CN117007791A - 一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液、所述稀释保存液包括如下浓度的组分:高分子聚合物,0.1‑3w/v%;保护蛋白,0.1‑10w/v%;表面活性剂,0.01‑0.1w/v%;缓冲液,10‑50 mmol/L;防腐剂,0.02‑0.1w/v%;所述稀释保存液的pH为6.0‑8.0。本发明技术方案通过在稀释保存液中加入高分子聚合物,具体为聚乙烯醇或聚氧化乙烯,使得本发明中的稀释保存液可以在维持辣根过氧化物酶偶联物的在溶液中的稳定性的同时,不会对均相化学发光检测体系造成信号检测方面的影响,且对于具有洗涤分离的反应体系也不会造成信号检测方面的影响,从而扩大了本发明中的稀释保存液的应用范围。
Description
技术领域
本发明涉及体外检测试剂领域,特别涉及一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液。
背景技术
当下,常见的基于免疫学相关原理而建立的检测分析技术,一般均需要将某些酶分子,如HRP酶(辣根过氧化物酶)标签,与抗原或者抗体偶联,从而实现检测的目的。
由于HRP价格相对低廉加之其与抗体偶联的方法(如高碘酸钠法)较为成熟,HRP被广泛应用于科研及体外诊断领域。由于HRP偶联物(如HRP-Ab)不稳定,一般完成标记后需将其在-20℃或者更低温度下保存,以维持偶联物的活性;但同时,需低温保存这一条件限制了其应用。近年来,大量的研究结果表明,一些保护性蛋白、稳定剂等对HRP偶联物的活性具有一定的保护作用,并且目前已经有商品化的HRP偶联物保护剂,如:Surmodics公司的StabilZymeTM HRP Conjugate Stabilizer,kementec公司的HRP-StabilPLUS等,但是须知的是,此类保护剂均是针对具有固液分离的免疫反应而设计,即基于传统的免疫学原理建立的检测方法(如酶联免疫吸附法,磁微粒化学发光法等),在免疫反应完成后,信号检测之前均有一个洗涤的步骤,通过洗涤步骤除去保护剂以及其他干扰物对信号检测的干扰。
但是上述保护剂仅考虑对HRP偶联物活性的影响,而未考虑对检测信号的影响;即对于基于均相化学发光技术设计的检测试剂而言,无洗涤分离的步骤,所以要求HRP偶联物稀释保存液不仅能保证HRP偶联物在工作浓度条件下的活性,而且需要保证其不会对检测造成干扰。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,旨在保证HRP偶联物在工作浓度条件下的活性的同时,保证其不会对基于均相化学发光技术而设计的检测试剂的检测信号造成干扰。
为实现上述目的,本发明提出的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液包括如下浓度的组分:
高分子聚合物,0.1-3w/v%;
保护蛋白,0.1-10w/v%;
表面活性剂,0.01-0.1w/v%;
缓冲液,10-50 mmol/L;
防腐剂,0.02-0.1w/v%;
所述稀释保存液的pH为6.0-8.0。
可选地/在一实施例中,所述稀释保存液还包括精氨酸盐。
可选地/在一实施例中,所述精氨酸盐为ArgGlu或ArgAcetate中的一种。
可选地/在一实施例中,所述精氨酸盐的浓度为20-125mmol/L。
可选地/在一实施例中,所述高分子聚合物为聚乙烯醇或聚氧化乙烯中的一种。
可选地/在一实施例中,所述高分子聚合物的浓度为0.5-2w/v%。
本发明进一步提出了一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,包括如下浓度的组分:
高分子聚合物,0.5-2w/v%;
保护蛋白,0.5-5w/v%;
表面活性剂,0.03-0.06w/v%;
精氨酸盐,20-125mmol/L;
缓冲液,15-30 mmol/L;
防腐剂,0.04-0.08w/v%;
所述稀释保存液的pH为6.0-8.0。
可选地/在一实施例中,所述表面活性剂为吐温20或曲拉通100中的一种。
可选地/在一实施例中,所述缓冲液为HEPES缓冲液、MES缓冲液或PBS缓冲液中的一种。
可选地/在一实施例中,所述防腐剂为BND-99或PC-300中的至少一种。
本发明技术方案通过在稀释保存液中加入高分子聚合物,具体为聚乙烯醇或聚氧化乙烯,使得本发明中的稀释保存液可以在维持辣根过氧化物酶偶联物的在溶液中的稳定性的同时,不会对均相化学发光检测体系造成信号检测方面的影响,且对于具有洗涤分离的反应体系也不会造成信号检测方面的影响,从而扩大了本发明中的稀释保存液的应用范围;另外,本发明中的稀释保存液中添加了精氨酸盐,从而抑制了蛋白质的聚集,进一步维持了辣根过氧化物酶偶联物在溶液中的稳定性,进而延长了保存时间。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
图1为实施例1、实施例2、对比例1及对比例2的高分子聚合物在37℃条件下对HRP偶联物的稳定性结果图;
图2为实施例3、实施例4、对比例3及对比例4的精氨酸盐在37℃条件下对HRP偶联物的稳定性结果图;
图3为实施例5配制的脂联素测定试剂R2在30℃条件下的稳定性结果图;
图4为对比例5配制的脂联素测定试剂R2在30℃条件下的稳定性结果图;
图5为对比例6配制的脂联素测定试剂R2在30℃条件下的稳定性结果图;
图6为实施例6、对比例7及对比例8分别配制的髓过氧化物酶测定试剂R2在2-8℃条件下平均降幅示意图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例,参照附图做进一步说明。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
需要说明,若本发明实施例中有涉及方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后……),则该方向性指示仅用于解释在某一特定姿态(如附图所示)下各部件之间的相对位置关系、运动情况等,如果该特定姿态发生改变时,则该方向性指示也相应地随之改变。
另外,若本发明实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述,则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外,若全文中出现的“和/或”的含义为,包括三个并列的方案,以 “A和/或B”为例,包括A方案,或B方案,或A和B同时满足的方案。另外,各个实施例之间的技术方案可以相互结合,但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础,当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在,也不在本发明要求的保护范围之内。
本发明提出一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,能在保证HRP偶联物在工作浓度条件下的活性的同时,保证其不会对基于均相化学发光技术而设计的检测试剂的检测信号造成干扰。
本发明所提出的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液包括如下浓度的组分:
高分子聚合物,0.1-3w/v%;
保护蛋白,0.1-10w/v%;
表面活性剂,0.01-0.1w/v%;
缓冲液,10-50 mmol/L;
防腐剂,0.02-0.1w/v%;
辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液的pH为6.0-8.0。
在本发明所提出的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液中,高分子聚合物主要用于保证溶剂中酶的稳定性;高分子聚合物能降低水活性,或者与酶在溶剂中与其它分子形成共轭键。
本发明中,高分子聚合物为聚乙烯醇或聚氧化乙烯中的一种,聚乙烯醇可以通过自身的醇基与蛋白分子碳水化合物部分的氢原子形成氢键,并且聚乙烯醇的碳氢主链和蛋白分子的疏水性区域形成疏水键,从而维持蛋白结构或酶分子的稳定;而聚氧化乙烯是通过醚氧原子与蛋白分子的碳水化合物部分的氢原子之间形成氢键,乙烯残基与蛋白分子的疏水区域形成疏水键,从而达到维持蛋白分子稳定性的目的。
相应地,高分子聚合物的浓度进一步为0.5-2w/v%,高分子聚合物在此浓度条件下,可以避免由于高分子聚合物由于浓度不够而导致的不稳定,同时能保证不会造成高分子聚合物浓度过高而造成的溶液整体粘度过大。
而为了进一步提高辣根过氧化物酶偶联物在溶液中的稳定性,本发明所提出的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液中还添加有精氨酸盐,所添加的精氨酸盐通过精氨酸阳离子自身的相互作用、与阴离子的相互作用、以及与蛋白质之间的相互作用等多种相互作用影响到蛋白质稳定性和活性,尤其是对抗体药物或试剂的CH2结构域,从而抑制蛋白质的聚集。
