CN116763902A - 抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 - Google Patents
抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116763902A CN116763902A CN202311037083.7A CN202311037083A CN116763902A CN 116763902 A CN116763902 A CN 116763902A CN 202311037083 A CN202311037083 A CN 202311037083A CN 116763902 A CN116763902 A CN 116763902A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- influenza
- virus
- polypeptide
- lipopeptide
- ykyy017
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 48
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 95
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 33
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 3
- WTBAHSZERDXKKZ-UHFFFAOYSA-N octadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O WTBAHSZERDXKKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 86
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 78
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 claims description 17
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 15
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 10
- 241001473385 H5N1 subtype Species 0.000 claims description 7
- 241000342557 H7N9 subtype Species 0.000 claims description 7
- 241000197306 H1N1 subtype Species 0.000 claims description 6
- 241000252870 H3N2 subtype Species 0.000 claims description 6
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 claims description 6
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 5
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 claims description 5
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 claims description 5
- XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N peramivir Chemical compound CCC(CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)C[C@H]1NC(N)=N XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001084 peramivir Drugs 0.000 claims description 5
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 claims description 4
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 125000000349 (Z)-3-carboxyprop-2-enoyl group Chemical group O=C([*])/C([H])=C([H])\C(O[H])=O 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000000865 liniment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 claims description 2
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 claims description 2
- -1 oral solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 229940040145 liniment Drugs 0.000 claims 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 claims 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 claims 1
- 229940100692 oral suspension Drugs 0.000 claims 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 claims 1
- 229940098458 powder spray Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 abstract description 16
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 142
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 138
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 136
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 49
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 16
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 16
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 9
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 7
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 241000197304 H2N2 subtype Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 3
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 3
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 3
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940042406 direct acting antivirals neuraminidase inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000002911 sialidase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 102000053723 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 2
- 229940122277 RNA polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OVIISSOUXFJLSM-KPNWGBFJSA-N butanedioic acid;(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O.C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 OVIISSOUXFJLSM-KPNWGBFJSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000001309 inhibitory effect on influenza Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000711467 Human coronavirus 229E Species 0.000 description 1
- 241000482741 Human coronavirus NL63 Species 0.000 description 1
- 241001428935 Human coronavirus OC43 Species 0.000 description 1
- 241000713297 Influenza C virus Species 0.000 description 1
- 241000322338 Loeseliastrum Species 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LTYMSROWYAPPGB-UHFFFAOYSA-N diphenyl sulfide Chemical compound C=1C=CC=CC=1SC1=CC=CC=C1 LTYMSROWYAPPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108010061514 sialic acid receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本公开涉及抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途，其中涉及抗冠状病毒脂肽或包含所述脂肽的组合物在制备治疗和/或预防病毒引起的疾病的药物中的用途，所述病毒引起的疾病选自：（1）流感病毒引起的流行性感冒；和（2）流感病毒引起的流行性感冒和冠状病毒引起的疾病；其中所述脂肽为式(I)所示的化合物或其药用盐或其衍生物：其中：X1为乙酰基（Ac‑）；X2为EAAAK；X3为赖氨酸；X4为修饰于X3的亲脂性化合物基团；所述亲脂性化合物为胆固醇琥珀酸单酯（chol）或硬脂酰氯；X5为氨基（‑NH2）。所述抗冠状病毒脂肽对流行性感冒，特别是甲型和乙型流行性感冒的治疗和预防效果显著。
Description
技术领域
本公开属于医药领域，具体涉及一种抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途。
背景技术
流行性感冒（Influenza），是由流感病毒（Influenza viruses, IVs）感染引起的，可引起急性呼吸道感染，主要是口、咽、支气管甚至肺部的不适，特征是突发高热、咽痛、咳嗽、流涕和肌肉关节痛等，严重的将导致死亡。流行性感冒具有以下特点：（1）高度传染性、传播迅速。（2）流行面广，控制难度大。（3）病率高。（4）流感病毒抗原性易变。（5）具有明显的季节性流动特点。
流感病毒属于正黏病毒科（Orthomyxoviridae），是一种高突变率、高致病性的RNA病毒。流感病毒根据核蛋白和基质蛋白抗原决定簇的不同，可划分为甲（A）、乙（B）、丙（C）和丁（D）四个亚型。甲、乙、丙型三种流感病毒都可感染人。其中，甲型流感病毒主要感染人、猪、马和禽类，乙型主要感染人和猪，丙型只感染人，丁型主要感染猪和牛。甲型流感病毒变异性强，是引起人类中流感大流行的原因。甲型流感病毒表面主要有两种糖蛋白，分别是血凝素（Hemagglutinin, HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase, NA）。根据它们抗原性的不同，血凝素HA可被划分为18个亚型H1～H18，神经氨酸酶NA可被划分为11个亚型N1～N11。
目前已批准的用于流感病毒感染后治疗的药物有离子通道阻滞剂、神经氨酸酶抑制剂和RNA酶抑制剂等。离子通道阻滞剂烷胺类药物，如上市药物金刚烷胺（amantadine）和金刚乙胺（rimantadine），此类药物通过阻断M2离子通道来阻止病毒脱衣壳，以影响病毒的复制过程。离子通道类药物有很多缺陷，如对甲型流感病毒外的病毒无效，出现病毒耐药株及药物本身对中枢神经系统有副作用等，目前已很少应用于流感病毒的治疗。神经氨酸酶抑制剂，如扎那米韦（zanamivir）、奥司他韦（oseltamivir）、拉那米韦（laninamivir）和帕拉米韦（peramivir），则是通过阻止流感病毒与细胞唾液酸受体结合后的切割，使病毒不能从被感染的宿主细胞中释放，因而可特异性抑制流感病毒。神经氨酸酶抑制剂在使用过程中，已出现多种流感病毒的耐药株，例如奥司他韦在使用两天后就有耐药性产生，帕拉米韦的治疗效果因耐药等问题受限制等。RNA聚合酶抑制剂玛巴洛沙韦（Blaloxavir）是最新被批准上市的药物，它作用于流感病毒复制周期的早期阶段，通过抑制cap-依赖型核酸内切酶（cap-dependent endonuclease），来抑制流感病毒的复制。此类药物对H5N1和H7N9病毒有一定的抑制作用，但是否能对未来的新变异的流感病毒起到抑制作用，尚未证实。
基于目前防治流感药物的不足以及流感病毒的高突变特征和高致病性特点，决定了开发潜在有效的广谱性抗流感药物的重要性，以防治目前可能存在的以及未来可能出现的对目前已上市药物不敏感的流感病毒。目前，如何获得高效且广谱性抗流感病毒的新型药物仍然是研究领域的关键科学问题之一。
多肽药物是以氨基酸为基本组成单位的分子，分子量通常介于小分子药物和生物制品药物之间。与小分子药物相比，具有更好的靶点选择性和特异性；与生物制品药物（如抗体药物）相比，具有更低免疫原性和生产成本。因此，多肽药物已成为药物潜在治疗多种疾病的重要考量点。查询文献资料等信息，可知悉多肽类药物已用于病毒类疾病的治疗探索。
表1为调研的目前公开的治疗流感的多肽序列和来源。大多来源于流感病毒本身或者蛋白衍生物。目前没有查询到来源于除流感病毒之外的其他病毒的多肽，用于治疗流感。
表1 已知治疗流感的多肽
表1（续）
表1（续）
参考文献：
[1] doi: 10.1016/j.bbamem.2021.183762,
Patrícia M. Silva, Marcelo T. Augusto, The pH-sensitive action ofcholesterol-conjugated peptide inhibitors of influenza virus, BBA -Biomembranes 2021, 1863, 183762
[2] doi: 10.1099/vir.0.038679-0,
Nicol, M.Q.; Ligertwood, Y.; Bacon, M.N.; Dutia, B.M.; Nash, A.A. Anovel family of peptides with potent activity against influenza A viruses. J.Gen. Virol. 2012, 93, 980–986.
