CN117007792A - 一种免疫亲和材料及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫亲和材料及其制备方法与应用。利用原子转移自由基聚合法在固相载体表面修饰长链树状聚合物，得到多反应基团固相载体；对蛋白A/蛋白G进行活化，所得蛋白溶液与所述多反应基团固相载体进行第一孵育，之后进行清洗、洗脱、定容，得到蛋白免疫载体；将真菌毒素抗体与蛋白免疫载体进行第二孵育，之后进行封闭。本发明提供的免疫亲和材料，能够有效提高免疫亲和材料的性能，满足高限量真菌毒素的测定，提高抗体利用率、减少免疫亲和材料用量，降低检测成本。同时，结合超高效液相色谱或高效液相色谱‑串联质谱联用分析技术，满足粮油、乳制品、调味品等食品、饲料和中草药基质中多种真菌毒素同时检测的需求。
Description
技术领域
本发明实施例涉及生物检测技术领域，具体涉及一种免疫亲和材料及其制备方法与应用。
背景技术
真菌毒素是真菌在生长繁殖过程中产生的次级代谢产物，广泛存在于农作物、食品和饲料中，对人体和动物的健康具有极大的危害。据联合国粮农组织(FAO)估计，全世界谷物供应链的25％受到真菌毒素的污染，给人类的健康造成了巨大的威胁。
目前，粮油、乳制品、调味品等食品、饲料和中草药等基质中真菌毒素检测方法主要包括有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱联用法等。
薄层色谱法是最早用于检测真菌毒素的传统方法，但是该方法操作繁琐、重现性较差、灵敏度较低，已被其它方法逐步取代。酶联免疫吸附法检测成本低、特异性好且灵敏度高，常用于快速检测方法，多用于大规模样品初筛和普查，但该方法易出现假阳性或者假阴性。高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱联用法检测真菌毒素的灵敏度和准确度高。
高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱联用法检测真菌毒素需要对样品进行前处理，前处理方法会显著影响测试结果的准确性和精密度，也是最耗时和易出错的步骤。常用的前处理方法是利用抗原抗体的特异性结合来捕捉样品中的真菌毒素，主要有免疫亲和柱、免疫磁珠等。目前市场上已开发出的基于免疫亲和材料前处理方法，但是单次仅能净化一种真菌毒素，且免疫亲和材料的性能，尤其是容量较低，不能满足高限量毒素的检测。
发明内容
为此，本发明实施例提供一种免疫亲和材料及其制备方法与应用。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
根据本发明实施例的第一方面，本发明提供一种免疫亲和材料的制备方法，包括：
利用原子转移自由基聚合法在固相载体表面修饰长链树状聚合物，得到多反应基团固相载体；
对蛋白A/蛋白G进行活化，所得蛋白溶液与所述多反应基团固相载体进行第一孵育，之后进行清洗、洗脱、定容，得到蛋白免疫载体；
将真菌毒素抗体与蛋白免疫载体进行第二孵育，之后进行封闭，得到所述免疫亲和材料。
其中，所述固相载体为带有氨基基团的磁珠，或琼脂糖凝胶；所述真菌毒素抗体为黄曲霉毒素总量抗体、玉米赤霉烯酮抗体、呕吐毒素抗体、伏马毒素总量抗体、赭曲霉毒素A抗体或T-2毒素抗体。
进一步地，所述多反应基团固相载体的制备方法为：
采用含戊二醛的无水甲醇对固相载体进行活化，所得活化产物添加到含聚乙烯亚胺的无水甲醇中，与此同时，缓慢加入第一氰基硼氢化钠，得到聚乙烯亚胺功能化产物；
所述聚乙烯亚胺功能化产物添加到含4-甲酰基苯基硼酸的无水甲醇中，与此同时，缓慢加入第二氰基硼氢化钠，得到多反应基团固相载体；
其中，所述固相载体、聚乙烯亚胺、第一氰基硼氢化钠、4-甲酰基苯基硼酸、第二氰基硼氢化钠的质量比为1g:(0.5-5.0)g:(0.2-3.0)g:(0.4-8.0)g:(0.4-6.0)g。
进一步地，所述对蛋白A/蛋白G进行活化的具体过程为：
向100mM pH 6.0的MES缓冲液中加入EDS和NHS，得到活化剂；
蛋白A/蛋白G与活化剂在室温下活化0.5h；
其中，所述EDS与NHS的质量比为1:1，所述EDS/NHS的浓度为1-50mg/ml；所述蛋白A/蛋白G与活化剂的质量比为(0.1-10):1。
进一步地，所述多反应基团固相载体与蛋白溶液的质量比为1:(0.1-100)；所述第一孵育在室温下进行，时间为1-5h。
进一步地，所述清洗使用的清洗液为PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
所述洗脱使用的洗脱液为含10-50mM铵盐的乙腈水溶液、含有10-50mM铵盐的甲醇水溶液、含有体积比为0.5％-5％弱酸的乙腈水溶液、含有0.5％-5％弱酸的甲醇水溶液中的一种或几种，其中，所述的乙腈水溶液中乙腈体积占比为10-100％，甲醇水溶液中甲醇的体积占比为10-100％；所述铵盐为乙酸铵或甲酸铵，所述弱酸为乙酸或甲酸。
本发明使用的上述洗脱液与现有常规洗脱液相比，增加了水，铵盐或酸，能够有效将特异性吸附在抗体上的抗原释放出来，且不完全破坏抗体，抗体可通过再生处理恢复特异性结合能力，降低检测成本。
同时，本发明使用的上述洗脱液能兼顾洗脱和后续的上机检测，相比常规氮吹复溶方法，简化操作步骤。
进一步地，所述真菌毒素抗体与蛋白免疫载体的质量比为1:(0.5-10)；所述第二孵育在室温下进行，时间为1-5h；所述封闭使用的封闭液为0.2％-2％甘氨酸、0.2％-2％BSA、pH 7.0-9.0的Tris-HCl或5％-20％乙醇胺。
进一步地，所述方法还包括：对使用过的免疫亲和材料进行再生处理，所采用的再生液选自PBS、PBST、TBST、水或PEG-PBS中的一种或几种。
根据本发明实施例的第二方面，本发明提供一种免疫亲和材料，其由如上任一项所述的方法制备而成。
根据本发明实施例的第三方面，本发明提供一种纯化真菌毒素的试剂盒，包括：如上所述的免疫亲和材料；样品稀释液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.1％-1％PEG的PBS、含有0.05-0.5％吐温-20的水或水；
第一清洗液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
第二清洗液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
洗脱液：含10-50mM铵盐的乙腈水溶液、含有10-50mM铵盐的甲醇水溶液、含有体积比为0.5％-5％弱酸的乙腈水溶液、含有0.5％-5％弱酸的甲醇水溶液中的一种或几种；其中，所述的乙腈水溶液中乙腈体积占比为10-100％，甲醇水溶液中甲醇的体积占比为10-100％；所述铵盐为乙酸铵或甲酸铵，所述弱酸为乙酸或甲酸。
根据本发明实施例的第四方面，本发明提供如上所述的试剂盒在纯化食品、饲料和中草药中的应用，其中，所述食品包括粮油、乳制品、调味品。
本发明实施例具有如下优点：
本发明使用聚乙烯亚胺等多官能团的化合物提高固相载体表面反应基团的数量，并利用蛋白A或蛋白G制备定向偶联免疫亲和材料，能够有效提高免疫亲和材料的性能(包括回收率、容量等)，满足高限量真菌毒素的测定，提高抗体利用率、减少免疫亲和材料用量，降低检测成本。
本发明的试剂基于多反应基团的亲和材料，制备定向偶联免疫亲和材料，建立粮油、乳制品、调味品等食品、饲料和中草药中多毒素同时净化的免疫亲和材料，结合超高效液相色谱或高效液相色谱-串联质谱联用分析技术，满足上述基质中多种真菌毒素同时检测的需求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
图1为本发明提供的真菌毒素抗体偶联免疫亲和材料的产品示意图；
图2为本发明提供的用于同时纯化多种真菌毒素的试剂组成示意图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种免疫亲和材料的制备方法包括如下步骤：