本发明所提出的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液中,精氨酸盐为ArgGlu或ArgAcetate中的一种;相应地,精氨酸盐的浓度进一步为20-125mmol/L,在此浓度下,精氨酸盐能稳定抑制蛋白质的聚集,且能在一定范围内调节溶液整体的pH,维持整体溶液pH值的稳定,使得HRP偶联物不易变性。并且,在此浓度条件下,不会出现精氨酸盐在低温条件下(2-8℃)保存后结晶的现象。
为了进一步提高辣根过氧化物酶(HRP)偶联物稀释保存液(以下简称为稀释保存液)对辣根过氧化物酶偶联物的稀释保存效果,本发明对各组分浓度进行了调整,具体如下:
高分子聚合物,0.5-2w/v%;
保护蛋白,0.5-5w/v%;
表面活性剂,0.03-0.06w/v%;
精氨酸盐,20-125mmol/L;
缓冲液,15-30 mmol/L;
防腐剂,0.04-0.08w/v%;
稀释保存液的pH为6.0-8.0。
其中,保护蛋白为牛血清白蛋白或明胶;
而表面活性剂为吐温20或曲拉通100中的一种;
缓冲液则为HEPES缓冲液、MES缓冲液或PBS缓冲液中的一种;
防腐剂为BND-99或PC-300中的至少一种,即防腐剂为BND-99、PC-300或BND-99和PC-300的混合物中的一种。
在本发明中,保护蛋白为稀释保存液中的常规组分,一方面由于蛋白相互之间的作用更有利于偶联物的稳定,另一方面可以避免由于包材的吸附作用而导致偶联物的浓度变化;表面活性剂是免疫测定用试剂的常规物质,添加后有利于后续抗体抗原的反应;缓冲液主要作用是维持辣根过氧化物酶偶联物在水溶液环境中稳定所需的pH的环境;防腐剂可以保证稀释保存液不会由于微生物的污染而导致的性质变化。
本发明中,保护蛋白的浓度范围由0.1-10w/v%缩小至0.5-5w/v%、表面活性剂的浓度范围由0.01-0.1w/v%缩小至0.03-0.06w/v%,缓冲液的浓度范围则由10-50 mmol/L缩小至15-30 mmol/L,防腐剂的浓度范围则由0.02-0.1w/v%缩小至0.04-0.08w/v%;上述各组分的浓度最大值均有减小,由此可以在维持本发明中的稀释保存液的基本性能不变的情况下,降低各物料的使用量,从而压缩了本发明中的稀释保存液在生产时的物料成本。
由此,本发明所提供的稀释保存液可以保证辣根过氧化物酶偶联物在工作浓度条件下的稳定性,例如在2-8℃条件下,稳定保存12个月;且本发明所提供的稀释保存液不会对基于均相化学发光技术而设计的检测试剂的检测信号造成干扰,另对于具有洗涤分离的反应体系也不会造成信号检测方面的影响。
为保证该稀释保存液中各组分能充分溶解,本发明所提供的稀释保存液可由以下步骤配置而成:
S1、制备缓冲液:将纯化水加入至定量的缓冲液基质中,搅拌溶解后调节溶液pH;
S2、添加高分子聚合物和精氨酸盐:将定量的高分子聚合物和精氨酸盐添加至步骤S1中所制得的缓冲液中,且添加时缓慢添加辅以搅拌溶解;
S3、添加保护蛋白、表面活性剂以及防腐剂:待高分子聚合物和精氨酸盐充分溶解后,添加保护蛋白、表面活性剂以及防腐剂,充分搅拌混匀后过滤,即得到辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液。
以下结合具体实施例进行具体说明
高分子聚合物选择
为保证溶剂中酶的稳定性,通常需要降低水活性,或者与酶在溶剂中与其它分子形成共轭键。而降低水活性或与酶分子形成共轭键的常用做法是加入高分子聚合物。在维持蛋白稳定性方面,最具代表性的高分子聚合物为聚乙二醇,并有多篇研究指出不同分子量的聚乙二醇在维持蛋白构象以及酶活性方面有着不同的作用。
为验证不同高分子聚合物对HRP偶联物稳定性的影响,在上述稀释保存液的基础之上,分别加入不同浓度及不同种类的高分子聚合物,且均以同样的步骤配置而成,具体如下:
实施例1
牛血清白蛋白2.5w/v%,聚乙烯醇0.5 w/v%,吐温20 0.06 w/v%,PC-300 0.05 w/v%,20 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.4;
实施例2
牛血清白蛋白 0.5w/v%,聚氧化乙烯1 w/v%,吐温20 0.03 w/v%,PC-300 0.08 w/v%,30 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.4;
对比例1
牛血清白蛋白 5 w/v%,聚乙二醇0.5 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.08 w/v%,20 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.4;
