CN116670285A - 抗cd38抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

提供了一种CD38抗体或其片段的组合物，及其在与CD38表达相关的疾病中的用途。

Description

抗CD38抗体及其用途
本申请要求于2020年06月23日提交美国专利局的美国临时申请US63042773的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
背景技术
CD38，也称为环ADP核糖水解酶，是具有长的C端胞外结构域和短的N端胞质结构域的II型跨膜糖蛋白。CD38是一组相关的膜结合酶或可溶性酶的成员，该组包含CD 157和Aplysia ADPR环化酶。该酶家族具有将NAD转化为环ADP核糖或烟碱酸-腺嘌呤二核苷酸磷酸的独特能力。
此外，据报道，CD38参与Ca 2+的动员以及通过酪氨酸磷酸化参与许多信号分子(包含磷脂酶Cγ、ZAP-70、syk和c-cbl)的信号转导。基于这些观察，CD38被认为是淋巴样细胞在正常发育期间成熟和活化的重要信号分子。
在造血细胞中，多种功能作用已归因于CD38介导的信号传导，包括淋巴细胞增殖、细胞因子释放、B细胞和骨髓细胞发育与存活的调节以及树突细胞成熟的诱导。
然而，由于大多数信号转导研究使用异位过表达的CD38的细胞系和抗CD38单克隆抗体(为非生理性配体)，因此CD38在信号转导和造血中的确切作用仍不清楚。
CD31(PECAM-1；血小板内皮细胞黏附分子1)被认为是CD38的天然配体。CD31是免疫球蛋白超家族的130kD成员，其在循环血小板、嗜中性粒细胞、单核细胞和初始B淋巴细胞的表面表达。在功能上，CD31被认为作为黏附分子起作用。已表明CD38与CD31的相互作用可起到促进白血病细胞存活的作用。
在许多情况下，缺乏单个分子的动物模型已成为用于了解该分子在动物中的生物学作用的基本工具。基本假设是，如果蛋白质发挥非冗余功能，则其完全缺乏将导致该功能完全丧失。
已经建成了CD38基因敲除小鼠模型。这些动物显示出与组织相关的NAD酶活性几乎完全丧失。然而，这些动物是可存活的，从而得出结论，CD38及其活性不是生命所必需的。然而，这些小鼠在其先天免疫中的确 存在缺陷，并且T细胞依赖的体液应答降低。
与小鼠的结果相反，在人中，有很强的间接证据显示，CD38是生命不可或缺的。对来自超过5000个新生儿血液样本进行的分析未能识别出单个CD38 -个体，表明与小鼠不同，CD38是存活所必需的。因此，尚不清楚在小鼠中有关CD38功能做出的观察是否可推及人。
CD38在许多造血系统恶性肿瘤和来源于多种造血系统恶性肿瘤的细胞系中上调，所述造血系统恶性肿瘤包括非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma，BL)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)、B慢性淋巴细胞性白血病(B chronic lymphocytic leukemia，B-CLL)、B和T急性淋巴细胞白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(T cell lymphoma，TCL)、急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)、毛细胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma，HL)和慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)。另一方面，造血系统的大多数原始多能干细胞是CD38 -(图1)。
尽管最近在抗癌剂的发现和开发方面取得了进展，但许多形式的涉及CD38表达肿瘤的癌症仍然预后差。因此，需要治疗此形式癌症的改善方法。
发明内容
本文中提供了用于与CD38结合的试剂和方法，以及用于治疗CD38相关疾病的方法，和使用CD38特异性结合剂(包括CD38特异性抗体或抗体片段)检测CD38的方法。
在一些实施方案中，描述了针对人CD38(SEQ ID NO:1)具有特异性的分离的抗体或抗体片段。该抗体或抗体片段由重链可变区和轻链可变区构成，其中重链可变区由三个互补决定区(complementary determining region，CDR)构成：HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且其中轻链可变区也由三个CDR构成：LCDR1、LCDR2和LCDR3。CDR的序列表示为：HCDR1(SEQ ID NO:9)、HCDR2(SEQ ID NO:13)、HCDR3(SEQ ID NO:17)、LCDR1(SEQ ID NO:25)、LCDR2(SEQ ID NO:29)和LCDR3(SEQ ID NO:33)。
在一些实施方案中，分离的抗体或抗体片段由重链可变区构成，所述 重链可变区的序列包含于SEQ ID NO:5。
在一些实施方案中，分离的抗体或抗体片段由轻链可变区构成，所述轻链可变区的序列包含于SEQ ID NO:21。
在一些实施方案中，分离的抗体或抗体片段由重链可变区构成，其中重链可变区的序列包含于SEQ ID NO:5。在其他实施方案中，分离的抗体由轻链可变区构成，其中轻链可变区的序列包含于SEQ ID NO:21。重链可变区和轻链可变区的这种组合称为scFv418。
在一些实施方案中，分离的抗体包含Fc结构域。在其他实施方案中，Fc结构域是人Fc结构域。在其他实施方案中，Fc结构域是变体Fc结构域。
在一些实施方案中，提供了编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸。在其他实施方案中，提供了编码SEQ ID NO:41所示的轻链的分离的核酸。
在一些实施方案中，提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含编码SEQ ID NO:5所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:21所示的轻链的分离的核酸。
在一些实施方案中，提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:41所示的轻链的分离的核酸。
在一些实施方案中，提供了产生本发明的抗体的方法。所述方法包括在表达分离的核酸并产生抗体的条件下培养包含编码SEQ ID NO:5所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:21所示的轻链的分离的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，提供了产生本发明的抗体的方法。所述方法包括在表达分离的核酸并产生抗体的条件下培养包含编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:41所示的轻链的分离的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，描述了对人CD38(SEQ ID NO:1)具有特异性的分离的抗体。该抗体由六个CDR构成，其中该抗体的每个CDR可通过0、1或2个氨基酸替换而不同于SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:33。
在其他实施方案中，分离的抗体由重链可变区构成，其中重链可变区的序列包含于SEQ ID NO:5。
在另一些实施方案中，分离的抗体由轻链可变区构成，其中轻链可变区的序列包含于SEQ NO:21。重链可变区和轻链可变区的这种组合称为scFv418。
在一些实施方案中，提供了编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸。在其他实施方案中，提供了编码SEQ ID NO:22所示的轻链的分离的核酸。重链和轻链的这种组合称为IgG418完整抗体。
在一些实施方案中，提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含编码SEQ ID NO:5所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:21所示的轻链的分离的核酸。
在一些实施方案中，提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:41所示的轻链的分离的核酸。
在一些实施方案中，提供了产生本发明的抗体的方法。所述方法包括在表达分离的核酸并产生抗体的条件下培养包含编码SEQ ID NO:5所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:21所示的轻链的分离的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，提供了产生本发明的抗体的方法。所述方法包括在表达分离的核酸并产生抗体的条件下培养包含编码SEQ ID NO:37所示的重链的分离的核酸以及编码SEQ ID NO:41所示的轻链的分离的核酸的宿主细胞。
在另一些实施方案中，描述了对人CD38(SEQ ID NO:1)具有特异性的分离的抗体。该抗体由六个CDR构成，其中该抗体的每个CDR可通过0、1或2个氨基酸替换而不同于SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:33。
在一些实施方案中，提供了分离的抗CD38抗体，其特异性结合人CD38(SEQ ID NO:1)，其中所述抗体以约10 -6、10 -7、10 -8、10 -9或更高的KD结合人CD38。
在一些实施方案中，提供了与IgG418竞争结合人CD38的抗体。
在一些实施方案中，提供了包含所述CD38抗体或抗体片段的组合物。
在一些实施方案中，提供了治疗患有与CD38表达相关疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的本发明所述CD38抗体或抗体片段，或施用包含所述CD38抗体或抗体片段的组合物。
在一些实施方案中，提供了本发明所述CD38抗体或抗体片段或其组合物在制备用于治疗与CD38表达相关疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，提供了用于治疗与CD38表达相关疾病的药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述CD38抗体或抗体片段。
参考以下描述和附图，以上内容和其他实施方案、特征和潜在优点将变得清楚。
附图说明
当结合附图时，本发明优选实施方案的以下详细描述将更好地被理解。出于说明本发明的目的，在附图中示出了目前优选的实施方案。然而，应该理解，本发明不限于附图中所示实施方案的确切方式和手段。
图1示使用捕获ELISA检测IgG418与CD38重组蛋白的亲和力，以Darzalex作为对照。
图2示使用流式细胞术检测IgG418与在Daudi细胞上表达的CD38的亲和力，以Darzalex作为对照。
图3示竞争ELISA检测结果，显示IgG418结合的CD38表位不同于Darzalex结合的表位。
图4示不同浓度IgG418对Daudi细胞的CDC活性的统计分析，以Darzalex作为对照。
图5示CDC数据的统计学分析结果。
图6示野生型和去岩藻糖基化的IgG418对Daudi细胞的ADCC活性，以Darzalex作为对照。
图7示抗人CD38单克隆抗体对人B细胞淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤生长的抑制作用，施用剂量1mg/kg。
图8示抗人CD38单克隆抗体对人B细胞淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤生长的抑制作用，施用剂量10mg/kg。
具体实施方式
概述
已显示CD38的胞外结构域具有双功能酶活性：ADP-核糖基环化酶和ADP-核糖基水解酶活性。因此，CD38可催化NAD向cADPR的转化(环化酶)，并且可将其进一步水解为ADP-核糖(水解酶)。cADPR参与来自胞内储存的钙的动员，钙具有对于细胞增殖、分化和凋亡很重要的第二信使活性。
升高的CD38表达已在多种造血来源疾病中被证实，并已被认为是慢性淋巴细胞性白血病的负面预后标志物(negative prognostic marker)。这样的疾病包括但不限于多发性骨髓瘤(Jackson et al.(1988))、慢性淋巴细胞白血病(Moribito et al.(2001)、Jelinek et(2001)、Chevalier et al.(2002)、Dürig et al.(2002))、B细胞慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(Keyhani et al(2000))、包括B细胞急性淋巴细胞白血病、Waldenstrom巨球蛋白血症、原发性系统性淀粉样变性、套细胞淋巴瘤、前淋巴细胞/粒细胞白血病、急性髓性白血病(Keyhani et al.(1993))、慢性髓性白血病(Marinov et al.,(1993))、滤泡性淋巴瘤、NK细胞白血病和浆细胞白血病。因此，CD38为造血系统疾病的治疗提供了有用的靶标。
数种抗CD38抗体正在用于治疗CD38相关癌症的临床试验中。因此，具有治疗效果和/或诊断应用的针对CD38的抗体是有用的。本发明提供了与CD38不同表位结合的不同的抗CD38的CDR组，以及包含这些CDR的抗体。
自2015年以来，用于骨髓瘤的CD38抗体治疗已被批准。此外，最近的数项其他研究表明CD38抗体治疗可消除肿瘤细胞对PD1/PDL1治疗的抗性。因此，本发明的抗CD38抗体的诊断和治疗应用不仅限于骨髓瘤，还包括所有其他种类的癌症。
另外，本发明显示抗CD38抗体可用于诊断和/或治疗与活化的淋巴细胞相关的炎症和/或免疫学疾病，包括特别是自身免疫病。如本文中所示，CD38在未成熟的造血细胞中表达，在成熟细胞中下调，并在活化的淋巴细胞和浆细胞中以高水平重新表达。例如，高CD38表达见于活化的B细胞、浆细胞、活化的CD4 +细胞、活化的CD8 +细胞、NK细胞、NKT细胞、成熟的树突细胞(DC)和活化的单核细胞中。
令人惊讶的是，针对CD38的自身抗体的存在与糖尿病、慢性自身免 疫性甲状腺炎和格雷夫斯病相关(参见Antonelli et al,Clin.Exp.Immunol.2001 126:426-431；Mallone et al.,Diabetes 50:752(2001)和Antonelli et al.,J.Endocrinol.Invest.27:695-707(2004)，所有这些都通过引用并入本发明。
因此，本发明的抗体可用于诊断和/或治疗多种疾病，包括但不限于如下所述的自身免疫病，包括但不限于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、系统性硬化症(Systemic Sclerosis，SSc)、多发性硬化症(Multiple Sclerosis，MS)、炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)、糖尿病和溃疡性结肠炎。
因此，例如，具有高的浆细胞含量的患者，例如表现出高浆细胞的SLE患者以及显示出对基于CD20的治疗无应答的RA患者，可选择作为对象。
本发明的治疗性抗CD38抗体与CD38阳性细胞结合，通过多种作用机制导致这些细胞(例如活化的淋巴细胞)的耗竭，导致自身免疫病的治疗和/或改善。所述作用机制包括但不限于如本文中所述的CDC、ADCC、ADCP和凋亡途径。
抗体
本发明提供了抗CD38抗体，通常是指本文中所述的治疗性和/或诊断性抗体。在本发明中所用抗体可采取本文中所述的多种形式，包括如下所述的传统抗体以及保留其抗原结合能力的抗体变体、衍生物、片段和类似物。基本上，本发明提供了包含如本文中所限定的一组6个CDR(包含如下所述的少量氨基酸变化)的抗体结构。
传统的抗体结构单元通常包含四聚体。每个四聚体通常由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(通常具有约25kDa的分子量)和一条“重”链(通常具有约50至70kDa的分子量)。人轻链分为κ轻链和λ轻链。重链分为μ、δ、γ、α或ε，并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG和IgE。IgG具有数个亚类，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包括但不限于IgM1和IgM2。因此，本文中使用的“同种型”意指由其恒定区的化学和抗原特性所定义的免疫球蛋白的任何亚类。已知的人免疫球蛋白同种型是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM1、IgM2、IgD和IgE。应理解，治疗性抗体也可包含同种型和/或亚类的杂交体。
每条链的氨基端部分包含主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区，。在可变区中，对于重链和轻链的每个V结构域，聚集了三个环以形成抗原结合位点。每个环被称为互补决定区(以下称为“CDR”)，其中氨基酸序列的变化最为显著。“可变的”是指可变区的某些片段在抗体之间的序列差异很大的事实。可变区内的可变性不是均匀分布的。相反，V区由15至30个氨基酸的相对不变的片段(称为框架区(FR))组成，这些片段由极度变异性的较短区域(称为“高变区”)隔开，每个区域的长度均为9至15个氨基酸或更长。
