CN117003865A - 抗犬c反应蛋白抗体或其功能性片段及其应用 - Google Patents

抗犬c反应蛋白抗体或其功能性片段及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段及其应用。本发明的不仅提供了一种于cCRP结合高亲和力的单克隆抗体(野生型)，还对该野生型做做了多个活性突变，并验证各突变的亲和力，为免疫检测cCRP领域的研究提供了参考。

Description

抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段及其应用。
背景技术
机体在受到创伤、感染等刺激时，会出现急性期反应，受到刺激的巨噬细胞、成纤维细胞和内皮细胞会释放出多种促炎因子，促进肝脏合成急性期反应蛋白。常见的急性期反应蛋白包括C反应蛋白、血清淀粉样本蛋白、触珠蛋白等。C反应蛋白是犬主要的急性反应期蛋白，具有快速合成、快速下降的特点。犬C反应蛋白的含量在健康犬体内为<10mg/L，在炎症刺激后的4到6小时内升高，48小时可达到峰值，此时，血清中该蛋白的浓度比正常值升高约100-1000倍。当全身炎症消退后，可在24小时内减少50％，所以，犬C反应蛋白对感染早期判断具有很强敏感性。另外，通过检测犬血清中CRP的含量，可用来鉴别细菌感染、病毒感染、血液寄生虫感染、创伤性疾病、肿瘤等疾病的辅助诊断。因此，临床上犬CRP已经作为一种全身性炎症和疾病发展的监控指标。
目前，临床上血清中犬C反应蛋白的检测一般采用单向免疫扩散法、酶联免疫法及胶乳比浊法等免疫检测方法，而免疫检测方法的灵敏度和准确性很大程度上依赖与抗原抗体的反应性，因此性能优良的单克隆抗体十分重要。
发明内容
本发明的目的在于提供抗犬C反应蛋白(cCRP)抗体或其功能性片段，实现与犬C反应蛋白的特异性结合，并最终应用到能够快速、准确检测犬炎症反应的免疫检测产品中。
具体如下：
抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段具有如下互补决定区：
CDR-VH1：X1-Y-X2-V-H，其中X1是T或N，X2是R或G；
CDR-VH2：X1-I-W-S-G-G-X2-T-D-Y-N-X3-A-F-I-S，其中X1是S或V，X2是N或S，X3是K、Q或A；
CDR-VH3：N-X1-D-Y-D-Y-F-D-X2，其中X1是G或S，X2是Y或V；
CDR-VL1：K-A-S-Q-X1-V-G-T-A-X2-A，其中X1是D或N，X2是V；
CDR-VL2：X1-A-S-T-X2-H-T，其中X1是Y或W；X2是L、R或E；
CDR-VL3：Q-Q-X1-S-S-C-P-X2-T，其中X1是A或Y，X2是P或Y。
进一步地，所述互补决定区的CDR-VH1中X1是N，CDR-VH2种X2是S，CDR-VH3种X1是G，CDR-VL1种X2是V，CDR-VL2中X1是W，CDR-VL3中X2是Y。
本发明所述CDR区段划分采用Kabat算法。
“CDR”在本文中用于指抗体可变序列内的“互补决定区”。重链和轻链的可变区各有3个CDR，从重链或轻链的N端开始。
抗原结合位点可以包括六个CDR(本发明中的CDR-VH1、CDR-VH2、CDR-VH3、CDR-VL1、CDR-VL2和CDR-VL3)。包含单个CDR(例如CDR-VH1、CDR-VH2、CDR-VH3、CDR-VL1、CDR-VL2活CDR-VL3)的多肽可称为“分子识别单元”。抗原-抗体复合物的晶体学分析已经证明CDR的氨基酸残基与结合的抗原形成广泛接触，其中最广泛的抗原接触是与重链CDR3。因此，分子识别单元可能主要负责抗原结合位点的特异性。一般而言，CDR残基直接且最实质性地参与影响抗原结合。
本发明的发明人发现，在各互补决定区中的上述突变位点为上述氨基酸残基时，该抗体对犬C反应蛋白具有更好的亲和力。
在可选的实施方式中，所述CDR-VH1中X1是T；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH1中X1是N；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH1中X2是R；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH1中X2是G；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X1是S；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X1是V；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X2是N；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X2是S；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X3是Q；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X3是K；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH2中X3是A；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH3中X1是G；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH3中X1是S；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH3中X2是Y；
在可选的实施方式中，所述CDR-VH3中X2是V；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL1中X1是D；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL1中X1是N；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL1中X2是V；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL2中X1是Y；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL2中X1是W；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL2中X2是L；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL2中X2是R；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL2中X2是E；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL3中X1是A：
在可选的实施方式中，所述CDR-VL3中X1是Y；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL3中X2是P；
在可选的实施方式中，所述CDR-VL3中X2是Y。
进一步地，所述抗体包括轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L和重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H；所述重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H依次选自SEQ IDNO:1-4；所述轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L依次选自SEQ ID NO:5-8。
进一步地，所述抗体还包含恒定区。
优选的，所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区，优选的，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
优选的，所述功能性片段选自所述抗体的VHH、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
进一步地，所述抗体为标记抗体。
本发明所述“标记抗体”为标记有可被检测的标记物。
术语“抗体”包括各种形式的抗体结构，包括但不限于完整抗体和抗体片段。根据本发明的抗体优选是山羊、绵羊、小鼠、兔或大鼠抗体，嵌合抗体或进一步的基因工程抗体，只要保留根据本发明的特征性质。“抗体片段”包含全长抗体的一部分，优选其可变结构域，或至少其抗原结合部位。抗体片段的实例包括双抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；单链抗体分子；scFv、sc(Fv)2；双抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
优选的，所述可被检测的标记物包括但不限于生物素、荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物；
优选的，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物、罗丹明类染料及其衍生物、Cy系列染料及其衍生物、Alexa系列染料及其衍生物、ATTOTM系列染料、TYE系列染料、量子点和蛋白类染料及其衍生物等；
所述酶为催化底物显色的酶所述催化底物显色的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。优选的，所述催化底物显色的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶；
优选的，所述放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F；
优选的，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物；
优选的，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒；
优选的，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶；
优选的，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
另一方面，本发明公开了一种检测试剂盒，所述检测试剂盒含有所述的抗cCRP抗体或其功能性片段。
优选的，所述检测试剂盒为荧光免疫层析检测试剂盒。
优选的，所述试剂盒检测的样本选自全血、血清、血浆、尿液或唾液的体液。
有益效果：
本发明的不仅提供了一种于犬C反应蛋白结合高亲和力的单克隆抗体(野生型)，还对该野生型多个活性突变，并验证各突变的亲和力，为免疫检测犬C反应蛋白领域的研究提供了参考。
附图说明
图1：本发明试剂与对照试剂临床相关性分析。
具体实施例
具体为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”、“可以”及其变体旨在是开放式的不排除附加行为或结构的可能性的过渡性短语、术语或词语。