[3] doi: 10.1021/jm1002183,
Matsubara, T.; Onishi, A.; Saito, T.; Shimada, A.; Inoue, H.; Taki,T.; Nagata, K.; Okahata, Y.; Sato, T. Sialic acid-mimic peptides ashemagglutinin inhibitors for anti-influenza therapy. J. Med. Chem. 2010, 53,4441–4449.
[4] doi: 10.1186/1472-6750-13-51,
Huttl, C.; Hettrich, C.; Miller, R.; Paulke, B.R.; Henklein, P.;Rawel, H.; Bier, F.F. Self-assembled peptide amphiphiles function asmultivalent binder with increased hemagglutinin affinity. BMC Biotechnol.2013, 13, 1–10.
[5] doi: 10.1016/j.antiviral.2014.01.015,
Hoffmann, J.; Schneider, C.; Heinbockel, L.; Brandenburg, K.; Reimer,R.; Gabriel, G. A new class of synthetic anti-lipopolysaccharide peptidesinhibits influenza A virus replication by blocking cellular attachment.Antivir. Res. 2014, 104, 23–33.
[6] doi: 10.1128/AAC.00534-10,
Thomas Gutsmann, Iosu Razquin-Olazara´n, New Antiseptic Peptides ToProtect against Endotoxin-Mediated Shock, ANTIMICROBIAL AGENTS ANDCHEMOTHERAPY,2010,54, 3817-3824.
[7] doi: 10.4049/jimmunol.0804049,
Doss, M.; White, M.R.; Tecle, T.; Gantz, D.; Crouch, E.C.; Jung, G.;Ruchala, P.; Waring, A.J.; Lehrer, R.I.; Hartshorn, K.L. Interactions of α-,β-, and θ-defensins with influenza A virus and surfactant protein D. J.Immunol. 2009, 182, 7878–7887.
[8] doi: 10.1179/2047773212Y.0000000004,
Ammendolia, M.G.; Agamennone, M.; Pietrantoni, A.; Lannutti, F.;Siciliano, R.A.; de Giulio, B.; Amici, C.; Superti, F. Bovine lactoferrin-derived peptides as novel broad-spectrum inhibitors of influenza virus.Pathog. Glob. Health 2012, 106, 12–19.
[9] doi: 10.1016/j.peptides.2011.05.015,
Li, Q.L.; Zhao, Z.H.; Zhou, D.H.; Chen, Y.Q.; Hong, W.; Cao, L.Y.;Yang, J.Y.; Zhang, Y.; Shi, W.; Cao, Z.J.; et al. Virucidal activity of ascorpion venom peptide variant mucroporin-M1 against measles, SARS-CoV andinfluenza H5N1 viruses. Peptides 2011, 32, 1518–1525.
[10] doi: 10.1099/vir.0.045013-0,
Tripathi, S.; Tecle, T.; Verma, A.; Crouch, E.; White, M.; Hartshorn,K.L. The human cathelicidin LL-37 inhibits influenza A viruses through amechanism distinct from that of surfactant protein D or defensins. J. Gen.Virol. 2013, 94, 40–49.
[11] doi: 10.1016/j.ymeth.2011.08.007,
Chase, G.; Wunderlich, K.; Reuther, P.; Schwemmle, M. Identificationof influenza virus inhibitors which disrupt of viral polymerase protein-protein interactions. Methods 2011, 55, 188–191.
[12] doi: 10.1371/journal.pone.0007517,
Wunderlich, K.; Mayer, D.; Ranadheera, C.; Holler, A.S.; Manz, B.;Martin, A.; Chase, G.; Tegge, W.; Frank, R.; Kessler, U.; et al.Identification of a PA-binding peptide with inhibitory activity againstinfluenza A and B virus replication. PLoS ONE 2009, 4, 1–10.
[13] doi: 10.1128/AAC.00506-08,
Conti, G.; Magliani, W.; Conti, S.; Nencioni, L.; Sgarbanti, R.;Palamara, A.T.; Polonelli, L. Therapeutic activity of an anti-idiotypicantibody-derived killer peptide against influenza A virus experimentalinfection. Antimicrob. Agents Chemother. 2008, 52, 4331–4337.
[14] doi: 10.1086/521027,
Salvatore, M.; Garcia-Sastre, A.; Ruchala, P.; Lehrer, R.I.; Chang,T.; Klotman, M.E. α-Defensin inhibits influenza virus replication by cell-mediated mechanism(s). J. Infect. Dis. 2007, 196, 835–843.
[15]Judd, A.K.; Sanchez, A.; Bucher, D.J.; Huffman, J.H.; Bailey, K.;Sidwell, R.W. In vivo anti-influenza virus activity of a zinc finger peptide.Antimicrob. Agents Chemother. 1997, 41, 687–692.
[16] Nasser, E.H.; Judd, A.K.; Sanchez, A.; Anastasiou, D.; Bucher,D.J. Antiviral activity of influenza virus M1 zinc finger peptides. J. Virol.1996, 70, 8639–8644.
[17] doi: 10.1186/1743-422X-6-74,
Rajik, M.; Jahanshiri, F.; Omar, A.R.; Ideris, A.; Hassan, S.S.;Yusoff, K. Identification and characterisation of a novel anti-viral peptideagainst avian influenza virus H9N2. Virol. J. 2009, 6, 1–10.
综上所述，多肽来源和种类多种多样，氨基酸序列来源不同，机制也不相同。因此，如何获得高效且广谱性抗流感病毒的新型多肽药物仍然是研究领域的关键科学问题之一。本领域有开发治疗和预防病毒感染药物的需求。
发明内容
本公开的目的是提供拮抗流感病毒感染的多肽，为流感病毒的防治提供新的可选药物。
YKYY017（CN114736272B中IPB29）是一种广谱抗冠状病毒脂肽YKYY017。既往研究数据表明YKYY017能够抑制多种不同类型的冠状病毒，如SARS-CoV-2及其各种突变株、SARS-CoV、MERS-CoV、HCoV-229E，HCoV-OC43和HCoV-NL63，可用于治疗由冠状病毒感染引起的，如新型冠状病毒感染等疾病。
本公开首次发现，YKYY017对流感病毒，特别是甲型和乙型流感病毒，均具有显著的抑制作用，可用来治疗和预防流行性感冒。同时还发现，并不是所有与YKYY017类似的多肽序列对流行性感冒具有同样的治疗作用。例如，本公开中多肽1和多肽2，与YKYY017相比，仅是缺少刚性接头（EAAAK）（多肽1），或刚性接头（EAAAK）和修饰脂质（Chol）都缺失（多肽2），但是二者对流感病毒均无抑制作用。多肽3与YKYY017相同，均衍生自新型冠状病毒的S蛋白（GenBank登录号：YP_009724390），具有刚性接头（EAAAK）和修饰脂质-胆固醇琥珀酸单酯（Chol），其与YKYY017不同之处在于在多肽N端多了3个S蛋白的氨基酸INA，在C端缺失了3个S蛋白的氨基酸YIK，其对流感病毒也无抑制作用。YKYY017对流行性感冒，特别是甲型和乙型流行性感冒的治疗和预防效果显著优于多肽1、多肽2和多肽3。
本公开提供了抗冠状病毒脂肽或包含前述脂肽的组合物在制备治疗和/或预防病毒引起的疾病的药物中的用途，所述病毒引起的疾病选自：
（1）流感病毒引起的流行性感冒；和
（2）流感病毒引起的流行性感冒和冠状病毒引起的疾病。
在一些实施方案中，多肽包括20~60个氨基酸。
在一些实施方案中，多肽包含式(I)所示的化合物（SEQ ID NO. 1）或其药用盐或其衍生物：
其中：
X1为乙酰基（Ac-）；
X2为EAAAK；
X3为赖氨酸；
X4为修饰于X3的亲脂性化合物基团；所述亲脂性化合物为胆固醇琥珀酸单酯或硬脂酰氯；
X5为氨基（-NH2）。
在一些实施方案中，脂肽与式（I）所示的化合物至少有80%的同源性。
在一些实施方案中，脂肽为YKYY017，其序列为：
Ac-SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKEAAAKK(Chol)-NH2。
在一些实施方案中，流感病毒为甲型流感病毒和/或乙型流感病毒。
在一些实施方案中，甲型流感病毒包括但不限于A/H1N1（A/Puerto Rico/8/1934，A/Weiss/43，A/WSN/1933，A/WS/33，A/Mal/302/54，A/California/07/2009）、A/H2N2（）、A/H3N2（A/Hongkong/1/1968，A/California/02/2014）、A/H5N1（A/Thailand/Kan353/2004）、A/H7N9（A/Shanghai/4664T/2013）等亚型下的多种毒株，乙型流感病毒包括但不限于B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940等毒株。
在一些实施方案中，将约4~40 mg/kg剂量的脂肽或包含4~40 mg/kg剂量的前述脂肽的组合物施用给哺乳动物。
在一些优选的实施方案中，将约8~20 mg/kg剂量的脂肽或包含约8~20 mg/kg剂量的前述多肽的组合物施用给哺乳动物。
在一些实施方案中，给药方式为口服给药、肺部给药、鼻腔给药、注射给药或外用给药。
在一些实施方案中，口服给药制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服溶液剂、混悬剂和乳剂。
在一些实施方案中，肺部给药制剂包括雾化吸入剂、气雾剂和粉雾剂。
在一些实施方案中，鼻腔给药制剂包括鼻喷雾剂和滴鼻剂。
在一些实施方案中，注射给药制剂包括注射液和冻干粉针。
在一些实施方案中，外用给药制剂包括搽剂、洗剂和膏剂。
本公开还提供了前述脂肽或包含前述脂肽的组合物和另一种或多种用于治疗和/或预防流感病毒引起的流行性感冒的药物联合给予。
在一些实施方案中，另一种或多种用于治疗和/或预防流感病毒引起的流行性感冒的药物选自：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦、拉那米韦、玛巴洛沙韦、金刚烷胺和金刚乙胺。
本公开还提供了治疗或/和预防流感病毒感染动物的方法，包括给受体动物施用前述脂肽或包含前述脂肽的组合物以抑制流感病毒感染动物。
本公开还提供了前述脂肽或包含前述脂肽的组合物预防和治疗冠状病毒所致疾病的方法。
本公开还提供了前述脂肽或包含前述脂肽的组合物和另一种或几种用于治疗和/或预防流感的药物组合预防和治疗冠状病毒所致疾病的方法。
在一些实施方案中，前述脂肽或包含前述脂肽的组合物和另一种或几种用于治疗和/或预防流感的药物组合给药。
本公开还提供了治疗或/和预防流感病毒感染动物的方法，包括给受体动物施用前述脂肽或包含前述脂肽的组合物以抑制流感病毒和冠状病毒感染动物。
那些另一种或几种用于治疗和/或预防流感的药物可以与前述脂肽或包含前述脂肽的组合物分开给药，作为多次给药方案的一部分。或者，那些药物可以是单一剂型的一部分，在单一组合物中与前述脂肽一起混合。如果作为多次给药方案的一部分给药，那么两种活性剂可以同时、依次或彼此间隔一定时间段（通常彼此间隔在五小时以内）提供。
附图说明
图1为YKYY017对甲型流感假病毒的作用结果。
图2为YKYY017对乙型流感假病毒的作用结果。
图3为YKYY017对甲型流感真病毒的作用结果。
图4为YKYY017对乙型流感真病毒的作用结果。
具体实施方式
为使本公开实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本公开实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本公开的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本公开的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本公开保护的范围。
实施例中所用多肽序列信息见表2。
表2 多肽序列信息
YKYY017、多肽1和多肽2序列非常相近，仅有非常小的区别。与YKYY017相比，多肽1缺少刚性接头（EAAAK），多肽序列直接与修饰脂质-胆固醇琥珀酸单酯（Chol）相连接；多肽2缺少刚性接头（EAAAK）和修饰脂质-胆固醇琥珀酸单酯（Chol）。
与YKYY017相比，多肽3同样采用刚性接头（EAAAK，SEQ ID NO. 6）和修饰脂质-胆固醇琥珀酸单酯（Chol），但是多肽序列不同，二者序列均来源均为新型冠状病毒。
上述序列均由悦康药业集团股份有限公司合成提供。
（A）YKYY017的合成方法（参见专利CN114736272B），包括如下步骤：
一、准备所需的原料：
包括各种Fmoc氨基酸、N,N'-二异丙基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、N,N-二甲基甲酰胺、哌啶（PIPE）、茚三酮、乙酸酐等；
二、合成肽树脂：
1、合成主链氨基酸：
使用Rink Amide MBHA树脂作为载体树脂，通过去Fmoc保护和偶联反应，依次与多肽氨基酸序列相应的保护氨基酸偶联；
YKYY017，其氨基酸部分的序列为：
SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKEAAAKK
2、接入侧链-多肽的胆固醇修饰：
用尽量小体积的2%（体积比）水合肼和DMF溶液，处理树脂去除C端赖氨酸侧链的Dde保护基（10分钟，两次），过滤洗涤，得到去Dde的树脂备用。
取0.3 mmol胆固醇琥珀酸单酯和0.3 mmol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.3 mmolDIC，慢慢加入至含胆固醇琥珀酸单酯和HOBt的溶液中，于室温环境中振荡反应5分钟。将制备的含胆固醇琥珀酸单酯、HOBt和DIC溶液加入到获得的去Dde的树脂中，偶联反应60分钟，过滤、洗涤和干燥，得到肽树脂；
三、粗品制备：
将上述肽树脂加入配制的裂解试剂，以将目标多肽从树脂上裂解下来并除去侧链保护基。裂解试剂的组成如下：三氟乙酸：1,2-乙二硫醇：苯甲硫醚：苯酚：H2O：三异丙基硅烷=68.5:10:10:5:3.5:1（体积比）。然后通过洗涤、沉淀、离心、抽干等过程获得脂肽粗品；
四、纯品制备：
1、获得的脂肽粗品通过乙腈处理，之后离心去除不溶物；
2、通过反相高效液相色谱法对脂肽粗品溶液进行纯化，得到的纯化溶液经冷冻干燥，获得蓬松状态的三氟乙酸盐多肽纯品；
3、将获得的三氟乙酸盐多肽纯品用水和乙腈重新溶解，并加入大量的阴离子交换树脂，进行搅拌处理。之后通过过滤、并采用水和乙腈混合溶剂冲洗离子交换树脂后，合并滤液冻干，即可得到蓬松状态的纯品目标多肽。
（B）多肽1的合成方法，包括如下步骤：
在上述YKYY017的合成方法基础上，将步骤“二、合成肽树脂：
1、合成主链氨基酸”部分中，将“YKYY017，其氨基酸部分的序列为：
SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKEAAAKK”
替换为：
“多肽1，其氨基酸部分的序列为：
SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK”，
其他合成步骤与YKYY017的合成方法保持一致。
（C）多肽2的合成方法，包括如下步骤：
在上述YKYY017的合成方法基础上，省略步骤“二、合成肽树脂：2、接入侧链-多肽的胆固醇修饰：”部分，其他合成步骤与YKYY017的合成方法保持一致。
（D）多肽3的合成方法，包括如下步骤：
在上述YKYY017的合成方法基础上，将步骤“二、合成肽树脂：
1、合成主链氨基酸”部分中，将“YKYY017，其氨基酸部分的序列为：
SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKEAAAKK”
替换为
“多肽3，其氨基酸部分的序列为：
INASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQEAAAKK”
其他合成步骤与YKYY017的合成方法保持一致。
实施例中涉及的阳性药物为玛巴洛沙韦，为RNA聚合酶抑制剂。它作用于流感病毒复制周期的早期阶段，通过抑制cap-依赖型核酸内切酶（cap-dependent endonuclease），来抑制流感病毒的复制。一般用于甲型流感病毒、乙型流感病毒等病毒引起的相关疾病。
实施例中所用试验材料来源：
YKYY017、多肽1、多肽2、多肽3以及假病毒合成制备由悦康药业集团股份有限公司完成；
胎牛血清购自Gibco，货号10270-106；
DMEM培养基购自大连美仑生物，货号MB4372；
CCK8检测试剂盒够自北京索莱宝科技有限公司，货号CA1210；
玛巴洛沙韦购自MedChemExpress公司，货号HY-109025；
实验用小鼠够自北京维通利华实验动物技术有限公司；
实验用真病毒A/California/07/2009、A/Puerto Rico/8/1934、A/WSN/1933、A/California/02/2014、B/Lee/1940、B/Florida/78/2015获自ATCC（American Type CultureCollection），A/Thailand/Kan353/2004、、A/Hongkong/1/1968、B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000获自上海药明康德生物技术有限公司；A/Shanghai/4664T/2013获自复旦大学生物安全三级实验室。实验用流感病毒质粒获自美国纽约血液中心。
实施例1：流感假病毒的制备
1、制备的假病毒包括：
1）甲型流感假病毒：
H1N1亚型-A/Puerto Rico/8/1934、A/WSN/1933、A/California/07/2009
H2N2亚型-
H3N2亚型-A/Hongkong/1/1968、A/California/02/2014
H5N1亚型-A/Thailand/Kan353/2004
H7N9亚型-A/Shanghai/4664T/2013
2）乙型流感假病毒：
B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015、B/Lee/1940
2、实验材料：
1）实验细胞：
HEK293T（人胚肾细胞，购自丰晖生物科技有限公司，商品货号：CL0132）
2）培养基：
胎牛血清；
DMEM培养基
3）质粒：
pNL4-3.Luc.R-E-（包含荧光素酶报告基因的 HIV骨架蛋白质粒，购自NTCC典型培养物保藏中心，货号pNL4-3-Luc.R-E-(HIV-Luc)）；
HA（包含A/California/07/2009 (H1N1)，GenBank accession No. ACP44189）；
NA（包含A/California/07/2009 (H1N1)，GenBank accession No. ACQ63272）；
4）试剂：
Lipofectamine 2000（购自Thermo Fisher公司，货号：）
3、实验步骤：
以甲型流感病毒A/California/07/2009 (H1N1)为例，载体细胞为HEK293T细胞。
1）将液氮冻存的HEK293T细胞于37°C水浴中快速溶解，之后用含10%胎牛血清的DMEM培养基稀释细胞溶液，用离心机1000 rpm离心5分钟后，弃掉上清，得到HEK293T细胞。
2）用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，之后将细胞悬液转移至提前预热的T75细胞培养瓶中，置于37°C、5% CO2培养箱中培养。
3）待细胞长到60% ~70%的汇合率进行转染操作。将5 μg 包含荧光素酶报告基因的 HIV骨架蛋白质粒pNL4-3.Luc.R-E-、2.5 μg包含 A/California/07/2009 (H1N1)的HA的质粒和2.5 μg包含 A/California/07/2009 (H1N1)的NA的质粒通过转染制剂Lipofectamine 2000导入细胞中。
4）6小时后，倾去培养瓶中转染试剂，加入新鲜的含10%胎牛血清的DMEM培养基，继续培养48小时。
5）收集细胞培养基上清，并用离心机3000 rpm离心20分钟后，收集含有A/California/07/2009假病毒的上清液。
6）通过无菌滤膜过滤后，于-80℃冰箱分装保存。
其它流感病毒假病毒的制备过程同上。涉及到的流感病毒质粒包括HA质粒和NA质粒。
HA质粒种类包括：
A/Puerto Rico/8/1934（GenBank accession No. ABD77675）
A/WSN/1933（GenBank accession No. ACF54598）
（GenBank accession No. AAY28987）
A/Hongkong/1/1968（GenBank accession No. CAP58158）
A/California/02/2014（GenBank accession No. AIM39605）
A/Thailand/Kan353/2004（GenBank accession No. ABP51985）
A/Shanghai/4664T/2013（GenBank accession No. AGI60292）
B/Yamagata/16/1988（GenBank accession No. ABL77255）
B/Victoria/504/2000（GenBank accession No. ABQ10176）
B/Florida/78/2015（GenBank accession No. ANW76990）
B/Lee/1940 （GenBank accession No. AAA43716）
NA质粒种类包括：
A/Puerto Rico/8/1934（GenBank accession No. ABD77678）
A/WSN/1933（GenBank accession No. ACF54601）
（GenBank accession No. AAY28988）
A/Hongkong/1/1968（GenBank accession No. CY112251）
A/California/02/2014（GenBank accession No. AIE09736）
A/Thailand/Kan353/2004（GenBank accession No. ABP52012）
A/Shanghai/4664T/2013（GenBank accession No. AGI60295）
B/Yamagata/16/1988（GenBank accession No. ABL77259）
B/Victoria/504/2000（GenBank accession No. AAT69482）
B/Florida/78/2015（GenBank accession No. ANW76993）
B/Lee/1940（GenBank accession No. AAA43749）。
获得的假病毒具有HA蛋白，可以实现与受体细胞受体结合，从而诱导内吞和膜融合的过程，导致细胞感染。但感染后，由于病毒原本的包膜基因已经被HIV骨架蛋白质粒所替代，导致无法产生包膜完整的流感病毒颗粒，而失去再次感染能力。进而使假病毒工具成为病毒初步研究的重要手段和工作。本实验正式基于假病毒具有的优势，进行了前期研究，并获得了较好的结果。
4、实验结果：
获得了H1N1亚型假病毒（A/Puerto Rico/8/1934、A/WSN/1933、A/California/07/2009），H2N2亚型假病毒（），H3N2亚型假病毒（A/Hongkong/1/1968、A/California/02/2014），H5N1亚型假病毒（A/Thailand/Kan353/2004），H7N9亚型假病毒（A/Shanghai/4664T/2013）和乙型流感假病毒（B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015）。
实施例2：YKYY017在马-达二氏犬肾（MDCK）细胞模型中对甲型流感假病毒的药效实验
1、实验材料：
1）实验细胞：
MDCK细胞（购自丰晖生物科技有限公司，货号CL0213），用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。
2）甲型流感假病毒毒株：
H1N1亚型- A/Puerto Rico/8/1934、A/WSN/1933、A/California/07/2009
H2N2亚型-
H3N2亚型-A/Hongkong/1/1968、A/California/02/2014
H5N1亚型-A/Thailand/Kan353/2004
H7N9亚型-A/Shanghai/4664T/2013
3）供试药物：
YKYY017、多肽1、多肽2或多肽3
4）阳性药物：
玛巴洛沙韦
5）检测试剂盒：
CCK8检测试剂盒
2、实验分组：
1）阴性对照组：不加病毒孵育的细胞对照组
2）病毒对照组：等体积的培养基与假病毒孵育
3）阳性药物组：玛巴洛沙韦梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
4）供试药物组：
I．YKYY017组：YKYY017梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
II．多肽1组：多肽1梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
III．多肽2组：多肽2梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
IV. 多肽3组：多肽2梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
3、药物剂量：
各给药组药物浓度梯度设置见表3。
表3 实验用药物浓度梯度
4、实验步骤：
1）将MDCK细胞接种到96孔板中，接种密度为1.5×104/孔，接种体积为100 μL/孔，置于37°C、5% CO2培养箱中培养过夜。
2）在实验第2天，依照实验设计的药物浓度梯度进行试剂配制。
3）分别将不同浓度的供试药物YKYY017、多肽1、多肽2、多肽3和阳性药物玛巴洛沙韦与假病毒溶液等体积混合，在37°C条件下共同孵育1小时。
4）按照实验分组，将3）的药物和假病毒混合液加入1）的96孔培养板中，每孔200 μL，病毒接种量为0.01 MOI。阳性药物组和供试药物组每个药物8个浓度点，每个浓度3个复孔；阴性对照组的孔加入100 μL培养基；病毒对照组的孔加入100 μL病毒溶液，病毒接种量为0.01 MOI。然后将培养板再次置于培养箱内孵育24小时。
5）弃掉培养基，使用细胞活力检测试剂CCK8检测每孔细胞存活率。每孔加入20 μLCCK8溶液37°C、5% CO2条件下继续培养3小时，然后使用酶标仪检测每孔吸光度值（OD450-OD630）。
6）依据各个样品孔吸光度值，计算受试物对甲型流感假病毒引起细胞死亡的抑制率（即，细胞存活率）。使用GraphPad Prism软件对供试药物和阳性药物对细胞死亡的抑制率进行非线性拟合分析，计算供试药物的半数有效浓度（EC50，能达到50%最大细胞存活率对应的药物的浓度）。
5、实验结果：
表4 甲型流感假病毒实验结果
备注：上述实验结果数值为3次独立细胞实验的均值。
实验结果见图1和表4。
YKYY017组对检测的各甲型流感假病毒的EC50范围在0.93~4.02 μM之间，其中对A/California/07/2009的抑制作用最好。多肽1、多肽2和多肽3组对检测的甲型流感假病毒的EC50范围均大于100 μM，表明多肽1、多肽2和多肽3对各甲型流感假病毒无抑制作用。结果表明YKYY017对甲型流感假病毒的抑制作用，与多肽1、多肽2和多肽3相比显著提升。
实施例3：YKYY017在马-达二氏犬肾（MDCK）细胞模型中对乙型流感假病毒的药效实验
1、实验材料：
1）实验细胞：
MDCK细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。
2）乙型流感假病毒毒株：
B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940
3）供试药物：
YKYY017、多肽1、多肽2和多肽3
4）阳性药物：
玛巴洛沙韦
5）检测试剂盒：
CCK8检测试剂盒
2、实验分组：
1）阴性对照组：不加病毒孵育的细胞对照组
2）病毒对照组：等体积的培养基与假病毒孵育
3）阳性药物组：玛巴洛沙韦梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
4）供试药物组：
I．YKYY017组：梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
II．多肽1组：多肽1梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
III．多肽2组：多肽2梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
IV. 多肽3组：多肽3梯度稀释为8个浓度后与假病毒共同孵育
3、药物剂量：
各给药组药物浓度梯度设置见表5。
表5 实验用药物浓度梯度
4、实验步骤：
具体实验步骤同实施例2，所用假病毒为制备的乙型流感假病毒B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940毒株。
5、实验结果：
表6 乙型流感假病毒实验结果
备注：上述实验结果数值为3次独立细胞实验的均值。
实验结果见图2和表6。YKYY017组对检测的各乙型流感假病毒的EC50范围在0.82-1.54 μM之间，其中对B/Florida/78/2015的抑制作用最好。多肽1、多肽2和多肽3组对检测的甲型流感假病毒的EC50范围均大于100 μM，表明阴性对照多肽1和多肽2对检测的乙型流感假病毒无抑制作用。结果表明YKYY017对乙型流感假病毒具有抑制作用，与多肽1、多肽2和多肽3相比显著提升。
实施例4：YKYY017在马-达二氏犬肾（MDCK）细胞模型中对甲型流感真病毒的药效实验
1、实验材料：
1）实验细胞：
MDCK细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。
2）甲型流感真病毒毒株：
H1N1亚型- A/Puerto Rico/8/1934、A/WSN/1933、A/California/07/2009
H2N2亚型-
H3N2亚型- A/Hongkong/1/1968、A/California/02/2014
H5N1亚型- A/Thailand/Kan353/2004
H7N9亚型- A/Shanghai/4664T/2013
3）供试药物：
YKYY017、多肽1、多肽2和多肽3
4）阳性药物：
玛巴洛沙韦
5）检测试剂盒：
CCK8检测试剂盒
2、实验分组：
1）阴性对照组：不加病毒孵育的细胞对照组
2）病毒对照组：等体积的培养基与病毒孵育
3）阳性药物组：玛巴洛沙韦梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
4）供试药物组：
I．YKYY017组：YKYY017梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
II．多肽1组：多肽1梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
III．多肽2组：多肽2梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
IV．多肽3组：多肽3梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
3、药物剂量：
各给药组药物浓度梯度设置见表7。
表7 实验用药物浓度梯度
4、实验步骤：
1）将MDCK细胞接种到96孔板中，接种密度为1.5×104/孔，接种体积为100 μL/孔，置于37°C、5% CO2培养箱中培养过夜。
2）在实验第2天，依照实验设计的药物浓度梯度进行试剂配制。
3）分别将不同浓度的供试药物YKYY017、多肽1、多肽2、多肽3和阳性药物玛巴洛沙韦与真病毒溶液等体积混合，在37°C条件下共同孵育1小时。
4）按照实验分组，将3）的药物和假病毒混合液加入1）的96孔培养板中，每孔200 μL，病毒接种量为0.01 MOI。阳性药物组和供试药物组每个药物8个浓度点，每个浓度3个复孔；阴性对照组的孔加入100 μL培养基；病毒对照组的孔加入100 μL病毒溶液，病毒接种量为0.01 MOI。然后将培养板再次置于细胞培养箱内孵育5天。
5）弃掉培养基，使用细胞活力检测试剂CCK8检测每孔细胞存活率。每孔加入20 μLCCK8溶液37°C、5% CO2条件下继续培养3小时，然后使用酶标仪检测每孔吸光度值（OD450-OD630）。
6）依据各个样品孔吸光度值，计算受试物对甲型流感假病毒引起细胞死亡的抑制率。使用GraphPad Prism软件对供试药物和阳性药物对细胞死亡抑制率进行非线性拟合分析，计算供试药物的半数有效浓度（EC50）。
5、实验结果：
表8 甲型流感真病毒实验结果
备注：上述实验结果数值为3次独立细胞实验的均值。
实验结果见图3和表8。
YKYY017组对检测的各甲型流感真病毒的EC50范围在3.21~15.81 μM之间，其中对A/California/07/2009的抑制作用最好。多肽1、多肽2和多肽3组对检测的甲型流感真病毒的EC50范围均大于144 μM，表明多肽1、多肽2和多肽3对各甲型流感真病毒无抑制作用。根据多肽1和多肽2对甲型流感真病毒无抑制作用，根本预料不到YKYY017对甲型流感病毒真病毒有显著增强的抑制作用。实验结果表明YKYY017对甲型流感真病毒具有抑制作用，与多肽1、多肽2和多肽3相比显著提升。
实施例5：YKYY017在马-达二氏犬肾（MDCK）细胞模型中对乙型流感真病毒的药效实验
1、实验材料：
1）实验细胞：
MDCK细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。
2）真病毒毒株：
B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940
3）供试药物：
YKYY017、多肽1、多肽2和多肽3
4）阳性药物：
玛巴洛沙韦
5）检测试剂盒：
CCK8检测试剂盒
2、实验分组：
1）阴性对照组：不加病毒孵育的细胞对照组
2）病毒对照组：等体积的培养基与病毒孵育
3）阳性药物组：玛巴洛沙韦梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
4）供试药物组：
I．YKYY017组：YKYY017梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
II．多肽1组：多肽1梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
III．多肽2组：多肽2梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
IV．多肽3组：多肽3梯度稀释为8个浓度后与病毒共同孵育
3、药物剂量：
各给药组药物浓度梯度见表9。
表9 实验用药物浓度梯度
4、实验步骤：
具体实验步骤同实施例4，只是所用病毒为乙型流感真病毒B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940毒株。
5、实验结果：
表10 乙型流感真病毒实验结果
备注：上述实验结果数值为3次独立细胞实验的均值。
实验结果见图4和表10。YKYY017组对检测的各乙型流感真病毒的EC50范围在9.07~20.15 μM之间，其中对B/Florida/78/2015的抑制作用最好。多肽1、多肽2和多肽3组对检测的乙型流感真病毒的EC50范围均大于144 μM，表明多肽1、多肽2和多肽3对各乙型流感真病毒无抑制作用。根据多肽1、多肽2和多肽3对甲型流感真病毒无抑制作用，根本预料不到YKYY017对乙型流感病毒真病毒有显著增强的抑制作用。实验结果表明YKYY017对乙型流感真病毒具有抑制作用，与多肽1、多肽2和多肽3相比显著提升。
实施例 6：YKYY017在流感病毒感染小鼠中的体内药效
1、实验材料：
1）实验动物：
雌性BALB/c小鼠，6-8周龄。
2）流感病毒毒株：
甲型流感病毒A/California/07/2009 (H1N1)
3）供试药物：
YKYY017
4）阳性药物：玛巴洛沙韦
2、实验分组：
1）溶媒对照组：给予灭菌注射用水
3）阳性药物组：给予玛巴洛沙韦
4）供试药物组：
I．YKYY017组1：1 mg/kg
II．YKYY017组2：4 mg/kg
III．YKYY017组3：8 mg/kg
IV. YKYY017组4：12 mg/kg
V. YKYY017组5：20 mg/kg
3、实验步骤：
如前所述，试验分为7组，每组6只动物。病毒接种量为300 p.f.u/动物，共接种1次。溶媒对照组动物连续5天给予溶媒处理；阳性药物组动物连续5天给予玛巴洛沙韦（10mg/kg）；供试药物组(I-V)动物连续5天分别给予YKYY017，剂量分别为1、4、8、12和20 mg/kg。实验期间统计动物体重数据和动物存活情况，并在给药结束后提取动物的肺脏组织用于肺部病毒载量检测和组织病理学检查。
4、实验结果：
1）动物存活情况
实验结束时，溶媒对照组存活1只动物，阳性药物组动物全部存活，1 mg/kgYKYY017剂量组存活2只试验动物，4 mg/kg YKYY017剂量组存活3只试验动物，8 mg/kg剂量组有5只动物存活，12 mg/kg和20 mg/kg剂量组动物全部存活。
2）肺部病毒载量结果
试验结果显示，溶媒处理动物肺组织中病毒滴度平均值为7.82Log10（PFU/glung）；阳性药物组动物肺组织中病毒滴度平均值为2.32Log10（PFU/g lung）；1 mg/kgYKYY017组动物肺组织中病毒滴度平均值为7.01Log10（PFU/g lung）；4 mg/kg YKYY017组动物肺组织中病毒滴度平均值为5.90Log10（PFU/g lung）；8 mg/kg YKYY017动物肺组织中病毒滴度平均值为4.09Log10（PFU/g lung）；12 mg/kg YKYY017动物肺组织中病毒滴度平均值为3.53Log10（PFU/g lung）；20 mg/kg YKYY017动物肺组织中病毒滴度平均值为3.05Log10（PFU/g lung）。
3）肺部组织病理学结果
实验结果表明，溶媒对照组动物肺部病变严重，在血管周、细支气管周、肺泡和肺间质有重度的炎性细胞浸润；阳性药物组动物肺部病变轻微，在血管周、细支气管周、肺泡和肺间质有轻度的炎性细胞浸润，其中5只动物未见细支气管周和肺间质炎性细胞浸润；1mg/kg YKYY017剂量组动物肺部病变基本无减轻，在血管周、肺泡和肺间质有重度的炎性细胞浸润，在细支气管周有中度至重度的眼形细胞浸润；4 mg/kg YKYY017剂量组动物肺部病变较溶媒对照组减轻，但程度有限，在血管周、肺泡和肺间质有轻度至中度的炎性细胞浸润，偶见重度炎性细胞浸润，在细支气管周有轻度的炎性细胞浸润；8 mg/kg YKYY017剂量组动物肺部病变在血管周有轻度至中度的炎性细胞浸润，在细支气管周、肺泡和肺间质有轻度的炎性细胞浸润，其中5只动物未见细支气管周炎性细胞浸润；12 mg/kg YKYY017剂量组动物肺部病变在血管周、细支气管周、肺泡和肺间质有轻度的炎性细胞浸润，其中4只动物未见细支气管周和肺间质炎性细胞浸润；20 mg/kg YKYY017剂量组动物肺部病变轻微，在血管周、细支气管周、肺泡和肺间质有轻度的炎性细胞浸润，其中5只动物未见细支气管周炎性细胞浸润，4只动物未见肺间质炎性细胞浸润。
5、试验结论：
YKYY017在大于等于4 mg/kg剂量下，即可展现出减少流感病毒感染导致的动物死亡，降低肺部的病毒载量，缓解肺部的病理学改变的效果，但8~20 mg/kg剂量组药效结果更优。
实施例 7：对新冠病毒SARS-CoV-2的抑制作用
1、实验材料：
1）实验细胞：
293T/ACE2细胞（购自诺唯赞生物，货号DD1701-01），用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。
2）SARS-CoV-2毒株：
Omicron BA.2，来自昆明动物研究所。
3）供试药物：
YKYY017、多肽1、多肽2和多肽3
5）检测试剂盒：
CCK8检测试剂盒
2、实验分组：
1）阴性对照组：不加病毒孵育的细胞对照组
2）病毒对照组：等体积的培养基与病毒孵育
3）供试药物组：
I．YKYY017组：YKYY017梯度稀释为9个浓度后与病毒共同孵育
II．多肽1组：多肽1梯度稀释为9个浓度后与病毒共同孵育
III．多肽2组：多肽2梯度稀释为9个浓度后与病毒共同孵育
IV．多肽3组：多肽3梯度稀释为9个浓度后与病毒共同孵育。
3、药物剂量
各给药组药物浓度梯度见表11。
表11 实验用药物浓度梯度
4、实验步骤：
1）将293T/ACE2细胞接种到96孔板中，接种密度为1.0×104/孔，接种体积为100 μL/孔，置于37°C、5% CO2培养箱中培养24小时。
2）在实验第2天，依照实验设计的药物浓度梯度进行试剂配制。
3）分别将不同浓度的供试药物YKYY017、多肽1、多肽2和多肽3与Omicron BA.2病毒溶液等体积混合，在37°C条件下共同孵育1小时，获得药物和病毒混合液。
4）按照实验分组，将3）的药物和病毒混合液加入1）的96孔培养板中，每孔200 μL，病毒接种量为0.02 MOI。供试药物组设置9个浓度点，每个浓度3个复孔；阴性对照组的孔加入100 μL培养基；病毒对照组的孔加入100 μL病毒溶液，病毒接种量为0.02 MOI。然后将培养板再次置于细胞培养箱内孵育48小时。
5）弃掉培养基，使用细胞活力检测试剂CCK8检测每孔细胞存活率。每孔加入20 μLCCK8溶液37°C、5% CO2条件下继续培养2小时，然后使用酶标仪检测每孔吸光度值（OD450-OD630）。
6）依据各个样品孔吸光度值，计算受试物对病毒引起细胞死亡的抑制率。使用GraphPad Prism软件对供试药物和阳性药物对细胞死亡抑制率进行非线性拟合分析，计算供试药物的半数有效浓度（EC50）。
5、实验结果
YKYY017对Omicron BA.2的EC50为0.56 nM，多肽1对Omicron BA.2的EC50为6.93nM，多肽2对Omicron BA.2的EC50为150.56 nM，多肽3对Omicron BA.2的EC50为98.61 nM。该试验证明了YKYY017和多肽1~3对新冠病毒的有效性，可以用于治疗新型冠状病毒导致的感染。其治疗效果中，YKYY017＞多肽1＞多肽3＞多肽2。
综合上述实验结果可知，YKYY017既能治疗新型冠状病毒导致的感染，又能治疗流感病毒导致的感染，而多肽1~3仅能用于治疗新型冠状病毒感染。
Claims (15)
1.抗冠状病毒脂肽或包含所述脂肽的组合物在制备治疗和/或预防病毒引起的疾病的药物中的用途，所述病毒引起的疾病选自：
（1）流感病毒引起的流行性感冒；和
（2）流感病毒引起的流行性感冒和冠状病毒引起的疾病；
其中所述脂肽为式(I)所示的化合物或其药用盐或其衍生物：
其中：
X1为乙酰基（Ac-）；
X2为EAAAK；
X3为赖氨酸；
X4为修饰于X3的亲脂性化合物基团；所述亲脂性化合物为胆固醇琥珀酸单酯（chol）或硬脂酰氯；
X5为氨基（-NH2）。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述脂肽为：
Ac-SVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKEAAAKK (Chol)-NH2。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述流感病毒为甲型流感病毒和/或乙型流感病毒。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述甲型流感病毒选自以下中的一种或多种：A/H1N1、A/H2N2、A/H3N2、A/H5N1和A/H7N9毒株，所述乙型流感病毒选自以下中的一种或多种：B/Yamagata/16/1988、B/Victoria/504/2000、B/Florida/78/2015和B/Lee/1940毒株。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述甲型流感病毒选自以下中的一种或多种：A/Puerto Rico/8/1934、A/Weiss/43、A/WSN/1933、A/WS/33、A/Mal/302/54、A/California/07/2009、、A/Hongkong/1/1968、A/California/02/2014、A/Thailand/Kan353/2004和A/Shanghai/4664T/2013毒株。
6.根据权利要求1或2所述的用途，其中将4~40mg/kg剂量的所述脂肽或包含4~40mg/kg剂量的所述脂肽的组合物施用给哺乳动物。
7.根据权利要求7所述的用途，其中将8~20mg/kg剂量的所述脂肽或包含8~20mg/kg剂量所述脂肽的组合物施用给哺乳动物。
8.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述药物的给药方式为口服给药、肺部给药、鼻腔给药、注射给药或外用给药。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述口服给药的制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服溶液剂、混悬剂或乳剂。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述肺部给药的制剂为雾化吸入剂、气雾剂或粉雾剂。
11.根据权利要求8所述的用途，其中所述鼻腔给药的制剂为鼻喷雾剂或滴鼻剂。
12.根据权利要求8所述的用途，其中所述注射给药的制剂为注射液或冻干粉针。
13.根据权利要求8所述的用途，其中所述外用给药的制剂为搽剂、洗剂或膏剂。
14.权利要求1或2所述的用途，其中所述的脂肽或包含所述脂肽的组合物和另一种或多种用于治疗和/或预防流感病毒引起的流行性感冒的药物联合给予。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述另一种或多种用于治疗和/或预防流感病毒引起的流行性感冒的药物选自：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦、拉那米韦、玛巴洛沙韦、金刚烷胺和金刚乙胺。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311037083.7A CN116763902B (zh) | 2023-08-17 | 2023-08-17 | 抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311037083.7A CN116763902B (zh) | 2023-08-17 | 2023-08-17 | 抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116763902A true CN116763902A (zh) | 2023-09-19 |
| CN116763902B CN116763902B (zh) | 2023-11-03 |
Family
ID=87986226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311037083.7A Active CN116763902B (zh) | 2023-08-17 | 2023-08-17 | 抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116763902B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5616327A (en) * | 1991-06-19 | 1997-04-01 | Sri International | M-protein peptides of influenza virus as antiviral agents |
| US20110097303A1 (en) * | 2009-10-27 | 2011-04-28 | Michael Zasloff | Methods and compositions for treating and preventing viral infections |
| CN109675042A (zh) * | 2019-02-01 | 2019-04-26 | 山西锦波生物医药股份有限公司 | 用于治疗和/或预防流感的组合物、方法和用途 |
| CN114736272B (zh) * | 2022-02-21 | 2022-09-06 | 悦康药业集团股份有限公司 | 一种优化病毒膜融合抑制剂的方法及广谱抗冠状病毒脂肽和应用 |
| CN116444644A (zh) * | 2023-03-20 | 2023-07-18 | 河南真实生物科技有限公司 | 一种广谱病毒膜融合抑制剂及其制备方法和用途 |
-
2023
- 2023-08-17 CN CN202311037083.7A patent/CN116763902B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5616327A (en) * | 1991-06-19 | 1997-04-01 | Sri International | M-protein peptides of influenza virus as antiviral agents |
| US20110097303A1 (en) * | 2009-10-27 | 2011-04-28 | Michael Zasloff | Methods and compositions for treating and preventing viral infections |
| CN109675042A (zh) * | 2019-02-01 | 2019-04-26 | 山西锦波生物医药股份有限公司 | 用于治疗和/或预防流感的组合物、方法和用途 |
| CN114736272B (zh) * | 2022-02-21 | 2022-09-06 | 悦康药业集团股份有限公司 | 一种优化病毒膜融合抑制剂的方法及广谱抗冠状病毒脂肽和应用 |
| CN116444644A (zh) * | 2023-03-20 | 2023-07-18 | 河南真实生物科技有限公司 | 一种广谱病毒膜融合抑制剂及其制备方法和用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116763902B (zh) | 2023-11-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10918623B2 (en) | Methods of treating influenza | |
| Leneva et al. | Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol | |
| KR102489519B1 (ko) | 급성 호흡기 바이러스 감염 치료용 항바이러스 면역 억제제 | |
| WO2009062348A1 (fr) | Procédés d'inhibition d'une infection par le virus de la grippe et leurs médicaments | |
| CN103648491B (zh) | 用于抑制流感病毒复制的方法和药物组合物 | |
| CN103052647A (zh) | 抗病毒剂 | |
| CA2817787C (en) | Composition comprising a peptide and an inhibitor of viral neuraminidase | |
| CA2813740C (en) | Recombinant human cc10 protein for treatment of influenza | |
| CN111420024A (zh) | 杆菌酞a在制备预防和治疗冠状病毒的药物中的应用 | |
| JP2022088370A (ja) | 抗ウイルス剤としてのペプチドおよびこのための使用 | |
| Xu et al. | Inhibition of peptide BF-30 on influenza A virus infection in vitro/vivo by causing virion membrane fusion | |
| CN104151403B (zh) | 一类多肽或其衍生物、及其在流感病毒感染中的应用 | |
| JP2023533041A (ja) | ウイルスに対するタウロリジンの使用 | |
| US9221874B2 (en) | Antiviral peptides against influenza virus | |
| CN116763902B (zh) | 抗冠状病毒脂肽在治疗和预防流行性感冒中的用途 | |
| CN115120608A (zh) | 一种siRNA药物、药物组合物、siRNA-小分子药物偶联物及其应用 | |
| JP6910043B2 (ja) | ヘマグルチニン結合ペプチド、および、これを含むインフルエンザウイルス感染症の予防・治療薬 | |
| WO2023123722A1 (zh) | 一种抗冠状病毒的多肽、其衍生物及其应用 | |
| EP3934653B1 (en) | Azelastine as antiviral treatment | |
| CA3064544A1 (en) | Peptides and uses therefor as antiviral agents | |
| KR20190122229A (ko) | 인플루엔자에 대한 면역원성 조성물 | |
| US20230059521A1 (en) | Methods of treating or preventing a viral infection using bacteriophages | |
| HUE029250T2 (en) | For use in the treatment of interferon-beta, influenza-induced lower respiratory diseases | |
| US20240108713A1 (en) | Novel replication deficient influenza a virus inducing high levels of type i interferon | |
| Pizzorno | Mechanisms of resistance to neuraminidase inhibitors in influenza A viruses and evaluation of combined antiviral therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |