CN116803275A - 一种银杏外种皮复合生物农药及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种银杏外种皮复合生物农药及其制备方法。由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物30～60份、蒺藜提取物30～60份、马齿苋提取物20～30份、乳化剂5～10份、填充剂20～50份、分散剂5～8份、水150～200份。本发明的银杏外种皮复合生物农药，可有效杀灭辣椒疫霉菌和青枯劳尔氏菌，其中，银杏外种皮提取物和蒺藜提取物的组合使用，对于辣椒疫霉菌的杀灭具有协同增效的作用，银杏外种皮提取物和马齿苋提取物的组合使用，对于青枯劳尔氏菌的杀灭具有协同增效的作用。
Description
技术领域
本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种银杏外种皮复合生物农药及其制备方法。
背景技术
银杏是我国特有的珍稀树种，银杏叶和和银杏果中含有银杏黄酮、银杏内酯等生物活性物质，银杏黄酮可使冠状动脉扩张、降低血糖、增加脑血流量、改善心脑血管循环等功能，银杏内酯则对脑功能障碍、智力衰退、末梢血管血流不畅等症状有明显的减缓作用。因而，银杏叶和果均广泛用于制备银杏提取物，而银杏外种皮因为含有较高对人体有害的酚酸类物质往往被废弃。已有的研究表明，银杏外种皮中的含有的酚酸类物质如银杏酚酸具有光谱的抗菌作用，对多种植物致病菌，如黄瓜赤霉菌、玉米大斑菌赤霉菌、苹果炭疽菌均有较好的抑制作用，因而具有广泛的生物农药开发前景。
植物真菌病是由植物病原真菌引起的病害，约占植物病害的70～80％。常见有霜霉、白粉、白锈、黑粉、锈粉、烟霉、黑痣、霉状物、蘑菇状物、棉絮状物、颗粒状物、绳索状物、粘质粒和小黑点等。大的病征可用肉眼直接观察到。病征的出现与寄主的品种、器官、部位、生育时期、外界环境有密切关系。如不少叶斑病菌一般在寄主生育后期才产生病征，甚至在落叶上才形成小黑点；有的菌核病要在寄主某一特定部位才形成颗粒状的菌核；银叶病要在寄主的死亡部分才长出蘑菇状的产孢结构；根肿病要在肿瘤很深的位置才能观察到病原菌。许多真菌病害在环境条件不适宜时完全不表现病征。真菌病害的症状与病原真菌的分类有密切关系，如白绢病菌在许多不同作物上均造成症状相似的白绢病，霜霉菌产生霜霉状物，黑粉菌产生黑粉状物等。
辣椒疫病俗称黑杆，是由辣椒疫霉菌侵染所引起的、发生在辣椒上的病害，辣椒疫病苗期和成株期均可发生，以成株期发病为主，病菌可侵染根、茎、叶、果。在日光温室内发生普遍，是日光温室辣椒生产上毁灭性病害，发生严重时常造成绝收，给辣椒种植户带来巨大的经济损失。辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)属鞭毛属亚门疫霉属的一种病原真菌，病菌孢囊梗不规则分枝或伞形分枝，孢子囊顶生，长椭圆形，淡色，顶端有乳头状突起，萌发时产生多个有双鞭毛的游动孢子，卵孢子圆球形，黄褐色，直径为15～28微米，病菌还能产生球形的厚壁孢子，淡黄色，单胞，该菌生长最适宜温度为25～27℃，产生孢子囊最适宜温度为26～28℃，辣椒疫霉属的寄主范围广，除辣椒外，还可为害番茄、茄子和瓜类等作物。
青枯劳尔氏菌是破坏力最强的植物病原细菌之一，可通过III型分泌系统传递一系列效应蛋白到植物体内介导发病。能在200多种植物上引起细菌性枯萎病，包括重要作物如马铃薯、番茄和烟草。因具有全地域性分布、高度异质性(空间上分布不均匀，具有一定复杂性)和极具侵染性的特点，青枯劳尔氏菌被认为是世界上最具破坏力的病原物之一。青枯劳尔氏菌可以长期生活在湿润土壤或水中，且通过次生根生长、害虫取食或农事耕作造成的植物根部表皮伤口对植株维管束系统进行侵染。一旦进入植株体内，青枯劳尔氏菌会定殖在根部皮层，并且侵染木质部导管，通过维管束系统进一步侵染地上部。寄主会因青枯菌的快速扩散而阻塞导管，减少水分运输，进而导致植株枯萎死亡。
虽然银杏外种皮的提取物对于辣椒疫霉菌和青枯劳尔氏菌均有一定的杀菌效果，但杀菌效果不佳。
发明内容
本发明的目的在于一种银杏外种皮复合生物农药及其制备方法。
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物30～60份、蒺藜提取物30～60份、马齿苋提取物20～30份、乳化剂5～10份、填充剂20～50份、分散剂5～8份、水150～200份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮40～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～8倍质量的70％乙醇60～75℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在50～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～10倍质量的70％乙醇60～80℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在50～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～10倍质量的70％乙醇60～80℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
所述乳化剂为N-月桂酰基肌氨酸钠、松香酸聚氧乙烯酯、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠、蓖麻油聚氧乙烯醚EL-10、吐温80中的一种或几种。
所述填充剂为凹凸棒土、白炭黑、高岭土、碳酸钙、糊精、硅藻土中的一种或几种。
所述分散剂为烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐磷酸盐中的一种或者几种。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物30～60份、蒺藜提取物30～60份、马齿苋提取物20～30份、乳化剂5～10份、填充剂20～50份、分散剂5～8份加入150～200份水中，搅拌均匀，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药在防治辣椒疫霉病和青枯病中的应用。
本发明的有益效果：本发明的银杏外种皮复合生物农药，可有效杀灭辣椒疫霉菌和青枯劳尔氏菌，其中，银杏外种皮提取物和蒺藜提取物的组合使用，对于辣椒疫霉菌的杀灭具有协同增效的作用，银杏外种皮提取物和马齿苋提取物的组合使用，对于青枯劳尔氏菌的杀灭具有协同增效的作用。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
实施例1
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物50份、蒺藜提取物50份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份、水180份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入6倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过40目筛，加入7倍质量的70％乙醇70℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入8倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物50份、蒺藜提取物50份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份加入180份水中，搅拌均匀，制成。
实施例2
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物30份、蒺藜提取物30份、马齿苋提取物20份、松香酸聚氧乙烯酯5份、凹凸棒土20份、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐5份、水150份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮40℃条件下干燥24h，粉碎，过30目筛，加入5倍质量的70％乙醇60℃下加热回流提取4h，蒸干，制成。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在50℃条件下干燥24h，粉碎，过30目筛，加入5倍质量的70％乙醇60℃下加热回流提取4h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在50℃条件下干燥24h，粉碎，过30目筛，加入5倍质量的70％乙醇60℃下加热回流提取4h，蒸干，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物30份、蒺藜提取物30份、马齿苋提取物20份、松香酸聚氧乙烯酯5份、凹凸棒土20份、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐5份加入150份水中，搅拌均匀，制成。
实施例3
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物60份、蒺藜提取物60份、马齿苋提取物30份、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠10份、糊精50份、烷基酚聚氧乙烯醚8份、水200份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮70℃条件下干燥48h，粉碎，过60目筛，加入8倍质量的70％乙醇75℃下加热回流提取6h，蒸干，制成。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在70℃条件下干燥48h，粉碎，过60目筛，加入10倍质量的70％乙醇80℃下加热回流提取6h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在70℃条件下干燥48h，粉碎，过60目筛，加入10倍质量的70％乙醇80℃下加热回流提取6h，蒸干，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物60份、蒺藜提取物60份、马齿苋提取物30份、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠10份、糊精50份、烷基酚聚氧乙烯醚8份加入200份水中，搅拌均匀，制成。
对比例1
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物100份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份、水180份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入6倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入8倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物100份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份加入180份水中，搅拌均匀，制成。
对比例2
一种复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：蒺藜提取物100份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份、水180份。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过40目筛，加入7倍质量的70％乙醇70℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入8倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取蒺藜提取物100份、马齿苋提取物25份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份加入180份水中，搅拌均匀，制成。
对比例3
一种银杏外种皮复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物75份、蒺藜提取物50份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份、水180份。
所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入6倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过40目筛，加入7倍质量的70％乙醇70℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物75份、蒺藜提取物50份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份加入180份水中，搅拌均匀，制成。
对比例4
一种复合生物农药，由如下重量份数的组分构成：蒺藜提取物50份、马齿苋提取物75份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份、水180份。
所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过40目筛，加入7倍质量的70％乙醇70℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在60℃条件下干燥36h，粉碎，过50目筛，加入8倍质量的70％乙醇65℃下加热回流提取5h，蒸干，制成。
所述复合生物农药的制备方法，按照如下步骤进行：按重量份数，取蒺藜提取物50份、马齿苋提取物75份、N-月桂酰基肌氨酸钠8份、高岭土40份、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐6份加入180份水中，搅拌均匀，制成。
实验例：
辣椒疫霉菌的分离：取发生疫病的辣椒病组织消毒，切成小块，取病健交界处组织放置于含硫酸链霉素的PDA培养基上，27℃培养箱培养3-4天，直至培养基内病组织周围有菌丝生长。挑取菌丝进行纯化培养，对分离所得的病原菌菌落形态进行观察，并在显微镜下进行初步形态鉴定。同时提取纯化的病原菌DNA进行ITS区PCR扩增，使用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增，所得的PCR产物送至生工公司进行测序。测序结果在NCBI的Blast进行比对及鉴定，测序结果与辣椒疫霉菌同源性高达100％，确定为辣椒疫霉。
青枯劳尔氏菌的分离：取发生疫病的姜病组织消毒，采用组织分离技术，在TZC平板上培养48h后，挑取具有青枯菌属细菌(Ralstonia solanacearum、R.pseudosolanacearum、R.sygyzii)典型形态特征的单菌落进行纯培养，采用种特异性鉴定PCR或基于egl基因系统进化分析进一步鉴定到种分类单元水平。
银杏外种皮提取物、蒺藜提取物、马齿苋提取物按照实施例1的方法制备，用水稀释后备用；供试土样为采自北京市房山区蔬菜大棚，取耕作层土壤带回实验室，挑取石块、砖块、秸秆等，过2mm网筛后，混匀备用。
辣椒疫霉菌和青枯劳尔氏菌接种土壤的制备，用无菌水将辣椒疫霉菌或青枯劳尔氏菌孢子悬浮液调整至3×108个孢子/mL，注入土壤中，最终孢子浓度为每克土壤6×106个孢子，然后在25℃下培养20天，作为试验土壤。
称取600g准备好的土样，放入1.5L干燥器中。施药时，银杏外种皮提取物、蒺藜提取物、马齿苋提取物用移液枪准确移取。施入药剂后，25℃下熏蒸5d。熏蒸结束后敞气1d，然后分离土传病原真菌。并设置空白处理，每个处理3次重复。
辣椒疫霉菌或青枯劳尔氏菌防效用下式计算：
根据Colby法(1966)公式计算防效并与实测的防效比较，简便、有效地评价混剂的联合作用效果。计算公式为：
E为混剂的理论防效；n为混用药剂的数量；X1表示施用第1种药剂后的防效；X2表示施用第2种药剂后的防效；Xn表示施用第n种药剂后的防效。当混剂实际防效大于理论防效时，表示增效；当混剂实际防效小于理论防效时，表示拮抗。
数据分析采用SPSS v20.0统计软件包(美国IBM公司)进行。采用方差分析和邓肯新的多程检验分析两组间的统计差异。
测试结果如下：
表1银杏外种皮提取物和蒺藜提取物混用对辣椒疫霉菌的效果
从表1可以看出，银杏外种皮提取物和蒺藜提取物混用对辣椒疫霉菌表现出了很强的协同增效作用。
表2银杏外种皮提取物和马齿苋提取物混用对青枯劳尔氏菌的效果
从表2可以看出，银杏外种皮提取物和马齿苋提取物混用对青枯劳尔氏菌表现出了很强的协同增效作用。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，由如下重量份数的组分构成：银杏外种皮提取物30～60份、蒺藜提取物30～60份、马齿苋提取物20～30份、乳化剂5～10份、填充剂20～50份、分散剂5～8份、水150～200份。
2.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述银杏外种皮提取物的提取方法为：将银杏外种皮40～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～8倍质量的70％乙醇60～75℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
3.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述蒺藜提取物的提取方法为：将新鲜蒺藜全草在50～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～10倍质量的70％乙醇60～80℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
4.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述马齿苋提取物的提取方法为：将新鲜马齿苋全草在50～70℃条件下干燥24～48h，粉碎，过30～60目筛，加入5～10倍质量的70％乙醇60～80℃下加热回流提取4～6h，蒸干，制成。
5.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述乳化剂为N-月桂酰基肌氨酸钠、松香酸聚氧乙烯酯、顺丁烯二酸二仲辛酯磺酸钠、蓖麻油聚氧乙烯醚EL-10、吐温80中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述填充剂为凹凸棒土、白炭黑、高岭土、碳酸钙、糊精、硅藻土中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药，其特征在于，所述分散剂为烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯甲醛缩合物硫酸盐、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物硫酸盐磷酸盐中的一种或者几种。
8.权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：按重量份数，取银杏外种皮提取物30～60份、蒺藜提取物30～60份、马齿苋提取物20～30份、乳化剂5～10份、填充剂20～50份、分散剂5～8份加入150～200份水中，搅拌均匀，制成。
9.权利要求1所述银杏外种皮复合生物农药在防治辣椒疫霉病和青枯病中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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