CN116981691A - 抗原结合分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及特异性结合白细胞介素31(IL‑31)的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含免疫球蛋白重链可变结构域和免疫球蛋白轻链可变结构域。

Description

抗原结合分子及其用途
【相关申请】
本申请要求2020年11月23日提交的美国临时申请No.63/117,383的优先权和权益。上述专利申请的内容通过引用整体并入本文。
【发明领域】
本发明一般涉及抗原结合分子。特别地，本发明涉及特异性结合白细胞介素31(IL-31)并中和其活性的抗原结合分子及其在治疗与异常IL-31表达和/或活性相关的病状如慢性炎症、特应性皮炎、湿疹、瘙痒症、气道过敏和炎症性肠综合征中的用途。
【序列表】
本申请包含序列表，该序列表已通过EFS-Web以ASCII格式提交，并通过引用整体并入本文。该ASCII副本创建于2021年11月22日，名为“SCTB-012-01WO_SeqList_ST25.txt”，大小为61KB。
【背景】
所有参考文献，包括本说明书中引用的任何专利或专利申请，均通过引用并入本文，以便能够充分理解本发明。然而，这些参考文献不应被理解为承认任何这些文件在澳大利亚或任何其他国家构成本领域公知常识的一部分。
正如 and Ruzicka(2018,J.Allergy Clin.Immunol.；141(3):858-866)所讨论的，IL-31是一种在许多人体组织中表达的细胞因子，并与Th2-偏向炎症反应相关。IL-31通过由IL-31受体α和制瘤素M受体β组成的受体复合物发出信号。研究表明，IL-31与慢性瘙痒性皮肤病(如特应性湿疹)密切相关，代表了定向药物治疗的新靶点。
IL-31属于糖蛋白130(gp130)/IL-6细胞因子家族，其还包括白血病抑制因子、抑癌蛋白M(OSM)、心肌营养素-1、睫状神经营养因子、心肌营养素样细胞因子、IL-6和IL-11。该家族的成员在其多单元受体中共享gp130的共同链，并参与神经生长、骨代谢、心脏发育和免疫调节，例如T细胞分化。在人类中，编码IL-31的基因位于染色体12q24.31上，且由编码164个氨基酸的前体的开放阅读框和含有4个α螺旋结构的预测的141个氨基酸的成熟多肽组成。IL-31还与非皮肤病学病况有关，例如过敏性哮喘和鼻炎、炎症性肠病、恶性肿瘤(例如癌症)和骨质疏松症。
从治疗的角度，使用人源化抗人IL-31RA单克隆抗体奈莫利珠单抗(CIM331)在健康受试者和特应性皮炎患者中进行了研究IL-31信号传导阻断的首批人体试验之一。研究表明，奈莫利珠单抗的单次皮下剂量显著降低瘙痒症的视觉模拟量表(VAS)评分和局部类固醇的使用，并提高睡眠效率，尽管有不良事件的报告，包括特应性皮炎的恶化和外周水肿，特别是与接受安慰剂的患者相比在接受奈莫利珠单抗的患者中。
因此，仍然迫切需要改进的治疗策略来治疗与过量IL-31水平和/或活性相关的病状，例如瘙痒症和其他皮肤病学和非皮肤病学病状。
【发明概述】
本公开内容至少部分基于包含能够特异性结合天然IL-31的互补决定区(CDR)的抗IL-31结合分子，且其框架区可以被修饰以与目标物种相容而不丧失对天然IL-31的结合特异性和选择性。因此，本文公开的IL-31结合分子适合用于治疗和预防与异常IL-31水平和/或活性相关的病状，其说明性实例包括瘙痒症和特应性皮炎。
因此，在本文公开的一个方面，提供了特异性结合白细胞介素-31(IL-31)的抗原结合分子，其中该抗原结合分子包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，其中所述VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，VH CDR1包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VH CDR2包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列和VH CDR3包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；且其中所述VL包含互补决定区1(VL CDR1)、VL CDR2和VL CDR3，VL CDR1包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VL CDR2包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，和VL CDR3包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中CDR的氨基酸序列基于IMGT编号。
本公开内容还至少部分基于发明人的发现，即本文公开的IL-31结合分子特异性结合犬科动物IL-31的区域，该区域尚未被鉴定为已知抗-IL-31抗体分子的结合区域。因此，在本文公开的另一个方面，提供了不与(i)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26的IL-31区域的IL-31结合分子或(ii)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84的IL-31区域的IL-31结合分子竞争结合IL-31的抗原结合分子。
本公开内容还延伸至编码本文所述的抗原结合分子(包括它们的重链和轻链序列及其IL-31结合片段)的核酸序列。
因此，一方面，提供了分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗原结合分子的核酸序列。
本文还公开了一种表达构建体，其包含编码本文所述的抗原结合分子的核酸序列。核酸序列可以可操作地连接到一个或多个调节序列。
本公开内容还延伸至包含本文所述的表达构建体的宿主细胞。
本公开内容还延伸至包含编码本文所述的抗原结合分子的核酸序列的载体。在一个实施方案中，该载体是AAV载体。
本公开内容还延伸至包含本文所述的抗原结合分子和药学上可接受的载体的药物组合物。
在本文公开的另一个方面，提供了治疗或预防与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状的方法，该方法包括向有需求的受试者施用如本文所述的抗原结合分子、载体或药物组合物。
本公开内容还延伸至包含本文所述的抗原结合分子、载体或药物组合物的试剂盒。
在本文公开的另一个方面，提供本文所述的抗原结合分子或载体在制备用于治疗或预防有需求的受试者中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状的药物中的用途。
本公开内容还延伸至如本文所述的抗原结合分子、载体或药物组合物，用于治疗或预防有需求的受试者中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状。
本公开内容还延伸至如本文所述的抗原结合分子、载体或药物组合物，用于治疗或预防有需求的受试者中由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状。
本公开内容还延伸至特异性结合犬科动物IL-31的表位的抗原结合分子，所述表位包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40。
本公开内容还延伸至抗原结合分子，其与本文描述的抗原结合分子竞争结合SEQID NO：1的犬科动物IL-31。
本公开内容还延伸至能够引起针对IL-31的免疫应答的免疫原性组合物，其中该组合物包含(i)包含IL-31的B细胞表位的免疫原和(ii)药学上可接受的载体，其中B细胞表位包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，且其中免疫原不包含天然IL-31分子的氨基酸序列。
【附图说明】
以下仅通过非限制性示例的方式参考附图描述本发明的实施方案，其中：
图1显示了RA4与犬科动物IL-31的结合。剂量反应曲线显示了嵌合单克隆抗体RA4(chRA4)与犬科动物IL-31的结合，如通过ELISA测定的。显示的结果是特异性结合在405nm处的吸光度与背景的比率。
图2显示了犬科动物DH82细胞中犬科动物IL-31诱导的STAT-3磷酸化的抑制。在添加到DH82细胞之前，将不同浓度的chRA4单克隆抗体与犬科动物IL-31预温育。这些数据表明RA4可以以剂量依赖性方式有效抑制IL-31诱导的STAT-3磷酸化。观察到的IC50为1.5μg/mL。
图3显示抗IL-31抗体schRA4、M14和34D03与犬科动物IL-31(caIL-31)、猫科动物IL-31(feIL-31)、犬科动物IL-31突变体1和犬科动物IL-31突变体2的结合，如通过ELISA测定的。数据显示嵌合RA4与犬科动物IL-31、猫科动物IL-31和2种犬科动物IL-31突变体(突变体1和2)的结合同样好。M14结合犬科动物IL-31和犬科动物IL-31突变体1，但不结合犬科动物IL-31突变体2。M14与猫科动物IL-31的结合也减少了。34D03也结合犬科动物IL-31并在较小程度上结合猫科动物IL-31，但不结合任一犬科动物IL-31突变蛋白。
图4A显示犬科动物/人嵌合蛋白ca/huIL-31_c123_h4、cahuIL-31_c12_h34和cahuIL-31_c1_h234的示意图。图4B显示单克隆抗体RA4结合犬科动物IL-31(caIL-31)、人IL-31(hIL-31)和嵌合犬科动物/人IL-31蛋白(c123_h4、c12_h34和c1_h234)的剂量反应曲线，如通过ELISA确定的。
图5A显示覆盖犬科动物IL-31的N-末端序列的重叠肽的截短系列的示意图。图5B显示了RA4和2种先前描述的抗IL-31单克隆抗体M14和34D03与全长犬科动物IL-31(Fullca IL-31)和源自犬科动物IL-31的N-末端的重叠肽的结合，如通过ELISA确定的。
图6显示了犬科动物IL-31的N末端区域中对RA4 mAb结合很重要的残基的鉴定。生成了犬科动物IL-31的N末端结构域的25个氨基酸区域的丙氨酸扫描文库。通过ELISA评估RA4 mAb与每个修饰的(丙氨酸取代的)肽的结合。将与每个修饰的肽的结合归一化至与X轴最左侧系列中的第一个肽(异亮氨酸)的结合。
图7显示RA4 mAb结合犬科动物IL-31的N-末端的不同且独特的区域。具有单个丙氨酸取代或所有四个丙氨酸取代的组合的全长犬科动物IL-31蛋白用于通过ELISA评估RA4mAb(A)或M14 mAb(B)的结合。包括野生型犬科动物IL-31(caIL-31；SEQ ID NO：1)作为对照。
【详细描述】
如本文别处所述，本公开内容至少部分基于包含能够特异性结合天然IL-31的互补决定区(CDR)的抗IL-31结合分子，且其框架区可以进行修饰以与目标物种相容，而不损失对天然IL-31的结合特异性和选择性。因此，本文公开的IL-31结合分子适合用于治疗和预防与异常IL-31水平和/或活性相关的病状，其说明性实例包括瘙痒症和特应性皮炎。
因此，本文公开了特异性结合白介素-31(IL-31)的抗原结合分子，其中该抗原结合分子包含免疫球蛋白重链可变结构域(VH)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL)，其中所述VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，VH CDR1包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VH CDR2包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列和VH CDR3包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；且其中所述VL包含互补决定区1(VLCDR1)、VL CDR2和VL CDR3，VL CDR1包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VL CDR2包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，和VL CDR3包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中CDR的氨基酸序列基于IMGT编号。
除非另有说明，本文公开的CDR序列基于IMGT编号。
本公开内容还至少部分基于发明人的发现，即本文公开的IL-31结合分子特异性结合IL-31的区域，该区域对于已知的IL-31结合分子尚未被鉴定。因此，在本文公开的一个方面，提供了不与(i)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26的IL-31区域的IL-31结合分子或(ii)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84的IL-31区域的IL-31结合分子竞争结合IL-31的抗原结合分子。
术语“对应于”是指当与SEQ ID NO：1的犬科动物IL-31肽序列比对时，包含与SEQID NO：1的残基对齐的氨基酸残基的IL-31肽序列的区域。例如，对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26的IL-31区域是指当与SEQ ID NO：1的犬科动物IL-31肽序列比对时，包含与SEQ ID NO：1的位置13、15、20和26处的残基对齐的氨基酸残基的IL-31肽序列的区域。类似地，对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84的IL-31区域是指当与SEQID NO：1的犬科动物IL-31肽序列比对时，包含与SEQ ID NO：1的位置76、77、80、81和84处的残基对齐的氨基酸残基的IL-31肽序列的区域。
如本文别处所述，本发明人还发现本文公开的IL-31结合分子结合包含SEQ IDNO：1的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40的IL-31表位。因此，本文公开了特异性结合犬科动物IL-31表位的抗原结合分子，所述表位包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40。
本公开内容还延伸至抗原结合分子，其与本文所述的抗原结合分子竞争结合SEQID NO：1的犬科动物IL-31。
如本文所用，术语“竞争”表示2种或更多种抗原结合分子竞争结合抗原(例如，IL-31)。在一个示例性测定中，IL-31被包被在固体基质上并允许结合第一抗原结合分子，之后添加第二抗原结合分子。如果第一抗原结合分子的存在降低第二抗原结合分子与IL-31的结合，则抗原结合分子被鉴定为竞争结合IL-31。术语“竞争”还包括抗原结合分子的组合，其中一种抗原结合分子减少另一种抗原结合分子的结合，但当以相反顺序添加抗原结合分子时未观察到竞争。然而，在一些实施方案中，第一和第二抗原结合分子抑制彼此与抗原的结合，无论它们添加的顺序如何。在一个实施方案中，一种抗原结合分子将另一种抗原结合分子与抗原的结合减少至少20％、优选至少30％、优选至少40％、优选至少50％、优选至少至少60％、优选至少70％、优选至少80％、优选至少90％，或更优选至少95％。
如本文所用，术语“抗原结合分子”是指对靶抗原具有结合特异性的分子。应理解该术语延伸至表现出抗原结合活性的免疫球蛋白、免疫球蛋白片段和非免疫球蛋白衍生的蛋白质框架。合适的抗原结合分子的说明性实例包括抗体及其抗原结合片段。优选地，抗原结合分子特异性结合IL-31以中和或基本上中和其活性。术语“中和”理解为是指抗原结合分子将结合IL-31并抑制、减少、废除、阻断或以其他方式阻止IL-31分子结合其天然受体的能力。在一些实施方案中，抗原结合分子将完全中和IL-31的活性(体内或体外)，使得与不存在抗原结合分子时相比，没有IL-31活性或存在可忽略不计的IL-31活性。在其他实施方案中，抗原结合分子将部分中和IL-31的活性(体内或体外)，使得与不存在抗原结合分子时相比，IL-31活性较低。
如本文所用，术语“抗体”应理解为是指包含至少一个互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物，其特异性结合靶抗原或与靶抗原特异性相互作用。术语“抗体”包括包含通过二硫键相互连接的两条重链(H)和两条轻链(L)的全长免疫球蛋白分子，及其多聚体(例如，IgM)。每条重链包含重链可变区(其可缩写为HCVR、VH或VH)和重链恒定区。重链恒定区通常包含三个结构域-CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(其可缩写为LCVR、VL、VK、VK或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区通常包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其中散布着更保守的区域，也称为框架区(FR)。每个VH和VL通常包含三个CDR和四个FR，其按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在一些实施方案中，本文所述的抗原结合分子的FR可以与目标物种(即，如本文所述的抗原结合分子或其抗原结合片段将施用至的物种)的种系序列的FR相同。在一些实施方案中，FR可以是天然或人工修饰的。虽然通常希望每个FR序列与源自目标物种的免疫球蛋白分子的FR序列相同，包括在向目标物种的受试者施用后最小化针对结合分子产生的免疫反应，但在一些实施方案中，抗原结合分子或其抗原结合片段可在其一个或多个FR序列中一包含个或多个氨基酸残基，其在来自目标物种的一个或多个FR中的对应位置处将是外来的。优选地，当抗原结合分子或其抗原结合片段在其一个或多个FR序列中包含在目标物种中的相应位置处将是外来的一个或多个氨基酸残基时，该“外来”氨基酸残基不会(i)不利地影响抗原结合分子或其抗原结合片段对IL-31(包括天然IL-31)的结合特异性和/或(ii)在施用至目标物种的受试者时引起针对抗原结合分子或其抗原结合片段的免疫反应，。
合适的抗体包括犬科动物IgGA、IgGB、IgGC和IgGD以及猫科动物IgG1a、IgG1b和IgG2(包括其亚类)。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型将是本领域技术人员所熟知的。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR)指识别并结合靶抗原的免疫球蛋白可变结构域的区域。每个可变结构域可包含多达三个CDR序列，标识为CDR1、CDR2和CDR3。每个CDR的氨基酸序列通常由Kabat编号(例如，关于轻链可变结构域的残基24～34(L1)、50～56(L2)和89～97(L3)和重链可变结构域的残基31～35(H1)、50～65(H2)和95～102(H3)；Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))和/或Chothia编号(例如，关于轻链可变结构域的残基26～32(L1)、50～52(L2)和91～96(L3)以及重链可变结构域的26～32(H1)、53～55(H2)和96～101(H3)；参见Chothia and LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))定义。本文公开的CDR序列基于IMGT编号，除非另有说明否则。
在一个实施方案中，如本文所述，抗原结合分子缀合至另一分子或部分，包括功能部分(例如，毒素)、可检测部分(例如，荧光分子、放射性同位素)、小分子药物和多肽。
应当理解，可以对本文所述的抗原结合分子进行修饰，包括对CDR序列进行修饰，而不会不利地影响本文所述的抗原结合分子的结合特异性。因此，本公开内容延伸至本文公开的IL-31结合分子的功能变体。如本文所用，术语“功能变体”应理解为意指包含与亲本或比较序列(例如，VH和/或VL)相差一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21等)氨基酸缺失、插入和/或取代的氨基酸序列的IL-31结合分子，其中所述差异不会或不会完全消除变体结合IL-31的能力。
