CN117100674A - 一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物0.5‑2.6份、抗菌植物提取物2‑5份、保湿剂1‑4份、皮肤调理剂0.2‑1.8份、pH调节剂0.05‑0.5份、羟乙基纤维素0.02‑0.12份、去离子水30‑50份。黑水虻提取物中包含抗菌肽、月桂酸等抗菌成分，协同抗菌植物提取物及其他成分，在维持肌底微生态平衡，为肌肤细胞提供活力的同时，灭杀或者抑制细菌生长，有效发挥抗菌功效。
Description
技术领域
本发明涉及皮肤护理技术领域，具体涉及一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用。
背景技术
近年来，随着人们对自然疗法的不断增强，黑水虻养殖规模大，来源易得，成本投入不高，因其富含多种有益物质，如蛋白肽、抗菌肽、甲壳素、月桂酸等，引起了广泛的关注。黑水虻虫体内的天然抗菌肽能够刺激免疫细胞分泌免疫因子抵抗病原菌的侵害，高含量的月桂酸具有极好的抑菌效果，可以替代防腐剂的使用同时起到抑菌功效，具有独特的抗菌、无毒和无刺激等优点。
研究表明，黑水虻体内的抗菌肽成分可以有效的抵抗金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌等病原菌，还富含多种氨基酸、有益菌和微量元素，目前常应用于水产养殖、饲料等领域的应用，在皮肤护理领域还具有极好的市场潜力，如何将黑水虻提取物应用于护肤品中，发挥其独特的抗菌效果，是目前研究的一大方向。
发明内容
本发明为解决上述技术问题和需求，公开了一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，黑水虻提取物中包含多种活性成分，能够为皮肤提供所需的微量元素和营养，调节皮肤微生态平衡，杀灭或者抑制细菌生长，起到良好的抗菌作用。
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
本发明提供一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物0.5-2.6份、抗菌植物提取物2-5份、保湿剂1-4份、皮肤调理剂0.2-1.8份、pH调节剂0.05-0.5份、羟乙基纤维素0.02-0.12份、去离子水30-50份。
优选地，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物1.3-1.8份、抗菌植物提取物3-4份、保湿剂2-3份、皮肤调理剂0.8-1.2份、pH调节剂0.25-0.3份、羟乙基纤维素0.06-0.08份、去离子水38-42份。
优选地，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物1.5份、抗菌植物提取物3.5份、保湿剂2.5份、皮肤调理剂1份、pH调节剂0.28份、羟乙基纤维素0.07份、去离子水40份。
优选地，所述保湿剂由甘油、乙基己基甘油和透明质酸钠按照重量份1：（0.2-0.6）：（0.42-0.68）组成。
优选地，所述皮肤调理剂选自棕榈酰寡肽、二裂酵母发酵产物溶胞物、腺苷中的一种或多种。
优选地，所述pH调节剂选自氢氧化钾、精氨酸、柠檬酸中的一种。
优选地，所述抗菌植物提取物选自山金车花提取物、桧柏提取物、牡丹根提取物、龙胆提取物、洋甘菊提取物、艾蒿提取物、茶叶提取物中的两种或两种以上。
优选地，所述抗菌植物提取物由牡丹根提取物和桧柏提取物按照重量份1：（0.38-0.62）组成。
优选地，所述黑水虻提取物的制备方法为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至70-100目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5-6，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：（0.012-0.032）：（0.006-0.018），设置摇床温度为50-60℃、功率为500-600W、转速为300-400rmp，酶解2-4h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温30-60min，于4℃、12000r/min条件下离心20-40min，过截留分子量为80-100KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1-2h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过SephadexG100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为1-3BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
优选地，所述具有抗菌作用的产品的制备方法包括以下步骤：
S21、将保湿剂、皮肤调理剂、羟乙基纤维素溶于去离子水中，搅拌均匀后加热至55-75℃，得到第一混合物；
S22、将抗菌植物提取物、1-3倍体积的去离子水，设置超声振荡水浴锅的超声处理功率为300-500W，温度为45-55℃，震荡15-45min，得到第二混合物；
S23、将第一混合物和第二混合物混合均匀后，控制搅拌速度为800-1000rmp，搅拌5-10min，再于转速1500-1800rmp条件下均质10-20min；
S24、升温至80-90℃，再缓慢加入黑水虻提取物、pH调节剂，调节pH至5.4-6.6，控制搅拌速度为1000-1200rmp，搅拌3-6h后，降温至30℃杀菌4h后进行萃取，即得到具有抗菌作用的产品。
本发明的有益效果：
本发明所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其中的黑水虻提取物无毒、无刺激，富含多种活性成分，同抗菌植物提取物、保湿剂等成分复配，能够在维持肌底微生态环境平衡的同时，为肌肤提供所需营养，抑制细菌增殖生长或者灭杀细菌，具有良好的抗菌功效。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1.
本实施例的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物0.5份、抗菌植物提取物2份、保湿剂1份、皮肤调理剂0.2份、pH调节剂0.05份、羟乙基纤维素0.02份、去离子水30份。
本实施例的保湿剂由甘油、乙基己基甘油和透明质酸钠按照重量份1：0.2：0.42组成。
本实施例的皮肤调理剂为棕榈酰寡肽。
本实施例的pH调节剂为柠檬酸。
本实施例的抗菌植物提取物由牡丹根提取物和桧柏提取物按照重量份1：0.38组成。
本实施例的黑水虻提取物的制备方法为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至70目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：0.012：0.006，设置摇床温度为50℃、功率为500W、转速为300rmp，酶解2h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温30min，于4℃、12000r/min条件下离心20min，过截留分子量为80KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过SephadexG100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为1BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
本实施例的具有抗菌作用的产品的制备方法包括以下步骤：
S21、将保湿剂、皮肤调理剂、羟乙基纤维素溶于去离子水中，搅拌均匀后加热至55℃，得到第一混合物；
S22、将抗菌植物提取物、1倍体积的去离子水，设置超声振荡水浴锅的超声处理功率为300W，温度为45℃，震荡15min，得到第二混合物；
S23、将第一混合物和第二混合物混合均匀后，控制搅拌速度为800rmp，搅拌5min，再于转速1500rmp条件下均质10min；
S24、升温至80℃，再缓慢加入黑水虻提取物、pH调节剂，调节pH至5.4，控制搅拌速度为1000rmp，搅拌3h后，降温至30℃杀菌4h后进行萃取，即得到具有抗菌作用的产品。
实施例2.
本实施例的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物2.6份、抗菌植物提取物5份、保湿剂4份、皮肤调理剂1.8份、pH调节剂0.5份、羟乙基纤维素0.12份、去离子水50份。
本实施例的保湿剂由甘油、乙基己基甘油和透明质酸钠按照重量份1：0.6：0.68组成。
本实施例的皮肤调理剂为棕榈酰寡肽。
本实施例的pH调节剂为柠檬酸。
本实施例的抗菌植物提取物由牡丹根提取物和桧柏提取物按照重量份1：0.62组成。
本实施例的黑水虻提取物的制备方法为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至100目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至6，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：0.032：0.018，设置摇床温度为60℃、功率为600W、转速为400rmp，酶解4h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温60min，于4℃、12000r/min条件下离心40min，过截留分子量为100KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附2h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过SephadexG100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为3BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
本实施例的具有抗菌作用的产品的制备方法包括以下步骤：
S21、将保湿剂、皮肤调理剂、羟乙基纤维素溶于去离子水中，搅拌均匀后加热至55℃，得到第一混合物；
S22、将抗菌植物提取物、3倍体积的去离子水，设置超声振荡水浴锅的超声处理功率为500W，温度为55℃，震荡45min，得到第二混合物；
S23、将第一混合物和第二混合物混合均匀后，控制搅拌速度为1000rmp，搅拌10min，再于转速1800rmp条件下均质20min；
S24、升温至90℃，再缓慢加入黑水虻提取物、pH调节剂，调节pH至6.6，控制搅拌速度为1200rmp，搅拌6h后，降温至30℃杀菌4h后进行萃取，即得到具有抗菌作用的产品。
实施例3.
本实施例的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物1.5份、抗菌植物提取物3.5份、保湿剂2.5份、皮肤调理剂1份、pH调节剂0.28份、羟乙基纤维素0.07份、去离子水40份。
本实施例的保湿剂由甘油、乙基己基甘油和透明质酸钠按照重量份1：0.4：0.55组成。
本实施例的皮肤调理剂为棕榈酰寡肽。
本实施例的pH调节剂为柠檬酸。
本实施例的抗菌植物提取物由牡丹根提取物和桧柏提取物按照重量份1：0.5组成。
本实施例的黑水虻提取物的制备方法为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至85目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5.5，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：0.022：0.012，设置摇床温度为55℃、功率为550W、转速为350rmp，酶解3h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温45min，于4℃、12000r/min条件下离心30min，过截留分子量为90KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1.5h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过SephadexG100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为2BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
本实施例的具有抗菌作用的产品的制备方法包括以下步骤：
S21、将保湿剂、皮肤调理剂、羟乙基纤维素溶于去离子水中，搅拌均匀后加热至65℃，得到第一混合物；
S22、将抗菌植物提取物、2倍体积的去离子水，设置超声振荡水浴锅的超声处理功率为400W，温度为50℃，震荡30min，得到第二混合物；
S23、将第一混合物和第二混合物混合均匀后，控制搅拌速度为900rmp，搅拌7.5min，再于转速1750rmp条件下均质15min；
S24、升温至85℃，再缓慢加入黑水虻提取物、pH调节剂，调节pH至6，控制搅拌速度为1100rmp，搅拌4.5h后，降温至30℃杀菌4h后进行萃取，即得到具有抗菌作用的产品。
对比例1.
与实施例3不同是不含黑水虻提取物。
对比例2.
与实施例3不同是不含抗菌植物提取物。
对比例3.
与实施例3不同的是黑水虻提取物的制备方法不同，为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至85目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5.5，水解3h，得到水解液；
S13、将水解液置于100℃水浴保温45min，于4℃、12000r/min条件下离心30min，过截留分子量为90KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1.5h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过SephadexG100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为2BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
对比例4.
与实施3不同的是黑水虻提取物的制备方法不同。
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至85目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5.5，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：0.022：0.012，设置摇床温度为55℃、功率为550W、转速为350rmp，酶解3h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温45min，于4℃、12000r/min条件下离心30min，过截留分子量为90KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加2%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1.5h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，控制洗脱速度为2BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
选取皮肤状态健康的20±2g的小鼠45只，分为9组，每组5只小鼠，随机分为正常组、阳性组和给药组，观察涂抹24小时后受试部位，对比前后测得细菌率，记录各组的抗菌率，测试结果如表1所示。
其中，正常组即往小鼠皮肤上涂抹生理盐水，给药组即在小鼠同一位置涂抹含有金黄色葡萄球菌的样液，阳性组即在小鼠同一位置涂抹由实施例1-3、对比例1-4制得的水乳产品。
表1
从表1中可看出本发明的产品各组分协同增效，能够有效抑制细菌增长，具有良好的抗菌效果。
从实施例1-3看出，本发明所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其中的黑水虻提取物与抗菌植物提取物互配，同其他组分共同作用，能够为皮肤肌底提供所需营养，促进表皮细胞活力，有效杀灭或者抑制细菌，起到有效的抗菌效果。
对比实施例3与对比例1、对比例2可知，黑水虻提取物与抗菌植物提取物互配制备的产品，在抗菌作用上更为明显。
对比实施例3与对比例3、对比例4可知，本发明借助复合酶对黑水虻进行提取，在提取后进行一系列的脱色、洗脱分离，可以更为有效地提取黑水虻中的活性成分，制备得到的产品抗菌效果更优。
以上述根据本发明的理想实施例为启示，应当指出，本发明的技术性范围不局限于说明书上的内容，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物0.5-2.6份、抗菌植物提取物2-5份、保湿剂1-4份、皮肤调理剂0.2-1.8份、pH调节剂0.05-0.5份、羟乙基纤维素0.02-0.12份、去离子水30-50份。
2.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物1.3-1.8份、抗菌植物提取物3-4份、保湿剂2-3份、皮肤调理剂0.8-1.2份、pH调节剂0.25-0.3份、羟乙基纤维素0.06-0.08份、去离子水38-42份。
3.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述具有抗菌作用的产品按重量份计包括：黑水虻提取物1.5份、抗菌植物提取物3.5份、保湿剂2.5份、皮肤调理剂1份、pH调节剂0.28份、羟乙基纤维素0.07份、去离子水40份。
4.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述保湿剂由甘油、乙基己基甘油和透明质酸钠按照重量份1：（0.2-0.6）：（0.42-0.68）组成。
5.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述皮肤调理剂选自棕榈酰寡肽、二裂酵母发酵产物溶胞物、腺苷中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述pH调节剂选自氢氧化钾、精氨酸、柠檬酸中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述抗菌植物提取物选自山金车花提取物、桧柏提取物、牡丹根提取物、龙胆提取物、洋甘菊提取物、艾蒿提取物、茶叶提取物中的两种或两种以上。
8.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述抗菌植物提取物由牡丹根提取物和桧柏提取物按照重量份1：（0.38-0.62）组成。
9.根据权利要求1所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述黑水虻提取物的制备方法为：
S11、取黑水虻幼虫进行杀菌消毒，清洗干燥后过20目筛，液氮冷冻后粉碎至70-100目，得到黑水虻幼虫粉；
S12、将黑水虻幼虫粉溶于去离子水中，添加柠檬酸将pH调节至5-6，加入木瓜蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶、胰蛋白酶与黑水虻虫粉按重量份比值为1：（0.012-0.032）：（0.006-0.018），设置摇床温度为50-60℃、功率为500-600W、转速为300-400rmp，酶解2-4h，得到酶解液；
S13、将酶解液置于100℃水浴保温30-60min，于4℃、12000r/min条件下离心20-40min，过截留分子量为80-100KD的超滤膜，得到第一滤液；
S14、往第一滤液中添加3%的活性炭进行脱色，控制吸附温度为30℃，吸附1-2h后，过200目滤布，得到第二滤液;
S15、将第二滤液过200目硅胶柱层析，用无水乙醇进行洗脱后，经过Sephadex G100凝胶柱层析，再用无水乙醇进行洗脱纯化，控制洗脱速度为1-3BV/h，收集乙醇溶液，干燥，即得黑水虻提取物。
10.根据权利要求1-9其中任一项所述的一种黑水虻提取物及其在制备具有抗菌作用的产品中的应用，其特征在于，所述具有抗菌作用的产品的制备方法包括以下步骤：
S21、将保湿剂、皮肤调理剂、羟乙基纤维素溶于去离子水中，搅拌均匀后加热至55-75℃，得到第一混合物；
S22、将抗菌植物提取物、1-3倍体积的去离子水，设置超声振荡水浴锅的超声处理功率为300-500W，温度为45-55℃，震荡15-45min，得到第二混合物；
S23、将第一混合物和第二混合物混合均匀后，控制搅拌速度为800-1000rmp，搅拌5-10min，再于转速1500-1800rmp条件下均质10-20min；
S24、升温至80-90℃，再缓慢加入黑水虻提取物、pH调节剂，调节pH至5.4-6.6，控制搅拌速度为1000-1200rmp，搅拌3-6h后，降温至30℃杀菌4h后进行萃取，即得到具有抗菌作用的产品。
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