CN117089462A - 一株寡雄腐霉菌菌株emf915及其应用 - Google Patents

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Abstract

一株寡雄腐霉菌(Pythiumoligandrum)菌株EMF915，于2022年05月24日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2022710，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭镰刀菌生物农药中的用途,该农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，1mL液体生物农药中含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,1g固体生物农药中含有2～5×107cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。生物农药经实验室和田间实验证明，对镰刀菌引起的作物腐烂病有明显抑制和杀灭作用，杀灭效果在68％以上，可用于制备杀灭镰刀菌的生物农药，也可用于制备治疗皮肤水肿、红斑、黑褐色结痂、角膜炎、角膜溃疡、内眼炎、骨髓炎、关节炎、鼻窦感染的药物。

Description

一株寡雄腐霉菌菌株EMF915及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及寡雄腐霉菌(Pythiumoligandrum)。
背景技术
据粮农组织估计，每年植物病害给全球经济造成的损失超过2200亿美元。其中约70％～80％的作物病害是受土传真菌侵染所致，该类土传真菌在土壤中或作物残余物中以菌核、分生孢子等抗性繁殖体在不良环境中存活，寄主范围广泛，可以通过分泌降解酶或毒素破坏或杀死寄主组织，同时还能产生菌丝体从寄主中吸收养分，进而导致植物变色、坏死、腐烂、萎蔫、畸形。研究显示，土传真菌病害隐蔽性、传染性、爆发性和毁灭性强，还会随着空气、雨水、灌溉、农事操作等途径传播，当在温湿度条件合适时，短期内可能造成病害的流行和爆发。
镰刀菌是一种土壤中常见的致病真菌，其致病性主要是破坏植物体结构，分泌次生代谢物使作物植株致病，从而导致作物大面积死亡，严重影响作物的产量和品质，给农业生产带来巨大的经济损失。该菌在世界范围内不同气候条件下均有分布，在温带和热带地区的耕作土壤中有分布、生长和繁衍，还能在严寒的北极和干旱炎热的沙漠上也能生长造成作物病害。镰刀菌可侵染多种植物包括粮食作物、经济作物、药用植物及观赏植物，从而可能引起不同植物的根腐、茎腐、茎基腐、花腐和穗腐等多种病害，寄主植物物种达100余种，尤其对农作物、花卉和水果等具有很强的破环性。
镰刀菌一般通过侵染寄主植物维管束系统，进而破坏作物的输导组织维管束，并可能产生毒素危害作物，造成作物萎蔫死亡，致使作物产量和品质下降，一直是生产上最难防治的重要病害之一，在世界范围内已经造成许多毁灭性的植物病害。如尖孢镰刀菌从根系侵染植物维管束系统后，向地上部分扩展，分泌细胞壁降解酶降解植物细胞壁，产生的降解产物果胶就会阻塞宿主植物导管，阻碍宿主正常生理活动，导致植物萎蔫、死亡，如山东生姜茎腐病的致病菌，致病率可以达到90％以上。禾谷镰刀菌在侵入植株后，分泌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇，破坏植物细胞结构，导致植物染病致死，该菌所产生的毒素可以作用于质膜、叶绿体膜、线粒体膜和核膜，使得小麦的幼根及胚的细胞膜通透性增加，使小麦更易染病。串珠镰刀菌等除了引起根腐和茎基腐以外，还引起顶腐、穗腐等症状，是引起玉米猝倒病和苗枯病的致病菌；三线镰刀菌和腐皮镰刀菌是引起宁夏黄芪根腐病、茎腐病以及黑头病的致病菌，致使黄芪芦头发黑，显著影响黄芪的质量和产量。
通过改变土壤环境可以预防镰刀菌危害的有效措施之一，如农艺上多采用轮作方式改善土壤结构，减少该类菌发生率。生物防治通过细菌、真菌和放线菌等微生物对致病镰刀菌的拮抗抑制作用进行防治，抑菌效果显著。化学处理方法疗效显著，但副作用明显，对环境生态破坏极大。寡雄腐霉被捷克开发用来生产生物农药，抑制或杀灭多种真菌性微生物病害，进而缓解或减少由此引起的农作物病害。EP2503892B1专利提供了有关利用寡雄腐霉卵孢子制剂减少农作物病害损失以及采后减损的方法和技术。但就世界范围内而言，目前仍然缺乏有效防治镰刀菌病害的寡雄腐霉菌株资源和技术。
通过开发生物处理手段缓解或清除镰刀菌引起皮肤病的研究和技术手段相对较少。CN110225759A专利中用寡雄腐霉卵孢子或游动孢子及其菌丝体被用来开发和用于于治疗皮肤和粘膜上的皮肤真菌病和酵母感染。该专利开创了寡雄腐霉作为生物处理手段防治人畜皮肤病和先例。比较而言，世界范围内还是缺乏用于人畜皮肤真菌性病害的生物处理手段，如寡雄腐霉的菌株资源和专门用于对镰刀菌病有防效的技术。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题在于提供一株寡雄腐霉菌菌株EMF915。
