CN116832123B - 一种酒醅中多酚类物质的提取方法 - Google Patents
一种酒醅中多酚类物质的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116832123B CN116832123B CN202310792223.5A CN202310792223A CN116832123B CN 116832123 B CN116832123 B CN 116832123B CN 202310792223 A CN202310792223 A CN 202310792223A CN 116832123 B CN116832123 B CN 116832123B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extraction
- polyphenols
- extracting
- supernatant
- centrifuging
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 87
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 title claims abstract description 80
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 79
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 174
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 12
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 3
- 239000011149 active material Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 67
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 40
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 21
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 20
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 20
- 230000004044 response Effects 0.000 description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 11
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 4-coumaric acid Chemical compound OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 4
- KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N apigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N apigenin Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008714 apigenin Nutrition 0.000 description 4
- 229940117893 apigenin Drugs 0.000 description 4
- VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O cyanidin cation Chemical compound [O+]=1C2=CC(O)=CC(O)=C2C=C(O)C=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 4
- IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N luteolin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N luteolin Natural products OC1=CC(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000009498 luteolin Nutrition 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 4
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 3
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 description 3
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N trans-isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(C=CC(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N (+)-taxifolin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C(O)=C1 CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-M 4-Hydroxycinnamate Natural products OC1=CC=C(\C=C\C([O-])=O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-M 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFYRUELUNQRZTB-UHFFFAOYSA-N Acetovanillone Natural products COC1=CC(C(C)=O)=CC=C1O DFYRUELUNQRZTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 2
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007336 cyanidin Nutrition 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 2
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 2
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012418 validation experiment Methods 0.000 description 2
- 235000014466 Douglas bleu Nutrition 0.000 description 1
- 240000001416 Pseudotsuga menziesii Species 0.000 description 1
- 235000005386 Pseudotsuga menziesii var menziesii Nutrition 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 235000007230 Sorghum bicolor Nutrition 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- -1 comes out Chemical class 0.000 description 1
- 239000011365 complex material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- KQNGHARGJDXHKF-UHFFFAOYSA-N dihydrotamarixetin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KQNGHARGJDXHKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07G—COMPOUNDS OF UNKNOWN CONSTITUTION
- C07G99/00—Subject matter not provided for in other groups of this subclass
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
Abstract
本发明属于活性物质提取技术领域，具体涉及一种酒醅中多酚类物质的提取方法，包括如下步骤：(1)前处理：将酒醅样品进行冷冻干燥、粉碎、过筛，得到粉末样品；(2)提取：向所述粉末样品中加入提取溶剂，进行搅拌提取；(3)离心：对提取得到的提取液进行离心，得到上清液；(4)测定：对所述上清液进行定性、定量测定；其中，所述提取溶剂包括：体积分数为45‑70％的乙醇水溶液。通过本发明所提供的方法对酒醅中的多酚类物质进行提取，大大减少了提取时间的同时，在不改变原有样品中多酚物质组成的前提下，大大提高了多酚类物质的提取率，可以尽可能真实、全面、详尽地反映出多酚类物质在酒醅中的组成分布。
Description
技术领域
本发明属于活性物质提取技术领域，涉及一种酒醅中多酚类物质的提取方法。
背景技术
酒醅是影响白酒固态发酵的关键，其物质组成复杂。多酚类物质(类黄酮、酚酸、原花色素等)是酒醅众多组分中一类含量低，但极为重要的物质组分，多项研究表明多酚类物质可以通过影响微生物的生长影响其代谢产物，亦可作用于一些糖化酶系影响原料中底物的转化，同样也是一些风味物质的前体，因此酒醅中多酚的组成及含量直接或者间接影响着白酒的品质。研究酒醅中的多酚类物质可有助于在白酒生产过程调控微生物发酵代谢，从而提高白酒基酒的生产质量。
由于酒醅中的物质组成复杂，多酚含量较低，因此在提取分析时极易形成基质干扰，目前也尚未有针对酒醅中全部多酚类物质提取的相关研究。而参考现有技术公开的针对酒醅中某种酚酸物质的提取方法，并无法同时满足多种多酚类物质的定性检测需求；而参考一些谷物多酚提取的报道，普遍操作繁琐，耗时过长，在重复提取时溶剂消耗量较大，增加了后期回收利用和检测分析的难度。
基于此，本申请旨在提供一种酒醅中多酚类物质的提取方法，将针对性地聚焦酒醅多酚研究，改善提取方法操作繁琐、耗时过长等技术现状。
发明内容
本发明目的在于提供一种酒醅中多酚类物质的提取方法。该方法针对白酒固态发酵过程中的酒醅，以总酚含量以及具体的多酚类物质为参考指标，不断优化方法条件，以达到在不改变原有多酚物质组成的前提下，提高提取率，减少提取时间的目的，最终所提供的提取方法尽可能真实、全面、详尽地反映出了多酚类物质在酒醅中的组成分布。
一方面，本发明提供了一种酒醅中多酚类物质的提取方法，包括如下步骤：
(1)前处理：将酒醅样品进行冷冻干燥、粉碎、过筛，得到粉末样品；
(2)提取：向所述粉末样品中加入提取溶剂，进行搅拌提取；
(3)离心：对提取得到的提取液进行离心，得到上清液；
(4)测定：对所述上清液进行定性、定量测定；
其中，所述提取溶剂包括：体积分数为45-70％的乙醇水溶液。
在一些实施方案中，所述提取溶剂包括：体积分数为45-55％的乙醇水溶液；优选地，所述提取溶剂包括：体积分数为48-52％的乙醇水溶液。
在一些实施方案中，所述步骤(2)中，以v/v计，料液比为1:12-15；优选地，以v/v计，所述料液比为1:13-14.9；优选地，所述料液比为1:13.5-14.5。
在一些实施方案中，所述步骤(2)中，所述提取的温度为80-95℃；优选地，所述提取的温度为85-95℃；优选地，所述提取的温度为88-92℃。
在一些实施方案中，所述步骤(2)中，所述提取的时间为15-30min；优选地，所述提取的时间为20-30min；优选地，所述提取的时间为22-27min。
在一些实施方案中，所述步骤(2)中，所述搅拌包括通过搅拌子进行磁力搅拌。
在一些实施方案中，所述步骤(1)中，所述冷冻干燥包括对所述酒醅样品进行低温冷冻干燥处理，至所述酒醅样品结构松散，没有水分。
在一些实施方案中，所述过筛的粒径为70-90目；优选地，所述过筛的粒径为75-85目。
在一些实施方案中，所述步骤(3)中，所述离心的条件为：3500-4500r/min下，离心8-15min；优选地，所述离心的条件为：3800-4200r/min下，离心9-12min。
在一些实施方案中，所述步骤(4)中，所述稀释的倍数为5-15倍。
在一些实施方案中，所述步骤(4)中，通过福林酚法对所述提取液中的总酚含量进行测定；优选地，通过高效液相色谱对所述提取液中的多酚类物质进行定性检测。
在一些实施方案中，所述高效液相色谱的检测参数包括：使用0.22μm滤膜对所述上清液进行过滤。
在一些实施方案中，所使用的色谱分离柱为反相C-18柱。
在一些实施方案中，使用双流动相进行梯度洗脱，所述流动相包括0.1％甲酸水溶液(A相)和乙腈(B相)。
在一些实施方案中，所述洗脱程序为：0-5min，5-15％B；5-45min，15-50％B；45-47min，50-70％B；47-48min，70-100％B；48-55min，100％B；55-56min，100-5％B；56-65min，5％B。
在一些实施方案中，流速为0.3-0.6mL/min，柱温为22-28℃，采用双通道检测，波长为288nm和330nm。
在一些实施方案中，所述步骤(2)中，所述提取条件通过如下方法进行确定：
1)以总酚含量为指标，采用单因素变量法，基于特定的初始提取条件，确定初步提取条件；其中，所述特定的初始提取条件包括：提取溶剂的不同体积分数、不同的料液比、不同的提取温度以及不同的提取时间；
2)以步骤1)确定的提取最佳条件为实验中间点，取邻近的实验条件作为被研究因素的范围，通过响应面优化法进一步对所述提取溶剂的体积分数、料液比、提取的温度以及提取的时间进行确定，得到最终所述提取条件。
在一些实施方案中，所述提取溶剂为乙醇。
在一些实施方案中，所述步骤1)中，所述初步提取条件包括：提取溶剂为体积分数为55％-65％的乙醇水溶液、提取温度为75℃-85℃、料液比为1:14.5-15.5、提取时间为15-25min。
在一些实施方案中，所述步骤1)中，所述初步提取条件包括：提取溶剂为体积分数为58％-62％的乙醇水溶液、提取温度为78℃-82℃、料液比为1:14.8-15.3、提取时间为18-22min。
在一些实施方案中，所述响应面优化法为：采用Design-Expert 13.0软件中的Box-Behnken模型进行优化。
综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
(1)通过本发明所提供的方法对酒醅中的多酚类物质进行提取，大大减少了提取时间的同时，在不改变原有样品中多酚物质组成的前提下，大大提高了多酚类物质的提取率，且最终所提供的提取方法尽可能真实、全面、详尽地反映出了多酚类物质在酒醅中的组成分布。
(2)在本发明所提供的提取方法中，其实首先对酒醅中多酚类物质提取比较关键的提取条件进行了确定，而后基于确定的特定的提取条件，先后通过单因素变量以及响应面的方式对提取条件进行了优化，最终确定了对酒醅中多酚类物质提取效果较好的提取条件以及提取方法。
附图说明
图1为本发明实施例中总酚测定标准曲线；
图2为不同体积分数的提取溶剂对酒醅中多酚类物质提取效果的对比图；
图3为不同提取温度对酒醅中多酚类物质提取效果的对比图；
图4为不同提取时间对酒醅中多酚类物质提取效果的对比图；
图5为不同料液比对酒醅中多酚类物质提取效果的对比图；
图6为乙醇体积分数与温度对酒醅多酚提取量的交互影响图；
图7为不同提取次数的提取效果图；
图8为单因素最优方法和响应面最优方法的高效液相色谱对比图；
图9为不同参考方法(参考方法4、参考方法5)的液相色谱对比图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。
本发明实施例中所使用的相关试剂以及仪器信息如下：
酒醅：取自某酱香型酒厂酱香型白酒酿造过程产生的酒醅；
分析级乙醇购于国药集团(化学试剂)北京有限公司；
所使用的真空冷冻干燥机购于Virtis公司；多功能酶标仪Cytation 3购于美国Biotek公司；恒温水浴锅购于太仓市华利达仪器设备公司。
所使用的高效液相色谱仪/系统购于Wtars公司，型号为J2187E520A。
实施例1一种酒醅中多酚类物质的提取方法
一、前处理：将酒醅样品进行低温冷冻干燥，至酒醅样品结构松散，没有水分后，进行粉碎，过80目筛网，得到粉末样品；
二、提取：准确称取2g冻干后的酒醅粉末，以体积分数为60％的乙醇作为提取溶剂，通过搅拌子进行磁力搅拌，进行多酚的提取；其中，提取温度为80℃、提取时间为20min、料液比1:15；
三、离心：提取完成后，在4000r/min下离心10min；
四、测定：将离心后的上清液稀释10倍，得到待测液，通过福林酚法进行总酚含量测定，通过高效液相色谱方法对待测液中的多酚类物质进行定性检测；
其中，总酚含量测定方法具体如下：
(1)绘制标准曲线
准确配制1g/L没食子酸标准溶液，分别吸取40、80、120、160、200、240μL没食子酸标准溶液于2mL离心管中，加乙醇使溶液体积补至2mL，所得系列没食子酸标准溶液浓度分别为0.02、0.04、0.06、0.08、0.01、0.012mg/mL。
吸取150μL系列没食子酸标准溶液于2mL离心管中，加入450μL去离子蒸馏水，150μL福林酚试剂，混匀反应6min后，加入600μL 75g/L的Na2CO3溶液，混合均匀并在室温下避光反应2h后，取200μL加入到96孔板中，用酶标仪在760nm下测定吸光度值。每个样品做三次平行，以不加福林酚试剂和碳酸钠作为空白对照。以没食子酸浓度(mg/L)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，没食子酸标准品的总酚标准曲线如图1所示。总酚含量以没食子酸当量(mg GAE/100g)计。
(2)待测液中多酚含量测定
吸取150μL步骤四中的待测液于2mL离心管中，加入450μL去离子蒸馏水，150μL福林酚试剂，混匀反应6min后，加入600μL 75g/L的Na2CO3溶液，混合均匀并在室温下避光反应2h后，取200μL加入到96孔板中，用酶标仪在760nm下测定吸光度值。将得到的吸光度值代入到标准曲线中，即得到对应的总酚含量。
通过上述方法，最终提取液中的多酚物质含量为915.05±2.21。
其中，对提取液中多酚类物质进行定性的方法为：高效液相色谱(HPLC)，具体如下：
取步骤三得到的离心上清液，使用0.22μm滤膜过滤，注射10μL于HPLC系统中，反相C-18柱用于色谱分离。使用双流动相梯度洗脱，包括0.1％甲酸水溶液(A相)和乙腈(B相)；洗脱程序为：0-5min，5-15％B；5-45min，15-50％B；45-47min，50-70％B；47-48min，70-100％B；48-55min，100％B；55-56min，100-5％B；56-65min，5％B；流速0.5mL/min，柱温25℃，采用双通道检测，波长为288nm和330nm。
如图8所示，通过上述方法，最终从酒醅中提取到了多种多酚物质，如：没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、木犀草定、矢车菊素、芹菜定、对香豆酸、阿魏酸、花旗松素、木樨草素、槲皮素。
对比例1溶剂体积分数对提取效果的影响
该对比例1基于实施例1，与实施例1的不同之处在于：提取溶剂的体积份数不同。进一步探究溶剂体积分数对提取效果的影响，具体如下：
基于实施例1，考察不同体积分数0％、20％、40％、60％、80％、100％的乙醇-水溶液对单次提取效果的影响。
结果如图2所示，总酚含量随着乙醇体积分数的增加呈现先增加后降低的趋势，当乙醇体积分数为60％时达到最大值，继续增加乙醇体积分数，总酚含量发生明显的降低。
对比例2提取温度对提取效果的影响
该对比例2基于实施例1，与实施例1的不同之处在于：提取温度不同。进一步探究提取温度对提取效果的影响，具体如下：
基于实施例1，考察不同提取温度50、60、70、80、90、100℃对单次提取效果的影响。结果如图3所示，提取温度为80℃和90℃时，总酚提取量最为接近，优于其他提取温度。
进一步对80℃和90℃两组数据进行单因素方差分析。如表1所示，F＜F crit且P＞0.05，因此两组数据间并无显著性差异。由于80℃的提取量略高于90℃，且从节约能耗角度考虑，故选择80℃为最佳提取温度。
表1不同提取温度(80℃、90℃)提取的总酚含量差异性分析
对比例3提取时间对提取效果的影响
该对比例3基于实施例1，与实施例1的不同之处在于：提取时间不同。进一步探究提取时间对提取效果的影响，具体如下：
基于实施例1，考察不同提取时间5、10、15、20、25、30min对单次提取效果的影响。结果如图4所示，提取时间在20min时，提取的总酚含量最高。
对比例4料液比对提取效果的影响
该对比例4基于实施例1，与实施例1的不同之处在于：料液比不同。进一步探究料液比对提取效果的影响，具体如下：
基于实施例1，考察不同料液比(g/mL)1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30对单次提取效果的影响。结果如图5所示，当料液比在1:5～1:15g/mL时，总酚的含量随着料液比的增大呈上升趋势，进一步增加溶剂使用量，总酚含量无明显变化。考虑到溶剂的用量增大，提取液后续的溶剂回收、精制、干燥的费用增大，因此选择1:15为最佳料液比。
实施例2一种酒醅中多酚类物质提取的优化方法
该实施例2基于实施例1，采用响应面优化法对酒醅中多酚类物质提取方法进行优化，具体如下：
以总酚含量为指标，以实施例1中的提取条件，即：乙醇体积分数为60％，料液比为1：15，提取温度为80℃，提取时间为20min，作为实验中间点，取邻近的实验条件作为被研究因素的范围(最低-最高)，通过响应面优化法进一步对乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比对酒醅中多酚提取条件进行优化。响应面优化实验采用Design-Expert 13.0软件中的Box-Behnken模型设计多酚提取响应面优化实验。如表2所示，共计29组实验，每组实验重复三次。
按照实施例1中的方法，将在不同提取条件下提取得到的提取液在4000r/min下离心10min，取上清液稀释10倍进行总酚含量测定。
表2Box-Behnken试验设计与结果
并对表2所示结果进行响应面回归分析，获得酒醅中总酚提取响应值的二次多项回归模型，如下：
Y＝910.75-46.02A+40.83B-0.8224C+0.6688D-2.7AB-11.21AC+18.26AD+5.22BC+13.1BD-13.59CD-32.29A2+11.42B2-3.31C2-34.18D2。
表3所示的方差分析结果表明：模型回归为极显著(P＜0.001)，失拟项为不显著(P＞0.05)，预示外界其余因素对该试验结果干扰并不显著。模型的决定系数为R2＝0.8558，表明实际测试所得数据与回归方程之间展现相对较好的吻合关系，能够较好反映出酒醅多酚提取过程中乙醇体积分数、提取温度、提取时间和料液比之间的关系。同时可知，对提取含量影响较大的单因素为乙醇体积分数和提取温度(P＜0.001)：二次项A2对提取含量有显著影响(即P＜0.05)；二次项D2对提取含量有极显著影响(即P＜0.01)。
表3回归模型方差分析
通过回归模型预测得到酒醅中多酚类物质的最佳提取条件为：乙醇体积分数为50％，料液比为1：13.68，提取温度为90℃，提取时间25min。
考虑到实际可操作性，将其中料液比的参数调整为1：14，并在此条件下进行3次平行验证实验。比较了单因素实验最优方法和响应面实验最优方法的单次总酚提取量。
结果如表4所示。在响应面实验最优方法的提取下，测得首次提取的总酚含量为1023.41±27.71mg GAE/100g，与理论值994.12mg GAE/100g很接近，相对标准偏差为2.88％。且该实验条件得到的结果相比实施例1中的提取条件所得到的结果，在单次总酚提取率上增加了11.8％。说明响应面法优化得到的提取方法可行。
表4响应面优化多酚提取验证实验
实施例3一种酒醅中多酚类物质的提取方法
一、前处理：将酒醅样品进行低温冷冻干燥，至酒醅样品结构松散，没有水分后，进行粉碎，过80目筛网，得到粉末样品；
二、提取：准确称取2g冻干后的酒醅粉末，以体积分数为50％的乙醇作为提取溶剂，通过搅拌子进行磁力搅拌，进行多酚的提取；其中，料液比为1：14，提取温度为90℃，提取时间25min；
三、离心：提取完成后，在4000r/min下离心10min，取上清液；
四、测定：将离心后的上清液稀释10倍，得到待测液，通过福林酚法进行总酚含量测定；通过高效液相色谱(HPLC)方法对步骤三中的上清液中的多酚类物质进行定性分析；
其中，总酚含量测定方法如下：
(1)绘制标准曲线
准确配制1g/L没食子酸标准溶液，分别吸取40、80、120、160、200、240μL没食子酸标准溶液于2mL离心管中，加乙醇使溶液体积补至2mL，所得系列没食子酸标准溶液浓度分别为0.02、0.04、0.06、0.08、0.01、0.012mg/mL。
吸取150μL系列没食子酸标准溶液于2mL离心管中，加入450μL去离子蒸馏水，150μL福林酚试剂，混匀反应6min后，加入600μL 75g/L的Na2CO3溶液，混合均匀并在室温下避光反应2h后，取200μL加入到96孔板中，用酶标仪在760nm下测定吸光度值。每个样品做三次平行，以不加福林酚试剂和碳酸钠作为空白对照。以没食子酸浓度(mg/L)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，没食子酸标准品的总酚标准曲线如图1所示。总酚含量以没食子酸当量(mg GAE/100g)计。
(2)待测液中多酚含量测定
吸取150μL步骤四中的待测液于2mL离心管中，加入450μL去离子蒸馏水，150μL福林酚试剂，混匀反应6min后，加入600μL 75g/L的Na2CO3溶液，混合均匀并在室温下避光反应2h后，取200μL加入到96孔板中，用酶标仪在760nm下测定吸光度值。将得到的吸光度值代入到标准曲线中，即得到对应的总酚含量。
通过上述方法，最终得到提取液中的多酚物质含量为1023.41±27.71。
其中，通过高效液相色谱(HPLC)方法对待测液中的多酚类物质进行定性分析，具体如下：
取步骤三得到的离心上清液，使用0.22μm滤膜过滤，注射10μL于HPLC系统中，反相C-18柱用于色谱分离。使用双流动相梯度洗脱，包括0.1％甲酸水溶液(A相)和乙腈(B相)；洗脱程序为：0-5min，5-15％B；5-45min，15-50％B；45-47min，50-70％B；47-48min，70-100％B；48-55min，100％B；55-56min，100-5％B；56-65min，5％B；流速0.5mL/min，柱温25℃，采用双通道检测，波长为288nm和330nm。
使用标准品对提取的多酚类物质进行定性。如图8所示，0-30分钟的色谱图为288nm波段下的谱图，30-65分钟的色谱图为330nm波段下的谱图。其中，色谱图中1-9为288nm波段下定性检测到的多酚类物质，分别为没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、木犀草定、矢车菊素、芹菜定、对香豆酸、阿魏酸、花旗松素；10-12为330nm波段下定性检测到的多酚类物质，分别为木樨草素、槲皮素、芹菜素。
与实施例1中采用单因素最优方法得到的提取条件对酒醅样品中多酚类物质进行提取的结果相比较，采用实施例3中提取方法所得到的提取液中，1-11号多酚的色谱峰强度均大于单因素优化的样品色谱峰强度，且12号(芹菜素)多酚仅在实施例3所采用的最终优化后的条件下可检测到。说明采用实施例3中的方法，不仅在总酚含量上具有优势，多酚物质的检测类别上也具有明显优势。
效果例提取方法的评估
以相对标准偏差(RSD)检验多酚提取方法的精密度，以加标回收率验证多酚提取方法的准确度，具体如下：
加标回收率计算方法：取3个酒醅样品，分别在3个酒醅样品中加入等量的没食子酸标准品；另取3个酒醅样品，不加入没食子酸标准品，作为对照样品。按照实施例3中的方法分别对加入没食子酸的酒醅样品和没加入没食子酸的对照样品进行多酚提取和总酚含量测定，根据检测结果计算加标回收率。
日内相对标准偏差计算方法：取3个酒醅样品，按照实施例3中的方法进行多酚物质提取，每个样品重复3次平行实验，取上清液稀释10倍进行总酚含量测定，根据检测结果计算日内相对标准偏差。
日间相对标准偏差技术方法：取3个酒醅样品，按照实施例3中的方法进行多酚物质提取，每个样品重复3次平行实验，取上清液在4℃下保存一天，稀释10倍进行总酚含量测定，根据检测结果计算日间相对标准偏差。
结果如表6。通过上述实施例3的提取方法对酒醅样品中的多酚物质进行提取的加标回收率平均值为104.06％，表明本发明实施例提供的提取方法的准确度很高，检测结果可靠。日内相对标准偏差为0.36％，日间相对标准偏差为1.19％，表明本发明实施例提供的提取方法稳定性好，误差较小。综上所述，本发明实施例所提供的提取方法准确、可靠，可以采用此方法测定酒醅中多酚类物质的含量。
表6精密度及准确度评价
对比例5提取次数对提取效果的影响
该对比例5基于实施例3，与实施例3的不同之处在于，提取次数不同。探究不同提取次数1、2、3次对提取效果的影响。
结果如表5、图7所示，累计提取2次后总酚含量基本达到最大值，在第3次提取时，溶液几乎澄清透明且吸光度未达到测量范围。计算前两次的总酚提取含量，首次提取的总酚含量可占两次提取总酚含量的90.7％，基本满足实验需求，因此从操作效率考虑，提取次数1次即可。
表5不同提取次数对提取效果的影响
对比例6采用不同提取方法对酒醅中多酚类物质提取效果的影响
参考方法1：参考现有文献《Changes in extractable phenolic profileduringnatural fermentation ofwheat,sorghum and teff》，根据参考文献中所公开的方法，进行适当调整，具体如下：
称取冻干过筛后的酒醅样品5.00g，用80％甲醇(料液比1:10；粉末：溶剂，w/v)在室温下震荡提取2h；将提取液在4000r/min下离心10min，并将上清液转移到新的试管中。将残余物进一步用80％甲醇提取两次(料液比1：2.5；残余物：溶剂，w/v)，每次提取30min并离心；合并上清液，置于-20℃保存待用。
参考方法2：参考现有文献《Characterization of phenolic compounds andantioxidant activity in sorghum grains》，根据参考文献中所公开的方法，进行适当调整，具体如下：
将丙酮、水和乙酸溶液(70：29.5：0.5，v/v/v)的提取溶剂以1：20(w/v)的比例添加到冻干过筛后的酒醅样品中；将混合物在室温(25℃)下磁力搅拌1h，该步骤重复3次；将提取液在4000r/min下离心10min，合并上清液，置于-20℃冷藏待用。
参考方法3：参考现有文献《Ultrasound assisted extraction ofpolyphenoliccompounds from red sorghum(Sorghum bicolor L.)bran and their biologicalactivities andpolyphenolic compositions》，根据参考文献中所公开的方法，进行适当调整，具体如下：
将冻干过筛后的酒醅样品置于25mL烧杯中，与70％乙醇混合(料液比1:10，w/v)；超声固定频率为25kHz，超声时间1h，每隔5min，对样品和提取溶剂的混合体系进行搅拌；提取后的液体用布氏漏斗抽滤，残渣重复提取两次；抽滤后的提取液在4000r/min下离心15min；合并离心后的上清液，置于-20℃冷藏待用。
参考方法4：参考现有文献《酿酒用高粱酚类物质组分分析及抗氧化活性评价-沈淑妤》，根据参考文献中所公开的方法，进行适当调整，具体如下：
准确称取2g样品于50mL离心管，加入30mL 80％冰乙醇摇床振荡提取15min；提取结束后在4000r/min下离心10min；移出上清液，残渣再提取两次，合并三次上清液，置于-20℃冷藏待用。
参考方法5：参考现有文献《响应面法优化芝麻香型白酒酒醅中阿魏酸的提取工艺》，根据参考文献中所公开的方法，进行适当调整，具体如下：
准确称取1g样品于50mL离心管，加入30ml体积分数为60％的甲醇-水溶液，在63℃下超声提取15min，在4000r/min条件下离心10min，取上清液置于-20℃冷藏待用。
分别将通过上述五种方法提取得到的多酚提取液通过实施例3中的方法进行多酚含量的测定，结果如表6所示：
表6不同提取方法下的多酚物质提取效果
根据表6中的结果可以看出，根据现有文献中报道的提取方法，对同一种酒醅进行多酚物质进行提取：
首先，从提取时间上来看，参考方法1、参考方法2、参考方法3、参考方法4的提取时间均在4小时及以上，而参考方法5的提取时间最短；其次，从提取效果上来看，参考方法4的提取效果最好，其次是参考方法5。基于此，对通过提取效果最好的参考方法4的方法和提取时间最快的参考方法5的方法得到的提取液进行液相色谱分析，结果如图9所示。从图9结果可以看出，参考方法4在整体峰响应上要高于参考方法5，且多酚主要出峰的时间段内(10-20分钟)，参考方法5峰型较差，难以定量更多种类的多酚类物质。
且，从表6的结果可以进一步看出，采用本发明实施例3中的方法对酒醅中的多酚物质进行提取，相比于参考方法4的方法，提取时间减少了70％的同时，提取率增加了21.5％，具有更高的提取效率。
可以理解，本发明是通过一些实施例进行描述的，本领域技术人员知悉的，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种改变或等效替换。另外，在本发明的教导下，可以对这些特征和实施例进行修改以适应具体的情况及材料而不会脱离本发明的精神和范围。因此，本发明不受此处所公开的具体实施例的限制，所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明所保护的范围内。
Claims (17)
1.一种酒醅中多酚类物质的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）前处理：将酒醅样品进行冷冻干燥、粉碎、过筛，得到粉末样品；
（2）提取：向所述粉末样品中加入提取溶剂，进行搅拌提取；
（3）离心：对提取得到的提取液进行离心，得到上清液；
（4）测定：对上清液进行定性、定量测定；
其中，所述步骤（2）中，所述提取溶剂为：体积分数为45-70%的乙醇水溶液；以v/v计，料液比为1:13-14.9；提取的温度为85-95℃；提取的时间为22-27min。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取溶剂为：体积分数为45-55%的乙醇水溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述提取溶剂为：体积分数为48-52%的乙醇水溶液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述提取的温度为88-92℃。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述搅拌包括通过搅拌子进行磁力搅拌。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述冷冻干燥包括对所述酒醅样品进行低温冷冻干燥处理，至所述酒醅样品结构松散，没有水分。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述过筛的粒径为70-90目。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述过筛的粒径为75-85目。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述离心的条件为：3500-4500r/min下，离心8-15min。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述离心的条件为：3800-4200r/min下，离心9-12min。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，通过福林酚法对总酚含量进行测定。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，通过高效液相色谱技术对所述上清液中的多酚类物质进行定性检测。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测参数包括：
使用0.22μm滤膜对上清液进行过滤。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所使用的色谱分离柱为反相C-18柱。
15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测参数中，使用双流动相进行梯度洗脱，流动相包括A相0.1%甲酸水溶液和B相乙腈。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测参数中，洗脱程序为：0-5min，5-15%B；5-45min，15-50%B；45-47min，50-70%B；47-48min，70-100%B；48-55min，100%B；55-56min，100-5%B；56-65min，5%B。
17.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测参数流速为0.3-0.6mL/min，柱温为22-28℃，采用双通道检测，波长为288nm和330nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310792223.5A CN116832123B (zh) | 2023-06-30 | 2023-06-30 | 一种酒醅中多酚类物质的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310792223.5A CN116832123B (zh) | 2023-06-30 | 2023-06-30 | 一种酒醅中多酚类物质的提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116832123A CN116832123A (zh) | 2023-10-03 |
| CN116832123B true CN116832123B (zh) | 2024-06-21 |
Family
ID=88168315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310792223.5A Active CN116832123B (zh) | 2023-06-30 | 2023-06-30 | 一种酒醅中多酚类物质的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116832123B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111205337A (zh) * | 2018-11-22 | 2020-05-29 | 唐石山 | 一种从橄榄中提取多酚类物质的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010285357A (ja) * | 2009-06-09 | 2010-12-24 | Kao Corp | 酒粕由来の抗酸化成分の製造方法 |
| CN109805393B (zh) * | 2019-03-27 | 2022-02-25 | 北京工商大学 | 一种酒糟提取物及其制备方法和应用 |
| CN110179932A (zh) * | 2019-07-02 | 2019-08-30 | 北京工商大学 | 一种基于白酒酒糟酚类化合物的提取方法 |
-
2023
- 2023-06-30 CN CN202310792223.5A patent/CN116832123B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111205337A (zh) * | 2018-11-22 | 2020-05-29 | 唐石山 | 一种从橄榄中提取多酚类物质的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郎酒酒糟中总酚的提取与检测方法的优化;曹新志;中国酿造;20110715(07);137-140 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116832123A (zh) | 2023-10-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cai et al. | Study of the structure and biosynthetic pathway of lignin in stone cells of pear | |
| Zhao et al. | Quadruple high-resolution α-glucosidase/α-amylase/PTP1B/radical scavenging profiling combined with high-performance liquid chromatography–high-resolution mass spectrometry–solid-phase extraction–nuclear magnetic resonance spectroscopy for identification of antidiabetic constituents in crude root bark of Morus alba L. | |
| Li et al. | Tandem mass spectrometry for sequencing proanthocyanidins | |
| Serra et al. | Determination of procyanidins and their metabolites in plasma samples by improved liquid chromatography–tandem mass spectrometry | |
| CN109884207B (zh) | 一种快速准确分析菜籽油中多酚含量的方法 | |
| Assimopoulou et al. | Analysis of alkannin derivatives from Alkanna species by high‐performance liquid chromatography/photodiode array/mass spectrometry | |
| Teng et al. | Qualitative and quantitative methods to evaluate anthocyanins | |
| Gu et al. | Simultaneous distillation extraction of some volatile flavor components from Pu-erh tea samples—comparison with steam distillation-liquid/liquid extraction and soxhlet extraction | |
| Casati et al. | Hexahydrocannabinol on the light cannabis market: the latest “new” entry | |
| CN111562340B (zh) | 一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法 | |
| Carrasco-Sandoval et al. | A fast and selective method to determine phenolic compounds in quinoa (Chenopodium quinoa Will) seeds applying ultrasound-assisted extraction and high-performance liquid chromatography | |
| Duquesnoy et al. | Identification and quantitative determination of carbohydrates in ethanolic extracts of two conifers using 13C NMR spectroscopy | |
| Vu et al. | Identification of health-promoting bioactive phenolics in black walnut using cloud-based metabolomics platform | |
| CN1302003C (zh) | 苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法 | |
| CN116832123B (zh) | 一种酒醅中多酚类物质的提取方法 | |
| CN113484447B (zh) | 基于偏最小二乘法和色谱技术判别茶叶发酵程度及区别茶类的方法 | |
| Guo et al. | A rational route based on liquid-liquid-refining extraction and high-speed counter-current chromatography for separation of target compound from Toona sinensis | |
| Spyros et al. | Structure determination of oligomeric alkannin and shikonin derivatives | |
| Li et al. | Determination of bioactive compounds in the nonmedicinal parts of Scrophularia ningpoensis using ultra‐high‐performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry and chemometric analysis | |
| Wu et al. | Determination of soluble persimmon tannin by high performance gel permeation chromatography | |
| CN112114079A (zh) | 一种同时检测使君子中9种化学成分的方法 | |
| Pang et al. | Simultaneous determination of main bioactive components in Rosa multiflora Thunb. and their fragmentation study by LC–MS | |
| Kay et al. | Bioactive compounds of berries: chemistry and analytical methods of detection | |
| Schefer et al. | Application of high-performance liquid chromatography–nuclear magnetic resonance coupling to the identification of limonoids from mahogany tree (Switenia macrophylla, Meliaceae) by stopped-flow 1D and 2D NMR spectroscopy | |
| Yang et al. | Rapid screening and evaluation of natural antioxidants from leaf, stem, and root of Artemisia argyi by online liquid microextraction combined with HPLC‐based antioxidant assay system coupled with calibration quantitative analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |