CN116769729A - 靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 - Google Patents
靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116769729A CN116769729A CN202310664495.7A CN202310664495A CN116769729A CN 116769729 A CN116769729 A CN 116769729A CN 202310664495 A CN202310664495 A CN 202310664495A CN 116769729 A CN116769729 A CN 116769729A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- binding fragment
- antigen
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 68
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 62
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 62
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 62
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 61
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 14
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 4
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100495352 Candida albicans CDR4 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 3
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101100042687 Mus musculus Slamf1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000008115 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Human genes 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- BVUGWTRIWCWFEH-UHFFFAOYSA-N C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1.C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1 Chemical compound C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1.C1=CN=C2C(=O)NC(NN)=NC2=N1 BVUGWTRIWCWFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 241000976088 Tropinota hirta Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- QDFHPFSBQFLLSW-KQYNXXCUSA-N adenosine 2'-phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1OP(O)(O)=O QDFHPFSBQFLLSW-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 arginine for lysine Chemical class 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N dihydrofolic acid Chemical class N=1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020939 nutritional additive Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种靶向CD150的抗体或抗原结合片段及其应用。所述抗体或抗原结合片段包括选自下列至少之一的CDR序列：轻链可变区CDR序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；重链可变区CDR序列：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。本发明的抗体能够特异性的靶向结合CD150，避免免疫细胞耗竭，使免疫细胞发挥免疫杀伤功能，进而抑制肿瘤增殖。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及靶向CD150的抗体或抗原结合片段及其应用，更具体地，本发明涉及一种抗体或抗原结合片段、核酸分子、表达载体、重组细胞、药物组合物、制药用途及试剂盒。
背景技术
恶性肿瘤作为一种严重威胁人类的生命健康的疾病。目前已有的恶性肿瘤治疗手段，包括手术切除、放疗、化疗、小分子靶向疗法、免疫检查点疗法、细胞及基因疗法等仅能够在部分恶性肿瘤患者中发挥有限的作用，恶性肿瘤仍是困扰人类生命健康的难题。肿瘤病人的治疗中手术切除一般只适用于早期患者，且有恢复难和并发症的风险。更晚期的治疗放疗和化疗有一定的效果但是也存在毒性和耐药性等缺点。免疫疗法中常见免疫检查点疗法，通过抑制免疫检查点去逆转肿瘤逃逸的机制从而达到杀伤肿瘤进行治疗的效果。基于上述原因，开发针对特定靶点的免疫检查点抗体是有必要的。
CD150是一种单链I型跨膜磷酸腺蛋白，分子量范围为70kDa至95kDa。CD150的核心蛋白的分子量约为42kDa。在细胞质尾部具有两个基于免疫感受器酪氨酸的开关基序(ITSM)。在恶性细胞的表面，CD150可作为麻疹病毒(MV)介导的溶瘤的靶标，并可能作为基于抗体的治疗的靶标。在肿瘤的发展过程中CD150在B细胞上高表达，与CD8+T细胞相互作用使得T细胞耗竭限制了对肿瘤的杀伤作用。
因此，亟需开发一种针对CD150的高特异性抗体。
发明内容
本发明是基于发明人的下列问题和事实的发现而完成的：
肿瘤免疫治疗是近些年来肿瘤治疗领域的巨大突破，其中，以PD-1/PD-L1为代表的免疫检查点抑制剂在临床应用中取得了很好的效果。对于癌症患者，多种肿瘤细胞表面会上调表达CD150，CD150与CD8+T细胞相互作用使T细胞耗竭来实现免疫逃逸；靶向CD150抗体通过与CD150结合，避免T细胞耗竭，使T细胞发挥免疫杀伤功能，抑制肿瘤增殖。
基于此，发明人经过大量试验，获得了能够特异识别CD150抗体，高效阻断与其配体的结合，通过逆转免疫细胞功能耗竭进而达到杀伤肿瘤细胞的效果，其中，免疫细胞包括T细胞，NK细胞，B细胞和巨噬细胞。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种大鼠杂交瘤细胞mCD150-mAb-1。根据本发明的实施例，所述大鼠杂交瘤细胞的保藏号为CGMCC No.45539。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种抗体或抗原结合片段。根据本发明的实施例，所述抗体或其抗原结合片段包括选自下列至少之一的CDR序列：
轻链可变区CDR序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；
重链可变区CDR序列：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。
QGISNY(SEQ ID NO:1)。
YTS(SEQ ID NO:2)。
QQYDSSPYT(SEQ ID NO:3)。
GYTFTDYA(SEQ ID NO:4)。
INTQTGKP(SEQ ID NO:5)。
TRYNSGNWFAY(SEQ ID NO:6)。
根据本发明实施例，上述抗体能够特异性的靶向结合CD150，逆转免疫细胞(如T细胞，NK细胞和B细胞等)功能耗竭。
根据本发明的实施例，上述抗体或抗原结合片段还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段包括：
分别如SEQ ID NO:1、2和3的氨基酸序列所示的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列；和/或
分别如SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列所示的重链可变区CDR4、CDR5、CDR6序列。
根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段进一步包括重链框架区序列和轻链框架区序列中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述重链框架区序列和轻链框架区序列的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的重链可变区和如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的轻链可变区。
QIQLVQSGPELKKPGESVKISCKASGYTFTDYAMNWVKQAPGNGLKWMGYINTQTGKPTYADDF KQRFVFSLETSASTAYLQINNLNIEDTATYFCTRYNSGNWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)。
DIQMTQTPSSMPASLGERVTISCRAGQGISNYLNWYQQKPDGAIKPLIYYTSNLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLEPEDFAMYYCQQYDSSPYTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:8).
根据本发明的实施例，所述抗体或抗原结合片段包括重链恒定区和轻链恒定区中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述轻链恒定区和重链恒定区均来自于鼠源。
根据本发明的实施例，所述鼠源轻链恒定区具有如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列和重链恒定区具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDST YSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO:12)。
AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK(SEQ ID NO:13)。