步骤一：制备多反应基团免疫亲和材料
将1g带有氨基基团的磁珠添加到10ml含有10％戊二醛的无水甲醇中，室温下机械搅拌2h，磁分离，将所得戊二醛活化产物用无水甲醇洗涤3次，然后添加到10ml含有2g聚乙烯亚胺的无水甲醇中，在室温机械搅拌条件下，向反应体系中缓慢加入氰基硼氢化钠0.5g，6h后，磁分离，收集聚乙烯亚胺功能化产物，并用水和甲醇洗涤3次。将所得聚乙烯亚胺功能化产物添加到5ml含有1g 4-甲酰基苯基硼酸的无水甲醇中，在室温下机械搅拌条件下，向上述溶液中加入氰基硼氢化钠0.5g，6h后，磁分离，收集固相，用水和乙醇洗涤，得到多反应基团免疫磁珠。
步骤二：制备蛋白溶液
配制活化剂：将10mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和10mg N-羟基丁二酰亚胺溶于0.5ml pH＝6.0，100mM的MES缓冲溶液中。
取4mg蛋白A或蛋白G，逐滴加入100μl活化剂，在室温下缓慢混合0.5h，得到蛋白溶液。
步骤三：制备蛋白免疫载体
取步骤一制备的多反应基团免疫磁珠20mg加入步骤二制备的蛋白溶液中，并加入1ml MES缓冲溶液，在室温下孵育2h，然后用PBST、PBS清洗磁珠各两次，用PBS定容，得到蛋白G或蛋白A免疫磁珠溶液。
步骤四、免疫亲和材料的制备
向1mL MES中加入4mg真菌毒素抗体，得到抗体稀释液，将所得抗体稀释液加入到步骤三制备的蛋白免疫磁珠溶液中，加入1ml PBS，孵育3h，得到初级真菌毒素抗体偶联免疫磁珠溶液，然后磁分离弃去上层液，加入2％甘氨酸封闭3h，再次磁分离弃去上层液，使用PBST和PBS清洗磁珠各2次，用PBS定容，4℃保存。
实施例2
本实施例提供一种免疫亲和材料的应用
参照图2，免疫亲和材料在2孔位充分混匀，将免疫亲和材料转移至1孔位中目标毒素后用磁珠磁吸免疫亲和材料，转移至3孔和4孔分别进行清洗(基质复杂时会在2-3孔增加清洗步骤和强度)，然后将免疫亲和材料转移至5孔进行洗脱，最后将免疫亲和材料转移至2孔位进行回收。
其中，稀释液可以为：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.1％-1％PEG的PBS、含有0.05-0.5％吐温-20的水或水；
清洗液①可以为：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
清洗液②可以为：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
洗脱液可以为：含10-50mM铵盐的乙腈水溶液、含有10-50mM铵盐的甲醇水溶液、含有体积比为0.5％-5％弱酸的乙腈水溶液、含有0.5％-5％弱酸的甲醇水溶液中的一种或几种；其中，乙腈水溶液中乙腈体积占比为10-100％，甲醇水溶液中甲醇的体积占比为10-100％；铵盐为乙酸铵或甲酸铵，弱酸为乙酸或甲酸。
试验例1
以伏马毒素总量抗体(浓度7.49mg/mL，纯度≥95％)为真菌毒素抗体按照实施例1的方法制备免疫亲和材料。
考察多反应基团磁珠、蛋白G和伏马毒素总量抗体的质量比对所制备的免疫亲和材料性能的影响。
容量的测试方法：测试充分混匀后2mg免疫亲和材料最大捕捉FBs的量，加标量为伏马毒素总量5000ng。
相对标准偏差(RSD)的测试方法：对免疫亲和材料进行3个平行的测定，从而计算RSD。
回收率的测试方法：测试免疫亲和材料的净溶液加标回收率，加标量为：FB1120ng，FB2120 ng，FB360 ng，伏马毒素总量300ng)。
结果见表1。
表1免疫亲和材料性能测试结果
注：—表示未检出
结果显示：加标回收率在91.0％-104.9％，RSD小于10.2％。偶联不同比例抗体的磁珠-重组蛋白G，随着抗体比例的增加，捕捉目标毒素的能力也随之升高。2mg的伏马毒素免疫磁珠的容量可达到2917ng。