本发明所要解决的另一个技术问题在于为寡雄腐霉菌菌株EMF915提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：一株寡雄腐霉菌(Pythiumoligandrum)菌株EMF915，于2022年05月24日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M 2022710，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学，其核苷酸序列如下：
tccgtaggtgaacctgcggaaggatcattaccacacctaaaaactttccacgtgaaccgt 60
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gtatcagtgtccgtacatcaaacttgcctttctttttttgtgtagtcaaaattagagatg 420
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1.寡雄腐霉菌菌株EMF915的分离方法
取样：采用常规五点取样法于2019年7月从云南省普洱市澜沧拉祜族自治县东回镇东岗村多处山区采集植物根际土壤，称取10～15g土壤，放入装有100mL加有灭菌玻璃珠的无菌蒸馏水中，180转/分钟28℃震荡40～60分钟，取上清液，得到菌液，放入冰箱内0±1℃保存，备用。
菌株分离：取菌液用蒸馏水稀释至10-6～10-1，分别吸取100μL，涂布在PDA平板上，28℃培养3天，根据产卵孢子特征进行分离纯化，得到寡雄腐霉菌菌株EMF915。
2.寡雄腐霉菌株EMF915的鉴定
(1)鉴定形态特征
寡雄腐霉菌菌株EMF915在PDA平板上菌丝呈气生，菌落呈白色，圆形，偶长至皿顶，菌丝为无色，蓬松棉絮状，菌丝无隔(多核)，结果见图1。在图1中，A图是寡雄腐霉菌菌株EMF915在PDA平板上菌丝体的主视图，B图是寡雄腐霉菌菌株EMF915在PDA平板上菌丝体的后视图，C图是寡雄腐霉菌菌株EMF915在PDA平板上菌丝体放大10倍的形态图，D图是寡雄腐霉菌菌株EMF915在PDA平板上菌丝体放大40倍的形态图。
(2)分子发育分析
PCR扩增ITS序列
根据真菌rRNA的ITS部分区域扩增采用通用上游引物ITS1
5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’和下游引物ITS4
5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’，在如下反应体系下进行PCR扩增反应：
2×TaqPCRMasterMIXⅡ10μL，10μM的ITS1引物1μL，10μM的ITS4引物1μL，模板DNA1μL，用双蒸水定容至20μL。其中，PCR的反应程序如下：
94℃变性3分钟，36轮循环，每个循环98℃变性10秒，52℃退火30秒，72℃复性1分钟，72℃延伸2分钟。经1％琼脂糖凝胶电泳检测，送至上海生工生物工程公司进行测序，通过BLAST搜索所得序列的相似序列，并采用邻接法在MEGA7.0软件中构建系统发育树，结果如图2，经初步分类鉴定，所分离的菌(Pythiumoligandrum)为菌株EMF915。
核苷酸序列测序结果如下：
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寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭串珠镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭腐皮镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭尖孢镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915，在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭茄科镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭三线镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
寡雄腐霉菌菌株EMF915的核苷酸序列与已报道的寡雄腐霉菌株核苷酸序列有明显差异。
采用本发明寡雄腐霉菌菌株EMF915所制备的固体或液体生物农药，经实验室和田间试验证明，寡雄腐霉菌菌株EMF915对镰刀菌引起的作物的腐烂病有明显的抑制和杀灭作用，杀灭效果在68％以上，可用于制备杀灭镰刀菌的固体或液体生物农药。
寡雄腐霉菌菌株EMF915也可在制备治疗皮肤水肿、红斑、黑褐色结痂、角膜炎、角膜溃疡、内眼炎、骨髓炎、关节炎、鼻窦感染药物中的用途。
附图说明
图1为寡雄腐霉菌EMF915生长形态结果图。
图2为寡雄腐霉菌EMF915建树结果图
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
一株寡雄腐霉菌(Pythiumoligandrum)菌株EMF915，于2022年05月24日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2022710，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学，其核苷酸序列如下：
tccgtaggtgaacctgcggaaggatcattaccacacctaaaaactttccacgtgaaccgt 60
tataattatgttctgtgcttcgtcgcaagacttgaggctgaacgaaggtgagtctgcgtc 120
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上述的菌株在制备抑制或杀灭串珠镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2×108cfu/g～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2×108cfu/g～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。本实施例的液体生物农药为水剂或悬浮剂或油剂，本实施例的固体生物农药为软膏剂或凝胶或喷雾或保湿膏药或粉末。各种剂型按制剂学常规方法制备。
其使用方法如下：
寡雄腐霉生物农药使用时，按生物农药与水比为1：2000～6000倍稀释，在农作物的叶和茎上进行均匀喷洒，抑制或杀灭串珠镰刀菌；也可按生物农药与水比为1：3000-6000，随水进入根部土壤，可以抑制或杀灭串珠镰刀菌。每亩使用剂量为20～50g，7～14天使用一次。
寡雄腐霉EMF915抑制或杀灭串珠镰刀菌的实验情况如下：
(1)寡雄腐霉EMF915对串珠镰刀菌的抑制作用
实验组将寡雄腐霉菌菌株EMF915和串珠镰刀菌分别接入马铃薯琼脂固体培养基两侧，对照组为空白，串珠镰刀菌保存于陕西师范大学生命科学学院工业微生物实验室，实验组培养基与对照组培养基于28℃培养5d，每天记录病原菌生长情况，培养结束，按实验组与对照组的致病菌菌落直径R1与R2计算抑制率，抑制率公式如下：
每一处理设3个重复，寡雄腐霉菌EMF915对典型串珠镰刀菌的抑制率为82.57％。
(2)田间实验
按照本发明实施例的方法制备的寡雄腐霉菌可湿性粉剂进行田间离体试验。
2021年6月在江西省赣州市丰县嘉定镇脐橙种植基地进行田间实验，脐橙腐烂病主要由串珠镰刀菌引起在脐橙腐烂病发病季节2021年10月调查脐橙腐烂病的发病率，串珠镰刀菌主要影响脐橙果实，将果实出现腐烂发黑的统计为发病果实。
实验设2个处理，每个处理设3次重复，每小区面积0.5亩333.5m2地。田间管理均按当地标准方法进行管理，各个处理及重复力求一致。
实验组1：将寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂加2000-6000倍自来水稀释。对脐橙植株整株喷施，每亩喷施寡雄腐霉EMF915可湿性粉剂用量50g，每隔14d喷施一次，共喷施5次。
空白对照组：用自来水对脐橙植株整株喷施，喷施方法同实验组。
实验结果见表1。
表1寡雄腐霉EMF915脐橙腐烂病病防治方法田间试验结果
注：不同英文字母表示样本间差异显著(P<0.05)。
对实验结果进行统计学分析，确定防治效果，实验组比对照组的发病率降低了23.18％，P<0.05，差异显著。
实施例2
寡雄腐霉菌菌株EMF915的核苷酸序列与实施例1相同。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭腐皮镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
使用方法与实施例1相同。
寡雄腐霉EMF915抑制或杀灭腐皮镰刀菌的实验情况如下：
(1)在实验室条件下寡雄腐霉菌株对腐皮镰刀菌的抑制作用。
对峙组将寡雄腐霉菌EMF915和腐皮镰刀菌分别接入马铃薯琼脂固体培养基两侧，对照组不接寡雄腐霉菌菌株EMF915，腐皮镰刀菌保存于陕西师范大学生命科学学院工业微生物实验室，对峙培养基与对照培养基于28℃培养5d，每天记录病原菌生长情况，抑制率计算方式同实施例1。
(2)寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂在田间对腐皮镰刀菌引起的土传病害的防治作用。
按照本发明实施例1的方法制备的寡雄腐霉菌菌株EMF915(实验时简称EMF915)可湿性粉剂进行田间离体试验。
2022年4月23日在宁夏省吴忠市宁夏固原县黄芪种植基地进行田间实验，2022年10月10日实验结束。黄芪黑头病的主要致病菌为腐皮镰刀菌，试验期间统计黄芪黑头病发病率为50.21％，
实验设2个处理，每个处理设2次重复，每小区面积1亩666.7m2地。田间管理均按当地标准方法进行管理，各个处理及重复力求一致。
实验组1：将寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂加2000-6000倍自来水稀释。对黄芪植株整株喷施，每亩喷施寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂用量50g，每隔7-14d喷施一次，共喷施5次。
空白对照组：用自来水对黄芪植株寡雄腐霉菌菌株EMF915整株喷施，喷施方法同实验组。
在黄芪黑头病发病季节2022年10月调查黄芪黑头病的发病率，将黄芪根部出现黑斑且根上部分枯萎现象严重统计为发病植株，对实验结果进行统计学分析，确定防治效果，实验组比对照组的发病率降低了17.86％，P<0.05，差异显著。
防治效果＝[(对照发病率－处理发病率)/对照发病率]×100％。
实验结果见表2。
表2寡雄腐霉EMF915对黄芪黑头病防治方法田间试验结果
注：不同英文字母表示样本间差异显著(P<0.05)
实施例3
寡雄腐霉菌菌株EMF915的核苷酸序列与实施例1相同。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭三线镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
使用方法与实施例1相同。
寡雄腐霉菌菌株EMF915对三线镰刀菌及其在田间引起的土传病害的抑制作用
(1)在实验室条件下寡雄腐霉菌菌株EMF915对三线镰刀菌的抑制作用
对峙组将寡雄腐霉菌菌株EMF915和三线镰刀菌分别接入马铃薯琼脂固体培养基两侧，对照组不接寡雄腐霉菌菌株EMF915，三线镰刀菌保存于陕西师范大学生命科学学院工业微生物实验室，对峙培养基与对照培养基于28℃培养5d，每天记录病原菌生长情况，抑制率计算方式同实施例1。
(2)寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂在田间对三线镰刀菌引起的土传病害的防治作用
按照本发明实施例1的方法制备的寡雄腐霉菌菌株EMF915(实验时简称EMF915)可湿性粉剂进行田间离体试验。
2022年4月23日在宁夏省吴忠市宁夏固原县黄芪种植基地进行田间实验，2022年10月10日实验结束。黄芪根腐病的主要致病菌为三线镰刀菌，试验期间统计黄芪黑头病发病率为50.21％，
实验设2个处理，每个处理设2次重复，每小区面积1亩666.7m2地。田间管理均按当地标准方法进行管理，各个处理及重复力求一致。
实验组1：将EMF915可湿性粉剂加2000-6000倍自来水稀释。对黄芪植株整株喷施，每亩喷施EMF915可湿性粉剂用量50g，每隔7-14d喷施一次，共喷施5次。
空白对照组：用自来水对黄芪植株整株喷施，喷施方法同实验组。
在黄芪黑头病发病季节2022年10月调查黄芪根腐病的发病率，将黄芪根部出现黑斑且根上部分枯萎现象严重统计为发病植株，对实验结果进行统计学分析，确定防治效果，实验组比对照组的发病率降低了17.86％，P<0.05，差异显著。
防治效果＝[(对照发病率－处理发病率)/对照发病率]×100％。
实验结果见表3。
表3EMF915对黄芪根腐病防治方法田间试验结果
注：不同英文字母表示样本间差异显著(P<0.05)
实施例4
寡雄腐霉菌菌株EMF915的核苷酸序列与实施例1相同。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭尖孢镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌菌株EMF915对尖孢镰刀菌及其在田间引起的土传病害的抑制作用
(1)在实验室条件下寡雄腐霉菌菌株EMF915对尖孢镰刀菌的抑制作用
对峙组将寡雄腐霉菌EMF915和尖孢镰刀菌接入马铃薯琼脂固体培养基两侧，对照组不接寡雄腐霉菌，对峙培养基与对照培养基于28℃培养5d，每天记录病原菌生长情况，抑制率计算方式同实施例1。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在实验室条件下对尖孢镰刀菌抑制作用处理同实施例1，尖孢镰刀菌菌保存于陕西师范大学生命科学学院工业微生物实验室。
(2)寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂在田间对尖孢镰刀菌引起的土传病害的防治作用。
2021年在山东枣庄市滕州市城区人和蓝湾生姜种植基地进行田间试验。生姜茎基腐病的两种主要致病菌为尖孢镰刀菌和茄科镰刀菌。
实验设2个处理，每个处理设3次重复，每小区面积0.5亩333.5m2地。田间管理均按当地标准方法进行管理，各个处理及重复力求一致。
实验组1：将寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂加2000-6000倍自来水稀释。对黄芪植株整株喷施，每亩喷施寡雄腐霉菌菌株EMF915可湿性粉剂用量50g，每隔14d喷施一次，共喷施5次。
空白对照组：用自来水对生姜植株整株喷施，喷施方法同实验组。
使用方法与实施例1相同。
在生姜茎基腐病发病季节2022年10月调查生姜茎基腐病的发病率，尖孢镰刀菌主要影响地下部分，将生姜表面有水渍并伴随有腐烂症状统计为发病植株，对实验结果进行统计学分析，确定防治效果，实验组比对照组的发病率降低了49.4％，P<0.05，差异显著。实验结果见表4。
表4寡雄腐霉EMF915对生姜尖孢镰刀菌病防治方法田间试验结果
注：不同英文字母表示样本间差异显著(P<0.05)
实施例5
寡雄腐霉菌菌株EMF915的核苷酸序列与实施例1相同。
寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭茄科镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2×108～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
寡雄腐霉菌对茄科镰刀菌及其在田间引起的土传病害的抑制作用
(1)在实验室条件下寡雄腐霉菌株对茄科镰刀菌的抑制作用。
对峙组将寡雄腐霉菌EMF915和茄科镰刀菌接入马铃薯琼脂固体培养基两侧，对照组不接寡雄腐霉菌，对峙培养基与对照培养基于28℃培养5d，每天记录病原菌生长情况，抑制率计算方式同实施例1。
寡雄腐霉菌在实验室条件下对茄科镰刀菌抑制作用处理同实施例1，茄科镰刀菌保存于陕西师范大学生命科学学院工业微生物实验室。
(2)寡雄腐霉EMF915可湿性粉剂在田间对尖孢镰刀菌引起的土传病害的防治作用。
2021年在山东枣庄市滕州市城区人和蓝湾生姜种植基地进行田间试验。生姜茎基腐病的两种主要致病菌为尖孢镰刀菌和茄科镰刀菌。
实验设2个处理，每个处理设3次重复，每小区面积0.5亩333.5m2地。田间管理均按当地标准方法进行管理，各个处理及重复力求一致。
实验组1：将寡雄腐霉EMF915可湿性粉剂加2000-6000倍自来水稀释。对生姜植株整株喷施，每亩喷施寡雄腐霉EMF915可湿性粉剂用量50g，每隔14d喷施一次，共喷施5次。
空白对照组：用自来水对生姜植株整株喷施，喷施方法同实验组。
使用方法与实施例1相同。
在生姜茎基腐病发病季节2022年10月调查生姜茎基腐病的发病率，茄科镰刀菌主要影响地上部分，将生姜植株有腐烂叶子或烂茎统计为发病植株，对实验结果进行统计学分析，确定防治效果，实验组比对照组的发病率降低了49.4％，P<0.05，差异显著。试验结果见表5。
表5寡雄腐霉EMF915对生姜茄科镰刀菌病防治方法田间试验结果
注：不同英文字母表示样本间差异显著(P<0.05)。

Claims (6)

1.一株寡雄腐霉菌(Pythiumoligandrum)菌株EMF915，于2022年05月24日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2022710，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。
2.寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭串珠镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
3.寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭腐皮镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
4.寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭尖孢镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915，在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
5.寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭茄科镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
6.寡雄腐霉菌菌株EMF915在制备抑制或杀灭三线镰刀菌生物农药中的用途,该生物农药由寡雄腐霉菌菌株EMF915以液体或固体型式按常规方法制成，在1mL的液体生物农药中，含有2～5×108cfu/mL寡雄腐霉菌菌株EMF915,在1g的固体生物农药中，含有2～5×108cfu/g寡雄腐霉菌菌株EMF915。
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