CN116670140A - 用作囊性纤维化跨膜转导调节因子的调节剂的含有1,3,4-噁二唑环的大环 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的调节剂、含有至少一种此类调节剂的药物组合物、使用此类调节剂和药物组合物治疗囊性纤维化的方法以及用于制备此类调节剂的方法。

Description

用作囊性纤维化跨膜转导调节因子的调节剂的含有1,3,4-噁 二唑环的大环
本申请要求于2020年11月18日提交的美国临时申请第63/115,552号的权益，所述美国临时申请的内容通过引用整体并入。
本发明涉及囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的调节剂、含有所述调节剂的药物组合物、使用此类调节剂和药物组合物治疗囊性纤维化和CFTR介导的病症的方法以及用于制备此类调节剂的方法。
囊性纤维化(CF)是隐性遗传疾病，在全球范围内大约有83,000名儿童及成人受其影响。尽管CF的治疗取得一定进展，但仍无法治愈。
在CF患者中，呼吸道上皮中内源性表达的CFTR的突变导致顶端阴离子分泌减少，从而使得离子和液体转运失衡。由此引起的阴离子转运减少导致肺中粘液累积增加，并且伴随微生物感染，最终导致CF患者死亡。除呼吸系统疾病之外，CF患者通常患有胃肠道问题和胰腺功能不全，如果不治疗，则会导致死亡。另外，大多数患有囊性纤维化的男性不育，并且患有囊性纤维化的女性的生育力降低。
CFTR基因的序列分析已揭露出多种引起疾病的突变(《切割(Cutting)》,G.R.等人(1990)《自然(Nature)》346:366-369；Dean,M等人(1990)《细胞(Cell)》61:863:870；以及Kerem,B-S等人(1989)《科学(Science)》245:1073-1080；Kerem,B-S等人(1990)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》87:8447-8451)。迄今为止，已识别出CF基因中超过2000个突变；目前，CFTR2数据库仅含关于这些已识别突变中的322个的信息，有足够的证据将281个突变定义为致病性的。最普遍的致病突变是CFTR氨基酸序列的508位处的苯丙氨酸缺失，并且通常被称为F508del突变。此突变出现在许多囊性纤维化病例中，并且与严重疾病相关。
CFTR是在包含吸收性和分泌性上皮细胞的各种细胞类型中表达的cAMP/ATP介导的阴离子通道，其中所述CFTR调控跨膜的阴离子通量以及其它离子通道和蛋白质的活性。在上皮细胞中，CFTR的正常功能对于维持电解质在全身(包含呼吸和消化组织)的转运至关重要。CFTR由编码蛋白质的1480个氨基酸构成，所述蛋白质由跨膜结构域的串联重复序列构成，每个跨膜结构域含有六个跨膜螺旋和核苷酸结合结构域。两个跨膜结构域通过大的极性调控(R)结构域与多个磷酸化位点连接，从而调控通道活性和细胞运输。
氯化物转运由存在于顶端膜上的ENaC(上皮钠通道)和CFTR以及细胞的基底外侧表面上表达的Na+-K+-ATP酶泵和Cl-通道的协调活性进行。来自腔侧的氯化物的继发性主动转运导致细胞内氯化物的积累，接着其可经由Cl-通道被动地离开细胞，从而导致媒介转运。Na+/2Cl-/K+共转运蛋白、Na+-K+-ATP酶泵和基底外侧表面上的基底外侧膜K+通道以及腔侧上的CFTR的布置协调氯化物的分泌。由于水自身可能无法主动转运，因此其跨上皮的流动取决于由钠和氯化物的大量流动所产生的微小跨上皮渗透梯度。
最近已识别出多种CFTR调节剂。这些调节剂可以表征为例如增效剂、校正剂、增效剂增强剂/共增效剂、扩增剂、通读剂和核酸疗法。增加在上皮细胞表面处的突变型和野生型CFTR的通道门控活性的CFTR调节剂被称为增效剂。校正剂改善了错误的蛋白质加工和由此产生的向上皮表面的运输。Ghelani和Schneider-Futschik(2020)《ACS药理学与转化科学(ACS Pharmacol.Transl.Sci.)》3:4-10。美国FDA批准了用于治疗囊性纤维化的三种CFTR校正剂。然而，使用一些CFTR校正剂的单一疗法尚未被发现足够有效，并且因此需要与增效剂的联合疗法来增强CFTR活性。目前只有一种CFTR增效剂被批准用于治疗囊性纤维化。因此，尽管囊性纤维化的治疗已通过这些新的小分子CFTR调节剂进行转化，但需要新的和更好的调节剂来预防疾病进展、降低囊性纤维化和其它CFTR介导的疾病的严重性以及治疗这些疾病的更严重形式。
本发明的一个方面提供了新型化合物，包含式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐。
例如，式I的化合物可以如下描绘：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2RYN1，其中每个RYN1独立地选自C1-C4烷基和C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、
-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自羟基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自其中环C选自C6-C10芳基和5至10元杂芳基；
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基、NH2、NH(CO)(C1-C6烷基)以及C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；
n选自4、5、6、7和8；并且
m选自0、1、2和3。
在式I的一些实施例中，X是-N(RX1)-。
在式I的一些实施例中，X是
在式I的一些实施例中，X选自：
-NH-、-N(CH3)-、-N(CH2CH3)-、
在式I的一些实施例中，
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-CO2RY1和-CON(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
在式I的一些实施例中，每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基。
在式I的一些实施例中，每个Q独立地选自C6-C10芳基。
在式I的一些实施例中，每个Q是苯基。
在式I的一些实施例中，
每个RY独立地选自：
氢、羟基、-CH3、-CD3、-CH2CH3、
或同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢吡喃基和四氢呋喃基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
在式I的一些实施例中，环B选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
在式I的一些实施例中，环B选自苯基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和吡啶基。
在式I的一些实施例中，环B选自：
在式I的一些实施例中，n选自4、5、6和7。
在式I的一些实施例中，-(Y)n是选自以下的基团：
在式I的一些实施例中，每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2和-PO(R2)2。
在式I的一些实施例中，每个R2独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷氧基的基团取代)。
在式I的一些实施例中，每个R1独立地选自-Br、
-CF3、-NH2、-CH3、-CH(CH3)2、-CN、-OH、-OCH3、-NH(CH3)、-NH(CH2CH3)、-CONH2,
-CO2CH3、-SO2CH3、-SO2Ph、PO(CH3)2、B(OH)2、苯基、吡啶基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、环丙基、环己基、咪唑基、
在式I的一些实施例中，Z选自其中环C选自C6-C10芳基。
在式I的一些实施例中，基团：
选自：
在式I的一些实施例中，基团：
是
在式I的一些实施例中，RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基。
在式I的一些实施例中，RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)。
在式I的一些实施例中，
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
在式I的一些实施例中，
RZ1选自氢、CH3、CF3、CH2OH、苯基、环丙基和四氢吡喃基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
在式I的一些实施例中，RZ2是羟基。
在式I的一些实施例中，Z选自：
在式I的一些实施例中，Z是在式I的一些实施例中，Z是在式I的一些实施例中，Z是在式I的一些实施例中，Z是其中(R)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则(Cahn-Ingold-Prelog convention)下的中心碳原子的立体化学标示。在式I的一些实施例中，Z是其中(S)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则下的中心碳原子的立体化学标示。
在式I的一些实施例中，m选自1和2。
在一些实施例中，本发明的化合物由式I'涵盖：
并且包含其氘化衍生物以及这些化合物和氘化衍生物的药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2Me；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、
-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；
n选自4、5、6和7；并且
m选自0、1、2和3。
在一些实施例中，式I化合物选自式I"化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I所定义的。
在式I"的一些实施例中，化合物的部分由以下表示：是其中(R)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则下的中心碳原子的立体化学标示。在式I"的一些实施例中，化合物的部分由以下表示：是其中(S)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则下的中心碳原子的立体化学标示。
本发明的化合物还包含式Ia、IIa、IIb、IIc、IId、IIe、IIf、IIg和IIh的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I'所定义的。
本发明的化合物还包含式Ia'、IIa'、IIb'、IIc'、IId'、IIe'、IIf'、IIg'和IIh'的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I所定义的。
在式Ia'、IIa'、IIb'、IIc'、IId'、IIe'、IIf'、IIg'和IIh'的一些实施例中，化合物的部分由以下表示：是其中(R)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则下的中心碳原子的立体化学标示。在式I"的一些实施例中，化合物的部分由以下表示：是其中(S)是指在卡恩-英格尔—普雷洛格规则下的中心碳原子的立体化学标示。
本发明的另一方面提供了药物组合物，所述药物组合物包括至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体，所述组合物可以进一步包含至少一种另外的活性药物成分。因此，本发明的另一方面提供了治疗CFTR介导的疾病囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体，任选地作为药物组合物的一部分，所述药物组合物包括至少一种另外的组分。
在某些实施例中，本发明的药物组合物包括至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐。在一些实施例中，包括至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐的组合物可以任选地进一步包括至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐。
本发明的另一方面提供了治疗CFTR介导的疾病囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用至少一种选自以下的化合物：本文所公开的新型化合物、其药学上可接受的盐以及前述中的任一项的氘化衍生物；以及任选地进一步施用一种或多种选自以下的另外的CFTR调节剂：(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物II)、N-[2,4-双(1,1-二甲基乙基)-5-羟基苯基]-1,4-二氢-4-氧代喹啉-3-甲酰胺(化合物III)或N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺(化合物III-d)、3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物IV)、N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物V)、N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物VI)、(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮(化合物VII)、(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮(化合物VIII)；N-(苯磺酰基)-6-(3-氟-5-异丁氧基-苯基)-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物IX)和N-[(6-氨基-2-吡啶基)磺酰基]-6-(3-氟-5-异丁氧基-苯基)-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物X)。
本发明的另一方面提供了治疗CFTR介导的疾病囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐；以及任选地进一步施用一种或多种选自以下的另外的CFTR调节剂：
(ASP-11)，公开于《囊性纤维化期刊(Journal ofCystic Fibrosis)》(2018),17(5),595-606，以及：
(奈索卡托(nesolicaftor)或PTI-428)，公开于WO 2016/105485。在一个实施例中，另外的CFTR调节剂是ASP-11。在一个实施例中，另外的CFTR调节剂包括PTI-428。
本发明的另一方面提供了治疗CFTR介导的疾病囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'化合物的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐；以及任选地进一步施用一种或多种选自以下的另外的CFTR调节剂：
(加利卡托(galicaftor)或ABBV-2222)，公开于美国专利申请公开第2016-0120841号；
(ABBV-3221)，公开于WO 2018/065921；
(波塞纳卡托(posenacaftor)或PTI-801)，公开于WO2017/062581；ABBV-2851，公开于WO 2017/009804；GLPG2737，公开于美国专利申请公开第2017-0101405号；ABBV-3748；ABBV-3903；以及ABBV-119。
附图说明
图1提供了无定形化合物4(纯形态)的X射线粉末衍射(XRPD)图。
图2提供了无定形化合物4(纯形态)的热重分析(TGA)曲线。
图3提供了无定形化合物4(纯形态)的DSC分析。
图4提供了无定形化合物19(纯形态)的XRPD图。
图5提供了无定形化合物19(纯形态)的TGA曲线。
图6提供了无定形化合物19(纯形态)的DSC分析。
图7提供了结晶化合物41形态A的XRPD图。
图8提供了结晶化合物41形态A的TGA曲线。
图9提供了结晶化合物52形态A(纯)的XRPD图。
图10提供了结晶化合物52形态A(纯)的TGA曲线。
图11提供了结晶化合物52形态A(纯)的DSC分析。
图12提供了无定形化合物60(纯形态)的XRPD图。
图13提供了无定形化合物60(纯形态)的TGA曲线。
图14提供了无定形化合物60(纯形态)的DSC分析。
图15提供了无定形化合物70(纯形态)的XRPD图。
图16提供了结晶化合物163形态A(纯)的XRPD图。
图17提供了结晶化合物163形态A(纯)的DSC分析。
图18提供了无定形化合物173(纯形态)的XRPD图。
图19提供了无定形化合物173(纯形态)的TGA曲线。
图20提供了无定形化合物173(纯形态)的DSC分析。
定义
如本文所使用的，“化合物II”是指(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，所述化合物可以用以下结构描绘：
化合物II可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物II以及制备和使用化合物II的方法公开于WO 2010/053471、WO 2011/119984、WO 2011/133751、WO 2011/133951和WO2015/160787，各自通过引用并入本文。
如贯穿本公开所使用的，“化合物III”是指N-(5-羟基-2,4-二-叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺，所述化合物通过以下结构描绘：
化合物III也可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物III以及制备和使用化合物III的方法公开于WO 2006/002421、WO 2007/079139、WO 2010/108162和WO 2010/019239，各自通过引用并入本文。
在一些实施例中，化合物III的氘化衍生物(化合物III-d)用于本文所公开的组合物和方法中。化合物III-d的化学名称是N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺，如以下结构所描绘的：
化合物III-d可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物III-d以及制备和使用化合物III-d的方法公开于WO 2012/158885、WO 2014/078842和美国专利第8,865,902号，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物IV”是指3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物IV可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物IV以及制备和使用化合物IV的方法公开于WO 2007/056341、WO 2009/073757和WO 2009/076142，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物V”是指N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物V可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物V以及制备和使用化合物V的方法公开于WO 2018/107100和WO 2019/113476，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物VI”是指N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物VI可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物VI以及制备和使用化合物VI的方法公开于WO 2018/064632，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物VII”是指(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物VII可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物VII以及制备和使用化合物VII的方法公开于WO 2019/161078、WO 2020/102346和PCT申请第PCT/US2020/046116号，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物VIII”是指(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物VIII可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物VIII以及制备和使用化合物VIII的方法公开于WO 2020/206080，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物IX”是指N-(苯磺酰基)-6-(3-氟-5-异丁氧基-苯基)-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物IX可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物IX以及制备和使用化合物IX的方法公开于WO 2016/057572，通过引用并入本文。
如本文所使用的，“化合物X”是指N-[(6-氨基-2-吡啶基)磺酰基]-6-(3-氟-5-异丁氧基-苯基)-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺，所述化合物通过以下化学结构描绘：
化合物X可以呈药学上可接受的盐的形式。化合物X以及制备和使用化合物X的方法公开于WO 2016/057572，通过引用并入本文。
如本文所使用的，术语“烷基”是指含有碳原子(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子)的饱和支链或非支链的脂肪族烃。烷基可以是经取代的或未经取代的。
如本文所使用的，术语“π键”是指由相邻原子的p轨道形成的共价键。π键在两个原子之间存在多个键(即双键或三键)的情况下存在。例如，碳碳双键由一个π键组成，并且碳碳三键由两个π键组成。
如本文所使用的，术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基。
如本文所使用的，术语“氟代烷基”是指被一个或多个氟原子取代的烷基。在一些实施例中，氟代烷基被1-6个氟原子取代。在一些实施例中，氟代烷基是全氟化的。
如本文所使用的，术语“烷氧基”是指与氧原子共价键合的烷基或环烷基。烷氧基可以是经取代的或未经取代的。
如本文所使用的，术语“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷氧基。
如本文所使用的，术语“氟代烷氧基”是指被一个或多个氟原子取代的烷氧基。在一些实施例中，氟代烷氧基被1-6个氟原子取代。在一些实施例中，氟代烷氧基是全氟化的。
如本文所使用的，“环烷基”是指具有3至12个碳(如3-10个碳)的环状、双环、三环或多环非芳香族烃基。“环烷基”涵盖单环、双环、三环、桥连环、稠合环和螺环，包含单螺环和二螺环。环烷基的非限制性实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、金刚烷基、降冰片基和二螺[2.0.2.1]庚烷。环烷基可以是经取代的或未经取代的。
如本文所使用的，术语“杂芳基环”是指包括至少一个环原子的芳香族环，所述至少一个环原子是杂原子，如O、N或S。
如本文所使用的，术语“杂环基环”和“杂环基”是指包括至少一个环原子的在环中含有3至12个原子(如3-10个原子)的非芳香族烃，所述至少一个环原子是杂原子，如O、N、S或Si。“杂环基”环涵盖单环、双环、三环、多环、桥连环、稠合环和螺环，包含单螺环和二螺环。
“经取代的”指示“经取代的”基团中的至少一个氢被取代基置换。除非另外指示，否则“任选地经取代”的基团可在所述基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被选自指定基团的多于一个取代基取代时，在每个位置处的取代基可以相同或不同。
用于氮的保护基的实例包含例如氨基甲酸叔丁酯(Boc)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、四氢吡喃基(THP)、氨基甲酸9-芴基甲基酯(Fmoc)、氨基甲酸苄酯(Cbz)、氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、氨基甲酸2-三甲基硅烷基乙酯(Teoc)、氨基甲酸烯丙酯(Aloc或Alloc)、甲酰胺、乙酰胺、苯甲酰胺、烯丙胺、三氟乙酰胺、三苯甲胺、亚苄基胺和对甲苯磺酰胺。氮保护基的完整列表可见于Wuts,P.G.M.“《格林氏有机合成中的保护基团：第五版(Greene's Protective Groups in Organic Synthesis:Fifth Edition)”,2014,约翰·威利父子出版公司(John Wiley and Sons)。
如本文所使用的，“氘化衍生物”意指相同的化学结构，其中一个或多个氢原子被氘原子置换。
如本文所使用的，“CFTR”意指囊性纤维化跨膜转导调节因子。
如本文所使用的，术语“CFTR调节剂”是指增加CFTR的活性的化合物。由CFTR调节剂引起的活性增加包含但不限于校正、增效、稳定化和/或扩增CFTR的化合物。
如本文所使用的，术语“CFTR校正剂”是指促进CFTR的加工和运输以增加细胞表面处的CFTR的量的化合物。
如本文所使用的，术语“CFTR增效剂”是指增加位于细胞表面处的CFTR蛋白的通道活性，从而导致离子转运增强的化合物。本文所公开的新型化合物是CFTR增效剂。
如本文所使用的，术语“CFTR增效剂增强剂”、“CFTR增效增强剂”和“CFTR共增效剂”可互换使用，并且是指增强CFTR增效的化合物。
如本文所使用的，术语“活性药物成分”(“API”)或“治疗剂”是指生物活性化合物。
术语“患者”和“受试者”可互换使用，并且是指包含人的动物。
术语“有效剂量”和“有效量”在本文中可互换使用，并且是指产生施用化合物所期望的效应(例如，改善CF或CF的症状，或减轻CF或CF的症状的严重程度)的化合物的量。有效剂量的确切量将取决于治疗目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，Lloyd(1999)《药物复合的艺术、科学和技术(The Art,Science and Technology ofPharmaceutical Compounding)》)。
本文所使用的，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等通常意指改善受试者的CF的一种或多种症状，或减轻CF或CF的一种或多种症状的严重程度。如本文所使用的，“治疗”包含但不限于以下：受试者的生长增加、体重增益增加、肺中粘液减少、胰腺和/或肝功能改善、胸部感染减轻和/或咳嗽或呼吸急促减轻。可以根据本领域已知的标准方法和技术容易地评估这些症状中任一者的改善或其严重程度的减轻。
如本文所使用的，当提及两种或更多种化合物、药剂或另外的活性药物成分时，术语“与…组合”意指在彼此之前、与其同时或在其之后向患者施用两种或更多种化合物、药剂或活性药物成分。
当与组合物或剂型的成分的剂量、量或重量百分比结合使用时，术语“约”和“大约”包含由本领域的普通技术人员所认定提供了与由指定剂量、量或重量百分比获得的药理学作用等效的药理学效应的指定剂量、量或重量百分比的值或所述剂量、量或重量百分比的范围。术语“约”和“大约”可以是指由本领域技术人员确定的特定值的可接受误差，其部分取决于如何测量或确定所述值。在一些实施例中，术语“约”和“大约”意指给定值或范围的20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％以内。如本文所使用的，紧接数值之前出现的符号“～”具有与术语“约”和“大约”相同的含义。
如本文所使用的，术语“溶剂”是指其中产物至少部分可溶(产物的溶解度>1g/L)的任何液体。
如本文所使用的，术语“室温”或“环境温度”意指15℃至30℃。
应理解，本发明的某些化合物可以作为单独立体异构体或对映异构体和/或那些立体异构体或对映异构体的混合物存在。如本文所公开的化学结构中所使用的，与立体原子的“楔形”或“散列”键指示已知绝对立体化学的手性中心(即，一种立体异构体)。如本文所公开的化学结构中所使用的，与立体原子的“波浪”键指示未知绝对立体化学的手性中心(即，一种立体异构体)。如本文所公开的化学结构中所使用的，与双键碳的“波浪”键指示E/Z异构体的混合物。如本文所公开的化学结构中所使用的，与立体原子的/(“直”)键指示其中存在混合物(例如，外消旋体或富集物)。如本文所使用的，与双键碳的两个/(“直”)键指示双键具有如所绘制的E/Z立体化学。如本文所公开的化学结构中所使用的，(即，与基团“A”的“直”键垂直的“波浪”线)指示基团“A”是其附着点位于在“波浪”线处终止的键的末端处的取代基。
本文所公开的某些化合物可以作为互变异构体存在，并且两种互变异构形式都是预期的，即使仅描绘单一互变异构结构。例如，化合物A的描述应理解为包含其互变异构体化合物B，且反之亦然，以及其混合物：
如本文所使用的，“最低功能(MF)突变”是指与最低CFTR功能(极低至无功能CFTR蛋白)相关的CFTR基因突变，并且包含例如与CFTR通道打开和关闭的能力的严重缺陷相关的突变，被称为缺陷型通道门控或“门控突变”；与CFTR的细胞加工及其向细胞表面的递送的严重缺陷相关的突变；与没有(或最少)CFTR合成相关的突变；以及与通道转导的严重缺陷相关的突变。
如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指本公开的化合物的盐形式，其中盐是无毒的。本公开的化合物的药学上可接受的盐包含衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐。例如，化合物的“游离碱”形式不含离子键结的盐。
关于本发明的一种或多种化合物或式，短语“以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物”与“以及其药学上可接受的盐和前述中的任一项的氘化衍生物”可互换使用。这些短语旨在涵盖所提及的化合物中的任一项的药学上可接受的盐、所提及的化合物中的任一项的氘化衍生物以及那些氘化衍生物的药学上可接受的盐。
本领域的普通技术人员将认识到，当公开“化合物或其药学上可接受的盐”的量时，化合物的药学上可接受的盐形式的量是等效于化合物的游离碱的浓度的量。应注意，本文的化合物或其药学上可接受的盐的公开量是基于其游离碱形式。
合适的药学上可接受的盐是例如S.M.Berge等人《药物科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中所公开的那些盐。例如，所述文章的表1提供了以下药学上可接受的盐：
表1：
药学上可接受的酸加成盐的非限制性实例包含：用无机酸，如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸或高氯酸形成的盐；用有机酸，如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐；以及通过使用本领域中使用的其它方法，如离子交换形成的盐。药学上可接受的盐的非限制性实例包含己二酸盐、褐藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐和戊酸盐。衍生自适当碱的药学上可接受的盐包含碱金属、碱土金属、铵和N+(C1-4烷基)4盐。本公开还设想本文公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。碱金属和碱土金属盐的合适的非限制性实例包含钠、锂、钾、钙和镁。药学上可接受的盐的另外的非限制性实例包含铵、季铵以及使用抗衡离子，如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、较低烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成的胺阳离子。药学上可接受的盐的其它合适的非限制性实例包含苯磺酸盐和葡糖胺盐。
如本文所使用的，术语“无定形”是指在其分子的位置中不具有长程有序的固体材料。无定形固体通常是其中分子以随机方式排列，使得不存在明确的布置(例如分子堆积)并且不存在长程有序的过冷液体。无定形固体通常是各向同性的，即在所有方向上表现出类似的特性，并且不具有确定的熔点。例如，无定形材料是在其X射线粉末衍射(XRPD)图中不具有尖锐特征结晶峰的(即，如通过XRPD所测定不是结晶的)固体材料。相反，在其XRPD图中出现一个或若干宽峰(例如，晕)。宽峰是无定形固体的特征。有关无定形材料和结晶材料的XRPD的比较，参见US 2004/0006237。在一些实施例中，固体材料可以包括无定形化合物，并且所述材料可以例如特征在于在其XRPD谱中缺乏尖锐特征结晶峰(即，如通过XRPD所测定，所述材料不是结晶的而是无定形的)。相反，所述材料的XRPD图中可以出现一个或若干宽峰(例如，晕)。有关无定形材料和结晶材料的XRPD的比较，参见US 2004/0006237。包括无定形化合物的固体材料可以例如特征在于低于纯结晶固体的熔点的玻璃转变温度。如固态NMR等其它技术也可以用于表征结晶或无定形形态。
如本文所使用的，术语“晶形”、“结晶形态”和“形态”可互换地指在晶格中具有特定分子堆积布置的结晶结构(或多晶型物)。结晶形态可以通过一种或多种表征技术(包含例如X射线粉末衍射(XRPD)、单晶X射线衍射和13C固态核磁共振(13C SSNMR))来鉴别并且彼此区别。因此，如本文所使用的，术语“化合物(I)的结晶形态[X]”是指可以通过一种或多种表征技术(包含例如XRPD、单晶X-射线衍射和13C SSNMR)来鉴别并且与其它结晶形态区别的独特结晶形态。在一些实施例中，新型结晶形态特征在于具有在一个或多个指定2θ值(°2θ)处的一个或多个信号的X射线粉末衍射图。
如本文所使用的，术语“游离形式”是指呈固态的化合物的非电离版本。游离形式的实例包含游离碱和游离酸。
如本文所使用的，术语“溶剂化物”是指包括以下的晶形：本公开的化合物的一个或多个分子以及并入晶格中的化学计算或非化学计算量的一种或多种溶剂的一个或多个分子。当溶剂是水时，溶剂化物被称为“水合物”。
在一些实施例中，固体材料可以包括结晶固体和无定形固体的混合物。包括无定形化合物的固体材料也可以例如含有至多30％的结晶固体。在一些实施例中，制备成包括无定形化合物的固体材料也可以例如含有至多25％、20％、15％、10％、5％或2％的结晶固体。在其中固体材料含有结晶固体与无定形固体的混合物的实施例中，如XRPD等表征数据可以含有结晶固体与无定形固体两者的指示器。在一些实施例中，本公开的结晶形态可以含有至多30％的无定形化合物。在一些实施例中，式I的化合物的结晶制剂可以含有至多25％、20％、15％、10％、5％或2％的无定形固体。
如本文所使用的，术语“基本上无定形”是指在其分子的位置中具有很少或没有长程有序的固体材料。例如，基本上无定形材料具有小于15％的结晶度(例如，小于10％的结晶度、小于5％的结晶度或小于2％的结晶度)。还应注意，术语“基本上无定形”包含描述词“无定形”，这是指没有(0％)结晶度的材料。
如本文所使用的，术语“基本上结晶”是指具有很少或没有无定形分子的固体材料。例如，基本上结晶材料具有小于15％的无定形分子(例如，小于10％的无定形分子、小于5％的无定形分子或小于2％的无定形分子)。还应注意，术语“基本上结晶的”包含描述词“结晶”，这是指呈100％结晶形态的材料。
如本文所使用的，当结晶形态如通过根据本技术的方法(如定量XRPD)所测定的占样品中所有固体形态的总和按重量计等于或大于90％的量时，所述结晶形态是“基本上纯”的。在一些实施例中，当固体形态占样品中所有固体形态的总和按重量计等于或大于95％的量时，所述固体形态是“基本上纯”的。在一些实施例中，当固体形态占样品中所有固体形态的总和按重量计等于或大于99％的量时，所述固体形态是“基本上纯”的。还应注意，术语“基本上纯”包含描述词“纯”。
如本文所使用的，术语“XRPD”是指X射线粉末衍射的分析表征方法。使用衍射仪以透射或反射几何学记录在环境条件下的本文所公开的XRPD图。
如本文所使用的，术语“环境条件”意指室温、露天条件和不受控制的湿度条件。术语“室温”和“环境温度”意指15℃至30℃。
如本文所使用的，术语“X射线粉末衍射图”、“X射线粉末衍射图”、“XRPD图”、“XRPD谱”可互换地指实验获得的绘制信号位置(横坐标上)对信号强度(纵坐标上)的图。对于无定形材料，X射线粉末衍射图可以包含一个或多个宽信号；并且对于结晶材料，X射线粉末衍射图可以包含一个或多个信号，各自由其如以2θ度(°2θ)所测量的角度值识别，描绘在X射线粉末衍射图的横坐标上，所述信号可以表示为“在…2θ度处的信号”、“在…的[a]2θ值处的信号”和/或“在至少…个选自…的2θ值处的信号”。
如本文所使用的，“信号”或“峰”是指XRPD图中如以计数测量的强度处于局部最大值的点。本领域的普通技术人员将认识到，XRPD图中的一个或多个信号(或峰)可重叠，并且可例如对肉眼不明显。实际上，本领域的普通技术人员将认识到，一些业内公认的方法能够并且合适用于确定信号是否存在于图中，如Rietveld精修。
如本文所使用的，“在…2θ度处的信号”是指如在X射线粉末衍射实验中所测量并观察到的X射线反射位置(°2θ)。
所测量角度值的可重复性在±0.2°2θ的范围内，即，角度值可在所列举的角度值+0.2度2θ处、角度值-0.2度2θ处或在这两个终点(角度值+0.2度2θ与角度值-0.2度2θ)之间的任何值处。
术语“信号强度”和“峰强度”可互换地指在给定X射线粉末衍射图内的相对信号强度。可影响相对信号或峰强度的因素包含样品厚度和优选定向(例如，结晶颗粒不随机分布)。
如本文所使用的，当两个衍射图中的信号中的至少90％(如至少95％、至少98％或至少99％)重叠时，X射线粉末衍射图“基本上与[特定]图中的图类似”。在确定“基本类似性”时，本领域的普通技术人员应理解，即使对于相同的结晶形态，XRPD衍射图中的强度和/或信号位置也可存在变化。因此，本领域的普通技术人员将理解，XRPD衍射图中的信号最大值(以2θ度为单位)通常意指所述值被识别为所报告值的±0.2度2θ，其为业内公认的方差。
如本文所使用的，当两个谱中的信号中的至少90％(如至少95％、至少98％或至少99％)重叠时，固态核磁共振(SSNMR)谱“基本上与[特定]图中的谱类似”。在确定“基本类似性”时，本领域的普通技术人员应理解，即使对于相同的结晶形态，SSNMR谱中的强度和/或信号位置也可存在变化。因此，本领域的普通技术人员将理解，SSNMR谱中的化学位移(以本文中所提及的百万分率(ppm)为单位)通常意指所述值被识别为所报告值的±0.2ppm，其为业内公认的方差。
如本文所使用的，术语“具有在…2θ值处的信号的X射线粉末衍射图”是指含有如在X射线粉末衍射实验中所测量并观察到的X射线反射位置(°2θ)的XRPD图。
如本文所使用的，术语“DSC”是指差示扫描量热法的分析方法。
如本文所使用的，术语“开始分解”是指在转变之前基线和相互反射切线的交点。
如本文所使用的，术语“玻璃转变温度”或“Tg”是指高于硬且脆的“玻璃状”无定形固体变得粘性或橡胶质的温度的温度。
如本文所使用的，术语“熔融温度”、“熔点”或“Tm”是指材料从固相转变到液相的温度。
如本文所使用的，术语“TGA”是指热重量(或热重)分析的分析方法。
具体实施方式
除了式I的化合物、其药学上可接受的盐以及这些化合物和盐的氘化衍生物之外，本发明提供了式I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐。
例如，在一些实施例中，式I的化合物选自具有下式中的任一项的化合物：式Ia、IIa、IIb、IIc、IId、IIe、IIf、IIg和IIh：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I'所定义的。
在一些实施例中，式I化合物选自式I"化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I所定义的。
在一些实施例中，式I的化合物选自具有下式中的任一项的化合物：式Ia'、IIa'、IIb'、IIc'、IId'、IIe'、IIf'、IIg'和IIh'：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中所有变量如式I所定义的。
本文还公开了具有选自表10中所描绘的式中的任一项的式的化合物、其氘化衍生物、那些化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐。
固体形态
本公开的另一方面提供了式I的化合物的固体形态(例如，式I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh和IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐)，所述化合物可以用于本文所述的治疗方法和药物组合物中。
无定形化合物4(纯形态)
在一些实施例中，本发明提供了化合物4的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物4的纯无定形形态。在一些实施例中，本发明提供了无定形化合物4(纯形态)。图1提供了在室温下无定形化合物4(纯形态)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物4(纯形态)是基本上纯的。在一些实施例中，无定形化合物4(纯形态)是基本上无定形的。在一些实施例中，无定形化合物4(纯形态)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物4(纯形态)特征在于基本上类似于图1的X射线粉末衍射图。
结晶化合物5形态A(纯)
在一些实施例中，本发明提供了化合物5的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物5的纯结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物5形态A(纯)。
在一些实施例中，结晶化合物5形态A(纯)是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物5形态A(纯)是基本上结晶的。
在一些实施例中，结晶化合物5形态A(纯)特征在于四方晶系，即I41空间群，以及在利用Cu Kα辐射的布鲁克(Bruker)衍射仪上100K处测量的以下单位晶胞维度：
无定形化合物19(纯形态)
在一些实施例中，本发明提供了化合物19的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物19的纯无定形形态。在一些实施例中，本发明提供了无定形化合物19(纯形态)。图4提供了在室温下无定形化合物19(纯形态)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物19(纯形态)是基本上纯的。在一些实施例中，无定形化合物19(纯形态)是基本上无定形的。在一些实施例中，无定形化合物19(纯形态)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物19(纯形态)特征在于基本上类似于图4的X射线粉末衍射图。
结晶化合物41形态A
在一些实施例中，本发明提供了化合物41的固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物41的结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物41形态A。图7提供了结晶化合物41形态A的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物41形态A是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物41形态A是基本上结晶的。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ和21.2±0.2度2θ中的一个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ和21.2±0.2度2θ中的两个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ和21.2±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ和20.7±0.2度2θ中的三个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ和20.7±0.2度2θ中的四个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ和20.7±0.2度2θ中的五个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ和20.7±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于具有在14.2±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、20.3±0.2度2θ、20.7±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、22.2±0.2度2θ和25.1±0.2度2θ中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物41形态A特征在于基本上类似于图7的X射线粉末衍射图。
结晶化合物52形态A(纯)
在一些实施例中，本发明提供了化合物52的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物52的纯结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物52形态A(纯)。图9提供了结晶化合物52形态A(纯)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)是基本上结晶的。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ和18.6±0.2度2θ中的一个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ和18.6±0.2度2θ中的两个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ和18.6±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ和21.4±0.2度2θ中的三个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ和21.4±0.2度2θ中的四个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ和21.4±0.2度2θ中的五个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在12.7±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ和21.4±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于具有在6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、15.1±0.2度2θ、15.5±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、19.2±0.2度2θ、19.7±0.2度2θ、20.4±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ、21.4±0.2度2θ和27.2±0.2度2θ中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物52形态A(纯)特征在于基本上类似于图9的X射线粉末衍射图。
无定形化合物60(纯形态)
在一些实施例中，本发明提供了化合物60的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物60的纯无定形形态。在一些实施例中，本发明提供了无定形化合物60(纯形态)。图12提供了在室温下无定形化合物60(纯形态)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物60(纯形态)是基本上纯的。在一些实施例中，无定形化合物60(纯形态)是基本上无定形的。在一些实施例中，无定形化合物60(纯形态)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物60(纯形态)特征在于基本上类似于图12的X射线粉末衍射图。
无定形化合物70(纯形态)
在一些实施例中，本发明提供了化合物70的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物70的纯无定形形态。在一些实施例中，本发明提供了无定形化合物70(纯形态)。图15提供了在室温下无定形化合物70(纯形态)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物70(纯形态)是基本上纯的。在一些实施例中，无定形化合物70(纯形态)是基本上无定形的。在一些实施例中，无定形化合物70(纯形态)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物70(纯形态)特征在于基本上类似于图15的X射线粉末衍射图。
结晶化合物163形态A(纯)
在一些实施例中，本发明提供了化合物163的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物163的纯结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物163形态A(纯)。图16提供了结晶化合物163形态A(纯)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)是基本上结晶的。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ和15.0±0.2度2θ中的一个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ和15.0±0.2度2θ中的两个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ和15.0±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ和25.8±0.2度2θ中的三个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ和25.8±0.2度2θ中的四个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ和25.8±0.2度2θ中的五个或多个处的信号的X射线粉末衍射图。在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ和25.8±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于具有在7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、14.6±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、16.9±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ、20.0±0.2度2θ、22.5±0.2度2θ、25.6±0.2度2θ、和25.8±0.2度2θ中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个处的信号的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，结晶化合物163形态A(纯)特征在于基本上类似于图16的X射线粉末衍射图。
无定形化合物173(纯形态)和结晶化合物173形态A(纯)
在一些实施例中，本发明提供了化合物173的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物173的纯无定形形态。在一些实施例中，本发明提供了无定形化合物173(纯形态)。图18提供了在室温下无定形化合物173(纯形态)的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物173(纯形态)是基本上纯的。在一些实施例中，无定形化合物173(纯形态)是基本上无定形的。在一些实施例中，无定形化合物173(纯形态)特征在于通过用Cu Kα辐射的入射光束进行的X射线粉末衍射分析所生成的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，无定形化合物173(纯形态)特征在于基本上类似于图18的X射线粉末衍射图。
在一些实施例中，本发明提供了化合物173的纯结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物173形态A(纯)。
在一些实施例中，结晶化合物173形态A(纯)是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物173形态A(纯)是基本上结晶的。
在一些实施例中，结晶化合物173形态A(纯)特征在于三斜晶系，即P1空间群，以及在利用Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪上150K处测量的以下单位晶胞维度：
结晶化合物175形态A(纯)
在一些实施例中，本发明提供了化合物175的纯固体形态。在一些实施例中，本发明提供了化合物175的纯结晶形态。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物175形态A(纯)。
在一些实施例中，结晶化合物175形态A(纯)是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物175形态A(纯)是基本上结晶的。
在一些实施例中，结晶化合物175形态A(纯)特征在于斜方晶系，即P212121空间群，以及在利用Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪上100K处测量的以下单位晶胞维度：
结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态
在一些实施例中，本发明提供了化合物188的溶剂化结晶形态。在一些实施例中，溶剂化结晶形态是二氯甲烷溶剂化物。在一些实施例中，本发明提供了结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态。
在一些实施例中，结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态是基本上纯的。在一些实施例中，结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态是基本上结晶的。
在一些实施例中，结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态特征在于单斜晶系，即P21空间群，以及在利用Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪上100K处测量的以下单位晶胞维度：
治疗方法
本文公开的新型化合物和固体形态中的任一者，如式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐可以充当CFTR调节剂，即，其调节体内的CFTR活性。编码CFTR的基因中发生突变的个体可以受益于接受CFTR调节剂。CFTR突变可能影响CFTR量，即细胞表面处CFTR通道的数量，或者其可能影响CFTR功能，即每个通道打开和转运离子的功能性能力。影响CFTR量的突变包含导致合成缺陷(I类缺陷)的突变、导致加工和运输缺陷(II类缺陷)的突变、导致CFTR合成减少(V类缺陷)的突变以及降低CFTR的表面稳定性(VI类缺陷)的突变。影响CFTR功能的突变包含导致门控缺陷(III类缺陷)的突变和导致转导缺陷(IV类缺陷)的突变。一些CFTR突变表现出多种类别的特征。CFTR基因中的某些突变导致囊性纤维化。
因此，在一些实施例中，本发明提供了治疗患者的囊性纤维化、减轻囊性纤维化的严重程度或对症治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的本文所公开的新型化合物和固体形态中的任一者，如式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐，单独或与另一种活性成分，如另一种CFTR调节剂组合。在一些实施例中，患者具有F508del/最小功能(MF)基因型、F508del/F508del基因型(对于F508del突变是纯合的)、F508del/门控基因型，或F508del/残余功能(RF)基因型。在一些实施例中，患者是杂合的并且具有一个F508del突变。在一些实施例中，患者对于N1303K突变是纯合的。
在一些实施例中，每天施用1mg至1000mg的本文所公开的化合物、其氘化衍生物或所述化合物或氘化衍生物的药学上可接受的盐。
在一些实施例中，患者是杂合的，并且在选自表2的一个等位基因上具有F508del突变并且在另一个等位基因上具有突变：
表2：CFTR突变
在一些实施例中，本公开还涉及使用前述化合物的同位素标记的化合物或其药学上可接受的盐的治疗方法，其中此类化合物和盐的化学式和变量各自并且独立地如上文或上述任何其它实施例所描述的，条件是，其中一个或多个原子被一个或多个原子质量或质量数不同于通常天然存在(同位素标记)的原子的原子质量或质量数的原子置换。可商购获得的并且合适用于本公开的同位素的实例包含氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别是2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
同位素标记的化合物和盐可以多种有益的方式使用。其可以合适用于药物和/或各种类型的测定，如底物组织分布测定。例如，氚(3H)和/或碳-14(14C)标记的化合物因制备相对简单和可侦测性优良而特别可用于各种类型的测定，如底物组织分布测定。例如，氘(2H)标记的化合物在治疗上可用，并且相较于非2H标记的化合物具有潜在的治疗优点。一般来说，与非同位素标记的化合物和盐相比，氘(2H)标记的化合物和盐可以由于以下所述的动力学同位素效应而具有较高的代谢稳定性。较高的代谢稳定性直接转化为增加的体内半衰期或较低的剂量，这可以是所期望的。同位素标记的化合物和盐通常可以通过进行本文中的合成方案和相关描述中、实例部分中和制备部分中所公开的程序，用容易获得的同位素标记的反应物置换非同位素标记的反应物来制备。
在一些实施例中，同位素标记的化合物和盐是氘(2H)标记的化合物和盐。在一些具体实施例中，同位素标记的化合物和盐是氘(2H)标记的，其中一个或多个氢原子被氘置换。在化学结构中，氘表示为“2H”或“D”。
当发现和开发治疗剂时，本领域技术人员尝试优化药物动力学参数，同时保留期望的体外特性。可以合理地假设，药物动力学特性较差的许多化合物容易发生氧化代谢。
氘(2H)标记的化合物和盐可以通过一级动力学同位素效应来调节化合物的氧化代谢。一级动力学同位素效应是由同位素核的交换引起的化学反应的速率的变化，这继而又由此同位素交换后形成共价键所必需的基态能量的变化引起。较重同位素的交换通常导致化学键的基态能量降低，并且因此导致限速键断裂的减少。如果沿着多产物反应的坐标在鞍点区域中或附近发生键断裂，则产物分布比率可能大幅改变。解释：如果氘在不可交换位置处与碳原子键合，则kM/kD＝2-7的速率差异是典型的。关于进一步的讨论，参见S.L.Harbeson和R.D.Tung,药物发现和开发中的氘(Deuterium In Drug Discovery andDevelopment),《药物化学年度报告(Ann.Rep.Med.Chem.)》2011,46,403-417，所述文献通过引用并入本文。
并入到本公开的同位素标记的化合物和盐中的同位素(例如，氘)的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文所使用的，术语“同位素富集因子”意指特定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。在一些实施例中，如果本公开的化合物中的取代基表示为氘，则此类化合物对于每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定氘原子处的52.5％氘并入)、至少4000(60％氘并入)、至少4500(67.5％氘并入)、至少5000(75％氘并入)、至少5500(82.5％氘并入)、至少6000(90％氘并入)、至少6333.3(95％氘并入)、至少6466.7(97％氘并入)、至少6600(99％氘并入)或至少6633.3(99.5％氘并入)。
组合疗法
本文公开的一方面提供了使用本文所公开的新型化合物和固体形态中的任一者，如式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及前述中的任一项的药学上可接受的盐与至少一种另外的活性药物成分组合治疗囊性纤维化以及其它CFTR介导的疾病的方法。
因此，在一些实施例中，本发明提供了治疗患者的囊性纤维化、减轻囊性纤维化的严重程度或对症治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的本文所公开的新型化合物和固体形态中的任一者，如式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及那些化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐，单独或与至少一种另外的活性药物成分，如CFTR调节剂组合。
在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂和抗炎剂。
在一些实施例中，另外的治疗剂是抗生素。本文中可用的示例性抗生素包含妥布霉素(tobramycin)，包含妥布霉素吸入粉(TIP)；阿奇霉素(azithromycin)；氨曲南(aztreonam)，包含氨曲南的气雾化形式；阿米卡星(amikacin)，包含其脂质体调配物；环丙沙星(ciprofloxacin)，包含其合适用于通过吸入施用的调配物；左氧氟沙星(levoflaxacin)，包含其气雾化调配物；以及两种抗生素的组合，例如磷霉素(fosfomycin)和妥布霉素。
在一些实施例中，另外的药剂是粘液溶解剂。本文中可用的示例性粘液溶解剂包含
在一些实施例中，另外的药剂是支气管扩张剂。示例性支气管扩张剂包含沙丁胺醇(albuterol)、硫酸异丙喘宁(metaprotenerol sulfate)、乙酸吡布特罗(pirbuterolacetate)、沙美特罗(salmeterol)或硫酸特曲布尔(tetrabuline sulfate)。
在一些实施例中，另外的药剂是抗炎剂，即可以减轻肺部炎症的药剂。本文中可用的示例性此类药剂包含布洛芬(ibuprofen)、二十二碳六烯酸(DHA)、西地那非(sildenafil)、吸入型谷胱甘肽(glutathione)、吡格列酮(pioglitazone)、羟氯喹(hydroxychloroquine)或辛伐他汀(simavastatin)。
在一些实施例中，另外的药剂是营养剂。示例性营养剂包含胰脂肪酶(胰酶替代物)，包含 (先前为)、或谷胱甘肽吸入剂。在一个实施例中，另外的营养剂是胰脂肪酶。
在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分选自CFTR调节剂。在一些实施例中，CFTR调节剂是CFTR校正剂。在一些实施例中，CFTR调节剂是CFTR增效剂增强剂/共增效剂(例如，ASP-11)。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR扩增剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR通读剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR核酸疗法。
在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是ENaC抑制剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是TMEM16A调节剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是GPR39激动剂。
在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分选自：(a)化合物II以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)化合物IV以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(c)化合物V以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(d)化合物VI以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(e)化合物VII以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；以及(f)化合物VIII以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。因此，在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；以及至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、化合物IV以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物；以及(c)至少一种选自以下的化合物：化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)至少一种选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物；以及(c)至少一种选自以下的化合物：化合物VII以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；以及(c)至少一种选自以下文献中公开的化合物的化合物：WO 2016/105485、美国专利申请公开第2016-0120841号、美国专利申请公开第2017-0101405号、WO2017/009804、WO 2018/065921、WO 2017/062581、Phuan,P.-W.等人《囊性纤维化杂志(J.Cyst.Fibros.)》2018,17(5),595–606；Pedemonte,N.等人《科学进步(Sci.Adv.)》2020,6(8),论文9669；Phuan,P.-W.等人《科学报告(Sci.Rep.)》2019,9(1),17640；Bose,S.等人《囊性纤维化杂志.》2020,19补刊1,S25–S32；Crawford,D.K.《药理学与实验治疗学杂志(J.Pharmacol.Exp.Ther.)》2020,374(2),264–272；Brasell,E.J.等人《公共科学图书馆-综合(PLoS One)》2019,14(12),e0223954；Smith,N.J,Solovay,C.F.,《医药专利分析(Pharm.Pat.Anal.)》2017,6(4),179-188；Kunzelmann,K.等人,《药理学前沿(Front.Pharmacol.)》2019,10,3；或Son,J.-H.等人,《欧洲医药化学杂志(Eur.J.ofMed.Chem.)》2020,112888.
在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；以及(c)至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ASP-11、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766、PTI-801、FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托(Icenticaftor))、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托(Navocaftor))、ABBV-191、ELX-02、MRT5005、Lunar-CF、RCT223、阿米洛利(amiloride)、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634、ARO-ENaC1001、ETD002和DS-1039。
在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；以及(b)至少两种选自以下文献中公开的化合物的化合物：WO 2019/195739、WO 2019/200246、WO 2021/030555、WO 2021/030556、WO 2010/053471、WO 2011/119984、WO 2011/133751、WO 2011/133951、WO 2015/160787、WO2007/056341、WO 2009/073757、WO 2009/076142、WO 2018/107100、WO 2019/113476、WO2018/064632、WO 2019/152940、WO 2016/057572、WO 2021/030554、WO 2020/206080、WO2016/105485、美国专利申请公开第2016-0120841号、美国专利申请公开第2017-0101405号、WO 2017/009804、WO 2018/065921、WO 2017/062581；Phuan,P.-W.等人《囊性纤维化杂志.》2018,17(5),595–606；Pedemonte,N.等人《科学进步》2020,6(8),论文9669；Phuan,P.-W.等人《科学报告》2019,9(1),17640；Bose,S.等人《囊性纤维化杂志.》2020,19补刊1,S25–S32；Crawford,D.K.《药理学与实验治疗学杂志》2020,374(2),264–272；Brasell,E.J.等人《公共科学图书馆-综合》2019,14(12),e0223954；Smith,N.J,Solovay,C.F.,《医药专利分析》2017,6(4),179-188；Kunzelmann,K.等人,《药理学前沿》2019,10,3；或Son,J.-H.等人,《欧洲医药化学杂志》2020,112888.
在一些实施例中，本文提供的组合疗法包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐；以及(b)至少两种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X、PTI-428、ASP-11、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766、PTI-801、FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)、ABBV-191、ELX-02、MRT5005、Lunar-CF、RCT223、阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634、ARO-ENaC1001、ETD002和DS-1039以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。
在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物II以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及那些化合物和氘化衍生物的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物IV以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及那些化合物和氘化衍生物的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物V以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及那些化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物VI以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物VII以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、那些化合物的氘化衍生物以及前述化合物和氘化衍生物中的任一项的药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物组合施用：化合物VIII以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。
式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、化合物II、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐中的每一种独立地可以每天一次、每天两次或每天三次施用。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物每天一次施用：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物每天两次施用：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物II以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物II以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物IV以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物IV以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物V以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物V以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物VI以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物VI以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物VIII以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物VIII以及其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；至少一种选自以下的化合物：化合物II、化合物IV以及其药学上可接受的盐；以及至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；至少一种选自以下的化合物：化合物II、化合物IV以及其药学上可接受的盐；以及至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；至少一种选自以下的化合物：化合物II以及其药学上可接受的盐；以及至少一种选自以下的化合物每天一次施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；至少一种选自以下的化合物：化合物II以及其药学上可接受的盐；以及至少一种选自以下的化合物每天两次施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。
式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、化合物II、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐可以单个药物组合物或单独药物组合物施用。此类药物组合物可以每天一次或每天多次，如每天两次施用。如本文所使用的，短语给定量的API(例如，化合物II、化合物VII或其药学上可接受的盐)每天一次或两次或每天施用意指所述给定量通过每天给药(可能每天一次或两次发生)来施用。
在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物以第一药物组合物施用：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；并且至少一种选自以下的化合物以第二药物组合物施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，至少一种选自以下的化合物以第一药物组合物施用：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；至少一种选自以下的化合物以第二药物组合物施用：化合物II以及其药学上可接受的盐；并且至少一种选自以下的化合物以第三药物组合物施用：化合物VII以及其药学上可接受的盐。
本领域已知的任何合适的药物组合物可以用于式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222、化合物II、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐。用于化合物II以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于WO 2011/119984和WO 2014/014841中，通过引用并入本文。用于化合物III以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于WO 2007/134279、WO 2010/019239、WO 2011/019413、WO 2012/027731和WO2013/130669，并且用于化合物III-d以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于US 8,865,902、US 9,181,192、US 9,512,079、WO 2017/053455和WO 2018/080591，这些专利中的所有专利均通过引用并入本文。用于化合物IV以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于WO 2010/037066、WO 2011/127421和WO 2014/071122中，通过引用并入本文。用于化合物V以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于WO2019/152940中，通过引用并入本文。用于化合物VI以及其药学上可接受的盐的一些示例性药物组合物可见于WO 2019/079760中，通过引用并入本文。
药物组合物
本发明的另一方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包括至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，与至少一种另外的活性药物成分组合。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR调节剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR校正剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR增效剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是增强CFTR增效的化合物，即，CFTR增效剂增强剂/共增效剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR扩增剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR通读剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是CFTR核酸疗法。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是ENaC抑制剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是TMEM16A调节剂。在一些实施例中，至少一种另外的活性药物成分是GPR39激动剂。在一些实施例中，所述药物组合物包括至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，以及至少两种另外的活性药物成分，其中每一种是CFTR校正剂。在一些实施例中，所述药物组合物包括至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，以及至少两种另外的活性药物成分，其中一种是CFTR校正剂，并且其中另一种是CFTR增效剂增强剂。
在一些实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、化合物IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐；以及(c)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II以及其药学上可接受的盐；以及(c)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物VII以及其药学上可接受的盐；以及(c)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、化合物IV以及其药学上可接受的盐；(c)至少一种选自以下的化合物：化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐；以及(d)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：(a)至少一种选自以下的化合物：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II以及其药学上可接受的盐；(c)至少一种选自以下的化合物：化合物VII以及其药学上可接受的盐；以及(d)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本文提供的药物组合物包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物；(c)至少一种选自以下文献中公开的化合物的化合物：WO 2016/105485、美国专利申请公开第2016-0120841号、美国专利申请公开第2017-0101405号、WO 2017/009804、WO 2018/065921、WO 2017/062581、Phuan,P.-W.等人《囊性纤维化杂志.》2018,17(5),595–606；Pedemonte,N.等人《科学进步》2020,6(8),论文9669；Phuan,P.-W.等人《科学报告》2019,9(1),17640；Bose,S.等人《囊性纤维化杂志.》2020,19补刊1,S25–S32；Crawford,D.K.《药理学与实验治疗学杂志》2020,374(2),264–272；Brasell,E.J.等人《公共科学图书馆-综合》2019,14(12),e0223954；Smith,N.J,Solovay,C.F.,《医药专利分析》2017,6(4),179-188；Kunzelmann,K.等人,《药理学前沿》2019,10,3；或Son,J.-H.等人,《欧洲医药化学杂志》2020,112888；以及(d)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本文提供的药物组合物包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少一种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物；(c)至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ASP-11、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766、PTI-801、FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)、ABBV-191、ELX-02、MRT5005、Lunar-CF、RCT223、阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634、ARO-ENaC1001、ETD002和DS-1039；以及(d)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本文提供的药物组合物包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少两种选自以下文献中公开的化合物的化合物：WO 2019/195739、WO 2019/200246、WO 2021/030555、WO 2021/030556、WO 2010/053471、WO 2011/119984、WO 2011/133751、WO2011/133951、WO 2015/160787、WO 2007/056341、WO 2009/073757、WO 2009/076142、WO2018/107100、WO 2019/113476、WO 2018/064632、WO 2019/152940、WO 2016/057572、WO2021/030554、WO 2020/206080、WO 2016/105485、美国专利申请公开第2016-0120841号、美国专利申请公开第2017-0101405号、WO 2017/009804、WO 2018/065921、WO 2017/062581；Phuan,P.-W.等人《囊性纤维化杂志.》2018,17(5),595–606；Pedemonte,N.等人《科学进步》2020,6(8),论文9669；Phuan,P.-W.等人《科学报告》2019,9(1),17640；Bose,S.等人《囊性纤维化杂志.》2020,19补刊1,S25–S32；Crawford,D.K.《药理学与实验治疗学杂志》2020,374(2),264–272；Brasell,E.J.等人《公共科学图书馆-综合》2019,14(12),e0223954；Smith,N.J,Solovay,C.F.,《医药专利分析》2017,6(4),179-188；Kunzelmann,K.等人,《药理学前沿》2019,10,3；或Son,J.-H.等人,《欧洲医药化学杂志》2020,112888；以及(c)至少一种药学上可接受的载体。
在一些实施例中，本文提供的药物组合物包括：(a)选自式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'化合物的化合物和固体形态、化合物1至213、化合物214至222以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐；(b)至少两种选自以下的化合物：化合物II、IV、化合物V、化合物VI、化合物VII、化合物VIII、化合物IX、化合物X、PTI-428、ASP-11、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766、PTI-801、FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)、ABBV-191、ELX-02、MRT5005、Lunar-CF、RCT223、阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634、ARO-ENaC1001、ETD002和DS-1039以及其药学上可接受的盐和氘化衍生物；以及(c)至少一种药学上可接受的载体。
本文公开的任何药物组合物可以包括至少一种药学上可接受的载体。在一些实施例中，至少一种药学上可接受的载体选自药学上可接受的媒剂和药学上可接受的佐剂。在一些实施例中，至少一种药学上可接受的选自药学上可接受的填充剂、崩解剂、表面活性剂、粘合剂、润滑剂。
本文所述的药物组合物可用于治疗囊性纤维化和其它CFTR介导的疾病。
如上所述，本文公开的药物组合物可以任选地进一步包括至少一种药学上可接受的载体。至少一种药学上可接受的载体可选自佐剂和媒剂。如本文所使用的，至少一种药学上可接受的载体包含适合于所需的特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂、其它液体媒剂、分散助剂、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂和润滑剂。《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)》,第21版,2005,D.B.Troy编辑,费城的利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Troy,LippincottWilliams&Wilkins,Philadelphia)以及《药剂百科全书(Encyclopedia ofPharmaceutical Technology)》,J.Swarbrick和J.C.Boylan编辑,1988-1999,纽约的马赛尔德克出版社(Marcel Dekker,New York)公开了用于调配药物组合物的各种载体和用于制备其的已知技术。除非任何常规载体与本公开的化合物不兼容，如通过产生任何不期望的生物效应或另外以有害方式与药物组合物的任何其它组分相互作用，否则其用途被预期在本公开的范围内。合适的药学上可接受的载体的非限制性实例包含但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸和山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐和电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠和锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、羊毛脂、糖(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)、淀粉(如玉米淀粉和马铃薯淀粉)、纤维素以及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素)、粉状黄蓍胶、麦芽、明胶、滑石、赋形剂(如可可脂和栓剂蜡)、油类(如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、二醇类(如丙二醇和聚乙二醇)、酯类(如油酸乙酯和月桂酸乙酯)、琼脂、缓冲剂(如氢氧化镁和氢氧化铝)、海藻酸、无热原质水、等渗盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)、乙醇、磷酸盐缓冲液、无毒兼容润滑剂(如硫酸月桂酸钠和硬脂酸镁)、着色剂、释放剂、包裹剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。
非限制性示例性实施例
1.一种选自式I化合物的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2RYN1，其中每个RYN1独立地选自C1-C4烷基和C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自羟基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自其中环C选自C6-C10芳基和5至10元杂芳基；
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基、NH2、NH(CO)(C1-C6烷基)以及C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；
n选自4、5、6、7和8；并且
m选自0、1、2和3。
2.根据实施例1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2Me；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、
-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；
n选自4、5、6和7；并且
m选自0、1、2和3。
3.根据实施例1或2所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是-NRX1。
4.根据实施例1至3中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
5.根据实施例1或2所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是
6.根据实施例1、2或5所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中环A选自吡咯烷、哌嗪、吗啉和异噻唑烷。
7.根据实施例1、2、5或6所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
8.根据实施例1至7中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个RY独立地选自：
氢、羟基、甲基、 或
其中同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢呋喃基和四氢吡喃基的环；或
其中两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
9.根据实施例1至8中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的基团取代)。
10.根据实施例1至9中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q是苯基。
11.根据实施例1至10中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
12.根据实施例1至11中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自：
13.根据实施例1至12中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
14.根据实施例1至13中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
15.根据实施例1至14中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y是-C(RY)2-。
16.根据实施例15所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y独立地选自-CH2-和-C(Me)2-。
17.根据实施例1至16中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自C1-C6氟代烷基和-N(R2)2。
18.根据实施例1至16中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自Br、-CH3、-CF3、-CHF2、-OH、-OCH3、-CN、-NH2、
19.根据实施例1至18中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自-CF3和-NH2。
20.根据实施例1至19中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
21.根据实施例1至20中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中：
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基，
RZ2选自氢、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
22.根据实施例1至21中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z是
23.根据实施例1至22中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中是
24.根据实施例1至23中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1选自C1-C6氟代烷基。
25.根据实施例1至24中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1是-CF3。
26.根据实施例1至25中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ2是羟基。
27.根据实施例1至21中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
28.根据实施例1至21中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中选自：
29.根据实施例1至28中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n选自4、5和6。
30.根据实施例1至29中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n是5。
31.根据实施例1至29中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n是6。
32.根据实施例1至31中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中m选自1和2。
33.根据实施例1至32任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中m是2。
34.一种选自式Ia化合物的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-NRX1-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2Me；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2-；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；并且
n选自4、5、6和7。
35.根据实施例34所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是-NRX1。
36.根据实施例34或35所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
37.根据实施例34所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是
38.根据实施例34或37所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中环A选自吡咯烷、哌嗪、吗啉和异噻唑烷。
39.根据实施例34、37或38所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
40.根据实施例34至39中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个RY独立地选自：
氢、羟基、甲基、 或
其中同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢呋喃基和四氢吡喃基的环；或
其中两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
41.根据实施例34至40中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的基团取代)。
42.根据实施例34至41中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q是苯基。
43.根据实施例34至42中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
44.根据实施例34至43中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自：
45.根据实施例34至44中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
46.根据实施例34至45中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
47.根据实施例34至45中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y是-C(RY)2-。
48.根据实施例47所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y独立地选自-CH2-和-C(Me)2-。
49.根据实施例34至48中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自C1-C6氟代烷基和-N(R2)2。
50.根据实施例34至48中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自Br、-CH3、-CF3、-CHF2、-OH、-OCH3、-CN、-NH2、
51.根据实施例34至50中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自-CF3和-NH2。
52.根据实施例34至51中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
53.根据实施例34至52中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中：
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基，
RZ2选自氢、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
54.根据实施例34至53中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z是
55.根据实施例34至54中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中是
56.根据实施例34至55中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1选自C1-C6氟代烷基。
57.根据实施例34至56中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1是-CF3。
58.根据实施例34至57中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ2是羟基。
59.根据实施例34至53中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
60.根据实施例34至53中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中选自：
61.根据实施例34至60中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n选自4、5和6。
62.根据实施例34至61中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n是5。
63.根据实施例34至62中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中n是6。
64.一种选自式IIa、IIb、IIc和IId化合物的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-NRX1-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2Me；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2-；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；并且
m选自0、1、2和3。
65.根据实施例64所述的化合物，其中m选自1和2。
66.根据实施例64或65所述的化合物，其中m是2。
67.一种选自式IIe、IIf、IIg和IIh化合物的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-NRX1-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2Me；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2-；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；并且
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基。
68.根据实施例64至67中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是-NRX1。
69.根据实施例64至68中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
70.根据实施例64至67中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X是
71.根据实施例64至67或70中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中环A选自吡咯烷、哌嗪、吗啉和异噻唑烷。
72.根据实施例64至67、70或71中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中X选自：
73.根据实施例64至72中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个RY独立地选自：
氢、羟基、甲基、 或
其中同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢呋喃基和四氢吡喃基的环；或
其中两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
74.根据实施例64至73中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的基团取代)。
75.根据实施例64至74中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Q是苯基。
76.根据实施例64至75中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
77.根据实施例64至76中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个环B独立地选自：
78.根据实施例64至77中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
79.根据实施例78所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-Y-Y-)是
80.根据实施例64至77中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
81.根据实施例80所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
82.根据实施例64至77中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
83.根据实施例82中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
84.根据实施例64至77中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
85.根据实施例84所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中(-Y-Y-Y-Y-)是选自以下的基团：
86.根据实施例64至77中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y是-C(RY)2-。
87.根据实施例86所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个Y独立地选自-CH2-和-C(Me)2。
88.根据实施例64至87中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自C1-C6氟代烷基和-N(R2)2。
89.根据实施例64至87中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自Br、-CH3、-CF3、-CHF2、-OH、-OCH3、-CN、-NH2、
90.根据实施例64至89中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中每个R1独立地选自-CF3和-NH2。
91.根据实施例64至90中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
92.根据实施例64至91中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中：
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基，
RZ2选自氢、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
93.根据实施例64至92中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z是
94.根据实施例64至93中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中是
95.根据实施例64至94中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1选自C1-C6氟代烷基。
96.根据实施例64至95中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ1是-CF3。
97.根据实施例64至96中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中RZ2是羟基。
98.根据实施例64至92中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中Z选自：
99.根据实施例64至92中任一项所述的化合物、氘化衍生物或盐，其中选自：
100.根据实施例1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X是-N(RX1)-。
101.根据实施例1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X是
102.根据实施例1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X选自：
-NH-、-N(CH3)-、-N(CH2CH3)-、
103.根据实施例1和100至102中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-CO2RY1和-CON(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
104.根据实施例1和100至103中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基。
105.根据实施例1和100至104中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个Q独立地选自C6-C10芳基。
106.根据实施例1和100至105中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个Q是苯基。
107.根据实施例1和100至106中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
每个RY独立地选自：
氢、羟基、-CH3、-CD3、-CH2CH3、
或同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢吡喃基和四氢呋喃基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
108.根据实施例1和100至107中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
109.根据实施例1和100至108中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自苯基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和吡啶基。
110.根据实施例1和100至109中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自：
111.根据实施例1和100至110中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中n选自4、5、6和7。
112.根据实施例1和100至111中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
113.根据实施例1和100至112中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2和-PO(R2)2。
114.根据实施例1和100至113中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R2独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷氧基的基团取代)。
115.根据实施例1和100至114中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R1独立地选自-Br、-CF3、-NH2、-CH3、-CH(CH3)2、-CN、-OH、-OCH3、-NH(CH3)、-NH(CH2CH3)、-CONH2、-CO2CH3、-SO2CH3、-SO2Ph、PO(CH3)2、B(OH)2、苯基、吡啶基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、环丙基、环己基、咪唑基、
116.根据实施例1和100至115中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z选自其中环C选自C6-C10芳基。
117.根据实施例1和100至116中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中基团：
选自：
118.根据实施例1和100至117中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中基团：
是
118A.根据实施例1和100至117中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基。
118B.根据实施例1和100至117中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)。
119.根据实施例1和100至118中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
120.根据实施例1和100至119中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
RZ1选自氢、CH3、CF3、CH2OH、苯基、环丙基和四氢吡喃基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
121.根据实施例1和100至120中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ2是羟基。
122.根据实施例1和100至121中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z选自：
123.根据实施例1和100至122中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中m选自1和2。
124.根据实施例1和100至123中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是4至6元杂环基；
RX1选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-和
每个RY独立地选自氢、C1-C6烷基以及C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
环B是C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)，
每个R1独立地选自C1-C6氟代烷基和-NH2；
Z是
RZ1是C1-C6氟代烷基；
RZ2是羟基，
n选自4、5和6；并且
m是2。
125.根据实施例1和100至124中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A是吡咯烷。
126.根据实施例1和100至125中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X选自：
-NH-、-N(CH3)-、
127.根据实施例1和100至126中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
每个RY独立地选自：
氢、-CH3、-CD3、
或同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基和四氢吡喃基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
128.根据实施例1和100至127中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B是苯基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)。
129.根据实施例1和100至128中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B是
130.根据实施例1和100至129中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
131.根据实施例1和100至130中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R1独立地选自CF3和-NH2。
132.根据实施例1和100至131中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ1是CF3。
133.根据实施例1和100至132中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z选自：
134.一种选自表10的化合物的化合物、其药学上可接受的盐以及前述中的任一项的氘化衍生物。
135.根据实施例134所述的化合物，其中所述化合物选自：
136.一种药物组合物，其包括根据实施例1至135中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物以及药学上可接受的载体。
137.根据实施例136所述的药物组合物，其进一步包括一种或多种另外的治疗剂。
138.根据实施例137所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括具有CFTR调节活性的化合物或其盐或氘化衍生物。
139.根据实施例137或138所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR校正剂。
140.根据实施例137至139中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物II)：
141.根据实施例137至140中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物IV)：
142.根据实施例137至141中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物V)：
143.根据实施例137至142中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物VI)：
144.根据实施例137至143中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮(化合物VII)：
145.根据实施例137至144中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮(化合物VIII)：
146.根据实施例137至145中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766和PTI-801。
147.根据实施例137至146中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂增强剂。
148.根据实施例137至147中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ASP-11。
149.根据实施例137至148中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂。
150.根据实施例137至149中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括选自以下的化合物：N-(5-羟基-2,4-二-叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺(化合物III)：
以及N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺(化合物III-d)：
151.根据实施例137至150中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)和ABBV-191。
152.根据实施例137至151中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR扩增剂。
153.根据实施例137至152中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括PTI-428。
154.根据实施例137至153中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR通读剂。
155.根据实施例137至154中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ELX-02。
156.根据实施例137至155中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括核酸疗法。
157.根据实施例137至156中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的药剂：MRT5005、Lunar-CF和RCT223。
158.根据实施例137至157中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ENaC抑制剂。
159.根据实施例137至158中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634和ARO-ENaC1001。
160.根据实施例137至159中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括TMEM16A调节剂。
161.根据实施例137至160中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ETD002。
162.根据实施例137至161中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括GPR39激动剂。
163.根据实施例137至162中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括DS-1039。
164.一种治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的根据实施例1至135中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据实施例136至163中任一项所述的药物组合物。
165.根据实施例164所述的方法，其进一步包括施用一种或多种另外的治疗剂。
166.根据实施例165所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括具有CFTR调节活性的化合物或其盐或氘化衍生物。
167.根据实施例165或166所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR校正剂。
168.根据实施例165至167中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物II)：
169.根据实施例165至168中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物IV)：
170.根据实施例165至169中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物V)：
171.根据实施例165至170中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物VI)：
172.根据实施例165至171中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮(化合物VII)：
173.根据实施例165至172中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮(化合物VIII)：
174.根据实施例165至173中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、ABBV-2851、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766和PTI-801。
175.根据实施例165至174中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂增强剂。
176.根据实施例165至175中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ASP-11。
177.根据实施例165至176中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂。
178.根据实施例165至177中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括选自以下的化合物：N-(5-羟基-2,4-二-叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺(化合物III)：
以及N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺(化合物III-d)：
179.根据实施例165至178中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)和ABBV-191。
180.根据实施例165至179中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR扩增剂。
181.根据实施例165至180中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括PTI-428。
182.根据实施例165至181中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR通读剂。
183.根据实施例165至182中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ELX-02。
184.根据实施例165至183中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括核酸疗法。
185.根据实施例165至184中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的药剂：MRT5005、Lunar-CF和RCT223。
186.根据实施例165至185中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ENaC抑制剂。
187.根据实施例165至186中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634和ARO-ENaC1001。
188.根据实施例165至187中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括TMEM16A调节剂。
189.根据实施例165至188中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ETD002。
190.根据实施例165至180中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括GPR39激动剂。
191.根据实施例165至190中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括DS-1039。
192.实施例1至135中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据实施例136至163中任一项所述的药物组合物，其用于治疗囊性纤维化。
193.一种实施例1至135中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据实施例136至163中任一项所述的药物组合物用于制备用于治疗囊性纤维化的药物的用途。
194.基本上无定形化合物4(纯形态)(即，其中小于15％的化合物4呈结晶形态，其中小于10％的化合物4呈结晶形态，其中小于5％的化合物4呈结晶形态)。
195.根据实施例194所述的基本上无定形化合物4(纯形式)，其中化合物4是100％无定形的。
196.根据实施例194或195所述的基本上无定形化合物4(纯形态)，其特征在于基本上类似于图1的X射线粉末衍射图。
197.基本上结晶化合物5形态A(纯)(即，其中小于15％的化合物5呈无定形形态，其中小于10％的化合物5呈无定形形态，其中小于5％的化合物5呈无定形形态)。
198.根据实施例197所述的基本上结晶化合物5形态A(纯)，其中化合物5形态A(纯)是100％结晶。
199.根据实施例197或198所述的基本上结晶化合物5形态A(纯)，其特征在于四方晶系，即I41空间群，以及在利用以下的Cu Kα辐射 的布鲁克衍射仪上100K处测量的单位晶胞维度：
200.基本上无定形化合物19(纯形态)(即，其中小于15％的化合物19呈结晶形态，其中小于10％的化合物19呈结晶形态，其中小于5％的化合物19呈结晶形态)。
201.根据实施例200所述的基本上无定形化合物19(纯形式)，其中化合物19是100％无定形的。
202.根据实施例200或201所述的无定形化合物19(纯形态)，其特征在于基本上类似于图4的X射线粉末衍射图。
203.基本上结晶化合物41形态A(即，其中小于15％的化合物41呈无定形形态，其中小于10％的化合物41呈无定形形态，其中小于5％的化合物41呈无定形形态)。
204.根据实施例203的基本上结晶化合物41形态A，其中化合物41形态A是100％结晶的。
205.根据实施例203或204所述的基本上结晶化合物41形态A，其特征在于具有选自14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ和21.2±0.2度2θ的一个、两个或三个信号的X射线粉末衍射图。
206.根据实施例203至205中任一项所述的基本上结晶化合物41形态A，其特征在于具有选自14.2±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ和20.7±0.2度2θ的一个、两个、三个、四个、五个或六个信号的X射线粉末衍射图。
207.根据实施例203至206中任一项所述的基本上结晶化合物41形态A，其特征在于具有选自14.2±0.2度2θ、16.6±0.2度2θ、18.0±0.2度2θ、19.5±0.2度2θ、20.3±0.2度2θ、20.7±0.2度2θ、21.2±0.2度2θ、22.2±0.2度2θ和25.1±0.2度2θ的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个信号的X射线粉末衍射图。
208.根据实施例203至207中任一项所述的基本上结晶化合物41形态A，其特征在于基本上类似于图7的X射线粉末衍射图。
209.基本上结晶化合物52形态A(纯)(即，其中小于15％的化合物52呈无定形形态，其中小于10％的化合物52呈无定形形态，其中小于5％的化合物52呈无定形形态)。
210.根据实施例209所述的基本上结晶化合物52形态A(纯)，其中化合物52形态A(纯)是100％结晶。
211.根据实施例209或210所述的基本上结晶化合物52形态A(纯)，其特征在于具有选自6.8±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ和18.6±0.2度2θ的一个、两个或三个信号的X射线粉末衍射图。
212.根据实施例209至211中任一项所述的基本上结晶化合物52形态A(纯)，其特征在于具有选自6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ和21.4±0.2度2θ的一个、两个、三个、四个、五个或六个信号的X射线粉末衍射图。
213.根据实施例209至212中任一项所述的基本上结晶化合物52形态A(纯)，其特征在于具有选自6.8±0.2度2θ、12.7±0.2度2θ、15.1±0.2度2θ、15.5±0.2度2θ、17.3±0.2度2θ、18.6±0.2度2θ、19.2±0.2度2θ、19.7±0.2度2θ、20.4±0.2度2θ、20.6±0.2度2θ、21.4±0.2度2θ和27.2±0.2度2θ的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个或十二个信号的X射线粉末衍射图。
214.根据实施例209至213中任一项所述的基本上结晶化合物52形态A(纯)，其特征在于基本上类似于图9的X射线粉末衍射图。
215.基本上无定形化合物60(纯形态)(即，其中小于15％的化合物60呈结晶形态，其中小于10％的化合物60呈结晶形态，其中小于5％的化合物60呈结晶形态)。
216.根据实施例215所述的基本上无定形化合物60(纯形式)，其中化合物60是100％无定形的。
217.根据实施例215或216所述的基本上无定形化合物60(纯形态)，其特征在于基本上类似于图12的X射线粉末衍射图。
218.基本上无定形化合物70(纯形态)(即，其中小于15％的化合物70呈结晶形态，其中小于10％的化合物70呈结晶形态，其中小于5％的化合物70呈结晶形态)。
219.根据实施例218所述的基本上无定形化合物70(纯形式)，其中化合物70是100％无定形的。
220.根据实施例218或219所述的基本上无定形化合物70(纯形态)，其特征在于基本上类似于图15的X射线粉末衍射图。
221.基本上结晶化合物163形态A(纯)(即，其中小于15％的化合物163呈无定形形态，其中小于10％的化合物163呈无定形形态，其中小于5％的化合物163呈无定形形态)。
222.根据实施例221所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其中化合物163形态A(纯)是100％结晶的。
223.根据实施例221或222所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其特征在于具有在7.4±0.2度2θ处的信号的X射线粉末衍射图。
224.根据实施例221至223中任一项所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其特征在于具有选自7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ和15.0±0.2度2θ的一个、两个或三个信号的X射线粉末衍射图。
225.根据实施例221至224中任一项所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其特征在于具有选自7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ和25.8±0.2度2θ的一个、两个、三个、四个、五个或六个信号的X射线粉末衍射图。
226.根据实施例221至225中任一项所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其特征在于具有选自7.4±0.2度2θ、8.4±0.2度2θ、14.1±0.2度2θ、14.6±0.2度2θ、15.0±0.2度2θ、16.9±0.2度2θ、19.1±0.2度2θ、20.0±0.2度2θ、22.5±0.2度2θ、25.6±0.2度2θ、和25.8±0.2度2θ中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个信号的X射线粉末衍射图。
227.根据实施例221至226中任一项所述的基本上结晶化合物163形态A(纯)，其特征在于基本上类似于图16的X射线粉末衍射图。
228.基本上无定形化合物173(纯形态)(即，其中小于15％的化合物173呈结晶形态，其中小于10％的化合物173呈结晶形态，其中小于5％的化合物173呈结晶形态)。
229.根据实施例228所述的基本上无定形化合物173(纯形式)，其中化合物173是100％无定形的。
230.根据实施例228或229所述的基本上无定形化合物173(纯形态)，其特征在于基本上类似于图18的X射线粉末衍射图。
231.基本上结晶化合物173(纯形态)(即，其中小于15％的化合物173呈无定形形态，其中小于10％的化合物173呈无定形形态，其中小于5％的化合物173呈无定形形态)。
232.根据实施例231所述的基本上结晶化合物173形态A(纯)，其中化合物173形态A(纯)是100％结晶的。
233.根据实施例231或232所述的基本上结晶化合物173形态A(纯)，其特征在于三斜晶系，即P1空间群，以及在利用以下的Cu Kα辐射 的布鲁克衍射仪上150K处测量的单位晶胞维度：
234.基本上结晶化合物175形态A(纯)(即，其中小于15％的化合物175呈无定形形态，其中小于10％的化合物175呈无定形形态，其中小于5％的化合物175呈无定形形态)。
235.根据实施例234所述的基本上结晶化合物175形态A(纯)，其中化合物175形态A(纯)是100％结晶的。
236.根据实施例234或235所述的基本上结晶化合物175形态A(纯)，其特征在于斜方晶系，即P212121空间群，以及在利用以下的Cu Kα辐射 的布鲁克衍射仪上100K处测量的单位晶胞维度：
237.基本上结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态(即，其中小于15％的化合物188二氯甲烷溶剂化物呈无定形形态，其中小于10％的化合物188二氯甲烷溶剂化物呈无定形形态，其中小于5％的化合物188二氯甲烷溶剂化物呈无定形形态)。
238.根据实施例237所述的基本上结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态，其中化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态是100％结晶的。
239.根据实施例237或238所述的基本上结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态，其特征在于单斜晶系，即P21空间群，以及在利用以下的Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪上100K处测量的单位晶胞维度：
实例
通用实验程序
缩写
AcOH：乙酸
Boc酸酐((Boc)2O)：二碳酸二叔丁酯
Boc：丁氧基羰基
BOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷酯
t-BuOH：叔丁醇
CDCl3：氯仿-d
CDI：1,1'-羰基二咪唑
CD3OD：甲基-d4乙醇-d
CH2Cl2：二氯甲烷
CH3CN：乙腈
CO2：二氧化碳
Cs2CO3：碳酸铯
CuI：碘化铜(I)
DCE：1,2-二氯乙烷
DCM：二氯甲烷
DIEA：(DIPEA；N,N-二异丙基乙胺)
DMAP：4-二甲基氨基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMP：戴斯-马丁高碘烷
DMSO：二甲基亚砜
DMSO-d6：二甲基亚砜-d6
EDCI：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺
ESI-MS：电喷雾电离质谱法
Et2O：二乙醚
Et3N或TEA：三乙胺
EtOAc：乙酸乙酯
EtOH：乙醇
Et2O：二乙醚
ESI-MS：电喷雾电离质谱法
Grubbs催化剂第2代：[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌
H2：氢
HATU：N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵N-氧化六氟磷酸
HCl：盐酸
HOBT：羟基苯并三唑
HPLC：高效液相色谱法
H2：氢
H2O2：过氧化氢
KHSO4：硫酸氢钾
KOH：氢氧化钾
K2CO3：碳酸钾
KMnO4：高锰酸钾
KHCO3：碳酸氢钾
LC：液相色谱法
LiAlH4：氢化铝锂
LiOH：氢氧化锂
MeMgCl：甲基氯化镁
MeTHF或2-MeTHF或2-Me-THF：2-甲基四氢呋喃
MeOH：甲醇
MTBE：甲基叔丁基醚
MgSO4：硫酸镁
MS：质谱法
n-Bu4NF·H2O：四正丁基氟化铵一水合物
Na：钠
NaH：氢化钠
NaHCO3：碳酸氢钠
NaOAc：乙酸钠
NaOH：氢氧化钠
Na2SO4：硫酸钠
NBS：N-溴代琥珀酰亚胺
NH3：氨
NH4Cl：氯化铵
NH4HCO3：碳酸氢铵
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR：核磁共振
N2：氮
Pd/C：钯碳
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Pd(dppf)Cl2：1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)
Pd(OAc)2：乙酸钯(II)
PhI(OAc)2：(二乙酸碘)苯
POCl3：氯化磷酰
PtO2：氧化铂
RT或rt：室温
SFC：超临界流体色谱法
Silica Cat Pd：钯/二氧化硅
SiO2：硅胶
TBAF：四正丁基氟化铵
TBAI：四丁基碘化铵
TBDPS-Cl或TBDPSCl：叔丁基二苯基氯硅烷
TEA：三乙胺
TEMPO：2,2,6,6-四甲基哌啶基氧基
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
Ti(OEt)4：乙氧基钛(IV)
TMEDA：四甲基乙二胺
TMSCF3：三氟甲基三甲基硅烷
p-TsCl或甲苯磺酰氯：对甲苯磺酰氯或4-甲苯磺酰氯
T3P：1-丙烷膦酸酐
UPLC：超高效液相色谱法
Xantphos：4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽
詹氏催化剂1B：二氯[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)2-咪唑烷基亚基][[5-[(二甲基氨基)磺酰]-2-(1-甲基乙氧基-O)苯基]亚甲基-C]钌(II)
通用UPLC-MS/HPLC-MS/GC分析方法：
LC方法A：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(50×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002350)，以及在3.0分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法B：使用Kinetex C18柱(4.6X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS。温度：45℃；流动：2.0毫升/分钟；运行时间：3分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续2.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
LC方法C：使用Kinetex极性C18柱(3.0X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.2毫升/分钟；运行时间：6分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续4.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持2.0分钟。
LC方法D：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(50×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002350)，以及在5.0分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法E：使用Kinetex极性C18柱(3.0X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.2毫升/分钟；运行时间：3分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续2.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
LC方法F：使用Kinetex C18柱(4.6X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：2.0毫升/分钟；运行时间：6分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续4.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持2.0分钟。
LC方法G：使用默克密理博(Merckmillipore)Chromolith SpeedROD C18柱(50x4.6mm)的分析反相HPLC-MS，以及在6分钟内从5％至100％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.1％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.1％三氟乙酸)。
LC方法H：使用由水制备的水Cortex C18柱(3.0X 50mm，2.7μm粒度)的分析反相HPLC-MS(pn：186007370)，温度：55℃；流动：1.2毫升/分钟；流动相A：水(+0.1％三氟乙酸)。流动相B：乙腈(+0.1％三氟乙酸)。梯度：在4分钟内5％至100％ B，在100％ B下平衡持续0.5分钟，在1.5分钟内平衡到5％ B。
LC方法I：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(30X 2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002349)，以及在1.2分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.5毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法J：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(50X 2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002350)，以及在3.0分钟内30％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法K：使用Kinetex EVO C18柱(4.6X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：2.0毫升/分钟；运行时间：4分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续2.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持2.0分钟。
LCMS方法L：使用X-Terra MS C18柱(4.6X 150mm，5μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：40℃；流动：1.5毫升/分钟；运行时间：10分钟。流动相：初始95％水(+10mM碳酸氢铵)和5％乙腈至95％乙腈线性梯度持续6.5分钟，然后在95％乙腈下保持3.5分钟。
LC方法M：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(50×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002350)，以及在3.0分钟内50％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法N：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(50×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002350)，以及在3.0分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(0.05％甲酸铵)。流动相B＝乙腈。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法O：使用Kinetex极性C18柱(3.0X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.2毫升/分钟；运行时间：4分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续3.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
LC方法P：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(100X 2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002352)，以及在13.5分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝0.8毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法Q：使用由菲罗门公司(Phenomenex)出售的Onyx整体C18柱(50X 4.6mm)的分析反相HPLC-MS(pn：CH0-7644)，以及在2.9分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝12毫升/分钟，进样体积＝50μL，以及柱温＝25℃。
LC方法R：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(30×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002349)，以及在1.0分钟内从30％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法S：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(30×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002349)，以及在1.0分钟内从1％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.5毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法T：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(30X 2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002349)，以及在1.0分钟内从50％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法U：使用由水制备的Acquity UPLC-MS BEH C18柱(30×2.1mm，1.7μm粒度)的分析反相UPLC-MS(pn：186002349)，以及在1.0分钟内从75％至99％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.05％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.035％三氟乙酸)。流速＝1.2毫升/分钟，进样体积＝1.5μL，以及柱温＝60℃。
LC方法V：使用Kinetex EVO C18柱(2.1X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.0毫升/分钟；运行时间：1.5分钟。流动相：初始98％的流动相A(水中的10mM甲酸铵:乙腈，95:5，pH 9)和2％流动相B(乙腈)至98％乙腈线性梯度持续1.15分钟，然后在98％乙腈下保持0.2分钟，然后返回至98％水和10mM甲酸铵持续0.05分钟并且保持0.1分钟。
LC方法W：使用Kinetex极性C18柱(3.0X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.2毫升/分钟；运行时间：4分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续3.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
LC方法X：使用Kinetex极性C18柱(3.0X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.2毫升/分钟；运行时间：5分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续4.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
LC方法Y：使用Luna C18柱(3.0X 50mm，3μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.5毫升/分钟；运行时间：3.5分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续1.3分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持2.2分钟。
LC方法Z：使用Luna C18柱(3.0X 50mm，3μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.5毫升/分钟；运行时间：2.5分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续1.3分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.2分钟。
LC方法AA：使用SunFire C18柱(4.6X 75mm，3.5μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃；流动：1.5毫升/分钟；运行时间：6分钟。流动相：初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续4.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持2.0分钟。
LC方法BB：使用XBridge C18柱(4.6X 75mm，5μm粒度)的分析反相HPLC-MS；流动：1.5毫升/分钟；运行时间：6分钟。流动相：初始95％水(+10mM碳酸氢铵)和5％乙腈至5％水(+10mM碳酸氢铵)和95％乙腈持续3分钟，然后在95％乙腈和5％水(+10mM碳酸氢铵)下保持3分钟。
LC方法CC：使用菲罗门ZB-1MS柱(0.25X 30mm，0.25μm粒度)的分析GC；起始温度50℃，以20℃/分钟斜升至300℃，并且保持5分钟。
LC方法DD：使用默克密理博Chromolith SpeedROD C18柱(50X 4.6mm)的分析反相HPLC-MS，以及在12分钟内5％至100％流动相B的双梯度运行。流动相A＝水(+0.1％三氟乙酸)。流动相B＝乙腈(+0.1％三氟乙酸)。
LC方法EE：使用Kinetex EVO C18柱(4.6X 50mm，2.6μm粒度)的分析反相HPLC-MS，温度：45℃，流动：2.0毫升/分钟，运行时间：3分钟。流动相条件；初始95％水(+0.1％甲酸)和5％乙腈(+0.1％甲酸)至95％乙腈(+0.1％甲酸)线性梯度持续2.0分钟，然后在95％乙腈(+0.1％甲酸)下保持1.0分钟。
通用X射线粉末衍射(XRPD)方法
X射线粉末衍射(XRPD)图在室温下使用帕纳科(PANalytical)Empyrean X射线衍射仪(荷兰阿尔默洛(Almelo,The Netherlands))以连续模式记录。使用在45kV和40mA下操作的Cu管生成X射线。像素1d检测器与抗散射狭缝P8一起使用。发散光学是布拉格布兰塔诺高分辨率(Bragg Brentano High Definition，BBHD)，具有10mm光罩，1/8发散狭缝和1/2抗散射狭缝。连续扫描模式采用0.0131度步长和每步13.77秒的计数时间，在4至40度2θ的范围内整合。将粉末样品放置在零背景支架内的凹进区域中，并用载玻片压平。
通用热重分析(TGA)方法
使用TGA来研究表征的批次中残留溶剂的存在，并且鉴定样品发生分解的温度。除非以下实例中另外提供，否则TGA数据在Mettler Toledo TGA/DSC 3+STARe系统上收集。在具有TRIOS系统的TA仪器发现系列上收集化合物4的TGA数据。
通用差示扫描量热法(DSC)
除非以下实例中另外提供，否则使用Mettler Toledo TGA/DSC 3+STARe系统测量材料的熔点或玻璃转变点。在具有TRIOS系统的TA仪器发现系列上收集化合物4的DSC数据。
一般合成方案：
本公开的另一个方面提供了用于制备以下化合物的方法：式I、I'、I"、Ia、Ia'、IIa、IIa'、IIb、IIb'、IIc、IIc'、IId、IId'、IIe、IIe'、IIf、IIf'、IIg、IIg'、IIh、IIh'的化合物、化合物1至213、化合物214至222、其氘化衍生物以及那些化合物和氘化衍生物的药学上可接受的盐；以及用于制备前述中的任一项的中间体。在以下方案和实例的一些实施例中，除了指定可变取代基之外或代替指定可变取代基，每个氮原子和氧原子可任选地具有选自本文公开的保护基团的范围的一个或多个保护基团。在以下方案和实例的一些实施例中，每个化合物可以被其氘化衍生物置换。
方案1：
方案1是指用于由式1-1的化合物制备式1-7的中间体化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。X1选自卤素，如Cl、I或Br。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a是选自2、3、4和5的整数。Y如对上式I所定义的。
格氏加成(Grignard-type addition)的任何合适的条件可以用于使式1-1的化合物与式1-2的化合物发生反应，以形成式1-3的化合物。例如，式1-1的化合物与式1-2的化合物的格氏加成可以在-78℃下在Et2O中形成，然后加入1N HCl水溶液，以得到式1-3的化合物。式1-3的化合物转化成式1-4的化合物可以通过建立氧保护基团的任何合适的程序来完成。式1-4的酯到式1-5的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。例如，式1-5的羧酸转化成式1-6的化合物可以通过使式1-5的化合物与DMF中的HATU和Et3N发生反应，然后加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯。任何合适的水解条件可以用于将式1-6的氨基甲酸酯转化成式1-7的酰肼。例如，式1-7的化合物可以通过使式1-6的化合物与CH2Cl2中的HCl在环境温度下发生反应。
方案2：
方案2是指用于由式2-1的化合物制备式2-3的中间体化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a是选自2、3、4和5的整数。R1、m和Y如对上式I所定义的。
用于形成酰胺键的任何合适的条件可以用于由式2-1的化合物和式1-7的化合物产生式2-3的化合物。例如，式2-1的化合物可以与乙腈和DMF中的CDI发生反应，然后加入式1-7的化合物，以得到式S2-2的化合物。式2-2的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式2-3的化合物。例如，式2-2的化合物可以与乙腈中的DIPEA发生反应，然后加入对甲苯磺酰氯，以得到式2-3的噁二唑。
方案3：
方案3是指用于由式3-1的化合物制备式3-8的化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a是选自1、2、3和4的整数，并且b是选自0、1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。环A、R1、m和Y如对上式I所定义的。
式3-1的化合物与式3-2的化合物的反应以得到式3-3的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式3-3的酯到式3-4的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。式3-5的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件由式3-4的化合物和式1-7的化合物制备。式3-5的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式3-6的化合物。例如，式3-5的化合物可以与乙腈中的DIPEA发生反应，然后加入对甲苯磺酰氯，以得到式3-6的噁二唑。式3-6的化合物的大环化可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式3-6的化合物可以在DCE中的Grubbs第2代催化剂的存在下发生反应，以得到式3-7的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式3-7的不饱和化合物到式3-8的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案4：
方案4是指用于由式2-3的化合物制备式4-3的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。环A、R1、m和Y如对上式I所定义的。
式2-3的化合物与式3-2的化合物的反应以得到式4-1的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式4-1的化合物的大环化以产生式4-2的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式4-1的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式4-2的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式4-2的不饱和化合物到式4-3的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案5：
方案5是指用于由式2-3的化合物制备式5-5的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。PG2选自合适的氮保护基团，如Boc和Fmoc。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。环A、R1、m和Y如对上式I所定义的。
式2-3的化合物与式5-1的化合物的反应以得到式5-2的化合物可以通过任何合适的交叉复分解条件来完成。例如，式2-3的含末端烯烃的化合物可以在DCE中的Grubbs第2代催化剂的存在下，与式5-1的含末端烯烃的化合物发生反应，以得到式5-2的交叉复分解产物。式5-2的不饱和化合物转化成式5-3的化合物可以使用用于烯烃还原和胺去保护的任何合适的程序来完成。式5-3的化合物的大环化以产生式5-4的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式5-4的化合物到式5-5的乙醇的转化可以使用用于乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案6：
方案6是指用于由式3-1的化合物制备式6-7的化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、Y和RX1如对上式I所定义的。
式3-1的化合物与式6-1的化合物的反应以得到式6-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式6-2的酯到式6-3的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。式6-4的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件由式6-3的化合物和式1-7的化合物制备。式6-4的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式6-5的化合物。例如，式6-4的化合物可以与乙腈中的DIEA发生反应，然后加入对甲苯磺酰氯，以得到式6-5的噁二唑。式6-5的化合物的大环化以产生式6-6的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式6-5的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式6-6的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式6-6的不饱和化合物到式6-7的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案7：
方案7是指用于由式3-1的化合物制备式7-7的化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自0、1、2和3的整数，条件是a+b不大于4。R1、m、Y、RX1和RY如对上式I所定义的。
式3-1的化合物与式7-1的化合物的反应以得到式7-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式7-2的酯到式7-3的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。式7-4的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件由式7-3的化合物和式1-7的化合物制备。式7-4的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式7-5的化合物。例如，式7-4的化合物可以与乙腈中的DIEA发生反应，然后加入对甲苯磺酰氯，以得到式7-5的噁二唑。式7-5的化合物的大环化以产生式7-6的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式7-5的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式7-6的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式7-6的不饱和化合物到式7-7的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案8：
方案8是指用于由式2-3的化合物制备式8-3的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、Y和RX1如对上式I所定义的。
式2-3的化合物与式6-1的化合物的反应以得到式8-1的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式2-3的化合物可以与乙腈中的DIEA发生反应，并且加热以得到式8-1的化合物。式8-1的化合物的大环化以产生式8-2的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式8-1的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式8-2的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式8-2的不饱和化合物到式8-3的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案9：
方案9是指用于由式9-1的化合物制备式9-5的化合物的方法。LX选自卤素，如Cl、I或Br。c是独立地选自1、2、3和4的整数。环A、环B、R1、m和Y如对上式I所定义的。
式9-1的化合物与式9-2的化合物的反应以得到式9-3的化合物可以通过任何合适的噁二唑形成条件来完成。例如，式9-2的化合物可以与DCM中的(N-异氰基亚胺)三苯基磷烷发生反应，然后逐滴加入式9-1的化合物，以得到式9-3的化合物。式9-3的化合物的大环化以产生式9-4的化合物可以通过任何合适的钯催化烯烃偶联条件来完成。例如，乙腈中的式9-3的化合物可以与三邻甲苯基膦和Pd(OAc)2发生反应，然后加入三乙胺，以得到式9-4的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式9-4的不饱和化合物到式9-5的大环的转化可以使用用于烯烃还原的任何合适的程序来完成。
方案10：
方案10是指用于由式10-1的化合物制备式10-8的化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。环A、R1和Y如对上式I所定义的。
式10-1的化合物与式3-2的化合物的反应以得到式10-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式10-1的化合物可以与乙腈中的式3-2的化合物和DIEA发生反应，以得到式10-2的化合物。式10-2的酯到式10-3的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。式10-4的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件由式10-3的化合物和式1-7的化合物制备。式10-4的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式10-5的化合物。例如，式10-4的化合物可以与乙腈中的DIEA发生反应，然后加入对甲苯磺酰氯，以得到式10-5的噁二唑。式10-5的化合物的大环化以产生式10-6的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式10-5的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式10-6的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式10-7的化合物转化成式10-8的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式10-7的不饱和化合物到式10-8的大环的转化可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案11：
方案11是指用于由式2-3的化合物制备式11-4的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、Y、RX1和RYN如对上式I所定义的。
式2-3的化合物与式11-1的化合物的反应以得到式11-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式2-3的化合物和式11-1的化合物可以在加热的存在下在DMSO中发生反应，以得到式11-2的化合物。式11-2的含末端烯烃的化合物到式11-3的羧酸的转化可以通过任何氧化切割条件来完成。例如，式11-2的化合物可以在四氧化锇和高碘酸钠的存在下在二噁烷和水的混合物中发生反应，以得到式11-3的化合物。式11-3的化合物的大环化以产生式11-4的化合物可以通过任何合适的酰胺键形成条件来完成。例如，式11-3的化合物可以在DMF中与IDEA发生反应，随后加入HATU，以得到式11-4的化合物。
方案12：
方案12是指用于由式2-3的化合物制备式12-4的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a是选自3、4、5和6的整数。环A、R1、m和Y如对上式I所定义的。
式2-3的含末端烯烃的化合物到式12-1的羧酸的转化可以通过任何合适的氧化条件来完成。例如，式2-3的化合物可以通过硼氢化/氧化转化成乙醇，随后通过乙醇的氧化转化成羧酸，以得到式12-1的化合物。式12-1的化合物与式12-2的化合物的反应以得到式12-3的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式12-1的化合物可以与微波中的式12-2的化合物和二异丙基乙胺发生反应，以得到式12-3的化合物。式12-3的化合物的大环化以产生式12-4的化合物可以通过任何合适的酰胺键形成条件来完成。例如，式12-3的化合物可以与DMF中的DIEA发生反应，随后加入HATU，以产生式12-4的化合物。
方案13：
方案13是指用于由式3-1的化合物制备式13-7的化合物的方法。每个Alk独立地选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X、Y、RX1和RY如对上式I所定义的。
式3-1的化合物与式13-1的化合物的反应以得到式13-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式3-1的化合物和式13-1的化合物可以在乙腈中搅拌，随后逐滴加入二异丙基乙胺并且加热，以得到式13-2的化合物。式13-2的二酯到式13-3或式13-4的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件，随后通过合适的酰胺键形成条件来完成。例如，式13-2的化合物可以与甲醇中的一水合肼发生反应，以得到式13-3或式13-4的化合物。式13-3或式13-4的化合物转化成式13-5的化合物可以通过任何合适的酰胺键形成条件来完成。式13-5的化合物转化成式13-6的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件来完成。例如，式13-5的化合物可以与乙腈中的N,N-二异丙基乙胺发生反应，随后加入4-甲苯磺酰氯，以得到式13-6的噁二唑。式13-6的化合物转化成式13-7的乙醇可以通过任何合适的乙醇去保护程序来完成。
方案14：
方案14是指用于由式14-1的化合物制备式14-7的化合物的方法。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。PG2选自合适的氮保护基团，如Boc和Fmoc。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X、Y和RX1如对上式I所定义的。
式14-1的化合物与式14-2的化合物的反应以得到式14-3的化合物可以通过任何合适的酰胺键形成条件来完成。式14-3的化合物转化成式14-4的化合物可以通过将乙醇转化成离去基团的任何合适的程序来完成。例如，式14-3的化合物可以与三苯基膦发生反应，随后与无水THF中的2,2,2-三氯乙腈发生反应，以得到式14-4的化合物。式14-4的化合物转化成式14-5的化合物可以通过任何合适的胺去保护条件来完成。式14-5的化合物的大环化以产生式14-6的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。例如，式14-5的化合物可以与DCM中的TFA发生反应，以得到式14-6的化合物。式14-6的化合物转化成式14-7的乙醇可以通过任何合适的乙醇去保护程序来完成。
方案15：
方案15是指用于由式7-6的化合物制备式15-4的化合物的方法。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自0、1、2和3的整数，条件是a+b不大于4。R1、m、Y、RX1和RY如对上式I所定义的。
式7-6的化合物转化成式15-1的乙醇可以通过任何合适的烯烃氧化程序来完成。式15-1的化合物转化成式15-2的化合物可以通过任何合适的乙醇去保护条件来完成。式15-2的乙醇转化成式15-3的含羰基化合物可以通过任何合适的氧化程序来完成。式15-3的含羰基化合物转化成式15-4的化合物可以通过任何合适的还原条件来完成。
方案16：
方案16是指用于由式3-1的化合物制备式16-10和式16-11的化合物的方法。Alk选自C1-C6直链或支链烷基。LG选自卤素和基于氧的离去基团，如OTf和OTs。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X、Y和RZ1如对上式I所定义的。
式3-1的化合物与式16-1的化合物的反应以得到式16-2的化合物可以通过任何合适的芳香族取代条件来完成。式16-2的酯到式16-3的羧酸的转化可以通过任何合适的水解条件来完成。式16-5的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件由式16-3的化合物和式16-4的化合物制备。式16-5的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式16-6的化合物。例如，式16-5的化合物可以与乙腈中的DIEA发生反应，随后加入对甲苯磺酰氯，以得到式16-6的噁二唑。式16-6的化合物的大环化以产生式16-7的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式16-6的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式16-7的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式16-7的化合物转化成式16-8的化合物可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。式16-8的化合物转化成式16-9的含羰基化合物可以使用任何合适的氧化条件来完成。式16-9的含羰基化合物转化成式16-10的肟可以使用任何合适的肟形成程序来完成。式16-9的含羰基化合物转化成式16-11的乙醇可以使用用于亲核加成为羰基的任何合适的程序来完成。
方案17：
方案17是指用于由式17-1的化合物制备式17-7的化合物的方法。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X、Y和RZ1如对上式I所定义的。
式17-1的羧酸与式17-2的乙醛的反应以得到式17-3的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件来完成。例如，式17-1的化合物可以与DCM中的式17-2的化合物和(N-异氰基亚胺)三苯基磷烷发生反应，以得到式17-3的化合物。式17-3的乙醇转化成式17-4的含羰基化合物可以通过任何合适的氧化条件完成。式17-4的含羰基化合物转化成式17-5的乙醇可以使用用于亲核加成为羰基的任何合适的程序来完成。式17-5的化合物的大环化以产生式17-6的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式17-5的化合物可以在DCE中的[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-[(2-异丙氧基-5-硝基-苯基)亚甲基]钌的存在下发生反应，以得到式17-6的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式17-6的化合物转化成式17-7的化合物可以使用用于烯烃还原的任何合适的程序来完成。
方案18：
方案18是指用于由式17-1的化合物制备式18-5的化合物的方法。PG1选自合适的氧保护基团，如苄基和硅烷基部分(例如，TBDPS、TBS和TMS)。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X和Y如对上式I所定义的。
式17-1的化合物与式18-1的化合物的反应以得到式18-2的化合物可以使用任何合适的酰胺键形成条件来完成。式18-2的化合物可以使用合适用于噁二唑形成的任何条件转化成式18-3的化合物。例如，式18-2的化合物可以与二异丙基乙胺和对甲苯磺酰氯发生反应，以得到式18-3的噁二唑。式18-3的化合物的大环化以产生式18-4的化合物可以通过任何合适的关环复分解条件来完成。例如，式18-3的化合物可以在DCE中的詹氏催化剂1B的存在下发生反应，以得到式18-4的大环作为E/Z异构体的混合物(如键所指示的)。式18-4的化合物转化成式18-5的化合物可以使用用于烯烃还原和乙醇去保护的任何合适的程序来完成。
方案19：
方案19是指用于由式13-7的化合物制备式19-2的化合物的方法。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X和Y如对上式I所定义的。
式13-7的乙醇转化成式19-1的烯烃可以使用任何合适的脱水程序来完成。式19-1的化合物转化成式19-2的化合物可以使用任何合适的烯烃还原条件来完成。
方案20：
方案20是指用于由式20-1的化合物制备式20-2的化合物的方法。a和b中的每一个是独立地选自1、2、3和4的整数，条件是a+b不大于5。R1、m、X、Y、RZ1和R2如对上式I所定义的。
式20-1的胺转化成式20-2的胺可以使用任何合适的胺化程序来完成。例如，式20-1的胺可以在双(三甲基硅烷基)氨基]钠的存在下与卤代烷发生反应，以得到式20-2的化合物。
中间体的制备
中间体1：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯的制备
步骤1：3-(二苯亚甲基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
将3-氯-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(47.3g，197.43mmol)、二苯基甲胺(47g，259.33mmol)、Xantphos(9.07g，15.675mmol)和碳酸铯(131g，402.06mmol)于二噁烷(800mL)中的混合物通过氮气鼓泡脱气30分钟。加入Pd(OAc)2(3.52g，15.679mmol)，并且将系统用氮气吹扫三次。将反应混合物在100℃下加热18小时。将反应冷却至室温，并在Celite垫上过滤。将饼用EtOAc洗涤，并且将溶剂在减压下蒸发，以得到呈黄色固体的3-(二苯亚甲基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(90g，84％)。ESI-MS m/z计算值384.10855，实测值385.1(M+1)+；保留时间：2.24分钟(LC方法B)。
步骤2：3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向3-(二苯亚甲基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(65g，124.30mmol)于甲醇(200mL)中的悬浮液中加入HCl(甲醇中的3M)(146mL的3M，438.00mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在减压下去除溶剂。将残余物放入乙酸乙酯(2L)和二氯甲烷(500mL)中。将有机相用5％碳酸氢钠水溶液(3X 500mL)和盐水(2X 500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下去除溶剂。将残余物用庚烷(2X 50mL)研磨，并丢弃母液。将获得的固体用二氯甲烷和庚烷的混合物(1:1，40mL)研磨，并过滤以得到呈黄色固体的3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(25.25g，91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.28(s,1H),5.98(br.s,2H),4.00(s,3H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-63.23(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值220.046，实测值221.1(M+1)+；保留时间：1.62分钟(LC方法E)。
步骤3：3-氨基-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下向3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(18.75g，80.91mmol)于乙腈(300mL)中的溶液中按份加入N-溴代琥珀酰亚胺(18.7g，105.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯(1000mL)。将有机层用乙酸乙酯(2X 200mL)反萃取的10％硫代硫酸钠溶液(3X 200mL)洗涤。将合并的有机提取物用饱和的碳酸氢钠溶液(3X 200mL)、盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并且在真空中浓缩，以产生3-氨基-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(25.46g，98％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.93-4.03(m,3H),6.01(br.s.,2H),7.37(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-64.2(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值297.9565，实测值299.0(M+1)+；保留时间：2.55分钟(LC方法F)。
步骤4：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
将3-氨基-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(5g，15.549mmol)、(Boc)2O(11g，11.579mL，50.402mmol)、DMAP(310mg，2.5375mmol)和CH2Cl2(150mL)的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩，并且通过硅胶色谱法(0％至15％乙酸乙酯/庚烷)进行纯化产生了呈淡黄色固体的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(6.73g，87％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.42(s,18H),3.96(s,3H),7.85(s,1H)ppm。19FNMR(282MHz,CDCl3)δ-63.9(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值498.06134，保留时间：2.34分钟(LC方法B)。
中间体2：6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸的制备
步骤1：2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在-78℃下将s-丁基锂(20.4mL的环己烷中的1.4M，28.56mmol)逐滴加入到吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.5g，20.44mmol)和四甲基乙二胺(2.8675g，3.7mL，24.676mmol)于二乙醚(80mL)的溶液中并且将混合物搅拌2小时。然后在-78℃下缓慢加入氯化锌(57mL的THF中的0.5M，28.5mmol)，并将混合物搅拌90分钟。在-78℃下缓慢加入氰化铜(I)(2.2g，24.564mmol)于氯化锂(82mL的THF中的0.5M，41mmol)中的溶液，并将混合物搅拌90分钟，然后在-78℃下缓慢加入3-溴丙-1-烯(7.4094g，5.3mL，61.247mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入氢氧化铵水溶液(60mL)，并将混合物在室温下搅拌1小时。分离相，并用二乙醚(2X 60mL)萃取水相。合并有机相，用盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度)进行纯化产生了呈澄清油的2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.9g，67％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.46(s,9H),1.66-1.95(m,4H),1.99-2.23(m,1H),2.33-2.62(m,1H),3.22-3.46(m,2H),3.67-3.94(m,1H),4.97-5.11(m,2H),5.62-5.84(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值211.1572，实测值234.2(M+Na)+；保留时间：2.17分钟(LC方法B)。
步骤2：2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)
在0℃下将三氟乙酸(13.468g，9.1mL，118.12mmol)缓慢加入到二氯甲烷(12mL)中的2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.6g，7.5721mmol)中。将混合物在室温下搅拌3小时然后浓缩。加入甲苯(10mL)，并将混合物浓缩(4次重复)，以得到呈琥珀色油的2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(1.9g，99％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.57-1.85(m,1H),1.89-2.31(m,3H),2.35-2.71(m,2H),3.32(br.s.,2H),3.61(br.s.,1H),4.95-5.35(m,2H),5.51-5.91(m,1H),8.27(br.s.,1H),9.31(br.s.,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-75.9(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值111.1048，实测值112.2(M+1)+；保留时间：0.36分钟(LC方法B)。
步骤3：6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在密封管中，将2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(338mg，1.5008mmol)加入到乙腈(10mL)中的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(500mg，1.0015mmol)和DIPEA(964.60mg，1.3mL，7.4635mmol)中。将管密封，并且将混合物在80℃下加热过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液(25mL)，并用乙酸乙酯(3X 25mL)萃取。将有机相合并，用盐水(25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度)进行纯化产生了呈黄色油的6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(480mg，91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.42(s,18H),1.65-1.90(m,2H),1.94-2.18(m,2H),2.24-2.40(m,1H),2.51-2.65(m,1H),3.41-3.52(m,1H),3.55-3.69(m,1H),3.88(s,3H),4.46-4.60(m,1H),4.95-5.11(m,2H),5.65-5.87(m,1H),7.63(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-56.0(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值529.24，实测值530.3(M+1)+；保留时间：2.63分钟(LC方法E)。
步骤4：6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(13.1g，24.74mmol)于THF(156mL)中的溶液中加入甲醇(125mL)和水(100mL)。将无水氢氧化锂(2.116g，86.6mmol)分三份加入到混合物中。将混合物在60℃下搅拌3.5小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入70mL的10％ HCl水溶液，并且将所得混合物用EtOAc(3X 100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至50％ EtOAc/己烷梯度)进行纯化，产生了呈黄色固体的6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(7.85g，76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.52(s,9H),1.74-1.81(m,2H),1.98-2.01(m,1H),2.15-2.26(m,2H),2.44-2.50(m,1H),3.38-3.43(m,1H),3.63-3.69(m,1H),4.25-4.32(m,1H),5.04-5.08(m,2H),5.70-5.80(m,1H),9.13(s,1H),9.67(s,1H),11.11(br.s,1H).ESI-MSm/z计算值415.1719，实测值416.3(M+1)+；保留时间：2.01分钟(LC方法A)。
中间体3：(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)的制备
步骤1：(2S)-2-(碘甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下在30分钟内向咪唑(16.9g，248.2mmol)和三苯基膦(35.8g，136.5mmol)于2-甲基四氢呋喃(300mL)中的溶液中按份加入碘(34.8g，137.1mmol)。将反应温度保持在<6℃，并且混合物变成深橙色乳脂糖，然后随着搅拌变成浅黄色和颗粒状。使混合物温热至环境温度，并且按份加入(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(25g，124.2mmol)于2-甲基四氢呋喃(150mL)中的溶液。在环境温度下搅拌混合物16小时，从而得到浅黄色浆液。将浆液通过硅藻土过滤以去除盐，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解在150mL的EtOAc中。向混合物中加入150mL己烷，得到油。加入EtOAc后，油不会溶解(约300mL)。通过抽吸去除油，并且通过分析发现是三苯基氧化膦。在去除油之后留下的溶剂相在真空中浓缩。在静置时形成沉淀，并且在100mL的MTBE中搅拌。将沉淀通过过滤去除，并用MTBE洗涤。将滤液在真空中浓缩，并且通过硅胶色谱法(0％至40％ EtOAc/己烷)进行纯化产生了呈淡黄色油的(2S)-2-(碘甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(36.5g，94％)。1H NMR(499MHz,氯仿-d)δ3.89(d,J＝14.0Hz,1H),3.42(d,J＝34.7Hz,4H),2.06(s,1H),2.00-1.86(m,2H),1.82(q,J＝6.9Hz,1H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值311.0382，实测值312.0(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法A)。
步骤2：(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将碘化亚铜(103g，540.8mmol)在氮气下悬浮于THF(525mL)中，并在搅拌下冷却至-40℃。在40分钟内将溴(乙烯基)镁(1L的1M，1.000mol)经由加料漏斗缓慢加入，从而将内部温度保持在-40℃与-45℃之间。将稠密悬浮液搅拌1小时，从而使得温热至-10℃。将黑色悬浮液冷却至-40℃，并且在30分钟内逐滴加入(2S)-2-(碘甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(105g，337.4mmol)于THF(260mL)中的溶液，从而将内部温度保持在-40℃与-45℃之间。将稠密悬浮液搅拌另外3小时，并且缓慢温热至18℃。将黑色悬浮液在减压下浓缩并且用饱和氯化铵水溶液(300mL)和MTBE(300mL)进行处理。将固体通过过滤去除并且将相分离。将有机相用饱和氯化铵水溶液(2X 100mL)又洗涤两次，并且将水相用MTBE(100mL)反萃取一次。将合并的有机相干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(己烷至5％丙酮/己烷(产物在200–210nm处吸收))进行纯化，产生了(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(32g，45％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.74(ddt,J＝17.3,10.3,7.2Hz,1H),5.13-4.97(m,2H),3.70(s,1H),3.23(dq,J＝19.2,11.3,9.4Hz,2H),2.46-1.52(m,6H),1.40(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值211.15723，实测值212.0(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法A)。
步骤3：(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)
向(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(17g，80.45mmol)于DCM(120mL)中的溶液中逐滴加入TFA(30mL，389.4mmol)。将混合物在环境温度下搅拌24小时。将溶剂在真空中去除，并且将产物用甲苯(200mL)共沸物处理3次。将产物在真空下干燥16小时，从而得到呈深色油的(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(17g，94％)。ESI-MS m/z计算值111.1048，实测值112.1(M+1)+；保留时间：0.4分钟(LC方法A)。
中间体4：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸的制备
步骤1：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(31.6g，63.29mmol)和(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(17g，75.49mmol)于乙腈(400mL)中的溶液中加入DIEA(45mL，258.4mmol)，并且将混合物在80℃下加热2小时。加入更多DIEA(10mL，57.41mmol)并且在80℃下搅拌18小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用EtOAc(700mL)稀释，并且用250mL的盐水洗涤两次，经MgSO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(0％至30％ EtOAc/己烷梯度)进行纯化，产生了6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(15g，45％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.63(s,1H),5.78(ddt,J＝17.3,10.2,7.2Hz,1H),5.15-4.91(m,2H),4.54(qd,J＝7.5,3.1Hz,1H),3.88(s,3H),3.61(t,J＝8.6Hz,1H),3.48(d,J＝8.4Hz,1H),2.69-2.53(m,1H),2.32(dt,J＝13.7,7.5Hz,1H),2.07(d,J＝5.6Hz,1H),2.02-1.94(m,1H),1.86-1.69(m,2H),1.43(s,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值529.24，实测值530.3(M+1)+；保留时间：2.06分钟(LC方法A)。
步骤2：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(20.5g，38.71mmol)溶解于THF(150mL)和MeOH(150mL)(黄色溶液)中，然后用水(150mL)进行处理(黄色乳液)，随后用LiOH(3.5g，146.1mmol)进行处理。将混合物加热至60℃并且搅拌3.5小时。将黄色混合物在减压下浓缩，以去除大部分THF和MeOH，以得到黄色乳液，将所述黄色乳液在冰浴中冷却，以得到黄色粘性悬浮液(pH＝14)。通过缓慢加入HCl(160mL的1M，160mmol)使悬浮液酸化，从而将内部温度保持在10℃左右(发泡)，并且然后在冷水浴中搅拌1小时。通过过滤收集固体，并且用冷水洗涤并且干燥过夜。通过用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷线性梯度洗脱的硅胶色谱法对固体进行纯化，从而得到明黄色固体的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(13.4g，83％)1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ11.11(s,1H),9.68(s,1H),9.13(s,1H),5.83-5.67(m,1H),5.12-5.02(m,2H),4.29(qd,J＝7.8,3.1Hz,1H),3.66(q,J＝9.0Hz,1H),3.41(t,J＝8.5Hz,1H),2.47(ddd,J＝13.8,7.6,3.2Hz,1H),2.29-2.17(m,1H),2.21-2.12(m,1H),2.06-1.93(m,1H),1.87-1.69(m,2H),1.53(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值415.1719，实测值416.0(M+1)+；保留时间：1.38分钟(LC方法M)。
中间体5：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)的制备
步骤1：2-羟基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯
在-78℃下在1.5小时的时间段内向3,3,3-三氟-2-氧代-丙酸乙酯(25.15g，147.87mmol)于Et2O(270mL)中的溶液中逐滴加入THF(190mL的0.817M，155.23mmol)中的溴(丁-3-烯基)镁(内部温度-72℃至-76℃)。将混合物在-78℃下搅拌20分钟。移除干冰-丙酮浴。在1小时内将混合物缓慢温热至5℃，加入到1N HCl水溶液(170mL)和碎冰(150g)的混合物中(pH＝4)。将两层分离。将有机层浓缩，并且将残余物与水相合并，并且用EtOAc(2X150mL)萃取。将合并的有机相用5％NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥。将混合物过滤并且浓缩，并用THF(2X 40mL)共蒸发，以得到呈无色油的2-羟基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯(37.44g，96％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.77(ddt,J＝17.0,10.4,6.4Hz,1H),5.15-4.93(m,2H),4.49-4.28(m,2H),3.88(s,1H),2.35-2.19(m,1H),2.17-1.89(m,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-78.74(s,3F)ppm。
步骤2：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯
在0℃下向2-羟基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯(24.29g，87.6％纯度，94.070mmol)于DMF(120mL)中的溶液按份加入NaH(60％于矿物油中，5.64g，141.01mmol)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。加入苄基溴(24.13g，141.08mmol)和TBAI(8.68g，23.500mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入NH4Cl(3g，0.6当量)。将混合物搅拌10分钟。加入30mL的EtOAc，然后是冰水(400g)。将混合物用CH2Cl2萃取并且将合并的有机层浓缩。通过硅胶色谱法(0％至20％ CH2Cl2/庚烷)进行纯化产生了呈粉色油的2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯(26.05g，88％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.34(t,J＝7.2Hz,3H),2.00-2.19(m,3H),2.22-2.38(m,1H),4.33(q,J＝7.2Hz,2H),4.64(d,J＝10.6Hz,1H),4.84(d,J＝10.9Hz,1H),4.91-5.11(m,2H),5.62-5.90(m,1H),7.36(s,5H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-70.5(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值316.12863，实测值317.1(M+1)+；保留时间：2.47分钟(LC方法B)。
步骤3：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸
将氢氧化钠(7.86g，196.51mmol)于水(60mL)中的溶液加入到2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸乙酯(24.86g，78.593mmol)于甲醇(210mL)中的溶液中。将反应在50℃下加热过夜。将反应浓缩以去除甲醇，用水(150mL)稀释，并将羧酸钠盐用庚烷(1X 100mL)洗涤。用3N HCl水溶液将水溶液酸化至pH＝2。将羧酸用二氯甲烷(3X 100mL)萃取，并经硫酸钠干燥。将溶液过滤并且浓缩，以得到呈浅黄色油的2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸(22.57g，97％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ14.31(br.s.,1H),7.55-7.20(m,5H),5.93-5.70(m,1H),5.17-4.91(m,2H),4.85-4.68(m,1H),4.67-4.55(m,1H),2.32-1.94(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-70.29(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值288.09732，实测值287.1(M-1)；保留时间：3.1分钟(LC方法C)。
步骤4：N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯
向2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸(21.92g，92.4％纯度，70.263mmol)于DMF(130mL)中的溶液中加入HATU(37.2g，97.836mmol)和Et3N(15g，148.24mmol)。将混合物搅拌10分钟，然后加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(12.2g，92.312mmol)。将混合物在25℃下搅拌过夜并在40℃下搅拌1小时。将混合物用冰水(500g)稀释，并用CH2Cl2萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩。通过硅胶色谱法(0％至30％ EtOAc/庚烷)进行纯化产生了呈白色固体的N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(26.08g，92％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.46(s,9H),2.10-2.31(m,3H),2.34-2.51(m,1H),4.60-4.72(m,1H),4.73-4.86(m,1H),4.95-5.19(m,2H),5.83(ddt,J＝16.7,10.4,6.1Hz,1H),6.28(br.s.,1H),7.30-7.51(m,5H),8.34(d,J＝2.6Hz,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-73.6(s,3F)ppm。
步骤5：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)
向N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(43.12g，107.2mmol)于CH2Cl2(200mL)中的溶液中加入HCl(100mL的4M，400.0mmol)，并且将混合物在环境温度下搅拌7小时。将溶剂在真空中去除，从庚烷中剥离残余物2次，并且将所得固体使用高真空在真空中干燥20小时，从而得到2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(35g，96％)1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.92(s,2H),7.41-7.31(m,2H),7.30-7.24(m,2H),7.24-7.16(m,1H),5.72-5.57(m,1H),5.02-4.87(m,2H),4.71(d,J＝10.9Hz,1H),4.62(d,J＝11.0Hz,1H),3.70(s,2H),2.34-1.85(m,4H).ESI-MS m/z计算值302.1242，实测值303.2(M+1)+；保留时间：1.5分钟(LC方法A)。
中间体6：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼的制备
步骤1：2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼
将2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)溶解于乙酸乙酯(500mL)并且用饱和NaHCO3水溶液(500mL)仔细处理并且搅拌0.5小时。将相分离并且将有机相用1:1饱和NaHCO3/水的溶液(500mL)洗涤一次，用1:4饱和NaHCO3/水的溶液(500mL)洗涤一次，用水(500mL)洗涤一次，并且用盐水(300mL)洗涤一次。将水相用乙酸乙酯(200mL)反萃取一次，并将合并的有机相干燥、过滤、蒸发，并且然后与甲苯共蒸发，并在真空下进一步干燥，以得到呈黄色油的2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(50g，99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),7.53-7.27(m,5H),5.81(ddt,J＝16.6,10.2,6.3Hz,1H),5.10-4.93(m,2H),4.71(s,2H),4.57-4.28(m,2H),2.27-1.84(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值302.1242，实测值303.0(M+1)+；保留时间：1.5分钟(LC方法A)。
中间体7：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯的制备
步骤1：N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在环境温度下向6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(239.2g，621.1mmol)和2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(230.1g，761.2mmol)于EtOAc(2.2L)中的混合物中加入吡啶(200mL，2.473mol)，得到沉淀。向混合物中加入1-丙烷膦酸酐(500g的50％w/w，785.7mmol)，并将反应混合物在环境温度下搅拌12小时。通过缓慢加入水(2L)中的NaOH(149g的50％w/w，1.863mol)淬灭反应，并将混合物搅拌15分钟。分离有机相，并用EtOAc(1L)萃取水相。将合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。在去除一半溶剂之后，将有机相用HCl水溶液(1000mL的1M，1.000mol)洗涤2次。将有机相经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物在温庚烷(2.5L)和MTBE(0.25L)中浆化，并且将混合物在环境温度下搅拌12小时，从而得到淡黄色浆液。过滤浆液，并将所得滤饼用1L的10％ MTBE/庚烷洗涤2次。将米白色固体空气干燥2小时，然后在40℃下在真空中干燥20小时，从而得到N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(379.9g，91％)1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),10.92(s,1H),10.35(s,1H),9.15(s,1H),7.50(d,J＝7.4Hz,2H),7.36(dt,J＝24.4,7.2Hz,3H),5.87(ddt,J＝16.0,10.4,5.2Hz,1H),5.09(d,J＝16.9Hz,1H),5.02(d,J＝10.1Hz,1H),4.84(q,J＝11.4Hz,2H),2.35-2.12(m,4H),1.49(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值668.1069，实测值670.9(M+3，Br同位素)+；保留时间：3.5分钟(LC方法D)。
步骤2：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N--[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(102g，150.8mmol)溶解于无水乙腈(1000mL)中，并且加入DIPEA(92mL，528.2mmol)。将所得的橙色溶液加热至70℃(内部温度)，从而制备澄清黄色溶液。然后将对甲苯磺酰氯(37.4g，196.2mmol)以12.47g的3等份间隔10分钟加入，并且然后加热反应另外30分钟。将反应冷却至室温，并且将乙腈在减压下浓缩。向混合物中加入1000mL MTBE，然后加入800mL水，并将混合物搅拌，并且将层分离。将有机层用柠檬酸(36.3g，188.9mmol)于700mL水中的溶液洗涤，然后用400mL饱和NaHCO3洗涤，然后用300mL盐水洗涤。然后将有机层经无水MgSO4干燥、并且在减压下浓缩。使用硅胶色谱法以15％至50％的EtOAc/己烷的8％溶液至纯己烷梯度对材料进行纯化，以产生N[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(91.7g，93％)，1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ10.18(s,1H),9.35(s,1H),7.55-7.47(m,2H),7.45-7.37(m,2H),7.36-7.28(m,1H),5.83-5.68(m,1H),5.10-4.93(m,2H),4.82(d,J＝10.5Hz,1H),4.69(d,J＝10.5Hz,1H),2.59-2.13(m,4H),1.56(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值650.0963，实测值651.0(M+1)+；保留时间：3.81分钟(LC方法D)。
中间体8：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯的制备
步骤1：N--[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(30g，41.910mmol)于MTBE(300mL)中的溶液中加入DIEA(6.6780g，9mL，51.670mmol)、DMAP(0.28g，2.2919mmol)和Boc酸酐(20.1g，21.158mL，92.097mmol)。将所得的黄色浑浊溶液在35℃下搅拌过夜。在冷却至室温之后，蒸发溶剂。然后将黄色油状残余物溶解于300mL DCM中，并且用水(300mL)洗涤，随后用盐水(300mL)洗涤。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(0％至20％ EtOAc/己烷)进行纯化产生了呈白色固体的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(28.68g，87％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.89(s,1H),7.51(d,J＝7.4Hz,2H),7.43(t,J＝7.5Hz,2H),7.35(t,J＝7.3Hz,1H),5.96–5.76(m,1H),5.11(d,J＝17.2Hz,1H),5.01(d,J＝10.1Hz,1H),4.73(d,J＝10.7Hz,1H),4.66(d,J＝10.6Hz,1H),2.65–2.51(m,2H),2.36–2.17(m,2H),1.27(d,J＝23.5Hz,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值750.1488，实测值751.6(M+1)+；保留时间：3.9分钟(LC方法G)。
中间体9：2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)的制备
步骤1：2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯
在-78℃下在3小时的时间段内向3,3,3-三氟-2-氧代-丙酸乙酯(30g，176.38mmol)于二乙醚(300mL)中的溶液中逐滴加入烯丙基(溴)镁(185mL的1M，185.00mmol)(内部温度：-74℃至-76℃)。将混合物在-78℃下搅拌45分钟。移除干冰-丙酮浴。在1小时的时间段内将混合物温热至约10℃，并且加入到1N HCl水溶液(210mL)和碎冰(400g)的混合物(pH 4)中。将混合物用EtOAc萃取，用5％ NaHCO3水溶液、盐水洗涤，并且经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤、浓缩，并且与己烷共蒸发，以得到呈淡黄色油的2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(42.2g，90％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.33(t,J＝7.1Hz,3H),2.60-2.79(m,2H),3.84(br.s.,1H),4.24-4.48(m,2H),5.09-5.33(m,2H),5.59-5.82(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-78.5(s,3F)ppm。
步骤2：2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯
在0℃下，向2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(18.56g，83.105mmol)于DMF(100mL)中的溶液中加入NaH(5.3g，60％w/w，132.51mmol)。将反应搅拌15分钟，并且加入苄基溴(21.14g，15mL，121.12mol)和四丁基碘化铵(8.5g，23.012mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应用水(300mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3X 300mL)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，并且经硫酸钠干燥。通过硅胶色谱法(20％至60％ DCM/己烷)进行纯化产生了呈无色油的2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(22.01g，70％)。1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.55-7.25(m,5H),6.00-5.80(m,1H),5.30-5.10(m,2H),4.86(d,J＝10.5Hz,1H),4.68(d,J＝10.5Hz,1H),4.33(q,J＝7.0Hz,2H),2.81(d,J＝7.0Hz,2H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值302.113，实测值303.5(M+1)+；保留时间：4.14分钟(LC方法G)。
步骤3：2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸
向2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(28.99g，95.902mmol)于甲醇(150mL)中的溶液中加入NaOH(7.6714g，191.80mmol)于水(50mL)中的溶液。将反应混合物在40℃下搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩，将残余物用水(200mL)稀释，并用二乙醚(200mL)洗涤。用浓HCl将水层酸化至pH 1，并用二乙醚(3X 200mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且在真空下浓缩，以得到呈淡黄色液体的2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸(28.04g，99％)。1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.55-7.28(m,5H),5.97-5.69(m,1H),5.33-5.17(m,2H),4.95-4.66(m,2H),2.91(d,J＝7.1Hz,2H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。
步骤4：N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯
向2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸(300g，1.094mol)于DMF(2L)中的溶液中加入HATU(530g，1.394mol)和DIEA(400mL，2.296mol)，并且将混合物在环境温度下搅拌10分钟。向混合物加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(152g，1.150mol)，并且将混合物在环境温度下搅拌36小时。将反应用冷水(4L)淬灭，并将混合物用EtOAc(2X 2L)萃取。将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(0％至40％ EtOAc/己烷)进行纯化产生了呈缓慢结晶成米白色固体的油的N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(386.49g，91％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.00(d,J＝37.9Hz,1H),8.93(s,1H),7.46-7.39(m,2H),7.38-7.29(m,3H),6.01-5.64(m,1H),5.32(d,J＝17.1Hz,1H),5.17(d,J＝10.1Hz,1H),4.77(s,2H),2.96(qd,J＝15.4,6.8Hz,2H),1.39(d,J＝17.3Hz,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值388.16098，实测值389.0(M+1)+；保留时间：2.51分钟(LC方法D)。
步骤5：2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)
向N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(98.5g，240.94mmol)于DCM(400mL)中的溶液中加入二噁烷中的HCl(200mL的4M，800.00mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，浓缩并且与DCM和己烷共蒸发，以得到呈米白色固体的2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)(81.15g，97％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),7.70–7.16(m,5H),5.87–5.61(m,1H),5.45–5.09(m,2H),4.79(s,2H),3.6–3.4(m,2H),3.23–3.07(m,1H),3.04–2.87(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值288.10855，实测值289.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法H)。
中间体10：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯的制备
步骤1：3-氨基-5-溴-吡啶-2-甲酸甲酯
将硫酸(10mL，187.6mmol)加入到3-氨基-5-溴-吡啶-2-甲酸(10g，43.77mmol)于甲醇(250mL)中的溶液中。将反应在75℃下加热3天。将反应混合物冷却至室温，并且在减压下去除约2/3的溶剂。将所得混合物倒入盐水(200mL)和冰(200mL)的混合物上。将水层用EtOAc(3X 200mL)萃取。将有机层合并并且用水(70mL)、5％ NaHCO3(70mL)和盐水(70mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，以得到呈黄色固体的3-氨基-5-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(4.56g，45％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.96(s,3H),5.82(br.s,2H),7.24(d,J＝1.8Hz,1H),8.06(d,J＝1.8Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值229.96909，实测值231.1(M+1)+；保留时间：1.51分钟(LC方法EE)。
步骤2：3-氨基-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯
将3-氨基-5-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(9.79g，42.372mmol)、甲基亚磺酰氧基钠(8.8g，86.2mmol)、碘化铜(I)(8.8g，46.206mmol)、L-脯氨酸(34mg，0.2953mmol)和DMF(195mL)在氮气下的混合物在130℃下加热3小时。将混合物冷却至室温并且在搅拌下加入到EtOAc(1.2L)。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液用28％ NH3水溶液(1X100mL然后1X50mL)和盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至约160mL，从而得到沉淀。通过过滤收集沉淀并干燥，以得到呈黄色固体的3-氨基-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(6.35g，65％)。11H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.23(d,J＝2.1Hz,1H),7.73(d,J＝2.1Hz,1H),7.09(s,2H),3.83(s,3H),3.29(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值230.03613，实测值231.1(M+1)+；保留时间：1.22分钟(LC方法E)。
步骤3：3-氨基-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯
向3-氨基-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(8g，34.746mmol)于乙腈(515mL)中的溶液中加入NBS(12.7g，71.355mmol)。将混合物在35℃下搅拌64小时。浓缩混合物以去除大多数乙腈。将残余物用乙酸乙酯(200mL)稀释，并用10％硫代硫酸钠水溶液(100mL)处理。在室温下搅拌10分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)。在搅拌5分钟后，通过过滤收集所得沉淀，用水和乙酸乙酯洗涤，然后干燥，以得到呈黄色固体的3-氨基-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(6.2g，55％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.25(br.s.,2H),3.83(s,3H),3.42(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值307.94666，实测值308.8(M+1)+；保留时间：1.57分钟(LC方法E)。
步骤4：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯
将3-氨基-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(6.2g，19.153mmol)、叔丁氧基羰基碳酸叔丁酯(12.825g，13.5mL，58.764mmol)、DMAP(373mg，3.0532mmol)和DCM(185mL)的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度)进行纯化产生了呈黄色固体的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(8.72g，89％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),3.97(s,3H),3.38(s,3H),1.43(s,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值508.0515，实测值352.8(M-155)+；保留时间：2.08分钟(LC方法E)。
中间体11：6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯的制备
步骤1：1-氧负离子基-5-(三氟甲基)吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯
在0℃下，将脲过氧化氢(62.7g，646.53mmol)按份加入到5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(40g，191.09mmol)于1,2-二氯乙烷(300mL)中的搅拌溶液中。然后在-10℃的温度下在30分钟内加入三氟乙酸酐(107.70g，72mL，507.65mmol)，伴冷浴(CO2/丙酮浴)。然后将反应混合物在0℃的温度下搅拌另外30分钟，并且然后在环境温度下搅拌1小时。然后将反应混合物倒入冷冰水(600mL)中。将混合物用二氯甲烷(300mL)稀释，并且然后将层分离。将水相用二氯甲烷(2X 200mL)萃取。将合并的有机相用水(2X 300mL)和盐水(1X 200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈淡黄色固体的1-氧负离子基-5-(三氟甲基)吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(47.6g，90％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.89(s,1H),8.02-7.90(m,1H),7.86-7.72(m,1H),3.89(s,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-62.00(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值221.02998，实测值222.1(M+1)+；保留时间：1.24分钟(LC方法E)。
步骤2：6-羟基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下，将三氟乙酸酐(291.62g，193mL，1.3885mol)逐滴加入到1-氧负离子基-5-(三氟甲基)吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(51.058g，230.66mmol)于DMF(305mL)中的混合物中。然后将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩以去除过量的三氟乙酸。将残余的DMF溶液逐滴投入0℃冷却并搅拌的水体积(1000mL)中。通过过滤收集沉淀的固体，并且然后用水(300mL)洗涤。将固体在真空下干燥，以得到呈白色固体的6-羟基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(45.24g，86％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝7.2Hz,1H),7.03(d,J＝7.2Hz,1H),4.02(s,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-66.39(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值221.03，实测值222.1(M+1)+；保留时间：1.43分钟(LC方法E)。
步骤3：6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-羟基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(33.04g，149.41mmol)于硫酸(200mL的18.4M，3.6800mol)中的冰冷溶液中逐滴加入硝酸(13mL的15.8M，205.40mmol)。5分钟后，移除冰浴，并将反应混合物在38℃下搅拌过夜。反应未完成，在室温下逐滴加入硝酸(3mL的15.8M，47.400mmol)，并将反应在38℃下加热4.5小时。将反应缓慢投入到冰冷的水(900mL)上，并将混合物在0℃下冷却15分钟。然后通过过滤分离所得固体，并且用水(600mL)洗涤。将固体在真空下干燥过夜，以得到呈白色固体的6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(39.49g，99％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),3.95(s,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-64.56(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值266.0151，实测值267.1(M+1)+；保留时间：1.64分钟(LC方法E)。
步骤4：6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
将6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(10g，37.575mmol)和二氯磷酸苯酯(48.008g，34mL，227.55mmol)的混合物在170℃下加热90分钟。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯(400mL)稀释并用盐水(2X 200mL)洗涤。将有机相在无水硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至15％乙酸乙酯/庚烷)进行纯化产生了呈黄色固体的6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(5.45g，50％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),4.07(s,3H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-64.12(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值283.9812，实测值285.0(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法E)。
中间体12：6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸的制备
步骤1：6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(32g，120.24mmol)于THF(180mL)和水(180mL)中的混合物用氢氧化锂一水合物(15.14g，360.79mmol)进行处理并且在27℃下搅拌过夜。将粗反应混合物在室温下冷却，并且用0.5M盐酸水溶液(380mL)将pH调节至2，然后转移到具有2-甲基THF的1-L分液漏斗中并萃取。将层分离并且然后将有机层用水(150mL)、盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到米白色固体的6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(29.61g，96％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-64.53(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值251.9994，实测值253.0(M+1)+；保留时间：0.79分钟(LC方法E)。
中间体13：[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯的制备
步骤1：N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(29.92g，102.66mmol)于乙腈(300mL)和DMF(60mL)中的溶液中加入CDI(17.48g，107.80mmol)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，然后按份加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(33.04g，97.534mmol)。将反应混合物在26℃下搅拌19小时。将反应混合物转移到用水(300mL)和2-Me THF(400mL)冲洗的萃取漏斗中。将混合物用2-Me THF(3X 400mL)萃取。将合并的有机层用0.5N HCl水溶液(3X 300mL)、盐水(3X 250mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并通过蒸发在减压下浓缩。然后在二氯甲烷(2X 300mL)中溶解两次，并且将挥发物通过蒸发在减压下去除，以产生呈棕色泡沫残余物的N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(58.5g，94％)。ESI-MS m/z计算值536.11304，实测值537.2(M+1)+。保留时间：2.03分钟(LC方法E)。
步骤2：[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯
向N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(9.76g，16.922mmol)于二氯甲烷(190mL)中的0℃溶液中加入DIPEA(8.0136g，10.8mL，62.004mmol)，随后加入三氟甲磺酰三氟甲烷磺酸酯(12.410g，7.4mL，43.985mmol)。20分钟后去除冰冷浴，并且将反应在室温下搅拌2.5小时。将混合物转移到具有1.0N HCl冰冷水溶液和EtOAc(300mL)的分液漏斗中。将有机层分离并将水相用乙酸乙酯(2X 150mL)萃取。将合并的有机层再次用HCl 1.0N冰冷水溶液(60mL)和盐水(3X 40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至10％ EtOAc/庚烷)进行纯化产生了呈橙色油的[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(5.334g，40％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.50-7.27(m,5H),5.87-5.68(m,1H),5.12-4.96(m,2H),4.88(d,J＝10.6Hz,1H),4.67(d,J＝10.9Hz,1H),2.60-2.16(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-62.68(s,3F),-71.80(s,3F),-73.04(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值650.0518，实测值651.1(M+1)+；保留时间：3.94分钟(LC方法C)。
中间体14：6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸的制备
步骤1：6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在0℃下向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.14g，4.006mmol)于THF(48.51mL)和水(24.26mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(201.7mg，4.807mmol)。使反应温热至室温，然后搅拌2小时。通过加入1N HCl将溶液酸化至pH约2-3，然后用EtOAc萃取。将有机相用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到呈澄清糖浆，6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.05g，97％)。ESI-MS m/z计算值269.9655，实测值271.0(M+1)+；保留时间：0.37分钟(LC方法S)。
中间体15：N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯的制备
步骤1：N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(222g，340.8mmol)于MTBE(1.333L)中的溶液中加入DIPEA(65.3mL，374.9mmol)，然后是DMAP(2.09g，17.11mmol)。在8分钟内加入二碳酸二叔丁酯(111.6g，511.3mmol)于MTBE(250mL)中的溶液(无温升)，并且将反应搅拌另外30分钟。加入1L的水并且将层分离。将有机层用KHSO4(886mL的0.5M，443.0mmol)、300mL盐水洗涤，用MgSO4干燥，并且大部分(>95％)的MTBE通过旋转蒸发在45℃下被蒸发，从而剩下稠密油。加入1.125L庚烷，在45℃旋转蒸发浴中旋转直至溶解，然后通过旋转蒸发来蒸发出325mL溶剂。使旋转蒸发浴温度降至室温，并且在蒸发期间产物开始结晶。然后将烧瓶放入-20℃的冰箱中过夜。将所得固体过滤并用冷庚烷洗涤，并且在室温下干燥3天，以得到N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(240.8g，94％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.95(s,1H),7.52-7.45(m,2H),7.44-7.36(m,2H),7.36-7.29(m,1H),5.83-5.67(m,1H),5.08-5.00(m,1H),5.00-4.94(m,1H),4.79(d,J＝10.4Hz,1H),4.64(d,J＝10.4Hz,1H),2.57-2.26(m,3H),2.26-2.12(m,1H),1.41(s,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值750.14874，实测值751.1(M+1)+；保留时间：3.76分钟(LC方法D)。
中间体16：(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼和(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼的制备
步骤1：2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼
将N-[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(386.49g，995.1mmol)溶解于DCM(1.25L)和甲苯(250mL)中，并且在室温下用HCl(750mL的4M，3.000mol)进行处理，并且将黄色溶液在室温下搅拌18小时。将混合物在真空中浓缩，并用EtOAc(2L)稀释。将混合物用NaOH(600mL的2M，1.200mol)进行处理，并且在环境温度下搅拌10分钟。将有机相分离，用1L盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，并且直接用于随后步骤(存在痕量甲苯)，2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(286g，100％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.34(s,1H),7.40-7.22(m,5H),5.69(ddt,J＝17.1,10.3,6.9Hz,1H),5.33-5.23(m,1H),5.15(dd,J＝10.3,1.8Hz,1H),4.73(s,2H),4.51(s,2H),3.05-2.87(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值288.10855，实测值289.0(M+1)+；保留时间：1.32分钟(LC方法B)。
步骤2：(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼和(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼
通过手性SFC使用在40℃下的ChiralPak IG柱(250X 21.2mm；5μm)使用7％ MeOH(加20mM NH3)/93％ CO2的移动相，以70毫升/分钟流动对外消旋2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(5.0g，17.35mmol)进行分离，并且样品的浓度是111mg/mL/甲醇(无改性剂)，注射体积＝160μL，出口压为136巴，检测波长为210nm)，从而产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(1.79g，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),7.45-7.39(m,2H),7.38-7.26(m,3H),5.77-5.62(m,1H),5.28(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.15(dq,J＝10.2,1.3Hz,1H),4.72(s,2H),4.44(d,J＝4.2Hz,2H),2.99(dd,J＝7.4,1.3Hz,1H),2.91(dd,J＝15.4,6.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值288.10855，实测值289.2(M+1)+；保留时间：1.28分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈白色固体的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(1.7g，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),7.48-7.39(m,2H),7.39-7.25(m,3H),5.77-5.62(m,1H),5.28(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.15(dq,J＝10.2,1.5Hz,1H),4.73(s,2H),4.51(s,2H),3.00(dd,J＝15.3,7.5Hz,1H),2.91(dd,J＝15.3,6.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值288.10855，实测值289.2(M+1)+；保留时间：1.28分钟(LC方法J)。
中间体17：[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯的制备
步骤1：N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(8.5g，29.165mmol)于乙腈(90mL)和DMF(18mL)中的溶液中加入CDI(5g，30.836mmol)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，然后加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)(9g，27.716mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物转移到用水(300mL)和2-Me THF(400mL)冲洗的萃取漏斗中。将混合物用2-甲基四氢呋喃(3X 400mL)萃取。将合并的有机层用0.5N HCl水溶液(3X300mL)、盐水(3X 250mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。然后在二氯甲烷(2X 300mL)中溶解两次，并且将挥发物在减压下去除，从而得到呈黄色固体的N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(14.7g，75％)。ESI-MS m/z计算值522.0974，实测值523.1(M+1)+；保留时间：2.08分钟(LC方法E)。
步骤2：[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯
在0℃下将三氟甲磺酰三氟甲烷磺酸酯(14.758g，8.8mL，52.308mmol)加入到二氯甲烷(175mL)中的N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(14.7g，20.712mmol)和DIPEA(9.79g，13.2mL，75.783mmol)。20分钟后去除冰冷浴，并将反应在室温下搅拌2.5小时。将混合物转移到具有冰冷的1.0N HCl水溶液(180mL)和EtOAc(500mL)的分液漏斗中。将有机层分离并将水相用乙酸乙酯(2X 120mL)萃取。将合并的有机层再次用HCl 1.0N冰冷水溶液(120mL)和盐水(3X120mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并通过蒸发在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至20％乙酸乙酯/庚烷)进行纯化产生了呈橙色粘性油的[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(5.425g，40％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),7.36-7.21(m,5H),5.93-5.74(m,1H),5.28-5.10(m,2H),4.78(d,J＝10.9Hz,1H),4.60(d,J＝10.6Hz,1H),3.21-3.05(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-62.69(s,3F),-71.82(s,3F),-73.32(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值636.03613，实测值637.1(M+1)+；保留时间：4.0分钟(LC方法C)。
中间体18：(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼的制备
步骤1：N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯
向(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酸(365g，1.266mol)于DMF(2L)中的溶液中加入HATU(612g，1.610mol)和DIEA(450mL，2.584mol)，并且将混合物在环境温度下搅拌10分钟。向混合物加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(200g，1.513mol)(随着加入轻微温升)，并且将混合物在环境温度下搅拌16小时。将反应倒入冰水(5L)中。通过过滤收集所得的沉淀并用水洗涤。将固体溶解在EtOAc(2L)中，并且用盐水洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将油用EtOAc(500mL)稀释，随后用庚烷(3L)稀释，并在环境温度下搅拌若干小时，从而得到稠密浆液。将浆液用另外的庚烷稀释并过滤以收集绒毛状白色固体(343g)。将滤液浓缩并且通过硅胶色谱法(0-40％ EtOAc/己烷)进行纯化，产生了N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(464g，91％，与来自结晶的产物合并)。ESI-MS m/z计算值402.17664，实测值303.0(M+1-Boc)+；保留时间：2.68分钟(LC方法D)。
步骤2：(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼
向N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酸叔丁酯(464g，1.153mol)于DCM(1.25L)和中的溶液中加入HCl(925mL的4M，3.700mmol)，并且将混合物在环境温度下搅拌20小时。将混合物在真空中浓缩，移除大部分DCM。混合物用乙酸异丙酯(1L)稀释并且用1L冰水中的NaOH(140g的50％w/w，1.750mol)碱化至pH＝6。将有机相分离，并用1L盐水洗涤，并将合并的水相用乙酸异丙酯(1L)萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，从而得到暗黄色油。(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(358g，定量)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.44-7.29(m,5H),5.81(ddt,J＝16.8,10.1,6.4Hz,1H),5.13-4.93(m,2H),4.75(dd,J＝10.5,1.5Hz,1H),4.61(d,J＝10.5Hz,1H),3.78(s,2H),2.43(ddd,J＝14.3,11.0,5.9Hz,1H),2.26-1.95(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值302.1242，实测值303.0(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法D)。
中间体19：2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑的制备
步骤1：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
将6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(28.8g，114.24mmol)和(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(30g，104.07mmol)溶解于乙酸乙酯(300mL)和三乙胺(42.108g，58mL，416.13mmol)的混合物中。将丙基膦酸酐(106g，50％w/w，166.57mmol)在室温(20℃至25℃)下加入并且将反应搅拌2小时。然后将反应用1M氯化铵水溶液(400mL)淬灭，将相分离，并且将有机相用1M氯化铵水溶液(400mL)洗涤，并且然后用1M碳酸氢钾(2X300mL)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥并且过滤，然后加入庚烷(250mL)并且将混合物蒸发至干燥，以得到呈黄色固体的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(63g，61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.48(d,J＝7.1Hz,2H),7.42-7.33(m,3H),5.96-5.83(m,1H),5.35(d,J＝16.6Hz,1H),5.20(d,J＝10.5Hz,1H),4.90-4.81(m,2H),3.12-2.94(m,2H)ppm。三个可交换质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值522.0974，实测值523.1(M+1)+；保留时间：3.102分钟(LC方法C)。
步骤2：2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑
将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(45g，80.979mmol)溶解于磷酰三氯(90mL)和乙腈(90mL)的混合物中，并且加入二甲基甲酰胺(45mL)。将混合物在70℃下加热2小时。然后将反应用1M碳酸氢钾水溶液(1.3L)淬灭，同时监测pH并用6M氢氧化钠(300mL)调节。然后将产物用乙酸乙酯(3X 500mL)萃取。将有机相合并，并且经硫酸钠(150g)干燥，然后过滤并浓缩。然后将产物使用125g硅胶干燥包装，并在用庚烷(2L)洗脱，并且然后用庚烷(8L)中的10％ MTBE洗脱的600g二氧化硅垫上纯化，从而得到一些纯产物和一些污染产物。将此污染产物使用50g硅干燥包装，并在用庚烷(1L)洗脱，并且然后用庚烷(6L)中的10％ MTBE再次洗脱的400g二氧化硅垫上纯化，从而得到纯产物和一些污染产物。通过反相色谱法使用100g C18柱，并且用0.1％甲酸水溶液至甲醇梯度洗脱对此污染产物进行进一步纯化(产物以约80％甲醇洗脱)。将含有产物的部分合并，将甲醇在真空下蒸发，并且然后将水溶液用乙酸乙酯(2X 50mL)萃取。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并且然后蒸发至干燥，以得到更需要的纯产物。将来自每种纯化的所有大量需要的产物合并，以得到呈淡黄色油的2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(13.5g，30％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),7.46-7.31(m,5H),5.92(dd,J＝16.9,9.5Hz,1H),5.39(d,J＝16.6Hz,1H),5.26(d,J＝10.3Hz,1H),4.79(d,J＝10.8Hz,1H),4.63(d,J＝10.8Hz,1H),3.31(d,J＝6.8Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值522.053，实测值523.0(M+1)+；保留时间：3.784分钟(LC方法C)。
中间体20：6-氯-5-(二氟甲基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯的制备
步骤1：5-(二氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向高压釜中加入2-溴-5-(二氟甲基)吡啶(25g，120.19mmol)、甲醇(250mL)、三乙胺(29.04g，40mL，286.98mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(2.6g，3.5533mmol)。将高压釜用氮气吹扫，然后用一氧化碳吹扫。将混合物在130℃下加热并且将一氧化碳压调整至120psi。将混合物在130℃下搅拌3小时，然后冷却至25℃。将混合物用氮气吹扫并且在真空下浓缩。将所得固体用乙酸乙酯(500mL)稀释，然后加入水(200mL)和碳酸钠(20g)。将混合物剧烈搅拌10分钟，并且将层分离。将有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。通过硅胶色谱法使用20％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈米白色固体的5-(二氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(11.41g，51％)。ESI-MS m/z计算值187.0445，实测值188.2(M+1)+；保留时间：1.48分钟(LC方法E)。
步骤2：5-(二氟甲基)-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯
将脲过氧化氢(13.7g，145.64mmol)加入到5-(二氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(8.1g，43.282mmol)于DCE(70mL)中的溶液中。在-10℃的温度下在冷浴(CO2/丙酮浴)中在20分钟内加入三氟乙酸酐(24.025g，15.9mL，114.39mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌另外30分钟，并且然后在环境温度下搅拌1小时。将反应混合物倒入冰水(150mL)并且用约150mL的1N氢氧化钠水溶液调节至pH＝2至3。将混合物用二氯甲烷(200mL)稀释，并且将层分离。将水相用二氯甲烷(2X 150mL)萃取。将合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-(二氟甲基)-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(8.39g，87％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.41(s,1H),7.72(d,J＝8.1Hz,1H),7.43-7.36(m,1H),6.84-6.47(m,1H),4.03(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-115.27(d,J＝55.9Hz,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值203.0394，实测值204.1(M+1)+；保留时间：0.73分钟(LC方法E)。
步骤3：5-(二氟甲基)-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃将三氟乙酸酐(84.616g，56mL，402.87mmol)在30分钟内逐滴加入到5-(二氟甲基)-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(11.63g，47.060mmol)于DMF(130mL)中的混合物中。将混合物在48℃下搅拌4小时，然后将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩以去除三氟乙酸酐。将残余DMF溶液在0℃下在30分钟内倒入水(1L)中。通过过滤收集沉淀的固体，并用水(200mL)洗涤。将固体在真空下干燥，以得到呈米白色固体的5-(二氟甲基)-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯(5.74g，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.29(br.s.,1H),7.88(d,J＝7.3Hz,1H),7.13(s,1H),7.07-6.76(m,1H),3.87(s,3H)ppm。19FNMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.60(br.s.,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值203.0394，实测值204.1(M+1)+；保留时间：1.34分钟(LC方法E)。
步骤4：5-(二氟甲基)-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
向5-(二氟甲基)-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯(7.43g，36.575mmol)于硫酸(48mL的18.4M，883.2mmol)中的冰冷溶液中逐滴加入硝酸(2.5mL的15.8M，39.5mmol)。5分钟后，移除冰浴，并将反应混合物在45℃下搅拌过夜。将反应沉淀在冰水中(300mL)。将溶液在0℃下冷却15分钟，然后将固体通过过滤分离并且用水(200mL)洗涤。将固体在真空下干燥过夜，以得到呈米白色固体的5-(二氟甲基)-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(5.47g，56％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(s,1H),7.19-6.75(m,1H),3.94(s,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-118.87(d,J＝54.5Hz,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值248.0245，实测值249.1(M+1)+；保留时间：1.6分钟(LC方法E)。
步骤5：6-氯-5-(二氟甲基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下将5-(二氟甲基)-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(2g，8.06mmol)溶解在磷酰三氯(6.58g，4mL，42.914mmol)和乙腈(4mL)的混合物中(温升)。在0℃下逐滴加入DMF(1.888g，2mL，25.83mmol)(温升)。将所得的黄色乳状混合物在70℃(预热油浴)下搅拌4小时。加入更多磷酰三氯(3.29g，2mL，21.457mmol)。将橙色溶液在70℃下搅拌过夜。冷却至0℃，并加入甲醇(30mL)。在0℃下逐滴加入50％饱和的碳酸氢钠溶液(50mL)。加入碳酸钾(10g)于水(50mL)、甲醇(50mL)和乙酸乙酯(150mL)中的溶液。将水层用乙酸乙酯(3X 50mL)分离并萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到橙色油，通过硅胶色谱法使用5％至30％ MTBE/庚烷梯度对所述橙色油进行纯化，以得到呈黄色油的6-氯-5-(二氟甲基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(1.92g，79％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.70(s,1H),7.16-6.76(m,1H),4.06(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-117.39(d,J＝53.1Hz,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值265.9906，实测值267.1(M+1)+；保留时间：1.84分钟(LC方法E)。
中间体21：2-甲基己-5-烯-2-胺(盐酸盐)的制备
步骤1：2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯
在0℃下，向N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯(30g，155.35mmol)于二乙醚(750mL)中的溶液中加入对TsCl(35.6g，186.73mmol)和粉末状KOH(103g，1.5605mol)。将反应温度升高至回流温度并且搅拌16小时。加入另一份KOH(17g，303mmol)并将反应回流另外2小时。将反应冷却至室温并用乙醚(500mL)稀释。通过玻璃烧结漏斗通过过滤去除形成的固体，并用更多的乙醚(100mL)洗涤。将合并的醚类滤液用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈澄清油的2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯(24.602g，88％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ2.04(s,2H),1.46(s,9H),1.28(s,6H)ppm。
步骤2：N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯
向反应烧瓶中装入THF(205mL，2M，410mmol)和无水THF(200mL)中的烯丙基(氯)镁。将溶液冷却至-30℃，并且加入溴化铜(I)(二甲基硫醚复合物)(28g，136.2mmol)。将反应混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。将2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯(24.602g，136.49mmol)于无水THF(200mL)中的溶液逐滴加入到反应混合物中。将反应在相同温度下搅拌30分钟，并且然后移动到-20℃冷冻箱并且储存3小时。在0℃下，将反应用饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭。将反应在室温下搅拌10分钟，然后用二乙醚(200mL)稀释。将溶液通过硅藻土垫过滤，并且用乙醚(100mL)洗涤。将两层分离，并将水层用二乙醚(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％二乙醚/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈淡黄色液体的N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(18.6g，61％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ5.82(ddt,J＝16.8,10.2,6.6,6.6Hz,1H),5.09–4.87(m,2H),4.38(s,1H),2.11–1.98(m,2H),1.79–1.64(m,2H),1.43(s,9H),1.26(s,6H)ppm。
步骤3：2-甲基己-5-烯-2-胺(盐酸盐)
在室温下将N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(26.6g，124.7mmol)和HCl于二乙醚(350mL，2M，700mmol)中的溶液搅拌2天。去除溶剂，并且用己烷研磨残余物，以得到呈白色固体的2-甲基己-5-烯-2-胺(盐酸盐)(15.198g，77％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.08(s,3H),5.92–5.64(m,1H),5.15–4.87(m,2H),2.21–1.96(m,2H),1.72–1.49(m,2H),1.23(s,6H)ppm。
化合物1-213和化合物214至222的制备
实例1：20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(4种立体异构体的混合物)(化合物1)的制备
步骤1：N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(200mg，0.4815mmol)于乙腈(5mL)中的溶液中相继加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(180mg，0.5314mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(盐酸盐)(140mg，0.7303mmol)、1-羟基苯并三唑(一水合物)(100mg，0.653mmol)和三乙胺(101.64mg，0.14mL，1.0044mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用1N HCl水溶液(30mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)、盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，89％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.51(s,9H),1.65-1.81(m,2H),1.88-2.00(m,1H),2.07-2.34(m,5H),2.37-2.59(m,2H),3.27-3.43(m,1H),3.56-3.71(m,1H),4.25-4.40(m,1H),4.66-4.77(m,1H),4.78-4.91(m,1H),4.93-5.19(m,4H),5.69-5.91(m,2H),7.32-7.51(m,5H),9.01(br.s.,1H),9.16(dd,J＝18.8,5.9Hz,1H),9.85-10.01(m,1H),10.05(br.s.,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-75.2至-72.1(m,3F),-57.8(d,J＝9.2Hz,1F)ppm。保留时间：2.82分钟(LC方法B)。
步骤2：N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在50℃下将N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.45g，3.5016mmol)和DIPEA(1.1872g，1.6mL，9.1858mmol)于乙腈(50mL)中的溶液加热，然后在50℃下按份加入对甲苯磺酰氯(815mg，4.2749mmol)。将所得混合物在70℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却，用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)碱化，并用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将通过反相色谱法使用70％至100％乙腈/含有0.1％甲酸的水梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色粘性材料，N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.2g，92％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.51(s,9H),1.64-1.78(m,2H),1.86-2.08(m,2H),2.16-2.57(m,6H),3.32-3.44(m,1H),3.53-3.69(m,1H),4.35-4.49(m,1H),4.58-4.69(m,1H),4.71-4.87(m,1H),4.88-5.10(m,4H),5.60-5.84(m,2H),7.24-7.43(m,5H),8.99(s,1H),9.55(br.s.,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.0(s,3F),-57.3(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值681.27496，实测值682.5(M+1)+；保留时间：3.19分钟(LC方法K)。
步骤3：N-6-(苄氧基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[6-(2-烯丙基吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(155mg，0.2274mmol)于1,2-二氯乙烷(15mL)中的脱气溶液中加入Grubbs催化剂，第2代(40mg，0.047mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌0.75小时。将反应混合物冷却至0℃，并且加入二(乙二醇)乙烯醚(125.84mg，0.13mL，0.9522mmol)以淬灭催化剂，然后在室温下搅拌10分钟并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄绿色固体的N-6-(苄氧基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(125mg，84％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.46(s,9H),1.60-1.79(m,2H),1.86-2.00(m,1H),2.00-2.25(m,3H),2.26-2.53(m,2H),2.58-2.82(m,1H),3.39-3.67(m,3H),3.83-4.05(m,1H),4.51-4.65(m,1H),4.89-5.00(m,1H),5.36-5.55(m,2H),7.11-7.28(m,5H),8.81-8.98(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-75.0和-74.1(2s,3F),-55.5(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值653.24365，实测值654.4(M+1)+；保留时间：2.94分钟(LC方法K)。
步骤4：N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-6-(苄氧基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(30mg，0.0459mmol)于甲醇(4mL)中的用氮气脱气的溶液中加入SiliaCat Pd0(73mg，0.24mmol/g，0.0175mmol)，并且将反应在室温下在氢气球下搅拌64小时。将反应混合物经硅藻土过滤，用甲醇洗涤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色胶的N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(15mg，58％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.20-1.27(m,2H),1.45(s,9H),1.48-1.59(m,5H),1.85-1.98(m,1H),1.99-2.65(m,4H),3.30-3.62(m,3H),3.87-4.18(m,2H),8.75-8.97(m,2H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-80.8和-77.4(s,3F),-55.4至-54.9(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值565.2124，实测值566.4(M+1)+；保留时间：2.73分钟(LC方法K)。
步骤5：20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(4种立体异构体的混合物)(化合物1)
在室温下将TFA(1.4800g，1mL，12.98mmol)加入到DCM(2mL)中的N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.053mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，并且用DCM(3X 10mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(4种立体异构体的混合物)(10mg，39％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ0.80-1.01(m,2H),1.13-1.36(m,3H),1.42-1.68(m,4H),1.71-1.87(m,1H),1.91-2.08(m,1H),2.12-2.29(m,1H),2.36-2.75(m,2H),3.31-3.47(m,1H),3.52-3.75(m,1H),3.86-4.23(m,1H),7.62(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,CD3OD)δ-82.0和-78.8(s,3F),-58.1(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.2(M+1)+；保留时间：3.84分钟(LC方法F)。
实例2：20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(化合物2)和20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(化合物3)的制备
步骤1：N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)和N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)
向N-6-(苄氧基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(675mg，1.0327mmol)于甲醇(60mL)中的用氮气脱气的溶液中加入SiliaCat Pd0(1.6g，0.24mmol/g，0.384mmol)，并且将反应在室温下在氢气球下搅拌24小时。将反应混合物经硅藻土过滤，用甲醇洗涤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体和待洗脱的第一非对映异构体对，N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(190mg，33％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ0.79-0.91(m,1H),0.94-1.10(m,1H),1.25(br.s.,1H),1.41-1.68(m,13H),1.70-1.84(m,1H),1.85-2.07(m,2H),2.08-2.27(m,2H),2.28-2.44(m,1H),2.54-2.74(m,1H),3.40-3.71(m,3H),3.94-4.14(m,1H),8.80-9.10(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.4(s,3F),-55.1(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值565.2124，实测值566.3(M+1)+；保留时间：8.407分钟(LC方法L)。
继续洗脱产生了呈黄色固体并且待洗脱的第二非对映异构体对，N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(165mg，28％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ0.81-0.98(m,2H),1.41-1.60(m,13H),1.61-1.89(m,3H),1.93-2.25(m,3H),2.35-2.62(m,2H),3.46-3.69(m,3H),3.95-4.13(m,1H),8.91(br.s.,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-80.8(s,3F),-55.1(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值565.2124，实测值566.4(M+1)+；保留时间：8.426分钟(LC方法L)。
步骤2：20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(化合物2)
在室温下将TFA(2.9600g，2mL，25.96mmol)加入到DCM(4mL)中的N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(190mg，0.336mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中，并且用DCM(3X 10mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(117mg，71％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ0.71-0.91(m,1H),1.32-1.62(m,6H),1.65-1.80(m,1H),1.81-2.00(m,2H),2.02-2.16(m,1H),2.18-2.36(m,1H),2.38-2.62(m,2H),3.18-3.31(m,1H),3.39-3.56(m,1H),3.78-3.94(m,1H),6.10(s,2H),7.59(s,1H),7.69(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-79.3(s,3F),-55.8(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.2(M+1)+；保留时间：3.82分钟(LC方法F)。
步骤3：20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(化合物3)
在室温下将TFA(2.9600g，2mL，25.96mmol)加入到DCM(4mL)中的N-[6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(165mg，0.2918mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，并且用DCM(3X 10mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(90mg，65％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ0.72-0.94(m,1H),1.21-1.54(m,5H),1.55-1.79(m,3H),1.81-1.93(m,1H),1.94-2.18(m,2H),2.19-2.41(m,2H),3.17-3.30(m,1H),3.41-3.60(m,1H),3.88-4.09(m,1H),6.10(br.s.,2H),7.53(s,1H),7.69(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-76.5(s,3F),-55.9(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.2(M+1)+；保留时间：3.78分钟(LC方法F)。
实例3：(6R,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物4)和(6S,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物5)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(7.8g，18.78mmol)于NMP(70mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(6.4g，18.89mmol)和DIEA(8.5g，65.77mmol)，随后加入HATU(10.7g，28.14mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2.5小时，然后将混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机相合并，并且经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至5％EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(10.2g，78％)。1H(400MHz,氯仿-d)δ1.52(s,9H),1.67-1.79(m,2H),1.95-1.97(m,1H),2.14-2.29(m,5H),2.43-2.53(m,2H),3.34-3.38(m,1H),3.61-3.67(m,1H),4.31-4.36(m,1H),4.71-4.75(m,1H),4.84-4.87(m,1H),4.99-5.14(m,4H),5.75-5.88(m,2H),7.38-7.43(m,5H),9.01(d,J＝2.5Hz,1H),9.12-9.20(m,1H),9.92-9.99(m,1H),10.06(d,J＝2.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值699.2855，实测值700.4(M+1)+；保留时间：2.39分钟(LC方法A)。
步骤2：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(19.3g，27.58mmol)溶解在乙腈(385mL)，然后加入DIEA(14.5mL，83.25mmol)并且加热至50℃。向此黄色溶液缓慢加入对甲苯磺酰氯(7.9g，41.44mmol)，并且将橙色溶液在70°下加热6小时。加入对甲苯磺酰氯的另一部分(0.8g，4.196mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。用碳酸氢钠饱和溶液(400mL)洗涤深橙色溶液，并将碳酸氢盐相用乙酸乙酯(2X 150mL)反萃取两次。将合并的有机相用碳酸氢钠饱和溶液(200mL)和盐水(200mL)再洗涤一次。将合并的有机相干燥、过滤并蒸发，得到深橙色油。通过硅胶色谱法使用0％至5％乙酸乙酯和己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(16.5g，88％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ9.58(d,J＝3.4Hz,1H),9.02(s,1H),7.48-7.20(m,5H),5.75(dddd,J＝17.6,15.4,7.0,4.6Hz,2H),5.10-4.93(m,4H),4.82(dd,J＝31.7,10.9Hz,1H),4.67(dd,J＝10.9,6.4Hz,1H),4.45(d,J＝8.0Hz,1H),3.64(q,J＝8.7Hz,1H),3.40(t,J＝8.4Hz,1H),2.61-2.17(m,6H),2.14-1.87(m,2H),1.84-1.64(m,2H),1.57(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值681.27496，实测值682.0(M+1)+；保留时间：2.52分钟(LC方法M)。
步骤3：N-[(12S)-6-苄氧基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(10.47g，14.131mmol)于DCE(2000mL)中的脱气溶液在氮气气氛下加热至50℃持续15分钟。然后加入詹氏催化剂1B(2g，2.722mmol)并且将混合物加热至70℃并且在此温度下保持过夜。加入更多詹氏催化剂1B(0.5g，0.6805mmol)并且继续加热4小时。将反应混合物冷却并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈强黄绿色泡沫的N-[(12S)-6-苄氧基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(5.87g，61％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),8.98(d,J＝6.8Hz,1H),7.38–7.21(m,5H),5.64–5.47(m,2H),5.02(q,J＝11.3Hz,1H),4.68(q,J＝11.0Hz,1H),4.15–3.92(m,1H),3.75–3.42(m,3H),2.92–2.81(m,1H),2.79–2.64(m,1H),2.58–2.48(m,1H),2.48–2.35(m,1H),2.31–2.16(m,2H),2.10–1.99(m,1H),1.82–1.71(m,2H),1.55(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值653.2437，实测值654.1(M+1)+；保留时间：4.29分钟(LC方法G)。
步骤4：(6R,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物4)和(6S,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物5)
向Pd/C(250mg的10％w/w，0.2349mmol)加入脱气MeOH(10mL)中的N-[(12S)-6-苄氧基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(1.4g，2.142mmol)，并且将混合物在H2的气球(10mg，4.961mmol)下搅拌3天。将混合物经硅藻土过滤并用MeOH洗涤。将滤液蒸发，并且在用0％至25％ EtOAc/己烷梯度洗脱的40g硅胶柱上对粗产物进行色谱分析，从而得到N-Boc保护的产品中间体作为非对映异构体的混合物。接下来将此材料溶解于DCM(10mL)中并加入TFA(1mL，12.98mmol)。将混合物在环境温度下搅拌20小时。在真空中去除溶剂，并且通过反相柱色谱法使用用30％至100％乙腈/水梯度洗脱的C18柱对粗油进行色谱分析，从而得到650mg的非对映异构体的混合物。使用ChiralPakAS-H柱(250X21.2mm；5μm粒度)使用10％甲醇/CO2移动相(流速＝70毫升/分钟)在6分钟内使此混合物经受手性SFC，得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为(6R,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(261.4mg，52％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.46(s,1H),5.08(s,1H),4.01(q,J＝9.8,9.1Hz,2H),3.65(d,J＝8.8Hz,1H),3.51-3.38(m,1H),2.57-2.40(m,2H),2.18(dtd,J＝12.5,6.3,3.5Hz,1H),2.12-1.95(m,2H),1.84(p,J＝10.0,9.5Hz,1H),1.77-1.37(m,8H),0.94(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.1(M+1)+；保留时间：3.17分钟(LC方法D)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为(6S,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(256.4mg，51％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.59(s,1H),4.04(s,1H),3.62(t,J＝8.6Hz,1H),3.43(s,1H),2.61(s,1H),2.36(t,J＝12.4Hz,1H),2.28-2.09(m,2H),2.07-1.71(m,3H),1.61(d,J＝22.0Hz,6H),1.01(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.0(M+1)+；保留时间：3.12分钟(LC方法D)。
步骤5：无定形化合物4(纯形态)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤4产生的无定形化合物4(纯形态)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得，并且提供于图1。
B.热重分析(TGA)
无定形化合物4(纯形态)的TGA数据在具有TRIOS系统的TA仪器发现系列上被收集。无定形化合物4(纯形态)的TGA曲线提供于图2。TGA曲线示出了约40-155℃以10.00℃/分钟斜升至350.00℃的1.69％质量损失。
C.差示扫描量热法分析
无定形化合物4(纯形态)的DSC数据在具有TRIOS系统的TA仪器发现系列上被收集。使用以下调制DSC方法运行DSC：
1.在-20.00℃下平衡，
2.每60秒由+/-1.00℃调节，
3.等温持续5.00分钟，然后
4.以2.00℃/分钟斜升至250.00℃。
无定形化合物4(纯形态)的DSC热谱图提供于图3。热谱图显示了在77.6℃下的Tg中点。
步骤6：结晶化合物5形态A(纯)的固体形态特征
A.单晶X射线衍射
结晶化合物5形态A(纯)的单一结晶从乙醇和戊烷生长。X射线衍射数据在配备有Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪和CCD检测器上100K处获得。所述结构使用SHELX程序溶解和精炼(Sheldrick,G.M.,《晶体学报(Acta Cryst.)》,(2008)A64,112-122)并且下表3中概述了结果。
表3：结晶化合物5形态A(纯)的单一结晶说明
实例4：(6S,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物6)的制备
步骤1：(6S,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物6)
使用ChiralPak AS-H柱(250X 10mm，5μm粒度)，使用8％甲醇/CO2移动相(流速＝10毫升/分钟)在6分钟内使20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(96.7mg，0.2078mmol)经受手性SFC，得到作为待洗脱的第二单个对映异构体的(6S,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(30.8mg，64％)ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.0(M+1)+；保留时间：2.13分钟(LC方法N)。
实例5：(6R,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物7)的制备
步骤1：(6R,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物7)
通过手性SFC使用ChiralPak AS-H(250X 10mm)5μm柱；40℃和8％MeOH(无改性剂)/CO2作为洗脱液，使用10.0毫升/分钟的流速以及70μL的注射体积对20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(80mg，0.1719mmol)进行纯化，以得到作为第一洗脱对映异构体的(6R,12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(19.9mg，50％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(s,1H),7.58(d,J＝2.1Hz,1H),6.12(s,2H),4.02(d,J＝8.2Hz,1H),3.52(t,J＝8.5Hz,1H),3.30(d,J＝9.0Hz,2H),2.35(ddd,J＝25.1,14.1,6.2Hz,2H),2.21-2.12(m,1H),2.10-2.00(m,1H),1.94(d,J＝9.0Hz,1H),1.79-1.68(m,2H),1.64(s,1H),1.58-1.46(m,2H),1.46-1.33(m,2H),0.88(q,J＝5.7,4.9Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.0(M+1)+；保留时间：2.1分钟(LC方法A)。
实例6：16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对1)(化合物8)和16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对2)(化合物9)的制备
步骤1：3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下将n-丁基锂(26.6mL的2.5M于己烷中，66.5mmol)缓慢加入到甲基三苯基溴化膦(23.8g，66.625mmol)于四氢呋喃(100mL)中的悬浮液中。将所得橙色溶液在0℃下搅拌5分钟。将3-甲酰吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(12.5g，62.736mmol)于四氢呋喃(75mL)中的溶液使用加料漏斗缓慢加入，从而将反应混合物保持在0℃。在0℃下搅拌15分钟后，在2.5小时内将反应温热至室温。再次，将反应混合物冷却至0℃，并用饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭，并使用二乙醚(3X 150mL)萃取。将有机层合并，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至15％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清液体的3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(10.18g，82％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.45(s,9H),1.60-1.77(m,1H),1.99(dtd,J＝12.5,6.4,3.4Hz,1H),2.69-2.85(m,1H),2.96-3.12(m,1H),3.19-3.36(m,1H),3.38-3.63(m,2H),4.97-5.15(m,2H),5.76(dt,J＝17.1,8.6Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值197.14159，实测值142.2(M-tBu+1)+；保留时间：2.08分钟(LC方法B)。
步骤2：3-乙烯基吡咯烷(三氟乙酸盐)
在0℃下将三氟乙酸(47.360g，32mL，415.35mmol)缓慢加入到二氯甲烷(32mL)中的3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(8g，40.553mmol)中。将混合物在室温下搅拌2小时然后浓缩。加入甲苯(40mL)并浓缩，以产生呈棕色油的3-乙烯基吡咯烷(三氟乙酸盐)(13.3g，93％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.87(br.s.,2H),5.81-5.64(m,1H),5.28-5.09(m,2H),3.56-3.40(m,2H),3.39-3.25(m,1H),3.10-2.91(m,2H),2.32-2.16(m,1H),1.96-1.79(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-75.96(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值97.08915，实测值98.2(M+1)+；保留时间：0.33分钟(LC方法O)。
步骤3：3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯
在室温下将氯碳酸9H-芴-9-基甲酯(550mg，2.126mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中的3-乙烯基吡咯烷(三氟乙酸盐)(500mg，1.4206mmol)和二异丙基乙胺(556.50mg，0.75mL，4.3058mmol)。将溶液搅拌2天，然后加入水(20mL)并用DCM(2X 20mL)萃取混合物。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清油的3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(458mg，100％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ1.54-1.75(m,1H),1.84-2.04(m,1H),2.66-2.85(m,1H),2.90-3.05(m,1H),3.13-3.27(m,1H),3.28-3.49(m,2H),4.15-4.37(m,3H),4.93-5.18(m,2H),5.69-5.87(m,1H),7.21-7.47(m,4H),7.62(d,J＝7.3Hz,2H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值319.15723，实测值320.2(M+1)+；保留时间：2.36分钟(LC方法B)。
步骤4：3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己-1-烯基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(E/Z混合物)
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.63g，2.5023mmol)和3-乙烯基吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(3.6g，11.271mmol)于1,2-二氯乙烷(8mL)中的脱气溶液中加入Grubbs催化剂，第2代(129mg，0.1516mmol)。将所得混合物在40℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈米白色固体的3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己-1-烯基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(E/Z混合物)(1.3g，47％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.56(s,9H),1.60-1.76(m,1H),1.90-2.03(m,1H),2.10-2.23(m,1H),2.28-2.55(m,3H),2.65-2.85(m,1H),3.01-3.14(m,1H),3.29-3.43(m,1H),3.47-3.64(m,2H),4.18-4.29(m,1H),4.31-4.41(m,2H),4.63-4.74(m,1H),4.76-4.88(m,1H),5.37-5.56(m,2H),7.28-7.45(m,7H),7.47-7.55(m,2H),7.57-7.65(m,2H),7.73-7.81(m,2H),9.35(s,1H),10.16-10.22(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.5(br.s.,3F),-63.8(br.s.,3F)ppm。保留时间：2.96分钟(LC方法K)。
步骤5：3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯
向3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己-1-烯基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(E/Z混合物)(205mg，0.2175mmol)于乙酸乙酯(16mL)中的用氮气脱气的溶液中加入钯碳(46mg，0.0216mmol)，并且将反应在室温下在氢气球下搅拌2小时。将反应混合物经硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤，并且蒸发滤液，以得到呈琥珀色胶的3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(190mg，92％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.34-1.46(m,4H),1.56(s,9H),1.91-2.18(m,3H),2.25-2.50(m,3H),2.85-2.99(m,1H),3.25-3.40(m,1H),3.44-3.66(m,3H),4.18-4.29(m,1H),4.30-4.41(m,2H),4.63-4.74(m,1H),4.75-4.85(m,1H),7.26-7.44(m,7H),7.46-7.54(m,2H),7.56-7.65(m,2H),7.72-7.80(m,2H),9.34(s,1H),10.19(br.s.,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.5(br.s.,3F),-63.8(br.s.,3F)ppm。保留时间：2.97分钟(LC方法K)。
步骤6：N-[2-[5-[1-苄氧基-5-吡咯烷-3-基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将哌啶(172.20mg，0.2mL，2.0224mmol)加入到THF(5mL)中的3-[5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己基]吡咯烷-1-甲酸9H-芴-9-基甲酯(75mg，0.0794mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。通过反相(C18柱)色谱法使用5％至70％至100％甲醇/含有0.1％甲酸的水梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清油的N-[2-[5-[1-苄氧基-5-吡咯烷-3-基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(27mg，43％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ1.31-1.47(m,4H),1.49-1.71(m,10H),1.96-2.25(m,4H),2.26-2.44(m,2H),2.62-2.74(m,1H),3.07-3.19(m,1H),3.22-3.42(m,2H),4.64-4.73(m,1H),4.74-4.83(m,1H),7.29-7.44(m,3H),7.44-7.53(m,2H),8.42(br.s,1H),9.35(s,1H),10.18(s,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.5(br.s.,3F),-63.8(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值721.16986，实测值722.2(M+1)+；保留时间：2.01分钟(LC方法K)。
步骤7：N-[10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-基]氨基甲酸叔丁酯
将DIPEA(51.940mg，0.07mL，0.4019mmol)加入到乙腈(7mL)中的N-[2-[5-[1-苄氧基-5-吡咯烷-3-基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(32mg，0.0443mmol)，并且将混合物在80℃下加热过夜。将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)中，并且用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄绿色胶的N-[10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-基]氨基甲酸叔丁酯(23mg，79％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d):δ9.03-9.32(m,1H),8.90-9.01(m,1H),7.19-7.30(m,5H),4.61-4.83(m,2H),4.44-4.59(m,1H),4.10-4.19(m,1H),3.28-3.51(m,2H),3.09-3.26(m,1H),2.52-2.68(m,1H),2.20-2.38(m,1H),1.93-2.17(m,3H),1.73-1.92(m,1H),1.39-1.60(m,9H),1.22-1.37(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-60.41(s,1.5F),-60.90(s,1.5F),-74.03(s,1.5F),-74.94(br.s.,1.5F)ppm。ESI-MS m/z计算值641.24365，实测值642.2(M+1)+；保留时间：3.14分钟(LC方法O)。
步骤8：10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-胺
在室温下将TFA(1.4800g，1mL，12.98mmol)加入到DCM(2mL)中的N-[10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.0935mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，并且用DCM(3X 10mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄绿色胶的10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-胺(36mg，71％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),7.29-7.13(m,5H),5.51-5.06(m,2H),4.85-4.72(m,1H),4.71-4.60(m,1H),4.59-4.43(m,1H),3.53-3.27(m,1H),3.25-2.84(m,2H),2.70-2.50(m,1H),2.43-2.21(m,1H),2.14-1.91(m,3H),1.66-1.28(m,6H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d):δ-62.15至-60.08(m,3F),-75.57至-73.50(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值541.1912，实测值542.1(M+1)+；保留时间：2.65分钟(LC方法O)。
步骤9：16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇
向10-(苄氧基)-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(18),11,13,15(19),16-五烯-16-胺(42mg，0.0776mmol)于甲醇(6mL)中的用氮气脱气的溶液中加入SiliaCat Pd0(120mg，0.24mmol/g，0.0288mmol)，并且将反应在室温下在氢气球下搅拌2小时。将反应混合物经硅藻土过滤，用甲醇洗涤，并蒸发滤液。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体和4种立体异构体的外消旋混合物，16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(17mg，48％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.70-7.64(m,1H),7.60-7.54(m,1H),6.52(br.s,1H),6.36(br.s,1H),4.49-4.32(m,1H),4.19-4.04(m,1H),3.04-2.83(m,2H),2.21-1.82(m,5H),1.65-1.25(m,6H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-59.86(br.s.,1.5F),-60.32(br.s.,1.5F),-77.43(br.s.,1.5F),-78.51(br.s.,1.5F)ppm。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.2(M+1)+；保留时间：3.52分钟(LC方法C)。
步骤10：16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对1)(化合物8)和16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对2)(化合物9)
将16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(14mg，0.03102mmol)，即通过反相制备型色谱法使用C18柱和30％至65％乙腈/含有5mM盐酸的水梯度对4种立体异构体的外消旋混合物进行纯化持续30分钟，从而得到非对映异构体的两种单独的对：
待洗脱的第一对非对映异构体分离为16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对1)(5.6mg，78％)。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.0(M+1)+；保留时间：1.58分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对非对映异构体分离为16-氨基-10,18-双(三氟甲基)-20-氧杂-2,12,13,19-四氮杂四环[13.3.1.12,5.111,14]二十一-1(19),11,13,15,17-五烯-10-醇(非对映异构体对2)(1.7mg，24％)。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.0(M+1)+；保留时间：1.62分钟(LC方法A)。
实例7：(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-胺(化合物10)的制备
步骤1：N-[(12R)-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向氢化容器中的N-[(12S)-6-苄氧基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(6.87g，10.090mmol)于MeOH(150mL)中的溶液中加入10％ Pd/C(2.7g，2.5371mmol)。将反应混合物用氮气吹扫三次，然后在使其经受60psi氢化67小时之前，用氢气回填两次。将反应混合物经硅藻土床过滤，并且将滤床用MeOH(3X 100mL)洗涤。将合并的滤液通过旋转蒸发浓缩，从而得到呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(5.71g，95％)。ESI-MS m/z计算值565.2124，实测值566.5(M+1)+；保留时间：3.92分钟。将此材料用于随后步骤中，而无需进一步纯化(LC方法G)。
步骤2：N-[(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[(12R)-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(14mg，0.02476mmol)溶解于吡啶(1.5mL)中，并且向溶液缓慢加入POCl3(105μL，1.126mmol)。将混合物密封并在50℃下加热20小时。然后将反应混合物冷却至室温，并用甲醇稀释然后过滤。通过反相制备型色谱法使用用50％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度洗脱的C18柱使用15分钟运行对所得材料进行纯化，以得到呈黄色固体的N-[(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(6.4mg，47％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,1H),8.69(s,1H),7.41(t,J＝9.1Hz,1H),4.26(q,J＝8.7Hz,1H),3.59(q,J＝8.6,8.2Hz,1H),3.50–3.40(m,1H),3.04(d,J＝12.4Hz,1H),2.44(t,J＝12.7Hz,1H),2.26–2.17(m,1H),2.13–2.08(m,1H),1.99(s,1H),1.78(t,J＝11.1Hz,2H),1.70(d,J＝11.6Hz,1H),1.63–1.56(m,1H),1.51(s,9H),1.48(s,1H),1.25(s,1H),1.18–1.08(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值547.2018，实测值548.1(M+1)+；保留时间：1.84分钟(LC方法M)。
步骤3：(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-胺(化合物10)
向N-[(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(17mg，0.03105mmol)于DCM(0.50mL)中的溶液中缓慢加入TFA(0.4mL，5.192mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂蒸发，并且通过硅胶色谱法使用DCM(15mL)对残余物进行纯化，从而产生(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-胺(11mg，78％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43(s,1H),7.16-6.96(m,1H),4.59(bs,2H),4.24(q,J＝7.8Hz,1H),3.40(t,J＝9.1Hz,1H),3.00(qd,J＝11.5,4.2Hz,1H),2.67-2.39(m,1H),2.23(dtd,J＝12.5,6.4,3.1Hz,1H),2.07(dd,J＝12.4,6.1Hz,1H),1.96(dq,J＝13.3,4.8,4.4Hz,2H),1.81-1.66(m,3H),1.64-1.48(m,2H),1.26(s,1H),1.15(td,J＝12.1,6.0Hz,1H).ESI-MSm/z计算值447.14938，实测值448.1(M+1)+；保留时间：0.43分钟(LC方法M)。
实例8：(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体1)(化合物11)和(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体2)(化合物12)的制备
步骤1：N-[(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[(6E,12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,6,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(17mg，0.03105mmol)于MeOH(2mL)中的溶液中加入PtO2(1.7mg，0.007486mmol)。烧瓶由橡胶隔膜密封。所有空气都抽空并用氮气填充3次。最后，去除所有氮气，并将烧瓶连接到氢气球。将反应搅拌90分钟，经硅藻土过滤并浓缩，以得到N-[(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(14mg，82％)。ESI-MS m/z计算值549.21747，实测值550.2(M+1)+；保留时间：0.88分钟(LC方法M)。
步骤2：(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体1)(化合物11)和(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体2)(化合物12)
在室温下向N-[(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(18mg，0.03276mmol)于DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(1mL，12.98mmol)。将混合物搅拌45分钟并浓缩。使溶解在1mL甲醇中的残余物以70μL注射通过用14％ MeOH/CO2洗脱的制备型ChiralCel ODAD柱(10X250mm，5μm颗粒)经受制备型手性SFC，从而得到两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体1)(4.2mg，56％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.43(s,1H),3.99(d,J＝8.4Hz,1H),3.82(ddd,J＝11.9,8.1,3.0Hz,1H),3.61(t,J＝8.5Hz,1H),3.55(bs,2H),3.43(t,J＝9.3Hz,1H),2.55(t,J＝11.4Hz,1H),2.39(q,J＝12.6Hz,1H),2.17(dtd,J＝12.3,6.3,3.5Hz,1H),1.98(ddt,J＝9.8,6.8,3.5Hz,2H),1.88-1.75(m,1H),1.57(m,J＝28.4,17.2,6.4Hz,7H),0.89(q,J＝9.9,9.2Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值449.16504，实测值450.1(M+1)+；保留时间：10.21分钟(LC方法P)。
待洗脱的第二对映异构体分离为(12R)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(对映异构体2)(5.0mg，65％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.42(s,1H),4.16(q,J＝8.7,8.2Hz,1H),4.00(td,J＝8.4,4.4Hz,1H),3.63(q,J＝8.5Hz,1H),3.40(t,J＝9.3Hz,1H),2.78(bs,2H),2.45-2.37(m,1H),2.23-2.1(m,3H),2.03-1.92(m,1H),1.86-1.72(m,3H),1.71-1.57(m,2H),1.52-1.45(m,3H),1.04-0.98(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值449.16504，实测值450.1(M+1)+；保留时间：10.03分钟(LC方法P)。
实例9：(6R,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物13)的制备
步骤1：(6R,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物13)
在室温下向(6R,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(30mg，0.06446mmol)于DMF(0.6mL)中的溶液中加入THF中的[双(三甲基硅烷基)氨基]钠(142μL的1M，0.142mmol)以及随后碘甲烷(71μL的1M，0.071mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将反应用乙醚稀释，并且用1M NH4Cl水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法使用10％至35％ EtOAc/己烷梯度(12g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈橙色固体的(6R,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(13.3mg，43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.51(s,1H),6.31(q,J＝5.4Hz,1H),3.91(q,J＝8.3Hz,1H),3.54(q,J＝8.7Hz,1H),3.32-3.24(m,1H),2.97(d,J＝4.9Hz,3H),2.29(t,J＝13.0Hz,1H),2.14(s,1H),2.02-1.89(m,3H),1.85-1.68(m,1H),1.51(d,J＝24.3Hz,7H),0.84(d,J＝12.2Hz,1H)ppm。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-55.43,-79.24ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：1.94分钟(LC方法Q)。
实例10：(6R,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物14)的制备
步骤1：(6R,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物14)
在室温下向(6R,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(30mg，0.06446mmol)于DMF(0.6mL)中的溶液中加入THF中的[双(三甲基硅烷基)氨基]钠(142μL的1M，0.142mmol)以及随后溴乙烷(71μL的1M，0.071mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用乙醚稀释，并且用1M NH4Cl水溶液洗涤，并且将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法使用10％至35％ EtOAc/己烷梯度(12g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈橙色固体的(6R,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(18.4mg，58％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,1H),7.55(s,1H),6.23(t,J＝5.7Hz,1H),3.98-3.85(m,1H),3.54(q,J＝8.6Hz,1H),3.37(m,3H),2.29(t,J＝13.7Hz,1H),2.14(m,1H),2.03-1.88(m,2H),1.83-1.70(m,1H),1.65-1.36(m,8H),1.22(t,J＝7.0Hz,3H),0.84(s,1H)ppm。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-55.40,-79.25ppm。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.1(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法Q)。
实例11：(6S,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物15)的制备
步骤1：(6S,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物15)
在室温下向(6S,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(30mg，0.06446mmol)于DMF(0.6mL)中的溶液中加入THF中的[双(三甲基硅烷基)氨基]钠(142μL的1M，0.142mmol)以及随后碘甲烷(71μL的1M，0.071mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，用乙醚稀释，并且用1M NH4Cl水溶液洗涤，并且将有机层干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(使用10％至35％ EtOAc/己烷梯度(12g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(6S,12R)-20-(甲基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(15.5mg，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(s,1H),7.51(s,1H),6.33(q,J＝5.0Hz,1H),4.03(q,J＝7.3,6.8Hz,1H),3.55(q,J＝8.6Hz,1H),3.31-3.22(m,1H),2.97(d,J＝4.9Hz,3H),2.44-2.25(m,1H),2.17(d,J＝7.3Hz,1H),2.05(q,J＝8.5Hz,1H),1.93(s,1H),1.82-1.62(m,4H),1.49(ddd,J＝34.0,18.0,7.7Hz,5H),0.97-0.83(m,1H)ppm。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-55.57,-76.40ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法Q)。
实例12：(6S,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物16)的制备
步骤1：(6S,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物16)
在室温下向DMF(0.6mL)中的(6S,12R)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(30mg，0.06446mmol)加入THF中的[双(三甲基硅烷基)氨基]钠(142μL的1M，0.142mmol)以及随后溴乙烷(71μL的1M，0.071mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时然后用乙醚和1MNH4Cl水溶液稀释。将层分离，并将有机层干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(12g柱)使用10％至35％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，产生了呈黄色固体的(6S,12R)-20-(乙基氨基)-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(16.6mg，52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d7.55(s,2H),6.24(t,J＝5.7Hz,1H),4.03(q,J＝8.7Hz,1H),3.55(q,J＝9.0,8.5Hz,1H),3.21-3.40(m,3H),2.44-2.26(m,1H),2.18(t,J＝7.2Hz,1H),2.03(td,J＝13.8,12.6,7.4Hz,1H),1.94(d,J＝11.7Hz,1H),1.72(dq,J＝21.7,13.1,11.4Hz,3H),1.47(ddt,J＝41.4,15.4,9.5Hz,6H),1.24(t,J＝7.1Hz,3H),0.91(td,J＝11.8,6.0Hz,1H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)d-55.55,-76.42.ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.1(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法Q)。
实例13：19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(化合物17)和19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(化合物18)的制备
步骤1：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯
在250-mL密封容器中，将2-乙烯基吡咯烷(879mg，9.047mmol)、DIEA(4.75mL，27.27mmol)和3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(2.5g，5.007mmol)合并于乙腈(28mL)中，并且将混合物在80℃下加热18小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，并且用盐水(2X25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈棕黄色固体的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.93g，75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(s,1H),5.74(ddd,J＝16.7,10.3,6.1Hz,1H),5.16-5.06(m,1H),5.03-4.90(m,2H),3.79(s,3H),3.65(p,J＝8.6Hz,1H),3.43(t,J＝8.3Hz,1H),2.14(dq,J＝11.9,6.5Hz,1H),2.02-1.92(m,1H),1.90-1.78(m,1H),1.71(ddt,J＝11.9,9.2,7.0Hz,1H),1.35(s,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值515.2243，实测值516.2(M+1)+；保留时间：1.79分钟(LC方法J)。
步骤2：3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸
向3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.93g，3.744mmol)于THF(20mL)、甲醇(19mL)和水(15mL)中的溶液中加入无水氢氧化锂(350mg，14.32mmol)。将混合物在60℃下搅拌4小时。通过蒸发去除THF和甲醇，然后加入30mL的10％HCl水溶液并用EtOAc(2X 50mL)萃取。合并有机相，用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸(1.35g，90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.46(s,1H),9.69(s,1H),8.64(s,1H),5.71(ddd,J＝16.9,10.2,6.5Hz,1H),5.18(ddd,J＝17.1,2.1,1.1Hz,1H),5.00–4.88(m,2H),3.61(q,J＝8.5Hz,1H),3.29(s,1H),2.12(dtd,J＝11.2,6.5,3.7Hz,1H),1.93(dtd,J＝13.3,6.7,3.2Hz,1H),1.85–1.75(m,1H),1.73–1.62(m,1H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值401.15625，实测值402.2(M+1)+；保留时间：1.72分钟(LC方法A)。
步骤3：N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)吡啶-2-甲酸(1.3g，3.239mmol)于NMP(16.5mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(1.10g，3.247mmol)和DIEA(2.25mL，12.92mmol)，随后加入HATU(1.7g，4.471mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.75g，79％)。ESI-MS m/z计算值685.2699，实测值686.2(M+1)+；保留时间：2.3分钟(LC方法J)。
步骤4：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.75g，2.552mmol)和DIEA(1.55mL，8.899mmol)于乙腈(40mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(760mg，3.986mmol)分3份加入。将所得混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色残余物的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.69g，99％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.65(s,1H),7.45–7.31(m,5H),5.86(m,J＝19.1,16.7,10.1,6.4Hz,1H),5.64(m,J＝17.1,10.2,6.9,5.0Hz,1H),5.22–5.12(m,1H),5.12–4.94(m,2H),4.90(dddd,J＝19.0,10.2,1.9,0.8Hz,1H),4.83–4.70(m,2H),4.65(dd,J＝11.0,6.9Hz,1H),3.65(q,J＝8.5Hz,1H),3.39(t,J＝8.7Hz,1H),2.57(m,J＝15.7,10.8,5.7Hz,1H),2.48–2.37(m,1H),2.35–2.20(m,2H),2.10(dt,J＝11.6,5.8Hz,1H),2.03–1.93(m,1H),1.85–1.75(m,1H),1.75–1.65(m,1H),1.46(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值667.25934，实测值668.2(M+1)+；保留时间：2.23分钟(LC方法M)。
步骤5：N-[6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,9,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在150mL圆底烧瓶中，将N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-6-(2-乙烯基吡咯烷-1-基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.67g，2.501mmol)于DCE(400mL)中的脱气溶液在氮气气氛下加热至50℃。然后，在10分钟内将詹氏催化剂1B(300mg，0.4089mmol)分两份加入。将所得混合物在70℃下加热2小时，然后在80℃下加热3小时。加入更多詹氏催化剂1B(300mg，0.4089mmol)，并且在85℃下加热另外18小时以完成反应。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。使用反相制备型色谱法使用C18柱和50％至99％乙腈/水(5mM HCl作为改性剂)梯度对残余物进行纯化15分钟，从而得到呈黄色残余物的N-[6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,9,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(45mg，3％)。ESI-MS m/z计算值639.228，实测值640.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法M)。
步骤6：N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)和N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)
向N-[6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,9,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(45mg，0.07036mmol)于AcOH(2.5mL)中的溶液中加入Pd/C(9.1mg的10％w/w，0.008551mmol)。将混合物放入Parr振荡器中，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压至60psi。将混合物振荡17小时。之后，将反应器减压，并且过滤反应并在真空下浓缩。通过反相制备型色谱法使用C18柱和30％至99％乙腈和水(5mM HCl作为改性剂)梯度对残余物进行纯化15分钟，从而得到呈黄色残余物的产物的两种非对映异构体对：
待洗脱的第一非对映异构体对分离为N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(15mg，77％)。ESI-MS m/z计算值551.1967，实测值552.2(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二非对映异构体对分离为N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(16mg，82％)。ESI-MS m/z计算值551.1967，实测值552.1(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法J)。
步骤7：19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(化合物17)
将N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(15mg，0.0272mmol)溶解于DCM(250μL)中，并且向混合物加入TFA(50μL，0.649mmol)，并且将所得溶液在室温下搅拌30分钟。将混合物蒸发至干燥，然后用乙醚稀释并重浓缩。然后，使用反相制备型色谱法使用C18柱和10％至99％乙腈/水(5mM HCl)梯度在30分钟运行内对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(1.4mg，11％)。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
步骤8：19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(化合物18)
将N-[6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(16mg，0.02901mmol)溶解于DCM(250μL)中，并且向混合物加入TFA(50μL，0.649mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物蒸发，并且使用反相制备型色谱法使用C18柱和30％至99％乙腈/水(5mM HCl)梯度在15分钟运行内对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(2.7mg，21％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.57(s,1H),4.10(s,1H),3.86(s,1H),3.63(s,1H),3.47(s,1H),2.42-2.31(m,1H),2.23(s,1H),2.20-2.08(m,3H),2.01(q,J＝5.9Hz,1H),1.90-1.82(m,1H),1.76-1.63(m,3H),1.49(d,J＝7.5Hz,1H),1.30-1.15(m,1H)ppm。两个可交换质子未被观察到。ESI-MSm/z计算值451.1443，实测值452.2(M+1)+；保留时间：2.01分钟(LC方法A)。
实例14：17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物19)和17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物20)的制备
步骤1：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在5mL密封微波小瓶中，将N-甲基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(375mg，3.084mmol)、DIEA(2.001mL，11.49mmol)和3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.0g，2.003mmol)合并于乙腈(15mL)中，并且将混合物加热至70℃持续18小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色油的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(565mg，56％)。ESI-MS m/z计算值503.22433，实测值504.2(M+1)+；保留时间：1.73分钟(LC方法J)。
步骤2：6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(360mg，0.715mmol)于THF(3.6mL)中的溶液中加入甲醇(3.6mL)和水(1.8mL)。加入无水氢氧化锂(327.8mg，13.69mmol)，并将混合物在60℃下加热1小时。在减压下去除THF和甲醇。加入1M HCl水溶液，直至混合物呈酸性，然后用乙酸乙酯(3X 75mL)萃取。将有机相合并，用盐水(75mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以产生呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(270mg，97％)。ESI-MS m/z计算值389.15625，实测值390.3(M+1)+；保留时间：0.7分钟(LC方法R)。
步骤3：N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(415mg，1.066mmol)于NMP(5.5mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(325mg，1.075mmol)和DIEA(750μL，4.306mmol)，随后加入HATU(560mg，1.473mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用碳酸氢钠溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色泡沫的N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(580mg，81％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(d,J＝5.1Hz,2H),10.32(s,1H),8.95(s,1H),7.53-7.47(m,2H),7.41-7.36(m,2H),7.35-7.30(m,1H),5.92-5.81(m,1H),5.81-5.70(m,1H),5.12-5.00(m,3H),4.95(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),4.86(t,J＝9.4Hz,2H),3.36(dd,J＝8.6,6.1Hz,2H),2.87(s,3H),2.33-2.28(m,2H),2.26(d,J＝7.3Hz,2H),2.19(d,J＝10.0Hz,2H),1.48(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值673.2699，实测值674.2(M+1)+；保留时间：2.23分钟(LC方法J)。
步骤4：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(575mg，0.8536mmol)和DIEA(550μL，3.158mmol)于乙腈(14mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(255mg，1.338mmol)分3份加入。将所得混合物在70℃下加热3小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色残余物的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(540mg，97％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.59(s,1H),8.72(s,1H),7.48–7.41(m,2H),7.38–7.30(m,3H),5.89–5.68(m,2H),5.13–4.92(m,4H),4.73(d,J＝10.9Hz,1H),4.65(d,J＝10.9Hz,1H),3.47–3.36(m,2H),2.95(d,J＝1.4Hz,3H),2.44(td,J＝14.6,13.1,6.8Hz,1H),2.38–2.23(m,5H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值655.25934，实测值655.2(M+1)+；保留时间：2.15分钟(LC方法M)。
步骤5：N-[6-苄氧基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在氮气气氛下在50℃下在10分钟内向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(540mg，0.8236mmol)于DCE(130mL)中的脱气溶液中分两份加入詹氏催化剂1B(91mg，0.124mmol)。将所得混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色残余物的N-[6-苄氧基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(395mg，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.09(s,1H),8.61(s,1H),7.41-7.35(m,1H),7.35-7.27(m,4H),5.67-5.56(m,1H),5.43(q,J＝8.3Hz,1H),4.76(d,J＝11.0Hz,1H),4.68(d,J＝11.0Hz,1H),3.45-3.33(m,2H),3.10-3.02(m,3H),2.62(d,J＝8.3Hz,2H),2.45(s,2H),2.24(dt,J＝15.6,6.5Hz,2H),1.47(d,J＝4.9Hz,9H)ppm。ESI-MSm/z计算值627.228，实测值628.2(M+1)+；保留时间：1.94分钟(LC方法M)。
步骤6：N-[6-羟基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-苄氧基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(390mg，0.6214mmol)于AcOH(22mL)中的溶液中加入Pd/C(67mg的10％w/w，0.06296mmol)。使混合物在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压至60psi。将混合物在Parr振荡器中振荡4小时。将反应器减压，并加入另外的0.2当量Pd/C(134mg的10％w/w)。将混合物返回到Parr振荡器，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压至55psi。将混合物振荡3小时。之后，将反应器减压，并且加入另外的0.7当量Pd/C(465mg的10％w/w)。将混合物返回到Parr振荡器，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压至45psi。将混合物再振荡6小时。之后，将反应器减压并过滤，然后在真空下浓缩。加入EtOAc(25mL)加AcOH(5mL)，然后将混合物在氮气下吹扫，并且加入1.0当量的新鲜Pd/C(665mg的10％w/w，0.6214mmol)。将混合物放入Parr振荡器中，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压至35psi。将混合物再振荡3小时。之后，将反应器减压，并将反应过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-羟基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(209mg，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),8.53(s,1H),7.65(s,1H),3.44(td,J＝14.1,13.3,4.3Hz,1H),3.34(d,J＝4.8Hz,1H),3.31-3.25(m,1H),3.03(d,J＝2.0Hz,3H),2.15(d,J＝8.6Hz,2H),1.89(dd,J＝12.1,5.3Hz,1H),1.72-1.65(m,1H),1.65-1.55(m,2H),1.47(s,9H),1.46-1.35(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值539.1967，实测值540.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法J)。
步骤7：17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
向N-[6-羟基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(185mg，0.3429mmol)于DCM(3.0mL)中的溶液中加入TFA(1.25mL，16.22mmol)并且在室温下搅拌2小时。将混合物蒸发，并且在15.0分钟内通过反相HPLC使用C18柱和1％至99％乙腈/水(+5mMHCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(130mg，86％)。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法A)。
步骤8：17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物19)和17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物20)
通过手性SFC使用用12％甲醇/88％ CO2洗脱的菲罗门LUX-4柱(250X21.2mm，5μm粒度)以70.0毫升/分钟的流速(500μL的注射体积)对外消旋17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(130mg，0.2959mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(45.0mg，69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.59(d,J＝16.9Hz,1H),4.97(d,J＝36.3Hz,2H),3.30-3.13(m,2H),2.87(d,J＝1.5Hz,3H),2.14(t,J＝7.3Hz,2H),1.93(dt,J＝12.6,6.3Hz,1H),1.72-1.65(m,1H),1.55(ddt,J＝37.4,14.8,7.4Hz,4H),1.40(td,J＝14.2,12.9,6.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(44.9mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.60(d,J＝16.1Hz,1H),4.86(d,J＝51.0Hz,2H),3.22(dtd,J＝34.7,13.0,4.4Hz,2H),2.87(d,J＝1.4Hz,3H),2.14(t,J＝7.3Hz,2H),1.94(td,J＝12.1,5.6Hz,1H),1.73–1.65(m,1H),1.55(ddt,J＝37.4,14.2,7.3Hz,4H),1.38(dt,J＝14.6,7.7Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法A)。
步骤9：无定形化合物19(纯形态)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
无定形化合物19(纯形态)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得，并且提供于图4。
B.热重分析(TGA)
无定形化合物19(纯形态)的TGA曲线提供于图5。TGA曲线示出了约40-198.6℃以10.00℃/分钟斜升至350.00℃的5.71％质量损失。
C.差示扫描量热法分析
使用以下方法收集无定形化合物19(纯形态)的DSC数据：
1.25℃至200.00℃，10℃/分钟，
2.200℃至-20℃，-50℃/分钟，然后
3.-20℃至150℃，10℃/分钟。
无定形化合物19(纯形态)的DSC热谱图提供于图6。热谱图显示了在69.6℃下的Tg中点。
实例15：(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物21)和(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物22)的制备
步骤1：2-氧代己-5-烯酸乙酯
将在氮气下机械搅拌的2L烧瓶中的草酸二乙酯(58.5g，400.3mmol)于THF(290mL)中的溶液在干冰浴中冷却，并且在1.5小时内逐滴加入溴(丁-3-烯基)镁(800mL的0.5M，400mmol)，将内部温度保持在-70℃下。将所得的云白色乳膏溶液搅拌2小时，然后通过加入从冷浴中取出的柠檬酸(400mL的1M，400mmol)淬灭并搅拌0.5小时。将相分离，并且将有机相用饱和NaHCO3(3X 250mL)和盐水(2X 250mL)洗涤。将水相用MTBE(300mL)反萃取一次，并且将合并的有机相干燥、过滤并蒸发。通过硅胶色谱法以0％至100％ DCM/己烷梯度进行纯化，得到呈黄色液体的2-氧代己-5-烯酸乙酯(49g，78％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.82(ddt,J＝16.8,10.2,6.5Hz,1H),5.07(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.02(dq,J＝10.2,1.4Hz,1H),4.32(q,J＝7.1Hz,2H),2.95(t,J＝7.3Hz,2H),2.45-2.34(m,2H),1.37(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。
步骤2：2-羟基己-5-烯酸乙酯
向2-氧代己-5-烯酸乙酯(12.4g，79.4mmol)于二氯甲烷(317.6mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(33.66g，158.8mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应通过加入饱和NaHCO3水溶液仔细淬灭。将所得层分离，并且将水层用DCM(2X 150mL)进一步萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈浅黄色油的2-羟基己-5-烯酸乙酯(12.2g，97％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.99-5.63(m,1H),5.36(d,J＝5.9Hz,1H),5.21-4.76(m,2H),4.09(qd,J＝7.1,1.3Hz,2H),3.99(dt,J＝7.9,4.9Hz,1H),2.08(tdd,J＝8.1,6.6,1.5Hz,2H),1.82-1.49(m,2H),1.19(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。
步骤3：2-苄氧基己-5-烯酸乙酯
在0℃下向2-羟基己-5-烯酸乙酯(12.3g，77.75mmol)于DMF(65.89mL)中的溶液中按份加入氢化钠(3.9g的60％w/w，97.51mmol)。将混合物(乳膏悬浮液)在0℃下搅拌30分钟。向混合物中加入溴甲基苯(11.61mL，97.61mmol)，并且使混合物温热至环境温度并搅拌18小时。将反应通过缓慢加入200mL的饱和NH4Cl水溶液淬灭，并且将所得混合物在环境温度下搅拌10分钟。将混合物用MTBE(415.2mL)稀释，并且将有机相分离。将有机相用水(166.2mL)、盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈橙色油的2-苄氧基己-5-烯酸乙酯(19g，98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.39-7.27(m,5H),6.01-5.50(m,1H),5.05-4.91(m,2H),4.65-4.34(m,2H),4.14(qd,J＝7.1,3.6Hz,2H),3.97(dd,J＝7.2,5.4Hz,1H),2.10(dtd,J＝8.0,6.7,1.4Hz,2H),1.74(dtd,J＝12.6,7.1,6.3,3.1Hz,2H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。保留时间：0.75分钟(LC方法S)。
步骤4：2-苄氧基己-5-烯酸
向2-苄氧基己-5-烯酸乙酯(19.3g，77.72mmol)于MeOH(112.6mL)和THF(38.6mL)中的溶液中加入NaOH(72.2mL的2M，144.4mmol)，并且将混合物在环境温度下搅拌6小时。将有机溶剂在真空中去除，并将残余物用1M NaOH(25mL)稀释并用MTBE(2X 300mL)萃取。将有机相用100mL的1N NaOH反萃取一次，并将合并的水相用10％ HCl水溶液酸化至pH＝1。将水相用乙酸乙酯(2X 150mL)萃取，并且将有机相合并，并且用盐水(150mL)洗涤。将有机相经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，从而产生呈橙色油的2-苄氧基己-5-烯酸(13.5g，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),7.67-6.71(m,5H),5.79(ddt,J＝16.9,10.2,6.6Hz,1H),5.07-4.81(m,2H),4.49(dd,J＝103.0,11.7Hz,2H),3.88(dd,J＝7.8,4.7Hz,1H),2.18-2.04(m,2H),1.75(tqd,J＝14.9,7.3,2.9Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值220.10994，实测值221.1(M+1)+；保留时间：0.57分钟(LC方法S)。
步骤5：N-(2-苄氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酸叔丁酯
向2-苄氧基己-5-烯酸(13.5g，61.29mmol)于DMF(112.2mL)中的溶液中加入HATU(30.71g，80.77mmol)和DIEA(22.83mL，131.1mmol)，并且将混合物在环境温度下搅拌10分钟。向混合物加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(8.424g，63.74mmol)(随着加入轻微温升)，并且将混合物在环境温度下搅拌3小时。将反应用水稀释，并用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(25mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到橙色油。然后通过硅胶色谱法(12克柱)使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，得到呈无色油的N-(2-苄氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酸叔丁酯(20g，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),8.77(s,1H),7.52-7.11(m,5H),5.91-5.69(m,1H),5.06-4.88(m,2H),4.48(dd,J＝110.1,11.7Hz,2H),3.82(t,J＝6.3Hz,1H),2.69(s,9H),2.22-2.01(m,2H),1.81-1.62(m,2H)ppm。
步骤6：2-苄氧基己-5-烯酰肼(盐酸盐)
向N-(2-苄氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酸叔丁酯(515mg，1.54mmol)于二氯甲烷(2.962mL)中的溶液中加入HCl(1.782mL的4M于二噁烷中，7.128mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，浓缩并且与二氯甲烷和庚烷共蒸发，以得到呈白色固体的2-苄氧基己-5-烯酰肼(盐酸盐)(417mg，99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),10.20(s,2H),7.43-7.26(m,5H),5.79(ddt,J＝16.9,10.3,6.6Hz,1H),5.12-4.76(m,2H),4.49(dd,J＝67.3,11.7Hz,2H),4.01(t,J＝6.2Hz,1H),2.15-2.00(m,2H),1.75(td,J＝7.9,6.0Hz,2H)ppm。
步骤7：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[(2-苄氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(3.5g，8.425mmol)于NMP(44.87mL)中的溶液中加入2-苄氧基己-5-烯酰肼(盐酸盐)(2.313g，8.543mmol)、DIEA(4.457mL、25.59mmol)和HATU(4.475g，11.77mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(12克柱)使用0％至70％乙酸乙酯/己烷梯度粗材料进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[(2-苄氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.65g，50％)。ESI-MS m/z计算值631.29816，实测值632.5(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法T)。
步骤8：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-苄氧基戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[(2-氧基己-5-烯基氨基)氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.53g，4.005mmol)和DIEA(2.425mL，13.92mmol)于乙腈(57.84mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(840mg，4.406mmol)分2份加入。将混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3X 25mL)萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(12克柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色半固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-苄氧基戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.75g，71％)。ESI-MS m/z计算值613.2876，实测值614.5(M+1)+；保留时间：0.9分钟(LC方法T)。
步骤9：N-[(12S)-6-(苄氧基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在氮气气氛下在50℃下在10分钟内向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-苄氧基戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.0g，3.259mmol)于DCE(481.2mL)中的脱气溶液中分两份加入詹氏催化剂1B(358.7mg，0.4889mmol)。将所得混合物在70℃下加热20小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色残余物的N-[(12S)-6-(苄氧基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(110mg，6％)。ESI-MS m/z计算值585.2563，实测值586.4(M+1)+；保留时间：0.85分钟(LC方法T)。
步骤10：N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)和N-[(12R)-6-羟基-18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)
向N-[(12S)-6-(苄氧基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(200mg，0.3415mmol)于AcOH(5.4mL)中的溶液中加入Pd/C(145.4mg的10％w/w，0.1366mmol)。将混合物在氢气氛下使用Parr振荡器以45psi振荡过夜。将反应混合物经二氧化硅塞过滤，用乙酸乙酯充分洗涤，并且然后将滤液浓缩，以得到黄色残余物的N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯。在20分钟内通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至10％乙酸乙酯/己烷梯度对此材料进行纯化，得到了分别作为单一对映异构体分离的两种非对映异构体的分离：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(50mg，59％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.90(s,2H),5.26(dd,J＝8.8,4.2Hz,1H),4.22(ddt,J＝9.8,7.5,3.9Hz,1H),4.04-3.66(m,1H),3.69-3.42(m,2H),2.44-2.30(m,1H),2.29-2.12(m,2H),2.00(tdd,J＝6.8,4.5,2.7Hz,2H),1.92-1.73(m,2H),1.71-1.57(m,3H),1.54(s,9H),1.46(qt,J＝8.7,3.8Hz,3H),1.11-0.94(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值497.22498，实测值498.42(M+1)+；保留时间：0.59分钟(LC方法T)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(30mg，35％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.95(s,1H),8.91(s,1H),5.05(dd,J＝10.2,3.4Hz,1H),4.10-4.02(m,1H),3.69-3.43(m,2H),3.37-2.79(m,1H),2.56(dddd,J＝10.4,8.4,5.9,2.3Hz,1H),2.35-2.12(m,2H),1.99(ddt,J＝14.2,6.5,3.9Hz,2H),1.86-1.45(m,17H),1.05-0.90(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值497.22498，实测值498.42(M+1)+；保留时间：0.6分钟(LC方法T)。
步骤11：(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物21)
向N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(7mg，0.01407mmol)于DCM(129.8μL)中的溶液中加入TFA(58.6μL，0.7606mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应浓缩，然后放入DCM中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层浓缩，以得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(4.1mg，73％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),5.16(dd,J＝8.7,4.2Hz,1H),4.20-4.03(m,1H),3.61-3.50(m,1H),3.38-3.28(m,1H),2.27(ddt,J＝9.8,5.1,2.6Hz,1H),2.22-2.09(m,2H),1.90(dqd,J＝16.7,7.1,6.7,3.5Hz,2H),1.83-1.66(m,2H),1.64-1.46(m,4H),1.45-1.29(m,4H),0.93(ddt,J＝17.2,11.2,5.5Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值397.17255，实测值398.3(M+1)+；保留时间：0.31分钟(LC方法T)。
步骤12：(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物22)
向N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(7mg，0.01407mmol)于DCM(129.8μL)中的溶液中加入TFA(58.6μL，0.7606mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应浓缩，然后放入二氯甲烷中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层浓缩，以得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(3.0mg，54％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.19(s,1H),4.97(dd,J＝10.2,3.4Hz,1H),3.96(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.66-3.46(m,1H),3.42-3.26(m,1H),2.58-2.39(m,1H),2.26-2.03(m,2H),1.91(ddt,J＝14.1,6.5,3.3Hz,2H),1.79-1.31(m,8H),0.90-0.67(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值397.17255，实测值398.3(M+1)+；保留时间：0.31分钟(LC方法T)。
实例16：21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物23)、21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物24)、21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物25)和21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物26)的制备
步骤1：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(2-丁-3-烯基吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在微波小瓶中，向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(250.3mg，0.3331mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中加入2-丁-3-烯基吡咯烷(74mg，0.591mmol)和Cs2CO3(342mg，1.05mmol)。在微波照射下，将反应在120℃下加热30分钟。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵溶液洗涤，然后用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％平缓至30％ EtOAc/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈无色糖浆，N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(2-丁-3-烯基吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(174mg，66％)。ESI-MSm/z计算值695.29065，实测值696.37(M+1)+；保留时间：1.51分钟(LC方法U)。少量的产物仍含有第二N-Boc保护基团，此材料被直接用于随后步骤。
步骤2：N-[6-(苄氧基)-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,9,18,20-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(2-丁-3-烯基吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.2444mmol)(被一些具有双N-Boc保护的起始材料所污染，参见先前步骤)于DCE(50mL)中的脱气溶液中加入詹氏催化剂1B(47mg，0.05848mmol)，并且将反应在70℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将混合物用1:4EtOAc/己烷稀释，并且经硅藻土过滤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％平缓至30％ EtOAc/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，得到呈明黄色油的N-[6-(苄氧基)-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,9,18,20-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(87mg，53％)。ESI-MS m/z计算值667.25934，实测值668.38(M+1)+；保留时间：2.37分钟(LC方法M)。
步骤3：N-[6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-(苄氧基)-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,9,18,20-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(68mg，0.1019mmol)于AcOH(5mL)中的溶液中加入Pd/C(62mg的10％w/w，0.05826mmol，50％水)。将烧瓶置于氢Parr振荡器上，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，移除所有氮气，并将反应器用氢气加压至50psi并振荡2天。将烧瓶减压，并将混合物通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至100％ EtOAc/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，产生了N-[6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(38mg，64％)。ESI-MS m/z计算值579.228，实测值580.4(M+1)+；保留时间：0.86分钟(LC方法R)。
步骤4：21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇
将TFA(250μL，3.245mmol)和二氯甲烷(750μL)的预先配制的溶液中的N-[6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(38mg，0.06557mmol)在室温下搅拌约1小时。将溶剂通过蒸发去除，然后在30分钟内将残余物以1mL的DMSO稀释并且通过反相HPLC使用40％至80％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体的21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(28mg，83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),7.62(s,1H),7.48-7.35(m,1H),6.38(s,1H),4.16(dt,J＝43.9,7.8Hz,1H),3.54(q,J＝8.9Hz,2H),3.14(t,J＝9.0Hz,1H),2.38-2.25(m,1H),2.16(dd,J＝14.6,8.1Hz,1H),1.97(dd,J＝8.8,4.3Hz,1H),1.94-1.79(m,2H),1.73(q,J＝9.8,8.8Hz,1H),1.61(s,1H),1.52-1.26(m,5H),1.23-1.11(m,2H),1.07-0.92(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.2(M+1)+；保留时间：0.69分钟(LC方法R)。
步骤5：21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物23)、21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物24)、21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物25)和21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物26)
通过正常相SFC使用由菲罗门公司(Phenomenex)出售的LUX-4柱(250X 10mm，5μm粒度)以及10％至90％移动相B的双梯度运行(移动相A＝CO2，移动相B＝甲醇(无改性剂)，10毫升/分钟的流速以及70μL的注射体积)对21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(48.01mg，0.09306mmol)的混合物进行纯化。这些条件产生了如下所述的4种对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体1)(4.8mg，43％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),7.66(s,1H),6.41(s,2H),4.20(t,J＝8.4Hz,1H),3.54(q,J＝8.3Hz,1H),3.12(t,J＝9.0Hz,1H),2.34-2.24(m,1H),2.22-2.16(m,1H),2.11(dt,J＝13.7,8.1Hz,1H),1.95-1.70(m,3H),1.61(d,J＝10.6Hz,2H),1.51-1.29(m,4H),1.27-1.12(m,3H),0.95(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：1.87分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.3mg，39％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),7.66(s,1H),6.41(s,2H),4.21(q,J＝8.3Hz,1H),3.54(q,J＝8.4Hz,1H),3.12(t,J＝9.0Hz,1H),2.29(t,J＝9.8Hz,1H),2.22-2.15(m,1H),2.11(dt,J＝14.8,8.0Hz,1H),1.94-1.80(m,2H),1.79-1.70(m,1H),1.61(d,J＝9.3Hz,2H),1.52-1.28(m,4H),1.19(q,J＝7.9,6.7Hz,3H),0.95(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.2(M+1)+；保留时间：1.87分钟(LC方法J)。
待洗脱的第三对映异构体分离为呈黄色固体的21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体3)(9.4mg，84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),7.66(s,1H),6.39(s,2H),4.09(d,J＝8.7Hz,1H),3.54(q,J＝8.5Hz,1H),3.21-3.08(m,1H),2.31(dt,J＝15.0,7.1Hz,1H),2.21-2.12(m,1H),1.97(t,J＝10.8Hz,2H),1.88(dt,J＝8.3,4.8Hz,2H),1.72(h,J＝10.5,9.6Hz,1H),1.58-1.50(m,1H),1.47(dt,J＝10.7,5.3Hz,2H),1.42(s,3H),1.15(d,J＝15.9Hz,2H),0.99(dq,J＝12.0,6.3Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.3(M+1)+；保留时间：1.87分钟(LC方法J)。
待洗脱的第四对映异构体分离为呈黄色固体的21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-23-氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.013,17]二十三碳-1(22),2,4,18,20-五烯-6-醇(对映异构体4)(9.4mg，84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.76(s,1H),7.66(s,1H),6.40(s,2H),4.10(d,J＝8.6Hz,1H),3.54(q,J＝8.4Hz,1H),3.15(t,J＝9.0Hz,1H),2.31(dt,J＝14.9,7.2Hz,1H),2.16(dd,J＝11.7,6.7Hz,1H),1.97(d,J＝12.5Hz,2H),1.88(dt,J＝8.4,4.3Hz,2H),1.80-1.65(m,1H),1.54(d,J＝6.8Hz,1H),1.46(dt,J＝11.9,6.2Hz,2H),1.34(ddt,J＝33.8,12.9,6.5Hz,3H),1.16(d,J＝16.0Hz,2H),1.02-0.94(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：1.85分钟(LC方法J)。
实例17：20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物27)、20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物28)、20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物29)和20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物30)的制备
步骤1：2-(羟基甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下向(4,4-二甲基吡咯烷-2-基)甲醇(3g，23.22mmol)于四氢呋喃(40mL)中的溶液中加入三乙胺(7.1148g，9.8mL，70.311mmol)，随后加入碳酸氢二叔丁酯(6g，27.492mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜并且在真空中浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(150mL)中，并且然后将混合物用1N HCl(150mL)、盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清油的2-(羟基甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.95g，92％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ4.08-3.94(m,1H),3.71-3.51(m,2H),3.32(d,J＝10.9Hz,1H),2.97(d,J＝10.9Hz,1H),1.92-1.69(m,1H),1.47(s,9H),1.38-1.22(m,1H),1.07(s,3H),1.01(s,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。
步骤2：2-(碘甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下在30分钟内向咪唑(2.9g，42.599mmol)和三苯基膦(6.2g，23.638mmol)于2-甲基四氢呋喃(75mL)中的溶液中按份加入碘(6.5g，25.61mmol)。将反应温度保持在<6℃下，并且混合物变成深橙色乳脂糖，随着搅拌变成淡黄色和颗粒状。将混合物温热至室温并且逐滴加入2-(羟基甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.9g，21.368mmol)于2-甲基四氢呋喃(25mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌20小时，从而得到淡黄色浆液。将浆液经硅藻土过滤，并且用二乙醚(75mL)洗涤，并将滤液在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色油的2-(碘甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(6.7g，92％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ3.85-3.68(m,1H),3.68-3.27(m,3H),3.05(d,J＝10.6Hz,1H),2.05-1.83(m,1H),1.59-1.44(m,10H),1.11(s,3H),1.00(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值339.0695，实测值284.1(M-55)+；保留时间：2.29分钟(LC方法E)。
步骤3：2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将碘化铜(4.8g，25.203mmol)于脱气的2-甲基四氢呋喃(56mL)中的悬浮液冷却至-50℃，并且逐滴加入四氢呋喃中的乙烯溴化镁(50mL的1M，50mmol)，从而将反应温度保持在<-40℃。在加入(20分钟)之后，将稠密悬浮液搅拌30分钟，使温度升高至-10℃，此时其变成较稀薄的黑色悬浮液。将黑色悬浮液冷却至-60℃，并且逐滴加入2-(碘甲基)-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.6g，16.509mmol)于2-甲基四氢呋喃(14mL)中的溶液，从而将反应温度保持在<-50℃。将混合物搅拌30分钟，使反应温度上升至-15℃。将反应用饱和氯化铵(25mL)淬灭，并且将有机相分离并用饱和氯化铵(75mL)洗涤。将水相用二乙醚(75mL)萃取，并且将合并的有机相经硫酸钠干燥、过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至20％二氯甲烷/己烷梯度对所得浅橙色油进行纯化，从而得到呈淡黄色油的2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.6g，40％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ5.84-5.59(m,1H),5.14-4.98(m,2H),4.01-3.73(m,1H),3.51-3.19(m,1H),2.90(d,J＝10.6Hz,1H),2.79-2.45(m,1H),2.36-2.15(m,1H),1.76(ddd,J＝12.6,7.3,1.8Hz,1H),1.51-1.44(m,10H),1.07(s,3H),0.97(s,3H)ppm。
步骤4：2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷(三氟乙酸盐)
在-20℃下在冷浴中在15分钟内将三氟乙酸(13.320g，9mL，116.82mmol)加入到2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.35g，9.8181mmol)于二氯甲烷(15mL)中的溶液。存在一些温升，并且达到的最大温度是-10℃。移除冷浴，将所得混合物在室温下搅拌2小时，并且然后将溶剂在真空下去除。将残余物在真空下干燥过夜，以产生呈深色油的2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷(三氟乙酸盐)(3.4g，94)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.13(br.s.,1H),8.16(br.s.,1H),5.81-5.62(m,1H),5.32-5.08(m,2H),3.93-3.77(m,1H),3.08(t,J＝5.4Hz,2H),2.64-2.38(m,2H),2.09-1.86(m,1H),1.74-1.53(m,1H),1.22(s,3H),1.19(s,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-75.94(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值139.1361，实测值140.3(M+1)+；保留时间：0.69分钟(LC方法C)。
步骤5：N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(1 0g，1.331mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中加入碳酸铯(2.2g，6.752mmol)和2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷(三氟乙酸盐)(685mg，2.705mmol)，并且在微波反应器中将反应混合物在100℃下加热30分钟。将反应混合物倒入碎冰上，并且在冰融化后，将水轻轻倒出，并且将所得浆状材料溶解于乙酸乙酯中，用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，产生了N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(654mg，69％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.65(s,1H),7.40(dt,J＝7.6,1.8Hz,2H),7.38-7.30(m,3H),5.84(dddt,J＝19.6,16.7,10.1,6.4Hz,1H),5.75-5.61(m,1H),5.15-4.89(m,4H),4.78-4.61(m,2H),4.54(d,J＝8.1Hz,1H),3.35(d,J＝10.3Hz,1H),3.03(d,J＝9.7Hz,1H),2.49-2.39(m,3H),2.38-2.18(m,3H),1.79(dd,J＝12.2,6.6Hz,1H),1.55(t,J＝11.5Hz,1H),1.47(s,9H),1.12(s,3H),0.85(d,J＝2.2Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值709.3063，实测值710.4(M+1)+；保留时间：2.36分钟(LC方法M)。少量的产物仍含有第二N-Boc保护基团，此材料被直接用于随后步骤。
步骤6：N-[6-(卞氧基)-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(650mg，0.9159mmol)(被一些具有双N-Boc保护的起始材料所污染，参见先前步骤)于DCE(200mL)中的脱气溶液中加入詹氏催化剂1B(192mg，0.2389mmol)，并且将反应在70℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温并浓缩。将混合物用1:4EtOAc/己烷稀释，并且经硅藻土过滤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈明黄色油的N-[6-(卞氧基)-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(420mg，67％)。ESI-MS m/z计算值681.27496，实测值682.5(M+1)+；保留时间：2.18分钟(LC方法M)。少量的产物仍含有第二N-Boc保护基团，此材料被直接用于随后步骤。
步骤7：N-[6-羟基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-(卞氧基)-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(420mg，0.6161mmol)(被一些具有双N-Boc保护的起始材料所污染，参见先前步骤)于AcOH(5mL)中的溶液中加入Pd/C(174mg的10％w/w，0.1635mmol，50％水湿润)。将烧瓶置于氢Parr振荡器上，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，移除所有氮气，并且将反应器加压至40psi的氢气并振荡过夜。将烧瓶减压，并且加入另外的Pd/C(182mg，0.171mmol，10％w/w，50％水湿润)和几滴1M HCl。将混合物置于氢Parr振荡器上，并在真空下脱气并填充有氮气三次。然后，移除所有氮气，并将反应器用氢气加压至60psi并振荡过夜。将烧瓶减压，并将混合物通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用0％平缓至50％乙酸乙酯/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，产生了N-[6-羟基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，46％)。ESI-MS m/z计算值593.24365，实测值594.36(M+1)+；保留时间：1.92分钟(LC方法M)。
由此纯化，还分离出了双N-Boc产物，N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-羟基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(84mg，20％)。ESI-MS m/z计算值693.2961，实测值694.34(M+1)+；保留时间：1.74分钟(LC方法M)。
步骤8：20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对1)和20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对2)
将N-[6-羟基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.2864mmol)溶解于TFA(200μL，2.596mmol)和二氯甲烷(800μL)的预制溶液中并且在室温下搅拌约1小时。将溶剂在减压下去除。单独地，将TFA(200μL，2.596mmol)和二氯甲烷(800μL)的预制溶液中的N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[6-羟基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(84mg，0.1211mmol)在室温下搅拌约1小时。然后将溶剂在减压下去除。将得自两种反应的粗产物合并并溶解于5mL的DMSO中，并且在30分钟内通过反相HPLC(使用85％至90％乙腈/水(+5mM HCl)的双梯度运行)进行纯化，得到两种单独的非对映异构体对：
待洗脱的第一非对映异构体对分离为呈黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(40mg，67％)。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.3(M+1)+；保留时间：1.26分钟(LC方法M)。
待洗脱的第二非对映异构体对分离为呈黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(46mg，77％)。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.1(M+1)+；保留时间：1.3分钟(LC方法M)。
步骤9：20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物27)和20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物28)
通过手性SFC使用正常相和由菲罗门公司出售的LUX-4柱(250X 10mm，5μm粒度)以及10％至90％ MeOH/CO2梯度，使用10毫升/分钟的流速以及70μL的注射体积对20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对1)(47mg，0.09525mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈明黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(19.4mg，83％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.57(s,1H),6.12(s,2H),4.33-4.22(m,1H),3.32(d,J＝9.6Hz,1H),3.00(d,J＝9.6Hz,1H),2.31(dt,J＝14.6,7.3Hz,2H),2.04(ddd,J＝14.5,8.8,5.8Hz,1H),1.93(dd,J＝11.9,6.2Hz,1H),1.71(dt,J＝46.2,8.5Hz,2H),1.41(tt,J＝18.8,7.7Hz,5H),1.12(s,3H),0.96-0.89(m,1H),0.88(s,3H ppm).ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.1(M+1)+；保留时间：1.26分钟(LC方法M)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈明黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(17.9mg，76％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.59(s,1H),6.12(s,2H),4.27(q,J＝10.2Hz,1H),3.32(d,J＝9.6Hz,1H)),3.00(d,J＝9.6Hz,1H),2.32(dq,J＝14.9,6.6Hz,2H),2.04(ddd,J＝14.5,9.0,6.0Hz,1H),1.93(dd,J＝11.9,6.2Hz,1H),1.75(q,J＝8.8,8.4Hz,1H),1.67(d,J＝7.6Hz,1H),1.52-1.31(m,5H),1.12(s,3H),0.93(d,J＝6.7Hz,1H),0.88(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.0(M+1)+；保留时间：1.25分钟(LC方法M)。
步骤10：20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物29)和20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物30)
通过手性SFC使用正常相和由菲罗门公司出售的LUX-4柱(250X 10mm，5μm粒度)以及10％至90％ MeOH/CO2梯度，使用10毫升/分钟的流速以及70μL的注射体积对20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体对2)(46mg，0.09322mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈明黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体3)(14.6mg，63％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.71(s,1H),6.11(s,2H),4.12(q,J＝9.3Hz,1H),3.31(d,J＝10.0Hz,2H),3.00(d,J＝9.6Hz,1H),2.45(dt,J＝12.8,6.7Hz,1H),2.25(dq,J＝9.4,5.8,4.7Hz,1H),1.97(dt,J＝13.7,8.7Hz,1H),1.88(dd,J＝11.9,6.2Hz,1H),1.56(t,J＝7.6Hz,2H),1.50-1.34(m,5H),1.11(s,3H),0.87(s,3H),0.84(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.1(M+1)+；保留时间：1.3分钟(LC方法M)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈明黄色固体的20-氨基-14,14-二甲基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体4)(13.7mg，60％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),6.11(s,2H),4.12(q,J＝9.3Hz,1H),3.31(s,2H),3.00(d,J＝9.6Hz,1H),2.45(d,J＝12.2Hz,1H),2.23(d,J＝10.9Hz,1H),1.97(dt,J＝13.4,8.5Hz,1H),1.89(dd,J＝11.9,6.2Hz,1H),1.55(s,2H),1.42(q,J＝12.3,10.9Hz,5H),1.11(s,3H),0.88(s,3H),0.82(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值493.19125，实测值494.0(M+1)+；保留时间：1.3分钟(LC方法M)。
实例18：(12R)-6-(羟亚胺基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(化合物31)的制备
步骤1：N-[(12R)-6-氧代-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[(12R)-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.201mmol)于DCM(1.628mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(102.3mg，0.2412mmol)，并且将反应在室温下搅拌30分钟。将反应混合物经硅藻土过滤并浓缩。在10分钟内通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，得到呈黄色固体的N-[(12R)-6-氧代-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(70mg，70％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.98(s,1H),8.92(s,1H),4.00-3.88(m,1H),3.64-3.51(m,1H),3.51-3.41(m,1H),3.22-3.10(m,1H),2.75-2.62(m,1H),2.57(td,J＝11.8,7.1Hz,1H),2.20-1.88(m,4H),1.83-1.56(m,6H),1.48(s,10H)ppm。ESI-MS m/z计算值495.20935，实测值496.4(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法T)。
步骤2：(12R)-6-(羟亚胺基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(化合物31)
向N-[(12R)-6-氧代-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(18mg，0.03544mmol)于二氯甲烷(400μL)中的溶液中加入TFA(27.30μL，0.3543mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将反应混合物浓缩，溶解在EtOH(200μL)中，并且然后加入羟胺(盐酸盐)(3.773mg，0.05429mmol)，随后加入NaOAc(4.858mg，0.05922mmol)。将混合物在75℃下加热5小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，并通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mMHCl)梯度进行纯化。第二次洗脱的合并部分和主要非对映异构体和蒸发。将所得固体溶解于乙酸乙酯并且用饱和NaHCO3洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩，以得到呈橙色固体的(12R)-6-(羟亚胺基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-胺(10mg，69％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.51(s,1H),3.91-3.76(m,1H),3.52(d,J＝8.8Hz,1H),3.28(dd,J＝17.8,8.8Hz,1H),3.20-3.08(m,1H),2.52(d,J＝11.9Hz,1H),2.37(ddd,J＝13.8,9.7,4.3Hz,1H),2.20-2.01(m,1H),1.88(dd,J＝6.9,3.3Hz,1H),1.85-1.61(m,3H),1.60-1.29(m,5H),0.95-0.84(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值410.16782，实测值411.3(M+1)+；保留时间：1.99分钟(LC方法A)。产物是具有肟的未知立体化学的单一对映异构体。
实例19：(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物32)和(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物33)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2.3g，5.537mmol)于NMP(32mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)(1.89g，5.820mmol)、DIEA(3.2mL，18.37mmol)和HATU(2.59g，6.812mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(3.16g，83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),10.28(d,J＝18.9Hz,2H),8.88(s,1H),7.46(d,J＝7.4Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.35-7.29(m,1H),5.98-5.84(m,1H),5.83-5.69(m,1H),5.38(d,J＝17.1Hz,1H),5.23(d,J＝10.3Hz,1H),5.04-4.91(m,2H),4.86(s,2H),4.70(ddt,J＝18.2,6.9,3.3Hz,1H),3.55(q,J＝8.6Hz,1H),3.36-3.32(m,1H),3.09(dd,J＝15.7,7.5Hz,1H),2.99(d,J＝15.8Hz,1H),2.36-2.27(m,1H),2.18(dd,J＝17.9,4.5Hz,1H),2.07-1.98(m,1H),1.93(t,J＝8.9Hz,1H),1.75(dt,J＝17.8,8.3Hz,1H),1.66(dt,J＝10.3,7.4Hz,1H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值685.2699，实测值686.2(M+1)+；保留时间：1.91分钟(LC方法M)。
步骤2：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(3.16g，4.609mmol)和DIEA(3mL，17.22mmol)于乙腈(100mL)中的溶液在50℃下加热，然后将对甲苯磺酰氯(1.4g，7.343mmol)一份加入。将所得混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并搅拌15分钟。将混合物用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取，并且将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(120克柱)(使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.59g，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.65(d,J＝3.7Hz,1H),7.35(ddd,J＝21.4,7.6,5.2Hz,5H),5.91(ddd,J＝17.5,12.8,7.6Hz,1H),5.79-5.62(m,1H),5.41-5.29(m,1H),5.23(t,J＝11.8Hz,1H),5.06-4.97(m,1H),4.94(d,J＝10.2Hz,1H),4.76(dd,J＝14.1,10.9Hz,1H),4.62(dd,J＝10.9,6.5Hz,1H),4.42-4.31(m,1H),3.60-3.50(m,1H),3.45-3.35(m,1H),3.27(t,J＝8.2Hz,2H),2.23(t,J＝11.8Hz,1H),2.03(d,J＝11.3Hz,1H),1.95(s,1H),1.71(ddd,J＝18.8,15.4,8.1Hz,2H),1.51-1.44(m,9H),1.23(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值667.25934，实测值668.3(M+1)+；保留时间：2.3分钟(LC方法M)。
步骤3：N-[(11S)-6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,8,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在氮气气氛下在50℃下在10分钟内向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.59g，3.879mmol)于DCE(600mL)中的脱气溶液中分两份加入詹氏催化剂1B(465mg，0.6337mmol)。将所得混合物在70℃下加热14小时。再次加入詹氏催化剂1B(465mg，0.6337mmol)，并将混合物在80℃下加热22小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120g柱)使用100％己烷至10％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈明黄色固体的N-[(11S)-6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,8,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(160mg，6.5％)。ESI-MS m/z计算值639.228，实测值640.2(M+1)+；保留时间：2.01分钟(LC方法M)。
步骤4：N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)和N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)
向N-[(11S)-6-(苄氧基)-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,8,16,18-六烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(240mg，0.3752mmol)于AcOH(6mL)和乙酸乙酯(6mL)中的溶液中加入Pd/C(400mg的10％w/w，0.3759mmol)。将混合物置于Parr振荡器中，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压。将混合物在80psi下振荡三个小时，然后在100psi下振荡另外四个小时。将反应器减压，并将反应过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到两种对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色残余物的N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(58.7mg，57％)。ESI-MS m/z计算值551.1967，实测值552.2(M+1)+；保留时间：1.42分钟(LC方法M)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色残余物的N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(58.5mg，57％)。ESI-MS m/z计算值551.1967，实测值552.2(M+1)+；保留时间：1.32分钟(LC方法M)。
步骤5：(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物32)
向N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(55mg，0.09973mmol)于DCM(1000μL)中的溶液中加入TFA(750μL，9.735mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物蒸发，并且在15.0分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到呈黄色固体的(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体1)(23.0mg，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68(s,1H),7.56(s,1H),5.75(s,2H),3.83(q,J＝7.8Hz,1H),3.51(q,J＝8.2Hz,2H),2.35-2.21(m,2H),2.12(dq,J＝11.6,6.0Hz,1H),2.00(q,J＝7.9Hz,1H),1.96-1.88(m,2H),1.84-1.72(m,1H),1.69-1.50(m,3H),1.48-1.36(m,1H),1.16(ddd,J＝13.0,10.0,6.1Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.2(M+1)+；保留时间：2.05分钟(LC方法A)。
步骤6：(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物33)
向N-[(11R)-6-羟基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-19-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(55mg，0.09973mmol)于DCM(1000μL)中的溶液中加入TFA(750μL，9.735mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物蒸发，并且在15.0分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到呈黄色固体的(11R)-19-氨基-6,17-双(三氟甲基)-21-氧杂-3,4,15,20-四氮杂四环[14.3.1.12,5.011,15]二十一-1(20),2,4,16,18-五烯-6-醇(对映异构体2)(23.8mg，52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),7.62(d,J＝10.0Hz,1H),5.59(s,2H),3.97(q,J＝8.1Hz,1H),3.54(d,J＝8.2Hz,2H),2.41–2.32(m,1H),2.15(dt,J＝11.8,5.9Hz,1H),2.04(d,J＝10.8Hz,1H),1.97–1.90(m,1H),1.90–1.74(m,2H),1.74–1.48(m,4H),1.39(dd,J＝18.2,11.8Hz,1H),1.11(td,J＝11.3,7.0Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值451.1443，实测值452.2(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法A)。
实例20：17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物34)和17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物35)的制备
步骤1：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
在250-mL密封容器中，将N-(2-甲氧基乙基)丁-3-烯-1-胺(180mg，1.393mmol)、DIEA(1000μL，5.741mmol)和N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(600mg，0.7984mmol)合并于乙腈(15mL)中，并且将混合物在80℃下加热36小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色泡沫的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(269mg，42％)。ESI-MS m/z计算值799.33795，实测值800.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法M)。
步骤2：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(241mg，0.3013mmol)于THF(2.5mL)中的溶液中加入MeOH(2.5mL)和水(2mL)，随后加入氢氧化锂(26mg，1.086mmol)。将混合物在60℃下搅拌7小时。在减压下去除THF和甲醇，加入10％ HCl(10mL)，并且将产物用EtOAc(2X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，产生了呈黄色固体的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(138mg，65％)。ESI-MS m/z计算值699.2855，实测值700.2(M+1)+；保留时间：2.2分钟(LC方法M)。
步骤3：N-[6-苄氧基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在500mL圆底烧瓶中，将N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(2-甲氧基乙基)氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.2573mmol)于DCE(80mL)中的脱气溶液在氮气气氛下在50℃下加热。然后，在10分钟内分两份加入詹氏催化剂1B(35mg，0.04770mmol)。将所得混合物在70℃下加热3小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色残余物的N-[6-苄氧基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(103mg，60％)。ESI-MS m/z计算值671.2542，实测值672.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法M)。
步骤4：N-[6-羟基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-苄氧基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(103mg，0.1534mmol)于AcOH(2.5mL)和乙酸乙酯(2.5mL)中的溶液中加入Pd/C(165mg的10％w/w，0.1550mmol)。将混合物置于Parr振荡器上，并在真空下脱气并填充氮气三次。然后，去除所有氮气，并且将反应器用氢气加压。将混合物在80psi振荡3小时，并且在100psi下振荡另外4小时。将反应器减压，并将反应过滤并在高真空下浓缩并放置30分钟，以得到呈黄色残余物的N-[6-羟基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(64mg，72％)。ESI-MS m/z计算值583.22296，实测值584.2(M+1)+；保留时间：1.39分钟(LC方法J)。
步骤5：17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
向N-[6-羟基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂四环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(64mg，0.1097mmol)于DCM(1.0mL)中的溶液中加入TFA(750μL，9.735mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物蒸发，并且通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(50mg，94％)。ESI-MS m/z计算值483.1705，实测值484.2(M+1)+；保留时间：1.35分钟(LC方法A)。
步骤6：17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物34)和17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物35)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用14％ MeOH(+20mM NH3)/86％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对外消旋17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(49mg，0.1014mmol)进行纯化，得到两种单一对映异构体产物：
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第一对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(13.4mg，54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(s,1H),7.57(s,1H),6.33(s,2H),3.51(d,J＝6.3Hz,2H),3.30(s,1H),3.29-3.23(m,3H),3.22(s,3H),2.14(t,J＝7.1Hz,2H),1.89(dq,J＝17.4,5.5,4.9Hz,1H),1.66-1.50(m,4H),1.42(ddd,J＝28.9,14.6,7.3Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值483.1705，实测值484.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法A)。
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第二对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-甲氧基乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(13.8mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(s,1H),7.57(s,1H),6.31(s,2H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),3.35-3.29(m,1H),3.29-3.23(m,3H),3.22(s,3H),2.14(t,J＝7.2Hz,2H),1.93-1.84(m,1H),1.67-1.50(m,4H),1.50-1.35(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值483.1705，实测值484.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法A)。
实例21：(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-酮(化合物36)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-酮(化合物36)
将N-[(12R)-6-氧代-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(8mg，0.01615mmol)的溶液溶解于二氯甲烷(137μL)中并且加入TFA(62.09μL，0.8059mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将反应浓缩，溶解于二氯甲烷中，并且用饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机层浓缩，以得到呈橙色固体的(12R)-20-氨基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-酮(3mg，47％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.49(s,1H),4.00(q,J＝8.3Hz,1H),3.66(q,J＝8.5Hz,1H),3.48(s,1H),3.28(td,J＝11.6,2.5Hz,1H),2.72(d,J＝11.9Hz,1H),2.64(dt,J＝11.9,5.9Hz,1H),2.30-2.00(m,4H),1.96-1.67(m,6H),1.01(d,J＝11.7Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值395.15692，实测值396.1(M+1)+；保留时间：1.67分钟(LC方法A)。两个可交换NH2质子在1HNMR中未被观察到。
实例22：5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体1)(化合物37)和5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体2)(化合物38)的制备
步骤1：N-[2-[5-[1-苄氧基-5-羟基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(330mg，0.5066mmol)于THF(2.533mL)中的溶液中逐滴加入硼烷二甲基硫醚络合物(380μL的2M，0.76mmol)，并且使混合物在0℃下搅拌15分钟。使反应温热至室温并搅拌1小时。在用NaOH(1.35mL的2M，2.7mmol)淬灭之前，将反应冷却至0℃，随后加入过氧化氢(300μL，9.79mmol)。在用乙酸乙酯(2X 20mL)萃取之前，使混合物在室温下搅拌30分钟。将有机层合并，用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷对滤液进行纯化，以得到呈无色半固体的N-[2-[5-[1-苄氧基-5-羟基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，59％)。ESI-MS m/z计算值668.1069，实测值670.4(M+1)+；保留时间：0.6分钟(LC方法T)。
步骤2：N-[2-[5-[1-苄氧基-5-氧代-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[1-苄氧基-5-羟基-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(135mg，0.2017mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(102.6mg，0.2419mmol)。反应在15分钟后完成。将反应用饱和NaHCO3水溶液淬灭。用二氯甲烷(2X 25mL)萃取，然后将有机层合并并且用盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在10分钟内通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对滤液进行纯化，以得到呈白色固体的N-[2-[5-[1-苄氧基-5-氧代-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，74％)。ESI-MS m/z计算值666.09125，实测值667.3(M+1)+；保留时间：0.66分钟(LC方法T)。
步骤3：5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸
向N-[2-[5-[1-苄氧基-5-氧代-1-(三氟甲基)戊基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(450mg，0.6743mmol)和2-甲基-2-丁烯(1.389mL，13.11mmol)于叔丁醇(5.44mL)中的溶液中加入亚氯酸钠(126.3mg，1.396mmol)和一水合磷酸一钠(651.7mg，4.723mmol)于水(5.44mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物在减压下部分浓缩。加入水(20mL)，并且将水层用1N HCl酸化，直至pH为约1-2，并且用二氯甲烷(2X 50mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈粗制白色固体的5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸(455mg，99％)。ESI-MS m/z计算值682.0862，实测值683.2(M+1)+；保留时间：0.57分钟。此材料被直接用于随后步骤，而无需进一步纯化(LC方法T)。
步骤4：5-苄氧基-5-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-哌嗪-1-基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸
在微波密封小瓶中，将5-苄氧基-5-[5-[6-溴-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸(160mg，0.2341mmol)、二异丙基乙胺(244.7μL，1.405mmol)和哌嗪(100.8mg，1.17mmol)加入到乙腈(1mL)中，并且将混合物在90℃下加热9小时。将反应用水稀释，并用乙酸乙酯(3X 15mL)萃取。将有机层合并，并且用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩成黄色固体的5-苄氧基-5-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-哌嗪-1-基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸(150mg，93％)。ESI-MS m/z计算值688.2444，实测值689.3(M+1)+；保留时间：0.69分钟。此材料被直接用于随后步骤，而无需进一步纯化(LC方法S)。
步骤5：N-[11-(苄氧基)-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯
向5-苄氧基-5-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-哌嗪-1-基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6,6,6-三氟-己酸(125mg，0.1815mmol)于DMF(12.5mL)中的溶液中加入DIEA(158.1μL，0.9077mmol)，随后加入HATU(151.8mg，0.3992mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5分钟。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色固体的N-[11-(苄氧基)-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯(115mg，80％)。ESI-MS m/z计算值670.2338，实测值671.2(M+1)+；保留时间：0.9分钟(LC方法S)。
步骤6：N-[11-羟基-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[11-(苄氧基)-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯(115mg，0.1458mmol)于乙酸(2.639mL)中的吹氮溶液中加入Pd/C(53.11mg的10％w/w，0.04991mmol)。将混合物抽空，然后在氢气氛下使用氢填充气球在室温下搅拌20小时。将溶液经二氧化硅塞过滤，用乙酸乙酯充分洗涤，并且然后将滤液在减压下浓缩。通过制备型反相HPLC使用C18柱和30％至99％乙腈/水梯度对残余物进行纯化。将所需部分合并以得到米白色固体的N-[11-羟基-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯(25mg，30％)。ESI-MS m/z计算值580.1869，实测值581.4(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法S)。
步骤7：5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体1)(化合物37和5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体2)(化合物38)
向N-[11-羟基-15-氧代-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-5-基]氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.03445mmol)溶解于二氯甲烷(342.4μL)中，并且向混合物加入TFA(132.4μL，1.719mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应在真空中浓缩，然后放入二氯甲烷中，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层在真空中浓缩，以得到浅黄色固体，使用ChiralPak OD柱(250X 10mm，5μm粒度)使用18％甲醇(20mM NH3)/CO2移动相(流速＝10毫升/分钟，柱温＝35℃)在5分钟内使所述浅黄色固体经受手性SFC。这些条件产生了如下所述的2种对映异构体产物：
峰1被浓缩，以得到呈浅黄色固体的5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体1)(2.9mg，35％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),5.65(s,2H),4.15(dq,J＝14.8,7.2Hz,1H),3.73(dd,J＝10.7,5.4Hz,1H),3.48(ddd,J＝16.9,10.5,6.5Hz,2H),3.32(tq,J＝13.1,6.7,5.8Hz,4H),3.03(dq,J＝12.8,5.7Hz,1H),2.65-2.46(m,3H),2.28(t,J＝7.8Hz,1H),1.94-1.81(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值480.13446，实测值481.2(M+1)+；保留时间：1.34分钟(LC方法A)。
峰2被浓缩，以得到呈浅黄色固体的5-氨基-11-羟基-3,11-双(三氟甲基)-21-氧杂-1,8,9,16,22-五氮杂四环[14.2.2.12,6.17,10]二十二碳-2,4,6(22),7,9-五烯-15-酮(对映异构体2)(2.9mg，35％)；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),5.61(d,J＝39.0Hz,2H),4.14(dt,J＝13.6,7.1Hz,1H),3.74(q,J＝5.2Hz,1H),3.52-3.25(m,6H),3.02(dt,J＝12.8,6.0Hz,1H),2.64-2.47(m,3H),2.34-2.24(m,1H),2.00-1.86(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值480.13446，实测值481.2(M+1)+；保留时间：1.34分钟(LC方法A)。
实例23：17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物39)和17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物40)的制备
步骤1：3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯
将N-甲基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(370mg，3.043mmol)、DIEA(1.5mL，8.612mmol)和3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(860mg，1.688mmol)合并于乙腈(12mL)中，并且将混合物在70℃下加热20小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在减压下去除。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，并且用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色残余物的3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(820mg，95％)。ESI-MS m/z计算值513.2145，实测值514.2(M+1)+；保留时间：1.89分钟(LC方法A)。
步骤2：6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸
向3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸甲酯(810mg，1.577mmol)于THF(8.5mL)中的溶液中加入甲醇(7.5mL)和水(6.5mL)，随后加入无水氢氧化锂(150mg，6.138mmol)。将混合物搅拌并且在65℃下加热3小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入10mL的10％ HCl水溶液，并且将产物用EtOAc(2X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，得到呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸(485mg，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.82(s,1H),10.08(s,1H),9.06(s,1H),5.78(ddt,J＝17.0,10.2,6.8Hz,1H),5.05(dq,J＝17.2,1.7Hz,1H),4.97(ddt,J＝10.2,2.4,1.2Hz,1H),3.39(s,3H),3.21(t,J＝7.5Hz,2H),2.81(s,3H),2.30(q,J＝7.0Hz,2H),1.49(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值399.1464，实测值400.2(M+1)+；保留时间：1.72分钟(LC方法A)。
步骤3：N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-甲磺酰-吡啶-2-甲酸(480mg，1.202mmol)于NMP(7mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(380.9mg，1.260mmol)和DIEA(850μL，4.880mmol)，随后加入HATU(565mg，1.486mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(720mg，88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),10.66(s,1H),10.33(s,1H),9.27(s,1H),7.52-7.49(m,2H),7.41-7.37(m,2H),7.35-7.31(m,1H),5.82-5.74(m,1H),5.15-5.04(m,2H),5.04-4.98(m,2H),4.97(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),4.85(d,J＝7.2Hz,2H),3.41(s,3H),3.27(t,J＝7.6Hz,2H),2.84(s,3H),2.34-2.27(m,4H),2.19(d,J＝9.6Hz,2H),1.49(s,9H)ppm。ESI-MSm/z计算值683.2601，实测值684.2(M+1)+；保留时间：1.91分钟(LC方法J)。
步骤4：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(720mg，1.053mmol)和DIEA(750μL，4.306mmol)于乙腈(20mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(320mg，1.678mmol)一份加入。将所得混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并搅拌15分钟。然后将混合物用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(640mg，91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.80(s,1H),9.10(s,1H),7.44(d,J＝6.7Hz,2H),7.39-7.30(m,3H),5.91-5.72(m,2H),5.10(dd,J＝17.1,1.8Hz,1H),5.07-4.98(m,2H),4.96(dd,J＝10.2,2.0Hz,1H),4.74(d,J＝11.0Hz,1H),4.66(d,J＝10.9Hz,1H),3.42(s,3H),3.29(d,J＝7.7Hz,2H),2.90(s,3H),2.48-2.36(m,2H),2.33(t,J＝8.6Hz,4H),1.50(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值665.2495，实测值666.2(M+1)+；保留时间：2.22分钟(LC方法J)。
步骤5：N-[6-苄氧基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在500mL圆底烧瓶中，将N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-5-甲磺酰-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，0.9013mmol)于DCE(225mL)中的脱气溶液在氮气气氛下在50℃下加热。然后，在10分钟内将詹氏催化剂1B(212mg，0.2889mmol)分两份加入。将所得混合物在70℃下加热4小时。加入更多詹氏催化剂1B(106mg，0.144mmol)，并且将混合物在70℃下另外加热10小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的N-[6-苄氧基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(235mg，41％)。ESI-MS m/z计算值637.2182，实测值638.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法J)。
步骤6：N-[6-羟基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-苄氧基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(235mg，0.3685mmol)于AcOH(5.0mL)和乙酸乙酯(5mL)中的溶液用氮气吹扫。然后，加入Pd/C(355mg的10％w/w，0.3336mmol)并且将混合物用氮气脱气5分钟，接着用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm下搅拌5小时，然后过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至55％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[6-羟基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(145mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H),8.81(s,1H),7.67(s,1H),3.38(s,3H),3.31-3.24(m,1H),3.17(s,3H),2.15(d,J＝9.2Hz,2H),1.92(dd,J＝11.8,6.5Hz,1H),1.70(t,J＝6.1Hz,1H),1.59(s,2H),1.48(s,9H),1.40(s,1H),1.29-1.23(m,2H),0.85(dt,J＝10.9,6.6Hz,2H)ppm。ESI-MSm/z计算值549.1869，实测值550.1(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法A)。
步骤7：17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
向N-[6-羟基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.2547mmol)于DCM(2.5mL)中的溶液中加入TFA(2.0mL，25.96mmol)并且将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物蒸发至干燥，然后用乙醚稀释并浓缩。通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(85mg，74％)。ESI-MS m/z计算值449.13446，实测值450.2(M+1)+；保留时间：1.62分钟(LC方法A)。
步骤8：17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物39)和17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物40)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用25％ MeOH(+20mM NH3)/75％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)在6分钟内对外消旋17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(90mg，0.2002mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第一对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(38.8mg，85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(s,1H),7.60(s,1H),6.56(s,2H),3.33(s,3H),3.17(t,J＝7.8Hz,2H),2.93(s,3H),2.12(d,J＝7.7Hz,2H),1.94(tt,J＝16.5,8.5Hz,1H),1.70-1.62(m,1H),1.62-1.55(m,2H),1.55-1.44(m,2H),1.40(dd,J＝15.3,7.0Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值449.13446，实测值450.2(M+1)+；保留时间：1.61分钟(LC方法A)。
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第二对映异构体进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-15-甲磺酰-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(38.6mg，85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97(s,1H),7.60(s,1H),6.56(s,2H),3.33(s,3H),3.17(t,J＝7.8Hz,2H),2.93(s,3H),2.12(d,J＝7.5Hz,2H),1.95(td,J＝13.1,7.4Hz,1H),1.72-1.64(m,1H),1.64-1.56(m,2H),1.56-1.44(m,2H),1.44-1.34(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值449.13446，实测值450.2(M+1)+；保留时间：1.61分钟(LC方法A)。
实例24：17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物41)和17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物42)的制备
步骤1：N-(2-苄氧基乙基)丁-3-烯-1-胺
在500mL密封容器中将4-碘丁-1-烯(12.5g，68.68mmol)、2-苄氧基乙胺(12.5g，82.67mmol)和DIEA(42mL，241.1mmol)于乙腈(180mL)中的混合物在50℃下加热90小时。然后将混合物在水浴中不使用热量通过旋转蒸发浓缩成残余物，并且通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，得到呈淡琥珀色油的N-(2-苄氧基乙基)丁-3-烯-1-胺(6.69g，47％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.39-7.24(m,5H),5.79(ddt,J＝17.1,10.2,6.7Hz,1H),5.04(dq,J＝17.2,1.7Hz,1H),4.99(ddt,J＝10.2,2.4,1.2Hz,1H),4.47(s,2H),3.49(t,J＝5.6Hz,2H),2.74(d,J＝5.6Hz,2H),2.71(d,J＝7.1Hz,1H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),2.17(qt,J＝7.0,1.4Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值205.14667，实测值206.2(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法A)。
步骤2：6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向N-(2-苄氧基乙基)丁-3-烯-1-胺(3.1g，15.10mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(2.11g，7.415mmol)于乙腈(41.0mL)中的溶液中加入DIEA(6.5mL，37.32mmol)，并且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且通过硅胶色谱法(120克柱)使用两个柱中100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化两次，以得到呈黄色残余物的6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.23g，96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),7.32-7.19(m,3H),7.19-7.11(m,2H),5.72(ddt,J＝17.1,10.2,6.8Hz,1H),5.08-4.96(m,2H),4.42(s,2H),3.93(s,3H),3.84(t,J＝5.2Hz,2H),3.72(t,J＝7.1Hz,2H),3.66(t,J＝5.2Hz,2H),2.37(q,J＝7.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值453.15115，实测值454.2(M+1)+；保留时间：2.15分钟(LC方法A)。
步骤3：6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.23g，7.124mmol)于THF(38mL)中的溶液中加入MeOH(38mL)和水(30mL)，随后加入氢氧化锂(737.8mg，30.81mmol)。将混合物搅拌并且在60℃下加热2小时。在减压下去除THF和甲醇，并且加入10mL的10％ HCl水溶液以酸化至pH约4，并且将混合物用EtOAc(2X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)(用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2.71g，87％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.27(s,1H),8.58(s,1H),7.28(dd,J＝8.0,6.1Hz,2H),7.25-7.19(m,1H),7.19-7.13(m,2H),5.72(ddt,J＝17.1,10.2,6.7Hz,1H),5.15-4.96(m,2H),4.42(s,2H),3.83(t,J＝5.2Hz,2H),3.71(t,J＝7.2Hz,2H),3.66(t,J＝5.2Hz,2H),2.37(q,J＝7.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1355，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法A)。
步骤4：6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.6g，3.641mmol)于NMP(28mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(1.98g，6.550mmol)和DIEA(3mL，17.22mmol)，随后加入HATU(2.9g，7.627mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.0g，38％)。ESI-MS m/z计算值723.24915，实测值724.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法J)。
步骤5：N-(2-苄氧基乙基)-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将6-[2-苄氧基乙基(丁-3-烯基)氨基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(833mg，1.151mmol)和DIEA(1000μL，5.741mmol)于乙腈(25mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(350mg，1.836mmol)一份加入。将所得混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并搅拌15分钟。将混合物用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的N-(2-苄氧基乙基)-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(650mg，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),7.40-7.27(m,5H),7.27-7.16(m,3H),7.17-7.09(m,2H),5.84(ddt,J＝16.8,10.2,6.5Hz,1H),5.71(ddt,J＝17.1,10.2,6.8Hz,1H),5.10(dq,J＝17.2,1.6Hz,1H),5.05-4.94(m,3H),4.76(d,J＝10.9Hz,1H),4.61(d,J＝10.8Hz,1H),4.40(s,2H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.76-3.61(m,4H),2.60-2.51(m,2H),2.38(q,J＝7.2Hz,2H),2.31-2.18(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值705.2386，实测值706.2(M+1)+；保留时间：1.79分钟(LC方法M)。
步骤6：6-苄氧基-13-(2-苄氧基乙基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
在500mL圆底3颈烧瓶中，将DCE(290mL)中的经由詹氏催化剂1B(165mg，0.2249mmol)的氮气线持续脱气的溶液在50℃下加热，并且通过注射器逐滴加入N-(2-苄氧基乙基)-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(640mg，0.9070mmol)于DCE(40mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-苄氧基-13-(2-苄氧基乙基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(360mg，59％)。ESI-MS m/z计算值677.2073，实测值678.2(M+1)+；保留时间：1.53分钟(LC方法M)。
步骤7：17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将6-苄氧基-13-(2-苄氧基乙基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(355mg，0.5239mmol)于AcOH(5.5mL)和乙酸乙酯(5.5mL)中的溶液用氮气吹扫，并且加入Pd/C(85mg的10％w/w，0.07987mmol)。将混合物用氮气脱气5分钟，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm下搅拌1小时。加入更多Pd/C(475mg的10％w/w，0.4453mmol)并搅拌另外3小时。将反应通过硅藻土塞过滤，并用乙腈和乙酸乙酯洗涤，并且然后将滤液浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(166mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.56(d,J＝48.2Hz,1H),4.11(d,J＝13.4Hz,2H),3.58(t,J＝6.8Hz,2H),3.54-3.31(m,1H),3.26(t,J＝7.8Hz,2H),3.17(dq,J＝14.3,6.8Hz,2H),2.14(t,J＝7.2Hz,2H),1.94-1.85(m,1H),1.70-1.50(m,4H),1.50-1.34(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.15485，实测值470.1(M+1)+；保留时间：1.58分钟(LC方法A)。
步骤8：17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物41)和17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物42)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用18％ MeOH(+20mM NH3)/82％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对外消旋17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(165mg，0.3515mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第一对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(53.7mg，64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.57(s,1H),6.29(s,2H),3.58(t,J＝6.7Hz,3H),3.31-3.13(m,4H),2.14(t,J＝7.6Hz,2H),1.90(h,J＝6.9,4.2Hz,1H),1.72-1.51(m,4H),1.51-1.34(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.15485，实测值470.2(M+1)+；保留时间：1.58分钟(LC方法A)。
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第二对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-(2-羟乙基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(51.4mg，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.57(s,1H),6.33(s,2H),3.58(t,J＝6.7Hz,3H),3.29-3.14(m,4H),2.13(d,J＝7.4Hz,2H),1.95-1.84(m,1H),1.69-1.49(m,4H),1.48-1.27(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.15485，实测值470.2(M+1)+；保留时间：1.58分钟(LC方法A)。
步骤9：结晶化合物41形态A的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤8产生的结晶化合物41形态A的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得。结晶化合物41形态A的XRPD衍射图提供于图7，并且下表4中总结了XRPD数据。
表4：结晶化合物41形态A的XRPD信号
XRPD峰编号 角度(°2θ±0.2) 强度％
1 14.1607 100
2 16.5689 27.78
3 18.0078 52.19
4 19.5231 79.81
5 20.2639 25.32
6 20.6598 26.89
7 21.2483 67.04
8 22.1718 16.32
9 25.1431 10.6
B.热重分析(TGA)
结晶化合物41形态A的TGA曲线提供于图8。TGA曲线示出了约30-181.8℃以10.00℃/分钟斜升至350.00℃的3.89％质量损失。
实例25：17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物43)和17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物44)的制备
步骤1：N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.3327mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中加入N,N′-二甲基乙烷-1,2-二胺(360μL，3.381mmol)，并且将反应混合物在100℃下搅拌2小时。然后，将反应冷却至室温，并且在15.0分钟内通过反相C18柱(使用10％至99％移动相B的双梯度运行)(移动相A＝H2O(5mM HCl)，移动相B＝CH3CN)进行纯化，以得到N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(174mg，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.67(s,1H),8.90(s,1H),8.75(s,1H),7.44-7.32(m,5H),5.87(ddt,J＝16.9,10.2,6.5Hz,1H),5.11(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.01(dd,J＝10.3,1.7Hz,1H),4.77(d,J＝11.2Hz,1H),4.66(d,J＝11.0Hz,1H),3.59(t,J＝6.9Hz,2H),3.52(t,J＝7.0Hz,2H),3.14(t,J＝6.2Hz,2H),2.96(s,3H),2.50(d,J＝2.0Hz,3H),2.31(dq,J＝11.0,5.8Hz,2H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值658.2702，实测值659.5(M+1)+；保留时间：0.54分钟(LC方法R)。
步骤2：4-苄氧基-4-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊酸
在0℃下向N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.1518mmol)于二噁烷(3mL)和水(1mL)的3:1混合物中的溶液中加入四氧化锇(2-甲基-2-丙醇中的50μL的2.5％，0.03737mmol)和高碘酸钠(106mg，0.4956mmol)。将反应在25℃下搅拌过夜。加入水(25mL)，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法使用100％己烷至100％ EtOAc平缓梯度对将所得棕色残余物进行纯化，以得到4-苄氧基-4-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊酸(62mg，60％)。ESI-MSm/z计算值676.2444，实测值677.3(M+1)+；保留时间：0.44分钟(LC方法R)。
步骤3：N-[6-苄氧基-10,13-二甲基-9-氧代-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
向4-苄氧基-4-[5-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-[甲基-[2-(甲基氨基)乙基]氨基]-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊酸(62mg，0.09163mmol)于DMF(10mL)中的溶液中加入DIEA(60μL，0.3445mmol)，随后加入HATU(65mg，0.1709mmol)。将反应混合物在室温下搅拌，并且在3小时后，所有起始材料消失。将混合物用水稀释，并用乙酸乙酯(3X)萃取。将有机相合并，并且经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过在15.0分钟内使用30％至99％移动相B的双梯度运行的反相HPLC-MS方法(移动相A＝H2O(5mM HCl)，移动相B＝CH3CN)对所得棕色残余物进行纯化，以得到呈棕色油的N-[6-苄氧基-10,13-二甲基-9-氧代-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(42mg，70％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(s,1H),8.51(d,J＝16.1Hz,1H),7.42-7.27(m,5H),4.73(d,J＝11.2Hz,1H),4.57-4.53(m,1H),4.14(s,1H),4.02(d,J＝13.9Hz,1H),3.81(s,1H),3.69(s,1H),3.14(d,J＝2.2Hz,2H),3.03(d,J＝40.3Hz,3H),2.92-2.78(m,2H),2.69-2.58(m,3H),1.51-1.39(m,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值658.2338，实测值659.2(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法R)。
步骤4：17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮
向N-[6-苄氧基-10,13-二甲基-9-氧代-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.06074mmol)于EtOH(5mL)中的溶液中加入Pd/C(35mg的10％w/w，0.03289mmol)并且配备有3向旋塞阀和氢气球。将反应混合物经受真空并用氮气回填三次，然后经受真空。将烧瓶用来自气球的氢气填充，并将混合物搅拌15小时。使混合物经受真空并用氮气回填三次，然后用乙酸乙酯稀释，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩并且在真空下干燥，以得到呈棕色油的30mg的N-[6-羟基-10,13-二甲基-9-氧代-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯。将此材料溶解于TFA(100μL，1.298mmol)和二氯甲烷(400μL)的预制溶液的1:4混合物中，并且在室温下搅拌1小时。将溶剂去除并且在真空下干燥，以得到呈棕色油的17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(25mg，88％)。ESI-MS m/z计算值468.13446，实测值469.0(M+1)+；保留时间：0.58分钟(LC方法S)。
步骤5：17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物43)和17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物44)
通过手性SFC使用ChiralCel OJ-3柱(250X 10mm，5μm粒度)使用12％甲醇/CO2移动相(流速＝10毫升/分钟，柱温＝35℃)在5分钟内对17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮的外消旋混合物(20mg，0.0427mmol)(MeOH中的约23mg/mL)进行纯化。这些条件产生了如下所述的2种对映异构体产物：
峰1被浓缩，以得到呈粘性棕色油的17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体1)(盐酸盐)(1.8mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.74-7.66(m,1H),6.43(s,1H),6.17(s,1H),6.07(s,1H),4.01(ddd,J＝13.5,10.0,4.3Hz,2H),3.73(t,J＝4.4Hz,2H),2.98(s,3H),2.78(d,J＝4.1Hz,2H),2.64(s,3H),2.59(d,J＝6.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值468.13446，实测值469.09(M+1)+；保留时间：1.5分钟(LC方法A)。
峰2被浓缩，以得到呈粘性棕色油的17-氨基-6-羟基-10,13-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,10,13,18-五氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-酮(对映异构体2)(盐酸盐)(2.3mg，21％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(d,J＝2.7Hz,1H),6.43(s,1H),6.17(s,1H),6.07(s,1H),4.02(dq,J＝10.1,6.1,5.4Hz,2H),3.71(d,J＝10.2Hz,2H),2.98(s,3H),2.80(d,J＝8.0Hz,2H),2.63(d,J＝6.9Hz,3H),2.58(d,J＝9.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值468.13446，实测值469.2(M+1)+；保留时间：1.5分钟(LC方法A)。
实例26：(12R)-20-氨基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物45)的制备
步骤1：N-[(12R)-6-羟基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[(12R)-6-氧代-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.06055mmol)于THF(605.4μL)中的溶液冷却至-78℃，然后在氮气气氛下逐滴加入MeMgCl(60.53μL的3M，0.1816mmol)，并且搅拌所得混合物30分钟。将反应用1M HCl淬灭，并且然后用乙酸乙酯(2X 30mL)萃取。将有机层合并，并且用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(20mg，65％)。ESI-MS m/z计算值511.24063，实测值512.2(M+1)+；保留时间：0.82分钟(LC方法R)。
步骤2：(12R)-20-氨基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物45)
向N-[(12R)-6-羟基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.0391mmol)于DCM(342.4μL)中的溶液中加入TFA(150.3μL，1.951mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应浓缩，然后溶于DCM中，用饱和NaHCO3溶液洗涤，并且将有机层浓缩，以得到呈黄色固体。在5分钟内将此固体通过正常相SFC方法使用ChiralPak IG柱(250X 10mm，5μm粒度)(使用40％甲醇(+20mM NH3)/CO2移动相)(流速＝10毫升/分钟，柱温＝35℃)进行纯化，得到呈黄色固体并且待洗脱的第二对映异构体的(12R)-20-氨基-6-甲基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(1.6mg，10％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.47(s,1H),4.06(q,J＝8.6Hz,1H),3.68(d,J＝8.9Hz,1H),3.44(t,J＝9.2Hz,1H),2.64-2.50(m,1H),2.23(ddd,J＝14.5,10.6,3.5Hz,2H),2.02(s,2H),1.90(ddd,J＝14.4,10.3,6.8Hz,2H),1.81(s,3H),1.73-1.62(m,3H),1.62-1.43(m,4H)ppm。两个可交换NH2质子和一个可交换OH质子在质子NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值411.1882，实测值412.2(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法A)。
实例27：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体1)(化合物46)和2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体2)(化合物47)的制备
步骤1：2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯和2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯
在250-mL密封容器中，将2-(丁-3-烯基氨基)乙酸乙酯(1g，6.361mmol)、DIEA(1.5mL，8.612mmol)和N-[2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(860mg，1.144mmol)合并于乙腈(25mL)中，并且将混合物在90℃下加热48小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯(245mg，26％)。ESI-MS m/z计算值827.3329，实测值828.2(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法M)。
还从硅胶柱中分离单boc产物，2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯(116mg，14％)。ESI-MS m/z计算值727.28046，实测值728.2(M+1)+；保留时间：2.09分钟(LC方法M)。
步骤2：2-[6-苄氧基-17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-13-基]乙酸乙酯(E/Z混合物)
在500mL圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下将DCE(250mL)中的经由詹氏催化剂1B(110mg，0.1499mmol)的氮气线持续脱气的溶液加热至50℃。然后通过注射器逐滴加入2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯(355mg，0.4288mmol)和2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-丁-3-烯基-氨基]乙酸乙酯(156mg，0.2144mmol)于DCE(30mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热2小时。然后将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，得到2-[6-苄氧基-17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-13-基]乙酸乙酯(E/Z混合物)(314mg，92％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.39-7.25(m,5H),5.61(q,J＝8.1Hz,1H),5.41(q,J＝8.5Hz,1H),4.76(d,J＝11.2Hz,1H),4.69(d,J＝11.2Hz,1H),4.41(s,2H),4.13(q,J＝7.1Hz,2H),3.60(d,J＝11.8Hz,1H),3.49(t,J＝12.7Hz,1H),2.71-2.52(m,3H),2.43-2.34(m,1H),2.33-2.23(m,1H),1.33(s,9H),1.28(s,9H),1.26-1.21(m,1H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值799.3016，实测值800.2(M+1)+；保留时间：1.69分钟(LC方法M)。
步骤3：2-[17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯
将2-[6-苄氧基-17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-13-基]乙酸乙酯(E/Z混合物)(310mg，0.3876mmol)于AcOH(5mL)和乙酸乙酯(5mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(64mg的10％w/w，0.06014mmol)。将混合物用氮气脱气5分钟，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌1小时。加入更多Pd/C(350mg的10％w/w，0.3289mmol)并搅拌另外3小时。将反应物通过硅藻土塞过滤，用乙腈、乙酸乙酯洗涤，并且然后将滤液浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的2-[17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(228mg，83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),7.68(s,1H),4.35(d,J＝2.8Hz,2H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),3.65-3.49(m,2H),2.23-2.08(m,2H),1.85(td,J＝10.2,9.2,4.2Hz,1H),1.73-1.55(m,3H),1.55-1.38(m,4H),1.35(s,9H),1.27(s,9H),1.16(d,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值711.27026，实测值712.2(M+1)+；保留时间：1.16分钟(LC方法M)。
步骤4：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯
向2-[17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(56mg，0.07869mmol)于DCM(1.5mL)中的溶液中加入TFA(250μL，3.245mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物蒸发至干燥，然后用乙醚稀释并浓缩。通过硅胶色谱法(4克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(26.8mg，67％)ppm。ESI-MS m/z计算值511.16544，实测值512.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
步骤5：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体1)(化合物46)和2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体2)(化合物47)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用14％ MeOH(+20mM NH3)/86％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对外消旋2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(26.8mg，0.05240mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第一对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体1)(11.4mg，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(s,1H),7.59(s,1H),6.30(s,2H),4.13-4.03(m,4H),3.42-3.32(m,2H),2.14(t,J＝7.3Hz,2H),1.91(dt,J＝12.8,6.1Hz,1H),1.59(ddd,J＝25.0,17.2,9.1Hz,4H),1.47(q,J＝7.6,6.1Hz,1H),1.36(q,J＝8.2,7.0Hz,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值511.16544，实测值512.1(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
在15分钟内通过反相制备型HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第二对映异构体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(对映异构体2)(11.1mg，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.70(s,1H),7.59(s,1H),6.30(s,2H),4.13-4.03(m,4H),3.44-3.32(m,2H),2.14(t,J＝7.4Hz,2H),1.98-1.86(m,1H),1.59(tt,J＝16.8,8.1Hz,4H),1.50-1.43(m,1H),1.43-1.32(m,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值511.16544，实测值512.1(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
实例28：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体1)(化合物48)和2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体2)(化合物49)的制备
步骤1：2-[17-(叔丁氧基羰基氨基)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-13-基]乙酸
向2-[17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]乙酸乙酯(72mg，0.1012mmol)于THF(900μL)中的溶液中加入甲醇(900μL)和水(630μL)，随后加入氢氧化锂(11.3mg，0.4719mmol)。将混合物搅拌并且在65℃下加热4小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入10mL的HCl水溶液(10％)以酸化至pH约4，并且将产物用乙酸乙酯(2X 5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(1mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(4克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到残余物，将所述残余物在真空下放置2小时，以得到呈黄色固体的2-[17-(叔丁氧基羰基氨基)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-13-基]乙酸(51mg，86％)。ESI-MS m/z计算值583.1865，实测值584.2(M+1)+；保留时间：1.41分钟(LC方法J)。
步骤2：N-[6-羟基-13-[2-(甲基氨基)-2-氧代-乙基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
在室温下向2-[17-(叔丁氧基羰基氨基)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-13-基]乙酸(51mg，0.08741mmol)于NMP(1mL)中的溶液中加入甲胺(盐酸盐)(15mg，0.2222mmol)和DIEA(125μL，0.7176mmol)，随后加入HATU(42mg，0.1105mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将有机材料用乙酸乙酯(3X 5mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥并蒸发。然后通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化(化合物以60％乙酸乙酯洗脱)，以得到黄色残余物，将所述黄色残余物在真空下放置2小时，以得到呈浅黄色固体的N-[6-羟基-13-[2-(甲基氨基)-2-氧代-乙基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(43.7mg，84％)。ESI-MS m/z计算值596.2182，实测值597.2(M+1)+；保留时间：1.31分钟(LC方法M)。
步骤3：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺
向N-[6-羟基-13-[2-(甲基氨基)-2-氧代-乙基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(43mg，0.07208mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中，并且向混合物加入TFA(150μL，1.947mmol)，并且将混合物在室温下搅拌。1小时后，反应完成。将混合物蒸发至干燥，然后用乙醚稀释并重浓缩。通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对粗材料进行纯化(化合物以85％乙酸乙酯洗脱)，以得到黄色残余物，然后将所述黄色残余物在真空下放置2小时，以得到呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(30.6mg，86％)。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.2(M+1)+；保留时间：1.46分钟(LC方法A)。
步骤4：2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体1)(化合物48)和2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体2)(化合物49)
在5分钟内使外消旋2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(30.6mg，0.06164mmol)经受正常相SFC方法使用ChiralPak IG柱(250X 10mm，5μm粒度)(使用22％甲醇(20mM NH3)/CO2移动相)(流速＝5毫升/分钟，柱温＝35℃)洗脱。这些条件产生了如下所述的2种对映异构体产物：
得到待洗脱的第一对映异构体呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体1)(10.3mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(d,J＝4.9Hz,1H),7.70(s,1H),7.59(s,1H),6.33(s,2H),3.78-3.67(m,2H),3.23(ddd,J＝15.2,11.4,3.9Hz,2H),2.62(d,J＝4.5Hz,3H),2.18-2.10(m,2H),1.91(d,J＝13.3Hz,1H),1.58(dq,J＝19.3,10.5,9.3Hz,4H),1.48(d,J＝7.1Hz,1H),1.37(s,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.1(M+1)+；保留时间：1.45分钟(LC方法A)。
得到待洗脱的第二对映异构体呈黄色固体的2-[17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-13-基]-N-甲基-乙酰胺(对映异构体2)(11.2mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(d,J＝4.9Hz,1H),7.70(s,1H),7.60(s,1H),6.33(s,2H),3.78-3.67(m,2H),3.23(ddt,J＝19.5,12.8,5.8Hz,2H),2.62(d,J＝4.5Hz,3H),2.14(q,J＝5.8,4.9Hz,2H),1.90(s,1H),1.58(dq,J＝28.5,11.4,10.0Hz,4H),1.48(d,J＝6.9Hz,1H),1.37(s,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.1(M+1)+；保留时间：1.45分钟(LC方法A)。
实例29：(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物50)和(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物51)的制备
步骤1：5-溴-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯
在0℃下，将三氟乙酸酐(41.869g，28.1mL，199.35mmol)逐滴加入到乙腈(140mL)中的5-溴吡啶-2-甲酸甲酯(21.5g，99.522mmol)和脲过氧化氢(20g，212.61mmol)，同时将温度保持在10℃以下。将混合物温热至室温并搅拌过夜。将混合物倒入0.5N盐酸水溶液(200mL)中，并用DCM(2X 100mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的5-溴-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(26.2g，98％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ8.65(s,1H),7.85-7.69(m,2H),4.00(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值230.9531，实测值232.0(M+1)+；保留时间：1.05分钟(LC方法E)。
步骤2：5-溴-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯
在1小时内在0℃下将三氟乙酸酐(298.00g，200mL，1.4188mol)逐滴加入到5-溴-1-氧负离子基-吡啶-1-鎓-2-甲酸甲酯(40g，151.70mmol)于DMF(240mL)中的混合物中，(温度应保持在10℃以下)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后，将混合物在减压下浓缩以去除过量的三氟乙酸。在30分钟内将残余的DMF溶液逐渐倒入在0℃下冷却的搅拌水(1.5L)中。通过过滤收集固体沉淀，并且然后用水(400mL)洗涤。将固体通过冻干法干燥，以产生白色固体的5-溴-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯(27.2g，77％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.27(br.s.,1H),7.89(d,J＝7.3Hz,1H),6.88(d,J＝7.3Hz,1H),3.99(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值230.9531，实测值232.0(M+1)+；保留时间：1.31分钟(LC方法E)。
步骤3：5-溴-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
向5-溴-6-羟基-吡啶-2-甲酸甲酯(10.9g，46.976mmol)于在冰浴中冷却的硫酸(65mL)中的溶液中逐滴加入硝酸(4.2280g，4mL，46.968mmol)。5分钟后，移除冰浴，并将反应混合物在30℃下搅拌过夜。加入硝酸(528.5mg，0.5mL，5.871mmol)，并将反应混合物在30℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却并加入到冰冷水(500mL)中。通过过滤收集所得沉淀，用另外的水冲洗并干燥，以得到呈黄色固体的5-溴-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(8.15g，58％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.29-9.81(m,1H),8.46(s,1H),4.07(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值275.93817，实测值277.0(M+1)+；保留时间：1.55分钟(LC方法E)。
步骤4：5-溴-6-氯-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
将5-溴-6-羟基-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(7.5g，26.802mmol)和二氯磷酸苯酯(32.476g，23mL，153.93mmol)的混合物在170℃下加热90分钟。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯(350mL)稀释并用盐水(350mL)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(330g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的5-溴-6-氯-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(7g，87％)。ESI-MS m/z计算值293.9043，实测值294.9(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法E)。
步骤5：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
向5-溴-6-氯-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(25g，84.61mmol)和(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(31g，107.37mmol)于乙腈(250mL)中的溶液中加入DIEA(75.684g，102mL，585.59mmol)，并且将混合物回流3小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(500mL)稀释，并用盐水(2X 200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(用0％至35％ EtOAc/己烷梯度洗脱)进行纯化，以得到呈棕色油的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(22.01g，69％)。ESI-MS m/z计算值369.0324，实测值370.0(M+1)+；保留时间：3.9分钟(LC方法G)。
步骤6：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(1.4g，3.5511mmol)于四氢呋喃(7mL)中的溶液中加入LiOH(400mg，9.5321mmol)于水(7mL)中的溶液。将所得混合物在50℃下搅拌4小时。将溶剂蒸发，然后用H2O(50mL)稀释并用1N HCl(pH3)酸化。将混合物用EtOAc(3X 50mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以产生呈黄色油的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸(1.34g，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.47(s,1H),6.69-6.39(m,1H),5.88-5.66(m,1H),5.20-5.02(m,2H),4.78-4.62(m,1H),4.09-3.98(m,1H),3.93-3.81(m,1H),2.65-2.52(m,1H),2.33-2.18(m,1H),2.14-2.05(m,2H),1.95-1.82(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值355.01675，实测值356.0(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法E)。
步骤7：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼
在室温下向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-甲酸(5.41g，14.232mmol)于CH2Cl2(90mL)中的溶液中加入草酰氯(2.5463g，1.75mL，20.061mmol)，随后逐滴加入DMF(1.3g，1.3771mL，17.785mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，并且在15分钟内逐滴加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(5.82g，17.181mmol)和DIPEA(2.8938g，3.9mL，22.390mmol)于CH2Cl2(60mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌20分钟，并且加入更多DIPEA(222.60mg，0.3mL，1.7223mmol)。将混合物在室温下搅拌10分钟，冷却至0℃，并且加入5％ NaHCO3水溶液(200mL)。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2X 100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至30％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(8.56g，94％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.28(d,J＝6.2Hz,1H),9.03(t,J＝6.5Hz,1H),8.26(d,J＝1.2Hz,1H),7.59-7.28(m,5H),5.92-5.63(m,2H),5.19-4.94(m,4H),4.89-4.77(m,1H),4.75-4.68(m,1H),4.66-4.51(m,1H),4.09-3.93(m,1H),3.85-3.71(m,1H),2.62-2.35(m,2H),2.32-1.95(m,6H),1.91-1.73(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.66(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值639.13043，实测值640.2(M+1)+；保留时间：2.34分钟(LC方法E)。
步骤8：2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑
在50℃下向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-5-溴-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(13.3g，20.767mmol)和二异丙基乙胺(8.0136g，10.8mL，62.004mmol)于乙腈(340mL)中的溶液中按份加入对甲苯磺酰氯(4.15g，21.768mmol)。将混合物在70℃下搅拌1.5小时，并且冷却至环境温度并浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(125mL)中，用5％NaHCO3水溶液(25mL)、水(2X 25mL)、盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。将挥发物通过在减压下蒸发去除，并且通过硅胶色谱法(220g柱)使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈红色油的2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑(11.54g，89％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.56(s,1H),7.49-7.27(m,5H),5.91-5.58(m,2H),5.23-4.89(m,4H),4.79(dd,J＝10.6,4.1Hz,1H),4.72-4.54(m,2H),4.13-3.95(m,1H),3.94-3.76(m,1H),2.69-1.62(m,10H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.13(br.s.,3F),-73.26(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值621.1199，实测值622.2(M+1)+；保留时间：2.69分钟(LC方法E)。
步骤9：(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
在1.0L烘干圆底烧瓶中，在氮气气氛下将2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-5-溴-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑(1.9g，2.7259mmol)于二氯乙烷(475mL)中的脱气溶液加热至50℃。然后，在15分钟内将詹氏催化剂1B(300mg，0.4089mmol)分两份加入。将所得混合物在70℃下加热3小时。将混合物冷却，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(1.2g，73％)。ESI-MS m/z计算值593.08856，实测值594.1(M+1)+；保留时间：2.48分钟(LC方法E)。
步骤10：(12S)-6-(苄氧基)-18-甲基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
向(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(100mg，0.1682mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液中加入甲基硼酸(30mg，0.5012mmol)、乙酸钯(II)(5mg，0.0223mmol)、Xantphos(30mg，0.0518mmol)和碳酸钾(70mg，0.5065mmol)，并且将反应混合物用氮气吹扫5分钟。将反应混合物在100℃下搅拌16小时，接着通过硅藻土垫过滤，用EtOAc(3X 10mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩并且通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到呈黄色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-18-甲基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(62mg，70％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.09(s,1H),7.42-7.28(m,5H),5.64-5.43(m,2H),5.24(d,J＝10.9Hz,1H),5.02-4.91(m,1H),4.10-3.96(m,1H),3.95-3.85(m,1H),3.84-3.73(m,1H),3.44-3.25(m,1H),2.52(s,3H),2.45-2.25(m,2H),2.23-2.06(m,4H),1.92-1.73(m,2H),1.54-1.44(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.06(s,3F),-73.53(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值529.19366，实测值530.2(M+1)+；保留时间：2.53分钟(LC方法E)。
步骤11：(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物50)和(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物51)
向(12S)-6-(苄氧基)-18-甲基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(62mg，0.1171mmol)于甲醇(7mL)中的溶液中加入5％钯碳(37mg，0.0174mmol)。将所得混合物用氢气鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气气球下搅拌4小时。加入更多5％钯碳(15mg，0.007mmol)，并且在氢气气氛下将混合物搅拌另外两小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体以及呈非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(8mg，15％)。通过手性SFC使用由手性技术公司(Chiral Technologies)出售并且用15％至35％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的OD-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)在14.5分钟内对此材料进行进一步纯化，产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(3.7mg，56％)。ESI-MS m/z计算值411.1882，实测值412.0(M+1)+；保留时间：1.99分钟(LC方法D)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(8.9mg，75％)。ESI-MS m/z计算值411.1882，实测值412.0(M+1)+；保留时间：1.90分钟(LC方法D)。
实例30：17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物52)和17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物53)的制备
步骤1：N-异丙基丁-3-烯-1-胺
在42℃下将丙-2-胺(44.032g，64mL，744.91mmol)和4-溴丁-1-烯(10g，74.073mmol)的混合物在油浴中于暗中加热15.5小时。蒸馏掉大部分过量的异丙胺，并将所得的固体残余物溶解于水(20mL)中。分份加入氢氧化钠(3.05g，76.256mmol)，然后用乙醚(2X 75mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩(浴温≤25℃，压力≤250torr)，以得到呈浅黄色液体的N-异丙基丁-3-烯-1-胺(7.99g，83％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ5.78(ddt,J＝17.1,10.2,6.9Hz,1H),5.16-4.99(m,2H),4.85(br.s.,1H),2.86-2.72(m,1H),2.66(t,J＝6.9Hz,2H),2.25(q,J＝6.9Hz,2H),1.05(d,J＝6.2Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值113.12045，实测值114.3(M+1)+；保留时间：0.34分钟(LC方法E)。
步骤2：6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(2g，7.0280mmol)和N-异丙基丁-3-烯-1-胺(1.9g，10.406mmol)于乙腈(20mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(2.7454g，3.7mL，21.242mmol)，并且将混合物回流1小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(75mL)稀释，并用盐水(2X 50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至20％二氯甲烷/庚烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.85g，71％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.61(s,1H),5.75(dtd,J＝14.6,9.9,7.0Hz,1H),5.15-4.94(m,2H),4.29(m,J＝6.5Hz,1H),4.02(s,3H),3.56(dd,J＝8.2,6.8Hz,2H),2.31(q,J＝7.1Hz,2H),1.27(d,J＝6.5Hz,6H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-58.38(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值361.12494，实测值362.1(M+1)+；保留时间：3.58分钟(LC方法C)。
步骤3：6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.75g，4.843mmol)于THF(20mL)中的溶液中加入MeOH(20mL)和水(16.5mL)，随后加入氢氧化锂(500mg，20.88mmol)。将混合物在60℃下搅拌2小时。在减压下去除THF和甲醇，并且加入10mL HCl(10％)以酸化至pH约4，并且将产物用EtOAc(2X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.13g，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.25(s,1H),8.64(s,1H),5.76(ddt,J＝18.9,9.5,6.9Hz,1H),5.07-4.93(m,2H),4.15(h,J＝6.6Hz,1H),3.55(dd,J＝8.3,6.3Hz,2H),2.26(q,J＝7.2Hz,2H),1.23(d,J＝6.5Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值347.10928，实测值348.2(M+1)+；保留时间：1.75分钟(LC方法A)。
步骤4：N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
在0℃下向6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.13g，3.254mmol)于NMP(20mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(1.1g，3.639mmol)和DIEA(2.75mL，15.79mmol)，随后加入HATU(1.35g，3.55mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.65g，80％)。ESI-MS m/z计算值631.22296，实测值632.2(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法J)。
步骤5：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-异丙基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在50℃下将N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[丁-3-烯基(异丙基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(800mg，1.267mmol)和DIEA(675μL，3.875mmol)于乙腈(24mL)中的溶液加热，然后将对甲苯磺酰氯(340mg，1.783mmol)一份加入，并且在70℃下加热1小时。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并搅拌15分钟。将有机材料用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-异丙基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(686mg，88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),7.40-7.30(m,5H),5.85(ddt,J＝16.8,10.3,6.4Hz,1H),5.76-5.66(m,1H),5.10(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.03-4.92(m,3H),4.76(d,J＝10.9Hz,1H),4.61(d,J＝10.8Hz,1H),4.18(h,J＝6.5Hz,1H),3.56(dd,J＝8.4,6.2Hz,2H),2.60-2.51(m,2H),2.27(q,J＝7.1Hz,3H),2.24-2.16(m,1H),1.25(d,J＝6.5Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值613.2124，实测值614.2(M+1)+；保留时间：1.71分钟(LC方法M)。
步骤6：苄氧基-13-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
在1L圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下在50℃下将DCE(400mL)中的经由詹氏催化剂1B(205mg，0.2794mmol)的氮气线持续脱气的溶液加热。然后，通过注射器逐滴加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-异丙基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(682mg，1.112mmol)于DCE(40mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热3小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-苄氧基-13-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(550mg，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(d,J＝14.6Hz,1H),7.46-7.26(m,5H),5.65-5.57(m,1H),5.57-5.31(m,1H),4.88-4.79(m,2H),4.13(tt,J＝13.0,6.5Hz,1H),3.55(t,J＝6.7Hz,1H),3.43(t,J＝8.5Hz,1H),2.39(t,J＝9.5Hz,2H),2.33(d,J＝1.9Hz,1H),2.22(q,J＝9.4,6.5Hz,2H),2.09(d,J＝16.2Hz,1H),1.28(q,J＝7.0Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值585.1811，实测值586.2(M+1)+；保留时间：1.46分钟(LC方法M)。
步骤7：17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将6-苄氧基-13-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(550mg，0.9394mmol)于AcOH(8.5mL)和乙酸乙酯(8.5mL)中的溶液用氮气吹扫，并且加入Pd/C(155mg的10％w/w，0.1456mmol)。将混合物用氮气脱气5分钟，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌1小时。加入更多Pd/C(850mg的10％w/w，0.7987mmol)并搅拌另外3小时。将反应通过硅藻土塞过滤，用乙腈和乙酸乙酯洗涤，并将滤液浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(349mg，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.55(s,1H),6.34(d,J＝6.3Hz,2H),3.64(p,J＝6.6Hz,1H),3.17(t,J＝11.3Hz,1H),3.04(d,J＝11.8Hz,1H),2.12(t,J＝7.2Hz,2H),1.71-1.63(m,1H),1.59(d,J＝12.5Hz,1H),1.54-1.37(m,6H),1.09(dd,J＝9.0,6.6Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.2(M+1)+；保留时间：2.16分钟(LC方法A)。
步骤8：17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物52)和17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物53)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用8％ MeOH(+20mM NH3)/92％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对外消旋17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(349mg，0.7467mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(129.0mg，73％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.56(s,1H),6.35(s,2H),3.65(p,J＝6.6Hz,1H),3.17(t,J＝10.5Hz,1H),3.11–3.01(m,1H),2.12(t,J＝7.1Hz,2H),1.66(d,J＝11.2Hz,1H),1.60–1.52(m,1H),1.52–1.28(m,6H),1.09(dd,J＝8.8,6.6Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.2(M+1)+；保留时间：2.16分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(132.6mg，75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(s,1H),7.55(s,1H),6.34(d,J＝6.3Hz,2H),3.64(p,J＝6.6Hz,1H),3.20–3.12(m,1H),3.04(d,J＝11.1Hz,1H),2.12(t,J＝7.0Hz,2H),1.67–1.61(m,1H),1.61–1.55(m,1H),1.45(qd,J＝17.8,15.8,8.8Hz,6H),1.09(dd,J＝9.0,6.6Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.2(M+1)+；保留时间：2.16分钟(LC方法A)。
步骤9：结晶化合物52形态A(纯)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤8产生的结晶化合物52形态A(纯)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得。结晶化合物52形态A(纯)的XRPD衍射图提供于图9，并且下表5中总结了XRPD数据。
表5：结晶化合物52形态A(纯)的XRPD信号
XRPD峰编号 角度(°2θ±0.2) 强度％
1 6.7649 77.6
2 12.7426 30.37
3 15.1429 11.8
4 15.467 12
5 17.2558 100
6 18.6449 74.23
7 19.1863 15.25
8 19.7446 10.42
9 20.3974 10.55
10 20.5788 16.53
11 21.4448 27.71
12 27.2406 14.77
B.热重分析(TGA)
结晶化合物52形态A(纯)的TGA曲线提供于图10。TGA曲线在高达213.9℃下未显示重量损失，并且以10.00℃/分钟斜升至350.00℃。
C.差示扫描量热法分析
收集DSC数据并且以10.00℃/分钟斜升至220.00℃。结晶化合物52形态A(纯)的DSC热谱图提供于图11。热谱图显示了191.94℃的开始Tm，其中Tm峰在194.42℃、78.59J/g下。
实例31：(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物54)和(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物55)的制备
步骤1：[(3R)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉-3-基]甲醇
向[(3R)-吗啉-3-基]甲醇(盐酸盐)(4.4g，28.645mmol)于CH2Cl2(400mL)中的悬浮液中加入Et3N(5.8080g，8mL，57.397mmol)和4-甲氧基苯甲醛(4.1g，30.114mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，直到其变成透明溶液为止。然后，加入乙酸(2.1g，1.9886mL，34.970mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(18.2g，85.873mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物冷却至0℃，并加入KHCO3(57g)于水(200mL)中的溶液。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2X 200mL)萃取。将合并的有机层用5％NaHCO3水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至5％ MeOH/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，得到呈浅黄色油的[(3R)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉-3-基]甲醇(6.45g，95％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ7.25-7.16(m,2H),6.93-6.80(m,2H),4.06(d,J＝12.9Hz,1H),3.97(dd,J＝11.4,4.4Hz,1H),3.88-3.77(m,4H),3.77-3.70(m,1H),3.65(dd,J＝11.4,9.4Hz,1H),3.56-3.43(m,2H),3.20(d,J＝13.2Hz,1H),2.72(dt,J＝11.9,2.9Hz,1H),2.63-2.46(m,2H),2.31(ddd,J＝12.0,10.0,3.2Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值237.13649，实测值238.2(M+1)+；保留时间：0.69分钟(LC方法E)。
步骤2：(3S)-3-(碘甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉
向[(3R)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉-3-基]甲醇(6.45g，27.181mmol)于CH2Cl2(250mL)中的溶液中加入三苯基磷(8.12g，30.959mmol)和咪唑(2.78g，40.836mmol)。将混合物在0℃下搅拌5分钟。按份加入碘(8.06g，31.756mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。将混合物浓缩至约100mL，并且通过快速色谱法(120克柱)使用0％至10％ MeOH/乙酸乙酯梯度进行纯化，得到呈浅黄色油的(3S)-3-(碘甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉(8.76g，93％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.30-7.24(m,2H),6.90-6.81(m,2H),3.85(d,J＝12.9Hz,1H),3.80(s,3H),3.77-3.72(m,2H),3.68-3.60(m,2H),3.51-3.41(m,1H),3.38-3.29(m,1H),3.24(d,J＝12.9Hz,1H),2.70-2.58(m,1H),2.42-2.21(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值347.0382，实测值348.1(M+1)+；保留时间：1.43分钟(LC方法E)。
步骤3：(3R)-3-烯丙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉
将碘化铜(I)(404mg，2.1213mmol)在氮气下悬浮于THF(3mL)中，并且在搅拌下冷却至-40℃。在10分钟内将THF中的溴(乙烯基)镁(4mL的1M，4mmol)缓慢加入，并且将稠密悬浮液进一步搅拌30分钟，然后使其温热至-10℃。将黑色悬浮液冷却至-40℃，并且在20分钟内逐滴加入(3S)-3-(碘甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉(460mg，1.3249mmol)于THF(1.5mL)中的溶液。将稠密悬浮液搅拌另外1小时，并且缓慢温热至15℃。加入EtOAc(10mL)和饱和NH4Cl(20mL)。将混合物在室温下搅拌5分钟。然后加入28％ NH3水溶液(15mL)。将混合物用EtOAc(3X 30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至40％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到呈无色油的(3R)-3-烯丙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉(265mg，81％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.23(d,J＝8.5Hz,2H),6.85(d,J＝8.5Hz,2H),5.83(ddt,J＝17.1,10.1,7.0Hz,1H),5.18-5.01(m,2H),4.00(d,J＝13.2Hz,1H),3.80(s,3H),3.76-3.64(m,2H),3.62-3.52(m,1H),3.46(dd,J＝11.2,7.9Hz,1H),3.14(d,J＝12.9Hz,1H),2.60(dt,J＝12.0,3.4Hz,1H),2.46(td,J＝7.6,3.7Hz,1H),2.41-2.27(m,2H),2.18(ddd,J＝12.0,8.9,3.5Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值247.15723，实测值248.2(M+1)+；保留时间：1.34分钟(LC方法E)。
步骤4：(3R)-3-烯丙基吗啉
向(3R)-3-烯丙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]吗啉(3.25g，13.14mmol)于1,2-二氯乙烷(60mL)中的溶液中加入1-氯甲酸氯乙酯(7.5525g，5.7mL，52.826mmol)。将混合物在78℃下搅拌18小时，冷却至室温并浓缩以去除溶剂。将残余物溶解于MeOH(60mL)中，并且在80℃下加热1小时。将混合物浓缩并且由EtOAc(2X 20mL)共蒸发。将残余物悬浮于30mL的EtOAc与庚烷的1:1混合物中，并且通过过滤收集所得的沉淀并用EtOAc与庚烷的1:1混合物洗涤，以得到呈白色固体的(3R)-3-烯丙基吗啉(盐酸盐)(1.515g，70％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.41(br.s.,2H),5.87-5.69(m,1H),5.23-5.09(m,2H),3.93-3.82(m,2H),3.68(td,J＝11.7,2.6Hz,1H),3.46(dd,J＝12.2,10.1Hz,1H),3.34-3.12(m,2H),3.11-2.95(m,1H),2.46-2.23(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值127.09972，实测值128.2(M+1)+；保留时间：0.32分钟(LC方法E)。
步骤5：6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向(3R)-3-烯丙基吗啉(盐酸盐)(1.51g，9.2273mmol)于乙腈(22mL)中的悬浮液中加入DIPEA(3.7100g，5mL，28.706mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.2g，11.245mmol)。将混合物在80℃下搅拌1小时，冷却至环境温度并浓缩。将残余物溶解于CH2Cl2(100mL)中，并且用KHCO3(3.6g)于水(50mL)中的溶液洗涤。将水层用CH2Cl2(50mL)反萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至30％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈红色油的6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.64g，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.61(s,1H),5.64(ddt,J＝17.1,10.0,7.3Hz,1H),5.18-4.97(m,2H),4.70-4.53(m,1H),4.01(s,3H),3.99-3.86(m,2H),3.75-3.52(m,4H),2.62(t,J＝7.3Hz,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-57.41(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值375.10422，实测值376.1(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法E)。
步骤6：6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在0℃下向6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.6g，9.5923mmol)于THF(40mL)中的溶液中加入氢氧化钠(762mg，19.051mmol)于水(10mL)中的溶液，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物冷却至0℃，并且逐滴加入HCl水溶液(1N，18.35mL)。将混合物浓缩，并且将残余物用EtOAc(3X 50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈红色泡沫的6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(3.59g，99％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.63(s,1H),6.30(br.s.,1H),5.66(ddt,J＝17.1,10.0,7.1Hz,1H),5.22-4.99(m,2H),4.67(td,J＝7.3,1.8Hz,1H),4.05-3.88(m,2H),3.80-3.54(m,4H),2.64(t,J＝7.3Hz,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-57.40(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值361.08856，实测值362.1(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法E)。
步骤7：6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
在0℃下向6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(3.38g，9.3558mmol)于CH2Cl2(55mL)中的悬浮液中逐滴加入草酰氯(1.6g，1.0997mL，12.606mmol)和DMF(690mg，0.7309mL，9.4399mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后在20分钟内加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(3.7g，10.922mmol)和DIPEA(1.71g，2.3046mL，13.231mmol)于CH2Cl2(40mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌1小时并冷却至0℃，并且加入5％ NaHCO3水溶液(100mL)。将混合物用CH2Cl2(3X 50mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用0％至30％EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(4.9g，81％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.37-8.82(m,2H),8.54-8.40(m,1H),7.55-7.28(m,5H),5.93-5.74(m,1H),5.72-5.54(m,1H),5.20-4.96(m,4H),4.90-4.66(m,2H),4.58-4.38(m,1H),4.03-3.83(m,2H),3.79-3.53(m,4H),2.61(t,J＝7.2Hz,2H),2.49-2.12(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值645.2022，实测值646.2(M+1)+；保留时间：2.25分钟(LC方法E)。
步骤8：(3R)-3-烯丙基-4-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吗啉
在50℃下向6-[(3R)-3-烯丙基吗啉-4-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(340mg，0.5267mmol)和DIPEA(186mg，0.2507mL，1.4391mmol)于乙腈(8mL)中的溶液中按份加入对甲苯磺酰氯(126mg，0.6609mmol)。将混合物在70℃搅拌2小时，冷却至0℃，并且用EtOAc(50mL)和5％ NaHCO3水溶液(15mL)稀释。将两层分离，并且将有机层用盐水(5mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至25％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的(3R)-3-烯丙基-4-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吗啉(272mg，82％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.70(s,1H),7.45-7.29(m,5H),5.90-5.73(m,1H),5.72-5.55(m,1H),5.17-4.97(m,4H),4.81(dd,J＝10.6,6.2Hz,1H),4.72-4.60(m,2H),4.02-3.86(m,2H),3.79-3.53(m,4H),2.63(t,J＝7.2Hz,2H),2.46(d,J＝10.0Hz,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值627.19165，实测值628.2(M+1)+；保留时间：2.45分钟(LC方法E)。
步骤9：(12R)-6-(苄氧基)-21-硝基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯(E/Z混合物)
在氮气下向干燥250-mL烧瓶中加入DCE(25mL)并且将氮气鼓泡通过溶剂5分钟。在氮气流下加入詹氏催化剂1B(47mg，0.0641mmol)。在70℃下在1小时内逐滴加入(3R)-3-烯丙基-4-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吗啉(270mg，0.4303mmol)于DCE(2mL)中的溶液。将混合物用氮气鼓泡，并且在70℃下加热2.5小时，然后将混合物冷却至室温并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至20％ EtOAc/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色油的(12R)-6-(苄氧基)-21-硝基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯(E/Z混合物)(171mg，56％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.68(s,1H),7.41-7.26(m,5H),5.69-5.43(m,2H),5.13-4.88(m,2H),4.12-3.86(m,3H),3.82-3.56(m,4H),2.83-2.52(m,2H),2.52-2.31(m,2H),2.28-2.15(m,1H),2.14-1.98(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-58.28(s,3F),-73.62(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值599.16034，实测值600.2(M+1)+；保留时间：2.37分钟(LC方法E)。
步骤10：(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇
向(12R)-6-(苄氧基)-21-硝基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯(E/Z混合物)(550mg，0.6606mmol)于EtOAc(10mL)和MeOH(10mL)中的溶液中加入10％钯碳(250mg，0.1175mmol，50％湿润)。将混合物在氢气球下于室温下在30℃下搅拌3天，然后在50℃下搅拌4小时。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。将滤液浓缩并且通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至15％ EtOAc/二氯甲烷梯度进行纯化，然后由二氯甲烷和己烷重结晶，得到呈黄色固体的(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(255mg，80％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.41(s,1H),5.37(s,1H),5.32(s,1H),3.90-3.68(m,5H),3.47-3.09(m,3H),2.62-1.94(m,3H),1.90-1.60(m,2H),1.58-1.40(m,5H)ppm。ESI-MS m/z计算值481.15485，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.29分钟(LC方法C)。
步骤11：(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物54)和(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物55)
通过手性SFC使用由菲罗门公司出售并且用20％ MeOH/CO2洗脱的LUX-4柱(250x21.2mm，5μm粒度)在6分钟内对外消旋(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(100mg，0.2075mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体1)(54mg，53％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.41(s,1H),5.31(s,2H),3.90-3.70(m,5H),3.47-3.37(m,1H),3.30(ddd,J＝12.8,9.4,3.1Hz,1H),3.19-3.09(m,1H),2.51-2.36(m,1H),2.27(t,J＝10.4Hz,1H),2.17-2.02(m,1H),1.82-1.62(m,3H),1.58-1.42(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-60.26(s,3F),-80.82(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值481.15485，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.3分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-21-氨基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-6-醇(对映异构体2)(43mg，41％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.42(s,1H),5.36(s,2H),3.91-3.63(m,5H),3.34(ddd,J＝13.1,10.4,2.9Hz,1H),3.26-3.11(m,2H),2.65-2.47(m,1H),2.45-2.30(m,1H),2.24-2.09(m,1H),2.06-1.79(m,2H),1.77-1.65(m,1H),1.62-1.52(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-60.58(s,3F),-77.24(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值481.1549，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.3分钟(LC方法C)。
实例32：17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物56)和17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物57)的制备
步骤1：N-苄基-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在100mL烧瓶中，将[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(200mg，0.3075mmol)溶解于乙腈(6mL)中，并且冷却至0℃，随后加入DIEA(300μL，1.722mmol)和N-苄基丁-3-烯-1-胺(110mg，0.6822mmol)，并且然后将混合物搅拌90分钟，使其温热至室温。将反应浓缩。然后通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化(产物以22％乙酸乙酯洗脱)，以得到呈黄色泡沫的N-苄基-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(199mg，98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),7.40-7.28(m,9H),7.26(dt,J＝8.3,3.5Hz,1H),5.84(ddt,J＝16.9,10.3,6.5Hz,1H),5.67(ddt,J＝17.1,10.3,6.8Hz,1H),5.14-4.94(m,4H),4.88(s,2H),4.75(d,J＝10.8Hz,1H),4.60(d,J＝10.8Hz,1H),3.61(t,J＝7.4Hz,2H),2.54(s,1H),2.45(d,J＝5.9Hz,1H),2.37(q,J＝7.4Hz,2H),2.31-2.13(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值661.2124，实测值662.2(M+1)+；保留时间：1.75分钟(LC方法M)。
步骤2：13-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
在500mL圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下将DCE(150mL)中的经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(55mg，0.07496mmol)加热至50℃。然后，通过注射器逐滴加入N-苄基-6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(199mg，0.3008mmol)于DCE(20mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热3小时。然后将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到黄色残余物，将所述黄色残余物在真空下放置14小时，以得到呈浅黄色固体的13-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(130mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),7.43–7.30(m,8H),7.29–7.25(m,2H),5.55(t,J＝8.5Hz,1H),5.31(q,J＝8.6Hz,1H),4.86(s,2H),4.82(d,J＝1.8Hz,2H),3.45(t,J＝8.4Hz,2H),2.49–2.25(m,4H),2.24(d,J＝4.9Hz,2H)ppm。ESI-MSm/z计算值633.1811，实测值634.2(M+1)+；保留时间：1.49分钟(LC方法M)。
步骤3：17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
在250mL烧瓶中，将13-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16--六烯(E/Z混合物)(130mg，0.2052mmol)于AcOH(2mL)和乙酸乙酯(2mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(35mg的10％w/w，0.03289mmol)。将混合物用氮气脱气5分钟，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1大气压的氢气下搅拌4小时。加入另外的Pd/C(大约185.6mg的10％w/w，0.1744mmol)并搅拌另外一个小时。过滤并浓缩混合物，并使其经受具有新鲜Pd/C(35mg的10％w/w，0.03289mmol)和AcOH(2.008mL)和乙酸乙酯(2.008mL)的不锈钢压力反应器。用氮气吹扫容器，然后用氢冲洗，并且在140psi氢气下搅拌2小时。将反应通过硅藻土塞过滤，用过量的乙腈和乙酸乙酯洗涤，并且然后浓缩有机滤液。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(76mg，87％)。ESI-MS m/z计算值425.12863，实测值426.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法A)。
步骤4：17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物56)和17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物57)
通过手性SFC使用在40℃下用10％ MeOH(+20mM NH3)/90％ CO2洗脱的菲罗门LUX-4柱(250X 10mm，5μm粒度)以70毫升/分钟的流速以及500μL的注射体积对外消旋17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(75mg，0.1763mmol)进行纯化，从而得到两种对映异构体的分离：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(23.8mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(d,J＝15.4Hz,2H),6.29(t,J＝4.9Hz,1H),5.95(s,2H),3.23(td,J＝8.1,5.3Hz,2H),2.13(dq,J＝10.9,6.6,6.2Hz,2H),1.84(d,J＝12.9Hz,1H),1.67-1.60(m,2H),1.59(d,J＝10.0Hz,2H),1.52(s,1H),1.39(d,J＝8.2Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值425.12863，实测值426.2(M+1)+；保留时间：1.77分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(24.0mg，63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(d,J＝15.4Hz,2H),6.29(t,J＝5.0Hz,1H),5.95(s,2H),3.23(td,J＝8.2,5.4Hz,2H),2.14(dq,J＝11.6,6.8,6.3Hz,2H),1.86(p,J＝6.9Hz,1H),1.68-1.60(m,2H),1.60-1.54(m,2H),1.51(d,J＝14.0Hz,1H),1.38(d,J＝8.9Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值425.12863，实测值426.2(M+1)+；保留时间：1.77分钟(LC方法A)。
实例33：17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(化合物58)的制备
步骤1：6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.92g，13.77mmol)于乙腈(58.8mL)中的溶液中加入N-甲基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(1.662g，13.67mmol)、DIEA(6.224mL，35.73mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将溶剂在真空中去除。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.89g，84％)。ESI-MS m/z计算值333.09363，实测值334.1(M+1)+；保留时间：0.73分钟(LC方法S)。
步骤2：6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(4.2g，12.60mmol)于乙醇(84mL)中的溶液中加入肼(5.932mL，189.0mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物用水(150mL)稀释，并用DCM(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，然后通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至10％MeOH/二氯甲烷梯度进行纯化，以得到呈黄色固体的6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(4.05g，96％)。ESI-MS m/z计算值333.1049，实测值334.2(M+1)+；保留时间：0.52分钟(LC方法S)。
步骤3：2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸乙酯
在氮气下向2-羟基己-5-烯酸乙酯(8g，48.04mmol)于DMF(96.08mL)中的溶液中加入咪唑(6.543g，96.11mmol)和DMAP(1.467g，12.01mmol)，随后缓慢加入TBDPSCl(15.0mL，57.68mmol)。将溶液在环境温度下搅拌过夜。将反应用二氯甲烷(150mL)稀释，用饱和氯化铵溶液(2X 100mL)、盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(220g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，产生了呈无色油的2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸乙酯(15.6g，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68-7.54(m,4H),7.52-7.28(m,6H),5.72(ddt,J＝16.9,10.2,6.5Hz,1H),5.05-4.79(m,2H),4.21(t,J＝5.7Hz,1H),3.88(q,J＝7.1Hz,2H),2.22-1.89(m,2H),1.85-1.65(m,2H),1.02(d,J＝11.7Hz,12H)ppm。保留时间：0.88分钟(LC方法R)。
步骤4：2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸
向2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸乙酯(17g，42.86mmol)于MeOH(99.16mL)和THF(34mL)中的溶液中加入NaOH(39.82mL，2N，79.64mmol)，并且将混合物在环境温度下搅拌过夜。去除有机溶剂，并将残余物用1N NaOH(20mL)稀释，并用MTBE(500mL)萃取两次。将有机相用1N NaOH(1X 50mL)反萃取，并将合并的水相用10％ HCl水溶液酸化至pH＝1。将水相用乙酸乙酯(2X 100mL)萃取，并且将有机相用盐水(1X 100mL)洗涤。将合并的乙酸乙酯相经MgSO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈白色固体的2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸(10.2g，65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,1H),7.66-7.56(m,4H),7.52-7.35(m,6H),5.75-5.62(m,1H),4.94-4.83(m,2H),4.16(t,J＝5.5Hz,1H),2.17-2.04(m,2H),1.71(qd,J＝8.8,7.4,3.0Hz,2H),1.03(s,9H)ppm。保留时间：0.86分钟(LC方法S)。
步骤5：6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-N'-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酸(3.344g，9.074mmol)和6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(2.88g，8.642mmol)于DMF(37.01mL)中的溶液中加入DIEA(4.573mL，26.25mmol)，随后加入HATU(3.943g，10.37mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色粘性固体的6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-N'-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(4.5g，76％)。ESI-MS m/z计算值683.2751，实测值684.5(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法R)。
步骤6：N-丁-3-烯基-6-[5-[1-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在50℃下将6-[丁-3-烯基(甲基)氨基]-N'-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(5.87g，8.584mmol)和DIEA(5.194mL，29.82mmol)于乙腈(134.2mL)中的溶液加热，然后加入对甲苯磺酰氯(2.557g，13.41mmol)。将所得混合物在70℃下加热15分钟。将反应混合物冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液(250mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3X 125mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色泡沫固体的N-丁-3-烯基-6-[5-[1-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(5.61g，98％)。ESI-MS m/z计算值665.2645，实测值666.4(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法T)。
步骤7：叔丁基-[[13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-6-基]氧基]-二苯基-硅烷(E/Z混合物)
在1L圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下将经由N-丁-3-烯基-6-[5-[1-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.2g，1.802mmol)的氮气线于DCE(600mL)中的持续脱气的溶液加热至50℃。然后，通过注射器加入[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(282.3mg，0.4505mmol)于DCE(50mL)中的溶液。将所得混合物在50℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈米白色固体的叔丁基-[[13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-6-基]氧基]-二苯基-硅烷(E/Z混合物)(780mg，68％)。ESI-MS m/z计算值637.2332，实测值638.4(M+1)+；保留时间：0.77分钟(LC方法T)。
步骤8：13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)
在0℃下向叔丁基-[[13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-6-基]氧基]-二苯基-硅烷(E/Z混合物)(490mg，0.7684mmol)于THF(8.1mL)中的搅拌溶液中加入TBAF(1.537mL，1M，1.537mmol)。移除冰浴，并将反应在室温下搅拌15分钟。将反应混合物在减压下浓缩并且通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％己烷至30％ EtOAc/己烷梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体的13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)(180mg，59％)。ESI-MS m/z计算值399.11545，实测值400.8(M+1)+；保留时间：1.65分钟(LC方法A)。
步骤9：13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)
向13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)(260mg，0.6511mmol)于DCM(5mL)中的溶液中加入DMP(359.0mg，0.8464mmol)，并且将反应搅拌30分钟。将反应用饱和NaHCO3淬灭，并且用DCM(2X 25mL)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(260mg，100％)。ESI-MS m/z计算值397.0998，实测值398.1(M+1)+；保留时间：0.69分钟(LC方法S)。
步骤10：17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(化合物58)
向13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(50mg，0.107mmol)于乙酸乙酯(1.148mL)中的吹氮溶液加入Pd/C(38.98mg，10％w/w，0.03663mmol)。将混合物抽空，并且然后在氢气气氛下在室温下使用氢气球搅拌1小时。将反应混合物过滤并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈亮橙色固体的17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(30.0mg，76％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.37(s,1H),3.27(dd,J＝9.1,6.3Hz,2H),2.92(d,J＝1.5Hz,3H),2.90-2.79(m,2H),1.95-1.83(m,4H),1.59(p,J＝7.1,6.5Hz,2H),1.48(tdd,J＝9.3,5.8,3.3Hz,2H)ppm。两个可交换质子未被观察到。ESI-MS m/z计算值369.14127，实测值370.1(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法A)。
实例34：(6S,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(化合物59)和(6R,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(化合物60)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)乙酮(583mg，1.833mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入DCM(5mL)中的(N-异氰亚氨基)三苯基磷(552mg，1.826mmol)，并且在室温下搅拌30分钟。然后，缓慢逐滴加入DCM(5mL)中的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(500mg，1.204mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，并且通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％ EtOAc/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，以得到N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(582mg，64％)。ESI-MS m/z计算值757.0996，实测值758.2(M+1)+；保留时间：0.66分钟(LC方法T)。
步骤2：N-[(15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.0g，2.640mmol)于乙腈(200mL)中的搅拌溶液用N2鼓泡5分钟。然后，加入三邻甲苯基磷(167mg，0.5487mmol)和Pd(OAc)2(64mg，0.2851mmol)，随后加入三乙胺(2.0mL，14.35mmol)，并且将溶液在80℃下加热6小时。将混合物冷却至室温，浓缩至约5mL体积，并且通过硅藻土过滤，并且将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％ EtOAc/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，得到N-[(15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(1.04g，63％)。ESI-MS m/z计算值629.1873，实测值630.3(M+1)+；保留时间：1.73分钟(LC方法M)。
步骤3：(6S,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(化合物59)和(6R,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(化合物60)
在使用3向接头的配备有H2气球的圆底烧瓶中，向N-[(15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(354mg，0.5623mmol)于乙醇(5mL)中的溶液中加入Pd/C(64mg，10％w/w，0.06014mmol)。经受真空并且用氮气回填三次，然后经受真空。将烧瓶用氢气填充，并且然后搅拌15小时。经受真空并且用氮气回填三次，然后用乙酸乙酯稀释，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩，并将残余物溶解于4mL的1:3TFA/二氯甲烷中。将此反应混合物在室温下搅拌约1小时并且浓缩。在30分钟内通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体以及待洗脱的第一对映异构体的(6S,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(9.1mg，39％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.90(d,J＝7.5Hz,1H),7.42-7.35(m,1H),7.22(ddd,J＝8.4,4.6,2.3Hz,1H),7.02(dd,J＝12.5,8.4Hz,1H),4.30(s,1H),3.87(t,J＝4.9Hz,1H),3.66-3.57(m,1H),3.31(t,J＝8.6Hz,1H),2.98(dd,J＝14.6,6.6Hz,1H),2.58-2.49(m,1H),2.45(t,J＝13.5Hz,1H),2.16-2.08(m,1H),1.95(td,J＝12.2,11.1,5.9Hz,2H),1.69-1.59(m,3H),1.04(dd,J＝12.0,6.5Hz,1H)ppm。三个可交换质子未被观察到。ESI-MS m/z计算值531.1505，实测值532.1(M+1)+；保留时间：1.67分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(6R,15R)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(7.7mg，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.15(dd,J＝7.7,2.3Hz,1H),7.73(s,1H),7.33(ddd,J＝8.4,4.5,2.3Hz,1H),7.12(dd,J＝12.4,8.4Hz,1H),6.26(s,1H),3.98(dt,J＝9.9,5.3Hz,1H),3.70(br.s,1H),3.24(d,J＝9.0Hz,1H),3.04(d,J＝15.2Hz,1H),2.55(m,2H),2.24(dt,J＝11.8,5.9Hz,1H),2.18-2.04(m,1H),2.00-1.83(m,3H),1.77-1.67(m,1H),1.59(qd,J＝11.3,6.1Hz,1H),0.90-0.74(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值531.1505，实测值532.0(M+1)+；保留时间：1.73分钟(LC方法J)。
步骤4：无定形化合物60(纯形态)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤3产生的无定形化合物60(纯形态)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得，并且提供于图12。
B.热重分析(TGA)
无定形化合物60(纯形态)的TGA曲线提供于图13。TGA曲线显示了以10.00℃/分钟斜升至350.00℃，从40℃至229.15℃的1.60％重量损失。
C.差示扫描量热法分析
使用DSC通过加热和冷却方法生成化合物60的纯无定形游离形态。将材料在DSC锅上加热至240℃，并且然后冷却至室温。然后将材料重新加热至240℃，以查看无定形材料的玻璃转变温度。
DSC分析使用以下方法运行：
1.25.0至240.0℃，10.00℃/分钟，N2 50.0毫升/分钟，
2.240.0至-20.0℃，-50.00℃/分钟，N2 50.0毫升/分钟，然后
3.-20.0至240.0℃，10.00℃/分钟，N2 50.0毫升/分钟。
无定形化合物60(纯形态)的DSC热谱图提供于图14。未观察到Tg。
实例35：17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物61)和17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物62)的制备
步骤1：17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物61)和17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物62)
在氮气下，将17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(25mg，0.06769mmol)于THF(504.5μL)中的溶液冷却至-78℃，然后逐滴加入MeMgCl(67.70μL的3M，0.2031mmol)，并且搅拌所得混合物30分钟。将反应混合物用1M HCl淬灭，并且然后用EtOAc(2X 30mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的外消旋混合物，通过正常相SFC使用由手性技术公司出售(型号＝20945)并且用45％至80％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的AS-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)(流速＝40毫升/分钟，柱温＝40℃)对所述外消旋混合物进行进一步纯化，产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体1)(5mg，38％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.35(s,1H),3.36-3.19(m,2H),2.92(s,3H),2.28(s,3H),2.06(dt,J＝14.6,7.9Hz,2H),1.84(dtd,J＝28.4,12.8,11.3,6.1Hz,4H),1.70(s,3H),1.55-1.47(m,2H),1.44-1.34(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值385.17255，实测值386.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6,13-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(对映异构体2)(5mg，36％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.53(d,J＝6.5Hz,1H),3.41(d,J＝37.2Hz,2H),3.04(s,3H),2.76-2.30(m,3H),2.26-2.07(m,2H),1.98(dd,J＝14.5,7.6Hz,3H),1.79(s,3H),1.66-1.41(m,5H)ppm。ESI-MS m/z计算值385.17255，实测值386.2(M+1)+；保留时间：1.77分钟(LC方法A)。
实例36：(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物63)和(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物64)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(330mg，0.5063mmol)于甲苯(14mL)中的溶液通过氮气鼓泡脱气20分钟。加入异丙烯基三氟硼酸钾(106mg，0.7163mmol)和与二氯甲烷复合的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)(23mg，0.0282mmol)，随后加入碳酸铯的用氮气脱气的水溶液(0.6mL，2M，1.2000mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 25mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈红色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(210mg，71％)。ESI-MS m/z计算值555.20935，实测值556.2(M+1)+；保留时间：2.56分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物63)和(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物64)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(210mg，0.3591mmol)于甲醇(21mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(160mg，0.0752mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体以及待洗脱的第一对映异构体的(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(54mg，32％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d))δ7.01(s,1H),5.02(br.s.,2H),4.03-3.80(m,1H),3.79-3.58(m,2H),3.35-3.20(m,1H),3.15(td,J＝9.0,3.1Hz,1H),2.56-2.34(m,2H),2.30-2.14(m,1H),2.12-1.92(m,2H),1.90-1.76(m,1H),1.73-1.42(m,8H),1.33(d,J＝6.8Hz,3H),1.15(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.2195，实测值440.3(M+1)+；保留时间：3.3分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(丙-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(29mg，18％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.01(s,1H),5.47-4.58(m,2H),4.04-3.83(m,1H),3.81-3.67(m,1H),3.65-3.51(m,1H),3.33-3.17(m,1H),3.16-2.99(m,1H),2.67-2.48(m,1H),2.45-2.29(m,1H),2.28-2.10(m,2H),2.06-1.87(m,2H),1.86-1.72(m,1H),1.70-1.45(m,7H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H),1.14(d,J＝6.5Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.2195，实测值440.3(M+1)+；保留时间：3.22分钟(LC方法C)。
实例37：17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物65)、17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物66)、17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物67)和17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物68)的制备
步骤1：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-甲基丁-3-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在40mL密封小瓶中，在室温下将[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(425mg，0.6534mmol)溶解于乙腈(11mL)中，随后加入DIEA(750μL，4.306mmol)和戊-4-烯-2-胺(盐酸盐)(220mg，1.809mmol)，并且然后将混合物搅拌90分钟。将反应浓缩。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至60％乙酸乙酯梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色泡沫的6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-甲基丁-3-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(266mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.78(d,J＝8.1Hz,1H),7.38-7.31(m,5H),5.85(ddt,J＝16.8,10.2,6.5Hz,1H),5.78-5.63(m,1H),5.13-4.94(m,4H),4.76(d,J＝10.8Hz,1H),4.60(d,J＝10.8Hz,1H),4.48(dq,J＝8.2,5.9Hz,1H),2.59-2.51(m,2H),2.47-2.40(m,1H),2.33-2.19(m,3H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值585.1811，实测值586.2(M+1)+；保留时间：2.01分钟(LC方法J)。
步骤2：6-苄氧基-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
在500mL圆底烧瓶中，在氮气气氛下在50℃下将DCE(200mL)中的经由詹氏催化剂1B(82mg，0.1118mmol)的氮气线持续脱气的溶液加热。然后，通过注射器逐滴加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-甲基丁-3-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(260mg，0.4441mmol)于DCE(40mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热3小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-苄氧基-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(150mg，61％)。ESI-MS m/z计算值557.1498，实测值558.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法J)。
步骤3：17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
在250mL圆底烧瓶中，将6-苄氧基-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(145mg，0.2601mmol)于AcOH(2.5mL)和乙酸乙酯(2.5mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(275mg的10％w/w，0.2584mmol)。将混合物用氮气脱气5分钟，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1大气压的氢气下搅拌4小时。将反应过滤，并用过量乙腈和乙酸乙酯洗涤硅藻土塞，然后浓缩滤液。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色固体以及4种立体异构体的混合物，17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(95mg，83％)。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.34分钟(LC方法A)。
步骤4：17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物65)、17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物66)、17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物67)和17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物68)
通过手性SFC使用在40℃下用10％ MeOH(+20mM NH3)/90％ CO2洗脱的菲罗门LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)，使用70毫升/分钟的流速以及500μL的注射体积对外消旋17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(93mg，0.2117mmol)进行纯化，得到四个对映异构体的分离：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(18.8mg，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(d,J＝15.2Hz,2H),6.01(s,2H),5.10(d,J＝4.5Hz,1H),3.69-3.59(m,1H),2.29-2.18(m,1H),2.01(ddd,J＝13.9,10.7,7.0Hz,1H),1.61(d,J＝9.8Hz,2H),1.50(d,J＝9.2Hz,3H),1.44(d,J＝9.1Hz,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),0.84(td,J＝14.7,11.1,6.0Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(16.0mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.55(s,1H),6.00(d,J＝7.6Hz,2H),5.13(d,J＝4.9Hz,1H),3.78-3.65(m,1H),2.43-2.26(m,2H),2.07-1.99(m,1H),1.69(s,2H),1.43(s,4H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),0.90(ddt,J＝18.2,12.2,5.9Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法A)。
待洗脱的第三对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(18.3mg，78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(d,J＝15.1Hz,2H),6.00(d,J＝7.6Hz,2H),5.10(d,J＝4.6Hz,1H),3.67–3.59(m,1H),2.47(s,1H),2.28–2.19(m,1H),2.00(ddd,J＝13.8,8.8,5.7Hz,1H),1.66–1.57(m,2H),1.53–1.50(m,1H),1.44(d,J＝11.0Hz,3H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),0.89–0.81(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法A)。
待洗脱的第四对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(16.4mg，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.55(s,1H),6.00(d,J＝7.8Hz,2H),5.13(d,J＝4.9Hz,1H),3.76-3.67(m,1H),2.42-2.26(m,2H),2.08(s,2H),1.71-1.67(m,1H),1.49-1.38(m,4H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),0.96-0.86(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值439.1443，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法A)。
实例38：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(化合物69)和(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(化合物70)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(3-溴苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向(N-异氰亚氨基)三苯基磷(4.843g，16.02mmol)和1-(3-溴苯基)-2,2,2-三氟-乙酮(4.053g，16.02mmol)于DMF(79.83mL)中的搅拌溶液中加入6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(3.2453g，6.406mmol)。将混合物加盖并且室温下搅拌15分钟。将混合物用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3(1X)、饱和NH4Cl(1X)和盐水(1X)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成橙色油，通过硅胶色谱法使用100％己烷平缓至100％乙酸乙酯梯度对所述橙色油进行纯化，从而得到呈黄/橙色糖浆，N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(3-溴苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(4.4g，99％)。ESI-MS m/z计算值691.12286，实测值692.2(M+1)+；保留时间：0.82分钟(LC方法T)。
步骤2：N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在配置有回流冷凝器的圆底烧瓶中，向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(3-溴苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(4.4g，6.354mmol)于脱气NMP(264mL)中的搅拌溶液中加入二乙酸钯(427.9mg，1.906mmol)，随后加入三邻甲苯基磷(1.16g，3.811mmol)和TEA(708.4μL，5.083mmol)，并且将溶液用N2鼓泡5分钟，然后在140℃下在油浴中加热100分钟。加入二乙酸钯(142.7mg，0.6356mmol)，随后加入三-邻甲苯基磷(386.8mg，1.271mmol)，并且在140℃下继续搅拌15分钟，然后加入TEA(221.3μL，1.588mmol)，并且在140℃下搅拌15分钟，然后冷却至室温并浓缩。将残余物用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3(1X)、饱和NH4Cl(1X)、水(1X)和盐水(1X)洗涤，然后经MgSO4干燥，经硅藻土过滤，并浓缩滤液。通过硅胶色谱法使用100％己烷平缓至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄/橙色泡沫的N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(1.62g，35％)。ESI-MS m/z计算值611.1967，实测值612.2(M+1)+；保留时间：0.64分钟(LC方法T)。
步骤3：N-[(15R)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-醇]氨基甲酸叔丁酯
向N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(30.7mg，0.04418mmol)于乙醇(1.689mL)中的溶液中加入Pd/C(25.03mg的10％w/w，0.02352mmol)，并且将氢气鼓泡通过溶液5分钟，然后将烧瓶用氢气球加盖，并且搅拌16小时。将氮气鼓泡通过溶液5分钟，然后经硅藻土过滤，用甲醇洗涤，从而得到黄色溶液，将所述黄色溶液浓缩，以得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的产物，N-[(15R)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-醇]氨基甲酸叔丁酯(29.9mg，100％)。ESI-MS m/z计算值613.2124，实测值614.4(M+1)+；保留时间：0.75分钟(LC方法T)。
步骤4：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(化合物69)
向N-[(15R)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(29.9mg，0.04415mmol)于DCM(541.8μL)中的溶液中加入TFA(204.2μL，2.65mmol)。将混合物在环境温度下搅拌4小时，然后将挥发物通过旋转蒸发去除，溶解于DMSO中，过滤并且在15.0分钟内通过反相HPLC使用40％至80％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体以及待洗脱的第一单一对映异构体的(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(6.5mg，51％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.00(s,1H),7.68(s,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,1H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.22(s,2H),3.94-3.84(m,1H),3.50(d,J＝8.1Hz,1H),3.18(s,1H),2.98(dd,J＝14.2,5.9Hz,1H),2.51(s,1H),2.28(td,J＝11.8,9.6,5.6Hz,1H),2.18-2.11(m,1H),1.87(dq,J＝12.4,6.2Hz,2H),1.84-1.74(m,1H),1.69-1.59(m,1H),1.53(dd,J＝11.5,6.4Hz,1H),0.83(dd,J＝11.2,5.9Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值513.16，实测值514.1(M+1)+；保留时间：1.06分钟(LC方法M)。
步骤5：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(化合物70)
向N-[(15R)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(1.1g，1.149mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入TFA(15mL，194.7mmol)。将混合物在环境温度下搅拌15分钟，然后将挥发物通过旋转蒸发而不加热去除，并且将残余酸通过加入饱和NaHCO3水溶液淬灭。将此混合物用EtOAc(2X)萃取，将有机层合并，经MgSO4干燥并且过滤，并且将滤液浓缩至黄色泡沫的所述黄色泡沫通过用50％至100％乙腈/水梯度洗脱的275g C18柱上的反相色谱法进行纯化，得到呈待洗脱的第二单一对映异构体的仍含有一些杂质的产物。合并不纯部分并且通过用50％至100％乙腈/水梯度洗脱的100g C18柱上的反相色谱法再次纯化，从而得到纯产物，将所述纯产物与来自第一柱的纯产物合并，并浓缩，以得到呈黄色固体的(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(234mg，79％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),7.93(s,1H),7.70(s,1H),7.63(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(t,J＝7.7Hz,1H),7.28(d,J＝7.7Hz,1H),6.23(s,2H),4.16(dt,J＝10.6,5.3Hz,1H),3.60-3.48(m,1H),3.23(t,J＝9.0Hz,1H),2.90(dd,J＝15.9,8.0Hz,1H),2.75-2.65(m,1H),2.40(dt,J＝10.9,5.6Hz,1H),2.22(dt,J＝11.9,6.0Hz,1H),1.92(dd,J＝12.8,6.8Hz,2H),1.83-1.67(m,2H),1.58(dt,J＝11.6,5.8Hz,1H),0.85(dt,J＝16.2,6.1Hz,1H)，一个可交换的质子未被观察到。ESI-MS m/z计算值513.16，实测值514.0(M+1)+；保留时间：2.34分钟(LC方法A)。
步骤6：无定形化合物70(纯形态)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤5产生的无定形化合物70(纯形态)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得，并且提供于图15。
实例39：(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物71)和(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物72)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物71)和(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物72)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(300mg，0.4396mmol)于甲醇(15mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入三乙胺(217.8mg，0.3mL，2.1524mmol)，随后加入钯碳(325mg，0.1527mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在氢气下在室温下搅拌5小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(40mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈橙色固体以及待洗脱的第一非对映异构体的(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(90mg，49％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.06(d,J＝8.8Hz,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,1H),5.30-4.06(m,2H),3.97-3.81(m,1H),3.54-3.37(m,1H),3.30-3.11(m,1H),2.73-2.54(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.31-1.84(m,5H),1.82-1.48(m,7H),1.02-0.79(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值397.1726，实测值398.2(M+1)+；保留时间：3.22分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈橙色固体的(12R)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(60mg，33.9％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.08(d,J＝8.8Hz,1H),6.53(d,J＝8.8Hz,1H),4.85(br.s.,2H),4.00-3.87(m,1H),3.54-3.36(m,1H),3.26-3.07(m,1H),2.75-2.55(m,1H),2.36-2.12(m,3H),2.11-1.92(m,3H),1.84-1.75(m,1H),1.73-1.34(m,6H),1.10-0.95(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值397.1726，实测值398.2(M+1)+；保留时间：3.22分钟(LC方法C)。
实例40：17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物73)和17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物74)的制备
步骤1：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-环丁基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(300mg，0.4612mmol)于THF(6mL)中的混合物中加入N-丁-3-烯基环丁胺(296μL，1.844mmol)和二异丙基乙胺(241μL，1.384mmol)，并且将混合物在50℃下搅拌30分钟。将混合物用EtOAc稀释，用水洗涤，然后用盐水洗涤，(MgSO4)干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(在15分钟内0％至10％ EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-环丁基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(127mg，44％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.66(s,1H),7.45-7.29(m,5H),5.80(ddt,J＝16.6,10.2,6.3Hz,1H),5.64(ddt,J＝17.1,10.3,6.9Hz,1H),5.14-4.95(m,5H),4.81(d,J＝10.6Hz,1H),4.65(d,J＝10.6Hz,1H),4.33(p,J＝8.2Hz,1H),3.74-3.64(m,2H),2.59-2.44(m,2H),2.42-2.20(m,5H),2.20-2.07(m,2H),1.80-1.62(m,2H)ppm；19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-58.50,-73.15ppm。ESI-MS m/z计算值625.2124，实测值626.2(M+1)+；保留时间：0.61分钟(LC方法T)。
步骤2：6-苄氧基-13-环丁基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)
在120℃下在氮气鼓泡下向亚苄基-[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-钌；三环己基膦(25mg，0.02945mmol)于甲苯(9mL)中的溶液中逐滴加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-丁-3-烯基-N-环丁基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(121mg，0.1934mmol)于甲苯(9mL)中的溶液，并且在120℃下在氮气鼓泡下将混合物搅拌1小时。将溶剂蒸发，并且通过硅胶色谱法(在15分钟内0％至20％EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生6-苄氧基-13-环丁基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(45mg，35％)。ESI-MS m/z计算值597.1811，实测值598.1(M+1)+；保留时间：0.54分钟(LC方法T)。
步骤3：17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物73)和17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物74)
将6-苄氧基-13-环丁基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(45mg，0.06778mmol)和Pd/C(22mg的10％w/w，0.02067mmol)于乙酸(700μL)中的混合物在氢气(不锈钢压力容器中的200psi)下在室温下搅拌24小时。然后，将混合物过滤，并将滤液蒸发。通过硅胶色谱法在15分钟内使用0％至35％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，以产生外消旋6-苄氧基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-胺。将此外消旋材料以20mg/mL溶解于乙腈中，并且通过手性SFC使用AS-3柱(250X 21.2mm，5μm粒度)使用5％至15％甲醇(5mM NH3)/CO2移动相梯度在10分钟内将对映异构体分离。这些条件产生了如下所述的2种对映异构体产物：
峰1被浓缩，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(6.7mg，21％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.38(s,1H),5.13(s,2H),4.07(tt,J＝9.5,7.3Hz,1H),3.90(s,1H),3.49-3.26(m,2H),2.43-2.23(m,3H),2.21-2.04(m,4H),1.76(td,J＝12.4,5.3Hz,1H),1.62(d,J＝9.6Hz,2H),1.53(s,6H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-58.82,-79.80ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法Q)。
峰2被浓缩，以得到呈黄色固体的17-氨基-13-环丁基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(6.5mg，20％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.39(s,1H),5.13(s,2H),4.07(tt,J＝9.6,7.3Hz,1H),3.88(s,1H),3.46-3.28(m,2H),2.43-2.23(m,3H),2.21-2.03(m,4H),1.76(td,J＝12.4,5.2Hz,1H),1.68-1.41(m,8H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-58.82,-79.80ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：1.83分钟(LC方法Q)。
实例41：17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(化合物75)的制备
步骤1：17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(化合物75)
将13-甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(250mg，0.6292mmol)和氯化锡(II)二水合物(568mg，2.517mmol)于乙酸乙酯(6.292mL)中的混合物在55℃下搅拌30分钟，然后用EtOAc稀释，并且向混合物加入2N NaOH，直至混合物变得粘性。将混合物通过硅藻土过滤，并且将滤液用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈橙色固体的17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-酮(E/Z混合物)(185mg，80％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.37(s,1H),5.67-5.51(m,1H),5.46-5.31(m,1H),3.37-3.26(m,2H),2.97(d,J＝1.9Hz,3H),2.92-2.83(m,2H),2.66(dq,J＝16.5,8.4,7.9Hz,4H)ppm。两个可交换质子未被观察到。ESI-MSm/z计算值367.1256，实测值368.2(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法S)。
实例42：17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物76)和17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物77)的制备
步骤1：17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物76)和17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物77)
在氮气下，在0℃下将17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(19mg，0.05144mmol)于THF(383.4μL)中的溶液冷却，然后逐滴加入溴(苯基)镁(113.2μL，1M，0.1132mmol)，并且将混合物在0℃下搅拌30分钟。将反应混合物用水和1N HCl淬灭，用乙酸乙酯(2X 15mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的外消旋混合物。然后通过手性SFC使用由手性技术公司出售并且用50％至80％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的OD-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)在14.5分钟内对此外消旋材料进行纯化，产生了两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(4mg，16％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.50(s,1H),7.31-7.15(m,5H),2.95-2.82(m,3H),2.26-2.07(m,2H),1.96-1.77(m,2H),1.71-1.08(m,8H)ppm。ESI-MS m/z计算值447.1882，实测值448.3(M+1)+；保留时间：2.15分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-13-甲基-6-苯基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4mg，16％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.50(s,1H),7.29-7.18(m,5H),2.91-2.81(m,3H),2.26-2.08(m,2H),1.92-1.81(m,2H),1.71-1.20(m,8H)ppm。ESI-MS m/z计算值447.1882，实测值448.3(M+1)+；保留时间：2.15分钟(LC方法A)。
实例43：17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物78)和17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物79)的制备
步骤1：17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物78)和17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物79)
在氮气下，在0℃下将17-氨基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-酮(30mg，0.08123mmol)于THF(605.4μL)中的溶液冷却，然后逐滴加入溴(环丙基)镁(178.7μL，1M，0.1787mmol)，并且在0℃下搅拌30分钟。将反应混合物用水和1N HCl淬灭，用乙酸乙酯(2X 15mL)萃取，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，得到了外消旋混合物，通过手性SFC使用由手性技术公司出售，用5％至15％MeOH(+20mM NH3)/CO2洗脱的OD-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)在14.5分钟内将所述外消旋混合物分离，产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(3mg，9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.48(s,1H),2.85(s,3H),1.97(td,J＝9.4,5.3Hz,2H),1.83(dd,J＝11.5,5.9Hz,2H),1.71-1.32(m,7H),1.29-1.18(m,2H),0.63(dtd,J＝9.4,5.4,3.7Hz,1H),0.52-0.36(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值411.1882，实测值412.3(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-环丙基-13-甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(3mg，9％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49(s,1H),2.86(s,3H),1.98(td,J＝9.3,5.3Hz,2H),1.89-1.74(m,2H),1.69-1.45(m,4H),1.44-1.33(m,2H),1.32-1.05(m,3H),0.68-0.59(m,1H),0.55-0.35(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值411.1882，实测值412.3(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法A)。
实例44：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体1)(化合物80)和(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体2)(化合物81)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)
将微波小瓶中的(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(400mg，0.6662mmol)于DMF(6mL)中的溶液用氮气脱气5分钟，并且然后加入氰化铜(I)(298mg，3.3273mmol)。将所得悬浮液在90℃下在氮气下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，并且然后用EtOAc(75mL)稀释，并且通过硅藻土垫过滤。将滤液用NH4OH的水溶液(10％v/v，3X20mL)洗涤。将有机层用盐水(2X 30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)(310mg，86％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.71-8.54(m,1H),7.48-7.20(m,5H),5.69-5.36(m,2H),5.22(d,J＝11.2Hz,1H),5.04-4.89(m,1H),4.31-3.90(m,3H),3.34-3.10(m,1H),2.55-1.87(m,8H),1.72-1.60(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值540.1733，实测值541.0(M+1)+；保留时间：2.4分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)(230mg，0.4043mmol)溶解于甲醇(6mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入10％钯碳(260mg，0.1222mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤。将所得滤液在减压下浓缩，以产生呈红色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(130mg，76％)。ESI-MS m/z计算值422.16782，实测值423.2(M+1)+；保留时间：2.14分钟(LC方法E)。
步骤3：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体1)(化合物80)和(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体2)(化合物81)
通过手性SFC使用用40％ MeOH/60％ CO2洗脱的Lux Cellulose-5柱(250X21.2mm，5μm粒度)对(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈的非对映异构体混合物(162mg，0.3835mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈橙色固体的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体1)(47mg，28％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.34(br.s.,1H),4.25-3.85(m,3H),3.83-3.71(m,1H),2.58-2.38(m,2H),2.19-1.90(m,5H),1.79-1.65(m,2H),1.64-1.37(m,6H),0.97-0.82(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-80.74(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值422.1678，实测值423.2(M+1)+；保留时间：3.29分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈橙色固体的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲腈(对映异构体2)(35mg，21％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.35(s,1H),4.98(br.s.,2H),4.07-3.88(m,2H),3.85-3.64(m,2H),2.68-2.49(m,1H),2.41-2.15(m,2H),2.14-1.88(m,4H),1.81-1.69(m,1H),1.67-1.50(m,5H),1.09-0.93(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值422.1678，实测值423.2(M+1)+；保留时间：3.28分钟(LC方法C)。
实例45：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(化合物82)和(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体2)(化合物83)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(6-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将1-(6-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙酮(146.8mg，0.5779mmol)和(N-异氰亚氨基)三苯基磷(174.7mg，0.5779mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室温下搅拌30分钟。然后，逐滴加入DCM(2mL)中的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(300mg，0.7222mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用EtOAc(50mL)稀释，连续用水和盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％ EtOAc平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(6-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(107mg，21％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(d,J＝16.4Hz,1H),8.99(d,J＝9.6Hz,1H),8.67(d,J＝8.6Hz,1H),8.05-7.94(m,2H),7.85-7.75(m,1H),5.55-5.39(m,1H),4.96-4.78(m,2H),4.20(ddd,J＝15.2,10.7,6.3Hz,1H),3.53(d,J＝9.0Hz,1H),3.35(s,1H),2.33(s,1H),2.09(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.01(d,J＝7.2Hz,1H),1.92(s,1H),1.72(s,1H),1.64-1.58(m,1H),1.48(d,J＝2.5Hz,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值692.11816，实测值693.15(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法T)。
步骤2：N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(6-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.08653mmol)于乙腈(8mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钯(II)(6mg，0.02672mmol)，随后加入三邻甲苯基磷(16mg，0.05257mmol)和三乙胺(100μL，0.7175mmol)，并且将溶液用N2鼓泡1分钟。在微波照射下，将混合物在150℃下加热1小时。将混合物冷却至室温，然后用EtOAc稀释，并且用饱和NH4Cl(1X)和盐水(1X)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成黄色油，将所述黄色油溶解于DMSO中，并且在15.0分钟内通过使用反相HPLC使用40％至80％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到呈黄色固体的N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(27mg，51％)。ESI-MS m/z计算值612.19196，实测值613.2(M+1)+；保留时间：0.59分钟(LC方法T)。
步骤3：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(化合物82)和(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体2)(化合物83)
在使用3向接头的配备有氢气球的圆底烧瓶中，向N-[(15S)-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(27mg，0.04408mmol)于乙醇(5mL)中的溶液中加入钯碳(12mg，10％w/w，0.01128mmol)。使混合物经受真空并用氮气回填三次，然后经受真空。用氢气填充烧瓶，然后将混合物搅拌15小时。使混合物经受真空并用氮气回填三次，然后用乙酸乙酯稀释，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩并溶解于400μL的1:3TFA/二氯甲烷混合物中。将反应搅拌约1小时，并且将溶剂蒸发。将所得残余物溶解于2mL的MeOH中，并且在30分钟内通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色无定形固体的(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体1)(5.1mg，40％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,2H),7.75(t,J＝7.8Hz,1H),7.68(s,1H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,1H),3.93(tdd,J＝9.8,5.9,3.0Hz,1H),3.49(q,J＝8.8Hz,1H),3.23(t,J＝9.0Hz,1H),3.10-3.00(m,1H),2.74-2.67(m,1H),2.43(dd,J＝14.2,10.6Hz,1H),2.23(dqd,J＝19.9,7.3,2.7Hz,2H),1.90(dt,J＝12.6,6.6Hz,1H),1.69(dtd,J＝28.3,11.9,7.9Hz,2H),1.58-1.50(m,1H),0.82(qd,J＝11.5,4.6Hz,1H)ppm。一个可交换的质子峰未被观察到，并假定与NMR中的DMSO峰重叠。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.1(M+1)+；保留时间：1.76分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色无定形固体的(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24,25-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(盐酸盐)(对映异构体2)(6.7mg，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,2H),7.83(t,J＝7.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.51(d,J＝7.8Hz,1H),7.41(d,J＝7.7Hz,1H),3.75(d,J＝5.6Hz,1H),3.48(d,J＝8.2Hz,1H),3.20-3.13(m,1H),3.13-3.06(m,1H),2.69-2.57(m,3H),2.17-2.03(m,2H),1.87(q,J＝9.1,6.1Hz,2H),1.55(dtd,J＝28.5,12.1,11.4,3.9Hz,2H),0.94(tt,J＝10.8,5.5Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.1(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法J)。
实例46：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体1)(盐酸盐)(化合物84)、(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体2)(盐酸盐)(化合物85)、(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体3)(盐酸盐)(化合物86)和(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体4)(盐酸盐)(化合物87)的制备
步骤1：1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇
在0℃下将戴斯-马丁高碘烷(14.2g，33.48mmol)分份加入到1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙醇(7.095g，27.71mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中，并且在18小时内使反应温热至环境温度。将反应混合物通过加入1:1饱和NaHCO3/硫化硫酸钠水溶液(20mL)淬灭，搅拌10分钟，并且将层分离。将水层用DCM(3X)萃取，并且将合并的有机萃取物用1:1饱和NaHCO3/硫化硫酸钠水溶液(3X 50mL)和盐水(一次)洗涤，将混合物由通过相分离滤芯干燥，过滤并在真空中浓缩。然而，尝试将残余物溶解于DCM中，使过滤的白色不溶性固体破裂，并将滤液在真空中浓缩，以得到浅黄色油。将油通过硅色谱法(用0％至30％ EtOAc/庚烷梯度洗脱)纯化。将相关部分合并，并且蒸发至干燥，以得到1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(7.5g，100％)1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝5.3Hz,1H),7.90(d,J＝1.8Hz,1H),7.79(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),7.72(s,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值270.9456，实测值271.8(M+1)+；保留时间：0.6分钟(LC方法V)。
步骤2：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在75℃下，向1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-乙烷-1,1-二醇(344.1mg，1.265mmol)和6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(300mg，0.6326mmol)于DMF(5.256mL)中的搅拌溶液中加入(N-异氰亚氨基)三苯基磷(382.4mg，1.265mmol)，并且将所得混合物加盖并且搅拌15分钟，然后冷却至室温。将混合物用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤一次，用饱和NH4Cl水溶液洗涤一次，并且用盐水洗涤一次。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成橙色油，通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％ EtOAc平缓梯度对所述橙色油进行纯化，以得到主要受MW＝439副产物污染的产物。通过硅胶色谱法使用100％ DCM至20％ MeOH/DCM平缓梯度对此材料进一步纯化，从而得到N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(259.8mg，59％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.56(s,1H),9.02(s,1H),8.51(dd,J＝5.3,3.2Hz,1H),8.15-8.08(m,1H),7.70(td,J＝5.4,1.7Hz,1H),7.10(d,J＝5.5Hz,1H),5.89-5.70(m,1H),5.12-4.96(m,2H),4.50-4.40(m,1H),3.64(dd,J＝9.6,6.7Hz,1H),3.40(t,J＝8.2Hz,1H),2.68-2.51(m,1H),2.29-2.14(m,1H),2.14-2.03(m,1H),1.97(ddt,J＝11.3,5.5,2.7Hz,1H),1.81-1.66(m,2H),1.54(d,J＝1.4Hz,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值692.11816，实测值693.4(M+1)+；保留时间：0.79分钟(LC方法T)。
步骤3：(15S)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(4-溴-2-吡啶基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(288.7mg，0.4163mmol)于乙腈(17.32mL)中的搅拌溶液中加入二乙酰氧基钯(28.04mg，0.1249mmol)，随后加入三邻甲苯基磷(76.03mg，0.2498mmol)和三乙胺(46.42μL，0.333mmol)，并且将溶液用氮气鼓泡1分钟，然后通过微波照射在150℃下加热2小时。将混合物冷却至室温，然后用EtOAc稀释，并且用饱和NH4Cl水溶液洗涤一次，并且用盐水洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成黄色油。将此油溶解于DCM/MeOH中，用硅藻土搅拌5分钟，然后经硅藻土垫过滤，用MeOH洗脱。将滤液浓缩成黄色泡沫的将所述黄色泡沫溶解于DCM(3mL)中并在室温下搅拌。加入TFA(1.282mL，16.64mmol)，并且将所得溶液在室温下搅拌4小时。将溶液通过旋转蒸发浓缩成残余物，然后溶解于DMSO中，过滤并通过反相HPLC(使用由菲罗门公司出售的Luna C18柱(75×30mm，5μm粒度)(型号：00C-4252-U0-AX)和在15.0分钟内50％至99％移动相B的双梯度运行)(移动相A＝H2O(5mM HCl)，移动相B＝乙腈，流速＝50毫升/分钟，注射体积＝950μL并且柱温＝25℃)进行纯化，从而得到呈淡黄色固体的(15S)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(非对映异构体的E/Z混合物)(94.1mg，44％)。ESI-MS m/z计算值512.1395，实测值513.3(M+1)+；保留时间：0.46分钟(LC方法T)。
步骤4：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体1)(盐酸盐)(化合物84)、(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体2)(盐酸盐)(化合物85)、(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体3)(盐酸盐)(化合物86)和(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体4)(盐酸盐)(化合物87)
向(15S)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(非对映异构体的E/Z混合物)(94mg，0.1834mmol)于乙醇(5.875mL)中的溶液中加入钯碳(58.55mg的10％w/w，0.05502mmol)，并且将氢气鼓泡通过溶液5分钟，然后将烧瓶用氢气球加盖，并且搅拌4小时。氮气鼓泡通过溶液5分钟，然后经硅藻土过滤，用甲醇洗脱，得到黄色溶液，将所述黄色溶液浓缩，以得到黄色固体，将所述黄色固体溶解于DMSO中，过滤并通过反相HPLC(使用由菲罗门公司出售的Luna C18柱(75X 30mm，5μm粒度)(型号：00C-4252-U0-AX)和在15.0分钟内50％至99％移动相B的双梯度运行)(移动相A＝H2O(5mM HCl)，移动相B＝乙腈，流速＝50毫升/分钟，注射体积＝950μL并且柱温＝25℃)进行纯化，以得到都呈淡黄色泡沫的4种异构体产物：
峰1：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体1)(盐酸盐)(5.4mg，4％)。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.4(M+1)+；保留时间：0.78分钟(LC方法M)。
峰2：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体2)(盐酸盐)(31.9mg，24％)。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.4(M+1)+；保留时间：0.85分钟(LC方法M)。
峰3：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体3)(盐酸盐)(5.8mg，5％)。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.4(M+1)+；保留时间：0.98分钟(LC方法M)。
峰4：(15R)-23-氨基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,8,19,24-五氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(异构体4)(盐酸盐)(22.1mg，16％)。ESI-MS m/z计算值514.1552，实测值515.4(M+1)+；保留时间：1.06分钟(LC方法M)。
假定每种产物为单一非对映异构体/阻转异构体组合。
实例47：(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物88)和(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物89)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[羟基(四氢吡喃-4-基)甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向四氢吡喃-4-甲醛(197.8mg，1.733mmol)于DCM(1.872mL)中的溶液中加入6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(180mg，0.4333mmol)，随后加入N-异氰亚氨基)三苯基磷(131mg，0.4333mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩并且通过色谱法(12克胺柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[羟基(四氢吡喃-4-基)甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，63％)。ESI-MS m/z计算值553.2512，实测值554.4(M+1)+；保留时间：0.72分钟(LC方法R)。
步骤2：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(四氢吡喃-4-羰基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[羟基(四氢吡喃-4-基)甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.2710mmol)于DCM(2.076mL)中的溶液中加入DMP(127.8mg，0.3013mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，并用饱和NaHCO3水溶液淬灭。用DCM(2X 25mL)萃取，将有机层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(四氢吡喃-4-羰基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(110mg，74％)。ESI-MS m/z计算值551.23553，实测值552.4(M+1)+；保留时间：0.88分钟(LC方法R)。
步骤3：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-羟基-1-四氢吡喃-4-基-戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(四氢吡喃-4-羰基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(56mg，0.1015mmol)于THF(1.3mL)中的冰浴冷却溶液中逐滴加入溴(丁-3-烯基)镁(670μL，0.5M，0.3350mmol)。将溶液搅拌20分钟，然后通过加入柠檬酸水溶液(101.4μL，1M，0.1014mmol)同时仍在冰浴中淬灭。将混合物用乙酸乙酯(2X 15mL)萃取，将有机层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-羟基-1-四氢吡喃-4-基-戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(20mg，32％)。ESI-MS m/z计算值607.29816，实测值608.5(M+1)+；保留时间：0.88分钟(LC方法R)。
步骤4：N-[(12S)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在100mL圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下在50℃下将DCE(17.5mL)中的经由N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(1-羟基-1-四氢吡喃-4-基-戊-4-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(35mg，0.05760mmol)的氮气线持续脱气的溶液加热。然后，通过注射器加入[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(8.9mg，0.0142mmol)于DCE(50mL)中的溶液。将所得混合物在60℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色半固体的N-[(12S)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(25mg，75％)。ESI-MS m/z计算值579.26685，实测值580.48(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法R)。
步骤5：N-[(12R)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[(12S)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(22mg，0.03796mmol)于AcOH(594μL)中的溶液中加入Pd/C(16mg，10％w/w，0.01503mmol)。将混合物用氮气冲洗，抽空并在氢气球下搅拌4小时。将反应混合物经二氧化硅塞过滤，用乙酸乙酯充分洗涤，并且然后将滤液浓缩，以产生呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(18mg，82％)。ESI-MS m/z计算值581.28253，实测值582.5(M+1)+；保留时间：0.85分钟(LC方法R)。
步骤6：(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物88)和(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物89)
向N-[(12R)-6-羟基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(15.00mg，0.02579mmol)于DCM(308.2μL)中的溶液中加入TFA(119.1μL，1.546mmol)，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩，然后通过手性SFC使用由手性技术公司出售并且用5％至15％MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的OD-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)进行纯化，产生了两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(4mg，32％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49(s,1H),4.14-4.00(m,1H),3.89(dd,J＝10.6,5.1Hz,2H),3.52(q,J＝8.6Hz,1H),3.37-3.22(m,3H),2.48(dtt,J＝9.1,6.0,2.9Hz,1H),2.12(ddt,J＝12.1,6.3,3.2Hz,1H),2.05-1.25(m,16H),0.90(ddd,J＝12.2,10.5,5.5Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值481.23007，实测值482.4(M+1)+；保留时间：3.02分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-(噁烷-4-基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(4mg，32％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49(s,1H),4.16-4.02(m,1H),3.89(dd,J＝10.6,5.1Hz,2H),3.52(q,J＝8.6Hz,1H),3.39-3.21(m,5H),2.48(dtt,J＝9.1,6.0,2.9Hz,1H),2.12(ddt,J＝12.1,6.3,3.2Hz,1H),2.06-1.29(m,14H),0.90(ddd,J＝12.2,10.5,5.5Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值481.23007，实测值482.4(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法A)。
实例48：(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物90)和(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物91)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-环丙基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(100mg，0.1465mmol)于甲苯(2.0mL)和水(0.2mL)中的溶液通过用氮气鼓泡脱气10分钟。向此混合物中加入磷酸钾(96mg，0.4523mmol)、三环己基膦四氟硼酸盐(11.4mg，0.0310mmol)、乙酸钯(II)(3.3mg，0.0147mmol)和环丙基硼酸(33mg，0.3842mmol)，然后将小瓶加盖，并在设置为100℃的油浴中加热21小时。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯(15mL)洗涤。将滤液转移到具有饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)的60mL已分离漏斗中，并用乙酸乙酯(2X 20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(约15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈琥珀色油的(12S)-6-(苄氧基)-18-环丙基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(69mg，85％)。ESI-MS m/z计算值555.20935，实测值556.2(M+1)+；保留时间：2.47分钟(LC方法W)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇
将(12S)-6-(苄氧基)-18-环丙基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(104mg，0.1872mmol)于甲醇(6mL)中的溶液在氮气下吹扫四次。加入10％钯碳(132mg，0.062mmol)，然后在氢气下吹扫三次。然后将反应在室温下剧烈搅拌6.5小时。加入更多10％钯碳(131mg，0.0615mmol)并搅拌另外6.5小时。在氮气下吹扫之后，将反应混合物经硅藻土过滤，用甲醇(40mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈荧光黄色泡沫状固体的(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(75mg，82％)。ESI-MS m/z计算值437.20386，实测值438.2(M+1)+；保留时间：2.17分钟(LC方法E)。
步骤3：(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物90)和(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物91)
通过手性SFC使用由手性技术公司出售的用10％至25％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的OD-H柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对外消旋(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(97mg，0.2217mmol)进行纯化，产生了两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(28.9mg，59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.51(s,1H),6.89(s,1H),5.82(s,2H),3.87(q,J＝8.0Hz,1H),3.76(d,J＝7.9Hz,1H),3.39(s,3H),2.27(d,J＝11.4Hz,1H),2.12(d,J＝7.9Hz,1H),2.03-1.83(m,3H),1.80-1.67(m,1H),1.49(t,J＝12.4Hz,6H),1.07(q,J＝9.7,7.6Hz,1H),0.99-0.88(m,1H),0.87-0.69(m,2H),0.62(dd,J＝9.6,5.5Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值437.20386，实测值438.0(M+1)+；保留时间：2.1分钟(LC方法D)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-环丙基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(29.0mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48(s,1H),6.89(s,1H),5.82(s,2H),4.11-3.72(m,2H),3.36(dd,J＝9.0,3.7Hz,1H),2.43-2.23(m,2H),2.15(dddd,J＝11.7,9.0,5.9,2.6Hz,1H),2.10-1.94(m,2H),1.90(ddt,J＝10.9,7.2,3.6Hz,1H),1.83-1.58(m,3H),1.58-1.28(m,5H),1.09(tdd,J＝9.2,5.9,3.8Hz,1H),1.01-0.81(m,2H),0.81-0.68(m,1H),0.62(dtd,J＝9.3,5.8,3.9Hz,1H)ppm。ESI-MSm/z计算值437.20386，实测值438.0(M+1)+；保留时间：2.1分钟(LC方法D)。
实例49：(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(化合物92)和(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(化合物93)的制备
步骤1：1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇
向5-溴-2-甲氧基苯甲醛(12.0g，55.8mmol)和Me3SiCF3(9.9mL，67mmol)于140mL的THF中的冰冷溶液中加入22.9mL的nBu4NF·H2O(THF中的1.0M，22.9mmol)。将金色溶液温热至环境温度并搅拌10小时。缓慢加入4.4M HCl水溶液(25.8mL，111.6mmol)。将混合物搅拌1小时，然后用30mL的EtOAc稀释，并且小心加入固体Na2CO3。一旦泡腾停止，就将溶液经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩成橙色含油残余物。通过硅胶色谱法(梯度洗脱，10:1至4:1己烷/EtOAc)对此材料进行纯化，得到呈无色油的1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇(4.8g，30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(d,J＝2.3Hz,1H),7.38(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),5.22(q,J＝6.8Hz,1H),3.77(s,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。
步骤2：1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮
向1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇(4.8g，16.84mmol)于DCM(168.4mL)中的溶液中加入TEMPO(大约131.6mg，0.842mmol)，随后加入PhI(OAc)2(大约10.85g,33.68mmol)。将反应在室温下搅拌过夜，然后用125mL的1M硫代硫酸钠溶液淬灭。将混合物分离，并将水层用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物合并并且浓缩至干燥。通过用0％至30％EtOAc/庚烷梯度洗脱的硅色谱法对粗材料进行纯化。将纯部分合并，并且浓缩，以得到1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮(3.8g，80％)，直接用于下一步。
步骤3：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在75℃下，向1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮(298.3mg，1.054mmol)和6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(250mg，0.5272mmol)于DMF(4.38mL)中的搅拌溶液中加入(N-异氰亚氨基)三苯基磷(378.6mg，1.252mmol)，并且将所得混合物加盖并且搅拌15分钟，然后冷却至室温。将混合物用EtOAc稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤一次，然后用饱和NH4Cl水溶液洗涤一次，并且用盐水洗涤一次。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成橙色油。将粗橙色油通过反相HPLC(使用由菲罗门公司出售的Luna C18柱(75×30mm，5μm粒度)(型号：00C-4252-U0-AX)和在15.0分钟内50％至99％移动相B的双梯度运行)(移动相A＝H2O(5mMHCl)，移动相B＝乙腈，流速＝50毫升/分钟，注射体积＝950μL并且柱温＝25℃)进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(230.7mg，61％)。ESI-MS m/z计算值721.1334，实测值724.4(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法T)。
步骤4：(15S)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(非对映异构体的E/Z混合物)
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(229.6mg，0.3178mmol)于乙腈(13.78mL)中的搅拌溶液中加入二乙酰氧基钯(21.4mg，0.09532mmol)，随后加入三邻甲苯基磷(58.04mg，0.1907mmol)和三乙胺(35.43μL，0.2542mmol)，并且将溶液用N2鼓泡1分钟，然后通过微波照射在150℃下加热2小时。将混合物冷却至室温，然后用硅藻土搅拌5分钟，并经硅藻土过滤，用EtOAc洗脱。将滤液用饱和NH4Cl水溶液洗涤一次，并且用盐水洗涤一次，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩成黄色固体，将所述黄色固体溶解于DCM(2.386mL)中，并且在室温下搅拌。加入TFA(979.1μL，12.71mmol)，并且将所得溶液在室温下搅拌1小时。将混合物用DCM稀释，并且用1N NaHCO3洗涤(注意：气体逸出)，然后将水相用DCM反萃取两次。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并浓缩成橙色糖浆。通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％ EtOAc平缓梯度对橙色粗材料进行纯化，从而得到(15S)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(非对映异构体的E/Z混合物)(55.5mg，32％)。ESI-MS m/z计算值541.15485，实测值542.4(M+1)+；保留时间：0.55分钟(LC方法T)。
步骤5：(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(化合物92)和(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(化合物93)
向(15S)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(非对映异构体的E/Z混合物)(55.5mg，0.1025mmol)于乙醇(3.469mL)中的溶液中加入钯碳(32.72mg的10％w/w，0.03075mmol)，并且将氢气鼓泡通过溶液5分钟，然后将烧瓶用氢气球加盖，并且搅拌1小时。加入钯碳(32.72mg的10％w/w，0.03075mmol)并在氢气下继续搅拌1小时。加入钯碳(32.72mg的10％w/w，0.03075mmol)，然后在100psi的氢压下搅拌50分钟。释放压力并用氮气回填，然后加入硅藻土并搅拌5分钟，然后经硅藻土垫过滤，用甲醇洗脱。将滤液浓缩，溶解于DMSO中，然后过滤。通过反相HPLC(使用由菲罗门公司出售的Luna C18柱(75×30mm，5μm粒度)(型号：00C-4252-U0-AX)和在15.0分钟内50％至99％移动相B的双梯度运行)(移动相A＝H2O(5mM HCl)，移动相B＝乙腈，流速＝50毫升/分钟，注射体积＝950μL并且柱温＝25℃)对材料进行纯化，得两种产物峰：
峰1仍受MW＝541杂质污染，因此将其通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％EtOAc平缓梯度进一步纯化，以得到呈黄色固体的(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(6.2mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(s,1H),8.04(d,J＝2.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.13(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.85(d,J＝8.3Hz,1H),6.14(s,2H),3.89-3.78(m,1H),3.60(s,3H),3.47(d,J＝8.1Hz,1H),3.17(t,J＝8.9Hz,1H),2.97(d,J＝14.6Hz,1H),2.44-2.36(m,1H),2.16(dt,J＝11.7,5.6Hz,1H),1.97-1.90(m,1H),1.89-1.82(m,2H),1.79(d,J＝6.6Hz,1H),1.60(t,J＝10.3Hz,1H),1.52(dt,J＝11.3,5.5Hz,1H),0.70(dd,J＝10.8,5.2Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值543.17053，实测值544.4(M+1)+；保留时间：1.09分钟(LC方法M)。
峰2分离为呈黄色固体的(15R)-23-氨基-8-甲氧基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(4.7mg，12％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.66(s,1H),7.64(s,1H),7.61(s,1H),7.20(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),6.98(d,J＝8.5Hz,1H),6.14(s,2H),3.82(dt,J＝9.5,5.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.47(q,J＝9.3,8.7Hz,1H),3.18(t,J＝8.8Hz,1H),2.97-2.89(m,1H),2.45(d,J＝3.0Hz,1H),2.15(dt,J＝12.0,5.9Hz,1H),1.96(dt,J＝7.9,4.0Hz,1H),1.85(q,J＝5.9Hz,2H),1.66(t,J＝12.5Hz,2H),1.52(dt,J＝11.2,5.7Hz,1H),0.73(dq,J＝11.1,6.0Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值543.17053，实测值544.4(M+1)+；保留时间：1.28分钟(LC方法M)。
实例50：17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体1)(化合物94)、17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体2)(化合物95)、17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体3)(化合物96)和17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体4)(化合物97)的制备
步骤1：6-(1-乙氧基羰基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在20mL密封小瓶中，在室温下将6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(725mg，2.68mmol)溶解于乙腈(7.25mL)和DMSO(7.25mL)中，随后加入DIEA(2.75mL，15.79mmol)和2-氨基己-5-烯酸乙酯(850mg，5.407mmol)，并且然后将混合物搅拌18小时。将反应浓缩，并且然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度，随后使用100％ DCM至20％甲醇/DCM梯度对粗材料进行纯化，以得到呈深橙色泡沫的6-(1-乙氧基羰基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(757mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.20(s,1H),8.51(s,1H),8.07(d,J＝7.1Hz,1H),5.80(ddt,J＝16.6,10.4,6.1Hz,1H),5.04-4.93(m,2H),4.64(ddd,J＝9.1,7.0,4.2Hz,1H),4.09(qd,J＝7.1,2.3Hz,2H),2.19-2.08(m,2H),2.08-1.91(m,2H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值391.09912，实测值392.2(M+1)+；保留时间：1.53分钟(LC方法A)。
步骤2：2-[[6-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯
向冷却至0℃的6-(1-乙氧基羰基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(52mg，0.1329mmol)于NMP(3.5mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(盐酸盐)(53mg，0.1632mmol)，随后加入HATU(65mg，0.1709mmol)。然后，加入DIEA(150μL，0.8612mmol)并且将反应混合物搅拌，使其温热至室温18小时。将反应用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法使用100％DCM至20％甲醇/DCM梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色泡沫的2-[[6-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯(42.6mg，48％)。ESI-MSm/z计算值661.19714，实测值662.2(M+1)+；保留时间：1.57分钟(LC方法J)。
步骤3：2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯
将2-[[6-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯(573mg，0.8661mmol)和DIEA(500μL，2.871mmol)于乙腈(18mL)中的溶液加热至50℃，然后将对甲苯磺酰氯(250mg，1.311mmol)一份加入。将所得混合物在70℃下加热90分钟。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)淬灭，并搅拌15分钟。然后将有机材料用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色固体的2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯(400mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),8.31(t,J＝7.3Hz,1H),7.35(d,J＝3.5Hz,5H),5.94-5.72(m,2H),5.38(dt,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.25(dt,J＝10.4,1.5Hz,1H),4.99-4.89(m,2H),4.80(d,J＝10.6Hz,1H),4.63(td,J＝9.4,8.9,2.7Hz,1H),4.53(dd,J＝10.5,1.6Hz,1H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),3.31(s,1H),2.49-2.45(m,1H),2.10(td,J＝9.4,7.7,4.9Hz,3H),2.03-1.94(m,1H),1.04(td,J＝7.1,2.2Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值643.1865，实测值644.2(M+1)+；保留时间：1.92分钟(LC方法J)。
步骤4：6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-12-甲酸乙酯(E/Z混合物)
在250mL圆底烧瓶中，将经由詹氏1B(110mg，0.1499mmol)的氮气线持续脱气的溶液溶解于DCE(200mL)中，并且将混合物在氮气气氛下加热至50℃。然后，通过注射器加入2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]己-5-烯酸乙酯(400mg，0.6216mmol)于DCE(10mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热2小时。将残余物浓缩并且通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈米白色固体的6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-12-甲酸乙酯(E/Z混合物)(315mg，82％)。ESI-MS m/z计算值615.1553，实测值616.2(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法J)。
步骤5：17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯
在50mL圆底烧瓶中，将6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-12-甲酸乙酯(E/Z混合物)(45mg，0.07311mmol)于AcOH(780μL)和乙酸乙酯(800μL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(78mg的10％w/w，0.07329mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1大气压的氢气下搅拌4小时。将反应过滤，并且通过硅胶色谱法使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对材料进行纯化，以得到呈黄色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(32mg，88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.68(d,J＝1.7Hz,1H),7.58(d,J＝3.4Hz,1H),6.15(d,J＝6.7Hz,2H),5.60(t,J＝5.1Hz,1H),4.45-4.29(m,1H),4.22(dddd,J＝17.9,10.8,7.1,3.7Hz,2H),2.29(ddt,J＝24.4,14.2,8.1Hz,2H),2.14-2.02(m,1H),1.81(dt,J＝13.9,7.7Hz,1H),1.62(s,3H),1.43(dt,J＝20.9,7.9Hz,3H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值497.14978，实测值498.2(M+1)+；保留时间：1.32分钟(LC方法J)。
步骤6：17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体1)(化合物94)、17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体2)(化合物95)、17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体3)(化合物96)和17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体4)(化合物97)
外消旋17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(32mg，0.06434mmol)通过正常相SFC使用由手性技术公司出售的IC柱(250×10mm，5μm粒度)(型号：83445)和12％ MeOH[+20mM NH3]/88％ CO2的等度运行，以10毫升/分钟的流速(注射体积＝70μL的22mg/mL浓度/不含改性剂的MeOH，柱温＝40℃)进行纯化，以分离三种单独部分(对映异构体1、一起洗脱的对映异构体2和3，以及对映异构体4)。然后将对映异构体2和3通过正常相SFC使用由菲罗门公司出售的LUX-4柱(250×10mm，5μm粒度)(型号：00G-4491-P0-AX)和10％ MeOH[+20mM NH3]/90％ CO2的等度运行，以10毫升/分钟的流速(注射体积＝70μL的12mg/mL浓度/不含改性剂的MeOH，柱温＝40℃)进行纯化。从这两个SFC纯化中分离出四种单独的对映异构体：
对映异构体1：黄色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体1)(3.1mg，38％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),5.77-5.63(m,1H),4.43(dd,J＝9.4,3.9Hz,1H),4.30(qd,J＝7.1,5.2Hz,2H),3.74(d,J＝51.8Hz,2H),3.50(s,1H),2.50-2.40(m,2H),2.21-2.12(m,1H),1.85(ddt,J＝10.4,6.9,3.6Hz,1H),1.77-1.65(m,3H),1.53-1.40(m,3H),1.36(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值497.14978，实测值498.1(M+1)+；保留时间：1.92分钟(LC方法A)。
对映异构体2：黄色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体2)(1.2mg，15％)。ESI-MS m/z计算值497.14978，实测值498.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
对映异构体3：黄色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体3)(1.5mg，19％)。ESI-MS m/z计算值497.14978，实测值498.1(M+1)+；保留时间：1.92分钟(LC方法A)。
对映异构体4：黄色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸乙酯(对映异构体4)(3.1mg，38％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.42-7.32(m,1H),5.65(d,J＝3.9Hz,1H),5.07(s,2H),4.39(dt,J＝9.7,3.5Hz,1H),4.34-4.22(m,2H),3.77(s,1H),2.51(ddt,J＝10.5,7.4,3.1Hz,1H),2.36(t,J＝12.4Hz,1H),2.30-2.20(m,1H),2.03-1.89(m,1H),1.75(ddt,J＝17.9,12.0,6.0Hz,3H),1.58-1.45(m,3H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值497.14978，实测值498.1(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法A)。
实例51：(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物98)和(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物99)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-(二甲基磷酰基)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
向(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)(120mg，0.2126mmol)、二甲基氧化膦(50mg，0.6406mmol)、Xantphos(13mg，0.0225mmol)和磷酸三钾(160mg，0.7538mmol)于脱气N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的悬浮液中加入乙酸钯(II)(5mg，0.0223mmol)。将混合物加热至120℃过夜。冷却至室温后，将混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释并通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并用二甲基亚砜(3mL)稀释。通过反相HPLC使用5％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得混合物进行纯化，从而得到呈黄色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-18-(二甲基磷酰基)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(20mg，17％)。ESI-MS m/z计算值561.2117，实测值562.2(M+1)+；保留时间：2.32分钟(LC方法W)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇
将(12S)-6-(苄氧基)-18-(二甲基磷酰基)-20-氨基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(20mg，0.0338mmol)于甲醇(1mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入5％钯碳(22mg，0.0103mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得混合物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(9mg，50％)。ESI-MS m/z计算值473.1804，实测值474.2(M+1)+；保留时间：3.08分钟(LC方法C)。
步骤3：(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物98)和(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物99)
通过SFC使用由菲罗门公司出售并且用30％至50％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(8.2mg，0.01732mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(2.7mg，33％)。ESI-MS m/z计算值473.18036，实测值474.0(M+1)+；保留时间：2.33分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(二甲基磷酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(0.9mg，11％)。ESI-MS m/z计算值473.18036，实测值474.0(M+1)+；保留时间：2.31分钟(LC方法A)，
实例52：(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物100)和(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物101)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(2-苄氧基-1-羟基-乙基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向2-苄氧基乙醛(355.7μL，2.532mmol)于DCM(2.735mL)中的溶液中加入6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(263mg，0.6331mmol)，随后加入N-异氰亚氨基)三苯基磷(191.4mg，0.6331mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩并且通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％ EtOAc/己烷梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(2-苄氧基-1-羟基-乙基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，80％)。ESI-MS m/z计算值589.2512，实测值590.4(M+1)+；保留时间：0.87分钟(LC方法R)。
步骤2：N-(2-{5-[2-(苄氧基)乙酰基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-6-[(2S)-2-(丙-2-烯-1-基)吡咯烷-1-基]-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-(2-苄氧基-1-羟基-乙基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.3892mmol)于DCM(3.176mL)中的溶液中加入DMP(215.9mg，0.509mmol)，并且将混合物搅拌15分钟。将反应用饱和NaHCO3水溶液淬灭。并且用DCM(2X 25mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈橙色固体的N-(2-{5-[2-(苄氧基)乙酰基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-6-[(2S)-2-(丙-2-烯-1-基)吡咯烷-1-基]-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，79％)。ESI-MS m/z计算值587.23553，实测值588.4(M+1)+；保留时间：0.92分钟(LC方法R)。
步骤3：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(苄氧基甲基)-1-羟基-戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-(2-{5-[2-(苄氧基)乙酰基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-6-[(2S)-2-(丙-2-烯-1-基)吡咯烷-1-基]-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.3063mmol)于THF(4.0mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且逐滴加入溴(丁-3-烯基)镁(2.02mL的0.5M，1.010mmol)，并且将溶液搅拌20分钟。将反应通过加入柠檬酸(306μL，1M，0.306mmol)同时仍在冰浴中淬灭，并用乙酸乙酯(2X 15mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％ EtOAc/己烷梯度进行纯化，得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(苄氧基甲基)-1-羟基-戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，30％)。ESI-MS m/z计算值643.29816，实测值644.5(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法T)。
步骤4：N-[(12S)-6-[(苄氧基)甲基]-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在100mL圆底3颈烧瓶中，在氮气气氛下将DCE(30.0mL)中的经由N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[1-(苄氧基甲基)-1-羟基-戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.09321mmol)的氮气线持续脱气的溶液加热至50℃。然后，通过注射器加入[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(14.40mg，0.02298mmol)于DCE(5mL)中的溶液。将所得混合物在60℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色半固体的N-[(12S)-6-[(苄氧基)甲基]-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(22mg，38％)。ESI-MS m/z计算值615.26685，实测值616.5(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法T)。
步骤5：N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)和N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)
向N-[(12S)-6-[(苄氧基)甲基]-6-羟基-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(25mg，0.04061mmol)于AcOH(432.0μL)中的溶液中加入Pd/C(11.07mg，10％w/w，0.0104mmol)。将混合物在室温下在氢气气球下搅拌4小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯充分洗涤，并且然后将滤液浓缩。在20分钟内通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至20％ EtOAc/己烷梯度进行纯化，得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(9mg，42％)。ESI-MS m/z计算值527.23553，实测值528.4(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法R)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(9mg，42％)。ESI-MS m/z计算值527.23553，实测值528.4(M+1)+；保留时间：0.66分钟(LC方法R)。
步骤6：(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物100)
向N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(9mg，0.01706mmol)于DCM(82.2μL)中的溶液中加入TFA(35.01μL，0.4544mmol)，并且将混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层分离，并且经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(5mg，65％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.67(s,1H),4.20-4.12(m,1H),3.91(dd,J＝94.4,11.6Hz,2H),3.70-3.60(m,1H),3.42(s,1H),2.58(s,1H),2.30-2.19(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.88-1.80(m,1H),1.71-1.60(m,3H),1.59-1.48(m,3H),1.03-0.87(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值427.18314，实测值428.3(M+1)+；保留时间：1.76分钟(LC方法A)。
步骤7：(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物101)
向N-[(12R)-6-羟基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(8.5mg，0.01611mmol)于DCM(174.7μL)中的溶液中加入TFA(74.39μL，0.9656mmol)，并且将混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-(羟基甲基)-18-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(5mg，69％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.70(s,1H),4.11(t,J＝7.1Hz,1H),3.89(dd,J＝79.9,10.7Hz,2H),3.65(s,1H),3.43(d,J＝9.3Hz,1H),2.66(d,J＝10.2Hz,1H),2.43(dd,J＝12.5,10.1Hz,1H),2.31-2.16(m,1H),2.02(ddt,J＝10.0,6.7,3.3Hz,1H),1.92-1.71(m,3H),1.70-1.58(m,5H),0.95(td,J＝11.3,9.4,5.1Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值427.18314，实测值428.3(M+1)+；保留时间：1.74分钟(LC方法A)。
实例53：17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物102)、17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物103)、17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物104)和17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物105)的制备
步骤1：2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯-1-醇
在20mL小瓶中，在室温下将[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(350mg，0.5381mmol)溶解于乙腈(6mL)中，随后加入2-氨基戊-4-烯-1-醇(盐酸盐)(225mg，1.635mmol)，然后加入DIEA(500μL，2.871mmol)，并且然后将混合物搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对材料进行纯化，以得到呈黄色固体的2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯-1-醇(180mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),7.51(d,J＝7.9Hz,1H),7.43-7.28(m,5H),5.85(ddt,J＝16.8,10.2,6.5Hz,1H),5.78-5.63(m,1H),5.10(dq,J＝17.2,1.7Hz,1H),5.05-4.97(m,2H),4.92(ddd,J＝10.4,8.1,3.5Hz,2H),4.76(dd,J＝11.0,1.5Hz,1H),4.60(d,J＝10.7Hz,1H),4.44(s,1H),3.55(dtd,J＝16.3,11.0,5.6Hz,2H),2.58-2.51(m,2H),2.38(t,J＝6.7Hz,2H),2.30-2.17(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值601.17596，实测值602.2(M+1)+；保留时间：1.69分钟。稍后洗脱的邻位连接的区域异构副产物(LC方法J)。
步骤2：[6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]甲醇
在150mL烧瓶中，将0.25当量的詹氏催化剂1B，二氯[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)2-咪唑烷基亚基][[5-[(二甲基氨基)磺酰]-2-(1-甲基乙氧基-O)苯基]亚甲基-C]钌(II)(53mg，0.07223mmol)溶解于DCE(100mL)中。然后，通过注射器加入2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯-1-醇(190mg，0.3159mmol)于DCE(5mL)中的溶液。将所得混合物加热至70℃持续2小时。将残余物浓缩并且通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至75％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈棕黄色固体的[6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]甲醇(58mg，32％)。ESI-MS m/z计算值573.1447，实测值574.0(M+1)+；保留时间：1.4分钟(LC方法J)。
步骤3：17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
在50mL圆底烧瓶中，将[6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]甲醇(58mg，0.1011mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(110mg的10％w/w，0.1034mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌6小时。将反应过滤，并且通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对材料进行纯化，以得到未完全分离的两个峰。因此，4种立体异构体的合并混合物一起浓缩，从而得到黄色固体的17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(34.5mg，75％)。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.46分钟(LC方法A)。
步骤4：17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物102)、17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物103)、17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物104)和17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物105)
使外消旋17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(31mg，0.06808mmol)经受两种单独的SFC纯化，以溶解所有四种单一对映异构体。第一制备型分离使用正常相SFC方法使用由菲罗门公司出售的菲罗门LUX-4柱(250X 10mm，5μm粒度)(型号：00G-4491-P0-AX)和12％ MeOH[+20mM NH3]/88％ CO2的等度运行(流速＝10毫升/分钟，注射体积＝70μL的22mg/mL浓度/不含改性剂的MeOH，并且柱温＝35℃)，从而分解了对映异构体1(与杂质共洗脱)、对映异构体2、对映异构体3和对映异构体4。第二制备型正常相SFC分离使用由手性柱公司(ChiralCel)出售的ChiralCel OJ柱(250X 10mm，5μm粒度)(型号：17335)和10％ MeOH[+20mM NH3]/90％ CO2的等度运行(流速＝10毫升/分钟，注射体积＝70μL的12mg/mL浓度/不含改性剂的MeOH，并且柱温＝35℃)，从而分解了对映异构体1。上述纯化条件导致以下所述的所有四种单一对映异构体的分离：
对映异构体1被分离成黄色固体的17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(0.9mg，12％)。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.41分钟(LC方法A)。
对映异构体2被分离成黄色固体的17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(1.7mg，22％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.53(s,1H),5.26(s,1H),3.85(dd,J＝11.0,3.3Hz,1H),3.73(td,J＝7.1,3.5Hz,1H),3.61(ddd,J＝11.1,7.4,2.1Hz,1H),2.50-2.43(m,1H),2.38(d,J＝12.9Hz,1H),2.14(ddd,J＝14.7,9.9,6.3Hz,1H),1.87-1.71(m,2H),1.64(q,J＝8.1,7.3Hz,1H),1.59-1.45(m,3H),1.29(s,1H),1.19-1.11(m,1H),0.91(dd,J＝16.8,10.6Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.51分钟(LC方法A)。
对映异构体3被分离成黄色固体的17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(2.2mg，28％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.53(d,J＝0.8Hz,1H),5.27(s,1H),3.86(dd,J＝10.9,3.1Hz,1H),3.70-3.63(m,1H),3.60(ddd,J＝10.9,7.7,2.0Hz,1H),2.52(td,J＝10.8,9.7,4.4Hz,1H),2.45-2.35(m,1H),2.13-2.03(m,1H),1.69(dt,J＝9.8,4.8Hz,2H),1.60(d,J＝6.2Hz,3H),1.56-1.49(m,1H),1.29(s,1H),1.06(d,J＝10.4Hz,1H),0.97-0.80(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.42分钟(LC方法A)。
对映异构体4被分离成黄色固体的17-氨基-12-(羟基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(1.9mg，24％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.33(s,1H),5.09(s,2H),3.96(d,J＝7.5Hz,1H),3.71(d,J＝8.0Hz,2H),2.52(dt,J＝14.4,7.7Hz,1H),2.33(t,J＝12.3Hz,1H),2.29-2.18(m,1H),1.99(d,J＝10.5Hz,1H),1.62(d,J＝7.4Hz,2H),1.56-1.50(m,2H),1.26(s,2H),1.21(d,J＝6.1Hz,1H),1.15(dd,J＝14.0,7.3Hz,1H),0.92-0.82(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.52分钟(LC方法A)。
实例54：18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体1)(化合物106)和18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体2)(化合物107)的制备
步骤1：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(6mg，0.009225mmol)于二噁烷中的混合物中加入氨(184μL的0.5M，0.092mmol)，随后加入THF(0.4mL)，并且将混合物在50℃下搅拌90分钟。将混合物用EtOAc稀释，用水然后用盐水洗涤，经(MgSO4)干燥，过滤并蒸发，以产生6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(4.3mg，90％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.63(s,1H),8.33(s,2H),7.42-7.29(m,5H),5.92(s,1H),5.79(ddd,J＝20.3,10.1,3.7Hz,1H),5.15-4.94(m,1H),4.80(d,J＝10.6Hz,1H),4.73-4.56(m,1H),2.65-2.04(m,4H)ppm；19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-64.72,-73.14ppm。ESI-MS m/z计算值517.11847，实测值518.1(M+1)+；保留时间：0.75分钟(LC方法S)。
步骤2：N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]戊-4-烯酰胺
在二氯甲烷(1.2mL)中加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(59mg，0.114mmol)、DIPEA(60μL，0.3445mmol)和DMAP(114μL的0.25M，0.0285mmol)。向此混合物中加入戊-4-烯酰氯(131μL的1M，0.131mmol)，作为冰浴冷却的DCM中的溶液。然后，将溶液在室温下搅拌30分钟，并且将混合物用1M NaHCO3水溶液、0.5M HCl水溶液、水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(4g柱，在15分钟内0％至25％ EtOAc/己烷梯度)对粗残余物进行纯化，以产生N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]戊-4-烯酰胺(69.5mg，定量)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.68(s,1H),7.99(s,1H),7.43-7.28(m,5H),6.00-5.73(m,2H),5.17-4.97(m,4H),4.84(d,J＝10.7Hz,1H),4.65(d,J＝10.6Hz,1H),2.99(t,J＝7.3Hz,2H),2.61-2.12(m,6H)ppm；19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.60,-73.06ppm。ESI-MS m/z计算值599.16034，实测值600.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法Q)。
步骤3：6-苄氧基-18-硝基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(18),2,4,9,15(19),16-六烯-13-酮(E/Z混合物)
在密封的20mL小瓶中，将N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]戊-4-烯酰胺(55mg，0.09175mmol)和1,3-双(邻甲苯基)-4,5-二氢咪唑；二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(8mg，0.01402mmol)于甲苯(8mL)中的溶液用N2鼓泡1分钟，并且然后在120℃下加热45分钟，并且然后将溶剂蒸发。通过硅胶色谱法(12g柱，在15分钟内0％至25％ EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生6-苄氧基-18-硝基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(18),2,4,9,15(19),16-六烯-13-酮(E/Z混合物)(32.6mg，62％)。ESI-MS m/z计算值571.129，实测值572.1(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法S)。
步骤4：18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体1)(化合物106)和18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体2)(化合物107)
将6-苄氧基-18-硝基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(18),2,4,9,15(19),16-六烯-13-酮(E/Z混合物)(32.6mg，0.05705mmol)和钯碳(18mg的10％w/w，0.01691mmol)于AcOH(700μL)中的混合物在不锈钢压力容器中的200psi氢气下在室温下搅拌18小时。然后，将混合物过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(4g柱，在15分钟内0％至35％ EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生外消旋18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮。将此材料溶解于1:1乙腈/甲醇中，并且通过制备型SFC(用甲醇(5mM NH3)/CO2(在10分钟内20％至45％)的梯度洗脱)，通过21.2X250mm LUX-4柱(5μm粒度)进行纯化，从而产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈白色结晶固体的18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体1)(6.9mg，27％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.51(s,2H),5.92(s,2H),3.90(s,1H),2.69-2.48(m,2H),2.30(td,J＝13.1,11.7,4.1Hz,1H),2.19(dq,J＝15.1,6.1,4.9Hz,2H),2.02-1.77(m,2H),1.56-1.32(m,4H),0.99-0.78(m,1H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.85,-79.25ppm。ESI-MS m/z计算值453.12357，实测值454.1(M+1)+；保留时间：1.07分钟(LC方法Q)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈白色结晶固体的18-氨基-6-羟基-6,16-双(三氟甲基)-20-氧杂-3,4,14,19-四氮杂三环[13.3.1.12,5]二十-1(19),2,4,15,17-五烯-13-酮(对映异构体2)(7.2mg，28％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.54(s,1H),7.51(s,1H),5.94(s,2H),4.10(s,1H),2.57(dtd,J＝24.0,12.0,5.5Hz,2H),2.30(td,J＝13.1,11.9,3.3Hz,1H),2.23-2.12(m,2H),1.92(d,J＝32.4Hz,1H),1.72-1.30(m,6H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.85,-79.25ppm。ESI-MS m/z计算值453.12357，实测值454.1(M+1)+；保留时间：1.07分钟(LC方法Q)。
实例55：17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体1)(化合物108)和17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体2)(化合物109)的制备
步骤1：N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]丁-3-烯酰胺
在二氯甲烷(2mL)中加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(100mg，0.1933mmol)、DIPEA(102μL，0.5856mmol)和DMAP(193μL的0.25M，0.04825mmol)。向此混合物中加入丁-3-烯酰氯(232μL的1M，0.232mmol)作为冰浴冷却的DCM中的溶液。在0℃下搅拌15分钟后，加入更多丁-3-烯酰氯(116μL的1M，0.116mmol)。在0℃下搅拌15分钟后，加入更多丁-3-烯酰氯(145μL的1M，0.145mmol)。在0℃下搅拌另外15分钟后，将混合物用DCM稀释，并且用1M NaHCO3水溶液、0.5M HCl水溶液、水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(4g柱，在15分钟内0％至25％EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]丁-3-烯酰胺(24mg，21％)。ESI-MS m/z计算值585.1447，实测值586.2(M+1)+；保留时间：1.53分钟(LC方法J)。
步骤2：6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体1)和6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体2)
在密封的20mL小瓶中，将N-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]丁-3-烯酰胺(23.4mg，0.03997mmol)和1,3-双(邻甲苯基)-4,5-二氢咪唑；二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(4.5mg，0.007888mmol)于甲苯(3.5mL)中的溶液用N2鼓泡1分钟，并且然后在120℃下加热45分钟。加入更多催化剂，1,3-双(邻甲苯基)-4,5-二氢咪唑；二氯-[(2-异丙氧基苯基)亚甲基]钌(4.5mg，0.007888mmol)，并且在120℃下加热30分钟，并且然后将溶剂蒸发。通过硅胶色谱法(12g柱，在20分钟内0％至20％ EtOAc/己烷)对残余物进行纯化，以产生两种异构体产物。
待洗脱的第一异构体分离为6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体1)(6.6mg，15％)ESI-MS m/z计算值557.1134，实测值558.0(M+1)+；保留时间：1.35分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二异构体分离为6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体2)(2.4mg，8％)ESI-MS m/z计算值557.1134，实测值558.1(M+1)+；保留时间：1.29分钟(LC方法J)。
步骤3：17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体1)(化合物108)和17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体2)(化合物109)
反应1：将6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体1)(6.6mg，0.006157mmol)和钯碳(3.2mg的10％w/w，0.003007mmol)加入到AcOH(200μL)中，并且将混合物在不锈钢压力容器中的200psi H2下在室温下搅拌18小时。然后，将混合物过滤，并将滤液蒸发。
反应2：将6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-酮(异构体2)(2.4mg，0.003014mmol)和钯碳(3.2mg的10％w/w，0.003007mmol)加入到AcOH(200μL)中，并且将混合物在不锈钢压力容器中的200psi H2下在室温下搅拌18小时。然后，将混合物过滤，并将滤液蒸发。
将来自反应1和反应2的粗产物合并，并且通过硅胶色谱法(4g柱，在20分钟内0％至35％ EtOAc/己烷)对所得残余物进行纯化，以产生2.4mg的外消旋17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮。将此材料溶解于1:1乙腈/甲醇中，并且通过制备型SFC(用甲醇(5mM NH3)/CO2(在10分钟内20％至45％)的梯度洗脱)，通过21.2X250mm LUX-4柱(5μm粒度)进行纯化，从而产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈白色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体1)(1.1mg，41％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61(s,1H),7.49(s,1H),5.63(s,2H),3.91-3.32(m,1H),2.89(td,J＝11.9,3.9Hz,1H),2.41(dtd,J＝14.5,11.2,9.8,4.8Hz,2H),2.23(ddt,J＝16.3,12.9,7.7Hz,2H),2.04(q,J＝4.2Hz,1H),1.87-1.71(m,1H),1.65(d,J＝24.3Hz,1H),1.48(s,1H),0.87(dd,J＝11.5,4.4Hz,1H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.71,-79.79ppm。ESI-MS m/z计算值439.1079，实测值440.1(M+1)+；保留时间：1.02分钟(LC方法Q)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈白色固体的17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-酮(对映异构体2)(1.2mg，44％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.61(s,1H),7.49(s,1H),5.63(s,2H),3.65(s,1H),2.99-2.81(m,1H),2.41(ddt,J＝19.2,9.8,4.8Hz,2H),2.23(ddt,J＝16.5,12.9,7.7Hz,2H),2.12-1.96(m,1H),1.84-1.71(m,1H),1.66-1.60(m,1H),1.50-1.35(m,1H),0.95-0.74(m,1H)ppm。19F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.71,-79.79ppm。ESI-MS m/z计算值439.1079，实测值440.2(M+1)+；保留时间：1.01分钟(LC方法Q)。
实例56：20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体1)(化合物110)、20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体2)(化合物111)、20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体3)(化合物112)和20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体4)(化合物113)的制备
步骤1：3-烯丙基-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物
将4,5-二氢异噻唑1,1-二氧化物(150mg，1.1331mmol)溶解于四氢呋喃(7.5mL)中。将混合物冷却至0℃，并且然后在氮气气氛下在0℃下加入烯丙基(氯)镁(四氢呋喃中的3mL的2M，6mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。一经消耗亚胺中间物(TLC/染色KMnO4)，就将反应在0℃下冷却，并且然后用饱和NH4Cl(20mL)淬灭。将所得混合物搅拌10分钟，并且然后用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度对粗材料进行纯化，以产生呈淡黄色油的3-烯丙基-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物(90mg，49％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.88-5.67(m,1H),5.27-5.14(m,2H),4.22(br s.,1H),3.78-3.60(m,1H),3.29-3.06(m,2H),2.62-2.45(m,1H),2.38(t,J＝6.8Hz,2H),2.14(dq,J＝13.5,8.6Hz,1H)ppm。ESI-MSm/z计算值161.051，实测值162.1(M+1)+；保留时间：0.89分钟(LC方法E)。
步骤2：3-烯丙基-2-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物
在0℃下将氢化钠(矿物油中的60％，142mg，3.5503mmol)加入到DMF(21mL)中的3-烯丙基-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物(620mg，3.8456mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。将悬浮液冷却至0℃，并且加入DMF(13mL)中的[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(2.1g，3.2286mmol)，并且将混合物在0℃下搅拌30分钟。加入水(40mL)和乙酸乙酯(30mL)，并且将相分离。将水相用乙酸乙酯(2X 30mL)萃取。将有机相合并，用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过用0％至40％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(80g柱)对所得残余物进行纯化，以得到呈黄色胶的3-烯丙基-2-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物(1.4g，65％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),7.43-7.29(m,5H),5.89-5.55(m,2H),5.15-4.95(m,4H),4.89-4.80(m,1H),4.69-4.61(m,1H),3.49-3.38(m,1H),3.17-3.01(m,1H),2.73-2.59(m,1H),2.58-2.16(m,8H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-59.63(s,3F),-73.09(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值661.143，实测值662.2(M+1)+；保留时间：2.32分钟(LC方法E)。
步骤3：6-苄氧基-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯15,15-二氧化物(E/Z混合物)
将二氯乙烷(168mL)中的詹氏催化剂1B(133mg，0.1813mmol)通过氮气鼓泡脱气，并且加热至60℃。然后在1小时内逐滴加入二氯乙烷(168mL)中的3-烯丙基-2-[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,2-噻唑烷1,1-二氧化物(1.05g，1.5871mmol)。将所得混合物加热至75℃并搅拌5小时。将混合物冷却并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈绿色固体的6-苄氧基-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯15,15-二氧化物(E/Z混合物)(195mg，19％)。ESI-MS m/z计算值633.1117，实测值634.2(M+1)+；保留时间：2.3分钟(LC方法E)。
步骤4：20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对1)和20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对2)
将6-苄氧基-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,9,17(21),18-六烯15,15-二氧化物(E/Z混合物)(30mg，0.0426mmol)溶解于甲醇(3mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(10％，湿润)(20mg，0.0094mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)(用0％至80％乙酸乙酯/庚烷洗脱)对残余物进行纯化，以得到两种不同的非对映异构体产物：
待洗脱的第一产物分离为呈黄色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对1)(4mg，18％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.72(s,1H),4.69-4.52(m,1H),3.46-3.35(m,1H),3.28
-3.18(m,2H),2.72-2.55(m,1H),2.36-2.17(m,2H),2.14-2.02(m,1H),1.97
-1.68(m,3H),1.66-1.44(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,CD3OD)δ-60.96(s,3F),-81.11(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：1.9分钟(LC方法E)。
待洗脱的第二产物分离为呈黄色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对2)(4mg，18％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.45(s,1H),5.68(br s,2H),4.70-4.56(m,1H),4.49-4.37(m,1H),3.66-3.57(m,1H),3.38-3.04(m,3H),2.62-1.99(m,6H),1.94-1.59(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-59.90(s,3F),-78.75(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：1.9分钟(LC方法E)。
步骤5：20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体1)(化合物110)、20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体2)(化合物111)、20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体3)(化合物112)和20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体4)(化合物113)
将20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对1)和20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(非对映异构体对2)的混合物(121mg，0.235mmol)通过硅胶柱色谱法(12g柱)(用0％至20％然后至60％乙酸乙酯/庚烷洗脱)进行纯化，随后通过硅胶柱色谱法(12g柱)(用0％至20％至60％乙酸乙酯/庚烷洗脱)再次纯化混合的部分，以得到两种非对映异构体对产物。
将第一非对映异构体对通过手性SFC(纤维素5柱；20％甲醇/CO2；流动＝75毫升/分钟；40℃)进行纯化，以分离对映异构体，以得到两个产物作为单一对映异构体。
第一对映异构体分离为呈米白色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体1)(14mg，11％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.79(s,1H),7.66(s,1H),6.96(br.s,2H),4.52-4.38(m,1H),3.54-3.41(m,1H),3.27-3.18(m,1H),2.21-2.05(m,2H),2.02-1.88(m,1H),1.79-1.67(m,2H),1.63-1.37(m,4H),1.27-1.02(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-58.50(s,3F),-78.49(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：2.93分钟(LC方法C)。
第二对映异构体分离为呈米白色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体2)(12mg，10％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.79(s,1H),7.66(s,1H),6.96(br.s.,2H),4.52-4.38(m,1H),3.53-3.41(m,1H),3.27-3.18(m,1H),2.20-2.08(m,2H),2.03-1.90(m,1H),1.78-1.67(m,2H),1.63-1.37(m,4H),1.25-1.03(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-58.50(s,3F),-78.49(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：2.93分钟(LC方法C)。
将第二非对映异构体对通过手性SFC(直链淀粉1柱；10％甲醇/CO2；流动＝75毫升/分钟；40℃)进行纯化，以分离对映异构体，以得到两个产物作为单一对映异构体。
第一对映异构体分离为呈米白色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体3)(12mg，9％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.78(s,1H),7.61(s,1H),6.87(br.s.,2H),4.72-4.58(m,1H),3.58-3.46(m,1H),3.26-3.20(m,1H),2.69-2.56(m,1H),2.18-2.01(m,3H),1.70-1.57(m,2H),1.53-1.40(m,3H),1.36-1.19(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-58.16(s,3F),-77.49(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：2.93分钟(LC方法C)。
第二对映异构体分离为呈米白色固体的20-氨基-6-羟基-6,18-双(三氟甲基)-22-氧杂-15λ6-硫杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-15,15-二酮(对映异构体4)(10mg，8％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.78(s,1H),7.61(s,1H),6.87(br.s.,2H),4.72-4.58(m,1H),3.59-3.46(m,1H),3.26-3.19(m,1H),2.68-2.57(m,1H),2.16-2.00(m,3H),1.72-1.57(m,2H),1.54-1.40(m,3H),1.36-1.19(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-58.16(s,3F),-77.49(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1062，实测值516.1(M+1)+；保留时间：2.93分钟(LC方法C)。
实例57：(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物114)和(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物115)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)
在室温下向(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(1.7g，2.4282mmol)于乙醇(68mL)和水(17mL)中的溶液加入铁(1.6g，28.651mmol)和氯化铵(170mg，3.1781mmol)。将混合物在80℃下加热2小时，然后冷却至室温。将反应经硅藻土过滤，将滤液用饱和NH4Cl水溶液(50mL)和水(50mL)稀释。用EtOAc(3X 50mL)萃取，并且将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)(1.1g，80％)。ESI-MS m/z计算值563.1144，实测值564.1(M+1)+；保留时间：2.55分钟(LC方法E)。
步骤2：(12S)-6-(苄氧基)-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)
向(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)(150mg，0.2658mmol)于二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中加入碘化铜(I)(25mg，0.1313mmol)和甲醇钠(0.5mL，25％w/v，2.3138mmol)于甲醇中的溶液，并且将混合物在105℃下搅拌4小时。将混合物冷却至室温，并且用水(25mL)稀释，并且通过硅藻土过滤。将滤液用乙酸乙酯(2X25mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对所得残余物进行纯化，从而得到呈红色固体的(12S)-6-(苄氧基)-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)(55mg，38％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.51-7.26(m,5H),6.49(s,1H),5.66-5.46(m,2H),5.21-4.91(m,3H),4.75-4.60(m,1H),4.02-3.89(m,1H),3.86(s,3H),3.82-3.73(m,1H),3.72-3.54(m,1H),3.47-3.32(m,1H),3.10-2.88(m,1H),2.59-2.39(m,1H),2.35-2.10(m,3H),2.06-1.90(m,1H),1.87-1.67(m,2H),1.57-1.41(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-75.31(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.2144，实测值516.3(M+1)+；保留时间：2.57分钟(LC方法E)。
步骤3：(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇
将(12S)-6-(苄氧基)-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-胺(E/Z混合物)(50mg，0.097mmol)于甲醇(5mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入10％钯碳(90mg，0.0423mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤。将所得滤液在减压下浓缩。将残余物溶解于二甲基亚砜(2mL)中，并且然后通过反相HPLC使用5％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度进行纯化，从而得到呈深绿色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(30mg，60％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.46(br.s.,1H),5.26-4.82(m,2H),3.97-3.75(m,4H),3.45-3.30(m,1H),2.75-2.31(m,2H),2.30-1.89(m,4H),1.84-1.45(m,8H),1.37-1.27(m,1H),0.97-0.81(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.28(br.s.,3F,次要非对映异构体),-80.82(br.s.,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值427.1831，实测值428.2(M+1)+；保留时间：3.12分钟(LC方法X)。
步骤4：(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物114)和(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物115)
通过SFC使用由菲罗门公司出售的LUX-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)以及15％至40％ MeOH(+20mM NH3)/CO2的双梯度运行在14.5分钟内对(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(29mg，0.06785mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(9.2mg，62％)。ESI-MS m/z计算值427.18314，实测值428.0(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法D)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(5.4mg，37％)。ESI-MS m/z计算值427.18314，实测值428.0(M+1)+；保留时间：1.86分钟(LC方法D)。
实例58：(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体1)(化合物116)和(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体2)(化合物117)的制备
步骤1：(5R)-5-烯丙基吗啉-3-酮
A部分：在0℃下在60分钟内向(2R)-2-氨基戊-4-烯酸(3.97g，34.483mmol)于THF(150mL)中的悬浮液逐滴加入THF(46mL，1M，46mmol)中的LiAlH4，将内部温度保持在0至5℃。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用THF(200mL)稀释，并且冷却至0℃，然后用1.82mL的水、1.82mL的25％ NaOH水溶液和5.46mL的水淬灭。将混合物在室温下搅拌1小时，过滤并用THF洗涤，并且保留滤液。将所得固体悬浮于THF(200mL)中，并且在回流下加热1小时，冷却至室温，然后过滤。将所有的合并滤液浓缩，以得到呈浅黄色油的(2R)-2-氨基戊-4-烯-1-醇(4.25g，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ5.93-5.63(m,1H),5.22-5.00(m,2H),3.60(dd,J＝10.6,3.8Hz,1H),3.32(dd,J＝10.6,7.6Hz,1H),2.99-2.85(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.11-1.94(m,1H),1.92-1.73(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值101.08406，实测值102.3(M+1)+；保留时间：0.27分钟(LC方法E)。
B部分：在-78℃下向(2R)-2-氨基戊-4-烯-1-醇(3.48g，34.405mmol)和Et3N(19.602g，27mL，193.71mmol)于CH2Cl2(50mL)中的溶液中逐滴加入2-氯乙酰氯(10g，88.54mmol)，并且在1小时内将混合物温热至室温。将混合物用CH2Cl2(100mL)和水(100mL)稀释。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2X 50mL)萃取。将合并的有机层用5％ NaHCO3水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的[(2R)-2-[(2-氯乙酰基)氨基]戊-4-烯基]2-氯乙酸酯(2.23g，26％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.62(d,J＝5.9Hz,1H),5.88-5.65(m,1H),5.27-5.08(m,2H),4.39-4.18(m,3H),4.09(s,2H),4.05(s,2H),2.45-2.28(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值253.02725，实测值254.1(M+1)+；保留时间：1.62分钟(LC方法E)。
C部分：向[(2R)-2-[(2-氯乙酰基)氨基]戊-4-烯基]2-氯乙酸酯(2.23g，8.7757mmol)于丙酮(50mL)中的溶液中加入Na2CO3(1.39g，13.115mmol)于水(30mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜并且浓缩以去除丙酮。将残余物用EtOAc(4X 40mL)萃取，并且将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(使用100％乙酸乙酯)对残余物进行纯化，以得到呈无色油的2-氯-N-[(1R)-1-(羟基甲基)丁-3-烯基]乙酰胺(1.55g，99％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.78(br.s.,1H),5.79(ddt,J＝17.1,10.1,7.3Hz,1H),5.29-5.05(m,2H),4.08-3.97(m,3H),3.77-3.65(m,2H),2.46-2.28(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值177.05565，实测值178.1(M+1)+；保留时间：0.95分钟(LC方法E)。
D部分：在0℃下向2-氯-N-[(1R)-1-(羟基甲基)丁-3-烯基]乙酰胺(1.46g，8.2194mmol)于THF(60mL)中的溶液中加入矿物油中的60％ NaH(380mg，9.5009mmol)。将混合物在室温下搅拌10分钟，并用饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭。将混合物浓缩以去除THF，并且用CH2Cl2(3X 20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(用100％ EtOAc洗脱)对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的(5R)-5-烯丙基吗啉-3-酮(806mg，69％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ6.22(br.s.,1H),5.72(dddd,J＝16.8,10.4,8.1,6.3Hz,1H),5.30-5.13(m,2H),4.27-4.05(m,2H),3.92(dd,J＝11.4,3.8Hz,1H),3.67-3.54(m,1H),3.52-3.41(m,1H),2.41-2.27(m,1H),2.23-2.09(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值141.07898，实测值142.2(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法E)。
步骤2：6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在氮气下向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.34g，4.7087mmol)、(5R)-5-烯丙基吗啉-3-酮(666mg，4.7178mmol)、Cs2CO3(1.84g，5.6473mmol)、Xantphos(546mg，0.9436mmol)和Pd2dba3(432mg，0.4718mmol)的混合物中加入1,4-二噁烷(20mL)。将混合物用氮气鼓泡5分钟，然后在80℃下在氮气下搅拌5.5小时。在15小时内逐滴加入6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.2g，4.2168mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液。加入后，将混合物在80℃下搅拌4小时，并且冷却至室温。加入水(30mL)，并将混合物用EtOAc(3X 50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(760mg，41％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.75(s,1H),5.71-5.41(m,1H),5.20-4.94(m,2H),4.84-4.56(m,1H),4.52-4.37(m,1H),4.34-4.18(m,1H),4.05(s,3H),4.03-3.93(m,2H),2.80-2.08(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-61.08至-62.72(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值389.08347，实测值390.1(M+1)+；保留时间：1.97分钟(LC方法E)。
步骤3：6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
将6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(114mg，0.2928mmol)、NH4Cl(20mg，0.3739mmol)和铁(166mg，2.9725mmol)于EtOH(5mL)和H2O(1mL)中的混合物在氮气下在80℃下加热2小时，并且然后冷却至室温。将EtOAc(30mL)和28％ NH3水溶液在搅拌下加入。将两层分离，并将水层用EtOAc(3X 30mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用50％至80％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(80mg，76％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.38-7.27(m,1H),6.38-5.98(m,2H),5.77-5.47(m,1H),5.24-4.99(m,2H),4.42-4.27(m,2H),4.26-3.43(m,6H),2.99-2.10(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-61.14至-63.58(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值359.10928，实测值360.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法E)。
步骤4：6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-氨基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(40mg，0.1113mmol)于CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(62mg，0.2841mmol)和DMAP(3.5mg，0.0286mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，并且将溶剂在减压下去除。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈油的6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(62mg，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.03-7.82(m,1H),5.79-5.41(m,1H),5.24-4.91(m,2H),4.68-4.16(m,2H),4.07-3.50(m,6H),2.97-2.12(m,2H),1.42(s,18H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-61.07至-62.72(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值559.2142，实测值582.2(M+Na)+；保留时间：2.22分钟(LC方法E)。
步骤5：6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
A部分：在氮气下将6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(900mg，1.6085mmol)和硅胶(15g，249.65mmol)于EtOAc(100mL)中的混合物在80℃下加热4小时，并且在70℃下加热过夜。将混合物浓缩并且通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到呈白色泡沫的6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(653mg，88％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.36-10.12(m,1H),9.41-9.25(m,1H),5.81-5.45(m,1H),5.26-4.96(m,2H),4.49-4.23(m,2H),4.08-3.49(m,6H),2.91-2.11(m,2H),1.54(s,9H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-61.17至-62.94(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值459.1617，实测值460.2(M+1)+；保留时间：2.23分钟(LC方法E)。
B部分：在0℃下向6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(50mg，0.1088mmol)于THF(2mL)中的溶液中加入NaOH(9.9mg，0.2475mmol)于H2O(0.5mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌2小时，并且冷却至0℃。用1N HCl(238mg)水溶液酸化，并浓缩以去除THF。将残余物用EtOAc(3X 20mL)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈无色油的6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(48mg，99％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.46-10.15(m,1H),9.55-9.37(m,1H),5.75-5.41(m,1H),5.24-4.98(m,2H),4.48-4.20(m,2H),4.07-3.88(m,2H),3.80-3.56(m,1H),2.83-2.09(m,2H),1.55(s,9H)ppm。一个可交换的质子未被观察到。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-61.03至-62.82(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值445.14606，实测值468.1(M+Na)+；保留时间：2.13分钟(LC方法E)。
步骤6：N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(632mg，1.419mmol)于CH2Cl2(25mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(536mg，1.7731mmol)、EDCI(盐酸盐)(390mg，2.0344mmol)、1-羟基苯并三唑(水合物)(55mg，0.3592mmol)和DIPEA(150mg，1.1606mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用5％ NaHCO3水溶液(10mL)处理，并且用CH2Cl2(3X 30mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(966mg，93％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ10.83-10.58(m,1H),9.83(br.s.,1H),9.43-9.31(m,1H),9.10(br.s.,1H),7.53-7.28(m,5H),5.96-5.43(m,2H),5.22-4.97(m,4H),4.92-4.67(m,2H),4.44-4.19(m,2H),4.06-3.55(m,3H),2.77-2.10(m,6H),1.53(s,9H)ppm。保留时间：2.47分钟(LC方法E)。
步骤7：N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[[[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]氨基]氨基甲酰]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(906mg，1.2417mmol)于CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入DIPEA(1.2614g，1.7mL，9.7599mmol)，随后逐滴加入三氟甲磺酸酐(550mg，1.9494mmol)。将混合物在0℃下搅拌20分钟，并且然后加入吗啉(120mg)以淬灭过量的三氟甲磺酸酐，并将所得混合物搅拌2分钟。将反应用5％ NaHCO3水溶液(10mL)淬灭，并且用CH2Cl2(3X 30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(694mg，79％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ10.31-10.13(m,1H),9.49-9.33(m,1H),7.46-7.26(m,5H),5.88-5.32(m,2H),5.21-4.93(m,4H),4.91-4.63(m,2H),4.43-4.25(m,2H),4.09-3.52(m,3H),2.93-2.08(m,6H),1.57(s,9H)ppm。保留时间：2.62分钟(LC方法E)。
步骤8：N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
将干燥的1L烧瓶装入詹氏催化剂1B(100mg，0.1363mmol)。将空气通过真空用氮气替代3次。通过套管加入DCE(260mL)。将混合物用氮气鼓泡10分钟，并且加热至75℃。在2.5小时内逐滴加入N-[6-[(3R)-3-烯丙基-5-氧代-吗啉-4-基]-2-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(692mg，0.9724mmol)于DCE(30mL)中的溶液。在加入期间，将混合物每40分钟用氮气鼓泡5分钟。加入完成后，将混合物用氮气鼓泡15分钟。然后将混合物在75℃下搅拌1.5小时，冷却至室温并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(483mg，73％)。此材料被直接用于随后步骤。
步骤9：N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)和N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)
在0℃下向N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,9,18(22),19-六烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(483mg，0.7066mmol)于EtOAc(15mL)和MeOH(15mL)中的溶液中加入10％钯碳(120mg，50％湿润，0.0564mmol)。将混合物在氢气球下在10℃至15℃下搅拌4小时，通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈无色油的N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(259mg，48％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ9.61(s,1H),9.29(s,1H),7.34-7.22(m,5H),4.90(d,J＝11.2Hz,1H),4.72(d,J＝11.2Hz,1H),4.40-4.25(m,2H),4.06-3.92(m,2H),3.70(d,J＝6.2Hz,1H),2.66-2.37(m,2H),2.12-1.95(m,2H),1.91-1.70(m,3H),1.56(s,9H),1.42-1.30(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-62.31(s,3F),-74.51(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值685.2335，实测值630.2(M-55)+；保留时间：2.58分钟(LC方法E)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈白色固体的N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(201mg，41％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ9.47(s,1H),9.27(s,1H),7.39-7.26(m,5H),4.94-4.82(m,1H),4.82-4.69(m,1H),4.36-4.26(m,2H),4.08-3.94(m,2H),3.66(d,J＝7.0Hz,1H),2.60-2.20(m,3H),2.15-1.64(m,4H),1.56(s,9H),1.39-1.27(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-62.39(s,3F),-74.40(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值685.2335，实测值630.2(M-55)+；保留时间：2.55分钟(LC方法E)。
步骤10：(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体1)(化合物116)
A部分：向N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(259mg，0.34mmol)于EtOAc(4mL)和MeOH(4mL)中的溶液中加入10％钯碳(123mg，50％湿润，0.0578mmol)。将混合物在氢气球在于30℃至50℃下搅拌5小时，并且在室温下搅拌过夜。再次，加入10％钯碳(150mg，50％湿润，0.0705mmol)，并且将混合物在30℃至50℃下搅拌6小时，并且在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至35％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈白色固体的N-[(12R)-6-羟基-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(178mg，88％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.34-9.16(m,2H),4.42-4.21(m,2H),4.08-3.89(m,2H),3.86-3.64(m,2H),2.74(t,J＝12.3Hz,1H),2.33-2.12(m,2H),2.01-1.68(m,4H),1.56(s,9H),1.53-1.29(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-62.24(s,3F),-80.04(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值595.1865，实测值596.2(M+1)+；保留时间：2.29分钟(LC方法E)。
B部分：在0℃下向N-[(12R)-6-羟基-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体1)(178mg，0.2989mmol)于CH2Cl2(4mL)中的溶液中逐滴加入TFA(1.4800g，1mL，12.98mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，浓缩，并且然后与MeOH和EtOAc的1:2混合物(3X 2mL)共蒸发。通过硅胶色谱法使用0％至60％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体1)(132mg，89％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.31(s,1H),5.86(s,2H),5.43(s,1H),4.46-4.22(m,2H),4.07-3.87(m,2H),3.80-3.63(m,1H),2.52-2.21(m,2H),2.03-1.51(m,7H),1.41-1.32(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-62.66(s,3F),-79.06(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值495.13412，实测值496.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法E)。
步骤11：(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体2)(化合物117)
A部分：向N-[(12R)-6-(苄氧基)-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(209mg，0.3048mmol)于EtOAc(4mL)和MeOH(4mL)中的溶液中加入10％钯碳(150mg，50％湿润，0.0705mmol)。将混合物在氢气球下在30℃至50℃下搅拌5小时，并且在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈白色固体的N-[(12R)-6-羟基-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(148mg，82％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.36(s,1H),9.27(s,1H),4.33(s,2H),4.05-3.92(m,3H),3.68-3.54(m,1H),2.52-2.12(m,3H),2.01-1.73(m,3H),1.68-1.61(m,1H),1.57(s,9H),1.51-1.37(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-62.46(s,3F),-78.66(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值595.1866，实测值540.3(M-55)+；保留时间：2.21分钟(LC方法E)。
B部分：在0℃下向N-[(12R)-6-羟基-16-氧代-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-21-基]氨基甲酸叔丁酯(对映异构体2)(148mg，0.2485mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入TFA(1.4800g，1mL，12.98mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，并且浓缩，接着与MeOH和EtOAc的1:3混合物(3X 4mL)共蒸发。通过硅胶色谱法使用0％至60％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，并且将产物由CH3CN(1mL)和H2O(2mL)冻干，以得到呈白色固体的(12R)-21-氨基-6-羟基-6,19-双(三氟甲基)-14,23-二氧杂-3,4,17,22-四氮杂四环[16.3.1.12,5.012,17]二十三碳-1(21),2,4,18(22),19-五烯-16-酮(对映异构体2)(101mg，81％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.78(s,1H),7.63(s,1H),6.94(br.s.,2H),4.18(s,2H),4.02-3.82(m,2H),3.72-3.53(m,1H),2.32-1.93(m,3H),1.88-1.52(m,4H),1.43
-1.20(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-61.51(s,3F),-78.17(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值495.1341，实测值496.3(M+1)+；保留时间：2.72分钟(LC方法E)。
实例59：(12R)-20-氨基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物118)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将压力管装入(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(150mg，0.2524mmol)、苯硼酸频哪醇酯(67mg，0.3283mmol)、碳酸铯(198mg，0.6077mmol)和甲苯(6mL)。将混合物用氮气鼓泡5分钟。加入Pd(dppf)Cl2(13mg，0.0159mmol)。将混合物用氮气鼓泡3分钟，并将管密封。将混合物在100℃下加热过夜，冷却至室温并用水(10mL)处理。将混合物用EtOAc(3X 20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(149mg，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.26(s,1H),7.53-7.27(m,10H),5.65-5.39(m,2H),5.35-4.91(m,2H),4.08-3.93(m,1H),3.65-3.48(m,1H),2.98-2.71(m,2H),2.59-2.06(m,6H),1.89-1.77(m,1H),1.76-1.61(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.83至-73.65(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值591.2093，实测值592.3(M+1)+；保留时间：2.7分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物118)
向(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(149mg，0.2519mmol)于EtOAc(4mL)和MeOH(4mL)中的溶液中加入10％钯碳(107mg，50％湿润，0.0503mmol)。将混合物在氢气球下在30℃至50℃下搅拌4小时，并且在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-苯基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(91mg，75％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.55-7.49(m,1H),7.48-7.31(m,5H),7.18-7.14(m,1H),5.93(s,2H),3.98-3.65(m,1H),2.78-2.54(m,2H),2.34-2.20(m,1H),2.13-1.93(m,2H),1.84-1.27(m,10H),1.02-0.70(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-76.08至-79.41(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值473.2039，实测值474.2(M+1)+；保留时间：3.96分钟(LC方法E)。
实例60：17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物119)、17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物120)、17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物121)和17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物122)的制备
步骤1：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-苯基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(600mg，0.9225mmol)于乙腈(8mL)中的溶液中加入1-苯基丁-3-烯-1-胺(410mg，2.785mmol)和DIEA(850μL，4.88mmol)，并且将混合物在室温下搅拌120分钟。将反应浓缩，并且通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-苯基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(459mg，77％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.30(dd,J＝7.8,3.2Hz,1H),7.42-7.31(m,7H),7.26-7.21(m,2H),7.21-7.15(m,1H),5.91-5.80(m,1H),5.79-5.67(m,1H),5.45-5.33(m,1H),5.17-5.06(m,2H),5.02(ddd,J＝10.3,5.5,2.0Hz,2H),4.77(d,J＝10.8Hz,1H),4.60(dd,J＝10.8,8.0Hz,1H),2.94(ddd,J＝14.3,9.2,7.1Hz,1H),2.58(ddd,J＝25.3,11.9,4.7Hz,3H),2.35-2.17(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值647.1967，实测值648.2(M+1)+；保留时间：2.08分钟(LC方法J)。
步骤2：6-苄氧基-17-硝基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)
在500mL 3颈烧瓶中，将亚苄基-[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑烷-2-基亚基]-二氯-钌；三环己基膦(125mg，0.1472mmol)溶解于甲苯(135mL)中。然后，通过注射器加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-苯基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(380mg，0.5868mmol)于甲苯(5mL)中的溶液。将所得混合物在110℃下加热30分钟。将反应混合物冷却并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至75％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈棕黄色油的6-苄氧基-17-硝基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(147mg，40％)。ESI-MS m/z计算值619.1654，实测值620.2(M+1)+；保留时间：1.39分钟(LC方法J)。
步骤3：17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
在100mL圆底烧瓶中，将6-苄氧基-17-硝基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(147mg，0.2373mmol)于乙酸乙酯(8mL)和AcOH(2mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(250mg，10％w/w，0.2349mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌7小时。将反应过滤，并且在30分钟内将滤液通过反相制备型HPLC(使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)的移动梯度运行)进行纯化，得到呈黄色固体的17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(50mg，42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),7.59(d,J＝5.3Hz,1H),7.47(t,J＝6.6Hz,2H),7.43-7.38(m,2H),7.34(t,J＝7.2Hz,1H),6.14(s,2H),4.81(dd,J＝24.4,3.9Hz,1H),4.70(dd,J＝29.0,10.3Hz,1H),2.81(d,J＝54.8Hz,1H),2.27(t,J＝12.5Hz,1H),2.07(s,1H),1.82-1.57(m,2H),1.50(s,1H),1.40(s,2H),1.26(d,J＝24.2Hz,1H),1.15(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值501.15994，实测值502.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法J)。
步骤4：17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物119)、17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物120)、17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(化合物121)和17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(化合物122)
通过SFC使用由菲罗门公司出售并且用5％至80％ MeOH(+20mM NH3)/CO2洗脱的Lux-4柱(250X 21.2mm，5μm粒度)对17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(50mg，0.09972mmol)进行纯化，以得到4种异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(6.6mg，52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),7.67(s,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.36-7.31(m,1H),6.14(s,2H),4.78(d,J＝3.6Hz,1H),4.67(dt,J＝10.6,2.9Hz,1H),2.91-2.83(m,1H),2.27(t,J＝12.4Hz,1H),2.08-1.99(m,1H),1.73(d,J＝10.5Hz,1H),1.56(ddd,J＝26.6,13.0,6.8Hz,2H),1.39(d,J＝8.3Hz,2H),1.35-1.29(m,1H),1.13(d,J＝11.6Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值501.15994，实测值502.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.8mg，38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),7.67(s,1H),7.47(d,J＝7.0Hz,2H),7.41(dd,J＝8.4,6.4Hz,2H),7.37-7.31(m,1H),6.14(s,2H),4.84(d,J＝4.1Hz,1H),4.74(dt,J＝10.9,3.2Hz,1H),2.78-2.69(m,1H),2.34(t,J＝10.9Hz,1H),2.09(ddd,J＝14.6,8.9,6.0Hz,1H),1.81(d,J＝9.6Hz,1H),1.70(dd,J＝14.4,7.7Hz,1H),1.52-1.37(m,3H),1.27(dd,J＝16.0,8.6Hz,1H),1.13(dd,J＝13.8,6.8Hz,1H)ppm。ESI-MSm/z计算值501.15994，实测值502.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法A)。
待洗脱的第三对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体3)(6.4mg，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),7.67(s,1H),7.48(d,J＝7.5Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.34(t,J＝7.2Hz,1H),6.14(s,2H),4.78(d,J＝3.6Hz,1H),4.66(dd,J＝8.6,5.4Hz,1H),2.86(d,J＝12.2Hz,1H),2.27(t,J＝12.4Hz,1H),2.08-1.99(m,1H),1.74(s,1H),1.59(q,J＝6.0Hz,1H),1.53(d,J＝20.4Hz,1H),1.38(d,J＝18.7Hz,2H),1.31(d,J＝7.6Hz,1H),1.12(d,J＝15.1Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值501.15994，实测值502.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法A)。
待洗脱的第四对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12-苯基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体4)(7.0mg，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),7.67(s,1H),7.47(d,J＝7.1Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.34(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),6.14(s,2H),4.83(d,J＝4.1Hz,1H),4.74(dt,J＝10.8,3.2Hz,1H),2.75(q,J＝9.4,8.9Hz,1H),2.38–2.27(m,1H),2.09(ddd,J＝14.9,8.9,5.9Hz,1H),1.82(dt,J＝12.0,4.6Hz,1H),1.69(dt,J＝14.7,7.5Hz,1H),1.49(dq,J＝11.5,6.2Hz,1H),1.45–1.34(m,2H),1.27(dd,J＝16.0,8.2Hz,1H),1.13(dt,J＝14.1,8.1Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值501.15994，实测值502.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法A)。
实例61：(12R)-20-氨基-18-(噁烷-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物123)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于甲苯(8mL)中的溶液通过氮气鼓泡脱气15分钟。在氮气下加入2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(107mg，0.5093mmol)和与二氯甲烷复合的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)(30mg，0.0367mmol)，随后加入碳酸铯的脱气水溶液(0.45mL，2M，0.9mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 20mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。在30分钟内通过反相HPLC使用0％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈红色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-18-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(152mg，76％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.13(s,1H),7.43-7.28(m,5H),5.90-5.77(m,1H),5.67-5.38(m,2H),5.32(d,J＝10.9Hz,1H),5.03-4.91(m,1H),4.46-4.23(m,2H),4.06-3.85(m,3H),3.66-3.34(m,3H),2.57-2.00(m,8H),1.90-1.66(m,2H),1.56-1.46(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.96(s,3F),-73.62(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值597.2199，实测值598.2(M+1)+；保留时间：2.56分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(噁烷-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物123)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(150mg，0.251mmol)溶解于甲醇(15mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(160mg，5％w/w，0.0752mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并在氢气下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。将通过反相HPLC使用5％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(噁烷-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(78mg，64％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.00(s,1H),5.42-4.68(m,2H),4.22-4.10(m,1H),4.05(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),3.99-3.81(m,1H),3.79-3.66(m,1H),3.61-3.46(m,2H),3.19-2.99(m,2H),2.62-2.30(m,2H),2.27-2.18(m,1H),2.12-1.92(m,2H),1.91-1.72(m,4H),1.66-1.45(m,9H),1.02-0.75(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.42(br.s.,3F,次要非对映异构体),-80.82(br.s.,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值481.2301，实测值482.3(M+1)+；保留时间：3.14分钟(LC方法C)。
实例62：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物124)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
在氮气下将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于甲苯(8mL)中的溶液通过氮气鼓泡脱气15分钟。加入3-吡啶硼酸(60mg，0.4881mmol)和与二氯甲烷复合的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)(30mg，0.0367mmol)，随后加入碳酸铯的脱气水溶液(450μL，2M，0.9mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物用乙酸乙酯(25mL)稀释，通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 15mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用0％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得混合物进行纯化，从而得到呈红色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(190mg，95％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ8.78-8.59(m,2H),8.29(s,1H),7.78-7.68(m,1H),7.54-7.27(m,6H),5.67-5.40(m,2H),5.32(d,J＝10.9Hz,1H),5.04-4.89(m,1H),4.12-3.96(m,1H),3.63-3.47(m,1H),3.01-2.83(m,1H),2.82-2.70(m,1H),2.54-2.11(m,5H),1.95-1.82(m,1H),1.78-1.61(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.95(br.s.,3F),-73.60(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值592.2046，实测值593.3(M+1)+；保留时间：2.32分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物124)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(190mg，0.3206mmol)溶解于甲醇(19mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(275mg，5％w/w，0.1292mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并将混合物在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(吡啶-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(45mg，29％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.94-8.43(m,2H),7.89-7.64(m,1H),7.50-7.30(m,1H),7.18-6.90(m,1H),5.26-4.67(m,2H),4.05-3.77(m,1H),2.98-2.69(m,2H),2.64-2.49(m,1H),2.39-2.00(m,3H),1.81-1.37(m,10H),1.11-0.79(m,1H)ppm。19FNMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.34(br.s.,3F,主要非对映异构体),-80.73(br.s.,3F,次要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值474.1991，实测值475.2(M+1)+；保留时间：3.08分钟(LC方法C)。
实例63：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物125)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于甲苯(8mL)中的溶液通过氮气鼓泡脱气15分钟。加入4-吡啶硼酸(60mg，0.4881mmol)和与二氯甲烷复合的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)(30mg，0.0367mmol)，随后加入碳酸铯的用氮气脱气的水溶液(450μL，2M，0.9mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X25mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用0％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得混合物进行纯化，从而得到呈黄色泡沫的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(180mg，90％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.75(br.s.,2H),8.33(s,1H),7.50-7.28(m,7H),5.68-5.44(m,2H),5.34(d,J＝10.9Hz,1H),5.05-4.90(m,1H),4.12-3.96(m,1H),3.66-3.48(m,1H),3.05-2.88(m,1H),2.79-2.63(m,1H),2.54-2.13(m,5H),1.97-1.83(m,1H),1.81-1.55(m,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.92(br.s.,3F),-73.61(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值592.2046，实测值593.3(M+1)+；保留时间：2.32分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物125)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(180mg，0.3038mmol)溶解于甲醇(18mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(194mg，5％w/w，0.0911mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后将混合物在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过反相HPLC使用0％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈橙色固体的(12R)-20-氨基-18-(吡啶-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(60mg，41％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.66(br.s.,2H),7.48-7.32(m,2H),7.14-6.98(m,1H),5.52-4.47(m,2H),4.05-3.78(m,1H),2.97-2.78(m,1H),2.76-2.58(m,1H),2.57-2.33(m,2H),2.32-1.88(m,3H),1.80-1.44(m,9H),1.02-0.85(m,1H)ppm。19FNMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.32(br.s.,3F,次要非对映异构体),-80.70(br.s.,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值474.1991，实测值475.2(M+1)+；保留时间：2.76分钟(LC方法C)。
实例64：(12R)-20-氨基-18-(氧戊环-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物126)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-(2,5-二氢呋喃-3-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
向压力管装入(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(100mg，0.1682mmol)、2-(2,5-二氢呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(50mg，0.255mmol)、碳酸铯(132mg，0.4051mmol)、Pd(dppf)Cl2(12mg，0.0147mmol)、甲苯(3mL)和H2O(0.2mL)。将混合物用氮气鼓泡3分钟并密封。将反应混合物在90℃下搅拌22小时，冷却至室温并用盐水(5mL)处理。将混合物用EtOAc(320mL)萃取，并且将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-18-(2,5-二氢呋喃-3-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(98mg，100％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.16(s,1H),7.40
-7.27(m,5H),5.97-5.88(m,1H),5.63-5.41(m,2H),5.36-4.69(m,6H),4.07
-3.92(m,1H),3.62-3.34(m,2H),3.33-3.18(m,1H),2.46-2.06(m,6H),1.88
-1.68(m,2H),1.56-1.46(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.79至-73.78(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值583.2043，实测值584.2(M+1)+；保留时间：2.5分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(氧戊环-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物126)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-(2,5-二氢呋喃-3-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(98mg，0.1679mmol)、10％钯碳(100mg，50％湿润，0.047mmol)、EtOAc(4mL)和MeOH(4mL)的混合物在氢气气球下在30℃至50℃下搅拌5小时，并且然后在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过快速色谱法(24g柱)使用20％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(氧戊环-3-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(29mg，35％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.57-7.46(m,1H),7.33
-7.21(m,1H),6.10-5.85(m,2H),4.13-3.87(m,2H),3.85-3.67(m,3H),3.61
-3.48(m,2H),3.14-2.96(m,1H),2.47-1.60(m,9H),1.58-1.32(m,6H),0.93
-0.73(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,DMSO-d6)δ-76.50(s,3F,次要非对映异构体),-79.35(s,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值467.2144，实测值468.1(M+1)+；保留时间：3.23分钟(LC方法C)。
实例65：(12R)-20-氨基-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物127)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于甲苯(8mL)和碳酸铯(0.45mL，水中的2M，0.9mmol)中的溶液通过氮气鼓泡脱气20分钟。加入1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡唑(105mg，0.5046mmol)和Pd(dppf)Cl2(28mg，0.0343mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 25mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(110mg，55％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.19(s,1H),7.55(s,1H),7.52-7.47(m,1H),7.42-7.27(m,5H),5.60-5.41(m,2H),5.33-4.90(m,2H),4.05-3.93(m,4H),3.55-3.40(m,1H),3.24-3.07(m,1H),3.05-2.90(m,1H),2.50-2.02(m,5H),1.99-1.82(m,1H),1.79-1.59(m,2H),1.49-1.26(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.98(s,3F)(次要非对映异构体),-73.62(s,3F)(主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值595.2155，实测值596.2(M+1)+；保留时间：2.44分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物127)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(100mg，0.1679mmol)溶解于甲醇(5mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入10％钯碳(20mg，0.0094mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在氢气下在室温下搅拌3天。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(34mg，42％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.70-7.61(m,1H),7.59-7.49(m,1H),7.09-6.97(m,1H),5.04(br.s,2H),4.16-3.82(m,4H),3.21(br.s,1H),2.81-2.01(m,5H),1.88-1.77(m,1H),1.75-1.44(m,9H),1.09-0.87(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.40(s,3F)(次要非对映异构体),-80.72(s,3F)(主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值477.21，实测值478.1(M+1)+；保留时间：3.26分钟(LC方法C)。
实例66：(12R)-20-氨基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物128)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
在密封管中，将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于二噁烷(8mL)、水(1.5mL)和碳酸铯(0.5mL，2M，1mmol)中的溶液通过氮气鼓泡脱气20分钟，并且加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(98mg，0.5051mmol)和Pd(dppf)Cl2(28mg，0.0343mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 25mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(18mg，9％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.27-8.18(m,1H),7.76-7.67(m,2H),7.42-7.28(m,5H),5.63-5.43(m,2H),5.33-4.90(m,2H),4.08-3.93(m,1H),3.57-3.40(m,1H),3.17-3.03(m,1H),3.02-2.89(m,1H),2.50-1.44(m,10H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.98(s,3F)(次要非对映异构体),-73.60(s,3F)(主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值581.1998，实测值582.2(M+1)+；保留时间：2.35分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物128)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(20mg，0.0344mmol)溶解于甲醇(3mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入10％钯碳(4mg，0.0019mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-(1H-吡唑-4-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(3mg，14％)。ESI-MS m/z计算值463.1944，实测值464.2(M+1)+；保留时间：3.11分钟(LC方法C)。
实例67：(12R)-20-氨基-18-环己基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物129)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-18-(环己-1-烯-1-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
在密封管中，将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.3365mmol)于甲苯(8mL)和碳酸铯(0.5mL，2M，1mmol)中的溶液通过氮气鼓泡脱气20分钟，并且加入环己烯-1-基硼酸(64mg，0.5081mmol)和Pd(dppf)Cl2(28mg，0.0343mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用乙酸乙酯(2X 25mL)冲洗。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-18-(环己-1-烯-1-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(136mg，68％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.05(s,1H),7.50-7.26(m,5H),5.78(br.s.,1H),5.60-5.42(m,2H),5.34-4.86(m,2H),4.05-3.89(m,1H),3.57-3.37(m,2H),2.48-1.95(m,9H),1.87-1.45(m,9H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.98(s,3F)(次要非对映异构体),-73.61(s,3F)(主要非对映异构体)ppm。保留时间：2.89分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-环己基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物129)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-(环己-1-烯-1-基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(136mg，0.2283mmol)溶解于甲醇(5mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入10％钯碳(25mg，0.0117mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在1大气压的氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-环己基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(49mg，44％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.52(br.s,1H),7.21(s,1H),5.93(br.s.,2H),3.94-3.64(m,2H),3.14-3.01(m,1H),2.83-2.69(m,1H),2.48-2.23(m,2H),2.22-2.07(m,1H),2.04-1.83(m,4H),1.81-1.70(m,4H),1.65-1.09(m,12H),0.94-0.74(m,1H)ppm。19FNMR(282MHz,DMSO-d6)δ-76.47(s,3F,次要非对映异构体),-79.36(s,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值479.2508，实测值480.3(M+1)+；保留时间：3.82分钟(LC方法C)。
实例68：(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物130)和(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物131)的制备
步骤1：2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙醇
向小瓶装入THF(6mL)中的4-氟-3-碘-苯甲醛(1.5g，5.9998mmol)和TMSCF3(1.1544g，1.2mL，8.1184mmol)，然后冷却至0℃。在10分钟后，逐滴加入TBAF(0.06mL，THF中的1M，0.06mmol)，使温度维持在<5℃。将反应搅拌10分钟，然后温热至室温并搅拌过夜。然后将反应冷却至0℃，并且加入水(0.75mL，41.631mmol)，随后在相同温度下逐滴加入TBAF(0.66mL，THF中的1M，0.66mmol)。将反应在0℃下搅拌10分钟，然后温热至室温并搅拌3小时。将反应倒入水(100mL)和DCM(100mL)中，然后将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈棕色油的2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙醇(2g，99％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ7.88(dd,J＝6.0,2.2Hz,1H),7.48–7.36(m,1H),7.14–6.99(m,1H),5.01–4.87(m,1H),3.15(s,1H)ppm。
步骤2：2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙酮
在室温下向2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙醇(2g，5.9371mmol)于DCM(40mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(4g，9.4308mmol)。将反应在相同温度下搅拌3小时。将反应用200mL的10％硫代硫酸钠溶液淬灭。将有机层分离，并且用饱和NaHCO3溶液(200mL)洗涤，然后用盐水(200mL)洗涤。将有机物经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至10％二乙醚/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈琥珀色液体的2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙酮(1.485g，75％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.38(dd,J＝6.0,2.3Hz,1H),8.14–8.06(m,1H),7.55(dd,J＝8.7,7.8Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值317.9165，实测值318.9(M+1)+；保留时间：2.14分钟(LC方法H)。
步骤3：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)乙酮(587mg，1.846mmol)和6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-(叔丁氧基羰基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(500mg，1.204mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时加入(N-异氰亚氨基)三苯基磷(568mg，1.879mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。然后将混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％ EtOAc/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(580mg，64％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(d,J＝10.8Hz,1H),8.87(d,J＝8.7Hz,1H),8.67(d,J＝16.3Hz,1H),8.06(dd,J＝5.9,2.3Hz,1H),7.60(dddd,J＝29.6,7.4,4.7,2.4Hz,1H),7.36(dt,J＝19.0,8.3Hz,1H),5.55(dddt,J＝50.3,17.5,10.7,7.2Hz,1H),5.04-4.93(m,1H),4.89-4.80(m,1H),4.26(dtd,J＝15.0,8.4,4.1Hz,1H),3.58-3.49(m,1H),3.36(d,J＝8.9Hz,1H),2.37(tdd,J＝12.2,7.9,2.5Hz,1H),2.12(dt,J＝13.3,7.9Hz,1H),2.03-1.91(m,2H),1.75-1.59(m,2H),1.48(d,J＝3.2Hz,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值757.0996，实测值758.0(M+1)+；保留时间：2.34分钟(LC方法J)。
步骤4：N-[(15S)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(4-氟-3-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(575mg，0.7591mmol)于乙腈(70mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钯(II)(19mg，0.08463mmol)，随后加入三(邻甲苯基)磷(52mg，0.1708mmol)和三乙胺(550μL，3.946mmol)，并且将溶液用N2鼓泡2分钟，然后在80℃下加热22小时。将混合物冷却至室温，浓缩至约5mL体积，并通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷平缓至50％乙酸乙酯/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[(15S)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(162mg，34％)。ESI-MS m/z计算值629.1873，实测值630.1(M+1)+；保留时间：1.7分钟(LC方法M)。
步骤5：N-[(15R)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯
在使用3向接头的配备有H2气球的圆底烧瓶中，向N-[(15S)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(160mg，0.2542mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的溶液中加入Pd/C(32mg，10％w/w，0.03007mmol)。经受真空并且用氮气回填三次，然后经受真空。用氢气填充烧瓶，然后将混合物搅拌15小时。经受真空并且用氮气回填三次，然后用乙酸乙酯稀释，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩并干燥，以得到呈黄色固体的N-[(15R)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(160mg，100％)。ESI-MS m/z计算值631.20294，实测值632.0(M+1)+；保留时间：1.83分钟(LC方法M)。
步骤6：(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物130)和(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物131)
将N-[(15R)-10-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.2375mmol)于TFA(500μL，6.49mmol)和二氯甲烷(2mL)的预制溶液中的溶液在室温下搅拌约1小时。将溶剂去除，并且在30分钟内通过反相HPLC使用50％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(50.1mg，74％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.05(dd,J＝7.3,2.5Hz,1H),7.69(s,1H),7.42(t,J＝7.3Hz,1H),7.20-7.12(m,1H),6.24(s,2H),3.90(dq,J＝10.5,5.1Hz,1H),3.52(q,J＝8.7Hz,1H),3.19(t,J＝8.9Hz,1H),2.85(dd,J＝15.6,6.2Hz,1H),2.62(dd,J＝15.1,12.1Hz,1H),2.40-2.32(m,1H),2.15(dt,J＝12.1,6.0Hz,1H),1.90(dt,J＝12.2,6.8Hz,2H),1.77-1.62(m,2H),1.55(qd,J＝11.2,6.2Hz,1H),0.91(qd,J＝10.8,6.1Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值531.1505，实测值532.1(M+1)+；保留时间：1.75分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(15R)-23-氨基-10-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7,9,11(25),20,22-八烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(24.2mg，36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,1H),8.01(d,J＝6.9Hz,1H),7.74-7.66(m,2H),7.29-7.23(m,1H),6.25(s,2H),4.16(dt,J＝10.7,5.4Hz,1H),3.55(q,J＝9.0Hz,1H),3.23(d,J＝9.0Hz,1H),2.77(d,J＝8.1Hz,2H),2.23(dt,J＝11.7,5.7Hz,1H),1.92(q,J＝5.9Hz,1H),1.84(s,2H),1.75(t,J＝9.0Hz,1H),1.60(td,J＝11.5,6.3Hz,1H),1.25-1.11(m,1H),0.90(d,J＝12.3Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值531.1505，实测值532.0(M+1)+；保留时间：1.87分钟(LC方法J)。
实例69：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物132)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
向微波小瓶装入(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(160mg，0.2692mmol)、三丁基(2-吡啶基)锡烷(160mg，0.4346mmol)、Pd(PPh3)4(40mg，0.0346mmol)和甲苯(2mL)。将管用氮气冲洗并密封。将混合物在126℃下搅拌21小时，冷却至室温并浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至60％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(80mg，50％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.71(d,J＝4.1Hz,1H),8.48(s,1H),7.81(td,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.47-7.27(m,7H),5.63-5.41(m,2H),5.35-4.87(m,2H),4.09-3.96(m,1H),3.66-3.48(m,1H),3.03-2.87(m,1H),2.72(ddd,J＝10.7,7.3,2.8Hz,1H),2.52-2.08(dd,J＝5.4,3.4Hz,5H),1.92-1.61(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.22至-73.82(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值592.2046，实测值593.0(M+1)+；保留时间：2.46分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物132)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(86mg，0.1451mmol)、10％钯碳(60mg，0.0282mmol)、EtOAc(3mL)和MeOH(1mL)的混合物在氢气球下在室温下放置3天，然后在50℃下放置5小时。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩并且通过反相HPLC使用50％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度进行纯化，从而得到呈黄橙色固体的(12R)-20-氨基-18-(吡啶-2-基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(22mg，31％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.65(d,J＝4.4Hz,1H),7.85(t,J＝7.8Hz,1H),7.57-7.45(m,2H),7.44-7.30(m,2H),5.95(br.s.,2H),3.97-3.74(m,1H),2.82-2.68(m,1H),2.43-1.92(m,5H),1.85-1.29(m,9H),1.05-0.81(m,1H)ppm。19FNMR(282MHz,DMSO-d6)δ-76.34(s,3F,主要非对映异构体),-79.21(s,3F,次要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值474.1991，实测值475.1(M+1)+；保留时间：3.18分钟(LC方法C)。
实例70：(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(化合物133)的制备
步骤1：(12S)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)
在0℃下在氮气下向(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(1g，1.6824mmol)于二氯甲烷(40mL)中的溶液中逐滴加入氯化钛(IV)(3.1832g，1.84mL，16.782mmol)。移除冷浴，然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用二氯甲烷(150mL)稀释，冷却至0℃，并且然后缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)。将所得混合物在0℃下剧烈搅拌15分钟，并且然后将相分离。将水相用二氯甲烷(3X 100mL)萃取。将所有有机层合并，并且用盐水(100mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％二氯甲烷/乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈棕色固体的(12S)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)(674mg，79％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.54–8.40(m,1H),7.34–7.20(m,1H),5.63–5.27(m,2H),4.06–3.75(m,3H),3.38–3.01(m,1H),2.33–1.54(m,9H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-80.14(br.s.,3F),-80.37(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值503.0416，实测值503.9(M+1)+；保留时间：2.3分钟(LC方法E)。
步骤2：(12S)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)
向(12S)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)(193mg，0.3827mmol)于乙醇(8mL)和水(2mL)中的溶液加入铁(86mg，1.54mmol)和氯化铵(62mg，1.1591mmol)。将反应在100℃下搅拌1.5小时。将深色溶液冷却至室温，并且经硅藻土过滤，用二氯甲烷(100mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。加入水(20mL)，并将所得混合物用二氯甲烷(2X 50mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得材料在真空下干燥，以产生呈黄色油的(12S)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)(180mg，99％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.39(d,J＝2.1Hz,1H),5.65-5.43(m,2H),4.92(br.s.,2H),4.09-3.94(m,1H),3.90-3.74(m,1H),3.65-3.42(m,2H),3.39-3.25(m,1H),2.98-2.75(m,1H),2.56-1.93(m,6H),1.80-1.67(m,1H),1.55-1.39(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.58(s,3F),-80.75(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值473.0674，实测值473.9(M+1)+；保留时间：2.31分钟(LC方法E)。
步骤3：N-[(12S)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
将(12S)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-6-醇(E/Z混合物)(2g，3.4115mmol)、碳酸氢二叔丁酯(3.69g，16.907mmol)、二异丙基乙胺(2.1295g，2.87mL，16.477mmol)、DMAP(76mg，0.6221mmol)和二氯甲烷(90mL)的混合物在室温下搅拌3天。将反应浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈米色固体的N-[(12S)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(2.21g，96％)。ESI-MS m/z计算值673.1723，实测值618.2(M-55)+；保留时间：2.59分钟(LC方法Y)。
步骤4：N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[(12S)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(294mg，0.4359mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的溶液置于氮气气氛中。加入铑氧化铝(89mg，5％w/w，0.0432mmol)，然后将反应在氢(气球)气氛下搅拌1.5小时。将反应置于氮气气氛中，然后经硅藻土过滤并浓缩，以得到呈黄色油的N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(280mg，95％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.68-7.63(m,1H),4.07-3.90(m,2H),3.86-3.75(m,1H),2.83-2.57(m,1H),2.45–2.27(m,1H),2.22–2.08(m,2H),2.01–1.94(m,1H),1.52–1.32(m,28H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-74.85(br.s.,3F),-77.76(s,3F)ppm。保留时间：2.99分钟(LC方法E)。
步骤5：N-[(12R)-18-(苯磺酰基)-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯
向压力管装入N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(69mg，0.102mmol)、苯亚磺酸钠(47mg，0.2863mmol)、CuI(24mg，0.126mmol)、L-脯氨酸(0.7mg，0.0061mmol)和DMSO(0.8mL)。将管用氮气冲洗2分钟并密封。将混合物在112℃下搅拌2.5小时，冷却至室温，并且加入到28％ NH3水溶液(6mL)。将混合物用MTBE(3X 20mL)萃取，并且将合并的有机层用28％ NH3水溶液(4mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈黄色油的N-[(12R)-18-(苯磺酰基)-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(80mg，定量)，将其直接用于下一步，而无需进一步纯化。
步骤6：(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(化合物133)
向N-[(12R)-18-(苯磺酰基)-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.1019mmol)于CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(2.9600g，2mL，25.96mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，并且浓缩，然后与MeOH(3X 3mL)共蒸发。将残余物在CH2Cl2(20mL)与5％ NaHCO3水溶液(15mL)之间分份。将两层分离，并将水层用CH2Cl2(2X 20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，并且将产物由CH3CN(1mL)和H2O(2mL)冻干，以得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(30mg，55％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.08-7.99(m,1H),7.86-7.77(m,2H),7.76-7.68(m,1H),7.67-7.52(m,3H),6.41-6.23(m,2H),3.93-3.69(m,2H),3.09-2.92(m,1H),2.23-1.74(m,5H),1.66-1.18(m,8H),0.50-0.33(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值537.1658，实测值537.9(M+1)+；保留时间：3.54分钟(LC方法C)。
实例71：(16R)-24-氨基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,21,23-八烯-7-醇(化合物134)的制备
步骤1：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1g，3.514mmol)和(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(1g，4.4403mmol)于乙腈(10mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(2.3002g，3.1mL，17.797mmol)，并且将混合物回流2小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱)对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.3g，100％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.62(s,1H),5.79-5.58(m,1H),5.14-4.97(m,2H),4.72-4.59(m,1H),4.01(s,3H),3.73-3.57(m,2H),2.63-2.47(m,1H),2.43-2.26(m,1H),2.17-1.99(m,2H),1.94-1.75(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-54.66(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值359.1093，实测值360.1(M+1)+；保留时间：2.29分钟(LC方法E)。
步骤2：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(22g，61.23mmol)于THF(220mL)中的溶液中加入甲醇(220mL)和水(110mL)。加入无水氢氧化锂(21.99g，918.2mmol)，并且在室温下搅拌0.5小时。在减压下去除THF和甲醇。加入3MHCl水溶液，直至混合物呈酸性，然后将水层用乙酸乙酯(3X 200mL)萃取。将有机相合并，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(19.7g，93％)。ESI-MSm/z计算值345.09363，实测值346.06(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法R)。
步骤3：2-苄氧基-6-羟基-苯甲酸甲酯
将2,6-二羟基苯甲酸甲酯(1.68g，9.9913mmol)、碳酸钾(2.76g，19.97mmol)和溴甲基苯(1.8694g，1.3mL，10.93mmol)于乙腈(30mL)中的混合物在油浴中在60℃下加热23小时。一旦冷却至室温，就将反应混合物经硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤并在减压下浓缩。将残余物转移到具有水(75mL)和少量1N HCl水溶液(达到约1至2的pH)的250mL分液漏斗中，并用乙酸乙酯(2X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈白色固体的2-苄氧基-6-羟基-苯甲酸甲酯(478mg，18％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ11.52(s,1H),7.54-7.46(m,2H),7.45-7.29(m,4H),6.63(dd,J＝8.4,1.0Hz,1H),6.50(d,J＝7.6Hz,1H),5.14(s,2H),3.96(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值258.0892，实测值257.2(M-1)-；保留时间：2.06分钟(LC方法E)。
步骤4：2-苄氧基-6-(三氟甲磺酰基氧基)苯甲酸甲酯
在0℃下，将三氟甲磺酰三氟甲烷磺酸酯(7.3788g，4.4mL，26.153mmol)缓慢加入到DCM(50mL)中的2-苄氧基-6-羟基-苯甲酸甲酯(5.45g，19.941mmol)和吡啶(3.2274g，3.3mL，40.802mmol)中。将混合物在室温下搅拌2小时，然后倒入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中，并用DCM(3X 50mL)萃取。将有机相合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清油的2-苄氧基-6-(三氟甲磺酰基氧基)苯甲酸甲酯(7.45g，93％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.47-7.29(m,6H),7.05-6.89(m,2H),5.17(s,2H),3.94(s,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.76(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值390.0385，实测值413.0(M+Na)+；保留时间：2.24分钟(LC方法E)。
步骤5：2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸甲酯
在室温下向四(三苯基磷)钯(0)(1.1g，0.9519mmol)和氯化锂(2.35g，55.432mmol)于脱气的干THF(35mL)中的溶液中加入2-苄氧基-6-(三氟甲磺酰基氧基)苯甲酸甲酯(7.45g，18.514mmol)于脱气的干THF(25mL)和烯丙基(三丁基)锡烷(6.75g，20.385mmol)中的溶液。将所得反应混合物回流过夜。将反应混合物冷却至室温并用MTBE(300mL)稀释。将所得溶液用水(300mL)、10％氢氧化铵水溶液(100mL)和盐水(200mL)洗涤。将溶剂在减压下蒸发，并且通过硅胶色谱法(120g柱)使用0％至5％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清油的2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸甲酯(5.4g，100％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ7.44-7.18(m,6H),6.90-6.78(m,2H),6.01-5.81(m,1H),5.16-4.99(m,4H),3.88(s,3H),3.38(d,J＝6.8Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值282.1256，实测值305.1(M+Na)+；保留时间：2.2分钟(LC方法E)。
步骤6：2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸
在室温下将氢氧化钾溶液(10.6mL的5M，53mmol)加入到THF(25mL)和乙醇(25mL)中的2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸甲酯(3g，10.626mmol)中。将混合物在50℃下搅拌4天，然后在60℃下搅拌4天。将混合物倒入水(250mL)中，并用MTBE(2X 100mL)洗涤。将水相使用3NHCl溶液酸化至pH＝2，并用MTBE(3X 100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈橙色胶的2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸(2.44g，83％)。ESI-MS m/z计算值268.1099，实测值269.1(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法E)。
步骤7：N-[(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)氨基]氨基甲酸叔丁酯
向2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酸(2.4g，8.945mmol)于DMF(25mL)中的溶液中加入三乙胺(1.8876g，2.6mL，18.654mmol)和HATU(4.75g，12.492mmol)。将混合物搅拌10分钟。然后，加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(1.5g，11.35mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层通过蒸发在减压下浓缩，并且然后通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，从而得到呈白色固体的N-[(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)氨基]氨基甲酸叔丁酯(2.89g，73％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.54
-7.46(m,1H),7.44-7.28(m,6H),6.93-6.77(m,2H),6.72-6.58(m,1H),6.33
-5.91(m,1H),5.18-5.01(m,4H),3.56-3.48(m,1H),1.90-1.87(m,1H),1.50(d,J＝2.3Hz,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值382.1893，实测值405.1(M+Na)+；保留时间：2.09分钟(LC方法E)。
步骤8：2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰肼(盐酸盐)
向N-[(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)氨基]氨基甲酸叔丁酯(2.89g，6.559mmol)于CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入Et2O中的HCl(15mL的2M，30mmol)。将混合物在室温下搅拌6小时。再次，加入Et2O中的HCl(5mL的2M，10mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜，然后用庚烷(120mL)稀释，并浓缩。将残余物在二乙醚中研磨，过滤并干燥，以得到呈白色固体的2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰肼(盐酸盐)(2.05g，98％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.40(d,J＝6.8Hz,1H),10.67(br.s,2H),7.47-7.27(m,6H),7.06-6.96(m,1H),6.91-6.80(m,1H),6.42-6.32(m,1H),6.00-5.73(m,1H),5.22-4.96(m,4H),3.29(d,J＝6.8Hz,1H),1.83(d,J＝4.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值282.1368，实测值283.1(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法E)。
步骤9：N'-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)-6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
在0℃下向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(730mg，2.1143mmol)于二氯甲烷(20mL)中的悬浮液中逐滴加入草酰氯(390mg，0.26mL，3.0727mmol)和DMF(188.80mg，0.2mL，2.583mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，随后逐滴加入2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰肼(盐酸盐)(810mg，2.5408mmol)和DIPEA(497.14mg，0.67mL，3.8466mmol)于二氯甲烷(13mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌1小时，并且加入饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)。将混合物用DCM(3X 100mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N'-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)-6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.16g，89％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.56-9.38(m,1H),8.96-8.77(m,1H),8.49(s,1H),7.48-7.28(m,5H),7.20-6.50(m,3H),6.37-5.90(m,1H),5.87-5.65(m,1H),5.24-4.97(m,5H),4.79-4.57(m,1H),3.79-3.58(m,2H),3.50(d,J＝6.5Hz,1H),2.70-2.51(m,1H),2.45-2.26(m,1H),2.20-1.99(m,2H),1.97-1.73(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-54.77(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值609.2199，实测值610.0(M+1)+；保留时间：2.33分钟(LC方法E)。
步骤10：2-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯基)-5-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑
在50℃下向N'-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯甲酰)-6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.16g，1.9029mmol)和二异丙基乙胺(742mg，1.0mL，5.7411mmol)于乙腈(20mL)中的溶液中按份加入对甲苯磺酰氯(381mg，1.9985mmol)。将混合物在70℃下搅拌3.5小时。然后，将反应混合物冷却，浓缩，并将残余物溶解于乙酸乙酯(125mL)中。将有机层用5％饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、水(2X 25mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。将挥发物通过在减压下蒸发去除，并且通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色胶的2-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯基)-5-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(680mg，57％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.69(d,J＝2.6Hz,1H),7.38(dd,J＝7.9,3.2Hz,1H),7.33-7.18(m,5H),7.01-6.82(m,2H),6.49-6.18(m,1H),5.72-5.52(m,1H),5.13(s,2H),5.08-4.91(m,3H),4.71-4.58(m,1H),3.76-3.58(m,2H),3.55-3.45(m,1H),2.54-2.42(m,1H),2.40-2.29(m,1H),2.15-1.98(m,2H),1.93-1.73(m,4H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-54.68(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值591.2093，实测值592.0(M+1)+；保留时间：2.61分钟(LC方法E)。
步骤11：(16S)-7-(苄氧基)-24-硝基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,13,21,23-九烯(E/Z混合物)
在氮气气氛下将2-(2-烯丙基-6-苄氧基-苯基)-5-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(300mg，0.5071mmol)于二氯乙烷(70mL)中的脱气溶液加热至50℃。然后，在15分钟内将詹氏催化剂1B(45mg，0.0613mmol)分两份加入。将所得混合物在70℃下加热5小时。将混合物冷却，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(16S)-7-(苄氧基)-24-硝基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,13,21,23-九烯(E/Z混合物)(77mg，26％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.74-8.63(m,1H),7.49-7.28(m,6H),7.15-6.89(m,2H),5.90-5.33(m,2H),5.30-5.07(m,2H),4.46-4.12(m,1H),3.79-3.33(m,3H),3.26-2.88(m,1H),2.30-1.62(m,6H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-53.50至-53.77(m,3F)ppm。保留时间：2.53分钟(LC方法E)。
步骤12：(16R)-24-氨基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,21,23-八烯-7-醇(化合物134)
将(16S)-7-(苄氧基)-24-硝基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,13,21,23-九烯(E/Z混合物)(70mg，0.1242mmol)溶解于甲醇(5mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(10％湿润，30mg，0.0141mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后在室温下在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(16R)-24-氨基-22-(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,20,25-四氮杂五环[19.3.1.12,5.06,11.016,20]二十六碳-1(25),2,4,6(11),7,9,21,23-八烯-7-醇(43mg，74％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),7.70(s,1H),7.45-7.31(m,1H),7.01-6.86(m,2H),6.16(s,2H),4.24-4.05(m,1H),3.61-3.50(m,1H),3.21-3.06(m,2H),2.42-2.30(m,2H),2.28-2.11(m,2H),1.98-1.81(m,1H),1.74-1.45(m,5H),1.12-0.99(m,1H)ppm。19FNMR(282MHz,DMSO-d6)δ-55.68(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值445.1726，实测值446.0(M+1)+；保留时间：4.35分钟(LC方法C)。
实例72：23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对1)(盐酸盐)(化合物135)和23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对2)(盐酸盐)(化合物136)的制备
步骤1：6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在5mL密封微波小瓶中，将3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.2g，2.403mmol)和2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷(三氟乙酸盐)(876mg，3.459mmol)和DIEA(2mL，11.48mmol)合并于乙腈(10mL)中，并且将混合物在70℃下加热18小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂去除。将所得棕色残余物溶解于乙酸乙酯中，并用饱和氯化铵溶液洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，以得到6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(830mg，62％)。ESI-MS m/z计算值557.27124，实测值558.3(M+1)+；保留时间：0.8分钟(LC方法R)。
将以上所述材料，6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯溶解于THF(4mL)和MeOH(4mL)的1:1混合物中，并且加入LiOH(8mL，1M，8mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。在减压下除去THF和MeOH。向残余物中加入水(5mL)并将所得混合物冷却至0℃。将溶液用HCl(8mL，1M，8mmol)酸化并用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(530mg，41％)。ESI-MS m/z计算值543.2556，实测值444.2(M-100(Boc))+；保留时间：0.8分钟(LC方法R)。
步骤2：N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
向6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(500mg，0.9198mmol)和2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)乙酮(457mg，1.437mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入(N-异氰亚氨基)三苯基磷(432mg，1.429mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水以及盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(使用100％己烷至100％乙酸乙酯平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈明黄色粘性油的N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(512mg，63％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.52(d,J＝21.6Hz,1H),8.96(s,1H),8.21(td,J＝7.4,2.3Hz,1H),7.78(tdd,J＝8.6,4.6,2.3Hz,1H),6.85(td,J＝11.6,8.7Hz,1H),5.63-5.41(m,1H),4.97-4.80(m,2H),4.52-4.37(m,2H),3.37(d,J＝10.2Hz,1H),3.02(s,1H),2.54-2.35(m,1H),2.12(dq,J＝21.7,7.6Hz,1H),1.75(dd,J＝12.4,6.9Hz,1H),1.59(s,9H),1.53(s,9H),1.11(d,J＝3.9Hz,3H),0.85(d,J＝5.8Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值885.18335，实测值786.1(M-100(Boc))+；保留时间：2.03和2.06，非对映异构体混合物(LC方法M)。
步骤3：N-[8-氟-6-羟基-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
向N-[6-(2-烯丙基-4,4-二甲基-吡咯烷-1-基)-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.5646mmol)于乙腈(80mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钯(II)(18mg，0.08017mmol)和三(邻甲苯基)磷(47mg，0.1544mmol)，随后加入三乙胺(500μL，3.587mmol)，并且将溶液用N2鼓泡1分钟，然后在80℃下加热22小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩至约5mL体积，并通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至100％乙酸乙酯平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[8-氟-6-羟基-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(216mg，58％)。ESI-MS m/z计算值657.2186，实测值658.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法M)。
步骤4：23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇
在使用3向接头的配备有H2气球的烧瓶中，向N-[8-氟-6-羟基-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(500mg，0.7604mmol)于乙醇(10mL)中的溶液中加入Pd/C(157mg，10％w/w，0.1475mmol)。使容器经受真空并用氮气回填三次，然后经受真空。用氢气填充烧瓶，然后将混合物搅拌15小时。经受真空并且用氮气回填三次，然后用乙酸乙酯稀释，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩，并且将所得残余物溶解于TFA(2mL，25.96mmol)和二氯甲烷(6mL)的预制溶液中，并且将反应混合物在室温下搅拌约1小时。将溶剂去除，并且在15.0分钟内通过反相HPLC使用50％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体以及4种立体异构体的混合物，23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(127mg，30％)。ESI-MS m/z计算值559.1818，实测值560.0(M+1)+；保留时间：1.91分钟(LC方法J)。
步骤5：23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对1)(盐酸盐)(化合物135)和23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对2)(盐酸盐)(化合物136)
在30分钟内将23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(80mg，0.143mmol)通过反相HPLC使用40％至85％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到两种非对映异构体对的分离：
待洗脱的第一非对映异构体对分离为呈黄色固体的23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对1)(盐酸盐)(1.8mg，4％)。ESI-MS m/z计算值559.1818，实测值560.5(M+1)+；保留时间：1.79分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二非对映异构体对分离为呈黄色固体的23-氨基-8-氟-17,17-二甲基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,20,22-八烯-6-醇(非对映异构体对2)(盐酸盐)(3.2mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.68(s,1H),7.30(d,J＝8.9Hz,1H),7.13(dd,J＝12.6,8.4Hz,1H),6.15(s,2H),4.22-4.11(m,1H),3.28(s,1H),2.88(t,J＝12.1Hz,2H),2.58(s,1H),2.11(d,J＝9.0Hz,1H),1.88(dd,J＝12.0,6.2Hz,1H),1.72(d,J＝32.5Hz,2H),1.46(t,J＝11.5Hz,1H),1.10(s,3H),0.96-0.86(m,1H),0.83(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值559.1818，实测值560.11(M+1)+；保留时间：1.85分钟(LC方法J)。
实例73：(12R)-20-氨基-18-苄基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物137)的制备
步骤1：(12S)-18-苄基-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
将(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(55mg，0.0925mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液通过用氮气鼓泡脱气15分钟。在氮气下加入2-苄基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(60mg，0.2751mmol)和与二氯甲烷复合的1,1'-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(II)(12mg，0.0147mmol)，随后加入碳酸铯(120μL，2M，0.24mmol)的脱气水溶液。将反应混合物在90℃加热过夜。冷却至室温后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，并且通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(2X 15mL)洗涤。将滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC使用0％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所得混合物进行纯化，得到呈棕色泡沫的(12S)-18-苄基-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(50mg，89％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.03(s,1H),7.48-7.28(m,8H),7.08(d,J＝6.8Hz,2H),5.66-5.35(m,2H),5.33-5.14(m,1H),5.03-4.89(m,1H),4.29-4.16(m,2H),4.13-4.02(m,1H),3.83-3.59(m,2H),3.48-3.23(m,1H),2.54-2.21(m,2H),2.19-1.90(m,4H),1.84-1.60(m,2H),1.55-1.43(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.02(s,3F),-73.54(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值605.225，实测值606.3(M+1)+；保留时间：2.65分钟(LC方法E)。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-苄基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物137)
将(12S)-18-苄基-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(50mg，0.0826mmol)于甲醇(5mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(88mg，5％w/w，0.0413mmol)。然后将氢气用气球鼓泡通过反应5分钟，并且将反应混合物在氢气下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。通过反相HPLC使用5％至95％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-苄基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(21mg，52％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.35-7.19(m,3H),7.09(d,J＝6.5Hz,2H),6.61(br.s.,1H),5.52-4.38(m,2H),4.18-3.78(m,3H),3.75-3.57(m,1H),3.27-3.01(m,1H),2.62-2.22(m,2H),2.20-2.09(m,1H),2.04-1.80(m,2H),1.78-1.29(m,9H),1.04-0.63(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值487.2195，实测值488.2(M+1)+；保留时间：3.79分钟(LC方法C)。
实例74：(6R,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(化合物138)和(6S,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(化合物139)的制备
步骤1：N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1R)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯和N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1S)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.264mmol)溶解于甲醇(6mL)中，并且在20分钟内通过反相HPLC使用C18柱和70％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1R)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(78mg，78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),9.05(s,1H),8.67(s,1H),8.18(dd,J＝7.1,2.3Hz,1H),7.96(ddd,J＝8.6,4.6,2.3Hz,1H),7.15(dd,J＝11.4,8.6Hz,1H),5.40(ddt,J＝14.3,10.9,7.2Hz,1H),5.01-4.86(m,2H),4.34(d,J＝4.4Hz,1H),4.04(dt,J＝11.0,8.4Hz,1H),3.77(m,J＝6.1,4.2Hz,1H),3.53(q,J＝8.0,7.2Hz,1H),3.44(qd,J＝7.0,5.0Hz,1H),2.03-1.88(m,2H),1.73-1.58(m,2H),1.49(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值757.0996，实测值758.4(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法M)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1S)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(67mg，60％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),9.10(s,1H),8.69(s,1H),8.18(dd,J＝7.1,2.3Hz,1H),7.91(ddd,J＝8.7,4.6,2.3Hz,1H),7.07(dd,J＝11.4,8.6Hz,1H),5.37(ddt,J＝17.2,10.2,7.1Hz,1H),4.90-4.77(m,2H),4.34(t,J＝5.1Hz,1H),4.26-4.11(m,1H),3.53(q,J＝9.0Hz,1H),3.44(qd,J＝7.0,5.0Hz,2H),2.36-2.27(m,1H),1.98-1.89(m,1H),1.76-1.52(m,2H),1.49(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值757.0996，实测值758.2(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法M)。
步骤2：(6R,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(化合物138)
A部分：向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1R)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.2376mmol)于乙腈(25mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钯(II)(5.947mg，0.02649mmol)，随后加入三(邻甲苯基)磷(18mg，0.05914mmol)和三乙胺(300μL，1.251mmol)，并且将溶液用N2鼓泡2分钟，然后在80℃下加热22小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩至约5mL体积，并通过硅胶色谱法使用100％己烷平缓至50％乙酸乙酯/己烷梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[(6R,15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(87mg，58％)。ESI-MS m/z计算值629.1873，实测值630.2(M+1)+；保留时间：1.68分钟(LC方法M)。
B部分：将N-[(6R,15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(25mg，0.03971mmol)溶解于TFA(100μL，1.298mmol)和二氯甲烷(400μL)的预制溶液中，并且将反应混合物在室温下搅拌约1小时。将溶剂去除，并且在15分钟内通过反相HPLC使用0％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(6R,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(8.2mg，36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),8.15-8.04(m,1H),7.76(d,J＝27.5Hz,1H),7.33(d,J＝7.4Hz,1H),7.23(ddd,J＝25.4,12.6,8.4Hz,1H),6.53(d,J＝12.1Hz,0.5H),6.39(s,1H),6.22(s,1H),5.83(td,J＝12.1,5.2Hz,0.5H),5.71-5.54(m,1H),4.66(d,J＝10.0Hz,0.5H),3.99(t,J＝5.4Hz,0.5H),3.63(tt,J＝17.3,7.8Hz,2H),3.23(dd,J＝16.5,8.5Hz,2H),2.26-2.12(m,1H),1.92(s,1H),1.71(t,J＝10.7Hz,1H),1.58(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值529.1349，实测值530.0(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法J)。
步骤3：(6S,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(化合物139)
A部分：向N-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-2-[5-[(1S)-2,2,2-三氟-1-(2-氟-5-碘-苯基)-1-羟基-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.2376mmol)于乙腈(25mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钯(II)(8mg，0.03563mmol)，随后加入三(邻甲苯基)磷(17mg，0.05585mmol)和三乙胺(200μL，0.435mmol)，并且将溶液用N2鼓泡2分钟，然后在80℃下加热22小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩至约5mL体积，并通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷平缓梯度对所得棕色残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N-[(6S,15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(84mg，56％)。ESI-MS m/z计算值629.1873，实测值630.2(M+1)+；保留时间：1.68分钟(LC方法M)。
B部分：将N-[(6S,15S)-8-氟-6-羟基-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-23-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(25mg，0.03971mmol)溶解于TFA(100μL，1.298mmol)和二氯甲烷(400μL)的预制溶液中，并且将反应混合物在室温下搅拌约1小时。将溶剂去除，并且在15分钟内通过反相HPLC使用0％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(6S,15S)-23-氨基-8-氟-6,21-双(三氟甲基)-26-氧杂-3,4,19,24-四氮杂五环[18.3.1.12,5.17,11.015,19]二十六碳-1(24),2,4,7(25),8,10,12,20,22-九烯-6-醇(E/Z混合物)(盐酸盐)(6.2mg，28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),7.91(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),7.74(s,1H),7.30(ddd,J＝8.3,4.4,2.3Hz,1H),7.13(dd,J＝12.5,8.3Hz,1H),6.29(s,2H),5.85-5.77(m,1H),5.71(dd,J＝16.1,4.2Hz,1H),4.54-4.34(m,1H),3.57(s,1H),3.41-3.34(m,1H),3.30-3.22(m,2H),2.21-2.09(m,1H),1.92(d,J＝8.4Hz,1H),1.84-1.63(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值529.1349，实测值530.0(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法J)。
实例75：(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物140)和(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物141)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物140)和(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物141)
将(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(17mg，0.03162mmol)溶解于MeOH(2mL)中，并且在30分钟内通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈橙色无定形固体的(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(7.2mg，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(s,1H),7.81(d,J＝7.8Hz,2H),7.72(t,J＝7.4Hz,1H),7.60(t,J＝7.6Hz,2H),3.89-3.76(m,2H),2.98(dt,J＝9.1,4.5Hz,1H),2.20(q,J＝7.0,6.5Hz,1H),2.03(q,J＝8.5,8.0Hz,2H),1.91-1.76(m,2H),1.60(dddd,J＝36.7,29.0,14.5,7.0Hz,3H),1.42-1.33(m,2H),1.26(h,J＝9.5,8.2Hz,3H),0.42(dp,J＝10.7,5.2Hz,1H)ppm。三个可交换的质子未被观察到。ESI-MS m/z计算值537.1658，实测值538.2(M+1)+；保留时间：1.37分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈橙色无定形固体的(12R)-20-氨基-18-(苯磺酰基)-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(7.4mg，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,1H),7.81(d,J＝7.7Hz,2H),7.72(t,J＝7.4Hz,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,2H),3.76(d,J＝8.4Hz,2H),3.02(td,J＝9.1,3.7Hz,1H),2.18(t,J＝12.1Hz,1H),2.09(t,J＝5.7Hz,1H),1.99(d,J＝10.2Hz,2H),1.83-1.73(m,1H),1.59(q,J＝10.0Hz,1H),1.41(ddd,J＝29.4,23.4,7.4Hz,6H),1.26(dd,J＝12.1,4.0Hz,1H),0.42(d,J＝11.4Hz,1H)ppm。三个可交换的质子未被观察到。ESI-MS m/z计算值537.1658，实测值538.2(M+1)+；保留时间：1.48分钟(LC方法J)。
实例76：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酰胺(化合物142)的制备
步骤1：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)
将微波小瓶中的(12S)-6-(苄氧基)-18-溴-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(330mg，0.5496mmol)于DMF(5mL)中的溶液用氮气脱气5分钟，并且加入氰铜(349mg，3.8967mmol)。将所得悬浮液在90℃下在氮气下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，用水(25mL)稀释，并且通过硅藻土垫过滤。将滤液用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(2X 30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(24g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)(182mg，61％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.62(s,1H),7.46-7.27(m,5H),5.71-5.34(m,2H),5.30-5.16(m,1H),5.08-4.87(m,1H),4.30-3.89(m,3H),3.39-3.10(m,1H),2.57-1.84(m,8H),1.79-1.46(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-73.07(s,3F),-73.59(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值540.1733，实测值541.2(M+1)+；保留时间：2.44分钟(LC方法E)。
步骤2：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲酰胺(E/Z混合物)
向(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲腈(E/Z混合物)(50mg，0.0925mmol)于EtOH(4.5mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入Ghaffar-Parkins催化剂(PtHiPMe2OH)(2mg，0.0047mmol)。将反应在70℃下加热4小时，并且冷却至室温。将反应浓缩，并且通过硅胶色谱法(4g柱)使用0％至60％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲酰胺(E/Z混合物)(32mg，62％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.44-8.27(m,1H),7.52-7.20(m,5H),6.89-6.60(m,1H),5.76(br.s.,1H),5.64-5.31(m,2H),5.28-5.09(m,1H),5.01-4.81(m,1H),3.99(d,J＝6.8Hz,1H),3.83-3.57(m,1H),3.52-3.14(m,2H),2.64-1.68(m,8H),1.16-0.98(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-72.96(br.s.,3F),-73.46(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值558.18384，实测值559.0(M+1)+；保留时间：2.21分钟(LC方法E)。
步骤3：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酰胺(化合物142)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯-18-甲酰胺(E/Z混合物)(32mg，0.0573mmol)于甲醇(5mL)中的溶液置于氮气气氛中，并且加入钯碳(30mg，5％w/w，0.0141mmol)。将反应置于氢气气氛中，并且搅拌过夜。将反应置于氮气气氛中，并且通过硅藻土过滤。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法(12g柱)使用40％至100％乙酸乙酯梯度/庚烷对残余物进行纯化。在19分钟内通过反相HPLC使用30％至50％乙腈/水(+10mM NH4HCO3)梯度对残余物进一步纯化，从而得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酰胺(11mg，43％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.63-7.37(m,1H),6.97-6.59(m,1H),6.28-5.82(m,1H),5.08(br.s.,2H),4.52-4.11(m,1H),4.04-3.80(m,1H),3.79-3.56(m,1H),3.13-2.86(m,1H),2.75-1.32(m,12H),1.18-0.77(m,2H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-77.35(br.s.,3F,次要非对映异构体),-80.65(br.s.,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值440.17838，实测值441.0(M+1)+；保留时间：2.72分钟(LC方法C)。
实例77：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(化合物143)的制备
步骤1：N-[(12R)-6-羟基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.1478mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液中加入碳酸铯(100mg，0.3069mmol)，并且将混合物用氮气脱气10分钟。将4-(三氟甲氧基)苯硫醇(70mg，0.3605mmol)加入到反应混合物中，并将混合物用氮气再次脱气5分钟。将Xantphos(18mg，0.0311mmol)以及然后Pd2(dba)3(14mg，0.0153mmol)加入到反应混合物中，然后用氮气脱气2分钟，并且将混合物在100℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，并且加入水(25mL)。将此混合物用二氯甲烷(2X 25mL)萃取，并将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并将溶剂蒸发。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化。在30分钟内通过反相HPLC使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行进一步纯化，从而得到呈黄色泡沫的N-[(12R)-6-羟基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(48mg，47％)。保留时间：2.97分钟(LC方法W)。
步骤2：N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
在氮气下在0℃下向N-[(12R)-6-羟基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.029mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(7mg，0.0312mmol)，并且将所得混合物在氮气下在0℃下搅拌1小时。在0℃下将混合物用碳酸氢钠的水溶液(15mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(2X 15mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(19mg，93％)。保留时间：2.53分钟(LC方法W)。
步骤3：N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
在氮气下在0℃下向N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(55mg，0.0779mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入3-氯过苯甲酸(18mg，0.0803mmol)，并且然后将所得混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用碳酸氢钠的水溶液(15mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(2X 15mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至5％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化。通过反相HPLC使用5％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进一步纯化，从而得到呈黄色泡沫的N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(43mg，55％)。ESI-MS m/z计算值721.2005，实测值722.0(M+1)+；保留时间：1.8分钟(LC方法Z)。
步骤4：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(化合物143)
将N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(10mg，0.0139mmol)于TFA(0.5mL)和二氯甲烷(0.5mL)的预制溶液中的溶液在室温下搅拌1小时。将混合物用在室温下缓慢加入的碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭，并且然后将其用二氯甲烷(2X 15mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)使用0％至5％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈浅黄色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(7mg，53％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.11(br.s.,1H),8.05(d,J＝8.5Hz,2H),7.16(d,J＝7.6Hz,2H),6.46-5.84(m,2H),4.86-4.03(m,2H),3.74-3.64(m,1H),2.76-2.50(m,1H),2.35-2.14(m,4H),1.90-1.42(m,9H),0.95-0.83(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-57.76(br.s.,3F,两种非对映异构体的-OCF3),-77.56(br.s.,3F,次要非对映异构体),-80.53(s,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值621.1481，实测值620.0(M-1)+；保留时间：3.08分钟(LC方法AA)。
实例78：(12R)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物144)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物144)
将N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.037mmol)于三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(0.5mL)的1:1混合物中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物用缓慢加入的碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭，并且然后将其用二氯甲烷(2X 15mL)萃取。然后将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-溴-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(12mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63-7.61(m,1H),4.04-3.82(m,2H),3.80-3.39(m,3H),3.36-3.26(m,1H),2.45-2.19(m,2H),2.19-2.09(m,1H),2.07-1.84(m,2H),1.79-1.66(m,1H),1.65-1.29(m,7H),0.93-0.77(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-76.40(s,3F,次要非对映异构体),-79.30(s,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值475.08307，实测值476.1(M+1)+；保留时间：4.93分钟(LC方法AA)。
实例79：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物145)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物145)
将N-[(12R)-6-羟基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(17mg，0.0241mmol)于三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(0.5mL)的1:1混合物中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物用缓慢加入的碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭，并且然后将其用二氯甲烷(2X15mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈浅橙色固体以及非对映异构体的混合物的(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯亚磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(11mg，75％)。ESI-MS m/z计算值605.15314，实测值606.2(M+1)+；保留时间：4.8分钟(LC方法AA)。
实例80：(12R)-20-氨基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物146)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物146)
将N-[(12R)-6-羟基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(26mg，0.0377mmol)于三氟乙酸(0.5mL)和二氯甲烷(0.5mL)的1:1混合物中的溶液在室温下搅拌2小时。将混合物用缓慢加入的碳酸氢钠水溶液(15mL)淬灭，并且然后将其用二氯甲烷(2X15mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-{[4-(三氟甲氧基)苯基]硫烷基}-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(15mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65-7.45(m,1H),7.44-7.35(m,4H),7.21-7.09(m,1H),4.08-3.57(m,3H),3.39-3.20(m,1H),2.40-2.19(m,2H),2.16-1.91(m,2H),1.89-1.79(m,1H),1.77-1.58(m,2H),1.55-1.33(m,5H),1.30-1.18(m,2H),0.85-0.71(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-56.84至-56.86(m,3F,两种非对映异构体的-CF3),-76.38(br s,3F,次要非对映异构体),-79.27(br s,3F,主要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值589.1582，实测值590.2(M+1)+；保留时间：5.43分钟(LC方法AA)。
实例81：(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物147)的制备
步骤1：(2S)-2-[(3-叔丁氧基-3-氧代-丙氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(2S)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.03g，20.024mmol)于乙腈(50mL)中的溶液用丙-2-烯酸叔丁酯(13.125g，15mL，102.4mmol)和苄基三甲基氢氧化铵的水溶液(1.952g，40％w/w，4.6685mmol)相继处理，并且在室温下搅拌。3小时后，将反应混合物转移到具有水(250mL)的1.0L分液漏斗中，并用MTBE(3X 250mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的(2S)-2-[(3-叔丁氧基-3-氧代-丙氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.88g，89％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ3.75(br.s.,1H),3.67-3.48(m,2H),3.42(d,J＝9.1Hz,1H),3.26(dd,J＝9.1,7.6Hz,1H),3.22-3.12(m,2H),2.40(t,J＝5.9Hz,2H),1.91-1.66(m,4H),1.39(s,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值329.2202，实测值352.2(M+23)+；保留时间：2.23分钟(LC方法E)。
步骤2：(2S)-2-(3-羟基丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(2S)-2-[(3-叔丁氧基-3-氧代-丙氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(362mg，1.0989mmol)于THF(6mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且用二异丁基氢化铝的二氯甲烷溶液(3.4mL的1M，3.4mmol)缓慢处理。20分钟后，将烧瓶从冰浴取出，并且将混合物在室温下搅拌约2小时。在冰浴中再次冷却，并且将反应用罗谢尔盐(Rochelle's salt)的水溶液(20mL)缓慢淬灭。加入一些MTBE(25mL)，并在室温下剧烈搅拌1小时。转移至125mL分液漏斗中，并将层分离。然后将水层再次用MTBE(2X 25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至70％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的(2S)-2-(3-羟基丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(191mg，67％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ4.01-3.89(m,1H),3.76(t,J＝5.6Hz,2H),3.65(t,J＝5.7Hz,2H),3.57(dd,J＝9.5,4.0Hz,1H),3.42-3.28(m,3H),2.27(br.s.,1H),1.98-1.75(m,6H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值259.1784，实测值282.2(M+23)+；保留时间：1.71分钟(LC方法E)。
步骤3：(2S)-2-(3-溴丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(2S)-2-(3-羟基丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(191mg，0.7365mmol)和三苯基磷(215mg，0.8197mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且用四溴化碳(272mg，0.8202mmol)处理。使反应逐渐温热至室温，同时在冷浴中维持4小时，然后在室温下搅拌过夜(16小时)。然后将粗反应混合物用硅胶处理，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到呈澄清无色油的(2S)-2-(3-溴丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(172mg，70％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ4.02-3.81(m,1H),3.68-3.44(m,5H),3.42-3.19(m,3H),2.09(quin,J＝6.2Hz,2H),1.97-1.77(m,4H),1.47(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值321.094，实测值344.1(M+23)+；保留时间：2.2分钟(LC方法E)。
步骤4：溴-[3-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]丙基]镁
将双颈10-mL烧瓶在氮气下火焰干燥并装入镁(132mg，5.431mmol)。将烧瓶中的镁在氮气下通过用热枪加热来活化。冷却后，加入碘(1mg，0.0039mmol)，随后逐滴加入(2S)-2-(3-溴丙氧基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.5516mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液，使得反应混合物持续沸腾。加入后，将深色反应混合物在室温下搅拌1小时。停止搅拌以使任何细颗粒沉降。所得溴-[3-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]丙基]镁被直接作为THF中的溶液用于下一步。
步骤5：(2S)-2-[(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在-78℃下在5分钟的时间段内向3,3,3-三氟-2-氧代-丙酸乙酯(384.90mg，0.4mL，1.6972mmol)于二乙醚(6mL)中的溶液中逐滴加入溴-[3-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]丙基]镁的THF溶液(3mL的0.517M，1.551mmol)。将混合物在-78℃下搅拌。将干冰丙酮浴在1小时后去除。使反应混合物在30分钟内缓慢温热至-30℃。向反应混合物加入饱和NH4Cl水溶液(2mL)和碎冰(10g)。将两层分离。将有机层浓缩，并且将残余物与水相合并，并且用MTBE(3X 60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2X 20mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥。将混合物过滤并浓缩，得到呈730mg的淡黄色粗油。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，得到呈无色油的(2S)-2-[(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(380mg，46％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.41-4.29(m,2H),4.17-4.00(m,1H),3.99-3.80(m,1H),3.64-3.19(m,6H),2.20-2.06(m,1H),2.00-1.65(m,6H),1.47(s,9H),1.35(t,J＝7.0Hz,3H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-78.57(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值413.2025，实测值436.2(M+23)+；保留时间：2.17分钟(LC方法E)。
步骤6：(2S)-2-[(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向(2S)-2-[(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(380mg，0.7905mmol)于DMF(4mL)中的溶液中按份加入氢化钠(45mg，矿物油中的60％分散体，1.1251mmol)，从而使温度在加入期间保持低于10℃。在冰水浴中搅拌30分钟后，逐滴加入溴甲基苯(201.32mg，0.14mL，1.1771mmol)，然后将反应逐渐温热至室温并搅拌20小时。在0℃下加入氯化铵(72mg，1.346mmol)作为固体，并且将混合物搅拌10分钟，然后加入15mL的庚烷/MTBE的1:3溶液以及水(5mL)。将混合物转移到用庚烷/MTBE(1:3，40mL)和水(20mL)冲洗的萃取漏斗中。将有机层分离，并将水相用庚烷/MTBE溶液(1:3，2X60mL)再次萃取。将合并的有机层用水(1X 20mL)、盐水(2X 20mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的(2S)-2-[(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(365mg，87％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.46-7.28(m,5H),4.82(d,J＝10.6Hz,1H),4.64(d,J＝10.6Hz,1H),4.34(q,J＝7.1Hz,2H),3.99-3.76(m,1H),3.58-3.47(m,1H),3.43(t,J＝6.0Hz,2H),3.38-3.16(m,3H),2.18-1.97(m,2H),1.96-1.73(m,5H),1.69-1.59(m,1H),1.46(s,9H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-70.43至-70.82(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值503.2495，实测值526.3(M+23)+；保留时间：2.55分钟(LC方法E)。
步骤7：2-苄氧基-5-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸
向(2S)-2-[(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)甲基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.75g，1.4254mmol)于甲醇(6.5mL)中的溶液中加入氢氧化钠(110mg，2.7502mmol)于水(2mL)中的溶液，并且将混合物在-40℃下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩以除去大部分甲醇。加入水(30mL)，并将混合物用Et2O(2X 80mL)萃取。将有机层合并并用水(2X30mL)洗涤，并将合并的水相用1N HCl水溶液(2.9mL)处理，并且然后用DCM(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈无色稠密油的2-苄氧基-5-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(657mg，95％)。ESI-MSm/z计算值475.2182，实测值498.2(M+23)+；保留时间：2.25分钟(LC方法E)。
步骤8：2-苄氧基-5-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)
在0℃下将1,4-二噁烷中的盐酸(12mL，4M，48mmol)溶液逐滴加入到2-苄氧基-5-[[(2S)-1-叔丁氧基羰基吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(1.787g，3.7544mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中。加入5分钟后去除冷浴，并将反应混合物在室温下搅拌23小时。将挥发物通过在减压下蒸发去除。将固体溶解于二氯甲烷(30mL)中，并且然后在减压下浓缩，并且在真空下干燥，以得到呈淡黄色泡沫的2-苄氧基-5-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)(1.58g，98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.26(br s,1H),9.28(br s,1H),8.66(br s,1H),7.48-7.26(m,5H),4.77(d,J＝10.9Hz,1H),4.60(d,J＝10.9Hz,1H),3.69-3.59(m,1H),3.58-3.53(m,1H),3.52-3.40(m,3H),3.18-3.03(m,2H),2.15-1.77(m,5H),1.76-1.49(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值375.16574，实测值376.2(M+1)+；保留时间：1.4分钟(LC方法Z)。
步骤9：2-苄氧基-5-[[(2S)-1-[6-甲氧基羰基-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸
向2-苄氧基-5-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)(50mg，0.1117mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(45mg，0.1542mmol)于乙腈(2mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(74.2mg，0.1mL，0.5741mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂在减压下去除，然后用乙酸乙酯(70mL)稀释，并且转移到具有30mL水的萃取漏斗中。将混合物用乙酸乙酯(3X 70mL)萃取。将合并的有机层用0.5N盐酸水溶液(2X 10mL)和盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色固体的2-苄氧基-5-[[(2S)-1-[6-甲氧基羰基-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(53mg，75％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.66-8.52(m,1H),7.43-7.19(m,5H),4.82-4.69(m,2H),4.63-4.53(m,1H),4.06-3.89(m,3H),3.73-3.29(m,6H),2.14-1.92(m,5H),1.91-1.76(m,1H),1.72-1.53(m,2H)。一个可交换的质子在NMR ppm中未被观察到。19FNMR(282MHz,氯仿-d)δ-54.31至-54.66(m,3F),-71.70(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值623.1702，实测值646.0(M+23)+；保留时间：2.34分钟(LC方法E)。
步骤10：6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向2-苄氧基-5-[[(2S)-1-[6-甲氧基羰基-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(53mg，0.0839mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液中加入三乙胺(18.15mg，0.025mL，0.1794mmol)和HATU(44mg，0.1157mmol)。将混合物搅拌10分钟，并且加入N-氨基氨基甲酸叔丁酯(14mg，0.1059mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用冷水稀释，并且用乙酸乙酯(3X 40mL)萃取，然后用饱和NaHCO3水溶液(2X 10mL)、水(1X 10mL)和盐水(3X 10mL)洗涤。将有机层在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(52mg，83％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.66-8.53(m,1H),8.33(d,J＝3.2Hz,1H),7.47-7.28(m,5H),6.32(br.s,1H),4.90-4.78(m,1H),4.78-4.56(m,2H),4.05-3.92(m,3H),3.72-3.33(m,6H),2.32-2.17(m,2H),2.13-1.99(m,3H),1.93-1.79(m,1H),1.73-1.63(m,2H),1.49-1.42(m,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值737.2496，实测值736.2(M-1)-；保留时间：2.41分钟(LC方法E)。
步骤11：6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在室温下向6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(433mg，0.547mmol)和氢氧化锂(一水合物)(73mg，1.7396mmol)的混合物中加入THF(13mL)和水(13mL)。然后将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过在减压下蒸发浓缩，并且然后转移到用水(25mL)和DCM(40mL)冲洗的分液漏斗中。用1M盐酸水溶液将pH调节至2。将混合物用DCM(3X 60mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，并且经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以得到呈黄色泡沫的6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(410mg，98％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.77-8.52(m,2H),7.44-7.27(m,5H),6.65(br.s,1H),4.88-4.56(m,3H),3.79-3.36(m,6H),2.18-1.84(m,6H),1.80-1.61(m,2H),1.54-1.43(m,9H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。保留时间：2.31分钟(LC方法E)。
步骤12：6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯
向6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(410mg，0.5383mmol)于CH2Cl2(3.6mL)中的溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(69mg，0.5995mmol)和DCC(114mg，0.5525mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时，并且然后将其在室温下搅拌过夜。将反应混合物冷却至0℃，并将形成的沉淀滤出并用二乙醚冲洗，并丢弃固体，然后将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色泡沫的6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯(400mg，85％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.69-8.58(m,1H),8.36-8.27(m,1H),7.46-7.29(m,5H),6.28(br.s,1H),4.93-4.78(m,1H),4.78-4.60(m,2H),3.76-3.38(m,6H),2.89(s,4H),2.32-2.18(m,2H),2.17-2.06(m,3H),1.97-1.84(m,1H),1.75-1.61(m,2H),1.45(s,9H)ppm。保留时间：2.30分钟(LC方法E)。
步骤13：6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯(盐酸盐)
向6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-4-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5,5,5-三氟-戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯(849mg，0.9631mmol)于1,4-二噁烷(34mL)中的溶液中逐滴加入盐酸(11mL，二噁烷中的4M，44mmol)。将混合物在油浴中在32℃下在20小时内搅拌。将挥发物在减压下去除。将残余物由1,2-二氯乙烷(2X 15mL)蒸发，并且在真空下干燥，从而得到呈淡黄色油的6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯(盐酸盐)(828mg，100％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.66-8.53(m,1H),7.45-7.26(m,5H),4.95-4.52(m,3H),3.85-3.33(m,7H),2.94-2.52(m,4H),2.31-1.76(m,6H),1.69-1.47(m,2H)ppm。三个可交换的质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值720.1979，实测值721.2(M+1)+；保留时间：1.9分钟(LC方法Z)。
步骤14：(6S)-12-苄氧基-18-硝基-12,20-双(三氟甲基)-8-氧杂-2,14,15,21-四氮杂三环[15.3.1.02,6]二十一-1(21),17,19-三烯-13,16-二酮
在1分钟内向6-[(2S)-2-[[4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]甲基]吡咯烷-1-基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯(盐酸盐)(828mg，0.9625mmol)于1,2-二氯乙烷(140mL)中的悬浮液中逐滴加入三乙胺(943.8mg，1.3mL，9.327mmol)。然后将混合物在70℃下搅拌2小时。将混合物冷却，并且将挥发物在减压下去除。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈浅黄色固体的(6S)-12-苄氧基-18-硝基-12,20-双(三氟甲基)-8-氧杂-2,14,15,21-四氮杂三环[15.3.1.02,6]二十一-1(21),17,19-三烯-13,16-二酮(364mg，61％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.78-8.48(m,1H),8.30-8.13(m,1H),7.48-7.28(m,3H),7.23-7.01(m,2H),4.81-4.53(m,2H),4.39-4.23(m,1H),4.02-3.08(m,6H),2.25-1.78(m,5H),1.53-1.29(m,1H),1.00-0.87(m,1H),0.77-0.51(m,1H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。19F NMR(400MHz,氯仿-d)δ-54.07(s,3F,次要非对映异构体的Ar-CF3),-59.20(s,3F,主要非对映异构体的Ar-CF3),-73.96(s,3F,次要非对映异构体的Alk-CF3),-74.09(s,3F,主要非对映异构体的Alk-CF3)ppm。ESI-MS m/z计算值605.1709，实测值606.2(M+1)+；保留时间：1.93分钟(LC方法Z)。
步骤15：(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯
在0℃下向(6S)-12-苄氧基-18-硝基-12,20-双(三氟甲基)-8-氧杂-2,14,15,21-四氮杂三环[15.3.1.02,6]二十一-1(21),17,19-三烯-13,16-二酮(17mg，0.0275mmol)于乙腈(2mL)和N,N-二异丙基乙胺(14.692mg，0.02mL，0.1125mmol)中的溶液中加入4-甲苯磺酰氯(7mg，0.036mmol)。然后将混合物在50℃下搅拌2小时，然后在70℃下搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(80mL)中，并且将有机层用5％碳酸氢钠水溶液(2X 15mL)、水(2X 15mL)、盐水(15mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯(9mg，55％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.72-8.66(m,1H),7.41-7.23(m,5H),5.34-4.62(m,2H),4.55-4.44(m,1H),4.10-4.02(m,1H),3.81-3.55(m,3H),3.50-3.38(m,1H),3.07-2.97(m,1H),2.94-2.62(m,1H),2.35-2.22(m,1H),2.21-2.00(m,4H),1.69-1.59(m,1H),1.55-1.46(m,1H)ppm。19F NMR(282MHz,氯仿-d)δ-53.19(s,3F,次要非对映异构体的Ar-CF3),-53.26(s,3F,主要非对映异构体的Ar-CF3),-72.58(s,3F,次要非对映异构体的Alk-CF3),-72.79(s,3F,主要非对映异构体的Alk-CF3)ppm。ESI-MS m/z计算值587.16034，实测值588.2(M+1)+；保留时间：2.12分钟(LC方法Z)。
步骤16：(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(化合物147)
将(12S)-6-(苄氧基)-20-硝基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯(9mg，0.0151mmol)溶解于无水甲醇(2mL)中。将氮气鼓泡到混合物中5分钟，并且然后加入钯碳(17mg，5％w/w，0.008mmol)。然后将氢气用气球鼓泡5分钟，并且将反应混合物在氢气下在室温下搅拌过夜。用氮气替换氢气球，并且使用针出口用氮气吹扫混合物。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(5mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到淡黄色泡沫的所述淡黄色泡沫由乙腈/水冻干，以得到呈黄色固体的(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(4.8mg，63％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.64
-7.41(m,1H),4.47-4.08(m,2H),3.87-3.36(m,4H),3.06-2.68(m,2H),2.29
-1.99(m,3H),1.98-1.83(m,2H),1.66-1.54(m,1H),1.38-1.28(m,1H),0.96
-0.80(m,1H)ppm。两个可交换质子在NMR中未被观察到或被溶剂峰屏蔽。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-54.52至-56.24(m,3F,两种非对映异构体的-CF3),-76.97(s,3F,主要非对映异构体),-81.17(s,3F,次要非对映异构体)ppm。ESI-MS m/z计算值467.13922，实测值468.2(M+1)+；保留时间：4.37分钟(LC方法AA)。
实例82：17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体1)(化合物148)、17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体2)(化合物149)、17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体3)(化合物150)和17-氨基-6-羟基-N,N二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体4)(化合物151)的制备
步骤1：2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯
在20mL微波小瓶中，在室温下将[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(1.35g，2.076mmol)溶解于乙腈(10mL)中，随后加入2-氨基戊-4-烯酸乙酯(900mg，6.286mmol)，然后加入DIEA(1.75mL，10.05mmol)，并且然后将混合物搅拌16小时。将混合物浓缩，并且通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(900mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(s,1H),8.14(t,J＝6.9Hz,1H),7.40-7.24(m,5H),5.81(dddt,J＝40.2,17.2,10.2,6.7Hz,2H),5.16-4.98(m,4H),4.76(d,J＝10.7Hz,1H),4.69(dddd,J＝9.1,7.2,5.3,1.9Hz,1H),4.59(dd,J＝10.7,2.0Hz,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.82-2.63(m,2H),2.55(dd,J＝12.4,7.4Hz,1H),2.47(s,1H),2.34-2.15(m,2H),1.04(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值643.1865，实测值644.2(M+1)+；保留时间：2.05分钟(LC方法J)。
步骤2：乙基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)
在1L 3颈烧瓶中，在氮气气氛下将1,2-二氯乙烷(400mL)中的经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(250mg，0.3407mmol)并且加热至50℃。然后，通过注射器加入2-[[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(900mg，1.399mmol)于1,2-二氯乙烷(10mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热2小时。将残余物浓缩并且通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈米白色固体的乙基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(310mg，36％)。ESI-MS m/z计算值615.1553，实测值616.0(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法J)。
步骤3：乙基-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)
将乙基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(160mg，0.26mmol)和氯化锡(II)二水合物(235mg，1.041mmol)于乙酸乙酯(7mL)中的混合物在55℃下搅拌90分钟。30分钟后加入另外的氯化锡(II)二水合物(235mg，1.041mmol)。将混合物用EtOAc稀释，并将2N NaOH加入到混合物中，直到其变得粘性，然后通过硅藻土过滤。将滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后，通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对混合物进行纯化，以得到呈黄色固体的乙基-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(125mg，82％)。ESI-MS m/z计算值585.1811，实测值586.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法J)。
步骤4：乙基-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)
向乙基-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(125mg，0.2135mmol)于二噁烷(6mL)中的溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(175mg，0.8018mmol)、三乙胺(220μL，1.578mmol)和DMAP(3.5mg，0.02865mmol)，并且将反应混合物搅拌3小时。将混合物用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用水(5mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)和盐水(5mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至40％ EtOAc/己烷平缓梯度对残余物进行纯化，从而得到呈明黄色泡沫的乙基-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(110mg，75％)。ESI-MS m/z计算值685.2335，实测值686.2(M+1)+；保留时间：2.29分钟。此产物受少量的双-Boc保护的副产物污染(ESI-MS m/z计算值785.28595，实测值786.2(M+1)+；保留时间：2.37分钟(LC方法J)。
步骤5：6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)
向乙基-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯(E/Z混合物)(135mg，0.1969mmol)(受少量由先前步骤所携带的类似双-Boc保护的化合物污染)于THF(2mL)中的溶液中加入MeOH(2mL)和H2O(3mL)，随后加入氢氧化锂(30mg，1.253mmol)。将混合物在65℃下搅拌2小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入10％ HCl水溶液(10mL)以酸化至pH约4，并且将产物用EtOAc(2X 150mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)(61mg，47％)。ESI-MS m/z计算值657.2022，实测值658.2(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法J)。
步骤6：N-[6-苄氧基-12-(二甲基氨基甲酰)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在室温下向6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)(61mg，0.09277mmol)于NMP(2.0mL)中的溶液中加入N-甲基甲铵(盐酸盐)(38mg，0.466mmol)和DIEA(250μL，1.435mmol)，随后加入HATU(55mg，0.1446mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将有机材料用乙酸乙酯(3X 5mL)萃取。将有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(4克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的N-[6-苄氧基-12-(二甲基氨基甲酰)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(49mg，77％)。ESI-MS m/z计算值684.2495，实测值685.2(M+1)+；保留时间：2.15分钟(LC方法J)。
步骤7：N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)和N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)
在100mL圆底烧瓶中，将N-[6-苄氧基-12-(二甲基氨基甲酰)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(39mg，0.05697mmol)于AcOH(1mL)和乙酸乙酯(1mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(65mg，10％w/w，0.06108mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，用过量乙酸乙酯洗涤，并且将滤液浓缩。在15分钟内通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到两种非对映异构体对的分离：
待洗脱的第一非对映异构体对分离为呈黄色固体的N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(8.7mg，51％)。ESI-MS m/z计算值596.2182，实测值597.2(M+1)+；保留时间：1.53分钟(LC方法J)。
待洗脱的第二非对映异构体对分离为呈黄色固体的N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(6.7mg，39％)。ESI-MS m/z计算值596.2182，实测值597.2(M+1)+；保留时间：1.61分钟(LC方法J)。
步骤8：17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体1)(化合物148)和17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体2)(化合物149)
向N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对1)(8.7mg，0.01458mmol)于DCM(750μL)中的溶液中加入TFA(100μL，1.298mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌45分钟。将混合物浓缩并且在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到产物的非对映异构体对。通过手性SFC使用用14％ MeOH(+20mM NH3)/86％ CO2洗脱的ChiralPak IG柱(250X10mm；5μm粒度)以10毫升/分钟的流速对此混合物进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体1)(2.1mg，55％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.33(s,1H),5.80(d,J＝6.0Hz,1H),5.12(s,2H),4.96(q,J＝5.7Hz,1H),3.58(s,1H),3.13(s,3H),3.04(s,3H),2.38-2.29(m,1H),2.28-2.16(m,2H),2.04(s,1H),1.77(dt,J＝13.5,6.6Hz,1H),1.60(d,J＝6.0Hz,2H),1.54-1.48(m,2H),1.44-1.37(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.2(M+1)+；保留时间：1.56分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体2)(1.1mg，30％)。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.2(M+1)+；保留时间：1.56分钟(LC方法A)。
步骤9：17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体3)(化合物150)和17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体4)(化合物151)
向N-[12-(二甲基氨基甲酰)-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(非对映异构体对2)(9.1mg，0.01526mmol)于DCM(750μL)中的溶液中加入TFA(100μL，1.298mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌45分钟。将混合物浓缩并且在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，从而得到产物的非对映异构体对。通过手性SFC使用用14％ MeOH(+20mM NH3)/86％ CO2洗脱的ChiralPak IG柱(250X10mm；5μm粒度)以10毫升/分钟的流速对此混合物进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体3)(1.7mg，44％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.34(s,1H),5.71(d,J＝6.0Hz,1H),5.05(s,2H),4.97(q,J＝6.2Hz,1H),3.59(s,1H),3.08(s,3H),3.03(s,3H),2.41(dt,J＝15.4,8.0Hz,1H),2.27(dt,J＝11.9,6.1Hz,1H),2.20(s,1H),2.04(s,1H),1.82(s,1H),1.65(dd,J＝12.5,6.2Hz,2H),1.51(s,2H),1.26(s,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.2(M+1)+；保留时间：1.59分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-6-羟基-N,N-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酰胺(对映异构体4)(1.5mg，39％)。ESI-MS m/z计算值496.16577，实测值497.2(M+1)+；保留时间：1.59分钟(LC方法A)。
实例83：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物152)和(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物153)的制备
步骤1：(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物152)和(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物153)
在30分钟内将(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(15mg，0.02413mmol)通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到两种单一非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(5.8mg，69％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.15-8.11(m,1H),8.05(dt,J＝8.7,2.6Hz,2H),7.41-7.36(m,2H),7.35-7.33(m,1H),5.30(s,1H),4.86(s,1H),4.02(d,J＝11.1Hz,1H),2.80(s,1H),2.55(s,1H),2.47-2.22(m,4H),2.10(s,1H),1.67(s,5H),1.50(d,J＝13.3Hz,3H)ppm。一个可交换的质子未被观察到或被溶剂峰屏蔽。ESI-MS m/z计算值621.1481，实测值622.3(M+1)+；保留时间：1.26分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-[4-(三氟甲氧基)苯磺酰基]-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(20),2,4,17(21),18-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(2.4mg，28％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.20(d,J＝9.7Hz,1H),8.04(t,J＝9.0Hz,2H),7.32(dd,J＝13.5,8.2Hz,3H),5.26(s,1H),5.02(s,1H),4.07(s,1H),3.38(d,J＝9.8Hz,2H),2.60(d,J＝36.9Hz,1H),2.35(d,J＝37.6Hz,2H),2.22-2.04(m,1H),1.76-1.43(m,8H)ppm。两个可交换的质子未被观察到或被溶剂峰屏蔽。ESI-MS m/z计算值621.1481，实测值622.4(M+1)+；保留时间：1.4分钟(LC方法A)。
实例84：[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物154)的制备
步骤1：2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸乙酯
向2-氨基戊-4-烯酸乙酯(1.3g，9.079mmol)溶解于二噁烷(7.5mL)中的溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(2.5g，11.45mmol)和三乙胺(4.5mL，32.29mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将二噁烷蒸发至半体积并加入水。将此混合物用乙酸乙酯萃取，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(440克柱)使用100％己烷至100％ EtOAc平缓梯度对所得残余物进行纯化，以得到呈澄清油的2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸乙酯(1.68g，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.21(d,J＝7.8Hz,1H),5.76(ddt,J＝17.1,10.1,6.9Hz,1H),5.12-5.01(m,2H),4.12-4.02(m,2H),3.97(td,J＝8.2,5.6Hz,1H),2.35(tt,J＝14.4,7.2Hz,2H),1.38(s,9H),1.17(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值243.14706，实测值244.1(M+1)+；保留时间：1.56分钟(LC方法A)。
步骤2：2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸
向2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸乙酯(1.68g，6.905mmol)于THF(25mL)中的溶液中加入MeOH(25mL)和H2O(35mL)，随后加入氢氧化锂(990mg，41.34mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入10％ HCl水溶液(10mL)以酸化至pH约4，并且将产物用EtOAc(2X 150mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷平缓至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈粘性油的2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸(1.48g，100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.38(s,1H),7.03(d,J＝8.1Hz,1H),5.89-5.58(m,1H),5.09(dd,J＝17.2,2.0Hz,1H),5.03(dd,J＝10.2,2.1Hz,1H),3.93(td,J＝8.6,5.1Hz,1H),2.47-2.25(m,2H),1.38(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值215.11575，实测值216.2(M+1)+；保留时间：1.11分钟(LC方法A)。
步骤3：N-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯
在室温下向2-(叔丁氧基羰基氨基)戊-4-烯酸(1.35g，6.272mmol)于THF(48m)和NMP(48mL)中的溶液中加入吡咯烷(1.85mL，22.16mmol)和DIEA(6.5mL，37.32mmol)，随后加入HATU(3.69g，9.705mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物用水、柠檬酸溶液稀释，并用乙酸乙酯(2X 50mL)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷平缓至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，得到呈白色固体的N-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯(1.45g，86％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.90(d,J＝8.2Hz,1H),5.74(ddt,J＝17.1,10.1,7.0Hz,1H),5.09(dd,J＝17.2,2.0Hz,1H),5.01(dd,J＝10.1,2.2Hz,1H),4.20(td,J＝8.3,5.6Hz,1H),3.52(dt,J＝10.1,6.8Hz,1H),3.41(dt,J＝10.0,6.8Hz,1H),3.25(td,J＝13.5,12.0,7.2Hz,2H),2.32(dt,J＝13.1,6.2Hz,1H),2.22(dd,J＝14.3,7.6Hz,1H),1.87(p,J＝6.7Hz,2H),1.81-1.71(m,2H),1.36(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值268.17868，实测值269.2(M+1)+；保留时间：1.3分钟(LC方法A)。
步骤4：2-氨基-1-吡咯烷-1-基-戊-4-烯-1-酮(盐酸盐)
向N-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯(1.45g，5.403mmol)于DCM(20mL)中的溶液中加入HCl(二噁烷中的4N，7M，28mmol)，并且在室温下搅拌1小时。将混合物蒸发至干燥，然后用乙醚稀释并浓缩。将残余物真空放置过夜，以得到呈米白色固体的2-氨基-1-吡咯烷-1-基-戊-4-烯-1-酮(盐酸盐)(750mg，68％)。ESI-MS m/z计算值168.12627，实测值169.2(M+1)+；保留时间：0.52分钟(LC方法A)。
步骤5：N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在20-mL微波容器中，将2-氨基-1-吡咯烷-1-基-戊-4-烯-1-酮(盐酸盐)(550mg，2.687mmol)、DIEA(900μL，5.167mmol)和N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(700mg，0.9315mmol)合并于乙腈(12mL)和DMSO(3.5mL)中，并且将混合物在90℃下加热14小时。然后，在105℃下加热另外24小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(159mg，23％)。ESI-MS m/z计算值738.29645，实测值739.2(M+1)+；保留时间：1.91分钟(LC方法M)。
步骤6：N-[(6R)-6-苄氧基-12-(吡咯烷-1-羰基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在500mL 3颈烧瓶中，在氮气气氛下将1,2-二氯乙烷(100mL)中的经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(40mg，0.05451mmol)加热至50℃。然后，通过注射器加入N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(吡咯烷-1-羰基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(155mg，0.2098mmol)于1,2-二氯乙烷(50mL)中的溶液。将所得混合物在75℃下加热2小时。将混合物浓缩并且然后通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至60％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈淡黄色固体的N-[(6R)-6-苄氧基-12-(吡咯烷-1-羰基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(98mg，66％)。ESI-MS m/z计算值710.26514，实测值711.2(M+1)+；保留时间：1.62分钟(LC方法M)。
步骤7：[(6R)-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(E/Z混合物)
将TFA(750μL，9.735mmol)加入到N-[(6R)-6-苄氧基-12-(吡咯烷-1-羰基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(98mg，0.138mmol)于1,2-二氯乙烷(100mL)中的溶液，并且将所得混合物搅拌20分钟。将反应混合物浓缩至干燥，然后用己烷和DCM稀释，并且再次浓缩，然后在真空下干燥过夜，以得到呈浅绿色固体的[(6R)-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(E/Z混合物)(105mg，82％)。ESI-MS m/z计算值610.2127，实测值611.0(M+1)+；保留时间：1.67分钟(LC方法J)。
步骤8：[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(化合物154)
在50mL圆底烧瓶中，将[(6R)-17-氨基-6-苄氧基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(E/Z混合物)(98mg，0.1605mmol)于AcOH(2.5mL)和乙酸乙酯(5mL)中的溶液用氮气吹扫。然后，加入Pd/C(185mg，10％w/w，0.1738mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌5小时。将混合物通过硅藻土过滤，用过量乙酸乙酯洗涤，并且将滤液浓缩。通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色固体的[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(48.3mg，58％)。ESI-MS m/z计算值522.1814，实测值523.1(M+1)+；保留时间：1.68分钟(LC方法A)。
实例85：(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体1)(化合物155)和(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体2)(化合物156)的制备
步骤1：2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯和2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯
将N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(2.1g，2.794mmol)、2-氨基戊-4-烯酸乙酯(1.2g，8.381mmol)、(1E,4E)-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮；钯(128mg，0.1398mmol)、Xantphos(165mg，0.2852mmol)和碳酸铯(3.7g，11.36mmol)于二噁烷(32mL)中的混合物通过氮气鼓泡脱气1分钟，然后密封，并且在95℃下搅拌16小时。将反应过滤并用乙酸乙酯稀释，然后用水和盐水洗涤，并且然后将有机层经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈淡黄色固体的2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(66mg，3％)。ESI-MS m/z计算值713.26483，实测值714.2(M+1)+；保留时间：2.13分钟(LC方法M)。
还从硅胶柱纯化分离出了2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(167mg，7％)。ESI-MS m/z计算值813.31726，实测值814.2(M+1)+；保留时间：1.91分钟(LC方法J)。
步骤2：(6R)-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)
在500mL 3颈烧瓶中，将经由0.25当量詹氏催化剂1B(52mg，0.07087mmol)的氮气线持续脱气的溶液溶解于DCE(150mL)中，并且在氮气气氛下加热至50℃。然后，通过注射器加入2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(167mg，0.2052mmol)与2-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]戊-4-烯酸乙酯(66mg，0.09248mmol)合并于DCE(150mL)中的溶液。将所得混合物加热至75℃持续2小时。将混合物浓缩，并且通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈米白色固体的149mg的(6R)-6-苄氧基-17-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸乙酯和(6R)-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12-甲酸酯的混合物。向此混合物于THF(2.5mL)中的溶液中加入MeOH(2.5mL)和H2O(2.5mL)，随后加入氢氧化锂(45mg，1.879mmol)。将混合物在50℃下搅拌4小时。在减压下去除THF和甲醇，并且然后加入5mL的10％ HCl水溶液以酸化至pH约4，并且将产物用EtOAc(2X25mL)萃取。将有机相合并，用盐水(25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至80％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色固体的(6R)-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)(63.3mg，21％，80％纯度)，ESI-MS m/z计算值657.2022，实测值658.2(M+1)+；保留时间：2.03分钟(LC方法J)。
步骤3：(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体1)(化合物155)和(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体2)(化合物156)
向(6R)-6-苄氧基-17-(叔丁氧基羰基氨基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12-甲酸(E/Z混合物)(20mg，0.03042mmol)于AcOH(540μL)中的溶液中加入Pd/C(12.95mg，10％w/w，0.01217mmol)。将混合物在填充氢气的气球下在室温下搅拌3小时。将反应混合物经二氧化硅塞过滤，用乙酸乙酯充分洗涤，并且然后将滤液浓缩。向残余物加入TFA(500μL)，并且将此混合物在室温下搅拌3分钟。将混合物浓缩并且通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进行纯化，得到两种对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体1)(5mg，43％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57(s,1H),4.34(dd,J＝9.4,3.1Hz,1H),2.58-2.44(m,1H),2.44-2.34(m,1H),2.14(dt,J＝13.7,8.0Hz,1H),1.95-1.86(m,1H),1.79(d,J＝9.0Hz,1H),1.69(d,J＝6.9Hz,2H),1.55(d,J＝9.4Hz,1H),1.49-1.39(m,1H),1.36-1.29(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.11847，实测值470.05(M+1)+；保留时间：1.29分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体收集为黄色固体的(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-甲酸(对映异构体2)(4mg，28％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57(s,1H),4.43(dd,J＝9.2,3.6Hz,1H),2.51-2.32(m,2H),2.19(ddd,J＝14.8,9.3,6.4Hz,1H),1.97-1.67(m,4H),1.61-1.55(m,1H),1.48(t,J＝6.6Hz,1H),1.33(d,J＝6.2Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.11847，实测值470.02(M+1)+；保留时间：1.39分钟(LC方法A)。
实例86：[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体1)(化合物157)和[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体2)(化合物158)的制备
步骤1：[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体1)(化合物157)和[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体2)(化合物158)
通过手性SFC使用用14％ MeOH(+20mM NH3)/86％ CO2洗脱的ChiralPak IC柱(250X 21.2mm，5μm粒度)以70毫升/分钟的流速对[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(42mg，0.08039mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体，并且在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度进一步纯化，从而得到呈黄色固体的[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体1)(7.7mg，36％)。ESI-MS m/z计算值522.1814，实测值523.0(M+1)+；保留时间：1.68分钟(LC方法A)。
在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对待洗脱的第二对映异构体进一步纯化，得到呈黄色固体的[(6R)-17-氨基-6-羟基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12-基]-吡咯烷-1-基-甲酮(对映异构体2)(5.3mg，25％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.33(s,1H),5.65(s,1H),5.07(s,1H),4.77(d,J＝6.0Hz,1H),3.61–3.45(m,4H),2.41(dt,J＝15.4,8.1Hz,1H),2.30(dd,J＝13.2,6.8Hz,1H),2.21(s,1H),1.95(ddd,J＝27.7,12.5,6.3Hz,4H),1.88–1.83(m,1H),1.67(dd,J＝12.7,5.9Hz,3H),1.55(q,J＝9.1,6.7Hz,3H)ppm。可交换芳基NH2质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值522.1814，实测值523.0(M+1)+；保留时间：1.69分钟(LC方法A)。
实例87：(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物159)和(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物160)的制备
步骤1：2,6-二氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶
在0℃下向2,6-二氯-4-甲氧基-吡啶(21.17g，118.92mmol)于硫酸(127mL)中的溶液中加入硝酸(17.898g，18.8mL，193.15mmol)。将反应加热至100℃持续2小时。将反应混合物倒入冰水(350mL)中。将悬浮液过滤并用水(80mL)洗涤，以得到呈白色固体的2,6-二氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶(24.5g，91％)。1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ7.74(s,1H),4.06(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值221.9599，实测值223.0(M+1)+；保留时间：2.91分钟(LC方法G)。
步骤2：2-(6-氯-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-2-氰-乙酸乙酯
向2,6-二氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶(208mg，0.914mmol)和CsCO3(446.6mg，1.3707mmol)于DMF(9mL)中的溶液中加入2-氰乙酸乙酯(119.78mg，113μL，1.0589mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将水(20mL)和HCl水溶液(2M，7mL)加入到反应混合物中，然后用EtOAc(3X 20mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 15mL)然后用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(干负载25g SiO2和少量DCM)(并且用0％至100％ EtOAc/己烷梯度洗脱)进行纯化，以得到呈暗黄色油的2-(6-氯-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-2-氰-乙酸乙酯(153.8mg，56％)。1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.10(s,1H),5.24(s,1H),4.37–4.26(m,2H),4.05(s,3H),1.33(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值299.0309，实测值300.4(M+1)+；保留时间：2.85分钟(LC方法G)。
步骤3：6-氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸
向2-(6-氯-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基)-2-氰-乙酸乙酯(50.7mg，0.1658mmol)于水(0.3mL)和DMSO(0.1mL)中的混合物中加入NaOAc(33.8mg，0.412mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌，并且逐滴加入H2O2(3.4015g，0.1mL的30％w/w，30mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，并且加入HCl水溶液(0.5M，5mL)，然后用EtOAc(3X 5mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 5mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(负载12g SiO2和少量DCM)(并且用0％至15％ MeOH/DCM梯度洗脱)进行纯化，得到呈淡黄色固体的6-氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸(22.8mg，59％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.44(s,1H),3.97(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值231.9887，实测值233.3(M+1)+；保留时间：1.75分钟(LC方法G)。
步骤4：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸
向6-氯-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸(0.4g，1.7199mmol)和(2S)-2-烯丙基吡咯烷(三氟乙酸盐)(0.8g，3.5523mmol)于DMF(45mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.23g，8.8998mmol)，并且将混合物搅拌并且在110℃下加热过夜。冷却至室温后，将反应混合物用100mL的水稀释。将混合物用DCM(3X 100mL)洗涤。然后将明黄色水溶液用1N HCl水溶液(20mL)酸化至pH＝3。将溶液用DCM(3X 100mL)萃取。将合并的有机溶液用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液蒸发。将残余物在真空中干燥，从而得到呈棕色油的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸(0.84g，64％)。ESI-MS m/z计算值307.11682，实测值308.5(M+1)+；保留时间：2.44分钟(LC方法G)。此材料被用于下一步，而无需进一步纯化。
步骤5：6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼
向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-甲酸(3.55g，7.649mmol)于EtOAc(130mL)中的溶液中加入2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(盐酸盐)(3.93g，11.601mmol)和吡啶(3.7164g，3.8mL，46.984mmol)，并且溶液变浑浊。然后加入EtOAc中的丙基膦酸酐溶液(9.6218g，9.0007mL的50％w/w，15.12mmol)，并将混合物在50℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并且通过搅拌15分钟用1M NaHCO3水溶液(250mL)淬灭。将层分离，并且将水层用EtOAc(2X 200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。将含油残余物干负载于二氧化硅上，并且通过硅胶柱色谱法(220g柱，0％至40％ EtOAc/己烷)进行纯化，从而得到呈泡沫状黄色固体的6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(2.3g，50％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.07–9.99(m,1H),9.40–9.31(m,1H),7.43–7.32(m,5H),5.92(s,1H),5.87–5.75(m,2H),5.16–4.99(m,4H),4.81(d,J＝10.5Hz,1H),4.68(d,J＝10.6Hz,1H),4.19(s,1H),3.90(s,3H),3.56(s,1H),3.40(s,1H),2.58–2.37(m,2H),2.29–1.90(m,8H)ppm。ESI-MS m/z计算值591.2305，实测值592.5(M+1)+；保留时间：3.4分钟(LC方法G)。
步骤6：2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑
在50℃下向6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-N'-[2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-4-甲氧基-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(0.4g，0.4402mmol)和DIEA(296.80mg，0.4mL，2.2964mmol)于乙腈(20mL)中的溶液中加入甲苯磺酰氯(0.14g，0.7343mmol)。将温度升至70℃，并且将混合物在此温度下搅拌过夜。加入更多甲苯磺酰氯(0.14g，0.7343mmol)和DIEA(296.80mg，0.4mL，2.2964mmol)并且继续加热6小时。加入另外的甲苯磺酰氯(0.42g，2.203mmol)和DIEA(890.40mg，1.2mL，6.8893mmol)并且继续加热过夜。冷却至室温后，将反应混合物浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(100mL)中。将有机层用5％ NaHCO3水溶液(100mL)、水(2X 100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过快速色谱法(粗干负载于用0％至40％ EtOAc/己烷洗脱的25g柱上)进行纯化，从而得到呈黄绿色固体的2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑(0.23g，89％)。ESI-MS m/z计算值573.2199，实测值574.5(M+1)+；保留时间：3.87分钟(LC方法G)。
步骤7：(12S)-6-苄氧基-19-甲氧基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)
在氮气气氛下在50℃下向2-[6-[(2S)-2-烯丙基吡咯烷-1-基]-4-甲氧基-3-硝基-2-吡啶基]-5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑(1g，1.7116mmol)于DCE(250mL)中的脱气溶液中加入詹氏催化剂1B(200mg，0.2722mmol)。将所得混合物加热至70℃并搅拌5小时。将反应混合物冷却并在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(干负载于25g硅胶，并且用0％至40％ EtOAc/己烷梯度洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈绿色固体的(12S)-6-苄氧基-19-甲氧基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(320mg，29％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.40–7.21(m,5H),6.33(s,1H),5.70–5.36(m,2H),4.70(d,J＝11.2Hz,1H),4.60(d,J＝11.1Hz,1H),4.00(s,3H),3.95–3.85(m,1H),3.53(t,J＝7.7Hz,1H),3.38(t,J＝10.3Hz,2H),2.45–2.34(m,2H),2.17–1.90(m,6H),1.62–1.49(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值545.1886，实测值546.1(M+1)+；保留时间：3.46分钟(LC方法H)。
步骤8：(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(化合物159)和(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(化合物160)
向(12S)-6-苄氧基-19-甲氧基-20-硝基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,9,17,19-六烯(E/Z混合物)(226mg，0.3503mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中加入钯碳(226mg，0.2124mmol)。将烧瓶充满氮气，抽空，并且用氢气回填。将此重复三次。将混合物在60psi下氢化2天。将混合物经硅藻土垫过滤，并且将滤饼用MeOH(2X 100mL)洗涤。将合并的滤液蒸发，然后在30分钟内通过HPLC使用15％至75％乙腈/水(+5mM HCl)梯度，以30毫升/分钟的流速进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(盐酸盐)(10.6mg，6％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.52(br,2H),6.28(s,1H),3.94(s,3H),3.85(s,1H),3.51-3.37(m,2H),3.29-3.13(m,1H),2.20-1.84(m,6H),1.80-1.65(m,2H),1.65-1.52(m,2H),1.50-1.34(m,3H),0.98-0.81(m,1H)ppm。ESI-MSm/z计算值427.1831，实测值428.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法H)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为(12R)-20-氨基-19-甲氧基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(盐酸盐)(21.3mg，12％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.52(br,2H),6.21(s,1H),4.05-3.78(m,4H,OH and CH3),3.47(m,2H),3.20(m,1H),2.27(t,J＝11.5Hz,1H),2.14-2.04(m,1H),2.04-1.64(m,7H),1.54-1.28(m,4H),1.03-0.80(m,1H)ppm。ESI-MSm/z计算值427.1831，实测值428.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法H)。
实例88：(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物161)和(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物162)的制备
步骤1：N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[(12R)-6-羟基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯
向微波小瓶装入N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.1478mmol)、甲烷亚磺酸钠(46mg，0.4506mmol)、碘化铜(I)(33mg，0.1733mmol)、L-脯氨酸(1.3mg，0.0113mmol)和DMSO(1.2mL)。将管用氮气冲洗2分钟并密封。将混合物在112℃下搅拌3小时，冷却至室温，并且然后加入28％ NH3水溶液(2mL)和水(10mL)。将混合物用MTBE(3X 20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[(12R)-6-羟基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(48mg，48％)。ESI-MS m/z计算值675.255，实测值676.2(M+1)+；保留时间：1.99分钟(LC方法Y)。产物受少量的单Boc保护的类似产物污染。
步骤2：(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇
向N-[(叔丁氧基)羰基]-N-[(12R)-6-羟基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]氨基甲酸叔丁酯(74mg，0.1095mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入TFA(4.44g，3mL，38.94mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌3小时。将材料浓缩，并且通过硅胶色谱法(12g柱)使用20％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色油的(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(40mg，77％)。ESI-MS m/z计算值475.15012，实测值476.2(M+1)+；保留时间：1.89分钟(LC方法Z)。
步骤3：(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物161)和(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物162)
通过SFC使用由菲罗门公司出售并且用30％至45％ MeOH(+20mM NH3)/CO2梯度洗脱的LUX-4柱(250x 21.2mm，5μm粒度)对(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇的非对映异构体混合物(66.2mg，0.1392mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(25.3mg，76％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.59(s,1H),6.31(s,2H),3.88(p,J＝7.7Hz,2H),3.33(s,3H),3.30-3.24(m,1H),2.35(d,J＝13.0Hz,1H),2.30-2.20(m,1H),2.14(dt,J＝12.9,7.4Hz,1H),2.06-1.94(m,1H),1.94-1.84(m,1H),1.79-1.67(m,1H),1.63-1.37(m,7H),0.95-0.78(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值475.15012，实测值476.0(M+1)+；保留时间：2.43分钟(LC方法D)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-18-甲磺酰基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(17.3mg，52％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.57(s,1H),6.33(d,J＝6.5Hz,2H),4.02(q,J＝8.1Hz,1H),3.88(q,J＝7.9Hz,1H),3.32(s,3H),3.22(dd,J＝18.3,3.9Hz,1H),2.30-2.13(m,3H),2.11-1.99(m,1H),1.97-1.84(m,1H),1.75(dq,J＝19.5,11.3,9.2Hz,2H),1.53(ddd,J＝29.0,16.3,7.5Hz,4H),1.43-1.30(m,2H),0.95(dt,J＝10.7,5.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值475.15012，实测值476.0(M+1)+；保留时间：2.31分钟(LC方法D)。
实例89：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物163)和(6R)-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,17-二醇(化合物164)的制备
步骤1：6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
将2-甲基己-5-烯-2-胺(盐酸盐)(69.4g，463.7mmol)悬浮于乙腈(960mL)中并用DIEA(220mL，1.263mol)处理。向所形成的棕色溶液中一份加入6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(120g，421.7mmol)。将橙色溶液在2.5小时内缓慢加热至65℃(注意：反应示出加热时温升)。将深橙色溶液在40℃下蒸发，并且向残余物加入MTBE(1L)和水(1L)，并且将层分离。将深橙色有机相用饱和NH4Cl水溶液/水混合物的1:1溶液(2X600mL)洗涤，用盐水(400mL)洗涤一次，并且将有机相干燥、过滤并蒸发，以得到6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(152.7g，100％)。ESI-MS m/z计算值361.12494，实测值362.0(M+1)+；保留时间：3.02分钟(LC方法D)。
步骤2：6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(152.4g，421.7mmol)溶解于甲醇(750mL)中，并且在搅拌下用NaOH(750mL的2M，1.500mol)处理(同时加入，从而得到30℃至40℃的轻微温升)。将溶液在室温下搅拌18小时。将深红色溶液在42℃下在减压下浓缩，并将所得橙红色溶液用甲苯(1L)处理。将乳液在冰浴中搅拌，并且通过加入HCl(260mL的6M，1.560mol)酸化至pH＝1，从而将内部温度保持低于15℃。将相分离，并将有机相用水(2X 500mL)洗涤两次，并且用盐水(400mL)洗涤一次。将有机相经MgSO4干燥，过滤，蒸发并在真空下干燥，以得到137g的深橙色固体块。将此材料由乙腈(约1L，以去除残余甲苯)蒸发，并且溶解于乙腈(600mL)中，并且温热至约60℃。在搅拌下向深红色热溶液中加入N-环己基环己胺(79mL，396.5mmol)(注明60℃至70℃的温升)，并且将热溶液播洒。所述材料在约60℃的内部温度下变成固体块，其可在碎裂后以磁性方式搅拌。将稠密悬浮液在冷却热水浴中搅拌过夜，并且然后在冰浴中搅拌3小时。通过过滤收集固体，用冷乙腈洗涤，直到滤液呈无色，并且在周末干燥，以得到呈黄色固体的6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(二环己胺盐)(172g，77％)。将此盐悬浮于MTBE(1L)中，并且用柠檬酸(1.2L的1M，1.200mol)处理。将混合物搅拌，并将相分离。将有机相用1M柠檬酸(2X400mL)再洗涤两次，并且用0.5M KHSO4(4X 400mL)洗涤4次。然后将有机相用盐水(200mL)洗涤一次，干燥、过滤并蒸发，以得到呈黄橙色油的6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(113.4g，77％)，其在静置时结晶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.21(s,1H),8.46(s,1H),6.20-6.00(m,1H),5.82-5.57(m,1H),5.13-4.74(m,2H),1.97(d,J＝2.9Hz,4H),1.45(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值347.10928，实测值348.0(M+1)+；保留时间：2.49分钟(LC方法D)。
步骤3：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
将6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(100g，285.1mmol)和(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(86.3g，299.4mmol)溶解于DMF(600mL)中，并且在冰浴中冷却。在3.1℃的内部温度下，将HATU(114g，299.8mmol)一份加入(未观察到温升)。然后，在0.5小时内缓慢加入DIEA(100mL，574.1mmol)(温升)，从而将内部温度保持在3与10℃之间。加入后，移除冰浴，并将反应搅拌另外0.5小时，使其温热至室温。将橙色溶液加入到冰和水(3L)和MTBE(1L)的搅拌溶液中。将混合物搅拌10分钟，并将相分离。将有机相用水(2X 1L)、0.2M KHSO4(3X 1L)洗涤两次，并且用盐水(250mL)洗涤一次。将有机相干燥，过滤并蒸发，以得到呈橙色块，N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(181g，定量产率)。ESI-MS m/z计算值617.2073，实测值618.0(M+1)+；保留时间：3.25分钟(LC方法D)。将此材料直接用于下一步。
步骤4：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(176.1g，285.2mmol)溶解于乙腈(1.4L)中，并且加热至55℃。将黄橙色溶液用DIEA(124mL，711.9mmol)处理，随后在15分钟内按份加入甲苯磺酰氯(54.4g，285.3mmol)(温升，通过去除热壁炉架并且缓慢加入将内部温度保持在55℃与60℃之间)，并且将反应在55-60℃下搅拌45分钟。将反应溶液在40℃下在减压下浓缩，并且将残余物用MTBE/庚烷1:1(1.4L)和水(1.4L)萃取。将有机相用水(1.5L)再洗涤一次、用0.2M KHSO4(2X 1L)洗涤两次，并且用盐水(0.5L)洗涤一次。将有机相干燥、过滤并蒸发，以得到172g橙色油，将所述橙色油溶解于100mL甲苯和300mL庚烷中。将溶液负载于3kg二氧化硅柱上(柱体积＝4800mL，流速＝900毫升/分钟)。用100％己烷洗脱1分钟，然后在106分钟(2柱体积)内将0％至10％乙酸乙酯/己烷的初始梯度程序化。将产物以约4％乙酸乙酯开始洗脱，使得将4.3％乙酸乙酯保持等度，直至产物完成洗脱，以得到6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(139.1g，80％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.51(s,1H),7.40-7.27(m,5H),6.03-5.87(m,1H),5.80-5.66(m,1H),5.58(s,1H),5.31-5.16(m,2H),5.03-4.95(m,1H),4.95-4.89(m,1H),4.81(d,J＝10.5Hz,1H),4.64(d,J＝10.5Hz,1H),3.28-3.13(m,2H),2.08-1.99(m,2H),1.99-1.89(m,2H),1.47(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值599.1967，实测值600.0(M+1)+；保留时间：3.71分钟(LC方法D)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
将此反应平行地以三个46.3g批次运行，每个批次在12L 3颈圆底烧瓶中。以下实验描述这些批次中的一个。
将喷射管、回流式冷凝器和鼓气器以及高位搅拌器连接到放置在热层中的12L容器。将6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(46.3g，76.22mmol)溶解于DCE(8.23L)中。用大量氮气喷射系统。将热层设置为50℃。当容器达到53℃时，同时加入二氯[1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)2-咪唑烷基亚基][[5-[(二甲基氨基)磺酰]-2-(1-甲基乙氧基-O)苯基]亚甲基-C]钌(II)(詹氏催化剂1B，11.2g，15.26mmol)。将催化剂容器用DCE冲洗，并将冲洗液加入到反应中。一旦催化剂加入完成，就将层温增加至73℃。一旦内部温度达到72℃，就继续搅拌2小时28分钟，然后将热层温度降低至45℃。在2小时27分钟后，内部温度达到50℃。15分钟后，加入固态2-硫烷基吡啶-3-甲酸(12g，77.33mmol)和三乙胺(11mL，78.92mmol)。搅拌12小时，然后使混合物冷却至室温。向反应加入100g的SiO2和10g的活性炭(20–40网格，颗粒状)。搅拌1小时，然后经硅藻土过滤，并将滤液蒸发，从而得到粗产物混合物。将来自所有三个平行反应的材料合并，以得到71.2g的粗产物混合物。在两个单独的3kg硅胶柱上使用在110分钟内100％己烷至10％乙酸乙酯/己烷梯度，随后在10分钟内10％乙酸乙酯/己烷至100％乙酸乙酯梯度对此材料进行纯化。将两个单独的纯化批次合并后，获得(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(51.88g，40％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝0.8Hz,1H),7.49-7.21(m,5H),6.58(s,1H),5.79(dt,J＝13.7,6.5Hz,1H),5.58(ddd,J＝15.0,8.8,5.6Hz,1H),4.83(d,J＝11.1Hz,1H),4.55(d,J＝11.1Hz,1H),3.13(dd,J＝14.2,5.4Hz,1H),2.77(dd,J＝14.3,8.8Hz,1H),2.38-2.24(m,1H),2.14-1.93(m,3H),1.58-1.32(m,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值571.1654，实测值572.1(M+1)+；保留时间：3.46分钟和3.49分钟(LC方法D)。产物形成为双键异构体的3:1混合物。
步骤6：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物163)和(6R)-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,17-二醇(化合物164)
将(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(50.8g，88.89mmol)溶解于250mL的乙醇中，并且通过旋转蒸发以及28℃水浴进行部分浓缩，以去除任何残余溶剂，然后在5L烧瓶中溶解于另外的乙醇(720mL)中。使用内部真空的5个周期和氮气回填对溶液进行脱气。在氮气下将二羟基钯(15.2g的10％w/w，10.824mmol)加入到底物溶液中。用氢气回填重复内部真空6个周期，以用氢气替换氮气气氛。最后，使用气球将容器保持在1大气压的氢气下。用磁力搅拌器剧烈搅拌此混合物过夜，然后移除氢气球。将混合物通过介质烧结漏斗上的70g的硅藻土过滤。将绿色滤液溶液通过旋转蒸发以及28℃水浴进行浓缩。获得呈黄色固体的42.65g的粗产物，其中的41.5g通过反相色谱法(溶解于125mL的甲醇和2.55mL DMF(2％ DMF/甲醇溶液)，并且负载于3.8kg C18柱(柱体积＝3.3L，流速＝375毫升/分钟)上)进行纯化。在176分钟内将40％至70％乙腈/水(20柱体积)初始梯度，然后在随后约20分钟后将洗脱液带入到100％乙腈中程序化。从柱中分离混合和纯部分。纯部分被浓缩，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(28.17g，70％)。将此材料与通过如乙腈中的溶液的类似方法所制备的若干较小批次(80mg、340mg、360mg、1.46g和1.63g)合并，然后将其浓缩以得到黄色固体。将此固体溶解于二氯甲烷，并且加入庚烷，然后将溶液在40℃下在暗处在真空下浓缩过夜，得到31.95g的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.59(s,1H),5.96(s,2H),4.64(s,1H),2.90-2.71(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.15-1.98(m,1H),1.91-1.74(m,1H),1.73-1.57(m,1H),1.56-1.38(m,5H),1.36(s,3H),1.31(s,3H).ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：3.03分钟(LC方法D)。
来自上述反相纯化的一个混合部分含有显示比上述预期产物大一个质量单位的杂质。将此部分浓缩，并且将残余物溶解于3.6mL的甲醇中，然后通过反相制备型HPLC通过C18柱使用1至99％乙腈/水(+HCl改性剂)梯度进行纯化，从而得到呈黄色固体的(6R)-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,17-二醇(105mg，0.003％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),7.64(s,1H),7.57(s,1H),4.85(s,1H),2.91-2.74(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.10-1.96(m,1H),1.85-1.68(m,1H),1.68-1.54(m,1H),1.53-1.37(m,5H),1.36(s,3H),1.31(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值454.14395，实测值455.2(M+1)+；保留时间：2.87分钟(LC方法D)。
步骤7：结晶化合物163形态A(纯)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤6产生并且由EtOH重结晶的结晶化合物163形态A(纯)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得。结晶化合物163形态A(纯)的XRPD衍射图提供于图16，并且下表6中总结了XRPD数据。
表6：结晶化合物163A形态(纯)的XRPD信号
XRPD峰编号 角度(°2θ±0.2) 强度％
1 7.4271 100
2 8.4377 7.56
3 14.1039 4.84
4 14.5744 2.53
5 14.962 7.2
6 16.9424 2.49
7 19.0503 5.71
8 19.9711 2.4
9 22.4778 2.31
10 25.5622 2.19
11 25.7502 3.64
B.差示扫描量热法分析
收集DSC数据并且以10.00℃/分钟斜升至250.00℃。由步骤6产生的结晶化合物163形态A(纯)的DSC热谱图提供于图17。热谱图显示了180.8℃的开始Tm，其中Tm峰在183.18℃、62.32J/g下。
实例90：(6S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物165)的制备
步骤1：3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向2L 3颈圆底烧瓶中装入6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(28.4g，78.6mmol)，并将深红色油溶解于乙醇(140mL)和THF(140mL)中。将反应容器放入水浴中。将500mL加料漏斗连接到烧瓶上。将连二亚硫酸钠(二钠盐)(50g，287.2mmol)溶解于水(330mL)中，并将水溶液加入到加料漏斗中。将连二亚硫酸钠溶液以使得内部温度维持在28℃或以下的速率缓慢加入到底物溶液中。在加入期间，发生沉淀，并且反应混合物从暗紫红色变成橙色，颜色开始变亮。在约1小时后加入完成。在加入完成时，反应混合物从不均匀转变成均匀。用2-甲基四氢呋喃(600mL)稀释橙色反应溶液并搅拌20分钟。加入200mL盐水并继续搅拌。将相分离，并将有机物用1M HCl水溶液(3X 200mL)洗涤。最终，用盐水(1X 200mL)洗涤，然后将有机物经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，并且在真空下进一步干燥，以得到3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(24.59g，92％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25(d,J＝0.8Hz,1H),5.92-5.68(m,1H),5.51(s,2H),5.07-4.80(m,2H),4.29(s,1H),3.91(s,3H),2.07-1.94(m,4H),1.42(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值331.15076，实测值332.2(M+1)+；保留时间：2.96分钟(LC方法D)。
步骤2：3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向500mL 2颈圆底烧瓶中装入3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(23.6g，71.23mmol)和THF(120mL)，并搅拌以溶解。连接125mL加料漏斗和热层。将氢氧化钾(21g，374.3mmol)溶解于水(120mL)中，并将此水溶液加入到加料漏斗中。在12分钟内将KOH水溶液加入到底物中(在加入期间，内部温度从19℃增加至27℃)。将内部温度维持在45℃至50℃之间。在N2以及空气冷却的回流冷凝器下剧烈搅拌。在约5小时后停止加热，并且使反应冷却至环境温度。将反应混合物放入500mL分液漏斗中，并将相分离。将有机相放入500mL烧瓶中并浓缩，以去除大部分THF。将粗残余物重新溶解于300mL乙酸异丙酯中。将有机溶液用1M HCl水溶液(1X 200mL)和盐水(1X 100mL)洗涤。将有机层干燥、过滤并在减压下浓缩，并在真空下进一步干燥，以得到呈橙色固体的3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(21.47g，95％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,3H),7.49(s,1H),5.89-5.61(m,1H),5.05-4.75(m,2H),4.24(s,1H),1.94(s,4H),1.37(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值317.1351，实测值318.2(M+1)+；保留时间：2.58分钟(LC方法D)。
步骤3：3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将3-氨基-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(12.4g，39.08mmol)溶解于THF(100mL)中。将溶液在N2气氛下搅拌。将碳酸氢二叔丁酯(10mL，43.53mmol)溶解于THF(20mL)中，并且通过注射器将此溶液加入到反应溶液中。接下来，在15分钟内通过注射器将三乙胺(8.01g，79.16mmol)加入到反应溶液中，17小时后，将反应在减压下浓缩以去除THF。将粗产物重新溶解在200mL的乙酸异丙酯中。将溶液放入500mL分液漏斗中，并将有机溶液用1M HCl水溶液(1X 80mL，1X 20mL)和盐水(30mL)洗涤。将有机物经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，并在高真空下进一步干燥，以得到呈深红色油的3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(16.3g，99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.59(s,1H),9.62(s,1H),8.52(s,1H),5.87-5.63(m,1H),5.00-4.85(m,2H),4.82-4.76(m,1H),1.97(s,4H),1.46(s,9H),1.41(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值417.18753，实测值418.4(M+1)+；保留时间：3.42分钟(LC方法D)。
步骤4：N-[2-[[[(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
在N2气氛下向3-(叔丁氧基羰基氨基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(16.3g，38.66mmol)和(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(12.4g，43.02mmol)于2-甲基四氢呋喃(200mL)中的搅拌溶液中加入固态2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(8g，45.57mmol)。在一小时内将4-甲基吗啉(5.24g，50.77mmol)于2-甲基四氢呋喃(50mL)中的溶液逐渐加入到反应混合物中，并将反应在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸异丙酯(250mL)稀释，用水(1X 50mL)、饱和NaHCO3水溶液(2X 100mL)洗涤，并且用盐水(1X 30mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(220g柱)对残余物进行纯化，以得到N-[2-[[[(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(21.92g，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.95(s,1H),9.63(s,1H),8.75(s,1H),7.51-7.42(m,2H),7.42-7.27(m,3H),5.99-5.68(m,2H),5.45-5.12(m,2H),5.03-4.87(m,2H),4.88-4.84(m,3H),3.22-2.85(m,2H),2.13-1.79(m,4H),1.46(s,9H),1.42(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值687.2855，实测值688.5(M+1)+；保留时间：0.82分钟(LC方法D)。
步骤5：N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[[[(2S)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(14g，20.36mmol)于乙腈(120mL)中的溶液中加入DIEA(7.94g，61.43mmol)，并且将溶液加热至50℃。在约1小时内通过加料漏斗缓慢逐滴加入对TsCl(4.33g，22.71mmol)于乙腈(50mL)中的溶液。将所得深棕色溶液加热6.5小时。再次，加入对TsCl(约1g，分3份间隔6小时)，同时在50℃下加热。将反应混合物冷却至室温，用乙酸异丙酯(250mL)稀释，并且缓慢加入饱和NaHCO3水溶液(50mL)，同时搅拌。将混合物搅拌10分钟，并将层分离。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(1X50mL)和盐水(1X 50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈暗紫红色油的N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(16.4g，定量)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.55(s,1H),7.43-7.28(m,5H),6.03-5.82(m,1H),5.80-5.62(m,1H),5.41-5.29(m,1H),5.22(dd,J＝10.3,1.8Hz,1H),5.05-4.88(m,2H),4.89-4.83(m,1H),4.84-4.73(m,2H),4.63(d,J＝10.9Hz,1H),3.27(d,J＝7.1Hz,2H),1.98(s,3H),1.47(s,9H),1.18(s,3H),1.17(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值669.27496，实测值670.6(M+1)+；保留时间：1.36分钟(LC方法D)。
步骤6：N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(13g，19.41mmol)于乙腈(100mL)中的溶液中加入DMAP(473mg，3.872mmol)，并且将混合物在室温下搅拌，以使其成为均匀溶液。缓慢加入碳酸氢二叔丁酯(5.51g，25.25mmol)于乙腈(20mL)中的溶液，并将反应混合物搅拌40分钟。将混合物在减压下浓缩，以去除CH3CN，然后用甲苯共沸，以去除残余tBuOH。将所得材料溶解于二氯甲烷/甲苯的1:1混合物(40mL)中，并且通过烧结漏斗过滤以去除残余固体。将滤液浓缩，并且通过硅胶色谱法使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈橙色糖浆，N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(12g，80％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.58(s,1H),7.42-7.26(m,5H),6.01-5.82(m,1H),5.82-5.60(m,1H),5.27-5.11(m,2H),5.00-4.83(m,3H),4.71(dd,J＝73.3,10.6Hz,2H),3.18(d,J＝7.0,2.1Hz,2H),2.04-1.95(m,4H),1.46(s,6H),1.41(d,J＝3.6Hz,18H)ppm。ESI-MS m/z计算值769.3274，实测值670.6(M+1-Boc)+；保留时间：0.44分钟(LC方法S)。
步骤7：N-[(6S)-6-苄氧基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
将N-[2-[5-[(1S)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(18g，23.38mmol)于甲苯(2.7L)中的搅拌溶液用N2剧烈喷射，然后开始将溶液加热至70℃。当内部温度达到50℃时，加入詹氏催化剂1B(2.6g，3.543mmol)，并且将混合物在70℃下加热3小时。将反应容器冷却至环境温度，并且加入2-硫烷基吡啶-3-甲酸(2.23g，14.37mmol)，随后加入三乙胺(2mL，14.35mmol)。将混合物在环境温度下搅拌过夜，并且加入硅胶(40g，230至400网格)。将混合物在环境温度下搅拌20分钟，并且然后通过硅藻土垫过滤。将滤饼用200mL EtOAc冲洗，并将滤液在减压下浓缩。在40分钟内通过硅胶色谱法使用100％己烷至25％EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的N-[(6S)-6-苄氧基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(11.87g，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.37-7.30(m,5H),6.00(dt,J＝15.0,7.4Hz,1H),5.62-5.54(m,1H),5.55-5.17(m,1H),4.81(d,J＝11.2Hz,1H),4.42(d,J＝11.2Hz,1H),3.31-3.18(m,1H),2.84(dd,J＝14.3,7.6Hz,1H),2.42-2.29(m,1H),2.25(dt,J＝12.9,5.4Hz,1H),2.18-2.01(m,2H),1.51(s,3H),1.40(s,3H),1.28(s,9H),1.22(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值741.2961，实测值742.6(M+1)+；保留时间：3.84分钟(LC方法D)。
步骤8：N-叔丁氧基羰基-N-[(6S)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[(6S)-6-苄氧基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(10.85g，14.63mmol)于乙醇(160mL)中的溶液用5个周期的真空脱气以去除空气，回填N2，并且然后使烧瓶处于N2下。加入钯碳(4.3g，5％w/w，2.02mmol)和氨(2.12mL的7M，14.84mmol)，并且重复脱气，然后使其处于N2气氛下。使用氢气袋和针将反应混合物在1atm的氢气压下搅拌过夜以排出。用N2替换氢气气氛，并且将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤饼用EtOH(200mL)彻底冲洗。将滤液在减压下浓缩，以得到呈无色油的N-叔丁氧基羰基-N-[(6S)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(9.35g，88％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.60(s,1H),5.01(s,1H),3.93(s,1H),3.29-3.03(m,1H),2.46-2.36(m,1H),2.11-1.97(m,1H),1.95-1.60(m,2H),1.58-1.39(m,25H),1.39(s,2H),1.34-1.17(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值653.26483，实测值654.4(M+1)+；保留时间：3.41分钟(LC方法D)。
步骤9：(6S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物165)
在0℃下向N-叔丁氧基羰基-N-[(6S)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-基]氨基甲酸叔丁酯(8.49g，12.99mmol)于乙醇异丙酯(85mL)中的溶液中加入甲烷磺酸(8.43mL，129.9mmol)。将反应混合物缓慢温热至环境温度，并且在3天内在环境温度下搅拌。将反应混合物用乙酸乙酯(250mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(3X 50mL)和盐水(60mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(750g柱)使用100％己烷至90％ EtOAc/己烷平缓梯度对残余物进行纯化，从而得到呈明黄色固体的(6S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(2.48g，42％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.59(s,1H),5.96(s,2H),4.64(s,1H),2.91-2.71(m,1H),2.30-2.15(m,1H),2.15-1.97(m,1H),1.92-1.74(m,1H),1.73-1.57(m,1H),1.55-1.38(m,5H),1.36(s,3H),1.31(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.3(M+1)+；保留时间：2.99分钟(LC方法D)。
实例91：(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(盐酸盐)(化合物166)的制备
步骤1：(E)-2-甲基-N-(2-吡啶基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺
向吡啶-2-甲醛(10g，93.362mmol)于二氯甲烷(125mL)中的溶液中加入硫酸镁(52g，432.01mmol)、对甲苯磺酸吡啶盐(780mg，3.1038mmol)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(7.5g，61.881mmol)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，用二氯甲烷(50mL)洗涤。将滤液在减压下蒸发。通过硅胶色谱法(330g柱)使用0％至35％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，得到呈棕色油的(E)-2-甲基-N-(2-吡啶基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(9.2g，71％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.81-8.72(m,1H),8.70(s,1H),8.01(d,J＝7.8Hz,1H),7.81(td,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.39(ddd,J＝7.6,4.9,1.2Hz,1H),1.28(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值210.0827，实测值211.2(M+1)+；保留时间：1.51分钟(LC方法Z)。
步骤2：2-甲基-N-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基]丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下向(E)-2-甲基-N-(2-吡啶基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(10g，47.552mmol)于四氢呋喃(182mL)中的冷却溶液中逐滴加入烯丙基(溴)镁(80mL，二乙醚中的1M，80mmol)。将反应保持在-78℃下，直到通过HPLC分析观察到起始材料的完全消耗。将反应用饱和氯化铵(100mL)缓慢淬灭，然后用二氯甲烷(2X 50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并将溶剂在减压下去除。通过硅胶色谱法(220g柱)使用0％至5％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色固体的2-甲基-N-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基]丙烷-2-亚磺酰胺(7.5g，62％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.67-8.41(m,1H),7.65(td,J＝7.7,1.7Hz,1H),7.31-7.28(m,1H),7.18(ddd,J＝7.6,4.9,1.0Hz,1H),5.92-5.51(m,1H),5.19-4.98(m,2H),4.84(br d,J＝6.8Hz,1H),4.65-4.35(m,1H),2.86-2.49(m,2H),1.33-1.06(m,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值252.1296，实测值253.2(M+1)+；保留时间：1.35分钟(LC方法Z)。
步骤3：1-(2-吡啶基)丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)
在室温下向2-甲基-N-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基]丙烷-2-亚磺酰胺(7g，27.736mmol)于甲醇(60mL)中的溶液中逐滴加入盐酸(70mL，二乙醚中的2M，140mmol)，并且将所得混合物在室温下搅拌1小时。将混合物冷却至0℃，然后加入二乙醚(100mL)并搅拌45分钟。将所得沉淀过滤，用二乙醚(75mL)洗涤，并将固体在真空下干燥，得到呈米白色固体的1-(2-吡啶基)丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(4.75g，90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06-8.77(m,3H),8.75-8.58(m,1H),8.14-7.90(m,1H),7.84-7.64(m,1H),7.60-7.39(m,1H),5.79-5.49(m,1H),5.08-4.85(m,2H),4.65-4.52(m,1H),2.88-2.75(m,1H),2.73-2.57(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值148.1，实测值149.2(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法BB)。
步骤4：N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯
在100-mL氮气吹扫的容器中，将1-(2-吡啶基)丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(760mg，4.116mmol)、DIEA(1.5mL，8.612mmol)、分子筛和N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-溴-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(1g，1.331mmol)合并于DMSO(20mL)中。将混合物通过将氮气鼓泡通过溶液脱气5分钟，然后将容器加盖，并将混合物在90℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。然后将材料用水稀释，并且加入乙酸乙酯(50mL)。然后加入柠檬酸溶液，并将所得混合物用乙酸乙酯(2X 50mL)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷平缓至100％乙酸乙酯梯度对残余物进行纯化，得到呈黄色固体的N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(98mg，9％)。ESI-MS m/z计算值818.32263，实测值819.0(M+1)+；保留时间：1.94分钟(LC方法J)。
步骤5：N-[(6R)-6-苄氧基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)
在100mL 3颈烧瓶中，将经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(23mg，0.03135mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(75mL)中，并且将混合物在氮气气氛下加热至50℃。然后，通过注射器加入N-[2-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-6-[1-(2-吡啶基)丁-3-烯基氨基]-5-(三氟甲基)-3-吡啶基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(98mg，0.1197mmol)于1,2-二氯乙烷(5mL)中的溶液。将所得混合物在85℃下加热12小时。将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到N-[(6R)-6-苄氧基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(23mg，24％)。ESI-MS m/z计算值790.2914，实测值791.2(M+1)+；保留时间：1.82分钟(LC方法J)。
步骤6：(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)
向N-[(6R)-6-苄氧基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-17-基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(E/Z混合物)(23mg，0.02909mmol)中加入TFA(3.0mL，38.94mmol)，并且将反应在室温下搅拌2小时，随后在60℃下加热2小时。将溶剂蒸发，然后将残余物用DCM稀释并且重浓缩，并且然后将残余物在真空下干燥1小时，以得到呈粗黄色固体的(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)(10mg，69％)。ESI-MS m/z计算值500.13956，实测值501.0(M+1)+；保留时间：1.14分钟(LC方法J)。此材料被直接用于随后步骤。
步骤7：(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(盐酸盐)(化合物166)
在50mL圆底烧瓶中，将(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-6-醇(E/Z混合物)(10mg，0.01998mmol)于乙酸乙酯(500μL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(8mg，10％w/w，0.007517mmol)。将混合物用氮气脱气，然后用填充有氢气的气球吹扫。将混合物在1atm的氢气下搅拌1小时。然后将反应物过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(4g柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度，随后在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体以及非对映异构体的混合物的(6R)-17-氨基-12-(2-吡啶基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(盐酸盐)(3.16mg，29％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(d,J＝4.9Hz,1H),7.86(s,2H),7.68(s,2H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝9.2Hz,1H),7.40(s,2H),6.12(s,1H),4.93(s,1H),2.73(s,1H),1.62(s,1H),1.46(d,J＝9.9Hz,4H),1.25(d,J＝16.5Hz,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值502.15518，实测值503.2(M+1)+；保留时间：1.76分钟(LC方法A)。
实例92：(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物167)和(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物168)的制备
步骤1：(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物167)和(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物168)
通过手性SFC使用用12％ MeOH(+20mM NH3)/88％ CO2洗脱的LUX-4柱(250X21.2mm，5μm粒度)对(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(250mg，0.5349mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体产物。
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体1)(65.5mg，52％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.50(s,1H),4.43-4.36(m,1H),4.14(d,J＝7.3Hz,1H),4.00-3.24(m,5H),3.02-2.73(m,2H),2.37-1.75(m,4H),1.61(s,2H),1.26(s,2H),1.01-0.71(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.13922，实测值468.1(M+1)+；保留时间：1.84分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(12S)-20-氨基-6,18-双(三氟甲基)-10,22-二氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-6-醇(对映异构体2)(105.5mg，84％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.56(s,1H),4.35(d,J＝8.0Hz,2H),3.79(t,J＝11.3Hz,1H),3.70-3.38(m,3H),2.99(s,1H),2.77(t,J＝12.7Hz,1H),2.38-1.78(m,6H),1.58(s,1H),1.25(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.13922，实测值468.1(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法A)。
实例93：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体1)(化合物169)和(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体2)(化合物170)的制备
步骤1：(12R)-20-{双[(叔丁氧基)羰基]氨基}-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯
在高压釜中加入N-[(12R)-18-溴-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-20-基]-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.2956mmol)、甲醇(5mL)、三乙胺(72.6mg，0.1mL，0.7175mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(6mg，0.0082mmol)。将高压釜用氮气吹扫，然后用一氧化碳吹扫。将混合物在130℃下加热并且将一氧化碳压调整至120psi。将混合物在130℃下搅拌3小时，然后冷却至25℃。将混合物用氮气吹扫并且在真空下浓缩。将所得固体用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后加入水(20mL)和碳酸钠(1.5g)，并且将混合物剧烈搅拌20分钟。将层分离，并且有机层用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈粗棕色固体的(12R)-20-{双[(叔丁氧基)羰基]氨基}-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(189mg)，将其直接用于下一步。ESI-MS m/z计算值655.2829，实测值556.4(M+H-Boc)+；保留时间：2.15分钟(LC方法Z)。
步骤2：(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体1)(化合物169)和(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体2)(化合物170)
向(12R)-20-{双[(叔丁氧基)羰基]氨基}-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(189mg，0.2883mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入TFA(4.44g，3mL，38.94mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌3小时。将混合物浓缩，并且在16分钟内通过反相HPLC使用50％至60％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，得到两种非对映异构体产物的分离：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体1)(11mg，8％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.49(s,1H),4.92(br.s,2H),3.92(s,3H),3.61-3.45(m,2H),2.93-2.77(m,2H),2.38-2.17(m,3H),2.16-2.01(m,1H),2.01-1.90(m,1H),1.76-1.47(m,8H),1.15-1.02(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-77.36(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值455.178，实测值456.2(M+1)+；保留时间：4.4分钟(LC方法AA)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(12R)-20-氨基-6-羟基-6-(三氟甲基)-22-氧杂-3,4,16,21-四氮杂四环[15.3.1.12,5.012,16]二十二碳-1(21),2,4,17,19-五烯-18-甲酸甲酯(对映异构体2)(11mg，8％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.37(s,1H),4.84(br s,2H),4.11(br s,1H),3.92(s,3H),3.55-3.41(m,1H),2.92(br t,J＝8.1Hz,1H),2.72(br t,J＝11.2Hz,1H),2.44(br t,J＝12.8Hz,1H),2.29-2.18(m,1H),2.17-2.05(m,1H),2.02-1.90(m,1H),1.85-1.41(m,9H),1.07-0.91(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-80.68(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值455.17804，实测值456.2(M+1)+；保留时间：4.55分钟(LC方法AA)。
实例94：17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物171)和17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物172)的制备
步骤1：6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(2,2-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在150mL密封小瓶中，在室温下将[6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]三氟甲磺酸酯(900mg，1.414mmol)溶解于乙腈(35mL)中，并且加入2,2-二甲基戊-4-烯-1-胺(盐酸盐)(675mg，4.51mmol)，随后加入DIEA(1.75mL，10.05mmol)。将反应混合物在80℃下加热16小时，然后冷却至室温。将混合物浓缩，并且通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈深橙色泡沫的6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(2,2-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(570mg，67％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.02(t,J＝6.3Hz,1H),7.37-7.30(m,5H),5.97-5.72(m,2H),5.38(dd,J＝17.0,1.8Hz,1H),5.25(dd,J＝10.3,1.8Hz,1H),4.99-4.89(m,2H),4.80(d,J＝10.7Hz,1H),4.55(d,J＝10.6Hz,1H),3.47(d,J＝6.1Hz,2H),2.63-2.49(m,2H),1.92(d,J＝7.4Hz,2H),0.81(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值599.1967，实测值600.2(M+1)+；保留时间：1.72分钟(LC方法M)。
步骤2：6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
在1L 3颈烧瓶中，在氮气气氛下将DCE(400mL)中的经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(180mg，0.2453mmol)加热至50℃。然后，通过注射器加入6-[5-[1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(2,2-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(570mg，0.9508mmol)于DCE(75mL)中的溶液。将所得混合物在80℃下加热16小时。然后，移除热浴，并且将反应混合物冷却至室温。加入丁-2,3-二烯酸乙酯(450μL，3.877mmol)于DCM(28mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌一小时。将溶剂蒸发，并且通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈淡黄色固体的6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(112mg，14％)。ESI-MS m/z计算值571.1654，实测值572.2(M+1)+；保留时间：1.46分钟(LC方法M)。
步骤3：17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
在不锈钢压力容器中，将6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(112mg，0.1372mmol)于AcOH(3mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(150mg的10％w/w，0.141mmol)。将混合物用氮气脱气，然后经受真空(3X)，然后用氢气吹扫，并在240psi的氢气下搅拌16小时。将反应过滤，并且将滤液在减压下浓缩。在15分钟内通过反相HPLC使用1％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(21mg，34％)。ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法A)。
步骤4：17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物171)和17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物172)
通过SFC使用用8％ MeOH(+20mM NH3)/CO2洗脱的OJ柱(250X4.6mm，5μm粒度)对17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(21mg，0.04632mmol)进行纯化，得到两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(4.6mg，43％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.27(s,1H),5.10(s,2H),4.72(t,J＝6.7Hz,1H),3.77(s,1H),3.66(s,1H),3.03(s,1H),2.42-2.32(m,1H),2.20(dt,J＝15.0,5.0Hz,1H),2.03-1.96(m,1H),1.77(s,1H),1.50-1.38(m,1H),1.26-1.17(m,2H),0.91(s,6H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法A)。
后一个洗脱的对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.5mg，42％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.29(s,1H),5.09(s,2H),4.80–4.65(m,1H),3.64(s,2H),3.01(d,J＝14.3Hz,1H),2.38(dt,J＝14.7,8.3Hz,1H),2.21(dt,J＝14.9,5.0Hz,1H),2.04–1.97(m,1H),1.77(d,J＝15.4Hz,1H),1.50–1.39(m,1H),1.26–1.17(m,2H),0.91(s,6H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：2.02分钟(LC方法A)。
实例95：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环丁烷]-6-醇(化合物173)的制备
步骤1：6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在125mL密封容器中，将1-烯丙基环丁胺(盐酸盐)(673mg，3.655mmol)、DIEA(3.0mL，17.22mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.1g，3.479mmol)合并于乙腈(20mL)中，并且将混合物在80℃下加热1小时。将反应混合物冷却至环境温度，并在减压下浓缩。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.15g，92％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝0.8Hz,1H),7.88(s,1H),5.78(ddt,J＝17.3,10.2,7.1Hz,1H),5.08-4.94(m,2H),3.91(s,3H),2.69(dt,J＝7.2,1.3Hz,2H),2.30(qd,J＝9.7,2.7Hz,2H),2.20-2.09(m,2H),1.77(dtd,J＝9.7,7.5,6.9,4.5Hz,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值359.10928，实测值360.2(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法A)。
步骤2：6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.15g，3.201mmol)于THF(20mL)、甲醇(20mL)和水(10mL)中的溶液中加入氢氧化锂(1.17g，48.86mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。在减压下去除THF和甲醇。加入3M HCl水溶液，直至混合物呈酸性，然后用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。然后将残余物在真空下放置16小时，以得到呈浅黄色固体的6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.04g，94％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.06(s,1H),8.41(s,1H),7.73(s,1H),5.79(ddt,J＝17.3,10.2,7.1Hz,1H),5.16-4.86(m,2H),2.71(d,J＝7.1Hz,2H),2.31(qd,J＝9.7,2.7Hz,2H),2.21-2.10(m,2H),1.84-1.71(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值345.09363，实测值346.2(M+1)+；保留时间：1.61分钟(LC方法A)。
步骤3：6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(875mg，2.534mmol)于DMF(20mL)中的溶液中加入DIEA(2mL，11.48mmol)和HATU(955mg，2.512mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后逐滴加入溶解于DMF(5mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(845mg，2.795mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％二氯甲烷至15％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色泡沫的6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.2g，75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(d,J＝1.3Hz,1H),10.39(d,J＝1.3Hz,1H),8.42(s,1H),7.65(s,1H),7.54-7.45(m,2H),7.41-7.30(m,3H),5.92-5.73(m,2H),5.10-5.04(m,2H),5.03-4.98(m,2H),4.84(q,J＝11.4Hz,2H),2.74(d,J＝7.2Hz,2H),2.36-2.17(m,8H),1.82-1.70(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值629.2073，实测值630.2(M+1)+；保留时间：1.74分钟(LC方法J)。
步骤4：N-(1-烯丙基环丁基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将6-[(1-烯丙基环丁基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.2g，1.906mmol)和DIEA(1.1mL，6.315mmol)于乙腈(23mL)中的溶液加热至60℃，然后加入对甲苯磺酰氯(440mg，2.308mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌90分钟。将反应混合物冷却，并且用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取。将有机物合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过硅胶色谱法(80克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到N-(1-烯丙基环丁基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.02g，87％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),7.96(s,1H),7.39-7.29(m,5H),5.81(dddt,J＝30.8,17.3,10.2,6.8Hz,2H),5.10(dq,J＝17.2,1.6Hz,1H),5.04-4.90(m,3H),4.76(d,J＝10.8Hz,1H),4.59(d,J＝10.8Hz,1H),2.65(d,J＝7.2Hz,2H),2.62-2.51(m,2H),2.28(pd,J＝11.0,10.0,3.9Hz,4H),2.10(ddt,J＝12.2,7.6,3.8Hz,2H),1.76-1.65(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值611.1967，实测值612.2(M+1)+；保留时间：1.66分钟(LC方法M)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12,1'-环丁烷](E/Z混合物)
在1L 3颈烧瓶中，将经由詹氏催化剂1B的氮气线持续脱气的溶液(350mg，0.477mmol)溶解于DCE(450mL)中，并且将混合物在氮气气氛下加热至50℃。然后，通过注射器加入N-(1-烯丙基环丁基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1g，1.635mmol)于DCE(50mL)中的溶液。将所得混合物在85℃下加热5小时，然后浓缩。通过硅胶色谱法(120克柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色残余物的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12,1'-环丁烷](E/Z混合物)(650mg，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.07(s,1H),7.35(d,J＝4.6Hz,4H),7.33-7.28(m,1H),5.89-5.79(m,1H),5.79-5.68(m,1H),4.86(s,2H),2.73(t,J＝10.8Hz,1H),2.57-2.53(m,1H),2.37-2.27(m,4H),2.27-2.10(m,4H),1.74(td,J＝9.9,9.3,4.3Hz,1H),1.61(q,J＝9.4Hz,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值583.1654，实测值584.2(M+1)+；保留时间：1.35分钟(LC方法M)。
步骤6：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环丁烷]-6-醇(化合物173)
在250mL圆底烧瓶中，将(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯-12,1'-环丁烷](E/Z混合物)(630mg，1.08mmol)于AcOH(14mL)和乙酸乙酯(5mL)中的溶液用氮气吹扫。然后加入Pd/C(1.15g的10％w/w，1.081mmol)。将混合物用氮气脱气，然后经受真空(3X)，然后经由连续针用氢气通过溶液进行吹扫，并将混合物在1atm的氢下搅拌3小时。将反应过滤，并且通过硅胶色谱法(80g柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对材料进行纯化，以得到黄色固体。在15分钟内通过反相HPLC使用30％至99％乙腈/水(+5mM HCl)梯度对此材料进行进一步纯化，从而得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环丁烷]-6-醇(381.6mg，75％)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(d,J＝6.6Hz,2H),5.95(s,2H),5.48(s,1H),2.44–2.33(m,2H),2.32–2.21(m,2H),2.15–2.04(m,2H),2.02–1.82(m,2H),1.82–1.60(m,5H),1.57–1.41(m,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值465.15994，实测值466.2(M+1)+；保留时间：2.13分钟(LC方法A)。
步骤7：无定形化合物173(纯形态)和结晶化合物173形态A(纯)的固体形态特征
A.X射线粉末衍射
由步骤6产生的无定形化合物173(纯形态)的XRPD衍射图使用通用X射线粉末衍射(XRPD)方法获得。无定形化合物173(纯形态)的XRPD衍射图提供于图18。
B.热重分析(TGA)
由步骤6产生的无定形化合物173(纯形态)的TGA曲线提供于图19。TGA曲线显示了以10.00℃/分钟斜升至350.00℃，从39℃至224.6℃的3.98％重量损失。
C.差示扫描量热法分析
使用以下调制DSC方法运行DSC分析：
1.在-20.00℃下平衡，
2.每60秒由+/-1.00℃调节，
3.等温持续5.00分钟，然后
4.以2.00℃/分钟斜升至250.00℃。
由步骤6产生的无定形化合物173(纯形态)的DSC热谱图提供于图20。热谱图显示了在96.3℃下的重结晶和在161.53℃、59.89J/g下的熔融。未观察到Tg。
D.单晶X射线衍射
结晶化合物173形态A(纯)的单一结晶生长自二氯甲烷和己烷。X射线衍射数据在配备有Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪和CPAD检测器上150K处获得。所述结构使用SHELX程序溶解和精炼(Sheldrick,G.M.,《晶体学报》,(2008)A64,112-122)并且下表7中概述了结果。
表7：结晶化合物173形态A(纯)的单一结晶说明
实例96：(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物174)和(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物175)的制备
步骤1：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
在室温下将1,1'-羰基二咪唑(1.35g，8.3257mmol)加入到6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(2g，7.8856mmol)于乙腈(20mL)和DMF(4mL)中的无色溶液中。将混合物在室温下搅拌0.5小时，然后逐滴加入乙腈(10mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(2.42g，7.7253mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，在40℃下轻轻加热20小时，然后冷却回室温，并且用水和2-甲基四氢呋喃淬灭。将混合物用2-甲基四氢呋喃(3X 200mL)萃取。将合并的有机层用0.5N HCl水溶液(2X 120mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并通过在减压下蒸发浓缩，以得到呈黄色油的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(4.8g，94％)。此产物无需纯化而用于随后步骤。
步骤2：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-醇
在0℃下向N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(6.47g，8.4557mmol)和N,N-二异丙基乙胺(5.8618g，7.9mL，45.355mmol)于乙腈(200mL)中的溶液中按份加入4-甲苯磺酰氯(3.71g，19.46mmol)。加入之后，去除冷浴，并在44小时内将反应在26℃下搅拌。将挥发物通过在减压下蒸发去除。将残余物放入乙酸乙酯(180mL)中，并且用0.5N盐酸水溶液(3X 25ml)和盐水(2X 15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并通过在减压下蒸发浓缩，从而得到呈棕色粘性残余物的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-醇(6.67g，70％)。ESI-MS m/z计算值518.1025，实测值519.1(M+1)+；保留时间：3.1分钟(LC方法BB)。
步骤3：(E)-N-(1-(苄氧基)丙-2-基亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向1-苄氧基丙-2-酮(9.5g，52.07mmol)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6.7g，55.28mmol)于THF(140mL)中的溶液中加入Ti(OEt)4(30.464g，28mL，133.55mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，并且倒入盐水(300mL)中。将所得悬浮液通过硅藻土过滤，并将滤饼用EtOAc(300mL)洗涤。将有机层分离，并将水层用EtOAc(2X200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(350mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至45％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油的(E)-N-(1-(苄氧基)丙-2-基亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6.85g，42％)。ESI-MS m/z计算值267.1293，实测值268.2(M+1)+；保留时间：2.56分钟(LC方法G)。
步骤4：N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下向(E)-N-(1-(苄氧基)丙-2-基亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.3g，18.236mmol)于甲苯(120mL)中的溶液中缓慢加入烯丙基(溴)镁(26.8mL的1M，26.8mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。将反应用饱和NH4Cl(200mL)淬灭，并且温热至室温。将有机层分离，并且将水层用EtOAc(3X 200mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色油的N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(5.32g，80％)。ESI-MS m/z计算值309.1762，实测值310.5(M+1)+；保留时间：3.31分钟(LC方法G)。
步骤5：1-苄氧基-2-甲基-戊-4-烯-2-胺
向N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(5.32g，14.612mmol)于1,4-二噁烷(85mL)中的溶液中加入二乙醚中的HCl(42mL的2M，84mmol)，并且然后将混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂在真空下蒸发。将残余物用EtOAc(150mL)和饱和NaHCO3(150mL)稀释。将有机层分离，并且将水层用乙酸乙酯(2X 150mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％ MeOH/DCM梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡棕色油的1-苄氧基-2-甲基-戊-4-烯-2-胺(1.9749g，63％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.38–7.29(m,4H),7.30–7.23(m,1H),5.86–5.76(m,1H),5.02(s,1H),4.99(d,J＝7.8Hz,1H),4.47(s,2H),3.13(s,2H),2.08(d,J＝7.4Hz,2H),1.61(s,2H),0.94(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值205.1467，实测值206.2(M+1)+；保留时间：1.49分钟(LC方法H)。
步骤6：N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-醇(300mg，0.5084mmol)于二氯甲烷(5mL)中的0℃溶液中加入DIPEA(200.34mg，0.27mL，1.5501mmol)，随后加入三氟甲磺酰三氟甲烷磺酸酯(184.47mg，0.11mL，0.6538mmol)。20分钟后移除冰浴，并将反应在室温下搅拌40分钟。将混合物再次冷却至0℃。向混合物中加入二氯甲烷(0.5mL)和DIPEA(200.34mg，0.27mL，1.5501mmol)中的1-苄氧基-2-甲基-戊-4-烯-2-胺(125mg，0.6089mmol)。20分钟后移除冰浴，并将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到橙色油的N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(78mg，20％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.47(s,1H),7.43-7.23(m,10H),6.26(br s,1H),5.86-5.69(m,2H),5.13-4.96(m,4H),4.84(d,J＝10.5Hz,1H),4.66(d,J＝10.5Hz,1H),4.57-4.45(m,2H),3.66-3.53(m,2H),2.74-2.17(m,6H),1.48(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.68(s,3F),-73.15(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值705.2386，实测值706.3(M+1)+；保留时间：4.54分钟(LC方法BB)。
步骤7：(6R)-6-苄氧基-12-(苄氧基甲基)-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
将N-[1-(苄氧基甲基)-1-甲基-丁-3-烯基]-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(248mg，0.3393mmol)于1,2-二氯乙烷(120mL)中的溶液用氮气脱气20分钟。在60℃下向溶液中加入詹氏催化剂1B的第一部分(15mg，0.0204mmol)，并且将反应在此温度下搅拌40分钟。然后，加入等量的詹氏催化剂1B(15mg，0.0204mmol)，并且在60℃下继续搅拌2.5小时。一旦冷却至室温，就将催化剂用约5至6滴的DMSO淬灭，并且将反应在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至90％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色泡沫的(6R)-6-苄氧基-12-(苄氧基甲基)-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(174mg，75％)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.54-8.48(m,1H),7.40-7.21(m,10H),6.49-6.14(m,1H),5.65-5.53(m,1H),5.42-5.29(m,1H),5.26-5.12(m,1H),4.97(d,J＝11.2Hz,1H),4.69-4.60(m,1H),4.59-4.43(m,1H),3.78-3.62(m,1H),3.62-3.28(m,2H),2.71-2.08(m,5H),1.44-1.39(m,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.15至-64.22(m,3F),-73.15至-73.40(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值677.2073，实测值678.2(M+1)+；保留时间：4.3分钟(LC方法C)。
步骤8：(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将(6R)-6-苄氧基-12-(苄氧基甲基)-12-甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(174mg，0.2542mmol)溶解于无水甲醇(8.7mL)中。将氮气鼓泡到混合物中5分钟，并且然后加入钯碳(165mg，5％w/w，0.0775mmol)。然后将氢气用气球鼓泡到混合物中5分钟，并且将反应混合物在氢气下在室温下搅拌过夜。用氮气替换氢气球，并且使用针出口用氮气吹扫混合物。将混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(15mL)洗涤，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈淡黄色泡沫的(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(68mg，56％)。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.1(M+1)+；保留时间：3.04分钟(LC方法C)。
步骤9：(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物174)和(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物175)
在40℃下，将(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇的非对映异构体混合物(59.3mg，0.1249mmol)通过SFC在用10％甲醇/CO2洗脱的纤维素1柱(21.2mmX 250mm，5μm粒度)上以75毫升/分钟的流动分离，从而得到两种单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色绒毛状固体的(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(21mg，35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62-7.56(m,2H),5.98(s,2H),5.12(s,1H),5.10(t,J＝5.0Hz,1H),3.51(dd,J＝10.5,5.6Hz,1H),3.36(dd,J＝10.4,4.8Hz,1H),2.94-2.82(m,1H),2.38-2.26(m,1H),2.08-1.96(m,1H),1.75-1.60(m,2H),1.60-1.49(m,2H),1.46-1.32(m,3H),1.30(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.72(s,3F),-76.81(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.1(M+1)+；保留时间：2.98分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色绒毛状固体的(6R)-17-氨基-12-(羟基甲基)-12-甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(30mg，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.59(s,1H),5.95(s,2H),5.26(s,1H),5.19(t,J＝5.0Hz,1H),3.38(d,J＝5.1Hz,2H),2.43-2.15(m,1H),1.99-1.85(m,1H),1.73-1.57(m,1H),1.55-1.26(m,9H),1.22-1.12(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.78(s,3F),-79.04(s,3F)ppm。ESI-MSm/z计算值469.1549，实测值470.1(M+1)+；保留时间：3.04分钟(LC方法C)。
步骤10：结晶化合物175A形态(纯)的固体形态特征
A.单晶X射线衍射
结晶化合物175形态A(纯)的单一结晶生长自二氯甲烷和己烷。X射线衍射数据在配备有Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪和CPAD检测器上100K处获得。所述结构使用SHELX程序溶解和精炼(Sheldrick,G.M.,《晶体学报》,(2008)A64,112-122)并且下表8中概述了结果。
表8：结晶化合物175形态A(纯)的单一结晶说明
实例97：(6R)-17-氨基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物176)的制备
步骤1：1,1,1-三氘-2-(三氘甲基)戊-4-烯-2-胺
将无水氯化铈(III)(130g，527mmol)于四氢呋喃(1L)中的混合物在室温下搅拌3小时，然后加热至40℃持续18小时。将混合物冷却至-78℃，在一小时的时间段内加入三氘甲基锂作为与二乙醚中的碘化锂溶液的复合物(0.5M，1050mL，525mmol)。混合物变成黄色，并且在-78℃下保持45分钟。在20分钟的时间段内加入戊-4-烯腈(21mL，210mmol)于四氢呋喃(125mL)中的溶液。混合物变成棕色，并且在-78℃下保持另外3小时。在1小时内将反应温热至0℃，浓缩，加入氢氧化铵(65mL)，并且将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将硫酸钠(500g)加入到反应混合物中。在搅拌15分钟后，将混合物通过硅藻土垫过滤，将其用二乙醚(1L)冲洗。将滤液在减压下浓缩成最小体积。加入二氯甲烷(200mL)，导致立即形成白色固体沉淀。过滤固体，并将滤液用二氯甲烷(700mL)稀释。将二氯甲烷溶液用2N氢氧化钠(500mL)和盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将混合物通过硅胶色谱法(350g柱)(用0％至15％的二氯甲烷中的浓缩氢氧化铵/甲醇的1:1混合物梯度洗脱)进行纯化，从而得到呈深色油的1,1,1-三氘-2-(三氘甲基)戊-4-烯-2-胺(5g，20％产率)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ5.83(tdd,J＝6.5,10.3,17.0Hz,1H),5.02(qd,J＝1.7,17.1Hz,1H),4.97–4.89(m,1H),2.14–2.03(m,2H),1.47–1.40(m,2H),1.27(br s,2H)ppm。2H NMR(61.4MHz,氯仿)δ1.07(s,6D)ppm。ESI-MS m/z计算值119.24，实测值120.2(M+H)+；保留时间：1.1分钟(LC方法CC)。
步骤2：6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在500mL密封容器中，将1,1,1-三氘-2-(三氘甲基)戊-4-烯-2-胺(8.8g，66.42mmol)、DIEA(22.75mL，130.24mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(18.53g，65.12mmol)合并于乙腈(148mL)中，并且将混合物在70℃下加热110分钟。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至5％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈红棕色油的6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(18.77g，78％)。ESI-MS m/z计算值367.16，实测值368.267(M+1)+；保留时间：2.91分钟(LC方法D)。
步骤3：6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(18.77g，51.1mmol)于甲醇(93.85mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(120.87mL，2M，241.74mmol)。在搅拌8小时后，在减压下去除甲醇。将混合物在冰浴中冷却，并且加入6MHCl溶液(50mL)，然后用MTBE(120mL)萃取。将有机相合并，用水(3X 50mL)、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈米色固体的6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(17.57，97％)。ESI-MS m/z计算值353.15，实测值354.207(M+1)+；保留时间：2.395分钟(LC方法D)。
步骤4：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
在4.9℃的内部温度下向6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(17.57g，49.73mmol)和(2R)-2-(苄氧基)-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(15.05g，52.21mmol)于DMF(105.42mL)中的溶液中一份加入HATU(19.85g，52.21mmol)。然后逐滴加入DIEA(17.32mL，99.453mmol)，将内部温度保持在10℃以下。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物加入到冷水(527.1mL)和MTBE(175.7mL)的搅拌溶液中。将混合物搅拌10分钟，并且将相分离。将有机层用水(2X 175mL)、0.2M KHSO4(3X 175L)和盐水(44mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，蒸发并干燥，以得到呈红色粘性油的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(32.7g，100％)，将其直接用于下一步，而无需进一步纯化。ESI-MS m/z计算值623.24，实测值624.422(M+1)+；保留时间：3.158分钟(LC方法D)。
步骤5：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(31.01g，49.73mmol)和DIEA(17.32mL，99.45mmol)于CH3CN(248.07mL)中的溶液中按份加入对甲苯磺酰氯(10.43g，54.7mmol)，从而使温度保持低于50℃。将混合物在60℃下加热30分钟，并且然后将反应混合物冷却至环境温度。将大部分溶剂在减压下去除，并且将剩余材料在MTBE(250mL)与水(250mL)之间分份。将相分离，将有机层用水(250mL)、0.2M KHSO4(2X 150mL)、盐水(75mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化进行纯化，从而得到呈红色油的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(24.65g，82％)。ESI-MS m/z计算值605.23，实测值606.357(M+1)+；保留时间：3.60分钟(LC方法D)。
步骤6：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
在5L 3颈烧瓶中，将6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1,1-双(三氘甲基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(21.17g，34.96mmol)和詹氏催化剂1B(6.41g，8.74mmol)于DCE(3.18L)中的连续用氮气脱气的溶液在氮气气氛下在75℃下加热3小时。将2-硫烷基吡啶-3-甲酸(5.56g，35.83mmol)和三乙胺(5.1mL，36.252mmol)加入到反应混合物中，在N2下在45℃下持续搅拌过夜。将反应混合物冷却至环境温度，然后加入45g SiO2(230-400网格)，并且将混合物搅拌1小时。将反应混合物经硅藻土过滤，并且将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(7.64g，37.8％)。ESI-MS m/z计算值577.20，实测值578.335(M+1)+；保留时间：3.36-3.38分钟(LC方法D)。
步骤7：(6R)-17-氨基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物176)
向(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(6.47g，11.2mmol)于EtOH(97.05mL)和EtOAc(32.35mL)中的溶液中加入钯碳(1.908g，5w/w％，0.896mmol)。用真空/氮气回填5次，然后用真空/氢气球回填5次来将搅拌溶液脱气。在氢气气氛下加入甲醇中的氨溶液(1.6mL，7M，11.203mmol)。将反应混合物在氢气气氛下在环境下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩，并将残余物用庚烷处理并浓缩。向所得固体中加入DCM/庚烷(3mL/18mL)。收集形成的固体，并且在40℃下在真空烘箱下用N2流干燥过夜，以得到呈明黄色固体的(6R)-17-氨基-12,12-双(三氘甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(5.26g，85％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(d,J＝8.3Hz,2H),5.96(s,2H),4.64(s,1H),2.80(dt,J＝14.5,7.5Hz,1H),2.29–2.15(m,1H),2.06(t,J＝12.4Hz,1H),1.88–1.75(m,1H),1.65(dd,J＝12.6,8.0Hz,1H),1.55–1.36(m,5H)ppm。ESI-MS m/z计算值459.20，实测值460.339(M+1)+；保留时间：2.918分钟(LC方法D)。
实例98：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环戊烷]-6-醇(化合物177)的制备
步骤1：6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在125mL密封容器中，将1-烯丙基环戊胺(460mg，3.674mmol)、DIEA(3mL，17.22mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.1g，3.479mmol)合并于乙腈(20mL)中，并且将混合物在75℃下加热2小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(80克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.19g，92％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝0.8Hz,1H),6.45(s,1H),5.84-5.69(m,1H),5.06-4.99(m,1H),4.95(ddt,J＝17.0,2.5,1.4Hz,1H),3.94(s,3H),2.68(dt,J＝7.3,1.2Hz,2H),2.17-2.06(m,2H),1.86-1.74(m,2H),1.72-1.58(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值373.12494，实测值374.2(M+1)+；保留时间：1.55分钟(LC方法J)。
步骤2：6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.19g，3.188mmol)于THF(12mL)中的溶液中加入甲醇(12mL)和水(5mL)。加入无水氢氧化锂(1.3g，54.28mmol)并在室温下搅拌90分钟。在减压下去除THF和甲醇，然后加入3M HCl溶液直至呈酸性。将水层用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，然后在真空下干燥过夜，以得到呈浅黄色胶的6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.02g，89％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.22(s,1H),8.45(s,1H),6.36(s,1H),5.84–5.69(m,1H),5.02(dd,J＝10.2,2.4Hz,1H),4.99–4.92(m,1H),2.69(dd,J＝7.0,1.3Hz,2H),2.19–2.07(m,2H),1.85–1.74(m,2H),1.73–1.58(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值359.10928，实测值360.2(M+1)+；保留时间：1.78分钟(LC方法A)。
步骤3：6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(250mg，0.6958mmol)于DMF(6mL)中的溶液中加入DIEA(550μL，3.158mmol)和HATU(263mg，0.6917mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后逐滴加入溶解于DMF(1.5mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(212.0mg，0.7013mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。将有机层用10％柠檬酸溶液进一步洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(40克柱)使用100％二氯甲烷至15％甲醇/二氯甲烷梯度对粗材料进行纯化(产物以5％甲醇/二氯甲烷洗脱)，并且将所需材料浓缩，然后将其在真空下放置4小时，以得到呈浅黄色泡沫的6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(399.7mg，89％)。ESI-MS m/z计算值643.22296，实测值644.2(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法J)。
步骤4：N-(1-烯丙基环戊基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向6-[(1-烯丙基环戊基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(330.1mg，0.5129mmol)和DIEA(330.19mg，445μL，2.5548mmol)于乙腈(8mL)中的溶液中加入甲苯磺酰氯(122.3mg，0.6415mmol)。将反应在70℃下搅拌2小时。将溶剂在真空下去除。将残余物直接负载于硅胶柱上，并且通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度进行纯化，以得到呈黄色胶的N-(1-烯丙基环戊基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(318.5mg，99％)。ESI-MS m/z计算值625.2124，实测值626.4(M+1)+；保留时间：4.55分钟(LC方法G)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环戊烷](E/Z混合物)
在氮气气氛下在50℃下向N-(1-烯丙基环戊基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(315.1mg，0.5037mmol)于DCE(80mL)中的溶液中加入詹氏催化剂1B(155.3mg，0.2114mmol)，并且然后用氮气鼓泡1分钟。将所得混合物在70℃下加热2.5小时。将反应混合物冷却并在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g硅胶柱)(并且用0％至25％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环戊烷](E/Z混合物)(82.3mg，27％)。ESI-MS m/z计算值597.1811，实测值598.3(M+1)+；保留时间：4.4分钟(LC方法G)。
步骤6：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环戊烷]-6-醇(化合物177)
向(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环戊烷](E/Z混合物)(82.3mg，0.1377mmol)于乙酸乙酯(8mL)中的溶液加入Pd/C(120mg，10％w/w，0.1128mmol)。将反应混合物用氮气脱气并用氢气回填三次。将反应混合物在室温下搅拌40小时。通过经由硅藻土垫过滤来去除催化剂，并且用乙酸乙酯(30mL)洗涤，然后在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，得到呈淡黄色粉末，(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环戊烷]-6-醇(51.5mg，75％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,2H),5.97(s,2H),4.68(s,1H),2.69–2.60(m,1H),2.19(t,J＝12.8,12.8Hz,1H),2.14–2.06(m,1H),2.03–1.94(m,1H),1.91–1.72(m,4H),1.68–1.38(m,10H)ppm。ESI-MS m/z计算值479.1756，实测值480.1(M+1)+；保留时间：3.86分钟(LC方法H)。
实例99：(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物178)和(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物179)的制备
步骤1：6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在125mL密封容器中，将2-甲基庚-6-烯-3-胺(盐酸盐)(1.0g，6.109mmol)、DIEA(3.75mL，21.53mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.7g，5.376mmol)合并于乙腈(40mL)中，并且将混合物加热至80℃持续1小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(120克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(2.0g，99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),5.81-5.73(m,1H),4.96-4.90(m,1H),4.88(q,J＝1.5,1.1Hz,1H),4.29-4.17(m,1H),3.92(s,3H),2.06-1.97(m,1H),1.97-1.85(m,2H),1.85-1.75(m,1H),1.72-1.63(m,1H),0.89(d,J＝6.8Hz,3H),0.82(d,J＝6.7Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值375.1406，实测值376.2(M+1)+；保留时间：2.11分钟(LC方法A)。
步骤2：6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.75g，4.662mmol)于THF(17mL)中的溶液中加入甲醇(17mL)和水(8.5mL)。加入无水氢氧化锂(1.7g，70.99mmol)，并且在室温下搅拌2小时。在减压下去除THF和甲醇。加入3M HCl溶液，直至混合物呈酸性，然后将水层用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。将混合物过滤，并且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(120克柱)使用100％己烷至50％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1g，59％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.12(s,1H),8.42(s,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),5.78(ddt,J＝16.9,10.2,6.6Hz,1H),4.97-4.85(m,2H),4.30-4.18(m,1H),2.06-1.85(m,3H),1.85-1.63(m,2H),0.89(d,J＝6.7Hz,3H),0.83(d,J＝6.7Hz,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值361.12494，实测值362.2(M+1)+；保留时间：1.77分钟(LC方法A)。
步骤3：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(300mg，0.828mmol)、(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(290mg，1.006mmol)和吡啶(342.3mg，0.35mL，4.3274mmol)于EtOAc(3mL)中的溶液中加入乙酸乙酯中的丙基膦酸酐溶液(600mg，50％w/w，0.9429mmol)，并且将反应混合物在50℃下搅拌4小时。使反应冷却至室温，用乙酸乙酯(25mL)稀释，用10％氯化铵水溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得黄色油通过硅胶色谱法(40g柱，使用DCM负载，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱)进行纯化。将所需产物部分合并，并且在真空中浓缩，以得到呈白色固体的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(510mg，93％)。ESI-MS m/z计算值631.2229，实测值632.5(M+1)+；保留时间：7.51分钟(LC方法DD)。
步骤4：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-异丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在50℃下向N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1-异丙基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(510mg，0.7424mmol)和DIEA(296.8mg，0.4mL，2.2964mmol)于乙腈(10mL)中的搅拌溶液中加入甲苯磺酰氯(200mg，1.0491mmol)。将反应混合物加热至70℃并搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(25mL)稀释。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得棕色粘性油通过硅胶色谱法(40g柱，负载于DCM中，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱)进行纯化。将所需产物部分合并，并且在真空中浓缩，以得到呈浅黄色油的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-异丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(398mg，85％)。ESI-MS m/z计算值613.2124，实测值614.3(M+1)+；保留时间：8.38分钟(LC方法DD)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-12-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
将6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-异丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(398mg，0.6162mmol)于DCE(40mL)中的溶液用氮气鼓泡十五分钟，随后加入詹氏催化剂1B(120mg，0.1633mmol)。将反应混合物加热至70℃并搅拌过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并且通过硅胶色谱法(40g柱，负载于DCM中，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱)进行纯化。将所需产物部分合并，并且在真空中浓缩，以得到呈浅黄色粘性固体的(6R)-6-苄氧基-12-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(180mg，47％)。ESI-MS m/z计算值585.1811，实测值586.7(M+1)+；保留时间：8.17分钟(LC方法DD)。
步骤6：(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将具有(6R)-6-苄氧基-12-异丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(180mg，0.3013mmol)和Pd/C(210mg，10％w/w，0.1973mmol)于EtOH(10mL)中的混合物的烧瓶用氮气吹扫并抽空。烧瓶配备有氢气球(0.6074mg，6.7489mL，0.3013mmol)并抽空。配备另一个氢气球(0.6074mg，6.7489mL，0.3013mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌20小时。将反应混合物经硅藻土过滤。将滤饼用甲醇洗涤。将滤液在真空中浓缩，并且将所得荧光绿色油通过硅胶色谱法(40g柱，用DCM负载，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱)进行纯化。将所需产物部分合并，并且在真空中浓缩，以得到呈明黄色固体的(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(80mg，56％)。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.3(M+1)+；保留时间：7.66分钟(LC方法DD)。
步骤7：(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物178)和(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物179)
将(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇的两种非对映异构体(78mg，0.1669mmol)通过手性超临界流体色谱法(纤维素4柱；10％乙醇(含有0.1％二乙胺)/CO2；流动＝4毫升/分钟；100bar；40℃)分离。然后将含有每个非对映异构体的部分在减压下浓缩，以得到两个分离的峰。
峰1：通过硅胶色谱法(24g柱，用20％至30％ EtOAc/二氯甲烷梯度洗脱)对获得自峰1的材料进行进一步纯化并且冻干，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(34mg，43％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.57(s,1H),6.05(s,2H),4.51(d,J＝4.9Hz,1H),3.59-3.50(m,1H),2.27-2.14(m,2H),2.11-1.94(m,2H),1.68-1.55(m,3H),1.53-1.37(m,3H),1.25-1.14(m,1H),0.97(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(d,J＝6.8Hz,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.69(s,3F),-79.09(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.0(M+1)+；保留时间：3.64分钟(LC方法C)。
峰2：通过硅胶色谱法(24g柱，用20％至30％ EtOAc/二氯甲烷梯度洗脱)对获得自峰2的材料进行进一步纯化并且冻干，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-异丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(26mg，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.56(s,1H),6.03(s,2H),4.55(d,J＝5.6Hz,1H),3.69-3.61(m,1H),2.34-2.24(m,1H),2.14-1.95(m,3H),1.85-1.73(m,1H),1.62-1.34(m,5H),1.31-1.21(m,1H),0.97(d,J＝6.8Hz,3H),0.91(d,J＝7.1Hz,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.69(s,3F),-76.49(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1756，实测值468.0(M+1)+；保留时间：3.61分钟(LC方法C)。
实例100：(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物180)和(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物181)的制备
步骤1：6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在125mL密封容器中，将1-苯基戊-4-烯-2-胺(690mg，4.279mmol)、DIEA(2mL，11.48mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.1g，3.479mmol)合并于乙腈(28mL)中，并且将混合物在80℃下加热15分钟。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(40克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.25g，88％)。ESI-MS m/z计算值409.12494，实测值410.53(M+1)+；保留时间：0.78分钟(LC方法S)。
步骤2：6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.25g，3.054mmol)与甲醇(12.5mL)、THF(12.5mL)和水(6.2mL)中的氢氧化锂(718mg，29.98mmol)合并，并在室温下剧烈搅拌5分钟。然后将反应混合物冷却并加入1M HCl，直至水层呈酸性。用乙酸乙酯稀释，并且将层分离。将水层用另外的乙酸乙酯(2X 15mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，无需进一步纯化，以得到呈粘性浅黄色固体的6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(1.2g，99％)。ESI-MS m/z计算值395.10928，实测值396.16(M+1)+；保留时间：0.69分钟。此材料被直接用于随后步骤(LC方法S)。
步骤3：6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(375mg，0.9486mmol)于DMF(14mL)中的溶液中加入DIEA(660μL，3.789mmol)和HATU(360mg，0.9468mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后逐滴加入DMF(3mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(320mg，1.059mmol)。使反应在室温下搅拌1小时。将反应用盐水和水稀释，并且使其搅拌5分钟。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈白色固体的6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(522mg，81％)。ESI-MS m/z计算值679.22296，实测值680.55(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法R)。
步骤4：N-(1-苄基丁-3-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将6-(1-苄基丁-3-烯基氨基)-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(520mg，0.7651mmol)和DIEA(460μL，2.641mmol)于乙腈(10mL)中的溶液加热至60℃，然后加入对甲苯磺酰氯(166mg，0.8707mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌15分钟。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。用乙酸乙酯(3X40mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(24g柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色半固体的N-(1-苄基丁-3-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(425mg，84％)。ESI-MS m/z计算值661.2124，实测值662.6(M+1)+；保留时间：0.82分钟(LC方法R)。
步骤5：(6R)-12-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)
将氮气鼓泡通过N-(1-苄基丁-3-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(425mg，0.6424mmol)于DCE(70mL)中的淡黄色溶液过夜。然后分三份加入詹氏催化剂1B(95mg，0.1295mmol)，第一份在室温下并且氮气鼓泡5分钟。然后将浅绿色溶液在75℃(预热油浴)下搅拌2小时，而另外两份每间隔30分钟加入。将棕色溶液冷却至室温，然后加入DMSO(10滴)以淬灭催化剂。将溶剂在真空下去除，并且将残余物在硅胶上用二氯甲烷干包裹。通过24g硅柱(1％至40％MTBE/庚烷)上的色谱法进行纯化，以得到呈淡黄色油的(6R)-12-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(76mg，19％)。此材料被直接带入随后步骤。
步骤6：(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物180)和(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物181)
在室温下将钯碳(30mg，10％w/w，0.0282mmol)加入到(6R)-12-苄基-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,9,14,16-六烯(E/Z混合物)(75mg，0.0829mmol)于甲醇(8mL)中的脱气溶液中。将黑色悬浮液用氮气吹扫5分钟，然后将氢气鼓泡通过悬浮液5分钟。然后将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。将黑色悬浮液经硅藻土过滤，并且在真空下浓缩，以得到荧光黄色油(59mg)。通过12g硅柱(1％至40％ MTBE/庚烷)上的色谱法进行此油的纯化，从而得到黄色固体(48mg)。通过15g C18柱(5％至95％乙腈/水中的0.02％HCl)上的色谱法进一步纯化，以得到黄色固体(22mg)。通过SFC(纤维素3柱；30％甲醇/CO2；流动＝4毫升/分钟；100bar；40℃)对此固体的纯化，分离了两种非对映异构体。
待洗脱的第一峰分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(10.35mg，23％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,1H),7.53(br.s,1H),7.31-7.24(m,4H),7.21-7.15(m,1H),6.00(s,2H),4.98(d,J＝4.2Hz,1H),3.80-3.61(m,1H),3.07(dd,J＝13.9,2.9Hz,1H),2.75(dd,J＝13.9,10.8Hz,1H),2.55-2.41(m,1H),2.36-2.21(m,1H),2.11-1.96(m,1H),1.75-1.41(m,6H),1.16-1.00(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.70(s,3F),-79.11(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1756，实测值516.0(M+1)+；保留时间：3.57分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二峰分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-苄基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(8.02mg，19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,1H),7.54(br.s,1H),7.28-7.26(m,4H),7.21-7.13(m,1H),5.99(s,2H),5.06(d,J＝4.8Hz,1H),3.88-3.66(m,1H),3.06(dd,J＝13.9,3.1Hz,1H),2.77(dd,J＝13.9,10.8Hz,1H),2.43-2.30(m,2H),2.13-2.01(m,1H),1.83-1.40(m,6H),1.21-1.09(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.67(s,3F),-76.35(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值515.1756，实测值516.0(M+1)+；保留时间：3.59分钟(LC方法C)。
实例101：(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-戊-6-醇(对映异构体1)(化合物182)和(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物183)的制备
步骤1：6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在烧瓶中，将1-(4-氟苯基)丁-3-烯-1-胺(515mg，3.117mmol)、DIEA(1.5mL，8.612mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(800mg，2.53mmol)合并于乙腈(20mL)中，并且将混合物在80℃下加热15分钟。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(40克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(980mg，94％)。ESI-MS m/z计算值413.09988，实测值414.09(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法S)。
步骤2：6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(980mg，2.371mmol)与甲醇(10mL)、THF(10mL)和水(5mL)中的氢氧化锂(555mg，23.18mmol)合并，并在室温下剧烈搅拌5分钟。然后将反应混合物冷却并加入1M HCl，直至水层呈酸性。用乙酸乙酯稀释，并且将所得层分离，并且将水随后用乙酸乙酯(15mL)萃取另外两次。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，无需进一步纯化，以得到呈橙色固体的6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(940mg，99％)。ESI-MSm/z计算值399.08423，实测值400.8(M+1)+；保留时间：0.67分钟(LC方法S)。
步骤3：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(412mg，1.032mmol)于DMF(16mL)中的溶液中加入DIEA(720μL，4.134mmol)和HATU(392mg，1.031mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后逐滴加入DMF(4mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(350mg，1.158mmol)。使反应在室温下搅拌30分钟。将反应用盐水和水稀释，并且使其搅拌5分钟。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(24克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈米白色固体的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(624mg，88％)。ESI-MS m/z计算值683.1979，实测值684.59(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法S)。
步骤4：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(624mg，0.9129mmol)和DIEA(550μL，3.158mmol)于乙腈(13mL)中的溶液加热至60℃，然后加入对甲苯磺酰氯(198mg，1.039mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌15分钟。将反应混合物冷却并且用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。用乙酸乙酯(3X 40mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(24g金柱)使用100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈黄色半固体的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(526mg，87％)。ESI-MS m/z计算值665.1873，实测值666.5(M+1)+；保留时间：0.82分钟(LC方法R)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-12-(4-氟苯基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)
将6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(4-氟苯基)丁-3-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(500mg，0.7512mmol)于1,2-二氯乙烷(224mL)中的搅拌溶液通过用氮气鼓泡脱气20小时。在65℃下向溶液中加入詹氏催化剂1B(25mg，0.0341mmol)，然后将反应在此温度下搅拌30分钟。然后，加入等量的詹氏催化剂1B(25mg，0.0341mmol)，并且在65℃下持续搅拌30分钟。然后，加入等量的詹氏催化剂1B(25mg，0.0341mmol)，并且在65℃下持续搅拌2小时。一旦冷却至室温，就将催化剂用几滴DMSO(约5至6滴)淬灭，并且将反应在减压下浓缩。在用0％至90％乙酸乙酯/庚烷洗脱的40g柱上通过硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈米白色泡沫的(6R)-6-苄氧基-12-(4-氟苯基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(235mg，41％)。ESI-MS m/z计算值637.156，实测值638.1(M+1)+；保留时间：2.59分钟(LC方法E)。产物难以与起始材料分离，并且以约83％纯度直接用于随后步骤。
步骤6：(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物182)和(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物183)
将(6R)-6-苄氧基-12-(4-氟苯基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(240mg，0.3765mmol)溶解于无水甲醇(12mL)中。将氮气鼓泡到混合物中5分钟，并且然后加入钯碳(245mg，5％w/w，0.1151mmol)。然后将氢气用气球鼓泡5分钟，并且将反应混合物在氢气下在室温下搅拌过夜。用氮气替换一个氢气球，并且然后将系统向空气开放，并且将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤饼用乙酸乙酯(3X 5mL)洗涤，并且将滤液通过在减压下蒸发浓缩。将残余物干负载于10g硅胶上，并且通过用乙酸乙酯(0-30％)/庚烷洗脱的24g硅胶柱上的色谱法进行纯化，以得到黄色泡沫固体(135mg，通过LCMS的97.5％纯度，67.3％产率)。将此产物通过手性SFC(纤维素4柱；10％甲醇/CO2；流动＝3毫升/分钟；100bar；40℃)进行纯化，以分离两种非对映异构体。第一峰分离为呈黄色固体泡沫的(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(54mg，27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.66(s,1H),7.60(s,1H),7.57-7.50(m,2H),7.27-7.14(m,2H),6.14(s,2H),4.84(d,J＝3.9Hz,1H),4.76-4.61(m,1H),2.92-2.80(m,1H),2.32-2.21(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.80-1.66(m,1H),1.65-1.20(m,5H),1.19-1.06(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.26(s,3F),-79.09(s,3F),-114.87至-114.98(m,1F)ppm。ESI-MS m/z计算值519.1505，实测值520.1(M+1)+；保留时间：3.73分钟(LC方法C)。
第二分离的非对映异构体是呈黄色固体泡沫的(6R)-17-氨基-12-(4-氟苯基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(44mg，22％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.66(s,1H),7.58(s,1H),7.56-7.47(m,2H),7.29-7.15(m,2H),6.13(s,2H),4.91(d,J＝4.2Hz,1H),4.82-4.69(m,1H),2.79-2.65(m,1H),2.40-2.25(m,1H),2.15-2.00(m,1H),1.87-1.75(m,1H),1.74-1.62(m,1H),1.54-1.32(m,3H),1.31-1.18(m,1H),1.18-1.05(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.23(s,3F),-76.30(s,3F),-114.88至-115.03(m,1F)ppm。ESI-MS m/z计算值519.1505，实测值520.1(M+1)+；保留时间：3.76分钟(LC方法C)。
实例102：(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物184)和(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物185)的制备
步骤1：(Z)-2-甲基-N-(噁唑-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺
向噁唑-2-甲醛(10g，103.02mmol)于二氯甲烷(250mL)中的溶液中加入硫酸镁(74g，614.78mmol)、对甲苯磺酸吡啶盐(1.3g，5.1731mmol)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(16.5g，136.14mmol)，并且将反应在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，并且用二氯甲烷(150mL)洗涤。将溶剂在减压下去除。将粗混合物通过硅胶柱色谱法(300g柱，乙酸乙酯/二氯甲烷0％至30％)进行纯化，以得到静置时结晶的油，以得到淡黄色固体的(Z)-2-甲基-N-(噁唑-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(13.2g，64％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.84(s,1H),7.41(s,1H),1.28(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值200.0619，实测值201.4(M+1)+；保留时间：1.46分钟(LC方法Z)。
步骤2：2-甲基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下向(Z)-2-甲基-N-(噁唑-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(500mg，2.4968mmol)于四氢呋喃(10mL)中的冷却溶液中逐滴加入庚烷中的三甲基铝(2.5mL的2M，5mmol)。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，并且然后逐滴加入二乙醚中的溴(丁-3-烯基)镁(7.5mL的0.5M，3.75mmol)。将反应保持在-78℃下，直到通过HPLC分析观察到起始材料的完全消耗。将反应用饱和氯化铵(25mL)缓慢淬灭，用乙酸乙酯(2X 25mL)萃取，用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并且将溶剂在减压下去除，以得到呈粗褐色油的2-甲基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺亚磺酰胺(450mg，70％)。ESI-MS m/z计算值256.1245，实测值257.4(M+1)+；保留时间：1.57分钟(LC方法Z)。
步骤3：1-噁唑-2-基戊-4-烯-1-胺(盐酸盐)
在室温下向2-甲基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.01g，3.9397mmol)于甲醇(10mL)中的溶液中逐滴加入二乙醚中的盐酸(10mL的2M，20mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将溶剂在真空下去除，并且然后将所得灰色固体悬浮于二乙醚/甲醇9/1(50mL)中，然后在0℃下搅拌1小时。将灰色悬浮液过滤，用二乙醚(25mL)洗涤，并在真空下干燥，以得到呈淡黄色粉末，1-噁唑-2-基戊-4-烯-1-胺(盐酸盐)(700mg，94％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(br s,3H),8.24(d,J＝0.7Hz,1H),7.33(s,1H),5.83-5.65(m,1H),5.09-4.91(m,2H),4.52(br s,1H),2.12-1.97(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值152.095，实测值153.1(M+1)+；保留时间：2.11分钟(LC方法BB)。
步骤4：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在室温下向2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(420mg，0.8034mmol)和1-噁唑-2-基戊-4-烯-1-胺(盐酸盐)(170mg，0.9011mmol)于乙腈(8.4mL)中的溶液中加入二异丙胺(404.32mg，560μL，3.9957mmol)。将混合物回流2小时。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法(40g柱，庚烷/二氯甲烷的梯度，0％至20％)进行纯化。收集所需部分，并且将溶剂在减压下浓缩，以得到呈褐色油以及两种非对映异构体的混合物，6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(370mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63(s,1H),8.58(dd,J＝7.5,6.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.49-7.22(m,5H),7.13(s,1H),5.96-5.69(m,2H),5.63-5.49(m,1H),5.36(dd,J＝17.0,0.9Hz,1H),5.23(dd,J＝10.3,1.5Hz,1H),4.95-4.85(m,2H),4.78(d,J＝10.8Hz,1H),4.53(dd,J＝10.6,8.4Hz,1H),3.32-3.25(m,2H),2.31-2.16(m,2H),2.16-1.97(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值638.1712，实测值639.1(M+1)+；保留时间：2.43分钟(LC方法E)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯(E/Z混合物)
在500mL烘干圆底烧瓶中，将6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-噁唑-2-基戊-4-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(370mg，0.5795mmol)于二氯乙烷(200mL)中的脱气溶液在氮气气氛下加热至70℃。然后，在15分钟内分两份加入詹氏催化剂1B(52mg，0.0709mmol)。将所得混合物加热至70℃并搅拌4小时。将混合物冷却并在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱法(12g柱，2％的乙酸乙酯/二氯甲烷的等度运行)进行纯化。收集所需部分，并且将溶剂在减压下浓缩，以得到呈淡黄色泡沫以及两种非对映异构体的混合物的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(162mg，46％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70-8.56(m,2H),8.22-8.16(m,1H),7.39-7.22(m,6H),6.03-5.78(m,1H),5.75-5.47(m,2H),4.87-4.45(m,2H),3.31-3.11(m,1H),2.94-2.75(m,1H),2.41-2.04(m,3H),1.98-1.74(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.83(s,3F),-62.92(s,3F),-73.60(s,3F),-73.70(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值610.1399，实测值611.1(M+1)+；保留时间：2.52分钟(LC方法E)。
步骤6：(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物184)和(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物185)
将(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(160mg，0.2621mmol)溶解于甲醇(10mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(170mg，5％w/w，0.0799mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。将所得混合物通过反相C18色谱法(15.5g柱，5％至95％乙腈(+0.1％甲酸)/水(+0.1％甲酸)梯度)进行纯化，以产生两种非对映异构体的混合物。在40℃下这些非对映异构体通过手性SFC在用10％甲醇/CO2洗脱的纤维素1柱(21.2mm x 250mm，5μm粒度)上以4毫升/分钟流动进行分离，从而得到两个单一对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色油的(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(17mg，13％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(d,J＝0.7Hz,1H),7.69(s,1H),7.58(s,1H),7.25(d,J＝1.0Hz,1H),6.16(s,2H),5.99(d,J＝4.9Hz,1H),5.08-4.97(m,1H),2.38-2.26(m,1H),2.16-2.04(m,1H),1.87-1.68(m,2H),1.68-1.34(m,6H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.35(s,3F),-76.50(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值492.1345，实测值492.9(M+1)+；保留时间：3.1分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色油的(6R)-17-氨基-12-噁唑-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(18mg，14％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,1H),7.69(s,1H),7.59(s,1H),7.26(s,1H),6.17(s,2H),5.98(d,J＝4.2Hz,1H),4.99-4.88(m,1H),2.72-2.59(m,1H),2.34-2.19(m,1H),2.13-2.00(m,1H),1.77-1.67(m,1H),1.66-1.45(m,6H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.39(s,3F),-79.05(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值492.1345，实测值492.9(M+1)+；保留时间：3.08分钟(LC方法C)。
实例103：(6R)-17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(化合物186)的制备
步骤1：2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯
向N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯(5.010g，25.943mmol)于二乙醚(100mL)中的溶液中加入对-TsCl(5.959g，31.257mmol)。将溶液在冰浴中冷却。将氢氧化钾(17.302g，262.13mmol)以若干批次加入到反应混合物中。然后将反应加热至回流并搅拌1小时。形成大量白色沉淀。将反应混合物冷却至室温并用二乙醚(100mL)稀释。将混合物倒入冰水(100mL)中。将两层分离，并且将有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩(35℃浴温，110Torr真空)，以得到呈澄清液体的2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯(4.49g，94％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ2.03(s,2H),1.45(s,9H),1.27(s,6H)ppm。
步骤2：N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯
在0℃下向(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(4.914g，17.047mmol)和NaHCO3(4.31g，51.305mmol)于二噁烷(50mL)和水(50mL)中的溶液中加入氯甲酸苄酯(8.7235g，7.3mL，51.136mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌1小时，并且在室温下搅拌过夜。将两个层分离，并将水层用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将合并的有机层在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至60％乙醚/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈澄清胶的N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯(9.2g，100％)。ESI-MS m/z计算值422.1453，实测值423.1(M+1)+；保留时间：3.43分钟(LC方法G)。
步骤3：N-[[(2R)-2-苄氧基-5-羟基-2-(三氟甲基)戊烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯
在室温下向N-[[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯(9.2g，16.989mmol)于无水THF(100mL)中的溶液中逐滴加入9-硼二环[3.3.1]壬烷(170mL的THF中的0.5M，85mmol)。将反应在室温下搅拌1小时。将反应冷却至0℃。将1N NaOH(85mL，85mmol)和H2O2(6.66g，20mL的30％w/w，58.739mmol)的水溶液加入到反应混合物中。将反应在室温下搅拌0.5小时。将反应用乙酸乙酯(200mL)稀释，并且用饱和硫代硫酸钠(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机溶液经无水硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色泡沫的N-[[(2R)-2-苄氧基-5-羟基-2-(三氟甲基)戊烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯(6.405g，86％)。ESI-MS m/z计算值440.1559，实测值441.2(M+1)+；保留时间：2.95分钟(LC方法G)。
步骤4：N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-(苄氧基羰基氨基氨基甲酰)-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
向反应小瓶装入N-[[(2R)-2-苄氧基-5-羟基-2-(三氟甲基)戊烯酰]氨基]氨基甲酸苄酯(6.405g，14.543mmol)和2,2-二甲基氮丙啶-1-甲酸叔丁酯(21.2g，123.81mmol)。将反应加热到80℃，并搅拌14小时。将反应冷却至室温，并且通过硅胶色谱法(使用0％至40％乙酸乙酯/己烷)直接纯化，从而得到呈澄清液体的N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-(苄氧基羰基氨基氨基甲酰)-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(2.868g，32％)。ESI-MS m/z计算值611.2818，实测值612.4(M+1)+；保留时间：3.72分钟(LC方法G)。
步骤5：N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-(苄氧基羰基氨基氨基甲酰)-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(1.912g，3.126mmol)于乙酸乙酯(100mL)中的溶液中加入10％ Pd/C(630mg，10％w/w，0.592mmol)。将反应在1大气压的氢气(氢气球)下搅拌3小时。将催化剂通过过滤去除。将滤液在真空下浓缩，并通过硅胶色谱法使用0％至60％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈澄清胶的N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(1.083g，73％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.95(s,1H),7.51–7.31(m,5H),4.81(s,1H),4.75(d,J＝10.3Hz,1H),4.66(d,J＝10.4Hz,1H),3.88(s,2H),3.45–3.37(m,1H),3.37–3.27(m,1H),3.13(d,J＝5.9Hz,2H),2.43–2.15(m,2H),1.65–1.36(m,11H),1.15(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值477.2451，实测值478.2(M+1)+；保留时间：3.07分钟(LC方法G)。
步骤6：N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-(肼羰基)戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(147.5mg，0.3089mmol)和6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(92mg，0.3649mmol)于无水DMF(4.5mL)中的溶液中加入TEA(312.18mg，0.43mL，3.0851mmol)，随后加入乙酸乙酯中的丙基膦酸酐溶液(197.76mg，0.37mL的50％w/w，0.3108mmol)。将反应在室温下搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用1N HCl(10mL)、盐水(3X 20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％丙酮/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色胶的N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(201mg，91％)。ESI-MS m/z计算值711.2339，实测值712.6(M+1)+；保留时间：3.56分钟(LC方法G)。
步骤7：N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[5-[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(201mg，0.2825mmol)和DIEA(363.58mg，0.49mL，2.8132mmol)于乙腈(4mL)中的溶液中加入对-TsCl(59mg，0.3095mmol)。将反应在室温下搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用饱和氯化铵水溶液(2X 10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机溶液经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至100％乙酸乙酯梯度/己烷对残余物进行纯化，以得到呈棕色固体的N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[5-[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(86.6mg，41％)。ESI-MSm/z计算值693.2233，实测值694.4(M+1)+；保留时间：3.84分钟(LC方法G)。
步骤8：N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-[5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-[(4R)-4-苄氧基-5,5,5-三氟-4-[5-[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(86.6mg，0.1149mmol)于无水THF(1mL)中的溶液中加入三苯基膦(122mg，0.4651mmol)，随后在0℃下逐滴加入2,2,2-三氯乙腈(33.120mg，0.023mL，0.2294mmol)。将反应在室温下搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(50mL)稀释并用盐水(15mL)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色胶的N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-[5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(21.3mg，26％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.70(s,1H),7.46–7.39(m,2H),7.39–7.33(m,2H),7.33–7.28(m,1H),4.82(d,J＝10.7Hz,1H),4.78(s,1H),4.63(d,J＝10.6Hz,1H),3.42–3.30(m,2H),3.11(d,J＝6.0Hz,2H),2.55–2.38(m,2H),1.87–1.77(m,1H),1.77–1.65(m,1H),1.42(s,9H),1.13(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值711.1894，实测值712.6(M+1)+；保留时间：4.12分钟(LC方法G)。
步骤9：(6R)-6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯
在室温下向N-[2-[(4R)-4-苄氧基-4-[5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊氧基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(21.3mg，0.0299mmol)于无水DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(740mg，0.5mL，6.4899mmol)。将反应在室温下搅拌1小时。将反应用DCM(30mL)稀释，并且用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥。过滤干燥试剂。将DIEA(14.840mg，0.02mL，0.1148mmol)加入到DCM溶液中，并且将反应在室温下搅拌1小时。将所有挥发物在真空下去除，以得到呈黄色胶的(6R)-6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯(18mg，99％)。ESI-MS m/z计算值575.1603，实测值576.4(M+1)+；保留时间：3.8分钟。将粗产物用于下一步反应，而无需纯化(LC方法G)。
步骤10：(6R)-17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(化合物186)
向(6R)-6-苄氧基-11,11-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯(18mg，0.0297mmol)于乙醇(5mL)中的溶液加入10％ Pd/C(20mg，10％w/w，0.0188mmol)。将反应在1大气压的氢气下搅拌3天。将催化剂通过硅藻土过滤去除，并将滤液蒸发。通过硅胶色谱法使用0％至100％乙酸乙酯梯度/己烷对残余物直接纯化，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-11,11-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-6-醇(7.3mg，53％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.29(s,1H),4.80(s,1H),4.09(s,1H),3.75(q,J＝7.6,7.6,7.5Hz,1H),3.69–3.55(m,2H),3.18(s,1H),2.53–2.36(m,1H),2.36–2.17(m,1H),1.96–1.77(m,1H),1.45–1.35(m,1H),1.25(s,3H),1.18(s,3H)ppm。两个可交换的质子在NMR中未被观察到。ESI-MSm/z计算值455.1392，实测值456.4(M+1)+；保留时间：1.79分钟(LC方法H)。
实例104：(6R,8R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(化合物187)、(6R,8S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(化合物188)、(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体1)(化合物189)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体2)(化合物190)的制备
步骤1：(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-8-醇和(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-醇(区域异构非对映异构体的混合物)
将(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(200mg，0.35mmol)于硼烷四氢呋喃复合物(2.5mL，THF中的1M溶液，2.5mmol)中的溶液在0℃下搅拌30分钟。在0℃逐滴加入水(1.3mL)(温升)。在0℃下加入氢氧化钠水溶液(0.4mL，2M，0.8mmol)和过氧化氢/水(524.48mg，1.35mL，5.3967mmol)。将混合物在室温下搅拌15分钟，然后用乙酸乙酯(3X 10mL)萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体以及非对映异构体的区域异构混合物的(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-8-醇和(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-醇(区域异构非对映异构体的混合物)(305mg，67％)。ESI-MS m/z计算值589.176，实测值589.9(M+1)+；保留时间：2.26分钟(LC方法C)。
步骤2：(6R,8R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(化合物187)、(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(非对映异构体的混合物)和(6R,8S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(化合物188)
在室温下向(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-8-醇和(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-9-醇(区域异构非对映异构体的混合物)的混合物(200mg，0.2701mmol)于甲醇(6mL)中的脱气溶液中加入10％钯碳(60mg，0.5638mmol)。将黑色悬浮液用氮气吹扫5分钟，然后将氢气鼓泡通过悬浮液5分钟。然后将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。将黑色悬浮液用氮气吹扫，然后经硅藻土过滤，将其用DCM(3X 10mL)洗涤，并且将滤液在真空下浓缩。通过反相HPLC(柱1)(50g C18柱)使用1％至85％乙腈/水(+0.02％ HCl)梯度进行纯化，从而得到三种产物：
来自柱1的待洗脱的第一区域异构体/对映异构体仍被杂质污染，并且通过反相HPLC(柱2)(50g C18柱)使用1％至85％乙腈/水(+0.02％ HCl)梯度进一步纯化，从而得到呈黄色固体的(6R,8R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(4.4mg，34％)。ESI-MSm/z计算值469.15485，实测值470.2(M+1)+；保留时间：2.85分钟(LC方法C)。
通过反相HPLC(柱3)(15g，C18柱)使用5％至80％乙腈/水(+0.02％HCl)梯度对来自柱1的待洗脱的第二产物峰进一步纯化，从而得到14.5mg的黄色固体以及(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇的不可分离混合物(非对映异构体的混合物)。此材料被直接用于随后步骤。
来自柱1的待洗脱的第三区域异构体/对映异构体分离为呈黄色固体的(6R,8S)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,8-二醇(66mg，52％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.50(s,1H),4.40(td,J＝9.2,4.9Hz,1H),3.54(td,J＝12.5,4.5Hz,1H),2.66(d,J＝14.5Hz,1H),2.11(dd,J＝14.8,10.0Hz,1H),1.77-1.46(m,4H),1.43(s,3H),1.41-1.35(m,1H),1.31(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-63.87(s,3F),-81.07(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.0(M+1)+；保留时间：3.21分钟(LC方法C)。
步骤3：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体1)(化合物189)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体2)(化合物190)
通过SFC使用用7％ MeOH/CO2洗脱的Lux纤维素1柱(150X 21.2mm，5μm粒度)对(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇的非对映异构体混合物(非对映异构体的混合物)(38mg，0.0672mmol)进行纯化，产生了两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体1)(18.9mg，60％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(s,1H),4.96-4.77(m,1H),3.40(t,J＝12.0Hz,1H),2.56(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),2.28-2.13(m,1H),2.21(dd,J＝13.4,9.8Hz,1H),1.97-1.83(m,1H),1.66-1.47(m,5H),1.46-1.35(m,1H),1.26(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-65.52(s,3F),-79.65(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：3.11分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,9-二醇(对映异构体2)(10.3mg，32％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.43(s,1H),4.78-4.65(m,1H),3.40(t,J＝12.5Hz,1H),3.02(dd,J＝14.1,6.2Hz,1H),2.21-2.08(m,1H),2.08-1.98(m,1H),1.96-1.80(m,1H),1.66-1.36(m,6H),1.26(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-65.54(s,3F),-82.01(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：3.14分钟(LC方法C)。
步骤4：结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态的固体形态特征
A.单晶X射线衍射
结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态的单一结晶生长自二氯甲烷。X射线衍射数据在配备有Cu Kα辐射的布鲁克衍射仪和CPAD检测器上100K处获得。所述结构使用SHELX程序溶解和精炼(Sheldrick,G.M.,《晶体学报》,(2008)A64,112-122)并且下表9中概述了结果。
表9：结晶化合物188二氯甲烷溶剂化物A形态的单一结晶说明
实例105：(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物191)和(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物192)的制备
步骤1：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-环丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(158mg，0.3022mmol)于乙腈(6mL)中的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(150mg，0.2022mL，1.1606mmol)，随后加入乙腈(1mL)中的1-环丙基戊-4-烯-1-胺溶液(50mg，0.3993mmol)。将混合物在30℃下搅拌2小时，并且冷却至室温。将混合物干负载于硅胶(约1g)上，并且通过快速色谱法(24g硅胶，用10％至30％乙酸乙酯/庚烷洗脱)进行纯化，以得到呈无色油的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-环丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(183mg，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),7.42-7.30(m,5H),6.05-5.91(m,1H),5.84-5.70(m,2H),5.35-5.21(m,2H),5.05-4.92(m,2H),4.82(d,J＝10.3Hz,1H),4.65(dd,J＝10.4,3.3Hz,1H),3.84-3.73(m,1H),3.31-3.17(m,2H),2.23-2.12(m,2H),1.93-1.76(m,2H),1.02-0.89(m,1H),0.68-0.59(m,1H),0.57-0.48(m,1H),0.45-0.28(m,2H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.59(s,3F),-73.44至-73.58(m,3F)ppm。NMR显示非对映异构体的1:1混合物。产物在LCMS上不离子化。保留时间：2.41分钟(LC方法E)。
步骤2：(6R)-6-苄氧基-12-环丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯
将干燥的250mL烧瓶装入1,2-二氯乙烷(100mL)。将溶剂用氮气鼓泡30分钟。在氮气轻流动下加入詹氏催化剂1B(27mg，0.0368mmol)。将混合物用氮气鼓泡10分钟，并且加热至66℃。在1小时内逐滴加入6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1-环丙基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(183mg，0.2992mmol)于1,2-二氯乙烷(20mL)中的氮气鼓泡溶液。加入完成后，将混合物用氮气鼓泡6分钟。将混合物继续在66℃下搅拌0.5小时，冷却至室温，然后加入5滴DMSO以淬灭催化剂。将混合物浓缩在硅胶(3g)上，并且通过快速色谱法(40g硅胶，用5％至25％乙酸乙酯/庚烷洗脱)进行纯化，以得到呈浅黄色油的(6R)-6-苄氧基-12-环丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯(132mg，76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52-8.43(m,1H),7.45-7.28(m,5H),5.95-5.69(m,2H),5.63-5.38(m,1H),5.02-4.85(m,1H),4.72-4.51(m,1H),3.45-3.27(m,1H),3.19-2.63(m,2H),2.49-2.15(m,2H),2.13-1.89(m,1H),1.80-1.65(m,1H),1.19-0.92(m,2H),0.69-0.44(m,2H),0.34-0.17(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-63.83至-64.98(m,3F),-72.69至-74.13(m,3F)ppm。
步骤3：(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将(6R)-6-苄氧基-12-环丙基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯(132mg，0.2262mmol)、10％钯碳(50％湿润)(41mg，0.0193mmol)和甲醇(6mL)的混合物在氢气气氛(气球)下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩，并且将残余物用10％钯碳(51mg，0.024mmol)和甲醇(6mL)在氢气气氛(气球)下在室温下再次氢化过夜。将混合物通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩并且通过快速色谱法(40g柱，用10％至30％乙酸乙酯/庚烷洗脱)进行纯化，以得到呈浅黄色油的(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(100mg，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33-7.29(m,1H),4.81(d,J＝15.2Hz,1H),3.93(br.s,1H),2.85-2.60(m,2H),2.48-1.98(m,3H),1.87-1.46(m,7H),1.39-1.31(m,1H),1.04-0.92(m,1H),0.78-0.68(m,1H),0.56-0.40(m,2H),0.24-0.10(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.12(s,3F),-76.49至-81.49(m,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.1599，实测值466.0(M+1)+；保留时间：3.49分钟(LC方法C)。
步骤4：(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物191)和(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物192)
将(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇的两种非对映异构体(130mg，0.2793mmol)通过手性SFC方法使用Amylose 1柱以及8％甲醇/CO2移动相(流速＝4毫升/分钟；柱温＝40℃)分离。然后将含有每种非对映异构体的部分在减压下浓缩并冻干(乙腈/水混合物)，以得到两种非对映异构体。
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈浅黄色固体的(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(31mg，24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.54(s,1H),6.02(s,2H),5.07(d,J＝3.4Hz,1H),2.89-2.80(m,1H),2.49-2.41(m,1H),2.35-2.23(m,1H),2.13-2.02(m,1H),1.79-1.58(m,3H),1.56-1.36(m,3H),1.34-1.21(m,1H),1.09-0.97(m,1H),0.73-0.63(m,1H),0.48-0.33(m,2H),0.14-0.04(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.73(s,3F),-76.29(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.1599，实测值466.0(M+1)+；保留时间：3.49分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈浅黄色固体的(6R)-17-氨基-12-环丙基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(28mg，21％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.57(s,1H),6.03(s,2H),4.99(d,J＝2.9Hz,1H),2.81-2.71(m,1H),2.63-2.53(m,1H),2.27-2.15(m,1H),2.07-1.94(m,1H),1.71-1.39(m,6H),1.23-1.13(m,1H),1.08-0.96(m,1H),0.71-0.60(m,1H),0.48-0.36(m,2H),0.15-0.05(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.73(s,3F),-79.14(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值465.1599，实测值466.0(M+1)+；保留时间：3.5分钟(LC方法C)。
实例106：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环己烷]-6-醇(化合物193)的制备
步骤1：6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在烧瓶中，将1-烯丙基环己胺(515mg，3.699mmol)、DIEA(1.7mL，9.76mmol)和6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(950mg，3.004mmol)合并于乙腈(23mL)中，并且将混合物加热至80℃持续15分钟。将反应混合物冷却至环境温度，并且将溶剂在真空中去除。将残余物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用盐水(2X 25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法(40克柱)使用100％己烷至30％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(899mg，77％)。ESI-MS m/z计算值387.1406，实测值388.53(M+1)+；保留时间：0.83分钟(LC方法S)。
步骤2：6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
将6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(899mg，2.321mmol)与MeOH(9mL)、THF(9mL)和水(4.5mL)中的LiOH(500mg，20.88mmol)合并，并在室温下剧烈搅拌5分钟。然后将反应混合物冷却并加入1M HCl，直至水层呈酸性。用乙酸乙酯稀释，并且将层分离，并且将水溶液用另外的乙酸乙酯(2X 15mL)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，无需进一步纯化，以得到呈米白色固体的6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(860mg，99％)。ESI-MS m/z计算值373.12494，实测值374.1(M+1)+；保留时间：0.74分钟(LC方法S)。
步骤3：6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(390mg，1.045mmol)于DMF(14.5mL)中的溶液中加入DIEA(720μL，4.134mmol)和HATU(397mg，1.044mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后逐滴加入DMF(3mL)中的(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(352mg，1.164mmol)。使反应在室温下搅拌10分钟。将反应用盐水和水稀释，并且使其搅拌5分钟。将反应用乙酸乙酯(3X 20mL)萃取。将有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后通过硅胶色谱法(12克柱)使用100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，以得到呈粘性浅橙色固体的6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(575mg，84％)。ESI-MS m/z计算值657.2386，实测值658.3(M+1)+；保留时间：0.76分钟(LC方法R)。
步骤4：(9R)-9-苄氧基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)螺[2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(18),5,14,16-四烯-3,1'-环己烷]-10,13-二酮(E/Z混合物)
将氮气鼓泡通过6-[(1-烯丙基环己基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(575mg，0.899mmol)于DCE(180mL)中的淡黄色溶液过夜。然后分三份加入詹氏催化剂1B(130mg，0.1772mmol)，第一份在室温下并且氮气鼓泡3分钟。然后将浅绿色溶液在60℃(预热油浴)下搅拌，而另外两份每间隔30分钟加入。在最后加入催化剂之后，将混合物在60℃下搅拌1小时。将棕色溶液冷却至室温，然后加入DMSO(10滴)以淬灭催化剂。将溶剂在真空下去除，并且通过24g硅柱内的正常相色谱法(1％至40％ MTBE/庚烷)对残余物进行纯化，以得到呈淡黄色油的(9R)-9-苄氧基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)螺[2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(18),5,14,16-四烯-3,1'-环己烷]-10,13-二酮(E/Z混合物)(446mg，70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),7.93(s,1H),7.49-7.29(m,4H),7.09-6.98(m,2H),5.70-5.41(m,2H),5.18(br.s.,1H),4.63(d,J＝9.7Hz,1H),4.37(d,J＝10.4Hz,1H),3.27(dd,J＝14.2,10.9Hz,1H),2.88(d,J＝13.9Hz,1H),2.32-2.15(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.91(dd,J＝14.2,5.1Hz,1H),1.79-1.47(m,4H),1.45-1.12(m,7H)ppm。ESI-MS m/z计算值629.2073，实测值629.9(M+1)+；保留时间：3.64分钟(LC方法C)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环己烷](E/Z混合物)
在室温下将(9R)-9-苄氧基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)螺[2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(18),5,14,16-四烯-3,1'-环己烷]-10,13-二酮(E/Z混合物)(260mg，0.3717mmol)和1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(60mg，0.5349mmol)于DCM(3.6mL)中的溶液用25％2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氢咪唑-1-鎓；氯(73mg，0.4318mmol)于DCM(2.6mL)中的溶液进行处理。咪唑鎓中间体的形成在10分钟内完成。将DCM蒸发，并且将残余物溶解于甲苯(8mL)中。将混合物在100℃下搅拌过夜。将深色混合物用水(3mL)淬灭，并用MTBE(3X10mL)萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到粗棕色油的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环己烷](E/Z混合物)(320mg，115％，材料是粗的并且含有杂质)。ESI-MS m/z计算值611.1967，实测值612.2(M+1)+；保留时间：4.4分钟。将本材料直接送至后续步骤(LC方法BB)。
步骤6：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环己烷]-6-醇(化合物193)
在室温下将钯碳(10mg，0.0094mmol)加入到粗(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,1'-环己烷](E/Z混合物)(40mg，0.0515mmol)于甲醇(2mL)中的脱气棕色溶液中。将氮气鼓泡通过黑色混合物，然后将氢气(1大气压)鼓泡通过混合物5分钟。将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。然后将黑色悬浮液用氮气吹扫5分钟，并且然后经硅藻土过滤。用DCM(3X 10mL)洗涤滤饼。将荧光黄色滤液在真空下浓缩，以得到粗黄色固体。将以相同方式制备的第二批粗产物与此批合并，以得到粗(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环己烷]-6-醇(242mg，0.4071mmol)，然后将其通过50g C18柱内的反相色谱法(5％至85％乙腈/水中的0.02％ HCl)进行纯化，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,1'-环己烷]-6-醇(162mg，79％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.54(s,1H),3.10-2.89(m,1H),2.46-2.28(m,2H),2.18-2.05(m,1H),1.94-1.84(m,1H),1.83-1.44(m,13H),1.44-1.33(m,1H),1.30-1.17(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-65.27(s,3F),-80.95(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值493.1912，实测值494.0(M+1)+；保留时间：3.77分钟(LC方法C)。
实例107：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，顺式二醇)(化合物194)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，顺式二醇)(化合物195)的制备
步骤1：3-叔丁氧基-2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)
向直火烘干的烧瓶装入2-烯丙氧基-2-甲基丙烷(359mg，2.7982mmol)、THF(6.5mL)和TMEDA(286.75mg，0.37mL，2.4676mmol)。然后将烧瓶在干冰丙酮浴中冷却，并且用仲丁基锂(1.76mL的1.4M，2.464mmol)的环己烷溶液逐滴处理。45分钟后，加入三甲基铝(1.23mL的2M庚烷溶液，2.46mmol)，并且将反应搅拌另外45分钟。加入3,3,3-三氟-2-氧代-丙酸乙酯(333.58mg，0.26mL，1.9612mmol)，并且将反应在冷浴中再搅拌4小时。将反应用1NHCl水溶液(约40mL)淬灭，并在室温下剧烈搅拌几分钟。将混合物用二乙醚(1X 40mL，2X20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2X 20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)(0％至20％乙酸乙酯/庚烷洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈无色油以及主要的外消旋顺式异构体的3-叔丁氧基-2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)(341mg，57％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.87(ddd,J＝17.6,10.0,8.1Hz,1H),5.31-5.20(m,2H),4.55(d,J＝8.1Hz,1H),4.38-4.23(m,2H),3.85(s,1H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.23(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-73.35(s,3F)ppm。此产物被约6.5％的外消旋反式二醇异构体污染。
步骤2：2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)
将3-叔丁氧基-2-羟基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)(3.24g，11.398mmol)于DMF(50mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且用氢化钠(563mg，矿物油中的60％w/w，14.076mmol)处理。40分钟后，加入溴甲基苯(2.6459g，1.84mL，15.47mmol)，并且将反应逐渐温热至室温并且搅拌过夜。向反应混合物加入水(450mL)，并将水层用MTBE(4X150mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 150mL)、盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过0％至20％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(220g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)(3.86g，83％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.46-7.41(m,2H),7.39-7.32(m,2H),7.32-7.28(m,1H),5.98(ddd,J＝17.9,9.3,8.6Hz,1H),5.27-5.22(m,1H),5.21(s,1H),4.92-4.85(m,1H),4.79-4.73(m,1H),4.59(d,J＝8.1Hz,1H),4.28(q,J＝7.1Hz,2H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H),1.20(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-65.50(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值374.1705，实测值397.2(M+Na)+；保留时间：2.45分钟(LC方法E)。
步骤3：2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸(顺式二醇)
将氢氧化钠(1.13g，28.252mmol)于水(10mL)中的溶液加入到2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸乙酯(顺式二醇)(3.4g，8.6908mmol)于甲醇(30mL)中的溶液中，并且将混合物在70℃下搅拌4天。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩以去除大部分甲醇。加入水(100mL)并且用1N HCl水溶液酸化至pH＝2。将水层用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈黄色油的2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸(顺式二醇)(3.29g，97％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.11(br.s.,1H),7.45-7.26(m,5H),5.86(ddd,J＝17.6,10.0,8.1Hz,1H),5.34-5.20(m,2H),4.88(d,J＝11.2Hz,1H),4.67-4.56(m,2H),1.15(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-64.77(s,3F)ppm。保留时间：2.15分钟(LC方法E)。
步骤4：2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(顺式二醇)
将2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酸(顺式二醇)(3.29g，8.4354mmol)和三乙胺(2.5410g，3.5mL，25.111mmol)于DMF(50mL)中的溶液用HATU(6.46g，16.99mmol)处理，并且将混合物在室温下搅拌20分钟。在冰浴中冷却，并且加入水合肼(6.708g，10mL，87.099mmol)。在约10分钟后，移除冰浴并将反应在室温下搅拌约18小时。向反应混合物加入水(450mL)，并将水层用乙酸乙酯(4X 150mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 250mL)、盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过0％至50％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(220g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(顺式二醇)(2.836g，91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(br.s.,1H),7.45-7.25(m,5H),5.81(ddd,J＝17.4,10.5,7.1Hz,1H),5.27(d,J＝17.1Hz,1H),5.21(d,J＝10.5Hz,1H),5.11-4.99(m,2H),4.90(d,J＝7.3Hz,1H),4.36(d,J＝4.4Hz,2H),1.18(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-67.28(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值360.1661，实测值305.1(M-55)+；保留时间：2.13分钟(LC方法E)。
步骤5：N'-[2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(顺式二醇)
将6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(775mg，2.2316mmol)和2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(顺式二醇)(750mg，2.025mmol)于DMF(15mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且用HATU(933mg，2.4538mmol)和DIPEA(534.24mg，0.72mL，4.1336mmol)相继处理。5分钟后移除冰浴，并且将反应在室温下搅拌过夜。向反应混合物加入水(100mL)，并将水层用乙酸乙酯(3X 50mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过0％至20％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(40g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈稠密琥珀色油的N'-[2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(顺式二醇)(1.136g，81％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.61(d,J＝6.6Hz,1H),8.89(d,J＝6.1Hz,1H),8.30(s,1H),7.49-7.31(m,5H),6.02-5.88(m,1H),5.85-5.70(m,1H),5.50-5.29(m,3H),5.27-5.12(m,2H),5.09-4.91(m,3H),2.13-1.93(m,4H),1.56(s,3H),1.52(s,3H),1.27(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.51(s,3F),-68.75(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值689.2648，实测值634.2(M-55)+；保留时间：2.59分钟(LC方法E)。
步骤6：6-[5-[1-苄氧基-2-叔丁氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(顺式二醇)
将N'-2-苄氧基-3-叔丁氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(顺式二醇)(335mg，0.4858mmol)和DIPEA(222.60mg，0.3mL，1.7223mmol)于乙腈(8mL)中的溶液加热至60℃，然后加入对甲苯磺酰氯(106mg，0.556mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌90分钟。将反应混合物冷却，并且将溶液浓缩至1/4体积，并且用饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)淬灭，并且然后用乙酸乙酯(3X30mL)萃取。将有机物分离，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过0％至20％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(40g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈浅黄色油的6-[5-[1-苄氧基-2-叔丁氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(顺式二醇)(312mg，96％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.52(s,1H),7.49-7.28(m,5H),6.02(ddd,J＝17.5,9.7,8.1Hz,1H),5.83-5.67(m,1H),5.57(br.s.,1H),5.36-5.18(m,2H),5.08-4.67(m,5H),2.14-1.89(m,4H),1.56(s,3H),1.49(s,3H),1.11(s,9H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.58(s,3F),-66.62(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值671.2542，实测值616.2(M-55)+；保留时间：4.53分钟(LC方法BB)。
步骤7：4-苄氧基-4-[5-[6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊-1-烯-3-醇(顺式二醇)
将6-[5-[1-苄氧基-2-叔丁氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(顺式二醇)(1.4g，2.0845mmol)于二氯甲烷(14mL)和TFA(10.360g，7mL，90.859mmol)中的溶液在室温下搅拌1小时。将反应在减压下浓缩，并将残余物用二氯甲烷(50mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过0％至30％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(40g柱)对残余物进行纯化，从而得到呈黄色油的4-苄氧基-4-[5-[6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊-1-烯-3-醇(顺式二醇)(1.05g，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),7.55-7.21(m,5H),6.24(s,1H),6.00(ddd,J＝17.1,10.3,6.6Hz,1H),5.75-5.65(m,1H),5.33-5.17(m,2H),4.99-4.74(m,5H),4.52-4.10(m,1H),2.05-1.82(m,4H),1.43(s,6H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.79(s,3F),-67.37(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值615.1916，实测值616.03(M+1)+；保留时间：4.07分钟(LC方法BB)。
步骤8：6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-醇(E/Z烯烃混合物，顺式二醇)
在250mL的烘干圆底烧瓶中，将4-苄氧基-4-[5-[6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5,5,5-三氟-戊-1-烯-3-醇(顺式二醇)的脱气溶液(150mg，0.2437mmol)在氮气气氛下加热至70℃。然后，在15分钟内将詹氏催化剂1B(30mg，0.0409mmol)分两份加入。将所得混合物加热至70℃并搅拌4小时。将混合物冷却，并且在减压下浓缩。在5％至90％乙腈/水(含0.1％甲酸)洗脱的50g C18柱上通过反相色谱法对残余物进行纯化，从而得到呈米白色固体的6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-醇(E/Z烯烃混合物，顺式二醇)(70mg，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.50-7.43(m,2H),7.40-7.28(m,3H),6.59(s,1H),6.03(d,J＝7.3Hz,1H),5.77-5.57(m,2H),4.85(d,J＝11.2Hz,1H),4.71(d,J＝11.0Hz,1H),4.42(t,J＝7.5Hz,1H),2.39-2.25(m,1H),2.14-1.95(m,3H),1.50(s,3H),1.39(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.43(s,3F),-66.71(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值587.1603，实测值588.2(M+1)+；保留时间：3.78分钟(LC方法BB)。
步骤9：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，顺式二醇)(化合物194)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，顺式二醇)(化合物195)
将6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-醇(E/Z烯烃混合物，顺式二醇)(46mg，0.0776mmol)于甲醇(2.5mL)中的溶液在氮气气氛和真空下按序吹扫三次。加入10wt.％钯碳(45mg，0.0211mmol)，然后在氢气氛和真空下按序吹扫两次，并且让反应在室温下在氢气气氛下搅拌17小时。将反应在氮气气氛下吹扫，并且将混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇洗涤。将混合物在减压下浓缩，并且通过0％至40％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法(24g柱)对残余物进行纯化，从而得到27mg的黄色固体。通过SFC(样品溶解18mg/mL于甲醇中)使用菲罗门Lux i-Cellulose(250X 21.2mm，5μM柱，使用10％ MeOH(0.1％二乙胺)/90％ CO2梯度，以75毫升/分钟的流动进行纯化，从而得到两种对映异构体：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈深黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，顺式二醇)(10.2mg，27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(s,1H),7.51(s,1H),5.91(s,2H),5.37(d,J＝8.6Hz,1H),4.65(s,1H),4.37(t,J＝9.9Hz,1H),1.84-1.62(m,2H),1.50-1.10(m,12H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.31(s,3F),-73.66(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：3.47分钟(LC方法BB)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈深黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，顺式二醇)(10.2mg，27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(s,1H),7.52(s,1H),5.91(br.s.,2H),5.37(d,J＝6.4Hz,1H),4.65(s,1H),4.44-4.31(m,1H),1.85-1.61(m,2H),1.49-1.11(m,12H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.32(s,3F),-73.66(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：3.47分钟(LC方法BB)。
实例108：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物196)的制备
步骤1：N-(4-羟基-1,1-二甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯
将4-氨基-4-甲基-戊-1-醇(8g，64.853mmol)溶解于THF(160mL)中，并且将碳酸氢钠(20g，238.08mmol)加入其中，随后加入碳酸氢二叔丁酯(21.5g，22.632mL，98.512mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后将反应用水(300mL)和EtOAc(400ml)稀释。将水层用EtOAc(2X 200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％丙酮/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈白色蜡，N-(4-羟基-1,1-二甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯(13.7g，92％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ4.47(s,1H),3.62(t,J＝6.5Hz,2H),1.82(s,1H),1.75–1.65(m,2H),1.61–1.48(m,2H),1.41(s,9H),1.24(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值217.1678，实测值218.4(M+1)+；保留时间：2.26分钟(LC方法G)。
步骤2：2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酸苄酯
在0℃下向2-(三氟甲基)丙-2-烯酸苄酯(25.5g，110.78mmol)于二噁烷(550mL)和水(110mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(47g，559.48mmol)。向此混合物中，在80分钟的剧烈搅拌下按份加入噁酮(68.5g，222.85mmol)。将反应在0℃下搅拌另外20分钟，然后温热至室温并搅拌另外1.5小时。然后将反应用EtOAc(500mL)和水(500mL)稀释，用EtOAc(2X 300mL)萃取。合并有机层，然后用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酸苄酯(24g，81％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.43–7.32(m,5H),5.49-5.10(m,2H),3.28–3.24(m,1H),3.23–3.18(m,1H)ppm。保留时间：3.1分钟(LC方法G)。
步骤3：2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-2-羟基-丙酸苄酯
向2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酸苄酯(5g，19.904mmol)于无水乙腈(21.5mL)中的溶液中加入N-(4-羟基-1,1-二甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯(5.05g，22.077mmol)和高氯酸镁(2.22g，9.946mmol)，并且将混合物在75℃下加热21小时。将反应冷却至室温，并用EtOAc(50mL)和水(25mL)稀释。将水层用EtOAc(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％丙酮/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-2-羟基-丙酸苄酯(1.5g，16％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.48–7.30(m,5H),5.51–4.90(m,2H),4.44(br.s,1H),4.05(br.s,1H),3.95(d,J＝9.8Hz,1H),3.72(d,J＝9.8Hz,1H),3.56–3.44(m,1H),3.43–3.34(m,1H),1.61–1.53(m,2H),1.52–1.45(m,2H),1.42(s,9H),1.22(d,J＝3.3Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值463.21817，实测值464.2(M+1)+；保留时间：3.81分钟(LC方法G)。
步骤4：2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸苄酯
在氩气下向烘干烧瓶装入NaH(730mg，60％w/w，18.252mmol)，用己烷(3X 10mL)洗涤，并且加入DMF(8mL)。将悬浮液冷却至0℃，(在2分钟内)逐滴加入DMF(2.5mL)中的2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-2-羟基-丙酸苄酯(3.1g，6.0196mmol)。将反应在相同温度下搅拌30分钟，然后加入溴甲基苯(2.3824g，1.7mL，13.651mmol)和TBAI(241mg，0.6525mmol)。将反应在0℃下搅拌7小时，然后缓慢温热至室温并搅拌13小时。将反应在0℃下用饱和氯化铵(25mL)淬灭并用乙酸乙酯(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(120g柱)使用0％至20％二乙醚/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸苄酯(1.7g，49％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ7.38–7.27(m,10H),5.31(s,2H),4.80(s,2H),4.35(s,1H),4.01(d,J＝10.5Hz,1H),3.90(d,J＝10.5Hz,1H),3.50–3.26(m,2H),1.61–1.55(m,2H),1.52–1.44(m,2H),1.41(s,9H),1.21(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值553.26514，实测值554.5(M+1)+；保留时间：3.64分钟(LC方法H)。
步骤5：2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸
向2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸苄酯(2.4g，4.3352mmol)于THF(7.2mL)中的溶液中加入LiOH(913mg，21.757mmol)，随后加入H2O(2.4mL)和MeOH(2.4mL)，并且将反应在室温下搅拌5小时。将混合物用TBME(50mL)稀释，用水(25mL)、HCl(26mL的1M，26mmol)、水(50mL)、盐水(2X 50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以产生呈浅黄色油的2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸(2.115g，100％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.43–7.29(m,5H),4.87(s,2H),4.71(s,1H),4.05(d,J＝10.3Hz,1H),3.97(d,J＝9.4Hz,1H),3.52(dd,J＝11.2,5.5Hz,2H),1.75–1.50(m,4H),1.43(s,9H),1.24(s,6H)ppm。酸性质子在质子NMR场中未被观察到。ESI-MS m/z计算值463.21817，实测值464.5(M+1)+；保留时间：6.37分钟(LC方法DD)。
步骤6：N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-(肼羰基)丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯
在室温下向2-苄氧基-2-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-3,3,3-三氟-丙酸(2g，4.0994mmol)于DMF(17.8mL)中的溶液中加入HATU(2.34g，6.1542mmol)和Et3N(1.2342g，1.7mL，12.197mmol)，并且将所得黄色溶液搅拌42分钟，冷却至0℃，然后在10分钟内逐滴加入肼(3.0630g，3mL，95.584mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌45分钟，并且温热至室温。将反应用NH4Cl溶液(40mL)淬灭，用EtOAc(3X 40mL)萃取，用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在45分钟内通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至30％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-(肼羰基)丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯(564.2mg，27％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.99(s,1H),7.43–7.31(m,5H),4.88–4.79(m,2H),4.42(s,1H),4.17(d,J＝10.9Hz,1H),4.08(d,J＝10.7Hz,1H),3.92(d,J＝4.5Hz,2H),3.56–3.49(m,2H),1.70(s,1H),1.66–1.61(m,1H),1.41(s,9H),1.24(d,J＝4.8Hz,6H)ppm。两个可交换的质子在1HNMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值477.24506，实测值478.6(M+1)+；保留时间：5.5分钟(LC方法DD)。
步骤7：N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-(肼羰基)丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯(564.2mg，1.1815mmol)于EtOAc(5mL)中的溶液中加入吡啶(547.68mg，0.56mL，6.9239mmol)、6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(313mg，1.2416mmol)和T3P(1.25g，1.9643mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应用NH4Cl(40mL)淬灭，并用EtOAc(3X 40mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至100％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈黄色玻璃状材料，N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，34％)。ESI-MS m/z计算值711.2339，实测值712.6(M+1)+；保留时间：6.87分钟(LC方法DD)。
步骤8：4-甲苯磺酸[6-[5-[1-苄氧基-1-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯
向N-[4-[2-苄氧基-3,3,3-三氟-2-[[[6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-羰基]氨基]氨基甲酰]丙氧基]-1,1-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯(142mg，0.1995mmol)于CH3CN(2.15mL)中的溶液中加入DIPEA(133.56mg，0.180mL，1.0334mmol)，然后加入对-TsCl(115mg，0.6032mmol)，并且将混合物在室温下搅拌50小时。将反应混合物用NH4Cl溶液(15mL)淬灭，并用EtOAc(3X 30mL)萃取。将合并的有机层用NaHCO3(20mL)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至30％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈浅黄色固体的4-甲苯磺酸[6-[5-[1-苄氧基-1-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯(124mg，70％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.60(s,1H),8.08(d,J＝8.4Hz,2H),7.41–7.27(m,7H),4.88(d,J＝10.8Hz,1H),4.82(d,J＝10.8Hz,1H),4.37(s,1H),4.35–4.28(m,2H),3.57(t,J＝6.2Hz,2H),2.39(s,3H),1.66–1.60(m,2H),1.59–1.52(m,2H),1.39(s,9H),1.20(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值847.2322，实测值848.6(M+1)+；保留时间：8.48分钟(LC方法DD)。
步骤9：4-甲苯磺酸[6-[5-[1-[(4-氨基-4-甲基-戊氧基)甲基]-1-苄氧基-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯
向4-甲苯磺酸[6-[5-[1-苄氧基-1-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-戊氧基]甲基]-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯(25mg，0.0295mmol)于DCM中的溶液中加入TFA(740mg，0.5mL，6.4899mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，用NaHCO3(20mL)淬灭，用盐水(20mL)洗涤，经K2CO3干燥并过滤，以产生4-甲苯磺酸[6-[5-[1-[(4-氨基-4-甲基-戊氧基)甲基]-1-苄氧基-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯(22mg，99％)，将其直接用于下一反应。ESI-MS m/z计算值747.1798，实测值748.5(M+1)+；保留时间：6.05分钟(LC方法DD)。
步骤10：6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯
向4-甲苯磺酸[6-[5-[1-[(4-氨基-4-甲基-戊氧基)甲基]-1-苄氧基-2,2,2-三氟-乙基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]酯(22mg，0.0294mmol)于DCM(20mL)中的溶液中加入DIPEA(74.200mg，0.100mL，0.5741mmol)，并且将混合物搅拌1小时。将挥发物在真空中去除，并且通过硅胶色谱法使用0％至20％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈琥珀色油的6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(8mg，45％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.52(d,J＝0.7Hz,1H),7.42–7.25(m,5H),5.56(s,1H),4.94(d,J＝11.3Hz,1H),4.82(d,J＝11.3Hz,1H),4.16(d,J＝10.1Hz,1H),4.08(dd,J＝10.1,1.2Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.45–3.36(m,1H),2.64–2.54(m,1H),2.37–2.27(m,1H),1.64–1.49(m,2H),1.40(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值575.16034，实测值576.4(M+1)+；保留时间：7.66分钟(LC方法DD)。
步骤11：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物196)
在氮气下向6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(10mg，0.0174mmol)于EtOH(3.1mL)中的溶液中加入Pd/C(7mg，10％w/w，0.0066mmol)，然后用氢气吹扫1分钟，并且在室温下在1atm氢气下搅拌5.5小时。将反应混合物用氮气回填并用EtOH(20mL)稀释，通过硅藻土垫过滤，并用EtOH(3X 20mL)冲洗，并将滤液浓缩。通过反相C18(15.5g柱)使用0％至95％乙腈/水(0.1％甲酸)的移动相对残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(7mg，76％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.47(s,1H),4.08(d,J＝9.5Hz,1H),3.87(d,J＝9.5Hz,1H),3.75-3.64(m,1H),3.61-3.49(m,1H),3.07-2.90(m,1H),2.46-2.31(m,1H),1.83-1.60(m,2H),1.39(s,3H),1.34(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-65.22(s,3F),-78.99(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值455.1392，实测值456.2(M+1)+；保留时间：3.19分钟(LC方法C)。
实例109：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物197)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物198)的制备
步骤1：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物197)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物198)
通过手性SFC使用由手性技术公司出售并且用8％ MeOH(+20mM NH3)/CO2洗脱的AS-H柱(250X 10mm，5μm粒度)对外消旋17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(10mg，0.02196mmol)进行纯化，产生了两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(3.3mg，65％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.27(s,1H),4.90(s,2H),4.43(s,1H),4.11(d,J＝9.4Hz,2H),3.85(dd,J＝9.5,1.2Hz,1H),3.67(ddd,J＝9.3,6.0,3.2Hz,1H),3.59(td,J＝9.6,9.1,2.8Hz,1H),3.03(ddd,J＝13.0,10.6,4.6Hz,1H),2.27(ddd,J＝13.3,10.5,6.1Hz,1H),1.83-1.71(m,1H),1.67(dtd,J＝11.1,6.0,2.7Hz,1H),1.39(s,3H),1.32(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.85分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-8,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.1mg，81％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.26(s,1H),4.89(s,2H),4.43(s,1H),4.11(d,J＝9.5Hz,2H),3.85(dd,J＝9.5,1.4Hz,1H),3.67(ddd,J＝9.3,6.1,3.2Hz,1H),3.59(td,J＝9.4,9.0,2.8Hz,1H),3.03(ddd,J＝13.2,10.7,4.6Hz,1H),2.27(ddd,J＝13.2,10.5,6.1Hz,1H),1.74(ddd,J＝10.4,6.7,3.3Hz,1H),1.66(ddd,J＝11.4,6.1,3.0Hz,1H),1.39(s,3H),1.32(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.85分钟(LC方法A)。
实例110：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物199)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物200)的制备
步骤1：2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙-1-醇
向2-氨基-2-甲基-丙-1-醇(20.548g，22mL，230.52mmol)于丙酮(250mL)和水(50mL)的混合物中的溶液中加入碳酸钾(64g，463.08mmol)，随后加入溴甲基苯(79.200g，55mL，463.07mmol)，并且将反应回流加热72小时。将反应冷却至室温并在真空中浓缩。将残余物在二氯甲烷(400mL)和水(500mL)之间分配，收集有机层，用水(500mL)、盐水(500mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至5％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈白色固体的2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙-1-醇(34g，55％)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(d,J＝6.8Hz,4H),7.17(t,J＝7.5Hz,4H),7.11-7.03(m,2H),4.43(t,J＝5.4Hz,1H),3.75(s,4H),3.37(d,J＝5.4Hz,2H),1.03(s,6H)ppm。ESI-MSm/z计算值269.178，实测值270.2(M+1)+；保留时间：1.51分钟(LC方法E)。
步骤2：N,N-二苄基-1-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基丙氧基]-2-甲基-丙-2-胺
在0℃下向2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙-1-醇(20g，74.244mmol)于二甲基甲酰胺(105mL)中的溶液中按份加入氢化钠(60％w/w)(4.1g，102.51mmol)。在0℃下搅拌30分钟后，向上述溶液中加入3-溴丙氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(24.046g，22mL，94.949mmol)。为了稀释混合物，加入二甲基甲酰胺(21mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用饱和氯化铵(200mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(2X 200mL)萃取，然后将合并的有机物用水(2X200mL)和盐水(200mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度对粗产物进行纯化，以产生呈无色油的N,N-二苄基-1-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基丙氧基]-2-甲基-丙-2-胺(16.4g，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.25(d,J＝7.1Hz,4H),7.16(t,J＝7.5Hz,4H),7.11-6.98(m,2H),3.76(s,4H),3.68(t,J＝6.4Hz,2H),3.38(t,J＝6.1Hz,2H),3.34(s,2H),1.69(quin,J＝6.2Hz,2H),1.06(s,6H),0.86(s,9H),0.03(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值441.3063，实测值442.3(M+1)+；保留时间：2.17分钟(LC方法E)。
步骤3：3-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]丙-1-醇
在氮气下在0℃下向N,N-二苄基-1-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基丙氧基]-2-甲基-丙-2-胺(16.3g，36.901mmol)于干四氢呋喃(163mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(THF中的1.0M)(60mL的1M，60mmol)。在0℃下搅拌1小时后，移除冷浴。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入饱和氯化铵水溶液(100mL)以淬灭反应。分离后，将水相用二乙醚(2X75mL)萃取。将合并的有机溶液用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并且通过硅胶色谱法使用5％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈无色油的3-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]丙-1-醇(8.25g，68％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(d,J＝7.1Hz,4H),7.17(t,J＝7.5Hz,4H),7.10-7.04(m,2H),4.38(t,J＝5.0Hz,1H),3.76(s,4H),3.53-3.45(m,2H),3.38(t,J＝6.2Hz,2H),3.34(s,2H),1.66(quin,J＝6.4Hz,2H),1.06(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值327.2198，实测值328.2(M+1)+；保留时间：1.55分钟(LC方法E)。
步骤4：N,N-二苄基-1-(3-溴丙氧基)-2-甲基-丙-2-胺
在0℃下向3-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]丙-1-醇(8.2g，25.041mmol)于无水二氯甲烷(250mL)中的搅拌溶液中相继加入四溴化碳(10g，30.154mmol)和三苯基膦(9g，34.314mmol)。将反应在0℃下搅拌3小时，并且然后在室温下过夜。将混合物在减压下蒸发，并且然后通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以产生呈无色油的N,N-二苄基-1-(3-溴丙氧基)-2-甲基-丙-2-胺(6.8g，70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(d,J＝7.1Hz,4H),7.17(t,J＝7.3Hz,4H),7.11-7.01(m,2H),3.76(s,4H),3.59(t,J＝6.5Hz,2H),3.43(t,J＝5.9Hz,2H),3.37(s,2H),2.03(quin,J＝6.2Hz,2H),1.07(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值389.1354，实测值390.2(M+1)+；保留时间：1.79分钟(LC方法E)。
步骤5：5-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯
在氮气下向配备有回流冷凝器的干5-mL双颈烧瓶装入镁(640mg，26.332mmol)和碘(166mg，0.654mmol)并在室温下搅拌平整10分钟。然后，逐滴加入二乙醚(7.5mL)中的N,N-二苄基-1-(3-溴丙氧基)-2-甲基-丙-2-胺(5.1g，13.065mmol)。将混合物在40℃下加热10分钟，并且然后在30℃下加热1小时。将所得混合物冷却至室温，然后加入二乙醚(7.5mL)。在-78℃下，将混合物逐滴加入到3,3,3-三氟-2-氧代-丙酸乙酯(2.4377g，1.9mL，14.332mmol)于四氢呋喃(51mL)中的冷却溶液中。将混合物在-78℃下搅拌10分钟。移除干冰-丙酮冷却浴。使反应混合物缓慢温热至室温并搅拌1小时。将反应混合物冷却至0℃，并且然后将其用饱和氯化铵溶液(250mL)淬灭。将所得混合物用二乙醚(2X 250mL)萃取。将合并的有机相用盐水(250mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度对粗残余物进行纯化，以产生呈无色油的5-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(3.23g，51％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(d,J＝7.3Hz,4H),7.16(t,J＝7.5Hz,4H),7.11-6.99(m,2H),6.81(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),3.76(s,4H),3.41-3.25(m,4H),2.08(td,J＝12.8,4.3Hz,1H),1.84(td,J＝12.8,4.4Hz,1H),1.75-1.60(m,1H),1.44-1.30(m,1H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H),1.05(s,6H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-76.77(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值481.244，实测值482.2(M+1)+；保留时间：1.83分钟(LC方法E)。
步骤6：5-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯
将5-[2-(二苄基氨基)-2-甲基-丙氧基]-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(3.4g，7.0606mmol)于乙醇(102mL)中的溶液用氮气脱气15分钟，并且然后加入20％氢氧化钯碳(500mg，20％w/w，0.7121mmol)。将氮气鼓泡到混合物中10分钟，然后将氢鼓泡到混合物中15分钟。将混合物在氢气球下在室温下搅拌18小时，并且然后过滤。将溶剂在减压下去除，以产生呈无色稠密油的5-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(2.09g，98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.43-4.29(m,2H),3.54-3.42(m,2H),3.16(s,2H),2.72-2.20(m,2H),2.20-2.04(m,2H),1.96(ddd,J＝13.9,10.6,5.3Hz,1H),1.78(ddt,J＝19.3,11.1,5.6Hz,1H),1.55-1.40(m,1H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H),1.10(s,3H),1.10(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-78.50(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值301.1501，实测值302.2(M+1)+；保留时间：1.44分钟(LC方法E)。
步骤7：6-[[2-(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.8g，6.3252mmol)和5-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-2-羟基-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(2.05g，6.8038mmol)于乙腈(25mL)中的室温搅拌溶液中逐滴加入二异丙基乙胺(4.0810g，5.5mL，31.576mmol)。将所得混合物在70℃下加热3小时。将溶剂通过在减压下蒸发去除，然后用乙酸乙酯(100mL)稀释，并且转移到具有150mL水的萃取漏斗中。将相分离，并且然后将水相用乙酸乙酯(2X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对粗产物进行纯化，以产生呈褐色油的6-[[2-(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.15g，91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),6.78(s,1H),6.45(s,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),3.94(s,3H),3.60-3.39(m,4H),2.03-1.87(m,1H),1.78-1.60(m,2H),1.43(s,6H),1.40-1.30(m,1H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-63.57(s,3F),-76.95(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值549.1546，实测值550.1(M+1)+；保留时间：2.29分钟(LC方法E)。
步骤8：6-[[2-(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下向6-[[2-(4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-4-羟基-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.1g，5.6423mmol)于DMF(31mL)中的溶液中按份加入氢化钠(460mg，11.501mmol)作为矿物油中的60％分散体，从而使温度在加入期间不上升超过10℃。在冰/冰水浴中搅拌30分钟后，逐滴加入溴甲基苯(1.5818g，1.1mL，9.2485mmol)，然后在2小时内使反应在冰浴中逐渐温热至室温。在0℃下加入作为固体的氯化铵(910mg，17.012mmol)。将混合物搅拌10分钟，然后加入MTBE/庚烷(3:1，100mL)，随后加入水(100mL)。将混合物转移到用MTBE/庚烷(3:1，100mL)和水(100mL)冲洗的萃取漏斗中。将有机层分离，并且将水相用MTBE/庚烷(3:1，2X 100mL)萃取。将合并的有机层用水(150mL)和盐水(2X 100mL)洗涤，并且经无水硫酸钠干燥。将混合物过滤，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈无色油的6-[[2-(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.25g，90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),7.44-7.26(m,5H),6.45(s,1H),4.70(d,J＝10.8Hz,1H),4.62-4.57(m,1H),4.29(q,J＝7.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.58-3.41(m,4H),2.11-1.97(m,2H),1.76-1.63(m,1H),1.62-1.49(m,1H),1.42(s,6H),1.23(t,J＝7.1Hz,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-63.54(s,3F),-70.73(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值639.2015，实测值640.2(M+1)+；保留时间：2.58分钟(LC方法E)。
步骤9：2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯
将6-[[2-(4-苄氧基-4-乙氧基羰基-5,5,5-三氟-戊氧基)-1,1-二甲基-乙基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.2g，5.0036mmol)溶解于甲醇(60mL)中，并且然后加入一水合肼(2.0580g，2mL，41.110mmol)。将所得混合物加热至80℃过夜。将溶剂在减压下去除，并且然后将混合物溶解于乙酸乙酯(50mL)中。将所得混合物用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以产生呈褐色稠密粗油的2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(3.15g，98％)。ESI-MS m/z计算值639.2128，实测值640.2(M+1)+；保留时间：2.29分钟。此材料被直接用于随后步骤(LC方法E)。
步骤10：2-苄氧基-5-[2-[[6-[[双(叔丁氧基羰基)氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯
向2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(3.1g，4.8472mmol)和叔丁基碳酸叔丁氧基羰基酯(2.65g，12.142mmol)于二氯甲烷(110mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(1.5582g，2.1mL，12.056mmol)，随后加入4-(二甲基氨基)吡啶(60mg，0.4911mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物溶解于二氯甲烷中，并且在减压下在硅胶上预吸附。通过硅胶色谱法使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，产生了呈褐色油的2-苄氧基-5-[2-[[6-[[双(叔丁氧基羰基)氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(2.16g，53％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.53-7.19(m,5H),6.47(br.s.,1H),4.75-4.67(m,1H),4.64-4.54(m,1H),4.28(q,J＝7.1Hz,2H),3.58-3.39(m,4H),2.13-1.97(m,2H),1.76-1.52(m,3H),1.48(s,18H),1.41(s,6H),1.24-1.21(m,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-63.15(br.s.,3F),-70.64至-70.77(m,3F)ppm；ESI-MS m/z计算值839.3176，实测值784.3(M-55)+；保留时间：4.62分钟(LC方法BB)。
步骤11：2-苄氧基-5-[2-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸
将氢氧化钠(300mg，7.5005mmol)于水(10mL)中的溶液加入到2-苄氧基-5-[2-[[6-[[双(叔丁氧基羰基)氨基]氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸乙酯(2.1g，2.4596mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中。将反应在50℃下加热过夜。将反应浓缩以去除甲醇，并将粗材料稀释到水(75mL)中，并且然后用庚烷(75mL)和MTBE(75mL)洗涤。将水溶液用3N盐酸水溶液酸化至pH＝2。将水性混合物用二氯甲烷(4X 50mL)萃取，并将合并的有机层经硫酸钠干燥。将溶液过滤并浓缩，以得到呈褐色油的2-苄氧基-5-[2-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(1.58g，90％)。ESI-MS m/z计算值711.2339，实测值656.1(M-55)+；保留时间：2.23分钟(LC方法E)。
步骤12：2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)
将2-苄氧基-5-[2-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(350mg，0.4918mmol)溶解于二噁烷(9mL)中，并且然后在室温下逐滴加入盐酸(3.5mL的二噁烷中的4M，14mmol)。将所得混合物在室温下搅拌48小时。将混合物在真空下浓缩，以得到呈粗淡黄色泡沫的2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)(318mg，100％)。ESI-MS m/z计算值611.1815，实测值612.0(M+1)+；保留时间：1.88分钟(LC方法Z)。将此材料直接用于下一步。
步骤13：9-苄氧基-3,3-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-5-氧杂-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮
向2-苄氧基-5-[2-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-2-甲基-丙氧基]-2-(三氟甲基)戊酸(盐酸盐)(360mg，0.5556mmol)于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)中的室温搅拌溶液中加入BOP(300mg，0.6783mmol)和HOBt(115mg，0.8511mmol)，随后加入二异丙基乙胺(371mg，0.5mL，2.8706mmol)。将所得混合物在室温下搅拌24小时。将溶剂在50℃下在真空下去除。将残余物干负载于硅胶上，并且通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度进行纯化，以产生呈澄清稠密油的9-苄氧基-3,3-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-5-氧杂-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮(92mg，28％)。ESI-MS m/z计算值593.1709，实测值594.0(M+1)+；保留时间：1.94分钟(LC方法Z)。
步骤14：6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯
在室温下向9-苄氧基-3,3-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-5-氧杂-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮(90mg，0.1516mmol)和N,N-二异丙基乙胺(148.40mg，200μL，1.1482mmol)于乙腈(25mL)中的溶液中加入4-甲苯磺酰氯(40mg，0.2098mmol)。然后在此温度下将混合物加热至70℃并搅拌2小时。然后将反应混合物冷却并通过在减压下蒸发浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(25mL)中。将此溶液用5％碳酸氢钠水溶液(2X 25mL)和盐水(25mL)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥并过滤。将挥发物通过在减压下蒸发去除。将残余物干负载于硅胶，并且通过硅胶色谱法使用0％至15％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到呈澄清稠密油的6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(47mg，54％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.34-7.18(m,5H),5.39(br.s.,1H),5.13(d,J＝11.0Hz,1H),4.89(d,J＝11.2Hz,1H),4.01(d,J＝8.1Hz,1H),3.56-3.44(m,3H),2.56-2.32(m,2H),1.61-1.51(m,2H),1.51(s,3H),1.46(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-63.91(s,3F),-73.26(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值575.1603，实测值576.0(M+1)+；保留时间：2.14分钟(LC方法Z)。
步骤15：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(52mg，0.0904mmol)溶解于甲醇(3mL)中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(35mg，5％w/w，0.0164mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后将混合物在室温下在氢气下搅拌过夜。将反应混合物使用用甲醇(10mL)洗涤的注射器微型过滤器进行过滤，并将所得溶液在减压下浓缩。将残余物再次在甲醇(3mL)中溶解。将氮气鼓泡到混合物中5分钟，并且然后加入钯碳(35mg，5％w/w，0.0164mmol)。然后将氢气用气球鼓泡到混合物中5分钟，并且然后将反应混合物在氢气下在室温下搅拌6小时。将反应混合物使用用甲醇(5mL)洗涤的注射器微型过滤器进行过滤，并将所得溶液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，随后通过反相色谱法(用0％至70％乙腈/0.1％NH4HCO3水溶液洗脱)进行纯化，以产生呈黄色油的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(25mg，60％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.49(s,1H),4.66(d,J＝7.8Hz,1H),3.75-3.57(m,2H),3.38(d,J＝7.8Hz,1H),2.70-2.55(m,1H),2.20(td,J＝13.0,5.6Hz,1H),1.90-1.76(m,1H),1.75-1.64(m,1H),1.54(s,3H),1.41(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,CD3OD)δ-65.19(s,3F),-81.21(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值455.1392，实测值456.1(M+1)+；保留时间：3.52分钟(LC方法BB)。
步骤16：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物199)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物200)
通过手性正常相SFC使用在50℃下用8％ MeOH(+20mM NH3)/CO2洗脱的ChiralPakAS柱(250X 10mm；5μm)，以10毫升/分钟流动对外消旋17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(13.0mg，0.02855mmol)进行纯化(样品的浓度为甲醇中的20.6mg/mL，注射体积＝70μL，出口压为152bar，并且检测波长为229nm)，从而得到两种单一对映异构体的分离：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(4.6mg，70％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.27(s,1H),4.81(s,2H),4.67(d,J＝7.8Hz,1H),4.38(s,1H),3.95(s,1H),3.71(ddd,J＝12.2,9.5,4.4Hz,1H),3.54(dt,J＝12.3,3.8Hz,1H),3.20(d,J＝7.8Hz,1H),2.76-2.64(m,1H),2.27-2.15(m,1H),1.73(ddt,J＝14.9,10.3,4.5Hz,2H),1.58(s,3H),1.40(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.63分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-10,19-二氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.2mg，64％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.27(s,1H),4.81(s,2H),4.66(d,J＝7.8Hz,1H),4.38(s,1H),3.92(s,1H),3.71(ddd,J＝12.3,9.8,4.3Hz,1H),3.54(dt,J＝12.3,3.8Hz,1H),3.20(d,J＝7.8Hz,1H),2.76-2.64(m,1H),2.27-2.15(m,1H),1.80-1.68(m,2H),1.58(s,3H),1.40(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值455.13922，实测值456.2(M+1)+；保留时间：1.64分钟(LC方法A)。
实例111：(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物201)和(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物202)的制备
步骤1：(E)-2-甲基-N-(嘧啶-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺
将嘧啶-2-甲醛(10g，92.509mmol)、2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(11.3g，93.234mmol)和硫酸氢钾(13g，95.470mmol)于甲苯(50mL)中的混合物在50℃下加热过夜。在倾析溶液之后，将固体残余物用二氯甲烷洗涤3次，将洗涤液与倾析溶液合并，并将溶剂在真空中蒸发。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/二氯甲烷梯度对粗混合物进行纯化，以得到呈米白色固体的(E)-2-甲基-N-(嘧啶-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(7.85g，40％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(d,J＝4.9Hz,2H),8.72(s,1H),7.38(t,J＝4.9Hz,1H),1.30(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值211.0779，实测值212.2(M+1)+；保留时间：1.31分钟(LC方法Z)。
步骤2：2-甲基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺
在-78℃下向(E)-2-甲基-N-(嘧啶-2-基亚甲基)丙烷-2-亚磺酰胺(2g，9.4659mmol)于四氢呋喃(40mL)中的冷却溶液中逐滴加入庚烷中的三甲基铝(14mL的2M，28mmol)。将混合物在-78℃下搅拌10分钟，并且然后逐滴加入烯丙基(溴)镁(14mL的二乙醚中的1M，14mmol)。将反应保持在-78℃下，直到通过HPLC分析观察到起始材料的完全消耗。将反应在-78℃下用饱和氯化铵水溶液(150mL)缓慢淬灭。移除冷浴，并且然后将混合物然后在室温下剧烈搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯(2X 100mL)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并将溶剂在减压下去除。通过硅胶色谱法使用0％至5％甲醇/二氯甲烷梯度对粗残余物进行纯化，以得到呈淡黄色油的2-甲基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.67g，70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,J＝4.9Hz,2H),7.18(t,J＝4.9Hz,1H),5.74(ddt,J＝17.0,10.3,7.0Hz,1H),5.10-4.99(m,2H),4.96(br d,J＝7.3Hz,1H),4.72-4.65(m,1H),2.84-2.59(m,2H),1.29(s,9H)ppm。ESI-MS m/z计算值253.1249，实测值254.2(M+1)+；保留时间：1.49分钟(LC方法Z)。
步骤3：1-嘧啶-2-基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)
在室温下向2-甲基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)丙烷-2-亚磺酰胺(2g，7.8938mmol)于甲醇(19mL)中的溶液中逐滴加入盐酸(19mL的二乙醚中的2M，38mmol)，并且然后将所得混合物在室温下搅拌1小时。将混合物冷却至0℃，然后加入二乙醚(75mL)，并将所得的粉红色悬浮液在此温度下搅拌30分钟。将所得沉淀过滤并用二乙醚(50mL)洗涤，以得到呈浅粉色粉末的1-嘧啶-2-基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(1.45g，96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.89(d,J＝5.1Hz,2H),8.87-8.74(m,3H),7.53(t,J＝4.9Hz,1H),5.71(ddt,J＝17.0,10.1,7.1Hz,1H),5.08-4.96(m,2H),4.53-4.37(m,1H),2.87-2.66(m,2H)ppm。ESI-MSm/z计算值149.0953，实测值150.1(M+1)+；保留时间：1.74分钟(LC方法BB)。
步骤4：3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
在反应小瓶中，将6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(270mg，0.9488mmol)与乙腈(7.8mL)中的1-嘧啶-2-基丁-3-烯-1-胺(盐酸盐)(253mg，1.139mmol)和DIEA(785μL，4.507mmol)混合。将反应在80℃下加热1小时，然后将溶剂在真空下去除。将残余物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液(3X)洗涤，随后用盐水洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过硅胶色谱法使用10％至60％乙酸乙酯/己烷梯度对粗材料进行纯化，从而得到灰色固体。将此灰色固体溶解于THF(4.8mL)、MeOH(4.8mL)和水(2.4mL)中，并且加入LiOH(340.8mg，14.23mmol)。将反应在室温下搅拌2小时，然后蒸发至干燥。将固体残余物用1N HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干燥。通过由乙酸乙酯/己烷重结晶对粗材料进行纯化，以产生呈棕黄色固体的3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(203mg，47％)。ESI-MS m/z计算值383.08414，实测值384.2(M+1)+；保留时间：0.55分钟(LC方法S)。
步骤5：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
将3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(202mg，0.4691mmol)和(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰肼(184mg，0.5886mmol)于DMF(5mL)中的溶液在冰浴中冷却，并且用HATU(255mg，0.6706mmol)和DIPEA(140.98mg，0.19mL，1.0908mmol)相继处理。5分钟后移除冰浴，并且将反应在室温下搅拌19小时。将反应转移到具有水(50mL)的125mL分液漏斗中，并将水混合物用乙酸乙酯(3X 25mL)萃取。将合并的有机层用水(2X 25mL)洗涤，然后用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈黄色油以及N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼的非对映异构体的约1:1混合物(215mg，63％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.57(d,J＝17.1Hz,1H),9.41-9.16(m,1H),8.73(dd,J＝4.9,2.7Hz,2H),8.21(d,J＝6.6Hz,1H),7.48-7.31(m,5H),7.23(t,J＝4.9Hz,1H),7.03-6.86(m,1H),5.84(ddt,J＝16.9,10.4,6.1Hz,1H),5.70(ddt,J＝17.3,9.8,7.2Hz,1H),5.57-5.43(m,1H),5.16-5.00(m,4H),4.88-4.81(m,1H),4.77-4.71(m,1H),2.99-2.86(m,1H),2.86-2.76(m,1H),2.51-2.35(m,1H),2.32-2.16(m,3H)ppm。保留时间：2.4分钟(LC方法E)。
步骤6：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-3-硝基-6-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基氨基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(215mg，0.2969mmol)和DIPEA(133.56mg，0.18mL，1.0334mmol)于乙腈(5mL)中的溶液在设置为60℃的油浴中加热，并且用甲苯磺酰氯(70mg，0.3672mmol)处理。90分钟后，将反应冷却至室温，并在减压下浓缩，以去除大部分乙腈。转移到含有饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)的125mL分液漏斗中，并将水层用乙酸乙酯(2X40mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈稠密琥珀色油和非对映异构体的约1:1混合物，6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(176mg，85％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(d,J＝4.9Hz,2H),8.60(s,1H),7.66(br.s.,1H),7.45-7.28(m,5H),7.25(td,J＝4.9,1.0Hz,1H),5.88-5.76(m,1H),5.72-5.65(m,1H),5.58(ddtd,J＝17.1,9.9,7.4,2.3Hz,1H),5.10(dt,J＝17.1,1.5Hz,1H),5.05-4.92(m,3H),4.83(dd,J＝10.6,6.2Hz,1H),4.67(dd,J＝10.5,4.9Hz,1H),3.02-2.92(m,1H),2.85-2.75(m,1H),2.59-2.22(m,4H)ppm。ESI-MS m/z计算值649.1872，实测值650.2(M+1)+；保留时间：4.16分钟(LC方法BB)。
步骤7：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)
向配备有回流冷凝器(顶部具有与玻璃鼓泡器的盆相连接的接头)的100-mL三颈烧瓶装入二氯乙烷(40mL)，并且用氮气吹扫，同时在设置为50℃的油浴中加热45至60分钟。加入詹氏催化剂1B(22mg，0.0300mmol)，搅拌5分钟，然后在约5分钟的时间段内加入6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-N-(1-嘧啶-2-基丁-3-烯基)-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(84mg，0.1199mmol)于二氯乙烷(5mL)中的溶液。将加热增加到83℃(油浴温度)，并且将反应搅拌16小时，同时继续用氮气鼓泡。冷却至室温后，将反应混合物用DMSO(3滴)淬灭，并在减压下浓缩。将残余物直接吸附在硅胶上，并且通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到呈琥珀色油的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(39mg，49％)。ESI-MSm/z计算值621.1559，实测值622.2(M+1)+；保留时间：4.0分钟(LC方法BB)。
步骤8：(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
将(6R)-6-苄氧基-17-硝基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯(E/Z混合物)(32mg，0.0477mmol)溶解于无水甲醇(3mL)中。将氮气鼓泡到混合物中5分钟，并且然后加入钯碳(35mg，5％w/w，0.0164mmol)。然后将氢气用气球鼓泡到混合物中5分钟，并且将反应混合物在氢气下在室温下搅拌过夜。将混合物使用了用甲醇(2X 0.4mL)冲洗的尼龙0.45微米过滤器(注射器上)进行过滤。将滤液通过在减压下蒸发浓缩，以得到呈暗黄色油的(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(30mg，86％，69％纯度)。ESI-MS m/z计算值503.1504，实测值503.9(M+1)+；保留时间：3.13分钟(LC方法C)。
步骤9：(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物201)和(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物202)
将外消旋(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(45mg，0.0614mmol，69％纯度)直接吸附在硅胶上，并且通过硅胶色谱法使用0％至50％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，以得到富集至89％纯度的28mg的材料。然后将此材料吸附在硅胶上，并且通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度再次纯化，以得到富集至95.9％纯度的19.5mg材料。在40℃下使此非对映异构体混合物经受SFC分离使用用20％ MeOH/CO2洗脱的Lux纤维素1柱，(150X 21.2mm，5μm粒度)，流速：75毫升/分钟，注射体积：1500μL，压力：100bar，波长：210nm，产生两种单一对映异构体产物：
待洗脱的第一对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(4mg，12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(d,J＝4.9Hz,2H),7.62(s,1H),7.53(s,1H),7.44(t,J＝5.0Hz,1H),6.22(d,J＝5.4Hz,1H),6.04(s,2H),5.02-4.95(m,1H),2.31-2.22(m,1H),2.13-2.02(m,1H),1.96-1.85(m,1H),1.71-1.31(m,7H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.80(s,3F),-76.54(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值503.1504，实测值504.2(M+1)+；保留时间：3.17分钟(LC方法C)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-嘧啶-2-基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(3.5mg，11％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82(d,J＝4.9Hz,2H),7.63(s,1H),7.53(s,1H),7.44(t,J＝4.9Hz,1H),6.27(d,J＝4.4Hz,1H),6.06(s,2H),4.91-4.84(m,1H),2.60-2.50(m,1H),2.24-2.13(m,1H),2.12-1.99(m,1H),1.74-1.47(m,5H),1.46-1.25(m,2H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.81(s,3F),-79.02(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值503.1504，实测值504.2(M+1)+；保留时间：3.12分钟(LC方法C)。
实例112：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体1)(化合物203)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体2)(化合物204)的制备
步骤1：N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯
在10分钟内向2-氨基-2-甲基-丙-1-醇(13.45g，16mL，135.8mmol)和三乙胺(13.794g，19mL，136.32mmol)于二氯甲烷(70mL)中的溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(27g，123.71mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且用10％柠檬酸水溶液(200mL)稀释，随后用乙酸乙酯(2X 100mL)萃取。将有机层用水(150mL)和盐水(150mL)洗涤，然后经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈白色固体的N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯(19.5g，83％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.71(brs,1H),4.27-3.96(m,1H),3.57(d,J＝5.4Hz,2H),1.43(s,9H),1.25(s,6H)ppm。
步骤2：N-(1,1-二甲基-2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)氨基甲酸叔丁酯(5g，26.42mmol)于DMSO(80mL)和Et3N(8.02g，11.05mL，79.26mmol)中的溶液用三氧化硫吡啶复合物(12.62g，6.573mL，79.26mmol)于DMSO(66mL)中的溶液进行处理。然后使反应混合物在室温下搅拌1小时，然后倒入Et2O中。将有机物用10％柠檬酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤。然后将有机物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈固体的N-(1,1-二甲基-2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯(6.0269g)，将其直接用于下一步。
步骤3：N-(2-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(1,1-二甲基-2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯的溶液(1g，5.3409mmol)冷却至-78℃，并且在5分钟内用烯丙基氯化镁(5.4mL的2M，10.8mmol)逐滴处理，并且然后在此温度下保持另外5分钟。移除干冰浴，并将烧瓶置于冰水浴(0℃至5℃)中。将溶液在此温度下搅拌1小时，并且然后倒入冰(100g)上NH4Cl水溶液(100mL)的混合物中。将混合物用EtOAc(5X 75mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在10分钟内通过硅胶色谱法(80g柱)使用0％至20％EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色固体的N-(2-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(980mg，80％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ6.00–5.89(m,1H),5.15–5.08(m,2H),4.67(s,1H),3.84(s,1H),3.57(d,J＝10.1Hz,1H),2.39–2.30(m,1H),2.11–2.01(m,1H),1.44(s,9H),1.37(s,3H),1.23(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值229.1678，实测值230.7(M+1)+；保留时间：4.15分钟(LC方法DD)。
步骤4：N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯
在氩气下向烧瓶中装入矿物油中的NaH(2.12g，60％w/w，53.005mmol)，并用己烷(55mL)洗涤，并且通过针和注射器将上清液层倾析(53mL)。将固体用THF(23mL)处理，并且冷却至0℃。然后在0℃下在35分钟内将浆液用N-(2-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(4.06g，17.705mmol)于THF(26mL)中的溶液逐滴处理，并且搅拌另外30分钟。然后在10分钟内将反应用苄基溴(7.4776g，5.2mL，43.72mmol)逐滴处理，随后用TBAI(654mg，1.7706mmol)一份处理，并且在0℃下搅拌另外3小时。移除冰浴，并在90分钟内将反应温热至室温，并且搅拌另外1小时。将混合物用Et2O(50mL)稀释，并且将所得混合物(5mL份)小心加入到饱和NH4Cl水溶液(300mL)于冰(300g)中的搅拌混合物中。将反应用EtOAc(400mL)稀释，并且将层分离。将水相用EtOAc(4X 150mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用100％己烷至5％乙酸乙酯/己烷梯度对粗残余物进行纯化，以产生呈无色液体的N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(4.47g，78％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.36–7.31(m,4H),7.31–7.26(m,1H),5.99–5.89(m,1H),5.13(dq,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.06–5.02(m,1H),4.71–4.64(m,2H),4.54(d,J＝11.1Hz,1H),3.95–3.76(m,1H),2.44–2.35(m,1H),2.30–2.23(m,1H),1.43(s,9H),1.31(d,J＝9.4Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值319.2147，实测值320.4(M+1)+；保留时间：7.06分钟(LC方法DD)。
步骤5：3-苄氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺(三氟乙酸盐)
在氮气下将N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.2522mmol)于DCM(7mL)中的溶液冷却至0℃，并且在5分钟内用TFA(888mg，0.6mL，7.7879mmol)于DCM(4mL)中的冷冻(0℃至5℃)溶液逐滴处理。移除浴，并将反应温热至室温150分钟。将反应在室温下浓缩，并在真空下干燥5天，以得到呈无色脆性固体的3-苄氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺(三氟乙酸盐)(431mg，100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.81(s,3H),7.42–7.32(m,4H),7.34–7.26(m,1H),5.96–5.84(m,1H),5.21–5.12(m,1H),5.07(d,J＝9.8Hz,1H),4.64(d,J＝11.2Hz,1H),4.55(d,J＝11.3Hz,1H),3.50(dd,J＝7.4,4.0Hz,1H),2.48–2.42(m,1H),2.30–2.23(m,1H),1.24(d,J＝19.7Hz,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值219.1623，实测值220.6(M+1)+；保留时间：3.18分钟(LC方法DD)。
步骤6：6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在氩气下向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(4.65g，16.34mmol)和3-苄氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺(三氟乙酸盐)(6.11g，18.329mmol)于DCM(43mL)中的溶液中在室温下加入Et3N(6.534g，9mL，64.572mmol)，并且将反应搅拌160分钟。在3分钟内将反应用另外的Et3N(3.993g，5.5mL，39.46mmol)逐滴处理，并且在40℃下加热，然后在30℃下加热18小时。将反应用DCM(150ml)稀释并用盐水(20ml)洗涤。将盐水层用DCM(30mL)萃取。将有机层合并，并且经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至5％EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈稠密黄色油的6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(6.18g，76％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.40(s,1H),7.34–7.25(m,5H),6.27(s,1H),5.98–5.85(m,1H),5.19–5.11(m,1H),5.08(d,J＝10.3Hz,1H),4.76(d,J＝11.3Hz,1H),4.49(d,J＝11.4Hz,1H),4.02(s,3H),3.81–3.75(m,1H),2.55–2.46(m,1H),2.42–2.32(m,1H),1.53(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1668，实测值468.2(M+1)+；保留时间：7.64分钟(LC方法DD)。
步骤7：6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(6.18g，12.428mmol)于THF(30mL)中的溶液中加入氢氧化锂(一水合物)(5.2g，123.92mmol)，随后加入水(6mL)和MeOH(2.8mL)。然后将反应混合物在30℃下在油浴中搅拌5小时。然后将反应用MTBE(300mL)稀释，用水(200mL)和1M NaOH(100mL)洗涤。将有机层用盐水(200mL)进一步洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以产生呈淡黄色泡沫的6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(5.5g，93％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.36–7.24(m,5H),6.00(s,1H),5.97–5.85(m,1H),5.14(dd,J＝17.1,2.0Hz,1H),5.03(d,J＝10.1Hz,1H),4.70(d,J＝11.4Hz,1H),4.49(d,J＝11.4Hz,1H),3.91(dd,J＝7.1,3.9Hz,1H),3.30(s,1H),2.30(dt,J＝14.7,7.2Hz,1H),1.49(s,6H)ppm。一个可交换的质子在NMR中未被观察到。ESI-MS m/z计算值453.15115，实测值454.4(M+1)+；保留时间：6.61分钟(LC方法DD)。
步骤8：6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(349mg，0.7697mmol)和2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(222mg，0.7701mmol)于干EtOAc(2.8mL)中的溶液中加入丙基膦酸酐溶液(686mg，EtOAc中的50％，1.078mmol)，然后加入吡啶(273.84mg，0.280mL，3.462mmol)，并且将混合物在室温下搅拌6小时。将反应用EtOAc(20mL)稀释，用NH4Cl(20mL)淬灭，并用EtOAc(2X 20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2X 40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至15％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈白色泡沫的6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(385mg，68％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.23–9.16(m,1H),8.58(dd,J＝28.2,5.4Hz,1H),8.24(d,J＝1.5Hz,1H),7.44–7.34(m,5H),7.28–7.26(m,1H),7.26–7.20(m,3H),6.09(s,1H),6.00–5.77(m,2H),5.40–5.25(m,2H),5.14(dt,J＝17.1,1.6Hz,1H),5.07(d,J＝10.1Hz,1H),4.85(s,2H),4.75(d,J＝11.6Hz,1H),4.51(d,J＝11.6Hz,1H),3.85(dd,J＝6.6,4.3Hz,1H),3.21–3.11(m,1H),3.02(ddd,J＝15.3,7.8,3.5Hz,1H),2.50(t,J＝10.6Hz,1H),2.38(dt,J＝14.6,7.1Hz,1H),1.54–1.50(m,6H)ppm。一个质子在NMR中未被观察到或被溶剂屏蔽。ESI-MS m/z计算值723.24915，实测值724.6(M+1)+；保留时间：7.9分钟(LC方法DD)。
步骤9：N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向6-[(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基]-N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(385mg，0.5267mmol)于CH3CN(5mL)中的溶液中加入对-TsCl(115mg，0.6032mmol)，然后加入DIPEA(204.05mg，0.275mL，1.5788mmol)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。将反应用EtOAc(30mL)稀释，然后用NH4Cl(30mL)和盐水(30mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至100％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈浅绿色油的N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(293mg，78％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.44(d,J＝2.6Hz,1H),7.41–7.25(m,8H),7.27–7.19(m,2H),6.33(d,J＝7.1Hz,1H),6.02–5.84(m,2H),5.32–5.18(m,2H),5.18–5.03(m,2H),4.78(ddd,J＝34.0,11.0,1.9Hz,2H),4.68–4.60(m,1H),4.46(dd,J＝11.4,4.1Hz,1H),3.76(dt,J＝6.5,4.0Hz,1H),3.30–3.15(m,2H),2.54–2.44(m,1H),2.37(dt,J＝14.6,7.1Hz,1H),1.49(s,6H)ppm。ESI-MS m/z计算值705.2386，实测值706.4(M+1)+；保留时间：8.79分钟(LC方法DD)。
步骤10：(6R)-6,11-二苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
将N-(2-苄氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(100mg，0.1417mmol)于1,2-二氯乙烷(60mL)中的溶液通过用氩气喷射进行脱气，并且然后加入詹氏催化剂1B(12.491mg，0.017mmol)，并且进一步脱气1小时。将混合物在70℃下加热18小时。将反应冷却至室温并浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至10％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈白色泡沫的(6R)-6,11-二苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(77mg，76％)。ESI-MS m/z计算值677.2073，实测值678.5(M+1)+；保留时间：8.16分钟(LC方法DD)。
步骤11：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体1)(化合物203)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体2)(化合物204)
向(6R)-6,11-二苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(69mg，0.0967mmol)于EtOH(3.5mL)中的溶液中在N2下加入Pd/C(7mg，10％w/w，0.0066mmol)，并且将混合物搅拌15分钟。将反应容器用氢气吹扫，并且在室温下使用氢气球在1atm的氢气下搅拌36小时。加入另外的Pd/C(7mg，10％w/w，0.0066mmol)，并且将混合物在室温下搅拌另外48小时。将混合物用EtOH(14mL)稀释，通过硅藻土塞过滤，并且在N2下向滤液加入Pd/C(39mg，10％w/w，0.0366mmol)，然后加入到用氢气吹扫的反应容器中，并且在1atm的氢气(气球)下在室温下搅拌1.5小时。然后将反应通过硅藻土垫过滤，并且将滤液浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％ EtOAc/n-戊烷梯度对残余物进行纯化，产生了两种非对映异构体产物
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色玻璃状材料的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体1)(11.2mg，49％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.50(d,J＝0.8Hz,1H),5.79(dd,J＝10.4,2.0Hz,1H),2.61–2.49(m,1H),2.08–1.97(m,1H),1.83–1.68(m,4H),1.65–1.58(m,1H),1.52(s,3H),1.46–1.37(m,1H),1.23(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.5(M+1)+；保留时间：2.33分钟(LC方法H)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色泡沫的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,11-二醇(对映异构体2)(10mg，44％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.49(s,1H),5.83–5.77(m,1H),2.52(td,J＝13.8,2.4Hz,1H),1.98–1.85(m,2H),1.81–1.72(m,2H),1.56(s,3H),1.53–1.36(m,3H),1.22(s,3H)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.5(M+1)+；保留时间：2.62分钟(LC方法H)。
实例113：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(化合物205)和(6R)-17-(甲基氨基)-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(化合物206)的制备
步骤1：2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑
将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)己-5-烯酰]-6-羟基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(30g，42.507mmol)溶解于磷酰三氯(60mL)和乙腈(60mL)的混合物中。然后加入二甲基甲酰胺(30mL)，并将混合物在70℃下加热1小时。然后将混合物在介于20℃与40℃之间的1M碳酸氢钾水溶液(900mL)中淬灭，在淬灭期间监测pH，并使用氢氧化钠(6M溶液，总共240mL)进行调整。然后将水相用乙酸乙酯(2X 450mL)萃取，并且将有机相合并，经硫酸钠(100g)干燥，过滤并蒸发。然后将残余物溶解于乙酸乙酯中，并且使用硅(100g)进行干燥包装。将干燥包装的硅胶加入到硅胶上(500g，干燥基)，并且然后用庚烷(2L)洗脱，随后用庚烷(4L)中的10％甲基叔丁基醚洗脱，然后用庚烷(2L)中的20％甲基叔丁基醚洗脱，并且最终用乙酸乙酯(2L)洗脱。将含有纯产物的部分蒸发并合并，以得到呈淡黄色油的2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(12.5g，54％)。ESI-MS m/z计算值536.0686，实测值537.0(M+1)+；保留时间：3.898分钟(LC方法C)。
步骤2：N-(4-烯丙基四氢吡喃-4-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(222mg，0.4136mmol)、4-烯丙基四氢吡喃-4-胺(92mg，0.6515mmol)和DIPEA(148.40mg，0.2mL，1.1482mmol)于乙腈(5mL)中的溶液在设置为65℃的油浴中搅拌约4小时。一旦冷却，就将反应混合物转移到具有饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)的125mL分液漏斗中，并将水层用乙酸乙酯(3X 25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至25％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到暗红色含油残余物。通过反相C18色谱法(5％至80％乙腈/水(+10mM碳酸氢铵/氢氧化铵缓冲液，pH＝10)洗脱)对此材料进一步纯化，以得到呈橙色油的N-(4-烯丙基四氢吡喃-4-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(60.4mg，23％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(s,1H),7.44-7.29(m,5H),5.87-5.74(m,1H),5.67(ddt,J＝17.1,9.9,7.4Hz,1H),5.43(br.s.,1H),5.13-4.95(m,4H),4.84(d,J＝10.5Hz,1H),4.66(d,J＝10.5Hz,1H),3.80(dt,J＝11.9,3.6Hz,2H),3.65-3.53(m,2H),2.77(d,J＝7.3Hz,2H),2.58-2.16(m,6H),1.93-1.81(m,2H)ppm。19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.52(s,3F),-73.15(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值641.2073，实测值642.2(M+1)+；保留时间：4.14分钟(LC方法BB)。
步骤3：(6'R)-6'-(苄氧基)-17'-硝基-6',15'-双(三氟甲基)-19'-氧杂-3',4',13',18'-四氮杂螺[噁烷-4,12'-三环[12.3.1.12,5]十九烷]-1'(18'),2',4',9',14',16'-六烯(E/Z混合物)
将N-(4-烯丙基四氢吡喃-4-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(60.4mg，0.0940mmol)于二氯乙烷(30mL)中的溶液用氮气鼓泡60分钟。然后将溶液置于设置为60℃的油浴中，并且加入第一部分的詹氏催化剂1B(4.6mg，0.0063mmol)。45分钟后，加入第二批次的詹氏催化剂1B(4.5mg，0.0061mmol)，并且持续加热另外3小时。一旦冷却至室温，就将反应用DMSO(2滴)淬灭，将挥发物在减压下去除，并且将残余物直接吸附在硅胶上。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈米白色固体的(6'R)-6'-(苄氧基)-17'-硝基-6',15'-双(三氟甲基)-19'-氧杂-3',4',13',18'-四氮杂螺[噁烷-4,12'-三环[12.3.1.12,5]十九烷]-1'(18'),2',4',9',14',16'-六烯(E/Z混合物)(46.4mg，80％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),7.41-7.28(m,5H),5.74-5.64(m,1H),5.61-5.47(m,2H),5.18(d,J＝11.0Hz,1H),4.98(d,J＝10.8Hz,1H),3.91-3.81(m,2H),3.57-3.43(m,2H),3.10(dd,J＝13.6,8.9Hz,1H),2.86(dd,J＝13.6,7.7Hz,1H),2.44-1.85(m,8H)ppm。ESI-MSm/z计算值613.176，实测值614.2(M+1)+；保留时间：3.96分钟(LC方法BB)。
步骤4：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(化合物205)和(6R)-17-(甲基氨基)-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(化合物206)
将(6'R)-6'-(苄氧基)-17'-硝基-6',15'-双(三氟甲基)-19'-氧杂-3',4',13',18'-四氮杂螺[噁烷-4,12'-三环[12.3.1.12,5]十九烷]-1'(18'),2',4',9',14',16'-六烯(E/Z混合物)(46.4mg，0.0748mmol)于甲醇(3mL)中的溶液用氮气吹扫三次。加入钯碳(48.5mg，5％w/w，0.0228mmol)，然后用氢气吹扫反应两次，并将反应在一大气压的氢气下搅拌约19小时。将反应用氮气吹扫两次，然后通过硅藻土垫过滤，并且用甲醇(约30mL)洗涤滤饼。将挥发物在减压下去除，并且通过用5％至70％乙腈/水(+10mM碳酸氢铵/氢氧化铵缓冲液pH＝10)梯度洗脱的反相C18色谱法对残余物进行纯化，从而得到两种产物：
待洗脱的第一产物分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(16.7mg，44％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.58(s,1H),6.01(s,2H),4.79(s,1H),3.70-3.56(m,2H),3.55-3.38(m,2H),2.75-2.62(m,1H),2.23-2.03(m,3H),2.00-1.86(m,2H),1.86-1.61(m,3H),1.60-1.37(m,5H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.21(s,3F),-78.07(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值495.1705，实测值496.2(M+1)+；保留时间：3.52分钟(LC方法BB)。
待洗脱的第二产物分离为呈黄色固体的(6R)-17-(甲基氨基)-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-12,4'-四氢吡喃]-6-醇(7.4mg，19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,1H),7.45(s,1H),6.16(q,J＝4.6Hz,1H),4.81(s,1H),3.70-3.57(m,2H),3.56-3.39(m,2H),2.95(d,J＝5.1Hz,3H),2.74-2.63(m,1H),2.24-2.04(m,3H),2.01-1.87(m,2H),1.86-1.61(m,3H),1.59-1.37(m,5H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-61.86(s,3F),-78.05(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值509.1862，实测值510.2(M+1)+；保留时间：3.79分钟(LC方法BB)。
实例114：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体1)(化合物207)和(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体2)(化合物208)的制备
步骤1：N-(3-烯丙基四氢呋喃-3-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(234mg，0.4359mmol)、3-烯丙基四氢呋喃-3-胺(盐酸盐)(99mg，0.605mmol)和DIPEA(222.6mg，0.3mL，1.7223mmol)于乙腈(5mL)中的溶液在65℃下搅拌2小时，然后在室温下搅拌19小时。将反应混合物转移到具有饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)的125mL分液漏斗中，并将水层用乙酸乙酯(3X 25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈橙红色油的N-(3-烯丙基四氢呋喃-3-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(220mg，80％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.55(s,1H),7.44-7.28(m,5H),5.87-5.66(m,3H),5.14(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),5.12-5.08(m,1H),5.07-5.04(m,1H),5.02(dd,J＝10.1,1.3Hz,1H),4.84(d,J＝10.8Hz,1H),4.67(dd,J＝10.6,1.6Hz,1H),4.02(d,J＝9.5Hz,1H),3.98-3.92(m,2H),3.85(dd,J＝9.5,1.5Hz,1H),2.79(d,J＝7.3Hz,2H),2.58-2.21(m,5H),2.20-2.09(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.46(s,3F),-73.13(s,3F,非对映异构体A),-73.17(s,3F,非对映异构体B)ppm。ESI-MS m/z计算值627.1916，实测值628.2(M+1)+；保留时间：4.09分钟(LC方法BB)。
步骤2：(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,3'-四氢呋喃](E/Z混合物)
将N-(3-烯丙基四氢呋喃-3-基)-6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)戊-4-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(220mg，0.3485mmol)于二氯乙烷(110mL)中的溶液用氮气鼓泡22小时。将溶液在60℃下加热，并且加入第一部分的詹氏催化剂1B(17.9mg，0.0244mmol)。45分钟后，加入第二部分的詹氏催化剂1B(18.2mg，0.0248mmol)，并且持续加热另外3小时。将反应混合物冷却至室温并用DMSO(8滴)淬灭。将混合物在减压下浓缩，并且通过硅胶色谱法使用0％至35％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈淡琥珀色半固体的(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,3'-四氢呋喃](E/Z混合物)(173.9mg，82％)。ESI-MS m/z计算值599.1603，实测值600.2(M+1)+；保留时间：3.88分钟(LC方法BB)。
步骤3：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇
向(6R)-6-苄氧基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,9,14(18),15-六烯-12,3'-四氢呋喃](E/Z混合物)(131.7mg，0.2171mmol)于乙醇(9mL)中的溶液用氮气吹扫三次。加入钯碳(131.5mg，5％w/w，0.0618mmol)，然后将反应用氢气吹扫两次，并将反应在一大气压的氢气下搅拌约22小时。将反应用氮气吹扫两次，然后通过硅藻土垫过滤，并且将滤饼用乙醇(约30mL)洗涤。将滤液的挥发物在减压下去除，以得到呈深黄色油和非对映异构体的混合物的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(103mg，96％)。ESI-MS m/z计算值481.1549，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.39分钟(LC方法BB)。
步骤4：(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体1)(化合物207)和(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体2)(化合物208)
将(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(103mg)通过反相色谱法(使用AQ C18柱(50g)并且用5％至70％乙腈/碱性水(+10mM碳酸氢铵/氢氧化铵缓冲液，pH＝10)梯度洗脱))进行纯化。通过SFC使用由菲罗门公司出售的LUX-5柱(250X21.2mm，5um粒度)使用7％ EtOH(+0.1％二乙胺)/CO2梯度对所得黄色固体进一步纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
分离待洗脱的第一非对映异构体，然后放入乙酸乙酯(10mL)中，并且将有机层用1N HCl水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)相继洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，然后由乙腈/水冻干，以得到呈深黄色固体的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体1)(44.5mg，33％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.60(s,1H),6.02(s,2H),5.41(s,1H),4.11(d,J＝9.5Hz,1H),3.81(td,J＝8.4,3.5Hz,1H),3.71-3.58(m,2H),2.74(t,J＝11.1Hz,1H),2.31-2.15(m,2H),2.13-1.95(m,2H),1.80-1.59(m,2H),1.57-1.35(m,5H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.26(s,3F),-78.52(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值481.1549，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.0分钟(LC方法C)。
分离待洗脱的第二非对映异构体，然后放入乙酸乙酯(10mL)中，并且将有机层用1N HCl水溶液(10mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和盐水(10mL)相继洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，并且由乙腈/水冻干，以得到呈深黄色固体的(6R)-17-氨基-6,15-双(三氟甲基)螺[19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-12,3'-四氢呋喃]-6-醇(对映异构体2)(45.5mg，34％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.60(s,1H),6.04(s,2H),5.26(s,1H),3.90(d,J＝9.3Hz,1H),3.81-3.65(m,3H),2.46-2.35(m,1H),2.23-2.06(m,5H),1.68-1.36(m,6H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.32(s,3F),-77.72(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值481.1549，实测值482.2(M+1)+；保留时间：3.06分钟(LC方法C)。
实例115：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，反式二醇)(化合物209)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，反式二醇)(化合物210)的制备
步骤1：6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-酮(E/Z混合物)
在0℃下向6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-醇(E/Z烯烃混合物，顺式二醇)(22mg，0.0374mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘烷(25mg，0.0589mmol)。将所得混合物在室温下搅拌10分钟，并且然后回流2小时。将混合物冷却至室温，过滤，并将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以产生呈浅色固体的6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-酮(E/Z混合物)(20mg，91％)。ESI-MS m/z计算值585.1447，实测值586.2(M+1)+；保留时间：1.94分钟(LC方法BB)。
步骤2：17-氨基-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-7-酮
将6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-7-酮(E/Z混合物)(120mg，0.205mmol)于甲醇(12mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟，并且然后加入钯碳(131mg，5％w/w，0.0615mmol)。将所得混合物用氢气球鼓泡5分钟，并且然后将混合物在1atm的氢气下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(25mL)洗涤，并且在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度对所得残余物进行纯化，以得到呈荧光黄色固体的17-氨基-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-7-酮(66mg，69％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.31(s,1H),5.22(br.s.,1H),5.08(br.s.,2H),4.40(br.s.,1H),3.48(ddd,J＝19.6,8.4,5.0Hz,1H),3.06-2.92(m,1H),2.71(dt,J＝19.3,5.1Hz,1H),2.22-2.07(m,1H),1.78-1.60(m,3H),1.53-1.41(m,1H),1.32(s,3H),1.30(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-63.91(s,3F),-74.29(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值467.1392，实测值468.1(M+1)+；保留时间：4.65分钟(LC方法AA)。
步骤3：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇
在0℃下向17-氨基-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-7-酮(36mg，0.077mmol)于四氢呋喃(2mL)中的溶液中加入四甲基硼氢化胺(28mg，0.3147mmol)。将混合物搅拌，同时使其从0℃温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃，并且然后加入丙酮(5mL)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，并且然后用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)处理。将混合物用乙酸乙酯(2X20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到呈褐色油的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(33mg，80％)(87.1％纯度)。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：3.52分钟(LC方法BB)。
步骤4：17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，反式二醇)(化合物209)和17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，反式二醇)(化合物210)
通过SFC使用由菲罗门公司出售的LUX-5柱(250X 21.2mm，5μm粒度)使用10％乙醇(+0.1％二乙胺)/CO2梯度对17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(72mg，0.1534mmol)进行纯化，从而得到两种单一对映异构体产物：
第一对映异构体分离为呈深黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体1，反式二醇)(16mg，22％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.40(br.s.,1H),6.00(s,2H),5.45(d,J＝6.6Hz,1H),4.59(s,1H),4.17(q,J＝6.8Hz,1H),3.17-3.03(m,1H),2.02-1.89(m,2H),1.70-1.52(m,2H),1.47-1.34(m,6H),1.24(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.36(s,3F),-72.91(br.s.,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.1(M+1)+；保留时间：3.51分钟(LC方法BB)。
待洗脱的第二对映异构体分离为呈深黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,7-二醇(对映异构体2，反式二醇)(15.5mg，22％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.41(br.s.,1H),6.00(s,2H),5.45(d,J＝6.8Hz,1H),4.59(s,1H),4.17(q,J＝6.4Hz,1H),3.16-3.03(m,1H),2.01-1.90(m,2H),1.69-1.52(m,2H),1.49-1.34(m,6H),1.24(s,3H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.36(s,3F),-72.91(br.s.,3F)ppm。ESI-MSm/z计算值469.1549，实测值470.1(M+1)+；保留时间：3.51分钟(LC方法BB)。
实例116：(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物211)和(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物212)的制备
步骤1：1-甲氧基己-5-烯-2-酮
在室温下在7分钟内将2-甲氧基乙腈(1.434g，1.5mL，20.175mmol)逐滴加入到溴(丁-3-烯基)镁(40.35mL的0.5M，20.175mmol)中。将深红色反应混合物在回流下搅拌2小时。然后将混合物冷却并用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭。将产物用二乙醚(2X 30mL)萃取。将合并的有机层用水、盐水洗涤，并且经无水硫酸钠干燥，然后过滤。将滤液在减压下去除，以得到呈棕色残余物的1-甲氧基己-5-烯-2-酮(1.4g，44％)，将其直接用于后续步骤中。
步骤2：1-甲氧基己-5-烯-2-胺
在室温下向1-甲氧基己-5-烯-2-酮(1.4g，8.8695mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入乙酸铵(12.44g，161.39mmol)和氰基硼氢化钠(761mg，12.11mmol)。将混合物搅拌48小时，并且小心地加入浓缩的HCl，直至达到pH<2，并且将溶剂在减压下去除。将残余物溶解于水(15mL)中，并用二乙醚(20mL)萃取。将水溶液用固体KOH带至pH>12，并且然后用二乙醚(3X 20mL)萃取。将合并的有机提取物经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％甲醇/二氯甲烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的1-甲氧基己-5-烯-2-胺(60mg，4％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.89-5.72(m,1H),5.11-4.92(m,2H),3.43-3.32(m,4H),3.26-3.18(m,1H),3.08-2.98(m,1H),2.43-2.24(m,2H),2.24-2.07(m,2H),1.63-1.37(m,2H)ppm。ESI-MS m/z计算值129.1154，实测值130.2(M+1)+；保留时间：2.0分钟(LC方法BB)。
步骤3：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(甲氧基甲基)戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向1-甲氧基己-5-烯-2-胺(60mg，0.3947mmol)和2-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-5-[6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]-1,3,4-噁二唑(253mg，0.5089mmol)于乙腈(2mL)中的溶液中逐滴加入DIPEA(296.8mg，0.4mL，2.2964mmol)，并且将混合物在室温下搅拌18小时。将挥发物在减压下去除。通过反相色谱法使用5％至80％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，以得到呈淡黄色油的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(甲氧基甲基)戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(80mg，32％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.57(s,1H),7.41-7.27(m,5H),6.14(d,J＝8.3Hz,1H),6.04-5.90(m,1H),5.82-5.68(m,1H),5.34-5.20(m,2H),5.02-4.88(m,2H),4.81(d,J＝10.5Hz,1H),4.64(dd,J＝10.5,5.1Hz,1H),4.60-4.51(m,1H),3.55-3.45(m,2H),3.40-3.37(m,3H),3.28-3.20(m,2H),2.13-2.04(m,2H),1.84-1.73(m,2H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-64.72(s,3F),-73.49(s,3F,非对映异构体A),-73.60(s,3F,非对映异构体B)ppm。ESI-MS m/z计算值615.1916，实测值616.2(M+1)+；保留时间：3.82分钟(LC方法AA)。
步骤4：(6R)-6-苄氧基-12-(甲氧基甲基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
将氮气鼓泡到6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[1-(甲氧基甲基)戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(80mg，0.1261mmol)于1,2-二氯乙烷(40mL)中的溶液中20小时。然后将溶液置于设置为60℃的油浴中，并且加入第一部分的詹氏催化剂1B(6.5mg，0.0089mmol)。45分钟后，加入第二部分的詹氏催化剂1B(6.5mg，0.0089mmol)，并且持续加热另外5小时。一旦冷却至室温，就将反应用DMSO(3滴)淬灭，将挥发物在减压下去除，并且通过硅胶色谱法使用0％至35％乙酸乙酯/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色泡沫的(6R)-6-苄氧基-12-(甲氧基甲基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(37mg，48％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.52-8.43(m,1H),7.41-7.28(m,5H),6.40-6.24(m,1H),5.85-5.75(m,1H),5.74-5.56(m,1H),4.90(d,J＝11.0Hz,1H),4.72
-4.52(m,1H),4.27-4.18(m,1H),3.66-3.56(m,2H),3.49-3.43(m,3H),3.17
-2.64(m,2H),2.32-2.17(m,1H),1.85-1.76(m,1H),1.70-1.61(m,1H),1.48
-1.37(m,1H)ppm。ESI-MS m/z计算值587.1603，实测值588.2(M+1)+；保留时间：3.7分钟(LC方法C)。
步骤5：(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物211)和(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物212)
将(6R)-6-苄氧基-12-(甲氧基甲基)-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(37mg，0.0608mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液用氮气鼓泡5分钟。加入钯碳(39mg，5％w/w，0.0183mmol)，并且将氢气在反应混合物中鼓泡5分钟，并且然后将反应在一大气压的氢气下搅拌96小时。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤饼用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。通过用19％乙酸乙酯/庚烷洗脱的硅胶色谱法对黄色残余物进行纯化，从而得到两种非对映异构体产物：
待洗脱的第一非对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(5.67mg，19％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.59(s,1H),6.09(s,2H),5.11(d,J＝2.4Hz,1H),3.74-3.65(m,1H),3.61-3.55(m,1H),3.53-3.46(m,1H),3.31(s,3H),2.44-2.35(m,1H),2.29-2.19(m,1H),2.08-1.96(m,1H),1.68-1.56(m,2H),1.55-1.37(m,4H),1.07-0.95(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.76(s,3F),-79.12(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：4.55分钟(LC方法AA)。
待洗脱的第二非对映异构体分离为呈黄色固体的(6R)-17-氨基-12-(甲氧基甲基)-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(4.97mg，17％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.56(s,1H),6.08(s,2H),5.13(d,J＝3.2Hz,1H),3.80-3.72(m,1H),3.61-3.55(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.31(s,3H),2.39-2.23(m,2H),2.12-2.00(m,1H),1.75-1.61(m,2H),1.58-1.35(m,4H),1.12-1.01(m,1H)ppm。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.75(s,3F),-76.32(s,3F)ppm。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.2(M+1)+；保留时间：4.56分钟(LC方法AA)。
实例117：(6R)-17-氨基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物213)的制备
步骤1：5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯
将2-甲基己-5-烯-2-胺(盐酸盐)(1.40g，9.3544mmol)、6-氯-5-(二氟甲基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(1.9g，6.293mmol)和DIPEA(4.081g，5.5mL，31.576mmol)于乙腈(28mL)中的溶液在密封管中在80℃下搅拌1小时。将深色溶液冷却至室温。蒸发溶剂，并将残余物溶解于MTBE(40mL)和0.5M盐酸溶液(60mL)中。将水溶液用MTBE(3X 30mL)萃取。将合并的有机层用50％饱和氯化铵水溶液(1X 40mL)、水(30mL)、盐水(20mL)洗涤，接着经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到呈橙色膜的5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(2.4g，76％)。ESI-MS m/z计算值343.1344，实测值344.2(M+1)+；保留时间：2.16分钟(LC方法E)。
步骤2：5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸
在室温下将氢氧化锂(一水合物)(2.8g，66.725mmol)于水(18mL)中的溶液加入到5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸甲酯(2.4g，4.7815mmol)于THF(18mL)和甲醇(9mL)中的橙色溶液中。将黄色悬浮液在室温下搅拌1小时。将所得的红色深色溶液冷却至室温，并且将有机溶剂在真空下去除。将残留的甲醇与乙腈(20mL)共蒸发，然后加入MTBE(60mL)和盐酸溶液(1M，80mL)，并将混合物搅拌10分钟。将水溶液分离并用MTBE(3X 30mL)萃取。将合并的有机层浓缩，并且通过反相色谱法使用5％至90％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对残余物进行纯化，从而得到呈橙色固体的5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸(1.4g，60％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.23(s,1H),6.75-6.39(m,1H),6.18(br.s.,1H),5.86-5.74(m,1H),5.73-5.65(m,1H),5.10-4.99(m,1H),4.96(d,J＝10.1Hz,1H),2.14-1.96(m,4H),1.53(br.s,6H)ppm。19FNMR(377MHz,氯仿-d)δ-115.13至-115.65(m,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值329.1187，实测值328.6(M-1)-；保留时间：1.94分钟(LC方法C)。
步骤3：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼
在室温下将HATU(2.0g，5.2600mmol)加入到5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-甲酸(1.4g，2.8697mmol)、(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(1.45g，5.0301mmol)和DIPEA(2.6712g，3.6mL，20.668mmol)于DMF(7mL)中的橙色溶液中。将溶液在室温下搅拌1.5小时。通过反相色谱法使用5％至75％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对DMF溶液直接进行纯化，以得到呈淡黄色固体的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(2.26g，定量)。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-73.76(s,3F),-115.07至-116.18(m,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值599.2167，实测值600.3(M+1)+；保留时间：3.75分钟(LC方法BB)。
步骤4：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-3-(二氟甲基)-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-吡啶-2-胺
在室温下将N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-5-(二氟甲基)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-吡啶-2-碳酰肼(2.26g，3.7695mmol)和1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(715mg，6.3741mmol)于DCM(100mL)中的溶液用2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氢咪唑-1-鎓；氯(895mg，5.2942mmol)于DCM(80mL)中的溶液进行处理。咪唑鎓中间体的形成在15分钟内完成。将DCM蒸发，并将残余物溶解于甲苯(250mL)中。将混合物在100℃下搅拌过夜。将深棕色混合物用水(150mL)淬灭，并且将水溶液分离，并且然后用MTBE(3X 80mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到橙色油(2.39g)。通过硅胶色谱法使用1％至35％ MTBE/庚烷梯度对此油进行纯化，得到了呈淡黄色固体的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-3-(二氟甲基)-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-吡啶-2-胺(1.75g，80％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.30(s,1H),7.44-7.23(m,5H),6.81-6.44(m,1H),6.05-5.89(m,1H),5.83-5.63(m,2H),5.30-5.18(m,2H),5.04-4.88(m,2H),4.82(d,J＝10.5Hz,1H),4.65(d,J＝10.5Hz,1H),3.22(d,J＝6.4Hz,2H),2.12-1.86(m,4H),1.48(s,6H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-73.46(s,3F),-115.13至-116.66(m,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值581.2061，实测值582.3(M+1)+；保留时间：2.43分钟(LC方法E)。
步骤5：(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-17-硝基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
将氮气鼓泡通过6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-3-(二氟甲基)-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-吡啶-2-胺(1.75g，3.0063mmol)于DCE(530mL)中的淡黄色溶液过夜。在室温下加入詹氏催化剂1B(60mg，0.0818mmol)，并且将氮气鼓泡5分钟。然后将浅绿色溶液在65℃下搅拌30分钟，并且在65℃下再次分两份以30分钟间隔加入詹氏催化剂1B(120mg，0.1696mmol)，并且将混合物搅拌3.5小时。将棕色溶液冷却至室温，然后加入DMSO(6mL)以淬灭催化剂。将溶剂在减压下去除，并且通过硅胶色谱法使用1％至100％ MTBE/庚烷梯度对残余物进行纯化，以得到粗产物，通过反相色谱法使用5％至100％乙腈/水(+0.1％甲酸)梯度对所述粗产物进一步纯化，以得到呈黄色固体的(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-17-硝基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(341mg，20％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.27(s,1H),7.45-7.24(m,5H),6.82-6.41(m,1H),5.79-5.57(m,3H),4.86(d,J＝10.9Hz,1H),4.54(d,J＝11.0Hz,1H),3.08(dd,J＝14.1,3.7Hz,1H),2.70(dd,J＝14.2,8.5Hz,1H),2.60-2.48(m,1H),2.22-2.08(m,1H),2.05-1.91(m,2H),1.44(d,J＝9.4Hz,6H)ppm。19F NMR(377MHz,氯仿-d)δ-73.01(s,3F),-115.34(dd,J＝53.1,12.3Hz,2F)ppm。ESI-MS m/z计算值553.1748，实测值554.2(M+1)+；保留时间：2.34分钟(LC方法E)。
步骤6：(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-胺
将钯碳(66mg，5％w/w，0.062mmol)加入到(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-17-硝基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(340mg，0.6112mmol)于THF(7mL)中的脱气溶液中。将黑色悬浮液用氮气吹扫5分钟，然后将氢气鼓泡通过悬浮液5分钟。然后将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌两夜。再次，加入钯碳(85mg，5％w/w，0.7987mmol)，并且将混合物在氢气氛下搅拌另外两夜。将黑色悬浮液用氮气吹扫，并且然后通过硅藻土塞过滤。将滤饼用DCM(3X 5mL)洗涤，并且将滤液在减压下浓缩，以得到呈荧光黄色油的(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-胺(290mg，24％)。ESI-MS m/z计算值525.22，实测值526.4(M+1)+；保留时间：2.40分钟(LC方法E)。
步骤7：(6R)-17-氨基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物213)
在室温下将钯碳(160mg，5％w/w，0.1503mmol)加入到(6R)-6-苄氧基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-17-胺(290mg，0.4304mmol)于THF(8mL)中的脱气溶液中。将黑色悬浮液用氮气吹扫5分钟，然后将氢气鼓泡通过悬浮液5分钟。将混合物在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。将黑色悬浮液用氮气吹扫，并且然后通过硅藻土塞过滤，并将滤饼用DCM(3X5mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩，以得到荧光黄色油，通过反相色谱法使用5％至80％乙腈/水(+0.02％ HCl)梯度对所述荧光黄色油进行纯化，以得到冻干后呈黄色固体的预期产物(45mg，94.5％纯度)。通过硅胶色谱法使用1％至10％ EtOAc/DCM梯度对此固体进行进一步纯化，以得到呈黄色固体的(6R)-17-氨基-15-(二氟甲基)-12,12-二甲基-6-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(29mg，15％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,1H),7.41(s,1H),7.18(t,J＝53.7Hz,1H),5.86(s,2H),5.20(s,1H),2.90-2.75(m,1H),2.27-2.14(m,1H),2.12-1.98(m,1H),1.89-1.75(m,1H),1.71-1.57(m,1H),1.54-1.37(m,5H),1.34(s,3H),1.29(s,3H)ppm。19FNMR(377MHz,DMSO-d6)δ-78.22(s,3F),-114.57至-115.76(m,1F),-115.76至-116.87(m,1F)ppm。ESI-MS m/z计算值435.1694，实测值436.3(M+1)+；保留时间：3.21分钟(LC方法C)。
实例118：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体1)(化合物214)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体2)(化合物215)的制备
步骤1：N-(3-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气气氛下将N-(1,1-二甲基-3-氧代-丙基)氨基甲酸叔丁酯(3.29g，14.712mmol)的溶液冷却至-78℃，并且在30分钟内用溴(乙烯基)镁(35mL的1M，35mmol)逐滴处理。将反应混合物在此温度下保持30分钟，并且然后转移到0℃冰浴中，并在此温度下保持3小时。然后将混合物用200mL的饱和NH4Cl水溶液淬灭。将混合物用二乙醚(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(120g，干负载，在40分钟内用0％至45％二乙醚/己烷洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈澄清液体的N-(3-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(1.9g，47％)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ5.96–5.81(m,1H),5.30–5.19(m,2H(vinylic proton and OH)),5.12–5.05(m,1H),4.39–4.31(m,1H),1.84–1.71(m,2H),1.43(s,9H),1.38(s,3H),1.36(s,3H).
步骤2：4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺
将N-(3-羟基-1,1-二甲基-戊-4-烯基)氨基甲酸叔丁酯(2.23g，9.7246mmol)和2,6-卢剔啶(4.2559g，4.6mL，39.718mmol)于干DCM(60mL)中的溶液冷却至0℃。然后在15分钟内逐滴加入三氟甲磺酰叔丁基二甲基硅烷酯(15.539g，13.5mL，58.785mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时，然后用二氯甲烷(100mL)稀释，并且加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL)。将双相混合物搅拌15分钟，并将层分离。将水层用二氯甲烷(3X 100mL)进一步萃取，并将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过反相色谱法(缓冲液A：用0.05％ TFA缓冲的水；缓冲液B：用0.05％ TFA缓冲的乙腈，在40分钟内30％缓冲液B至90％缓冲液B洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈澄清黄色油的4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺(0.91g，38％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.88(ddd,J＝17.2,10.2,7.0Hz,1H),5.23–5.14(m,1H),5.08–5.00(m,1H),4.38(dd,J＝12.2,6.6Hz,1H),1.61(dd,J＝14.0,7.2Hz,1H),1.47(dd,J＝14.0,4.9Hz,1H),1.09(s,3H),1.07(s,3H),0.90(s,9H),0.11(s,3H),0.06(s,3H).ESI-MS m/z计算值243.2018，实测值244.4(M+1)+；保留时间：2.82分钟(LC方法G)。
步骤3：6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1g，3.514mmol)于乙腈(40mL)中的溶液中加入4-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-2-甲基-己-5-烯-2-胺(0.91g，3.7378mmol)和DIEA(1.4098g，1.9mL，10.908mmol)。将所得黄色溶液在室温下搅拌24小时，并且然后在40℃下加热过夜。冷却至室温后，将溶剂在减压下去除，并且通过硅胶色谱法(120g，干负载，在45分钟内0％至10％二乙醚/己烷洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈白色固体的6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(0.96g，56％)。ESI-MS m/z计算值491.2063，实测值492.0(M+1)+；保留时间：4.56分钟(LC方法G)。
步骤4：6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(0.96g，1.9529mmol)于THF(30mL)和MeOH(9mL)中的溶液中加入LiOH(0.6g，25.054mmol)于水(15mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用5％柠檬酸水溶液酸化至pH＝2。将水层用二乙醚(3X 75mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体的6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(0.95g，100％)。ESI-MS m/z计算值477.1907，实测值477.9(M+1)+；保留时间：4.18分钟(LC方法G)。
步骤5：N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰肼(0.7g，2.4283mmol)和6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(0.95g，1.9495mmol)于EtOAc(30mL)中的混合物中加入吡啶(782.4mg，0.8mL，9.8913mmol)和丙基膦酸酐溶液(2.5656g，2.4mL的EtOAc中的50％w/w，4.0316mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物加入1M NaHCO3水溶液(200mL)，并且搅拌15分钟。将混合物用EtOAc(3X 100mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g，干负载，在30分钟内0％至45％二乙醚/己烷洗脱)对含油残余物进行纯化，从而得到呈黄色固体的N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1g，69％)。ESI-MS m/z计算值747.2887，实测值748.4(M+1)+；保留时间：4.52分钟(LC方法G)。
步骤6：6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
向N'-[(2R)-2-苄氧基-2-(三氟甲基)戊-4-烯酰]-6-[[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(0.32g，0.4279mmol)和DIEA(185.5mg，0.25mL，1.4353mmol)于乙腈(7mL)中的溶液中加入TsCl(125mg，0.6557mmol)，并且将混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物浓缩，并将残余物溶解于乙酸乙酯(75mL)中。将有机层用5％ NaHCO3水溶液(2X 75mL)、水(2X 75mL)、盐水(75mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(12g，干负载，以及在30分钟内0％至15％二乙醚/己烷洗脱)对残余物进行纯化，从而得到呈澄清黄色油的6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(311mg，100％)。ESI-MSm/z计算值729.2781，实测值730.4(M+1)+；保留时间：4.9分钟(LC方法G)。
步骤7：5-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-甲基-己-1-烯-3-醇
在室温下向6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-[3-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基-1,1-二甲基-戊-4-烯基]-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(790mg，1.0825mmol)于甲醇(25mL)中的溶液中加入1N HCl水溶液(1.6mL的1M，1.6mmol)。将反应在室温下搅拌6小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)稀释，并用二乙醚(3X 100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，以得到呈黄色固体的5-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-甲基-己-1-烯-3-醇(0.67g，100％)。ESI-MS m/z计算值615.1916，实测值616.3(M+1)+；保留时间：4.06分钟(LC方法G)。
步骤8：[3-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-甲基-1-乙烯基-丁基]乙酸酯
向5-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-甲基-己-1-烯-3-醇(146.5mg，0.238mmol)于无水二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入吡啶(58.68mg，60μL，0.7418mmol)、乙酸酐(43.28mg，40μL，0.4239mmol)和DMAP的催化量(7.9mg，0.0647mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时，并且然后在真空下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，以得到呈淡黄色胶的[3-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-甲基-1-乙烯基-丁基]乙酸酯(154.5mg，99％)。ESI-MS m/z计算值657.2022，实测值658.7(M+1)+；保留时间：4.11分钟(LC方法G)。
步骤9：[(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯-10-基]乙酸酯(E/Z混合物)
在室温下将詹氏催化剂1B(145mg，0.1973mmol)混合于甲苯(40mL)中，并且用N2脱气30分钟。单独地，将甲苯(10mL)中的[3-[[6-[5-[(1R)-1-苄氧基-1-(三氟甲基)丁-3-烯基]-1,3,4-噁二唑-2-基]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-甲基-1-乙烯基-丁基]乙酸酯(353mg，0.5315mmol)用N2脱气15分钟，并且然后按份加入到含有甲苯中的催化剂的预热(110℃)烧瓶中，并有效搅拌。将混合物在110℃下加热16小时。加入更多詹氏催化剂1B(64mg，0.0871mmol)，并且使反应在相同温度下继续另外3小时。将反应混合物冷却至室温，并且然后加入EtOAc(50ml)和盐水(40ml)。将有机层分离，并且经无水MgSO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(40g柱)使用0％至20％乙酸乙酯/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈棕色油的[(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯-10-基]乙酸酯(E/Z混合物)(149mg，20％)。ESI-MS m/z计算值629.1709，实测值630.5(M+1)+；保留时间：3.96分钟(LC方法G)。
步骤10：(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-10-醇(E/Z混合物)
在室温下向[(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,8,14(18),15-六烯-10-基]乙酸酯(E/Z混合物)(12mg，0.0191mmol)于MeOH(0.5mL)中的溶液中加入K2CO3(14mg，0.1013mmol)，并且将混合物在室温下搅拌3小时。加入盐水(15mL)和二氯甲烷(20ml)，并且将层分离。将有机层浓缩。通过硅胶色谱法(12g柱)使用0％至40％ EtOAc/己烷梯度对残余物进行纯化，从而得到呈无色油的(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-10-醇(E/Z混合物)(11mg，93％)。ESI-MS m/z计算值587.1603，实测值588.5(M+1)+；保留时间：4.12分钟(LC方法G)。
步骤11：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇
向(6R)-6-苄氧基-12,12-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯-10-醇(E/Z混合物)(110mg，0.1779mmol)于EtOH(5mL)中的溶液中加入5％ Pd/C(180mg，0.0846mmol)。将混合物用氢气吹扫若干次，并且然后在Parr振荡器上在50psi下氢化6小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤。将滤液浓缩，以产生呈绿黄色泡沫的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(77mg，88％)。ESI-MS m/z计算值469.1549，实测值470.5(M+1)+；保留时间：3.61分钟(LC方法G)。
步骤12：(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体1)(化合物214)和(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体2)(化合物215)
通过手性SFC使用用12％ MeOH(20mM NH3)/88％ CO2洗脱的Chiral Cel OJ柱(250X 21.2mm，5μm粒度)以70毫升/分钟的流速对外消旋(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(75mg，0.1358mmol)进行纯化，得到呈黄色固体和待洗脱的第一峰，即(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体1)(19.9mg，62％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.60(s,1H),5.97(s,2H),4.47(s,1H),4.28(d,J＝5.4Hz,1H),3.89–3.76(m,1H),3.60(d,J＝13.7Hz,1H),2.37(t,J＝13.1Hz,1H),1.95(tt,J＝11.3,5.6Hz,1H),1.75–1.60(m,1H),1.59–1.47(m,3H),1.47(s,3H),1.40(s,3H),1.03(dd,J＝13.7,9.8Hz,1H).ESI-MS m/z计算值469.15485，实测值470.2(M+1)+；保留时间：1.52分钟(LC方法A)。
待洗脱的第二峰产生为黄色固体的(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6,10-二醇(非对映异构体2)(25.5mg，79％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,1H),7.59(s,1H),6.00(s,2H),4.48(s,1H),4.31(d,J＝5.3Hz,1H),3.76(d,J＝14.2Hz,1H),3.65(d,J＝12.9Hz,1H),2.44(t,J＝12.9Hz,2H),1.97(dd,J＝13.6,9.5Hz,1H),1.70-1.52(m,3H),1.45(s,3H),1.39(s,3H),1.11(dd,J＝13.8,8.9Hz,1H).ESI-MS m/z计算值469.15485，实测值470.2(M+1)+；保留时间：1.49分钟(LC方法A)。
实例119：17-氨基-7-氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物216)、17-氨基-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物217)、17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物218)和17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物219)的制备
步骤1：6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向压力管中的6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(2.72g，7.5280mmol)于MeOH(60mL)中的溶液中加入一水合肼(3.35g，66.919mmol)。将混合物在85℃下搅拌4小时，冷却至室温并浓缩。将残余物与甲苯(2X 20mL)共蒸发，并且通过硅胶快速色谱法(用20％至60％ EtOAc/庚烷梯度洗脱)进行纯化，以得到呈浅黄色油的6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(2.7g，99％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),5.84-5.71(m,1H),5.44(br.s,1H),5.04-4.93(m,2H),3.39(br.s,3H),2.09-1.93(m,4H),1.49(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.45(s,3F).ESI-MS m/z计算值361.1362，实测值362.2(M+1)+；保留时间：1.96分钟(LC方法E)。
步骤2：3,3-二氟-2-羟基-戊-4-烯酸乙酯
在10℃下向3-溴-3,3-二氟-丙-1-烯(4.8g，30.582mmol)和甲苯中的2-氧代乙酸乙酯(5.9mL的50％w/v，28.896mmol)于DMF(60mL)和水(18mL)中的溶液中加入铟(7g，60.966mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入冰水(200mL)。将所得混合物搅拌30分钟，用甲基叔丁基醚(100mL)稀释，通过硅藻土过滤，并将滤饼用甲基叔丁基醚洗涤。将水相用tBuOCH3(2X 100mL)反萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(50％至100％二氯甲烷/戊烷)对残余物(5.8g)进行纯化，以得到呈无色油的3,3-二氟-2-羟基-戊-4-烯酸乙酯(4.283g，82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.10-5.93(m,1H),5.82-5.72(m,1H),5.58(d,J＝11.0Hz,1H),4.43-4.27(m,3H),3.22(d,J＝6.4Hz,1H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-107.00至-107.85(m,1F),-108.89至-109.75(m,1F).ESI-MS m/z计算值180.0598，实测值181.2(M+1)+；保留时间：1.47分钟。(LC方法E)。
步骤3：2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸乙酯
在0℃下向3,3-二氟-2-羟基-戊-4-烯酸乙酯(2.45g，11.832mmol)于二氯甲烷(19mL)和无水庚烷(38mL)中的溶液中加入2,2,2-三氯亚氨代乙酸苄酯(7g，27.72mmol)。将混合物在0℃下搅拌5分钟，并且逐滴加入三氟甲磺酸(400mg，2.6653mmol)，从而得到白色沉淀。使混合物缓慢温热至室温，并且在室温(5至19℃)下搅拌过夜，并且然后冷却至0℃，并且用二氯甲烷(50mL)稀释。加入饱和NaHCO3水溶液(20mL)，并且将两层分离，并且将水层用二氯甲烷(2X 30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化(梯度：0％至10％ EtOAc/庚烷)，从而得到呈澄清油的2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸乙酯(1.56g，46％)。产物在LCMS上是不可离子化的。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.31(m,5H),6.16-6.00(m,1H),5.80-5.71(m,1H),5.56(d,J＝11.2Hz,1H),4.79(d,J＝12.0Hz,1H),4.61(d,J＝12.0Hz,1H),4.33-4.16(m,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-102.91至-103.81(m,1F),-106.39至-107.27(m,1F)。保留时间：4.4分钟(LC方法AA)。
步骤4：2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸
向2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸乙酯(1.55g，5.735mmol)于DCE(60mL)中的溶液中加入三甲基氢氧化锡(1.88g，10.397mmol)。将混合物在82℃下搅拌30小时并冷却至室温。加入硅胶(8g)。将混合物在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至15％ MeOH/二氯甲烷梯度)纯化，从而得到呈无色油的2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸(1.14g，78％)。产物在LCMS上是不可离子化的。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.31(m,5H),6.13-5.97(m,1H),5.77(dt,J＝17.4,2.2Hz,1H),5.58(d,J＝11.0Hz,1H),4.83-4.70(m,2H),4.25(t,J＝9.4Hz,1H).19FNMR(377MHz,CDCl3)δ-103.47至-104.44(m,1F),-106.04至-106.95(m,1F)。保留时间：1.86分钟(LC方法E)。
步骤5：N'-(2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酰)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼
向250-mL干燥烧瓶中装入2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酸(806mg，3.3276mmol)和二氯甲烷(20mL)。加入草酰氯(573mg，0.3938mL，4.5144mmol)，然后逐滴加入DMF(292mg，0.3093mL，3.9949mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。在15分钟内逐滴加入6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.80g，4.9817mmol)和DIEA(1.3g，1.752mL，10.059mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。加入后，将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入饱和NaHCO3水溶液(15mL)和水(15mL)。将两层分离，并将水层用二氯甲烷(2X 30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(5％至40％ EtOAc/庚烷洗脱)和第二硅胶快速色谱法(5％ EtOAc/二氯甲烷洗脱)对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的N'-(2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酰)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.33g，68％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(d,J＝6.1Hz,1H),8.74(d,J＝6.1Hz,1H),8.31(s,1H),7.45-7.31(m,5H),6.12-5.96(m,1H),5.85-5.71(m,2H),5.57(d,J＝11.0Hz,1H),5.46(br.s,1H),5.08-4.91(m,2H),4.88-4.77(m,2H),4.26(t,J＝9.5Hz,1H),2.11-1.96(m,4H),1.52(d,J＝1.5Hz,6H).19FNMR(377MHz,CDCl3)δ-64.50(s,3F),-104.56至-105.38(m,1F),-106.39至-107.22(m,1F).ESI-MS m/z计算值585.2011，实测值586.2(M+1)+；保留时间：2.23分钟(LC方法E)。
步骤6：6-[5-(1-苄氧基-2,2-二氟-丁-3-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在0℃下向N'-(2-苄氧基-3,3-二氟-戊-4-烯酰)-6-(1,1-二甲基戊-4-烯基氨基)-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-碳酰肼(1.33g，2.2715mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入DIEA(1.76g，2.3720mL，13.618mmol)，随后逐滴加入三氟甲磺酸酐(961mg，3.4061mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟。加入吗啉(1.2g)。将混合物在0℃下搅拌5分钟。然后加入饱和NaHCO3水溶液(25mL)。将两层分离，并将水层用二氯甲烷(2X 30mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(用0％至30％ EtOAc/庚烷梯度洗脱)对残余物进行纯化，以产生呈浅黄色油的6-[5-(1-苄氧基-2,2-二氟-丁-3-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(938mg，73％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.41-7.29(m,5H),6.08(dq,J＝17.5,11.5Hz,1H),5.81-5.69(m,2H),5.62-5.52(m,2H),5.11-4.90(m,3H),4.80(d,J＝11.7Hz,1H),4.59(d,J＝11.7Hz,1H),2.10-1.92(m,4H),1.49(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.56(s,3F),-103.99至-104.84(m,1F),-107.22至-108.19(m,1F).ESI-MS m/z计算值567.1905，实测值568.2(M+1)+；保留时间：2.39分钟(LC方法E)。
步骤7：6-苄氧基-7,7-二氟-12,12-二甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)
向干燥1-L烧瓶装入6-[5-(1-苄氧基-2,2-二氟-丁-3-烯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]-N-(1,1-二甲基戊-4-烯基)-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(420mg，0.7401mmol)和1,2-二氯乙烷(400mL)。将溶液用氮气鼓泡1小时，并且加热至75℃。快速加入Grubbs催化剂第2代(130mg，0.1531mmol)于1,2-二氯乙烷(5mL)中的溶液。将混合物在75℃下搅拌40分钟。加入更多1,2-二氯乙烷(5mL)中的Grubbs催化剂第2代(60mg，0.0707mmol)。将混合物在75℃下搅拌1小时并冷却至室温。加入DMSO(385mg)。将混合物在室温下搅拌10分钟并且在硅胶(20g)上浓缩。通过硅胶快速色谱法用0％至30％ EtOAc/庚烷梯度洗脱对残余物进行纯化，以得到呈粗浅黄色油的粗6-苄氧基-7,7-二氟-12,12-二甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(180mg)。通过反相色谱法对此材料进行进一步纯化(柱：100g Aq C18。梯度：5％至95％MeCN/水(0.1％甲酸改性剂)。将含有产物的部分在减压下浓缩以去除大多数乙腈。将残余物用饱和NaHCO3水溶液(10mL)处理并且用EtOAc(3X 20mL)萃取。将有机层合并，并且经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到呈浅黄色油的6-苄氧基-7,7-二氟-12,12-二甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(160.2mg，40％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.40-7.30(m,5H),6.36-6.25(m,1H),6.06-5.93(m,1H),5.57(br.s,1H),5.21(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),4.77-4.66(m,2H),2.84(t,J＝12.5Hz,1H),2.40-2.28(m,1H),2.17-2.07(m,1H),1.86(dd,J＝14.2,6.8Hz,1H),1.46(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.14(s,3F),-92.09至-92.96(m,1F),-110.61(dd,J＝254.8,20.4Hz,1F).ESI-MS m/z计算值539.1592，实测值540.2(M+1)+；保留时间：2.3分钟(LC方法E)。
步骤8：17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇、17-氨基-7-氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(化合物216)和17-氨基-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(化合物217)
在100mL烧瓶中向6-苄氧基-7,7-二氟-12,12-二甲基-17-硝基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,8,14,16-六烯(E/Z混合物)(175mg，0.3244mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中加入10％ Pd/C(50％湿度，82mg，5％w/w，0.0385mmol)。将烧瓶中的空气用通过真空的氮气替代三次。将氮气用通过真空的氢气替代六次。将反应混合物在室温下在氢气(气球)下搅拌16小时。将混合物通过硅藻土过滤，并将滤饼用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并且通过硅胶快速色谱法(10％至50％ EtOAc/庚烷洗脱)对残余物进行纯化，以得到三种产物。
主要产物17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(102mg，73％)分离为呈黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28(s,1H),5.38-5.27(m,1H),4.94(br.s,2H),4.46(br.s,1H),3.29(d,J＝7.3Hz,1H),2.54-2.10(m,4H),1.97-1.73(m,2H),1.64-1.49(m,2H),1.39(s,3H),1.36(s,3H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-63.87(s,3F),-101.77至-103.92(m,2F).ESI-MS m/z计算值421.1537，实测值422.3(M+1)+；保留时间：3.15分钟(LC方法C)。
将单脱氟副产物(20mg)通过硅胶色谱法(20％至50％ EtOAc/庚烷梯度)进一步纯化。将所需部分在减压下浓缩，并且将残余物冻干，以得到呈黄色固体的17-氨基-7-氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(非对映异构体的混合物)(16mg，12％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),6.58(d,J＝6.1Hz,0.5H),6.52(d,J＝6.6Hz,0.5H),6.00-5.85(m,2H),5.29-4.77(m,2H),4.62(s,0.5H),4.56(s,0.5H),3.05-2.80(m,1H),2.17-1.97(m,1H),1.95-1.62(m,3H),1.60-1.41(m,3H),1.39-1.27(m,6H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.22(s,3F),-184.41至-186.39(m,1F).ESI-MS m/z计算值403.1631，实测值404.2(M+1)+；保留时间：3.09分钟(LC方法C)。
通过硅胶色谱法(20％-70％ MTBE/庚烷梯度)对双脱氟副产物(10mg)进行纯化并且冻干，以得到呈黄色固体的17-氨基-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(8mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55(s,1H),6.06(d,J＝6.1Hz,1H),5.89(s,2H),4.98-4.89(m,1H),4.58(s,1H),2.63-2.51(m,1H),2.10-1.95(m,2H),1.88-1.75(m,1H),1.59-1.37(m,6H),1.34(s,3H),1.30(s,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.18(s,3F).ESI-MS m/z计算值385.1726，实测值386.2(M+1)+；保留时间：3.62分钟(LC方法BB)。
步骤9：17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物218)和17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物219)
使外消旋17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(102mg，0.2382mmol)经受使用以下条件的SFC分离：柱菲罗门Lux 5μm，纤维素4(250X 21.2mm)；6.7mg/注射；洗脱液：10％ EtOH(0.1％二乙胺)/90％CO2；流速：75毫升/分钟；浓度：甲醇中的22.2mg/mL(无改性剂)，注射体积：300μL；出口压：100bar；波长：250nm；温度：40℃。
将含有第一洗脱化合物的部分在减压下浓缩。将残余物放入乙腈(2.2mL)中，并且加入水(1.8mL)。将所得澄清黄色溶液冻干，以得到通过硅胶色谱法(30％-50％ EtOAc/庚烷梯度)再次纯化的材料，随后冻干以得到呈黄色固体的17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(40mg，40％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.19(d,J＝6.4Hz,1H),5.97(s,2H),5.32-5.22(m,1H),4.61(s,1H),2.58-2.51(m,1H),2.47-2.31(m,1H),2.27-2.11(m,1H),2.10-1.98(m,1H),1.89-1.74(m,1H),1.64-1.42(m,2H),1.36(s,3H),1.35-1.29(m,1H),1.27(s,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.30(s,3F),-99.00至-100.99(m,2F).ESI-MS m/z计算值421.1537，实测值422.2(M+1)+；保留时间：4.45分钟(LC方法AA)。
将含有第二洗脱化合物的部分在减压下浓缩。将残余物放入乙腈(2.5mL)中，并且加入水(2.2mL)。将所得澄清黄色溶液冻干，以得到通过硅胶色谱法(30％-50％ EtOAc/庚烷梯度)再次纯化的材料，随后冻干以得到呈黄色固体的17-氨基-7,7-二氟-12,12-二甲基-15-(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(41mg，41％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(s,1H),7.19(d,J＝6.4Hz,1H),5.97(s,2H),5.32-5.23(m,1H),4.61(s,1H),2.58-2.51(m,1H),2.46-2.31(m,1H),2.28-2.11(m,1H),2.10-1.99(m,1H),1.89-1.75(m,1H),1.63-1.42(m,2H),1.36(s,3H),1.35-1.29(m,1H),1.27(s,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.29(s,3F),-99.01至-100.95(m,2F).ESI-MS m/z计算值421.1537，实测值422.2(M+1)+；保留时间：4.45分钟(LC方法AA)。
实例120：[(6R)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]硼酸(化合物220)的制备
步骤1：[(6R)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]硼酸(化合物220)
向(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(225mg，0.4963mmol)和双(频哪醇)二硼(375mg，1.4767mmol)于乙腈(6mL)中的溶液中加入亚硝酸叔丁酯(346.80mg，0.4mL，3.3631mmol)，并且将混合物在80℃下搅拌15分钟。将挥发物在减压下去除，并且将粗材料与此同一反应的另一批次合并，所述反应使用了(6R)-17-氨基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(117mg，0.2581mmol)、双(频哪醇)二硼(160mg，0.6301mmol)、亚硝酸叔丁酯(108.38mg，0.125mL，1.051mmol)和乙腈(3mL)。通过反相色谱法(C18柱，5％-100％甲醇/水(0.1％甲酸改性剂)梯度对合并的粗产物进行纯化，在此期间将频哪醇硼酸酯水解成硼酸，从而得到呈黄色固体的[(6R)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]硼酸(37mg，42％纯度)。将此材料(0.0322mmol)与由类似合成(12mg，78％纯度，0.0194mmol)和(17mg，60％纯度，0.0212mmol)制备的相同材料的另外两个批次合并，并且通过反相色谱法(C18柱，5％-100％乙腈/碱性水(碳酸氢铵/氢氧化铵缓冲液pH＝10)梯度)对合并的材料进一步纯化，以得到冻干后呈淡黄色固体的[(6R)-6-羟基-12,12-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(17),2,4,14(18),15-五烯-17-基]硼酸(8.8mg，2％总产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.14(s,1H),7.72(s,1H),5.52(s,1H),2.97-2.84(m,1H),2.34-2.21(m,1H),2.09-1.96(m,1H),1.74-1.65(m,1H),1.63-1.53(m,1H),1.43(br.s.,7H),1.36(s,3H),1.29-1.18(m,1H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.02(s,3F),-78.34(s,3F).ESI-MS m/z计算值482.156，实测值481.2(M-1)-；保留时间：3.81分钟(LC方法BB)。
实例121：17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物221)和17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物222)的制备
步骤1：5,5-二甲基噁庚-2-酮
向4,4-二甲基环己酮(6.1g，48.338mmol)于二氯甲烷(120mL)中的溶液中加入间氯过氧苯甲酸(17.5g，75％w/w，76.058mmol)。将混合物在室温下在暗处搅拌2天并过滤。将滤饼用二氯甲烷-戊烷(1:1，20mL)洗涤。在0℃下将滤液加入到碳酸钠(6g，56mmol)、水(50mL)和10％硫代硫酸钠水溶液(50mL)的混合物中。将所得混合物在0℃下搅拌10分钟，并转移到分液漏斗中。将有机层用饱和NaHCO3(50mL)和盐水(20mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以得到呈白色固体的5,5-二甲基噁庚-2-酮(6.87g，100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.22–4.18(m,2H),2.62-2.58(m,2H),1.67-1.63(m,2H),1.58-1.54(m,2H),1.02(s,6H).ESI-MS m/z计算值142.0994，实测值143.2(M+1)+；保留时间：1.54分钟。(LC方法E)。
步骤2：6-羟基-4,4-二甲基-己酸甲酯
向5,5-二甲基噁庚-2-酮(6.87g，48.314mmol)于MeOH(100mL)中的溶液中加入硫酸(0.8g，0.4348mL的95％w/w，7.7488mmol)。将混合物在回流下搅拌1小时。将混合物浓缩，并将残余物放入二乙醚(100mL)。将所得溶液用饱和NaHCO3(50mL)、盐水(20mL)洗涤，并且用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(100mL)中，并且用Na2SO4再次干燥，过滤并浓缩，以得到8.02g的无色油，所述无色油由所需产物，6-羟基-4,4-二甲基-己酸甲酯和杂质，(6-甲氧基-3,3-二甲基-6-氧代-己基)6-羟基-4,4-二甲基-己酸酯的5:1混合物组成。所需产物，6-羟基-4,4-二甲基-己酸甲酯，表征：ESI-MS m/z计算值316.225，实测值317.3(M+1)+；保留时间：1.98分钟(LC方法E)。将不纯产物混合物直接带到随后的步骤。
步骤3：4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酸甲酯
在0℃下向7.2g的6-羟基-4,4-二甲基-己酸甲酯与杂质(6-甲氧基-3,3-二甲基-6-氧代-己基)6-羟基-4,4-二甲基-己酸酯的5:1混合物于二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入Et3N(10g，83.98mmol)，随后加入甲苯磺酰氯(10g，52.453mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入冰水(100mL)。将混合物用二氯甲烷(3X 50mL)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到11.8g的无色油，所述无色油由所需产物4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酸甲酯和杂质6-[4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酰基]氧基-4,4-二甲基-己酸酯的5:1混合物组成。所需产物，4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酸甲酯，表征：ESI-MS m/z计算值470.2338，实测值471.3(M+1)+；保留时间：2.27分钟(LC方法E)。将不纯产物混合物直接带到随后的步骤。
步骤4：6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己酸甲酯
向11.8g的4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酸甲酯和杂质6-[4,4-二甲基-6-(对甲苯磺酰氧基)己酰基]氧基-4,4-二甲基-己酸酯的5:1混合物于正丁醇(150mL)中的溶液中加入二苄基胺(21g，106.45mmol)，随后加入DIEA(4g，5.3908mL，30.949mmol)。将混合物在100℃下搅拌45小时，冷却并浓缩。将残余物(47g)溶解于乙酸乙酯(300mL)中，并且用饱和NaHCO3(200mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈无色油的6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己酸甲酯(7.59g，50％(3步骤))。ESI-MS m/z计算值353.2355，实测值354.3(M+1)+；保留时间：1.8分钟(LC方法E)。
步骤5：6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己-1-醇
在0℃下在10分钟内向LiAlH4(1.13g，29.773mmol)于THF(100mL)中的悬浮液中加入6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己酸甲酯(7.59g，21.471mmol)于THF(100mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜并且冷却至0℃。加入THF(150mL)，随后缓慢加入水(1.2g)于THF(10mL)中的溶液、25％ NaOH水溶液(1.2g)和水(3.6g)。将所得混合物在室温下搅拌30分钟，通过硅藻土过滤，并将滤饼用THF洗涤。将滤液用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈无色油的6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己-1-醇(6.69g，96％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.16(m,10H),3.57(br.s,4H),3.51-3.37(m,3H),2.52-2.30(m,2H),1.62-1.51(m,3H),1.42-1.30(m,3H),0.80(s,6H).ESI-MS m/z计算值325.2406，实测值326.3(M+1)+；保留时间：1.72分钟(LC方法E)。
步骤6：N,N-二苄基-6-溴-3,3-二甲基-己-1-胺
在0℃下向6-(二苄基氨基)-4,4-二甲基-己-1-醇(6.69g，20.554mmol)于二氯甲烷(200mL)中的溶液中加入四溴化碳(8.2g，24.727mmol)和三苯基膦(6.6g，25.163mmol)。将混合物缓慢温热至室温，并在室温下搅拌过夜。将混合物在硅胶上浓缩，并且通过硅胶色谱法(用0％至10％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱)进行纯化，以得到呈无色油的N,N-二苄基-6-溴-3,3-二甲基-己-1-胺(6.04g，76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.28(m,8H),7.26-7.19(m,2H),3.57(s,4H),3.25(t,J＝6.8Hz,2H),2.47-2.38(m,2H),1.76-1.65(m,2H),1.49-1.42(m,2H),1.23-1.15(m,2H),0.80(s,6H).ESI-MS m/z计算值387.1562，实测值388.2(M+1)+；保留时间：1.95分钟(LC方法E)。
步骤7：8-(二苄基氨基)-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯
在氮气下向配备有回流冷凝器的干100mL三颈烧瓶装入镁(581mg，23.905mmol)和碘(185mg，0.7289mmol)，并且将混合物在室温下搅拌平整10分钟，并且然后加热至40℃。在8分钟内逐滴加入N,N-二苄基-6-溴-3,3-二甲基-己-1-胺(4.61g，11.87mmol)于二乙醚(7mL)中的溶液。将混合物在40℃下搅拌10分钟，并且然后在30℃下搅拌1小时。将所得混合物冷却至室温，并且用二乙醚(7mL)稀释，然后在-78℃下通过注射器在15分钟内逐滴加入到三氟丙酮酸乙酯(2g，11.759mmol)于THF(45mL)中的冷却溶液中。将混合物在-78℃下搅拌10分钟。使反应混合物在1小时内缓慢温热至室温，并在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至0℃，并且用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭。将所得混合物用乙酸乙酯(3X100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物(6.5g)进行纯化，以得到呈无色油的8-(二苄基氨基)-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(2.13g，37％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38-7.27(m,8H),7.25-7.18(m,2H),4.34(q,J＝7.1Hz,2H),3.76(s,1H),3.60-3.49(m,4H),2.39(dd,J＝79.8,5.1Hz,2H),1.93-1.81(m,1H),1.80-1.69(m,1H),1.47-1.37(m,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H),1.13-1.03(m,2H),1.01-0.90(m,1H),0.75(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-78.65(s,3F).ESI-MS m/z计算值479.2647，实测值480.3(M+1)+；保留时间：2.05分钟(LC方法E)。
步骤8：8-氨基-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯
将8-(二苄基氨基)-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(2.13g，4.4414mmol)和20％氢氧化钯碳(360mg，50％湿润，10％w/w，0.2563mmol)于EtOH(60mL)中的混合物在室温下在氢气(气球)下搅拌24小时。加入更多20％氢氧化钯碳(360mg，50％湿润，10％w/w，0.2563mmol)。将混合物在室温下在氢气(气球)下搅拌2天。将混合物通过硅藻土过滤并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩并与庚烷/EtOAc共蒸发(以去除EtOH的痕量)，以得到呈无色油的8-氨基-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1.32g，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.43-4.31(m,2H),2.68(dd,J＝10.3,6.1Hz,2H),2.15(br.s,3H),1.99-1.90(m,1H),1.87-1.76(m,1H),1.55-1.42(m,1H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H),1.30-1.14(m,4H),1.10-0.99(m,1H),0.85(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-78.64(s,3F).ESI-MS m/z计算值299.1708，实测值300.2(M+1)+；保留时间：1.69分钟(LC方法E)。
步骤9：6-[(7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-7-羟基-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
向8-氨基-2-羟基-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1.32g，4.4098mmol)于乙腈(25mL)中的溶液中加入6-氯-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.3g，4.5682mmol)和DIEA(2.8g，3.7736mL，21.665mmol)。将混合物在60至65℃下搅拌2.5小时。将混合物冷却至室温，并在硅胶上浓缩。通过用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的6-[(7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-7-羟基-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.86g，77％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝0.7Hz,1H),5.59(br.s,1H),4.37(q,J＝6.9Hz,2H),4.02(s,3H),3.85(s,1H),3.63-3.54(m,2H),2.01-1.91(m,1H),1.90-1.80(m,1H),1.54-1.44(m,2H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H),1.31-1.18(m,3H),1.13-1.01(m,1H),0.92(d,J＝2.4Hz,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.31(s,3F),-78.63(s,3F).ESI-MS m/z计算值547.1753，实测值548.2(M+1)+；保留时间：2.24分钟(LC方法E)。
步骤10：6-[(7-苄氧基-7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下向6-[(7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-7-羟基-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.63g，2.9775mmol)于DMF(16mL)中的溶液中逐滴加入NaH(253mg，60％w/w，6.3256mmol)。将混合物在0℃下搅拌20分钟。加入苄基溴(766mg，4.4786mmol)。将混合物缓慢温热至室温，并在室温下搅拌3小时。将混合物冷却至0℃，并加入NH4Cl(0.6g)。将混合物在0℃下搅拌30分钟。加入碎冰(80g)。将混合物搅拌，直到大部分冰融化。通过过滤收集沉淀，并且溶解于EtOAc(20mL)中。将滤液用叔丁基甲基醚/庚烷(2:1，2X 80mL)萃取。将所有有机层(沉淀溶解于EtOAc中，并且洗涤叔丁基甲基醚/庚烷)合并，并且用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用0％至20％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的6-[(7-苄氧基-7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.965g，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.44-7.27(m,5H),5.56(br.s,1H),4.81(d,J＝10.8Hz,1H),4.64(d,J＝11.0Hz,1H),4.33(qd,J＝7.1,0.9Hz,2H),4.01(s,3H),3.58-3.49(m,2H),2.01-1.92(m,2H),1.54-1.44(m,4H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H),1.25-1.18(m,2H),0.90(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.31(s,3F),-70.52(s,3F).ESI-MS m/z计算值637.2223，实测值638.3(M+1)+；保留时间：2.47分钟(LC方法E)。
步骤11：2-苄氧基-8-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯
将压力管中的6-[(7-苄氧基-7-乙氧基羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.96g，2.8282mmol)和一水合肼(1.23g，24.57mmol)于MeOH(30mL)中的混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，并且将残余物溶解于EtOAc中，并用水(20mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用20％至60％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶色谱法对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色固体的2-苄氧基-8-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1.67g，93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.43-7.29(m,5H),5.48(br.s,1H),4.82(d,J＝10.5Hz,1H),4.64(d,J＝10.8Hz,1H),4.38-4.29(m,2H),4.11(br.s,2H),3.55-3.45(m,2H),2.03-1.93(m,2H),1.60-1.42(m,4H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H),1.28-1.20(m,3H),0.92(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.28(s,3F),-70.40(s,3F).ESI-MS m/z计算值637.2335，实测值638.3(M+1)+；保留时间：2.27分钟(LC方法E)。
步骤12：2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯
向2-苄氧基-8-[[6-(肼羰基)-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1.67g，2.6193mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(55mg，0.4502mmol)和二异丙基乙胺(1.1g，1.4825mL，8.5111mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(1.5g，1.5789mL，6.8729mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在硅胶上浓缩。通过用0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱的硅胶对残余物进行纯化，以得到呈浅黄色油的2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1.21g，63％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),7.44-7.28(m,5H),5.50(br.s,1H),4.80(d,J＝10.8Hz,1H),4.64(d,J＝10.3Hz,1H),4.38-4.28(m,2H),3.58-3.47(m,2H),2.00-1.88(m,2H),1.58(s,9H),1.55-1.47(m,6H),1.39-1.30(m,5H),0.89(s,6H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-63.97(s,3F),-70.41--70.51(m,3F).ESI-MS m/z计算值737.2859，实测值682.3(M-55)+；保留时间：2.68分钟(LC方法E)。
步骤13：2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸
向2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸乙酯(1g，1.3556mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中加入NaOH(230mg，5.7504mmol)于水(5mL)中的溶液。将混合物在45℃下搅拌5小时，并且在43℃下搅拌16小时。将混合物冷却至室温，并在减压下浓缩，以去除大部分MeOH。将残余物用水(10mL)稀释并冷却至0℃。逐滴加入HCl水溶液(1N，5.3mL)。将所得混合物用EtOAc(3X 20mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以得到受一些双-Boc副产物污染的呈浅黄色泡沫的2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸(914mg，95％)。ESI-MSm/z计算值709.25464，实测值654.2(M-55)+；保留时间：4.9分钟(LC方法AA)。
步骤14：6-[(7-苄氧基-7-羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸
向2-苄氧基-8-[[6-[(叔丁氧基羰基氨基)氨基甲酰]-5-硝基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-6,6-二甲基-2-(三氟甲基)辛酸(914mg，1.2880mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中逐滴加入含HCl的1,4-二噁烷(10mL的4M，40mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。在30℃下将反应混合物在减压下浓缩，并且与EtOAc(3X 20mL)共蒸发。通过反相色谱法(5％至80％乙腈/水梯度)对残余物进行纯化。将所需部分在减压下浓缩，并且将残余物冻干，以得到呈浅黄色固体的6-[(7-苄氧基-7-羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(450mg，57％)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-63.16至-63.54(m,3F),-70.23至-70.52(m,3F).ESI-MS m/z计算值595.1753，实测值596.3(M+1)+；保留时间：3.2分钟(LC方法C)。
步骤15：9-苄氧基-5,5-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮
向6-[(7-苄氧基-7-羰基-8,8,8-三氟-3,3-二甲基-辛基)氨基]-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(42mg，0.0635mmol)于DMF(30mL)中的溶液中加入DIEA(60mg，0.4642mmol)、二甲替乙酰胺中的1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.16mL的1M，0.16mmol)和六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)磷酯(80mg，0.1809mmol)。将混合物在30℃下搅拌，并且在16小时的时间段内逐滴加入用DMF(5mL)稀释的含肼的THF(0.08mL的1M，0.08mmol)中的溶液。加入后，将反应混合物在30℃下搅拌3小时并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法使用0％至40％乙酸乙酯/庚烷梯度进行纯化，得到了呈浅黄色油的9-苄氧基-5,5-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮(37mg，84％，纯度＝85％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(br.s,1H),8.06(br.s,1H),7.49-7.28(m,4H),7.03-6.89(m,2H),5.44(br.s,1H),4.69-4.51(m,1H),4.46-4.18(m,2H),3.28-3.13(m,1H),2.38-2.24(m,1H),2.17-2.06(m,1H),1.92-1.74(m,1H),1.45-1.29(m,5H),0.99(s,3H),0.93(s,3H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-63.92(s,3F),-74.18(s,3F).ESI-MS m/z计算值591.1916，实测值592.2(M+1)+；保留时间：4.62分钟(LC方法AA)。
步骤16：6-苄氧基-10,10-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯
在0℃下向9-苄氧基-5,5-二甲基-15-硝基-9,17-双(三氟甲基)-2,11,12,18-四氮杂二环[12.3.1]十八碳-1(17),14(18),15-三烯-10,13-二酮(55mg，0.0895mmol)于二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入DIEA(70mg，0.5416mmol)，随后逐滴加入三氟甲磺酸酐(51mg，0.1808mmol)。将混合物在0℃下搅拌50分钟。加入吗啉(150mg)以淬灭反应。在0℃下搅拌5分钟后，将混合物用饱和NaHCO3水溶液(6mL)处理并且用二氯甲烷(3X 10mL)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至30％乙酸乙酯/庚烷梯度)进行纯化，得到呈浅黄色油的6-苄氧基-10,10-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(46mg，87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(s,1H),7.37-7.27(m,5H),5.99-5.88(m,1H),5.00-4.90(m,2H),3.68-3.54(m,1H),3.51-3.39(m,1H),2.41-2.30(m,1H),2.29-2.18(m,1H),1.70-1.59(m,1H),1.51-1.31(m,5H,与庚烷重叠),0.89(s,3H,与庚烷重叠),0.87(s,3H,与庚烷重叠).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.16(s,3F),-73.53(s,3F).ESI-MS m/z计算值573.1811，实测值574.2(M+1)+；保留时间：5.19分钟(LC方法AA)。
步骤17：17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇
向6-苄氧基-10,10-二甲基-17-硝基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯(46mg，0.0779mmol)于MeOH(5mL)中的溶液加入10％钯碳(46mg，50％湿润，5％w/w，0.0216mmol)。将烧瓶中的空气用通过真空的氮气替代3次。将烧瓶中的氮气用通过真空的氢气替代6次。通过注射器加入含氨的MeOH(0.38mL的2M，0.76mmol)。将反应混合物在室温下在氢气气氛(气球)下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于MeOH(5mL)中。加入10％ Pd/C(60mg，50％湿润，5％w/w，0.0282mmol)。将烧瓶中的空气用通过真空的氮气替代3次。将烧瓶中的氮气用通过真空的氢气替代6次。通过注射器加入含氨的MeOH(0.38mL的2M，0.76mmol)。将反应混合物在室温下在氢气气氛(气球)下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗涤，并且将滤液在真空中浓缩。通过硅胶色谱法(10％至40％ EtOAc/庚烷梯度)进行纯化，得到呈黄色固体的17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(25mg，71％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(s,1H),4.82(br.s,1H),3.77(br.s,1H),3.56(td,J＝12.8,4.2Hz,1H),3.33(td,J＝12.9,4.5Hz,1H),2.33-2.16(m,2H),1.88-1.61(m,3H),1.59-1.41(m,3H),1.33-1.14(m,2H),0.92(s,3H),0.87(s,3H).19F NMR(377MHz,CDCl3)δ-64.09(s,3F),-79.37(s,3F).ESI-MS m/z计算值453.1599，实测值454.2(M+1)+；保留时间：4.67分钟(LC方法AA)。
步骤18：17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(化合物221)和17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(化合物222)
通过使用以下条件的SFC对外消旋17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(41mg，0.0905mmol)进行纯化：菲罗门Lux 5μm，纤维素4柱(250x 21.2mm)；9.6mg/注射；洗脱液：10％ MeOH，90％ CO2；流速：75毫升/分钟；浓度：甲醇中的13.7mg/mL(无改性剂)，注射体积：700μL；出口压：100bar；波长：220nm；温度：40℃。
含有来自手性SFC分离的第一洗脱化合物的部分在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至40％ EtOAc/庚烷梯度)对残余物再次进行纯化并且冻干，以得到呈黄色固体的17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体1)(13mg，32mg，99.9％ee)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(s,1H),7.55(s,1H),6.18(t,J＝5.3Hz,1H),5.89-5.79(m,2H),3.48-3.35(m,1H),3.28-3.15(m,1H),2.24-2.12(m,1H),2.11-2.00(m,1H),1.77-1.57(m,3H),1.55-1.44(m,1H),1.43-1.26(m,2H),0.87(s,3H),0.83(s,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.94(s,3F),-78.03(s,3F).ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：4.68分钟(LC方法AA)。
含有来自手性SFC分离的第二洗脱化合物的部分在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(0％至40％ EtOAc/庚烷梯度)对残余物再次进行纯化并且冻干，以得到呈黄色固体的17-氨基-10,10-二甲基-6,15-双(三氟甲基)-19-氧杂-3,4,13,18-四氮杂三环[12.3.1.12,5]十九碳-1(18),2,4,14,16-五烯-6-醇(对映异构体2)(18mg，44mg，99.9％ee)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57(s,1H),7.55(s,1H),6.18(t,J＝5.1Hz,1H),5.91-5.76(m,2H),3.47-3.35(m,1H),3.28-3.16(m,1H),2.24-2.12(m,1H),2.11-2.00(m,1H),1.77-1.57(m,3H),1.54-1.44(m,1H),1.43-1.26(m,2H),0.87(s,3H),0.83(s,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-62.94(s,3F),-78.03(s,3F).ESI-MS m/z计算值453.15994，实测值454.2(M+1)+；保留时间：4.68分钟(LC方法AA)。
实例122：生物活性分析
CFTR介导的短路电流的尤斯室测定
使用衍生自CF受试者的F508del和最小功能CFTR突变(F508del/MF-HBE)杂合的人支气管上皮(HBE)细胞进行尤斯室实验，并且如先前所述(Neuberger T,Burton B,ClarkH,Van Goor F《分子生物学方法(Methods Mol Biol)》2011:741:39-54)进行培养。在四天之后，移除顶端培养基，并且在使用前在空气液体界面生长细胞>14天。这导致有纤毛的完全分化的柱状细胞的单层，所述细胞的特征是人支气管气道上皮的特征。
为了分离CFTR介导的短路(ISC)电流，将SnapwellTM细胞培养插入物上生长的F508del/MF-HBE安装在尤斯室中，并且在电压钳记录条件(V保持＝0mV)下在37℃下测量跨上皮ISC。基底外侧溶液含有(以mM为单位)145NaCl、0.83K2HPO4、3.3KH2PO4、1.2MgCl2、1.2CaCl2、10葡萄糖、10HEPES(用NaOH将pH调节至7.4)，并且顶端溶液含有(以mM为单位)145葡糖酸钠、1.2MgCl2、1.2CaCl2、10葡萄糖、10HEPES(用NaOH将pH调节至7.4)和30μM阿米洛利以阻断上皮钠通道。将佛司可林(20μM)加入到顶端表面以活化CFTR，随后顶端加入由BPO、GlyH-101和CFTR抑制剂172(各自在20μM最终测定浓度下)组成的CFTR抑制剂混合物以特异性分离CFTR电流。根据抑制后对稳态电流的佛司可林峰响应确定每种条件下的CFTR介导的ISC(μA/cm2)。
增效剂化合物的鉴定
在尤斯室研究中如上所述确定了CFTR增效剂化合物对CFTR介导的ISC的活性。在37℃下并且在20％人血清存在的情况下将F508del/MF-HBE细胞培养物用以一定浓度范围的增效剂化合物与10μM的(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮相合并温育18-24小时。将增效剂化合物的浓度和在18-24小时温育期间使用的(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮在贯穿CFTR-介导的ISC的尤斯室测量期间保持恒定，以确保贯穿整个实验都存在化合物。将假定的F508del增效剂的功效和效力与已知的顶点增效剂的功效和效力进行比较，依伐卡托(ivacaftor)(N-[2,4-双(1,1-二甲基乙基)-5-羟基苯基]-1,4-二氢-4-氧代喹啉-3-甲酰胺)。
下表表示了使用此实例中所描述的测定产生的本发明的代表性化合物的CFTR调节活性(EC50:+++为<500μM；++为500nM–1μM；+为>1μM；并且ND为“在此测定中未判定到”)。
表10：生物活性
其它实施例
前述论述仅公开并描述了本公开的示例性实施例。所属领域的技术人员将从此类论述以及从附图和权利要求书中容易地认识到，在不脱离如以下权利要求书中限定的本公开的精神和范围的情况下，可在其中进行各种改变、修改和变化。

Claims (87)

1.一种选自式I化合物的化合物：
以及其氘化衍生物和药学上可接受的盐，其中：
X选自-N(RX1)-和
环A是任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基和氧代的基团取代的4至6元杂环基；
RX1选自H、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、氧代、-ORX2和-N(RX2)2的基团取代)；以及C3-C8环烷基；
每个RX2独立地选自H和C1-C6烷基；
每个Y独立地选自-C(RY)2-、-O-、-CO-、-NRYN-和其中每个RYN独立地选自H、C1-C4烷基和CO2RYN1，其中每个RYN1独立地选自C1-C4烷基和C3-C6环烷基；
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-ORY1、-CO2RY1、-CORY1、-CON(RY1)2和-N(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上；
每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基；
环B选自：
■C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的基团取代)；
■C3-C8环烷基，
■5至10元杂芳基；以及
■3至6元杂环基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；
每个Q独立地选自：
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷基：
○卤素；
○氧代；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和-OCF3的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C3-C8环烷基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、-NH2和-NHCOMe的基团取代)；
○C1-C6烷氧基；
○C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C3-C8环烷基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的C6-C10芳基：
○卤素；
○CN、
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和羟基的基团取代)；
○任选地被1-4个独立地选自以下的基团取代的C1-C6烷氧基：
■卤素；
■C3-C8环烷基(其任选地被CF3取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素、CF3、OCF3和C1-C6烷基的基团取代)；以及
○C6-C10芳基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的5至10元杂芳基：
○卤素；
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)；
○C3-C8环烷基(其任选地被1-3个CF3基团取代)；以及
○3至10元杂环基，
■任选地被1-3个独立地选自以下的基团取代的3至10元杂环基：
○C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自氧代和C3-C8环烷基的基团取代)；以及
○氧代；
每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自羟基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2、-PO(OR2)2和-PO(R2)2；
每个R2独立地选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-6个独立地选自卤素的基团取代)、C1-C6氟代烷基和C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷基和C1-C6氟代烷氧基的基团取代)；
Z选自其中环C选自C6-C10芳基和5至10元杂芳基；
RZ1选自氢、-CN、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基；
RZ2选自氢、卤素、羟基、NH2、NH(CO)(C1-C6烷基)以及C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)，
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团；
每个RZ3独立地选自羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基和C6-C10芳基；或两个RZ3一起形成3至6元杂环基；
n选自4、5、6、7和8；并且
m选自0、1、2和3。
2.根据权利要求1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X是-N(RX1)-。
3.根据权利要求1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X是
4.根据权利要求1所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中X选自：
-NH-、-N(CH3)-、-N(CH2CH3)-、
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
每个RY独立地选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基(其任选地被1-3个独立地选自羟基、C1-C6烷氧基和Q的基团取代)、C3-C8环烷基、C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素的基团取代)、5至10元杂芳基、-CO2RY1和-CON(RY1)2；
或同一原子上的两个RY一起形成选自C3-C8环烷基和3至7元杂环基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个RY1独立地选自氢和C1-C6烷基，或与同一个氮键合的两个RY1一起形成3至6元杂环基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个Q独立地选自C6-C10芳基。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个Q是苯基。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
每个RY独立地选自：
氢、羟基、-CH3、-CD3、-CH2CH3、
或同一原子上的两个RY一起形成选自环丁基、环戊基、环己基、四氢吡喃基和四氢呋喃基的环；
或两个RY一起形成π键，所述两个RY中的一个位于一个原子上并且其中的第二个位于相邻原子上。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和5至10元杂芳基。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自苯基(其任选地被1-3个独立地选自卤素和C1-C6烷氧基的基团取代)和吡啶基。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环B选自：
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中n选自4、5、6和7。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中-(Y)n-是选自以下的基团：
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R1独立地选自卤素、C1-C6氟代烷基、C1-C6烷基(其任选地被选自C6-C10芳基的基团取代)、-OR2、-N(R2)2、-CO2R2、-CO-N(R2)2、-CN、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5至6元杂芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6烷基的基团取代)、3至6元杂环基、-B(OR2)2、-SO2R2、-SR2、-SOR2和-PO(R2)2。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R2独立地选自C6-C10芳基(其任选地被1-3个独立地选自C1-C6氟代烷氧基的基团取代)。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中每个R1独立地选自-Br、-CF3、-NH2、-CH3、-CH(CH3)2、-CN、-OH、-OCH3、-NH(CH3)、-NH(CH2CH3)、-CONH2、-CO2CH3、-SO2CH3、-SO2Ph、PO(CH3)2、B(OH)2、苯基、吡啶基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、环丙基、环己基、咪唑基、
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z选自其中环C选自C6-C10芳基。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中基团：
选自：
20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中基团：
是
21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基、C6-C10芳基和5至6元杂芳基。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ2选自氢、卤素、羟基和C1-C6烷氧基(其任选地被1-3个独立地选自C3-C10环烷基的基团取代)。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
RZ1选自氢、C1-C6烷基(其任选地被1-3个羟基取代)、C1-C6氟代烷基、3至6元杂环基、C3-C6环烷基和C6-C10芳基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：
RZ1选自氢、CH3、CF3、CH2OH、苯基、环丙基和四氢吡喃基；并且
RZ2选自氢、卤素和羟基；
或RZ1和RZ2一起形成选自氧代和＝N-OH的基团。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中RZ2是羟基。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z选自：
27.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中m选自1和2。
28.一种选自表10的化合物的化合物、其药学上可接受的盐以及前述中的任一项的氘化衍生物。
29.根据权利要求28所述的化合物，其中所述化合物选自：
。
30.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至29中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物以及药学上可接受的载体。
31.根据权利要求30所述的药物组合物，其进一步包括一种或多种另外的治疗剂。
32.根据权利要求31所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括具有CFTR调节活性的化合物或其盐或氘化衍生物。
33.根据权利要求31或32所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR校正剂。
34.根据权利要求31至33中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物II)：
35.根据权利要求31至34中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物IV)：
36.根据权利要求31至35中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物V)：
37.根据权利要求31至36中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物VI)：
38.根据权利要求31至37中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮(化合物VII)：
39.根据权利要求31至38中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮(化合物VIII)：
40.根据权利要求31至39中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766和PTI-801。
41.根据权利要求31至40中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂增强剂。
42.根据权利要求31至41中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ASP-11。
43.根据权利要求31至42中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂。
44.根据权利要求31至43中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括选自以下的化合物：N-(5-羟基-2,4-二-叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺(化合物III)：
以及N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺(化合物III-d)：
45.根据权利要求31至44中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托(Icenticaftor))、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托(Navocaftor))和ABBV-191。
46.根据权利要求31至45中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR扩增剂。
47.根据权利要求31至46中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括PTI-428。
48.根据权利要求31至47中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR通读剂。
49.根据权利要求31至48中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ELX-02。
50.根据权利要求31至49中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括核酸疗法。
51.根据权利要求31至50中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的药剂：MRT5005、Lunar-CF和RCT223。
52.根据权利要求31至51中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ENaC抑制剂。
53.根据权利要求31至52中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括阿米洛利(amiloride)、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634和ARO-ENaC1001。
54.根据权利要求31至53中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括TMEM16A调节剂。
55.根据权利要求31至54中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ETD002。
56.根据权利要求31至55中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括GPR39激动剂。
57.根据权利要求31至56中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括DS-1039。
58.一种治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的根据权利要求1至29中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据权利要求30至57中任一项所述的药物组合物。
59.根据权利要求58所述的方法，其进一步包括施用一种或多种另外的治疗剂。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括具有CFTR调节活性的化合物或其盐或氘化衍生物。
61.根据权利要求59或60所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR校正剂。
62.根据权利要求59至61中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物II)：
63.根据权利要求59至62中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物IV)：
64.根据权利要求59至63中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(1,3-二甲基吡唑-4-基)磺酰基-6-[3-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙氧基)吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物V)：
65.根据权利要求59至64中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括N-(苯磺酰基)-6-[3-[2-[1-(三氟甲基)环丙基]乙氧基]吡唑-1-基]-2-[(4S)-2,2,4-三甲基吡咯烷-1-基]吡啶-3-甲酰胺(化合物VI)：
66.根据权利要求59至65中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(14S)-8-[3-(2-{二螺[2.0.2.1]庚-7-基}乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-12,12-二甲基-2λ6-硫杂-3,9,11,18,23-五氮杂四环[17.3.1.111,14.05,10]二十四碳-1(22),5,7,9,19(23),20-六烯-2,2,4-三酮(化合物VII)：
67.根据权利要求59至66中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括(11R)-6-(2,6-二甲基苯基)-11-(2-甲基丙基)-12-{螺[2.3]己-5-基}-9-氧杂-2λ6-硫杂-3,5,12,19-四氮杂三环[12.3.1.14,8]十九碳-1(17),4(19),5,7,14(18),15-六烯-2,2,13-三酮(化合物VIII)：
68.根据权利要求59至67中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：PTI-428、ABBV-2222、ABBV-2851、GLPG2737、ABBV-3221、ABBV-3748、ABBV-3903、ABBV-119、ABBV-2851、FDL-169、ARN5562、ARN21586、ARN22081、ARN22652、ARN23765、ARN23766和PTI-801。
69.根据权利要求59至68中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂增强剂。
70.根据权利要求59至69中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ASP-11。
71.根据权利要求59至70中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR增效剂。
72.根据权利要求59至71中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括选自以下的化合物：N-(5-羟基-2,4-二-叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺(化合物III)：
以及N-(2-(叔丁基)-5-羟基-4-(2-(甲基-d3)丙-2-基-1,1,1,3,3,3-d6)苯基)-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-甲酰胺(化合物III-d)：
73.根据权利要求59至72中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的化合物：FDL-176、PTI-808、GLPG1837、GLPG2451/ABBV-2451(伊森卡托)、GLPG3067/ABBV-3067(纳沃卡托)和ABBV-191。
74.根据权利要求59至73中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR扩增剂。
75.根据权利要求59至74中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括PTI-428。
76.根据权利要求59至75中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括CFTR通读剂。
77.根据权利要求59至76中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ELX-02。
78.根据权利要求59至77中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括核酸疗法。
79.根据权利要求59至78中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括至少一种选自以下的药剂：MRT5005、Lunar-CF和RCT223。
80.根据权利要求59至79中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ENaC抑制剂。
81.根据权利要求59至80中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括阿米洛利、ETD001、CF552、GS-9411、GS-5737、P-1037(VX-371)、P-1055(VX-551)、AZD5634、SPX-101、Ionis-ENaC-2.5Rx、BI 1265162、AZ5634和ARO-ENaC1001。
82.根据权利要求59至81中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括TMEM16A调节剂。
83.根据权利要求59至82中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括ETD002。
84.根据权利要求59至83中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括GPR39激动剂。
85.根据权利要求59至84中任一项所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括DS-1039。
86.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据权利要求30至57中任一项所述的药物组合物，其用于治疗囊性纤维化。
87.一种根据权利要求1至29中任一项所述的化合物、盐或氘化衍生物或根据权利要求30至57中任一项所述的药物组合物用于制备用于治疗囊性纤维化的药物的用途。
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