CN116920001A - 一种降低高尿酸的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种包含枫香油的中药组合物及其制备方法，所述枫香油具有抑制黄嘌呤氧化酶的作用，具有良好的降低尿酸的功能，将其制备为胶囊剂可以防止枫香油挥发，长期稳定地保持其活性。

Description

一种降低高尿酸的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体为一种降低高尿酸的中药组合物及制备方法。

背景技术

痛风是一种常见代谢病,即嘌呤合成代谢增强和(或)尿酸排泄减少，从而导致血液中尿酸的浓度升高的现象。近年来的统计结果表明，在所有年龄段痛风的患病率为0.84％。

目前临床上抗痛风药物以西药为主，主要为炎症干扰药及降尿酸药两大类，前者药物包括秋水仙碱、非甾体抗炎药、肾上腺皮质激素类，后者包括尿酸促排药、抑制尿酸生成类。体内尿酸的生成与嘌呤代谢有关，在嘌呤代谢的最后阶段，黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XO)的作用下生成尿酸，抑制XO的活性可以有效的减少尿酸的生成，例如，别嘌呤醇(allopurinol)可抑制黄嘌呤氧化酶的活性，从而减少尿酸的生成。虽然这些药物可有效减少尿酸生成,但是临床使用发现这类药不良反应较多，常见恶心、呕吐、腹泻、过敏反应、肝肾损害等。中药治疗痛风也有报道、如草解、虎杖、参三七、黄柏、防己、黄茂等，但都是临床老中医配方使用，以清热祛风、除湿通痹作用为主，作用机理不清，疗效不佳。因此医生在临床用药方面可选择性很小。中成药在市场上暂时开发相对较少。

枫香油为枫香树(Liquidambar formosana Hance，金缕梅科、枫香树属植物)的枫香树脂(又称之为枫香脂、白胶香、云香等)中的挥发性油，主要成分包括烯烃类化合物。可以用来制香，或者作为生物燃料，由于其可挥发性，在医药领域的用途涉及比较少。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明利用现代中药的提取纯化技术，从中药原药材中提取得治疗痛风的有效部分制成合适的制剂。具体的，

本发明第一方面，提供一种枫香油在抑制黄嘌呤氧化酶活性中的用途。

本发明第二方面，提供一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，所述抑制剂包括枫香油。

本发明第三方面，提供一种枫香油的制备方法，所述制备方法包括：从枫香树脂中提取挥发油。

优选的，所述制备方法包括：

1)将枫香树脂进行超声波溶解；

2)将溶解后的枫香树脂膜过滤；

3)过滤后的滤液减压蒸馏；

4)共沸蒸馏，制备枫香油。

更优选的，所述步骤1)包括将枫香树脂溶于乙醇，超声波溶解，枫香树脂：乙醇重量比为1:(1-3)；搅拌时间30-40min，超声时间50-70min。

更优选的，所述步骤2)包括膜过滤速度为20-40kg/min。

更优选的，所述步骤3)包括在-0.04Mpa～0.05Mpa下减压，温度90℃～110℃；

更优选的，所述步骤4)包括-0.04Mpa～0.05Mpa下，温度：100℃～110℃共沸蒸馏。

本发明第四方面，提供一种枫香油在制备中药组合物中的用途，所述中药组合物用于抑制抑制黄嘌呤氧化酶活性。

优选的，所述中药组合物可用于治疗嘌呤代谢异常有关的疾病。更优选的，所述嘌呤包括黄嘌呤。进一步优选的，所述嘌呤代谢异常导致尿酸增加。

更优选的，所述疾病包括尿酸异常相关的疾病，进一步优选的，所述疾病包括高尿酸血症(hyperuricemia，HUA)、以及高尿酸血症引起的其他系统的疾病，包括例如：痛风、肾功能损伤、甲状腺功能损伤、高血压、冠心病、动脉硬化、心衰、肺动脉高压、糖尿病、脑卒中等等。

本发明第五方面，提供一种中药组合物，所述中药组合物包括枫香油。

优选的，所述枫香油重量份为25-80％。

优选的，所述中药组合物为任意的剂型，例如，口服剂、注射剂等等；更优选的，所述中药组合物为适合口服的剂型，包括，例如，胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、片剂、散剂、冲剂、口服液、汤剂等剂型。

进一步优选的，所述中药组合物为胶囊剂，更为优选的，所述胶囊为微胶囊或者软胶囊。更优选的的，所述中药组合物包括将包含枫香油的微胶囊剂进一步制备为其他剂型，例如片剂、颗粒剂、散剂、冲剂等等。

优选的，所述中药组合物包括药用辅料。更优选的，所述辅料包括制备上述任一剂型的辅料。所述辅料重量份为20-75％。

更优选的，所述枫香油和辅料的重量份，根据不同剂型进行调整，所述枫香油为25-80％范围中的任意数值或任意范围，例如28％、30％、35％、40％、45％、49％、50％、55％、60％、 65％、70％、75％、78％、80％等等；所述药用辅料为20-75％中的任意数值或任意范围，例如 22％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％等等。

例如：在微胶囊中枫香油重量份为25％-60％，可以是上述范围中的任意数值或任意范围，例如28％、30％、35％、40％、45％、49％、50％、55％、60％等等，而所述辅料重量份为40％-75％范围中的任意数值或任意范围，例如：40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％等等。

又如，在软胶囊中，所述枫香油重量份为60％-80％，更优选为65％-78％、68％-75％、 70％-80％、70％-78％、72％-72％等等，而所述辅料重量份为20％-40％范围中的任意数值或任意范围，例如：22％-35％、25％-32％、28％-35％、30％-40％、32％-38％等等。

或者根据其它剂型调整枫香油和药用辅料的重量份。

优选的，所述中药组合物包括微胶囊辅料，所述微胶囊辅料包括壁材、填充剂、水溶性乳化剂。

进一步优选的，所述壁材为阿拉伯胶和明胶的混合物，更为优选的，所述阿拉伯胶质量分数1-2份，明胶质量分数2-3份；枫香油的添加量为壁材质量的3-6倍。

进一步优选的，所述填充剂为低聚异麦芽糖、蔗糖、葡萄糖中的任意一种或者多种；更为优选的，所述枫香油添加量为填充剂质量的2-5倍；

进一步优选的，水溶性乳化剂为聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚山梨酯-80中的任意一种或者多种，更为优选的，所述水溶性乳化剂添加量为枫香油质量的0.4-10％；

优选的，所述辅料包括制备非胶囊剂型的其它辅料，例如硫酸钙、麦芽糖、羧甲基淀粉钠、预胶化淀粉、羟丙甲纤维素、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁等中的一种或者多种。

优选的，所述中药组合物包括枫香油微胶囊40％-85％、其它辅料15％-60％。

更优选的，所述枫香油微胶囊为40％-85％范围中的任意数值或任意范围，例如：40％-80％、 45％-75％、50％-70％、55％-60％、75％-85％等等。

更优选的，所述其它辅料为15％-60％范围中的任意数值或任意范围，例如15％-25％、 15％-60％、20-55％、25％-55％、30％-50％、40％-45％等等。

优选的，所述中药组合物包括软胶囊辅料，更优选的，所述软胶囊辅料包括胶料，增塑剂、水。更优选的，所述软胶囊辅料还包括附加剂、遮蔽剂、调味剂、防腐剂等等。

进一步优选的，所述胶料包括明胶、所述增塑剂包括大豆油、甘油、山梨醇中的一种或者多种。更为优选的，所述增塑剂包括大豆油。

优选的，所述明胶：增塑剂：水的比例为100：(30-40)：(140-160)，更优选的，所述明胶：增塑剂：水的比例可以是上述范围的任意比例或者任意范围，例如为100：(32-38)：(145-158)、100：(33-37)：(148-155)，100：36：152。

优选的，所述枫香油与软胶囊辅料重量比为(2-4)：1。

本发明第六方面，提供一种中药组合物的制备方法，所述制备方法将枫香油和药用辅料，制备获得中药组合物。

优选的，所述中药组合物为胶囊剂，将枫香油和药用辅料制备获得中药组合物胶囊。更优选的，所述胶囊为软胶囊或者微胶囊，进一步更优选的，所述制备方法包括将微胶囊进一步制备为其它剂型。

更优选的，所述中药组合物为微胶囊，所述的制备方法包括：

1)将微胶囊辅料加入水中，制得水相；

2)将枫香油加入到水相中乳化，均质；

3)均质后的乳液，抽真空，搅拌；

4)乳液干燥、造粒，得到的包含枫香油的微胶囊。

在一个具体的实施方式中，

所述中药组合物微胶囊的制备方法包括：

1)将复合壁材、填充剂、水溶性乳化剂加入纯净水中，加热搅拌溶解，然后加入油溶性抗氧化剂，分散均匀，制得水相；

2)将枫香油加入到高速剪切的水相中乳化，再通过高压均质机进行均质；

3)均质后的乳液放入暂存罐中，抽真空，搅拌；

4)将乳液用喷雾-淀粉流化床干燥法进行一步造粒，得到的枫香油微胶囊。

优先的，所述步骤1)中复合壁材为阿拉伯胶和明胶的混合物，更优选的，阿拉伯胶质量分数1-2份，明胶质量分数2-3份；枫香油的添加量为壁材质量的3-6倍。

优选的，所述步骤1)中加热温度为50-80℃；

优选的，所述步骤3)中真空度≥0.09MPa，搅拌时间为0.5-1小时。

优选的，所述步骤4)中枫香油微胶囊粒径为40-100目。

进一步优选的，

所述步骤1)中填充剂为低聚异麦芽糖、蔗糖、葡萄糖中的任意一种；枫香油添加量为填充剂质量的2-5倍；水溶性乳化剂为聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚山梨酯-80中的任意一种，添加量为枫香油质量的0.4-10％；纯净水的质量为枫香油质量的0.5-1.2倍。

所述步骤2)中高速剪切速度≥10000r/min，乳化时间0.5-1小时，均质操作参数为低压 5-10MPa、高压60-90MPa，均质次数≥2次。

所述步骤4)中喷雾-淀粉流化床干燥法条件为：喷雾进风温度为0-50℃，淀粉流化床鼓风温度为60-80℃。

更优选的，所述中药组合物的制备方法包括将上述获得中药组合物微胶囊加工为其他剂型，例如，片剂、颗粒剂、散剂、冲剂等等。

优选的，所述其它剂型的辅料，包括例如硫酸钙、麦芽糖、羧甲基淀粉钠、预胶化淀粉、羟丙甲纤维素、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁等中的一种或者多种。

优选的，所述中药组合物包括枫香油微胶囊40％-85％、其它辅料15％-60％。

更优选的，所述枫香油微胶囊为40％-85％范围中的任意数值或任意范围，例如：40％-80％、 45％-75％、50％-70％、55％-60％、75％-85％等等。

更优选的，所述其它辅料为15％-60％范围中的任意数值或任意范围，例如15％-25％、 15％-60％、20-55％、25％-55％、30％-50％、40％-45％等等。

优选的，所述中药组合物为软胶囊剂，更优选的，所述软胶囊辅料包括胶料，增塑剂、水。更优选的，所述软胶囊辅料还包括附加剂、遮蔽剂、调味剂、防腐剂等等。

进一步优选的，所述胶料包括明胶、所述增塑剂包括大豆油、甘油、山梨醇中的一种或者多种。更为优选的，所述增塑剂包括大豆油。

优选的，所述明胶：增塑剂：水的比例为100：(30-40)：(140-160)，更优选的，所述明胶：增塑剂：水的比例可以是上述范围的任意比例或者任意范围，例如为100：(32-38)：(148-158)、100：(33-37)：(148-155)，100：36：152。

所述软胶囊剂的制备方法包括：滴制法制成软胶囊。

优选的，所述制备方法包括：

1)溶胶：将明胶：增塑剂：水的比例为100：(30-40)：(140-160)进行溶胶；优选的，所述溶胶温度80℃±5℃，溶胶25～65min；

2)保温消泡：抽真空，保温消泡，优选的，真空度读数在-0.05Mpa～-0.08Mpa，温度80℃±5℃，保温消泡4-8h；

3)滴丸：将包含枫香油的丸油和胶液分别注入滴丸机，制备胶囊，优选的，枫香油：胶液重量比为(2-4)：1，保温温度控制在80-85℃；

4)干燥：对胶囊进行干燥，优选的，干燥温度18-25℃，湿度20％-40％，干燥12-30h。

优选的，所述制备方法制备获得上述中药组合物。

本发明第七方面，提供一种枫香油、上述抑制剂或者中药组合物在降低尿酸中的应用。

本发明第八方面，提供一种降低尿酸含量的方法，所述方法包括向个体施加上述枫香油、抑制剂或者中药组合物。

本发明第九方面，提供一种枫香油，所述枫香油包括从枫香树脂中提取的挥发油。

优选的，所述枫香油包括β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、d-柠檬烯、β-石竹烯、和(-)-β-蒎烯。更优选的，上述单一组分含量为5％-12.5％。进一步优选的，上述单一组分含量为7.5％-12.5％。

更优选的，所述枫香油由上述枫香油的制备方法制备。

本发明的有益效果：

(1)本发明选用中药材为原料，组份符合中医学理论及现代医学理论，符合药典及中医管理条例之规定。本发明为口服药，常规药物，常规剂量，可长期服用，无明显毒副作用。

(2)本发明为中药制剂，作用于嘌呤代谢系统，抑制黄嘌呤氧化酶，降低尿酸，针对性强，减少副作用。

(3)本发明标本同治，治疗痛风的主要病因，调节体内物质代谢，减少尿酸生成而达到治疗目的。

(4)本发明将制剂中的主要原料制备为胶囊剂，例如软胶囊或者微胶囊化，可以抗氧化和分解，提高药物稳定性，可使液体药物固化，掩盖药物的不良气味等特性，提高患者顺应性。

(5)优选的，本发明在微胶囊的制备过程中，通过抽真空搅拌大幅减少了乳液中的气泡从而使喷雾造粒所得微胶囊中的空隙显著降低，加之对壁材进行了复配，显著地提高了其机械强度和稳定性，微胶囊机械强度达到100g以上，微胶囊在25℃、RH75％条件下放置6个月后的含量保留率大于95％，足以满足压片要求。

(6)优选的，本发明在软胶囊的制备过程中，调整囊材与增塑剂的比例，优化制备参数，使得软胶囊不易硬化，储存期延长。

附图说明

图1所示为枫香油生产工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1枫香油制备方法

参照图1制备枫香油，步骤包括：

1)将枫香树脂进行超声波溶解；

2)将溶解后的枫香树脂膜过滤；

3)过滤后的滤液减压蒸馏；

4)共沸蒸馏，制备枫香油。

其中，关键工艺参数如下表：

表1：制备枫香油工艺条件

获得枫香油，该枫香油主要成分包括烯烃类化合物，主要包括：β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、d-柠檬烯、β-石竹烯和(-)-β-蒎烯。上述各组分含量5％-12.5％。优选为，7.5％-12.5％。

具体的，主要成分及含量见表2(低于5％含量的组分未显示)：

表2：枫香油主要成分及相对含量

序号	保留时间RT	CAS	匹配度	成分名称	相对含量％
						1	10.752	000127-91-3	94	β-蒎烯	11.8-12.5
2	8.3692	000080-56-8	97	α-蒎烯	9.6-10.2
						3	9.3498	000079-92-5	95	莰烯	9.0-9.5
4	13.5009	005989-27-5	99	d-柠檬烯	8.7-9.2
						5	29.5532	000087-44-5	99	β-石竹烯	8.5-9.2
6	10.6638	018172-67-3	97	(-)-β-蒎烯	7.5-8.2

测量不同批次样本其主要组分在上述范围内保持相对稳定。

实施例2枫香油对黄嘌呤氧化酶抑制作用的分析

检测原理：

在酶标板中加入阳性药物和待测药物，并添加等量的黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase， XO)，随后加入等量黄嘌呤作为底物，在295nm波长下测定吸光度值，数值反应产生的尿酸的量，根据所得数据判断该药物对黄嘌呤氧化酶是否存在抑制作用。

材料：

实施例1获得的枫香油样品、阳性药物别嘌醇、黄嘌呤氧化酶、黄嘌呤、96孔板、灭菌 PBS

仪器：

多功能酶标仪、旋涡搅拌器、移液枪

步骤：

1、样品用纯水溶解后过滤，设置三个浓度梯度，终浓度分别为500μg/ml、250μg/ml、 125μg/ml；别嘌醇先配制成4mg/ml的母液，再稀释100倍配成40μg/ml的工作液；黄嘌呤配制成30mM母液，随后稀释10倍成3mM工作液；黄嘌呤氧化酶(XO)稀释成0.1U/ml 的工作液。

2、将实验设置为空白组、别嘌醇(阳性药)以及不同浓度的待测药物组(实验组1、实验组2、实验组3)，每组都设置加酶组和不加酶组，各4个重复，加酶组为添加黄嘌呤氧化酶(XO)，不加酶组为对照组，添加等量PBS。

3、空白组加入110μl PBS，除空白组之外的其他各组添加60μl PBS，

4、除空白组外的其他各组分别添加50μl相应的药品，别嘌醇组、实验组各孔加入40μl黄嘌呤氧化酶，

对照组添加等量PBS，4℃条件下孵育10min使药物与酶充分接触

5、然后各孔加入等量黄嘌呤作为底物，25℃条件下孵育15min，随后在295nm波长下测定吸光度值测得数值设为T，抑制率的计算公式:

抑制率＝[1-(T实验-T对照)/(T空白-T空白对照)]×100％。

实验简便步骤见表3：

表3：反应步骤

分组如表4所示：

表4：实验分组

结果：见表5：

表5：枫香油对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

如表5所示：别嘌醇组抑制率符合实验预期，具有较高的抑制率，说明检测方法准确，实验结果可信；枫香油的浓度增长与对黄嘌呤氧化酶的抑制率增长呈正相关，说明抑制效果与药品浓度有依赖关系。相对于空白组，各实验组的抑制作用有显著性，各实验组之间也有显著性的差异，综合来看枫香油样品对XO的体外抑制率明显，可作为抗痛风候选药物继续筛选的价值。

实施例3枫香油小鼠体内对尿酸作用的评价

1、材料、仪器及动物房设施

SPF级雄性昆明鼠60只(18-20g，许可证号：SCXK(京)20160011)，待测样品：枫香油样品(实施例1制备)。别嘌醇(sigmaPHR1377)，次黄嘌呤、羧甲基纤维素钠、吐温80、尿酸检测试剂盒(南京建成)。多功能酶标仪、涡旋振荡器、移液枪、分析天平、研体、小鼠灌胃器、注射器、天平、离心机等：SPF级动物实验室。

2、实验方法

1)、药品溶液配制

羧甲基纤维素钠(简称CMC)溶液：称取2.5gCMC干粉，加入500ml纯水，加热状态下搅拌溶解，配成0.5％的CMC溶液，灭菌后常温密闭保存。

空白溶液：取1.5ml吐温80，加98.5ml0.5％CMC溶液充分匀，配制成含1.5％吐温80的0.5％CMC空白溶液，4℃保存，备用。

别嘌醇溶液：称取16.24mg别嘌醇，置于研钵中，加入0.48ml吐温80，研磨均匀，缓慢加入6.0ml0.5％CMC溶液，充分研磨后，转移至50ml离心管中，用0.5％CMC溶液(6.0ml/次)研磨清洗研钵，将清洗液转移合并至相同50ml离心管中，共清洗转移3次(6.0ml×3)，最后再向该50ml离心管补加0.5％CMC溶液8.0ml，使液体总量达至32.48ml，混匀，配制成0.5mg/ml别嘌醇溶液，4℃保存，备用。

样品溶液：称取样品2.6561g，置于研钵中，加1ml吐温80研磨均匀后，边磨边加入20ml0.5％CMC溶液，充分研磨后转移至100ml试剂瓶中，用20ml0.5％CMC溶液研磨清洗研钵后，将清洗液转移合并至相同100ml试剂瓶中、其后再清洗转移一次(共清洗转移2次， 20ml×2)。最后，向该100ml试剂瓶补加0.5％CMC溶液5.4ml，使液体总量达至66.4ml(含 1.5％吐温80)，混匀，乳化后配制成40mg/ml的枫香油样品溶液。在此基础上，用0.5％CMC 溶液分别稀释成50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml和200mg/ml的枫香油样品溶液，所有枫香油样品溶液均4℃保存，备用。

次黄嘌呤溶液：称取次黄嘌呤2.14705g，置于研体中，加入5.78m10.5％CMC溶液研磨均匀后，边磨边分次逐渐加入30ml0.5％CMC溶液，使0.5％CMC溶液总量达35.78ml，特研磨充分后转移至50ml试剂瓶中，配制成60mg/ml溶液，备用。

2)小鼠饲养

购买的小鼠到货后先置于SP℉级动物房检疫室，检疫合格后转入饲养室，明暗交替 (12h:12h)饲养，温度23±2℃，湿度50±10％，自由饮食。

3、高尿酸血症小鼠模型建立

1)、高尿酸血症小鼠模型建立方法

本次造模采取次黄嘌呤腹腔注射方式。小鼠依次腹腔注射600mg/kg次黄嘌呤造模。

分别取注射后20min、30min、60min、90min、120min分钟后的小鼠血清，测量血清中的尿酸含量，0min为未注射前，相当于对照组。

2)测量方法

尿酸酶过氧化物酶偶联法(尿酸测定试剂盒)测定鼠血清尿酸含量。

检测原理：在检测反应体系中，首先，尿酸(UA)在尿酸酶催化下与水(H₂O)和氧气(O₂)发生氧化还原反应，生成尿囊素和过氧化氢(H₂O₂)，而所生成的H202在过氧化物酶催化下很快与4-氨基替比林(4-AAP)和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-m-甲苯胺钠盐(TOOS)反应，生成红色醒亚胺。该醒亚胺在550nm处有强的吸收峰，反应后测定反应液在特定波长下的吸收度，便可计算出UA含量，相关反应方程如下，

UA+2H₂O+O₂→尿囊素+CO₂+H₂O₂

H₂O₂+4-AAP+TOOS→醌亚胺+5H₂O

操作步骤：操作步骤按照试剂盒说明书内容进行。利用96孔板，测试组每孔分别加待测小鼠血清各5ml，空白对照组每孔加纯水5ml，标准组每孔加试剂。

盒中标准品溶液5μl，随后每孔分别加250μl Buffer B，在37℃条件下解育10min后，测定510m波长下的吸光度值A。各组设3个复孔，取各组3孔吸光度A的平均值，按下述计算公式，计算各组小鼠血中的尿酸含量：

尿酸含量(μmol/L)＝(A_测试-A_空白)/(A_标准-A_空白)×C_标准

其中，C为标准品溶液中标准品的浓度400μmol/L。

3)统计学分析

实验数据采用SPSS19.0软件进行统计处理，各组数据通过t-检验分析进行组间比较。

4)结果

结果如表6所示：

表6注射次黄嘌呤后血清中的尿酸(Mean±SD，n＝6)

时间(注射后时间，min)	血中尿酸含量(μmol/L)
		0	31.75±19.71
20	52.48±63.25
		30	85.80±48.52
60	260.42±137.50
		90	320.29±105.34
120	252.22±102.34

根据上述结果可知，次黄嘌呤腹腔注射后，小鼠血清中尿酸浓度在30min后明显升高，在注射后1-1.5h达到峰值，随后开始下降，可见，次黄嘌呤可用于高尿酸血症疾病模型的建立，本发明中高尿酸血症疾病模型成功建立。

4、动物实验

1)分组

小鼠随机分成7组，每组10只。

(1)正常对照组：每只小鼠每天分别灌胃空白溶液350μl。

(2)模型组：每只小鼠腹腔注射600mg/kg次黄嘌呤建模，然后灌胃空白溶液350μl；

(3)别嘌醇组(阳性药物组)：建模成立后，每天灌胃别嘌醇5mg/kg，每天一次，连续灌胃7天。

(4)实验组：建模成立后，四组实验组每天分别灌胃枫香油50mg/kg(ZY1)、 100mg/kg(ZY2)、150mg/kg(ZY3)和200mg/kg(ZY4)的枫香油，每天一次，连续灌胃7天。

根据上述建模尿酸监测可知，尿酸浓度30min后显著升高，1-1.5h达到峰值，随后开始下降，为避免尿酸自身代谢浓度下降导致的差异，我们：

首先，对各组小鼠进行序号标记。

其次，按组别和序号顺序，除正常对照组以外的各组小鼠依次腹腔注射次黄嘌呤造模，而正常对照组小鼠则腹腔注射等体积0.5％CMC溶液，记录各小鼠腹腔注射时间。

最后，严格控制给药时间，仍按相同组别和序号顺序，每只小鼠在腹腔注射次黄嘌呤造模后10min时间点按上所述方式和剂量给药，受试组小鼠灌胃以上样品溶液(包括别嘌醇组和实验组)，正常对照组和模型组小鼠则分别灌胃空白溶液，并记录给药时间。

根据记录的给药时间，每只小鼠在灌胃给药30min后摘眼球取血，每只取约500μl，37℃静置2h，4℃、3500r/min离心10min，取血清进行尿酸测定。

重复7天，取平均值。

实验期间更换垫料2次，保证饮水和饲料充足。

测定方法同上。

2)实验结果

实验数据统计结果如表7中所示：

表7：枫香油对小鼠中尿酸的影响

注：别嘌醇为阳性对照。**：p<0.01w正常对照组：#：p<0.05，##：p<0.01w模型组。

根据上述结果可知：

1)与正常对照组比较，模型组小鼠血中尿酸值大幅升高，统计学差异极为显著，表明模型建立成功：与模型组比较，别嘌醇阳性药组小鼠血中尿酸水平显著降低，统计学差异也极为显著，表明阳性药物选择及整个实验都非常成功，含枫香油样品相关实验结可信。

2)实验组小鼠血中尿酸值呈剂量依赖型变化，其中50mg/kg剂量组尿酸水平明显低于模型组，100mg/kg剂量组尿酸水平显著低于模型组，达到高峰，与模型组比较统计学差异显著， 150mg/kg、200mg/kg与模型组比较也具有统计学差异。以上结果表明，枫香油样品在 50-200mg/kg范围的剂量灌胃给药时对高尿酸血症模型小鼠血中升高的尿酸水平有明显降低作用，统计学差异显著，在100mg/kg中剂量效果最佳。

实施例4制备包含枫香油的中药组合物

方案1

(1)将24g阿拉伯胶、36g明胶、100g蔗糖、1.0g聚山梨酯-80加入200g纯净水中， 80℃搅拌30分钟至完全溶解，继续搅拌分散均匀，制得水相。

(2)将200g的枫香油加入到高速剪切的水相中，剪切速度10000r/min，乳化时间30分钟，然后过两遍高压均质机，低压5MPa，高压60MPa。

(3)将乳液加入到进料暂存罐中，抽真空至0.09MPa，搅拌45分钟。

(4)将乳液用喷雾-淀粉流化床干燥法进行一步造粒，条件为：进风温度45℃，淀粉流化床鼓风温度65℃，得到粒径为40-100目的枫香油软胶囊。

也可以在上述微胶囊的基础上制备成其他剂型，例如，

(5)应用上述枫香油软胶囊进行压片，加以辅料(硫酸钙、麦芽糖、羧甲基淀粉钠十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁)100g，通过ZP19D旋转式压片机压片，条件为压片力为40kN，车速为28r/min。

方案2：

(1)将24g阿拉伯胶，36g明胶，100g葡萄糖、10g蔗糖脂肪酸酯加入200g纯净水中，65℃搅拌30分钟至完全溶解，继续搅拌分散均匀，制得水相。

(2)将250g的枫香油加入到高速剪切的水相中，剪切速度12000r/m

min，乳化时间40分钟，然后过两遍高压均质机，低压5MPa，高压75MPa。

(3)将乳液加入到进料暂存罐中，抽真空至0.095MPa，搅拌30分钟。

(4)将乳液用喷雾-淀粉流化床干燥法进行一步造粒，条件为：进风温度40℃，淀粉

流化床鼓风温度75℃，得到粒径为40-100目的枫香油微胶囊。

也可以在上述微胶囊的基础上制备成其他剂型，例如，

(5)应用上述枫香油微囊进行压片，加以辅料(硫酸钙、预胶化淀粉、羟丙甲纤维素、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁)150g，通过ZP19D旋转式压片机压片，条件为压片力为40kN，车速为28r/min。

方案3

(1)将20g阿拉伯胶、40g明胶、60g低聚异麦芽糖、1.2g聚甘油脂肪酸酯加入180g纯净水中，70℃搅拌1小时至完全溶解，继续搅拌分散均匀，制得水相。

(2)将300g的枫香油加入到高速剪切的水相中，剪切速度13000r/m，乳化时间45分钟，然后过3遍高压均质机，低压10MPa，高压70MPa。

(3)将乳液加入到进料暂存罐中，抽真空至0.09MPa，搅拌1小时。

(4)将乳液用喷雾-淀粉流化床干燥法进行一步造粒，条件为：进风温度50℃，淀粉流化床鼓风温度80℃，得到粒径为40-100目的枫香油微胶囊。

也可以在上述微胶囊的基础上制备成其他剂型，例如，

(5)应用上述枫香油微胶囊进行压片，加以辅料(硫酸钙、麦芽糖、羧甲基淀粉钠、预胶化淀粉、羟丙甲纤维素、十二烷基硫酸钠)200g，通过ZP19D旋转式压片机压片，条件为压片力为40kN，车速为28r/min。

上述方案中，无论是方案1、2还是3，枫香油经加工为微胶囊后，显著地提高了其机械强度和稳定性，微胶囊机械强度达到100g以上，微胶囊在25℃、RH75％条件下放置6个月后的含量保留率大于95％。

实施例5制备包含枫香油的软胶囊

1材料

(1)处方药材来源

枫香油：实施例1制备

(2)辅料来源及标准

大豆油(南昌白云药业有限公司))，明胶(包头东宝生物技术股份有限公司)，纯化水，均符合2020版中国药典年版规定。

2制备步骤：

(1)溶胶

检查化胶罐状态，确认完好后，关闭化胶罐底部阀门，打开罐体上的纯化水阀门，控制流量计先加入纯化水，纯化水加料完成后，关闭纯化水阀门后启动搅拌桨，记录纯化水的投料量。同时打开化胶罐夹层热水循环阀门进行加热，记录升温开始时间和夹层温度以及罐内温度；从投料口依次将不锈钢周转桶内的明胶及大豆油分批加入，最后用纯化水荡洗大豆油桶后荡洗液一并投入化胶罐内，记录明胶和大豆油的投料量，关闭投料口，罐内温度缓慢升高，控制罐内温度在80℃±5℃，溶胶25～65min，溶胶完成，关闭搅拌，记录溶胶结束时间、夹层温度和罐内温度。进入下一道工序。

(2)保温消泡

检查真空泵状态，确认完好后，开启真空泵开关，缓慢开启化胶罐真空管道阀门，抽真空开始，记录消泡开始时间、罐内温度和真空读数，维持化胶罐罐内温度在80℃±5℃，真空度读数在-0.05Mpa～-0.08Mpa,保温消泡4-8H，保温消泡结束，关闭真空管道阀门、加热开关和真空泵开关，记录消泡结束时间、罐内温度和真空读数。

(3)滴丸

接通滴丸机电源，将储油桶、储胶桶分别与滴丸机连接，并将丸油和胶液分别注入滴丸机油槽和胶槽中。调节胶液和丸油温度至工艺要求。胶箱保温温度控制在80-85℃。将油管用夹子夹紧，使油管的气泡往油槽上升排尽，装上滴头，接好滴头油管。

(4)干燥

干燥过程中应每2小时翻动一次胶囊，翻丸时左手握纱盘左侧，约拉出3/4盘，右手将纱盘四周的胶囊翻至纱盘中间，再将胶囊上下翻动数次，并松开粘结丸，再将胶囊均匀铺满整个纱盘。翻丸动作应协调、用力均匀，切勿用力过大，压破胶囊。温度18-25℃，湿度20-40％下干燥12小时。

3工艺条件优化：

(1)囊壳处方的研究

以明胶、大豆油及水作为囊壳处方成分，根据生产经验设计了多种不同配比的囊壳处方，在相同的实验条件下考察成品的成型性。结果表明，明胶：增塑剂：水的比例为100：(30-40)： (140-160)的范围配比是合适的，在上述范围外增塑剂和水配比降低后囊壳变硬，三个月后逐渐变硬，而在上述范围外增加增塑剂和水配比后存放3个月出现变形，随着增塑剂和水配比逐渐增加变形比例逐渐增多，其中，尤其以明胶：大豆油：水＝100:36:152最佳，存放3个月后囊壳既不变硬也不变形。

(2)溶胶时间的研究

实验中将适量水与明胶分别在常温条件下溶胀0min、25min、45min、65min，随后加入处方量的大豆油，在80℃的恒温水浴锅中搅拌，至溶解，并于0.05-0.08MPa真空压力下脱气泡，直至明胶溶液变为澄清透明，且没有气泡，趁热将溶液倒入烧杯中，待溶液冷却后取出，测定黏度。

表8不同溶胀时间对胶液粘度影响

溶胀时间	粘度(E)
		0	5.12±0.03
25	4.24±0.04
		45	4.12±0.05
65	4.06±0.06

结果表明，溶胀时间越长，黏度越小。其中溶胀时间为25min、45min、65min，黏度较接近。0min时黏度最大，这可能是由于充分地溶胀使得溶胶时间缩短，黏度相应减小。溶胶时间25-65分钟都是适合的。考虑成本因素，采用25min进行下面的参数优化。

(3)溶胶温度的研究

实验中，在常温减压的条件下，将适量的水与明胶溶胀25min，随后加入处方量的大豆油，选择在70℃、80℃、90℃的恒温水浴锅中搅拌，直至溶解，随后在-0.05～-0.08MPa真空压力下脱气泡，直至明胶溶液澄清透明，且无气泡，趁热将溶液倒入烧杯中，待溶液冷却后取出，测定黏度。

表9不同溶胶温度对胶液粘度的影响

溶胀温度	粘度(E)
		70	4.25±0.04
80	3.62±0.02
		90	5.31±0.02

由表9结果可以看出，70-90℃对应的粘度都在允许范围内，优选的温度为80℃±5℃，尤以80℃时体系黏度最低，所以选择80℃作为最佳反应温度。这可能是因为明胶对于温度较为敏感，温度越高，黏度越大；但是温度太低使得溶胶时间延长，胶液长时间受热，容易使黏度增大。

(4)胶液保温温度及保温时间的研究

考察不同的保温温度及保温时间对明胶胶液质量的影响。分别设定60℃、70℃、80℃三个保温温度，每个温度条件下设定4、8、12、24小时四个保温时间，以黏度为指标。

表10不同保温温度及保温时间对胶液黏度的影响

表10结果可知，保温温度相同时，保温时间越长，黏度越大；保温温度越低，黏度越大，保温时间对黏度的影响较大。在60-80℃保温4-24h的粘度都在允许范围内，以80℃±5℃，保温4-8h为优选，其中尤其以80℃保温4h为最佳。

(5)干燥温度和时间的研究

软胶囊的干燥温度和时间也非常重要。明胶是一种高分子聚合物，温度过高会导致明胶结构变化。所以，选择合适的干燥条件对于保证软胶囊产品的质量非常重要。实验中，分别设定不同干燥温度和湿度及干燥时间，以崩解时间为指标，设计了不同的干燥温度及干燥时间对胶囊材的影响。

表11不同干燥温湿度及干燥时间的影响

由表11可知温湿度适宜，崩解时间适宜。温度过高过低都会影响软胶囊的崩解时间。根据企业标准。崩解时间在30min以内都是符合要求的。但15min崩解是比较稳定的崩解时间。因此，可以选择温度18-25℃，湿度20％-40％，干燥12-30h均可，考虑到成本，干燥时间不宜过长，尤其为25℃/40％下干燥12小时为最佳。

综上：上述结果调整确定枫香油软胶囊最佳制备工艺为每粒软胶囊加入枫香油0.375g为囊心药液，囊壳0.125g为明胶：大豆油：水(100:36:152)，溶胶时间为25min，溶胶温度为 80℃，保温时间和温度分别为80℃保温4h。干燥温湿度为25℃/40％下干燥12小时为最佳。

4、软胶囊稳定性评估

考察了三个批次枫香油软胶囊的稳定性，加速试验稳定性数据如表12：

批号：(20210501、20210502、20210503)批量：10000粒/批规格：枫香油：375毫克

包装：口服固体药用高密度聚乙烯瓶

考察条件：(温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％)

表12：枫香油软胶囊加速试验结果

三个批号枫香油软胶囊经六个月加速稳定性试验，外观性状、崩解时限和相对密度、折光率、酸值均无明显变化，微生物限度检查合格。结果表明枫香油软胶囊稳定性良好。

本发明的枫香油的动物实验表明其有良好的降尿酸作用，但枫香油属挥发油，易挥发、有特殊的气味，且存在不易控制服药量、携带不方便等不利因素，而胶囊具有防止氧化分解、提高制剂稳定性、剂量准确、携带服用方更等特点，故本发明将软胶囊或者微胶囊后制作其它剂型作为枫香油首选剂型，在保持痛风良药枫香油功效的基础上，为患者提供更科学、合理、方便的新剂型。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种枫香油在抑制黄嘌呤氧化酶活性中的用途。

2.一种枫香油的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括从枫香树脂中提取挥发油。

3.一种枫香油在制备中药组合物中的用途，其特征在于，所述中药组合物用于抑制黄嘌呤氧化酶活性。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述中药组合物可用于治疗嘌呤代谢异常有关的疾病。

5.根据权利要求4的用途，其特征在于，所述疾病包括尿酸异常相关的疾病。

6.一种中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括枫香油。

7.根据权利要求6所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括枫香油重量份为25-80％和20-75％药用辅料，优选的，所述中药组合物为任意的剂型，更优选的，所述剂型为口服剂、注射剂，进一步优选的，所述中药组合物为适合口服的剂型，包括，例如，胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、片剂、散剂、冲剂、口服液、汤剂等剂型。

8.权利要求6-7任一所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将枫香油制备获得中药组合物。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述中药组合物为胶囊，优选的，所述胶囊为软胶囊或者微胶囊，更优选的，所述制备方法包括将微胶囊进一步加工为其它剂型。

10.一种枫香油，其特征在于，所述枫香油包括从枫香树脂中提取的挥发油，优选的，所述枫香油包括β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、d-柠檬烯、β-石竹烯和(-)-β-蒎烯。