CN116925984A - 一株解淀粉芽孢杆菌yhj32及其复合益生菌制剂和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌YHJ32及其复合益生菌制剂和应用，属于微生物技术领域。所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32保藏编号为CCTCC NO：M 2023849，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述复合益生菌制剂包括活菌量不低于5.00×107 CFU/g的解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉、活菌量不低于3.00×107 CFU/g的鼠李糖乳杆菌菌粉、活菌量不低于2.00×107 CFU/g的乳酸片球菌菌粉和载体。所述复合益生菌制剂能显著降解亚硝酸盐，为解决动物养殖过程中由亚硝酸盐浓度偏高造成的动物中毒现象提供了有效的手段，可在水域治理、水产养殖及发酵饲料中广泛应用。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌YHJ32及其复合益生菌制剂和应用。
背景技术
近年来，随着水产养殖业的发展，养殖密度不断提高，超量放养和集中投饵导致了养殖水体中积累了大量的饲料残饵和水产动物的粪便，这些蛋白含量高的有机物沉积于养殖水体底部，被有害细菌利用导致腐败发酵，因此，水体中产生了大量的氨氮、亚硝酸盐等有害物质，尤其是高浓度的亚硝酸盐不仅可直接导致水产动物发生中毒现象，而且还会大大降低养殖动物的机体免疫力，增加了养殖动物的发病几率，给养殖户造成了严重经济损失，严重制约了水产养殖业的发展。
养殖动物亚硝酸盐中毒原理为水体中亚硝酸盐通过生物的呼吸进入血液，将红血球中的血红蛋白转化为高铁血红蛋白，使血球不能和氧结合，丧失运输氧气的能力，使各组织缺氧导致氧输送功能瘫痪，导致养殖动物神经麻痹，甚至窒息死亡。因此，如何控制或降解水体中亚硝酸盐成为了水产养殖行业亟待解决的一个难题。
目前有效去除亚硝酸盐的方法有化学降解法、物理吸附法及生物降解法。化学方法降解效率高，但是维持时间短且会产生二次污染；物理方法以吸附为主，用量大且应用范围窄；生物降解法安全无污染，但目前行业内主要采用硝化细菌和反硝化细菌，还未有以解淀粉芽孢杆菌、鼠李糖乳杆菌和乳酸片球菌组合的复合益生菌可有效降解亚硝酸盐的应用。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺陷和不足，本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌YHJ32及其复合益生菌制剂和应用。所述复合益生菌制剂能有效降解亚硝酸盐，可在水域治理、水产养殖及发酵饲料中广泛应用。
为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌YHJ32，其分类名为Bacillus amyloliquefaciens，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2023849。
进一步的，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明还提供了一种复合益生菌制剂，其中包含所述的解淀粉芽孢杆菌YHJ32的菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉、乳酸片球菌菌粉和载体。
进一步的，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉、乳酸片球菌菌粉的质量比为1-6:1-5:1-5。
进一步的，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉的活菌含量不低于5.00×107 CFU/g；所述鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌含量不低于3.00×107 CFU/g；所述乳酸片球菌菌粉的活菌含量不低于2.00×107 CFU/g；所述载体的含量不低于500mg/g。
进一步的，所述鼠李糖乳杆菌菌粉是由鼠李糖乳杆菌NSL0401经培养、发酵、离心、冷冻干燥后得到的；所述乳酸片球菌菌粉是由乳酸片球菌NSS0302经培养、发酵、离心、冷冻干燥后得到的。
进一步的，所述载体为葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖中的至少一种，其80目筛上物为0。
本发明还提供了所述的复合益生菌制剂在降解水体亚硝酸盐中的应用。
进一步的，所述复合益生菌制剂的用量为0.2-1.2g/m3水体；在应用时，所述复合益生菌制剂能够直接对水体进行均匀喷洒或者用其质量10-50倍的水溶制成菌液后，在对水体进行均匀喷洒。
本发明还提供了所述的复合益生菌制剂在制备动物养殖的饲料添加剂中的应用。
进一步的，将所述复合益生菌制剂以1‰-5‰的质量比混入动物养殖饲料中，搅拌均匀后，发酵24-72h饲喂动物。
进一步的，所述动物为南美白对虾。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益技术效果：
1、本发明选用的解淀粉芽孢杆菌YHJ32筛选自健康养殖池塘，能够产生蛋白酶，可将饲料中大分子蛋白质分解为小分子肽，被养殖动物充分吸收利用，减少了粪便中蛋白残留量，降低了亚硝酸盐的产生。
2、本发明选用的鼠李糖乳杆菌NSL0401筛选自传统泡菜，选用的乳酸片球菌NSS0302筛选自传统农家发酵豆豉，生长繁殖速度快，且大量分泌乳酸等代谢产物，可有效降解亚硝酸盐。
3、本发明的复合益生菌制剂是利用上述三种菌株经发酵、喷干或冻干制备的菌粉与载体混合制成的，其成分简单安全，经实验验证，其能够显著降解亚硝酸盐，改善养殖过程中养殖动物亚硝酸盐中毒现象，再加上三种菌株的协同作用，经其发酵后的饲料在养殖过程中应用也可有效降低亚硝酸盐的产生。
附图说明
图1为解淀粉芽孢杆菌YHJ32 的平板培养照片；
图2为解淀粉芽孢杆菌YHJ32 的菌体镜检照片；
图3为亚硝酸盐标准曲线；
图4为复合益生菌制剂降解亚硝酸盐效果；
图5为复合益生菌制剂发酵饲料降低亚硝酸盐产生的效果。
具体实施方式
结合以下具体实例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。
实施例1、解淀粉芽孢杆菌YHJ32 的分离和鉴定
1、分离筛选
以来源于6份江苏省如东县健康对虾养殖池塘水样为样品。将多份水样按 10%的体积分别接种到LB 液体培养基中，37℃培养 20-24h，无菌试管中加入1.0 mL菌液和9.0mL 0.85%无菌生理盐水，稀释成浓度为10-1 的菌液，重复上述操作依次将菌液稀释成浓度为 10-2、10-3、10-4 、10-5 四个梯度，用无菌吸管各吸取 0.1 mL的 10-3、10-4 、10-5 三个浓度梯度的菌液涂于 LB固体培养基上，每个浓度梯度做 3 个平行试验，37℃静置培养 20-24 h。进行菌落形态观察，挑选不同形态的单菌落再次于 MRS 固体培养基上划线分离，37℃下培养 20-24h，重复划线分离 3 代，得到纯化后菌株，进行革兰氏染色并显微镜观测，挑选出革兰氏染色阳性，显微镜观测菌落不透明、表面粗糙、污白色、边缘毛发状的菌株。在筛选得到的多种菌株中进一步筛选得到一株编号为YHJ32的菌株。
2、形态学观察
（1）将菌株YHJ32 接种于 LB 固体平板上，37℃恒温培养 20-24h，观察菌落形态特征。结果见图1，菌株 YHJ32 的菌落不透明、表面粗糙、污白色、边缘毛发状。
（2）取菌株 YHJ32 的典型菌落涂片，用革兰氏染色法进行染色，显微镜下观察菌体形态。结果见图2，菌株YHJ32呈革兰氏阳性，菌体呈现椭圆或柱状，革兰氏阳性，好氧，产芽孢。
2、菌株的16S rRNA鉴定
提取菌株 YHJ32 的 DNA 作为模板，利用细菌 16S rRNA 通用引物进行扩增，扩增片段送至生物公司进行序列测定，测序结果如 SEQ ID No.1 所示。BLAST比对结果表明，菌株YHJ32 与Bacillus amyloliquefaciens 的序列相似性最高，因此，判断菌株 YHJ32为解淀粉芽孢杆菌。
将筛选到的解淀粉芽孢杆菌YHJ32进行菌种保藏，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32的保藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC）；地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2023年05 月 29 日；解淀粉芽孢杆菌YHJ32 Bacillus amyloliquefaciensYHJ32 的保藏编号为CCTCC NO：M 2023849。
实施例2、复合益生菌制剂的制备
复合益生菌制剂包括：活菌含量不低于5.00×107 CFU/g的解淀粉芽孢杆菌YHJ32；活菌含量不低于3.00×107 CFU/g的鼠李糖乳杆菌NSL0401（来自专利：2021106221046）；活菌含量不低于2.00×107 CFU/g的乳酸片球菌NSS0302（来自专利：2023102343679）；载体葡萄糖、麦芽糊精以1:1的质量比混合后的含量不低于500mg/g。
复合益生菌制剂的制备步骤为：
（1）将上述解淀粉芽孢杆菌YHJ32于LB固体平板上划线，37℃培养24h，然后挑取单菌落接种于LB液体培养基中，37℃培养24 h；菌液再以3%的接种量接种至2 L的LB液体培养基中，37℃培养24 h，培养至对数期，经压力式喷雾干燥塔喷干后，得到解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉。
（2）将鼠李糖乳杆菌NSL0401和乳酸片球菌NSS0302菌株分别于改良MRS固体平板上划线，37℃培养48h，然后挑取单菌落接种于改良MRS液体培养基中，37℃培养16 h；菌液再以3%的接种量接种至2 L的改良MRS液体培养基中，37℃培养16 h，培养至对数期；菌悬液在4℃下，12000r/min，离心10 min，弃去上清液，收集菌体；菌体用超纯水洗涤3次，离心后得到菌泥；菌泥用12%的脱脂乳溶液重悬，经真空冷冻干燥冻干后，分别得到鼠李糖乳杆菌NSL0401菌粉和乳酸片球菌NSS0302菌粉。
（3）将解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉、鼠李糖乳杆菌NSL0401菌粉、乳酸片球菌NSS0302以4:3:3的质量比进行混合后，再混入含量不低于500 mg/g的载体葡萄糖和麦芽糊精，最终制得复合益生菌制剂。
实施例3、复合益生菌制剂在水体降亚硝酸盐中的应用
复合益生菌制剂在使用时，先将复合益生菌制剂用10-50倍水溶制成菌液，再以复合益生菌制剂的用量，即0.2-1.2g/m3体积比对水体进行均匀喷洒。
将复合益生菌制剂1kg添加到50L水中，溶解混匀制成活菌菌液备用。
将养殖南美白对虾的小棚水体分为三个组别，分别为对照组、试验一组、试验二组，对照组不添加任何益生菌制剂，试验一组将上述活菌菌液按照25ml/m3用量对水体进行均匀喷洒，试验二组将上述活菌菌液按照60ml/m3用量对水体进行均匀喷洒，每个组别设3个重复，72h后检测亚硝酸盐的含量，并记录结果，计算降解率。
亚硝酸盐标准曲线绘制：
（1）亚硝酸钠标准溶液制备：准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度后混匀。
亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取2.50 mL亚硝酸钠标准溶液，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度后混匀。
（2）绘制标准曲线：吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液，分别置于50 mL比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL 4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀静置5min，再加入1 mL 2 g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀静置15min，于波长 538nm 处测吸光度，绘制标准曲线。标准曲线见图3。
亚硝酸盐检测方法：每个组别每个重复各取40 mL养殖用水，置于50 mL比色管中，加入2 mL 4 g/L的对氨基苯磺酸溶液，混匀静置5min，然后加入1 mL 2 g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀静置15 min，于波长 538 nm 处测吸光度。
其中，4 g/L的对氨基苯磺酸溶液制备：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL 20%盐酸中，混匀，置棕色瓶。
2 g/L盐酸萘乙二胺溶液制备：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶。
结果如图4所示，可以看出，试验二组亚硝酸盐降解率为82.65%，试验一组亚硝酸盐降解率为65.72%，试验二组亚硝酸盐降解率要优于试验一组，由此可见，复合益生菌制剂对于亚硝酸盐具有显著的降解效果，并且在一定范围内降解率与菌量高低呈正相关。
实施例4、复合益生菌制剂发酵饲料改善水体亚硝酸盐含量的应用
发酵饲料制备：将1kg复合益生菌制剂添加至1000kg饲料原料中，饲料原料由豆粕、麸皮、玉米粉按照1-5:1-3:1-6的比例组成，添加适量水分调整最终含水量在35%-50%之间，混合均匀后30-35℃恒温密封发酵24-72h，发酵后密封保存备用。
将养殖南美白对虾的小棚分为二个组别，分别为对照组、试验组，在同等养殖条件下，对照组饲喂常规饲料，试验组饲喂添加了5-10%发酵饲料的常规饲料，每个组别设3个重复，每隔24 h检测一次亚硝酸盐的含量，连续监测3天，并记录结果。
从图5可以看出，试验组的亚硝酸盐的含量显著低于对照组，由此可见，经过复合益生菌制剂发酵后的饲料对于养殖过程中亚硝酸盐的产生具有显著的降低效果。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一株解淀粉芽孢杆菌YHJ32，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32的分类名为Bacillus amyloliquefaciens，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2023849。
2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌YHJ32，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种复合益生菌制剂，其特征在于，所述复合益生菌制剂中包含权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌YHJ32的菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉、乳酸片球菌菌粉和载体。
4.根据权利要求3所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉、鼠李糖乳杆菌菌粉、乳酸片球菌菌粉的质量比为1-6:1-5:1-5。
5.根据权利要求3所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌YHJ32菌粉的活菌含量不低于5.00×107 CFU/g；所述鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌含量不低于3.00×107 CFU/g；所述乳酸片球菌菌粉的活菌含量不低于2.00×107 CFU/g；所述载体的含量不低于500mg/g。
6.复合益生菌制剂在降解水体亚硝酸盐中的应用，其特征在于，所述复合益生菌制剂为权利要求3所述的复合益生菌制剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述复合益生菌制剂的用量为0.2 g/m3-1.2g/m3水体；在应用时，所述复合益生菌制剂能够直接对水体进行均匀喷洒或者用其质量10-50倍的水溶制成菌液后，在对水体进行均匀喷洒。
8.复合益生菌制剂在制备动物养殖的饲料添加剂中的应用，其特征在于，所述复合益生菌制剂为权利要求3所述的复合益生菌制剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将所述复合益生菌制剂以1‰-5‰的质量比混入动物养殖饲料中，搅拌均匀后，发酵24-72h饲喂动物。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述动物为南美白对虾。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017074485A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Z Probiotics Inc. Dba Z Bioscience Inc. | Probiotic compositions and uses thereof |
| CN109837230A (zh) * | 2019-04-17 | 2019-06-04 | 中国科学院水生生物研究所 | 解淀粉芽孢杆菌y1711、培养方法及其应用 |
| CN111172058A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-05-19 | 江南大学 | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN113549567A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-10-26 | 青岛诺森生物技术有限责任公司 | 一株具有促排便功能的鼠李糖乳杆菌nsl0401及其应用 |
| CN116179443A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-05-30 | 青岛诺森生物技术有限责任公司 | 一株缓解便秘的乳酸片球菌nss0302及其应用 |
-
2023
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017074485A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Z Probiotics Inc. Dba Z Bioscience Inc. | Probiotic compositions and uses thereof |
| CN109837230A (zh) * | 2019-04-17 | 2019-06-04 | 中国科学院水生生物研究所 | 解淀粉芽孢杆菌y1711、培养方法及其应用 |
| CN111172058A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-05-19 | 江南大学 | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN113549567A (zh) * | 2021-06-04 | 2021-10-26 | 青岛诺森生物技术有限责任公司 | 一株具有促排便功能的鼠李糖乳杆菌nsl0401及其应用 |
| CN116179443A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-05-30 | 青岛诺森生物技术有限责任公司 | 一株缓解便秘的乳酸片球菌nss0302及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 曹海鹏 等: ""具有降解亚硝酸盐活性的解淀粉芽孢杆菌的分离与安全性分析"", 《环境污染与防治》, vol. 35, no. 6, pages 16 - 21 * |
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