CN109052654A - 一种用于改善城市黑臭水的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于改善城市黑臭水的方法，包括以下步骤：S1.在黑臭水中投放ORP调节剂，用于改善水体ORP环境和提高水体溶解氧；S2.8‑12小时后，再向黑臭水中投入驯化后的光合细菌，用于消除硫化氢和氨氮等致臭物质，进而抑制致黑物质硫化亚铁、硫化铜等的生成；S3.8‑12小时后，再向黑臭水中投放驯化后的复合微生物菌群，用于降低水体COD，抑菌除臭。本发明的方法能有效去除黑臭水中的溶解物和发臭物质，抑制水体中致黑物质的生成，提高水体中氧气含量，使缺氧的水体恢复到好氧状态，提高水体及底部氧化还原电位，进而提高好氧微生物的活性，加速污染物分解，提高水体自净能力，并最终达到改善黑臭水体的目的。

Description

一种用于改善城市黑臭水的方法
技术领域
本发明属于水处理技术领域，尤其是涉及一种用于改善城市黑臭水的方法。
背景技术
随着经济发展和人口的不断增加，工业废水、生活污水的排放量不断增加，大量未经有效处理的污水直接排放入河流或湖泊，河流所接受的污水和废水量大大增加，已经严重超过水体自净能力，有机污染物大量积累，使水体严重污染，致使不少河流，尤其是中小型河流长期处于黑臭状态。水质恶化一方面导致水源水质的下降和处理成本的增加，同时生态系统结构、功能遭到严重损坏，严重威胁到人们的生活和健康。因此，治理黑臭水体问题迫在眉睫。目前，我国水环境污染形式严峻，2010年环境公报显示，七大水系总体为轻度污染，湖泊(水库)富营养化问题突出，在被统计的131条流经城市的河流中，严重污染的有36条，重度污染的有21条。我们必须要了解黑臭水体的现状，分析出成因，并为此制定合理的治理方法，达成国家对黑臭水体的治理的目标。
黑臭水体的传统治理方法主要是物理方法和化学方法。物理方法(如疏浚、截污、引水和调水等)主要是利用机械，人工疏浚河流底泥，降低底泥向水体中释放污染物，是治理城市黑臭河流的一个主要方式，但工程投资费用大，而且清出的淤泥占地面积大，后续处理也是一个新的问题。化学方法(如化学絮凝和吸附等)虽然可以达到去除污染物的目的，但单一化学方法投入药品量大，容易造成二次污染，持续性差，容易反复。还有一种方法是曝气充氧，通过人工手段向水体中曝气，提高水中的溶解氧含量，这样有氧微生物的分解活性就增强，切断河流产生黑臭的中间途径，来治理河流。由于其效率高，周期短，所以我国部分城市为了快速改善城市河流的黑臭情况，利用人工曝气装备，去除黑臭。但其费用高的弊端也显露无疑。目前在整治黑臭河流中适用性广的是生物修复技术，它能使有机物分解为CO2和H2O，不会造成二次污染，并且降解速度快，处理时间短，操作简单，费用低，又能很方便地与其它技术组合综合处理污染，较之上述传统的方法，这些优点使其成为最具发展潜力的修复方法。生物修复通常是指利用微生物的代谢活性降解有机污染物，目的是去除环境中的污染物，使其浓度下降至环境标准规定的浓度，改善受污染的环境。但是，单一的生物修复技术依然存在有缺陷，如营养消耗不完全。复合的多种菌之间有协同增效作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用于改善城市黑臭水的方法。该方法能有效去除黑臭水中的溶解物和发臭物质，抑制水体中致黑物质的生成，提高水体中氧气含量，使缺氧的水体恢复到好氧状态，提高水体及底部氧化还原电位，进而提高好氧微生物的活性，加速污染物分解，提高水体自净能力，并最终达到改善黑臭水体的目的。
为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
一种用于改善城市黑臭水的方法，包括以下步骤：
S1.在黑臭水中投放ORP调节剂，用于改善水体ORP环境和提高水体溶解氧；
S2.在投放ORP调节剂8-12小时后，再向黑臭水中投入驯化后的光合细菌，用于消除硫化氢和氨氮等致臭物质，进而进而抑制致黑物质硫化亚铁、硫化铜等的生成；
S3.在投入驯化后的光合细菌8-12小时后，再向黑臭水中投放驯化后的复合微生物菌群，用于降低水体COD，抑菌除臭。
优选地，所述光合细菌为红螺菌。
上述三个步骤的先后顺序及使用时机对黑臭水的处理过程极为重要。先使用ORP调节剂，目的在于改善水体ORP环境、特有的氨基多糖螯合盐可降低水质及底质重金属含量，从而为生物制剂提供更有利的生长环境，另外，ORP调节剂对底泥上浮有控制作用，可降低底泥污染物向上覆水体释放；8-12小时后，ORP调节剂发挥最大功效后，使用驯化后的光合细菌一方面可消除水体致黑致臭物质，另一方面还可调节水体的菌相平衡，为后续的复合微生物提供优良条件；在投入驯化后的光合细菌8-12小时后，使用驯化后的复合菌群对步骤S2的微生物进行衔接，增加水体有益微生物菌群，从而全面去除有机污染物。如果改变使用步骤或使用时机则不会达到改善黑臭水体的目的。
作为技术方案的进一步改进，步骤S1中，所述ORP调节剂是过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐按质量比7：2的比例复合而成。
作为技术方案的进一步改进，所述ORP调节剂的添加量为2-4ppm。
所述光合细菌是地球上出现最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成体系的原核生物，是在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，是一类没有形成芽孢能力的革兰氏阴性菌，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。光合细菌广泛分布于自然界的土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等处，主要分布于水生环境中的缺氧区。光合细菌因其灵活的代谢途径、分布广等特点，具有重要的生态意义和应用价值。它可在污染严重的水体中通过利用有机物、硫化氢、氨等作为供氢体合成自身的组成物质，从而降解水体中的氨氮、亚硝酸盐、硫化物等有毒物质，起到净化污水的作用。
作为技术方案的进一步改进，所述的光合细菌筛选自黑臭或受污染严重水体，采集底泥和水样，在厌氧条件下进行光合细菌的富集，通过筛选获得对黑臭水有改善效果的菌群。
优选地，本发明的光合细菌制备方法如下：采集黑臭水体或受污染严重水体的底泥和污水加入到无菌容量瓶，加满光合细菌富集培养基，加塞封口置于28-30℃，光照培养箱中进行培养，7天后培养液呈红色，取1mL底部培养液于另一容量瓶，加满富集培养基，连续多次富集直至经固体培养和镜检后，菌落、菌体形态均匀单一为止；再将已筛选的菌种进行发酵，直至pH≥9.5，OD680≥1.0，总菌数≥5亿/mL时，发酵结束。
作为技术方案的进一步改进，步骤S2中，所述光合细菌的添加量为3-8ppm。
作为技术方案的进一步改进，步骤S3中，所述复合微生物菌群包括乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌。
优选地，所述反硝化细菌为假单胞菌。
优选地，所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶0.8-1。
乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。这类细菌在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。它可以摄取光合细菌、酵母菌产生的糖类形成乳酸，平衡水体pH值，乳酸具有很强的杀菌能力，能有效抑制有害微生物的滋生，能够分解淤泥中有害物质，防止淤泥中有害物质因腐败变质而产生有害物质污染水体。
酵母菌是单细胞真核生物，分布广，可将无机N源或尿素合成SCP。能适应多种环境，对有机物降解效率高。上世纪90年代，酵母菌率先被实际应用到废水处理中，能高效降解油脂等特殊有机物。Chigusa K等将来自工业废水的混合酵母菌处理豆油废水，发现混合菌对COD的去除不仅稳定而且高效，后续处理方法也很简便。由于酵母菌适应性强，对有机物降解效率高，目前成熟的工艺都集中在工业废水处理方面，而很少有研究针对河流黑臭水体。
放线菌是原核生物的一个类群，大多数有发达的分枝菌丝，因菌落呈放线状而得名。放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌的物质代谢比较特殊，糖类、淀粉、有机酸类等化合物都可作其C源和能源。放线菌中绝大多数是腐生菌，能分解腐败有机物，然后转化成有利于植物生长的营养物质。骆耀仙等从活性污泥中分离出的能降解TA的诺卡氏菌属，净化TA废水时去除了49.46％的CODcr。
反硝化细菌是一种能引起反硝化作用的细菌，能够把污水中的硝酸盐转化为氮气释放出来。传统的反硝化细菌属于异养微生物，在厌氧条件下进行反硝化作用，后来又发现了好氧的反硝化细菌，近年来又有自养反硝化细菌的报道。
优选地，所述乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌，均筛选自黑臭或受污染严重水体；采集黑臭水体或受污染严重水体的底泥1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；用1mL 无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液。以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液。从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌，将此4种菌和上述光合细菌均进行单菌株发酵，然后乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶ 0.8-1，总菌数达到100亿/g。
优选地，所述复合微生物菌群在黑臭水中的添加量为3-8ppm。
如无特殊说明，本发明中的各原料均可通过市售购买获得，本发明中所用的设备可采用所属领域中的常规设备或参照所属领域的现有技术进行。
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
本发明方法能有效去除黑臭水中的溶解物和发臭物质，抑制水体中致黑物质的生成，提高水体中氧气含量，使缺氧的水体恢复到好氧状态，提高水体及底部氧化还原电位，进而提高好氧微生物的活性，加速污染物分解，提高水体自净能力，并最终达到改善黑臭水体的目的。另外，本发明方法基本不使用任何水处理设备，操作简单，工程量小。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。
本发明一种用于改善城市黑臭水的方法，包括以下步骤：
S1.在黑臭水中投放ORP调节剂，用于改善水体ORP环境和提高水体溶解氧；
S2.在投放ORP调节剂8-12小时后，再向黑臭水中投入驯化后的光合细菌，用于消除硫化氢和氨氮等致臭物质，进而进而抑制致黑物质硫化亚铁、硫化铜等的生成；
S3.在投入驯化后的光合细菌8-12小时后，再向黑臭水中投放驯化后的复合微生物菌群，用于降低水体COD，抑菌除臭。
在本发明某些实施例中，所述光合细菌为红螺菌。
在本发明某些实施例中，步骤S1中所述ORP调节剂是过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐按质量比7∶2的比例复合而成。过硫酸氢钾复合盐是一种氧化型消毒剂，对各种微生物均有杀灭作用。产品在固态时安全稳定，不易发生化学反应，溶于水后通过系列链式反应，连续产生激发态氧自由基，杀菌效果优异，且过硫酸氢钾复合盐在水中分解放出氧气和硫酸钾，不产生有害物质，安全环保，属于绿色产品。污水中的还原硫磺化合物，包括硫化氢、硫醇、硫化物、二硫化物和亚硫酸盐等，均可被过硫酸氢钾复合盐氧化，达到污水除臭的目的。而氨基多糖螯合盐有以下两方面作用：一方面可改善过硫酸氢钾复合盐的溶水性，另一方面可降低水体及底质重金属的含量，改善水体环境。
在本发明某些实施例中，所述ORP调节剂的添加量为2-4ppm。
在本发明某些实施例中，步骤S2中所述光合细菌选自现有产品。
在本发明某些优选实施例中，本发明的光合细菌制备方法如下：采集黑臭水体或受污染严重水体的底泥和污水加入到无菌容量瓶，加满光合细菌富集培养基，加塞封口置于 28-30℃，光照培养箱中进行培养，7天后培养液呈红色，取1mL底部培养液于另一容量瓶，加满富集培养基，连续多次富集直至经固体培养和镜检后，菌落、菌体形态均匀单一为止。再将已筛选的菌种进行发酵，直至pH≥9.5，OD680≥1.0，总菌数≥5亿/mL时，发酵结束。
在本发明某些实施例中，步骤S2中，所述光合细菌的添加量为3-8ppm。
在本发明某些实施例中，步骤S3中，所述复合微生物菌群包括乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌。
在本发明某些优选实施例中，所述反硝化细菌为假单胞菌。
在本发明某些优选实施例中，所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶0.8-1。
在本发明某些优选实施例中，所述乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌，均筛选自黑臭或受污染严重水体；采集黑臭水体的底泥1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；用1mL 无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液。以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液。从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌，将此4种菌和上述光合细菌均进行单菌株发酵，然后乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶ 0.8-1，总菌数达到100亿/g。
在本发明某些实施例中，所述复合微生物菌群在黑臭水中的添加量为3-8ppm。
实施例1
一种用于改善城市黑臭水的方法，包括如下步骤：
1)在黑臭水中投放过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，添加量为3ppm；
2)8-12小时后，向黑臭水中投入光合细菌，添加量为5ppm；
3)8-12小时后，再向黑臭水中投放复合微生物菌群，所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为2∶2∶2∶1∶1；添加量为5ppm。
对比例1
一种用于改善城市黑臭水的方法，包括如下步骤：
1)在黑臭水中投放过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，添加量为2ppm；
2)8-12小时后，向黑臭水中投入光合细菌，添加量为3ppm。
对比例2
一种用于改善城市黑臭水的方法，包括如下步骤：
1)在黑臭水中投放过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，添加量为4ppm；
2)8-12小时后，向黑臭水中投放复合微生物菌群，所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为2∶2∶2∶1∶1；添加量为5ppm。
对比例3
一种用于改善城市黑臭水的方法，包括如下步骤：
1)向黑臭水中投入光合细菌，添加量为8ppm；
2)8-12小时后，再向黑臭水中投放复合微生物菌群，所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为2∶2∶2∶1∶1；添加量为8ppm。
对比例4
重复实施例1，其不同之处仅在于：所述ORP调节剂选自高锰酸钾。
对比例5
重复实施例1，其不同之处仅在于：所述ORP调节剂选自次氯酸钠。
实验报告：
1、天津某地黑臭水体
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1投放按对比例1；对照组2投放按对比例4；对照组3投放按对比例5；
本发明组投放按实施例1。
2)结果：
本发明组的COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率明显高于空白组和对照组。
COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率(指标去除率，％)
空白组 对照组1 对照组2 对照组3 本发明组
COD 8.33 17.43 10.30 12.23 62.50
NH<sub>3</sub>-N 7.86 16.90 9.08 10.93 27.78
臭阈值 8.71 21.70 10.28 12.23 82.94
色阈值 2.04 18.79 4.81 5.21 69.11
S<sup>2-</sup> 4.08 15.66 6.02 7.24 86.87
注：COD测定采用重铬酸钾法；NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；臭阈值测定采用臭阈值法；色阈值测定采用三刺激法；S2-测定采用亚甲基兰分光光度法。
2、河北唐山某地黑臭水体
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组投放按对比例2；
本发明组投放按实施例1。
2)结果：
本发明组的COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率明显高于空白组和对照组。
COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率(指标去除率，％)
注：COD测定采用重铬酸钾法；NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；臭阈值测定采用臭阈值法；色阈值测定采用三刺激法；S2-测定采用亚甲基兰分光光度法。
3、北京某地黑臭水体
1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。
空白组不投放任何处理剂；
对照组投放按对比例3；
本发明组投放按实施例1。
2)结果：
本发明组的COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率明显高于空白组和对照组。
COD、NH3-N、臭阈值、色阈值、S2-的去除率(指标去除率，％)
空白组 对照组 本发明组
COD 9.50 17.65 61.99
NH<sub>3</sub>-N 9.71 15.73 28.66
臭阈值 10.62 20.29 80.91
色阈值 4.91 13.58 66.38
S<sup>2-</sup> 5.18 14.54 85.86
注：COD测定采用重铬酸钾法；NH3-N测定采用纳氏试剂分光光度法；臭阈值测定采用臭阈值法；色阈值测定采用三刺激法；S2-测定采用亚甲基兰分光光度法。
综上所述：本发明的一种用于改善城市黑臭水的方法各步骤之间具有相互配合，相互促进的协同作用，更高效的去除黑臭水中的溶解物和发臭物质，抑制水体中致黑物质的生成，提高水体中氧气含量，使缺氧的水体恢复到好氧状态，提高水体及底部氧化还原电位，进而提高好氧微生物的活性，加速污染物分解，提高水体自净能力，并最终达到改善黑臭水体的目的。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (10)

1.一种用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.在黑臭水中投放ORP调节剂；
S2.在投放ORP调节剂8-12小时后，再向黑臭水中投入驯化后的光合细菌；
S3.在投入驯化后的光合细菌8-12小时后，再向黑臭水中投放驯化后的复合微生物菌群。
2.根据权利要求1所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：所述光合细菌为红螺菌。
3.根据权利要求1所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：步骤S1中，所述ORP调节剂为过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物，过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐按质量比7：2的比例复合而成。
4.根据权利要求3所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：所述过硫酸氢钾复合盐与氨基多糖螯合盐的复合物的添加量为2-4ppm。
5.根据权利要求1所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于，所述光合细菌制备方法如下：采集黑臭水体或受污染严重水体的底泥和污水加入到无菌容量瓶，加满光合细菌富集培养基，加塞封口置于28-30℃，光照培养箱中进行培养，7天后培养液呈红色，取1mL底部培养液于另一容量瓶，加满富集培养基，连续多次富集直至经固体培养和镜检后，菌落、菌体形态均匀单一为止。再将已筛选的菌种进行发酵，直至pH≥9.5，OD680≥1.0，总菌数≥5亿/mL时，发酵结束。
6.根据权利要求1所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：步骤S2中，所述光合细菌的添加量为3-8ppm。
7.根据权利要求1所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：步骤S3中，所述复合微生物菌群包括乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌。
8.根据权利要求7所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：所述反硝化细菌为假单胞菌。
9.根据权利要求7所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于：所述乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比为1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶0.8-1。
10.根据权利要求7所述用于改善城市黑臭水的方法，其特征在于，所述乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌的制备方法如下；采集黑臭水体或受污染严重水体的底泥1.0g，放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液；用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液；从10-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45-50℃的培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28-30℃培养24-48小时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体；根据细菌的形态特征和生理生化特征对分离的优势菌进行鉴定；从细菌的菌落形态和生理生化实验确定了优势菌种为乳酸菌、酵母菌、放线菌和反硝化细菌，将此4种菌均进行单菌株发酵，然后乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和反硝化细菌按比例混合，菌数数量比1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶0.8-1∶0.8-1，总菌数达到100亿/g。
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