CN116948894A - 一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用，复合微生物菌剂由暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)组成。通过采用本发明的技术方案，各组分种群相互协同，强化对降解底物的降解效能和耐冲击能力，降解方法针对性强、响应时间快、操作简单，可以应用于COD降解中，也可以应用于养殖废水厌氧处理。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
随着我国畜牧业的发展，产业竞争日益激烈，畜牧业的规模化、集约化发展已成为必然趋势，规模化养殖具有较高的饲养技术，统一的管理，降低了成本，提高了经济效益，但由于大量集中的粪便冲洗污水排放引起的环境污染问题也越来越严重。养殖业的粪尿排泄物及废水中含有大量有机物、氮、磷、悬浮物及致病菌并产生恶臭，直接排入河流或地表水将会严重污染水源、土壤环境，破坏水体原有功能，危害人体健康及农渔业生产，如富营养化等，对水域水质造成致命伤害。另一方面，淡水作为一种事关国计民生的资源，日益受到人们的关注。
养殖场中的污染主要由粪(以固体为主)和冲洗养殖场形成的污水(包括残留尿液)两个方面组成。对粪便的处理不外乎干清粪和水冲粪两种，粪便进行固液分离后，排往污水处理系统。这些废水中含有大量的有机物、氨氮、总磷、SS以及致病菌，如不加治理，会产生令人恶心的恶臭、对环境质量造成极大影响，深受环保的重视，急需治理。养殖场废水特点如下：
1、有机污染物：粪便中含有大量含碳化合物、含氨化合物等腐败有机物，进入水体后，严重首先使水质浑浊，水色变黄，气味变臭。在微生物作用下，大量消耗水中的溶解氧时，溶解氧被耗尽，有机物进行厌氧分解，产生多种恶臭物质，水体变黑发臭，水质恶化，不能饮用。
2、氮、磷营养物质污染：氮、磷是畜禽排泄物的主要营养物质污染物。在有机分解过程中，有机物氮、磷还要被矿化为无机的氮、磷。多数含氮化物被氧化成硝酸盐，其中一部分滞留在表土层，另一部分则渗入地下，日积月累则会污染地下水源。含磷过多的污水流入河沟和池塘，使水体富营养化，可使藻类等浮游生物大肆繁殖疯长，导致水中溶解氧含量降低并产生多种毒素，直接影响鱼类生长。由于藻类大量繁殖，加大了水的浑浊度，使水生植物和藻类的光合作用发生障碍而死亡，死亡的藻体和水生植物在厌氧条件下腐烂分解，导致水体恶化，从而危害生态环境。
3、矿物质元素污染：在畜禽养殖行业，为增强畜禽的食欲，往往在饲料中加入食盐，这导致粪尿盐分含量增多，直接影响动物健康和畜产品的食用安全，污染土壤，对农作物的生长不利。
我国对粪便污水的处理工艺和技术进行了大量的研究和探索，对粪便污水处理进行了各方面的试验和实践，取得了行之有效的成功经验，逐渐形成了以生化为主、生化与物化相结合的处理工艺。生化法中常用的有活性污泥法、生物膜法、厌氧和好氧相结合法、水解酸化与好氧相结合等各种工艺。实践证实，大中型养殖场粪便污水固液分离后进行好氧处理是可行和高效的，对于规模小的采用水解酸化与好氧相结合的方法较为适宜。现有的养殖废水处理生物法主要通过投放单一的菌种实现对COD的降解，例如中国发明专利CN111733113A公开了一种COD降解菌种及其应用，利用产吲哚金黄杆菌扩大培养后可应用于畜禽养殖废水种，但是单一菌种的投放具有明显的针对性不足、反应时间长等局限。
显然，提供一种复合微生物制剂将有助于改善畜禽粪便对土壤和水体的污染，对单一菌种对养殖废水的处理具有更明显的优势。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用，通过各组分种群的相互协同作用，强化对降解底物的降解效能，降解方法针对性强、响应时间快、操作简单。
为了达到上述目的，本申请提供如下技术方案：
一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂，由复合微生物菌剂由暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)组成。
进一步地，所述复合微生物菌剂中，各菌株的菌细胞浓度百分比为暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％-20％、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)15％-20％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％-20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％-10％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％-10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％-10％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％-8％、特吕珀菌属(Truepera)2％-8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％-8％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％-5％。
进一步地，所述复合微生物菌剂为液体菌剂，所述液体菌剂中菌细胞浓度为≥109个/mL。
将上述技术方案提供的所述复合微生物菌剂进行养殖废水进行发酵降解处理，COD降解率≥85％。
为实现另一个技术目的，本发明还提供了一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)活化；
S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、按照暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％-20％、厌氧绳菌(Anaerolineathermophila)15％-20％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％-20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％-10％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％-10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％-10％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％-8％、特吕珀菌属(Truepera)2％-8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％-8％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％-5％的菌细胞浓度百分比将10种菌液混合，得到所述复合微生物菌剂。
进一步地，所述培养基包括营养琼脂平板培养基和LB液体培养基；将活化后的菌株分别接种至所述营养琼脂平板培养基中长出比较均一、规则的菌落后，再接种至所述LB培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL。
进一步地，所述营养琼脂平板培养基中培养条件包括25℃-30℃温度下培养24h-48h；所述LB液体培养基中培养条件包括厌氧培养、30℃温度条件下培养24h-48h。
为进一步对本发明技术方案进行优化，在上述技术方案的基础上可以对复合微生物菌剂进行扩大培养，具体步骤包括：
S1、将暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)活化；
S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、将S2培养后的菌种分别按10％的接种量接种入500L种子罐，厌氧培养至对数生长期，所述种子罐中的培养基为LB液体培养基；
S3、将种子液按10％接种量接入生产罐中培养，所述生产罐中的培养基与所述种子罐中的培养基相同；
S4、在所述生产罐发酵结束后菌体数量≥10亿个/mL，发酵完成后分别出罐，依照菌细胞百分比浓度将10种菌混合，即为所述复合微生物菌剂的液体菌剂。
进一步地，S3中，所述生产罐中的培养条件包括搅拌速度为100～150r/min，培养温度为30℃，整个工艺流程培养时间为48～60h。
将上述技术方案提供的复合微生物菌剂接种于养殖废水中，接种量为1～5％。
本发明同时提供以上述复合微生物菌剂为活性成分，同时配以必要牛肉膏、蛋白胨等有机营养成分，所得复合制剂可以应用于COD的降解，尤其在养殖废水处理领域。
本发明所获得的有益技术效果：
1.通过采用本发明的技术方案，各组分种群相互协同，强化对降解底物的降解效能和耐冲击能力，降解方法针对性强、操作简单，可以应用于COD的降解，也可以应用于养殖废水厌氧处理。
2.通过采用本发明的技术方案，将复合微生物菌剂应用于实现的养殖废水厌氧处理中，借助复合菌剂的优势，能够大大降低养殖中COD，处理效果稳定，能够实现达标排放。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。
本发明提供的复合微生物菌剂暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％-20％、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)15％-20％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％-20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％-10％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％-10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％-10％、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)2％-8％、特吕珀菌属(Truepera)2％-8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％-8％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％-5％。组成。
实施例1
本实施例提供了一种复合微生物菌剂，制备方法包括以下步骤：
1、菌种
暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)组。
2、培养基
营养琼脂平板培养基：胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL；倒入平板制成营养琼脂平板培养基。
LB培养基：胰化蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL。
3.复合微生物菌剂的制备
步骤1：将10种菌分别接种到LB培养基，厌氧培养，30℃、培养24h～48h；当每一种达到指数期后，转接，直至检测结果每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
步骤2：将10种菌分别接种至营养琼脂平板培养基；25℃～30℃培养24h-48h，划线、分离，转接，直至长出比较均一、规则的菌落；
步骤3：将10种菌分别自营养琼脂平板培养基接种至LB液体培养基，30℃培养48h，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
步骤4：暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％、厌氧绳菌(Anaerolineathermophila)15％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％、芽单胞菌(Gemmatimonadotanorank)5％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％、特吕珀菌属(Truepera)2％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％的菌细胞百分比浓度比例将10种菌混合，制得复合微生物菌剂。
接种量：每升养殖废水中复合微生物菌剂为1g。
在室温下，将上述复合微生物菌剂直接接种至pH＝7～8的养殖废水中厌氧处理，DO≤0.2mg/L，进行COD的检测，并计算COD的降解率。
发酵降解前，养殖废水中的COD浓度为5500mg/L。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于，发酵降解前，养殖废水中的COD浓度为12000mg/L。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于，发酵降解前，养殖废水中的COD浓度为1050mg/L。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于，复合微生物菌剂中各菌种的组成包括暖绳菌属(Caldilineaceae)19％、厌氧绳菌(Anaerolineaceae)15％、黄杆菌(Xanthobacteraceae)15％、芽单胞菌(Gemmatimonadota)10％、浮霉状菌(Phycisphaeraceae)10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)10％、生丝微菌(Hyphomicrobiaceae)8％、特吕珀菌属(Truepera)8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)8％、腐螺菌(Saprospiraceae)5％。
实施例5
本实施例提供了一种液体的复合微生物菌剂，制备方工艺包括斜面种子一种子液一种子罐—产品(包装剂型为液体菌剂)。
制备方法具体步骤包括：
步骤(1)、将实施例1的10种菌株的试管种接种于发酵培养基中，培养至对数期；
步骤(2)、将上述培养好的菌种按10％的接种量接种入500L种子罐，厌氧培养至对数生长期，种子罐所用的培养基配方及质量含量为：蛋白胨0.5﹪、酵母膏0.25﹪，用蒸馏水配制，pH为7.0；
步骤(3)、将种子液按10％接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同；
步骤(4)、在种子罐和生产罐的培养过程中搅拌速度为100～150r/min，培养温度为30℃，整个工艺流程培养时间为48～60h，发酵结束后菌体数量达到10亿个/mL以上，发酵完成后培养液出罐，依照暖绳菌属(Caldilineaceae)20％、厌氧绳菌(Anaerolineaceae)20％、黄杆菌(Xanthobacteraceae)20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota)10％、浮霉状菌(Phycisphaeraceae)5％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％、生丝微菌(Hyphomicrobiaceae)5％、特吕珀菌属(Truepera)2％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％、腐螺菌(Saprospiraceae)1％的菌细胞百分比浓度比例将10种菌混合，即为复合微生物菌剂。
将复合微生物菌剂直接接种至7实施例1的养殖废水中进行检测，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种暖绳菌属(Caldilineaceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种厌氧绳菌(Xanthobacteraceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种黄杆菌(Xanthobacteraceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例4
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种芽单胞菌(Gemmatimonadota)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例5
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种浮霉状菌(Phycisphaeraceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例6
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例7
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种生丝微菌(Hyphomicrobiaceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例8
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种特吕珀菌属(Truepera)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例9
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种盖勒氏菌属(Gaiellales)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例10
本对比例与实施例1的区别在于，仅接种腐螺菌(Saprospiraceae)，接种量与实施例1的复合微生物菌剂接种量相同。
对比例11
本对比例与实施例1的区别在于，步骤4中，菌种的接种包括暖绳菌(Caldilineaaerophila)15％、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)15％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％。
对比例12
本对比例与实施例1的区别在于，步骤4中，菌种的接种包括亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％、特吕珀菌属(Truepera)2％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％。
对比例13
本对比例与实施例1的区别在于，步骤4中，菌种的接种包括暖绳菌(Caldilineaaerophila)15％、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)15％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％、特吕珀菌属(Truepera)2％。
对比例14
本对比例与实施例1的区别在于，步骤4中，菌种的接种包括黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％、特吕珀菌属(Truepera)2％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％。
将上述实施例和对比例制备得到的复合微生物菌剂接种至处理后的养殖废水中，厌氧条件下培养，进行发酵降解，实现COD的降解，其中，厌氧培养的温度为30℃，pH值为7，厌氧培养的DO(溶解氧)值为0.2mg/L。在反应过程中每12h取一次样，按照下述COD的测定方法测定并计算废水中的COD降解率。
COD的浓度的检测采用国标HJ 828-2017重铬酸盐法。
根据测定数据及以下计算公式计算COD降解率：
COD降解率＝[COD(0)-COD(x)]/COD(0)×100％
COD(0)为废水液体培养基接种菌液后混合体系的初始COD浓度；COD(x)为降解后的混合体系的COD浓度；COD(x)为在x时间点所取样本的COD浓度。
表1分别接种实施例和对比例的符合微生物菌剂的降解率结果
| 名称 | 最高COD降解率/％ |
| 实施例1 | 86.8 |
| 实施例2 | 86.6 |
| 实施例3 | 89.8 |
| 实施例4 | 84.6 |
| 实施例5 | 85.9 |
| 对比例1 | 35.6 |
| 对比例2 | 38.3 |
| 对比例3 | 32.7 |
| 对比例4 | 34.2 |
| 对比例5 | 36.6 |
| 对比例6 | 32.8 |
| 对比例7 | 33.3 |
| 对比例8 | 31.9 |
| 对比例9 | 32.6 |
| 对比例10 | 31.6 |
| 对比例11 | 48.4 |
| 对比例12 | 50.7 |
| 对比例13 | 65.6 |
| 对比例14 | 66.1 |
结论：通过表1的结果可见，实施例1和实施例5分别为不同包装类型的复合微生物菌剂，得到的降解率结果相当，说明，本发明的菌剂在试剂生产中可以根据需要制备不同包装类型的产品，并不影响菌剂的使用效果。
进一步地，通过对不同COD值的养殖废水进行处理，且直接对养殖废水进行接种，无需对养殖废水进行前处理，区别于现有技术中需要进行的前处理步骤，节省了养殖废水的前处理工序，且处理结果均能符合实际处理需求，工序简单。
通过实施例1与对比例1-10进行对比可见，采用单一的菌种接种，降解效果明显低于实施例1中采用的十种菌种的联合作用；而对比例11-12采用其中的任意五种进行接种时，效果能够稍优于单一菌种的接种，但是也明显大大地低于本发明的十种菌种的联合接种。
通过实施例1与对比例13-14可见，选择其中任意八种菌种的接种效果，接种效果也只是略微提升，并没有全部的菌种的效果。
显然采用本发明的技术方案，十种菌种在进行降解过程中的反应存在着协同效应，对COD的降解率可达到85％以上，联合接种相比较于其中的任一种或多种产生了意想不到的降解效果。
以上仅为本发明的优选实施例而已，其并非因此限制本发明的保护范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，通过常规的替代或者能够实现相同的功能在不脱离本发明的原理和精神的情况下对这些实施例进行变化、修改、替换、整合和参数变更均落入本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂，复合微生物菌剂由暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)组成。
2.根据权利要求1所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂中，各菌株的菌细胞浓度百分比为暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％-20％、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)15％-20％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％-20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％-10％、贝氏浮霉状菌(Planctomycesbekefii)5％-10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％-10％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％-8％、特吕珀菌属(Truepera)2％-8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％-8％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％-5％。
3.根据权利要求1或2所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂为液体菌剂，所述液体菌剂中菌细胞浓度为≥109个/mL。
4.根据权利要求3所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂对养殖废水的COD降解率≥85％。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)活化；
S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、按照暖绳菌(Caldilinea aerophila)15％-20％、厌氧绳菌(Anaerolineathermophila)15％-20％、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)15％-20％、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)5％-10％、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)5％-10％、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)5％-10％、普通生丝微菌(Hyphomicrobium vaigare)2％-8％、特吕珀菌属(Truepera)2％-8％、盖勒氏菌属(Gaiellales)2％-8％、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)1％-5％的菌细胞浓度百分比将10种菌液混合，得到所述复合微生物菌剂。
6.根据权利要求5所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述培养基包括营养琼脂平板培养基和LB液体培养基；将活化后的菌株分别接种至所述营养琼脂平板培养基中长出比较均一、规则的菌落后，再接种至所述LB培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL。
7.根据权利要求6所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述营养琼脂平板培养基中培养条件包括25℃-30℃温度下培养24h-48h；所述LB液体培养基中培养条件包括厌氧培养、30℃温度条件下培养24h-48h。
8.一种如权利要求1-4任一项所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将暖绳菌(Caldilinea aerophila)、厌氧绳菌(Anaerolinea thermophila)、黄色杆菌(Xanthobacteraceae)、芽单胞菌(Gemmatimonadota norank)、贝氏浮霉状菌(Planctomyces bekefii)、亚硝化单胞菌(Nitrosomonas)、普通生丝微菌(Hyphomicrobiumvaigare)、特吕珀菌属(Truepera)、盖勒氏菌属(Gaiellales)、腐败螺旋菌(Saprospiraceae_norank)活化；
S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、将S2培养后的菌种分别按10％的接种量接种入500L种子罐，厌氧培养至对数生长期，所述种子罐中的培养基为LB液体培养基；
S3、将种子液按10％接种量接入生产罐中培养，所述生产罐中的培养基与所述种子罐中的培养基相同；
S4、在所述生产罐发酵结束后菌体数量≥10亿个/mL，发酵完成后分别出罐，依照菌细胞百分比浓度比例将10种菌混合，即为所述复合微生物菌剂的液体菌剂。
9.根据权利要求8所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述生产罐中的培养条件包括搅拌速度为100～150r/min，培养温度为30℃，整个工艺流程培养时间为48～60h。
10.如权利要求1-4任一项所述的用于厌氧处理养殖废水的复合微生物菌剂在处理养殖废水中的应用，接种量为1～5g/L。
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2023
- 2023-07-19 CN CN202310887326.XA patent/CN116948894A/zh active Pending
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