra1)2、-N(Ra1)S(O)2Ra1、C3-7环烷基、3-7元杂环烷基、C6-12芳基或5-12元杂芳基；
    m选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
    每一Ra1各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、苯基、C4-7环烷基、C3-6环烯基、4-7元杂环烷基或5-6元杂芳基；其中，所述杂环烷基或杂芳基具有1-4个选自N、O、S的杂原子；
    R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、-O-C1-6烷基可被一个或多个F原子取代；
    L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基、5-12元杂芳基、C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-12环烷基、C6-12芳基、3-12元杂环基和5-12元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-12亚烷基、C2-12亚烯基和C2-12亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
    Rb选自氢或C1-6烷基；
    每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rc1、-C(O)-Rc1、-C(O)O-Rc1、-C(O)-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)C(O)O-Rc1、-N(Rc1)C(O)-Rc1、-N(Rc1)C(O)N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2N(Rc1)(Rc1)、-N(Rc1)S(O)2O(Rc1)、-OC(O)Rc1、-OC(O)N(Rc1)(Rc1)、-Si(Rc1)、-S-Rc1、-S(O)Rc1、-S(O)(NH)Rc1、-S(O)2Rc1或-S(O)2N(Rc1)(Rc1)；其中， 所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rc2取代；
    每一Rc1各自独立地选自H或C1-6烷基；
    每一Rc2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
    n、p各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7或8；
    表示单键或双键；
    LBM为连接酶结合部分。
  3. 如权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述环A、环B各自独立地选自部分饱和的4-8元杂环基、5-8元杂芳基或C6-10芳基；
    优选地，所述环A、环B各自独立地选自部分饱和的4-6元杂环基、5-6元杂芳基或C6-8芳基；
    更优选地，所述环A选自部分饱和的5元杂环基或5元杂芳基，所述环B选自苯基或6元杂芳基。
  4. 如权利要求3所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    其被m个R1所取代；
    优选地，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    其被m个R1所取代。
  5. 如权利要求4所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    优选地，所述环A、环B一起形成的并环选自：
  6. 如权利要求5所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    优选
    优选地，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    优选
  7. 如权利要求6所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述环A、环B一起形成的并环选自：
    优选地，所述环A、环B一起形成的并环选自：
  8. 如权利要求1-6任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、C1-6烷基、卤素、羟基、氨基、-C(O)C1-6烷基、-COOH、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NH2、-C(O)N(C1-6烷基)2；m选自0、1或2；
    优选地，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、Br、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-COOH、-C(O)OCH2CH3、-C(O)OCH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2；m选自0或1；
    更优选地，所述每一R1各自独立地选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2；m选自0或1；
    最优选地，所述每一R1各自独立地选自氢或氰基；m选自0或1。
  9. 如权利要求1或2所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述R1选自7-9元杂环烷基，优选7元杂环烷基，更优选 进一步优选
  10. 如权利要求1-9任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述R2选自氢、C1-6烷基、C3-8环烷基、4-8元杂环烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、氨基或-O-C1-6烷基；
    优选地，所述R2选自氢、C1-3烷基、C4-6环烷基、4-6元杂环烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基、氨基或-O-C1-3烷基；
    更优选地，所述R2选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氨基、甲氧基或乙氧基；
    进一步优选地，所述R2选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、氨基或甲氧基；
    最优选地，所述R2为甲基。
  11. 如权利要求1-10任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-7环烷基、C6-8芳基、3-12元杂环基、5-8元杂芳基、C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-S-、-C(S)-、-C(S)-O-、-S(O)2-、-S(O)(Rb)＝N-、-S(O)2NH-、-C(O)-N(Rb)-、-C＝N-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-7环烷基、C6-8芳基、3-12元杂环基和5-8元杂芳基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-6亚烷基、C2-8亚烯基和C2-8亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
    Rb选自氢或C1-6烷基；
    每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基或3-8元杂环基；
    每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
    n、p各自独立地选自0、1、2、3、4或5。
  12. 如权利要求11所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基、5-8元杂芳基、C1-3亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-C(O)-N(Rb)-；其中，所述C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基和5-8元杂芳基可任选地各自独立地 被一个或多个Rc取代，所述C1-3烷基、C2-3烯基和C2-4炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
    Rb选自氢或C1-6烷基；
    每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基、3-8元杂环基；
    每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-3烷基或C4-8环烷基；
    Rh选自氢、C1-3烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-7元杂环基或5-6元杂芳基；
    n选自0、1、2或3。
  13. 如权利要求12所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基、5-8元杂芳基、C1-3亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)2-或-C(O)-N(Rb)-；Rb选自氢或C1-6烷基；
    优选地，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-11元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-；
    更优选地，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-7元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-；
    进一步优选地，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C4-6环烷基、4-7元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-C(O)-、-O-、-NH-、-NH-(CH2)2-或-C(O)-NH-，且L1、L2、L3、L4和L5中至少2个不选自键，至少1个选自C4-6环烷基或4-7元杂环基。
  14. 如权利要求1-10任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，其中，L5连接LBM，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-11环烷基、3-12元杂环基、C1-6亚烷基、C2-8亚烯基、C2-8亚炔基、-O-C2-8亚烯基、-O-C2-8亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-C(O)-N(Rb)-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-N(Rb)-、-O-C(O)-O-、 其中，所述C3-11环烷基和3-12元杂环基可任选地各自独立地被一个或多个Rc取代，所述C1-6亚烷基、C2-8亚烯基和C2-8亚炔基可任选地各自独立地被一个或多个Rd取代；
    Rb选自氢或C1-6烷基；
    每一Rc各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C1-6卤代烷基、C6-8芳基、5-8元杂芳基或3-8元杂环基；
    每一Rd各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-6烷基或C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基；
    n、p各自独立地选自0、1、2、3、4或5。
  15. 如权利要求14所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L表示-L1-L2-L3-L4-L5-，L5连接LBM，所述L1、L2、L3、L4和L5各自独立地选自键、C3-11环烷基(优选C3-9环烷基，更优选C3-7环烷基)、4-11元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-O-C2-4亚炔基、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-O-、-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-、-NH-、-C(O)-NH-或-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-，且L1、L2、L3、L4和L5中至少2个不选自键，至少1个选自C3-11环烷基(优选C3-9环烷基，更优选C3-7环烷基)或4-11元杂环基；
    Rb选自氢、甲基或乙基；
    n选自0、1、2或3；
    优选地，L1选自C3-7环烷基或4-11元杂环基；
    L2选自C1-3亚烷基、-C(O)-NH-、-C(O)-、-C(O)-(CH2)n-、-(CH2)n-C(O)-N(Rb)-、-N(Rb)-(CH2)n-或5-6元杂环基；
    L3选自键或5-10元杂环基；
    L4选自键、C1-3亚烷基、-C(O)-或-C(O)-(CH2)n-；
    L5选自键、5-6元杂环基、C1-3亚烷基、C2-4亚炔基、-N(Rb)-(CH2)n-、-O-C2-4亚炔基或-C(O)-(CH2)n-。
  16. 如权利要求1-15任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述L选自如下所示的结构及其立体异构体：
    优选
  17. 如权利要求1-16任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(II)化合物：
    其中，
    W选自C(Re)或N；
    表示单键或双键；当表示单键时，W1选自C(Re)2或NH；当表示双键时，W1选自C(Re)或N；
    Re选自氢或C1-6烷基；
    Cy1、Cy2各自独立地选自不存在、C6-12芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基；其中，所述芳基、杂芳基或杂环基可被1-5个Rf取代，所述杂环基、杂芳基具有1-4个独立的选自N、O、S的杂原子；
    每一Rf各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Rf1、-C(O)-Rf1、-C(O)O-Rf1、-C(O)-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)C(O)O-Rf1、-N(Rf1)C(O)-Rf1、-N(Rf1)C(O)N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2N(Rf1)(Rf1)、-N(Rf1)S(O)2O(Rf1)、-OC(O)Rf1、-OC(O)N(Rf1)(Rf1)、-Si(Rf1)、-S-Rf1、-S(O)Rf1、-S(O)(NH)Rf1、-S(O)2Rf1或-S(O)2N(Rf1)(Rf1)；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Rf2取代；
    每一Rf1各自独立地选自氢或C1-6烷基；
    每一Rf2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个氟原子取代；
    Rg选自C1-6烷基、C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基。
  18. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIa)化合物：
    其中，
    W选自C(Re)或N；
    Re选自氢或C1-6烷基；
    每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-O-C1-4烷基；
    q选自0、1、2或3。
  19. 如权利要求18所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIa’)化合物：
    其中，
    每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或-O-C1-4烷基；优选地，Rf选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或-O-C1-4烷基；
    q选自0、1、2或3；
    优选地，所述LBM选自：
  20. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIb)化合物：
    其中，
    W选自C(Re)或N；
    Re选自氢或C1-6烷基；
    每一Rf各自独立地选自F、Cl、Br、硝基、氰基、羟基、甲基或甲氧基；
    q选自0、1、2或3；
    优选地，所述LBM是式(IIb’)化合物或式(IIb”)化合物，优选式(IIb’)化合物：
    其中，Rf为F；
    更优选地，所述LBM选自：
    优选：
  21. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc)化合物：
    其中，
    W选自C(Re)或N；
    Re选自氢或C1-6烷基；
    环C、D和E各自独立地选自C6-8芳基、5-6元杂芳基或4-7元饱和或部分饱和的杂环基；其中，所述芳基、杂芳基或杂环基可被1-3个Ri取代；
    每一Ri各自独立地选自氧代、-N＝Rg、-C(Rh)＝N、-S(O)＝N-、亚磺酰胺、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基、-O-Ri1、-C(O)-Ri1、-C(O)O-Ri1、-C(O)-N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)C(O)O-Ri1、-N(Ri1)C(O)-Ri1、-N(Ri1)C(O)N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2N(Ri1)(Ri1)、-N(Ri1)S(O)2O(Ri1)、-OC(O)Ri1、-OC(O)N(Ri1)(Ri1)、Si(Ri1)、-S-Ri1、-S(O)Ri1、-S(O)(NH)Ri1、-S(O)2Ri1或-S(O)2N(Ri1)(Ri1)；其中，所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-15环烷基、C1-8卤代烷基、C6-12芳基、5-12元杂芳基、3-12元杂环基可被1-3个Ri2取代；
    每一Ri1各自独立地选自氢或C1-6烷基；
    每一Ri2各自独立地选自卤素、氧代、氰基、羟基、C1-6烷基、C3-8环烷基或-O-C1-6烷基；其中，所述C1-6烷基、-O-C1-6烷基可被1-3个F原子取代；
    Rg选自C1-6烷基、C4-12环烷基；
    Rh选自氢、C1-6烷基、C4-6环烷基、C6-8芳基、4-11元杂环基或5-8元杂芳基。
  22. 如权利要求21所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-1)化合物：
    其中，W、Y1和Y2各自独立地选自CH或N；
    优选地，所述LBM为：
  23. 如权利要求21所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-3)化合物：
    其中，W、M2和M3独立地选自CH或N；M1选自O或S；
    Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、硝基、氰基、羟基或甲氧基。
  24. 如权利要求23所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-3’)化合物：
    其中，W选自CH或N；Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
  25. 如权利要求24所述的化合物的立体异构体或其光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-3”)化合物或式(IIc-3”’)化合物：
    其中，W选自CH或N；Ri可选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
  26. 如权利要求23-25任一项所述的化合物的立体异构体或其光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM选自：
  27. 如权利要求21所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-5)化合物：
    其中，W和M4独立地选自CH或N；
    表示单键或双键；
    当表示单键时，W与X1相连时，Rf与X3相连；W与X3相连时，Rf与X1相连；X1、X3各自独立地选自CH或N，X2选自-C(O)-；
    当表示双键时，W与X3相连，X1选自O或S，X2选自CH或N，X3选自C；
    Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
  28. 如权利要求27所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-5’)化合物：
    其中，W和M4独立地选自CH或N；
    Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
  29. 如权利要求28所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-5”)化合物：
    其中，Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基；
    优选地，所述LBM选自：
  30. 如权利要求29所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIc-6)化合物：
    其中，W和M4独立地选自CH或N；
    优选地，所述LBM为：
  31. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IId)化合物：
    其中，
    W选自CH或N；
    表示单键或双键；当表示单键时，W1选自CH2或NH；当表示双键时，W1选自CH或N；
    Cy2选自6-8元芳基、5-6元杂芳基或7-10元杂环基；其中，所述芳基、杂芳基或杂环基可被1-2个Rf取代；
    每一Rf各自独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
  32. 如权利要求31所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，
    W选自CH或N；
    表示单键或双键；当表示单键时，W1选自CH2或NH；当表示双键时，W1选自CH或N；
    Cy2选自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或吡咯基；其中；所述苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、噻唑基或吡咯基可被1-2个Rf取代；
    每一Rf各自独立地选自F、Cl、Br、硝基、氰基、羟基或甲基。
  33. 如权利要求32所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，
    表示单键或双键；当表示单键时，W1选自CH2；当表示双键时，W1选自N；
    Cy2选自苯基、嘧啶基或吡啶基；其中，所述苯基、嘧啶基或吡啶基可被Rf取代；
    Rf选自F、Cl、Br、羟基或甲基。
  34. 如权利要求33所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM选自：
  35. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIe)化合物：
    其中，
    W选自CH或N；
    环F选自5-6元杂环基；其中，所述杂环基具有1-3个独立的选自N、O、S的杂原子；
    优选地，所述LBM是式(IIe’)化合物：
    其中，
    X4、X5各自独立地选自O或S；
    更优选地，所述LBM为：
  36. 如权利要求17所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(IIf)化合物：
    其中，W选自CH或N；
    Rf可选自卤素、硝基、氰基、羟基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基或-O-C1-4烷基；
    优选地，所述LBM是式(IIf’)化合物：
    其中，Rf可选自甲基、乙基或甲氧基；
    更优选地，所述LBM为：
  37. 如权利要求1-16任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述LBM是式(III)化合物：
    其中，R11选自氢、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
    优选地，所述LBM是式(IIIa)化合物或式(IIIb)化合物：
    其中，R11选自氢、C1-6烷基或C1-6卤代烷基；
    更优选地，所述所述LBM选自：
  38. 如权利要求1-37任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述化合物如下式(I’)所示：
    其中，环A选自5元杂环基或5元杂芳基，环B选自苯基或6元杂芳基；
    R1选自氢、氰基、甲基、F、羟基、氨基、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
    m选自0或1；
    X、Z1各自独立地选自CH或N；
    R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基。
  39. 如权利要求1-37任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述化合物如下式(I”)所示：
    其中，R1、m、R2、X、L和LBM如权利要求1-37任一项所定义；
    优选地，R1选自氢、氰基、甲基、F、Cl、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
    m选自0、1或2；
    X选自CH或N；
    R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基。
  40. 如权利要求1-37任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述化合物如下式(I”’)所示：
    其中，R1、m、R2、L和LBM如权利要求1-37任一项所定义；
    优选地，R1选自氢、氰基、甲基、F、Cl、羟基、氨基、-C(O)CH3、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或7-9元杂环烷基；
    m选自0、1或2；
    R2选自氢、C1-3烷基、氨基或甲氧基。
  41. 下列化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
  42. 一种药用组合物，其包含根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物；
    优选地，所述药用组合物还包含药学上可接受的辅料。
  43. 根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或根据权利要求42所述的药用组合物在制备预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的药物中的用途；
    优选地，所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物单独使用或与其他药物组合使用；
    优选地，所述由IRAK4介导的疾病、病症或病况为癌症、神经退化性疾病、病毒性疾病、自身免疫疾病、炎症性病症、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关的病况、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或中枢神经系统病症。
  44. 一种预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况的方法，其包括向患者施用预防和/或治疗有效剂量的根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或根据权利要求42所述的药用组合物；
    优选地，所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物单独使用或与其他药物组合使用；
    优选地，所述由IRAK4介导的疾病、病症或病况为癌症、神经退化性疾病、病毒性疾病、自身免疫疾病、炎症性病症、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关的病况、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或中枢神经系统病症。
  45. 根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或根据权利要求42所述的药用组合物，其用于预防和/或治疗由IRAK4介导的疾病、病症或病况；
    优选地，所述由IRAK4介导的疾病、病症或病况为癌症、神经退化性疾病、病毒性疾病、自身免疫疾病、炎症性病症、遗传性病症、激素相关疾病、代谢病症、与器官移植相关的病况、免疫缺陷病症、破坏性骨病、增生性病症、感染性疾病、与细胞死亡相关的病况、凝血酶诱发的血小板凝集、肝病、涉及T细胞活化的病理性免疫病况、心血管病症或中枢神经系统病症。
  46. 一种降解和/或抑制患者或生物样品中IRAK蛋白激酶(优选IRAK4)的方法，其包括给予所述患者根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或根据权利要求42所述的药用组合物，或使所述生物样品与根据权利要求1-41中任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物或根据权利要求42所述的药用组合物接触；
    优选地，所述化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物单独使用或与其他药物组合使用。
  47. 根据权利要求1-41中任一项所述的化合物的制备方法，所述制备方法为方法1或方法2：
    方法1：
    其中，式I化合物为根据权利要求1-41中任一项所述的化合物；
    优选地，方法1包括以下步骤：
    i)以化合物I-a1和甲胺或NH2-R2为基本原料，得到化合物I-a2；
    ii)以化合物I-a2和水合肼为基本原料，得到化合物I-a3；
    iii)以化合物I-a3和羧酸为基本原料，反应得到化合物I-a4；
    iv)化合物I-a4和劳森试剂反应得到化合物I-a5；
    v)以化合物I-a5和I-a6为基本原料，发生耦联反应得到化合物I-a7；
    vi)以化合物I-a7和连接酶结合部分为基本原料，通过缩合、还原胺化反应得到式I化合物；
    方法2：
    其中，式I化合物为根据权利要求1-41中任一项所述的化合物；
    优选地，方法2包括以下步骤：
    i)以化合物I-b1和甲胺或NH2-R2为基本原料，得到化合物I-b2；
    ii)以化合物I-b2和NIS为基本原料，得到化合物I-b3；
    iii)以化合物I-b3和硼酸频那醇酯为基本原料，反应得到化合物I-b4；
    iv)化合物I-b4和I-b5发生耦联反应得到化合物I-b6；
    v)以化合物I-b6和I-b7为基本原料，发生耦联反应得到化合物I-b8；
    vi)以化合物I-b8和连接酶结合部分为基本原料，通过缩合、还原胺化反应得到式I化合物。
  48. 式(III)化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
    其中，
    W、M2和M3各自独立地选自CH或N；
    当M3为CH时，R12选自氢、卤素(优选F、Cl或Br)、叔丁氧羰基、苄基、苄氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基或C1-3烷基；
    当M3为N时，R12选自氢、叔丁氧羰基、苄基、苄氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基或C1-3烷基；
    M1选自O或S；
    Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、硝基、氰基、羟基或甲氧基。
  49. 如权利要求48所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述式(III)化合物是式(III’)化合物：
    其中，
    R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
    W选自CH或N；
    Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
  50. 如权利要求49所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述式(III)化合物是式(III”)化合物或式(III”’)化合物：
    其中，
    R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
    W选自CH或N；
    Ri选自氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、F、Cl、羟基或甲氧基。
  51. 如权利要求48-50任一项所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述式(III)化合物选自：
    其中，R12选自氢、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3。
  52. 式(IV)化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物：
    其中，
    R13选自氢、卤素、氨基、羟基、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-NH-叔丁氧羰基、-NH-苄基、-NH-苄氧羰基、-CH2COOH、-COC1-3烷基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C3-12环烷基、3-12元杂环烷基、C6-12芳基、5-14元杂芳基或3-14元杂环基；
    W和M4各自独立地选自CH或N；
    Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基。
  53. 如权利要求52所述的化合物或其立体异构体、光学异构体、药用盐、前药、溶剂合物或同位素标记物，其中，所述式(IV)化合物是式(IV’)化合物：
    其中，
    R13选自氢、F、Cl、Br、叔丁氧羰基、-CH2-叔丁氧羰基、-CH2COOH或-COCH3；
    Rf选自氢、甲基、乙基、正丙基或异丙基；
    优选地，所述式(IV)化合物选自：
    其中，R13选自F、Cl或Br。
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