CN116655626A - 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116655626A
CN116655626A CN202310588059.6A CN202310588059A CN116655626A CN 116655626 A CN116655626 A CN 116655626A CN 202310588059 A CN202310588059 A CN 202310588059A CN 116655626 A CN116655626 A CN 116655626A
Authority
CN
China
Prior art keywords
imidazo
mmol
preparation
reaction
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310588059.6A
Other languages
English (en)
Inventor
黄强
吴律嘉
黎江东
赵长阔
王先恒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zunyi Medical University
Original Assignee
Zunyi Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zunyi Medical University filed Critical Zunyi Medical University
Priority to CN202310588059.6A priority Critical patent/CN116655626A/zh
Publication of CN116655626A publication Critical patent/CN116655626A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种含咪唑并[l,2‑a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，该化合物具有如式(Ⅰ)所示的结构：

Description

一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制 备方法和用途
技术领域
本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途。
背景技术
近十多年来，肿瘤靶向治疗取得了许多突破性进展，其中，基于酪氨酸激酶(tyrosine kinase,TKs)设计的各种靶向抑制剂对多种恶性肿瘤显示出了突出的治疗效果。TKs是一种酪氨酸特异性蛋白激酶，其功能是催化腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的磷酸基团转移到下游蛋白的酪氨酸的残基上发生磷酸化。目前已发现的TKs有90多种，可以分为受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinases,RTKs)，胞质酪氨酸激酶和核内酪氨酸激酶，其中RTKs研究最为广泛。
RTKs通常由三部分组成：①含有配体结合位点的细胞外结构域，②单次跨膜的疏水α螺旋区，③含有酪氨酸蛋白激酶活性的细胞内结构域。RTKs不仅被证明是正常细胞过程的关键调节因子，而且还在许多类型的癌症的发展和恶化中起关键作用，RTKs异常表达会激活一系列下游信号途径，引起级联反应，致使细胞增殖调节紊乱，最终导致肿瘤的形成。当药物与RTKs细胞内酪氨酸激酶结构域结合后，能够有效抑制RTKs的活性，从而发挥抗肿瘤效果。基于此，人们相继开发出了多种RTKs抑制剂，例如，索拉菲尼、吉非替尼、克唑替尼、吉瑞替尼、奥西替尼、劳拉替尼、卡博替尼等。这些RTKs抑制剂涉及的主要靶点包括FLT3、AXL、MET、EGFR、FGFR、VEGFR和KIT，涵盖的恶性肿瘤疾病有肺癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、淋巴癌等。因此，对酪氨酸激酶抑制剂继续深入研究，从而得到更多对酪氨酸激酶具有高抑制活性的化合物，以期为疾病的治疗提供更多的选择是非常有意义的。
发明内容
本发明意在提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，以期得到更多对酪氨酸激酶具有高抑制活性的化合物。
为了达到上述目的，本发明提供一种具有如式(Ⅰ)所示结构的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐：
式(Ⅰ)中，R1和R2各自独立地为氢、卤素、三氟甲基、羟基、羟甲基、三氟甲氧基、乙酰基、C1-C4直链或支链的烷基；
R3、R4、R5和R6各自独立地为氢、卤素、三氟甲基、羟基、氰基、硝基、氨基、羟甲基、三氟甲氧基、羧基、巯基、C1-C12直链或支链的烷基、C2-C12直链或支链的不饱和烃基、C3-C12环烃基、C3-C12杂环基、-SOR7、-SO2R7、-COR7、-COOR7、-CONR7R8、-SO2NR7R8、-OCOR7、-NR7R8、-OR7、-SR7、-SCOR7、-N(R7)COR8、-POR7R8、-PR7R8；
R7和R8各自独立地为氢、甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基、氨基、羟甲基、巯基、C2-C12直链或支链的烷基、C2-C12直链或支链的取代烷基、C2-C12直链或支链的不饱和烃基、C3-C12环烃基、C3-C12杂环基；
X为CH2、O或C＝O中的任意一种。
本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种。该药物组合物所制成的制剂包括用于口服给药的固体制剂、用于口服给药的液体制剂、用于胃肠外注射的制剂和用于局部给药的制剂。
本发明还提供上述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗酪氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物中的应用，且酪氨酸蛋白激酶介导的疾病包括肝癌、肺癌、肾癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和白血病等多种恶性肿瘤疾病。
可选地，所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物为下述化合物中的一种：
可选地，所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物的药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，所述无机盐为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐为甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。
本发明是在现有酪氨酸激酶抑制剂基础上进行的创新性结构改造，设计合成出的一系列化合物对酪氨酸激酶具有高抑制活性，对不同恶性肿瘤细胞系具有突出的抗增殖活性，可以特别地用于预防或者治疗可通过抑制酪氨酸激酶进行调节的疾病，例如肝癌、肺癌、肾癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等多种恶性肿瘤疾病。具体地，本发明中的化合物通过调节蛋白激酶的活性显示出抗癌活性，在寻求对其活性进行调节的激酶中，FLT3以及FLT3蛋白的突变体是优选的。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均为市售分析纯。
实施例1
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为氮-(4-氟苯基)-氮(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-1。
化合物A-1-1的制备方法如下：
步骤A：咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇的制备
将2-氨基-3-羟基吡啶(2.2g,20mmol)溶于50mL乙醇中，滴加10mL 40％的氯乙醛水溶液，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干乙醇，加50mL饱和NaCl加热溶解，加NaOH(20％)水溶液调节PH至8，析出固体，抽滤，干燥，得浅黄色固体产物2g，收率为75％。
步骤B：8-(4-硝基苯氧基)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇(300mg,2.238mmol)溶于4mL DMF中，依次加入1-氟-4-硝基苯(315.67mg,2.238mmol)、碳酸钾(328.98mg,3.357mmol)，于60℃下反应6h。反应完毕后，加饱和氯化铵淬灭，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，用30mL饱和NaCl洗涤有机层，之后用无水Na2SO4干燥，减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物253mg，收率44.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝6.8Hz,1H),8.19(d,J＝9.1Hz,2H),8.04(s,1H),7.49(s,1H),7.17–7.10(m,3H),6.93(t,J＝7.1Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ162.77,142.81,142.35,139.50,133.46,126.34,125.37,117.45,115.17,114.91,112.01.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C13H10N3O3]+:256.0717,found:256.0715.
步骤C：8-(4-氨基苯氧基)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将8-(4-硝基苯氧基)咪唑[1,2-a]吡啶(200mg,0.912mmol)溶于10mL甲醇中，再加入Pd/C(20mg,10％,w％),将反应液置于氢气氛围下，室温下搅拌4h，反应结束后，在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行过滤，收集滤液并减压浓缩，得白色固体粗品180mg，收率85％。不进一步处理直接用于下一步反应。
步骤D：甲基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯的制备
将1-(甲氧羰基)环丙烷-1-羧酸(1.944g,13.5mmol)溶于DCM中，并依次加入二异丙基乙基胺(DIPEA,3.48g,27mmol)，HATU(6.84g,18mmol)，室温下搅拌30min后，加入4-氟基苯胺(1g,9mmol)室温下反应16h。反应完毕后，加饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，用30mL饱和NaCl洗涤有机层，之后用无水Na2SO4干燥，减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得白色固体产物1.813g，收率为85％。
步骤E：1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸的制备
将甲基1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸酯(1g,4.21mmol)溶于甲醇和水(1：1)的混合溶液中，然后加入氢氧化锂(0.811g,33.8mmol)，室温搅拌6小时，反应结束后，加水稀释反应液，用1N盐酸调节pH至3，析出白色固体，过滤，并用水洗涤，得0.722g白色固体，收率77％。
步骤F：N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(70mg，0.313mmol)溶于DMF中，并依次加入DIPEA，HATU，室温下搅拌30min后加入8-(4-氨基苯氧基)咪唑[1,2-a]吡啶(60mg，0.235mmol)，室温下反应4h后，加入饱和氯化铵淬灭，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，饱和NaCl洗涤有机层，无水Na2SO4干燥，减压浓缩。通过柱色谱法纯化粗品，用DCM：MeOH＝30:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物73mg，收率72.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(d,J＝4.3Hz,2H),8.31(d,J＝6.7Hz,1H),7.99(s,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,4H),7.51(s,1H),7.12(t,J＝8.7Hz,2H),7.03(d,J＝8.6Hz,2H),6.77(t,J＝7.0Hz,1H),6.56(d,J＝7.5Hz,1H),1.47–1.38(m,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.57,168.44,158.64(d,J＝239.9Hz),151.85,146.33,139.69,135.64(d,J＝2.8Hz),135.46,133.03,122.79,122.69,122.52,119.39,115.46(d,J＝22.2Hz),114.83,112.09,109.31,31.90,15.82.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C24H20FN4O3]+:431.1514,found:431.1516.