根据本发明的实施例，所述抗体包括选自多抗、全长单抗、Fab抗体、Fab’抗体、F(ab’)2抗体、F(ab)2抗体、Fv抗体、单链抗体、单域抗体以及最小识别单位中的至少之一；或者所述抗原结合片段包括选自F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、F(ab)2片段、Fv片段、scFv片段、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白和最小识别单位中的至少之一。
根据本发明的实施例，所述抗体为全长单抗。
根据本发明的实施例，所述抗体具有如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的轻链。
QIQLVQSGPELKKPGESVKISCKASGYTFTDYAMNWVKQAPGNGLKWMGYINTQTGKPTYADDFKQRFVFSLETSASTAYLQINNLNIEDTATYFCTRYNSGNWFAYWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK(SEQ ID NO:9)。
DIQMTQTPSSMPASLGERVTISCRAGQGISNYLNWYQQKPDGAIKPLIYYTSNLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLEPEDFAMYYCQQYDSSPYTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ IDNO:10)。
在本发明的第三方面，本发明提供了一种核酸分子。根据本发明的实施例，所述核酸分子编码本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本发明实施例的核酸分子所编码前述的抗体或抗原结合片段。
根据本发明的实施例，所述核酸分子为DNA。
需要说明的是，对于本发明中所提及的核酸分子，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。另外，本申请中的核酸序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。
在本发明的第四方面，本发明提供了一种表达载体。根据本发明的实施例，所述表达载体携带本发明第三方面所述的核酸分子。根据本发明的实施例，在将上述核酸分子连接到载体上时，可以将所述核酸分子与载体上的控制元件直接或者间接相连，只要这些控制元件能够控制所述核酸分子的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即，并非来自于载体本身。当然，所述核酸分子与控制元件进行可操作地连接即可。
根据本发明的实施例，所述表达载体为真核表达载体或原核表达载体。
根据本发明的实施例，所述表达载体为质粒表达载体。
在本发明的第五方面，本发明提供了一种重组细胞。根据本发明的实施例，所述重组细胞携带本发明第三方面所述的核酸分子；或表达本发明第一方面所述的抗体或抗原结合片段。根据本发明的实施例，利用该重组细胞在适合条件下，能够在细胞内有效地表达前述的抗体或抗原结合片段。
需要说明的是，本申请说明书中所述的“适合条件”，是指适合本发明所述抗体或抗原结合片段表达的条件。本领域技术人员容易理解的是，适合所述抗体或抗原结合片段表达的条件包括但不限于合适的转化或转染方式、合适的转化或转染条件、健康的宿主细胞状态、合适的宿主细胞密度、适宜的细胞培养环境、适宜的细胞培养时间。“适合条件”不受特别限制，本领域技术人员可根据实验室的具体环境，优化最适的所述抗体或抗原结合片段表达的条件。
根据本发明的实施例，所述重组细胞是通过将本发明第四方面所述的表达载体引入至宿主细胞中而获得的。
根据本发明的实施例，所述重组细胞为真核细胞。
根据本发明的实施例，所述重组细胞为哺乳动物细胞。
在本发明的第六方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物组合物包括本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段、本发明第三方面所述的核酸分子、本发明第四方面所述的表达载体或本发明第五方面所述的重组细胞。本发明的药物组合物能够结合CD150，阻断CD150与其受体进行结合，可有效治疗以及预防肿瘤发生发展。
根据本发明的实施例，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的载体或辅料。
需要说明的是“药学上可接受的载体”可以包括生理学上相容的任何和所有溶剂等等。具体实例可以是水、盐水、磷酸盐缓冲盐溶液、葡萄糖等以及它们的组合物中的一种或多种。有许多情况下，药物组合物中包括等渗剂，例如氯化钠等。当然药学上可接受的载体还可包括微量的辅助物质，例如缓冲剂，用来延长抗体的保存限期或效力。
例如，本发明的抗体或抗原结合片段可掺入适用于胃肠外施用(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)的药物组合物中。这些药物组合物可以被制备成各种形式。例如液体、半固体和固体剂型等，包括但不限于液体溶液(例如，注射溶液和输注溶液)脂质体。典型的药物组合物为注射溶液或输注溶液形式。所述抗体可通过静脉输注或注射、或者肌肉内或皮下注射来施用。
在本发明的第七方面，本发明提供了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括：本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段、本发明第三方面所述的核酸分子、本发明第四方面所述的表达载体或本发明第五方面所述的重组细胞。本发明提供的试剂盒中的抗体或抗原结合片段能够与CD150有效结合。在合适条件下，所述核酸分子、表达载体或重组细胞均能够表达所述抗体或抗原结合片段。进一步地，包含上述物质的试剂盒能够与CD150进行有效结合，可用于有效检测CD150。所述试剂盒可用于科学研究，如定性或定量检测生物样本中的CD150，也可以用于对个体状态进行判断，如获得所述个体的CD150水平后，判断其CD150水平是否过高于或低于正常水平，所述生物样本可以为细胞、组织、血液等。
