CN116725995A - γ-氨基丁酸在预防和/或改善由香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途及实现该用途的方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了γ‑氨基丁酸用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途以及实现该用途的方法,γ‑氨基丁酸能够有效预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤,拓展了γ‑氨基丁酸的应用范围。进一步地,γ‑氨基丁酸可以有效预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈萎缩和/或牙龈炎症,可以将γ‑氨基丁酸应用于口腔护理品等中。
Description
技术领域
本申请涉及个人护理产品技术领域,尤其涉及γ-氨基丁酸在预防和/或改善由香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途及实现该用途的方法。
背景技术
牙龈是指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构,由复层扁平上皮及固有层组成。是口腔黏膜的一部分,血管丰富,呈淡红色,坚韧而有弹性,因缺乏黏膜下层,直接与骨膜紧密相连,故牙龈不能移动。牙龈缘位置退向根方而使牙根暴露的情况称之为牙龈萎缩,牙龈萎缩后,暴露的跟面容易发生龋齿,跟面上较薄的牙质被机械地磨去后,易发生楔状缺损或牙本质敏感,甚至因长期刺激而引起牙髓充血和变性;牙间乳头地退缩使邻间隙增大,易造成食物嵌塞和菌斑堆积;龈裂和肥厚的龈缘也会妨碍菌斑的清除,继发更重的炎症和增生。
然而,香烟烟雾引起的牙龈损伤不同于其他牙龈损伤。在整个香烟烟雾中发现了两种主要的相,一种是焦油相,一种是气相,它是7000多种化合物的复杂混合物。有研究表明香烟烟雾提取物(CSE)具有降解胶原蛋白的能力,并可导致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、核因子-κB(NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌增加。而吸烟减少了成纤维细胞结合和胶原蛋白的产生,以及骨形成蛋白的产生,并增加了组织破坏酶(MMPs)的水平,因此,香烟烟雾导致的牙龈损伤是多重且复杂的损伤。
香烟烟雾引起的牙龈损伤也不同于皮肤损伤,在空腔中,粘膜表面的上皮细胞是抵御香烟烟雾等环境有害刺激的第一道防线。口腔中牙龈等组织直接与香烟烟雾接触产生一系列口腔疾病。流行病学研究已经证实,吸烟是牙周病的一个公认的危险因素,在牙周炎患者中,吸烟与附着丧失和骨吸收有关。吸烟也会对牙周组织对治疗的反应产生负面影响。研究发现香烟烟雾影响牙龈血流、细胞因子产生、结缔组织细胞(如成纤维细胞)的细胞形态、细胞迁移、增殖和附着以及蛋白质的合成和分泌。
发明内容
为了有效保护牙龈健康,降低外界不利因素带来的损伤,本申请通过研究发现,γ-氨基丁酸能够有效保护牙龈,特别是保护吸烟者的牙龈,从而完成了本申请。
本申请具体的技术方案如下:
1.γ-氨基丁酸用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途。
2.根据项1所述的用途,所述牙龈损伤包括牙龈萎缩和/或牙龈炎症。
3.根据项1或2所述的用途,所述牙龈损伤包括牙龈成纤维细胞损伤。
4.一种预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的方法,所述方法包括在口腔中施用γ-氨基丁酸。
5.根据项4所述的方法,所述牙龈损伤包括牙龈萎缩和/或牙龈炎症。
6.根据项4或5所述的方法,所述牙龈损伤包括牙龈成纤维细胞损伤。
发明效果
γ-氨基丁酸能够有效预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤,因此,拓展了γ-氨基丁酸的应用范围。
进一步地,γ-氨基丁酸可以有效预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈萎缩和/或牙龈炎症,因此,可以将γ-氨基丁酸应用于口腔护理品等中。
附图说明
附图用于更好地理解本申请,不构成对本申请的不当限定。其中:
图1为实施例1不同组别的细胞内ROS相对含量;
图2为实施例2不同组别的TNF-α相对含量;
图3为实施例3不同组别的Ⅰ型胶原蛋白的荧光照片。
具体实施方式
以下对本申请的示范性实施例做出说明,其中包括本申请实施例的各种细节以助于理解,应当将它们认为仅仅是示范性的。因此,本领域普通技术人员应当认识到,可以对这里描述的实施例做出各种改变和修改,而不会背离本申请的范围和精神。同样,为了清楚和简明,以下的描述中省略了对公知功能和结构的描述。
本申请提供了γ-氨基丁酸新的用途,以及实现该用途的方法。
一方面,本申请提供了γ-氨基丁酸用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途。
所述牙龈是指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构,由复层扁平上皮及固有层组成,属于口腔黏膜的一部分,本申请所述牙龈符合本领域内一般定义。
所述γ-氨基丁酸(GABA)指γ-aminobutyric acid,化学名为4-氨基丁酸,是一种在脊椎动物、植物和微生物中广泛存在的氨基酸,同时也是一种重要的抑制性神经递质。GABA最初是由Florey和Robert于1950年在哺乳动物脑萃取液中首先发现,之后大量研究表明GABA在哺乳动物神经中可降低神经元敏感性并防止神经细胞过度兴奋,具有安定、放松和消除神经紧张的作用。近年来也有研究表明GABA可以快速穿透皮肤,释放皱纹,淡化细纹,增强肌肉本身的放松机能,从而起到减压美容的效果。
香烟烟雾会引起牙龈损伤,本申请通过研究发现,γ-氨基丁酸能够有效预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤,从而可以将其用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的产品中,例如,可以将其用于个人护理品中,来缓解香烟烟雾引起的牙龈损伤,所述个人护理品可以是口服制剂,也可以是外用制剂。对于具体的制剂类型,本申请不做限制,本领域技术人员可以根据使用需要自行在现有技术中进行选择,例如,所述口服制剂可以是粉剂、颗粒剂、胶囊、液体制剂、混悬液等,所述外用制剂可以是敷贴、喷剂、膏霜、液体涂抹制剂等。
在一些实施方式中,本申请提供了γ-氨基丁酸在制备预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的产品/个人护理品中的用途。
对于γ-氨基丁酸在产品/个人护理品中的剂量,本申请不做限定,本领域技术人员可以根据γ-氨基丁酸的常规使用剂量进行选择,例如,按重量百分比计,可以是0.01%~10%,在一些实施方式中,所述γ-氨基丁酸的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%、10.0%等。
在一些实施方式中,所述产品包括漱口水、牙膏、散剂、含片或口腔贴膜。对于漱口水、牙膏、散剂、含片或口腔贴膜的制备方法,本申请不作任何限制,其均可以通过本领域常规的制备方法制备得到。
在一些实施方式中,所述产品还包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂、抗结石剂、抗炎剂、美白剂、保湿剂中的一种或两种以上。
例如,所述γ-氨基丁酸可以与包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂、抗结石剂、抗炎剂、美白剂、保湿剂中的任一种或者任两种或者任三种或者任四种或者与上述所述的全部成分同时用于上述产品中。
在本申请中,对于抗菌剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常规的抗菌剂,例如,所述抗菌剂可以为氯化亚锡、四氢姜黄素、三氯生等。
在本申请中,对于抗龋剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的抗龋剂,例如,所述抗龋剂可以为磷酸钙、三偏磷酸钠、甘油磷酸镁、乳磷酸钙等。
在本申请中,对于抗敏剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的抗敏剂,例如,所述抗敏剂可以为甘草酸二钾、氟化钾、氯化钾等。
在本申请中,对于抗结石剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的抗结石剂,例如,所述抗结石剂可以为焦磷酸盐、三聚磷酸盐、柠檬酸盐等。
在本申请中,对于抗炎剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的抗炎剂,例如,所述抗炎剂可以为甲硝唑、替硝唑、奥硝唑等。
在本申请中,对于美白剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的美白剂,例如,所述美白剂可以为过氧化物漂白剂、木瓜蛋白酶、葡萄糖氧化酶等。
在本申请中,对于保湿剂,本申请不作任何限制,其可以是本领域常用的保湿剂,例如,所述保湿剂可以为甘油、丙二醇、山梨醇、木糖醇、玻尿酸等。
在一些实施方式中,所述个人护理品还包括pH调节剂、增稠剂、渗透压调节剂中的一种或两种以上。
所述pH调节剂可以为本领域可用的酸、碱、无机盐等;所述增稠剂可以为羟乙基纤维素、羧甲基纤维素及其盐、黄原胶等;所述渗透压调节剂可以是本领域可用的无机盐等。
进一步的,本申请提供了γ-氨基丁酸用于用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的非治疗目的的用途。
所述非治疗目的即不以疾病的诊断或治疗为目的,可以是以预防目的、以改善为目的、以缓解为目的、以减轻、减缓为目的等等。
进一步的,本申请提供了一种预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的非治疗目的的方法,所述方法包括在口腔中施用γ-氨基丁酸。所述施用方式可以是本领域内任何一种施用方式,包括但不限于涂抹、含化、雾化、口服、注射等等。
对于γ-氨基丁酸在空腔中的施用剂量,本申请不做限定,本领域技术人员可以根据γ-氨基丁酸的常规使用剂量进行选择,例如,按重量百分比计,可以是0.01%~10%,在一些实施方式中,所述γ-氨基丁酸的浓度为0.01%、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%、10.0%等。
本申请所述牙龈损伤包括但不限于牙龈出血、牙龈氧化、牙龈疼痛、牙龈肿胀、牙龈萎缩、牙龈炎症等中一种或两种以上的情况。一种具体的实施方式中,所述牙龈损伤包括牙龈萎缩和/或牙龈炎症。
本申请所述牙龈损伤包括但不限于牙龈中的成纤维细胞损伤、淋巴细胞损伤、浆细胞损伤、巨噬细胞损伤等中一种或两种以上的情况。一种具体的实施方式中,所述牙龈损伤包括牙龈成纤维细胞损伤。
本申请提供了一种γ-氨基丁酸在制备预防或抑制由吸烟引起的牙龈损伤的产品中的用途。
在本申请的一些实施方式中,γ-氨基丁酸作为唯一活性成分在制备预防或改善由吸烟/香烟烟雾引起的细胞损伤的产品/个人护理品中的用途。
在本申请的一些实施方式中,γ-氨基丁酸作为唯一活性成分用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途。
在本申请的一些实施方式中,γ-氨基丁酸作为唯一活性成分用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的非治疗目的的用途。
本申请将γ-氨基丁酸用于制备预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的个人护理品中或用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的非治疗目的的用途中,可以显著抑制香烟烟雾提取物对牙龈成纤维细胞氧化刺激后的活性氧含量上升,相对于没有经过γ-氨基丁酸处理的细胞,结果具有极其显著的统计学差异,说明γ-氨基丁酸可以抑制香烟烟雾提取物引起的牙龈氧化损伤,同时,还可以抑制香烟烟雾提取物刺激后的肿瘤坏死因子含量上升,相对于没有经过γ-氨基丁酸处理的细胞,结果具有极其显著的统计学差异。说明γ-氨基丁酸可以抑制香烟烟雾提取物引起的牙龈炎症因子含量的上升,缓解牙龈炎症刺激。
本申请提供的GABA的新用途以及实现该用途的方法,可以改善口腔健康状况,缓解因吸烟等引起的口腔不适,并预防口腔疾病的形成,例如口腔肿瘤,保护口腔,具有广阔的应用前景。
实施例
本申请对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述,在下面的实施例中,如果无其他特别的说明,%表示wt%,即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实验例1:GABA在CSE诱导下对ROS生成的影响
称取γ-氨基丁酸(以下简称GABA,购于华熙生物)用HGF-1细胞完全培养基(含10% FBS、1%青链霉素)混匀溶解,分别配置10μg/mL和100μg/mL的GABA溶液。
香烟烟雾提取物(CSE)制备:将集气瓶灭菌并装入HGF-1细胞培养基,取某品牌香烟固定在集气瓶长导管端,短导管端接入真空泵。打开真空泵并点燃香烟,使香烟烟雾从长导管端进入培养基中。以此种方式制备香烟烟雾提取物。
测试方法:用无酚红培养基制备终浓度为10μM的DCFH-DA(2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯)溶液。
将HGF-1细胞以30000个/孔的密度接种至96孔板中,在37℃、5% CO2条件下培养备用。24h待细胞贴壁后,设置空白组、对照组、以及含1、10、100μg/mLGABA的实验组,100μL/孔。24h孵育后,每孔加入200μL浓度为5%的CSE溶液(空白组和对照组只添加培养基),3h孵育结束后,吸去上清,用DPBS溶液清洗,加入10μM的DCFH-DA工作液200μL,孵育30min,DPBS溶液清洗。在激发波长485nm、发射波长538nm处测定荧光强度。其中,
空白组:不加入GABA,不进行CSE处理,
对照组:不加入GABA,进行CSE处理,
实验组:加入1、10、100μg/mL GABA,进行CSE处理。
实验结果如图1所示,根据图1数据分析,比较空白组和对照组,CSE能显著刺激细胞中ROS含量的上升。同时观察实验组与对照组可以得出,10μg/mL和100μg/mL的GABA可抑制CSE氧化刺激后的ROS含量上升,说明其可以抑制HGF-1细胞氧化损伤,结果具有统计学差异。
用Graphpad Prism统计软件进行分析处理。两两比较采用t检验,*P<0.05表示有统计学差异,**P<0.01表示有显著性统计学差异,***P<0.001为有极其显著的统计学差异
实验例2:GABA在CSE诱导下对TNF-α生成的影响
炎症与肿瘤关系密切,肿瘤坏死因子α(TNF-α)是参与炎症的主要炎性细胞因子之一,在各种慢性炎症性疾病及肿瘤环境中高表达。TNF-α可诱导其他炎性因子释放放大炎症反应,还可通过释放氧氮介质直接诱导上皮细胞癌变促进肿瘤发生。本实验通过GABA在CSE诱导下对TNF-α(肿瘤坏死因子)生成的影响来验证GABA对香烟诱导的炎症影响。
称取γ-氨基丁酸(以下简称GABA,购于华熙生物)用HGF-1细胞完全培养基(含10% FBS、1%青链霉素)混匀溶解,分别配置1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的GABA溶液。
香烟烟雾提取物(CSE)制备:将集气瓶灭菌并装入HGF-1细胞培养基,取某品牌香烟固定在集气瓶长导管端,短导管端接入真空泵。打开真空泵并点燃香烟,使香烟烟雾从长导管端进入培养基中。以此种方式制备香烟烟雾提取物。
测试方法:将HGF-1细胞以30000个/孔的密度接种至96孔板中,在37中、5% CO2条件下培养备用。24h待细胞贴壁后,设置空白组、对照组、以及含1、10、100μg/mLGABA的实验组,100μL/孔。24h孵育后,每孔加入200μL浓度为5%的CSE溶液(空白组和对照组只添加培养基)处理24h,收集上清液,采用ELISA检测试剂盒检测TNF-α的分泌量。在ELISA检测的同时,将96孔板中加入细胞裂解液并离心,取上清进行BCA蛋白定量。经过均一化处理后,通过后以对照组(为基准,用百分数表示TNF-α相对含量%。其中,
空白组:不加入GABA,不进行CSE处理,
对照组:不加入GABA,进行CSE培养箱处理,
实验组:加入1、10、100μg/mL GABA,进行CSE处理。
实验结果如图2所示,根据图2数据分析,比较空白组和对照组,CSE能显著刺激细胞中TNF-α含量的上升。同时观察实验组与对照组可以得出,1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的GABA可抑制CSE刺激后的TNF-α含量上升,说明其可以抑制炎症刺激,结果具有统计学差异。
用Graphpad Prism统计软件进行分析处理。两两比较采用t检验,*P<0.05表示有统计学差异,**P<0.01表示有显著性统计学差异,***P<0.001为有极其显著的统计学差异。
实验例3:GABA在CSE诱导下对Ⅰ型胶原蛋白生成的影响
组成牙龈和牙根的组织成分大部分为胶原蛋白,牙龈中的胶原蛋白流失后容易造成牙齿病变,如蛀牙、牙龈萎缩、牙周病、牙齿松动、脱落、疼痛、易敏咬力不强等,且牙龈中的胶原蛋白流失后,牙龈组织中新生细胞的更新速度就会减缓,色素会沉积在牙齿表层,造成牙齿发黄变黑。本实验通过GABA在CSE诱导下对Ⅰ型胶原蛋白表达的影响来验证GABA在预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤方面的用途。
取HGF-1细胞用DMEM培养基在T75的培养瓶里培养,待细胞密度约80%,接种于带有盖玻片的24孔板,在37℃、5% CO2条件下培养。24h后吸掉上清液,实验组添加含有100μg/mLGABA和5%CSE共同孵育,同时设置对照组和空白组。置于37℃、5% CO2培养箱孵育72h。吸去上清液,清洗两遍细胞,然后用冰甲醇于-20℃下固定细胞,接着分别加入Ⅰ型胶原蛋白一抗4℃孵育过夜,第二天用PBS洗三遍,加入相应二抗后避光室温孵育1.5小时,用DAPI染核封片,随后在荧光显微镜下观察拍摄照片,最后用Image J软件半定量分析照片的荧光数据。其中,
空白组:不加入GABA,不进行CSE处理,
对照组:不加入GABA,进行CSE处理,
实验组:加入100μg/mL GABA,进行CSE处理。
实验结果如图3所示,根据图3分析,相较于空白组,CSE刺激后,Ⅰ型胶原蛋白(上图荧光区域)的荧光亮度降低,说明CSE处理影响了Ⅰ型胶原蛋白的含量。同时实验组中添加了100μg/mL的GABA,能够明显增强Ⅰ型胶原蛋白的表达量,荧光区域亮度变强。因此表明GABA有效抑制CSE导致的Ⅰ型胶原蛋白表达量较少,具有较强的抵御香烟刺激的效果。
尽管以上结合对本申请的实施方案进行了描述,但本申请并不局限于上述的具体实施方案和应用领域,上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的,而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本申请权利要求所保护的范围的情况下,还可以做出很多种的形式,这些均属于本申请保护之列。
Claims (6)
1.γ-氨基丁酸用于预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,所述牙龈损伤包括牙龈萎缩和/或牙龈炎症。
3.根据权利要求1或2所述的用途,所述牙龈损伤包括牙龈成纤维细胞损伤。
4.一种预防和/或改善香烟烟雾引起的牙龈损伤的方法,所述方法包括在口腔中施用γ-氨基丁酸。
5.根据权利要求4所述的方法,所述牙龈损伤包括牙龈萎缩和/或牙龈炎症。
6.根据权利要求4或5所述的方法,所述牙龈损伤包括牙龈成纤维细胞损伤。
Priority Applications (1)
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CN202310735821.9A CN116725995A (zh) | 2023-06-20 | 2023-06-20 | γ-氨基丁酸在预防和/或改善由香烟烟雾引起的牙龈损伤的用途及实现该用途的方法 |
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