确定变体是否保留所述功能的合适方法将是本领域技术人员所熟悉的，其说明性实例在本文别处描述。功能变体可包含不同于比较序列(例如，SEQ ID NO：12和13)的氨基酸序列。在一些实施方案中，功能变体可以包含氨基酸取代，与该变异所比较的参考分子(例如，包含SEQ ID NO：12和13的VH和VL的抗原结合分子)相比，该氨基酸取代增强了抗原结合分子对IL-31的结合亲和力。在一个实施方案中，功能变体与比较物的不同之处在于一个或多个保守氨基酸取代，如本文别处所述。
提及“至少80％序列同一性”包括与参考序列(例如，SEQ ID NO：6～13中的任何一个)的80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性，例如，在最佳比对或最佳拟合分析之后。因此，在一个实施方案中，抗原结合分子的功能变体包含与SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％、优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，例如，在最佳比对或最佳拟合之后分析。在另一个实施方案中，抗原结合分子的功能变体的CDR序列包含与SEQ ID NO：6～11中的任一个具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％，优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，例如，在最佳比对或最佳拟合分析之后。
在一个实施方案中，(i)VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，VHCDR1包含与SEQ ID NO：6具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％，优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列，VH CDR2包含与SEQ ID NO:7具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％，优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％、优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％的序列同一性的氨基酸序列和VHCDR3包含与SEQ ID NO：8具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少至少90％，优选至少91％，优选至少92％，优选至少93％，优选至少94％，优选至少95％，优选至少96％，优选至少97％，优选至少98％％，优选至少99％或优选100％的序列同一性的氨基酸序列；(ii)VL包含互补决定区1(VL CDR1)、VLCDR2和VL CDR3，VL CDR1包含与SEQ ID NO：9具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％、优选至少96％，优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列，VL CDR2包含与SEQ ID NO：10具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％，优选至少94％、优选至少95％、优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列，和VL CDR3包含与SEQ ID NO：11具有至少80％、优选至少85％、优选至少86％、优选至少87％、优选至少88％、优选至少89％、优选至少90％、优选至少91％、优选至少92％、优选至少93％、优选至少94％、优选至少95％、优选至少96％、优选至少97％、优选至少98％、优选至少99％或优选100％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，VH CDR1包含与SEQ ID NO：6具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VH CDR2包含与SEQ ID NO：7具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，且VH CDR3包含与SEQ ID NO：8具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；且VL包含互补决定区1(VL CDR1)、VL CDR2和VL CDR3，VL CDR1包含与SEQ ID NO：9具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，VL CDR2包含与SEQ ID NO：10具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，以及VL CDR3包含与SEQ ID NO：11具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，VH CDR1包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，VH CDR2包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成和VH CDR3包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成；且VL包含互补决定区1(VL CDR1)、VL CDR2和VL CDR3，VL CDR1包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成、VL CDR2包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成，和VL CDR3包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子包含重链可变区(VH)，其包含SEQID NO：12的氨基酸序列或与其具有至少80％、优选至少85％，优选至少90％，优选至少95％，或更优选至少98％的序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子包含轻链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列或与其具有至少80％、优选至少85％、优选至少90％、优选至少95％，或更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子包含(a)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列或与其具有至少80％、优选至少85％，优选至少90％，优选至少95％，或更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列，和(b)轻链可变区(VL)，其包含SEQ IDNO：13的氨基酸序列或与其具有至少80％、优选至少85％、优选至少90％、优选至少95％或更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子包含(a)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，(b)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列，和轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列。
在一个实施方案中，重链可变区(VH)由或基本上由SEQ ID NO：12的氨基酸序列组成，轻链可变区(VL)由或基本上由SEQ ID NO：12的氨基酸序列组成。
如本文所用，术语“同一性”、“相似性”、“序列同一性”、“序列相似性”、“同源性”、“序列同源性”等是指在比对的序列中的任何特定的氨基酸残基位置处，氨基酸残基在比对的序列之间相同。如本文所用，术语“相似性”或“序列相似性”表示在比对的序列中的任何特定位置处，氨基酸残基在序列之间具有相似类型。例如，亮氨酸可以取代异亮氨酸或缬氨酸残基。这可称为保守取代。在一个实施方案中，氨基酸序列可以通过其中包含的任何氨基酸残基的保守取代的方式被修饰，使得当与未修饰的多肽相比时修饰对修饰的多肽的结合特异性或功能活性没有影响。
在一些实施方案中，关于肽序列的序列同一性涉及候选序列中在比对序列并引入缺口(如果需要)以达到最大百分比同源性之后且在不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分的情况下与相应肽序列的残基相同的氨基酸残基的百分比。N或C末端延伸和插入均不应解释为降低序列同一性或同源性。用于执行两个或多个氨基酸序列的比对并确定它们的序列同一性或同源性的方法和计算机程序是本领域技术人员众所周知的。例如，两个氨基酸序列的同一性或相似性百分比可以很容易地使用算法计算，例如BLAST、FASTA或Smith-Waterman算法。
用于确定氨基酸序列“相似性”的技术是本领域技术人员众所周知的。一般而言，“相似性”是指两个或多个肽序列或在适当位置的氨基酸与氨基酸的精确比较，其中氨基酸相同或具有相似的化学和/或物理性质，例如电荷或疏水性。然后可以在比较的肽序列之间确定所谓的“相似性百分比”。通常，“同一性”是指两个肽序列的氨基酸与氨基酸的精确对应。
也可以通过确定它们的“同一性百分比”来比较两个或多个肽序列。两个序列的同一性百分比可以描述为两个比对的序列之间的精确匹配数除以较短序列的长度再乘以100。核酸序列的近似比对由Smith and Waterman,Advances in Applied Mathematics 2:482-489(1981)的局部同源性算法提供。可以使用Dayhoff,Atlas of Protein Sequencesand Structure,M.O.Dayhoff ed.,5suppl.3:353-358,National Biomedical ResearchFoundation,Washington,D.C.,USA开发的评分矩阵将该算法扩展到与肽序列一起使用，并通过Gribskov,Nucl.Acids Res.14(6):6745-6763(1986)归一化。用于计算序列之间的百分比同一性或相似性的合适程序是本领域公知的。
用于比对比较窗口的序列的最佳比对可以通过算法(Wisconsin GeneticsSoftware Package Release 7.0,Genetics Computer Group,575Science DriveMadison,WI,USA中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)的计算机实现或通过检查和由所选的各种方法中的任何一种生成的最佳对齐(即，在比较窗口中产生最高百分比的同源性)来进行。还可以参考BLAST系列程序，例如Altschul等人,1997,Nucl.Acids Res.25:3389所公开的。序列分析的详细讨论可见Ausubel等人,“Current Protocols in MolecularBiology”,John Wiley&Sons Inc,1994-1998,Chapter 15的Unit 19.3。
在一些实施方案中，功能变体在任何一个或多个CDR序列中包含至少一个(例如，1个、2个、3个、4个或5个)氨基酸取代，优选保守氨基酸取代。在一个实施方案中，抗原结合分子在任何一个或多个CDR序列中包含1、2或3个氨基酸取代。在其他实施方案中，功能变体在VH和/或VL序列的非CDR区(例如框架区)中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。
本领域技术人员完全有能力筛选和鉴定能够特异性结合IL-31的功能变体。合适的筛选方法的说明性实例在本文别处描述。
在优选的实施方案中，氨基酸取代是保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”应理解为表示其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中定义，它们通常可以如下表“氨基酸分类”所示进行细分：
【氨基酸亚分类】
保守氨基酸取代还包括基于侧链的分组。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。例如，可以合理地预期用异亮氨酸或缬氨酸替换亮氨酸，用谷氨酸替换天冬氨酸，用丝氨酸替换苏氨酸，或用结构相关的氨基酸进行氨基酸的类似替换不会对所得变体多肽的特性产生重大影响。氨基酸变化是否会产生功能性多肽可通过测定其活性容易地确定。
保守取代还显示在下表(示例性和优选的氨基酸取代)中。落入本发明范围内的氨基酸取代通常通过选择其在维持(a)取代区域中的肽主链结构、(b)分子在目标位点的电荷或疏水性或(c)侧链的主体的作用方面没有显著差异的取代来实现。引入取代后，可以使用本领域技术人员已知的方法，包括本文别处描述的那些方法，筛选变体特异性结合IL-31的能力。
【示例性和优选的氨基酸取代】
原始残基 示例性取代 优选取代
Ala Val、Leu、Ile Val
Arg Lys、Gln、Asn Lys
Asn Gln、His、Lys、Arg Gln
Asp Glu Glu
Cys Ser Ser
Gln Asn、His、Lys, Asn
Glu Asp、Lys Asp
Gly Pro Pro
His Asn、Gln、Lys、Arg Arg
Ile Leu、Val、Met、Ala、Phe、Norleu Leu
Leu Norleu、Ile、Val、Met、Ala、Phe Ile
Lys Arg、Gln、Asn Arg
Met Leu、Ile、Phe Leu
Phe Leu、Val、Ile、Ala Leu
Pro Gly Gly
Ser Thr Thr
Thr Ser Ser
Trp Tyr Tyr
Tyr Trp、Phe、Thr、Ser Phe
Val Ile、Leu、Met、Phe、Ala、Norleu Leu
在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子特异性结合犬科动物IL-31。在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子特异性结合猫科动物IL-31。
本公开内容延伸至特异性结合天然IL-31(即，天然存在的IL-31)及其变体的抗原结合分子。此类变体可包括通过一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入与天然存在的(野生型)分子不同的IL-31分子。这种类型的变体IL-31分子可以是天然存在的或合成的(例如，重组的)形式。然而，应当理解，在优选的实施方案中，本文所述的抗原结合分子特异性结合天然形式的IL-31。
术语“抗原结合片段”、“抗原结合部分”、“抗原结合结构域”、“抗原结合位点”等在本文中可互换使用以指保留与目标抗原(也就是说，与IL-31，包括天然IL-31)结合的能力的抗原结合分子的一部分。这些术语包括天然存在的、酶法可获得的、合成的或遗传工程改造的(重组的)特异性结合IL-31以形成复合物的多肽和糖蛋白。
抗原结合片段可以例如使用本领域技术人员已知的任何合适的方法(其说明性实例包括蛋白水解消化或涉及编码抗体可变结构域和任选恒定结构域的核酸序列的操作和表达的重组基因工程技术)从天然来源的免疫球蛋白分子衍生。合适的核酸序列是已知的和/或容易从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以合成。可以对核酸序列进行测序和通过化学方法或使用分子生物学技术进行操作，例如，以将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。
合适的抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)最小识别单位，其由模拟抗体高变区的氨基酸残基(例如，分离的CDR，如CDR3肽)，或受约束的FR3-CDR3-FR4肽组成。其他工程改造的分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、单臂抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等)和小模块免疫药物(SMIP)也包含在本文所用的术语“抗原结合片段”中。
在一个实施方案中，抗原结合片段包含至少一个免疫球蛋白可变结构域。可变结构域可包含任何合适长度或组成的氨基酸序列，且通常将包含至少一个与一个或多个框架序列相邻或与其同读框的CDR。当抗原结合片段包含VH结构域和VL结构域时，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体的且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在一些实施方案中，抗原结合片段可包含共价连接至至少一个恒定结构域的至少一个可变结构域。可在抗原结合片段内发现的可变和恒定结构域的非限制性配置包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3,(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2,(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何配置中，包括上面列出的任何示例性配置，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或者可以通过完整或部分铰链或接头区连接。铰链区可由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60或更多)氨基酸组成，这导致单个多肽分子中相邻可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。在一些实施方案中，如本文所述的抗原结合片段可以包含上文所列的任何可变结构域和恒定结构域配置的彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域(例如，通过二硫键)非共价缔合的同源二聚体或异源二聚体(或其他多聚体)。多特异性抗原结合分子通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或同一抗原上的不同表位。使用本领域可用的常规技术，任何多特异性抗原结合分子形式，包括双特异性抗原结合分子形式，都可以适用于本公开内容的抗体的抗原结合片段的情况。
术语“可变区”或“可变结构域”是指参与结合靶抗原的免疫球蛋白重链或轻链的结构域。天然免疫球蛋白分子的重链和轻链可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守框架区和三个高变区(HVR)。参见，例如，Kindt等人,KubyImmunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007)。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。
本文描述的抗原结合分子可以被适当地修饰以与目标物种相容，例如，以最小化或以其他方式避免在施用至该物种后针对抗原结合分子产生的免疫反应。在一个实施方案中，抗原结合分子是犬源化的、猫源化的或马源化的。
“犬源化”是指抗原结合分子包含与犬科动物相容的氨基酸序列，使得该氨基酸序列不太可能被犬科动物受试者的免疫系统视为外来的。在一个实施方案中，犬源化抗原结合分子包含一个或多个源自一种或多种犬科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白框架区。在一些实施方案中，犬源化抗原结合分子的所有框架区将源自一种或多种犬科动物免疫球蛋白分子。犬源化抗体可任选地包含源自犬科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白重链恒定区。因此，在一个实施方案中，抗原结合分子是犬源化的抗原结合分子。
“猫源化”是指抗原结合分子包含与猫科动物相容的氨基酸序列，使得该氨基酸序列不太可能被猫科动物受试者的免疫系统视为外来的。在一个实施方案中，猫源化抗原结合分子包含一个或多个源自一种或多种猫科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白框架区。在一些实施方案中，猫源化抗原结合分子的所有框架区将源自一种或多种猫科动物免疫球蛋白分子。猫源化抗体可以任选地包含源自猫科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子是猫源化抗原结合分子。
“马源化”是指抗原结合分子包含与马科动物相容的氨基酸序列，使得该氨基酸序列不太可能被马科动物受试者的免疫系统视为外来的。在一个实施方案中，马源化抗原结合分子包含一个或多个源自一种或多种马科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白框架区。在一些实施方案中，马源化抗原结合分子的所有框架区将源自一种或多种马科动物免疫球蛋白分子。马源化抗体可任选地包含源自马科动物免疫球蛋白分子的免疫球蛋白重链恒定区。
应当理解，本公开内容还延伸至与除犬科动物、猫科动物和马科动物之外的物种相容的抗原结合分子。在本文中，抗原结合分子可被称为“特定的”，指的是该分子将被施用至的目标物种。
设计和产生与目标物种相容的重组抗体或抗原结合分子的合适方法将是本领域技术人员所熟知的，其示例性实例描述于Cattaneo(2010；Curr.Op.Mol.Ther.12(1):94-106)、WO 2006/131951、WO 2012/153122、WO 2013/034900、WO 2012/153121和WO2012/153123，其内容通过引用整体并入本文。
在一个实施方案中，抗原结合分子被犬源化。在一个实施方案中，犬源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(a)与选自SEQ ID NO：18、22、26、30和34的VHFR1氨基酸序列具有至少80％序列同一性的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列，
(b)与选自SEQ ID NO：19、23、27、31和35的VHFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(c)与选自SEQ ID NO：20、24、27、32和36的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(d)与选自SEQ ID NO：21、25、28、33和37的VHFR4氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(e)与选自SEQ ID NO：38、42、46和50的重链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR1氨基酸序列，
(f)与选自SEQ ID NO：39、43、47和51的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(g)与选自SEQ ID NO：40、44、48和52的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，
(h)与选自SEQ ID NO：41、45、49和53的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
在一个实施方案中，犬源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(a)与SEQ ID NO：81或SEQ ID NO：85的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR1氨基酸序列，
(b)与SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：86的VHFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(c)与SEQ ID NO：83或SEQ ID NO：87的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(d)与SEQ ID NO：84或SEQ ID NO：88的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(e)与SEQ ID NO：89的重链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR1氨基酸序列，
(f)与SEQ ID NO：90的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(g)与SEQ ID NO：91的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，和
(h)与SEQ ID NO：92的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
在一个实施方案中，犬源化抗原结合分子包含重链可变结构域(VH)，其包含与SEQID NO：99或SEQ ID NO：100的VH氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，犬源化抗原结合分子包含轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQID NO：101的VL氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗原结合分子是猫源化的。在一个实施方案中，猫源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(a)与SEQ ID NO：54的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR1氨基酸序列，
(b)与SEQ ID NO：55的VHFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(c)与SEQ ID NO：56的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(d)与SEQ ID NO：57的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(e)与SEQ ID NO：58的轻链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR1氨基酸序列，
(f)与SEQ ID NO：59的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(g)与SEQ ID NO：60的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，和
(h)与SEQ ID NO：61的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
在修饰本文公开的抗原结合分子以与靶物种(包括犬科动物、猫科动物和马科动物)相容时可以使用的其他合适的框架区序列是本领域技术人员所熟悉的，其说明性实例描述于Cattaneo(2010；同上)、WO2006/131951、WO2012/153122、WO2013/034900、WO2012/153121和WO2012/153123。
短语“特异性地结合”或“特异性结合”是指两个分子之间的结合反应，其是背景的至少两倍且更通常在生理条件下是背景分子缔合的超过10到100倍。当使用一种或多种其为蛋白质的可检测结合剂时，特异性结合决定了在蛋白质和其他生物制品的异质群体中，蛋白质的存在。因此，在指定的免疫测定条件下，特定的抗原结合分子结合特定的抗原决定簇，从而鉴定其存在。在此类条件下与抗原决定簇的特异性结合需要针对其对该决定簇的特异性而选择的抗原结合分子。这种选择可以通过减去与其他分子发生交叉反应的抗原结合分子来实现。可以使用多种免疫测定形式来选择抗原结合分子(例如，免疫球蛋白)，使得它们与特定抗原具有特异性免疫反应性。例如，固相ELISA免疫测定通常用于选择与蛋白质特异性免疫反应的抗体(对于可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述参见，例如Harlow&Lane,Antibodies,A Laboratory Manual(1988))。确定结合亲和力和特异性的方法也是本领域众所周知的(参见，例如，Harlow and Lane，同上)；Friefelder,“Physical Biochemistry:Applications to biochemistry and molecular biology”(W.H.Freeman and Co.1976))。
“亲和力”或“结合亲和力”是指分子(例如，抗原结合分子)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员例如抗原结合分子之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)表示，它是解离和缔合速率常数(分别为koff和kon)之比。因此，等效亲和力可以包含不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同即可。亲和力可通过本领域已知的常用方法测量，包括本文所述的那些。一种测量亲和力的特定方法是表面等离子共振(SPR)。
术语“多肽”、“肽”或“蛋白质”在本文中可互换使用以表示通过相邻残基的α-氨基和羧基之间的肽键彼此连接的氨基酸残基的线性系列。氨基酸残基通常是天然的“L”异构形式。然而，“D”异构形式的残基可以取代任何L-氨基酸残基，只要多肽保留所需的功能特性即可。
如本文所用，术语“修饰的抗体”包括抗体的合成形式，其被改变以使得它们不是天然存在的，例如，包含至少两个重链部分但不包含两个完整重链的抗体(例如结构域删除的抗体或微型抗体)；被改变以结合2种或更多种不同的抗原或单一抗原上的不同表位的多特异性形式的抗体(例如，双特异性、三特异性等)；连接到scFv分子的重链分子以及类似的。ScFv分子在本领域中是已知的，且例如在美国专利No.5,892,019中有所描述。此外，术语“修饰的抗体”包括多价形式的抗体(例如，三价、四价等，结合相同抗原的三个或更多个拷贝的抗体)。
在一个实施方案中，抗原结合分子是抗体或其抗原结合片段，如本文别处所述。在一个实施方案中，抗原结合片段选自Fab片段、scFab、Fab'、单链可变片段(scFv)和单臂抗体。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含免疫球蛋白分子的重链和/或轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物、猫科动物或马科动物免疫球蛋白分子的重链和/或轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在又一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGA分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGA分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGA分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGB分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGB分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGB分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGC分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGC分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGC分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGD分子的重链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGD分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗原结合分子包含犬科动物IgGD分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，犬科动物免疫球蛋白分子是犬科动物IgGA，其包含SEQ IDNO：2的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在一个实施方案中，犬科动物IgGA包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含免疫球蛋白重链，该重链包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在一个实施方案中，抗原结合分子包含免疫球蛋白重链，该重链包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，抗原结合分子包含免疫球蛋白轻链，该轻链包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在一个实施方案中，抗原结合分子包含免疫球蛋白轻链，该轻链包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，VH由SEQ ID NO：14的核酸序列编码。在一个实施方案中，VH由SEQ ID NO：15的核酸序列编码。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的重链和轻链恒定区。
本文还公开了包含如本文所述的IL-31结合分子和异源部分的嵌合分子。在一些实施方案中，异源部分可以是可检测部分、半衰期延长部分或治疗部分。因此，如本文所用，“嵌合”分子是包含一种或多种不相关类型的组分或包含两个或多个化学上不同的区域的分子，这些区域可以彼此缀合、融合、连接、翻译、通过接头连接、化学合成、从核酸序列表达等。例如，肽和核酸序列、肽和可检测标记、不相关的肽序列等。在嵌合分子包含不同来源的氨基酸序列的实施方案中，嵌合分子包括(1)在自然界中不一起发现的多肽序列(即，至少一个氨基酸序列相对于至少一个它的其他氨基酸序列是异源的)，或(2)不是天然相邻的氨基酸序列。例如，本文所用的“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于来自不同的来源或物种。
在一个实施方案中，本文所述的抗原结合分子是抗体或其IL-31结合片段。在一个实施方案中，抗体是嵌合抗体。嵌合抗体的说明性实例包括抗体分子，其中VH和VL序列源自小鼠，重链和轻链恒定区源自小鼠以外的物种(例如，重链和轻链恒定区源自犬科动物、猫科动物、马科动物免疫球蛋白分子)。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在又一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD的犬科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGA分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGA分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGA分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGB分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGB分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGB分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGC分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGC分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGC分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGD分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGD分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含犬科动物IgGD分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，犬科动物免疫球蛋白分子是犬科动物免疫球蛋白γ重链A。在一个实施方案中，犬科动物免疫球蛋白γ重链A包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。在一个实施方案中，犬科动物免疫球蛋白γ重链A包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，嵌合抗体包含含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的重链、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，嵌合抗体包含含有SEQ ID NO：17的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的轻链、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，嵌合抗体包含含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的重链、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，嵌合抗体包含含有SEQ ID NO：17的氨基酸序列的轻链、由其组成或基本上由其组成。
在一个实施方案中，VH由SEQ ID NO：14的核酸序列编码。在一个实施方案中，VH由SEQ ID NO：15的核酸序列编码。
在另一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在又一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2的猫科动物免疫球蛋白分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1a分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG1b分子的重链和轻链恒定区。
在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的重链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的轻链恒定区。在一个实施方案中，嵌合抗体或其IL-31结合片段包含猫科动物IgG2分子的重链和轻链恒定区。
本公开内容还延伸至经修饰以改善例如稳定性和血清半衰期的重链和轻链恒定区序列的用途。
合适的重链和轻链恒定区序列，包括非人类物种(例如犬科动物、猫科动物和马科动物)的修饰序列，将是本领域技术人员所熟悉的，其示例性实例描述于WO2019/035010，其全部内容通过引用并入本文。
本文还公开了一种分离的核酸分子，其包含编码本文所述的抗原结合分子的核酸序列。在一个实施方案中，提供了分离的核酸分子，其包含(i)编码与SEQ ID NO：12具有至少80％序列同一性的免疫球蛋白重链可变区的核酸序列和/或(ii)编码与SEQ ID NO：13具有至少80％序列同一性的免疫球蛋白轻链可变区的核酸序列。
在一个实施方案中，编码免疫球蛋白重链可变区的核酸序列包含SEQ ID NO：14的核酸序列。
在另一个实施方案中，编码免疫球蛋白轻链可变区的核酸序列包含SEQ ID NO：15的核酸序列。
术语“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用以指核苷酸的聚合物，其可以是mRNA、RNA、cRNA、cDNA或DNA。该术语通常指长度为至少10个碱基的核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式)的聚合形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。
本文还公开了一种表达载体，其包含编码如本文所述的IL-31结合分子的核酸。
“载体”是指源自例如其中可以插入或克隆核酸序列的质粒、噬菌体或病毒的核酸分子，优选DNA分子。载体优选包含一个或多个独特的限制性位点，且能够在包括靶细胞或组织或其祖细胞或组织的特定宿主细胞中自主复制，或者可与特定宿主的基因组整合，使得克隆的序列是可再生的。因此，载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如线性或闭合环状质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以包含确保自我复制的任何手段。或者，载体可以是这样的载体，当被引入宿主细胞时，其被整合到基因组中并与它整合到其中的染色体一起复制。载体系统可包含单个载体或质粒、两个或更多个载体或质粒，它们一起含有待引入宿主细胞基因组中的总DNA，或转座子。载体的选择通常取决于载体与载体将被引入其中的宿主细胞的相容性。该载体还可以包括可用于选择合适的转化体的选择标记，例如抗生素抗性基因。这种抗性基因的例子是本领域技术人员众所周知的。
在一个实施方案中，载体是腺相关病毒(AAV)载体，其使得如本文所述的IL-31结合分子能够安全地施用至受试者并提供IL-31结合分子在受试者中的持续表达。
腺相关病毒是细小病毒科(Parvoviridae)的成员且包含小于约5,000个核苷酸的线性单链DNA基因组。AAV需要与辅助病毒(即腺病毒或疱疹病毒)共感染，或表达辅助基因，以用于有效复制。用于施用治疗性核酸的AAV载体通常删除了大约96％的亲本基因组，使得仅保留包含DNA复制和包装的识别信号的末端重复序列(ITR)。这消除了由于病毒基因表达引起的免疫或毒副作用。此外，如果需要，将特定的AAV蛋白递送至生产细胞能够将包含AAVITR的AAV载体整合到细胞基因组的特定区域中(参见例如美国专利号6,342,390和6,821,511)。包含整合的AAV基因组的宿主细胞在细胞生长或形态方面没有表现出变化(参见，例如，美国专利号4,797,368)。
AAV ITR位于非结构复制(Rep)蛋白和结构衣壳(Cap)蛋白(也称为病毒粒子蛋白(VP))的独特编码核苷酸序列的侧翼。末端的145个核苷酸是自互补的，且被组织成可以形成形成T形发夹的能量稳定的分子内双链体。这些发夹结构通过作为细胞DNA聚合酶复合物的引物用作病毒DNA复制的起点。Rep基因编码Rep蛋白Rep78、Rep68、Rep52和Rep40。Rep78和Rep68由p5启动子转录，Rep52和Rep40由p19启动子转录。Rep78和Rep68蛋白是多功能DNA结合蛋白，其在生产性复制期间执行解旋酶和切口酶功能以允许解析AAV末端(参见，例如，Im等人,Cell,61:447-57(1990))。这些蛋白质还调节来自内源性AAV启动子和辅助病毒内启动子的转录(参见，例如，Pereira等人，J.Virol.，71：1079-1088(1997))。其他Rep蛋白修饰Rep78和Rep68的功能。cap基因编码衣壳蛋白VP1、VP2和VP3。cap基因从p40启动子转录。
本文还公开了一种表达构建体，其包含编码如本文所述的IL-31结合分子的核酸序列，其可操作地连接至一个或多个调节序列。
术语“构建体”是指重组遗传分子，其包括来自不同来源的一个或多个分离的核酸序列。因此，构建体是嵌合分子，其中两个或更多个不同来源的核酸序列组装成单个核酸分子，且包括含有以下的任何构建体：(1)核酸序列，包括在自然界中不一起发现的调节和编码序列(即，至少一个核苷酸序列相对于至少一个其他核苷酸序列是异源的)，或(2)编码非天然相邻的功能性RNA分子或蛋白质的部分的序列，或(3)非天然相邻的启动子的部分。代表性构建体包括任何重组核酸分子，例如质粒、粘粒、病毒、自主复制的多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA核酸分子，源自任何来源，能够进行基因组整合或自主复制，包含核酸分子，其中一个或多个核酸分子已可操作地连接。本发明的构建体通常包括指导感兴趣的核酸序列表达的必要元件，该核酸序列也包含在该构建体中，例如靶核酸序列或调节核酸序列。此类元件可包括控制元件或调节序列，例如启动子，其可操作地连接至(以便指导转录)感兴趣的核酸序列，且通常也包括聚腺苷酸化序列。在本发明的某些实施方案中，构建体可以包含在载体中。除了构建体的组分之外，载体可以包括，例如，一种或多种选择标记、一种或多种复制起点，例如原核和真核起点、至少一个多克隆位点，和/或有助于促进构建体稳定整合到宿主细胞的基因组中的元件。两个或多个构建体可包含在单个核酸分子内，例如单个载体，或可包含在两个或多个分离的核酸分子内，例如两个或多个分离的载体。“表达构建体”通常至少包括可操作地连接至感兴趣的核苷酸序列的控制序列。以这种方式，例如，在表达构建体中提供与待表达的核苷酸序列可操作连接的启动子，用于在生物体或其部分包括宿主细胞中表达。对于本发明的实践，用于制备和使用构建体和宿主细胞的常规组合物和方法是本领域技术人员所熟知的，参见例如，Molecular Cloning:ALaboratory Manual,3rd edition Volumes 1,2,and 3.J.F.Sambrook,D.W.Russell,andN.Irwin,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2000。
如本文所用，“控制元件”、“控制序列”、“调节序列”等是指在特定宿主细胞中表达可操作连接的编码序列所必需的核酸序列(例如，DNA)。适用于原核细胞的控制序列例如包括启动子和任选地顺式作用序列如操纵子序列和核糖体结合位点。适用于真核细胞的控制序列包括转录控制序列，如启动子、聚腺苷酸化信号、转录增强子、翻译控制序列，如翻译增强子和内部核糖体结合位点(IRES)、调节mRNA稳定性的核酸序列，以及将由转录的多核苷酸编码的产物靶向至细胞内的细胞内区室或细胞外环境的靶向序列。
本文还公开了包含本文定义的构建体的宿主细胞。
术语“宿主”、“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用且是指其中已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和由其衍生的后代，而与传代数无关。后代细胞的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，而是可能包含突变。具有与在最初转化的细胞中所筛选或选择的相同的功能或生物活性的突变后代包括在本文中。宿主细胞是可用于产生本发明的抗原结合分子的任何类型的细胞系统。宿主细胞包括培养细胞，例如哺乳动物培养细胞，例如CHO细胞、BHK细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、YO骨髓瘤细胞、P3X63小鼠骨髓瘤细胞、PER细胞、PER.C6细胞或杂交瘤细胞、酵母细胞、昆虫细胞和植物细胞，仅举几例，还有包含在转基因动物、转基因植物或培养的植物或动物组织中的细胞。在一个实施方案中，宿主细胞是CHO或HEK293细胞系。
还提供了用于产生如本文所述的修饰的IL-31结合分子的方法，此类方法包括培养本文公开的宿主细胞和从宿主细胞或培养基中回收IL-31结合分子。
本文还公开了药物组合物，其包含如本文所述的IL-31结合分子或载体，以及药学上可接受的载体。
如本文别处所述，本发明人已发现本文公开的IL-31结合分子结合未被任何已知IL-31抗原结合分子结合的IL-31表位；具体地，结合包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40的IL-31表位。IL-31的该表位的鉴定有利地允许鉴定的表位或其模拟表位用作免疫原性组合物以在将免疫原性组合物施用至受试者时诱导免疫应答。因此，在本文公开的一个方面，提供了一种能够引起对IL-31的免疫应答的免疫原性组合物，其中该组合物包含(i)包含IL-31的B细胞表位的免疫原和(ii)药学上可接受的载体，其中B细胞表位包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，且其中免疫原不包含天然IL-31分子的氨基酸序列。在一个实施方案中，免疫原由对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，免疫原由对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列组成。如本文别处所述，提及“至少80％序列同一性”包括与参考序列的80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，例如，在最佳比对或最佳拟合分析之后。
“药学上可接受的载体”是指药物媒介物，其包含在生物学上或其他方面并非不合需要的物质，即，该物质可以与选定的活性剂一起施用至受试者而不会引起任何或实质性的不良反应。载体可包括赋形剂和其他添加剂，例如稀释剂、洗涤剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。
代表性的药学上可接受的载体包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、此类类似的材料及其组合，如本领域普通技术人员所知(例如，参见Remington's Pharmaceutical Sciences,18th Ed.Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329，其通过引用并入本文)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑了其在药物组合物中的使用。
药物组合物可以是多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注的溶液)、分散体或悬浮液、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。合适的药物组合物可以静脉内、皮下或肌肉内施用。在一些实施方案中，组合物呈可注射或可输注溶液的形式。优选的施用方式是肠胃外施用(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在具体实施方案中，药物组合物通过静脉内输注或注射施用。在其他实施方案中，药物组合物通过肌肉内或皮下注射施用。
本文所用的短语“肠胃外施用”和“胃肠外施用”是指除肠内和局部施用外的施用方式，通常通过注射施用，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下腔、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、酒精/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。在本发明中，药学上可接受的载体包括但不限于0.01～0.1M，优选0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％生理盐水。其他常见的肠胃外载体包括磷酸钠溶液、林格氏右旋糖、氯化右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内媒介物包括液体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格氏右旋糖的补充剂等。也可存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。
更具体地，适用于可注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(如果是水溶性的)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在这种情况下，该组合物必须是无菌的且应该是流动的以达到易于注射的程度。它在制造和储存条件下应该是稳定的，且优选保存以防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。例如，可以通过使用诸如卵磷脂的涂层和/或通过保持所需的粒度来保持适当的流动性。在特定的实施方案中，本公开内容的试剂可以与用于细胞递送的媒介物缀合。在这些实施方案中，可以将药剂封装在合适的媒介物中以帮助将药剂递送至靶细胞、增加药剂的稳定性或使药剂的潜在毒性最小化。如本领域技术人员将理解的，多种媒介物适用于递送本公开内容的药剂。合适的结构化流体递送系统的非限制性实例可以包括纳米颗粒、脂质体、微乳液、胶束、树枝状聚合物和其他含磷脂的系统。将本公开内容的试剂掺入递送载体的方法是本领域已知的。尽管下文呈现了各种实施方案，但应当理解，本领域已知的将如本文所述的抗原结合分子掺入递送媒介物中的其他方法也在考虑之列。
调整剂量方案以提供最佳的期望反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加剂量。本公开内容的抗原结合分子可以多次施用。单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。间隔也可以是不规则的，如通过测量患者体内修饰的多肽或抗原的血液水平所示。或者，抗原结合分子可以作为持续释放制剂施用，在这种情况下需要较低频率的施用。剂量和频率取决于多肽在患者体内的半衰期而变化。
以剂量单位形式配制组合物可能是有利的，以便于施用和剂量均匀。本文所用的剂量单位形式是指物理上离散的单位，其适合作为待治疗受试者的单位剂量；每个单位含有预定量的活性化合物，其经计算与所需的药学上可接受的载体结合产生所需的治疗效果。本发明的剂量单位形式的规格由(a)活性化合物的独特特性和要达到的特定治疗效果和(b)配制此类活性化合物以用于治疗个体敏感性的领域中内在的局限性决定并直接取决于这些因素。
抗原结合分子的剂量和治疗方案可由技术人员确定。在某些实施方案中，抗原结合分子通过注射(例如皮下或静脉内)以约0.01～40mg/kg，例如0.01～0.1mg/kg，例如约0.1～1mg/kg，约1～5mg/kg，约5～25mg/kg，约10～40mg/kg，或约0.4mg/kg的剂量施用。给药时间表可以从例如每周一次到每2、3或4周一次。在一个实施方案中，抗原结合分子每隔一周以约10～20mg/kg的剂量施用。本公开内容的抗原结合分子的有效量的示例性非限制性范围是0.01～5mg/kg，更合适地0.03～2mg/kg。
应注意，剂量值可随待缓解病状的类型和严重程度而变化。还应理解，对于任何特定受试者，具体剂量方案应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整，且本文中给出的剂量范围仅是示例性的且不旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。
本发明的药物组合物可以包含有效量的本文公开的试剂(即IL-31结合分子)。有效量可以是“治疗有效量”或“预防有效量”。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所需治疗结果的量。药剂的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药剂在个体中引起所需反应的能力的因素而变化。治疗有效量也是其中药剂的任何毒性或有害作用被治疗有益作用所抵消的量。或者，可以通过检查化合物的抑制能力来评估组合物的这种特性，例如通过技术人员已知的测定在体外进行。
相比之下，“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所需预防结果的量。通常，由于预防剂量是在疾病发生之前或疾病早期阶段用于受试者，因此预防有效量将小于治疗有效量。
本文还公开了一种治疗或预防与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状的方法，该方法包括向有需求的受试者施用如本文所述的抗原结合分子、载体或药物组合物。
本文所用的术语“治疗”可指(1)延迟病状的一种或多种症状的出现；(2)抑制病状或病状的一种或多种症状的发展；(3)缓解病状，即导致病状或病状的至少一种或多种症状的消退；和/或(4)引起病状或病状的一种或多种症状的严重程度降低。
术语“治疗”、“医治”等在本文中可互换使用以表示减轻、减少、缓解、改善或以其他方式抑制病状，包括病状的一种或多种症状。术语“预防”、“防止”、“阻止”、“预防性”、“防治性”等在本文中可互换使用以表示预防或延迟病状的发作或发展病状的风险。
术语“治疗”、“医治”等还包括缓解、减少、缓和、改善或以其他方式抑制病状的影响持续至少一段时间。还应理解，术语“治疗”、“医治”等并不意味着该病状或其症状被永久缓解、减少、缓和、改善或以其他方式抑制，因此也包括暂时缓解、减少、缓和、改善或以其他方式抑制病状或其症状。
在本文中可互换使用的术语“受试者”、“患者”、“宿主”或“个体”是指需要治疗的任何动物。受试者通常包括非人类受试者，包括但不限于，哺乳动物、鸟类和鱼类，并适当地包括家养、农场、动物园和野生动物，例如牛、猪、马、山羊、绵羊或其他有蹄类动物、狗、猫、鸡、鸭、非人类灵长类动物、豚鼠、兔子、雪貂、大鼠、仓鼠和小鼠。在一个实施方案中，受试者选自：犬科动物、猫科动物和马科动物。在一个实施方案中，受试者是犬科动物。在一个实施方案中，受试者是猫科动物。在一个实施方案中，受试者是马科动物。
与IL-31的异常(例如，增加的)水平和/或异常(例如，增加的)活性相关的病状将是本领域技术人员所熟悉的，其说明性实例包括慢性瘙痒性皮肤病，例如特应性湿疹，和非皮肤病，如过敏性哮喘和鼻炎、炎症性肠病、恶性肿瘤(如癌症)和骨质疏松症。
在一个实施方案中，与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状选自：瘙痒症和皮炎。在一个实施方案中，病状是特应性皮炎。在一个实施方案中，病状是瘙痒症。
本文还提供了如本文所述的抗原结合分子或载体，其用于治疗、抑制或改善受试者中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状。
本文还提供了如本文所述的IL-31结合分子或载体在制备用于治疗、抑制或改善有需求的受试者中与IL-31的异常(例如，增加的)水平和/或异常(例如，增加的)活性相关的病状的药物中的用途，如本文所述。
本文还公开了治疗或预防有需求的受试者中由IL-31的表达增加或对IL-31的敏感性增加引起、相关或导致的病状的方法，该方法包括将如本文所述的IL-31结合分子或载体施用至有需求的犬科动物受试者的步骤。
本文还公开了如本文所述的IL-31结合分子、或载体或药物组合物，其用于治疗受试者中由IL-31的表达增加或对IL-31的敏感性增加引起、相关或导致的病状。
本公开内容还延伸至如本文所述的IL-31结合分子或载体在制备用于治疗受试者中由IL-31的表达增加或对IL-31的敏感性增加引起、相关或导致的病状的药物中的用途。
本公开内容还延伸至用于治疗或预防由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状的方法，该方法包括向有需求的受试者施用IL-31结合分子、或载体、或药物组合物，如本文所述。
本文还提供如本文所述的IL-31结合分子、或载体、或药物组合物，其用于治疗或预防有需求的受试者中由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状。
本公开内容还延伸至如本文所述的IL-31结合分子或载体在制备用于治疗或预防有需求的受试者中由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状。
本公开内容还延伸至包含如本文所述的IL-31结合分子、或载体、或药物组合物的试剂盒。
本文还公开了如本文所述的IL-31结合分子或载体用于检测样品中的IL-31的用途。
如本文所用，“和/或”是指并涵盖一个或多个相关列出的项目的任何和所有可能组合，以及当以可供选择的事物(或)解释时缺少组合。
如在本申请中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。例如，术语“一种试剂”包括多种试剂，包括它们的混合物。
“约”是指与参考数目、水平、值、数量、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数目、水平、值、数量、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。
在整个本说明书和随后的陈述中，除非上下文另有要求，否则词语“包含”和诸如“含有”和“包括”的变体将被理解为暗示包括规定的整数或步骤或整数或步骤组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤组。
本说明书中对任何在先出版物(或从中得出的信息)或任何已知事项的引用不是也不应被视为承认或认可或任何形式的暗示该在先出版物(或从中得出的信息)或已知事项构成本说明书相关领域的公知常识的一部分。
本领域的技术人员将理解，除了具体描述的那些之外，本文描述的发明易于进行变化和修改。应当理解，本发明包括落入精神和范围内的所有此类变化和修改。本发明还包括本说明书中单独或共同提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及任何两个或多个所述步骤或特征的任何和所有组合。
现在将参照以下实施例描述本发明的某些实施方案，这些实施例仅用于说明的目的，而不是用于限制上文描述的一般性的范围。
【实施例】
【实施例1：识别犬科动物白细胞介素31(IL-31)的小鼠单克隆抗体的产生】
在Sf9杆状病毒属(Baculovirus)细胞中产生的包含在C末端融合到6个氨基酸的His-标签的142个氨基酸(登录号NP_001159386的氨基酸残基24～159；SEQ ID NO：1)的重组犬科动物IL-31(ProSpec-Tany，Israel)被用作免疫原以在Balb/c小鼠中产生抗体。
【犬科动物IL-31蛋白】
使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定免疫小鼠的抗体滴度。将犬科动物IL-31(100ng/孔)固定在聚苯乙烯微孔板上，并用作捕获抗原并用PBS/0.05％ Tween 20/1％BSA封闭。将包被的孔与在PBS/0.05％ Tween 20/1％ BSA(100μl/孔)中稀释的单克隆抗体(mAb)于室温温育1小时。使用范围从1000ng/ml到1.37ng/ml的mAb浓度来建立标准曲线。洗涤后，将板与在PBS/0.05％ Tween 20/1％ BSA中1/10,000稀释的碱性磷酸酶偶联的AffiniPure山羊抗小鼠IgG(亚类1+2a+2b+3)、Fcg片段特异性(Jackson Immuno ResearchLaboratories,Inc)或碱性磷酸酶偶联的兔抗狗IgG(全分子；Sigma)温育。用PBS/0.05％Tween 20洗涤板并通过添加3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物显色。通过添加100μl 2MH2SO4停止显色，并在450nm的光密度(OD)下测定每个孔的吸光度。
分离用犬科动物IL-31蛋白(SEQ ID NO：1)免疫的3只小鼠的脾脏，并使用标准技术分别用于杂交瘤生成(参见，例如，Albitar(2007；Methods in Molecular Biology；Monoclonal Antibodies Volume 378||Development and Characterization of MouseHybridomas,10.1007/978-1-59745-323-3(第1章)))。融合后，将杂交瘤接种到多孔板中。使用微阵列ELISA格式针对与犬科动物IL-31的结合筛选了6000个孔。
在筛选期间鉴定的候选物中，一种杂交瘤表现出与犬科动物IL-31的良好结合和犬科动物IL-31活性的抑制。随后对该杂交瘤进行克隆和测序(克隆名称RA4.D2)。
RA4.D2的亚克隆的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的序列是通过得自杂交瘤的cDNA的VH和VL区的PCR扩增获得的。使用IMGT/V-Quest程序(The InternationalImmunogenetics Information System；http://www.imgt.org/IMGT_vquest/vquest)进行VH和VL基因序列的分析。
为了产生嵌合抗体chRA4，将鼠单克隆抗体RA4的重链可变序列融合到SEQ ID NO：2的犬科动物免疫球蛋白γ重链A的恒定区(对应于GenBank：AAL35301的氨基酸位置138～468)，且将轻链可变序列融合到对应于来自IMGT(登录号IMGT000067)的IGKC*01等位基因的恒定区，如下所示：
【犬科动物重链恒定区】
【犬科动物κ轻链恒定区】
【表1A：单克隆抗体RD4.D2的重链(HC)和轻链(LC)可变区的CDR序列(IMGT定义)】
CDR 序列 SEQ ID NO
HC_CDR1 GYTFTDYS SEQ ID NO：6
HC_CDR2 INTETGKT SEQ ID NO：7
HC_CDR3 ASGRPDY SEQ ID NO：8
LC_CDR1 ESVEYYGTSL SEQ ID NO：9
LC_CDR2 AAS SEQ ID NO：10
LC_CDR3 QQSRKVPYT SEQ ID NO：11
【表1B：单克隆抗体RD4.D2的重链(HC)和轻链(LC)可变区的CDR序列(使用Kabat编号识别)】
CDR 序列 SEQ ID NO
HC_CDR1 DYSMH SEQ ID NO：93
HC_CDR2 WINTETGKTI HAEDFKG SEQ ID NO：94
HC_CDR3 GRPDY SEQ ID NO：95
LC_CDR1 RASESVEYYG TSLMQ SEQ ID NO：96
LC_CDR2 AASGVES SEQ ID NO：97
LC_CDR3 QQSRKVPYT SEQ ID NO：98
【鼠单克隆抗体RA4.D2的重链(VH)和轻链(VL)可变区的氨基酸序列(CDR序列(IMGT识别的)有下划线)】
【RA4_VH】
【RA4_VL】
【编码鼠单克隆抗体RA4.D2的重链(VH)和轻链(VL)可变区的核苷酸序列】
【RA4_重链可变区(VH)】
【RA4_轻链可变区(VL)；(κ轻链)】
【嵌合RA4.D2抗体的重链(HC)和轻链(LC)区的氨基酸序列】
【chRA4_HC】
【chRA4_LC】
为了产生犬源化RA4单克隆抗体，鼠单克隆抗体RA4的重链和轻链可变序列的框架区被取代为犬科动物重链和轻链框架区。使用BLAST搜索算法搜索犬科动物抗体序列以与鼠重链和轻链可变结构域进行比较，并从前200个BLAST结果中选择候选犬科动物可变结构域。将基于框架同源性、保持关键框架残基和经典环结构的组合来选择最佳候选者。
犬源化RA4重链和轻链可变区的氨基酸序列如下所示：
【RA4犬源化重链】
【VHC5】
【VHC6】
【RA4犬源化轻链】
【VLC6】
【表2：犬源化IL-31结合分子的重链(VH1)和轻链(VL)框架区(FR1～4)的氨基酸序列】
为了产生猫源化RA4单克隆抗体，鼠单克隆抗体RA4的重链和轻链可变序列的框架区将被取代为猫科动物重链和轻链框架区序列。将使用BLAST搜索算法搜索猫科动物抗体序列以与鼠重链和轻链可变结构域进行比较，且将从前200个BLAST结果中选择候选猫科动物可变结构域。将基于框架同源性、保持关键框架残基和经典环结构的组合来选择最佳候选者。
【表3：猫源化IL-31结合分子的重链(VH)和轻链(VL)框架区(FR1～4)的氨基酸序列的实例】
【实施例2：单克隆抗体RA4与犬科动物IL-31、猫科动物IL-31和犬科动物IL-31突变体的结合的测定】
为了评估鼠单克隆抗体RA4是否结合由先前公开的抗IL-31抗体M14(如美国专利号10,093,731B2中所述)和mAb 34D03(如在美国专利号8790651B2中所述)靶向的犬科动物IL-31的区域，产生了2种突变犬科动物IL-31蛋白，其中在(i)SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84(犬科动物IL-31突变体1；SEQ ID NO：62)和(ii)SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26(犬科动物IL-31突变体2；SEQ ID NO：63)处引入了丙氨酸取代。靶向用于丙氨酸取代的犬科动物IL-31突变体1和2的氨基酸位置先前已被确定分别参与了34D03和M14与犬科动物IL-31的结合。
犬科动物IL-31突变体1和2以及猫科动物IL-31蛋白的氨基酸序列提供如下：
【犬科动物IL-31突变体1(丙氨酸取代用粗体和下划线文本标识)】
【犬科动物IL-31突变体2(丙氨酸取代用粗体和下划线文本标识)】
【猫科动物IL-31】
如上所述，通过ELISA分析纯化的鼠RA4和重组嵌合RA4 mAb与犬科动物IL-31的结合。如图1所示，如通过ELISA测定的，嵌合抗体RA4(chRA4)以剂量依赖性方式与犬科动物IL-31结合。与这些结合数据一致，chRA4显示在体外中和犬科动物IL-31活性，如犬科动物DH82细胞中犬科动物IL-31诱导的STAT-3磷酸化的抑制所证明的(图2)。RA4 mAb在犬科动物单核细胞系中中和IL-31介导的pSTAT3信号传导的能力如下评估：犬科动物DH-82细胞用10ng/mL犬科动物γ干扰素预处理24小时，然后血清饥饿处理2小时。将细胞上清液与犬科动物IL-31(160ng/mL)温育60分钟。然后将RA4/IL-31混合物添加到细胞中5分钟，并使用pSTAT3 ELISA(STAT-3(磷酸)[pY705]多物种ELISA试剂盒，Invitrogen)评估STAT磷酸化。
为了评估RA4 mAb是否结合到被先前公布的抗IL-31抗体M14和34D03靶向的犬科动物IL-31的区域，产生了2种突变的犬科动物IL-31蛋白，其中在(i)SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84(犬科动物IL-31突变体1；SEQ ID NO：62)和(ii)SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26(犬科动物IL-31突变体2；SEQ ID NO：63)处引入了丙氨酸取代。
如图3所示，RA4结合犬科动物IL-31、猫科动物IL-31(SEQ ID NO：64)和2种犬科动物IL-31突变蛋白，突变体1(SEQ ID NO：62)和突变体2(SEQ ID NO：63)。M14与犬科动物IL-31和犬科动物IL-31突变体1结合，但未显示与犬科动物IL-31突变体2的显著结合。M14显示与猫科动物IL-31的最小结合。34D03也与犬科动物IL-31结合，并在较小程度上与猫科动物IL-31结合，但未显示与突变体1或突变体2的显著结合。在这些研究中，RA4不与人IL-31结合。
【实施例3：犬科动物白细胞介素31(caIL-31)上抗caIL-31mAb克隆RA4的结合表位的鉴定】
如上文实施例2所述，鼠RA4 mAb不结合参与抗犬科动物IL-31mAb M14和34D03的结合的关键残基。
为了定义结合RA4的犬科动物IL-31的区域，产生了许多嵌合和截短的犬科动物IL-31肽，如下所示(也参见图4A)。人IL-31衍生的氨基酸序列由带下划线的文本标识)：
【犬科动物IL-31(SEQ ID NO：1)】
【犬科动物/人类chIL-31_c123_h4】
【犬科动物/人类chI L-31_c12_h34】
【犬科动物/人类chIL-31_c1_h234】
图5中鉴定的犬科动物IL-31蛋白的氨基酸序列如下：
【犬科动物IL-31_N-term】
【犬科动物IL-31_N-term_20_1】
【犬科动物IL-31_N-term_20_2】
【犬科动物IL-31_N-term_20_3】
【犬科动物IL-31_N-term_20_4】
图7中鉴定的犬科动物IL-31蛋白的氨基酸序列如下：
【犬科动物IL-31】
【犬科动物IL-31_4xMUT_combo】
【犬科动物IL-31_L29A】
【犬科动物IL-31_Y32A】
【犬科动物IL-31_Q33A】
【犬科动物IL-31_P40A】
通过ELISA评估与各种IL-31蛋白和肽的结合。将IL-31蛋白或肽(100ng/孔)固定到聚苯乙烯微孔板上作为捕获抗原。孔用PBS/0.05％ Tween 20/1％ BSA封闭。将包被的孔与在PBS/0.05％ Tween 20/1％ BSA(100μl/孔)中稀释的抗IL-31mAb于室温温育1小时。洗涤后，将板与PBS/0.05％ Tween 20/1％ BSA中的1/10,000稀释的碱性磷酸酶缀合的兔抗狗IgG(全分子)(Sigma)一起温育。用PBS/0.05％ Tween20洗涤板并通过添加TMB底物显色。通过添加100μl ELISA终止溶液(Invitrogen)终止显色，并在450nm的光密度(OD)下测定每个孔的吸光度。
如图4B所示，RA4 mAb结合嵌合犬科动物/人IL-31蛋白，该蛋白包含犬科动物IL-31(SEQ ID NO：1)的前49个氨基酸，其并入IL-31的螺旋A。用人序列替换犬科动物序列的螺旋B、C和D不会消除结合，证明RA4 mAb的表位位于犬科动物IL-31的N末端区域。
产生了20个氨基酸的重叠肽(图5A)，以进一步定义RA4 mAb的表位。如图5B中的ELISA数据所示，RA4 mAb结合含有犬科动物IL-31前50个氨基酸的肽和含有成熟犬科动物IL-31的氨基酸残基30～40的肽3。RA4 mAb结合的表位不同于由抗犬科动物IL-31抗体M14和34D03靶向的表位。34D03似乎不与犬科动物IL-31的N末端区域结合，与图3中的数据一致，这表明34D03结合的表位存在于螺旋B/C中。相反，M14仅与肽1结合，肽1包含犬科动物IL-31的氨基酸残基1～20。这些数据显示RA4 mAb与犬科动物IL-31的独特表位结合，该表位之前未针对M14和34D03进行过描述。
生成了包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基18～42的区域(IILELQPLSR GLLEDYQKKETGVPES；SEQ ID NO：79)的丙氨酸扫描肽文库，由25个肽组成，每个在不同的残基处具有单个丙氨酸突变。RA4 mAb与每种肽的结合通过ELISA确定，如上文详述。
如图6所示，其中与每个肽的结合显示为与系列中第一个肽的结合的百分比，数据表明4个关键残基在取代为丙氨酸时严重影响RA4与犬科动物IL-31的结合。对应于L29A、Y32A、Q33A和P40A的丙氨酸突变都将与犬科动物IL-31肽的结合降低至低于第一个肽的15％。还显示另外3个残基对与犬科动物IL-31的结合很重要，当取代为丙氨酸残基时，它们将结合降低至低于50％(K35A、V39A和S42A)。
RA4 mAb靶向的独特表位的确认是通过评估RA4 mAb与含有各自被取代为丙氨酸的上面鉴定的4个关键残基的全长犬科动物IL-31蛋白以及所有4个残基都被取代为丙氨酸的版本的结合来进行的。组氨酸标记的蛋白质在瞬时转染后在哺乳动物细胞中产生，并通过镍亲和层析纯化。如上所述，通过ELISA确定RA4 mAb和M14 mAb与每种蛋白质的结合。如图7所示，嵌合RA4 mAb能够结合具有单个氨基酸丙氨酸取代的所有蛋白，与野生型犬科动物IL-31蛋白的结合相当(图7A)。当所有4个残基(L29、Y32、Q33和P40)被组合取代为丙氨酸时，未检测到与犬科动物IL-31的结合。相反，M14 mAb与所有突变蛋白和野生型犬科动物IL-31蛋白的结合同样好。这些数据显示包含犬科动物IL-31(SEQ ID NO：1)的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40的表位对于RA4 mAb是独特的。
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<150> US 63/117,383
<151> 2020-11-23
<160> 101
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31蛋白
<400> 1
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile
65 70 75 80
Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro
85 90 95
Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe
100 105 110
Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe
115 120 125
Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
130 135
<210> 2
<211> 331
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IgG重链A
<400> 2
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu His Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Pro Cys Pro Val
100 105 110
Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125
Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
130 135 140
Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
145 150 155 160
Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu Gln Gln
165 170 175
Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Asp
195 200 205
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Arg Ala
210 215 220
His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser
225 230 235 240
Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Tyr Pro
245 250 255
Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu
260 265 270
Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr
275 280 285
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
290 295 300
Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn His Tyr
305 310 315 320
Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 3
<400> 3
000
<210> 4
<400> 4
000
<210> 5
<400> 5
000
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - HC_CDR1
<400> 6
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - HC_CDR2
<400> 7
Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - HC_CDR3
<400> 8
Ala Ser Gly Arg Pro Asp Tyr
1 5
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - LC_CDR1
<400> 9
Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu
1 5 10
<210> 10
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - LC_CDR2
<400> 10
Ala Ala Ser
1
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单克隆抗体 RD4.D2 - LC_CDR3
<400> 11
Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠单克隆抗体 RA4.D2 - VH
<400> 12
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr Ile His Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠单克隆抗体 RA4.D2 - VL
<400> 13
Asp Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Gly Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Ile Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser
115 120
<210> 14
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠单克隆抗体 RA4.D2 - 重链可变区(VH)
<400> 14
Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Gly Gly Thr Gly Cys
1 5 10 15
Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr
20 25 30
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Gly
35 40 45
Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Thr
50 55 60
Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Ala
65 70 75 80
Thr Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Thr
85 90 95
Thr Cys Ala Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Ala
100 105 110
Ala Gly Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Ala Ala Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Thr Thr Thr Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Thr Gly
130 135 140
Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ala Cys Ala Cys Thr Gly
145 150 155 160
Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr
165 170 175
Ala Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Cys Thr Thr Cys
180 185 190
Ala Ala Gly Gly Gly Ala Cys Gly Gly Gly Thr Thr Gly Cys Cys Thr
195 200 205
Thr Cys Thr Cys Thr Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr Cys
210 215 220
Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Thr Ala Thr
225 230 235 240
Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys
245 250 255
Thr Cys Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys
260 265 270
Gly Gly Cys Thr Ala Cys Ala Thr Ala Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr
275 280 285
Gly Cys Thr Ala Gly Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Gly
290 295 300
Ala Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly
305 310 315 320
Cys Ala Cys Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Ala Gly Thr Cys
325 330 335
Thr Cys Cys Thr Cys Ala
340
<210> 15
<211> 336
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠单克隆抗体 RA4.D2 - 轻链可变区(VL); (κ 轻链)
<400> 15
Gly Ala Cys Ala Thr Thr Gly Thr Gly Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys
1 5 10 15
Ala Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Thr Cys Thr Thr Thr
20 25 30
Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Thr Ala Gly Gly Gly
35 40 45
Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr
50 55 60
Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Ala
65 70 75 80
Ala Ala Gly Thr Gly Thr Thr Gly Ala Ala Thr Ala Thr Thr Ala Thr
85 90 95
Gly Gly Cys Ala Cys Ala Ala Gly Thr Thr Thr Gly Ala Thr Gly Cys
100 105 110
Ala Gly Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala
115 120 125
Gly Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys
130 135 140
Ala Ala Ala Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Gly
145 150 155 160
Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Gly Gly Cys Gly Thr Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys
180 185 190
Ala Gly Gly Thr Thr Thr Ala Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly
195 200 205
Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly Ala Cys Thr Thr
210 215 220
Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys Ala Thr
225 230 235 240
Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Thr Gly
245 250 255
Ala Thr Ala Thr Thr Gly Cys Ala Ala Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr
260 265 270
Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala Gly Thr Ala Gly Gly
275 280 285
Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys Ala Cys Gly Thr
290 295 300
Thr Cys Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Cys Cys Ala Ala
305 310 315 320
Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Cys Gly Gly
325 330 335
<210> 16
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合RA4.D2抗体 - 重链 (HC)
<400> 16
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr Ile His Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
His Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser
180 185 190
Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
260 265 270
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
275 280 285
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
305 310 315 320
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
325 330 335
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
340 345 350
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
355 360 365
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
370 375 380
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
385 390 395 400
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
420 425 430
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 17
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合RA4.D2抗体 - 轻链 (LC)
<400> 17
Asp Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Gly Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Ile Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ile Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
210 215 220
<210> 18
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH1 FR1
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 19
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH1 FR2
<400> 19
Trp Val Arg Gln Arg Thr Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 20
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH1 FR3
<400> 20
Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ala Lys Ser Gln Val Ser Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH1 FR4
<400> 21
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH2 FR1
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 23
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH2 FR2
<400> 23
Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 24
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH2 FR3
<400> 24
Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ala Lys Ser Gln Val Ser Leu Gln
1 5 10 15
Met Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH2 FR4
<400> 25
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH3 FR1
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 27
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH3 FR3
<400> 27
Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 28
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH3 FR3
<400> 28
Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ala Lys Ser Gln Val Ser Leu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH3 FR4
<400> 29
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 30
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH4 FR1
<400> 30
Glu Val Thr Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH4 FR2
<400> 31
Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 32
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH4 FR3
<400> 32
Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ala Lys Asn Gln Val Ser Leu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH4 FR4
<400> 33
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH5 FR1
<400> 34
Glu Val Thr Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser
20 25
<210> 35
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH5 FR2
<400> 35
Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 36
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH5 FR3
<400> 36
Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ala Lys Asn Gln Val Ser Leu Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) - VH5 FR4
<400> 37
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 38
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL1 FR1
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 39
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL1 FR2
<400> 39
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 40
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL1 FR3
<400> 40
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL1 FR4
<400> 41
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 42
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL2 FR1
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 43
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL2 FR2
<400> 43
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 44
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL2 FR3
<400> 44
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL2 FR4
<400> 45
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 46
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL3 FR1
<400> 46
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 47
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL3 FR2
<400> 47
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 48
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL3 FR3
<400> 48
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL3 FR4
<400> 49
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 50
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL4 FR1
<400> 50
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 51
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL4 FR2
<400> 51
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 52
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL4 FR3
<400> 52
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 53
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VL框架(FR) - VL4 FR4
<400> 53
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 54
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VH框架(FR) - FR1
<400> 54
Gln Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Ala Asp Leu Val Gln Pro Ser Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 55
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VH框架(FR) - FR2
<400> 55
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VH框架(FR) - FR3
<400> 56
Arg Leu Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Phe Leu Gln
1 5 10 15
Met His Ser Leu Gln Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VH框架(FR) - FR4
<400> 57
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 58
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VL框架(FR) - FR1
<400> 58
Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Ala Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Ser Ile Ser Cys
20
<210> 59
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VL框架(FR) - FR2
<400> 59
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 60
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VL框架(FR) - FR3
<400> 60
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Gln Thr Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 猫源化VL框架(FR) - FR4
<400> 61
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 62
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31突变体1
<400> 62
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Ala Ala Asn Ile Ala
65 70 75 80
Ala Lys Ile Ala Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro
85 90 95
Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe
100 105 110
Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe
115 120 125
Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
130 135
<210> 63
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31突变体2
<400> 63
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Ala Val Ala Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Ala Leu Gln Pro Leu Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile
65 70 75 80
Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro
85 90 95
Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe
100 105 110
Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe
115 120 125
Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
130 135
<210> 64
<211> 136
<212> PRT
<213> 家猫（Felis catus）
<400> 64
Ser His Met Ala Pro Ala His Arg Leu Gln Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Arg Pro Met Ser Lys Gly Leu Leu Gln Asp Tyr
20 25 30
Leu Lys Lys Glu Ile Gly Leu Pro Glu Ser Asn His Ser Ser Leu Pro
35 40 45
Cys Leu Ser Ser Asp Ser Gln Leu Pro His Ile Asn Gly Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Thr Ile
65 70 75 80
Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln Arg Glu Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Val Ser Met Pro Ala Asp Asn Phe Glu Arg Lys Asn Phe
100 105 110
Ile Leu Ala Val Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu His Val Leu
115 120 125
Gln Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
130 135
<210> 65
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物/人类chIL-31_c123_h4
<400> 65
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile
65 70 75 80
Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu Pro
85 90 95
Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe
100 105 110
Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu
115 120 125
Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln Gln Ala Thr Thr
130 135 140
<210> 66
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物/人类chIL-31_c12_h34
<400> 66
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile
50 55 60
Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Ser Val Ile
65 70 75 80
Asp Glu Ile Ile Glu His Leu Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala Pro
85 90 95
Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr Asp Thr His Glu Cys Lys Arg Phe
100 105 110
Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala Leu
115 120 125
Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln Gln Ala Thr Thr
130 135 140
<210> 67
<211> 141
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物/人类chIL-31_c1_h234
<400> 67
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys Leu Ser Pro Asp Ala Gln Pro Pro Asn Asn Ile His Ser Pro Ala
50 55 60
Ile Arg Ala Tyr Leu Lys Thr Ile Arg Gln Leu Asp Asn Lys Ser Val
65 70 75 80
Ile Asp Glu Ile Ile Glu His Leu Asp Lys Leu Ile Phe Gln Asp Ala
85 90 95
Pro Glu Thr Asn Ile Ser Val Pro Thr Asp Thr His Glu Cys Lys Arg
100 105 110
Phe Ile Leu Thr Ile Ser Gln Gln Phe Ser Glu Cys Met Asp Leu Ala
115 120 125
Leu Lys Ser Leu Thr Ser Gly Ala Gln Gln Ala Thr Thr
130 135 140
<210> 68
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_N-term
<400> 68
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
20 25 30
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu
35 40 45
Cys
<210> 69
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_N-term_20_1
<400> 69
Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys
1 5 10 15
Ile Ile Leu Glu
20
<210> 70
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_N-term_20_2
<400> 70
Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg
1 5 10 15
Gly Leu Leu Glu
20
<210> 71
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_N-term_20_3
<400> 71
Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu
1 5 10 15
Thr Gly Val Pro
20
<210> 72
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_N-term_20_4
<400> 72
Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Leu
20
<210> 73
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31
<400> 73
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 74
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_4xMUT_combo
<400> 74
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Ala Glu Asp Ala Ala Lys Lys Glu Thr Gly Val Ala Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 75
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_L29A
<400> 75
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Ala Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 76
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_Y32A
<400> 76
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Ala Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 77
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_Q33A
<400> 77
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Ala Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 78
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物IL-31_P40A
<400> 78
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Ala Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln His
145 150 155 160
His His His His His
165
<210> 79
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基18-42的区域的丙氨酸扫描肽文库
<400> 79
Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr
1 5 10 15
Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser
20 25
<210> 80
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬科动物κ 轻链恒定区
<400> 80
Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp
1 5 10 15
Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln
35 40 45
Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser
65 70 75 80
His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr
85 90 95
Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
100 105 110
<210> 81
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH6 - FR1
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser
20 25
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH6 - FR2
<400> 82
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met Gly
1 5 10
<210> 83
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH6 - FR3
<400> 83
Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ile Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH6 - FR4
<400> 84
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 85
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH7 - FR1
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser
20 25
<210> 86
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH7 - FR2
<400> 86
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Met Gly
1 5 10
<210> 87
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH7 - FR3
<400> 87
Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VH7 - FR4
<400> 88
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 89
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VL5 - FR1
<400> 89
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VL5 - FR2
<400> 90
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 91
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VL5 - FR3
<400> 91
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 犬源化VH框架(FR) 序列 - VL5 - FR4
<400> 92
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - HC_CDR1
<400> 93
Asp Tyr Ser Met His
1 5
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - HC_CDR2
<400> 94
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr Ile His Ala Glu Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - HC_CDR3
<400> 95
Gly Arg Pro Asp Tyr
1 5
<210> 96
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - LC_CDR1
<400> 96
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln
1 5 10 15
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - LC_CDR2
<400> 97
Ala Ala Ser Gly Val Glu Ser
1 5
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4.D2 - LC_CDR3
<400> 98
Gln Gln Ser Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 99
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4犬源化重链 - VHC5
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr Ile His Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ile Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 100
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4犬源化重链 - VHC6
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Lys Thr Ile His Ala Glu Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ile Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 101
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RA4犬源化轻链 - VLC6
<400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Leu Ser Gln Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Gly Val Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Phe Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (53)

1.特异性结合白细胞介素-31(IL-31)的抗原结合分子，
其中所述抗原结合分子包含免疫球蛋白重链可变区(VH)和免疫球蛋白轻链可变区(VL)，
其中所述VH包含互补决定区1(VH CDR1)、VH CDR2和VH CDR3，
VH CDR1包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，
VH CDR2包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，和
VH CDR3包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；且
其中所述VL包含互补决定区1(VL CDR1)、VL CDR2和VL CDR3，
VL CDR1包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，
VL CDR2包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，和
VL CDR3包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，
其中CDR的氨基酸序列基于IMGT编号。
2.特异性结合犬科动物IL-31的表位的抗原结合分子，所述表位包含SEQ ID NO：1的氨基酸残基L29、Y32、Q33和P40。
3.抗原结合分子，其与根据权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子竞争结合SEQID NO：1的犬科动物IL-31。
4.根据权利要求1～3之任一项所述的抗原结合分子，
其中所述VH包含：
包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的VH CDR1、
包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VH CDR2、和
包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的VH CDR3；且
其中所述VL包含：
包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的VL CDR1、
包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的VL CDR2、和
包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VL CDR3。
5.根据权利要求4所述的抗原结合分子，
其中所述VH包含：
由SEQ ID NO：6的氨基酸序列组成的VH CDR1、
由SEQ ID NO：7的氨基酸序列组成的VH CDR2、和
由SEQ ID NO：8的氨基酸序列组成的VH CDR3；且
其中所述VL包含：
由SEQ ID NO：9的氨基酸序列组成的VL CDR1、
由SEQ ID NO：10的氨基酸序列组成的VL CDR2、和
由SEQ ID NO：11的氨基酸序列组成的VL CDR3。
6.根据权利要求1～5之任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子不与下列结合分子竞争结合IL-31：
(i)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置13、15、20和26的IL-31区域的IL-31结合分子，或
(ii)特异性结合对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置76、77、80、81和84的IL-31区域的IL-31结合分子。
7.根据权利要求1～6之任一项所述的抗原结合分子，其中所述分子是犬源化、猫源化或马源化的抗原结合分子。
8.根据权利要求7所述的抗原结合分子，其中所述分子是犬源化抗原结合分子。
9.根据权利要求8所述的抗原结合分子，其中所述犬源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(a)与选自SEQ ID NO：18、22、26、30和34的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR1氨基酸序列，
(b)与选自SEQ ID NO：19、23、27、31和35的VHFR2氨基酸序列具有至少80％的序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(c)与选自SEQ ID NO：20、24、27、32和36的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(d)与选自SEQ ID NO：21、25、28、33和37的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(e)与选自SEQ ID NO：38、42、46和50的重链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR1氨基酸序列，
(f)与选自SEQ ID NO、39、43、47和51的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(g)与选自SEQ ID NO：40、44、48和52的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，和
(h)与选自SEQ ID NO：41、45、49和53的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
10.根据权利要求8所述的抗原结合分子，其中所述犬源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(i)与SEQ ID NO：81或SEQ ID NO：85的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR1氨基酸序列，
(j)与SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：86的VHFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(k)与SEQ ID NO：83或SEQ ID NO：87的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(l)与SEQ ID NO：84或SEQ ID NO：88的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(m)与SEQ ID NO：89的重链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR1氨基酸序列，
(n)与SEQ ID NO：90的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(o)与SEQ ID NO：91的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，和
(p)与SEQ ID NO：92的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
11.根据权利要求8所述的抗原结合分子，其中所述重链可变结构域(VH)包含与SEQ IDNO：99或SEQ ID NO：100的VH氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求8所述的抗原结合分子，其中所述轻链可变结构域(VL)包含与SEQ IDNO：101的VL氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求7所述的抗原结合分子，其中所述分子是猫源化抗原结合分子。
14.根据权利要求13所述的抗原结合分子，其中所述猫源化抗原结合分子包含：
(i)重链可变结构域(VH)，其包含：
(a)与SEQ ID NO：54的重链可变结构域框架区1(VHFR1)氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR1氨基酸序列，
(b)与SEQ ID NO：55的VHFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR2氨基酸序列，
(c)与SEQ ID NO：56的VHFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR3氨基酸序列，和
(d)与SEQ ID NO：57的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VHFR4氨基酸序列；和/或
(ii)轻链可变结构域(VL)，其包含：
(e)与SEQ ID NO：58的VLFR1氨基酸序列具有至少80％序列同一性的轻链可变结构域框架区1(VLFR1)氨基酸序列，
(f)与SEQ ID NO：59的VLFR2氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR2氨基酸序列，
(g)与SEQ ID NO：60的VLFR3氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR3氨基酸序列，和
(h)与SEQ ID NO：61的VHFR4氨基酸序列具有至少80％序列同一性的VLFR4氨基酸序列。
15.根据权利要求1～14之任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子是抗体或其IL-31结合片段。
16.根据权利要求15所述的抗原结合分子，其中所述IL-31结合片段选自Fab片段、scFab、Fab'、单链可变片段(scFv)和单臂抗体。
17.根据权利要求1～16之任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含犬科动物、猫科动物或马科动物免疫球蛋白分子的重链和/或轻链恒定区。
18.根据权利要求17所述的抗原结合分子，其中所述免疫球蛋白分子是猫科动物免疫球蛋白。
19.根据权利要求18所述的抗原结合分子，其中所述猫科动物免疫球蛋白分子选自IgG1a、IgG1b和IgG2。
20.根据权利要求17所述的抗原结合分子，其中所述免疫球蛋白分子是犬科动物免疫球蛋白分子。
21.根据权利要求20所述的抗原结合分子，其中所述犬科动物免疫球蛋白分子选自IgGA、IgGB、IgGC和IgGD。
22.根据权利要求21所述的抗原结合分子，其中所述犬科动物免疫球蛋白分子是犬科动物IgGA。
23.根据权利要求22所述的抗原结合分子，其中所述犬科动物免疫球蛋白分子包含SEQID NO：2的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的抗原结合分子，其中所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
25.根据权利要求22～24之任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
26.分离的核酸分子，其包含编码根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子的核酸序列。
27.表达构建体，其包含根据权利要求26所述的核酸序列。
28.宿主细胞，其包含根据权利要求27所述的表达构建体。
29.载体，其包含编码根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子的核酸序列。
30.根据权利要求29所述的载体，其中所述载体是AAV载体。
31.药物组合物，其包含根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子和药学上可接受的载体。
32.试剂盒，其包含：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、
根据权利要求29或根据权利要求30所述的载体、或
根据权利要求31所述的药物组合物。
33.治疗或预防与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状的方法，所述方法包括向有需求的受试者施用：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、
根据权利要求29或权利要求30所述的载体、或
根据权利要求31所述的药物组合物。
34.根据权利要求33所述的方法，其中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状选自：瘙痒症和皮炎。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述病状是特应性皮炎。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述病状是瘙痒症。
37.治疗或预防由IL-31诱导增殖的肿瘤及其相关病状的方法，该方法包括向有需求的受试者施用：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、
根据权利要求29或权利要求30所述的载体、或
根据权利要求31所述的药物组合物。
38.根据权利要求33～37之任一项所述的方法，其中所述受试者选自：犬科动物、猫科动物和马科动物。
39.下列物质在制备用于治疗或预防有需求的受试者中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状的药物中的用途：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、或
根据权利要求29或权利要求30所述的载体。
40.根据权利要求39所述的用途，其中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状选自：瘙痒症和皮炎。
41.根据权利要求40所述的用途，其中所述病状是特应性皮炎。
42.根据权利要求40所述的用途，其中所述病状是瘙痒症。
43.下列物质在制备用于治疗或预防有需求的受试者中由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状的药物中的用途：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、或
根据权利要求29或权利要求30所述的载体。
44.根据权利要求39～43之任一项所述的用途，其中所述受试者选自：犬科动物、猫科动物和马科动物。
45.下列物质，用于治疗或预防有需求的受试者中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、
根据权利要求29或权利要求30所述的载体、或
根据权利要求31所述的药物组合物。
46.根据权利要求45所述的抗原结合分子、载体或药物组合物，其中与IL-31的表达增加和/或活性增加相关的病状选自：瘙痒症和皮炎。
47.根据权利要求46所述的抗原结合分子、载体或药物组合物，其中所述病状是特应性皮炎。
48.根据权利要求46所述的抗原结合分子、载体或药物组合物，其中所述病状是瘙痒症。
49.下列物质，用于治疗或预防有需求的受试者中由IL-31诱导增殖的肿瘤和与其相关的病状：
根据权利要求1～25之任一项所述的抗原结合分子、
根据权利要求29或权利要求30所述的载体、或
根据权利要求31所述的药物组合物。
50.根据权利要求45～49之任一项使用的抗原结合分子、载体或药物组合物，其中所述受试者选自：犬科动物、猫科动物和马科动物。
51.能够引起针对IL-31的免疫应答的免疫原性组合物，
其中所述组合物包含：
(i)包含IL-31的B细胞表位的免疫原、和
(ii)药学上可接受的载体，
其中所述B细胞表位包含对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，且
其中免疫原不包含天然IL-31分子的氨基酸序列。
52.根据权利要求51所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原由对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列组成。
53.根据权利要求51所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原由对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置29～40的氨基酸序列组成。
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