CN117143236A - 一种抗acth抗体及其制备方法、检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抗ACTH抗体及其制备方法、检测试剂盒,制备方法包括以下步骤:S1、对原ACTH抗体的VH‑CDR3区序列进行随机突变,并对CDR3区序列进行优化,优化后的CDR3区序列如SEQ ID NO.1所示,构建抗体噬菌体展示文库;S2、进行ACTH抗体的淘选,获得优选抗体;S3、对优选抗体进行重组表达纯化:将优选抗体序列与表达载体连接,表达得到单链抗体,纯化,筛选后得到优选单链抗体;S4、制备全长抗体,得到抗ACTH抗体。本发明解决了现有试剂盒灵敏度不足,导致无法准确检测ACTH含量的技术问题,实现了提高检测ACTH含量准确度的技术效果。
Description
技术领域
本发明涉及抗体技术领域,具体而言,涉及一种抗ACTH抗体及其制备方法、检测试剂盒。
背景技术
促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)也称为促皮质素,它主要是由垂体的前叶所分泌,除此之外,还发现于下丘脑、肾上腺髓质、肠道和胎盘等组织。ACTH在人体内的合成和分泌直接受到下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的调控,ACTH的分泌过程是脉冲式的和应变的,释放的频率和幅度与昼夜交替密切相关。ACTH参与调控糖皮质激素(glucocorticoids,GC)的合成与分泌,影响糖、脂肪和蛋白质的合成与代谢,调节心脑血管功能,提高机体抵抗力,促进神经损伤恢复与再生,还具有抗炎、免疫抑制、抗毒素、抗休克等作用。ACTH在促皮质腺中的分泌会受到机体应激状态的影响(例如烧伤、冻伤、中毒等),这些因素会激发肾上腺皮质激素的释放,促进肾上腺皮质的组织增生以及促皮质素的生成和分泌,增加相应的抵抗能力。
ACTH是由39个氨基酸构成的多肽类激素,分子量4500道尔顿。测定ACTH有助于判断下丘脑一垂体一肾上腺皮质的功能状态。ACTH检测常用于鉴别诊断下列疾病:垂体库欣综合征,ACTH合成垂体瘤(Nelsan综合征),伴ACTH缺乏的垂体功能减退和异位ACTH症候群。结合皮质醇测定,ACTH测定联合功能或刺激检测还能诊断确定糖皮质激素合成过多的原因。同样,ACTH测定可用于鉴别诊断肾上腺皮质功能减退症(阿狄森氏病)。在体检中属于常见的检测项目,其相关临床意义:(1)ACTH增高:见于肾上腺皮质增生,异源性ACTH分泌综合征,烧伤、创伤、手术、失血、剧痛、低血糖、注射垂体后叶加压素后、原发性慢性肾上腺皮质功能减退症、Nelson综合征、先天性肾上腺皮质增生症等;(2)ACTH降低:见于垂体前叶功能减退症、垂体前叶缺血性坏死、垂体瘤、外源性皮质醇增多症、肾上腺皮质肿瘤等。ACTH在体内的含量较少(正常值约7.3~63.3pg/ml),且半衰期很短,约10min。
存在的问题是:目前市面上很多试剂盒灵敏度不足,无法准确检测ACTH含量。
发明内容
本发明解决了现有试剂盒灵敏度不足,导致无法准确检测ACTH含量的技术问题,实现了提高检测ACTH含量准确度的技术效果。
为解决上述问题,本发明提供一种抗ACTH抗体的制备方法,包括以下步骤:S1、对原ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,并对CDR3区序列进行优化,优化后的CDR3区序列如SEQ ID NO.1所示,构建抗体噬菌体展示文库;S2、进行ACTH抗体的淘选,获得优选抗体;S3、对优选抗体进行重组表达纯化:将抗体序列与表达载体连接,表达得到单链抗体,纯化,筛选后得到优选单链抗体;S4、制备全长抗体,得到抗ACTH抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:本发明提供的抗ACTH抗体的制备方法,对ACTH抗体的VH-CDR3区进行改造优化,使抗体亲和力成熟,进而经过淘选获得最佳的抗ACTH抗体,然后通过单链抗体的重组表达和纯化,选择优选的单链抗体制备全长抗体。因此,通过上述制备方法得到的抗ACTH抗体灵敏度高,具有高度特异的抗原识别能力、高度的亲和力,并且具有独特的抗原决定簇识别位点,能够在ACTH抗原的免疫检测中获得优异的检测效率。
