CN116916931A - 1-二异丙基-磷酰基-烷烃化合物用于治疗眼部不适的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及使用如本文所述的特定1‑二异丙基‑磷酰基‑烷烃(DIPA‑1‑7、DIPA‑1‑8和DIPA‑1‑9，以下统称为“DIPA化合物”)的方法，用于治疗由眼部疲劳、眼部手术、与眼表面相互作用的空气传播的刺激物或污染物、炎热不适、长时间佩戴隐形眼镜、过度暴露于阳光下、视力衰弱、结膜炎或干眼综合症引起的眼部不适。本发明还涉及包含这些化合物的制药组合物，以及携带这些制药组合物的介质。

Description

1-二异丙基-磷酰基-烷烃化合物用于治疗眼部不适的用途

相关申请的引证

本申请优先权要求基于于2020年5月21日提交的申请号为16/873,626的美国申请，该申请为申请号为16/350,559的美国申请的续展申请，该申请于2018年11月30日提交，而该申请又是申请号为14/544,355的美国申请的部分续展，该申请于2014年12月29日提交，现已授权为美国专利号10,195,217 B2，该申请又是基于于2013年10月22日提交的申请号为PCT/GB2013/052,750的国际专利申请和于2021年1月11日提交的申请号为63/205,848的美国申请的部分续展。

技术领域

本发明总的来说涉及治疗性化合物领域。更具体地说，本发明涉及如本文所述的某些1-二异丙基-磷酰基-烷烃(DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8和DIPA-1-9，以下统称为“DIPA化合物”)，这些化合物在治疗某些疾病和障碍方面具有用途，包括：感觉不适(例如由刺激、瘙痒或疼痛引起)；皮肤不适感；皮炎；银屑病；眼部不适；炎热不适；热应激；绝经后女性的潮红和/或盗汗(血管运动症状)；术后低体温；麻醉后战栗；疲劳；疲劳感；抑郁；认知功能障碍；以及增强认知功能。本发明还涉及包含这些化合物的制药组合物，以及这些化合物和组合物在治疗中的使用。

背景技术

为了更充分地描述和揭示本发明以及本发明涉及的技术现状，一些出版物在此被引用了。这些出版物在此完整地并入本公开内容，就好像每一份出版物都明确且独立地被指明要作为参考文献并入本公开内容。

在本说明书中，包括后续的权利要求，除非上下文另有要求，词语“包括”及其变体如“包括”和“包含”将被理解为包含所述的整数、步骤或整数、步骤组合，但不排除任何其他整数、步骤或整数、步骤组合。

必须注意，在说明书和附加权利要求中使用的单数形式包括复数形式，除非上下文明确说明。因此，例如，“药物载体”的提及包括两种或更多此类载体的混合物等。

在本说明书中，经常使用从“大约”某个特定值到“大约”另一个特定值的范围。当表示此类范围时，另一实施例包括从一个特定值到另一个特定值。同样，当通过使用前导词“大约”来表示值的近似值时，将理解该特定值构成另一实施例。

本公开内容包含可能有助于理解本发明的信息。这并不是对此处提供的任何信息是先前公知技术或与目前所声称的发明相关的任何证明，也不意味着任何明确或隐含引用的出版物是先前公知技术。

神经病理性眼表疼痛(Neuropathic Ocular Pain，NOP)指的是眼表(定义为角膜、角膜缘、结膜和眼睑缘上皮)的疼痛。神经病理性眼表疼痛的一个机制是由于对角膜神经的重复直接损伤。神经末梢的异常再生和痛觉受体的上调可能是外周敏化的原因。持续的疼痛可能导致中枢敏化和痛苦。神经病理性眼表疼痛可能发生在眼部损伤愈合后，且在没有可检测到的解剖破坏情况下，称为角膜“无痛斑”。神经病理性眼表疼痛还被称为角膜神经病变、角膜神经痛、角膜神经性疼痛和角膜觉触过敏。在《国际疾病分类》第11版中，慢性疼痛有更加标准化的术语，其中慢性疼痛的分类位于第21章的MG30节中。神经病理性眼表疼痛被归类为慢性神经病理性疼痛。

神经病理性眼表疼痛对患者的生活质量产生严重的负面影响。疼痛、对光敏感性和刺激感的强烈、持续的感觉影响了日常活动，如阅读、驾驶和工作。身体和社交功能减退，产生了痛苦和不适感。许多神经病理性眼表疼痛患者患有对传统治疗无反应的慢性干眼综合征。特别难治疗的情况是来自屈光或白内障手术的神经病理性眼表疼痛。一个近期广为人知的案例是J.S.，一位来自底特律的35岁电视气象学家和两个年幼子女的母亲，在Lasik手术后患上神经病理性眼表疼痛后自杀。关于神经病理性眼表疼痛的详细和最新讨论可在迈阿密大学的Anat Galor的论文中找到(Galor,A.et al.,The Ocular Surface,2018,16,31–44；Mehra D.,Anat Galor,Ophthalmology and Therapy,2020,9(3):427–47)。

根据定义，慢性神经病理性疼痛是指持续时间超过三个月的一种情况。对于神经病理性眼表疼痛患者来说，通常意味着在三个月的时间里尝试了一切可能的治疗，但效果有限或几乎没有效果。例如，建议进行眼表治疗，包括使用人工泪液、软膏和凝胶。随后可能会尝试进行泪点堵塞、局部和全身抗生素、抗炎类固醇，以及环孢素和利托腾等抗炎药物。神经生长因子和自体血清是用于神经再生疗法的推测性疗程。另一种治疗方法是给予影响中枢神经系统的药物，如抗抑郁药(如阿米替林、诺替林)、抗癫痫药(如卡马西平)、非甾体抗炎药、曲马多和加巴喷丁/普瑞巴林，但效果因人而异。如果神经病理性眼表疼痛与偏头痛有关，治疗偏头痛可能有助于缓解眼表疼痛。因此，需要新的、有效的神经病理性眼表疼痛治疗方法。

化学冷却剂

风扇或空调吹向脸部可以减少疲劳并增加警觉性。湿毛巾敷在额头上可以缓解发热或头痛的不适。这些方法通过物理降低组织温度并向大脑发送外部环境凉爽的信号来产生作用。

一种在面部皮肤上产生冷却/凉爽感觉但不改变组织温度的化学物质可能实现相同的目标。术语“化学冷却剂”可能含糊不清，因为例如，将乙醇或氯化乙基等化学物质涂抹在皮肤上会引起蒸发冷却并降低组织温度。

发明人已经确定了一些化合物，当它们涂抹在皮肤上时，能够强烈模拟去除热量的效果，而不降低组织温度(见，例如，Wei 2012,Journal of Skin Barrier Research,Vol.14,No.2,pp.5-12)。这些效果在每次涂抹剂量小于5毫克的情况下被观察到，而在皮肤上达到的强烈冷却水平是异常的，并且以前尚未被认知。

早在以前就已经知道，环境温度低于21.1摄氏度(70华氏度)对于工作表现是最佳的，而最适宜的温度范围是18.3至20摄氏度(65至68华氏度)(见，例如，Dawson et al.,2009,“Nine switches of human alertness”,www.circadian.com,presentation fromCircadian Technologies,Inc.,Houtston,TX,USA,October 2009).实验上可以证明，在20摄氏度的环境下，与23摄氏度的环境相比，表现有所改善。(见，例如，Tham and Willem,2010,Building Environment,Vol.45,pp.40-44)。因此，最佳的凉爽环境可以减少疲劳并提高工作效率。通过将动态凉爽效应局限在眼周的面部皮肤和眼睑边缘，本发明人发现这种警觉和增强效应可以被聚焦和放大。

脸部和眼眶的皮肤对温度感知信息特别敏感，当环境温度降低到15至18摄氏度以下时，会激活大脑结构和觉醒/警觉通路。发明人提出，应用一种引起“动态凉爽”感觉的感官剂会唤醒有机体并对抗疲劳。这种心态的改变是化学诱导的抗疲劳效应的基础。该策略是应用在皮肤上的感官剂，而不是眼科产品。

感到疲劳、疲倦和乏力是一种普遍的体验，被视为一种可能通过小睡、喝一杯咖啡或停止引起疲劳的活动来解决的不便之处。然而，在许多疾病中，疲劳是一种非特异性症状，带来不良后果。

疲劳及其运行缺陷在美国联邦航空管理局的定义中得到认可：“疲劳是一种条件，其特征为在减少工作能力的同时增加不适感，工作效率降低，对刺激的反应能力或能量降低，并通常伴随着疲倦和疲劳感。”(见，例如，Salazar,2013,“Fatigue in aviation,Medical Facts for Pilots”,Federal Aviation Administration,publication numberOK-07-193,prepared for FAA Civil Aerospace Medical Institute)。

引起疲劳的条件包括：焦虑、无聊、抑郁、昼夜节律或睡眠紊乱、重度体力劳动、过度的脑力活动、癌症治疗、慢性疾病和热应激(见，例如，Salazar,2013,“Fatigue inaviation,Medical Facts for Pilots”,Federal Aviation Administration,publication number OK-07-193,prepared for FAA Civil Aerospace MedicalInstitute；Stasi et al.,2003,Cancer,Vol.98,No.9,pp.1786-1801)。美国国家癌症研究所对于疲劳的定义是：由于缺乏能量而表现为极度疲倦和无法正常运作的状况。疲劳可以是急性的或慢性的(持续1个月以上)，根据伴随的症状、严重程度和持续时间，可以进一步分为轻度、中度或严重疲劳。疲劳是一种主观感觉，其主要症状是感到疲倦。见，例如，National Cancer Institute,2013。

含有适量的咖啡因、安非他命、甲基苯丙胺、尼古丁、多奈哌齐、以及莫达非尼等的药物已被用于治疗疲劳。这些化合物通过侵入性作用于大脑化学成分。也就是说，这些药物需要通过进入血液循环，并从那里进入中枢神经系统，对酶或受体产生作用。安非他命和尼古丁等药物具有成瘾性。甚至咖啡因也可能过度刺激神经系统，导致心悸、烦躁、耐受性和依赖性。因此，需要寻找替代方法来治疗疲劳和乏力。

另外观察到的一个效果是本文中描述的化合物对受刺激、瘙痒或疼痛的角化皮肤具有强效的镇静作用。该化合物对皮肤的这种活性在皮肤疾病的治疗中具有应用，特别是对于缓解刺激、瘙痒和疼痛方面。

已知的膦氧化物

Rowsell等人在1978年(美国专利号4,070,496)中描述了一系列对皮肤和身体黏膜(特别是鼻子、口腔、喉咙和胃肠道)具有生理降温效果的膦氧化物。请参阅其表格中第3和第4栏。其中的十(10)个化合物(见下表)具有一个异丙基基团(表示为iso-C₃H₇)。然而，没有任何一个化合物是DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8或DIPA-1-9。事实上，没有任何一个化合物有两个异丙基基团。

Wei在2005年(美国专利出版号2005/0059639A1)中描述了使用某些膦氧化物，并通过含有这些化合物的眼药水的给药来治疗眼部不适。请参阅其中第4页的表格1。其中的五(5)个化合物(见下表)具有一个异丙基基团。没有任何一个化合物是DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8或DIPA-1-9。事实上，没有任何一个化合物有两个异丙基基团。

截至目前，关于DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8或DIPA-1-9的制备和评估尚未有报道。

附图说明

图1是人头的示意图，显示用于测试的面部部位：(a)眶下，(b)颊部，(c)颧骨，(d)腮腺-咬肌颊部，(e)前额，(f)眼周。取自Pilsl等人,2012,Dermatologic surgery:American Society for Dermatologic Surgery,Vol.38,pp.1254 1262.

图2是一个响应曲线图(相对荧光单位；％最大值)，显示测试化合物(称为激动剂)浓度的对数函数(以μM表示)与每个化合物的响应之间的关系：1-5(圆圈)，DIPA-1-6(正方形)，DIPA-1-7(倒三角形)，DIPA-1-8(菱形)，或DIPA-1-9(正三角形)。

图3展示了示踪图，第一个示踪图(“野生型”)显示了DIPA-1-7在浓度为1mg/mL时对离体小鼠迷走神经辣椒素诱导去极化的抑制作用，第二个示踪图(“TRPM8 KO”)显示了DIPA-1-7在浓度为1mg/mL时对离体TRPM8基因敲除(knockout)小鼠迷走神经的显著抑制缺失。

图4a显示了在Fura2-AM荷载下，对Ca2⁺通量的荧光发射图像。10μM的DIPA-1-9激活了来自培养的Trpm8^EGFPf/+转基因小鼠的神经元(绿色)，这些神经元对薄荷醇(100μM)也敏感。白色箭头指示出响应的神经元。刻度尺：100μm。图4b是Trpm8^EGFPf/+(Trpm8^+/-)或Trpm8^EGFPf/EGFPf(Trpm8^-/-)转基因神经元对DIPA-1-9和薄荷醇的典型钙迹。图4c显示了对Trpm8^+/-转基因神经元(n＝104)和Trpm8^-/-转基因神经元(n＝136)上DIPA-1-9和薄荷醇的激活定量分析。高浓度的K⁺(KCl)被用于确认神经元的总数。图4d和图4e显示DIPA-1-9不在杂交KNRK细胞中激活小鼠TRPV1或人类TRPA1离子通道，这些通道被阳性对照物质TRPV1辣椒素(10μM)或TRPA1芥末油(100μM)激活。

图5a显示与载体(生理盐水)相比，DIPA-1-9的局部应用增加了泪液分泌，无论是在假手术组(sham)(5.4±0.5vs.3.8±0.5，n＝5)还是干眼小鼠(1.3±0.4vs.0.5±0.1，n＝6)。图5b和图5c显示在假手术组或干眼小鼠模型中，载体或DIPA-1-9的应用对自发性眨眼和角膜磨损没有影响。所有数据以平均值±标准误差(SEM)呈现。统计学显著性通过t检验计算。^*P<0.05。^**P<0.01。

图6a显示TRPM8表达的感觉纤维(绿色)密集内布于上眼睑的皮肤，这是通过对Trpm8^EGFPf/+转基因小鼠的TRPM8-GFP进行全视野染色所显示的。白色箭头表示Trpm8^EGFPf/+纤维轴突和终末。图6b显示通过在上眼睑微注射神经逆行示踪剂Fluoro-Gold^TM，揭示了向上眼睑内布的三叉神经节神经元。白色箭头表示TRPM8⁺/fluorogold⁺神经元。图6c显示了一种将测试溶液局部应用于靶向上眼睑边缘的TRPM8的方法。图中比例尺：图6a：250微米，图6b：100微米。图6c展示了一种将试验溶液局部涂抹于眼睑边缘以针对TRPM8的方法。

图7a是眼表面凉爽程度的视觉模拟评分(VAS)。图7b显示了干眼症状评分。图7c显示了泪液破裂时间(TBUT，以秒为单位)。图7d显示了基础泪液分泌量(以毫米为单位)。图7e显示了角膜上皮病变评分。^*P<0.05，^**P<0.01，与基线值和空白对照组比较(每组30例)。

图8a显示了泪液破裂时间(TBUT，以秒为单位)。图8b显示了基础泪液分泌量(以毫米为单位)。图8c显示了角膜上皮病变评分。图8d显示了眼部不适的视觉模拟评分(VAS)。图8e显示了眼表面疾病指数(OSDI)评分。图8f显示了计算机视觉综合症(CVS)症状评分。^*P<0.05，^**P<0.01，与基线值和空白对照组比较(每组20例)。

发明内容

在一方面，本发明提供了一种用于治疗需要此类治疗的受试者眼部不适的方法。该方法包括向受试者施用一种组合物有效剂量，所述组合物包含从DIPA-1-5、DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8和DIPA-1-9中选择的1-二异丙基膦酰烷(DIPA)化合物。

在另一个方面，本发明提供一种药物组合物，其包含从DIPA-1-5、DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8和DIPA-1-9中选择的有效剂量的1-二异丙基膦酰烷(DIPA)化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在本发明的某些实施例中，所述的DIPA化合物是从以下化合物中选择的：

在某些实施例中，DIPA化合物的浓度为0.5-20毫克/毫升。

在某些实施例中，该组合物是一种液体组合物。

在某些实施例中，该组合物是一种液体组合物，含有浓度为1-5毫克/毫升的DIPA化合物。

在某些实施例中，眼部不适可能是由眼睛疲劳、眼部手术、空气中的刺激物质或污染物与眼部表面的相互作用、长时间佩戴隐形眼镜、过度暴露于阳光、视力疲劳、结膜炎或干眼综合征引起的。

在某些实施例中，眼部不适可能是疼痛。

在某些实施例中，疼痛是与干眼症相关或由干眼症引起的。

在某些实施例中，给药方式是局部给药。

在某些实施例中，给药方式是局部给药到受试者的眼睑。

在某些实施例中，给药至少每天一次。

在某些实施例中，给药至少持续一周。在某些实施例中，给药至少持续两周。

某些实施例涉及一种携带本文所披露的组合物的拭子、湿巾、垫片或纸巾。

某些实施例涉及适用于涂抹到眼睑的携带本文所披露的组合物的缓释贴片。

某些实施例涉及一种压力容器，用于提供含有本文所披露的组合物的气雾剂喷雾。

某些实施例涉及一种手动激活的喷雾器，连接到携带本文所披露的组合物的储液器。

某些实施例涉及一种制备本文所披露的组合物的方法。

正如一个在该领域具备专业技能的人所理解的那样，本发明一个方面的特征和优选实施例也适用于本发明的其他方面。

通过参考以下描述和附加的权利要求，将更好地理解本发明的这些特征、方面和优势。

具体实施方式

本发明涉及某些化合物(即本文中所描述的DIPA化合物)，当涂抹于面部皮肤，特别是眼周和颧骨表面时，可选择性地和强烈地产生至少数小时的“动态凉爽”感觉。这些DIPA化合物可用于抵消疲劳并增强认知功能。DIPA化合物经局部施用，因此可以在不直接干扰脑化学的情况下产生效果。动态凉爽感觉可以重复多次而不会显著减弱效果，并且可以持续整天。面部皮肤上的感觉不会影响个体入睡的能力。DIPA化合物在治疗皮肤不适，特别是皮肤刺激、瘙痒和疼痛方面有应用。DIPA化合物也可能特别有用于抵消热应激、慢性疾病引起的疲劳，或者增强工作表现。DIPA化合物还可用于对抗绝经后妇女出现的潮红和“盗汗”(血管运动症状)。

DIPA化合物

本发明的化合物是亚磷酰氧化物的示例(其具有以下通用式)，更具体地说，是二烷基膦酰基烷烃的示例(其中R1、R2和R3均为烷基基团)。

更具体地说，本发明的化合物是以下化合物(在此统称为“DIPA化合物”)：

DIPA-1-7是一种无色液体，密度约为0.85g/cm3。它在水或生理盐水中可溶性高达20mg/mL。当以1-10mg/mL的水溶液形式涂抹在面部皮肤上时，几乎没有刺激感。将其与眼周、眶下或颧骨皮肤接触，浓度为1-10mg/mL，会在涂抹后一分钟内产生一种“动态凉爽”的感觉。在浓度为1-10mg/mL的单次涂抹后，这种感觉可以抵消疲劳，持续五个小时或更长时间。

DIPA-1-7和DIPA-1-8的强烈感官效果出人意料地具有特异性，这种效果在结构类似的类似物中并不常见。DIPA-1-8的作用持续时间比DIPA-1-7更长，但其动态凉爽强度较低。DIPA-1-7和DIPA-1-8(尤其是DIPA-1-7)对治疗皮肤感觉异常(例如皮肤刺激、瘙痒或疼痛)、眼部不适、热不适和热应激特别有效。

DIPA-1-9引起的刺激最少，因此特别适用于治疗眼部不适，甚至可能作为眼药水使用。

DIPA-1-6的作用时间不如DIPA-1-7长，但它更容易被皮肤吸收，因此特别适用于

全身应用，例如治疗绝经后女性的潮红和/或盗汗(血管运动症状)。

化学合成

DIPA化合物是通过以下一般方法制备的：从Acros获得100毫升(23.7克，约200毫摩尔)的异丙基氯化镁(或者对于二异丁基衍生物，使用丁基氯化镁)，以四氢呋喃(THF)的25％溶液形式提供，并放置在带有搅拌子的500毫升烧瓶中，在氮气氛围下。向烧瓶中滴加THF中的磷酸二乙酯溶液(来自Aldrich，D99234；8.25克，60.6毫摩尔，50毫升)。大约30分钟后，反应混合物变热并开始沸腾。反应混合物再搅拌30分钟，然后滴加适量的n烷基碘化物溶液(来自TCI；60毫摩尔，20毫升)。然后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物稀释水，转移到分液漏斗中，并用乙酸(约10毫升)酸化。然后用醚提取两次。乙醚层经水洗后蒸发(使用RotaVap Buchi，水浴温度40℃)。淡棕色油经高真空蒸馏。最终产品通过质谱验证，是透明液体，呈无色或略带淡黄色。

以下化合物是通过这种方法制备的：

组合物

本发明的一个方面涉及一种组合物(例如，药物组合物)，包括上述所述的DIPA化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的另一个方面涉及一种制备组合物(例如，药物组合物)的方法，包括混合上述所述的DIPA化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在一种实施方式中，该组合物的浓度为0.005-2.0％重量/体积(wt/vol)。

在一种实施方式中，该组合物是液体或半液体组合物(乳液、霜剂或软膏)，其DIPA化合物的浓度为0.5-20毫克/毫升(mg/mL)。

在一种实施方式中，该组合物是液体组合物，其DIPA化合物的浓度为1-5毫克/毫升(mg/mL)。

在一种实施方式中，该组合物是液体组合物，其DIPA化合物的浓度为5-10毫克/毫升(mg/mL)。

在一种实施方式中，该组合物是液体组合物，其DIPA化合物的浓度为10-20毫克/毫升(mg/mL)。

该组合物可以配备适当的包装和/或适当的容器。

例如，该组合物可以提供为一种棉签、湿巾、垫片或毛巾片(例如，适当密封在包装中)，携带DIPA化合物或包含DIPA化合物的组合物。

同样，该组合物可以提供为一种贴片，例如，一种控释贴片，适用于贴在皮肤上，例如，在锁骨上方或胸锁乳突肌上的皮肤上。

同样，该组合物可以提供为一种从加压容器中释放的喷雾剂。

同样，该组合物可以提供为一种手动激活的喷雾器(例如，具有适当的小孔)，与含有DIPA化合物或包含DIPA化合物的组合物的储液器相连，例如，能够释放一个单位体积(例如，0.05至0.15毫升)的液体到皮肤表面。

在治疗方法中的应用

本发明的另一方面涉及所述的DIPA化合物在治疗人体或动物体的方法中的使用，例如，在治疗本文所述的疾病的方法中的使用。

制造药物的应用

本发明的另一方面涉及使用所述的DIPA化合物在药物的制造中，例如，用于治疗的方法，又例如，用于治疗本说明书中描述的疾病。

在一种实施方式中，药物包含所述的DIPA化合物。

治疗方法

本发明的另一方面涉及一种治疗方法，例如，一种治疗本说明书中描述的疾病的方法，其包括向需要治疗的受体主体中给予一种有效剂量的所述DIPA化合物，如本说明书所述，优选地以药物组成的形式给予。

治疗的疾病

在一种实施方式中(例如在治疗方法的应用、在药物制剂的制造应用、治疗方法)，治疗的病症包括：感官不适(例如由刺激、瘙痒或疼痛引起)；皮肤畸感；皮炎；银屑病；眼部不适；热不适；热应激；潮红和/或潮汗(更年期女性的血管运动症状)；术后低体温；麻醉后颤抖；疲劳；疲倦；抑郁；认知功能障碍；以及增强认知功能。

治疗的疾病-感官不适等

在一种实施方式中(例如在治疗方法的应用、在药物制剂的制造应用、治疗方法)，治疗的病症包括：感官不适。

此处所使用的术语“感官不适”指的是来自身体表面的刺激、瘙痒、疼痛或其他畸感(异常感觉，如灼热感、感觉异物存在、或刺痛感)。该术语暗示了激活位于身体感觉神经末梢的伤害感受器。伤害感受器可以通过高温或低温、机械压力、化学物质(例如辣椒素、酸度、污染物等)、损伤、炎症和炎症介质等被刺激。像DIPA-1-7这样减轻感觉不适的化合物可以被称为抗伤害感受器剂。

在一种实施方式中，感官不适是刺激、瘙痒或疼痛。

在一种实施方式中，感官不适是由皮肤畸感引起的。

在一种实施方式中，皮肤畸感是皮肤刺激、皮肤瘙痒或皮肤疼痛。

在一种实施方式中，感官不适是由皮炎引起的。

在一种实施方式中，感觉不适是由特应性皮炎引起的。

在某些实施例中，感官不适是由犬特应性皮炎引起的。

在某些实施例中，感官不适是由牛皮癣引起的。

在某些实施例中，治疗是治疗皮肤畸感。

在某些实施例中，皮肤畸感是皮肤刺激、瘙痒或疼痛。

在某些实施例中，治疗是治疗皮炎。

在某些实施例中，治疗是治疗特应性皮炎。

在某些实施例中，治疗是治疗犬特应性皮炎。

在某些实施例中，治疗是治疗牛皮癣。

在某些实施例中，治疗是治疗眼部不适。

在某些实施例中，眼部不适是由眼睛疲劳、眼睛疲劳、眼部手术、与眼表面相互作用的空气中的刺激物或污染物、长时间佩戴隐形眼镜、过度暴露于阳光、眼疲劳、结膜炎或干眼综合症引起的。

在某些实施例中，治疗是治疗热不适。

在某些实施例中，治疗是为了提高运动表现而治疗热不适。

在某些实施例中，治疗是治疗热应激。

在某些实施例中，治疗是治疗绝经后妇女的潮热和/或盗汗(血管运动症状)。

在某些实施例中，治疗是治疗手术后低体温或麻醉后颤抖。

在某些实施例中，治疗是为人体皮肤传递一种清新感。

治疗的疾病-眼部不适

在一个方面，本发明提供了一种用于治疗感官不适的方法，适用于需要这种治疗的受试者。该方法包括向受试者施用一种含有治疗有效量的1-二异丙基膦酰烷基(DIPA)化合物的组合物。

在本申请中，“感官不适”包括但不限于以下症状：眼红和流泪，刺激，瘙痒，疼痛和感觉异常，例如有颗粒感、疼痛、有异物感、干涩和眼疲劳。

在本文中，所述“治疗有效量”或“有效治疗量”是指在适用于任何医疗治疗的合理效益/风险比例下，足够的DIPA化合物数量。然而，应理解的是，DIPA化合物的总日用量应在医生的合理医疗判断范围内确定。对于任何特定受试者，具体的治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的疾病及其严重程度；所使用的具体组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和DIPA化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与DIPA化合物联用的药物；以及医学界熟知的类似因素。例如，在技术领域内众所周知的做法是，起始剂量通常比实现期望的治疗效果所需的剂量低，并逐渐增加剂量直至达到所期望的效果。此外，“治疗有效量”是指能够引发研究人员或临床医生所寻求的组织、系统或受试者的生物学或医学反应，特别是能够引发某种期望的治疗或预防效果，例如对抗感官不适。.

技术领域的专业人士认识到，即使疾病没有完全被根除或预防，只要在受试者中部分改善或缓解了其症状和/或效果，其治疗也是“有效”的。对于确定缓解感官不适方法的有效性，熟悉该领域的专业人士知道有各种各样的指标可供使用。

此处所用的术语“治疗”或“疗法”并不一定意味着完全治愈或消除疾病或病况。对于疾病或病况的任何不良迹象或症状的任何缓解，无论程度如何，都可以被视为治疗和/或疗法。此外，治疗可能包括可能会加剧患者整体幸福感或外观的行为。

在某些实施例中，DIPA化合物是从以下化合物中选择的：

在某些实施例中，DIPA化合物的浓度为0.5-20毫克/毫升。

在某些实施例中，该组成是液体组成。

在某些实施例中，该组成是液体组成，其中DIPA化合物的浓度为1-5毫克/毫升。

在某些实施例中，眼部不适是由眼睛紧张、眼部手术、与眼睛表面相互作用的空气中的刺激物或污染物、延长佩戴隐形眼镜、过度暴露于太阳、眼睛疲劳、结膜炎或干眼症引起的。

如本文中所使用，“asthenopia”指的是眼睛功能的减弱，尤其是由于过度使用视频屏幕，例如智能手机或计算机所致。视觉系统被过度使用，导致广泛的眼睛不适。调节、聚合和瞳孔直径的肌肉控制系统疲劳。除了肌肉紧张外，减少眨眼也会导致眼睛不适的症状，包括疲劳、缺乏焦点、视力模糊、昏暗、头痛和干涩感。

在某些实施例中，不适是疼痛。

在某些实施例中，疼痛与干眼症有关或由干眼症引起。

在某些实施例中，给药是局部给药。

在某些实施例中，给药是局部给药于受试者的眼睑。

在某些实施例中，给药至少每天一次。

在某些实施例中，给药至少持续一周。在某些实施例中，给药至少持续两周。

在另一方面，本发明提供一种药物组合物，包括从DIPA-1-5、DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8和DIPA-1-9中选择的治疗有效量的DIPA化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本文所描述的药物组合物可以直接用于人类患者，或与其他活性成分混合在药物组合物中，如联合治疗，或与载体、稀释剂、赋形剂或其组合混合。适当的制剂取决于所选择的给药途径。制剂和给药本文所描述的化合物的技术在熟练的技术人员中是众所周知的。

如本文所使用，“载体”指的是促进化合物被细胞或组织吸收的化合物。例如，但不限于，二甲基亚砜(DMSO)、乙醇(EtOH)或PEG400是常用的载体，它们促进许多有机化合物被主体的细胞或组织吸收。

如本文所使用，“稀释剂”是指在药物组合物中没有药理活性但可能在药学上是必要或可取的成分。例如，稀释剂可用于增加一种有效药物的体积，因为其质量过小难以制造和/或给药。它也可以是一种液体，用于溶解要通过注射、摄取或吸入给药的药物。在技术领域中，一种常见的稀释剂是缓冲水溶液，例如磷酸盐缓冲生理盐水，它模拟了人类血液的成分。

如本文所使用，“赋形剂”指的是一种惰性物质，被添加到药物组合物中以提供体积、一致性、稳定性、结合能力、润滑性、分散能力等等。"稀释剂"是赋形剂的一种类型。

在某些实施例中，DIPA化合物是从以下化合物中选择的：:

在某些实施例中，DIPA化合物的浓度为0.5-20毫克/毫升。

在某些实施例中，该组成物是液体组成物。

在某些实施例中，该组成物是液体组成物，含有1-5毫克/毫升的DIPA化合物浓度。

在某些实施例中，眼部不适可能是由眼睛疲劳；眼部手术；与眼表面相互作用的空气中的刺激物或污染物；长时间佩戴隐形眼镜；过度暴露于阳光；眼疲劳；结膜炎；或干眼综合征引起的。

某些实施例涉及携带所述组成物的棉签、擦拭片、垫子或湿巾。

在某些实施例中，通过浸渍药物溶液的棉签或擦拭片实现对眼睑边缘的局部给药。眼用滴剂是最常见的眼科药物给药形式，但是当药物分子接触到角膜时，滴剂可能加剧不适，因为角膜是一个富含伤害感受器且对疼痛刺激非常敏感的表面。使用擦拭片或棉签降低了药物与角膜的接触，因为角膜大约占据了前眼球总面积的1/6。

某些实施例涉及适用于贴在眼睑上的控释贴片，其中载有所述组成物。

某些实施例涉及用于提供含有所述组成物的喷雾剂的加压容器。

某些实施例涉及手动激活的喷雾器，与一个装有所述组成物的储液器相连接。

某些实施例涉及制备所述组成物的方法。

治疗的疾病-疲劳等

在某些实施例中(例如，在疗法方法中使用，用于制药品的制造，或治疗方法中使用)，治疗是针对疲劳、疲倦或抑郁的治疗。

在某些实施例中，治疗是针对疲劳的治疗。

在某些实施例中，疲劳是由慢性疾病、衰老、神经功能障碍或心理功能障碍引起的疲劳。

在某些实施例中，疲劳是由癌症或癌症相关治疗引起的疲劳。

在某些实施例中，疲劳是由焦虑、抑郁、热应激、认知功能障碍、过度体力劳动或过度脑力劳动引起的疲劳。

在某些实施例中，疲劳与思考能力下降、注意力不集中、学习能力减弱或工作表现下降相关。

治疗的疾病-认知功能障碍等

在某些实施例中(例如，在疗法方法中使用，用于制药品的制造，或治疗方法中使用)，治疗是针对认知功能障碍的治疗。

在某些实施例中，治疗是为了增强认知功能(例如，对健康人和患病者均适用)。

在某些实施例中，增强的认知功能是改善运动中的手眼协调能力。

在某些实施例中，增强的认知功能是在机会或心理技能游戏中提高表现。

治疗

在本文中，用于治疗疾病的术语“治疗”通常涉及对人类或动物(例如，在兽医应用中)进行治疗，从而实现某种期望的治疗效果，例如抑制疾病的进展，并包括减缓进展速度、停止进展速度、减轻疾病症状、改善疾病症状以及治愈疾病。预防措施(即预防性治疗)也包括在内。例如，对于尚未患病但有患病风险的患者的使用，也包括在“治疗”一词的范围内。还包括对被视为正常或健康的个体进行治疗，以增强认知或身体性能的基础水平。

术语“治疗有效量”，在本文中指的是一种化合物或包含该化合物的材料、组合物或剂型的量，当按照期望的治疗方案进行给药时，能够产生某种期望的治疗效果，并与合理的收益/风险比相符。

联合治疗

术语“治疗”包括联合治疗和疗法，其中两种或更多的治疗或疗法结合在一起，例如顺序或同时进行。例如，本文所描述的化合物也可以与其他药物一起用于联合治疗，例如与其他药物同时或顺序使用。

本发明的一个方面涉及在本文中所描述的DIPA化合物与一个或多个(例如1个、2个、3个、4个等)其他治疗剂的联合应用。特定的联合应用可由医生或药师酌情选择，并使用其一般常识和熟练从业者所知的给药剂量方案。

其他治疗剂的例子包括：抗炎糖皮质激素；镇痛药；交感神经兴奋剂脱充血剂；抗组胺药；局部麻醉剂；眼科润滑剂；防晒成分；抗痘痘剂；角质溶解剂；抗痔剂；阴部瘙痒或不适的药物；抗生素；皮肤保湿剂；或抗皮肤衰老剂。

试剂盒

本发明的一个方面涉及一个试剂盒，其中包括：(a)本文所描述的DIPA化合物，或者包含本文所描述的DIPA化合物的组合物，例如，它们可优选地放在合适的容器中和/或配备合适的包装；以及(b)使用说明书，例如，关于如何给予该化合物或组合物的书面说明。

这些书面说明还可以包括适用于该活性成分的适当治疗的适应症列表。

这些书面说明(例如，小册子或包装标签)还可以包括剂量和给药说明、配方组成细节、临床药理学、药物耐药性、药代动力学、吸收、生物利用度和禁忌症等信息。

诊断方法

本文所描述的DIPA化合物也可用于诊断，例如用于诊断触觉过敏症，例如冷触觉过敏症。更具体地说，DIPA化合物可以用作对冷触觉过敏症的诊断试剂(例如，鉴别诊断)。

触觉过敏症是由于通常不引发疼痛的刺激而导致的疼痛。例如，温度和物理刺激可以引起触觉过敏症，并且通常发生在受伤部位之后。

目前尚未知道用于区分神经性疼痛(例如触觉过敏症)与体性疼痛的简单诊断工具。应用DIPA化合物，例如DIPA-1-7，于皮肤上，可用于提供对冷触觉过敏症的鉴别诊断。

给予途径

DIPA化合物或含有DIPA化合物的药物组合物可以通过局部应用的方式给予受试者，例如如本文所述的方式。

在本文中，术语“局部应用”指的是将药物应用于与空气接触的身体表面，包括皮肤、会阴部位、眼眶过渡上皮表面、嘴唇、鼻子、肛门、气道消化道(鼻黏膜、口腔、咽喉和食道表面)、下呼吸道以及胃肠道腔。

特别优选的应用部位是三叉神经和舌咽神经支配的表面，其中包括头皮、面部皮肤、眼周皮肤、嘴唇、鼻腔和口腔，以及咽喉部位。另一个优选部位是颈部、肘部和膝盖等常与特应性湿疹和银屑病瘙痒有关的表面。还有一个优选部位是头皮，头皮可能是银屑病和脂溢性皮炎炎症的部位。

在某些实施例中(例如，在疗法方法、药物制剂的制造或治疗方法中)，治疗可以通过局部给药来进行。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗皮肤疾病。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗面部皮肤疾病。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗眼眶周围皮肤、眼睑皮肤、颧骨皮肤、额头皮肤或头皮的疾病。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗眼眶、额骨或颧骨的皮肤表面的疾病。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗肛门和/或男性或女性生殖器的皮肤表面的疾病。

在某些实施例中，治疗是通过局部给药治疗锁骨上窝或胸乳突肌上方的皮肤的疾病。

受试对象/患者

受试对象/患者可以是哺乳动物，例如有袋动物(例如袋鼠、袋熊)，啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)，鼠类(例如小鼠)，兔形目动物(例如兔子)，鸟类(例如鸟类)，犬科动物(例如狗)，猫科动物(例如猫)，马科动物(例如马)，猪科动物(例如猪)，绵羊科动物(例如绵羊)，牛科动物(例如牛)，灵长类动物(例如灵长类动物)，类人猿(例如猴子或猿类动物)，猴类动物(例如卷尾猴、狒狒)，猿类动物(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩)，或人类。

在一个优选实施例中，受试对象/患者是人类。

配方

尽管DIPA化合物可以单独给予，但最好将其制成药物配方(例如，组合物、制剂、药物)，其中包含至少一种如上所述的DIPA化合物，以及一种或多种其他在医学领域内熟知的药学可接受成分，包括但不限于药学可接受载体、稀释剂、辅料、佐剂、填料、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、溶解剂、表面活性剂(例如湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、香料剂和甜味剂。该配方还可以包含其他活性剂。

因此，本发明还提供如上所述的药物组合物和制备药物组合物的方法。如果以离散单元(例如，棉签、擦拭物、垫片、湿巾等)的形式配制，则每个单元含有化合物的预定量(剂量)。

本文中使用的“药学可接受”一词指的是在合理的医学判断范围内，适合与所讨论受试对象(例如，人类)的组织接触的化合物、成分、材料、组合物、剂型等，其毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症不过度，与合理的效益/风险比例相符。每种载体、稀释剂、辅料等在与配方的其他成分兼容的意义上也必须是“可接受”的。

适合的载体、稀释剂、辅料等可在标准药学文献中找到，例如：Remington'sPharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990；andHandbook of Pharmaceutical Excipients,第5版,2005。

这些制剂可以通过药学领域中众所周知的任何方法来制备。这些方法包括将化合物与载体及一种或多种辅料结合。一般来说，这些制剂通过将化合物与载体(例如，液体载体、细粉末固体载体等)均匀且密切地结合，并在必要时对产品进行造型而制备。

这些制剂可以是液体、溶液(例如，水溶性、非水溶性)、悬浮液(例如，水悬浮液、非水悬浮液)、乳剂(例如，油包水乳剂、水包油乳剂)、口服液、糖浆、蜜糖、漱口水、滴剂、片剂(包括，例如，包衣片剂)、颗粒、粉剂、含片、橡胶囊(包括，例如，硬胶囊和软胶囊)、糖衣丸、药丸、安瓿、药丸、栓剂、洗液、膏剂、糊剂、软膏、乳霜、润肤露、油剂、泡沫剂、喷雾剂、雾化剂或气雾剂的形式。

此外，DIPA化合物还可以作为药物制剂或化妆品制剂的辅助成分使用。

剂量

对于一个在该领域具备专业技能的人来说，他们会意识到DIPA化合物及其组合物的适当剂量因患者而异。确定最佳剂量通常涉及在治疗效果与任何风险或有害副作用之间进行平衡。所选的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于特定DIPA化合物的活性，给药途径，给药时间，治疗持续时间，与其他药物、化合物和/或材料的联合使用，疾病的严重程度，患者的物种、性别、年龄、体重、健康状况和既往病史。DIPA化合物的用量和给药途径最终将由医生、药剂师、兽医或临床医生决定，尽管通常剂量将被选择为在达到所需效果的作用部位产生局部浓度的同时不引起重大有害或有害的副作用。

给药可以通过单次剂量、持续给药或间断给药(例如，在适当的时间间隔内分割剂量)来实现，直至治疗结束。对于如何确定最有效的给药途径和剂量，对于具备相关技术的专业人员而言，这些方法是众所周知的，将随着用于治疗的配方、治疗目的、正在治疗的靶细胞和接受治疗的患者而有所不同。单次或多次给药可以由治疗医生、兽医或临床医生选择剂量水平和模式来执行。

送药靶点

经过实验证明，用于局部传递抗疲劳剂并实现最大感觉效果的最佳靶点位于三叉神经的眼支和颧支的感受野上。脸部上的优选位点为图1中标记为(f)、(c)和(a)的部位，其中(f)代表眼眶，(c)代表颧骨，(a)代表下眼眶。标记为(f)的眼眶部位包括眼睑和睫毛的皮肤。

图1是一个人头的插图，显示了用于测试的脸部位点：(a)下眼眶，(b)颊部，(c)颧骨，(d)腮腺-咬肌颊部，(e)额部，(f)眼眶部。图片来源：Pilsl等人，2012年。

为了对抗疲劳或热应激，活性成分最好送到(a)、(c)或(f)部位。另外，如果冷却剂用于治疗绝经后女性的潮热和/或夜间盗汗(血管运动症状)，也可以涂抹在锁骨上方或胸部的皮肤上。为了减轻皮肤的感觉不适，冷却剂可以直接应用于损伤和/或炎症部位。

次要的部位是额骨和头皮上的皮肤(标记为(e))，但对于(e)需要更高浓度的冷却剂。其他皮肤部位，如颊部、腮腺质部、耳周围和下巴，缺乏敏感性，而像人中、鼻部、颞部和颈部等部位在拓扑上不方便用于冷却剂的传递。在实际应用中，冷却剂可以喷洒或涂抹(例如用棉签、湿巾、或膏霜、乳霜或药膏)在眼眶皮肤、颊骨(颧骨)皮肤、或在位于颧骨和鼻子之间的眼眶下的皮肤上。重要的感受野来自三叉神经的分支，即颧面神经(V2)的颧骨面神经和额神经(V1)的额上神经和额上毛状神经。

DIPA-1-7和DIPA-1-8的一个不寻常特点是它们在涂抹后在皮肤上留下一个储存器，因此在初始感觉消失后，当皮肤再次潮湿时，动态凉爽感会重新出现。这个特性对于在环境温度升高的条件下使用DIPA-1-7和DIPA-1-8尤其有益。当出于热量而激活出汗时，汗液重新溶解DIPA-1-7和DIPA-1-8，并增强和持续感官效应。这种自我调节的反馈机制使得DIPA-1-7和DIPA-1-8的效果更加稳健、有效，并且持续时间更长。

传递方法

DIPA化合物的传递可以通过溶解在固体或半固体载体中实现，例如，可以在乳霜或软膏中，或者在液体载体中，例如在溶液、乳液、棉签、湿巾上，或作为喷雾雾化。

对于固体或半固体载体，DIPA化合物的优选浓度为0.01至2.0％重量/体积。除非另有说明，重量/体积以g/cm³为单位进行测量，因此0.01％重量/体积是指在1cm³的配方中含有0.1毫克(0.0001克)DIPA化合物；而2％重量/体积是指在1cm³的配方中含有20毫克(0.02克)DIPA化合物。

对于液体载体，优选的给药体积为0.05至0.15毫升。例如以喷雾形式给药的这种体积不会在给药部位引起太多湿润或残留物。

对于液体载体，DIPA化合物的优选浓度范围为0.5至20毫克/毫升。对于眼眶部位，优选浓度为1至5毫克/毫升。对于颧骨和眼下皮肤，优选浓度为5至10毫克/毫升。对于额头皮肤和头皮，优选浓度为10至20毫克/毫升。

优选的DIPA化合物在应用部位的投放量为0.01至5毫克；例如，0.1至5毫克。

将DIPA化合物擦拭在目标皮肤上可以使用预处理的湿巾，这在个人护理产品中是众所周知的，例如用于擦拭婴儿换尿布后的皮肤，或者用于卸妆(例如Pond’s品牌的6”x8”(15厘米x20厘米)Clean Sweep洁面和卸妆湿巾)。通常，这些湿巾被包装成单次使用的密封单元或多个湿巾组合。对于单个单元，适用的包装材料是相对不透气的，以防止湿巾干燥，并且能够形成可剥离的密封。适用于此发现的湿巾材料的例子包括聚酰胺(20％尼龙)-涤纶，人造丝(70％)-涤纶(30％)组织，聚丙烯不织布，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)，聚酯聚丙烯混纺物，棉花或微纤维(指合成纤维的度数小于一丹尼尔或一德西)。

另外，含有DIPA化合物的溶液可以在储液瓶中提供，并配备独立的应用器，或者作为预包装的单个单元。例如，Puritan 803PCL应用器是理想的棉尖应用器，连接在一个3英寸(约7.5厘米)的聚苯乙烯棒上，用于将DIPA化合物输送到眼眶周围的皮肤。此类应用器的示例是Unicep公司(位于美国爱达荷州桑德波因特工业大道1702号)的SwabDose^TM和American Empire Manufacuring公司(位于美国伊利诺伊州沃基根市霍桑庭大道3828号)的Pro Swabs。每个应用器尖端通过将吸收材料的尖端(例如40至100毫克的棉花)浸入0.5至1.5毫升的DIPA化合物水溶液中使其浸湿，并包装在一个单独的容器中。

对于面部使用，使用者被指导轻轻地将乳霜、润肤液或湿纸巾涂抹或喷洒到目标面部皮肤上，眼睑闭合或其他皮肤表面。使用说明可能包括指导使用者重复应用或“补充”，以确保足够的组成物送达到目标位置。一旦使用者了解了预期效果，就可以根据需要调整剂量(例如，通过在眼窝的内侧或外侧轻轻涂抹)，以达到所需的效果。已经观察到，经过一两次尝试后，个体学会了如何有效地应用冷却剂，并且在此过程中没有不适的风险(例如，眼部不适)。

对于应用于肛门生殖器皮肤或其他高度敏感的表面，可以使用手动激活泵喷洒DIPA化合物，例如每次喷洒约0.15毫升的体积。

作用机制

DIPA-1-7和DIPA-1-8通过在涂抹部位引发“动态凉爽”的感觉，产生抗疲劳效果，并缓解热应激和皮肤不适。这种感觉不是持续的凉爽、寒冷或冰凉感觉，而是一种强烈的清新感觉，就像突然间一阵清凉的微风吹到皮肤上(例如脸部)。这种效果非常明显。这种感觉的神经生理基础、可能的受体机制，以及动态凉爽对抗疲劳、抗热应激和抗瘙痒作用的重要性在本文中进一步讨论。

神经生理学:

在皮肤温度降低时，小有髓(Aδ)纤维和无髓(C)纤维的传入神经冲动率增加，例如在35℃和15℃之间。这些神经信号检测到热量的减少，并传输到中枢神经系统，产生冷感和寒冷的有意知觉。当皮肤温度从35℃升高到40℃时，C纤维的冲动率增加，这些纤维传递温暖的信号(参见，例如，Hutchison等人，1997)。冷/寒和温暖的感受机制和“电缆线”是分开而独立的，但在大脑中和可能也在外围相互抑制。感觉受体是特异性的，不对机械刺激作出反应。在分子水平上，冷却剂的靶结合位点被认为位于离子通道受体上，在温度下降时发生去极化。热量的减少降低了受体的放电阈值，促进的去极化引发产生神经元信号。

这些神经元的中枢反应已经被记录并从大鼠的浅部髓后脊柱角进行了研究，该部位对大鼠的面部和舌头的无害热刺激作出反应。-Δ5℃的阶跃变化刺激了静态发放率和主要具有动态特性的细胞(参见，例如，Davies等人，1985年)。在猫和人类的类似研究中显示，温度的阶跃下降(动态变化)低至Δ0.5℃/秒，神经元和心理物理测量均可轻松检测到(参见，例如，Davies等人，1983年)。

从对神经元放电的尖峰模式(脉冲/秒)的研究中可以清楚地看出，对温度变化的动态而不是静态放电反应是产生凉爽/寒冷感觉最强烈的刺激(参见，例如，Hutchison等人，1997年)。也就是说，大脑“感知”-Δ℃/t而不是绝对℃。因此，一个能模拟神经元放电中的Δ℃/t的冷却剂将产生“动态凉爽”效果。

动态凉爽与抗疲劳之间的关系:

动态凉爽(相对于静态冷却/冷)对于抗疲劳效果至关重要。例如，如果一个人感到疲劳并驾驶汽车，打开空调并将空气吹向脸部将缓解疲劳。但仅仅通过打开空调降低环境温度并在车内感到寒冷并不会产生太大的效果。

本文所描述的用于提高性能和对抗疲劳的局部治疗避免了对大脑化学进行侵入性干预的全身性药物的必要性。这种局部治疗的好处可以从本文中所描述的案例研究中得到说明。

受体机制:

有一种普遍的观点认为，“TRP-”离子通道受体(A1，M8，和V1至V4)是生理温度感应的主要生理元素。其中TRPM8受体是对感觉/冷却剂如薄荷醇和icilin(参见McKemy，2002)做出反应的受体。TRPM8是一个由1104个氨基酸残基组成的蛋白质，具有六个跨膜结构域。通过降低环境温度激活该受体导致在第五个和第六个跨膜环之间打开一个孔，非特异性阳离子进入细胞。TRPM8受体在感觉神经元上的去极化可能主要通过Aδ(和一些C)纤维传递信号。

虽然TRPM8在感觉生理学中的作用概念对于温度的物理变化可能是有效的，但对于薄荷醇和icilin等化学剂的感觉效应的解释更为复杂。薄荷醇不仅在体外刺激TRPM8，还刺激与温暖有关的TRPV3受体(参见Macpherson等，2006)。薄荷醇还抑制TRPA1受体。icilin不仅刺激TRPM8，还刺激TRPA1，并抑制TRPV3受体(参见Sherkheli等，2012)和甘氨酸能传递(参见Cho等，2012)。因此，薄荷醇和icilin是“多功能”冷却剂，它们的特定感觉效应可能与任何一个特定的受体蛋白质无关。发明家对大量的冷却剂进行了筛选，但令人惊讶的是，只有DIPA-1-6和DIPA-1-7在皮肤上产生了超强的动态凉爽效果。DIPA-1-8也产生了强烈的冷却效果，并且其作用时间较长，但它没有DIPA-1-6和DIPA-1-7那种超级“哇”冷却效果。其他冷却剂的刺激作用较弱或作用时间较短，因此不太适合本文中所考虑的用途。

可以得出结论，DIPA-1-7和DIPA-1-8与位于敏感于物理温度降低的神经末梢上的电压门控离子通道受体上的一个位点结合。这个事件促进了神经元的去极化，产生了冷却/寒冷信号，并通过Aδ和C纤维向中枢神经系统传递一个动作电位。如果神经末梢位于面部皮肤上，信号可以从脑干的三叉神经核背侧表面记录。进一步的传输和信号整合导致了对凉爽/寒冷感觉的知觉，并且与刺激部位有地形学的联系。

当我们研究DIPA化合物的结构-活性关系时，我们发现当R1＝R2＝异丙基且R3＝己基(C6)或庚基(C7)时，会观察到动态凉爽效应。当R3＝辛基(C8)时，也可以得到强烈而持久的冷却效果。然而，当R1＝R2＝异丁基且R3＝丁基到辛基(C4到C8)时，部分观察到动态凉爽，但强度要小得多。正如在本文所描述的研究中所示，这种二异丁基和二异丙基化合物之间的区别在动物的摇晃行为中也可以观察到，而摇晃行为是大鼠的降温作用的指标(因为摇晃会被高温抑制)。

摇晃行为是关于脊柱轴的旋前肌肉和旋后肌肉的快速交替收缩，可以很容易地观察和计数。被毛和羽毛覆盖的动物在潮湿和寒冷时会摇晃，就像湿狗一样(参见，例如，Dickerson等，2012年；Ortega-Jimenez等，2012年；Wei，1981年)。“湿狗摇晃”已在动物中进行了详细研究。大鼠可以摇晃头部，上半身，或者摇晃足够剧烈，影响整个身体，使动物失去平衡。DIPA-1-7和DIPA-1-8引起了激烈的摇晃。对于被毛和羽毛覆盖的生物来说，摇晃的目的或生存价值是去除附在皮肤上或附近的水滴。通过摇晃去除皮肤上或附近的水滴，减少了生物通过蒸发来去除水分的能量需求。在人类中，类似于摇晃的行为是发抖，这是由于广泛的凉爽/寒冷感觉引起的。从麻醉后恢复的人体表现出激烈的颤抖；这种状态称为麻醉后颤抖。

Icilin(1-[2-羟基]-4-[3-硝基苯基]-1,2,3,6-四氢嘧啶-2-酮)会导致大鼠产生激烈的摇晃。令人惊讶的是，两种有效的对薄-薄脑腈酸酰胺冷却剂[(R)-2-[((1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己烷羧酰)-氨基]-丙酸乙酯，[((1R,2S,5R)-2-异丙基-5-甲基-环己烷羧酰)-氨基]-乙酸异丙酯]，其TRPM8受体的EC50值与icilin相似，但不会引起摇晃(在雄性大鼠中以50mg/kg皮下注射并观察1小时)。G805A突变位于第二至第三跨膜环上，会消除icilin在TRPM8受体上的激活作用，但对薄荷醇的作用不受影响。很可能DIPA-1-6、DIPA-1-7和DIPA-1-8在TRPM8受体上也有特定的结合位点和激活位点，这些位点与薄荷醇或对薄-薄脑腈酸酰胺不共享，但最近的研究表明，即使在TRPM8受体上存在G805A突变，DIPA-1-6和DIPA-1-7仍然具有活性。

在Watson等人于1978年的研究中，显示出一个能够从受体接受氢键的极性氧基团的存在对生物活性至关重要。在对异丙基类似物与对叔丁基类似物进行分子轨道计算(使用Molecular Modelling Pro v6.0.3，ChemSW Inc，加利福尼亚州费尔菲尔德94534，美国)，结果显示，对叔丁基实体中的氧具有稍高的部分负电荷(0.007e)，这表明对叔丁基取代基有利于氧与受体的氢键结合位点产生更高的亲和力。因此，异丙基取代基由于“亲和力较松散”，可能更快地与受体结合和解离，有利于产生受体的动态启动和停止反应。这种与结合位点的快速相互作用将有利于更“动态”和强烈的冷却刺激，并产生所谓的摇晃现象。

另一个可能性是DIPA-1-7对TRP受体具有双重作用，因此它既刺激TRPM8，又在较高浓度下刺激TRPV1。这种双重作用将产生冷热协同效应，可能导致更动态的冷却感觉。

TRPM8,TRPA1,和TRPV1受体测试:

测试化合物的体外效应是在克隆的hTRPM8通道上评估的(由人类TRPM8基因编码，在CHO细胞中表达)，使用Fluo-8钙试剂盒和Fluorescence Imaging Plate Reader(FLIPRTETRA^TM)仪器。为了检查测试化合物的特异性，进一步对TRPV1通道(人类TRPV1基因在HEK293细胞中表达)和TRPA1通道(人类TRPA1基因在CHO细胞中表达)进行了测试。这些实验由ChanTest Corporation(位于美国俄亥俄州克利夫兰市Neo Parkway 14656号)进行。

选择活性成分

理想情况下，用于送达角质化皮肤的活性药物成分(API)应该是稳定的、无毒的，并且具有足够的持续时间和强效性，以激活导致抗疲劳、抗热或抗疼痛效应的机制。API应该在制剂中溶解并均匀分散，以便在制造过程中维持恒定的浓度。最终产品应满足清洁和无菌的标准。为了进行配方，API可以在标准温度和压力条件下为液体，并且可以在中性pH和/或等渗溶液中均匀溶解。通过使用纯化试剂并通过微孔滤器过滤、加热或辐照可以最佳地实现最终产品的无菌。标准的辅料，如乳化剂、等渗盐水、溶剂、稳定剂和防腐剂，可以添加以优化配方，但重要的成分应该优先溶解在水溶性媒介中，如纯净水或标准皮肤学溶剂。

对于每个个体来说，感知到的感觉取决于特定的冷却剂、剂量、用于携带冷却剂的载体、局部给药的方法以及目标表面的性质。发明家已经对面部皮肤进行了许多候选化合物的筛选(参见，例如，Wei，2011)，并确定了DIPA-1-6、DIPA-1-7和DIPA-1-8具有理想的抗疲劳、抗热和抗疼痛剂的所需特性。

总结而言，导致选择DIPA-1-6、DIPA-1-7和DIPA-1-8作为合适的药剂的概念如下：

·使用“动态凉爽”感觉来对抗疲劳并描述其在眼眶和颧骨周围的神经生理学和机制的合理定义。这种感觉效果是非同寻常的，并且只在DIPA化合物中发现，而在结构相似的化合物中并不存在。

·设计一种药物给药方法，避免与角膜上的痛觉受体接触，因为这将导致刺痛/疼痛，并且会产生回避反应，不太实际。

·通过实验寻找理想的化合物(活性药物成分)：DIPA-1-7和DIPA-1-8在水中可溶(在蒸馏水中可获得20mg/mL的透明溶液)，对热稳定，并且在应用浓度为1至10mg/mL时，能产生持续五到七小时的“动态凉爽”效果。重复使用时不会出现速效耐受。

·在体外确定这些化合物的受体靶点，以及所选择API的选择性。.

·确定一种体外孤立神经制备，显示DIPA-1-7具有抗痛作用，并证明这种效应在TRPM8基因敲除小鼠的神经中被废除。

·确定一个“湿狗抖动”的动物模型，以展示“动态凉爽”特性并允许进一步研究其作用机制。

·在人体志愿者中进行测试，展示DIPA 化合物对减轻慢性疾病和热应激导致的疲劳以及增加普通个体的精神能量水平的疗效。

·在人体志愿者中进行测试，显示DIPA-1-7对缓解皮肤的感觉不适是有效的，因此可用作抗痛觉或抗瘙痒剂，或作为评估皮肤感觉异常的诊断工具。

应用

DIPA化合物在角质化的皮肤上施用时，具有模拟热量吸收的感觉/冷却效果，但组织温度没有改变。这些化合物，尤其是DIPA-1-6、DIPA-1-7和DIPA-1-8，也可以穿过皮肤屏障进入全身循环产生冷却作用。这些效应在小剂量下获得，例如0.1至0.5毫升，浓度为1至20毫克/毫升或0.1至2％wt/vol。效果发生很快，小于5分钟，冷感强烈、令人耳目一新。在角质化的皮肤上具有类似生物活性的化合物目前尚未在化妆品或治疗应用中使用。

热应激:

"热舒适度"是空调工程师使用的技术术语，用于定义“人类对周围环境感到满意的心理状态”。维持建筑物或其他封闭空间内居住者的热舒适度是建筑师和设计工程师的重要目标之一。对于大多数人来说，热舒适的室温为25℃(77°F)。经过认真研究发现，每增加1℃至33℃，工作表现和生产力(产出/投入)就会下降2％。在办公室温度为28-30℃(82-86°F)时，会出现更多的出汗、头痛、嗜睡和迟钝、难以集中注意力以及身体的不适。例如，研究表明，将呼叫中心的室内空气温度从25℃增加到26℃，呼叫响应率从7.79下降到7.64个呼叫/小时，损失了1.9％(参见，例如，Tanabe等人，2007)。因此，25℃以上的环境温度属于热应激的一种形式。

巴西和印度的空调系统销售量呈指数增长。这种能源使用的增加进一步引起了对全球变暖的担忧，但由于大多数人口现在在室内工作，能源成本必须与工人的生产力相平衡。基本上，当工人保持凉爽时，他们的效率会更高。一种在炎热环境中对抗精神疲劳的方法，而不需要支出能源费用，将会带来经济效益。在本文所描述的案例研究中，发现将DIPA-1-7涂抹在备考的学生的面部皮肤上，对克服炎热的不适是有益的。

运动表现：

这是人类的自然愿望，希望在身体或心智方面表现更好。最近，人们对利用低温疗法来提高运动表现的兴趣激增。低温疗法被定义为“通过从身体中提取热量来降低组织温度(局部或全身)，以实现治疗目标...”现在已经被接受，通过热量抽取的外部预冷却，例如，通过浸泡在冰中或穿着装满冰的背心，可以提高在炎热环境中的耐力(参见Marino等人，2002年)。对于大约30分钟的任务，体力输出可以提高约5％(参见Grahn等人，2005年)。当核心体温接近40℃(104°F)时，会限制工作能力，这就是热衰竭的发生。预冷却(或内部冷却，例如，喝冰激凌)可以减缓体温升高的速度。

令人惊讶的是，可以通过感觉到凉爽而提高运动表现，而不需要改变核心体温。研究者表明，穿戴商用冷却领巾(Black Ice LLC，位于田纳西州Lakeland)的训练有素的马拉松跑者，其达到自愿精疲力尽的时间延长了13.5％(参见Tyler等人，2011年)。颈部的冷却减轻了感知到的热应变程度，并延迟了自愿终止锻炼的时间点。参与者在颈部冷却时可以容忍更高的体温和心率。

在几项对薄荷醇(一种能产生凉爽感觉但不改变皮肤或核心体温的化学物质)的研究中，注意到感知到的冷却增加，而核心体温并未改变，可能会增强更好的体能表现。这种效果出乎意料，并归因于薄荷醇是一种“积极”的安慰剂(参见Gillis等人，2010年；Schlader等人，2011年)。脸部表面密布有能够检测温度的神经末梢。外周的冷/寒冷检测系统与特定的神经纤维放电相关，并且经过精确调节，可以轻松地区分1℃。在脸部，特别是嘴唇周围，超过92％的热感受单元对冷却作出反应，并且这些神经元在室温下保持持续活跃状态(参见Hutchison等人，1997年)。

薄荷醇在2％或更高浓度时喷洒在皮肤上会引起刺激。尽管受试者报告感到凉爽，但喷洒后并未增强运动表现。然而，类似DIPA-1-7或DIPA-1-8的物质，如果涂抹在脸部，颈部或胸部，很可能会减少热不适并改善运动表现。

疾病相关疲劳：

疲劳被认为是晚期进行性疾病患者，尤其是癌症患者的一个重要问题，因为疲劳会对身体、心理、社交和精神福祉以及生活质量产生负面影响(参见Minton等人，2010)。这种症状被认定为需要管理和研究优先级的条件。对于与癌症相关的疲劳，共识的定义是“与癌症或癌症治疗相关的常见、持久和主观的疲劳感，干扰了正常功能”。

一些专门用于评估疲劳的评估工具已经被开发出来，例如简明疲劳指数(BriefFatigue Inventory)、癌症疲劳量表(Cancer Fatigue Scale)、疲劳评估工具(FatigueAssessment Instrument)和多维度疲劳量表(Multidimensional Fatigue Inventory)。对患者进行评估时，重要的问题包括：

(1)您是否感觉或曾经感觉过异常疲劳？

(2)如果是，您能否在0到10的范围内表示您平均感觉有多累？

(3)这种疲劳对您日常生活活动有多大影响？

与疲劳相关的症状包括：全身无力或肢体沉重感、注意力或专注力下降、精力减退、需要更多休息、对参与常规活动的兴趣减少、失眠或嗜睡、感觉睡眠不恢复或不具有恢复作用、因感觉疲劳而难以完成日常任务、短期记忆问题的感知以及情绪反应的改变(如悲伤、沮丧或易怒)。如果这些症状中的五项或更多症状每天或几乎每天持续出现了两周时间，那么将做出医学疲劳的诊断。

使用这些问卷，估计在约50％的癌症患者在诊断时存在疲劳症状，并且在治疗期间可以增加到60-96％的癌症患者出现疲劳症状。

除了癌症外，疲劳在其他一些严重疾病中也被用于干预研究，包括慢性阻塞性肺疾病、运动神经元疾病、囊性纤维化、痴呆、帕金森病、人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征以及多发性硬化症。已经认识到导致疲劳的潜在原因包括贫血、脱水、感染、营养不良、疼痛、抑郁、睡眠障碍、焦虑、甲状腺功能减退、疾病进展以及肌肉消耗和体能下降。在这些患者中，疲劳的特点包括在没有劳累的情况下感到疲劳，甚至在休息后仍然感到疲劳。患者抱怨日常生活中的正常活动能力减弱，从任务中缓慢恢复，注意力减退。

疲劳的管理包括使用抗抑郁药、镇痛药、兴奋剂、抗焦虑药和营养补充剂等药物。非药物方法包括改善睡眠习惯的咨询、体育锻炼和放松技巧。促红细胞生成的药物如促红细胞生成素和达伯泊肽是有效的，但可能会降低生存率，这一不良反应限制了它们的使用。根据文献综述，除了甲基苯丙胺之外，没有其他中枢神经兴奋剂能够明确地提供对抗疲劳的益处。疲劳被认为是一个需要研究优先的症状，因为癌症治疗的其他不良反应，例如疼痛和恶心，相对而言得到了较好的管理，但疲劳并未得到充分应对。

局部应用“动态凉爽”剂，如DIPA-1-7或DIPA-1-8，可能对抗疲劳，使人精神焕发，并增强活力。

认知提高:

人类天然地渴望在身体或智力方面表现更好。旨在增强表现的化学物质可分为两类：一类是增加体能的，例如类固醇或维生素；另一类是增强认知功能的。被称为“认知增强剂”(CEs)的药物也被称为智力增强剂或神经增强剂，包括咖啡因、安非他命、哌酮、尼古丁、多奈哌齐和莫达非尼等物质。认知增强剂旨在提升个体在诸如抽象思维、注意力、态度、头脑风暴、理解力、识别力、创造性思维、批判性思维、好奇心增强、执行功能、决策能力、印象记忆、情绪和感觉、目标设定、想象力、智力、内省、横向思维、学习、记忆、心算、动机、感知、个性和回忆等任务的能力。

对视觉世界的有意识感知依赖于视觉系统，它能够捕捉视网膜上的图像模式，并将其传递到大脑进行认知和理解。认知功能是记忆、智力、创造力和注意力的总和。人类的注意力进一步分为注意状态(警觉状态)和选择性注意力(在执行任务时不被干扰的能力)。注意力及其药理学的大脑网络已成为研究的主题(参见Lanni等人，2008)。一些认知增强剂的神经递质机制已经得到研究。例如，安非他命和哌酮通过儿茶酚胺通路增加警觉性，尼古丁和多奈哌齐可能通过胆碱能通路影响选择性注意力。视觉系统对生物的生存尤为重要，神经生理学家估计至少有90％的大脑活动集中在处理和解释视觉感觉输入上。

并非所有影响大脑/行为的化学物质都能增强表现。例如，酒精(乙醇)和大麻并不是认知增强剂。认知功能下降称为认知功能障碍(或损害)，其表现为疲劳、嗜睡、记忆力减退、学习能力下降、决策困难、任务无法完成或无法遵循指令。认知功能障碍会导致工作生产力降低、交通事故、无法胜任工作和白天疲劳/嗜睡。许多情况都可能导致认知功能障碍和损害，包括衰老、焦虑、抑郁症、阿尔茨海默病、中风、帕金森病、嗜睡症、失眠、昼夜节律紊乱、阻塞性睡眠呼吸暂停和抑郁症。

在健康人中使用诸如认知增强剂(CEs)等药物，例如在学术和商业环境中，最近引起了广泛争议(参见，例如，Talbot，2009；Greely，2008)。目前使用的药物需要使活性成分进入血液循环，并作用于中枢神经系统的酶或受体。然而，在这里，所提出的认知增强方法是通过将具有“动态凉爽”效果的药物局部应用于面部皮肤的外部表面来实现的，而不会直接影响大脑化学过程。

可以问为什么认知功能会被DIPA化合物增强。如果你问一个来自寒冷气候(例如挪威、俄罗斯或韩国)的人，在脸上感受到寒冷的空气是否会让你清醒并思维更清晰，他们会表示这是已知的经验和显而易见的事实。寒冷的天气使人们思维更加清晰。DIPA-1-7产生的动态凉爽效果类似于这种提醒性事件。

在不希望受任何特定理论限制的情况下，发明者提出了以下假设来解释这一现象。大约2亿年前，某些生物获得了控制代谢产热(温血动物)和维持恒定体温(恒温动物)的能力。这种从“冷血动物”到“温血动物”生理学的进化转变使这些物种能够更好地适应和在多变的环境中生存。虽然人类主要是在温暖的栖息地中进化的，但迁徙也使物种暴露于寒冷的环境。寒冷是警告需要保留体热的第一个信号，它是确保生物生存的普遍和主导性神经信号，因为生物体的代谢机制在恒定温度下运作高效，并且依赖于恒定的温度。在寒冷的情况下，生物会思考和规划生存。这种神经回路构建在大脑中，并作为增强认知功能的模板。

身体表明的感觉不适:

DIPA-1-7和DIPA-1-8所产生的强烈的“动态凉爽”感觉还进一步评估了它们对皮肤的抗瘙痒(和其他抗伤害感)效果。正如在本文中描述的案例研究中所示，使用20mg/mL的浓度，用棉签涂抹在患处，能够有效地停止三名患者由接触性皮炎引起的瘙痒和不适感。

一个可以缓解感觉不适的局部药物有许多用途，包括但不限于：

(a)缓解各种类型皮炎(特应性皮炎，接触性皮炎和刺激性皮炎)引起的刺激，瘙痒和疼痛；

(b)缓解烧伤，创伤，疾病，缺氧或刺激的皮肤引起的疼痛(例如，激光手术损伤的皮肤，糖尿病性溃疡，晒伤，放射治疗)，以及与创面去除有关的操作引起的疼痛；

(c)缓解皮肤感染，昆虫叮咬，晒伤，光动力疗法引起的瘙痒和不适(例如，光化学治疗，基底细胞癌)，苔藓样硬化等引起的瘙痒；

(d)缓解由于干燥症，银屑病或脂溢性皮炎引起的瘙痒；

(e)缓解口腔炎，口腔炎，唇炎，唇炎引起的嘴唇瘙痒；

(f)缓解肛周瘙痒，痔疮不适，肛裂引起的疼痛或瘙痒，肛瘘引起的疼痛，痔疮手术后引起的疼痛，会阴炎，肛周皮肤炎症和各种局部原因引起的不适，如失禁，尿布疹，会阴炎；

(g)缓解阴部瘙痒和疼痛(例如念珠菌感染或特发性疼痛，如阴道前庭炎和阴道疼痛综合症)，性交痛，生殖器感染，包括疣和性传播疾病，真菌感染，皮肤病毒感染(尤其是免疫功能低下的患者)；

(h)缓解因呼吸障碍(如充血，鼻炎，哮喘，支气管炎，肺气肿和慢性阻塞性肺疾病)，呼吸困难，睡眠呼吸暂停和打鼾引起的鼻孔和鼻腔或上呼吸道不适；

(i)缓解眼睛疲劳(asthenopia)，结膜炎(conjunctivitis)，眼表面刺激，角膜磨损引起的疼痛，以及眼部手术引起的疼痛。

特别值得关注的是在头皮瘙痒方面使用DIPA-1-7和DIPA-1-8，例如在脂溢性皮炎和银屑病中使用；这些都是未满足的医疗需求。DIPA-1-7也可以在涂抹化妆品之前或之后用于皮肤清洁，以减少苯甲酰过氧化物治疗痤疮的刺激效果，并减少皮脂分泌，改善“油性”皮肤的外观。

血管运动症状(绝经后妇女的“潮热/盗汗”):

在大脑的体温调节系统感知需要降低体温时，身体会出现潮红(血管扩张)和出汗。绝经后，至少三分之一的妇女会出现“潮热”症状(即短暂但反复出现的感觉温暖和脸红，并且白天和夜晚会出汗)。雌激素替代疗法可能会缓解症状，但激素替代治疗(HRT)是否安全存在不确定性。夜间和清晨时分出现的出汗尤其令人困扰，因为床单会变湿，每天或经常更换床单是一种负担。每周平均可能会出现14次“潮热/盗汗”症状。除了HRT，目前的替代疗法，如瑜伽、针灸和植物雌激素，未被证明有效。

DIPA化合物是强效药剂，能够穿过皮肤屏障被吸收入血液，并产生全身性效应。治疗血管运动症状的一种可能方法是通过控释贴剂经皮肤局部给予DIPA-1-6或DIPA-1-7。DIPA化合物的全身效应将产生冷却感，以抵消中枢散热机制(血管扩张和出汗)的活化。贴剂可以在夜间贴在方便的身体部位，例如锁骨窝上方的皮肤或胸胸乳肌上方的皮肤，释放的DIPA化合物将抑制“盗汗”。另外，DIPA化合物(如DIPA-1-6、DIPA-1-7或DIPA-1-8)可以作为霜剂或润肤乳液涂抹在皮肤上。

对痛觉过敏的诊断剂:

患有神经病理性疼痛的患者常常在本应无害的皮肤冷却时感受到疼痛的感觉，这种情况称为冷性觉痛(参见Wasner等人，2008年)。冷性觉痛在一些患有疼痛的糖尿病患者中有所表现，但目前缺乏一种简单的诊断工具来区分神经病理性疼痛和体表疼痛。应用DIPA-1-7等试剂于皮肤上可能对此类诊断有用，并有助于选择最佳治疗方法。已有使用40％薄荷醇溶液在酒精中作为刺激试剂，但临床结果并不明确(参见Binder等人，2011年)。

预防术后低体温和麻醉后颤抖：

术后低体温(33至36.4℃)和麻醉后颤抖的患者会增加不良后果的风险，包括减少伤口愈合、增加出血和心脏病发作等事件(参见Buggy等人，2000年的研究)。一项研究表明，TRPM8激动剂如薄荷醇通过产生寒冷感觉可以提高核心体温(参见Tajno等人，2011年的研究)。类似DIPA-1-7这样的药物，通过增加对寒冷的敏感性，可能对术后低体温提供有效的治疗。在大鼠中，注射DIPA-1-7会引起颤抖、提高体温，并缩短戊巴比妥酸钠麻醉的持续时间，这是通过恢复翻身反射来测量的。这些药理作用将抵消麻醉药对体温的抑制效应。

药物辅助剂：

在制药或美容领域中，“辅助剂”是指用于增加主要物质、治疗或程序的功效或安全性，或用于促进其性能的附加物质、治疗或程序。DIPA化合物能缓解皮肤的感觉不适，具有抗痛觉活性，并且在涂抹后不到1分钟内即可发挥作用。它们是适用于制药品和涂抹在皮肤上的化妆品的理想辅助剂。

如果主要物质具有刺激性，辅助剂可以用于降低刺激性，从而提高患者的耐受性和依从性。例如，可以向含有苯酰过氧化物的抗痤疮制剂中添加DIPA-1-7作为辅助剂。苯酰过氧化物是主要物质，它作为皮肤脱屑剂，增加细胞更新，并减少P.acnes，但它是一种刺激性物质，涂抹在皮肤上时可能引起灼烧、肿胀和疼痛。同样，用作治疗生殖器疣和皮肤癌的主要物质伊莫喹莫德可能导致水疱和疼痛，使用DIPA-1-7或DIPA-1-8等辅助剂可以提高患者对该药物的接受度和依从性。

DIPA-1-7等辅助剂可用于增加另一主要成分的“表观”疗效，从而提高患者的满意度和依从性。例如，DIPA-1-7在约0.5％至2％的浓度下，可以在涂抹后几分钟内止痒。如果与抗炎类固醇结合使用，这种配方可能比单独使用抗炎类固醇更受欢迎，因为抗炎类固醇的作用时间较长。羟化可的松、曲安奈德和氯倍他索等抗炎类固醇用于治疗皮肤的感觉不适，如昆虫叮咬、接触性皮炎、特应性湿疹和银屑病。在止痒的同时，DIPA-1-7作为辅助剂的存在，有助于减少主要成分的剂量或使用频率，但仍能实现等效的治疗效果。这种辅助剂的益处在于特别有助于使用皮肤类固醇，因为人们都知道其不良作用，如胶原蛋白降解、组织变薄以及增加感染的风险。降低剂量或增强主要成分的疗效的辅助剂具有价值。其他主要的抗瘙痒剂包括乙酸铝和氯化锶或硝酸锶。

对于皮肤疾病，本发现的组合物也可用作光疗、激光疗法、冷冻疗法或皮肤紫外线疗法的辅助剂。

可以与辅助剂DIPA化合物联合或依次使用的药物包括抗炎类固醇药物、抗炎类镇痛药物、抗组胺药物、交感神经仿生血管收缩剂、局部麻醉剂、抗生素、抗痤疮药物、局部维生素A酸类药物、治疗生殖器疣和皮肤癌的药物、抗皱和抗衰老药物、抗痔疮药物、治疗外阴瘙痒的药物、皮肤保湿剂，以及角质溶解剂等药物。

类固醇抗炎剂的例子包括氢化可的松(hydrocortisone)、氯倍他索(clobetasol)、丙酸氯倍他索(clobetasol propionate)、氟倍他索(halobetasol)、泼尼松(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、氟曲安奈德(fluocinolone acetonide)、氟曲安奈德(fluocinonide)、乙酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、乙酸泼尼松(prednisolone acetate)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、乙酸地塞米松(dexamethasone acetate)、倍他米松(betamethasone)、倍他米松戊酸酯(betamethasone valerate)、氟米松(flumetasone)、氟替卡松(fluticasone)、氟甲酯醇(fluorometholone)、丙酸倍可米松(beclomethasonedipropionate)等。

抗炎镇痛剂的例子包括水杨酸甲酯(methyl salicylate)、单乙二醇水杨酸酯(monoglycol salicylate)、阿司匹林(aspirin)、消炎痛(indomethacin)、双氯芬酸(diclofenac)、布洛芬(ibuprofen)、氯洛芬酸(ketoprofen)、萘普生(naproxen)、普拉诺普芬(pranoprofen)、芬普芬(fenoprofen)、舒林达克(sulindac)、芬氯芬酸(fenclofenac)、克利那克(clidanac)、氟布洛芬(flurbiprofen)、芬替阿酸(fentiazac)、布费沙酸(bufexamac)、吡洛昔康(piroxicam)、喷他可辛(pentazocine)等。

抗组胺药的例子包括盐酸苯海拉明(diphenhydramine hydrochloride)、水杨酸苯海拉明(diphenhydramine salicylate)、苯海拉明(diphenhydramine)、马来酸氯苯那敏(chlorpheniramine maleate)、盐酸异丙嗪(promethazine hydrochloride)等。

肾上腺素类似物血管收缩剂的例子包括盐酸苯肾上腺素(phenylephrinehydrochloride)、盐酸奥克西甲唑林(oxymetazoline)、萘甲唑林(naphazoline)和其他咪唑受体激动剂，用于鼻腔除充血作用，以及用于缓解眼表红肿和扩张。

局部麻醉剂的例子包括盐酸地布卡因(dibucaine hydrochloride)、地布卡因(dibucaine)、盐酸利多卡因(lidocaine hydrochloride)、利多卡因(lidocaine)、苯扎卡因(benzocaine)、盐酸普拉莫卡因(pramoxine hydrochloride)、丁卡因(tetracaine)、盐酸丁卡因(tetracaine hydrochloride)、盐酸氧丙卡因(oxyprocaine hydrochloride)、美派卡因(mepivacaine)、盐酸哌洛卡因(piperocaine hydrochloride)等。

皮肤保湿剂成分的例子包括三类：保湿剂、润肤剂和防腐剂。保湿剂，例如尿素、甘油和α羟基酸，有助于吸收空气中的水分并将其保持在皮肤中。润肤剂，例如羊毛脂、矿物油和石蜡，有助于填补皮肤细胞之间的空隙，润滑和平滑皮肤。防腐剂有助于防止保湿剂中的细菌生长。保湿剂可能含有其他成分，如维生素、矿物质、植物提取物和香料。

抗生素的例子包括新霉素、红霉素和抗病毒剂多科山奴以及实验性药物如N,N-二氯二甲基牛磺酸。局部抗痘剂包括过氧化苯甲酰、间苯二酚、间苯二酚单乙酰酸盐和水杨酸。其他抗痘剂包括顶用维甲酸类如阿达帕林和异维A酸(Retin-A,Differen和Tazorac)。角质溶解剂的例子包括α-羟基酸、乙醇酸和水杨酸。

DIPA化合物作为辅助剂可以用于人类疗法以及兽医用途的药物。

研究1

毒性

对DIPA-1-7进行了初步的毒理学研究。在Ames试验中(采用Strains TA 98和TA100细菌菌株，分别进行了有和无肝脏激活的测试)，未显示出诱变性(测试由美国马萨诸塞州沃特敦的Apredica进行)。

将DIPA-1-7溶解在3％乙醇/97％1,2-丙二醇中，或仅使用溶剂，以每公斤体重20毫克的剂量在雄性大鼠的口部周围给予连续7天(每组10只动物)。在第8天，使用戊巴比妥钠对动物进行了安乐死，并取出并称重主要器官(体、心脏、肝脏、肺、肾脏、睾丸、脑)。对心脏组织(心室和心瓣)和肝脏样本进行了苏木精和伊红染色，并进行了组织学检查。两组之间的体重和器官重量没有显著差异，并且心脏和肝脏的组织学检查结果正常。

研究2

组织温度

本发明的化合物模拟了散热感觉，但不会改变组织温度。对受试者(N＝5)的前额皮肤进行了测量，测量是在额头皮肤上涂抹DIPA-1-7(使用浓度为20mg/mL的蘸有蒸馏水的纸巾)。结果总结在以下表格中。受试者注意到DIPA-1-7对皮肤的冷却效果，这种效果持续了30-45分钟；然而，皮肤温度没有受到影响。

研究3

化合物对面部皮肤的感觉效果

当测试化合物应用于皮肤时，可以对产生的感觉进行表征。个别化合物产生的感觉质量有所不同，具有明显的特征。产生的感觉质量、描述和其提议的作用机制总结如下表所示。对于任何化合物，它们的活性可能会有些重叠，但通常一个化合物仅涵盖一到两种感觉类别。例如，icilin的感觉特性完全是凉爽，几乎没有“寒冷”感。DIPA-1-6和DIPA-1-7在产生愉快、强烈的“动态凉爽”方面是例外。DIPA-1-8、2-6、2-7是强效的产生寒冷感的化合物。

即使冷却/寒冷作用结束后，某些化合物仍具有“储备效应”。实验上，我们在冷却结束后一小时进行测量，将热毛巾和冷毛巾放在应用部位上，并确定冷却效果是否持续至少30分钟。如果发生这种情况，则存在“储备效应”。"储备效应"也可以通过空气流动来激发，但是空气流动的条件很难标准化。DIPA-1-7在皮肤中的“储备效应”很可能是由于残留的药物重新激活以刺激动态/静态感觉神经元。

在本文描述的研究中，对冷感的评级为0、1、2或3：0表示没有变化；1表示轻微的凉爽或寒冷；2表示明显的凉爽或寒冷信号；3表示强烈的冷却或寒冷。这些感觉在5至15分钟的间隔内记录，直到至少连续获得两个零评级。

药物作用的开始时间被认为是达到2个凉爽强度单位的时间。

感觉作用的持续时间被定义为偏移时间减去开始时间。这里定义药物作用的偏移时间为凉爽强度降到2以下的时间，之前曾超过2个单位。不活性化合物被定义为在涂抹后5分钟或更长时间内不超过2个冷却单位的化合物。对于作用时间为两个小时或更长时间的化合物，偏移终点有时会不稳定，因为凉爽/冷感可能会因日光、通风、活动和“储备效应”等环境变量而波动。例如，DIPA-1-8和2-8在皮肤上的作用时间异常长。

对试验化合物在眼周皮肤、颧骨(颧骨)皮肤和额头皮肤上的效果进行了测定。

化合物在眼周皮肤上进行了测试。试验化合物用棉纱布(0.4克，矩形，50毫米x60毫米；来源于日本第三棉纱)涂抹在闭合的眼睑上。试验化合物以1毫克/毫升的浓度在蒸馏水中使用。使用秒表测量了感觉效果的持续时间。将“动态凉爽”程度分为0到+++，中间步骤为+和++。只有足够的“动态凉爽”效果时才表现出抗疲劳效果。

结果总结如下表所示：

化合物在颧骨和额头皮肤上进行了测试。将试验化合物用棉纱布(0.4克，长方形，50毫米x60毫米；来自日本CS-being公司的Daisan Cotton)涂抹在额头和颧骨的皮肤上。试验化合物使用浓度为20毫克/毫升的蒸馏水溶液。使用秒表测量感觉效果的开始和持续时间。动态凉爽的程度从0到+++进行评分，中间有+和++两个步骤。只有足够的“动态凉爽”，才能产生抗疲劳效果。

结果总结如下表所示：

化合物3-1和3-2在眼眶以及颧骨/额头皮肤上进行了测试，并且被发现在这些部位都没有活性。

值得注意的是，DIPA-1-7选择性地产生了不同寻常的“动态凉爽”感觉，并且还具有抗疲劳效果。从上面的数据可以看出，在这些化合物中，DIPA-1-7在眼眶和颧骨/额头表面上引起了“动态凉爽”感觉。另一个具有类似特性的化合物是DIPA-1-8，但该化合物更冷/冰冷，尽管它具有颧骨/额头表面上更长持续时间的良好特性。DIPA-1-7和DIPA-1-8在皮肤上的长持续时间为其作为抗疲劳剂增添了价值，尤其对于慢性疾病的疲劳。如下面所述的案例研究所示，单次使用DIPA-1-7可以至少持续三到四个小时来对抗疲劳和热应激。

DIPA-1-9具有特殊价值的地方在于在眼眶应用后提供的舒适冷却效果以及其长效作用，并且没有任何刺痛感。因此，它在缓解眼部不适方面有着特殊的治疗优势。

对DIPA-1-7进行的结构-活性关系研究并未发现任何能预测其独特特性的属性。例如，2-5在口咽表面会产生动态凉爽，但在皮肤上用擦拭的方式涂抹时并不引发这种感觉。

DIPA化合物的抗疲劳效应和其作用持续时间的感觉特性无法通过标准的亲脂性和亲水性参数的相关性来预测。在对颧弓/前额皮肤的作用持续时间方面，增加R3上碳的数量会增加冷却持续时间，这可能是基于亲脂性的预测，但对于抗疲劳作用，颧弓区的效果表明亲水性也很重要。在“受体机制”部分中，讨论了磷氧基氧原子上的部分电荷对氢键形成和“开关式”或“快速结合-解离”激活动态凉爽的重要性。这里对DIPA-1-7和DIPA-1-8的选择性属性的结果是出乎意料的、令人惊讶的，并且对于抵消疲劳和抗痛觉有实际应用价值。

研究4

化合物对TRPM8的激动活性

采用Fluo-8钙试剂盒和荧光成像板阅读器(FLIPRTETRA^TM)仪器，在CHO细胞中表达的人类TRPM8基因编码的克隆hTRPM8通道上评估了试验化合物的体外效应。这些实验由ChanTest公司(地址：14656Neo Parkway,Cleveland,OH 44128,美国)进行。

实验中，测试化合物和阳性对照溶液是通过将储备溶液稀释在HEPES缓冲生理盐水(HBPS)溶液中制备的。将测试化合物和对照制剂装入聚丙烯或玻璃涂层的384孔板中，然后放入FLIPR仪器(Molecular Devices Corporation，位于美国加利福尼亚州联合城市)。每种测试化合物在4或8个浓度下进行评估，每次测试有n＝4个重复。阳性对照参考化合物是L-薄荷醇，已知的TRPM8激动剂。测试细胞是转染了人类TRPM8 cDNA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)。

在FLIPRTETRA^TM测定中，细胞被分别植入384孔黑色墙壁、平底微孔板中(类型：BDBiocoat Poly-D-Lysine Multiwell Cell Culture Plate)，每孔大约30,000个细胞。细胞在37℃下孵育过夜，形成接近完整的单层细胞，适用于荧光测定。测试步骤是去除生长培养基，加入含有Fluo-8的HBPS(HEPES缓冲生理盐水)40μL，在37℃下孵育30分钟。然后，加入10μL测试化合物、载体或对照溶液，使用FLIPR系统(MDS-AT)自带的FLIPR Control软件进行测定，持续4分钟。

浓度-反应(response)数据通过FLIPR Control软件进行分析，该软件与FLIPR系统(MDS-AT)一起提供，并拟合为以下形式的Hill方程：

在此方程中，"Base"代表低浓度下测试化合物的反应；"Max"代表高浓度下的最大反应；"xhalf"代表EC50，即产生半最大激活的测试化合物浓度；而"rate"则代表希尔系数。使用非线性最小二乘法进行拟合，假定简单的一对一结合模型。通过使用GraphPad Prism6软件获得95％的置信区间。

结果总结如下表所示：

代号	EC50μM	95％置信区间	相对效能
				薄荷醇	3.8	2.5-5.6	1.0
1-5	5.6	4.4-7.2	0.7
				DIPA-1-6	2.4	1.5-4.0	1.6
DIPA-1-7	0.7	0.5-1.0	5.4
				DIPA-1-8	0.7	0.5-1.0	5.4
DIPA-1-9	0.9	0.4-2.5	4.0
				2-4	14.5	7-29	0.3
2-5	1.7	1.0-2.9	2.2
				2-6	0.8	0.5-1.3	4.7
2-7	1.1	0.6-2.3	3.4
				2-8	1.3	0.7-2.3	2.9
3-1	24	8-76	0.2
				3-2	4.2	1.6-10.8	0.9

所有化合物都被发现对受体具有完全的功效：也就是说，它们在受体上的激活程度高达100％，而且在测试的剂量水平内呈现出S形剂量-反应关系。

"二异丙基"化合物的结果如图2所示。

图2是响应(相对荧光单位；％最大值)与测试化合物(被称为激动剂)的浓度的对数之间的关系图，浓度以μM表示，包括1-5(圆圈)、DIPA-1-6(方块)、DIPA-1-7(倒三角形)、DIPA-1-8(菱形)和DIPA-1-9(正三角形)。

DIPA-1-7和DIPA-1-8的效力明显高于1-5和DIPA-1-6。DIPA-1-7和DIPA-1-8的95％置信区间相似，并且有重叠的95％置信区间。DIPA-1-7在产生皮肤和眼表面的“动态凉爽”感觉方面更为有效。此外，DIPA-1-7和DIPA-1-8的效力显著高于1-5和DIPA-1-6。

在测试的12个化合物中，所有化合物在TRPM8受体上表现出全效性，即在较高浓度下，钙离子入侵的刺激率达到了约100％，数据符合S型剂量-反应曲线。较为有效的化合物(DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8、DIPA-1-9、2-5、2-6、2-7、2-8)的EC50值在一个较窄的范围内，其95％置信区间有重叠。在EC50数据中没有明显特征能够预测哪些化合物具有“动态凉爽”属性。而3-1和3-2的结构修饰导致了明显的生物活性丧失。

研究5

孤立迷走神经的研究：直接抗痛觉活性

为了确定DIPA-1-7是否直接作用于感觉神经，它在英国伦敦帝国理工学院开发的一个孤立神经模型中进行了测试(参见Birrell等人，2009年；Patel等人，2003年)。在这个体外测定中，将小鼠迷走神经的片段放置在一个平台上，并在顶部涂抹辣椒素后记录其电活动。辣椒素是一种已知的刺激物，在涂抹于皮肤时会引起疼痛，同时它会使孤立的迷走神经去极化。然后测量物质抑制辣椒素诱导的去极化的能力。

简而言之，从小鼠身上取下迷走神经，位于延髓神经节的尾侧，使用细长的镊子进行处理，然后将其放入含氧的Krebs液，并用95％的氧气和5％的二氧化碳进行冒泡。去鞘的神经躯干被安装在一个“脂质隙”记录室中，并通过流速约为2毫升/分钟的Krebs液不断地超滤，同时使用电极监测神经的电活动。通过水浴将灌注液的温度保持在37℃。通过超滤神经用辣椒素(1μM)诱导去极化。在对辣椒素产生两次可重复去极化响应后，将DIPA-1-7以1mg/mL(4μM)的浓度加入灌注液中，持续处理10分钟，然后再次加入辣椒素。之后用Krebs液冲洗神经直到响应恢复到基线，然后再次挑战辣椒素。正常和TRPM8基因敲除小鼠的结果和示踪图如图3所示。

图3显示了示踪图，描述了在第一示踪(“野生型”)中，DIPA-1-7以1mg/mL的浓度对离体小鼠迷走神经中辣椒素诱导的去极化的抑制作用，并在第二示踪(“TRPM8 KO”)中，显示了在离体TRPM8基因敲除小鼠迷走神经中，DIPA-1-7以1mg/mL的浓度没有显著的抑制作用。

在图3中显示的示踪图中，前两个峰显示了小鼠迷走神经对辣椒素(“Caps”)的去极化响应。在应用了DIPA-1-7(1mg/mL)后，正常小鼠迷走神经(“野生型”)的反应被抑制，但在TRPM8基因敲除小鼠迷走神经(“TRPM8 KO”)中没有被抑制。

DIPA-1-7对离体正常小鼠迷走神经所引起的辣椒素诱导的去极化反应的抑制率约为75％；对于离体TRPM8基因敲除小鼠迷走神经所引起的辣椒素诱导的去极化反应的抑制率约为20％。

这实验清楚地证明了DIPA-1-7对感觉神经的直接药理作用，这是一个令人惊讶和意想不到的结果。此外，TRPM8基因敲除小鼠的反应减弱表明该受体的靶点是TRPM8。这些结果提供了强有力的证据，表明DIPA-1-7可以作为一种抗痛觉药物，并且其靶点受体是TRPM8。

Capsaicin是TRPV1激动剂，过去十多年来，许多制药公司一直在寻找有效的TRPV1拮抗剂。在这里，展示了DIPA-1-7在低浓度下是TRPV1的有效“生理性”拮抗剂。DIPA-1-7本身并不引起去极化，表明它在这种“痛觉”受体上没有激动剂活性。这些结果强烈表明DIPA-1-7作为一种抗痛觉药物的有用性。

研究6

实验动物中的生物活性

毛皮和羽毛的动物——在潮湿和寒冷的情况下——会像湿狗一样抖动(参见例如Dickerson等人，2012年；Ortega-Jimenez等人，2012年；Wei，1981年)。这些抖动是关于脊柱轴的旋前肌肉和旋后肌肉的快速交替收缩，并且可以轻松地观察和计数。“湿狗抖动”已经在动物中进行了详细研究，这种行为被解释为具有生存价值，因为通过抖动，可以将水从皮肤上去除，减少了消耗蒸发能量去除湿度的需要。触发抖动的感觉是毛囊或羽毛之间被水困住。人类的皮肤上几乎没有毛发，因此不会抖动。在人类中，与抖动相对应的行为可能是颤抖，这是一种由于感觉到寒冷/湿润而引起的状况。

动物中的药物引起的震颤现象已经得到了回顾(参考文献：Wei，1981)。在适当的条件下，可以观察到戊巴比妥酸盐麻醉大鼠中的药物引起的震颤，并且在低体温和寒冷的情况下会加强这种震颤现象。

采用“湿狗颤抖”作为动态凉爽的模型来评估测试化合物。使用标准化的程序，测试化合物在刺激颤抖反应方面进行了比较。每个测试化合物以20毫克/千克的剂量通过口服灌胃给予戊巴比妥酸盐麻醉的雄性白化大鼠。在40分钟的时间内，每隔10分钟计算一次颤抖次数。

结果总结如下表所示：

四个“二异丙基”化合物中有三个引起了强烈的颤抖。而“二仲丁基”化合物相对不活跃，除了2-5，在40分钟的观察期内平均产生了4次颤抖。相比之下，1-5，DIPA-1-6和DIPA-1-7分别平均产生了86次，56次和36次颤抖。1-5的强烈活性是不寻常的。1-5在皮肤上使用时会产生一种令人清爽的“动态凉爽”效果，但作用持续时间只有约30分钟，明显小于DIPA-1-6和DIPA-1-7的持续时间。1-5作用时间较短限制了其实际效用。可能是由于其较小的分子尺寸有利于吸收，从而使其更容易接近目标受体，因此引发了更多的颤抖反应。

这些结果为某些化合物选择性地产生强烈的“动态凉爽”提供了最强有力的客观实验室证据，而其他化合物则没有此效果。化合物中碳原子的总数或最大烷基基团中碳原子的数量似乎不是活性的关键决定因素。

在对戊巴比妥酸钠麻醉的大鼠进行研究时，进一步探究了震颤反应与温度感觉之间的关系。在注射麻醉剂后，直肠温度下降，并在麻醉开始后约10分钟左右达到约35℃。这可以通过将动物放在加热表面上并将体温维持在38℃来逆转。

给戊巴比妥酸钠麻醉的雄性白化大鼠口服了20毫克/公斤的DIPA-1-7。在40分钟的时间内，以5分钟或10分钟为间隔计算震颤次数。在未加热的动物中，40分钟后，DIPA-1-7引起36±5次震颤(N＝6)。而在加热的动物中，震颤频率明显减少至5±2次震颤(N＝6)。

该研究表明，DIPA-1-7引起的震颤受到热的抑制。当麻醉的大鼠被放置在温暖的表面上并保持体温在38℃时，DIPA-1-7引起的震颤次数减少了2/3。因此，震颤频率受热反作用，表明其与寒冷感觉和颤抖有关。

研究7

对颅骨局部位点的影响

DIPA-1-7，对于动态凉爽效果最强的化合物，在头颅的其他局部位点进行了测试。使用棉纱布，将20毫克/毫升的溶液涂抹在颊部腮腺质颊、太阳穴、耳周区域上方的皮肤以及后颏部，使用相应的头颅测量点(颞颅联合、冠状缝、髁状突和下颌角)作为标志。令人惊讶的是，在除了颊部腮腺质颊外的所有这些部位，几乎没有观察到冷却效果。在颊部腮腺质颊上观察到了轻微的冷却效果，大约持续30分钟，但这个效果可能是由于溶液扩散到了infraorbital nerve的感受野。因此，对于眼眶和颧骨/额头皮肤的作用是有选择性的，并确定了头部皮肤的重要递送目标。

头部被认为是一个有助于缓解热不适的部位。在Nakamura等人2012年的研究中，十一名男性受试者暴露在温和的热环境中。受试者只穿着短裤，进入了一个保持在32.5±0.5℃、相对湿度为50％的气候室。进入气候室约1.5小时后，启动了局部冷却方案，用水冷却刺激器放置在头部、胸部、腹部或大腿上。受试者感觉脸部和大腿的冷却效果比胸部和腹部的冷却更有效，减轻了热不适。

在Essick等人的研究中，对34名年轻成年人的面部、前臂和头皮的不同部位进行了冷却和寒冷疼痛的检测阈值测定。最敏感的部位是唇红区，能够检测到约0.5℃的温度变化，其次是嘴周围的区域(上唇、下唇、嘴角)和下颌侧面。中颊和耳周皮肤的敏感性较低(能够检测到约2℃的温度变化)，前臂和头皮的敏感性最低(能够检测到约3℃的温度变化)。对眼眶、颧骨和额头皮肤的敏感性没有进行测试。

DIPA-1-7在眼眶、颧骨和额头等部位的使用，例如在办公环境或炎热环境中使用时，如果受试者在这些部位使用化妆品，可能会不方便。令人惊讶的是，发现20mg/mL的DIPA-1-7在头皮上涂抹，特别是靠近发际线的地方，可以产生动态凉爽效果。这种效果足以对抗炎热引起的疲劳。同样，将DIPA-1-7涂抹在胸口正中、胸骨上方的皮肤上，可以缓解炎热带来的不适感。在这些应用部位，化妆品不受影响，但仍能获得令人振奋的凉爽感，对抗炎热的虚弱效应。

DIPA-1-7引起头皮和发际线的冷却能力对于治疗像银屑病、头皮屑和脂溢性皮炎等情况下的瘙痒也非常重要。

研究8

治疗干眼不适

DIPA-1-9(1-二异丙基膦酰基-壬烷)也称为cryosim-3(C3)，是一种水溶性的TRPM8受体激动剂。在这项研究中，将评估DIPA-1-9对缓解干眼不适的效果。

在干眼症患者(n＝30)的上眼睑上使用棉纱垫将DIPA-1-9或溶剂(水)涂抹。评估冷感、泪膜破裂时间(TBUT)、基础泪液分泌和角膜染色情况。然后，使用预装的单元装载器，每天四次，持续2周，将DIPA-1-9以2mg/mL浓度溶于水中涂抹在患者上眼睑上(n＝20)，另一组则只使用水。分析涂抹前、涂抹后1周和2周时的TBUT、基础泪液分泌、角膜染色以及3个问卷调查的眼不适感(VAS评分、OSDI和CVS症状)。

具体的，在每次患者就诊时，使用三个问卷调查分析治疗对眼部不适感的影响。首先，使用1到10的视觉模拟评分(VAS)来评估干眼症(DED)症状。接下来，使用眼表面疾病指数(OSDI)问卷评估症状，该问卷包含12个问题，分级为0到4分(0＝“从不”到4＝“始终如此”)。通过以下方程式计算总分(0-100)：(25×(已回答问题分数之和/已回答问题数目))。参与者还被要求对与计算机视觉综合症(CVS)相关的五个症状进行评级。疲劳、灼热感、干燥、视觉模糊和视觉不清晰症状的排名在0到6分之间(0＝“无症状”，6＝“非常严重的症状”)，并报告两个测试组的平均综合分数。

在从TRPM8EGFP/+小鼠中分离和培养的原始感觉神经元中，DIPA-1-9可以激活钙离子进入，但在从TRPM8-/-小鼠中分离的TRPM8缺乏的感觉神经元中不能激活(图4a-图4c)。图4a显示了对Fura2-AM染色的激发下钙离子流的荧光发射图像。DIPA-1-9(10μM)激活了来自培养的Trpm8^EGFPf/+转基因小鼠中的神经元(绿色)，这些神经元也对薄荷醇(100μM)敏感。白色箭头表示响应的神经元。刻度尺：100μm。图4b显示了Trpm8^EGFPf/+(Trpm8^+/-)或Trpm8^EGFPf/EGFPf(Trpm8^-/-)转基因神经元对DIPA-1-9和薄荷醇的代表性钙迹。高浓度的K+(KCl)用于识别总的神经元数。图4c显示了对Trpm8^+/-(n＝104)和Trpm8-/-转基因神经元(n＝136)上DIPA-1-9和薄荷醇激活的定量。高浓度的K+(KCl)用于识别总的神经元数。DIPA-1-9在转染了TRPV1和TRPA1质粒的细胞中不活跃(图4d、图4e)，但是阳性对照物质辣椒素和芥末油是活跃的。图4d和图4e显示，DIPA-1-9不会在异源性的KNRK细胞中激活小鼠TRPV1或人类TRPA1离子通道，而这些通道可以被阳性对照物质TRPV1辣椒素(10μM)或TRPA1芥末油(100μM)激活。这些结果表明，DIPA-1-9是感觉神经元上TRPM8的选择性和特异性激动剂。

为了确定DIPA-1-9对泪液分泌的影响，将小鼠牢固地固定，用移液管从鼻侧涂抹2μL的DIPA-1-9或溶剂在眼睑上，从鼻侧到颞侧。DIPA-1-9使假手术动物和外眼眶泪腺被外科切除的小鼠的泪液分泌增加(图5a)。图5a显示，与溶剂(生理盐水)相比，DIPA-1-9的局部应用在假手术组(5.4±0.5vs.3.8±0.5,n＝5)和干眼小鼠(1.3±0.4vs.0.5±0.1,n＝6)中都增加了泪液分泌。图5b和图5c显示，假手术组和干眼小鼠模型中，溶剂或DIPA-1-9的应用对自发性眨眼和角膜磨损没有影响。所有数据均表示为平均值±标准误。统计学显著性使用t检验进行计算。^*P<0.05，^**P<0.01。

图6a显示上眼睑密集地被TRPM8纤维所供应，尤其是在睫毛发根处(图6a)，但在结膜上几乎没有TRPM8纤维。图6b显示了通过向上眼睑微量注射神经逆行示踪剂Fluoro-Gold^TM来显示供应上眼睑的三叉神经节神经元。白色箭头表示TRPM8⁺/fluorogold⁺神经元。图6c显示了一种将测试溶液局部应用于上眼睑边缘以靶向TRPM8的方法。DIPA-1-9被擦拭到上眼睑上，触及睫毛，从外侧到内侧方向；这样模拟了自然的泪液分泌方向。预期睫毛将作为液体的导管将水溶液分布到眼睑边缘，并与也是水的角膜前膜融合。然后，角膜上皮垫(称为眼睑擦拭器)将溶液推到眼表面。令人惊讶的是，DIPA-1-9的擦拭方法使得在眼表面上舒适且持久的降温效果可以在没有不适的情况下实现。

图7a-图7e显示了单次应用载剂或DIPA-1-9(2mg/mL)后的凉爽感觉和眼部参数的变化。图7a是眼表面凉爽感觉的视觉模拟量表(VAS)，显示DIPA-1-9在应用后5分钟内增加了眼部冷却VAS评分，并持续了平均46±2分钟。与载剂相比，DIPA-1-9治疗在每个时间点上得分更高，并且具有明显的药理效应。报告的感觉是清爽和动感的冷却感，具有提神的作用。没有患者报告在局部应用载剂或DIPA-1-9后感觉到眼部疼痛或刺激。图7b是干眼症状评分，显示DIPA-1-9治疗后的干眼症状评分显著改善，而载剂对照组没有看到这种改善。图7c是泪液破裂时间(TBUT)(以秒为单位)，DIPA-1-9应用后30分钟和40分钟的TBUT显著高于基线。图7d是基础泪液分泌量(以毫米为单位)，显示在DIPA-1-9应用后20分钟、40分钟和60分钟，基础泪液分泌量显著增加，而载剂对照组没有显著差异。图7e是角膜上皮病变评分，两个治疗组之间没有差异。^*P<0.05，^**P<0.01，与基线值和载剂组相比(每组30名患者)。

图8a-图8f显示了每天四次应用载剂或DIPA-1-9(2mg/mL)治疗2周后眼部参数的变化。图8a显示泪液破裂时间(TBUT)(以秒为单位)。图8b显示基础泪液分泌量(以毫米为单位)。图8c显示角膜上皮病变评分。图8d显示眼部不适的视觉模拟量表(VAS)评分。图8e显示眼表面疾病指数(OSDI)评分。图8f显示计算机视觉综合症(CVS)症状评分。^*P<0.05，^**P<0.01，与基线值和载剂组相比(每组20名患者)。载剂或DIPA-1-9治疗后的眼部参数变化在第1周和第2周的TBUT和角膜上皮病变评分方面没有显著变化(图8a，图8c)。但是，与基线和载剂组相比，DIPA-1-9组的基础泪液分泌量在第1周和第2周显著增加(图8b)。通过三个问卷评估的眼部症状评分显示，DIPA-1-9应用后，VAS评分或总OSDI评分评估的症状严重程度在第2周显著改善，但在第1周没有显著改善，与载剂组相比(图8d，图8e)。在DIPA-1-9应用后，CVS类型的症状在第1周和第2周均显著改善(图8f)。在2周的研究期间，两组均没有报告任何重大的不良反应，如眼部疼痛、刺激或不适。

案例研究

下面描述了使用DIPA-1-7的案例研究：(a)增强认知能力，减少精神疲劳和疲劳，提高表现力；(b)对抗慢性疾病引起的疲劳和乏力；(c)缓解因热应激引起的疲劳和/或不适；(d)缓解皮肤瘙痒和疼痛；(e)减轻“盗汗”的严重程度。

在这些研究中，被试者被提供含有1.5到1.75毫升DIPA-1-7的剂量单元，存储在2.0毫升微量离心管中(Nova Biostorage Plus，Canonsburg，PA 15317)，以及棉纱(0.4克，矩形，50毫米x 60毫米；来自日本的CS-being，Daisan Cotton)。DIPA-1-7以蒸馏水或2％乙醇-98％蒸馏水的溶液形式提供，浓度为1毫克/毫升或5毫克/毫升。被试者被告知如何将溶液放在纱布上，并在闭眼的情况下将湿纱布擦在皮肤表面：对于眼眶和颧骨/额头皮肤，远离睫状沟处，使用5毫克/毫升，如果主要部位是眼周皮肤，则使用1毫克/毫升。这些应用方法分别提供约0.35毫升和0.15毫升的剂量。

对于某些测试化合物(例如，2-6和2-7)，残留在眼周皮肤上的物质可能会进入眼表面，在被试者出汗或淋浴时引起刺痛和不适。然而，这个问题在DIPA-1-7和DIPA-1-8上几乎没有发生。被试者被告知如果有任何刺激的表面，可以用水或湿毛巾冲洗。然而，在这些浓度下，很少看到DIPA-1-7或DIPA-1-8引起刺激或不适。

案例研究1

一名65岁的男性是一位狂热的斯诺克玩家，喜欢频繁光顾伦敦和香港的斯诺克俱乐部。他和朋友们进行比赛，但随着年龄的增长，他的技艺有所下降，一天只能打八局。他在比赛中使用冰冷的毛巾和处方眼镜来帮助自己，但他觉得影响他比赛的是缺乏集中力和计划一系列击球的能力，这妨碍了他完成连续得分的“攻关”(连续得分的累积)。他自愿尝试含有DIPA-1-7的湿巾。他的比赛发生了显著的转变。他的击球速度更快，计划和执行更加精确。每个比赛场次的帧数增加了，他的比赛频率也增加了。他打出了职业生涯中最长的一杆80分，欣喜若狂。他继续使用湿巾来帮助他的斯诺克比赛。他还注意到，通过将冰冷的毛巾敷在脸上，他的认知能力得到了更新和激活(这是“蓄水池效应”的一个例子)。然而，他指出，重要的是要避免过多地将DIPA-1-7进入眼表面，因为有时会引起刺激，特别是使用过于频繁时。通过练习，他注意到他的比赛认知增强能够通过优化输送程序来调节和控制。

一名70岁的退休建筑师喜欢每周一到两次和朋友们一起玩便士扑克。他自愿尝试含有5毫克/毫升DIPA-1-7的湿巾，看看它是否能提高他的扑克技巧。一开始，他没有告诉他的朋友们就尝试了这个。他立刻注意到，在擦拭后，他比其他玩家更清醒。他能记住被弃牌的牌，能计算并记住各种手牌的胜算(例如，成功拿到四张牌的两路顺子或四张牌的同花的可能性)，但最重要的是，他还能感知对手是否有强牌或弱牌，以及他们是否在虚张声势。他感到精力充沛，更加冒险，愿意通过虚张声势来冒险。他能快速并更有信心地做出决定。他觉得他的游戏更有洞察力，得到了改善。他因为在朋友们面前拥有不公平的优势而感到有些愧疚，并鼓励其他几个玩家尝试了这种湿巾。所有人都注意到了令人振奋的动态凉爽，但他们不太确定他们的扑克技巧是否有所提高。

一位68岁的药理学家将时间花在研究、设计和管理临床试验上。他拥有一家咨询公司，有八名员工，每天至少花8到12个小时坐在电脑显示屏前。他的工作空间里有一台意式浓缩咖啡机，还有香烟和雪茄。他用咖啡和烟草来提高思维敏锐度。他同意使用含有1毫克/毫升DIPA-1-7(仅用于眼眶周围)和5毫克/毫升DIPA-1-7(眼眶周围和颧骨/额头)的湿巾，并注意到他的疲劳至少消失了6到8个小时，能够集中注意力和思维更清晰。他说这些湿巾在提高注意力方面比咖啡和烟草都要好。他现在在工作中也使用这些湿巾，在商务和科学会议前使用，以增强社交表现和思维敏捷，并减轻疲劳。

一位72岁的退休警察决定重新当保安，因为他需要资金来支持孙女的大学费用。他的工作时间是从中午到晚上8:30，他抱怨感到疲倦和疲劳，影响了他的活动。他说他太累了，连电视上的足球比赛都看不了，尽管他是一个狂热的球迷。他自愿尝试含有DIPA-1-7的湿巾，并表示它们明显让他更加警觉，尤其是在下班回家的路上。他说打开汽车的空调，将冷气口对准脸部，再配合薄荷糖和湿巾，让他保持清醒，不再对道路构成威胁。他的颈围有18.5英寸(47厘米)，晚上打鼾很厉害，但多导睡眠图并未显示出睡眠呼吸暂停的情况。他感觉使用湿巾在眼周围，一些凉意通过鼻泪管流到鼻膜上，这种凉爽的感觉让他呼吸更自由，晚上睡得更好。目前，他正在加强锻炼并试图减少食物摄入，以控制疲劳。

另外几个人也尝试了含有DIPA-1-6、DIPA-1-8、2-6和2-7的湿巾，也发现这些化合物对于增强表现和思维是有效的，但效果被认为略显不如DIPA-1-7，或者带有一些残留的刺痛感。在这些类似物中，DIPA-1-8被认为是对认知增强的最佳替代品。通过适当的配方，所有这些类似物都有可能被用作替代品。总结而言，这里做出的令人惊讶的观察是，使用这些化合物，特别是DIPA-1-7，可以增强需要手眼协调能力的技能(例如在斯诺克中)，以及专注力(例如在像扑克这样的游戏中)。

案例研究2

一名48岁的女性账户主管是一家大型金融机构的忙碌职业人士。她的丈夫是一名成功的建筑师。她有两个十几岁的孩子，经常没有足够的时间完成家务。每天结束时，她经常身心疲惫，晚餐后就会早早入睡。由于最近的婚姻问题，她感到大部分时间都感到疲劳和疲倦，她在着装和礼仪方面的家庭和职业态度开始恶化。她没有患有任何慢性身体疾病，但经过几次面试后，她在Brief Fatigue Inventory(BFI)上被评为“中度疲劳”，并被她的医生认为“抑郁”。她自愿使用含有DIPA-1-7的湿巾，并被告知一天不要使用超过一张。使用两天后，她报告说这些湿巾改善了她的情绪和对外界事件的兴趣。她更有活力和积极性。她及时完成工作任务，拥有更好的体力，并且更有斗志和自信。与她最亲近的人，包括孩子和同事，也注意到她在态度和个性上有了明显的改善。她继续根据需要使用这些湿巾。

一名69岁的男性患有已持续12年的帕金森病。他接受专业的医疗护理，并在过去几年中服用了各种药物来帮助管理疾病。然而，近几年来，主要药物(如)的效果逐渐减弱，他的行动能力下降，越来越少出门。2009年11月，他接受了深部脑部刺激治疗的植入电极手术，这个治疗方式提高了他的运动能力。然而，最近，尽管对脑部刺激参数进行了仔细调整，他的帕金森症状逐渐复发，他抱怨持续疲劳和情绪低落。他的Brief FatigueInventory(BFI)评分处于“中度到重度”疲劳水平范围。他自愿尝试了含有DIPA-1-7(1mg/mL和5mg/mL)的湿巾，并被告知一天只限使用一张。使用这些湿巾后，他首先注意到的是他能够保持清醒，以便在周一晚上观看他喜欢的两个电视节目“豪斯”和“夏威夷五-0”(从晚上9点到11点)。他说通常他必须额外努力才能跟上“豪斯”的对话和情节，但会在“夏威夷五-0”“开始前”入睡。他的整体活动和情绪都有所改善，他更愿意带狗散步。他更频繁地去高尔夫练习场练习击球和推杆，但他说他仍然不能在球垫上挥杆。他的朋友们注意到他的情绪更好，更积极参与社交活动。他将他的减轻疲劳归功于这些湿巾，并期待每天早上使用它。他说他的食欲改善了，不再感到抑郁，他希望变得更加积极活跃。

这名62岁的患者在10年前被诊断为丙型肝炎病毒(HCV)感染，并接受了干扰素PEG和利巴韦林的治疗，但由于他的基因构成没有产生反应。他提前从职业生涯退休，并相对无症状，除了轻度疲劳需要每天下午至少两个小时的强制性午睡。然而，六个月前，磁共振成像检测到他右下肝叶边缘有一个3厘米直径的肝细胞癌。他先接受了含多柔比星的乳化微球的经动脉化学栓塞(TACE)治疗，然后不久后接受了射频消融治疗，因为注意到他的甲胎蛋白水平升高，提示TACE治疗后可能仍存在肝细胞癌细胞。这些治疗导致了中度到重度的疲劳，通过BFI评估，即使在最后一次治疗两个月后仍持续存在。他最初手术后疼痛严重，使用鸦片类镇痛药进行管理，但现在他主要抱怨睡眠不宁、白天疲劳、注意力不集中和记忆力下降。他被开了催眠药/>但这并没有改善他的睡眠问题，所以现在他被开了/>尽管这种药物可能会增加对肝脏的损害风险。由于他是一位狂热的读者，属于一个读书俱乐部，希望在疲劳限制了他的运动能力时保持头脑活跃，所以他自愿尝试含有DIPA-1-7(1mg/mL和5mg/mL)的湿巾。

使用湿巾后，他评论说在阅读时更加警觉，能更好地集中注意力。他指出，将湿巾应用于较大的面积，特别是在颧骨和眼眶的皮肤上，增强了所期望的感觉效果。(感觉剂在神经感受野的传递面积扩大了。)他注意到自己已经读完了库尔特·冯内古特的传记，但因为史蒂夫·乔布斯的传记有超过600页，所以被吓到了。使用湿巾后，他在三天内读完了乔布斯的传记，并能够记住并与朋友讨论书中更细节的内容。他特别对乔布斯的癌症治疗和反应感到好奇。他说湿巾没有改善手术后的疼痛，并且关节仍然疼痛，但他的心情和日常活动能力得到了改善。他指出，湿巾中活性成分的异常长持续时间可能在治疗其他慢性疾病，如嗜睡症，神经和重度抑郁症，以及作为管理阿尔茨海默病的辅助治疗中有用。他继续根据需要使用湿巾。

这些研究展示了药物湿巾的潜在好处，特别是含有DIPA-1-7的湿巾，可以对抗慢性疾病引起的疲劳和乏力。

案例研究3

在另一系列的研究中，使用了湿巾代替棉质擦拭物。湿巾由塑料包装(重量为1.1克)，一块23厘米x 26厘米的无纺蕾丝毛巾(重量为3.4至3.5克)和液体组合物(14至15毫升)组成，该液体组合物被自动添加并密封在包装中。用于生产湿巾的自动化设备在该领域是众所周知的。在这里，湿巾是由位于旧金山的Kank Factor公司(地址为721CommercialStreet,San Francisco CA 94108,网址：www.3LWipes.com)生产的。湿巾中包含了蒸馏水(作为安慰剂对照)或者溶解在蒸馏水中的DIPA-1-7(浓度为1至5毫克/毫升)。每次使用的液体量取决于涂抹部位，但对于面部和额头大约为0.3毫升至0.5毫升，但如果还包括对躯干的擦拭则可能更多。

湿巾在冰箱中存放，但在使用前至少放置在室温下1小时。湿巾的有效消毒可以通过将其放入微波炉中加热1分钟来实现(参见例如Tanaka等人，1998年)。受试者被指示用双手握住湿巾，将湿巾贴近脸部，就像使用小湿毛巾一样，并保持双眼闭合。脸部的皮肤通过这个过程被湿润和药物处理。一旦受试者了解了预期效果，受试者可以根据需要调整剂量(例如轻拍)以达到期望的抗疲劳/抗热效果。经过一两次试用后，个体很快就学会如何应用这种感觉剂，而不会出现任何不适的风险。

在旧金山湾区的“印度夏天”热浪期间，室外温度为30至33℃，天空晴朗，阳光强烈。如上所述，湿巾被用作基质，将DIPA-1-7传递到几个人的胸部和腋下的皮肤上，这些人强烈抱怨热应激和不适。舒适的降温效果持续了超过3.5小时，出汗减少。这些人在办公环境中能够正常工作，无需额外的降温措施。

一位来自北加利福尼亚州的70岁人在9月份前往拉斯维加斯度假，进行了为期7天的高尔夫假期。他每天至少打一轮高尔夫球，有时甚至两轮。他没有戴帽子，也没有使用防晒霜。度假第三天，该人出现了典型的晒伤症状：面部皮肤发红和潮红，感觉持续的温暖、疼痛和面部敏感，眼周轻度肿胀，还有患上性头痛。他自愿尝试了含有1％重量/体积DIPA-1-8的乳霜，用约0.5毫升的乳霜涂抹在他的脸颊和颧骨上。令人惊讶的是，他立刻感到皮肤不适得到了缓解，这种效果持续了至少四个小时。他的头痛消失了，他说他的脸感觉“舒适和正常”。他根据需要使用这种乳霜，并采取措施减少直接阳光照射，如戴宽檐帽和大量使用防晒产品。

一位美国南部的二年级医学生在夏天为她的考试做准备。在炎热的天气里，她的电费增加了三倍，她和她的室友无法负担晚上开启空调。她说她可以通过在脖子周围用湿毛巾来应对高温，但高温的主要不良影响是干扰学习的精神集中和难以舒适地入睡。她同意尝试含有DIPA-1-7的湿巾，发现它给她的面部和身体带来了持久而令人振奋的凉爽感觉。她注意到她的皮肤感觉清爽凉爽，她更能集中精力学习和记住信息。她还注意到她的男朋友说她的眼睛周围有一种清新而充满活力的外表，就像朱莉娅·罗伯茨年轻时的样子，这使她更有吸引力。她说DIPA-1-7可能有价值作为一种美容剂，可以增强美丽，同时也是提高学习和学术情境下的专注力的辅助工具。她还指出，DIPA-1-7可能像放在脖子周围的冰领一样，显著提高运动表现。

案例研究4

两名在实验室工作的科学家对洗涤剂和肥皂产生过敏性皮炎，手部发炎且极度瘙痒。使用DIPA-1-7，浓度为20mg/mL，用棉签立即停止了瘙痒感，这种效果持续了至少2小时，并且可以通过反复涂抹来维持抑制作用。其中一位科学家是世界知名的皮肤科医生，他在止痒方面发表了许多论文，他指出DIPA-1-7在缓解瘙痒方面如此迅速，且产生一种“冰冷”的感觉，他之前从未遇到过如此有效的化合物。

一位药理学家喜欢在花园里工作，但是三角梅和玫瑰灌木的刺以及杜鹃花叶上的毛发刺激了他的皮肤，导致剧烈的瘙痒。他发现将DIPA-1-6或DIPA-1-7以20mg/mL的水溶液或作为乳霜(混合Eucerin润肤霜)涂抹在皮肤上，可以立即停止皮肤上的感觉不适。这些效果也可以通过DIPA-1-8获得。他还指出，昆虫叮咬引起的刺激和瘙痒也可以立即被这些药物停止。

一名40岁的男性患有包皮白斑病(lichen sclerosus)。这是一种影响龟头和包皮的炎症性皮肤病，而在这个特定的病例中，伴有剧烈的瘙痒和感觉异常(灼热感)。在皮肤科医生的监督下，患者自愿尝试在患处使用DIPA-1-8，并获得了不同浓度的DIPA-1-8溶于蒸馏水的配方。经过自我试验，他得出结论，1到1.5mg/mL浓度的DIPA-1-8可以显著缓解症状，但2mg/mL浓度的DIPA-1-8过于寒冷和不舒适。这些溶液可以用棉签或纱布擦拭涂抹。使用DIPA配方的优点在于其水溶性，这减少了对辅料的需求，并降低了进一步刺激的可能性。该患者建议喷雾剂也可能是一种方便的药物给药方法。

这些研究展示了DIPA-1-7和DIPA-1-8的抗痛觉特性，特别是对于止痒作用。DIPA-1-8的作用持续时间比DIPA-1-7更长，可能是皮肤科应用的首选药物。

案例研究5

一名66岁的女性偶尔会出现潮热和盗汗，大约每两周有1次发作。她曾接受激素替代疗法(激素雌二醇1毫克和甲羟孕酮2.5克，每天一次)，但在两个朋友患乳腺癌和一个朋友患子宫癌后，她决定停止激素替代疗法。随后，她的盗汗发作频率增加到每隔一天一次，她和她的丈夫因为需要频繁更换床单而感到沮丧。她同意尝试含有1％ DIPA-1-6的乳液。这个乳液在睡觉前涂抹在颈部和胸部中心的皮肤上。如果她在夜间醒来，就会再次涂抹。她说这个乳液感觉凉爽，但不会感到不适。在接下来的三周里，她没有出现盗汗的情况。在与医生进一步讨论后，她决定重新开始激素替代疗法，过去9个月里她没有再次出现盗汗的情况。

案例研究6

三名受试者决定对DIPA-1-6、DIPA-1-7、DIPA-1-8和DIPA-1-9在眼表面的感觉效果进行系统比较。每种化合物在蒸馏水中制备成1毫克/毫升的溶液。一个特定大小(Puritan 803-PCL)的棉花尖的棉签，包含一个55到75毫克的棉球，绕在一个三英寸长的聚苯乙烯棒的尖端，然后将其浸入溶液中。然后将尖端闭着眼睛涂抹到上眼睑的下方，涂抹到睫毛上，进行两次由外向内的擦拭动作。然后告诉受试者眨眼。通过眨眼，溶液会均匀分布在角膜前膜上。这种“拭子”送药方法在两只眼睛的表面释放了大约35微升的液体。DIPA-1-6引起了明显的刺痛和不适，因此没有进一步研究。DIPA-1-7和DIPA-1-8产生了强烈而令人耳目一新的凉爽感，缓解了眼部刺激，并提高了认知功能。例如，受试者感觉可以聚焦在远处的物体并欣赏景色。他们感到头脑清醒和焕然一新。但是，使用DIPA-1-7和DIPA-1-8后，眼睑上会有一小部分残留物；随后用毛巾洗脸可能会引起眼部刺激。令人惊讶的是，DIPA-1-9在涂抹在眼睑上时不会产生任何刺激，并且也不会留下残留物。它也能产生令人耳目一新的凉爽感，但强度不及DIPA-1-7或DIPA-1-8。另一方面，DIPA-1-9具有治疗眼部不适的理想特性，例如由眼部劳累引起的不适；眼疲劳；眼部手术；与眼表面相互作用的空气刺激物或污染物；长时间佩戴隐形眼镜；过度暴露于阳光；眼疲劳症；结膜炎；或干眼综合征。

案例研究7

一只2岁的母的西高地梗狗在夏季出现了瘙痒的症状，导致持续搔抓耳朵和腹部。兽医将这种行为诊断为犬瘙痒症，并开了口服抗组胺药。然而，这些药物并没有控制瘙痒的进展，尾部基部和后肢出现了皮肤擦伤和脱毛的斑块。局部应用抗炎类固醇三氟新醇也只有有限的效果，狗仍然看起来很痛苦。令人惊讶的是，将DIPA-1-7乳膏(1％重量/体积)涂抹在发炎的皮肤部位立即减少了搔抓，并且皮肤部位开始愈合。从狗的行为来看，瘙痒的严重程度减轻了。进一步限制狗外出的机会，并控制可能接触跳蚤和尘螨的可能性，成功地控制了狗的皮肤问题。

案例研究8

眼睛对损伤非常敏感，损伤的症状包括视力模糊、瘙痒、刺激、灼热感、异物感和疼痛。DIPA-1-9能够产生持续的舒凉感，且不会留下不适感，这表明它可能在治疗“干眼综合征”方面有用，这是广泛存在于一般人群中的病症。韩国干眼综合征(DES)的领先眼科医生KC Yoon教授进行了DIPA-1-9在正常人和被诊断为DES的患者中的临床试验。对于这个DIPA-1-9研究，有12名正常受试者和15名DES患者。研究人群的特征见表2。该试验获得了韩国光州全南大学伦理审查委员会的批准。

在研究中，将2毫克/毫升的DIPA-1-9溶解在生理盐水中，滴入棉纱垫上，并在被试者的上眼睑上涂抹，眼睛保持闭合。通过使用视觉类比量表(0到10分)的问卷，在每5分钟的间隔内获得了关于眼表面冷却感觉的症状变化。在10分钟的间隔内测量了泪膜破裂时间(BUT)，在20分钟的间隔内测量了Schirmer试验I(不用麻醉)，使用国家眼科研究所(NEI)系统记录了眼表面上皮损伤评分(角上皮病变)。使用Cochet-Bonnet触觉测量仪测量了角膜对微丝的敏感性。测试对象的特征见表2。在涂抹后，冷感在5分钟内达到6分的峰值，然后稳步下降。冷感的平均持续时间为47分钟，两组受试者之间没有差异。干眼组的泪膜破裂时间和Schirmer试验1的得分明显改善，但“正常”组的得分没有显著变化。DIPA-1-9的涂抹对BUT和Schirmer试验的影响在涂抹后持续约30分钟。在对机械刺激的角膜敏感性方面没有变化。

表1

根据Yoon教授的观点，接受DIPA-1-9治疗的干眼症患者所见到的症状缓解在数量上优于他实验室使用已批准的干眼症药物(如0.5％环孢素和P2Y2受体激动剂二半甲酯)的结果。进一步的研究正在进行中，使用更大的测试组和为期4周的治疗方案，结果将会公开传达。

案例研究9

一个28岁的女性患者拜访了验光师，典型的干眼病症状，包括眼表不适感、视力模糊、对光敏感，以及阅读、驾驶和使用智能手机屏幕时的问题。检查中发现她的眼睑边缘充血，美泊酮腺管阻塞，有些眼睑增厚。进一步询问发现她正在使用美泊酮溶液诱导睫毛多毛症，但由于对睫毛生长速度缓慢感到不满，她每天使用该溶液两三次(而不是建议的每天一次)。

她被告知不要再使用眼部化妆品，并提供了Blephaclean^TM眼部湿巾，这是一次性使用的湿巾，含有清洁溶液，用于清理美泊酮腺管和维持眼部卫生。然而，该患者对这些清洁湿巾引起的刺激表示强烈反对，并因为美泊酮溶液价格昂贵而无法继续使用。她参加了一项关于DIPA-1-9湿巾的临床试验，使用浓度为2毫克/毫升的溶液，并被告知在早晚各使用一次，白天根据需要再使用两次。使用DIPA-1-9湿巾后，她感觉立即好转，并对眼部表面和边缘出现的冷却和清新感觉进行了评价。她说她的美泊酮溶液现在不再引起刺激，睫毛也变得浓密而豪华。她建议将DIPA-1-9添加到美泊酮溶液中作为辅助治疗，并表示愿意支付继续使用DIPA-1-9湿巾的费用。

案例研究10

这项前瞻性非随机的初步研究遵循《赫尔辛基宣言》的原则进行。已从全南大学医院伦理审查委员会(CNUH-2018-274)获得了道德批准。所有纳入患者都获得了知情同意。样本大小是使用G*Power软件(版本3.1.9.4；德国海因里希·海涅大学)计算的，置信水平为0.05，功效为95％，以便检测疼痛评分中的2分差异。因此，总共有13名患者的样本大小被认为足够。

在2018年1月至12月期间接受评估的伴有神经病理性眼部疼痛特征的干眼患者被纳入研究。干眼的诊断基于OSDI评分>13和泪液破裂时间(TBUT)>7秒。纳入标准如下：(1)慢性眼部疼痛，在常规局部治疗(如润滑剂、抗炎药、分泌刺激药等)治疗3个月以上无效；(2)眼部干眼症状和体征的不一致，伴随特定的描述符，包括灼烧或刺痛感；以及(3)Wong-Baker FACES疼痛评分量表(WBFPS)评分>4。排除具有除干眼外其他眼部疾病史以及正在接受影响疼痛和情绪状态的全身性药物治疗的患者。

患者在接受常规局部治疗的同时，采用DIPA-1-9辅助治疗。DIPA-1-9样品(2毫克/毫升)在纯净水中稀释，浸泡在纱布中，并使用自动设备进行包装。患者每天使用顶点DIPA-1-9，通过将纱布擦在闭合的眼睑缘上，每天4次，持续1个月。眼表疾病指数(OSDI)问卷用于量化与视觉相关的生活质量(QoL)，该问卷得分范围为0到100。泪液破裂时间(TBUT)是指最后一次完整眨眼和泪液膜破裂的第一个出现之间的时间间隔，测量了三次并取平均值进行分析。角膜染色评分使用面积密度指数进行评估，即将面积和密度得分相乘。Schirmer试验分数代表了湿润的长度，并使用标定的无菌纸带放置在外眼角5分钟，进行局部麻醉(0.5％丙氨卡因)。仅评估右眼的得分。

WBFPS被选择用于筛选干眼患者的疼痛程度。患者选择最能描述他们正在经历的疼痛的面孔。在治疗开始时，治疗后1周和治疗后1个月，患者还填写了眼痛评估调查表(OPAS)，这是一个经过验证的用于神经病理性疼痛的问卷，如之前所述[参见Qazi,Y.等人]。这些问题被分成以下几个部分进行分析：第4-9个问题，涉及眼痛强度(0到60分)；第10-11个问题，涉及非眼部疼痛(0到20分)；第13-19个问题(0-10分，总分0到60)，评估生活质量(阅读和/或使用电脑，驾车和/或看电视，一般活动，情绪，睡眠和享受生活/与他人的关系)；第20-21个问题(每个得分0-1分，总分0-2分)，评估加重因素(机械和化学刺激)；第22-25个问题(每个得分0-1分，总分0-4分)，评估相关因素(眼红；灼热感；对光的敏感性；流泪)。OPAS中有关缓解症状的部分被排除，仅分析问题4-25。这些问题被分为以下5个部分：眼痛强度，非眼部疼痛，生活质量，加重因素和相关因素。

统计分析使用PASW Statistics for Windows，版本18.0(SPSS Inc.，芝加哥，美国伊利诺伊州)进行。使用Shapiro-Wilk测试评估了分布的正态性。使用Wilcoxon符号秩检验和重复测量方差分析与Bonferroni事后检验进行了治疗前后参数的比较。P值小于0.05被认为具有统计学意义.

结果

本研究纳入了20名患有伴随神经病理性眼表疼痛的干眼患者。其中5名患者(25.0％)因药物无效或耐受性差而中止了治疗。其余的15名患者(75.0％)被纳入了分析。平均年龄为59.5±13.0岁，其中9名患者(60.0％)为女性。其中5名患者有眼内手术的病史，1名患者有眼外伤的病史。

在治疗后的1周，眼疼痛程度、生活质量(开车/看电视、一般活动、睡眠以及生活愉悦/与他人的关系)和相关因素(灼热感、对光敏感以及流泪)得到了改善。在治疗后1个月，眼疼痛强度、生活质量(睡眠)以及相关因素(灼热感和对光敏感)的总体眼部疼痛评估调查(OPAS)得分仍然有所改善。然而，非眼部疼痛和加重因素的得分在治疗后没有改变(表2)。在临床干眼参数方面，治疗后1个月，OSDI(眼表疾病指数)和Schirmer试验分数得到了改善(表3)。根据之前的用药情况，疼痛分数没有显著差异(表4)。

结果显示，DIPA-1-9可能对于那些对传统治疗无效的干眼症伴有神经病理性眼痛的患者具有疗效。

表2.在应用DIPA-1-9一个月后，眼部疼痛评估调查分数的变化

所有数值以平均值±标准差的形式呈现。＊使用重复测量方差分析进行比较，并使用Bonferroni的事后检验进行进一步分析。

表3.应用DIPA-1-9一个月后的临床参数变化

所有数值以平均值±标准差的形式呈现。使用Wilcoxon符号秩检验进行比较。

表4.受试者的先前用药情况和Wong-Baker面部疼痛评分量表(WBFPS)得分

参考资料

以下列举了一些出版物，旨在更全面地描述和揭示本发明及其所涉及的技术现状。这些出版物的完整引用如下。所有这些出版物均被完全并入本文，就好像每个个别出版物都明确指示并单独被引用一样。

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Claims (24)

1.一种治疗受试者眼部不适的方法，该方法包括向受试者给予含有有效治疗量的1-二异丙基-磷酰基-烷烃(DIPA)化合物的组合物。

2.根据权利要求1所述方法，其中DIPA化合物是从以下化合物中选择的：

3.根据权利要求1或2所述方法，其中给予是局部给药。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述组合物被给予于受试者的眼表面。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述组合物是适用于在受试者眼表面上集中释放该化合物的液体组合物。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合物是以水或等渗盐水为溶剂的液体。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中DIPA化合物的浓度为0.5-20毫克/毫升。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述组合物是一种液体组合物，其包含浓度为0.5-5毫克/毫升或1-5毫克/毫升的DIPA化合物。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中眼部不适是由眼部疲劳；眼部手术；空气传播的刺激物或污染物与眼表面相互作用；

炎热不适；长时间佩戴隐形眼镜；过度暴露于阳光下；视力衰弱；

结膜炎；或干眼综合症所致。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中不适是疼痛。

11.根据权利要求10所述的方法，其中疼痛是与干眼症相关或由干眼症引起的。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中给予是局部给药于受试者的眼睑。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中给予至少每天一次。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中给予至少持续一周。

15.一种治疗眼部不适的组合物，包括治疗性有效量的1-二异丙基-磷酰基-烷烃(DIPA)化合物和药学上可接受的载体或辅料，用于治疗受试者的眼部不适。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中DIPA化合物是从以下化合物中选择的：

17.根据权利要求15或16所述的组合物，其中DIPA化合物浓度为0.5-20毫克/毫升。

18.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物，其中该组合物是一种液体组合物。

19.根据权利要求15至18中任一项所述的组合物，其中该组合物是一种液体组合物，其含有浓度为0.5-5毫克/毫升或1-5毫克/毫升的DIPA化合物。

20.根据权利要求15至19中任一项所述的组合物，其中眼部不适是由眼部疲劳、眼部手术、与眼表面相互作用的空气传播的刺激物或污染物、炎热不适、长时间佩戴隐形眼镜、过度暴露于阳光下、视力衰弱、结膜炎或干眼综合症所致。

21.根据权利要求15至20中任一项所述的组合物，其中眼部不适是疼痛。

22.根据权利要求21所述的组合物，其中疼痛是与干眼症相关或由干眼症引起的。

23.一种携带根据权利要求15至22中任一项所述的组合物的介质。

24.根据权利要求23所述的介质，其中介质可以是拭子、擦拭物、垫子、湿巾、控释贴剂、用于喷雾送达的压力容器，或与储液器相连的手动喷雾器。