对比例2
牛血清白蛋白 5 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.08 w/v%,10 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.4;
依据SPARCL技术,吖啶类衍生物标记鼠抗体(抗人脂联素抗体)加入基础缓冲液中(吖啶类衍生物标记抗体含量为1μg/mL),制备成试剂R1;HRP标记羊抗鼠抗体加入不同配方的稀释缓冲液中(HRP标记抗体含量为0.1μg/mL),制备成试剂R2。试剂R1和试剂R2反应后,加入触发剂后可以直接发光。
将配制好的试剂用HomoG 100化学发光仪上进行检测: 40 μL试剂R1 + 40 μL试剂R2 在37℃条件下孵育反应20 min,之后加入20 μL 背景消除剂以及75 μL触发剂,检测光信号。
将以上稀释保存液配制的试剂R2保存于37℃条件下,在第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天进行检测,比较不同时间检测的反应值变化趋势,结果如图1所示。
根据图1可知,实施例1在第二天及第七天时的反应值相较于第一天下跌了5.0%及24.0%;实施例2在第二天及第七天时的反应值相较于第一天下跌了4.6%及26.7%;但对比例1在第二天及第七天时的反应值相较于第一天下跌了9.5%及83.4%;对比例2在第二天及第七天时的反应值相较于第一天下跌了6.8%及48.9%;根据数据变化趋势,不难看出对比例1及对比例2在第二天及第七天反应值下跌的百分比均大于实施例1及实施例2,且对比例1及对比例2的下跌的幅度远大于实施例1及实施例2,由此结果推测含有聚乙二醇的对比例1虽然初始的发光之最高,但是随着保存时间的延长,其发光值的下降趋势也越大;而分别含有聚乙烯醇以及聚氧化乙烯的实施例1及实施例2,发光值虽然也有下降,但是其变化趋势相对较小。由此可以得出,聚乙二醇虽然对HRP偶联物稳定性有一定的作用,但是其能显著促进发光值,对本底发光值的促进也较大,会降低信噪比。综上,优选聚氧化乙烯或聚乙烯醇。
精氨酸盐选择
在蛋白质药物或试剂的生产过程中,如何维持蛋白药物或试剂的稳定至关重要;在实际的生产过程中,常会添加多种物质以维持蛋白药物或试剂的稳定性;精氨酸则是可被添加至溶液中维持蛋白药物或试剂稳定性的物质之一。
以上述高分子聚合物选择中的验证方法继续验证HRP偶联物的稳定性,并以实施例1为基础,验证精氨酸盐对HRP偶联物在溶液中的稳定性的影响,具体配置如下:
实施例3
ArgGlu 125 mmol/L,牛血清白蛋白 2 w/v%,聚乙烯醇1 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.05 w/v%,20 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为6.5;
实施例4
ArgAcetate 30 mmol/L,牛血清白蛋白 5 w/v%,聚乙烯醇2 w/v%,吐温20 0.03w/v%,PC-300 0.05 w/v%,20 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.5;
对比例3
Arg2SO450 mmol/L,牛血清白蛋白 0.5 w/v%,聚乙烯醇0.5 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.05 w/v%,20 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为8.0;
对比例4
ArgCl 100 mmol/L,牛血清白蛋白 1.5 w/v%,聚乙烯醇0.5 w/v%,吐温20 0.05w/v%,PC-300 0.05 w/v%,50 mmol/L PBS,该稀释保存液的pH为7.4;
验证实施例3、实施例4、对比例3及对比例4在37℃条件下的热稳定性,结果如图2所示。
根据图2所示,实施例3在第三天、第五天及第七天时反应值相较于第一天的下跌百分比分别为4.7%、5.6%及7.2%;实施例4在第三天、第五天及第七天时反应值相较于第一天的下跌百分比分别为6.7%、10.2%及11.9%;对比例3在第三天、第五天及第七天时反应值相较于第一天的下跌百分比则分别为16.9%、25.7%及33.3%;对比例4在第三天、第五天及第七天时反应值相较于第一天的下跌百分比分别为19.0%、31.4%及40.5%;由此不难看出,实施例3及实施例4反应值的下跌程度远小于对比例3及对比例4,及实施例3及实施例4的HRP偶联物的稳定性远好于对比例3及对比例4;且依据实施例3、实施例4、对比例3及对比例4的结果推测,影响蛋白稳定性的不仅是精氨酸阳离子,而且与之配伍的阴离子对HRP偶联物稳定性的影响也比较大,从结果可以看出SO4 2-和Cl-会降低HRP偶联物的稳定性。由结果推测可能由于阴离子acetate和Glu-是强的水合阴离子,其会被抗体表面排斥,从而不会破坏静电相互作用,结合Arg+对蛋白质的相互作用而达到稳定蛋白质的效果。
不同稀释液对脂联素测定试剂的影响
依据SPARCL技术设计一种脂联素的测定方法,SPARCL™ Kits购自于Lumigen公司。脂联素测定方法包括试剂R1、试剂R2以及校准品。试剂R1中包含1.5μg/mL吖啶类衍生物标记的鼠抗人脂联素单克隆抗体4,溶解于R1基础缓冲液中;试剂R2中包含0.2μg/mL HRP标记的鼠抗人脂联素单克隆抗体3,溶解于稀释保存液中;校准品为不同浓度重组人脂联素与校准品稀释缓冲液。
其中,稀释保存液具体配置如下:
实施例5
牛血清白蛋白 0.5 w/v%,ArgAcetate 50 mmol/L,聚乙烯醇1 w/v%,吐温20 0.05w/v%,PC-300 0.05 w/v%,20 mmol/L MES,该稀释保存液的pH为6.0。
对比例5
牛血清白蛋白 2.0 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.05 w/v%,10 mmol/LPBS,该稀释保存液的pH为7.5;
对比例6
牛血清白蛋白 2.0 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,PC-300 0.05 w/v%,10 mmol/LPBS,调整该稀释保存液的pH为7.5,之后将其与kementec公司的HRP-StabilPLUS 按照体积比1:1混匀;
将HRP标记的鼠抗人脂联素单克隆抗体 3与上述稀释保存液混匀即为试剂R2,R2中的HRP标记的鼠抗人脂联素单克隆抗体 3浓度为0.2 μg/mL。
将配制好的脂联素检测试剂用HomoG 100化学发光仪上进行检测:5μL校准品+60μL试剂R1 + 60 μL试剂R2 在37℃条件下孵育反应20 min,之后加入20 μL 背景消除剂以及75 μL触发剂,检测光信号。
将以上稀释保存液配制的试剂R2保存于30℃条件下,在第0天、第5天、第10天、第15天、第20天、第30天进行检测,比较不同时间检测,同一校准品的反应值。
表.1.不同稀释保存液对检测结果的影响
对比以上三个不同配方R2稀释保存液,实施例5、对比例5及对比例6所分别配制的脂联素测定试剂R2在30℃条件下的稳定性对比如图3至图5所示;对比例5为常规试验所用,对比例6为对比例5与商品化HRP偶联物稀释液StabilPLUS 按照体积比1:1混合。以3个不同稀释液配制试剂R2,检测不同浓度脂联素校准品,比较信噪比和递进比。从以上结果可以看出,加入商品化HRP偶联物稀释液StabilPLUS后,信噪比明显下降(S1/S0);虽然对比例5在第0天对信噪比无明显影响,但是根据图4中各配方在30℃下的稳定性可以看出,由对比例5配制的试剂R2,检测到第10天就已经明显下降。
不同稀释保存液对髓过氧化物酶测定试剂的影响
基于上述验证,髓过氧化物酶测定试剂也是基SPARCL技术设计,SPARCL™ Kits购自于Lumigen公司。与上述高分子聚合物选择测试时的试剂组成相同,分为试剂R1、试剂R2以及校准品。试剂R1中包含1.0μg/mL吖啶类衍生物标记髓过氧化物酶单克隆抗体1,溶解于R1基础缓冲液中;试剂R2中包含0.2μg/mL HRP标记髓过氧化物酶单克隆抗体 2,溶解于稀释保存液中;校准品为不同浓度重组人髓过氧化物酶与校准品稀释缓冲液。
其中,稀释保存液具体配置如下:
实施例6
明胶 0.4 w/v%,ArgGlu 100 mmol/L,聚氧化乙烯2 w/v%,曲拉通 0.03 w/v%,BND-99 0.075 w/v%,50 mmol/L HEPES,该稀释保存液的pH为7.0;
对比例7
牛血清白蛋白 5.0 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,BND-99 0.075 w/v%,10 mmol/LPBS,调整该稀释保存液的pH为7.4,之后将其与StabilZymeTMHRP Conjugate Stabilizer按照体积比5:1混匀;
对比例8
牛血清白蛋白 5.0 w/v%,吐温20 0.05 w/v%,BND-99 0.075 w/v%,10 mmol/LPBS,调整该稀释保存液的pH为7.4,之后将其与StabilZymeTMHRP Conjugate Stabilizer按照体积比1:1混匀;
将HRP标记髓过氧化物酶单克隆抗体 2与上述各稀释保存液混匀即为试剂R2,R2中的HRP标记的髓过氧化物酶单克隆抗体 2浓度为0.2 μg/mL。
将配制好的髓过氧化物酶检测试剂用HomoG 100化学发光仪上进行检测:5μL校准品+40 μL试剂R1 + 40 μL试剂R2 在37℃条件下孵育反应20 min,之后加入20 μL 背景消除剂以及75 μL触发剂,检测光信号。
将以上各稀释保存液配制的试剂R2保存于2-8℃条件下,分别在第1个月、第2个月、第3个月、第6个月、第9个月、第12个月进行检测,比较不同时间检测,同一校准品的反应值。
表.2.不同稀释保存液对髓过氧化物酶检测结果的影响
从表中的结果显示,对比稀释保存液中,随着商品化HRP偶联物稀释液StabilZymeTMHRP Conjugate Stabilizer添加的量的增加,对均相检测髓过氧化物酶的影响越大。具体体现为信噪比显著降低,响应值也随着添加量的增加而降低。另外需要说明的是,在对比例7中保护剂含量越多,其保护作用越明显,但是其对信号的的影响越大,导致上限的递进比变差,并且含量越多,信噪比相对会变小。图6为不同条件下配制的髓过氧化物酶测定试剂R2在2-8℃条件保存,不同时间点检测各浓度校准品的平均降幅。参照图6,如果商品化HRP偶联物稀释液添加量不足,对试剂R2中HRP-Ab的保护效果会显著降低。
综上,从以上实施例可以看出,本发明的HRP偶联物稀释液不仅可以保证R2中HRP-Ab在工作浓度下的稳定性,而且与商品化HRP偶联物稀释液相比,不会对均相免疫反应体系的检测信号造成影响。
以上所述仅为本发明的可选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是在本发明的发明构思下,利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换,或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述稀释保存液包括如下浓度的组分:
高分子聚合物,0.1-3w/v%;
保护蛋白,0.1-10w/v%;
表面活性剂,0.01-0.1w/v%;
缓冲液,10-50 mmol/L;
防腐剂,0.02-0.1w/v%;
所述稀释保存液的pH为6.0-8.0。
2.如权利要求1所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述稀释保存液还包括精氨酸盐。
3.如权利要求2所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述精氨酸盐为ArgGlu或ArgAcetate中的一种。
4.如权利要求2所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述精氨酸盐的浓度为20-125mmol/L。
5.如权利要求2所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述高分子聚合物为聚乙烯醇或聚氧化乙烯中的一种。
6.如权利要求2所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述高分子聚合物的浓度为0.5-2w/v%。
7.一种辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,包括以下浓度的组分:
高分子聚合物,0.5-2w/v%;
保护蛋白,0.5-5w/v%;
表面活性剂,0.03-0.06w/v%;
精氨酸盐,20-125mmol/L;
缓冲液,15-30 mmol/L;
防腐剂,0.04-0.08w/v%;
所述稀释保存液的pH为6.0-8.0。
8.如权利要求7所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述表面活性剂为吐温20或曲拉通100中的一种。
9.如权利要求3所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述缓冲液为HEPES缓冲液、MES缓冲液或PBS缓冲液中的一种。
10.如权利要求3所述的辣根过氧化物酶偶联物稀释保存液,其特征在于,所述防腐剂为BND-99或PC-300中的至少一种。
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