每个VH和VL由三个高变区(“互补决定区”、“CDR”)和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
轻链可变区的高变区通常包含位于约24至34位(LCDR1；“L”表示轻链)、50至56位(LCDR2)和89至97位的氨基酸残基(LCDR3)；重链可变区的高变区通常包含位于约31至35位(HCDR1；“H”表示重链)、50至65位(HCDR2)和95至102位的氨基酸残基(HCDR3)(Kabat et al.,SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST,5 th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))，以及/或者形成高变环的那些残基，例如，轻链可变区的26至32位(LCDR1)、50至52位(LCDR2)和91至96位(LCDR3)的残基，以及重链可变区的26至32位(HCDR1)、53至55位(HCDR2)和96至101位(HCDR3)残基(Chothia and Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917)。本发明的特定CDR如下所述。
在本说明书通篇，当提及可变结构域(约轻链可变区的1至107位残基和重链可变区的1至113位残基)中的残基时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat et al.,supra(1991))，其中EU编号系统用于Fc区。
CDR有助于抗体的抗原结合的形成，或更具体地，表位结合位点的形成。“表位”是指与抗体分子的可变区中的特定抗原结合位点(称为对位)相互作用的决定簇。表位是一组例如氨基酸或糖侧链分子，并且通常具有特定的结构特征以及特定的电荷特征。单个抗原可具有多于一个表位。例如，如本文中所示，本文中称为“IgG418”和Darzalex的两种不同抗体与CD38分子上的不同表位结合。
表位可包含直接参与结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性成分)和不直接参与结合的其它氨基酸残基，例如被抗原参与特异性结合的肽有 效封闭的氨基酸残基，换句话说，这些氨基酸残基在抗原参与特异性结合的肽的占用空间内。
表位可以是构象的或线性的。构象表位是由线性多肽链不同片段在空间上并列的氨基酸产生的。线性表位是由多肽链中相邻氨基酸残基产生的表位。构象和非构象表位的区别可在于，在存在变性溶剂的情况下，与前者的结合丧失而与后者的结合不丧失。
在独特的空间构象中，表位通常包含至少3个，更通常至少5个或8至10个氨基酸。识别相同表位的抗体可通过一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力的简单免疫测定来验证。
在本发明中，IgG418与Darzalex的结合表位不同，因为它们在竞争性ELISA测定中不竞争相同的表位。
因此，在一些实施方案中，通过与scFv418或IgG418两者之一的表位竞争结合的抗体可用于治疗癌症和自身免疫性病。应注意，本发明发现与scFv418或IgG418竞争的抗体的用途。
每条链的羧基末端部分限定主要负责效应子功能的恒定区。Kabat等人收集了重链和轻链可变区的许多一级序列。基于序列的保守程度，他们将单个一级序列分为CDR和框架，并制成列表(参见SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST,5 th edition,NIH publication,No.91-3242,E.A.Kabat et al.，通过引用完全并入)。
在免疫球蛋白的IgG亚类中，重链中有数个免疫球蛋白结构域。本文中的“免疫球蛋白(Ig)结构域”意指具有不同三级结构的免疫球蛋白区域。本发明中感兴趣的是重链结构域，包含恒定重链(CH)结构域和铰链结构域。对于IgG抗体，IgG同种型各自具有三个CH区。因此，对于IgG，“CH”结构域如下所示：“CH1”是指根据如Kabat中的EU索引的第118至220位，“CH2”是指根据如Kabat中的EU索引的第237至340位，并且“CH3”是指根据如Kabat中的EU索引的第341至447位。
重链的另一种Ig结构域是铰链区。本文中的“铰链”或“铰链区”或“抗体铰链区”或“免疫球蛋白铰链区”意指包含抗体的第一和第二恒定结构域之间氨基酸的柔性多肽。在结构上，IgG CH1结构域在EU第220位处终止，而IgG CH2结构域在EU第237位残基处开始。因此，对于IgG，本文中的抗体铰链定义为包含第221(IgG1中的221)至236位(IgG1中的G236)，其中编号是根据如Kabat中的EU索引进行的。在一些实施方 案中，例如在Fc区的情况下，包含下部铰链，其中“下部铰链”通常是指第226位或第230位。
在本发明中特别感兴趣的是Fc区。本文中使用的“Fc”或“Fc区”或“Fc结构域”意指包含抗体的恒定区的多肽，但不包含第一恒定区免疫球蛋白结构域，在某些情况下还包含部分铰链。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域N末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可包含J链。对于IgG，Fc结构域包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)以及Cγ1(Cγ1)和Cγ2(Cγ2)之间的下部铰链区。尽管Fc区的边界可变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为在其羧基端包含C226或P230残基，其中编号是根据如Kabat中的EU索引进行的。在一些实施方案中，如下文所述，在Fc区进行氨基酸修饰，例如以改变与一种或更多种FcγR受体或FeRn受体的结合。
在一些实施方案中，抗体是全长的。本文中的“全长抗体”意指构成抗体的天然生物学形式的结构，包含可变区和恒定区，包含如本文中所述的一种或更多种修饰。
或者，抗体可以是多种结构，包括但不限于抗体片段、单克隆抗体、双特异性抗体、小抗体、结构域抗体、合成抗体(在本文中有时称为“抗体类似物”)、嵌合抗体、人源化抗体、抗体融合物(有时称为“抗体缀合物”)和各自的片段。
在一个实施方案中，抗体是抗体片段。特异性抗体片段包括但不限于(i)由VL、VH、CL和CH1结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iii)由单个抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)由单个可变区组成的dAb片段(Ward et al.,1989,Nature341:544-546，通过引用完全并入)；(v)分离的CDR区；(vi)包含两个连接的Fab片段的二价F(ab’)2片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接，该肽接头允许两个结构域缔合形成抗原结合位点(Bird et al.,1988,Science 242:423-426、Huston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:5879-5883，通过引用整体并入)；(viii)双特异性单链Fv(WO 03/11161，在此通过引用并入)以及(ix)通过基因融合构建的“双抗体”或“三抗体”、多价或多特异性片段(Tomlinson et.al.,2000,Methods Enzymol.326:461-479；WO94/13804；Holliger et al.,1993,Proc.Natl.Acad.Sci,U.S.A.90:6444-6448，其全部通过引用整体并 入)。
嵌合抗体和人源化抗体
在一些实施方案中，抗体可以是来自不同物种的混合物，例如嵌合抗体和/或人源化抗体。即，在本发明中，CDR组可与本文中序列具体描述之外的框架区和恒定区一起使用。
通常，“嵌合抗体”和“人源化抗体”二者均是指来自多于一个物种的区域组合的抗体。例如，“嵌合抗体”传统上包含来自小鼠(或在某些情况下为大鼠)的可变区和来自人的恒定区。“人源化抗体”通常是指将非人源抗体的可变结构域框架区替换为在人抗体中发现的序列的抗体。通常，在人源化抗体中，除CDR外的整个抗体由人来源的多核苷酸编码或除其CDR外与人来源的抗体相同。将起源于非人类生物体的核酸编码的一部分或全部的CDR移植到人抗体可变区的β片层框架中以产生抗体，该抗体的特异性由移植的CDR确定。这样的抗体的产生描述于例如WO 92/11018,Jones,1986,Nature 321:522-525,Verhoeyen et al.,1988,Science 239:1534-1536中，其全部通过引用并入本文。通常需要将选择的接纳体框架残基“回复突变”为相应的供体残基以恢复在初始移植的构建体中丧失的亲和力(美国专利No.5,530,101；美国专利No.5,585,089；美国专利No.5,693,761；美国专利No.5,693,762；美国专利No.6,180,370；美国专利No.5,859,205；美国专利No.5,821,337；美国专利No.6,054,297；美国专利No.6,407,213，全部通过引用整体并入。理想地，人源化抗体还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区，通常是人免疫球蛋白的一部分，典型地，包含人Fc区。也可以使用具有遗传改造免疫系统的小鼠产生人源化抗体(Roque et al.,2004,Biotechnol.Prog.20:639-654，通过引用整体并入)。用于使非人抗体人源化和重塑的多种技术和方法是本领域公知的(参见Tsurushita&Vasquez,2004,Humanization of Monoclonal Antibodies,Molecular Biology of B Cells,533-545,Elsevier Science(USA)以及其中引用的参考文献，全部通过引用整体并入)。人源化方法包括但不限于在Jones et al.,1986,Nature 321:522-525；Riechmann et al.,1988,Nature 332:323-329；Verhoeyen et al.,1988,Science,239:1534-1536；Queen et al.,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:10029-33；He et al.,1998,J.Immunol.160:1029-1035；Carter et al.,1992,Proc Natl Acad Sci USA 89:4285-9；Presta et al.,1997,Cancer Res.57(20):4593-9；Gorman et al.,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:4181-4185；O'Connor et al.,1998,Protein Eng 11:321-8(全部 通过引用整体并入)中描述的方法。人源化或降低非人抗体可变区免疫原性的其他方法可包括表面重铺方法(resurfacing method)，例如在Roguska et al.,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:969-973中所述，其通过引用整体并入。在一个实施方案中，如本领域已知，亲本抗体已经是亲和力成熟的抗体。基于结构的方法可用于人源化和亲和力成熟，例如在美国系列No.11/004,590中所述。基于选择的方法可用于使抗体可变区人源化和/或亲和力成熟，包括但不限于在Wu et al.,1999,J.Mol.Biol.294:151-162；Baca et al.,1997,J.Biol.Chem.272(16):10678-10684；Rosok et al.,1996,J.Biol.Chem.271(37):22611-22618；Rader et al.,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:8910-8915；Krauss et al.,2003,Protein Engineering 16(10):753-759(全部通过引用整体并入)中描述的方法。其他人源化方法可包括仅部分CDR的移植，包括但不限于美国系列No.09/810,510；Tan et al.,2002,J.Immunol.169:1119-1125；De Pascalis et al.,2002,J.Immunol.169:3076-3084(全部通过引用整体并入)中所述的方法。
在一个实施方案中，本发明的抗体可以是多特异性抗体，尤其是双特异性抗体，有时也称为“双抗体”。这些抗体与两个(或更多个)不同抗原或同一抗原上不同表位结合。双抗体可以以本领域已知的多种方式制备(Holliger and Winter,1993,Current Opinion Biotechnol.4:446-449，通过引用整体并入)，例如，化学制备或由杂交瘤制备。
在一个实施方案中，抗体是微抗体。微抗体是包含连接至CH3结构域的scFv的最小化抗体样蛋白。Hu et al.,1996,Cancer Res.56:3055-3061，通过引用整体并入。在一些情况下，scFv可连接至Fc区，并且可包含部分或整个铰链区。
本发明的抗体通常是分离的或重组的。当用于描述本文中公开的多种多肽时，“分离的”意指已从表达其的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收的多肽。通常，分离的多肽将通过至少一个纯化步骤来制备。“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。例如，特异性结合CD38的分离的抗体基本上不含与CD38之外的抗原特异性结合的抗体。
然而，与人CD38或食蟹猴CD38的表位、同种型或变体特异性结合的分离的抗体可与例如来自其他物种的其他相关抗原，例如CD38的物种同源物，具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
具有不同特异性的分离的单克隆抗体可组合在明确的组合物中。因此，如果需要，可将IgG418组合在单一制剂中。
本发明的抗CD38抗体特异性结合其配体CD38(例如SEQ ID NO:1的人CD38蛋白)。“特异性结合”或对特定抗原或表位的“特异性”意指与非特异性相互作用显著不同的结合。特异性结合可被测量，例如，通过对比抗体与相应分子和对照分子的结合来测定，对照分子通常是不具有结合活性的类似结构的分子。例如，可通过与类似于靶标的对照分子的竞争确定特异性结合。
对特定抗原或表位的特异性结合可通过KD值来体现，例如针对某一抗原或表位的抗体的KD为至少约10 -4M、至少约10 -5M、至少约10 -6M、至少约10 -7M、至少约10 -8M、至少约10 -9M、至少约10 -10M、至少约10 -11M、至少约10 -12M或更高，其中KD指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。通常，特异性结合抗原的抗体与抗原或表位的KD是其与对照分子的20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍。
此外，对特定抗原或表位的特异性结合可通过KA或Ka来体现，例如针对抗原或表位的抗体具有的KA或Ka是对照表位的20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍的抗体，其中KA或Ka是指特定抗体-抗原相互作用的结合速率。
抗体修饰
本发明还提供了抗体的变体。即，可对本发明的抗体进行许多修饰，包括但不限于：CDR中的氨基酸修饰(亲和力成熟)、Fc区中的氨基酸修饰、糖基化变体、其他类型的共价修饰等。
本文中的“变体”意指由于至少一个(一个或更多个)氨基酸修饰而不同于亲本多肽的多肽序列。氨基酸修饰可包括替换、插入和缺失，在许多情况下前者是优选的。
通常，如本文中所述，只要蛋白的功能仍然存在，变体可包含任何数量的修饰。也就是说，例如，在用IgG418的CDR产生氨基酸变体的情况下，抗体应特异性结合人CD38。类似地，如果用Fc区产生氨基酸变体，则抗体变体应维持抗体的特定应用或适应症所需的受体结合功能。
通常，利用1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的替换是比较常见的，因为通常目的是用最少数量的修饰来改变功能。在一些情况下，存在1至5个修饰，其中1至2个、1至3个和1至4个修饰也发现用于 许多实施方案中。
应注意，氨基酸修饰的数目可在功能结构域内：例如，期望在野生型或经改造蛋白的Fc区中具有1至5个修饰，或在Fv区中具有1至5个修饰。变体多肽序列优选与亲本序列(例如，IgG418的可变区、恒定区以及/或重链和轻链序列)具有至少约80％、85％、90％、95％或高至98％或99％的同一性。应注意，根据序列的大小，同一性百分比将取决于氨基酸的数目。
本文中的“氨基酸替换”或“替换”意指亲本多肽序列中特定位置的氨基酸被另一氨基酸替换。例如，S100A替换是指其中第100位的丝氨酸被丙氨酸替换的变体多肽。本文中使用的“氨基酸插入”或“插入”意指在亲本多肽序列中特定位置的氨基酸的添加。本文中使用的“氨基酸缺失”或“缺失”意指在亲本多肽序列中特定位置的氨基酸的去除。
本文中使用的“亲本多肽”、“亲本蛋白”、“前体多肽”或“前体蛋白”意指未经修饰的多肽，其随后被修饰以产生变体。通常，本文的亲本多肽是scFv418和IgG418。亲本多肽可指多肽本身，包含亲本多肽的组合物或编码其的氨基酸序列。因此，本文中使用的“亲本Fc多肽”意指用于修饰以产生变体的Fc多肽，并且本文中使用的“亲本抗体”意指用于修饰以产生变体抗体的抗体。
本文中的“野生型”或“WT”或“天然”意指在自然界中发现的氨基酸序列或核苷酸序列，包含等位基因变异。WT蛋白、多肽、抗体、免疫球蛋白、IgG等具有未经故意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
本文中的“Fc区变体”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于野生型Fc序列的Fc序列。Fc变体可指包含Fc变体多肽或氨基酸序列的Fc多肽组合物。
在一些实施方案中，抗体IgG418的一个或更多个CDR的一个或更多个氨基酸被修饰。通常，在任一CDR中仅有1或2或3个氨基酸被替换，通常在一组CDR中不超过4、5、6、7、8、9或10个氨基酸改变。然而，应了解，在任何CDR中无替换、1、2或3个替换的任何组合可独立且任选地与任何其他替换组合。
在一些情况下，CDR中的氨基酸修饰称为“亲和力成熟”。一个“亲和力成熟”抗体是在一个或更多个CDR具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲本抗体相比，亲和力成熟抗体对抗原的亲和力得到改 善。在一些情况下，尽管很少见，期望降低抗体对其抗原的亲和力，但这通常不是优选的。
可进行亲和力成熟以使抗体对抗原的结合亲和力与“亲本”抗体相比提高至少约10％至50-100-150％或更多，或者1至5倍。优选的亲和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩或甚至皮摩的亲和力。亲和力成熟抗体可通过已知操作产生，参见例如，Marks et al.,1992,Biotechnology 10:779-783描述了通过可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域混编的亲和力成熟。CDR和/或构架残基的随机诱变描述于：例如，Barbas,et al.1994,Proc.Nat.Acad.Sci,USA 91:3809-3813；Shier et al.,1995,Gene 169:147-155；Yelton et al,1995,J.Immunol.155:1994-2004；Jackson et al.,1995,J.Immunol.154(7):3310-9；和Hawkins et al,1992,J.Mol.Biol.226:889-896。
或者，可在本发明抗体的一个或更多个CDR中进行“沉默的”氨基酸修饰，例如不显著改变抗体对抗原的亲和力。可出于多种原因进行这些修饰，包括优化表达(如可通过编码本发明抗体的核酸进行)。
因此，CDR变体和抗体变体包括在本发明的CDR和抗体的定义内。即，本发明的抗体可在IgG418的一个或更多个CDR中包含氨基酸修饰。另外，如下所述，氨基酸修饰也可独立地并且任选地在CDR之外的任何区域中进行，包括框架区和恒定区。
在一些实施方案中，本发明的抗CD38抗体由Fc结构域变体构成。如本领域已知，抗体的Fc区与许多Fc受体和配体相互作用，赋予其一系列重要的功能能力，称为效应子功能。这些Fc受体包括但不限于：(人的)FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型(包括同种异型H131和R131)，FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；以及FcγRIII(CD1.6)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158，与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)相关)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)、FcRn(新生受体)、C1q(参与补体依赖性细胞毒性(CDC)的补体蛋白)和FcRn(参与血清半衰期的新生受体)。可在一个或更多个位置上进行合适的修饰，例如在系列美国专利申请No.11/841,654及其中引用的参考文献，美国2004/013210、美国2005/0054832、美国2006/0024298、美国2006/0121032、美国2006/0235208、美国2007/0148170、美国系列No.12/341,769、美国专利No.6,737,056、美国专利No.7,670,600、美国专利No.6,086,875，其全部内容通过引用整体明确地并入，特别是能提高与Fc受体结合的特定 氨基酸替换。
除上述修饰之外，还可进行其他修饰。例如，可通过加入连接VH和VL结构域的二硫键来稳定分子(Reiter et al.,1996,Nature Biotech.14:1239-1245，通过引用整体并入)。另外，可以进行如下所述的抗体的多种共价修饰。
抗体的共价修饰包括在本发明的范围内，这些修饰通常但并非总是在翻译后进行。例如，通过使抗体的特定氨基酸残基与能够和选择的侧链或N或C端残基反应的有机衍生剂反应，来将数种类型的共价修饰引入抗体分子中。
半胱氨酸残基最常见的是与α-卤代乙酸酯(和对应的胺)反应，例如与氯乙酸或氯乙酰胺反应得到羧甲基或羧酰胺甲基衍生物。半胱氨酸残基也可通过与溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-亚咪唑酰基)丙酸、氯乙酰基磷酸酯、N-烷基马来酰亚胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、2-吡啶基二硫化甲基、对氯汞苯甲酸酯、2-氯汞基-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑等反应而衍生化。
组氨酸残基通过与焦碳酸二乙酯在pH为5.5至7.0下反应而衍生化，因为该试剂对组氨酸侧链相对特异。也可使用对溴苯甲酰基溴。反应优选在pH 6.0的0.1M二甲胂酸钠中进行。
赖氨酰和氨基末端残基与琥珀酸或其他羧酸酐反应。用这些试剂衍生化具有逆转赖氨酰残基的电荷的作用。用于衍生化含α-氨基的残基的其他合适的试剂包括：亚氨基酯，例如甲基吡啶亚氨酸甲基酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯硼氢化物；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2,4-戊二酮；和转氨酶催化的乙醛酸反应。
通过与一种或数种常规试剂反应来修饰精氨酸残基，其中包括苯乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-环己二酮和茚三酮。由于胍官能团的高pKa，精氨酸残基的衍生化要求反应在碱性条件下进行。此外，这些试剂可与赖氨酸基团以及精氨酸ε-氨基基团反应。
可对酪氨酰基残基进行特定修饰，其中特别感兴趣的是通过与芳族重氮化合物或四硝基甲烷反应将光谱标记引入酪氨酰基残基中。最常见地，使用N-乙酰基咪唑和四硝基甲烷分别形成O-乙酰基酪氨酰基物质和3-硝基衍生物，使用125I或131I碘化酪氨酰基残基，以制备用于放射免疫测定的标记蛋白，上述氯胺T方法是合适的。
通过与碳二亚胺(R’—N═C═N—R’)反应选择性地修饰羧基侧基(天冬氨酰或谷氨酰基)，其中R和R’任选地为不同的烷基，例如1-环己基-3-(2-吗啉基-4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3-(4-氮阳离子-4,4-二甲基戊基)碳二亚胺。此外，天冬氨酰和谷氨酰基残基通过与铵离子反应而转化为天冬酰胺基和谷氨酰胺基残基。
双官能剂衍生化可用于将抗体交联至水不溶性支持基质或表面，以用于包括以下所述方法的多种方法。常用的交联剂包括例如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯基乙烷；戊二醛；N-羟基琥珀酰亚胺酯，例如，4-叠氮基水杨酸酯；同双功能酰亚胺酯，包括二琥珀酰亚胺基酯，例如3,3’-二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)；和双官能马来酰亚胺，例如双-N-马来酰亚胺-1,8-辛烷。衍生剂，例如3-[(对叠氮基苯基)二硫]丙亚氨酸甲酯产生能够在光的存在下形成交联的可光活化的中间体。或者，将例如食蟹猴生成溴(cynomolgusogen bromide)活化的碳水化合物的反应性水不溶性基质和在美国专利No.3,969,287、No.3,691,016、No.4,195,128、No.4,247,642、No.4,229,537和No.4,330,440中描述的反应性底物(全部通过引用并入本文)用于蛋白质固定。
谷氨酰胺基和天冬酰胺基残基经常分别被脱酰胺基化为相应的谷氨酰基和天冬氨酰残基。或者，这些残基在弱酸性条件下脱酰胺。这些残基的任一种形式均落入本发明的范围内。
其他修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酸或苏氨酸残基的羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties,W.H.Freeman&Co.,San Francisco,pp.79-86[1983]，通过引用整体并入)，N端胺的乙酰化，和任何C端羧基的酰胺化。
另外，如本领域技术人员将认识到的，标记物(包括荧光、酶、磁性、放射性等)均可被添加至抗体以及本发明的其他组合物。
糖基化
共价修饰的另一种类型是糖基化的改变。在另一个实施方案中，本文中公开的抗体可被修饰以包括一种或更多种经改造的糖型。本文中使用的“经改造的糖型”意指共价连接至抗体的糖链组合物，其中所述糖链组合物在化学上不同于亲本抗体。经改造的糖型可用于多种目的，包括但不限于增强或降低效应子功能。经改造的糖型的优选形式是去岩藻糖基化，已 表明其与ADCC功能的提高相关，据推测是通过与FcγRIIIa受体的更紧密结合来实现。在该背景下，“去岩藻糖基化”意指在宿主细胞中产生的大多数抗体基本上不含岩藻糖，例如，产生的抗体中90-95-98％不含有显著的岩藻糖作为抗体糖链部分的组分(通常连接在Fc区的N297)。从功能上来说，去岩藻糖基化抗体通常对FcγRIIIa受体表现出至少50％或更高的亲和力。
可通过本领域已知的多种方法来产生经改造的糖型( et al.,1999,Nat Biotechnol 17:176-180；Davies et al.,2001,Biotechnol Bioeng74:288-294；Shields et al.,2002,J Biol Chem 277:26733-26740；Shinkawa et al.,2003,J Biol Chem 278:3466-3473；美国专利No.6,602,684；美国系列No.10/277,370；美国系列No.10/113,929；PCT WO 00/61739A1；PCT WO 01/29246A1；PCT WO 02/31140A1；PCT WO 02/30954A1；其全部通过引用并入；( technology[Biowa,Inc.,Princeton,N.J.]； glycosylation engineering technology[Glycart Biotechnology AG,Zürich,Switzerland])。许多技术基于控制与Fc区共价连接的岩藻糖基化和/或二等分寡糖的水平，例如通过在多种生物体或细胞系中、经改造的或以其他方式表达IgG(例如Lec-13CHO细胞或大鼠杂交瘤YB2/0细胞)，通过调节参与糖基化途径的酶(例如，FUT8[α1,6-岩藻糖基转移酶]和/或β1-4N-乙酰氨基葡糖基转移酶III[GnTITT])，或者在已表达IgG之后修饰糖链。例如，Seattle Genetics的“糖链改造的抗体”或“SEA技术”通过添加在生产过程中抑制岩藻糖基化的经修饰的糖来发挥作用，参见例如20090317869，其通过引用整体并入本文。经改造的糖型通常是指不同的糖链或寡糖，抗体可以包括经改造的糖型。
或者，经改造的糖型可指包含不同糖链或寡糖的IgG变体。如本领域中已知，糖基化模式可取决于蛋白质的序列(例如，下文讨论的特定的糖基化氨基酸残基的存在与否)，或产生蛋白的宿主细胞或生物体。特定的表达系统在下面讨论。
多肽的糖基化通常是N-连接或O-连接的。N-连接是指糖链部分与天冬酰胺残基的侧链连接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸)是糖链部分连接到天冬酰胺侧链上的酶促连接的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列中任一个的存在都会产生潜在的糖基化位点。O-连接糖基化是指将N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种与羟基氨基酸连接，尽管可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖 氨酸，但最常见的是丝氨酸或苏氨酸。
通过改变氨基酸序列以使其包含一个或更多个上述三肽序列可方便地实现将糖基化位点添加至抗体(对于N-连接的糖基化位点)。改变也可通过在起始序列上添加或替换一个或更多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(对于O-连接的糖基化位点)。为简便起见，抗体氨基酸序列优选通过DNA水平的改变来进行，特别是突变编码靶多肽的DNA处的预定碱基，得到可翻译成期望氨基酸的密码子。
提高抗体上糖链数目的另一种方法是通过化学或酶促偶联将糖苷与蛋白质相连。这些方法的优点在于它们不需要在具有N-和O-糖基化能力的宿主细胞中产生蛋白质。根据所使用的偶联方式，糖可连接于(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，例如半胱氨酸的巯基；(d)游离羟基，例如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的羟基；(e)芳族残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基，或者(I)谷氨酰胺的酰胺基。这些方法在WO 87/05330和Aplin and Wriston,1981,CRC Crit.Rev,Biochem.,pp.259-306中所述，二者均通过引用整体并入。
可通过化学或酶促方法去除存在于起始抗体(例如翻译后抗体)上的糖链部分。化学去糖基化需要使蛋白质暴露于化合物三氟甲磺酸或等同的化合物。该处理导致除连接糖(N-乙酰基葡糖胺或N-乙酰基半乳糖胺)之外的大多数或所有糖的裂解，而同时保持多肽完整。Hakimuddin et al.,1987,Arch.Biochem.Biophys.259:52和Edge et al.,1981,Anal.Biochem.118:131描述了化学去糖基化，二者均通过引用整体并入。多肽上糖链部分的酶促切割可通过多种内切和外切糖苷酶来实现，如Thotakura et al.,1987,Meth.Enzymol.138:350所述，其通过引用整体并入。潜在的糖基化位点的糖基化可通过使用化合物衣霉素来避免，如Duskin et al.,1982,0.1Biol.Chem.257:3105所述，其通过引用整体并入。衣霉素阻断蛋白质-N-糖苷键的形成。
抗体的另一种共价修饰类型包含以例如2005-2006PEG Catalog from Nektar Therapeutics(可在Nektar网站上获得)、美国专利No.4,640,835、No.4,496,689、No.4,301,144、No.4,670,417、No.4,791,192或No.4,179,337
(其全部通过引用整体并入)中所述的方式将抗体连接至多种非蛋白聚合物，包括但不限于各种多元醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯。另外，如本领域中已知，可在抗体内的多个位置进行氨基酸替换，以促进例如PEG聚合物的添加。参见例如美国公开No.2005/0114037A1，其通过 引用整体并入。
具体的CDR和可变区实施方案
本发明提供了多种抗体，每个抗体具有一组特定的CDR(包括，如上所述，一些氨基酸替换的CDR)。如上所述，抗体可通过一组6个CDR、可变区或重链和轻链全长(包括恒定区)来定义。另外，如上所述，还可进行氨基酸替换。通常，在CDR内的变化，由于CDR的长度较短，氨基酸的修饰通常根据氨基酸修饰的数目来描述。这也适用于讨论在可变序列、恒定序列或全长序列中引入的氨基酸修饰的数目。除氨基酸改变的数目之外，就“％同一性”来定义这些改变也是适合的。因此，如本文中所述，与本文中列出的SEQ ID NO具有80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的抗体包括在本发明内。在定义氨基酸序列相似性百分比时，本文中使用的术语“同源性”与“同一性”有相同含义。
对于IgG418抗体，其CDR组如下：重链的三个CDR包含SEQ ID NO:9(HCDR1)、SEQ ID NO:13(HCDR2)和SEQ ID NO:17(HCDR3)以及轻链的三个CDR包含SEQ ID NO:25(LCDR1)、SEQ ID NO:29(LCDR2)和SEQ ID NO:33(LCDR3)。
在一些实施方案中，提供了与本发明的抗体竞争结合人CD38的抗体(例如，scFv418或IgG418)。如本领域已知，可通过任何合适的技术来确定两种或更多种抗CD38抗体与CD38或CD38的一部分的竞争结合。
在本发明的上下文中，竞争是指在测试化合物的存在下，本发明的抗体(例如IgG418)结合其特定结合伴侣(例如CD38)的倾向可检测地显著降低。通常，竞争意指通过例如ELISA或 标准技术所测量的在竞争者存在下本发明的抗体与CD38的结合降低至少约10％至100％。因此，可设置竞争标准，其中，在抗体被认为具有足够的竞争性之前，检测到至少约10％的相对抑制，至少约15％的相对抑制，至少约20％的相对抑制。在竞争性抗体的表位与抗原紧邻的情况下，竞争可通过对CD38结合的大于约40％的相对抑制来确定，例如，至少约45％的抑制、至少约50％的抑制、至少约55％的抑制、至少约60％的抑制、至少约65％的抑制、至少约70％的抑制、至少约75％的抑制、至少约80％的抑制、至少约85％的抑制、至少约90％的抑制、至少约95％的抑制、或更高水平的相对抑制。
在一些情况下，如下文在诊断应用的背景中所讨论的，竞争结合测定的一种或更多种组分被标记。
也有可能是，抗CD38抗体与多于一个CD38表位和/或CD38的一部分之间存在竞争，例如CD38与抗体结合的特异区段位于呈现为片段，例如呈递良好的线性抗原位于不同的测试片段，或大的CD38片段及CD38分子中的构象表位。
评估竞争通常涉及使用本发明的抗体、CD38和测试分子来评价相对的结合抑制。测试分子可包括任何分子，包括其他抗体、小分子、肽等。以足以进行比较以告知关于所讨论的分子相对于其他存在的分子的选择性和/或特异性的信息的量来混合化合物。
测试化合物、CD38和本发明的抗体的量可变化。例如，对于ELISA评估，需要约5至50μg(例如约10至50μg、约20至50μg、约5至20μg、约10至20μg等)的抗CD38抗体和/或CD38靶标来评估是否存在竞争。条件也应适合于结合。通常，生理条件或接近生理的条件(例如，约20至40℃的温度，约7至8的pH等)适合于抗CD38与CD38的结合。
竞争通常以ELISA和/或FACS分析中显著大于约5％的相对抑制来确定。可设置较高的相对抑制阈值作为在特定背景下合适的竞争水平的标准/决定因素(例如，在竞争分析用于选择或筛选设计有预期阻断另一种肽或分子(例如CD38的天然结合伴侣，例如CD31，也称为CD31抗原、EndoCAM、GPIIA、PECAM-1、血小板/内皮细胞黏附分子或天然存在的抗CD38抗体)与CD38结合功能的新抗体的情况下)。
在一些实施方案中，本发明的抗CD38抗体特异性结合CD38中的一个或更多个残基或区域，但不与和CD38具有同源性的其他蛋白质(例如BST-1(骨髓基质细胞抗原-1)和Mo5(也称为CD157))交叉反应。
通常，缺乏交叉反应性意味着当在合适的测定条件下使用足够量的分子通过ELISA和/或FACS分析评估时，分子之间的相对竞争抑制小于约5％。
CD38活性的抑制
本文公开的抗体可用于阻断配体-受体相互作用或抑制受体组分相互作用。本发明的抗CD38抗体可以是“阻断的”或“中和的”。“中和抗体”是指与CD38结合而导致CD38的生物学活性被抑制的抗体，例如其与配体相互作用的能力、酶活性、信号传导能力，并且特别是其活化淋巴细胞的能力。可通过本领域已知的数种体外或体内测定标准来评估CD38的生 物学活性的抑制。
“抑制结合”或“阻断结合”(例如，当提及抑制/阻断CD38结合伴侣与CD38的结合时)包含部分和完全抑制/阻断二者。抑制/阻断CD38结合伴侣与CD38的结合可降低或改变CD38结合伴侣与CD38结合(没有抑制或阻断)时发生的细胞信号传导的正常水平或类型。与未与抗CD38抗体接触的配体相比，抑制和阻断也旨在包含当与抗CD38抗体接触时，CD38结合伴侣与CD38的结合亲和力的任何可测量的降低。例如，CD38结合伴侣与CD38的结合被阻断至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。
本文公开的抗CD38抗体也可以抑制细胞生长。与未与抗CD38抗体接触的细胞的生长相比，“抑制生长”包括当与抗CD38抗体接触时，可测量到相同细胞生长的降低，例如细胞培养物的生长被抑制至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。
在一些实施方案中，本文公开的抗CD38抗体能够耗尽活化的淋巴细胞和浆细胞。在本文中，“耗竭”意指与未经处理的动物相比，可测量到活化的淋巴细胞和/或浆细胞的血清水平(例如，如在食蟹猴中所测试的)降低。通常，可见耗竭至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。另外，如以下实施例中所示，本发明的抗体表现出的一个特别的优点是给药之后这些细胞的可恢复性。也就是说，如一些治疗(例如用抗CD20抗体)所知，细胞耗竭可持续长的时间段，而导致不希望的副作用。如本文中所示，本文公开的抗体对活化淋巴细胞和/或浆细胞的作用是可恢复的。
本发明抗体的制备方法
本发明还提供了用于产生所公开的抗CD38抗体的方法。这些方法包括培养包含编码本发明抗体的分离的核酸的宿主细胞。如本领域技术人员将理解的，这可根据抗体的性质以多种方式来完成。在一些实施方案中，本发明的抗体是全长传统抗体，例如重链可变区和轻链可变区是在产生的抗体并可被分离的条件下。
通常，本公开提供了编码本发明抗体的核酸。这样的多核苷酸编码每条重链和轻链的可变区和恒定区，根据本文中所述的组合物，本发明也包括其他组合。本发明还包括来源于上述公开的多核苷酸的寡核苷酸片段和与这些多核苷酸互补的核酸序列。
多核苷酸可以是RNA或DNA的形式。DNA、cDNA、基因组DNA、核酸类似物和合成DNA形式的多核苷酸在本发明的范围内。DNA可以是双链或单链，如果是单链，则可以是编码(有义)链或非编码(反义)链。编码多肽的编码序列可与本文中提供的编码序列相同，或者可以是不同的编码序列，由于遗传密码的冗余或简并性，该序列编码与本文中提供的DNA相同的多肽。
在一些实施方案中，将编码本发明抗体的核酸插入表达载体中，所述表达载体可以是染色体外的或被设计成整合入宿主细胞的基因组中。表达载体可包含任何数量的适当调控序列(包括但不限于转录和翻译调控序列、启动子、核糖体结合位点、增强子、复制起点等)或其他组分(选择基因等)，如本领域所公知的，所有这些都可操作地连接。在一些情况下，使用两种核酸并将其分别置于不同的表达载体中(例如，第一表达载体中的重链，第二表达载体中的轻链)，或者替代地可将它们置于同一表达载体中。本领域技术人员将理解，包括调节序列的选择的表达载体的设计可取决于例如宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等因素。
通常，可使用适合于所选宿主细胞的任何方法(例如，转化、转染、电穿孔、感染)将核酸和/或表达载体引入合适的宿主细胞中以产生重组宿主细胞，使得核酸分子可操作地连接至一个或更多个表达控制元件(例如，在载体中，在通过细胞中的过程产生的构建体中，整合到宿主细胞基因组中)。所得重组宿主细胞可在适合表达的条件下(例如，在诱导剂的存在下，在合适的非人动物中，在补充有合适的盐、生长因子、抗生素、营养补充剂等的合适培养基中)维持，由此产生编码的多肽。在一些情况下，重链在一个细胞中产生，轻链在另一个细胞中产生。
可用作表达宿主的哺乳动物细胞系是本领域已知的，包括可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)(Manassas,Va.)获得的许多永生化细胞系，包括但不限于中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)细胞、HEK 293细胞、NSO细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(baby hamster kidney，BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)和许多其他细胞系。非哺乳动物细胞(包括但不限于细菌、酵母、昆虫和植物)也可用于表达重组抗体。在一些实施方案中，抗体可在转基因动物(例如牛或鸡)中产生。
抗体分子生物学、表达、纯化和筛选的一般方法可参见：例如，Kontermann&Dubel抗体编辑的Antibody Engineering,Springer,Heidelberg, 2001和2010；Hayhurst&Georgiou,2001,Curr Opin Chem Biol 5:683-689；Maynard&Georgiou,2000,Annu Rev Biomed Eng 2:339-76；以及Morrison,S.(1985)Science 229:1202。
应用和适应症
本发明的抗体可用于多种应用中，包括CD38相关疾病的诊断和治疗。CD38相关病症
在一个方面中，本发明提供了诊断和治疗与炎症和免疫疾病相关的病症的方法，特别是与活化淋巴细胞相关的疾病。如本文中所示，CD38在未成熟的造血细胞中表达，在成熟细胞中下调，并在活化的淋巴细胞和浆细胞中以高水平重新表达。例如，高CD38表达见于活化的B细胞、浆细胞、活化的CD4 +T细胞、活化的CD8 +T细胞、NK细胞、NKT细胞、成熟的树突细胞(DC)和活化的单核细胞。
本发明的治疗性抗CD38抗体与CD38阳性细胞(例如活化的淋巴细胞)结合，通过多种作用机制(包括CDC、ADCC和ADCP途径)导致这些细胞的耗竭。
因此，可使用本发明的抗体来治疗具有CD38表达提高或表达CD38的细胞数量提高作为疾病的表征的任何自身免疫病。这些疾病包括但不限于系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、系统性硬化症(SSc)、多发性硬化症(MS)、炎症性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎、同种异体胰岛移植排斥、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪生病、抗嗜中性粒细胞胞质自身抗体(antineutrophil cytoplasmic autoantibody，ANCA)、肾上腺自身免疫病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性嗜中性粒细胞减少症、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少症、自身免疫性荨麻疹、白塞病、大疱性类天疱疮、心肌病、卡斯尔曼综合征、腹型斯泼卢腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、丘-斯综合征、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩病、皮肌炎、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、因子VIII缺乏、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球性肾炎、格雷夫斯病、格林-巴利、古德帕斯丘综合征、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease，GVHD)、桥本甲状腺炎、血友病A、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura，ITP)、IgA神经病、IgM多神经病、免疫介导 的血小板减少、幼年型关节炎、川畸病、扁平苔藓、红斑狼疮、梅尼埃病、混合性结缔组织病、多发性硬化、1型糖尿病、重症肌无力、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病关节炎、雷诺现象、赖特尔综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、舍格伦综合征、实体器官移植排斥、僵人综合征、系统性红斑狼疮、高安动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血栓性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、例如疱疹样皮炎血管炎的血管炎、白斑和韦格纳肉芽肿病。
特别地，在一些实施方案中，本发明抗体用于诊断和/或治疗多种疾病，所述疾病包括但不限于自身免疫疾病，包括但不限于系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)、系统性硬化症(SSc)、多发性硬化症(MS)、炎症性肠病(IBD)、糖尿病、移植物宿主疾病和溃疡性结肠炎。
例如，可选择具有高浆细胞含量的患者，例如表现出高浆细胞的SLE患者，以及表现出对基于CD20治疗无应答的RA患者。
在一个方面中，本发明提供了治疗与表达CD38的细胞的增殖相关的病症的方法，所述方法包括向患者施用药学有效量的所述抗体。在某些实施方案中，所述病症是癌症，并且在一些特定实施方案中，所述癌症是血液学癌症。在其他一些特定的实施方案中，所述病症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、浆细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、B细胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。
在本领域中已知某些病症与表达CD38的细胞相关，某些病症与细胞表面上CD38的过表达、高密度表达或上调表达相关。可通过本领域已知的方法来确定细胞群是否表达CD38，例如利用流式细胞术确定给定群中被特异性结合CD38的抗体标记的细胞百分比或免疫组化测定，如下面在诊断应用中通常所述。例如，在其中约10％至30％的细胞中检测到CD38表达的细胞群可被视为对CD38具有弱阳性；而在其中超过约30％的细胞中检测到CD38表达的细胞群可被视为对CD38具有明确阳性(如Jackson et al.(1988),Clin.Exp.Immunol.72:351-356)。其他标准也可用来确定细胞群是否表达CD38。可使用本领域已知的方法确定细胞表面表达的密度，例如流式细胞仪测量使用特异性结合CD38的抗体进行荧光标记的细胞的平均荧光强度。
在一些实施方案中，本发明的组合物和方法应用于癌症，例如血液系 统癌症。血液系统癌症是指形成血液的组织的恶性肿瘤，包含白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。与CD38表达相关的病症包括但不限于多发性骨髓瘤(Jackson et al.(1988),Clin.Exp.Immunol.72:351-356)、B细胞慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)(Dürig et al.(2002),Leukemia 16:30-5；Morabito et al.(2001),Leukemia Research 25:927-32；Marinov et al.(1993),Neoplasma 40(6):355-8；and Jelinek et al.(2001),Br.J.Haematol.115:854-61)、急性淋巴细胞性白血病(Keyhani et al.(1999),Leukemia Research 24:153-9；and Marinov et al.(1993),Neoplasma 40(6):355-8)、慢性粒细胞白血病(Marinov et al.(1993),Neoplasma 40(6):355-8)、急性髓细胞性白血病(Keyhani et al.(1999),Leukemia Research 24:153-9)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病或慢性髓性白血病(CML)、急性髓细胞性白血病或急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、毛细胞白血病(HCL)、骨髓增生异常综合症(MDS)或母细胞性慢性髓细胞性白血病以及通过本领域技术人员公知的形态学、组织化学和免疫学技术定义的这些白血病的所有亚型。
“肿瘤”或“肿瘤性病症”是指与细胞增殖相关的疾病，其特征在于细胞丧失正常控制导致一种或更多种症状，包括生长失控、分化缺乏、局部组织浸润和转移。
在本发明的一些实施方案中，血液系统癌症选自慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、急性髓细胞性白血病(AML)和急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
此外，本领域已知CD38表达是例如B细胞慢性淋巴细胞性白血病(Dürig et al.(2002),Leukemia 16:30-5；and Morabito et al.(2001),Leukemia Research 25:927-32)和急性髓细胞性白血病(Keyhani et al.(1999),Leukemia Research 24:153-9)患者的预后指标。
CLL是西方成年人中最常见的白血病。CLL涉及淋巴结和其他淋巴样组织的成熟淋巴细胞的克隆扩增，并伴有骨髓的逐渐浸润和出现在外周血中。B型CLL(B-CLL)代表了几乎所有情况。
B-CLL
B-CLL是一种无法治愈的疾病，其特征是积累在骨髓和外周血中的无反应性单克隆B谱系细胞的长期持续增多。CD38的表达被认为是B-CLL预后不良的独立因素。Hamblin et al.,Blood 99:1023-9(2002).
如今，B-CLL的标准治疗是姑息治疗，并且主要是通过细胞抑制药苯丁酸氮芥或氟达拉滨进行。当发生复发时，通常使用氟达拉滨、环磷酰胺联合利妥昔单抗(针对CD20的单克隆抗体)或campath(针对CD52的单克隆抗体)的组合治疗。因此，对B-CLL的治疗存在严重的未满足的医学需求。在一些实施方案中，本公开提供了使用抗CD38抗体治疗B-CLL的方法(并且如下文所述，这可使用任选和独立地包含上述任何药物的组合治疗来完成)。
B-CLL具有惰性和侵袭性两种亚型。这些临床表型与免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因中体细胞突变的存在与否相关。本文中所述惰性B-CLL是指在具有突变的IgVH基因和/或表现出与惰性B-CLL相关的一种或更多种临床表型的对象中的疾病。本文中所述侵略性B-CLL是指具有未突变的IgVH和/或表现出一种或更多种与侵略性B-CLL相关的临床表型的对象中的疾病。
多发性骨髓瘤
多发性骨髓瘤是B细胞谱系的恶性疾病，其特征在于骨髓中浆细胞的肿瘤性增生。当前的治疗方案显示出中等的应答率。然而，仅观察到总体存活率的微小变化，并且中位存活约为3年。因此，对于多发性骨髓瘤的治疗存在严重的未满足的医学需求。在一些实施方案中，提供了使用本发明公开的抗体治疗多发性骨髓瘤的方法。
CD38在作为终末分化B细胞的浆细胞上高表达。
骨髓瘤细胞的增殖会产生多种影响，包括骨骼中的溶解性病变(孔)、红血细胞数量降低、异常蛋白质的产生(伴随肾脏、神经和其他器官的损害)、免疫系统功能降低、以及血钙水平升高(高钙血症)。
当前的治疗选择包括化学疗法，优选在可能的情况下与自体干细胞移植(autologous stem cell transplantation，ASCT)结合进行。
意义未定的单克隆丙种球蛋白病和郁积性多发性骨髓瘤
在一些实施方案中，提供了使用本公开的抗体治疗单克隆丙种球蛋白病的方法。在其他实施方案中，提供了使用本公开的抗体治疗郁积性多发性骨髓瘤的方法。
意义未定的单克隆丙种球蛋白病(Monoclonal gammopathy of undetermined significance，MGUS)和郁积性多发性骨髓瘤(smoldering multiple myeloma，SMM)是无症状的恶性前疾病，其特征是骨髓中的单 克隆浆细胞增生，没有终末器官损害。
郁积性多发性骨髓瘤(SMM)是无症状的浆细胞增生性疾病，具有发展为有症状或活动性多发性骨髓瘤的高风险(N.Engl.J.Med.356(25):2582-2590(2007))。
关于SMM的国际共识标准于2003年被采用，其中要求患者的M蛋白水平>30g/L和/或骨髓克隆浆细胞>10％(Br.J.Haematol.121:749-57(2003))。患者必须没有器官或相关组织损伤，包括骨病变或症状(Br.J.Haematol.121:749-57(2003))。
最近的研究已确定了SMM的两个亚组，i)患有逐渐发展的疾病的患者和ii)患有非逐渐发展的疾病的患者(Br.J.Haematol.121:631-636(2003))。国际共识标准定义的MGUS要求患者的M蛋白水平<30g/L、骨髓浆细胞<10％，并且没有器官或相关组织损伤，包括骨病变或症状(Br.J.Haematol.121:749-57(2003))。
由于不存在终末器官损伤，SMM类似于意义未定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)(N.Engl.J.Med.356(25):2582-2590(2007))。然而，在临床上，SMM在20年中很可能发展为活动性多发性骨髓瘤或淀粉样变性(SMM概率为78％而MGUS为21％)(N.Engl.J.Med.356(25):2582-2590(2007))。
另外，最近的其他数项研究表明，CD38抗体治疗可消除肿瘤细胞对PD1/PDL1治疗的抗性。因此，本发明的抗CD38抗体通过与PD1/PDL1或其他免疫检查点靶向治疗的组合，不仅在骨髓瘤而且在所有其他种类的癌症中都有诊断和治疗应用。
用于体内施用的抗体组合物
本发明使用的抗体可通过将具有所需纯度的抗体与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备冻干制剂或水溶液形式的制剂用于储存(Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.[1980])。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，包括：缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质， 例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，例如钠；金属络合物(例如锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，例如TWEEN TM、PLURONICS TM或聚乙二醇(PEG)。
本文中的制剂还可包含对于所治疗的特定适应症所需的多于一种的活性化合物，优选彼此不造成不利影响的具有互补活性的化合物。例如，可提供具有其他特异性的抗体。替代地或另外，组合物可包含细胞毒性剂、细胞因子、生长抑制剂和/或小分子拮抗剂。这样的分子以对预期目有效的量存在于组合中。
活性成分也可被包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如，分别在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或大乳剂中的羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。这样的技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。
用于体内施用的制剂应该是无菌的或接近无菌的。通过无菌过滤膜的过滤可容易地实现这一点。
可制备成缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈定型制品的形式，例如膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯；水凝胶(例如，聚(甲基丙烯-2-羟基乙酯)或聚(乙烯醇))；聚交酯(美国专利No.3,773,919)；L-谷氨酸和γL-谷氨酸乙酯的共聚物；不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯；可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，例如LUPRON DEPOT TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球)；和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。某些聚合物例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能够持续释放分子超过100天，但某些水凝胶会在较短时间内释放蛋白。
当包封的抗体在体内长时间滞留时，由于暴露于37℃的潮湿环境，它们可能会变性或聚集，从而导致生物学活性丧失和免疫原性可能发生变化。根据所涉及的机制，可针对稳定性设计合理策略。例如，如果发现聚集机制是通过硫代-二硫键交换形成分子间S-S键，则可通过修饰巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制水分含量、使用适当的添加剂以及开发特定的聚合物基质组合物来实现稳定。
施用方式
根据例如通过推注静脉内施用或者通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内(intracerobrospinal)、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、经口、局部或吸入途径在一定时间段内连续输注的已知方法向对象施用本发明的抗体或化学治疗剂。优选静脉内或皮下施用抗体。
治疗方式
在本发明的方法中，治疗是针对疾病或病症提供积极的治疗应答。“积极的治疗应答”意指疾病或病症的改善和/或与疾病或病症相关症状的改善。例如，积极的治疗应答是指疾病的以下一种或更多种改善：(1)肿瘤细胞数量减少；(2)肿瘤细胞死亡的增加；(3)肿瘤细胞存活的抑制；(5)肿瘤生长的抑制(即，在某种程度上减慢，优选停止)；(6)患者存活率的提高；(7)与疾病或病症相关的一种或更多种症状的缓解。
可通过对特定疾病或病症的标准化应答标准来确定任何给定疾病或病症中的积极的治疗应答。肿瘤应答可通过肿瘤形态的变化(即，总体肿瘤负荷、肿瘤尺寸等)来评估，使用例如磁共振成像(MRI)扫描、X射线摄影成像、计算机断层摄影(CT)扫描、骨扫描成像、内窥镜检查和肿瘤活检采样(包括骨髓穿刺(BMA)和循环中肿瘤细胞计数)来进行的。
除这些积极的治疗应答之外，经受治疗的对象可在与疾病相关的症状改善方面获益。
因此，对于B细胞肿瘤，对象可经历所谓的B症状(即盗汗、发烧、体重减轻和/或荨麻疹)减轻。对于恶性前病症，用抗CD38治疗剂进行治疗可阻断和/或延长相关恶性病症发展之前的时间，例如，在意义未定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)对象中多发性骨髓瘤的发展。
疾病的改善可表征为完全应答。“完全应答”意指不存在临床可检测到的疾病，其中在骨髓瘤的情况下任何先前异常的射线摄影研究、骨髓和脑脊液(CSF)或异常单克隆蛋白均正常化。
在根据本发明的方法治疗之后，这样的应答可持续至少4至8周，或有时6至8周。或者，疾病的改善可归类为部分应答。“部分应答”意指在不存在新病变的情况下，所有可测量的肿瘤负荷(即，对象中存在的恶性细胞的数量，或测得的肿瘤块的体积或异常单克隆蛋白的数量)至少降低约50％，其可持续4至8周或6至8周。
根据本发明的治疗包含“治疗有效量”的所用药物。“治疗有效量”是指在需要的剂量和时间段内有效达到期望的治疗结果的量。
治疗有效量可根据例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药物在个体中引起期望应答的能力的因素而变化。治疗有效量也是抗体或抗体部分的任何毒性或有害作用均被治疗有益作用所抵消的量。
用于肿瘤治疗的“治疗有效量”也可通过其稳定疾病进展的能力来测量。可在动物模型系统中评价化合物抑制癌症的能力以预测其对人肿瘤的功效。
或者，可通过本领域技术人员已知的体外测定检查化合物抑制细胞生长或诱导细胞凋亡的能力来评价组合物的这种特性。治疗有效量的治疗化合物可降低肿瘤尺寸，或以其他方式改善对象的症状。本领域普通技术人员将能够基于例如对象的体型、对象的症状的严重程度以及所选择的特定组合物或施用途径等因素来确定治疗有效量。
可通过调整剂量方案来提供最佳的期望应答(例如治疗应答)。例如，可施用单次推注，可随时间施用数个分开的剂量，或者可按照治疗情况的紧急程度按比例降低或提高剂量。肠胃外组合物可配制成剂量单位形式，以便于给药和剂量的均匀性。本文中使用的剂量单位形式是指适合用于待治疗对象的单位剂量的物理上离散的单位；每个单元包含预定量的经计算与所需的药物载体相关联产生期望治疗效果的活性化合物。
本发明的剂量单位形式的规范由以下规定或直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗作用，以及(b)在配制这样的化合物用于治疗个体敏感性的技术中固有的局限。
用于本发明的抗CD38抗体的有效剂量和剂量方案取决于待治疗的疾病或病症，可由本领域技术人员确定。
本发明中使用的治疗有效量的抗CD38抗体的示例性、非限制性范围为约0.1至100mg/kg，例如约0、1至50mg/kg；例如约0.1至20mg/kg，例如约0.1至10mg/kg、例如约0.5、约例如0.3、约1或约3mg/kg。在另一个实施方案中，以1mg/kg或更多的剂量施用抗体，例如1至20mg/kg的剂量，例如5至20mg/kg的剂量，例如8mg/kg的剂量。
具有本领域普通技术的专业医务人员可容易地确定所需药物组合物的有效量并开具处方。例如，医师或兽医可以以低于获得期望治疗效果所需药物组合物的水平开始使用药物剂量，并逐渐提高剂量直至获得期望效 果。
在一个实施方案中，通过以10至500mg/kg(例如200至400mg/kg)的周剂量输注来施用抗CD38抗体。这样的施用可重复例如1至8次(例如3至5次)。可通过持续输注2至24小时(例如2至12小时)的时间来进行施用。
在一个实施方案中，如果需要降低包括毒性在内的副作用，则通过长时间(例如超过24小时)的缓慢连续输注来施用抗CD38抗体。
在一个实施方案中，以250mg至2000mg(例如300mg、500mg、700mg、1000mg、1500mg或2000mg)的周剂量施用多至8次(例如4至6次)的抗CD38抗体。可通过连续输注2至24小时(例如2至12小时)的时间来进行施用。这样的方案可根据需要重复一次或更多次，例如在6个月或12个月之后。可通过在施用之后在血液中测量本发明化合物的量来确定或调节剂量，例如通过取出生物样品并使用靶向抗CD38抗体抗原结合区的抗独特型抗体来确定或调节剂量。
在另一个实施方案中，每周施用一次抗CD38抗体，持续2至12周，例如3至10周，例如4至8周。
在一个实施方案中，通过维持治疗施用抗CD38抗体，例如，每周一次，持续6个月或更长的时间。
在一个实施方案中，通过包括一次输注抗CD38抗体，随后输注与放射性同位素缀合的抗CD38抗体的方案来施用抗CD38抗体。方案可例如在7至9天之后重复。
作为非限制性实例，根据本发明的治疗可以约0.1至100mg/kg的量提供抗体的日剂量，例如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg，在每24、12、8、6、4或2小时、或其任意组合使用单次或分次剂量进行；在开始治疗之后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天至少一次，或者，在开始治疗之后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、16、17、18、19或20周至少一次，或者其任意组合，
在一些实施方案中，抗CD38抗体分子与一种或更多种其他治疗剂(例 如化学治疗剂)联合使用。DNA损伤化学治疗剂的非限制性实例包括拓扑异构酶I抑制剂(例如，伊立替康、拓扑替康、喜树碱及其类似物或代谢物、和阿霉素)；拓扑异构酶II抑制剂(例如，依托泊苷、替尼泊苷和柔红霉素)；烷基化剂(例如，美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、噻替哌、异环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫斯汀、司莫斯汀、链脲菌素、达卡巴嗪、甲氨蝶呤、丝裂霉素C和环磷酰胺)；DNA嵌入剂(例如，顺铂、奥沙利铂和卡铂)；DNA嵌入剂和自由基产生剂，例如博来霉素；以及核苷类似物(例如，5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、氟达拉滨、阿糖胞苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和羟基脲)。
破坏细胞复制的化学治疗剂包括：紫杉醇、多烯紫杉醇、及相关类似物；长春新碱、长春碱、及相关类似物；沙利度胺、来那度胺、及相关类似物(例如CC-5013和CC-4047)；蛋白酪氨酸激酶抑制剂(例如甲磺酸伊马替尼和吉非替尼)；蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)；NF-κB抑制剂，包括IκB激酶抑制剂；与癌症中过表达的蛋白质结合并从而下调细胞复制的抗体(例如，曲妥珠单抗、利妥昔单抗、西妥昔单抗和贝伐单抗)；以及其他已知在癌症中被上调、过表达或激活的蛋白质或酶的抑制剂，其抑制作用下调细胞复制。
在一些实施方案中，可在 (硼替佐米)治疗之前、同时或之后使用本发明的抗体。
诊断用途
本公开所提供的抗CD38抗体也可用于与CD38相关的肿瘤或自身免疫病状态的体外或体内成像。在一些实施方案中，本文中所述的抗体用于诊断和治疗，或单独用于诊断。
在许多实施方案中，诊断抗体被标记。本文中的“标记的”意指本文中公开的抗体具有一种或更多种附接的元素、同位素或化学化合物，以使筛选或诊断程序中的检测得以进行。常见的标记有以下几类：a)免疫标记，其可以是整合入被抗体识别的融合伴侣的表位；b)同位素标记，其可以是放射性或重同位素；c)小分子标记，其可包含荧光染料和比色染料，或是例如能够实现其他标记方法的生物素的分子；以及d)例如颗粒(包括用于超声标记的气泡)的标记或允许人体成像的顺磁性标记。如本领域已知的，可将标记在任何位置并入抗体中，并且可在蛋白质表达期间在体外或体内并入。
诊断可通过施用如下所述允许进行全身成像的诊断抗体在体内进行，或者对从患者取出的样品在体外进行。在本文中，“样品”包含多种形式的物质，包括但不限于体液(包括但不限于血液、尿、血清、淋巴液、唾液、肛门和阴道分泌物、汗液和精液)以及例如来自相关组织的活检结果的组织样本。
在一些实施方案中，进行了体内成像，包括但不限于超声、CT扫描、X射线、MRI和PET扫描，以及光学技术，例如使用光学标记用于身体表面附近的肿瘤的那些。
与CD38相关疾病的体内成像可通过任何合适的技术进行。例如， 99Tc标记或用另一种发射β射线的同位素标记标记抗CD38抗体。该技术的多种变化可包括使用磁共振成像(MRI)来改善γ相机技术的成像。类似的免疫闪烁扫描方法和原理描述于例如Srivastava(ed.),Radiolabeled Monoclonal Antibodies For Imaging And Therapy(Plenum Press 1988),Chase，“放射性同位素的医学应用”描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Edition,Gennaro et al.,(eds.),pp.624-652(Mack Publishing Co.,1990)，和Brown的“单克隆抗体的临床使用”描述于Biotechnology And Pharmacy 227-49,Pezzuto et al.,(eds.)(Chapman&Hall 1993)。
在一个实施方案中，本发明提供了体内成像方法，其中将抗CD38抗体缀合到检测促进剂上，将缀合的抗体施用于宿主，例如通过注射进入血流中，并测定宿主中标记抗体的存在和位置。通过该技术和本文中提供的任何其他诊断方法，本发明提供了用于筛选与疾病相关的细胞在人患者或取自人患者的生物样品中的存在的方法。
对于诊断成像，可将放射性同位素直接或通过使用中间官能团间接与抗CD38抗体相连。可用的中间官能团包括螯合剂，例如乙二胺四乙酸和二亚乙基三胺五乙酸(参见例如美国专利No.5,057,313)。在涉及放射性同位素缀合的抗CD38抗体的诊断测定中，递送至患者的缀合抗CD38抗体的剂量通常维持在尽可能低的水平，在可检测和准确测量的情况下，可通过选择具有最小半衰期、最小体内保留和最小同位素量的最佳组合的同位素来进行。
除放射性同位素和不透射线剂之外，还可使用与染料(例如与生物素-链霉亲和素复合物)、造影剂、荧光化合物或分子和增强剂(例如顺磁性离子)缀合的抗CD38抗体以用于磁共振成像(MRI)(参见例如美国专利No.6,331,175，其描述了MRI技术和与MRI增强剂缀合的抗体的制备) 进行诊断的方法。这样的诊断/检测剂可选自用于磁共振成像的试剂和荧光化合物。
为了给抗CD38抗体加载放射性金属或顺磁性离子，可能需要使其与具有长链的试剂反应，在其上有多个用于结合离子的螯合基团。这样的链可以是聚合物(例如聚赖氨酸、多糖)，或具有可与螯合基团结合的侧基的其他衍生或可衍生链，所述螯合基团例如卟啉、多胺、冠醚，双鼠脲卡巴腙(bisthiosemicarbazones)、聚肟和已知可用于该目的的类似基团。
可使用标准化学方法将螯合物与抗CD38抗体偶联。螯合物通常通过能够使与分子的键形成且具有最小免疫反应性损失、最小聚集和/或内部交联的基团与抗CD38抗体连接。
潜在有用的金属螯合物组合物的实例包括2-苄基DTPA及其单甲基和环己基类似物，其与60keV至4,000keV的一般能量范围内的诊断同位素一起使用，例如用于放射成像的 125I、 123I、 124I、 62Cu、 64Cu、 18F、 111In、 67Ga、 99Tc、 94Tc、 11C、 13N、 5O和 76Br。
标记包括放射性核素、放射学造影剂、顺磁性离子、金属、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂。这样的诊断剂是公知的，并且可使用任何这样的已知诊断剂。诊断剂的非限制性实例可包括放射性核素，例如 110In、 111In、 177Lu、 18F、 52Fe、 62Cu、 64Cu、 67Cu、 67Ga、 68Ga、 86Y、 90Y、 89Zr、 94mTc、 94Tc、 99mTc、 120I、 123I、 124I、 125I、 131I、 154-158Gd、 32P、 11C、 13N、 15O、 186Re、 188Re、 51Mn、 52mMn、 55Co、 72As、 75Br、 76Br、 82mRb、 83Sr或者其他γ-、β-或正电子发射体。
使用的顺磁性离子可包括铬(III)、锰(II)、铁(III)、铁(II)、钴(II)、镍(III)、铜(III)、钕(III)、钐(III)、镱(III)、钆(III)、钒(II)、铽(III)、镝(III)、钬(III)或铒(III)。金属造影剂可包括镧(III)、金(III)、铅(II)或铋(III)。
超声造影剂可包含脂质体，例如充气脂质体。不透射线的诊断剂可选自化合物，例如钡化合物、镓化合物和铊化合物。
当与非放射性金属(如锰、铁和钆)配合时，这些和类似的螯合物可用于与抗CD38抗体相关的MRI诊断方法。大环螯合物(例如NOTA、DOTA和TETA)可与多种金属和放射性金属一起使用，最特别地，分别与镓、钇和铜的放射性核素一起使用。通过使环的尺寸适合感兴趣的金属，可使这样的金属螯合物络合物非常稳定。对于稳定结合核素(例如 223Ra)的其他环型螯合物(例如大环聚醚)也可适用于诊断方法。
因此，本发明提供了诊断性抗CD38抗体缀合物，其中所述抗CD38抗体缀合物与造影剂(例如用于磁共振成像、计算机断层摄影，或超声造影增强剂)或放射性核素(可以是例如发射γ-、β-、α-、俄歇电子或正电子的同位素)缀合。
抗CD38抗体还可用于例如检测特定细胞、组织或血清中感兴趣的抗原的表达。对于诊断应用，通常用可检测部分标记抗体以进行体外测定。如本领域技术人员将认识到的，有多种合适的标记可用于体外测试。用于本发明这一方面中的合适的染料包括但不限于荧光镧系元素络合物(包括铕和铽的那些)、荧光素、若丹明、四甲基若丹明、伊红、赤藓红、香豆素、甲基香豆素、量子点(也称为纳米晶体)；参见美国系列No.09/315,584，在此通过引用并入)、芘、孔雀石绿、二苯乙烯、萤虫黄、Cascade Blue TM、德克萨斯红、Cy染料(Cy3、Cy5等)、alexa染料(包括Alexa、藻红蛋白、bodipy以及其他由Richard P.Haugland撰写的《分子探针手册》第6版(在此通过引用明确并入)中所述的染料。
可通过评估被染色组织的放射性作为肿瘤中CD38相关肽含量的指标。通过使用这样的技术获得的图像可用于评估患者、哺乳动物或组织中CD38的生物分布，例如使用CD38作为侵入性癌细胞存在的生物标志物。制品
在其他实施方案中，提供了包含可用于治疗上述疾病的材料的制品，所述制品包含容器和标签。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。容器可由多种材料形成，例如玻璃或塑料。容器装有有效治疗病症的组合物，并且可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉注射溶液袋或带有可被皮下注射针穿透的塞子的小瓶)。组合物中的活性剂是抗体。容器上或与容器相关的标签表明组合物用于治疗所选病症。制品还可包含第二容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，例如磷酸盐缓冲盐水、林格液和右旋糖溶液。从商业和用户的角度来看，其还可包含其他所需材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针头、注射器和带有使用说明的包装插页。
实施例
通过参考以下实验实施例进一步详细描述本发明。提供这些实施例仅用于举例说明的目的，除非另有指明，否则不具有限制性。因此，本发明决不应解释为限于以下实施例，而是应解释为涵盖由于本文中提供的教导而变得明显的任何和所有变化。
无需进一步描述，认为本领域普通技术人员可使用前述说明和以下举例说明性实施例制备并利用本发明并实施所要求保护的方法。因此，以下工作实施例特别指出了本发明的一些优选实施方案，并且不应解释为以任何方式限制本公开内容的其余部分。
实施例1：酵母展示人scFv文库的筛选
构建了1×10 11酵母展示初始人scFv文库，并从ACRO biosystems购买了人CD38的胞外结构域。文库筛选的方法文献已有描述(Zhao et al.,J Immunol Methods.2011；363(2):221-32.)。简而言之，将重组生物素化的CD38-avi蛋白与诱导的酵母展示scFv文库一起孵育。使用链霉亲和素(SA)缀合的微珠然后使用流式细胞仪激活细胞分选(FACS)来分离结合CD38的酵母细胞。鉴定出的scFv被改造为完整抗体，并由293F细胞表达。
使用磁珠的酵母展示scFv文库筛选
将酵母展示scFv文库从-80℃解冻，并以3000rpm离心5分钟。丢弃上清液，并将酵母细胞重悬于12L SD-CAA培养基(1升SD-CAA培养基包含5g酪蛋白氨基酸、1.7g不含硫酸铵和氨基酸的酵母氮碱、5.3g硫化铵、10.2g Na 2HPO 4·7H 2O、8.6g NaH 2PO 4·H 2O和20g右旋糖)。将细胞在30℃以200rpm摇动培养过夜。第二天，3000rpm离心5分钟收获酵母细胞，并取适量重悬于12L S-CAA-GRD诱导培养基(1升S-CAA-GRD培养基含有5g酪蛋白氨基酸、1.7g不含硫酸铵和氨基酸的酵母氮碱、5.3g硫化铵、10.2g Na 2HPO 4·7H 2O、8.6g NaH 2PO 4·H 2O、1g右旋糖、20g半乳糖和20g棉子糖)，使得培养物最终浓度为OD600＝0.5，并在20℃下诱导过夜。3000rpm离心5分钟收获诱导的酵母细胞，并用2L PBE缓冲液(PBE缓冲液是含有2mM EDTA和0.5％BSA的PBS缓冲液)清洗两次，最后重悬于200ml PBE中。将细胞与40μg生物素化的CD38蛋白在室温(RT)下孵育1.5小时，然后4℃孵育0.5小时。以下步骤在4℃或在冰上完成。以3000rpm离心5分钟收获细胞，用2L PBE清洗两次，重悬于200ml PBE中。然后，将2ml链霉亲和素微珠(Miltenyi Biotec)添加至细胞，并缓慢摇动孵育1小时。将1升PBE添加至细胞，震荡以确保细胞分散为单个细胞，并使用70μm滤网过滤。通过AUTOMACS仪器分离结合CD38的酵母细胞。将收获的细胞铺在SD-CAA板上，并在30℃培养2天。从第一轮磁珠分选中获得了总共2.5×10 7个克隆。刮取细胞并诱导进行第二轮磁珠分选。留取部分于置于含有10％甘油 的SD-CAA中，-80℃储存。
使用流式分选的酵母展示scFv文库筛选
将从磁珠分选中获得的酵母细胞进一步进行流式分选。如果没有另外说明，所有离心均为3000rpm离心5分钟，并且所有步骤均在4℃或冰上进行。将从磁珠分选中分离出的2×10 9个细胞在100ml S-CAA-GRD培养基中20℃诱导过夜，从其中取出1×10 8个细胞用于流式分选。沉淀细胞并用15ml PBE清洗两次，然后重悬于1ml PBE中，与0.2mg生物素化的CD38蛋白在室温下孵育1.5小时，然后4℃孵育半小时。将细胞用PBE清洗3次，然后与50μl抗生物素素-PE(Invitrogen)在1ml PBE中4℃在黑暗中孵育1小时。染色之后，将细胞用15ml PBE清洗3次并重悬于1ml PBE中。通过流式细胞术分选结合CD38的酵母细胞。使分选的细胞于30℃在SD-CAA板上生长2天。
挑选单个克隆并使其在96深孔板中生长，并诱导表达scFv。通过流式细胞术鉴定与CD38特异性结合的单个克隆。
实施例2：将scFv418改造成IgG418
基于V-base和IMGT数据库，鉴定scFv418重链和轻链的种系，并将信号肽和恒定区添加到可变区，以组成编码重链和轻链全长肽的基因。将重链和轻链基因克隆到自建的完整抗体表达载体Lh1中，并由293F细胞表达，使用蛋白A(Protein A)亲和层析进行纯化。
实施例3：通过捕获ELISA测定IgG418的亲和力
用捕获ELISA测量IgG418和Darzalex对CD38重组蛋白的亲和力。简而言之，将抗人Fc抗体以10μg/ml的浓度包被在ELISA板上，4℃过夜。将板用PBST清洗两次，在室温下用PBSTM封闭2小时，并与从50nM 4倍连续稀释降至0.012nM的一式三份的IgG418一起孵育。将板用PBST清洗6次，然后与0.5μg/ml生物素化的CD38-avi重组蛋白在PBSTM中在室温下孵育1小时。清洗6次之后，将板与1:1000稀释的链霉亲和素-HRP(BD Bioscience)在PBSTM中在室温下孵育30分钟。再次清洗板6次，并在室温下用TMB孵育20分钟，用终止缓冲液终止比色反应，并在OD450读取吸光度。使用GraphPad Prism软件计算亲和力，其中Darzalex的Kd＝1.64nM，IgG418的Kd＝0.082nM(图1)。表1示ELISA 的读数。
表1：捕获ELISA的读数(OD450)
抗体浓度 IgG418 Darzalex
50nM 2.549 0.171
12.5nM 2.599 0.164
3.125nM 2.605 0.172
0.781nM 2.551 0.145
0.195nM 2.067 0.135
0.049nM 0.959 0.147
0.012nM 0.373 0.135
0nM 0.143 0.143
实施例4：通过流式细胞术测定IgG418的亲和力
以Darzalex作为对照，通过流式细胞术测量IgG418对Daudi细胞表面天然构象CD38的亲和力。如表2所示，将Daudi细胞用PBS清洗两次，并在冰上与连续稀释的抗体在FACS缓冲液(含2％FBS的PBS)中孵育1小时。将细胞用PBS清洗3次，并与1:200稀释的抗人IgG-Alexa647在FACS缓冲液中避光4℃孵育30分钟。用PBS清洗3次之后，使用流式细胞仪分析细胞。表2示出了每个样品的抗体浓度和平均荧光读数。使用GraphPad Prism软件计算亲和力，其中Darzalex的Kd＝3.256nM，并且IgG418的Kd＝3.1nM(图2)。
表2：流式细胞仪测定结果
实施例5：使用竞争性ELISA鉴定IgG418是否与Darzalex的结合表位相同
将ELISA板用2μg/ml Darzalex以50μl/孔包被(在PBS中)，4℃过夜。然后将板在室温下用PBSTM封闭2小时。然后将ELISA孔分别与CD38或抗体-CD38复合物一起孵育，所述抗体-CD38复合物是将抗体(15μg/ml)和CD38(0.2μg/ml)在室温下预孵育1小时而得。在4℃孵育30分钟后，将板用PBST清洗，并在室温下与链霉亲和素-HRP孵育30分钟。再次清洗板6次，并在室温下与TMB孵育20分钟。用终止缓冲液终止比色反应，在OD450处读取吸光度(图3)。竞争性ELISA显示，IgG418和Darzalex不竞争CD38上的结合位点，因此，它们的表位是不同的。
实施例6：IgG418的CDC活性
补体依赖性细胞毒性(CDC)是抗体杀伤抗原阳性细胞(例如肿瘤细胞或致病性浆细胞)的主要机制之一。IgG418和Darzalex的CDC活性分析如下：在96孔板中用完全培养基从20nM 2倍连续稀释抗体直至约0.078nM，100μl/孔。周围孔中填充有250μl/孔的水以防止蒸发。将板放入培养箱中预热以降低当添加人血清之后的凝聚。解冻并以6000rpm离心人血清5分钟以去除凝聚物。用9倍体积的完全培养基(含10％血清，相当于2x)稀释1体积的人血清，并用1:9稀释后的人血清重悬Daudi细胞，密度为4×10 4/100μl。然后将100μl细胞添加到每个含有抗体的孔中(已有100μl培养基中，总体积为200μl)，并在37℃孵育2小时。用完全培养基将7AAD稀释10倍，向每个孔中添加50μl稀释的7AAD，避光孵育5至10分钟。将细胞转移到1.5ml试管中，并在Accuri C6流式细胞仪上运行样品。图4示通过流式细胞术检测的CDC数据。只有P1是活细胞(7AAD阴性)，P2是完全释放了所有细胞质的死细胞，因此7AAD也是阴性(7AAD与DNA结合)；P3是释放了部分细胞质的刚死亡的细胞，因此7AAD是阳性的。因此，分析P1的比例以评价CDC活性。图5示CDC数据的统计分析。IgG418、Darzalex和IgG207的IC 50分别为9.8nM、 29.8nM和30459nM。IgG207是阴性对照抗体。
表3：CDC检测结果
实施例7：去岩藻糖基化IgG418的制备
抗体依赖性细胞毒性(ADCC)是抗体杀伤抗原阳性细胞的另一重要机制。在本领域已公认297N上糖基化的抗体会影响ADCC的功效。去岩藻糖基化的抗体通常具有10至100倍增强的ADCC活性。为了进一步提高ADCC活性，利用Antagen Pharmaceuticals Inc.的FUT8基因敲除的CHO-K1细胞系制备去岩藻糖基化的IgG-418，命名为IgG418AF。
实施例8：IgG418的ADCC活性
使用由Antagen Pharmaceuticals开发的经改造以萤光素酶信号作为ADCC活性指标的Jurkat细胞系作为效应细胞测量Darzalex和野生型(WT)以及去岩藻糖基化(AF)IgG418的ADCC活性。在Daudi细胞上进行ADCC测量。表4示抗体稀释浓度和相应的萤光素酶读数。结果表明，野生型IgG418(WT)的最大ADCC活性比Darzalex高1.4倍，去岩藻糖基化IgG418(AF)的最大ADCC活性比Darzalex高1.6倍，并且IC 50降低约10倍(表4和图6)
表4：ADCC检测结果
实施例9：IgG418对人B细胞淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤生长的抑制作用
CB-17SCID小鼠，SPF级，16.6-21.5g，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。Daudi细胞(南京科佰，货号：CBP60262)培养于1640完全培养基(Hyclone，货号：SH30809.01)，10％FBS(Hyclone，货号：SH30087.03)，100U/mL青霉素,100μg/mL链霉素(Hyclone，货号：SV30010)中，维持在5％CO2的37℃饱和湿度培养箱中。收集对数生长期Daudi细胞，重悬于1640完全培养基中，1:1加入基质胶，调整细胞浓度至2×10 7/ml。在无菌条件下，接种0.1ml细胞悬液至SCID小鼠右侧背部皮下，接种浓度为2×10 6/0.1mL/只。接种14天后，挑选肿瘤体积达到100-200mm 3左右时，将动物按肿瘤体积随机分组，每组9只，使各组肿瘤体积差异小于均值的10％，分组当日记为Day 0，共4组，分别为：
组1：同型对照抗体(Isotype)(10mg/kg)
组2：Darzalex(10mg/kg)(JBS2Y20西安杨森制药有限公司)
组3：IgG418-WT(10mg/kg)
组4：IgG418-AF(10mg/kg)
实验周期为31天，实验期间每周2次测定动物体重和肿瘤体积，记录数据。每日1次观察记录动物临床症状，给药全部结束观察至要求的时间，处死小鼠，取瘤。
肿瘤体积(tumor volume，TV)计算公式为：1/2×a×b2，其中a、b分别为肿瘤测量的长和宽。相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)计算公式为：Vt/V 0，其中V 0为分组时的肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抑瘤率(TGI％)计算公式为：(TWC-TWT)/TWC×100％，其中TWC为阴性对照组平均肿瘤重量，TWT为治疗组平均肿瘤重量。使用Prism GraphPad作图软件进行作图分析(平均值±SEM)，组间P值使用T检验进行统计分析。p<0.05，认为组间有显著差异；p<0.01，认为组间有极显著差异。结果如表5和图7所示。
表5 抗CD38单克隆抗体体内抑瘤结果(剂量：10mg/kg)
组别与剂量 肿瘤体积(mm 3) 抑瘤率(TGI)(％)
Isotype(10mpk) 1136.11±229.12 /
Darzalex(10mpk) 233.73±26.54** 79
IgG418-WT(10mpk) 141.24±14.46** 88
IgG418-AF(10mpk) 49.16±6.44** 96
备注：mpk表示mg/kg；与Isotype比较，**表示P＜0.01。
小鼠体内药效实验结果显示，与阴性对照Isotype相比，本公开人源化抗体IgG418-AF、IgG418-WT对人淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤模型均有显著的抑制作用。相比阴性对照Isotype(10mg/kg)组，IgG418-AF(10mg/kg)组和IgG418-WT(10mg/kg)组给药D21抑瘤率分别达到96％、88％，其抑瘤率均显著高于阳性对照Darzalex(10mg/kg)组(TGI：79％)，抑瘤效果优于Darzalex。实验给药期间各组动物体重均无明显影响，提示本公开的抗体无明显毒副作用。
实施例10：IgG418对人B细胞淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤生长抑制作用的剂量依赖效应
实验操作与肿瘤测量同实施例9。
组1：同型对照抗体(Isotype)(1mg/kg)
组2：Darzalex(1mg/kg)(JBS2Y20西安杨森制药有限公司)、
组3：IgG418-WT(1mg/kg)
组4：IgG418-AF(0.1mg/kg)
组5：IgG418-AF(0.3mg/kg)
组5：IgG418-AF(1mg/kg)
结果如表6和图8所示。
表6 抗CD38单克隆抗体体内抑瘤结果
组别与剂量 肿瘤体积(mm 3) 抑瘤率(TGI)(％)
Isotype(1mpk) 1178.9±109.5 /
Darzalex(1mpk) 544.8±91.9** 61
IgG418-WT(1mpk) 379.6±46.2** 76
IgG418-AF(0.1mpk) 1120.2±76.3 6
IgG418-AF(0.3mpk) 874.1±102.2 29
IgG418-AF(1mpk) 306.2±89.8** 84
备注：mpk表示mg/kg；与Isotype比较，**表示P＜0.001。
小鼠体内药效实验结果显示，与阴性对照Isotype相比，本公开人源化抗体IgG418-AF、IgG418-WT对人淋巴瘤Daudi SCID小鼠异种移植瘤模型均有显著的抑制作用。相比阴性对照Isotype(1mg/kg)组，IgG418-AF(1mg/kg)组和IgG418-WT(1mg/kg)组给药D21抑瘤率分别达到76％、84％，其抑瘤率均显著高于阳性对照Darzalex(1mg/kg)组(TGI：61％)，抑瘤效果优于Darzalex，且IgG418-AF各给药组抑瘤作用具有明显的剂量依赖效应实验给药期间各组动物体重均无明显影响，提示本公开的抗体无明显毒副作用。
本文中引用的每个专利、专利申请和出版物的公开内容均在此通过引用整体并入本文。虽然已经参考一些具体实施方案公开了本发明，但显然，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，本领域的其他技术人员可设 计出本发明的另一些实施方案和变体。所附权利要求书旨在被解释为包括所有这样的实施方案和等同变体。
本申请中列举的序列如下：
SEQ ID NO:1 人CD38
SEQ ID NO:2 scFv418核酸序列
SEQ ID NO:3 scFv418氨基酸序列
SEQ ID NO:4 scFv418VH核酸序列
SEQ ID NO:5 scFv418VH氨基酸序列
SEQ ID NO:6 scFv418VH框架区1(FR1)核酸序列
SEQ ID NO:7 scFv418VH框架区1(FR1)氨基酸序列
SEQ ID NO:8 scFv418VH CDR1核酸序列
SEQ ID NO:9 scFv418VH CDR1氨基酸序列
SEQ ID NO:10 scFv418VH框架区2(FR2)核酸序列
SEQ ID NO:11 scFv418VH框架区2(FR2)氨基酸序列
SEQ ID NO:12 scFv418VH CDR2区核酸序列
SEQ ID NO:13 scFv418VH CDR2区氨基酸序列
SEQ ID NO:14 scFv418VH框架区3(FR3)核酸序列
SEQ ID NO:15 scFv418VH框架区3(FR3)氨基酸序列
SEQ ID NO:16 scFv418VH CDR3区核酸序列
SEQ ID NO:17 scFv418VH CDR3区氨基酸序列
SEQ ID NO:18 scFv418VH框架区4(FR4)核酸序列
SEQ ID NO:19 scFv418VH框架区4(FR4)氨基酸序列
SEQ ID NO:20 scFv418VL核酸序列
SEQ ID NO:21 scFv418VL氨基酸序列
SEQ ID NO:22 scFv418VL框架区(FR1)核酸序列
SEQ ID NO:23 scFv418VL框架区(FR1)氨基酸序列
SEQ ID NO:24 scFv418VL CDR1核酸序列
SEQ ID NO:25 scFv418VL CDR1氨基酸序列
SEQ ID NO:26 scFv418VL框架区2(FR2)核酸序列
SEQ ID NO:27 scFv418VL框架区2(FR2)氨基酸序列
SEQ ID NO:28 scFv418VL CDR2核酸序列
SEQ ID NO:29 scFv418VL CDR2氨基酸序列
SEQ ID NO:30 scFv418VL框架区3(FR3)核酸序列
SEQ ID NO:31 scFv418VL框架区3(FR3)氨基酸序列
SEQ ID NO:32 scFv418VL CDR3区核酸序列
SEQ ID NO:33 scFv418VL CDR3区氨基酸序列
SEQ ID NO:34 scFv418VL框架区4(FR4)核酸序列
SEQ ID NO:35 scFv418VL框架区4(FR4)氨基酸序列
SEQ ID NO:36 IgG418重链核酸序列
SEQ ID NO:37 IgG418重链氨基酸序列
SEQ ID NO:38 IgG418重链信号肽核酸序列
SEQ ID NO:39 IgG418重链信号肽氨基酸序列
SEQ ID NO:40 IgG418轻链核酸序列
SEQ ID NO:41 IgG418轻链氨基酸序列
SEQ ID NO:42 IgG418轻链信号肽核酸序列
SEQ ID NO:43 IgG418轻链信号肽氨基酸序列

Claims (32)

  1. 包含抗体或抗体片段的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含以下一个或更多个成分：
    a.)轻链可变区的第一框架区(FR1)，其包含选自SEQ ID NO:23和与SEQ ID NO:23有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    b.)轻链可变区的互补决定区1(CDR1)，其包含选自SEQ ID NO:25和与SEQ ID NO:25有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    c.)轻链可变区的第二框架区(FR2)，其包含选自SEQ ID NO:27和与SEQ ID NO:27有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    d.)轻链可变区的互补决定区2(CDR2)，其包含选自SEQ ID NO:29和与SEQ ID NO:29有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    e.)轻链可变区的第三框架区(FR3)，其包含选自SEQ ID NO:31和与SEQ ID NO:31有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    f.)轻链可变区的互补决定区3(CDR3)，其包含选自SEQ ID NO:33和与SEQ ID NO:33有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    g.)轻链可变区的第四框架区(FR4)，其包含选自SEQ ID NO:35和与SEQ ID NO:35有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    h.)重链可变区的第一个框架区(FR1)，其包含选自SEQ ID NO:7和与SEQ ID NO:7有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    i.)重链可变区的互补决定区1(CDR1)，其包含选自SEQ ID NO:9和与SEQ ID NO:9有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    j.)重链可变区的第二个框架区(FR2)，其包含选自SEQ ID NO:11和与SEQ ID NO:11有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    k.)重链可变区的互补决定区2(CDR2)，其包含选自SEQ ID NO:13和与SEQ ID NO:13有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    l.)重链可变区的第三个框架区(FR3)，其包含选自SEQ ID NO:15和与SEQ ID NO:15有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    m.)重链可变区的互补决定区3(CDR3)，其包含选自SEQ ID NO:17和与SEQ ID NO:17有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    n.)重链可变区的第四个框架区(FR4)，其包含选自SEQ ID NO:19 和与SEQ ID NO:19有不低于90％同源性的氨基酸序列。
  2. 权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，
    所述重链可变区包含重链可变区的互补决定区1(CDR1)、重链可变区的互补决定区2(CDR2)和重链可变区的互补决定区3(CDR3)，所述重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3包含选自SEQ ID NO:9、13和17所示的氨基酸序列以及与SEQ ID NO:9、13和17有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    所述轻链可变区包含轻链可变区的互补决定区1(CDR1)、轻链可变区的互补决定区2(CDR2)和轻链可变区的互补决定区3(CDR3)，所述轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3包含选自SEQ ID NO:25、29和33所示的氨基酸序列以及与SEQ ID NO:25、29和33有不低于90％同源性的氨基酸序列。
  3. 权利要求2所述的组合物，其中
    所述重链可变区的CDR1包含选自SEQ ID NO:9和与SEQ ID NO:9有不低于90％同源性的氨基酸序列，所述重链可变区的CDR2包含选自SEQ ID NO:13和与SEQ ID NO:13有不低于90％同源性的氨基酸序列，和所述重链可变区的CDR3包含选自SEQ ID NO:17和与SEQ ID NO:17有不低于90％同源性的氨基酸序列，以及
    所述轻链可变区的CDR1包含选自SEQ ID NO:25和与SEQ ID NO:25有不低于90％同源性的氨基酸序列，所述轻链可变区的CDR2包含选自SEQ ID NO:29和与SEQ ID NO:29有不低于90％同源性的氨基酸序列，和所述轻链可变区的CDR3包含选自SEQ ID NO:33和与SEQ ID NO:33有不低于90％同源性的氨基酸序列。
  4. 权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含含有SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的重链。
  5. 权利要求1所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
  6. 包含抗体或抗体片段的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含以下一个或更多个成分：
    a.)重链信号肽，其包含选自SEQ ID NO:39和与SEQ ID NO:39有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    b).重链可变区，其包含选自SEQ ID NO:5和与SEQ ID NO:5有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    c.)轻链信号肽，其包含选自SEQ ID NO:43和与SEQ ID NO:43有不低于90％同源性的氨基酸序列；
    d.)轻链可变区，其包含选自SEQ ID NO:21和与SEQ ID NO:21有不低于90％同源性的氨基酸序列。
  7. 权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段选自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD和IgE，或者所述抗体或抗体片段具有IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgA或IgE的免疫球蛋白恒定区和/或可变区。
  8. 权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段包含λ或κ的轻链恒定区或其变体的部分或全部序列。
  9. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是重组抗体。
  10. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是单克隆抗体。
  11. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是多克隆抗体。
  12. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是单克隆抗体和/或多克隆抗体的混合物。
  13. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是人源性抗体。
  14. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是人源化抗体。
  15. 权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述抗体或抗体片段是嵌合型抗体。
  16. 包含分离的核酸分子的组合物，其中所述分离的核酸分子编码权利要求1至15任一项所述组合物所包含的抗体或抗体片段。
  17. 权利要求16所述的组合物，其中所述组合物是包含所述分离的核酸分子的载体。
  18. 权利要求17所述的组合物，其中所述载体选自：DNA、RNA、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体和逆转录病毒载体。
  19. 权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述组合物是包含所述抗体或抗体片段的细胞。
  20. 权利要求16所述的组合物，其中所述组合物是包含所述分离的核酸分子的细胞。
  21. 权利要求19至20中任一项所述的组合物，其中所述细胞是噬菌体、大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞，例如CHO、HEK293或PER.C6。
  22. 权利要求19至21中任一项所述的组合物，其中所述细胞是体外或体内的表达系统，例如经改造用于蛋白表达的动物。
  23. 治疗患有与CD38表达相关疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的权利要求1至20中任一项所述的组合物。
  24. 权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述组合物是抗体药物缀合物，其包含共价或非共价地可操作地连接至生物活性剂的所述抗体或抗体片段，其中所述生物活性剂是毒素、同位素、纳米颗粒、酶、生物活性肽或核酸。
  25. 权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含多特异性抗体，所述多特异性抗体结合相同或不同抗原上的两个或更多个不同表位，其中所述表位之一为CD38的表位。
  26. 权利要求25所述的组合物，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
  27. 治疗患有与CD38表达相关疾病的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的权利要求1至26中任一项所述的组合物。
  28. 诊断哺乳动物中与CD38表达相关疾病的存在的方法，所述方法包括用包含权利要求1至26中任一项所述的组合物的组合物对从所述哺乳动物中分离的组织样品进行检测或分析，所述抗体或抗体片段与所述组织样品的特异性结合提示在所述哺乳动物中存在与CD38表达相关的疾病。
  29. 权利要求1至26中任一项所述的组合物，其还包含药学上可接 受的载体、赋形剂、稳定剂、稀释剂、佐剂、细胞因子、趋化因子、化疗药物、其他治疗性药物、或其组合。
  30. 在对象中对CD38表达相关的疾病成像的方法，所述方法包括施加权利要求1至26中任一项所述的组合物的步骤，其中所述抗体或抗体片段可操作地连接至试剂。
  31. 权利要求30所述的方法，其中所述试剂是光活化剂、荧光染料、同位素、生物发光蛋白、生物发光肽、荧光标签、荧光蛋白、荧光肽、影像增强剂、酶、核磁共振活化剂或纳米颗粒。
  32. 权利要求27至31中任一项所述的方法，其中所述与CD38表达相关的疾病选自：增殖型疾病，例如癌症或恶性肿瘤或癌前病变；自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、系统性硬化症(SSc)、多发性硬化症(MS)；和非癌症的与CD38表达相关的自身免疫性疾病的相关适应症。
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Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US459007A (en) 1891-09-08 Porte
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3691016A (en) 1970-04-17 1972-09-12 Monsanto Co Process for the preparation of insoluble enzymes
CA1023287A (en) 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4195128A (en) 1976-05-03 1980-03-25 Bayer Aktiengesellschaft Polymeric carrier bound ligands
US4330440A (en) 1977-02-08 1982-05-18 Development Finance Corporation Of New Zealand Activated matrix and method of activation
CA1093991A (en) 1977-02-17 1981-01-20 Hideo Hirohara Enzyme immobilization with pullulan gel
US4229537A (en) 1978-02-09 1980-10-21 New York University Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
US5776093A (en) 1985-07-05 1998-07-07 Immunomedics, Inc. Method for imaging and treating organs and tissues
US5057313A (en) 1986-02-25 1991-10-15 The Center For Molecular Medicine And Immunology Diagnostic and therapeutic antibody conjugates
AU597574B2 (en) 1986-03-07 1990-06-07 Massachusetts Institute Of Technology Method for enhancing glycoprotein stability
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
EP0672142B1 (en) 1992-12-04 2001-02-28 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2270148A3 (en) 1999-04-09 2011-06-08 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
AU7950400A (en) 1999-10-19 2001-04-30 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Process for producing polypeptide
EP1174440A1 (en) * 2000-07-19 2002-01-23 U-BISys B.V. A selectively-expressed epitope on the human CD38 molecule detected by a phage display library-derived human scFv antibody fragment
CA2424977C (en) 2000-10-06 2008-03-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
ES2639222T5 (es) 2000-10-06 2023-11-24 Kyowa Kirin Co Ltd Células que producen unas composiciones de anticuerpo
IT1320715B1 (it) 2000-10-19 2003-12-10 Cselt Centro Studi Lab Telecom Modulo generatore di circuiti per la decodifica di codiciconvoluzionali, metodo per la generazione di tale tipo di circuito e
EP2354149B1 (en) 2000-12-12 2017-08-30 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
ES2271321T3 (es) 2001-08-03 2007-04-16 Tyco Healthcare Group Lp Marcador para ser usado con un aparato de marcacion de tejido.
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US7610156B2 (en) 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
RS59399B1 (sr) * 2005-03-23 2019-11-29 Genmab As Antitela protiv cd38 za lečenje multiplog mijeloma
DK1931709T3 (en) 2005-10-03 2017-03-13 Xencor Inc FC VARIETIES WITH OPTIMIZED FC RECEPTOR BINDING PROPERTIES
US10817851B2 (en) 2009-12-23 2020-10-27 Aristocrat Technologies Australia Pty Limited System and method for cashless gaming
BR112016009403A2 (pt) * 2013-10-31 2017-09-19 Sanofi Sa Anticorpos anti-cd38 específicos para tratamento de cânceres humanos
SG10201913447SA (en) * 2013-10-31 2020-02-27 Sanofi Sa Specific anti-cd38 antibodies for treating human cancers
US9732154B2 (en) * 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
IL307913A (en) * 2014-12-04 2023-12-01 Janssen Biotech Inc Anti-CD38 antibodies for the treatment of acute myeloid leukemia

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