试验例2
以黄曲霉毒素总量抗体(7.73mg/ml，纯度≥99％)、玉米赤霉烯酮抗体(24.10mg/ml，纯度≥97.3％)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体(9.75mg/ml，纯度≥99％)为真菌毒素抗体按照实施例1的方法制备免疫亲和材料，其中，黄曲霉毒素总量抗体、玉米赤霉烯酮抗体、脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的质量比为1:1:1。
粮食中黄曲霉毒素总量、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇三种真菌毒素同时净化的测试结果：
(1)称取玉米、糙米空白基质各5g，基质加标，提取液为20ml的70％乙腈水。2500rpm涡旋20min，7000rpm离心5分钟。
(2)准确移取0.5ml提取液加入到9ml样品稀释液0.1％PBST中，混合10分钟，分别用0.1％PBST和PBS清洗磁珠2次，用甲醇洗脱免疫磁珠。
(3)洗脱后，吸取0.8ml洗脱液氮吹，0.4ml 20％乙腈水复溶，有机相0.22μm滤膜过滤，上机进行检测。
液相色谱参考条件：
色谱柱：C18，100mm×2.1mm，1.8μm；
进样量：2.0μL；
流速：0.3mL/min；
柱温：35℃；
流动相：A相：含1％乙酸(体积分数)和5mmol/L乙酸铵的水溶液；B相：甲醇；
流动相洗脱梯度：0min，A相90％；2min，A相90％；3min，A相90％；7min，A相76％；10.5min，A相70％；13.5min，A相40％；15.0min，A相30％；18min，A相25％；18.1min，A相5％；21.9min，A相5％；22min，A相90％。
质谱条件：
离子源：电喷雾离子源；
质谱扫描方式：多反应检测模式(MRM)；
毛细管电压：3.5kV(﹢)，3.5kV(-)；
干燥气：300℃，7L/min；
雾化器压力：241kPa(35psi)；
鞘流气：350℃，11L/min；
AFB1母离子313.2(m/z)，子离子285.1*/241.1(m/z)，碰撞能量22/38eV，离子化方式(+)。
AFB2母离子315.2(m/z)，子离子287.1*/259.1(m/z)，碰撞能量24/30eV，离子化方式(+)。
AFG1母离子329.2(m/z)，子离子311.1*/243.1(m/z)，碰撞能量20/25eV，离子化方式(+)。
AFG2母离子331.2(m/z)，子离子313.1*/245.1(m/z)，碰撞能量23/30eV，离子化方式(+)。
ZEN母离子317.1(m/z)，子离子175.0*/130.8(m/z)，碰撞能量25/33eV，离子化方式(-)。
DON母离子355.1(m/z)，子离子265.0*/247.0(m/z)，碰撞能量10/10eV，离子化方式(-)。
(注：*为定量离子)
回收率(Rec)的测试方法：测试免疫亲和材料的基质加标回收率，加标量为：AFT10μg/kg(以AFB1计)，ZEN 60μg/kg，DON 1000μg/kg。
变异系数(CV)的测试方法：对免疫亲和材料进行2个平行的测定，从而计算RSD。
测试结果见表2。
表2三种真菌毒素同时净化测试结果
结果显示：AFT、ZEN和DON的加标回收率在83.1-123.6％之间，CV％小于7.9％。
试验例3
试验例1的免疫亲和材料对饲料中伏马毒素总量的测试结果
(1)称取猪饲料、玉米干酒糟粕(DDGS)各5g，基质加标，提取液为20ml的乙腈-水-甲酸(V:V:V＝70:29:1)。2500rpm涡旋20min，10000rpm离心10分钟。
(2)准确移取0.5ml提取液加入到9ml样品稀释液0.05％吐温-20/水中，混合10分钟，分别用0.1％PBST和PBS清洗磁珠2次，用甲醇洗脱免疫磁珠。
(3)洗脱后，吸取0.8ml洗脱液氮吹，0.4ml 20％乙腈水复溶，有机相0.22μm滤膜过滤，上机进行检测。
液相色谱条件：
色谱柱：C18，100mm×4.6mm，4.6μm；
流动相：A相：甲酸铵-甲酸水溶液；B相：甲醇；
进样量：10.0μL；
流速：0.8mL/min；
柱温：40℃；
检测波长：激发波长335nm，发射波长440nm；
流动相洗脱程序为：0min，A相30％；5min，A相28％；6min，A相25％；11min，A相22％；11.10min，A相30％；14.00min，A相30％。衍生溶剂为邻苯二甲醛。
表3饲料中伏马毒素测试结果
结果显示：使用免疫亲和材料净化饲料中的伏马毒素的回收率在79.9-102.7％之间，RSD小于14.1％。
以上内容表明，本发明的方法制备的试剂在纯化粮油、乳制品、调味品等食品、饲料和中草药中真菌毒素的应用。洗脱孔中的溶液，可加水稀释或氮吹复溶后，使用高效液相色谱或高效液相色谱-串联质谱联用法进行分析测试。
试验例4
真菌毒素免疫亲和材料免氮吹洗脱液结果
(1)准确配置20mM乙酸铵：乙腈：水＝15:75:10洗脱液。
(2)在基质提取液中加入一定量的真菌毒素，准确移取0.5mL加标提取液加入到样品稀释液中，混合10分钟，分别用0.1％PBST和PBS清洗磁珠2次，用20mM乙酸铵：乙腈：水＝15:75:10洗脱免疫磁珠。
(3)洗脱后，PTFE滤膜过滤，上机进行检测。
液相色谱条件：
色谱柱：C18，150mm×4.6mm，5μm；
流动相：A相：水；B相：甲醇/乙腈(1:1)；
进样量：10.0μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：40℃；
光化学衍生器：光化学柱后衍生器；
流动相洗脱程序为：0-14min，A相65％(检测波长：激发波长362nm，发射波长440nm)；14-29min，A相35％(检测波长：激发波长333nm，发射波长460nm)；29-34min，A相65％(检测波长：激发波长362nm，发射波长440nm)。
表4免氮吹洗脱测试结果
表5方法线性范围、检出限和定量限
经验证真菌毒素免疫磁珠经20mM乙酸铵：乙腈：水＝15:75:10洗脱后，可以直接上机检测，无需氮吹或加水稀释，消除溶剂效应、防止因氮吹等导致的损失。方法准确性好，灵敏度高，满足粮油、饲料的日常检测。
试验例5
真菌毒素免疫亲和材料再生测试结果
(1)使用过的真菌毒素免疫磁珠，置于0.1％PBS溶液中，置于200转/min振荡器振荡6小时。
(2)在样品稀释液中加入一定量的真菌毒素，混合10分钟，分别用0.1％PBST和PBS清洗磁珠2次，用20mM乙酸铵：乙腈：水＝15:75:10溶液洗脱免疫磁珠。
(3)洗脱后，PTFE滤膜过滤，上机进行检测。
表6真菌毒素免疫磁珠柱回收测试结果(％)
表7真菌毒素免疫磁珠容量测试结果(ng)
经验证真菌毒素免疫磁珠可以重复再生，回收率和容量均满足产品性能要求，可重复使用3次以上。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，包括：
利用原子转移自由基聚合法在固相载体表面修饰长链树状聚合物，得到多反应基团固相载体；
对蛋白A/蛋白G进行活化，所得蛋白溶液与所述多反应基团固相载体进行第一孵育，之后进行清洗、洗脱、定容，得到蛋白免疫载体；
将真菌毒素抗体与蛋白免疫载体进行第二孵育，之后进行封闭，得到所述免疫亲和材料；
其中，所述固相载体为带有氨基基团的磁珠，或琼脂糖凝胶；
所述真菌毒素抗体为黄曲霉毒素总量抗体、玉米赤霉烯酮抗体、呕吐毒素抗体、伏马毒素总量抗体、赭曲霉毒素A抗体或T-2毒素抗体。
2.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，
所述多反应基团固相载体的制备方法为：
采用含戊二醛的无水甲醇对固相载体进行活化，所得活化产物添加到含聚乙烯亚胺的无水甲醇中，与此同时，缓慢加入第一氰基硼氢化钠，得到聚乙烯亚胺功能化产物；
将所述聚乙烯亚胺功能化产物添加到含4-甲酰基苯基硼酸的无水甲醇中，与此同时，缓慢加入第二氰基硼氢化钠，得到多反应基团固相载体；
其中，所述固相载体、聚乙烯亚胺、第一氰基硼氢化钠、4-甲酰基苯基硼酸、第二氰基硼氢化钠的质量比为1g:(0.5-5.0)g:(0.2-3.0)g:(0.4-8.0)g:(0.4-6.0)g。
3.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，所述对蛋白A/蛋白G进行活化的具体过程为：
向100mM pH 6.0的MES缓冲液中加入EDS和NHS，得到活化剂；
蛋白A/蛋白G与活化剂在室温下活化0.5h；
其中，所述EDS与NHS的质量比为1:1，所述EDS/NHS的浓度为1-50mg/ml；所述蛋白A/蛋白G与活化剂的质量比为(0.1-10):1。
4.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，
所述多反应基团固相载体与蛋白溶液的质量比为1:(0.1-100)；
所述第一孵育在室温下进行，时间为1-5h。
5.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，
所述清洗使用的清洗液为PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
所述洗脱使用的洗脱液为含10-50mM铵盐的乙腈水溶液、含有10-50mM铵盐的甲醇水溶液、含有体积比为0.5％-5％弱酸的乙腈水溶液、含有0.5％-5％弱酸的甲醇水溶液中的一种或几种，其中，所述的乙腈水溶液中乙腈体积占比为10-100％，甲醇水溶液中甲醇的体积占比为10-100％；所述铵盐为乙酸铵或甲酸铵，所述弱酸为乙酸或甲酸。
6.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，其特征在于，
所述真菌毒素抗体与蛋白免疫载体的质量比为1:(0.5-10)；
所述第二孵育在室温下进行，时间为1-5h；
所述封闭使用的封闭液为0.2％-2％甘氨酸、0.2％-2％BSA、pH 7.0-9.0的Tris-HCl或5％-20％乙醇胺。
7.根据权利要求1所述的免疫亲和材料的制备方法，所述方法还包括：
对使用过的免疫亲和材料进行再生处理，所采用的再生液选自PBS、PBST、TBST、水或PEG-PBS中的一种或几种。
8.一种免疫亲和材料，其特征在于，其由权利要求1-7中任一项所述的方法制备而成。
9.一种纯化真菌毒素的试剂盒，其特征在于，包括：
权利要求8所述的免疫亲和材料；
样品稀释液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.1％-1％PEG的PBS、含有0.05-0.5％吐温-20的水或水；
第一清洗液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
第二清洗液：PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的PBS、含有0.05％-0.5％吐温-20的TBST、含有0.05％-0.5％吐温-20的水或水；
洗脱液：含10-50mM铵盐的乙腈水溶液、含有10-50mM铵盐的甲醇水溶液、含有体积比为0.5％-5％弱酸的乙腈水溶液、含有0.5％-5％弱酸的甲醇水溶液中的一种或几种；其中，所述的乙腈水溶液中乙腈体积占比为10-100％，甲醇水溶液中甲醇的体积占比为10-100％；所述铵盐为乙酸铵或甲酸铵，所述弱酸为乙酸或甲酸。
10.权利要求9所述的试剂盒在纯化食品、饲料和中草药中的应用，其中，所述食品包括粮油、乳制品、调味品。
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