除非另外指明，否则实践本发明将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratoryManual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal CellCulture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols inMolecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:ThePolymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(CurrentProtocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1单克隆抗体的制备
1、小鼠免疫及抗体检测
挑选10只6-8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，将弗氏完全佐剂与浓度为1mg/ml的犬C反应蛋白按等体积混合，并在乳化器上进行乳化。乳化好的抗原免疫6-8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，采用脚底注射或背部皮下注射每只小鼠注射50μg抗原蛋白。初次免疫完成两周后，将抗原蛋白与弗氏不完全佐剂混合乳化，再次采用脚底注射或背部皮下注射每只小鼠注射50μg抗原蛋白。两周以后通过尾静脉采血，离心收集上清并用间接ELISA法检测血清效价。筛选血清效价高于1：100000的小鼠进行细胞融合。
2、细胞融合和阳性杂交瘤筛选及亚克隆
细胞融合：准备处于对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0细胞和饲养层细胞，取小鼠的脾脏细胞或淋巴结细胞，将其与SP2/0细胞按1:1比例混合，在电融合仪上完成融合形成杂交瘤细胞。融合完成后将杂交瘤细胞转移至有血清的RPMI-1640培养基中，进行96孔铺板培养，每孔杂交瘤细胞数为105细胞数，补加饲养层细胞，按每孔105进行补加。补加完成后，将细胞培养板置于细胞培养箱中培养10天，10天后进行阳性杂交瘤筛选。
阳性杂交瘤筛选及亚克隆：采用间接ELISA筛选方法鉴定细胞培养液中的融合细胞，以确定是否产生特异性抗体。对阳性孔的细胞进行亚克隆，亚克隆当天制备饲养层细胞。取需要进行亚克隆的细胞轻轻吹打，制成单细胞悬液，加入计数板，计算细胞密度。按每板100个细胞，取所需体积，加入适量完全培养基中，充分混匀后加入96孔板。选出亲和力最高的单克隆杂交瘤细胞。
3、单克隆抗体的生产纯化
选择两组6-8周BALB/c小鼠，腹腔注射500μL石蜡油以抑制小鼠免疫反应。石蜡注射注射一周后，在其中一组小鼠腹腔内注入0.5ml的上述单克隆杂交瘤细胞，细胞数量约1×106数量；两周之后进行腹水收集。收集的腹水经硫酸铵沉淀和蛋白A的亲和纯化得到目的抗体。
实施例2抗体性能的验证
1、ELISA亲和力测试
利用包被液(0.05M pH＝9.5的碳酸盐和碳酸氢盐缓冲液)将羊抗鼠稀释至1ug/mL，按照每孔100μL的量加入96孔酶标板，于4℃包被过夜。用含有0.05％Tween-20的PBS缓冲液进行3次洗板。用稀释液(1％BSA，0.1％PBST)将抗体稀释至1ug/mL，按照每孔100μL的量加入96孔酶标板，于37℃孵育30分钟。用稀释液将生物素标记的犬C反应蛋白稀释至100ng/mL，取出37℃孵育的酶标板，进行3次洗板，将准备好的抗体犬C反应蛋白稀释液按150μL的量加入A行的96孔酶标板，将稀释液按照每孔100μL的量加入B～H行96孔酶标板中，取A行孔中的抗体稀释液50uL，从B行依次进行3倍梯度稀释，于37℃孵育30分钟。用稀释液将标记辣根过氧化物酶的亲和素按1:5000稀释，取出酶标板进行3次洗板，按照每孔100μL的量加入96孔酶标板，于37℃孵育30分钟。取出酶标板进行3次洗板，加入显色液，室温显色3分钟，加入0.5M硫酸终止反应，在读板仪上读取OD450值。
实施例1中的目的抗体其重链可变区如SEQ ID NO:9所示，其中，重链可变区上的各互补决定区的氨基酸序列如下：
CDR-VH1：T(X1)-Y-G(X2)-V-H；
CDR-VH2：V(X1)-I-W-S-G-G-N(X2)-T-D-Y-N-A(X3)-A-F-I-S；
CDR-VH3：N-S(X1)-D-Y-D-Y-F-D-V(X2)；
其轻链可变区如SEQ ID NO:10所示，其中，轻链可变区上的各互补决定区的氨基酸序列如下：
CDR-VL1：K-A-S-Q-D(X1)-V-G-T-A-V(X2)-A；
CDR-VL2：Y(X1)-A-S-T-E(X2)-H-T；
CDR-VL3：Q-Q-Y(X1)-S-S-C-P-P(X2)-T。
在目的抗体的基础上，在互补决定区中对于抗体活性有关的位点进行突变，其中，X1、X2、X3均为突变位点。
表1与抗体活性有关的突变位点
表2抗体活性分析数据
从上表可以看出，突变3的活性效果最佳，因而以突变2作为骨架序列，筛选亲和力较好的突变位点，部分结果如下：
表3与抗体亲和力有关的突变位点
犬C反应蛋白100ng/ml
测量每个突变OD450的吸光值，结果如下：
表4抗体突变的亲和力测试
突变3-1 2.3850 突变3-2 2.3189 突变3-3 2.3754 突变3-4 2.4127 突变3-5 2.2424
突变3-6 2.5207 突变3-7 2.4548 突变3-8 2.3144 突变3-9 2.3077 突变3-10 2.4125
突变3-11 2.3220 突变3-12 2.2031 突变3-13 2.4208 突变3-14 2.5220 突变3-15 2.3297
突变3-16 2.4355 突变3-17 2.4084 突变3-18 2.3764 突变3-19 2.5369 突变3-20 2.4421
突变3-21 2.3415 突变3-22 2.3804 突变3-23 2.3744 突变3-24 2.3098 突变3-25 2.4571
突变3-26 2.3083 突变3-27 2.4128 突变3-28 2.4198 突变3-29 2.3208 突变3-30 2.3609
突变3-31 2.2891 突变3-32 2.3752 突变3-33 2.4214 突变3-34 2.3552 突变3-35 2.4475
2、稳定性测定
本发明抗体的浓度1ug/mL，cCRP的浓度100ng/mL。
将抗体在既定缓冲(PBS，0.05％ProClinTM300)中进行37℃热加速7天，通过SDS-PAGE及ELISA间接法对加速抗体进行评价，与4℃作对照，鉴定抗体的长期稳定性。另外通过在-20℃进行反复冻融5次，测量结果如下：
表5稳定性研究
从上可以看出，突变3到突变3-35可以在4℃下稳定保存，在37℃加速0.5个月性质依旧稳定(轻微的反应性下降未影响试剂性能)，保证了开瓶使用试剂的性能，从而保证检测结果的准确和稳定。
实施例3抗体的应用
本实施例利用犬C反应蛋白单克隆抗体在荧光免疫层析法中的应用来展现本发明抗体应用上展现的优良性能。
A.荧光免疫层析试剂盒的检测原理
采用基于双抗体夹心法原理的免疫荧光层析法。所述犬C反应蛋白免疫荧光定量试剂卡包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维膜上设有一条包被羊抗鼠的质控C线、一条包被cCRP单克隆抗体A的检测T线和一条包被荧光微球标记的cCRP单克隆抗体B的微球线。当进行检测时，血清中的cCRP与荧光标记抗体B形成复合物，由于层析作用复合物沿硝酸纤维素膜向前移动被检测T线处的抗体A捕获，形成“荧光微球标记B-cCRP-A”复合物，该复合物在紫外光激发下能激发产生615nm的红光，激发产生的荧光强度与试纸条上富集的反应复合物数量成正比，即可计算出检样中抗原的含量。
B.荧光免疫层析试剂盒的制备
本发明试剂盒包括标记1mg/mL抗体B的荧光微球、包被有抗体A、抗体B和羊抗鼠的硝酸纤维素膜和试剂卡组装。
所述荧光微球标记抗体B是将荧光微球用EDC活化0.5h，将抗体B与荧光微球按1:50的质量比混合，室温旋转标记2.5h，使用BSA封闭剂封闭1h，封闭结束后12000rpm离心去掉上清，用稀释液调整浓度到1mg/mL，使用水浴超声处理得到足够分散的标记有抗体B的荧光微球。
所述硝酸纤维素膜是将抗体A和羊抗鼠用包被液(0.05MpH＝9.5的碳酸盐和碳酸氢盐缓冲液)调整到1mg/mL，利用划膜仪将配制好的抗体A划到硝酸纤维素膜上检测线区，将羊抗鼠溶液划到硝酸纤维素膜上质控线区；将标记抗体B的荧光微球标记划到硝酸纤维素膜上的微球线区，将硝酸纤维素膜置于45℃烘箱烘干。
所述试剂卡组装是在塑料底板上依次紧密搭接样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫。将贴好的中间物用斩切机切成0.5cm宽一条的试纸条，装在塑料卡壳中。塑料底衬、样品垫、吸水垫、塑料卡壳为本领域通用材料。
C.荧光免疫层析试剂盒的检测方法
使用重庆中元汇吉生物技术股份有限公司研发的Q3VET进行检测。
标准曲线绘制
将cCRP用血清配制成系列浓度标准品：0mg/L、3.125mg/L、6.25mg/L、12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L。取5uL标准品加入995uL样本稀释液中混匀，吸取60uL混合液滴加到试剂卡的加样孔中，插入Q3VET，3min后读取检测区与质控区信号强度的比值，即T/C值(每个质控点测试两次，取平均值)，绘制相应的标准曲线。
样本的检测
取血清/血浆5uL加入995uL样本稀释液中混匀；吸取60uL混合液滴加到试剂卡的加样孔中，插入Q3VET荧光仪，3min后读取检测区与质控区信号强度的比值，即T/C，通过标准曲线可获得样品中的cCRP的含量。
血清中cCRP的临床相关性的检测
利用本实施例试剂盒与对照试剂盒检测120例相同浓度梯度的犬血清样品，验证本发明中试剂盒的临床相关性。
实施例中无法详尽各种方案，本实施例选择，所述抗体B选择突变3-20，所述抗体A序列重链可变区如SEQ ID NO:11所示，轻链可变区如SEQ ID NO:12所示。
结果如图1所示，本发明试剂盒与对照试剂盒临床有较强相关性，R2为0.978。表明发明的突变3-20和抗体A应用到荧光免疫层析试剂盒中，可实现cCRP的特异性检测。D、血清中cCRP的检测精密度
利用本发明的荧光免疫层析试剂盒检测分别检测低值和高值样本，每份检测8次，计算精密度，结果如表6所示，精密度<10％。
表6血清中cCRP的检测精密度
测试点 低值ug/mL 高值ug/mL
1 11.9 63.3
2 12.6 66.2
3 11.4 58.2
4 11.2 56.8
5 12.0 65.5
6 11.3 66.2
7 12.2 61.5
8 12.9 55.3
Mean 11.9 61.6
SD 0.6113 4.3857
CV 5％ 7％
结果表明本发明中的突变3-20和A应用到荧光免疫层析试剂盒中，可实现cCRP的准确检测。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，具有如下互补决定区：
CDR-VH1：X1-Y-X2-V-H，其中X1是T或N，X2是R或G；
CDR-VH2：X1-I-W-S-G-G-X2-T-D-Y-N-X3-A-F-I-S，其中X1是S或V，X2是N或S，X3是K、Q或A；
CDR-VH3：N-X1-D-Y-D-Y-F-D-X2，其中X1是G或S，X2是Y或V；
CDR-VL1：K-A-S-Q-X1-V-G-T-A-X2-A，其中X1是D或N，X2是V；
CDR-VL2：X1-A-S-T-X2-H-T，其中X1是Y或W；X2是L、R或E；
CDR-VL3：Q-Q-X1-S-S-C-P-X2-T，其中X1是A或Y，X2是P或Y。
2.如权利要求1所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，所述互补决定区的CDR-VH1中X1是N，CDR-VH2种X2是S，CDR-VH3种X1是G，CDR-VL1种X2是V，CDR-VL2中X1是W，CDR-VL3中X2是Y。
3.如权利要求1所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，所述CDR-VH1中X1是T；
优选的，所述CDR-VH1中X1是N；
优选的，所述CDR-VH1中X2是R；
优选的，所述CDR-VH1中X2是G；
优选的，所述CDR-VH2中X1是S；
优选的，所述CDR-VH2中X1是V；
优选的，所述CDR-VH2中X2是N；
优选的，所述CDR-VH2中X2是S；
优选的，所述CDR-VH2中X3是Q；
优选的，所述CDR-VH2中X3是K；
优选的，所述CDR-VH2中X3是A；
优选的，所述CDR-VH3中X1是G；
优选的，所述CDR-VH3中X1是S；
优选的，所述CDR-VH3中X2是Y；
优选的，所述CDR-VH3中X2是V；
优选的，所述CDR-VL1中X1是D；
优选的，所述CDR-VL1中X1是N；
优选的，所述CDR-VL1中X2是V；
优选的，所述CDR-VL2中X1是Y；
优选的，所述CDR-VL2中X1是W；
优选的，所述CDR-VL2中X2是L；
优选的，所述CDR-VL2中X2是R；
优选的，所述CDR-VL2中X2是E；
优选的，所述CDR-VL3中X1是A：
优选的，所述CDR-VL3中X1是Y；
优选的，所述CDR-VL3中X2是P；
优选的，所述CDR-VL3中X2是Y。
4.如权利要求1-3任意一项所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，所述各互补决定区选自如下突变组合中任意一种：
5.如权利要求1-4任意一项所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体包括轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L和重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H；所述轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L依次选自SEQ ID NO:1-4；所述重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H依次选自SEQ ID NO:5-8。
6.如权利要求5所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体还包含恒定区；
优选的，所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区，优选的，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
7.如权利要求6所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段，其特征在于，抗体均为标记抗体；
优选的，所述标记抗体的标记物包括但不限于生物素、荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物；
优选的，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物、罗丹明类染料及其衍生物、Cy系列染料及其衍生物、Alexa系列染料及其衍生物、ATTOTM系列染料、TYE系列染料、量子点和蛋白类染料及其衍生物等；
所述酶为催化底物显色的酶所述催化底物显色的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。优选的，所述催化底物显色的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶；
优选的，所述放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F；
优选的，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物；
优选的，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒；
优选的，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶；
优选的，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
8.一种检测试剂盒，所述检测试剂盒含有如权利要求1-7任一项所述的抗犬C反应蛋白抗体或其功能性片段。
9.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为荧光免疫层析检测试剂盒。
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