在本发明的一个实例中,步骤S1中,对ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,包括以下步骤:使用Trimer引物对CDR区域进行PCR扩增,得到的PCR扩增产物为突变后的DNA文库;其中,扩增所用引物分别如SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.4所示。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:对ACTH抗体序列进行分析,设计Trimer引物,进而利用Trimer引物对优选抗体的VH-CDR3区域进行改造优化,PCR扩增产物为突变后的DNA文库,筛选后,能够快速获得所需抗体。
在本发明的一个实例中,步骤S1还包括以下步骤:将PCR扩增产物与展示载体连接,构建抗体噬菌体展示文库。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:抗体噬菌体展示文库具有强大的筛选能力,能够满足高通量抗体的开发需求。
在本发明的一个实例中,步骤S2中,进行ACTH抗体的淘选,包括以下步骤:在PBS重悬后的二代抗体噬菌体中加入1-5%的酪蛋白,封闭1h;同时封闭空的离心管及磁珠1h;抗体噬菌体封闭1h后加入ACTH抗原,混合1h后,加入封闭好的磁珠,反应半小时;洗脱未结合的抗体噬菌体,更换封闭好的离心管,去除上清;用磁珠感染TG1进入下一轮筛选,筛选3-5轮,每轮筛选后随机挑选单克隆进行ELISA检测,挑选阳性单克隆测序,分析序列富集程度,选取序列进行表达。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:将噬菌体文库与固定抗原孵育,洗涤未结合的噬菌体,接着再洗脱与抗原特异性结合的噬菌体,进而富集到高亲和力的噬菌体。筛选到合适的噬菌体之后,进行抗体验证,测序获得正确的序列进行抗体的表达。
在本发明的一个实例中,步骤S2还包括以下步骤:将表达纯化得到的抗体进行亲和力检测,将检测结果按优到次排序,选取检测结果为优的抗体作为最佳的抗ACTH抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:通过亲和力检测,能够快速筛选得到具有高度亲和力的抗ACTH抗体,检测方便。
在本发明的一个实例中,步骤S3还包括以下步骤:对纯化得到的单链抗体进行亲和力检测。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:通过亲和力检测,能够筛选得到具有高度亲和力的单链抗体,通过该单链抗体制备的全长抗体,同时也具有高度亲和力。
在本发明的一个实例中,步骤S4包括以下步骤:将优选单链抗体的抗体序列插入全长抗体VH的CDR3区中,CHO细胞表达全长抗体,纯化,得到抗ACTH抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:上述制备方法操作简便快捷,效率高。
本发明还提供一种抗ACTH抗体,采用上述任一实例的制备方法制备得到。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:本发明提供的抗ACTH抗体具有高亲和力,有利于提高检测试剂盒的灵敏度,进而快速直观地反应患者的身体情况,有助于患者的诊断治疗,具有良好的市场价值。
在本发明的一个实例中,抗ACTH抗体的CDR3区序列如SEQ ID NO.5所示。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:最佳抗体的CDR3区序列如SEQ ID NO.5所示,对ACTH抗原具有特异的识别和结合能力,亲和力高。
本发明还提供一种ACTH检测试剂盒,包括上述实例的抗ACTH抗体。
与现有技术相比,采用该技术方案所达到的技术效果:根据本发明筛选得到的最佳的抗ACTH抗体,制备成试剂盒,试剂盒具有灵敏度高,特异性强,重复性好,准确度高的优点,且试剂盒成本低,能满足现阶段试剂开发的需求。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:
图1为本发明实施例提供的ACTH突变引物的PCR电泳图。
图2为本发明实施例提供的ACTH单链抗体表达电泳图。
图3为本发明实施例提供的ACTH抗体改造前fortebio亲和力测定结果图。
图4为本发明实施例提供的ACTH抗体改造后fortebio亲和力测定结果图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂,下面对本发明的具体实施例做详细的说明。
实施例一:
本发明提供一种优化后的CDR3区序列,由如SEQ ID NO.1所示替换为如SEQ IDNO.5所示,包括以下步骤:
S1、对原ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,并对CDR3区序列进行优化,优化后的CDR3区序列如SEQ ID NO.1所示,构建抗体噬菌体展示文库;
S2、进行ACTH抗体的淘选,获得优选抗体;
S3、对优选抗体进行重组表达纯化:将抗体序列与表达载体连接,表达得到单链抗体,纯化,筛选后得到优选单链抗体;
S4、制备全长抗体,得到抗ACTH抗体。
具体的,本发明提供的抗ACTH抗体的制备方法,对ACTH抗体的VH-CDR3区进行改造优化,使抗体亲和力成熟,进而经过淘选获得最佳的抗ACTH抗体,然后通过单链抗体的重组表达和纯化,选择优选的单链抗体制备全长抗体。因此,通过上述制备方法得到的抗ACTH抗体灵敏度高,具有高度特异的抗原识别能力、高度的亲和力,并且具有独特的抗原决定簇识别位点,能够在ACTH抗原的免疫检测中获得优异的检测效率。
具体的,表达载体为PET-22b载体。
进一步地,步骤S1中,对ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,包括以下步骤:
使用Trimer引物对CDR区域进行PCR扩增,得到的PCR扩增产物为突变后的DNA文库;
其中,扩增所用引物分别如SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.4所示。
具体的,对ACTH抗体序列进行分析,设计Trimer引物,进而利用Trimer引物对优选抗体的VH-CDR3区域进行改造优化,PCR扩增产物为突变后的DNA文库,筛选后,能够快速获得所需抗体。
进一步地,步骤S1还包括以下步骤:
将PCR扩增产物与展示载体连接,构建抗体噬菌体展示文库。
具体的,抗体噬菌体展示文库具有强大的筛选能力,能够满足高通量抗体的开发需求。
进一步地,步骤S2中,进行ACTH抗体的淘选,包括以下步骤:
在PBS重悬后的二代抗体噬菌体中加入1-5%的酪蛋白,封闭1h;同时封闭空的离心管及磁珠1h;
抗体噬菌体封闭1h后加入ACTH抗原,混合1h后,加入封闭好的磁珠,反应半小时;
洗脱未结合的抗体噬菌体,更换封闭好的离心管,去除上清;
用磁珠感染TG1进入下一轮筛选,筛选3-5轮,每轮筛选后随机挑选单克隆进行ELISA检测,挑选阳性单克隆测序,分析序列富集程度,选取序列进行表达。
具体的,将噬菌体文库与固定抗原孵育,洗涤未结合的噬菌体,接着再洗脱与抗原特异性结合的噬菌体,进而富集到高亲和力的噬菌体。筛选到合适的噬菌体之后,进行抗体验证,测序获得正确的序列进行抗体的表达。
进一步地,步骤S2还包括以下步骤:
将表达纯化得到的抗体进行亲和力检测,将检测结果按优到次排序,选取检测结果为优的抗体作为最佳的抗ACTH抗体。
具体的,通过亲和力检测,能够快速筛选得到具有高度亲和力的抗ACTH抗体,检测方便。
进一步地,步骤S3还包括以下步骤:
对纯化得到的单链抗体进行亲和力检测。
具体的,通过亲和力检测,能够筛选得到具有高度亲和力的单链抗体,通过该单链抗体制备的全长抗体,同时也具有高度亲和力。
进一步地,步骤S4包括以下步骤:
将优选单链抗体的抗体序列插入全长抗体VH的CDR3区中,CHO细胞表达全长抗体,纯化,得到抗ACTH抗体。
实施例二:
在一个具体实施例中,抗ACTH抗体的制备方法,具体包括:
一、对抗体进行亲和力成熟改造
1.抗体噬菌体库的构建
对实验室自产的ACTH杂交瘤抗体进行测序,对其中的可变区(VH)的CDR3区序列进行分析,并进行密码子优化,密码子优化后的序列如下所示:
ACTH-CDR3(SEQ ID NO.1):
AACGCGTTTAACTGGGATGAAGGCGGCTATAGCGGCATGGATTAT
设计Trimer引物,引物序列如下:
ACTH-F(SEQ ID NO.2):
ATGGCCCAGCCGGCCCATCATCATCATCATCAT
ACTH-ant1(SEQ ID NO.3):
GTGCGGCCGCGCTACTCACGGTCACGCTCGTGCCTTGGCCCCAATA ATCCATGCCGCTX6X7X8X9X10CCAGTTAAAC
ACTH-ant2(SEQ ID NO.4):
GTGCGGCCGCGCTACTCACGGTCACGCTCGTGCCTTGGCCCCAX1X2X3X4X5ATAGCCG
使用Trimer引物对CDR区域进行PCR扩增,得到的PCR扩增产物为突变后的DNA文库,PCR反应条件如下:
PCR结果参见图1,其中,M:Marker;1:ACTH-CDR3 1号库扩增;2:ACTH-CDR3 2号库扩增。
使用琼脂糖凝胶回收试剂盒胶回收800bp左右的条带。将载体PHEN1和PCR产物分别用用Sfi I酶和Not I酶进行双酶切,利用凝胶回收试剂盒回收酶切产物后利用T4 DNA连接酶进行连接。利用清洁回收试剂盒纯化连接产物。取150ng纯化好的连接产物,加入100uLTG1电转感受态中,进行电转,条件为2mm电转杯,2500v电压,加入培养基复苏培养后,取1uL梯度稀释涂平板,计算菌落数,同时挑单克隆进行PCR验证,根据克隆阳性率计算库容(库容量=克隆数×稀释倍数×PCR鉴定阳性率×10)。
2.构建噬菌体文库
接种至少10倍库容量的活细胞于20ml(250ml瓶)2YT/Glu 2%/amp+培养基,30℃,2-2.5h,到OD≈0.5。加入辅助噬菌体(20:1感染复数),37℃静置15min,220rpm,30-45min。离心3000g,10min。用200ml(2YT/AMP/KAN)重悬沉淀,30℃剧烈震荡过夜,3000g,4℃,20min取上清,加入1/5体积的PEG-NaCl,4℃放置>1h,4℃,10000rpm,20min,去上清。沉淀用PBS重悬,取10ul测定滴度,其余制备成终浓度25%的甘油,-20℃保存。
二、抗体噬菌体文库的淘选
PBS重悬后的噬菌体,加入1%的酪蛋白,封闭1h。同时封闭空离心管及磁珠1h。噬菌体封闭1h后加入抗原,继续反应1h。噬菌体-抗原反应1h后,加入封闭好的磁珠,继续反应半小时。开始洗脱未结合的噬菌体:PBST,洗涤8次;5%的酪蛋白,洗涤2次;PBS洗涤2次,更换封闭好的1.5ml的离心管。去除上清,将磁珠上的噬菌体经过感染TG1进入下一轮淘选,经过多轮淘选,每轮筛选后随机挑选单克隆进行ELISA检测,淘选前后噬菌体库阳性率参见表1和表2,挑选阳性单克隆测序,分析序列富集程度,选取序列进行表达。
表1未淘选的噬菌体库单克隆phage elisa结果
表2淘选3轮后噬菌体库单克隆phage elisa结果
三、单链抗体的重组表达和纯化
根据上述淘选获得的抗体阳性克隆的序列,送金斯瑞进行基因合成,并构建到pET22b(改造后)的SfiI和NotI位点,转化Roseeta(DE3)。将转化成功的克隆接种到5mL的LB培养基中37℃,200rpm活化6-8h,然后按照1%接种到50mL的LB培养基中,37℃培养至OD600=0.8~1,加入终浓度0.4mM的IPTG诱导,25℃,180rpm诱导过夜。4000g离心10min收菌取培养基上清,将离心得到的上清加入平衡好的His亲和柱中,进行洗脱。将收集到的目的蛋白透析到存储缓冲液中(Tris-HCl,pH8.0)。表达结果参见图2,利用pET22b构建的抗体蛋白大小在25-35kDa之间,其中,M:Marker;阴性:诱导前;上清:诱导后培养基上清;沉淀:诱导后全菌。
四、抗体的亲和力测定及全长抗体的制备
将得到的单链抗体用BCA试剂盒确定浓度,采用梯度KSCN法定亲和力的方法测定改造单链抗体与对照单链抗体的相对亲和力。选择相对较高的亲和力抗体,该抗体的CDR3序列见SEQ ID NO.5,根据该抗体序列插入原本全长抗体VH的CDR3区中,CHO细胞表达全长抗体,并用Protein G亲和柱进行纯化,得到抗体。通过fortebio设备检测抗体的亲和力,检测结果参见图3和图4。根据检测结果按优到次排序,选取检测结果为优的抗体作为最佳的抗ACTH抗体。
最佳ACTH-CDR3(SEQ ID NO.5):
AACGCGTTTAACTGGGATTTTGGTCCGCATAGCGGCATGGATTAT
实施例三:
本实施例提供一种抗ACTH抗体,采用上述任一实例的制备方法制备得到。
进一步的,抗ACTH抗体的CDR3区序列如SEQ ID NO.5所示。
本实施例提供的抗ACTH抗体具有高亲和力,有利于提高检测试剂盒的灵敏度,进而快速直观地反应患者的身体情况,有助于患者的诊断治疗,具有良好的市场价值。
实施例四:
本实施例提供一种ACTH检测试剂盒,包括上述实例的抗ACTH抗体。
具体的,将筛选到的最佳的抗ACTH抗体制备成检测ACTH的试剂盒,以检验其检测性能。
将外购ACTH抗体包被磁珠,搭配改造的抗体标记吖啶酯,组成试剂盒,加入校准品和随机样本后本后,样本中的相应抗原与磁微粒表面的特异性抗体相结合,同时也会和吖啶酯标记的另一株特异性单克隆抗体相结合,在磁微粒表面形成了特异性抗体-抗原-吖啶酯标记的抗体的免疫复合物,洗涤后,磁微粒表面的免疫复合物上的吖啶酯经过激发后发出光子。采用发光仪光学系统测定样本的相对发光强度,观察信噪比,检测结果参见表3和表4。
表3对照抗体制备的试剂盒化学发光验证检测结果
样本(pg/mL) | 平均值 | 第一测 | 第二测 | CV | 信噪比 |
空白 | 1,437 | 1509 | 1365 | 7.1% | 1.0 |
0.00 | 1,721 | 1528 | 1913 | 15.8% | 1.2 |
11.03 | 3,797 | 3548 | 4045 | 9.3% | 2.6 |
2383.05 | 513,091 | 513034 | 513148 | 0.0% | 357.1 |
随机样本1# | 12,875 | 12764 | 12985 | 1.2% | 9.0 |
随机样本2# | 18,774 | 18684 | 18864 | 0.7% | 13.1 |
随机样本3# | 16,021 | 15584 | 16458 | 3.9% | 11.1 |
随机样本4# | 9,259 | 9154 | 9364 | 1.6% | 6.4 |
随机样本5# | 5,815 | 5973 | 5657 | 3.8% | 4.0 |
随机样本6# | 9,932 | 10280 | 9584 | 5.0% | 6.9 |
表4改造抗体制备的试剂盒化学发光验证
样本(pg/mL) | 平均值 | 第一测 | 第二测 | CV | 信噪比 |
空白 | 1,369 | 1433 | 1304 | 6.7% | 1.0 |
0.00 | 1,489 | 1424 | 1553 | 6.1% | 1.1 |
11.03 | 5,552 | 5114 | 5989 | 11.1% | 4.1 |
2383.05 | 1,270,642 | 1185163 | 1356120 | 9.5% | 928.5 |
随机样本1# | 17,154 | 16597 | 17710 | 4.6% | 12.5 |
随机样本2# | 26,945 | 26207 | 27682 | 3.9% | 19.7 |
随机样本3# | 22,762 | 22635 | 22889 | 0.8% | 16.6 |
随机样本4# | 11,739 | 11674 | 11803 | 0.8% | 8.6 |
随机样本5# | 6,934 | 7218 | 6650 | 5.8% | 5.1 |
随机样本6# | 12,935 | 13276 | 12594 | 3.7% | 9.5 |
根据表3和表4的检测结果可知,本发明实施例筛选到的最佳抗ACTH抗体制备的检测试剂盒灵敏度有显著地提升,且特异性强,多次测定后数据偏差<5%,重复性好,准确度高,且试剂盒成本低,能满足现阶段试剂开发的需求。
根据本发明筛选得到的最佳的抗ACTH抗体,制备成试剂盒,进行性能验证,显示该试剂盒具有灵敏度高,特异性强,重复性好,准确度高的优点,且试剂盒成本低,能满足现阶段试剂开发的需求。
综上所述,本发明提供的抗ACTH抗体的制备方法,利用Trimer引物对优选抗体的VH-CDR3区域进行改造优化,使抗体亲和力成熟,经过淘选获得最佳的抗ACTH抗体。并提供了所得最佳抗体的CDR3区序列,能够制备得到对ACTH抗原具有特异的识别和结合能力的抗体,最终筛选得到的抗体亲和力可达到2.3E-10,且具有独特的抗原决定簇识别位点,因此,显示出本发明提供的抗体制备方法能够充分发挥抗体的优越性能,开发周期短。
虽然本发明披露如上,但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员,在不脱离本发明的精神和范围内,均可作各种更动与修改,因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (10)
1.一种抗ACTH抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、对原ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,并对CDR3区序列进行优化,优化后的CDR3区序列如SEQ ID NO.1所示,构建抗体噬菌体展示文库;
S2、进行ACTH抗体的淘选,获得优选抗体;
S3、对所述优选抗体进行重组表达纯化:将优选抗体序列与表达载体连接,表达得到单链抗体,纯化,筛选后得到优选单链抗体;
S4、制备全长抗体,得到所述抗ACTH抗体。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中,对ACTH抗体的VH-CDR3区序列进行随机突变,包括以下步骤:
使用Trimer引物对CDR区域进行PCR扩增,得到的PCR扩增产物为突变后的DNA文库;
其中,扩增所用引物分别如SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1还包括以下步骤:
将所述PCR扩增产物与展示载体连接,构建所述抗体噬菌体展示文库。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S2中,进行ACTH抗体的淘选,包括以下步骤:
在PBS重悬后的二代抗体噬菌体中加入1-5%的酪蛋白,封闭1h;同时封闭空的离心管及磁珠1h;
抗体噬菌体封闭1h后加入ACTH抗原,混合1h后,加入封闭好的磁珠,反应半小时;
洗脱未结合的抗体噬菌体,更换封闭好的离心管,去除上清;
用磁珠感染TG1进入下一轮筛选,筛选3-5轮,每轮筛选后随机挑选单克隆进行ELISA检测,挑选阳性单克隆测序,分析序列富集程度,选取序列进行表达。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S2还包括以下步骤:
将表达纯化得到的抗体进行亲和力检测,将检测结果按优到次排序,选取检测结果为优的抗体作为最佳的抗ACTH抗体。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S3还包括以下步骤:
对纯化得到的单链抗体进行亲和力检测。
7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S4包括以下步骤:
将所述优选单链抗体的抗体序列插入原全长抗体VH的CDR3区中,CHO细胞表达全长抗体,纯化,得到所述抗ACTH抗体。
8.一种抗ACTH抗体,其特征在于,采用权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备得到。
9.根据权利要求8所述的抗ACTH抗体,其特征在于,所述抗ACTH抗体的CDR3区序列如SEQ ID NO.5所示。
10.一种ACTH检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求8或9所述的抗ACTH抗体。
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