在本发明的第八方面，本发明提供了一种本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段、本发明第三方面所述的核酸分子、本发明第四方面所述的表达载体、本发明第五方面所述的重组细胞或本发明第六方面所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗恶性肿瘤。
根据本发明的实施例，所述恶性肿瘤包括肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、甲状腺癌等常见相关肿瘤。
在本发明的第九方面，本发明提供了一种本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段、本发明第三方面所述的核酸分子、本发明第四方面所述的表达载体或本发明第五方面所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD150。
在本发明的第十方面，本发明提供了一种预防和/或治疗恶性肿瘤的方法。根据本发明实施例，所述方法包括：向受试者施用药学上可接受量的本发明第二方面所述的抗体或抗原结合片段或本发明第六方面所述的药物组合物。由此，可有效治疗预防和/或治疗恶性肿瘤。
本发明所述的抗体或抗原结合片段或药物组合物的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的活性成分的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
本发明的抗体或抗原结合片段或药物组合物可掺入适用于胃肠外施用(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)的药物中。这些药物可以被制备成各种形式。例如液体、半固体和固体剂型等，包括但不限于液体溶液(例如，注射溶液和输注溶液)或冻干粉。典型的药物为注射溶液或输注溶液形式。前述抗体或抗原结合片段、前述的重组蛋白、前述的多特异性抗体、前述的药物组合物或前述偶联物可通过静脉输注或注射或肌肉内或皮下注射来施用。
根据本发明的实施例，所述方法的给药途径采用皮下注射或静脉注射。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为本发明实施例1的CD150免疫原的表达，纯化，鉴定；
图2为本发明实施例1的单克隆抗体SDS-PAGE电泳图和单克隆纯化蛋白纯化图；
图3为本发明实施例1的流式细胞术验证抗体与抗原结合以及抗体的阻断效果；
图4为本发明实施例1的采用ELISA表征CD150小鼠单克隆抗体效价；
图5为本发明实施例1的BLI表征单克隆抗体与TD1 m的亲和力；
图6为本发明实施例2的抗CD150抗体抑制小鼠肿瘤增殖；
图7为本发明实施例1的PTT5-hfc重组质粒图谱。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
在本文中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
在本文中，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
在本申请中，所述HAT选择性培养基用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞的培养基，是含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)和甘氨酸的完全培养基。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下，这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄嘌呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞不可以在此培养基中生存。作为常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培养基。
在本申请中，所述HT培养基用于杂交瘤筛选培养基的添加剂和营养添加剂以克服细胞内残留氨基喋呤(Aminopterin)对DNA经典合成途径的抑制作用。
抗体
本文中，术语“抗体”是能够与特异性抗原结合的免疫球蛋白分子。包括两条分子量较轻的轻链和两条分子量较重的重链，重链(H链)和轻链(L链)由二硫键连接形成一个四肽链分子。其中，肽链的氨基端(N端)氨基酸序列变化很大，称为可变区(V区)，羧基端(C端)相对稳定，变化很小，称为恒定区(C区)。L链和H链的V区分别称为VL和VH。
在可变区中某些区域氨基酸组成和排列顺序具有更高的变化程度，称为高变区(Hypervariable region，HVR)，高变区为抗原和抗体结合的位置，因此也称为互补决定区(complementarity-determining region，CDR)。重链可变区和轻链可变区上均有三个CDR。
本发明利用含有小鼠CD150胞外区基因的重组蛋白免疫雌鼠，通过杂交瘤融合技术筛选到一株能够特异性结合CD150蛋白的鼠源抗体。利用该抗体片段能够特异性的靶向结合CD150，阻断CD150与CD8+T细胞的相互作用，避免T细胞耗竭，增强T细胞的杀伤效果。
在一些实施方案中，本发明提出了一种能够特异识别CD150的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：选自下列至少之一的CDR序列：轻链可变区CDR序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3；重链可变区CDR序列：SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：6。在本文中，所述“抗原结合片段”是指保持特异性结合抗原能力的抗体片段，抗原结合片段的实施例包括但不限于Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、Fab片段、(Fab)2、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白、Fv-Fc融合蛋白、由抗原结合片段形成的多特异性抗体、单结构域抗体、VHH纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体或最小识别单位的至少之一。此外，本发明所提供的抗体或者抗原结合片段与上述重链和轻链相比，还可以进行保守氨基酸取代。所述“保守氨基酸取代”指的是氨基酸被另一氨基酸发生生物学上、化学上或者结构上相似的残基所取代。生物学上相似的指的是该取代不破坏CD150抗体或者与CD150抗原的生物学活性。结构上相似指的是氨基酸具有相似长度的侧链，如丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸，或具有相似大小的侧链。化学相似性指的是氨基酸具有相同的荷电或者都是亲水或者疏水的。例如疏水残基异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或者甲硫氨酸相互取代。或者用极性氨基酸例如用精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸、谷氨酰胺取代天冬酰胺，丝氨酸取代苏氨酸等等。
核酸分子、表达载体、重组细胞
在制备或者获取这些抗体或抗原结合片段的过程中，可以利用表达这些抗体或抗原结合片段的核酸分子，与不同的载体连接，然后在不同细胞中表达，来获得相应抗体或抗原结合片段。
为此，本发明还提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码上述所述的抗体或其抗原结合片段。
在一些优选的实施方案中，所述核酸分子经过种属优化，更易在哺乳动物细胞中表达。
本发明还提供了一种表达载体，所述表达载体包含上述分离的核酸分子。在将上述分离的多核苷酸连接到载体上时，可以将多核苷酸与载体上的控制元件直接或者间接相连，只要这些控制元件能够控制多核苷酸的翻译和表达等即可。当然这些控制元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。当然，多核苷酸与控制元件进行可操作地连接即可。
本文中“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上，使得载体内的控制元件，例如转录控制序列和翻译控制序列等等，能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。当然用来编码抗体重链和轻链的多核苷酸，可以分别独立的插入到不同的载体上，常见的是插入到同一载体上。常用的载体例如可以为质粒、噬菌体等等。
本发明还提供了一种重组细胞，该重组细胞中包含有该表达载体。可以将表达载体导入到哺乳动物细胞中，构建获得重组细胞，然后利用这些重组细胞表达本发明提供的抗体或者抗原结合片段。通过该重组细胞进行培养，即可以获得相应抗体。这些可用的哺乳动物细胞例如可以为CHO细胞等。
药物组合物、试剂盒及制药用途
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述抗体或者其抗原结合片段，还可以包括上述核酸分子、表达载体、重组细胞。
本文提供的靶向CD150单克隆抗体可以掺入适合受试者施用的药物组合物中。通常，这些药物组合物包括本文提供的CD150抗体。
当然，本文中的CD150抗体还可以根据需要被制成试剂盒或者其他诊断性试剂的一部分。根据本发明的实施例，本发明还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述CD150抗体。应用本发明提供的试剂盒，例如可以用于免疫印迹、免疫沉淀等涉及到利用CD150抗原和抗体特异性结合性能来检测的试剂盒等。这些试剂盒可包含下列中的任意一种或多种：拮抗剂、CD150抗体或者药物所需材料；蛋白纯化柱；免疫球蛋白亲和纯化缓冲剂；细胞的测定稀释剂；说明书或者文献等。CD150抗体可被用于不同类型的诊断测试，例如可以在体外或者体内检测各种各样的疾病或者药物、毒素或者其他蛋白等的存在。例如可以通过对受试者的血清或者血液进行检测，用来检测CD150。
本发明CD150抗体和/或含有CD150抗体的药物，可以预防和/或治疗癌症或肿瘤，这些癌症或者肿瘤可以是任何不受调控的细胞生长。具体地，可以是肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、甲状腺癌等。在利用本发明所提供的CD150抗体治疗上述疾病时，可以将本发明提供的CD150抗体提供给受试者即可。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
需要说明的是，本申请中CD150m均表示CD150鼠源蛋白。
实施例1：抗CD150单克隆抗体的制备
本实施例通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD150的单克隆抗体，具体如下：
(1)表达载体的构建
从公司合成的CD150全长基因中PCR扩增小鼠CD150(氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示)胞外段编码序列，将序列片段与PTT5-hfc重组质粒(图7)在SaI l和X-BaI l处酶切后进行连接，连接产物转化DH5α大肠杆菌，涂板生长过夜，并对筛选得到的菌株进行PCR检测，将PCR鉴定阳性的克隆进行DNA测序，测序结果表明载体ptt5-CD150-hFc构建成功。
MTGGGVMDCPVILQKLGQDTWLPLTNEHQINKSVNKSVRILVTMATSPGSKSNKKIVSFDLSKGSYPDHLEDGYHFQSKNLSLKILGNRRESEGWYLVSVEENVSVQQFCKQLKLYEQVSPPEIKVLNKTQENENGTCSLLLACTVKKGDHVTYSWSDEAGTHLLSRANRSHLLHITLSNQHQDSIYNCTASNPVSSISRTFNLSSQACKQESSSESSPWMQYTLVPLGVVIIFILVFTAIIMMKRQGKSNHCQPPVEEKSLTIYAQVQKSGPQEKKLHDALTDQDPCTTIYVAATEPAPESVQEPNPTTVYASVTLPES(SEQ ID NO:11)。
(2)免疫原表达，纯化与鉴定
用pei 2:1转染ptt5-CD150-hFc到293f细胞中，120rpm，37℃，5％ CO2培养细胞4天，4000g，离心20min取细胞上清。用Protein A蛋白纯化柱纯化含有hFc片段的CD150蛋白，用0.1M的乙酸洗脱蛋白用p H＝8.0的Tris-HCl去中和酸性，得到含有hFc片段的CD150蛋白。之后用TEV酶4度过夜酶切去除hFc片段，用10KD超滤管浓缩蛋白，加入PBS去清洗蛋白，将纯化的CD150蛋白进行SDS-PAGE检测纯度，最后用superdex 75的分子筛过蛋白确定蛋白的大小和状态。最终制备得到CD150蛋白。结果如图1所示，经验证，制备获得大量单体CD150m蛋白。
(3)细胞融合以及杂交瘤细胞制备
a.脾细胞制备：将步骤(2)纯化获得的CD150蛋白与等体积的完全弗氏佐剂混合，蛋白的浓度为0.2mg/ml。初次免疫每只大鼠注射40-60ug的蛋白，每两周免疫一次，免疫4次后开始做ELISA检测大鼠的血清效价，测得较高的血清效价安乐死大鼠取脾脏细胞用200目滤网过滤脾脏细胞。
b.饲养层细胞制备：用大鼠腹腔的巨噬细胞作为饲养层细胞。选取8周龄左右的大鼠安乐死，用移液器吸取5ml的DMEM培养基注入小鼠的腹腔反复抽吸，最后吸取液体进行离心重悬，300g，4度，10min。用DMEM培养基调整细胞浓度为2×105细胞/ml，加入到96孔板中每孔100ul。进行正常细胞培养
c.细胞融合以及杂交瘤细胞制备(CD150的单抗由保藏号为CGMCC No.45539的大鼠杂交瘤细胞产生)：取上述制备的脾脏细胞和骨髓瘤细胞在无血清DMEM培养基中混匀，随后离心去培养基，加入提前预热的PEG溶液，60s后加入无血清DMEM培养基，离心后收集细胞，加入HAT选择培养基重悬。
将融合细胞悬液加入到预先准备的饲养层细胞中，融合细胞在HAT培养基培养一周后，更换HT培养基培养细胞，随后用ELISA筛选可以产生抗体的杂交瘤细胞，换用DMEM培养基继续培养细胞。
随后采用有限稀释方法进行亚克隆化ELISA多次筛选后得到杂交瘤细胞株，连续培养2周或者冻存6月后仍然能稳定大量分泌抗小鼠CD150的抗体。
(4)单克隆抗体制备
将杂交瘤细胞在DMEM培养基中培养2天后传代培养收集培养上清，上清中含有高浓度的单克隆抗体，用0.22um的滤膜过滤后用Protein G亲和层析的方法纯化抗体，抗体的纯度用SDS-PAGE鉴定。还可以将所述杂交瘤细胞注射到用石蜡预先免疫的裸鼠腹腔，通过抽取裸鼠腹水进行提取获得单克隆抗体，具体来说，石蜡免疫8-10周龄的雌性裸鼠，每只裸鼠腹腔注射500μl无菌的液体石蜡；一周之后腹腔注射杂交瘤细胞，每只裸鼠注射1-2×106细胞/ml细胞，7-10天左右产生腹水，收集裸鼠腹水，离心收上清即腹水抗体。经Protein A亲和层析柱纯化单克隆抗体Fc融合蛋白。如图2所示，最终制备得到高纯度单克隆抗体蛋白。
(5)阻断抗体筛选
采用流式细胞术检测抗体的阳性和阻断效果，挑选出结合阳性高和阻断效果好的抗体。取小鼠的脾脏细胞用PBS重悬调整浓度为1×106细胞/ml每管，一部分加入制备的单克隆抗体和标记hFc的抗体检测抗体与CD150的结合情况。另一部分先加入制备的单克隆抗体，随后加入CD150的配体检测单克隆抗体是否可以阻断CD150与其配体的结合。结果如图3所示，可以看出，抗体含量的增加可以显著阻断CD150与其配体的结合。
(6)单克隆抗体鉴定
间接ELISA测定单克隆抗体效价：ELISA检测单克隆抗体效价的方法如下：用PBS缓冲液稀释CD150蛋白至0.25μg/ml，100μl/孔，包被96孔ELISA板，4℃过夜，用PBS清洗3遍，1％BSA封闭，37℃孵育2小时。PBS清洗3遍，加入纯化的单克隆抗体，设置8-12个梯度6000ng/ul起始浓度每次稀释4倍，采用PD-L1蛋白作为对照组，设PBS为调零孔，100μl/孔，37℃孵育1小时。PBS清洗3遍，每孔加入100μl辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗大鼠IgG(1∶8000稀释)，37℃孵育1小时。清洗后加入TMB底物液(购自碧云天)，100μl/孔，避光显色10-15分钟，加入终止液(2M H2SO4)100μl/孔，酶标仪终止后立即检测OD450。与PBS孔相比，当测试抗体检测值/阴性对照值(比值)大于2.1设为阳性，以最大稀释度的阳性孔为抗体的滴度。结果如图4所示，表明本实施例制备的抗体效价较高(EC50＝1129ng/ml)。
(7)单克隆抗体亲和力验证
采用BLI表征单克隆抗体与CD150的亲和力。为了表征单克隆抗体与CD150的亲和力，首先用生物素标记CD150，得到生物素化的CD150蛋白(biotin-CD150)。而后，将其固化在SA生物传感器上，设置不同的单克隆抗体蛋白浓度梯度，检测biotin-CD150与单克隆抗体Fc融合蛋白的亲和力。结果如图5所示，单克隆抗体蛋白浓度与亲和力成正比。
实施例2：请补充在肿瘤小鼠模型中的验证试验结果
采用C57BL/6J小鼠，MC38(小鼠结肠癌细胞系)皮下荷瘤模型进抗体的治疗效果验证。根据本发明的实施例，具体步骤如下所示：
在第0天取8周龄的雌性小鼠，进行皮下荷瘤，细胞量为2*105/mL，体积为100ul，每只共12只，第8天将小鼠随机分为两组6vs.6，进行抗体治疗，治疗组用单克隆抗体治疗，采用腹腔给药的方式进行治疗用量为10mg/kg，注射体积为100ug，对照组用IgG作为对照量也为10mg/kg，一共治疗5次每次间隔3天，从治疗开始每隔一天测量肿瘤体积，计算公式为0.5*长*宽2。结果如图6所示，与对照组相比，本申请制备的抗CD150抗体可显著抑制肿瘤的增殖。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (12)
1.一种大鼠杂交瘤细胞mCD150-mAb-1，其特征在于，其保藏号为CGMCC No.45539。
2.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，包括选自下列至少之一的CDR序列：
轻链可变区CDR序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3；
重链可变区CDR序列：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6。
3.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包括：
分别如SEQ ID NO:1、2和3的氨基酸序列所示的轻链可变区CDR1、CDR2、CDR3序列；和/或
分别如SEQ ID NO:4、5和6的氨基酸序列所示的重链可变区CDR4、CDR5、CDR6序列；
任选地，所述抗体或抗原结合片段进一步包括重链框架区序列和轻链框架区序列中的至少之一；
其中，所述重链框架区序列和轻链框架区序列的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体中的至少之一；
任选地，所述抗体或抗原结合片段具有如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的重链可变区和如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的轻链可变区。
4.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包括重链恒定区和轻链恒定区中的至少之一；
任选地，所述重链恒定区和轻链恒定区的至少之一的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体中的至少之一；
优选地，所述轻链恒定区和重链恒定区均来自于鼠源。
5.根据权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体包括选自多抗、全长单抗、Fab抗体、Fab’抗体、F(ab’)2抗体、F(ab)2抗体、Fv抗体、单链抗体、单域抗体以及最小识别单位中的至少之一；或者
所述抗原结合片段包括选自F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、F(ab)2片段、Fv片段、scFv片段、scFv-Fc融合蛋白、scFv-Fv融合蛋白和最小识别单位中的至少之一；
优选地，所述抗体为全长单抗；
任选地，所述抗体具有如SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的轻链。
6.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段；
任选地，所述核酸分子为DNA。
7.一种表达载体，其特征在于，携带权利要求6所述的核酸分子；
任选地，所述表达载体为真核表达载体或原核表达载体；
任选地，所述表达载体为质粒表达载体。
8.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞：
携带权利要求6所述的核酸分子；或
表达权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段；
任选地，所述重组细胞是通过将权利要求7所述的表达载体引入至宿主细胞中而获得的；
任选地，所述重组细胞为真核细胞；
优选地，所述重组细胞为哺乳动物细胞。
9.一种药物组合物，其特征在于，包括：
权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段；
权利要求6所述的核酸分子；
权利要求7所述的表达载体；或
权利要求8所述的重组细胞；
任选地，进一步包括药学上可接受的辅料或载体。
10.一种试剂盒，其特征在于，包括：
权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段；
权利要求6所述的核酸分子；
权利要求7所述的表达载体；或者
权利要求8所述的重组细胞。
11.权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体、权利要求8所述的重组细胞或权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗恶性肿瘤；
任选地，所述恶性肿瘤包括肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、食管癌、甲状腺癌。
12.权利要求1～5任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的重组细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD150。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310664495.7A CN116769729B (zh) | 2023-06-05 | 靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310664495.7A CN116769729B (zh) | 2023-06-05 | 靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116769729A true CN116769729A (zh) | 2023-09-19 |
| CN116769729B CN116769729B (zh) | 2024-07-02 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114174495A (zh) * | 2019-07-24 | 2022-03-11 | 英研生物(英国)有限公司 | 肿瘤浸润淋巴细胞疗法及其用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106999576A (zh) * | 2014-09-08 | 2017-08-01 | 国立癌症研究中心 | 癌细胞特异性抗体、抗癌剂、及癌症的检查方法 |
| CN110753703A (zh) * | 2017-05-23 | 2020-02-04 | 德国亥姆霍兹慕尼黑中心健康与环境研究中心（有限公司） | 新的cd73抗体、其制备和用途 |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106999576A (zh) * | 2014-09-08 | 2017-08-01 | 国立癌症研究中心 | 癌细胞特异性抗体、抗癌剂、及癌症的检查方法 |
| CN110753703A (zh) * | 2017-05-23 | 2020-02-04 | 德国亥姆霍兹慕尼黑中心健康与环境研究中心（有限公司） | 新的cd73抗体、其制备和用途 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114174495A (zh) * | 2019-07-24 | 2022-03-11 | 英研生物(英国)有限公司 | 肿瘤浸润淋巴细胞疗法及其用途 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN116178547A (zh) | Cd3抗原结合片段及其应用 | |
| CN110835374A (zh) | 抗ccr8×ctla-4双特异性抗体及其应用 | |
| JP2022514693A (ja) | Ｍｕｃ１８に特異的な抗体 | |
| EP4269442A1 (en) | Mesothelin binding molecule and application thereof | |
| WO2020038404A1 (zh) | 抗人claudin 18.2单克隆抗体及其应用 | |
| JP2022514786A (ja) | Ｍｕｃ１８に特異的な抗体 | |
| CN116731169B (zh) | 一种分拣蛋白1特异性的纳米抗体及其应用 | |
| CN114685666A (zh) | 抗间皮素纳米抗体及其应用 | |
| WO2023125842A1 (zh) | 一种新型upar单域抗体的开发 | |
| CN116769729B (zh) | 靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 | |
| CN114685667B (zh) | 间皮素结合分子及其应用 | |
| CN116769729A (zh) | 靶向cd150的抗体或抗原结合片段及其应用 | |
| CN116284405B (zh) | 靶向cd150蛋白的纳米抗体及其应用 | |
| JP2020533278A (ja) | Ｋ−Ｒａｓ遺伝子の状態に関連したＣＫ８陽性がんの治療 | |
| CN117343185B (zh) | 一种抗犬pd-1抗体及其用途 | |
| CN113164601B (zh) | 一种分离的抗原结合蛋白及其用途 | |
| EP4269437A1 (en) | Pd-1 binding molecule and application thereof | |
| WO2024140742A1 (zh) | 抗cd94的抗体及其应用 | |
| CN113166264B (zh) | 一种分离的抗原结合蛋白及其用途 | |
| WO2023186113A1 (zh) | 靶向pd-l1和cd40的抗原结合蛋白及其制备和应用 | |
| CN117304320A (zh) | 靶向小鼠clec12b蛋白的纳米抗体及其应用 | |
| CN116813771A (zh) | Cd112抗体及用途 | |
| WO2023187460A1 (en) | Human antibody or antigen binding fragment thereof specific against pd-l1 to enhance t-cell function | |
| CN115819582A (zh) | Pvrig的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| CN118027195A (zh) | 亲和力成熟的mica抗体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |