CN116940571A - 苯并异噁唑衍生物及其用途 - Google Patents

苯并异噁唑衍生物及其用途 Download PDF

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CN116940571A
CN116940571A CN202280017295.6A CN202280017295A CN116940571A CN 116940571 A CN116940571 A CN 116940571A CN 202280017295 A CN202280017295 A CN 202280017295A CN 116940571 A CN116940571 A CN 116940571A
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R·E·J·贝克威思
S·博纳齐
A·塞尔尼延科
J·S·科布
N·A·戴尔斯
J·杜赫斯特
A·法扎尔
M·J·赫西
R·贾殷
J·R·克里根
H·A·马利克
J·R·曼宁
G·奥布赖恩
A·W·帕特森
N·M-F·汤姆森
P·Y·廷
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Novartis AG
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Novartis AG
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Abstract

本披露内容涉及具有式(I)的化合物和药物组合物以及它们在降低宽间隔锌指基序(WIZ)表达水平、或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达、以及在治疗遗传性血液病(例如血红蛋白病，例如β‑血红蛋白病)，例如镰状细胞病和β‑地中海贫血中的用途。

Description

苯并异噁唑衍生物及其用途
优先权要求
本申请要求2021年3月15日提交的美国临时申请号63/161141和2021年3月22日提交的美国临时申请号63/164125的优先权权益，将这些临时申请的披露内容通过引用以其全文并入本文。
序列表
本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且将该序列表通过引用以其全文特此并入。所述ASCII副本创建于2021年7月16日，名称为PAT069043-US-PSP02_SL.txt并且大小为4,096字节。
技术领域
本披露内容涉及苯并异噁唑衍生物化合物和药物组合物以及它们在降低宽间隔锌指基序(WIZ)蛋白表达水平、和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)蛋白表达水平、以及在治疗遗传性血液病(血红蛋白病，例如β-血红蛋白病)，例如镰状细胞病和β-地中海贫血中的用途。
背景技术
镰状细胞病(SCD)是一组严重的遗传性血液病，其导致红细胞扭曲成镰刀状。这些细胞可引起血流堵塞，从而导致剧烈疼痛、器官损伤和过早死亡。β地中海贫血是一组遗传性血液病，其由β球蛋白的合成减少或缺乏而导致，从而引起贫血。
已知胎儿血红蛋白(HbF)诱导可改善SCD和β-地中海贫血患者的症状，并在临床上得到了遗传学(球蛋白控制基因座和BCL11A中的单核苷酸多态性)和药理学(羟基脲)验证(Vinjamur，D.S.等人(2018)，The British Journal of Haematology[英国血液病学杂志]，180(5)，630-643)。羟基脲是针对SCD的当前护理标准，并且被认为经由诱导HbF提供益处，但具有遗传毒性，引起剂量限制性嗜中性粒细胞减少症，并且应答率低于40％。临床和临床前靶向的其他机制包括抑制HDAC1/2(Shearstone等人，2016，PLoS One[公共科学图书馆·综合]，11(4)，e0153767)、LSD1(Rivers等人，2018，ExperimentalHematology[实验血液学]，67，60-64)、DNMT1、PDE9a(McArthur等人，2019，Haematologica.[血液学]doi：10.3324/haematol.2018.213462)、HRI激酶(Grevet等人，2018，Science[科学]，361(6399)，285-290)和G9a/GLP(Krivega等人，2015，Blood[血液]，126(5)，665-672；Renneville等人，2015，Blood[血液]，126(16)，1930-1939)。另外，免疫调节剂泊马度胺和来那度胺在人原代红系细胞中离体(Moutouh-de Parseval，L.A.等人(2008)，The Journalof Clinical Investigation[临床调查杂志]，118(1)，248-258)和体内(Meiler，S.E.等人(2011)，Blood[血液]，118(4)，1109-1112)诱导HbF。WIZ被广泛表达，并在将G9a/GLP组蛋白甲基转移酶靶向基因组基因座以调节染色质结构和转录中发挥作用(Bian，Chen等人(2015)，eLife 2015；4：e05606)。
发明内容
本披露内容涉及有效降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达的治疗剂。本披露内容进一步涉及有效降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达的苯并异噁唑化合物、其药学上可接受的盐、其组合物、以及它们在用于以上详述的病症和目的的疗法中的用途。
在第一方面，本披露内容提供了具有式(I”)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N；
Y选自CH2、CRYR2和N-R3；
Z选自CH2、CRYR2和N-R3，
其中Y和Z中的至少一个是N-R3，使得当Y是N-R3时，Z选自CH2和CRYR2，并且当Z是N-R3时，Y选自CH2和CRYR2，
并且其中当Y或Z的CRYR2的R2是氧代时，RY不存在；
Rx选自氢、C1-C6烷基、卤代(例如F、Cl)、C1-C6烷氧基和C3-C8环烷基；
RY选自氢和C1-C6烷基，
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢，C1-C8烷基，C2-C6烯基，-SO2R4，C1-C6卤代烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，C3-C10环烷基，-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中该C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中该C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR7R8和C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且该C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢、C3-C8环烷基和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
在第二方面，本披露内容提供了具有式(I’)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N；
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中该C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中该C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且该C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
在第三方面，本披露内容提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
X选自CH、CF和N；
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中该C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中该C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且该C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
在另一个方面，本披露内容提供了药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物使用。
在另一个方面，本披露内容提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低或调节影响的障碍的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一个方面，本披露内容提供了抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了降解有需要的受试者的WIZ蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了抑制、降低、或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的血红蛋白病、例如β-血红蛋白病的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一个方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的镰状细胞病的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的β-地中海贫血的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗选自镰状细胞病和β-地中海贫血的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防受WIZ蛋白水平降低影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防受WIZ蛋白表达抑制或降低影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防受WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在抑制、降低或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在诱导或促进胎儿血红蛋白中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在重新激活胎儿血红蛋白产生或表达中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在增加胎儿血红蛋白表达中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗血红蛋白病中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗镰状细胞病中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗β-地中海贫血中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白表达增加影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达抑制、降低、或消除影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白诱导或促进影响的疾病或障碍中使用。
在另一个方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白产生或表达重新激活影响的疾病或障碍中使用。
在本文中以及在权利要求中描述了本披露内容的各个其他方面。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术术语和科学术语均具有与本披露内容所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本说明书和权利要求书中，单数形式还包括复数，除非上下文另外明确地指示。虽然类似或等同于本文所述的那些的方法和材料可以用于本披露内容的实践或测试，但以下描述了合适的方法和材料。本文所提到的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均通过引用以其全文并入，用于所有目的。本文引用的参考文献不被视为要求保护的披露内容的现有技术。在冲突的情况下，则以包括定义在内的本说明书为准。此外，这些材料、方法和实例仅仅是说明性的，而并不旨在进行限制。
根据以下的具体实施方式和权利要求书，本文所披露的化合物、组合物和方法的其他特征和优点将显而易见。
附图说明
图1A描绘了来自WIZ KO细胞的差异表达基因与加扰gRNA对照相比的火山图。每个点代表一个基因。HBG1/2基因与靶向WIZ KO的WIZ_6和WIZ_18gRNA差异性地上调。
图1B描绘了条形图，其显示了由于shRNA介导的WIZ在人动员的外周血CD34+源性红系细胞中的缺失而导致的HbF+细胞的频率。
图1C描绘了条形图，其显示了由于CRISPR/Cas9介导的WIZ在人动员的外周血CD34+源性红系细胞中的缺失而导致的HbF+细胞的频率。
具体实施方式
本文披露的化合物有效降低WIZ蛋白表达水平、或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达。不希望受任何理论的束缚，据信所披露的化合物可以通过诱导胎儿血红蛋白HbF表达来治疗血液病，例如遗传性血液病，例如镰状细胞病和β-地中海贫血。
定义
除非另有说明，否则术语“本披露内容的化合物(compounds of the presentdisclosure、compounds of the disclosure或compound of the disclosure)”是指具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物、示例性化合物、其盐(特别是其药学上可接受的盐)、水合物、溶剂化物、前药，以及所有立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)，以及固有形成的部分。
在下文定义的基团(group、radical)或部分中，通常在基团之前指出碳原子数目，例如C1-C8烷基意指具有1至8个碳原子的烷基基团。通常，对于包含两种或更多种亚基团的基团，最后提及的基团为基团附接点，例如“烷基芳基”意指具有式烷基-芳基-的单价基团，而“芳基烷基”意指具有式芳基-烷基-的单价基团。
此外，使用表示单价基团的术语而其中二价基团是适当的，应理解为表示相应的二价基团，反之亦然。除非另有说明，否则假定术语对照的常规定义和常规的稳定原子的原子价，并在全部式和基团中体现。冠词“一个/种(a和an)”是指一个/种或多于一个/种(例如，至少一个/种)该冠词的语法宾语。通过举例，“一个要素”意指一个要素或多于一个要素。
除非另有指示，否则术语“和/或”意指“和”或者“或”。
术语“取代的”意指特定的基团或部分带有一个或多个合适的取代基，其中取代基可以在一个或多个位置处与特定的基团或部分连接。例如，被环烷基取代的芳基可以指示环烷基通过键与芳基的一个原子连接或通过与芳基稠合且共享两个或更多个共同原子。
如本文所用，术语“C1-C8烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，该基团中不存在不饱和、具有一至八个碳原子、并且通过单键附接到分子的其余部分。术语“C1-C3烷基”、“C1-C4烷基”、“C1-C6烷基”应相应地进行解释。C1-C8烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、1-甲基丙基(仲丁基)、2-甲基丙基(异丁基(iso-butyl或i-butyl))、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、正戊基、3-戊基、正己基、正庚基、4-庚基、正辛基、2-异丙基-3-甲基丁基。
如本文所用，术语“C1-C6烷氧基”是指具有式-ORa的基团，其中Ra是如上一般定义的C1-C6烷基基团。C1-C6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基和己氧基。
如本文所用，术语“C1-C6卤代烷基”是指被如本文所定义的一个或多个卤代基团取代的如以上所定义的C1-C6烷基基团。C1-C6卤代烷基的实例包括但不限于三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、1，1-二氟乙基、2，2-二氟乙基、2，2，2-三氟乙基、2-氟丙基、1，1，1-三氟丙基、2，2-二氟丙基、3，3-二氟丙基和1-氟甲基-2-氟乙基、1，3-二溴丙烷-2-基、3-溴-2-氟丙基、1，1，2，2-四氟丙基和1，4，4-三氟丁烷-2-基。
如本文所用，术语“C1-C6卤代烷氧基”意指被一个或多个卤代基团取代的如本文所定义的C1-C6烷氧基基团。C1-C6卤代烷氧基基团的实例包括但不限于三氟甲氧基、二氟甲氧基、氟甲氧基、三氯甲氧基、1，1-二氟乙氧基、2，2-二氟乙氧基、2，2，2-三氟乙氧基、1-氟甲基-2-氟乙氧基、五氟乙氧基、2-氟丙氧基、3，3-二氟丙氧基和3-二溴丙氧基。优选地，C1-C6卤代烷氧基的一个或多个卤代基团是氟。优选地，C1-C6卤代烷氧基选自三氟甲氧基、二氟甲氧基、氟甲氧基、1，1-二氟乙氧基、2，2-二氟乙氧基、2，2，2-三氟乙氧基、1-氟甲基-2-氟乙氧基和五氟乙氧基。
术语“卤素”或“卤代”意指氟、氯、溴或碘。
如本文所用，术语“环烷基”意指含有3-18个碳原子的单环或多环饱和或部分不饱和碳环，其中在环碳之间没有共用的离域π电子(芳香性)。术语“C3-C10环烷基”、“C3-C8环烷基”、“C4-C10环烷基”和“C4-C7环烷基”应相应地进行解释。术语多环涵盖桥接(例如降莰烷)、稠合(例如十氢化萘)和螺环环烷基。优选地，环烷基，例如C3-C10环烷基是3至10个碳原子的单环、桥接或螺环烃基团。
环烷基基团的实例包括但不限于环丙烯基、环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环己基、环庚烷基、环辛烷基、降莰烷基(norboranyl)、降莰烯基(norborenyl)、螺[3.3]庚烷基(例如螺[3.3]庚烷-6-基)、双环[2.2.2]辛烷基、双环[2.2.2]辛烯基、金刚烷基及其衍生物。优选地，环烷基基团是饱和的。
C3-C10环烷基的优选实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、螺[3.3]庚烷基(例如螺[3.3]庚烷-6-基)、双环[1.1.1]戊基、双环[2.1.1]己基、双环[2.1.1]庚基、双环[2.2.2]辛基和金刚烷基。
“杂环基”意指含有碳和至少一个选自氧、氮和硫(O、N和S)的杂原子的饱和的或部分饱和的单环或多环的环，并且其中在环碳或杂原子之间没有共用的离域π电子(芳香性)。术语“4元至10元杂环基”、“4元至6元杂环基”和“5元或6元杂环基”应相应地进行解释。杂环基环结构可以被一个或多个取代基取代。取代基本身可以是任选地取代的。杂环基可以经由碳原子或杂原子键合。术语多环涵盖桥接、稠合和螺环杂环基。
杂环基环的实例包括但不限于氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、噁唑啉基、异噁唑啉基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡喃基、硫代吡喃基、四氢吡喃基、二噁啉基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基S-氧化物、硫代吗啉基S-二氧化物、哌嗪基、氮杂革基、氧杂革基、二氮杂革基、托品烷基、噁唑烷酮基、1，4-二噁烷基、二氢呋喃基、1，3-二氧戊环基、咪唑烷基、二氢异噁唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、氧氮杂革基、二硫戊环基、同托品烷基(homotropanyl)、二氢吡喃基(例如3，6-二氢-2H-吡喃基)、氧杂螺庚烷基(例如2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)、二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基、2-氮杂螺[3.3]庚烷基(例如2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)等。
杂环基的优选实例包括但不限于氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、哌嗪基、二氢异噁唑啉基、四氢吡喃基、吗啉基、二氢吡喃基(例如3，6-二氢-2H-吡喃基)、2-氮杂螺[3.3]庚烷基(例如2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)和氧杂螺庚烷基(例如2-氧杂螺[3.3]庚烷-6-基)。
如本文所用，术语“芳基”如本文所用意指单环、双环或多环碳环芳族环。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(例如萘-1-基、萘-2-基)、蒽基(例如蒽-1-基、蒽-9-基)、菲基(例如菲-1-基、菲-9-基)等。芳基还旨在包括被碳环芳族环取代的单环、双环或多环碳环芳族环。代表性实例是联苯(例如联苯-2-基、联苯-3-基、联苯-4-基)、苯基萘基(例如1-苯基萘-2-基、2-苯基萘-1-基)等。芳基还旨在包括具有至少一个不饱和部分(例如苯并部分)的部分饱和双环或多环碳环。代表性实例是茚满基(例如茚满-1-基、茚满-5-基)、茚基(例如茚-1-基、茚-5-基)、1，2，3，4-四氢萘基(例如1，2，3，4-四氢萘-1-基、1，2，3，4-四氢萘-2-基、1，2，3，4-四氢萘-6-基)、1，2-二氢萘基(例如1，2-二氢萘-1-基、1，2-二氢萘-4-基、1，2-二氢萘-6-基)、芴基(例如芴-1-基、芴-4-基、芴-9-基)等。芳基还旨在包括含有一个或两个桥的部分饱和双环或多环碳环芳族环。代表性实例是苯并降莰基(例如苯并降莰-3-基、苯并降莰-6-基)、1，4-桥亚乙基-1，2，3，4-四氢萘基(例如1，4-桥亚乙基-1，2，3，4-四氢萘-2-基、1，4-桥亚乙基-1，2，3，4-四氢萘-10-基)等。术语“C6-C10芳基”应相应地进行解释。
芳基的优选实例包括但不限于茚基(例如茚-1-基、茚-5-基)、苯基(C6H5)、萘基(C10H7)(例如萘-1-基、萘-2-基)、茚满基(例如茚满-1-基、茚满-5-基)和四氢萘基(例如1，2，3，4-四氢萘基)。
优选地，C6-C10芳基是指单环或双环碳环芳族环。
C6-C10芳基的优选实例包括但不限于苯基和萘基。在一个实施例中，C6-C10芳基是苯基。
如本文所用，术语“杂芳基”如本文所用旨在包括含有选自氧、氮和硫(O、N和S)的一个或多个杂原子的单环杂环芳族环。代表性实例是吡咯基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、三唑基(例如1，2，4-三唑基)、噁二唑基(例如1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基)、噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基)、四唑基、吡喃基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，3，5-三嗪基、噻二嗪基、氮杂革基、吖癸因基(azecinyl)等。
杂芳基还旨在包括含有选自氧、氮和硫(O、N和S)的一个或多个杂原子的双环杂环芳族环。代表性实例是吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并吡喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噁嗪基、苯并三唑基、萘啶基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、喹唑啉基、噌啉基、喹啉基、异喹啉基、噎唑啉基、噁唑并吡啶基、异噁唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、吡唑并三嗪基、三唑并吡啶基、三唑并嘧啶基、咪唑并噻唑基、三唑并吡啶基、三唑并嘧啶基等。
杂芳基还旨在包括含有选自氧、氮和硫(O、N和S)的一个或多个杂原子的多环杂环芳族环。代表性实例是咔唑基、吩噁嗪基、吩嗪基、吖啶基、吩噻嗪基、咔啉基、菲咯啉基等。
杂芳基还旨在包括含有选自氧、氮和硫(O、N和S)的一个或多个杂原子的部分饱和单环、双环或多环杂环基。代表性实例是咪唑啉基、二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并吡喃基、二氢吡啶并噁嗪基、二氢苯并二噁英基(例如2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英基)、苯并间二氧杂环戊烯基(例如苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯)、二氢苯并噁嗪基(例如3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]噁嗪)、四氢吲唑基、四氢苯并咪唑基、四氢咪唑并[4，5-c]吡啶基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、四氢喹喔啉基等。
杂芳基环结构可以被一个或多个取代基取代。取代基本身可以是任选地取代的。杂芳基环可以经由碳原子或杂原子键合。
术语“5-10元杂芳基”应相应地进行解释。
5-10元杂芳基的实例包括但不限于吲哚基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并噁唑酮基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、苯并三唑基、哒嗪基、吡唑并三嗪基、吲唑基、苯并咪唑基、喹啉基、三唑基(例如1，2，4-三唑基)、吡唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、噁二唑基(例如1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基)、咪唑基、吡咯并吡啶基、四氢吲唑基、喹喔啉基、噻二唑基(例如1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基)、吡嗪基、噁唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、苯并噁唑基、二氢吲哚基、异噁唑并吡啶基、二氢吡啶并噁嗪基、四唑基、二氢苯并二噁英基(例如2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英基)、苯并间二氧杂环戊烯基(例如苯并[d][1，3]间二氧杂环戊烯)和二氢苯并噁嗪基(例如3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]噁嗪)。
如本文所用，术语“氧代”是指基团＝O。
“氰基”或“-CN”意指具有通过三键连接到氮原子的碳原子的取代基，例如C≡N。
如本文所用的术语“C2-C6烯基”表示具有2至6个碳原子和至少一个双键的支链或直链烃基团。代表性实例是乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙烯基(例如丙-1-烯基、丙-2-烯基)、2-甲基丙-1-烯基、2-甲基丙-2-烯基、1，1-(二甲基)丙-2-烯基、丁二烯基(例如丁-1，3-二烯基)、丁烯基(例如丁-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基)、2-甲基丁-1-烯基、戊烯基(例如戊-1-烯基、戊-2-烯基)、己烯基(例如己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基)、2-甲基戊-3-烯基等。
如本文所用，术语“桥环”是指在式(I)的杂环烷基部分的两个不相邻碳原子(连接形成C1-C3亚烷基接头)处形成的环，其中所述接头的碳原子之一任选地被选自氮、氧和硫的杂原子替换。在一个优选的实施例中，亚烷基接头仅包含碳原子。
如本文所用，术语“C1-C3亚烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链烃链二价基团，该基团中不存在不饱和，具有一至两个碳原子。
如本文所用，术语“任选地取代的”包括未经取代的或经取代的。
如本文所用，表示与分子的其他部分的附接点。
如本文所用，具有式(X)的化合物或通用方案1至4中任一项的任何中间体及其子式中的术语氮保护基团(PG)是指应保护有关的官能团免于不希望的二次反应(例如酰化、醚化、酯化、氧化、溶剂分解和类似反应)的基团。可以在脱保护条件下将其去除。取决于所使用的保护基团，技术人员通过参考已知程序将知道如何去除保护基团以获得游离胺NH2基团。这些程序包括参考有机化学教科书和文献程序，例如J.F.W.McOmie，″ProtectiveGroups in Organic Chemistry[有机化学中的保护基团]″，Plenum Press[Plenum出版社]，伦敦和纽约1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Greene′s Protective Groups inOrganic Synthesis[格林有机合成中的保护基团]″，第四版，Wiley[威利出版社]，纽约2007；在″ThePeptides[肽]″；第3卷(编辑：E.Gross和J.Meienhofer)，Academic Press[学术出版社]，伦敦和纽约1981；P.J.Kocienski，″Protecting Groups[保护基团]″，第三版，Georg Thieme Verlag[格奥尔格蒂梅出版社]，斯图加特和纽约2005；以及在″Methodender organischen Chemie″(Methods of Organic Chemistry)[有机化学方法]，HoubenWeyl，第4版，第15卷/I，Georg Thieme Verlag[格奥尔格蒂梅出版社]，斯图加特1974。
优选的氮保护基团通常包括：C1-C6烷基(例如叔丁基)，优选地C1-C4烷基，更优选地C1-C2烷基，最优选地C1烷基，其被以下各项单取代、二取代或三取代：三烷基甲硅烷基-C1-C7烷氧基(例如三甲基甲硅烷基乙氧基)、芳基(优选地苯基)或杂环基团(例如苄基、枯基、二苯甲基、吡咯烷基、三苯甲基、吡咯烷基甲基、1-甲基-1，1-二甲基苄基、(苯基)甲基苯)，其中该芳基环或杂环基团未经取代或被一个或多个(例如两个或三个)例如选自由以下组成的组的残基取代：C1-C7烷基、羟基、C1-C7烷氧基(例如对甲氧基苄基(PMB))、C2-C8-烷酰基-氧基、卤素、硝基、氰基、和CF3、芳基-C1-C2-烷氧基羰基(优选地苯基-C1-C2-烷氧基羰基(例如苄氧基羰基(Cbz)、苄氧基甲基(BOM)、新戊酰氧基甲基(POM))、C1-C10-烯氧基羰基、C1-C6烷基羰基(例如乙酰基或新戊酰基)、C6-C10-芳基羰基；C1-C6-烷氧基羰基(例如叔丁氧基羰基(Boc)、甲基羰基、三氯乙氧基羰基(Troc)、新戊酰基(Piv)、烯丙氧基羰基)，C6-C10-芳基C1-C6-烷氧基羰基(例如9-芴基甲基氧基羰基(Fmoc))，烯丙基或肉桂基，磺酰基或次磺酰基，琥珀酰亚胺基基团，甲硅烷基基团(例如三芳基甲硅烷基、三烷基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基(TES)、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)、三甲基甲硅烷基(TMS)、三异丙基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基)。
根据本披露内容，优选的氮保护基团(PG)可以选自包含以下的组：叔丁基氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Cbz)、对甲氧基苄基(PMB)、2，4-二甲氧基苄基(DMB)、甲基氧基羰基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)和苄基。氮保护基团(PG)优选地是酸不稳定保护基团，例如叔丁氧基羰基(Boc)、2，4-二甲氧基苄基(DMB)。
在一些实施例中，本披露内容的化合物对其他蛋白质具有选择性。
如本文所用，与降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达的方法有关的术语“治疗剂”是指导致WIZ基因或WIZ蛋白的表达可检测地降低或WIZ蛋白的活性水平降低(与不存在这种物质情况下的水平相比)的物质。
如本文所用，“调节剂”或“降解剂”意指例如本披露内容的化合物，该化合物有效调节、降低、或减少特异性蛋白(例如WIZ)的水平或降解特异性蛋白(例如WIZ)。可以通过将用本披露内容的化合物处理后剩余的特异性蛋白(例如WIZ)的量与用本披露内容的化合物处理前测量的存在的特异性蛋白(例如WIZ)的初始量或水平进行比较来测量降解的特异性蛋白(例如WIZ)的量。
如本文所用，“选择性调节剂”、“选择性降解剂”、或“选择性化合物”意指例如本披露内容的化合物，该化合物有效调节、降低、或减少特异性蛋白(例如WIZ)的水平或降解特异性蛋白(例如WIZ)至比任何其他蛋白质更大的程度。例如，可以通过将化合物调节、降低、或减少特异性蛋白(例如WIZ)的水平或降解特异性蛋白的能力与该化合物调节、降低、或减少其他蛋白质水平或降解其他蛋白质的能力进行比较，来鉴定“选择性调节剂”、“选择性降解剂”、或“选择性化合物”。在一些实施例中，可以通过测量化合物的EC50或IC50鉴定选择性。降解可以通过介导E3连接酶(例如包含蛋白质Cereblon的E3-连接酶复合物)来实现。
在一个实施例中，降解的特异性蛋白是WIZ蛋白。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约30％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约40％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约50％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约60％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约70％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约75％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约80％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约85％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约90％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约95％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，超过95％的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，至少约99％的WIZ被降解。
在一个实施例中，与初始水平相比，从约30％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约40％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约50％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约60％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约70％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约80％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约90％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约95％至约99％的量的WIZ被降解。在一个实施例中，与初始水平相比，从约90％至约95％的量的WIZ被降解。
如本文所用，术语“诱导胎儿血红蛋白”、“胎儿血红蛋白诱导”、或“增加胎儿血红蛋白表达”是指增加受试者血液中HbF的百分比。在一个实施例中，受试者血液中总HbF的量增加。在一个实施例中，受试者血液中总血红蛋白的量增加。在一个实施例中，与不存在本文披露的化合物的任一情况相比，HbF的量增加了至少约10％、或至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或至少约100％、或超过100％，例如至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍、或至少约6倍、或至少约7倍、或至少约8倍、或至少约9倍、或至少约10倍、或超过10倍。
在一个实施例中，与不存在本文披露的化合物的任一情况相比，血液(例如受试者血液)中总血红蛋白增加了至少约10％、或至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或至少约100％、或超过100％，例如至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍、或至少约6倍、或至少约7倍、或至少约8倍、或至少约9倍、或至少约10倍、或超过10倍。
本披露内容的化合物的术语“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医学应答(例如，酶或蛋白活性的降低或抑制，或改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等)的本披露内容的化合物的量。在一个实施例中，术语“治疗有效量”是指本披露内容的化合物的以下量，当向受试者施用时，该量有效地：(1)至少部分地缓解、预防和/或改善(i)由WIZ介导、或(ii)与WIZ活性相关、或(iii)以WIZ活性(正常或异常)为特征的病症或障碍或疾病；或(2)降低或抑制WIZ活性；或(3)减少或抑制WIZ表达。在另一实施例中，术语“治疗有效量”是指本披露内容的化合物的以下量，当施用至细胞、或组织、或非细胞生物材料、或介质时，该量有效地至少部分地降低或抑制WIZ活性；或至少部分地减少或抑制WIZ表达。
“HbF依赖性疾病或障碍”意指任何直接地或间接地受HbF蛋白水平的调节影响的疾病或障碍。
如本文所用，术语“受试者”是指灵长类动物(例如，人(男性或女性))、狗、兔、豚鼠、猪、大鼠和小鼠。在某些实施例中，受试者是灵长类动物。在又其他实施例中，受试者是人。
如本文所用，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”是指减轻或改善疾病或障碍(即，减慢或阻止疾病或其至少一种临床症状的发展)；或者减轻或改善与该疾病或障碍相关联的至少一种物理参数或生物标志物，包括针对患者可能无法辨别的那些物理参数或生物标志物。
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“预防(prevent、preventing或prevention)”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展。
如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中获益，则这样的受试者是“需要”这种治疗的。
如本文所用，术语“一个/种(a、an)”、“所述/该(the)”以及在本披露内容的上下文中(特别是在权利要求的上下文中)使用的类似术语应被解释为涵盖单数和复数两者，除非本文另外指示或与上下文明显相矛盾。
本文描述了本披露内容的多个列举的实施例。应认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本披露内容的另外实施例。
列举的实施例
实施例1.一种具有式(I”)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N；
Y选自CH2、CRYR2和N-R3；
Z选自CH2、CRYR2和N-R3，
其中Y和Z中的至少一个是N-R3，使得当Y是N-R3时，Z选自CH2和CRYR2，并且当Z是N-R3时，Y选自CH2和CRYR2，
并且其中当Y或Z的CRYR2的R2是氧代时，RY不存在；
Rx选自氢、C1-C6烷基、卤代(例如F、Cl)、C1-C6烷氧基和C3-C8环烷基；
RY选自氢和C1-C6烷基，
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢，C1-C8烷基，C2-C6烯基，-SO2R4，C1-C6卤代烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，C3-C10环烷基，-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR7R8和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢、C3-C8环烷基和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
实施例2.根据实施例1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(I’)，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N；
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
实施例3.根据实施例1和2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(I)，其中：
X选自CH、CF和N；
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R0选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
实施例4.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1选自氢和C1-C3烷基；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N和O的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自氯、氟、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2或3；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
实施例5.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基和卤代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成C1-C2亚烷基桥环；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个另外的O杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2或3，例如n是0、1或2；
m是0、1或2，例如m是1或2；并且
p是0或1。
实施例6.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基和氟；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代，并且所述C1-C6卤代烷基被0-1次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C8环烷基，包含1-2个独立地选自N和O的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至6元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C8环烷基、4元至6元杂环基、5元至6元杂芳基和苯基被0-3次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
n是0、1或2；
m是1或2；并且
p是0或1。
实施例7.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地是C1-C6烷基；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和未经取代的C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C6环烷基，包含1个O杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至6元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C6环烷基、4元至6元杂环基、5元至6元杂芳基和苯基被0-2次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基、C1-C6烷基和苯基，例如R4是C1-C6烷基；
n是0、1或2；
m是1或2；并且
p是1。
实施例8.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C3烷基；
R3选自C1-C6烷基、-SO2R4和未经取代的C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C6烷基被0-2次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C6环烷基、包含1个O杂原子的4元至6元杂环基、包含1-2个N杂原子的6元杂芳基、以及苯基，其中所述C4-C6环烷基、4元至6元杂环基、6元杂芳基和苯基被0-2次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自氯、氟、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷基；
R4是C1-C6烷基；
n是0、1或2；
m是1；并且
p是1。
实施例9.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，所述化合物具有式(Ia”)：
实施例10.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ia’)：
实施例11.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ia)：
实施例12.根据实施例1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ib”)：
实施例13.根据实施例1至10和12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ib’)：
实施例14.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ib)：
实施例15.根据实施例1至9和12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ic”)，其中：
是单键或双键；
X选自CH、C-F和N；
Rx选自氢、C1-C6烷基、卤代(例如F、Cl)、C1-C6烷氧基和C3-C8环烷基；
R2b选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2c选自氢和C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
或者R2b和R2c与它们所附接的碳原子一起形成氧代基团；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；并且
R3是根据前述实施例中任一项所定义的。
实施例16.根据实施例1至10、12、13和15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ic’)，其中：
是单键或双键；
X选自CH、C-F和N；
R2b选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2c选自氢和C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
或者R2b和R2c与它们所附接的碳原子一起形成氧代基团；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；并且
R3是根据前述实施例中任一项所定义的。
实施例17.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ic)，其中：
X选自CH、C-F和N；
R2b选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2c选自氢和C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
或者R2b和R2c与它们所附接的碳原子一起形成氧代基团；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；并且
R3是根据前述实施例中任一项所定义的。
实施例18.根据实施例15至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b选自氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和卤代；
R2c选自氢和C1-C3烷基；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和卤代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成C1-C2亚烷基桥环；
R0选自C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；并且
m是1或2。
实施例19.根据实施例15至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b、R2c、R2d和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；
R2f是氢；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；并且
m是1或2。
实施例20.根据实施例15至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b、R2d和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；
R2c是氢；
R2f是氢；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代，并且所述C1-C6卤代烷基被0-1次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C8环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C8环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-3次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，例如R4是C1-C6烷基，
其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；并且
m是1。
实施例21.根据实施例1、4至9、15和18至20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Id”)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例22.根据实施例1、2、4至10、15、16和18至21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Id’)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例23.根据实施例1至11和15至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Id)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例24.根据实施例1、4至9、12、15和18至21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ie”)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例25.根据实施例1、2、4至10、12、13、15、16、18至22和24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ie’)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例26.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ie)，其中：
R2b、R2c和R2e是根据实施例15至20中任一项所定义的。
实施例27.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是CH。
实施例28.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是N。
实施例29.根据实施例1至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是未经取代的C1-C6烷基并且n是1。
实施例30.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中m是1。
实施例31.根据实施例1至11、15至23和27至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被1次出现的R3a取代。
实施例32.根据实施例1至11、15至23和27至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自甲基、乙基、正丙基、异丙基和-CH2-(CH2)0-1-R3a。
实施例33.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a是C3-C7环烷基，其中所述C3-C7环烷基被0-4次出现的R3b取代，其中每个R3b独立地选自氯、氟、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基。
实施例34.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a是C3-C7环烷基，其中所述C3-C7环烷基被0-2次出现的氟取代。
实施例35.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a选自环丙基、环丁基、环己基和
实施例36.根据实施例15至28和30至35中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；并且R2c是氢。
实施例37.根据实施例15至28和30至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b和R2e各自独立地选自氢和甲基；并且R2c是氢。
实施例38.根据实施例15至28和30至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b是未经取代的C1-C3烷基(例如甲基)；
R2c是氢；并且
R2e选自氢和未经取代的C1-C3烷基。
实施例39.根据实施例15至28和30至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2b是甲基并且R2c、R2d、R2e和R2f都是氢。
实施例40.根据实施例1至14和27至35中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是未经取代的C1-C3烷基并且n是1。
实施例41.根据实施例1、2、4至10、12、13、15、16、18至22、24、25和27至40中任一项所述的化合物，其中是双键。
实施例42.根据前述实施例中任一项所述的化合物，其中是单键。
实施例43.根据实施例1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
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实施例44.根据前述实施例中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐是酸加成盐。
实施例45.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
实施例46.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物使用。
实施例47.一种治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例48.一种治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例49.一种治疗受WIZ蛋白水平调节影响的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例50.一种抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例51.一种降解有需要的受试者的WIZ蛋白的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例52.一种抑制、降低或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例53.一种诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例54.一种重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例55.一种增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例56.一种治疗有需要的受试者的血红蛋白病、例如β-血红蛋白病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例57.一种治疗有需要的受试者的镰状细胞病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例58.一种治疗有需要的受试者的β-地中海贫血的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
实施例59.一种用于降低受试者中WIZ蛋白水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
实施例60.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍中使用。
实施例61.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗选自镰状细胞病和β-地中海贫血的疾病或障碍中使用。
实施例62.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平抑制影响的障碍中使用。
实施例63.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍中使用。
实施例64.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防受WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍中使用。
实施例65.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在抑制、降低或消除有需要的受试者的WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达中使用。
实施例66.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白中使用。
实施例67.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达中使用。
实施例68.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达中使用。
实施例69.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的血红蛋白病中使用。
实施例70.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的镰状细胞病中使用。
实施例71.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的β-地中海贫血中使用。
实施例72.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白表达增加影响的疾病或障碍中使用。
实施例73.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达抑制、降低、或消除影响的疾病或障碍中使用。
实施例74.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白诱导或促进影响的疾病或障碍中使用。
实施例75.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白产生或表达重新激活影响的疾病或障碍中使用。
实施例76.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达中使用。
实施例77.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在降解有需要的受试者的WIZ蛋白中使用。
实施例78.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受WIZ蛋白水平降低、WIZ蛋白表达抑制或WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍的药物中的用途。
实施例79.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受诱导或促进胎儿血红蛋白影响的疾病或障碍的药物中的用途。
实施例80.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受重新激活胎儿血红蛋白产生或表达影响的疾病或障碍的药物中的用途。
实施例81.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受增加胎儿血红蛋白表达影响的疾病或障碍的药物中的用途。
实施例82.根据实施例78至81中任一项所述的化合物的用途，其中所述疾病或障碍选自镰状细胞病和β-地中海贫血。
实施例83.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗受WIZ蛋白水平降低、WIZ蛋白表达抑制或WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍中的用途。
实施例84.根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗受诱导胎儿血红蛋白、重新激活胎儿血红蛋白产生或表达或者增加胎儿血红蛋白表达影响的疾病或障碍中的用途。
实施例85.根据实施例83或84所述的用途，其中所述疾病或障碍选自镰状细胞病和β-地中海贫血。
实施例86.一种药物组合，所述药物组合包含根据实施例1至44中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂。
根据起始材料和程序的选择，化合物可以呈可能的异构体形式或作为其混合物(例如作为纯的光学异构体或作为异构体混合物，如外消旋体和非对映异构体混合物)存在，这取决于不对称中心的数目。本披露内容旨在包括所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、对映异构体富集的混合物、非对映异构体混合物和光学纯的形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或使用常规技术拆分。如果化合物含有二取代或三取代的环烷基，则该一个或多个环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。本披露内容包括经取代的环烷基基团的顺式构型和反式构型以及其混合物。所有互变异构形式也包括在内。特别地，当含有作为环原子的N的杂芳基环是2-吡啶酮时，例如则包括其中羰基被描述为羟基(例如2-羟基吡啶)的互变异构体。
药学上可接受的盐
如本文所用，术语“盐(salt或salts)”是指本披露内容的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别地包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本披露内容的化合物的生物有效性和特性，并且典型地不是生物学上或其他方面不希望的盐。由于氨基和/或羧基或与其类似的基团的存在，本披露内容的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。
可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生出盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生出盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸、甲酸、三氟乙酸等。
可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生出盐的无机碱包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施例中，这些盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以衍生出盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺；经取代的胺(包括天然存在的经取代的胺)；环胺；碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
在另一方面，本披露内容提供了呈以下形式的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸酯、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯脲鎓酸盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸酯、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。
在另一方面，本披露内容提供了呈以下形式的化合物：钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌、铜、异丙胺、苄星、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪或氨丁三醇盐形式。
优选地，具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物的药学上可接受的盐是酸加成盐。
同位素标记的化合物
本文给出的任何式也旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子替换。可以掺入本披露内容的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、硫、氟、氯和碘的同位素，例如，分别是2H、3H、11C、13C、14C、18O、15N、18F、17O、18O、35S、36Cl、123I、124I、125I。本披露内容包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中掺入放射性同位素(例如3H和14C)的那些化合物，或其中掺入非放射性同位素(例如2H和13C)的那些化合物。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。特别地，18F化合物对于PET或SPECT研究可能是特别理想的。同位素标记的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实例和通用方案(例如通用方案1至5)中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替未标记的先前使用的试剂来制备。
在本披露内容的任一方面的一个实施例中，具有式(I”)、式(I)或式(I’)的化合物中的氢以其正常同位素丰度存在。在另一实施例中，氢以同位素氘(D)的形式被富集，并且在本披露内容的一个特定实施例中，具有式(I)或式(I’)的化合物中的二氢尿嘧啶(DHU)或尿嘧啶部分的一个或多个氢以D的形式被富集，例如/>氘代二氢尿嘧啶和尿嘧啶部分可以如Hill，R.K.等人，Journal of Labelled Compounds andRadiopharmaceuticals[标记化合物和放射性药物杂志]，第XXII卷，第2期，第143-148页中所述制备。
此外，用较重的同位素、特别是氘(即，2H或D)进行的取代可以提供来源于更大的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量需求减少或治疗指数改善)的某些治疗优点。应当理解，该上下文中的氘被视为具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物的取代基。这种较重的同位素(特别是氘)的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本披露内容的化合物中的取代基指示氘，这种化合物具有针对每个指定的氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个表示的氘原子上52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。
根据本披露内容的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如，D2O/d6-丙酮、d6-DMSO。
含有能够充当氢键的供体和/或受体的基团的本披露内容的化合物，即具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物，可能能够与合适的共晶形成剂形成共晶。这些共晶可以通过已知的共晶形成程序由具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物来制备。此类程序包括研磨，加热，共升华，共熔化，或在溶液中使具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物与共晶形成剂在结晶条件下接触，并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成剂包括WO 2004/078163中描述的那些。
本文描述的所有方法能够以任何合适的顺序进行，除非本文中另外指示或另外与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(如“例如”)的应用仅旨在更好地说明本披露内容，而不对另外要求保护的本披露内容的范围做出限制。
本披露内容的一种或多种化合物的任何非对称中心(例如碳等)能以外消旋或对映异构体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型。在某些实施例中，例如呈对映异构体的混合物，每个不对称中心以至少10％对映异构体过量、至少20％对映异构体过量、至少30％对映异构体过量、至少40％对映异构体过量、至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量存在。在某些实施例中，例如呈对映异构体富集形式，每个不对称中心以至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量、或至少99％对映异构体过量存在。因此，本披露内容的化合物能以外消旋混合物或对映异构体富集形式或对映异构体形式存在，或呈非对映异构体的混合物。
在本申请的式中，在C-sp3上的术语指示绝对的立体化学，(R)或(S)。在本申请的式中，在C-sp3上的术语/>指示绝对的立体化学，(R)或(S)。在本申请的式中，在C-sp3上的术语/>表示共价键，其中没有定义该键的立体化学。这意指，在C-sp3上的术语包括各自手性中心的(S)构型或(R)构型。此外，也可以存在混合物。因此，本披露内容涵盖立体异构体的混合物，例如对映异构体的混合物(例如外消旋体)，和/或非对映异构体的混合物。
为避免疑义，对于任何R基团(例如式(I”)、(I’)或(I)中的R2)，当描绘具有未明确的立体化学的化合物结构时，如用键表示，这意指不对称中心具有(R)-或(S)-构型，或作为其混合物存在并如此陈述。
因此，如本文所用，本披露内容的化合物可以呈可能的立体异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如，呈基本上纯的几何(顺式或反式)立体异构体、非对映异构体、光学异构体、外消旋体、或其混合物。
任何所得立体异构体混合物可以基于组分的物理化学差异例如通过色谱法和/或分级结晶被分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。
可以通过已知方法将任何所得的本披露内容的化合物或中间体的外消旋体拆分成光学异构体(对映异构体)，例如通过将用光学活性酸或碱得到的其非对映异构体盐进行分离，并释放出光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本披露内容的化合物拆分成它们的光学对映体，例如通过分级结晶用光学活性酸，例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O，O′-对甲苯酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐来拆分。本披露内容的外消旋化合物或外消旋中间体还可以通过手性色谱法(例如，使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC))拆分。
此外，本披露内容的化合物(包括其盐)也能以其水合物的形式获得，或包括用于其结晶的其他溶剂。本披露内容的化合物可以固有地或通过设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本披露内容旨在包括溶剂化形式和非溶剂化形式两者。术语“溶剂化物”是指本披露内容的化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子(例如，水、乙醇等)是制药领域常用的那些，已知它们对接受者是无害的。术语“水合物”是指溶剂分子为水的复合物。本领域技术人员可以使用工具(例如NMR)来鉴定溶剂化物的存在。
本披露内容的化合物(包括其盐、水合物和溶剂化物)可以固有地或通过设计形成多晶型物。
制备方法
本披露内容的化合物能以有机合成领域技术人员熟知的许多方法制备。举例来说，本披露内容的化合物可以使用下文描述的方法、以及合成有机化学领域中已知的合成方法或本领域技术人员所理解的其变体来合成。
通常，具有式(I”)、(I’)和(I)的化合物可以根据下文提供的方案制备。
通用方案1
以上反应方案的起始材料是可商购的，或可以根据本领域技术人员已知的方法或通过本文披露的方法来制备。通常，本披露内容的化合物按照上述反应方案1如下制备：
在极性溶剂(例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF))、合适的配体(例如dppf)和碱(例如碳酸钾(K2CO3))存在下的交叉偶联反应，例如钯(Pd)催化的I-1与具有式I-2A的硼烷基偶联配偶体(例如，通过适当的烯烃与9-BBN的硼氢化而制备)的偶联，可以在步骤1中提供交叉偶联产物I-3(其中X是CH)。在胺或碱性碳酸盐(例如二异丙基乙胺(DIPEA)或碳酸铯(Cs2CO3))和极性溶剂(例如乙腈)存在下，伯酰胺和I-3的氨基基团与羰基等效物(例如1，1’-羰基二咪唑(CDI))的环化形成二氢尿嘧啶部分，可以得到I-4(步骤2)。在室温在酸性条件下去除保护基团(例如Boc)可以提供游离胺I-5(步骤3)。然后，I-5可以通过如下被转化为I-6：在硼氢化物试剂(例如乙酸硼氢化钠)存在下，用适当的醛进行还原胺化(步骤4-i)；可替代地，在胺或碱性碳酸盐和极性溶剂(例如二异丙基乙胺(DIPEA)或碳酸钾(K2CO3)和二甲基甲酰胺(DMF))存在下，通过与适当的烷基卤化物、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯进行烷基化反应(步骤4-ii)；可替代地，当R3与其所附接的氮形成酰胺时，通过化合物与适当的羧酸、活化剂(例如HATU)和碱(例如DIPEA)进行酰胺偶联反应(步骤4-iii)；或可替代地，通过与适当的酰氯或磺酰氯和碱(例如DIPEA或TEA)进行酰化或磺酰化反应(步骤4-iv)，其中R3与其所附接的氮形成酰胺或磺酰胺。
通用方案2
以上反应方案的起始材料是可商购的，或可以根据本领域技术人员已知的方法或通过本文披露的方法来制备。通常，本披露内容的化合物按照上述反应方案2如下制备：
在有机溶剂(例如甲苯)和水、膦配体(例如RuPhos或Xphos)和碱(例如碳酸铯(Cs2CO3))存在下的交叉偶联反应，例如钯(Pd)催化的I-1与具有式II-2B的三氟硼酸盐(钾盐)偶联配偶体的偶联，可以在步骤1中提供交叉偶联产物I-3，其中X是N。按这种方式制备的化合物I-3可以通过通用方案1，步骤2-4的方法转化为具有式I-6的化合物。
通用方案3
在通用方案3中，具有式I-6或I-7的化合物在合适的溶剂(例如甲苯)中(例如在室温)或在N，O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺存在吓经受氧化条件(例如MnO2)，以产生具有式III-1(即当Z＝H时的式(I’))的化合物，随后当Z是氮保护基团(例如DMB)时进行任选的脱保护步骤，以给出具有式III-2(即，式(I’))的化合物。
通用方案4
在通用方案4中，首先用合适的氮保护基团(由Z表示)，例如酸不稳定保护基团(例如DMB)保护具有式I-6的化合物，随后进行克莱森缩合(Claisen condensation)(步骤2)和随后的硒化/氧化/消除顺序(步骤3)，以给出具有式IV-2的化合物。具有式IV-2的化合物经受水解，随后进行铜催化的脱羧，以给出具有式IV-3的化合物。随后的脱保护，例如在酸性条件以及加热下，提供了具有式III-2(即，式(I’))的化合物。
通用方案5
通常，具有式(I”)的化合物可以按照与通用方案1类似的方式制备。对于中间体V-2A、V-3、V-4和V-5，Z和Y中只有一个可以是N-Boc或N-H，如权利要求1所定义。
对于方案1至5，X、Y、Z、R2、R3、n、m和p如本文所定义，特别地根据实施例1至43中任一项所定义。
在另一个实施例中，提供了具有式(X-1)的化合物或其盐，
其中：
X选自CH、CF和N；
Y选自CH2、CRYR2和N-RN；
Z选自CH2、CRYR2和N-RN；
其中Y和Z中的至少一个是N-RN，使得当Y是N-RN时，Z选自CH2和CRYR2，并且当Z是N-RN时，Y选自CH2和CRYR2，
并且其中当Y或Z的CRYR2的R2是氧代时，RY不存在；
RY选自氢和C1-C6烷基；
RN选自氢和氮保护基团(PG)(例如叔丁基氧基羰基(Boc))；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
在一个实施例中，RY是氢。
在一个实施例中，氮保护基团PG是酸不稳定保护基团。
在一个实施例中，氮保护基团PG是Boc保护基团(叔丁基氧基羰基)。
在另一个实施例中，提供了具有式(X)的化合物或其盐，
其中：
X选自CH、CF和N；
RN选自氢和氮保护基团(PG)(例如叔丁基氧基羰基(Boc))；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中该C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
在一个实施例中，氮保护基团PG是酸不稳定保护基团。
在一个实施例中，氮保护基团PG是Boc保护基团(叔丁基氧基羰基)。
在一个实施例中，具有式(X-1)或(X)的化合物的盐选自HCl和TFA盐。
在另一个实施例中，提供了3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺或其盐。
在另一个方面，本披露内容提供了用于制备呈游离形式或呈药学上可接受的盐形式的具有式(I”)、(I’)或(I)的化合物的方法，该方法包括以下步骤：
1)在交叉偶联条件下，使具有式I-1的芳基溴化物与具有式I-2A、V-2A或II-2B的硼烷基偶联配偶体偶联，以给出如本文所定义的具有式I-3)或V-3的化合物。
步骤1的硼烷基偶联配偶体可以任选地通过前体烯烃例如与9-BBN的硼氢化来制备。
用于任何前述方法步骤或下文的交叉偶联反应条件涉及在膦配体(例如Pd(OAc)2和RuPhos或Xphos)以及碱(例如碳酸铯(Cs2CO3))存在下，在合适的溶剂(例如甲苯、水或其混合物)存在下，使用Pd催化剂。
在本文所述的方法的一个实施例中，提供了另外的步骤：
2)具有式I-3或V-3的化合物中的酰胺部分与具有式I-3或V-3的化合物中的酰胺部分进行分子内环化，以给出如本文所定义的具有式1-4或V-4的化合物；
3)脱保护具有式I-4或V-4的化合物(例如在酸性条件下)，以给出如本文所定义的具有式I-5或V-5的化合物；
4-a)使具有式1-5或V-5的化合物在还原胺化条件下反应，以给出如本文所定义的具有式I-6或V-6的化合物；或者
4-b)使具有式式I-5或V-5的化合物在烷基化条件下反应，以给出如本文所定义的具有式I-6或V-6的化合物；或者
4-c)使具有式1-5或V-5的化合物在酰胺偶联条件下反应，以给出如本文所定义的具有式I-6或V-6的化合物；或者
4-d)使具有式I-5或V-5的化合物在酰化或磺酰化条件下反应，以给出如本文所定义的具有式I-6或V-6的化合物。
用于任何前述方法步骤或下文的环化条件涉及在胺或碱性碳酸盐(例如二异丙基乙胺(DIPEA)或碳酸铯(Cs2CO3))和极性溶剂(例如乙腈)存在下，使用有机偶联试剂，例如1，1’-羰基二咪唑(CDI)。
用于任何前述方法步骤或下文的还原胺化条件涉及使用相应的醛、合适的氢化物试剂(例如NaBH(OAc)3)、合适的溶剂(例如DMF)，反应在室温(r.t.)下进行。可任选地将反应加热至高于室温的温度。
用于任何前述方法步骤或下文的烷基化反应条件涉及在合适的碱(例如DIPEA)或碱性碳酸盐(例如K2CO3)、极性溶剂(例如DMF)存在下使用相应的烷基卤化物、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯，反应在合适的温度(例如室温至100℃，例如80℃)、任选地在微波下进行。
用于任何前述方法步骤或下文的酰胺偶联反应条件涉及使用相应的羧酸、活化剂(例如HATU)、合适的碱(例如DIPEA或NMM)、合适的溶剂(例如DMF)，反应在合适的温度(例如室温)下进行合适的时间，例如12小时。
用于任何前述方法步骤或下文的酰化或磺酰化反应条件包括在合适的溶剂(例如DCM)存在下使用相应的酰氯或磺酰氯以及碱(例如DIPEA或TEA)，反应在合适的温度(例如室温)下进行。
在另一个实施例中，提供了根据通用方案1至5中任一项的用于制备呈游离形式或呈药学上可接受的盐形式的具有式(I”)、(I’)或(I)及其子式的化合物的方法。
如本文所定义的具有式(X-1)、(X)和(I)-1的化合物，即3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺，可用于制备本披露内容的化合物，例如，具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物。因此，在一方面，本披露内容涉及具有式(I)-1、(X-1)或(X)的化合物或其盐。在另一方面，本披露内容涉及具有式(I)-1、(X-1)或(X)的化合物或其盐在制造具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物中的用途。本披露内容进一步包括本披露方法的任何变型，其中将可在其任何阶段获得的中间体产物用作起始材料并且进行其余步骤，或其中起始材料在反应条件下原位形成，或其中将反应组分以其盐或光学纯物质的形式使用。
药物组合物
在另一方面，本披露内容提供了药物组合物，该药物组合物包含本文所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，以及一种或多种药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药物组合物”是指呈适于口服或肠胃外施用的形式的本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐、以及至少一种药学上可接受的载体。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指可用于制备或使用药物组合物的物质，并且包括例如合适的稀释剂、溶剂、分散介质、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂、等渗剂、缓冲剂、乳化剂、吸收延迟剂、盐、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、染料以及它们的组合，如本领域技术人员已知的(参见例如，Remington TheScience and Practice of Pharmacy[雷明顿：药物科学与实践]，第22版，PharmaceuticalPress[药物出版社]，2013，第1049至1070页)。
在另一方面，本披露内容提供了药物组合物，该药物组合物包含本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在另一个实施例中，该组合物包含至少两种药学上可接受的载体，例如本文所描述的那些。出于本披露内容的目的，除非另有指定，溶剂化物和水合物通常被认为是组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。可以将药物组合物配制成用于特定的施用途径，例如口服施用、肠胃外施用和直肠施用等。另外，本披露内容的药物组合物能以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或以液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳液)制成。可以对药物组合物进行常规的制药操作，例如灭菌，和/或可以使其含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲液等)。
典型地，药物组合物是包含活性成分以及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：
a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬酯酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮；
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；以及
e)吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
在一个实施例中，这些药物组合物是仅包含活性成分的胶囊。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。
适用于口服施用的组合物包括有效量的呈片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂、溶液或固体分散体的本披露内容的化合物。将旨在用于口服使用的组合物根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且为了提供药学上精致的并且适口的制剂，此类组合物可以含有一种或多种选自由以下组成的组的试剂：甜味剂、调味剂、着色剂以及防腐剂。片剂可以含有与适用于制造片剂的非毒性、药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂未包衣或通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并且从而在较长时间内提供持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的配制品能以硬明胶胶囊的形式呈现，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或者以软明胶胶囊的形式呈现，其中活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
某些可注射组合物是水性等渗溶液或悬浮液，并且栓剂有利地由脂肪乳液或悬浮液制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有辅助剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲液。另外，它们还可以含有其他有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣方法来制备，并且含有约0.1％-75％、或含有约1％-50％的活性成分。
适用于透皮应用的组合物包括有效量的本披露内容的化合物和合适的载体。适用于透皮递送的载体包括帮助通过宿主皮肤的可吸收的药理学上可接受的溶剂。例如，透皮装置呈绷带的形式，该绷带包含衬件、含有化合物并任选地含有载体的贮库、任选地在延长的一段时间内以受控且预定的速率将化合物递送至宿主皮肤的控速屏障、以及将该装置固定至皮肤的器具。
适用于局部应用(例如，应用至皮肤和眼睛)的组合物包括水溶液、悬浮液、软膏剂、霜剂、凝胶或可喷雾配制品，例如用于通过气溶胶等递送。此类局部递送系统将尤其适用于真皮应用，例如用于治疗皮肤癌，例如用于防晒霜、洗剂、喷雾等中的预防用途。因此它尤其适用于局部中的用途，包括本领域中熟知的化妆品、配制品。此类系统可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲液和防腐剂。
如本文所用，局部应用还可以涉及吸入或鼻内应用。它们可以在使用或不使用合适的推进剂的情况下自干燥粉末吸入器以干燥粉末的形式(单独的作为混合物，例如与乳糖的干燥掺混物，或经混合的组分颗粒，例如与磷脂混合的组分颗粒)或自加压容器、泵、喷雾、雾化器或喷雾器以气溶胶喷雾形式便利地递送。
呈游离形式或呈药学上可接受的盐形式的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物表现出有价值的药理学特性，例如WIZ调节特性或WIZ降解特性或HbF诱导特性，例如，如实例中提供的体外测试所示，因此适用于疗法或用于作为研究化学品、例如作为工具化合物使用。
所披露的化合物的另外的特性包括在本文所述的生物测定中具有良好的效力、有利的安全性、以及有利的药代动力学特性。
疾病和障碍
在本披露内容的一个实施例中，提供了本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐，其有效降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达。
本披露内容的化合物可以用于治疗下文所述的一种或多种疾病或障碍。在一个实施例中，该疾病或障碍受WIZ蛋白表达水平降低和/或胎儿血红蛋白蛋白表达水平诱导影响。在另一实施例中，该疾病或障碍是血红蛋白病，例如β血红蛋白病，包括镰状细胞病(SCD)和β-地中海贫血。
使用方法
所有涉及降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达的方法的前述实施例和下文实施例同样适用于：
本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐，用于在降低WIZ蛋白表达水平和/或诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达的方法中使用；
本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗根据本披露内容的前述疾病或障碍中使用；
本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐在治疗根据本披露内容的前述疾病或障碍中的用途；以及
包含本披露内容的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，用于在治疗根据本披露内容的前述疾病或障碍中使用。
考虑到它们作为WIZ调节剂或降解剂的活性，呈游离形式或药学上可接受的盐形式的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、和(Ie)的化合物可用于治疗可通过调节WIZ蛋白表达水平、降低WIZ蛋白表达水平、或诱导胎儿血红蛋白(HbF)来治疗的病症，例如血液障碍，例如遗传性血液病，例如镰状细胞病或μ-地中海贫血。在一方面，本披露内容提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了降解有需要的受试者的WIZ蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了抑制、降低或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的血红蛋白病、例如β-血红蛋白病的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的镰状细胞病的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了治疗有需要的受试者的β-地中海贫血的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在一个实施例中，重型或中度β-地中海贫血是纯合无效突变或复合杂合突变的结果，其导致β-球蛋白缺乏和β-地中海贫血的表型并发症，无论是否是输血依赖型的。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在降解有需要的受试者的WIZ蛋白的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在抑制、降低或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达的方法中使用，该方法包括向该受试者施用具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在治疗有需要的受试者的血红蛋白病、例如β-血红蛋白病的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在治疗有需要的受试者的镰状细胞病的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在另一方面，本披露内容提供了具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，用于在治疗有需要的受试者的β-地中海贫血的方法中使用，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体。
在一个实施例中，重型或中度β-地中海贫血是纯合无效突变或复合杂合突变的结果，其导致β-球蛋白缺乏和β-地中海贫血的表型并发症，无论是否是输血依赖型的。
剂量
对于约50-70kg的受试者，本披露内容的药物组合物或组合可以处于约1-1000mg一种或多种活性成分、或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg、或约1-50mg的活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物、或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种、体重、年龄和个体状况，所治疗的障碍或疾病或其严重性。
使用有利的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或其分离的器官、组织和制品在体外和体内测试中可证明上述剂量特性。本披露内容的化合物能以溶液(例如水溶液)的形式体外应用，以及例如以悬浮液或以水溶液的形式肠内、肠胃外(有利地，静脉内)体内应用。体外剂量可在约10-3摩尔和10-9摩尔浓度之间的范围内。取决于施用途径，体内治疗有效量可以在约0.1-500mg/kg之间、或约1-100mg/kg之间的范围内。
可以通过实例中所述的体外方法对根据本披露内容的化合物的活性进行评估。
组合疗法
在另一方面，本披露内容提供了药物组合，该药物组合包含具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，以及一种或多种另外的治疗剂，用于在疗法中同时、单独或顺序使用。在一个实施例中，该另外的治疗剂是骨髓抑制剂，例如羟基脲。
组合疗法包括向受试者施用化合物与其他生物活性成分(例如但不限于第二种不同的抗肿瘤剂或靶向HbF或另一癌症靶标的治疗剂)和非药物疗法(例如但不限于手术或放射治疗)的另外组合。例如，本申请的化合物可以与其他药物活性化合物(优选地，能够增强本申请的化合物的作用的化合物)组合使用。
本披露内容的化合物可以与一种或多种其他的治疗剂同时施用、或在其之前或之后施用。本披露内容的化合物可以通过相同或不同的施用途径单独施用，或与其他药剂处于同一药物组合物中一起施用。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，该治疗剂当与本披露内容的化合物组合施用至患者时具有治疗活性或增强治疗活性。因此，在一个实施例中，本披露内容提供了组合，该组合包含治疗有效量的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗活性剂。
在一个实施例中，本披露内容提供了产品，该产品包含具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物和至少一种其他治疗剂，作为用于在疗法中同时、单独或顺序使用的组合制剂。在一个实施例中，该疗法是治疗由WIZ调节的疾病或病症。作为组合制剂提供的产品包括组合物，该组合物包含一起处于同一药物组合物中的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物和一种或多种其他治疗剂，或者呈单独形式(例如呈试剂盒形式)的具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物和一种或多种其他治疗剂。
在一个实施例中，本披露内容提供了药物组合物，该药物组合物包含具有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)的化合物和一种或多种其他治疗剂。任选地，该药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。
在一个实施例中，本披露内容提供了试剂盒，该试剂盒包含两种或更多种单独的药物组合物，其中至少一种含有式(I”)、(I’)、(I)、(Ia”)、(Ia’)、(Ia)、(Ib”)、(Ib’)、(Ib)、(Ic”)、(Ic’)、(Ic)、(Id”)、(Id’)、(Id)、(Ie”)、(Ie’)、或(Ie)。在一个实施例中，该试剂盒包含用于单独地保留所述组合物的装置，例如容器、分开的瓶、或分开的箔袋。此类试剂盒的实例是泡罩包装，如典型地用于包装片剂、胶囊等。
本披露内容的试剂盒可用于施用不同剂型(例如，口服及肠胃外)，用于以不同剂量间隔施用单独的组合物、或用于相对在彼此滴定单独的组合物。为有助于依从性，本披露内容的试剂盒典型地包含用于施用的说明书。
在本披露内容的组合疗法中，本披露内容的化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，本披露内容的化合物和其他治疗剂可以在以下情况下放在一起组合成组合疗法：(i)在向医师发布组合产品(例如，在包含本披露内容的化合物和另一种治疗剂的试剂盒的情况下)之前进行；(ii)在施用前不久，由医师自己(或在医师的指导下)进行；(iii)在患者本身中，例如在顺序施用本披露内容的化合物和另一种治疗剂期间进行。
化合物的制备
应当理解，在以下描述中，仅当所描绘式的取代基和/或变量的组合产生稳定化合物时，此类组合才是被允许的。
本领域技术人员还应理解，在下文所述的方法中，中间体化合物的官能团可能需要通过合适的保护基团保护。此类官能团包括羟基、酚、氨基和羧酸。适用于羟基或酚的保护基团包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基、经取代的苄基、甲基等。适用于氨基、脒基和胍基的保护基团包括叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等等。适用于羧酸的保护基团包括烷基酯、芳基酯或芳基烷基酯。
保护基团可以根据标准技术添加或去除，这些标准技术是本领域技术人员熟知的并且如本文所述。保护基团的用途详细地描述于J.F.W.McOmie，″Protective Groups inOrganic Chemistry[有机化学中的保护基团]″，Plenum Press[Plenum出版社]，伦敦和纽约1973；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，″Greene′s Protective Groups in OrganicSynthesis[格林有机合成中的保护基团]″，第四版，Wiley[威利出版社]，纽约2007；P.J.Kocienski，″Protecting Groups[保护基团]″，第三版，Georg Thieme Verlag[格奥尔格蒂梅出版社]，斯图加特和纽约2005；以及在″Methoden der organischen Chemie″(Methods of Organic Chemistry)[有机化学方法]，Houben Weyl，第4版，第15卷/I，GeorgThieme Verlag[格奥尔格蒂梅出版社]，斯图加特1974。
该保护基团还可以是聚合物树脂，例如王氏(Wang)树脂或2-氯三苯甲基-氯树脂。
以下反应方案说明了制备本披露内容的化合物的方法。应当理解，本领域技术人员将能够通过类似的方法或通过本领域技术人员已知的方法来制造这些化合物。通常，起始组分和试剂可以从以下来源获得，例如西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)、兰开斯特合成有限公司(Lancaster Synthesis，Inc.)、五月桥公司(Maybridge)、矩阵科学公司(Matrix Scientific)、TCI公司、美国氟化学公司(Fluorochem USA)、Strem公司、其他商业供应商，或可以根据本领域技术人员已知的来源合成，或根据本披露内容所述进行制备。
分析方法、材料和仪器
除非另有说明，否则使用如从商业供应商处收到的试剂和溶剂。除非另有说明，否则在Bruker Avance光谱仪或Varian Oxford 400MHz光谱仪上获得质子核磁共振(NMR)光谱。光谱以ppm(δ)给出，并且以赫兹报告偶联常数J。将四甲基硅烷(TMS)用作内标。相对于二甲基亚砜(δ2.50)、甲醇(δ3.31)、氯仿(δ7.26)或NMR光谱数据中所示的其他溶剂，以ppm报告化学位移。将少量干燥样品(2-5mg)溶于适当的氘代溶剂(1mL)中。化学名称使用来自CambridgeSoft的ChemBioDraw Ultra v12生成。
使用Waters系统(Acquity UPLC和Micromass ZQ质谱仪)或Agilent-1260Infinity(6120四极杆)收集质谱(ESI-MS)；除非另有说明，否则报告的所有质量均为质子化的母离子的m/z。将样品溶解于合适的溶剂(如MeCN、DMSO、或MeOH)中，并且使用自动样品处理器将其直接注入柱中。在Waters Acquity UPLC系统上进行分析(柱：WatersAcquity UPLC BEH C18 1.7μm，2.1x30mm；流速：1mL/min；55℃(柱温)；溶剂A：水中的0.05％甲酸，溶剂B：MeOH中的0.04％甲酸；梯度：从0至0.10min，95％溶剂A；从0.10至0.50min，95％溶剂A至20％溶剂A；从0.50至0.60min，20％溶剂A至5％溶剂A；从0.6至0.8min，保持在5％溶剂A；从0.80至0.90min，5％溶剂A至95％溶剂A；以及从0.90至1.15min，保持在95％溶剂A)。
缩写：
ACN 乙腈
AcOH 乙酸
AIBN 偶氮二异丁腈
aq. 水性
B2pin2 双(频哪醇)二硼
9-BBN 9-硼杂双环[3.3.1]壬烷
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
Bn 苄基
BnBr 苄基溴
br 宽峰
d 双重峰
dd 双重双重峰
ddd 双重双重双重峰
ddq 双重双重四重峰
ddt 双重双重三重峰
dq 双四重峰
dt 双三重峰
dtbbpy 4，4′-二-叔丁基-2，2′-二吡啶基
dtd 双重三重双重峰
CDI 1，1′-羰基二咪唑
Cs2C03 碳酸铯
DCE 1，2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DHP 二氢吡喃
DIBAL-H 氢化二异丁基铝
DIPEA(DIEA) 二异丙基乙胺
DIPEA N，N-二异丙基乙胺
DMA N，N-二甲基乙酰胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DME 1，2-二甲氧基乙烷
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DMP 戴斯-马丁高碘烷或1，1，1-三(乙酰氧基)-1，1-二氢-1，2-苯碘酰-3-(1H)-酮
DMSO 甲基亚砜
EC50 半数最大有效浓度
ELSD 蒸发光散射检测器
EtOH 乙醇
Et2O 乙醚
Et3N 三乙胺
EtOAc 乙酸乙酯
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HCl 氯化氢
hept 七重峰
HPLC 高效液相色谱法
h或hr 小时
HRMS 高分辨质谱法
g 克
g/min 克/分钟
IC50 半数最大抑制浓度
IPA(iPrOH) 异丙醇
Ir[(dF(CF3)ppy)2dtbbpy]PF6 [4，4’-双(1，1-二甲基乙基)-2，2’-二吡啶-N1，N1’]双[3，5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-N]苯基-C]铱(III)六氟磷酸盐
K2CO3 碳酸钾
KI 碘化钾
KOAc 乙酸钾
K3PO4 磷酸三钾
LCMS 液相色谱质谱法
LDA 二异丙基氨基锂
m 多重峰
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
mg 毫克
MHz 兆赫
min 分钟
mL 毫升
mmol 毫摩尔
M 摩尔
MS 质谱法
NaH 氢化钠
NaHCO3 碳酸氢钠
NaBH(OAc)3 三乙酰氧基硼氢化钠
Na2SO4 硫酸钠
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振
on 过夜
Pd/C 钯碳
PdCl2(dppf)·DCM 与二氯甲烷复合的[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
PMB 对甲氧基苄基
q 四重峰
qd 四重双重峰
quint 五重峰
quintd 五重双重峰
rbf 圆底烧瓶
RockPhos G3 Pd [(2-二-叔丁基膦基-3-甲氧基-6-甲基-2′4′6′-三异丙基-1，1′-联苯)-2-(2-氨基联苯)]甲磺酸钯(II)
rt或r.t. 室温
Rt 保留时间
RuPhos 二环己基(2′，6′-二异丙氧基-[1，1′-联苯]-2-基)磷烷
s 单峰
SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
SnBu3 三丁基锡
t 三重峰
td 三重双重峰
tdd 三重双重双重峰
TBAI 四丁基碘化铵
TEA(NEt3) 三乙胺
TFA 三氟乙酸
TfOH 三氟甲磺酸
THF 四氢呋唠
THP 四氢吡喃
TMP 2，2，6，6-四甲基哌啶
Ts 甲苯磺酰基
tt 三重三重峰
ttd 三重三重双重峰
TLC 薄层色谱法
UPLC 超高效液相色谱法
XPhos Pd G2 氯(2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基-1，1’-联苯)[2-(2’-氨基-1，1’-联苯)]钯(II)
μW或uW 微波
中间体的制备
(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾的制备。
步骤1.(((3R)-4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-鎓-1-基)甲基)三氟硼酸盐
向(溴甲基)三氟硼酸钾(2.00g，9.96mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加叔丁基(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯(2.09g，15.7mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物过滤，并将滤饼用THF(2x10mL)洗涤，并且收集滤饼并干燥，以给出呈白色固体的(((3R)-4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-鎓-1-基)甲基)三氟硼酸盐(4.3g，粗品)。将粗品不经任何其他纯化而用于下一步骤。1H NMR(400MHz，DMSO-d6lδ8.45-8.44(m，1H)，4.31-2.92(m，1H)，3.87-3.82(m，1H)，3.67-3.54(m，1H)，3.27-3.04(m，2H)，2.99-2.77(m，2H)，1.99(brs，2H)，1.83-1.70(m，1H)，1.50-1.37(m，9H)，1.21(br d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤2.(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾。
向(((3R)-4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-鎓-1-基)甲基)三氟硼酸盐(4.3g，粗品)在丙酮(20mL)中的溶液中添加K2CO3(2.10g，15.2mmol)，并将反应混合物在25℃搅拌16h。将反应混合物过滤，并将滤饼用丙酮(2x10mL)洗涤，并且将滤液浓缩，以给出呈白色固体的(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾(1.1g，粗品)。将粗物质不经任何其他纯化而用于下一步骤。1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ4.09(br s，1H)，3.79-3.60(m，1H)，3.51-3.21(m，1H)，2.98(br s，3H)，1.71-1.46(m，2H)，1.39(s，9H)，1.15(d，J＝7.2Hz，3H)。
通过以上方法制备的另外的硼酸盐：
下表中的硼酸盐是通过(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾的方法，在步骤1中使用适当的可商购的起始材料制备的。
(R)-2-(二氟甲基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪盐酸盐的制备。
步骤1.叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯
向叔丁基(R)-3-(羟基甲基)哌嗪-1-甲酸酯(3.0g，13.9mmol)和四氢-2H-吡喃-4-甲醛(2.37g，20.8mmol)在DCM(25mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(5.85mL，41.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌90min。然后在0℃，缓慢添加三乙酰氧基硼氢化钠(5.88g，27.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。完成后，将反应用DCM和水稀释，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以得到叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(3.0g，9.54mmol，69％产率)。LCMS[M+H]+：315.2。
步骤2.叔丁基(R)-3-甲酰基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯
在惰性气氛下在-78℃向草酰氯(1.62mL，19.1mmol)在DCM(15mL)中的搅拌溶液中滴加DMSO(2.71mL，38.2mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌15min，然后在-78℃滴加叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(2.0g，6.4mmol)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌1h，并缓慢添加Et3N(8.93mL，63.6mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌1h并允许其温热至室温。将反应用DCM和水稀释，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到粗制叔丁基(R)-4-(环己基甲基)-3-甲酰基哌嗪-1-甲酸酯(2.4g，粗品)。LCMS[M+H]+：313.2。
步骤3.叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯
在惰性气氛下在0℃向叔丁基(R)-4-(环己基甲基)-3-甲酰基哌嗪-1-甲酸酯(2.4g，7.68mmol)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加DAST(2.0mL，15.4mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2h。完成后，将反应用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用DCM稀释。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以得到叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.53g，1.58mmol，21％产率)。LCMS[M+H]+：334.9。
步骤4.(R)-2-(二氟甲基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪盐酸盐
在0℃向叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.52g，1.55mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加HCl在二噁烷中的溶液(4.0M，6.0mL)。将反应混合物在室温搅拌3h。完成后，将混合物浓缩并将粗化合物用乙醚洗涤，以得到(R)-2-(二氟甲基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪盐酸盐(0.50g，粗品)。LCMS[M+H]+：235.1。
(R)-2-(二氟甲基)-1-甲基哌嗪盐酸盐的制备。
步骤1.叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸酯
向叔丁基(R)-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸酯[参见US 2019/144444，2019，A1](0.35g，1.48mmol)和多聚甲醛(0.089g，2.96mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(0.41mL，2.96mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h。然后在0℃，缓慢添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.627g，2.96mmol)。将反应混合物在室温搅拌14h。完成后，将反应用DCM和水稀释，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以得到叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸酯(0.18g，0.71mmol，52％产率)。
步骤2.(R)-2-(二氟甲基)-1-甲基哌嗪盐酸盐
在0℃向叔丁基(R)-3-(二氟甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸酯(0.18g，0.71mmol)在二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中添加HCl在二噁烷中的溶液(4.0M，1.0mL)。将反应混合物在室温搅拌3h。完成后，将混合物浓缩并将粗化合物用乙醚洗涤，以得到(R)-2-(二氟甲基)-1-甲基哌嗪盐酸盐(0.16g，粗品)。
(R)-1-异丁基-2-(甲氧基甲基)哌嗪盐酸盐的制备。
/>
步骤1.叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-异丁基哌嗪-1-甲酸酯
向溶解于DCM(70mL)中的叔丁基(R)-3-(羟基甲基)哌嗪-1-甲酸酯(6.0g，27.7mmol)和异丁醛(3.0g，41.6mmol)的搅拌溶液中添加Et3N(11.7mL，83.2mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min，然后在0℃分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(11.7g，55.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应用DCM和水稀释，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法(用在己烷中的10％-20％EtOAc洗脱)纯化，以得到叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-异丁基哌嗪-1-甲酸酯(4.2g，15.5mmol，56％产率)。LCMS[M+H]+：273.3。
步骤2.叔丁基(R)-4-异丁基-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸酯
在惰性气氛下向叔丁基(R)-3-(羟基甲基)-4-异丁基哌嗪-1-甲酸酯(0.60g，2.2mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液(冷却至0℃)中添加NaH(0.13g，3.36mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30min，然后在0℃添加MeI(0.47g，3.36mmol)。将反应用EtOAc和水稀释，并且将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过硅胶色谱法(用在己烷中的10％-20％EtOAc洗脱)纯化，以得到叔丁基(R)-4-异丁基-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.486g，1.7mmol，77％)。LCMS[M+H]+：287.1
步骤3.(R)-1-异丁基-2-(甲氧基甲基)哌嗪盐酸盐
向叔丁基(R)-4-异丁基-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.392g，1.37mmol)在DCM(7.0mL)中的搅拌溶液(冷却至0℃)中添加HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，4.0mL)。将反应混合物在室温搅拌3h然后浓缩。将粗化合物用乙醚洗涤，以得到(R)-1-异丁基-2-(甲氧基甲基)哌嗪盐酸盐(0.3g，粗品)。LCMS[M+H]+：187.1。
下表中的硼酸盐是通过(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾的方法，在步骤1中使用适当的可商购的哌嗪制备的。
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/>
实例1.1-(5-((1-(环己基甲基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
步骤1：3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈
在室温将碳酸铯(2.39g，7.32mmol)添加至5-溴苯并[d]异噁唑-3-胺(1.20g，5.63mmol)和丙烯腈(0.378mL，5.75mmol)在MeCN(20mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌1h，然后在80℃加热2h。将反应混合物冷却至室温，并将橙色悬浮液通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。将滤液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的EtOAc洗脱)纯化，以提供呈白色固体的3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈(1.3g，4.9mmol，87％产率)。LCMS[M+H]+：266.1。
步骤2：3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺
在室温将硫酸(4mL，75mmol)滴加至3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈(1.3g，4.9mmol)在TFA(20mL，260mmol)中的溶液中。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倾倒入冰水中并搅拌10min。通过过滤收集形成的沉淀物，并用水洗涤，随后用乙醚洗涤三次。将固体在真空下干燥，以提供呈白色固体的3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(1.17g，4.12mmol，84％产率)。LCMS[M+H]+：284.1。
步骤3：叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌 啶-1-甲酸酯
a)将含有叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯(400mg，2.03mmol)的小瓶用氮气吹扫15min，然后添加9-BBN的溶液(于THF中0.5M，4.07mL，2.03mmol)。给小瓶加盖，并将混合物在80℃加热3.5h然后冷却至室温。
b)将来自部分a的反应混合物通过注射器添加至含有3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(518mg，1.83mmol)、K2CO3(350mg，2.53mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(43mg，0.053mmol)在DMF(10mL)中的混合物的小瓶中。给小瓶加盖，并将反应混合物在60℃加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的0-100％EtOAc洗脱)纯化，以提供叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(572mg，1.42mmol，70％产率)。LCMS[M+H]+：403.1。
步骤4：叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲 基)哌啶-1-甲酸酯(实例1a)
在室温将碳酸铯(607mg，1.86mmol)添加至叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(500mg，1.24mmol)和CDI(504mg，3.11mmol)在乙腈(10mL)中的悬浮液中。然后将反应混合物在加盖的小瓶中在90℃加热24h。将反应冷却至室温并用乙酸乙酯稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的3∶1EtOAc∶EtOH洗脱)纯化，以提供呈灰白色固体的叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(380mg，0.887mmol，71％产率)。LCMS[M+H]+：429.3。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ7.67(s，1H)，7.52(d，J＝8.6Hz，1H)，7.47(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，4.06(d，J＝13.4Hz，2H)，2.90(t，J＝6.6Hz，2H)，2.70(d，J＝7.2Hz，4H)，1.79(d，J＝13.0Hz，1H)，1.65(d，J＝13.3Hz，2H)，1.46(d，J＝1.5Hz，9H)，1.22-1.07(m，2H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
步骤5：1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮 盐酸盐(实例1b)
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，4mL，16mmol)添加至叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯(250mg，0.583mmol)中，并将混合物在室温搅拌2h。然后将反应浓缩，以给出粗制1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(215mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。将样品通过使用ACN/水/0.1％TFA的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的三氟乙酸盐。LCMS[M+H]+：329.3。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ7.70(s，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，7.49(d，J＝8.7Hz，1H)，4.19(t，J＝6.6Hz，2H)，3.38(d，J＝13.2Hz，2H)，3.00-2.87(m，4H)，2.77(d，J＝6.9Hz，2H)，2.05-1.84(m，3H)，1.57-1.35(m，2H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
步骤6.1-(5-((1-(环己基甲基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮(实例1)
在室温将三乙胺(0.011mL，0.077mmol)添加至1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(28mg，0.077mmol)和环己烷甲醛(17.2mg，0.153mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌5min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(48.8mg，0.230mmol)。将反应在室温搅拌60min，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将混合物用DCM萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％TFA的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((1-(环己基甲基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的三氟乙酸盐(16.2mg，0.029mmol，38％产率)。LCMS[M+H]+：425.3。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ7.58(dd，J＝1.8，0.8Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.6，0.7Hz，1H)，7.37(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.07(t，J＝6.6Hz，2H)，3.48-3.38(m，2H)，2.87-2.73(m，6H)，2.65(d，J＝6.7Hz，2H)，1.88-1.75(m，3H)，1.74-1.65(m，5H)，1.64-1.57(m，1H)，1.45(q，J＝13.7Hz，2H)，1.32-1.18(m，2H)，1.13(tdd，J＝12.7，9.4，3.2Hz，1H)，1.00-0.87(m，2H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
下表中的化合物是通过实例1的方法，在步骤6中使用适当的可商购的醛制备的。
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实例13.1-(5-((1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
步骤1.1-(5-((1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将2，2，2-三氟乙基甲磺酸酯(120mg，0.68mmol)添加至1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(150mg，0.45mmol)和Et3N(0.19mL，1.4mmol)在DCM(7mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌36h，然后用DCM和水稀释。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗化合物通过反相HPLC纯化：ATLANTIS(250mm×21.2mm)，5.0μ，A＝在水中的0.1％HCOOH，B＝MeCN，流速：20mL/min。将含有产物的级分合并并冻干，以得到呈灰白色固体的1-(5-((1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(46mg，0.11mmol，24％产率)。LCMS[M+H]+：411.2。HPLC：Rt＝5.70min。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.86(brs，1H)，7.63-7.58(m，2H)，7.47-7.44(m，1H)，4.05(t，J＝6.8Hz，2H)，3.12-3.04(m，2H)，2.87-2.84(m，2H)，2.80-2.77(m，2H)，2.62-2.60(m，2H)，2.22(t，J＝11.2Hz，2H)，1.53-1.45(m，3H)，1.25-1.19(m，2H)。
实例14.1-(5-((1-(异丙基磺酰基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.1-(5-((1-(异丙基磺酰基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将DIPEA(0.048mL，0.27mmol)和丙烷-2-磺酰氯(0.0074mL，0.066mmol)添加至1-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H1)二酮盐酸盐(20mg，0.055mmol)在DCM(1.5mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌2h。添加另外的DIPEA(0.048mL，0.27mmol)和丙烷-2-磺酰氯(0.0074mL，0.066mmol)，并将混合物搅拌45min，然后用DCM稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％TFA的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((1-(异丙基磺酰基)哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的三氟乙酸盐(6.8mg，0.012mmol，22％产率)。LCMS[M+H]+：435.3。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ7.56(s，1H)，7.41(d，J＝8.7Hz，1H)，7.36(d，J＝8.8Hz，1H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，3.65(d，J＝12.7Hz，2H)，3.15(d，J＝6.8Hz，1H)，2.83-2.70(m，4H)，2.61(d，J＝7.0Hz，2H)，1.62(t，J＝17.1Hz，3H)，1.22-1.15(m，8H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例15.1-(5-(((2S，4S)-1-((4，4-二氟环己基)甲基)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮和实例16.1-(5-(((2S，4R)-1-((4，4-二氟环已基)甲基)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.步骤1.叔丁基(S)-2-甲基-4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。
在0℃向在THF(20mL)中的干t-BuOK(1.58g，14.1mmol)中添加甲基三苯基溴化鏻(5.02g，14.07mmol)，然后将混合物在室温搅拌2h。将混合物冷却至0℃并缓慢添加叔丁基(S)-2-甲基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯(2g，9.38mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌14h。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(50mL)淬灭并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层浓缩，以给出粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(用0-10％EtOAc/石油醚洗脱)纯化，以给出呈黄色油状物的叔丁基(S)-2-甲基-4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯(1.7g，8.1mmol，86％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.85(d，J＝1.6Hz，1H)，4.74(d，J＝1.6Hz，1H)，4.51-4.48(m，1H)，4.04-4.01(m，1H)，2.89-2.82(m，1H)，2.42-237(m，1H)，2.17-2.13(m，2H)，2.03-2.00(m，1H)，1.47(s，9H)，1.07(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤2.叔丁基(2S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲 基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯
a)将含有叔丁基(S)-2-甲基-4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯(0.74g，3.5mmol)的小瓶用氮气吹扫15min，然后添加9-BBN的溶液(于THF中0.5M，14.0mL，7.02mmol)。给小瓶加盖，并将混合物在80℃加热3.5h然后冷却至室温。
b)将来自部分a的反应混合物通过注射器添加至含有3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(1.0g，3.5mmol)、K2CO3(726mg，5.26mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2加合物(57mg，0.070mmol)在DMF(5mL)和水(2.5mL)中的混合物的小瓶中。给小瓶加盖，并将反应混合物在90℃加热14h。然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的5％MeOH洗脱)纯化，以提供作为顺式(主要)和反式(次要)异构体的混合物的叔丁基(2S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯(1.0g，2.4mmol，69％产率)。LCMS[M+H]+：417.6。
步骤3.叔丁基(2S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5- 基)甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯
在室温将CDI(1.39g，8.62mmol)和DIPEA(1.5mL，8.62mmol)添加至叔丁基(2S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯(900mg，2.15mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热8h。将反应冷却至室温并浓缩。将残余物首先通过硅胶色谱法(用在庚烷中的70％EtOAc洗脱)纯化，然后通过反相HPLC重新纯化：流动相：A＝在水中的0.1％HCOOH，B＝CH3CN
柱：JUPITER Phenomenex(250mm x 21.2mm)，4.0μ。将含有产物的级分浓缩，以获得叔丁基(2S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯(280mg，0.633，29％产率)。LCMS[M+H]+：443.1。
步骤4.1-(5-(((2S，4S)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮和1-(5-(((2S，4R)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮。
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，3mL)滴加至叔丁基(2S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌啶-1-甲酸酯(0.25g，0.56mmol)的溶液中，并将混合物在室温搅拌4h。然后将反应浓缩，并将残余物通过添加饱和NaHCO3水溶液碱化。将混合物用DCM萃取，并将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到作为顺式(主要)和反式(次要)异构体的混合物的粗产物。将异构体通过手性HPLC分离：柱：CHIRALPAK IH，250MM X 20MM X 5微米，流动相：己烷(A)在EtOH∶MeOH(1∶1)中的0.1％DEA(B)，流速：15ML，等度：75(A)：25(B)，稀释剂：乙醇-8ML，进样体积-0.5ML，运行时间-28min。将收集的级分在减压下浓缩，以得到：
化合物1：1-(5-(((2S，4S)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(70mg，0.20mmol，35％)；LCMS[M+H]+：343.1；HPLC：(6.03min)。
化合物2：1-(5-(((2S，4R)-2-甲基哌啶-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(30mg，0.087mmol，15％)；LCMS[M+H]+：343.2；HPLC：(7.20min)。
步骤5.
将前面步骤中分离的异构体分别按照实例1，步骤6的条件，使用4，4-二氟环己烷-1-甲醛进行处理，以给出各自的产物。
实例15.1-(5-(((2S，4S)-1-((4，4-二氟环己基)甲基)-2-甲基哌啶-4-基)甲基) 苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
LCMS[M+H]+：475.1。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.68(d，J＝1.6Hz，1H)，7.53(d，J＝8.7Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.53(d，J＝12.7Hz，1H)，3.21-3.11(m，1H)，3.05(s，1H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.73(d，J＝7.0Hz，4H)，2.07(s，2H)，1.87(dt，J＝28.3，14.9Hz，8H)，1.55-1.27(m，7H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例16.1-(5-(((2S，4R)-1-((4，4-二氟环己基)甲基)-2-甲基哌啶-4-基)甲基) 苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
LCMS[M+H]+：475.1。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.68(s，1H)，7.54(d，J＝8.5Hz，1H)，7.51-7.44(m，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.74(s，1H)，3.24(s，2H)，3.02(d，J＝5.8Hz，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.76(d，J＝7.2Hz，2H)，2.13(d，J＝32.9Hz，3H)，1.97-1.73(m，8H)，1.63(d，J＝20.5Hz，1H)，1.45-1.28(m，5H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例17.叔丁基3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸酯
通过实例1，步骤3-4的方法从叔丁基3-亚甲基氮杂环丁烷-1-甲酸酯制备。LCMS[M+H]+：401.0。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.69(s，1H)，7.49(q，J＝8.8Hz，2H)，4.16(td，J＝6.7，1.4Hz，2H)，3.97(t，J＝8.3Hz，2H)，3.66(dd，J＝8.6，5.3Hz，2H)，3.02(d，J＝7.8Hz，2H)，2.97-2.82(m，3H)，1.42(s，9H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例18.1-(5-(氮杂环丁烷-3-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例1，步骤5的方法从实例17制备。LCMS[M+H]+：301.2。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.77(s，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，3.70(dd，J＝11.8，3.7Hz，1H)，3.58(dd，J＝11.8，4.5Hz，1H)，3.17(dd，J＝13.1，7.7Hz，1H)，3.03(dd，J＝13.1，5.9Hz，1H)，2.91(dt，J＝16.0，6.4Hz，4H)，2.43(s，1H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例19.1-(5-((1-(环己基甲基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑.3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
/>
通过实例1，步骤6的方法从实例18制备。LCMS[M+H]+：397.3。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.72(s，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，7.48(d，J＝8.9Hz，1H)，4.16(t，J＝7.2Hz，4H)，3.95(t，J＝9.1Hz，2H)，3.22(p，J＝7.8Hz，1H)，3.09(d，J＝7.6Hz，2H)，3.02(d，J＝7.0Hz，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，1.81-1.58(m，6H)，1.25(dt，J＝29.2，12.4Hz，3H)，1.00(q，J＝12.0，11.3Hz，2H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例20.1-(5-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例1，步骤6的方法，使用乙醛从实例18制备。LCMS[M+H]+：315.4。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.72(s，1H)，7.56(d，J＝8.6Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.9，1.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，4.11(t，J＝9.4Hz，2H)，3.93(t，J＝8.6Hz，2H)，3.26-3.15(m，1H)，3.09(d，J＝7.7Hz，2H)，2.93-2.83(m，5H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例21.1-(5-((4-(环己基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌 嗪-1-甲酸酯
在室温向3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(125mg，0.44mmol)在甲苯(4mL)和水(0.4mL)中的悬浮液中添加Cs2CO3(573mg，1.76mmol)、{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾(269mg，0.88mmol)和RuPhos(41mg，0.088mmol)，随后添加Pd(OAc)2(9.9mg，0.044mmol)。将混合物在90℃搅拌3h，然后冷却至室温并在EtOAc和水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的0-100％3∶1EtOAc∶EtOH洗脱)纯化，以给出叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(100mg，0.248mmol，56％产率)。LCMS[M+H]+：404.4。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ7.70(d，J＝1.6Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.37(d，J＝8.6Hz，1H)，3.69-3.59(m，4H)，3.45(s，4H)，2.65(t，J＝6.8Hz，2H)，2.44(t，J＝5.2Hz，4H)，1.47(s，9H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
步骤2.叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲 基)哌嗪-1-甲酸酯
在室温将DIPEA(189mg，1.47mmol)和CDI(317mg，1.96mmol)添加至叔丁基4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(200mg，0.49mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热8h。将反应冷却至室温并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的70％EtOAc洗脱)纯化，以提供叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(120mg，0.279mmol，57％产率)。LCMS[M+H]+：430.2。
步骤3.1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-三酮 盐酸盐
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，2mL，8mmol)添加至叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(120mg，0.279mmol)在DCM(5mL)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌1h。然后将反应浓缩，以给出1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(130mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：330.1。
步骤4.1-(5-((4-(环己基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将三乙胺(164mg，1.63mmol)添加至1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(180mg，0.546mmol)和环己烷甲醛(122mg，1.09mmol)在DCM(10mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌10min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(347mg，1.63mmol)。将反应在室温搅拌2h，然后用DCM和水稀释。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((4-(环己基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的甲酸盐(80mg，0.188mmol，34％产率)。LCMS[M+H]+：426.3。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，7.72(s，1H)，7.66(d，J＝8.6Hz，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，3.56(s，2H)，2.79(t，J＝6.6Hz，2H)，2.36(m，8H)，2.09(d，J＝7.3Hz，2H)，1.65(q，J＝14.2，13.0Hz，5H)，1.45(ddd，J＝11.0，7.5，3.6Hz，1H)，1.16(h，J＝13.0Hz，3H)，0.80(q，J＝11.5Hz，2H)。
下表中的化合物是通过实例21的方法，在步骤4中使用适当的可商购的醛制备的。
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下表中的化合物是通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾[参见ChemMedChem[化学与药物化学]，2016，11，2640-2648]以及在步骤4中使用适当的可商购的醛制备的。
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下表中的化合物是通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾[参见ChemMedChem[化学与药物化学]，2016，11，2640-2648]以及在步骤4中使用适当的可商购的醛制备的。
实例32.(S)-1-(5-((4-异丁基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾[参见J.Med.Chem.[药物化学杂志]2012，55，7796-7816]以及在步骤4中使用异丁醛制备。LCMS[M+H]+：400.0。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.80(s，1H)，7.60(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.52(d，J＝8.7Hz，1H)，4.15(q，J＝6.7Hz，3H)，3.32(d，J＝3.1Hz，1H)，2.86(t，J＝6.6Hz，2H)，2.77-2.61(m，3H)，2.51(s，1H)，2.22(t，J＝10.5Hz，1H)，2.13-1.98(m，3H)，1.91(t，J＝10.4Hz，1H)，1.77(dt，J＝13.7，6.9Hz，1H)，1.18(d，J＝6.2Hz，3H)，0.87(d，J＝6.6Hz，6H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例33.(R)-1-(5-((4-异丁基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾[参见J.Med.Chem.[药物化学杂志]2012，55，7796-7816]以及在步骤4中使用异丁醛制备。LCMS[M+H]+：400.2。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.5，1.7Hz，1H)，7.54(d，J＝8.7Hz，1H)，4.23(d，J＝13.2Hz，1H)，4.15(t，J＝6.6Hz，2H)，3.37(d，J＝13.2Hz，1H)，3.01-2.81(m，4H)，2.75(dd，J＝9.4，3.4Hz，1H)，2.65(d，J＝4.8Hz，1H)，2.41-2.24(m，4H)，2.18(t，J＝10.7Hz，1H)，1.85(dq，J＝13.5，6.7Hz，1H)，1.23(d，J＝6.4Hz，3H)，0.91(d，J＝6.6Hz，6H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例34.(R)-1-(5-((4-异丁基-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用异丁醛制备。LCMS[M+H]+：400.3。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.82(s，1H)，7.63(d，J＝8.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.62(t，J＝4.5Hz，2H)，2.90(q，J＝8.3，6.6Hz，3H)，2.84-2.60(m，2H)，2.48(dd，J＝26.8，15.9Hz，2H)，2.28(d，J＝7.3Hz，2H)，2.17-1.92(m，2H)，1.80(s，1H)，1.02(d，J＝6.2Hz，3H)，0.91(t，J＝6.5Hz，6H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例35.(S)-1-(5-((3-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-乙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用乙醛制备。LCMS[M+H]+：372.3。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.84(d，J＝1.6Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，7.57(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.75(d，J＝13.0Hz，1H)，3.67(d，J＝13.0Hz，1H)，3.18(d，J＝11.9Hz，1H)，2.99(d，J＝12.3Hz，1H)，2.88(t，J＝6.6Hz，4H)，2.73(s，1H)，2.64(s，3H)，2.43(s，1H)，2.19(d，J＝12.0Hz，1H)，1.84(ddd，J＝14.1，7.5，3.5Hz，1H)，1.53(s，1H)，0.92(t，J＝7.4Hz，3H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例36.(S)-1-(5-((3-乙基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-乙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛制备。LCMS[M+H]+：456.3。1HNMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.85(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，4.00-3.88(m，2H)，3.81(d，J＝13.1Hz，1H)，3.71(d，J＝13.1Hz，1H)，3.50-3.35(m，2H)，3.23(d，J＝13.0Hz，1H)，2.87(t，J＝6.6Hz，4H)，2.73(s，2H)，2.49(d，J＝48.5Hz，3H)，1.89(s，1H)，1.81-1.53(m，4H)，1.29(pd，J＝11.9，4.5Hz，3H)，0.88(t，J＝7.4Hz，3H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例37.(S)-1-(5-((3-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-异丙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用乙醛制备。LCMS[M+H]+：386.3。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.84(d，J＝1.6Hz，1H)，7.67-7.46(m，2H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.82(d，J＝13.2Hz，1H)，3.72(d，J＝13.1Hz，1H)，3.34(d，J＝3.1Hz，1H)，3.10(dt，J＝12.4，2.6Hz，2H)，2.98(d，J＝12.3Hz，2H)，2.87(t，J＝6.6Hz，2H)，2.54-2.40(m，1H)，2.39-2.23(m，2H)，1.29(s，3H)，0.97(dd，J＝14.8，7.0Hz，6H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例38.(S)-1-(5-((3-异丙基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-异丙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛制备。LCMS[M+H]+：470.4。1HNMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.87(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.9Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.99-3.81(m，3H)，3.74(d，J＝13.1Hz，1H)，3.51-3.34(m，3H)，3.13(d，J＝9.1Hz，1H)，2.98-2.82(m，4H)，2.77(s，1H)，2.49-2.09(m，4H)，1.91-1.72(m，2H)，1.60(d，J＝13.1Hz，1H)，1.24(ddd，J＝34.5，12.4，8.1Hz，3H)，0.89(dd，J＝18.7，6.7Hz，6H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例39.叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯
通过实例21，步骤1-2的方法，在步骤1中使用((4-(叔丁氧基羰基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：444.0。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.82(s，1H)，7.65(d，J＝8.8Hz，1H)，7.54(d，J＝8.8Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.76(s，2H)，3.52-3.43(m，4H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.73-2.60(m，4H)，1.82(s，2H)，1.46(d，J＝4.4Hz，9H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例40.1-(5-((1，4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤3的方法从实例39制备。LCMS[M+H]+：343.9。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.97(s，1H)，7.70(d，J＝8.8Hz，1H)，7.44(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(m，4H)，3.40(m，2H)，3.36(m，2H)，3.28(m，2H)，3.12(m，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.11(m，2H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例41.1-(5-((4-(环己基甲基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤4的方法从实例40制备。LCMS[M+H]+：440.2。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.85(s，1H)，7.65(dd，J＝9.0，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，3.82(s，2H)，3.21-3.02(m，4H)，2.93-2.66(m，7H)，1.97(s，2H)，1.85-1.61(m，5H)，1.38-1.19(m，4H)，1.06-0.88(m，3H)，由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例42.叔丁基3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯的制备
使用实例1a的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基哌啶-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H-tBu]+：373.1。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.67(s，1H)，7.51(d，J＝8.7Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.16(t，J＝6.6Hz，2H)，3.84(br s，2H)，2.88(m，3H)，2.66(m，3H)，1.85-1.62(m，3H)，1.38(m，11H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例43.1-(5-(哌啶-3-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1b的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基哌啶-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：329.9。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.42(s，1H)，7.70(s，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，7.48(d，J＝8.6Hz，1H)，4.16(d，J＝5.7Hz，2H)，3.34(d，J＝4.5Hz，1H)，3.25(dd，J＝12.6，3.7Hz，1H)，2.96-2.63(m，6H)，2.13-1.98(m，1H)，1.89(t，J＝17.1Hz，2H)，1.69(tdd，J＝14.1，8.8，3.9Hz，1H)，1.39-1.24(m，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例44.1-(5-((1-(环己基甲基)哌啶-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基哌啶-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：425.3。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.38(s，1H)，7.70(s，1H)，7.56(d，J＝8.6Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.51(d，J＝12.6Hz，1H)，3.42-3.34(m，1H)，2.97-2.62(m，8H)，2.16(s，1H)，1.99-1.63(m，9H)，1.38-1.14(m，4H)，1.00(q，J＝12.1Hz，2H)。
实例45.1-(5-((1-甲基哌啶-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基哌啶-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯，并在步骤6中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：342.9。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.43(s，1H)，7.66(d，J＝1.7Hz，1H)，7.52(d，J＝8.7Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.8，1.8Hz，1H)，4.14(t，J＝6.7Hz，2H)，3.39(d，J＝12.2Hz，1H)，3.32(t，J＝2.2Hz，1H)，2.90-2.60(m，9H)，2.09(ddt，J＝15.7，7.9，3.9Hz，1H)，1.91(dq，J＝13.6，3.4Hz，1H)，1.81(d，J＝13.4Hz，1H)，1.77-1.63(m，1H)，1.22(qd，J＝12.6，3.8Hz，1H)。
实例46.1-(5-((1-异丁基哌啶-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基哌啶-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯，并在步骤6中使用异丁醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：384.9。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.45(s，1H)，7.70(s，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，7.49(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.52(d，J＝12.4Hz，1H)，3.39(d，J＝11.9Hz，1H)，2.96-2.63(m，8H)，2.24-2.08(m，2H)，1.86(td，J＝30.3，14.1Hz，3H)，1.29(t，J＝12.9Hz，1H)，1.00(dd，J＝6.7，3.7Hz，6H)。
实例47.叔丁基3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸酯的制备
使用实例1a的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基吡咯烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：415.3。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.52(s，1H)，7.68(s，1H)，7.54-7.44(m，2H)，4.14(t，J＝6.6Hz，2H)，3.41(dt，J＝16.8，10.0Hz，2H)，3.24(d，J＝8.1Hz，1H)，2.97(d，J＝13.0Hz，1H)，2.86(t，J＝6.6Hz，2H)，2.81(d，J＝6.8Hz，2H)，2.48(s，1H)，1.93(s，1H)，1.70-1.56(m，1H)，1.42(s，9H)。
实例48.1-(5-(吡咯烷-3-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1b的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基吡咯烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：314.8。1H NMR(300MHz，cd3od)δ8.53(s，1H)，7.74(s，1H)，7.59-7.47(m，2H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，2.99-2.83(m，6H)，2.75-2.61(m，2H)，2.21-2.04(m，2H)，1.75(dd，J＝13.1，8.6Hz，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例49.1-(5-((1-(环己基甲基)吡咯烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基吡咯烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：411.3。1H NMR(300MHz，cd3od)δ7.74(s，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，7.53-7.48(m，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.77-3.58(m，2H)，3.22(s，1H)，3.04(dd，J＝6.8，4.1Hz，2H)，2.98-2.80(m，5H)，2.79-2.63(m，1H)，2.26-2.07(m，1H)，1.95(d，J＝15.9Hz，1H)，1.78(d，J＝12.0Hz，6H)，1.27(dt，J＝23.6，12.4Hz，3H)，1.02(d，J＝12.3Hz，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例50.1-(5-((1-甲基吡咯烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基3-亚甲基吡咯烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯，并在步骤6中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：329.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.74(s，1H)，7.56(d，J＝8.6Hz，1H)，7.54-7.49(m，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.48(s，4H)，3.10(d，J＝23.9Hz，1H)，2.95-2.85(m，6H)，2.81(d，J＝7.7Hz，1H)，2.26-2.14(m，1H)，1.92-1.81(m，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例51.叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)氮杂环庚烷-1-甲酸酯的制备
使用实例1a的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基4-亚甲基氮杂环庚烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：443.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.64(s，1H)，7.49(d，J＝8.9Hz，1H)，7.44(d，J＝8.7Hz，1H)，4.15(t，J＝6.6Hz，2H)，3.53(dp，J＝14.9，4.7Hz，1H)，3.45-3.33(m，2H)，3.15(qd，J＝10.3，5.1Hz，1H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.67(dt，J＝5.1，2.5Hz，2H)，1.78(dt，J＝18.0，7.6Hz，4H)，1.59-1.48(m，1H)，1.44(dd，J＝7.8，2.0Hz，9H)，1.34(ddt，J＝18.7，13.8，6.9Hz，1H)，1.27-1.13(m，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例52.1-(5-(氮杂环庚烷-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1b的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基4-亚甲基氮杂环庚烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：343.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.50(s，1H)，7.67(s，1H)，7.53(d，J＝8.6Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.6，1.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.30-3.22(m，2H)，3.11(dddd，J＝29.3，13.5，10.3，2.4Hz，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.73(h，J＝6.8Hz，2H)，1.97(dt，J＝16.5，5.5Hz，4H)，1.85-1.71(m，1H)，1.66-1.52(m，1H)，1.35(dt，J＝25.0，12.2Hz，2H)。
实例53.1-(5-((1-甲基氮杂环庚烷-4-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1的方法制备，其中在步骤3a中使用叔丁基4-亚甲基氮杂环庚烷-1-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯，并在步骤6中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：357.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.39(s，1H)，7.66(d，J＝6.2Hz，1H)，7.49(dt，J＝18.7，5.8Hz，2H)，4.15(p，J＝6.6Hz，2H)，3.40-3.12(m，5H)，2.86(dt，J＝10.1，4.8Hz，4H)，2.71(dq，J＝18.6，10.0Hz，2H)，1.97(d，J＝44.1Hz，5H)，1.69(q，J＝12.1Hz，1H)，1.41(q，J＝10.0Hz，1H)。
实例54和55.叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯的制备
使用实例1a的方法，从3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺制备，其中在步骤3a中使用叔丁基(1R，5S)-3-亚甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯代替叔丁基4-亚甲基哌啶-1-甲酸酯。将异构体通过手性HPLC分离：柱：LUX CELLULOSE-4，250MM X21.2MM X 5微米，流动相：己烷(A)在EtOH：MeOH(1：1)中的0.1％HCOOH(B)，流速：15ML，等度：60(A)：40(B)。将收集的级分在减压下浓缩，以得到：
实例54(主要产物)：叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯(20mg，0.044mmol)；LCMS[M+H]+：455.2；手性HPLC：(12.5min)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.55(s，1H)，7.64(dd，J＝1.7，0.8Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.16(dd，J＝8.4，5.0Hz，4H)，2.89(t，J＝6.7Hz，2H)，2.61(d，J＝7.0Hz，2H)，2.18(dp，J＝12.1，6.1Hz，1H)，1.89(s，2H)，1.66(d，J＝7.6Hz，2H)，1.54(d，J＝13.1Hz，2H)，1.45(s，11H)。
实例55(次要产物)：叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯(10mg，0.022mmol)；LCMS[M+H-Boc]+：355.2；手性HPLC：(14.1min)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.66(d，J＝1.7Hz，1H)，7.50(d，J＝8.7Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.16(dd，J＝9.9，3.5Hz，4H)，2.88(t，J＝6.8Hz，4H)，2.15-1.80(m，5H)，1.44(s，9H)，1.34(ddd，J＝19.1，10.5，3.0Hz，4H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例56.1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1b，步骤5的方法从实例5制备，其中使用叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯代替叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：355.0。1H NMR(300MHz，cd3od)δ7.68(s，1H)，7.53(d，J＝8.7Hz，1H)，7.50-7.42(m，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.99(d，J＝5.1Hz，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.71(d，J＝7.0Hz，2H)，2.27-2.14(m，1H)，2.11-1.89(m，4H)，1.82-1.69(m，2H)，1.58(t，J＝13.2Hz，2H)，1.31(d，J＝12.1Hz，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例57.1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1b，步骤5的方法从实例55制备，其中使用叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯代替叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：355.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.72(d，J＝1.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.99(s，2H)，2.99(d，J＝7.9Hz，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.29-2.12(m，7H)，1.76(d，J＝14.4Hz，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例58.1-(5-(((1R，5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1，步骤6的方法从实例56制备，其中使用1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮代替叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯，并使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：369.2。1H NMR(300MHz，cd3od)δ8.57(s，1H)，7.68(s，1H)，7.53(d，J＝8.6Hz，1H)，7.50-7.43(m，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.80(s，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.71(d，J＝6.2Hz，5H)，2.23(s，3H)，1.95(d，J＝8.6Hz，2H)，1.69(dd，J＝28.5，15.9Hz，4H)。
实例59.1-(5-(((1R，5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例1，步骤6的方法从实例57制备，其中使用1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮代替叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌啶-1-甲酸酯，并使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：369.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.54(s，1H)，7.74-7.69(m，1H)，7.54(dd，J＝8.7，0.8Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.16(t，J＝6.7Hz，2H)，3.75(s，2H)，3.00(d，J＝7.1Hz，2H)，2.87(t，J＝6.7Hz，2H)，2.72(s，3H)，2.41-2.32(m，2H)，2.28-2.15(m，5H)，1.80(d，J＝14.0Hz，2H)。
实例60.1-(5-(((1R，5S)-8-(甲基磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例14的方法从实例56制备，其中使用1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮代替3-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)哌啶-2，6-二酮，并使用甲磺酰氯代替丙烷-2-磺酰氯。LCMS[M+H]+：433.2。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.88(s，1H)，7.66-7.56(m，2H)，7.49(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，4.11-4.01(m，4H)，2.89(s，3H)，2.79(t，J＝6.6Hz，2H)，2.60(d，J＝7.0Hz，2H)，2.04-1.86(m，3H)，1.63-1.49(m，4H)，1.37(dd，J＝12.9，10.4Hz，2H)。
实例61.1-(5-(((1R，5S)-8-(甲基磺酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
使用实例14的方法从实例57制备，其中使用1-(5-(((1R，5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮代替3-(5-(哌啶-4-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)哌啶-2，6-二酮，并使用甲磺酰氯代替丙烷-2-磺酰氯。LCMS[M+H]+：433.1。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.87(s，1H)，7.66-7.62(m，2H)，7.51(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，4.07(dd，J＝12.6，6.0Hz，4H)，2.91(s，3H)，2.80(q，J＝7.0Hz，4H)，2.09-1.94(m，5H)，1.85(t，J＝7.1Hz，2H)，1.42(d，J＝12.4Hz，2H)。
实例62.1-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
通过实例21的方法制备，其中在步骤4中使用乙醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：358.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.53(s，1H)，7.84(d，J＝1.6Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.57(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.73(s，2H)，3.08(s，4H)，2.99(q，J＝7.3Hz，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.71(s，4H)，1.27(t，J＝7.3Hz，3H)。
实例63.1-(5-((4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
通过实例21，步骤4的方法从实例40制备，其中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：357.9。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.10(d，J＝1.8Hz，1H)，7.76(dd，J＝8.8，1.8Hz，1H)，7.73-7.68(m，1H)，4.48(s，2H)，4.19(dd，J＝7.7，5.9Hz，2H)，3.69(d，J＝16.2Hz，4H)，3.51(s，2H)，3.44(d，J＝5.5Hz，2H)，2.96(d，J＝1.8Hz，3H)，2.88(td，J＝6.7，1.7Hz，2H)，2.28(s，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例64.(R)-1-(5-((4-乙酰基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.叔丁基(R)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲 基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯
在室温向3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(500mg，1.75mmol)在二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的悬浮液中添加Cs2CO3(1.14g，3.5mmol)、(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾[参见J.Med.Chem.[药物化学杂志]2012，55，7796-7816](1.12g，3.5mmol)和RuPhos(81mg，0.18mmol)，随后添加Pd(OAc)2(39mg，0.18mmol)。将混合物在90℃搅拌3h，然后冷却至室温并在EtOAc和水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的100％EtOAc洗脱)纯化，以给出叔丁基(R)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(400mg，0.95mmol，54％产率)。LCMS[M+H]+：418.0。
步骤2.叔丁基(R)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5- 基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯
在室温将DIPEA(495mg，3.83mmol)和CDI(621mg，3.83mmol)添加至叔丁基(R)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(400mg，0.95mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热8h。将反应冷却至室温并且用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以给出粗制叔丁基(R)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(300mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：444.1。
步骤3.(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮盐酸盐
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，5mL)添加至叔丁基(R)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(300mg，0.67mmol)在DCM(5mL)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌2h。然后将反应浓缩，以给出(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(130mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：344.2。
步骤4.(R)-1-(5-((4-乙酰基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在-20℃将三乙胺(115mg，1.05mmol)添加至(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(120mg，0.349mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。添加乙酰氯(40mg，0.52mmol)并将混合物在-20℃搅拌20min。将反应用水淬灭然后用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到(R)-1-(5-((4-乙酰基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(20mg，0.051mmol，15％产率)。LCMS[M+H]+：386.21H NMR(400MHz，MeOD)δ7.85(s，1H)，7.65(dt，J＝8.7，1.3Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.16(td，J＝6.1，3.2Hz，3H)，4.07-3.87(m，1H)，3.76-3.60(m，1H)，3.46(dd，J＝13.4，4.5Hz，1H)，3.17(td，J＝13.2，9.1Hz，1H)，2.97(dd，J＝13.2，8.5Hz，1H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.82-2.70(m，1H)，2.60(dtd，J＝30.9，6.0，3.0Hz，1H)，2.31-2.13(m，1H)，2.08(d，J＝8.4Hz，3H)，1.22(dd，J＝10.1，6.2Hz，3H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例65.(R)-1-(5-((2，4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤4的方法制备，其中使用(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：357.9。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.41(s，1H)，7.82(s，1H)，7.65-7.58(m，1H)，7.55(d，J＝8.7Hz，1H)，4.26(d，J＝13.3Hz，1H)，4.15(t，J＝6.6Hz，2H)，3.35(d，J＝20.3Hz，2H)，3.19(dt，J＝30.7，14.4Hz，3H)，2.92-2.75(m，4H)，2.71(s，3H)，2.38(d，J＝12.9Hz，1H)，1.27(d，J＝5.7Hz，3H)。
实例66.(R)-1-(5-((4-乙基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤4的方法制备，其中使用(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用乙醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：372.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.51(s，1H)，7.84(d，J＝1.7Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.26(d，J＝13.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.20-3.06(m，2H)，2.92-2.73(m，5H)，2.70-2.26(m，5H)，1.27(d，J＝6.2Hz，3H)，1.21(t，J＝7.3Hz，3H)。
实例67.(R)-1-(5-((2-甲基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤4的方法制备，其中使用(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：442.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.31(s，1H)，7.91(d，J＝1.7Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.62(d，J＝8.7Hz，1H)，4.42(d，J＝13.4Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，3.97-3.88(m，2H)，3.63(d，J＝13.4Hz，1H)，3.42(tt，J＝11.9，2.1Hz，2H)，3.24-3.11(m，2H)，2.98(d，J＝11.5Hz，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.73-2.52(m，4H)，1.96(ddd，J＝13.0，6.6，2.8Hz，1H)，1.68(dt，J＝12.3，2.8Hz，2H)，1.37(d，J＝6.3Hz，3H)，1.29(tt，J＝12.0，6.0Hz，3H)。
实例68.(R)1-(5-((2-甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d] 异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤4的方法制备，其中使用(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用氧杂环丁烷-3-甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：414.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.86(d，J＝1.7Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.79(ddt，J＝7.7，6.1，3.9Hz，3H)，4.41(td，J＝6.2，3.9Hz，2H)，4.31(d，J＝13.3Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.52-3.44(m，1H)，2.93-2.67(m，8H)，2.38(q，J＝9.3Hz，2H)，2.28-2.19(m，1H)，1.28(t，J＝5.1Hz，3H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例69.(R)-1-(5-((4-异丙基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将碳酸钾(120mg，0.872mmol)和异丙基碘(75mg，0.44mmol)添加至(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(150mg，0.436mmol)在MeCN(5mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌2h。将反应用水淬灭然后用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到(R)-1-(5-((4-异丙基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(20mg，0.051mmol，12％产率)。LCMS[M+H]+：386.21H NMR(400MHz，MeOD)δ7.84(d，J＝1.7Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.29(d，J＝13.3Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.25(d，J＝20.3Hz，4H)，2.97-2.85(m，4H)，2.75(s，2H)，2.38(t，J＝12.3Hz，1H)，1.30(dt，J＝6.7，2.0Hz，9H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例70.(R)-1-(5-((2-甲基-4-(2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基) 苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例69的方法制备，其中使用2-溴-1-(哌啶-1-基)乙烷-1-酮代替异丙基碘。LCMS[M+H]+：469.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.29(s，1H)，7.92(d，J＝1.6Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.62(d，J＝8.7Hz，1H)，4.42(d，J＝13.3Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，3.66(d，J＝24.7Hz，3H)，3.54(t，J＝5.6Hz，2H)，3.44(t，J＝5.5Hz，2H)，3.16-2.94(m，4H)，2.89(t，J＝6.6Hz，2H)，2.64(dt，J＝32.3，10.4Hz，3H)，1.72-1.51(m，6H)，1.36(d，J＝6.3Hz，3H)。
实例71.(R)-1-(5-((2-甲基-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑- 3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64的方法制备，其中在步骤4中使用甲磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：422.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.83(d，J＝1.6Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.9Hz，1H)，4.20-4.10(m，3H)，3.44-3.35(m，3H)，2.98(ddd，J＝11.8，9.2，3.0Hz，1H)，2.89(t，J＝6.7Hz，2H)，2.84-2.77(m，5H)，2.72-2.59(m，1H)，2.30(ddd，J＝12.1，9.2，3.2Hz，1H)，1.23(d，J＝6.2Hz，3H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例72.(R)-1-(5-((4-(乙基磺酰基)-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑- 3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64的方法制备，其中在步骤4中使用乙磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：436.2。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.89(s，1H)，7.75(d，J＝1.6Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，4.10-3.97(m，3H)，3.37(s，1H)，3.24(d，J＝12.2Hz，1H)，3.08-3.00(m，2H)，2.95(t，J＝8.9Hz，1H)，2.83-2.75(m，3H)，2.22-2.13(m，1H)，1.20(q，J＝8.0Hz，6H)，1.12(d，J＝6.2Hz，3H)。
实例73.(R)-1-(5-((4-(异丙基磺酰基)-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
64，其中在步骤4中使用丙烷-2-磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：450.2。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.88(s，1H)，7.77-7.73(m，1H)，7.67(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，4.10-3.99(m，3H)，3.39(d，J＝11.4Hz，4H)，3.04(t，J＝9.3Hz，1H)，2.87(dd，J＝12.1，7.9Hz，1H)，2.80(t，J＝6.6Hz，2H)，2.64-2.58(m，1H)，2.19-2.10(m，1H)，2.00(q，J＝6.9Hz，1H)，1.20(dd，J＝6.8，2.0Hz，6H)，1.11(d，J＝6.3Hz，3H)。
实例74.(R)-1-(5-((2-甲基-4-(吡咯烷-1-基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d] 异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64的方法制备，其中在步骤4中使用吡咯烷-1-磺酰氯代替乙酰氯并在室温进行步骤4。LCMS[M+H]+：477.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.34(s，1H)，7.83(t，J＝1.1Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.21-4.07(m，3H)，3.44-3.36(m，2H)，3.28(d，J＝6.7Hz，5H)，3.01(ddd，J＝12.1，9.4，3.0Hz，1H)，2.89(t，J＝6.7Hz，2H)，2.86-2.81(m，1H)，2.77(ddd，J＝11.8，4.8，3.0Hz，1H)，2.63(tt，J＝9.3，6.2Hz，1H)，2.27(ddd，J＝12.3，9.4，3.2Hz，1H)，1.94-1.87(m，4H)，1.22(d，J＝6.2Hz，3H)。
实例75.(R)-1-(5-((2-甲基-4-(吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64的方法制备，其中在步骤4中使用吡咯烷-1-碳酰氯代替乙酰氯并在室温进行步骤4。LCMS[M+H]+：441.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.32(s，1H)，7.88(d，J＝1.6Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.29(d，J＝13.3Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.63-3.46(m，3H)，3.36(q，J＝5.2Hz，4H)，3.06(ddd，J＝13.2，10.1，2.9Hz，1H)，2.96-2.85(m，3H)，2.82(ddd，J＝12.0，4.2，2.9Hz，1H)，2.71(ddd，J＝9.2，6.2，3.1Hz，1H)，2.36(ddd，J＝11.9，10.1，3.2Hz，1H)，1.84(td，J＝7.9，4.5Hz，4H)，1.28(d，J＝6.2Hz，3H)。
实例76.(R)-N-环戊基-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑- 5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酰胺
通过实例64的方法制备，其中在步骤4中使用异氰酸环戊烷代替乙酰氯并在室温进行步骤4。LCMS[M+H]+：455.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.30(s，1H)，7.87(d，J＝1.6Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.25(d，J＝13.3Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.99(p，J＝7.3Hz，1H)，3.76(ddd，J＝13.2，3.3，1.7Hz，1H)，3.72-3.62(m，1H)，3.49(d，J＝13.3Hz，1H)，3.07(ddd，J＝13.2，10.0，3.1Hz，1H)，2.90(dt，J＝13.4，7.7Hz，3H)，2.77(ddd，J＝11.9，4.3，3.1Hz，1H)，2.61(ddd，J＝9.2，6.2，3.2Hz，1H)，2.26(ddd，J＝11.9，10.0，3.3Hz，1H)，1.97-1.86(m，2H)，1.76-1.65(m，2H)，1.62-1.52(m，2H)，1.42(dddd，J＝14.1，8.8，7.5，4.2Hz，2H)，1.25(d，J＝6.3Hz，3H)。由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例77.(R)-1-(5-((4-环丁基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
向(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(80mg，0.21mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加环丁酮(45mg，0.63mmol)、二氯化二丁基锡(128mg，0.42mmol)、和三乙胺(0.1mL，0.63mmol)。将混合物在80℃搅拌3h然后冷却至0℃，并且添加苯基硅烷(68mg，0.63mmol)。将反应在加盖的小瓶中在80℃搅拌3h。将反应冷却至室温，用DCM稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并、冷冻并冻干，以得到呈白色固体的(R)-1-(5-((4-环丁基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(18mg，0.04mmol，21％产率)。LCMS[M+H]+：398.3。1HNMR(400MHz，MeOD)δ7.84(d，J＝1.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.59-7.53(m，1H)，4.28(d，J＝13.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.38(d，J＝13.4Hz，1H)，3.07(dd，J＝19.5，11.8Hz，2H)，2.93-2.80(m，3H)，2.69(d，J＝3.7Hz，1H)，2.47(t，J＝11.6Hz，1H)，2.40-2.27(m，2H)，2.27-2.00(m，3H)，1.87-1.65(m，3H)，1.42(p，J＝7.4Hz，1H)，1.27(d，J＝6.2Hz，3H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例78.(R)-1-(5-((2-甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d] 异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例77的方法制备，其中使用四氢-4H-吡喃-4-酮代替环丁酮。LCMS[M+H]+：428.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.39(s，1H)，7.87(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，1H)，4.34(d，J＝13.3Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，4.03(d，J＝11.2Hz，2H)，3.49-3.36(m，3H)，3.11-3.02(m，1H)，2.96(dt，J＝12.9，3.0Hz，1H)，2.91-2.84(m，2H)，2.84-2.73(m，2H)，2.66(s，1H)，2.44(t，J＝12.0Hz，1H)，1.97(t，J＝11.6Hz，2H)，1.64(ddd，J＝12.3，7.8，4.6Hz，2H)，1.36-1.31(m，5H)。
实例79.1-(5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)三氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
通过实例77的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用丙酮代替环丁酮。LCMS[M+H]+：372.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.53(s，1H)，7.83(dd，J＝1.6，0.8Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.69(s，2H)，3.05(t，J＝6.6Hz，1H)，2.89(q，J＝9.5Hz，6H)，2.78-2.54(m，4H)，1.21(d，J＝6.6Hz，6H)。
实例80.1-(5-((4-环丁基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
通过实例77的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐。LCMS[M+H]+：384.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.40(s，1H)，7.85(d，J＝1.5Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.57(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.77(s，2H)，3.57(p，J＝8.2Hz，1H)，3.08(s，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.76(s，2H)，2.33-2.14(m，4H)，1.92-1.78(m，2H)，1.63(dd，J＝37.5，8.0Hz，1H)，1.51-1.25(m，2H)，1.00-0.87(m，1H)。
实例81.1-(5-((4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例77的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用四氢-4H-吡喃-4-酮代替环丁酮。LCMS[M+H]+：414.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.42(s，1H)，7.86(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，4.03(dd，J＝11.6，4.4Hz，2H)，3.77(s，2H)，3.41(td，J＝12.0，1.7Hz，2H)，3.07(q，J＝15.9Hz，5H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.75(s，4H)，2.00-1.92(m，2H)，1.64(qd，J＝12.1，4.6Hz，2H)。
实例82.(S)-1-(5-((3-甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异 噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例77的方法制备，其中使用(S)-1-(5-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用氧杂环丁烷-3-酮代替环丁酮。LCMS[M+H]+：400.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.39(s，1H)，7.90(d，J＝1.6Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.60(d，J＝8.7Hz，1H)，4.68(dd，J＝12.6，6.8Hz，3H)，4.60(t，J＝6.8Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.91-3.80(m，3H)，2.96(d，J＝12.0Hz，1H)，2.92-2.75(m，4H)，2.64-2.47(m，2H)，2.31(dt，J＝20.6，10.5Hz，2H)，0.92(d，J＝6.3Hz，3H)。
实例83.1-(5-((4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64，步骤4的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用甲磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：408.1。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.24(s，1H)，7.83(s，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.8Hz，1H)，7.56(d，J＝8.9Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.70(s，2H)，3.23(t，J＝5.0Hz，4H)，2.91-2.85(m，2H)，2.83(d，J＝1.5Hz，3H)，2.59(t，J＝4.9Hz，4H)。
实例84.1-(5-((4-(异丙基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64，步骤4的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用丙烷-2-磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：436.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.11(s，1H)，7.86(s，1H)，7.65(d，J＝8.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.77(s，2H)，3.38(t，J＝5.0Hz，5H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.62(t，J＝4.9Hz，4H)，1.30(d，J＝6.9Hz，6H)。
实例85.1-(5-((4-异丁酰基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2， 4(1H，3H)-二酮
通过实例64，步骤4的方法制备，其中使用1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用异丁酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：400.0。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.09(s，1H)，7.75(m，1H)，7.69(m，1H)，4.94(br s，4H)，4.51(s，2H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.35(m，4H)，2.95(m，1H)，2.87(t，J＝6.7Hz，2H)，1.09(t，J＝6.6Hz，6H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例86.(S)-1-(5-((3-甲基-4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并 [d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用氧杂环丁烷-3-甲醛制备。LCMS[M+H]+：414.0。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.42(s，1H)，7.85(s，1H)，7.64(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.6Hz，1H)，4.80(dt，J＝9.7，6.7Hz，2H)，4.44(dt，J＝8.5，6.0Hz，2H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.74(d，J＝4.1Hz，2H)，3.44-3.33(m，2H)，3.03-2.93(m，1H)，2.87(q，J＝7.1Hz，5H)，2.58(t，J＝11.1Hz，1H)，2.46(d，J＝11.7Hz，1H)，2.23(s，1H)，1.36-1.27(m，1H)，1.20(d，J＝6.2Hz，3H)。
实例87.(R)-1-(5-((2-乙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-乙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：372.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.49(s，1H)，7.84(s，1H)，7.63(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.57(d，J＝8.8Hz，1H)，4.25(d，J＝13.5Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.37(d，J＝14.4Hz，1H)，3.22(d，J＝11.9Hz，1H)，3.09(d，J＝11.9Hz，1H)，2.92-2.85(m，3H)，2.77(s，2H)，2.68(s，3H)，2.61(s，1H)，2.38(t，J＝11.9Hz，1H)，1.89-1.68(m，2H)，1.01(t，J＝7.4Hz，3H)。
实例88.(R)-1-(5-((2-乙基-4-异丁基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-乙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用异丁醛制备。LCMS[M+H]+：414.1。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.42(s，1H)，7.88(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，1H)，4.33(d，J＝13.3Hz，1H)，4.18(t，J＝6.7Hz，2H)，3.49(d，J＝13.0Hz，1H)，3.24(dd，J＝24.8，10.2Hz，2H)，2.94(dt，J＝13.1，3.3Hz，1H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.85-2.69(m，5H)，2.53(t，J＝12.0Hz，1H)，2.05(dt，J＝13.6，6.9Hz，1H)，1.82(dt，J＝14.2，7.7Hz，2H)，1.02(dd，J＝16.2，7.0Hz，9H)。
实例89.(R)-1-(5-((2-异丙基-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基1二 氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-异丙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：386.3。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.83(s，1H)，7.64(dd，J＝8.6，1.8Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.29(d，J＝13.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.25(d，J＝13.5Hz，1H)，3.10(d，J＝11.1Hz，1H)，2.96(d，J＝11.7Hz，1H)，2.93-2.80(m，4H)，2.56(s，3H)，2.53-2.39(m，3H)，2.29(t，J＝12.0Hz，1H)，1.02(dd，J＝8.2，6.5Hz，6H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例90.(R)-1-(5-((4-异丁基-2-异丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(R)-((4-(叔丁氧基羰基)-2-异丙基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用异丁醛制备。LCMS[M+H]+：428.1。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.41(s，1H)，7.85(s，1H)，7.64(dd，J＝8.9，1.8Hz，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，1H)，4.34(d，J＝13.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.36(d，J＝12.9Hz，3H)，2.98-2.80(m，7H)，2.68(t，J＝7.1Hz，1H)，2.48(dd，J＝15.3，9.3Hz，2H)，2.11(dt，J＝13.6，6.8Hz，1H)，1.10-0.97(m，12H)。
实例91.叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲 基)-2，2-二甲基哌嗪-1-甲酸酯
通过实例21，步骤1-2的方法，在步骤1中使用((4-(叔丁氧基羰基)-3，3-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：458.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.82(s，1H)，7.66(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.59(s，2H)，3.47-3.40(m，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.46(t，J＝5.5Hz，2H)，2.21(s，2H)，1.45(s，9H)，1.36(s，6H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例92.1-(5-((3，3，4-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶- 2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用((4-(叔丁氧基羰基)-3，3-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：372.2。1H NMR(400MHz，cd3od)δ8.55(s，1H)，7.82(s，1H)，7.64(dd，J＝8.8，1.8Hz，1H)，7.56(dd，J＝9.0，1.7Hz，1H)，4.17(td，J＝6.7，1.8Hz，2H)，3.65(s，2H)，3.12(s，2H)，2.88(td，J＝6.7，1.8Hz，2H)，2.63(s，3H)，2.58-2.23(m，4H)，1.30(s，6H)。
实例93.叔丁基(1S，4S)-5-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁 唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯
通过实例21，步骤1-2的方法，在步骤1中使用(((1S，4S)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：442.0。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.90(s，1H)，7.68(d，J＝8.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，1H)，4.37(s，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，4.00(t，J＝10.8Hz，2H)，3.71(s，1H)，3.54(d，J＝10.6Hz，1H)，3.28-3.19(m，1H)，2.97(d，J＝10.5Hz，1H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.81(t，J＝12.4Hz，1H)，2.02(d，J＝10.5Hz，1H)，1.83(t，J＝9.4Hz，1H)，1.46(s，9H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例94.1-(5-((3，3.4-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶- 2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1S，4S)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：356.2。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.42(s，1H)，7.76(s，1H)，7.67-7.57(m，2H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，3.75(q，J＝13.6Hz，2H)，3.20(d，J＝30.0Hz，2H)，2.82-2.73(m，2H)，2.70-2.57(m，4H)，2.28(s，3H)，1.63(s，2H)。
实例95.1-(5-(((1S，4S)-5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环 [2.2.1]庚烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1S，4S)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛制备。LCMS[M+H]+：440.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.43(s，1H)，7.93(s，1H)，7.70(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，7.60(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，4.10(d，J＝12.1Hz，2H)，3.96(t，J＝10.6Hz，3H)，3.77(s，1H)，3.43(t，J＝11.8Hz，3H)，3.22-3.13(m，2H)，3.05-2.84(m，4H)，2.21(d，J＝11.5Hz，1H)，2.08(d，J＝11.7Hz，1H)，1.94(s，1H)，1.72(t，J＝15.1Hz，2H)，1.35(ddt，J＝20.0，14.O，6.6Hz，3H)。
实例96.叔丁基(1R，4R)-5-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁 唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯
通过实例21，步骤1-2的方法，在步骤1中使用(((1R，4R)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：442.1。1H NMR(400MHz，cd3od)δ7.88(s，1H)，7.68(d，J＝8.7Hz，1H)，7.57(d，J＝8.6Hz，1H)，4.34(s，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.93(d，J＝4.3Hz，2H)，3.64(s，1H)，3.54(d，J＝10.6Hz，1H)，3.22(t，J＝12.3Hz，1H)，2.89(q，J＝7.5Hz，3H)，2.76(dd，J＝23.4，10.1Hz，1H)，1.98(d，J＝10.4Hz，1H)，1.79(t，J＝10.3Hz，1H)，1.47(s，9H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例97.1-(5-(((1R，4R)-5-甲基-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)苯并 [d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
/>
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1R，4R)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：356.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，7.86(s，1H)，7.67(d，J＝8.6Hz，1H)，7.56(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.5Hz，2H)，4.11(br s，1H)，3.95(m，1H)，3.86(m，1H)，3.69(m，2H)，3.10(d，J＝11.0Hz，1H)，3.00(3，1H)，2.88(m，6H)，2.21(m，1H)，2.10(m，1H)。
实例98.1-(5-(((1R，4R)-5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环 [2.2.1]庚烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1R，4R)-5-(叔丁氧基羰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛制备。LCMS[M+H]+：440.1。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.36(s，1H)，7.93(s，1H)，7.70(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，4.13-4.07(m，2H)，4.00-3.90(m，3H)，3.77(s，1H)，3.50-3.34(m，4H)，3.20(td，J＝7.9，4.1Hz，2H)，3.05-2.85(m，4H)，2.23-2.06(m，2H)，2.02-1.91(m，1H)，1.70(dtt，J＝18.0，14.4，3.0Hz，2H)，1.34(dtd，J＝17.1，11.7，5.0Hz，2H)。
实例99.叔丁基(1R，5S)-3-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁 唑-5-基)甲基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸酯
通过实例21，步骤1-2的方法，在步骤1中使用(((1R，5S)-8-(叔丁氧基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：456.1。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.82(s，1H)，7.62(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.7Hz，1H)，4.20-4.07(m，4H)，3.59(s，2H)，2.88(t，J＝6.7Hz，2H)，2.66(dd，J＝10.9，2.6Hz，2H)，2.27(s，2H)，1.96(d，J＝7.0Hz，2H)，1.82(d，J＝7.9Hz，2H)，1.46(s，9H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例100.1-(5-(((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯并[d]异 噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
/>
通过实例21，步骤1-3的方法，在步骤1中使用(((1R，5S)-8-(叔丁氧基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：356.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.54(s，1H)，7.86(d，J＝1.6Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.96(dq，J＝4.5，2.2Hz，2H)，3.70(s，2H)，2.91-2.80(m，4H)，2.52(d，J＝12.3Hz，2H)，2.23-2.14(m，2H)，2.04-1.93(m，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例101.1-(5-(((1R，5S)-8-甲基-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1R，5S)-8-(叔丁氧基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：370.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.53(s，1H)，7.86(dd，J＝1.7，0.8Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，3.81(s，2H)，3.72(s，2H)，2.92-2.84(m，4H)，2.76(s，3H)，2.58(d，J＝12.4Hz，2H)，2.25-2.14(m，4H)。
实例102.1-(5-(((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)苯并[d]异 噁唑-3-基1二氢嘧啶-2，4(1H，3H1-二酮
通过实例21，步骤1-3的方法，在步骤1中使用(((1R，5S)-3-(叔丁氧基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)三氟硼酸钾制备。LCMS[M+H]+：356.2。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 7.87(s，1H)，7.70(m，1H)，7.57(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.65(m，2H)，3.39(br s，2H)，3.21(br d，J＝13.6Hz，2H)，3.08(br d，J＝11.0Hz，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.31(m，2H)，1.89(m，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH质子。
实例103.1-(5-(((1R，5S)-3-甲基-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
/>
通过实例21的方法，在步骤1中使用(((1R，5S)-3-(叔丁氧基羰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)三氟硼酸钾以及在步骤4中使用多聚甲醛制备。LCMS[M+H]+：370.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.47(s，1H)，7.97(d，J＝1.6Hz，1H)，7.73(ddd，J＝7.9，6.1，1.7Hz，1H)，7.63(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(td，J＝6.6，4.7Hz，2H)，3.95(s，1H)，3.57(s，1H)，3.16-3.08(m，1H)，2.92-2.83(m，3H)，2.66(s，3H)，2.36-2.26(m，1H)，2.04(t，J＝7.2Hz，1H)，1.61(dt，J＝44.4，7.8Hz，2H)，1.35-1.25(m，2H)，0.93(t，J＝7.4Hz，2H)。
实例104.1-(5-(((1R，5S)-3-(甲基磺酰基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基) 甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例64，步骤4的方法制备，其中使用1-(5-(((1R，5S)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐代替(R)-1-(5-((2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，并使用甲磺酰氯代替乙酰氯。LCMS[M+H]+：434.0。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.61-1.69(m，2H)，1.94-2.03(m，2H)，2.80(t，J＝6.60Hz，2H)，2.85(s，3H)，2.91(d，J＝10.12Hz，2H)，3.15-3.19(m，2H)3.23(br s，2H)，3.25-3.29(m，1H)，4.07(t，J＝6.60Hz，2H)，7.68(s，2H)，7.80(s，1H)，8.19(s，1H)，10.89(s，1H)。
实例105.1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并 [d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐
通过实例21，步骤1-3的方法制备，其中在步骤1中使用(((2S，5S)-4-(叔丁氧基羰基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾代替((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾。LCMS[M+H]+：357.8。
步骤2.1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d] 异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将三乙胺(61mg，0.56mmol)和甲磺酰氯(30mg，0.27mmol)添加至1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(80mg，0.22mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌2h，然后用DCM稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％HCOOH的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基-4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(16mg，0.045mmol，19％产率)。LCMS[M+H]+：436.0。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.88(s，1H)，7.74(s，1H)，7.68(d，J＝8.6Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，4.18(d，J＝13.7Hz，1H)，4.11-4.02(m，2H)，3.84(d，J＝7.5Hz，1H)，3.39(dd，J＝12.8，3.4Hz，1H)，3.19-3.10(m，1H)，2.92(s，3H)，2.90-2.75(m，3H)，2.50(m，1H)，2.40-2.32(m，1H)，2.18(dd，J＝11.6，3.7Hz，1H)，1.15(dd，J＝9.2，6.3Hz，6H)。
实例106.1-(5-(((2S，5S)-2，4，5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法制备，其中在步骤1中使用(((2S，5S)-4-(叔丁氧基羰基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾代替((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾，并在步骤4中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：372.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.54(s，1H)，7.83(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，4.01(d，J＝13.4Hz，1H)，3.54-3.47(m，1H)，3.09-2.92(m，4H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.70-2.60(m，4H)，2.54(dd，J＝12.9，3.3Hz，1H)，1.24(dd，J＝6.5，3.0Hz，6H)。
实例107.1-(5-(((2S，5S)-2，5-二甲基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1- 基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法制备，其中在步骤1中使用(((2S，5S)-4-(叔丁氧基羰基)-2，5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾代替((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾，并在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：456.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.50(s，1H)，7.85(d，J＝1.5Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.58(s，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，4.11(d，J＝13.2Hz，1H)，3.99-3.87(m，2H)，3.53-3.35(m，4H)，2.99-2.78(m，4H)，2.77-2.35(m，4H)，1.85(s，1H)，1.73(d，J＝13.3Hz，1H)，1.64(d，J＝13.4Hz，1H)，1.37-1.07(m，8H)。
实例108.1-(5-(((2R，6S)-2，4，6-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法制备，其中在步骤1中使用(((2S，6R)-4-(叔丁氧基羰基)-2，6-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾代替((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾，并在步骤4中使用多聚甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：371.9。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.94(d，J＝1.7Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(t，J＝6.7Hz，2H)，4.05(s，2H)，3.61(q，J＝7.1Hz，1H)，3.38(s，1H)，3.00-2.80(m，9H)，1.17(d，J＝5.8Hz，6H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例109.1-(5-(((2R，6S)-2，6-二甲基-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1- 基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21的方法制备，其中在步骤1中使用(((2S，6R)-4-(叔丁氧基羰基)-2，6-二甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾代替((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾，并在步骤4中使用四氢-2H-吡喃-4-甲醛代替环己烷甲醛。LCMS[M+H]+：456.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.39(s，1H)，7.97(s，1H)，7.71-7.64(m，1H)，7.57(d，J＝8.8Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，4.14(s，1H)，3.92(dd，J＝11.7，4.3Hz，2H)，3.51-3.37(m，3H)，3.11(d，J＝17.5Hz，3H)，2.89(t，J＝6.7Hz，4H)，2.53(d，J＝9.8Hz，2H)，2.33(s，2H)，2.07-1.88(m，2H)，1.66(d，J＝13.3Hz，2H)，1.21(d，J＝6.2Hz，6H)。
实例110.(R)-1-(5-((六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异 噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤1-2的方法制备，其中在步骤1中使用(R)-三氟((六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)硼酸钾代替{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾。LCMS[M+H]+：386.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.23(s，1H)，7.85(t，J＝1.2Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.88-3.59(m，5H)，3.22(t，J＝10.8Hz，1H)，2.96(d，J＝8.1Hz，1H)，2.93-2.81(m，3H)，2.77(ddd，J＝12.2，7.3，5.0Hz，2H)，2.51-2.37(m，4H)，1.99(t，J＝11.0Hz，1H)。
实例111.(S)-1-(5-((六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异 噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤1-2的方法制备，其中在步骤1中使用(S)-三氟((六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)硼酸钾代替{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾。LCMS[M+H]+：386.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.82(dd，J＝1.6，0.7Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.86-3.78(m，1H)，3.69-3.58(m，4H)，3.20(dd，J＝11.2，10.3Hz，1H)，2.92-2.85(m，3H)，2.81-2.75(m，1H)，2.69(dq，J＝11.1，2.2Hz，2H)，2.42-2.31(m，4H)，1.86(t，J＝10.8Hz，1H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例112.(S)-1-(5-((1，1-二氧化六氢-5H-异噻唑并[2，3-a]吡嗪-5-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤1-2的方法制备，其中在步骤1中使用(S)-((1，1-二氧化六氢-5H-异噻唑并[2，3-a]吡嗪-5-基)甲基)三氟硼酸钾代替{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾。LCMS[M+H]+：420.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.84(dd，J＝1.7，0.8Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.58-7.52(m，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.72(q，J＝13.1Hz，2H)，3.27-3.10(m，4H)，3.03(d，J＝11.1Hz，1H)，2.95(d，J＝11.6Hz，1H)，2.92-2.83(m，3H)，2.33(dddd，J＝12.6，9.2，5.8，3.5Hz，1H)，2.23(td，J＝11.4，3.4Hz，1H)，2.05-1.92(m，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例113.1-(5-((4-异丁基-3-氧代哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤1-2的方法制备，其中在步骤1中使用三氟((4-异丁基-3-氧代哌嗪-1-基)甲基)硼酸钾代替{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾。LCMS[M+H]+：400.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.85(dd，J＝1.7，0.8Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.71(s，2H)，3.39-3.33(m，2H)，3.21(d，J＝7.7Hz，2H)，3.15(s，2H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.77-2.68(m，2H)，2.06-1.95(m，1H)，0.90(d，J＝6.7Hz，6H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例114.(R)-1-(5-((4-异丁基-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例21，步骤1-2的方法制备，其中在步骤1中使用(R)-三氟((4-异丁基-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)甲基)硼酸钾代替{[4-(叔丁氧基羰基)-1-哌嗪基]甲基}(三氟)硼酸钾。LCMS[M+H]+：430.3。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.47(s，1H)，7.86(d，J＝1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(t，J＝6.7Hz，2H)，3.81-3.71(m，2H)，3.60(qd，J＝10.7，4.4Hz，2H)，3.36(s，3H)，3.16-3.09(m，1H)，2.99-2.76(m，7H)，2.64-2.48(m，3H)，2.03-1.90(m，1H)，1.04-0.95(m，6H)。
实例115.(R)-1-(5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基) 甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.(R)-3-((5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基) 甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺
通过将氩气鼓泡通过混合物10min，将3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(200mg，0.70mmol)和(R)-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾(0.62g，1.75mmol)在叔戊醇(6mL)和水性碳酸铯(1.5M，1.5mL)中的溶液脱气。添加cataCXium-A-Pd-G3(20mg，0.028mmol)，将混合物用氩气再脱气一分钟。将混合物在90℃搅拌16h，然后冷却至室温并在EtOAc和水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在DCM中的7％-8％MeOH洗脱)纯化，以给出(R)-3-((5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(100mg，0.22mmol，32％产率)。LCMS[M+H]+：452.2。
步骤2.(R)-1-(5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲 基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将碳酸铯(210mg，0.66mmol)和CDI(107mg，0.66mmol)添加至(R)-3-((5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(100mg，0.22mmol)在乙腈(12mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热24h。将反应冷却至室温并且用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到(R)-1-(5-((3-(二氟甲基)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(14mg，0.029mmol，13％产率)。LCMS[M+H]+：478.21H NMR(400MHz，MeOD)δ8.48(s，1H)，7.80(d，J＝1.6Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.54(d，J＝8.7Hz，1H)，6.24(td，J＝56.0，5.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.95-3.85(m，2H)，3.67-3.53(m，2H)，3.39(t，J＝12.0Hz，2H)，2.99-2.92(m，1H)，2.88(t，J＝6.6Hz，2H)，2.76(dd，J＝9.6，5.1Hz，1H)，2.65-2.48(m，5H)，2.42(dt，J＝12.8，7.2Hz，2H)，1.71(dt，J＝25.9，10.4Hz，3H)，1.19(dt，J＝14.5，11.1Hz，2H)。
实例116.(R)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.3-((5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺
通过将氩气鼓泡通过混合物10min，将3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(4g，14mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(3.7g，28mmol)和TEA(5.8mL，42mmol)在叔丁醇(60mL)中的溶液脱气。添加Pd(dppf)Cl2·DCM(571mg，0.16mmol)并将混合物在90℃搅拌14h。将反应冷却至室温并浓缩。将粗物质在DCM和水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的90％EtOAc洗脱)纯化，以给出3-((5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(1.1g，4.8mmol，34％产率)。LCMS[M+H]+：232.1。
步骤2.1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将碳酸铯(5.7g，17.2mmol)和CDI(2.7g，17.2mmol)添加至3-((5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(1.0g，4.3mmol)在乙腈(50mL)中的溶液中。然后将反应混合物在95℃加热6h。将反应冷却至室温并且用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的90％EtOAc洗脱)纯化，以给出1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.8g，3.1mmol，72％产率)。LCMS[M+H]+：257.8。
步骤3.3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H， 3H)-二酮
在室温将碳酸铯(2.5g，7.8mmol)和PMBCl(1.1mL，7.8mmol)添加至1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(1.0g，3.9mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌4h。将反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以给出3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.6g，1.6mmol，41％产率)。LCMS[M+H]+：377.9。
步骤4.3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑- 5-甲醛在0℃将四氧化锇(于t-BuOH中2.5wt％，0.79mL，0.079mmol)添加至3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-乙烯基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.6g，1.6mmol)在t-BuOH(4mL)和二噁烷(4mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h。然后将混合物冷却至0℃并添加高碘酸钠(1.69g，7.95mmol)在水(5mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌2h。将反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以给出粗制3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-甲醛(0.25g，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：380.2。
步骤5.(R)-3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
向3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-甲醛(200mg，0.52mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加(R)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-4(3H)-酮(82mg，0.52mmol)、二氯化二丁基锡(158mg，1.02mmol)、和三乙胺(0.3mL，1.58mmol)。将混合物在80℃搅拌1h，并添加苯基硅烷(111mg，0.52mmol)。将反应在80℃搅拌1h。将反应冷却至室温，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出粗制(R)-3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(130mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：520.3。
步骤6.(R)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并 [d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将10％TfOH在TFA中的溶液(2mL)添加至(R)-3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(130mg，0.25mmol)中。然后将反应混合物在70℃搅拌3h。然后将反应浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/O.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到(R)-1-(5-((4-氧代六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(10mg，0.025mmol，10％产率)。LCMS[M+H]+：400.11H NMR(400MHz，MeOD)δ8.28(s，1H)，7.83(dd，J＝1.7，0.8Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(dd，J＝8.7，0.7Hz，1H)，4.47(ddd，J＝13.2，3.3，1.8Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，4.09(d，J＝1.6Hz，2H)，3.97(dd，J＝11.9，4.6Hz，1H)，3.75-3.62(m，4H)，3.60-3.48(m，2H)，2.98-2.78(m，3H)，2.11(td，J＝11.8，3.3Hz，1H)，1.97(t，J＝11.1Hz，1H)。
实例117.(R)-1-(5-((3-(甲氧基甲基)-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑- 3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例116，步骤5-6的方法制备，其中在步骤5中使用(R)-2-(甲氧基甲基)-1-甲基哌嗪[参见US2014/323463，2014，A1]代替(R)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-4(3H)-酮。LCMS[M+H]+：388.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.15(t，J＝1.2Hz，1H)，7.81-7.73(m，2H)，4.63(s，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，2H)，3.97(d，J＝11.8Hz，1H)，3.82(d，J＝13.3Hz，3H)，3.69(s，1H)，3.61-3.50(m，4H)，3.48(s，3H)，3.06(s，3H)，2.90(t，J＝6.7Hz，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例118.(R)-1-(5-((3-(二氟甲基)-4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3- 基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例116，步骤5-6的方法制备，其中在步骤5中使用(R)-2-(二氟甲基)-1-甲基哌嗪代替(R)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-4(3H)-酮。LCMS[M+H]+：394.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.29(s，1H)，7.82(d，J＝1.8Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.55(d，J＝8.7Hz，1H)，6.05(td，J＝55.0，3.4Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.73-3.60(m，2H)，2.86(dt，J＝11.3，7.4Hz，4H)，2.73(d，J＝11.4Hz，1H)，2.58(d，J＝10.9Hz，1H)，2.50-2.38(m，4H)，2.38-2.21(m，2H)。
实例119.1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
步骤1.叔丁基4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并 [d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯
在室温将碳酸铯(0.303g，0.93mmol)和PMBCl(83mg，0.53mmol)添加至叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.3g，0.46mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的90％EtOAc洗脱)纯化，以给出叔丁基4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(0.12g，0.21mmol，47％产率)。LCMS[M+H]+：550.5。
步骤2.3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧 啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，2mL)添加至叔丁基4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯(100mg，0.21mmol)中，并将混合物在室温搅拌2h。然后将反应浓缩，以给出3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(110mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：450.2。
步骤3.1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄 基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
向3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(哌嗪-1-基甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(100mg，0.20mmol)和环丙基硼酸(35mg，0.41mmol)在DCE(3mL)中的溶液中添加Na2CO3(43mg，0.41mmol)、二吡啶(32mg，0.20mmol)、和Cu(OAc)2(37mg，0.20mmol)。将混合物在60℃搅拌16h。将反应冷却至室温，用DCM稀释并用水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出粗制1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(150mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：490.3。
步骤4.1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
在室温将10％TfOH在TFA中的溶液(5mL)添加至1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(150mg，0.30mmol)中。然后将反应混合物在90℃加热16h。然后将反应冷却至室温并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(11mg，0.02mmol，9％产率)。LCMS[M+H]+：370.01H NMR(400MHz，MeOD)δ8.16(d，J＝1.4Hz，1H)，7.83-7.70(m，2H)，4.63(s，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，2H)，3.80-3.52(m，8H)，3.00(s，1H)，2.90(t，J＝6.7Hz，2H)，1.03(d，J＝4.3Hz，4H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例120.(R)-1-(5-((4-环丙基-2-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例119，步骤5-6的方法制备，其中在步骤1中使用叔丁基(R)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯代替叔丁基4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)哌嗪-1-甲酸酯。LCMS[M+H]+：384.0。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.06(s，1H)，7.72(d，J＝1.3Hz，2H)，4.74(s，1H)，4.20(t，J＝6.6Hz，2H)，4.14(s，1H)，3.72-3.53(m，1H)，3.22(d，J＝10.6Hz，4H)，2.89(t，J＝6.6Hz，4H)，2.21(t，J＝7.6Hz，1H)，1.53(d，J＝6.4Hz，3H)，0.76-0.58(m，4H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例121和122.1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2] 辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并 [d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯在室温将三乙胺(0.29mL，2.1mmol)添加至3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-甲醛(400mg，1.05mmol)和叔丁基2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(223mg，1.05mmol)在DCM(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌1h，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(444mg，2.1mmol)。将反应在室温搅拌14h，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将混合物用DCM萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以给出外消旋叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(0.25g，0.43mmol，41％产率)。LCMS[M+H]+：576.3。
将异构体通过手性HPLC分离：柱：CHIRALPAK IG，250MM X 21MM X 5微米，流动相：己烷(A)在EtOH∶MeOH(1∶1)中的0.1％HCOOH(B)，流速：15ML，等度：60(A)：40(B)。将收集的级分在减压下浓缩，以得到：
手性峰1：叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(80mg)；手性HPLC：(8.64min)。
手性峰2：叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(80mg)；手性HPLC：(9.08min)。
步骤2.1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)- 3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，1mL)添加至叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(80mg，0.017mmol，手性峰1)在二噁烷(2mL)中的溶液中，并将混合物在室温搅拌3h。然后将反应浓缩，以给出1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(60mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：476.1。
步骤3.3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂 双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将三乙胺(0.028mL，0.20mmol)添加至1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(50mg，0.1mmol)和四氢-2H-吡喃-4-甲醛(11mg，0.10mmol)在DCM(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌1h，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(42mg，0.20mmol)。将反应在室温搅拌4h，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将混合物用DCM萃取两次，并将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以给出粗制3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.07g，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：574.3。
步骤4.1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2- 基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(实例121)
在室温将10％TfOH在TFA中的溶液(5mL)添加至3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(70mg)中。然后将反应混合物在70℃加热2h。然后将反应冷却至室温并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(20mg，0.044mmol，40％产率)。LCMS[M+H]+：454.01H NMR(400MHz，MeOD)δ8.28(s，1H)，7.94(d，J＝1.7Hz，1H)，7.70(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.60(d，J＝8.7Hz，1H)，4.18(t，J＝6.6Hz，2H)，4.05(s，2H)，3.95(dd，J＝10.7，5.2Hz，2H)，3.56(d，J＝11.9Hz，1H)，3.51-3.34(m，4H)，3.21(s，1H)，3.15-2.98(m，3H)，2.95-2.83(m，3H)，2.17(d，J＝14.3Hz，2H)，2.07-1.88(m，2H)，1.85-1.66(m，3H)，1.43-1.27(m，2H)。
实例122.1-(5-((5-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷- 2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例121的方法，在步骤1中从手性峰2制备。LCMS[M+H]+：454.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.07(s，1H)，8.02(s，1H)，7.77-7.71(m，1H)，7.65(d，J＝8.7Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.19(t，J＝6.6Hz，2H)，3.97(d，J＝11.5Hz，2H)，3.75-3.36(m，6H)，3.13(dt，J＝3.4，1.7Hz，3H)，2.89(t，J＝6.6Hz，2H)，2.36-2.17(m，2H)，2.10-1.83(m，3H)，1.73(d，J＝13.1Hz，2H)，1.46-1.25(m，4H)。
实例123.1-(5-((5-甲基-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例121的方法，在步骤1中从手性峰1制备，其中在步骤3中使用多聚甲醛代替四氢-2H-吡喃-4-甲醛。LCMS[M+H]+：370.2。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.53(s，1H)，7.88(d，J＝1.5Hz，1H)，7.67(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.6Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.89(s，2H)，3.56-3.48(m，1H)，3.37(s，1H)，3.28-3.18(m，2H)，2.98-2.84(m，6H)，2.79(dd，J＝11.8，1.7Hz，1H)，2.26-2.08(m，2H)，1.97(dd，J＝13.6，10.3Hz，1H)，1.78-1.65(m，1H)。
实例124.1-(5-((5-甲基-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例121的方法，在步骤1中从手性峰2制备，其中在步骤3中使用多聚甲醛代替四氢-2H-吡喃-4-甲醛。LCMS[M+H]+：370.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.23(d，J＝1.7Hz，1H)，7.86(dd，J＝8.8，1.8Hz，1H)，7.78-7.72(m，1H)，4.80-4.67(m，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，2H)，4.00(d，J＝4.1Hz，1H)，3.91(s，1H)，3.83(s，2H)，3.72-3.59(m，2H)，3.12(s，3H)，2.91(t，J＝6.6Hz，2H)，2.41(s，2H)，2.05(d，J＝22.3Hz，2H)。由于更换溶剂，未观察到NH。
实例125.1-(5-((5-(甲基磺酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
步骤1.1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基) 二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将10％TfOH在TFA中的溶液(5mL)添加至叔丁基5-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(70mg，手性峰1)中。然后将反应混合物在70℃加热2h。然后将反应冷却至室温并浓缩。将粗品溶解于在DCM中的10％MeOH中并用amberlyst-A21(游离碱)树脂碱化，并且过滤。将滤液浓缩，以给出粗制1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(70mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：356.1。
步骤2.1-(5-((5-(甲基磺酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并 [d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将三乙胺(0.11mL，0.78mmol)和甲磺酰氯(0.024mL，0.31mmol)添加至1-(5-((2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(70mg)在DCM(10mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌2h，然后用DCM稀释并依次用水和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％HCOOH的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-((5-(甲基磺酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(15mg，0.031mmol，16％产率)。LCMS[M+H]+：434.1。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.88(s，1H)，7.78(s，1H)，7.67(d，J＝8.6Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，4.06(t，J＝6.6Hz，2H)，3.88-3.77(m，2H)，3.70-3.58(m，2H)，3.23(dd，J＝10.0，2.1Hz，1H)，2.96(s，3H)，2.90(ddt，J＝12.2，5.8，2.9Hz，2H)，2.80(t，J＝6.6Hz，2H)，2.73(dd，J＝10.6，2.1Hz，1H)，2.05-1.82(m，2H)，1.79-1.56(m，2H)。
实例126.1-(5-((5-(甲基磺酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-基)甲基)苯 并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
/>
通过实例125的方法，在步骤1中从手性峰2(实例121，步骤1)制备。LCMS[M+H]+：434.1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.29(s，1H)，7.90(s，1H)，7.67(dd，J＝8.7，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.6Hz，2H)，3.97(d，J＝3.1Hz，2H)，3.84-3.75(m，2H)，3.39-3.33(m，1H)，3.15(dd，J＝10.8，2.7Hz，1H)，3.08-3.02(m，1H)，2.97(s，3H)，2.90(dt，J＝13.3，4.3Hz，3H)，2.16(s，1H)，2.08-1.98(m，1H)，1.87(dddd，J＝13.5，11.2，4.6，2.4Hz，1H)，1.79-1.70(m，1H)。
实例127.1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
步骤1.1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将碳酸铯(4.59g，14.1mmol)和CDI(2.28g，14.1mmol)添加至3-((5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(1.0g，3.5mmol)在乙腈(43mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热16h。将反应冷却至室温并浓缩。将反应混合物通过硅藻土过滤，将其用DCM中的10％MeOH洗涤。将滤液浓缩并将粗物质通过硅胶色谱法(用在DCM中的10％MeOH洗脱)纯化，以给出1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.8g，2.6mmol，74％产率)。
步骤2.1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)- 二酮
在室温将碳酸铯(2.51g，7.74mmol)和PMBCl(0.52g，3.35mmol)添加至1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.80g，2.6mmol)在乙腈(18mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌4h。将反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在己烷中的20％-30％EtOAc洗脱)纯化，以给出1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(1.2g，2.7mmol，100％产率)。LCMS[M+H]+：429.9。
步骤3.1-(5-乙酰基苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H， 3H)-二酮
在室温将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(604mg，1.67mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(98mg，0.14mmol)添加至1-(5-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(600mg，1.39mmol)在DMF(8mL)中的溶液中。将混合物在90℃搅拌3h，然后冷却至室温并用1N HCl水溶液酸化。将混合物在EtOAc与水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(用30％EtOAc/己烷洗脱)纯化，以给出呈黄色固体的1-(5-乙酰基苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.18g，0.46mmol，33％产率)。LCMS[M+H]+：393.9。
步骤4.3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3- 基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
向1-(5-乙酰基苯并[d]异噁唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(180mg，0.48mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加1-甲基哌嗪(138mg，1.37mmol)、二氯化二丁基锡(289mg，0.95mmol)、和三乙胺(0.2mL)。将混合物在80℃搅拌1h，并添加苯基硅烷(0.2)。将反应在80℃搅拌12h。将反应冷却至室温，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(用5％MeOH/DCM洗脱)纯化，以给出呈黄色油状物的3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(0.12g，0.25mmol，55％产率)。LCMS[M+H]+：478.1。
步骤5.1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4 (1H，3H)-二酮
在室温将10％TfOH在TFA中的溶液(2.2mL)添加至3-(4-甲氧基苄基)-1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(120mg，0.25mmol)中。然后将反应混合物在90℃加热2h。然后将反应冷却至室温并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到1-(5-(1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(18mg，0.05mmol，20％产率)。LCMS[M+H]+：358.01H NMR(400MHz，MeOD)δ8.52(s，1H)，7.81(d，J＝1.7Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，7.56(d，J＝8.7Hz，1H)，4.17(t，J＝6.7Hz，2H)，3.60(q，J＝6.7Hz，1H)，2.89(t，J＝6.6Hz，2H)，2.64(d，J＝77.3Hz，8H)，2.45(s，3H)，1.43(d，J＝6.7Hz，3H)。
实例128.
步骤1：5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺
在室温将碳酸钾(0.77g，5.6mmol)和乙酰氧肟酸(0.42g，5.6mmol)添加至3-溴-6-氟-2-甲基苄腈(0.40g，1.9mmol)在DMF(4mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物在EtOAc和水之间分配，并且分离各层。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供粗制5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺(0.40g，1.8mmol，94％产率)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：227.0。
步骤2：3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈
在室温将碳酸铯(0.75g，2.3mmol)添加至5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-胺(0.40g，1.8mmol)和丙烯腈(0.12mL，1.8mmol)在MeCN(8mL)中的溶液中。将混合物在80℃加热3h。将反应混合物冷却至室温，并将橙色悬浮液通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。将滤液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供粗制3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈(0.48g，1.7mmol，97％产率)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：280.0。
步骤3：3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺
在室温将硫酸(1mL)滴加至3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙腈(0.48g，1.7mmol)在TFA(5mL)中的溶液中。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倾倒入冰水中并搅拌10min。通过过滤收集形成的沉淀物，并用水洗涤，随后用乙醚洗涤三次。将固体在真空下干燥，以提供呈灰白色固体的3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(0.42g，1.4mmol，82％产率)。LCMS[M+H]+：298.0。
步骤4.叔丁基(S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)-4-甲基苯并[d]异噁唑- 5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯
在室温向3-((5-溴-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)氨基)丙酰胺(250mg，0.84mmol)在甲苯(3mL)和水(0.3mL)中的悬浮液中添加Cs2CO3(820mg，2.52mmol)、(S)-((4-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)三氟硼酸钾(1.34g，4.19mmol)和RuPhos(78mg，0.17mmol)，随后添加Pd(OAc)2(19mg，0.084mmol)。将混合物在100℃搅拌4h，然后冷却至室温并在EtOAc和水之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用在庚烷中的10％-100％EtOAc洗脱)纯化，以给出叔丁基(S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯(220mg，0.51mmol，61％产率)。LCMS[M+H]+：432.5。
步骤5.叔丁基(S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯并[d]异噁 唑-5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯
在室温将碳酸铯(82mg，0.25mmol)和CDI(68mg，0.42mmol)添加至叔丁基(S)-4-((3-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯(90mg，0.21mmol)在乙腈(2mL)中的溶液中。然后将反应混合物在90℃加热16h。将反应冷却至室温并浓缩。将反应混合物在EtOAc和水之间分配，并且分离各层。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以提供粗制叔丁基(S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯(100mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：458.2。
步骤6.(S)-1-(4-甲基-5-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢 嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐
将HCl的溶液(于二噁烷中4.0M，2mL，8mmol)添加至叔丁基(S)-4-((3-(2，4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-5-基)甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯(100mg，0.22mmol)的溶液中，并将混合物在室温搅拌2h。然后将反应浓缩，以给出(S)-1-(4-甲基-5-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(100mg，粗品)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]+：358.2。
步骤7.(S)-1-(5-((4-异丁基-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲基苯并[d]异噁唑- 3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
在室温将三乙胺(8mg，0.076mmol)添加至(S)-1-(4-甲基-5-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐(20mg，0.051mmol)和异丁醛(11mg，0.15mmol)在DCM(2mL)中的悬浮液中。将反应混合物在室温搅拌10min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(43mg，0.20mmol)。将反应在室温搅拌2h，然后用DCM和水稀释。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO中，通过1微米过滤器过滤并通过使用ACN/水/0.1％甲酸的反相HPLC纯化。将含有产物的级分合并并冻干，以得到(S)-1-(5-((4-异丁基-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的甲酸盐(14mg，0.027mmol，53％产率)。LCMS[M+H]+：414.2。1H NMR(500MHz，DMSO)δ10.91(s，1H)，7.61(d，J＝7.1Hz，2H)，4.08(t，J＝11.8Hz，2H)，3.84(dt，J＝11.6，5.3Hz，1H)，3.80-3.45(m，3H)，3.36-3.06(m，3H)，2.94(ddd，J＝17.3，11.3，6.4Hz，4H)，2.74(dt，J＝17.0，4.6Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.00(s，1H)，1.25(s，3H)，0.95(dd，J＝10.7，6.5Hz，7H)。
实例129.(S)-1-(5-((3，4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲基苯并[d]异噁唑-3- 基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例128的方法制备，其中在步骤7中使用多聚甲醛代替异丁醛。LCMS[M+H]+：372.4。1H NMR(500MHz，DMSO)δ10.92(s，1H)，7.61(q，J＝8.6Hz，2H)，4.97(s，2H)，4.10(td，J＝11.7，4.6Hz，1H)，3.93-3.84(m，1H)，3.73(s，2H)，3.45(s，1H)，3.30-2.89(m，4H)，2.87-2.62(m，4H)，2.49(s，3H)，2.27(s，1H)，1.23(d，J＝6.4Hz，3H)。
实例130.(S)-1-(5-((4-(环丙基甲基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲基苯并[d] 异噁唑-3-基)二氢嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮
通过实例128的方法制备，其中在步骤7中使用环丙烷甲醛代替异丁醛。LCMS[M+H]+：412.2。1H NMR(500MHz，DMSO)δ10.93(s，1H)，7.62(q，J＝8.7Hz，2H)，4.09(dt，J＝9.8，6.7Hz，2H)，3.86(dt，J＝11.6，5.3Hz，1H)，3.72(d，J＝30.6Hz，3H)，3.31(s，1H)，3.17(d，J＝18.7Hz，2H)，3.06-2.83(m，4H)，2.75(dt，J＝17.0，4.5Hz，1H)，2.49(s，3H)，2.36(d，J＝20.0Hz，1H)，1.24(d，J＝6.4Hz，3H)，1.04(s，1H)，0.64(s，2H)，0.38(d，J＝27.5Hz，2H)。
生物学数据
缩写
BSA 牛血清白蛋白
Cas9 CRISPR相关蛋白9
CRISPR 成簇的规则间隔短回文重复序列
crRNA CRISPR RNA
DMEM 杜尔贝科改良伊格尔培养基
DMSO 二甲基亚砜
DTT 二硫苏糖醇
EDTA 乙二胺四乙酸
eGFP 增强的绿色荧光蛋白
FACS 荧光激活细胞分选
FBS 胎牛血清
FITC 荧光素
Flt3L Fms相关的酪氨酸激酶3配体，Flt3L
HbF 胎儿血红蛋白
HEPES (4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
IMDM 伊斯科夫改良的杜尔贝科培养基(Iscove’s modifiedDulbecco’s medium)
KCl 氯化钾
mPB 动员的外周血
PBS 磷酸盐缓冲盐水
rhEPO 重组人红细胞生成素
rhIL-3 重组人白介素-3
rhIL-6 重组人白介素-6
rhSCF 重组人干细胞因子
rhTPO 重组人促血小板生成素
RNP 核糖核蛋白
shRNA 短发夹RNA
tracrRNA 反式激活crRNA
WIZ 含有宽间隔的锌指的蛋白
材料与方法
实例131：HiBit标签融合蛋白测定中WIZ蛋白水平的定量
将来自普洛麦格公司(Promega)的HiBit系统用于开发高通量和定量测定，以测量WIZ蛋白水平对化合物的响应的变化。HiBit标签来源于分裂的纳米荧光素酶，并且具有以下蛋白质序列：VSGWRLFKKIS(SEQ ID NO：1)。将纳米荧光素酶(称为LgBit，来自普洛麦格公司)的互补片段添加到HiBit标签中，以形成有活性的纳米荧光素酶，其活性可以精确测量。以这种方式，可以在细胞裂解物中定量具有HiBit标签的融合蛋白的水平。
构建慢病毒载体(基于InvitrogenTM pLenti6.2/V5 DEST骨架)，其将HiBit标签置于WIZ上游，并从HSVTK启动子表达融合蛋白。
为了确保HiBit-WIZ融合蛋白在群体中的所有细胞中的适度和一致的表达，从具有单拷贝构建体的细胞构建稳定的细胞系。使用来自InvitrogenTM的ViraPowerTM试剂盒制备与构建体一起包装的慢病毒。在低感染复数下，将来自ATCC的293T细胞(目录号：CRL-3216)用病毒感染，并在培养基中通过5μg/mL杀稻瘟菌素选择2周。
如下测量化合物处理的细胞系中HiBit-WIZ标记的融合蛋白的水平：
第1天，将细胞在正常生长培养基中稀释至1.0x106个细胞/ml。将20μL的细胞悬液接种到固体白色384孔板的每个孔中。将板在37℃和5％CO2湿润的组织培养箱中孵育过夜。
第2天，在384孔板中制备连续稀释的化合物。在第1、2、23、24列给化合物板提供DMSO，在第3-12列和第13-22列给化合物板提供10点化合物稀释系列。将10mM的化合物储备溶液放入第3列或第13列中，并进行1：5连续稀释，直至每种化合物有10点稀释系列。通过(Labcyte公司)声转移将50nL稀释的化合物转移到铺板的细胞中。化合物的最高浓度为25μM。将板在37℃和5％CO2湿润的组织培养箱中孵育过夜(约18小时)。
第3天，将板从培养箱中取出并允许其在室温平衡60分钟。如制造商方案所述的，添加HiBit底物(Nano-HiBit Lytic检测系统，普洛麦格公司目录号：N3050)。将板在室温孵育30分钟，并使用/>读数器/>读取发光。使用/>软件包对数据进行分析和可视化。/>
化合物的WIZ降解活性(表1)
表1示出了本披露内容的化合物在293T细胞中的WIZ HiBit测定中的WIZ降解活性。WIZ Amax反映了DMSO归一化，WIZ-HiBit的曲线拟合百分比保持为25uM。通过以下方式进行计算：将DMSO对照归一化为100％，对剂量响应数据进行参数曲线拟合(10点，5倍)，随后使用拟合方程计算在25uM处的响应(nd＝未确定)。
表1：
/>
实例132：小分子HbF诱导测定
从澳赛尔斯公司(AllCells，LLC)获得冷冻保存的原代人CD34+造血干细胞和祖细胞。在通过施用粒细胞集落刺激因子进行动员后，从健康供体的外周血中分离CD34+细胞。使用2阶段培养法使细胞向红系谱系离体分化。在第一阶段，将细胞在37℃在5％CO2下在补充有rhSCF(50ng/mL，公司)、rhIL-6(50ng/mL，/>公司)、rhIL-3(50ng/mL，/>公司)和rhFlt3L(50ng/mL，/>公司)以及1X抗生素-抗真菌药(生命技术公司(Life Technologies)，赛默飞世尔科技公司(Thermo FisherScientific))的StemSpanTM无血清扩增培养基(SFEM)(干细胞技术公司(STEMCELLTechnologies Inc.))中培养6天。在第二阶段期间，将细胞在37℃在5％CO2下、在化合物存在下、在红系分化培养基中以5,000个细胞/mL培养7天。红系分化培养基包括IMDM(生命技术公司)，补充有胰岛素(10μg/mL，西格玛奥德里奇公司)、肝素(2U/mL，西格玛奥德里奇公司)、全转铁蛋白(330μg/mL，西格玛奥德里奇公司)、人血清AB(5％，西格玛奥德里奇公司)、氢化可的松(1μM，干细胞技术公司)、rhSCF(100ng/mL，/>公司)、rhIL-3(5ng/mL，公司)、rhEPO(3U/mL，/>公司)和1X抗生素-抗真菌剂。将所有化合物溶解并稀释到二甲基亚砜(DMSO)中，然后将其添加到培养基中，使最终浓度为0.3％DMSO，从而从30uM开始以7点、1：3稀释系列进行测试。
染色和流式细胞术
为了进行活力分析，将样品洗涤并重悬于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，并用LIVE/DEADTM可固定紫色死细胞染色试剂盒(生命技术公司，L34963)染色20分钟。然后将细胞再次用PBS洗涤，并重悬于补充有2％胎牛血清(FBS)和2mM EDTA的PBS中，以准备进行细胞表面标志物分析。将细胞用别藻蓝素偶联的CD235a(1：100，BD生物科学公司，551336)抗体和Brilliant Violet偶联的CD71(1：100，BD生物科学公司，563767)抗体标记20分钟。为了分析细胞质胎儿血红蛋白(HbF)，根据制造商的方案，使用固定缓冲液(420801)和透化洗涤缓冲液(/>421002)将细胞固定并透化。在透化步骤期间，将细胞用藻红蛋白偶联或FITC偶联的HbF特异性抗体(1∶10-1∶25，InvitrogenTM，MHFH04-4)染色30分钟。在FACSCantoTMII流式细胞仪或LSRFortessaTM(BD生物科学公司)上进行分析之前，将染色的细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤。使用FlowJoTM软件(BD生物科学公司)进行数据分析。
化合物的HbF诱导活性(表2)
将mPB CD34+细胞扩增6天，然后在化合物存在下使其红系分化7天。将细胞固定，染色并通过流式细胞术分析。表2示出了化合物的HbF诱导活性。HbF Amax＝在拟合的剂量响应曲线中HbF阳性染色细胞的最高百分比(％HbF+细胞)。DMSO处理的细胞的基线％HbF+细胞约为30％-40％。
表2：
实例133：用于shRNA和CRISPR测定的细胞培养
将HEK293T细胞维持在含有丙酮酸钠、非必需氨基酸、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL pen/strep、25mM HEPES的DMEM高葡萄糖完全培养基中。除非另有说明，否则所有用于培养HEK293T细胞的试剂均从InvitrogenTM获得。
在shRNA转导或靶向WIZ的靶向性核糖核蛋白(RNP)电穿孔之前，将动员的外周血(mPB)CD34+细胞(澳赛尔斯公司)维持在补充有各自50ng/mL的rhTPO、rhIL-6、rhFLT3L、rhSCF的StemSpanTM无血清扩增培养基(SFEM)(干细胞技术公司)中2-3天。所有细胞因子均从公司获得。将细胞培养物保持在37℃和5％CO2湿润的组织培养箱中。
靶向WIZ的shRNA慢病毒克隆的产生
针对WIZ的各自的shRNA的5’-磷酸化有义和反义互补单链DNA寡核苷酸由集成DNA技术公司(Integrated DNA Technologies，Inc.，IDT)合成。将每个DNA寡核苷酸设计为分别在5’-末端和3’-末端带有PmeI/AscI限制性突出端，以便随后相容性连接到慢病毒载体骨架中。通过在98℃在加热块上加热5分钟、随后在工作台上冷却至室温来将等摩尔的互补寡核苷酸在NEB缓冲液2(New England公司)中退火。使用T4 DNA连接酶试剂盒(新英格兰生物实验室)，将退火的双链DNA寡核苷酸连接到用PmeI/AscI消化的pHAGE慢病毒主链中。根据制造商的方案，将连接反应转化为化学感受态的Stbl3细胞(InvitrogenTM)。使用测序引物(5’-ctacattttacatgatagg-3’；SEQ ID NO：2)验证阳性克隆，并将质粒通过阿尔塔生物技术公司(Alta Biotech LLC)纯化。
根据制造商的说明(InvitrogenTM)，使用Lipofectamine 3000试剂以150mm组织培养皿形式，通过用表达pCMV-dR8.91和pCMV-VSV-G的包膜质粒共转染HEK293T细胞来生成相应shRNA构建体的慢病毒颗粒。共转染后48小时收获慢病毒上清液，通过0.45μm过滤器(密理博公司(Millipore))过滤，并使用带有Ultracel-100膜的Amicon Ultra 15(密理博公司)进行浓缩。连续稀释和感染HEK293T细胞后，使用eGFP表达作为转导标志物，通过流式细胞术确定每种慢病毒颗粒的感染单位。
shRNA序列如下：
shWIZ_#15’-AGCCCACAATGCCACGGAAAT-3’(SEQ ID NO：3)；
shWIZ_#25’-GCAACATCTACACCCTCAAAT-3’(SEQ ID NO：4)；
shWIZ_#45’-TGACCGAGTGGTACGTCAATG-3’(SEQ ID NO：5)；
shWIZ_#55’-AGCGGCAGAACATCAACAAAT-3’(SEQ ID NO：6)。
mPB CD34+细胞的慢病毒shRNA转导和FACS
mPB CD34+转导在retronectin包被的非组织培养物处理的96孔平底板(康宁公司(Corning，Inc.))上进行。简而言之，将板用100μL的(1μg/mL)(宝生物公司(TAKARABIO，Inc.))包被，密封并在4℃孵育过夜。然后去除/>并将板与PBS中的BSA(牛血清白蛋白)(1％)在室温下孵育30分钟。随后，将BSA(牛血清白蛋白)吸出并用100μL慢病毒浓缩液代替，并在室温下以2000xg离心2小时。接下来，轻轻吸取残留的上清液，准备进行mPB CD34+细胞的转导。将一万个细胞接种于150μL补充有各自50ng/mL的rhTPO、rhIL-6、rhFLT3L、rhSCF的StemSpanTM无血清扩增培养基(SFEM)中，以开始转导。将细胞培养72小时，然后使用eGFP表达作为标志物评估转导效率。
在FACSAriaTMIII(BD生物科学公司)上分选eGFP阳性细胞。简而言之，将转导的mPBCD34+细胞群洗涤，并用含1x Hank缓冲盐水溶液、EDTA(1mM)和FBS(2％)的FACS缓冲液重悬。分选的eGFP阳性细胞用于红系分化测定。
对WIZ进行靶向性CRISPR敲除
Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA和tracrRNA(5′-AGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU-3’；SEQ ID NO：7)购自集成DNA技术公司。通过使用聚合酶链式反应(PCR)机(伯乐公司(Bio-Rad))在95℃下加热5分钟，随后在操作台上冷却至室温将等摩尔的tracrRNA与靶向WIZ的crRNA(表3)在Tris缓冲液(10mM，pH 7.5)中退火。随后，通过将退火的tracrRNA：crRNA与6ug Cas9在37℃下在含HEPES(100mM)、KCl(50mM)、MgCl2(2.5mM)、甘油(0.03％)、DTT(1mM)和Tris pH 7.5(2mM)的1x缓冲液中混合5分钟来生成核糖核蛋白(RNP)复合物。
根据制造商的建议，在4D-NucleofectorTM(龙沙公司(Lonza))上进行RNP复合物的电穿孔。简而言之，将重悬于含有补充剂(龙沙公司)的原代细胞P3缓冲液中的50,000个mPBCD34+细胞与核比色皿中每孔5μL RNP复合物预混合，并在室温下孵育5分钟。随后，使用CM-137程序使混合物进行电穿孔。RNP电穿孔后将细胞培养72小时，然后开始红系分化。下表3中示出了crRNA序列。
表3.
shRNA转导的或RNP电穿孔的mPB CD34+细胞的红系分化
通过在96孔组织培养板中每孔接种8,000个RNP电穿孔的或FACS分选的eGFP+mPBCD34+细胞来开始红系分化。基础分化培养基由IMDM(伊斯科夫改良的杜尔贝科培养基)、人AB血清(5％)、转铁蛋白(330μg/mL)、胰岛素(10μg/mL)和肝素(2IU/mL)组成。分化培养基补充有rhSCF(100ng/mL)、rhIL-3(10ng/mL)、rhEPO(2.5U/mL)和氢化可的松(1μM)。分化4天后，使细胞在新鲜培养基中分裂(1：4)，以维持最佳生长密度。将细胞再培养3天，并用于评估胎儿血红蛋白(HbF)表达。
通过RNA-seq分析HbF基因表达
在mPB CD34+HSC中，使用WIZ_6和WIZ_18gRNA或非靶向加扰gRNA阴性对照对WIZ进行两次独立的靶向性CRISPR/Cas9敲除(KO)。然后将来自KO和阴性对照的细胞培养7天以进行红系分化并用于总RNA分离(Zymo研究公司(Zymo Research)，目录号R1053)。在测序前使用Agilent RNA 6000 Pico试剂盒(安捷伦公司(Agilent)，目录号5067-1513)确定分离的RNA的量。
使用Illumina TruSeq Stranded mRNA样品制备方案制备RNA测序文库，并使用Illumina NovaSeq6000平台(依诺米那公司(Illumina))进行测序。样品被测序为具有2x76个碱基对的长度。对于每个样品，使用salmon版本0.8.2(Patro等人2017；doi：10.1038/nmeth.4197)将测序片段映射到由ENSEMBL数据库提供的人参考基因组hg38中的注释转录本。通过使用tximport(Soneson等人2015；doi：10.12688/f1000research.7563.1)将转录本水平计数的计数相加来获得每个基因的表达水平。使用DESeq2来标准化文库大小和转录本长度差异，并测试用靶向WIZ的gRNA处理的样品与用加扰gRNA对照处理的样品之间的差异表达(Love等人2014；doi：10.1186/s13059-014-0550-8)。使用ggplot2(Wickham H(2016).ggplot2：Elegant Graphics for Data Analysis[ggplot2：用于数据分析的精美图表].Springer-Verlag New York[纽约施普林格出版社].ISBN 978-3-319-24277-4；https://ggPlot2.tidyverse.org)使数据可视化。
HbF细胞内染色
将十万个细胞等分到U型底96孔板中，并根据制造商的建议(英杰公司(Invitrogen))，在黑暗中用稀释的LIVE/DEAD可固定紫色活力染料染色20min。将细胞用FACS染色缓冲液洗涤，随后在黑暗中用抗CD71-BV711(BD生物科学公司)和抗CD235a-APC(BD生物科学公司)染色20min。在用三倍体积的1x PBS洗涤两轮后，在室温在黑暗中，将细胞用1X BD Cytofix/Cytoperm(BD生物科学公司)固定并透化30分钟。随后，将细胞用三倍体积的1x Perm/wash缓冲液(BD生物科学公司)洗涤两次。将抗HbF-FITC(赛默科技公司(ThermoScientific))在1x perm/wash缓冲液中稀释(1∶25)，添加到透化细胞中并在室温在黑暗中孵育30分钟。接下来，将细胞用三倍体积的1x perm/wash缓冲液洗涤两次，并使用LSR Fortessa(BD生物科学公司)通过流式细胞术进行分析。使用FlowJo软件分析数据。
结果
WIZ KO在红系分化时上调HBG1/2表达
使用两个独立的gRNA(WIZ_6和WIZ_18)对WIZ进行靶向KO显示出胎儿血红蛋白基因(HBG1/2)上调，如图1A所示。
WIZ的缺失诱导胎儿血红蛋白在mPB CD34+源性红系细胞中表达
为了验证WIZ是否为HbF表达的负调节物，采用了shRNA和CRISPR-Cas9介导的敲低和敲除功能遗传学方法。将mPB CD34+细胞用shRNA或CRISPR-Cas9试剂处理并使其红系分化7天，然后进行流式细胞术分析。靶向敲低WIZ转录物导致78％-91％的HbF+细胞，相比之下，阴性对照加扰的shRNA导致40％的HbF+细胞。误差条代表两个生物学重复的标准误差，每个生物学重复具有三个技术重复(图1B)。CRISPR/Cas9介导的WIZ的靶向缺失导致62％-88％的HbF+细胞，相比之下，随机导向的crRNA导致39％的HbF+细胞。误差条代表一种生物样品的标准误差，该生物样品具有四个技术重复(图1C)。总而言之，结果表明WIZ的缺失在人原代红系细胞中诱导了HbF。因此，锌指转录因子宽间隔锌指基序(WIZ)被确定为进行HbF诱导的新靶点。这些数据提供了遗传证据，即证明WIZ是胎儿血红蛋白表达的调节剂，并且是治疗镰状细胞病和β-地中海贫血的新靶点。
已经如此描述了几个实施例的几个方面，应理解，本领域技术人员将容易想到各种改变、修改和改进。此类改变、修改和改进旨在成为本披露内容的一部分，并且旨在落入本披露内容的精神和范围内。因此，前述的说明书和附图仅是举例来说。
本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验就确定本文具体描述的具体实施例的许多等效物。此类等效物旨在被涵盖于以下权利要求的范围内。
序列表
<110> 诺华股份有限公司（NOVARTIS AG）
<120> 苯并异噁唑衍生物及其用途
<130> PAT059043-US-PSP02
<140> 63/164,125
<141> 2021-03-22
<160> 14
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
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<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成肽"
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<400> 6
agcggcagaa catcaacaaa t 21
<210> 7
<211> 67
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 7
agcauagcaa guuaaaauaa ggcuaguccg uuaucaacuu gaaaaagugg caccgagucg 60
gugcuuu 67
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 8
acggaggcta agcgtcgcaa 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 9
aacatctttc gggccgtagg 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 10
gacatccgct gcgagttctg 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 11
tgcagcgtcc cgggcagagc 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 12
caagccgtgc ctcatcaaga 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 13
cgggcacacc tgcggcagtt 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成寡核苷酸"
<400> 14
agtgggtgcg gcacttacag 20

Claims (79)

1.一种具有式(I”)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N；
Y选自CH2、CRYR2和N-R3；
Z选自CH2、CRYR2和N-R3，
其中Y和Z中的至少一个是N-R3，使得当Y是N-R3时，Z选自CH2和CRYR2，并且当Z是N-R3时，Y选自CH2和CRYR2，
并且其中当Y或Z的CRYR2的R2是氧代时，RY不存在；
Rx选自氢、C1-C6烷基、卤代(例如F、Cl)、C1-C6烷氧基和C3-C8环烷基；
RY选自氢和C1-C6烷基，
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢，C1-C8烷基，C2-C6烯基，-SO2R4，C1-C6卤代烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，C3-C10环烷基，-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、NR7R8和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢、C3-C8环烷基和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，其中Y选自CH2和CRYR2、例如CHR2，并且Z是N-R3。
3.根据权利要求1和2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，其中Rx选自氢、C1-C6烷基、和卤代(例如F、Cl)。
4.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、前药、立体异构体、或互变异构体，其中Rx是氢。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(I’)，其中：
是单键或双键；
X选自CH、CF和N：
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(I)，其中：
X选自CH、CF和N；
R’选自氢和C1-C6烷基；
R1选自氢和C1-C6烷基；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基、-C(＝O)-O-(R5)和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1选自氢和C1-C3烷基；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R3选自氢、C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个选自N和O的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自氯、氟、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2或3；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基和卤代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成C1-C2亚烷基桥环；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
或者
R3与其所附接的氮原子以及R2与其所附接的碳原子一起形成包含0-1个另外的O杂原子的5元或6元杂环基；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；
n是0、1、2或3，例如n是0、1或2；
m是0、1或2，例如m是1或2；并且
p是0或1。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C6烷基和氟；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代，并且所述C1-C6卤代烷基被0-1次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C8环烷基，包含1-2个独立地选自N和O的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至6元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C8环烷基、4元至6元杂环基、5元至6元杂芳基和苯基被0-3次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
n是0、1或2；
m是1或2；并且
p是0或1。
10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地是C1-C6烷基；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和未经取代的C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C6环烷基，包含1个O杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至6元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C6环烷基、4元至6元杂环基、5元至6元杂芳基和苯基被0-2次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基、C1-C6烷基和苯基，例如R4是C1-C6烷基；
n是0、1或2；
m是1或2；并且
p是1。
11.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R’是氢；
R1是氢；
每个R2独立地选自未经取代的C1-C3烷基；
R3选自C1-C6烷基、-SO2R4和未经取代的C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C6烷基被0-2次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C6环烷基、包含1个O杂原子的4元至6元杂环基、包含1-2个N杂原子的6元杂芳基、以及苯基，其中所述C3-C6环烷基、4元至6元杂环基、6元杂芳基和苯基被0-2次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自氯、氟、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷基；
R4是C1-C6烷基；
n是0、1或2；
m是1；并且
p是1。
12.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ia)：
13.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ib)：
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ic)，其中：
X选自CH、C-F和N；
R2b选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基和卤代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2c选自氢和C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
或者R2b和R2c与它们所附接的碳原子一起形成氧代基团；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；并且
R3是根据前述权利要求中任一项所定义的。
15.根据权利要求14所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b选自氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和卤代；
R2c选自氢和C1-C3烷基；
R2d和R2e各自独立地选自氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基和卤代；
R2f是氢；
或者R2b和R2e或者R2b和R2f与它们所附接的碳原子一起形成C1-C2亚烷基桥环；
R3选自C1-C8烷基、C2-C6烯基、-SO2R4、C1-C6卤代烷基和-C(＝O)-(R6)，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，C6-C10芳基，C1-C6烷氧基，羟基和-C(＝O)-NR7R8，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和C6-C10芳基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R6选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基和C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R6a取代，并且所述C3-C8环烷基被0-1次出现的R6b取代；
R6a选自C6-C10芳基和C3-C8环烷基；
R6b选自卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；并且
m是1或2。
16.根据权利要求14和15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b、R2c、R2d和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；
R2f是氢；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基和C1-C6卤代烷基独立地被0-3次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C10环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-4个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C10环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-4次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自C1-C6烷氧基、卤代、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基、-CN、-SO2NR7R8、-SO2R4和羟基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；
R7选自氢和C1-C6烷基；
R8选自氢和C1-C6烷基；
或者
R7和R8与它们所附接的氮原子一起形成包含0-1个选自N、O和S的另外的杂原子的5元或6元杂环基；并且
m是1或2。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
X选自CH和N；
R2b、R2d和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；
R2c是氢；
R2f是氢；
R3选自C1-C8烷基、-SO2R4和C1-C6卤代烷基，其中所述C1-C8烷基被0-2次出现的R3a取代，并且所述C1-C6卤代烷基被0-1次出现的R3a取代；
每个R3a独立地选自C3-C8环烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，包含1-3个独立地选自N、O和S的杂原子的5元至10元杂芳基，以及苯基，其中所述C3-C8环烷基、4元至6元杂环基、5元至10元杂芳基和苯基被0-3次出现的R3b取代；
每个R3b独立地选自卤代、C1-C6卤代烷基和C1-C6烷基；
R4选自C3-C8环烷基，C1-C6烷基，包含1-2个独立地选自N、O和S的杂原子的4元至6元杂环基，以及C6-C10芳基，例如R4是C1-C6烷基，
其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R4a取代；
R4a选自C3-C8环烷基、C6-C10芳基和C1-C6烷氧基；并且
m是1。
18.根据权利要求1至12和14至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Id)，
其中R2b、R2c和R2e是根据权利要求14至17中任一项所定义的。
19.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ie)，
其中R2b、R2c和R2e是根据权利要求14至17中任一项所定义的。
20.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是CH。
21.根据权利要求1至13和20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是未经取代的C1-C6烷基并且n是1。
22.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中m是1。
23.根据权利要求1至12、14至18和20至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是C1-C6烷基，其中所述C1-C6烷基被1次出现的R3a取代。
24.根据权利要求1至12、14至18和20至23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自甲基、乙基、正丙基、异丙基和-CH2-(CH2)0-1-R3a。
25.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a是C3-C7环烷基，其中所述C3-C7环烷基被0-4次出现的R3b取代，其中每个R3b独立地选自氯、氟、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6烷基。
26.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a是C4-C7环烷基，其中所述C4-C7环烷基被0-2次出现的氟取代。
27.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3a选自环丙基、环丁基、环己基和
28.根据权利要求14至20和22至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b和R2e各自独立地选自氢和未经取代的C1-C3烷基；并且R2c是氢。
29.根据权利要求14至20和22至28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b和R2e各自独立地选自氢和甲基；并且R2c是氢。
30.根据权利要求14至20和22至28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R2b是未经取代的C1-C3烷基(例如甲基)；
R2c是氢；并且
R2e选自氢和未经取代的C1-C3烷基。
31.根据权利要求14至20和22至30中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2b是甲基并且R2c、R2d、R2e和R2f都是氢。
32.根据权利要求1至13和20至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是未经取代的C1-C3烷基并且n是1。
33.根据权利要求1至5、7至11、20至27和32中任一项所述的化合物，其中是双键。
34.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中是单键。
35.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
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36.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐是酸加成盐。
37.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
38.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物使用。
39.一种治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
40.一种治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
41.一种治疗受WIZ蛋白水平调节影响的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的患者施用根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
42.一种抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
43.一种降解有需要的受试者的WIZ蛋白的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
44.一种抑制、降低或消除WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
45.一种诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
46.一种重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
47.一种增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
48.一种治疗有需要的受试者的血红蛋白病、例如β-血红蛋白病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
49.一种治疗有需要的受试者的镰状细胞病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
50.一种治疗有需要的受试者的β-地中海贫血的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
51.一种用于降低受试者中WIZ蛋白水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
52.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的疾病或障碍中使用。
53.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗选自镰状细胞病和β-地中海贫血的疾病或障碍中使用。
54.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平抑制影响的障碍中使用。
55.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防有需要的受试者的受WIZ蛋白水平降低影响的障碍中使用。
56.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防受WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍中使用。
57.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在抑制、降低或消除有需要的受试者的WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达中使用。
58.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在诱导或促进有需要的受试者的胎儿血红蛋白中使用。
59.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在重新激活有需要的受试者的胎儿血红蛋白产生或表达中使用。
60.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在增加有需要的受试者的胎儿血红蛋白表达中使用。
61.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的血红蛋白病中使用。
62.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的镰状细胞病中使用。
63.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗有需要的受试者的β-地中海贫血中使用。
64.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白表达增加影响的疾病或障碍中使用。
65.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受WIZ蛋白活性或WIZ蛋白表达抑制、降低、或消除影响的疾病或障碍中使用。
66.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白诱导或促进影响的疾病或障碍中使用。
67.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗受胎儿血红蛋白产生或表达重新激活影响的疾病或障碍中使用。
68.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在抑制有需要的受试者的WIZ蛋白表达中使用。
69.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在降解有需要的受试者的WIZ蛋白中使用。
70.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受WIZ蛋白水平降低、WIZ蛋白表达抑制或WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍的药物中的用途。
71.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受诱导或促进胎儿血红蛋白影响的疾病或障碍的药物中的用途。
72.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受重新激活胎儿血红蛋白产生或表达影响的疾病或障碍的药物中的用途。
73.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗受增加胎儿血红蛋白表达影响的疾病或障碍的药物中的用途。
74.根据权利要求70至73中任一项所述的化合物的用途，其中所述疾病或障碍选自镰状细胞病和β-地中海贫血。
75.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗受WIZ蛋白水平降低、WIZ蛋白表达抑制或WIZ蛋白降解影响的疾病或障碍中的用途。
76.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在治疗受诱导胎儿血红蛋白、重新激活胎儿血红蛋白产生或表达或者增加胎儿血红蛋白表达影响的疾病或障碍中的用途。
77.根据权利要求75或76所述的用途，其中所述疾病或障碍选自镰状细胞病和β-地中海贫血。
78.一种药物组合，所述药物组合包含根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种另外的治疗剂。
79.一种具有式(X-1)的化合物或其盐，
其中：
X选自CH、CF和N；
Y选自CH2、CRYR2和N-RN；
Z选自CH2、CRYR2和N-RN；
其中Y和Z中的至少一个是N-RN，使得当Y是N-RN时，Z选自CH2和CRYR2，并且当Z是N-RN时，Y选自CH2和CRYR2，
并且其中当Y或Z的CRYR2的R2是氧代时，RY不存在；
RY选自氢和C1-C6烷基；
RN选自氢和氮保护基团(例如叔丁基氧基羰基(Boc))；
每个R2独立地选自C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、卤代和氧代，其中所述C1-C6烷基被0-1次出现的R2a取代；或者不相邻碳原子上的2个R2与它们所附接的不相邻碳原子一起形成桥环；
R2a选自C1-C6烷氧基和羟基；
n是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；并且
p是0或1。
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