实施例2
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲氧苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-2。
化合物A-1-2的制备方法如下：
步骤A：8-(3-甲氧基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇(300mg,2.238mmol)溶于4mL DMF中，依次加入5-氟-2-硝基苯甲醚(382.6mg,2.238mmol)、碳酸钾(463.2mg,3.357mmol)，于60℃下反应6h。反应完毕后，加饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，有机层用30mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，最后通过减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物306.1mg，收率为48％
步骤B：4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲氧基苯胺的制备
将8-(3-甲氧基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶(260mg,0.912mmol)溶于10mL甲醇中，再加入Pd/C(26mg,10％,w％)后置于氢气氛围下室温下搅拌4h，反应结束后过滤，收集滤液并减压浓缩，得白色固体粗品197.6mg，收率85％。未进一步纯化直接用于下一步反应。
步骤C：N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲氧苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(131.1mg,0.588mmol)溶于3mL DMF中，并依次加入DIPEA(126.4mg,0.98mmol)，HATU(297.9mg,0.784mmol),在室温下搅拌30min，然后加入4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲氧基苯胺(100mg,0.392mmol)继续反应4h，直至反应结束。向反应液加入20mL饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层。有机层用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用石油醚：乙酸乙酯＝2：1作为洗脱液，得淡黄色固体产物82.9mg，收率为46％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),9.83(s,1H),8.31(d,J＝6.7Hz,1H),8.09–7.92(m,2H),7.62–7.54(m,2H),7.52(s,1H),7.22–7.10(m,2H),6.91(s,1H),6.82–6.73(m,1H),6.65–6.52(m,2H),3.77(s,3H),1.62–1.48(d,J＝15.7Hz,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.41,167.97,159.09(d,J＝241.0Hz),152.61,150.91,146.30,139.70,134.81(d,J＝2.6Hz),133.04,124.00,123.82,123.74,122.66,122.20,115.73,115.51,114.81,112.08,110.46,109.25,103.69,56.69,30.09,17.11.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C25H22FN4O4]+:461.1620,found:461.1623.
实施例3
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲基苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-3。
化合物A-1-3的制备方法如下：
步骤A：8-(3-甲基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇(300mg,2.238mmol)溶于4mL DMF中，依次加入5-氟-2-硝基甲苯(346.8mg,2.238mmol)、碳酸钾(463.2mg,3.357mmol)，于60℃下反应6h。反应完毕后，加饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，有机层用30mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，最后通过减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物246.8mg，收率为41％。
步骤B：4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲基苯胺的制备
向8-(3-甲基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶(200mg,0.743mmol)加入10mL甲醇，再加入Pd/C(20mg,10％,w％)置于氢气氛围下室温搅拌4h，反应结束后收集滤液并减压浓缩，得白色固体粗品142mg，收率80％，直接用于下一步反应。
步骤C：N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲基苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(139.8mg,0.627mmol)溶于3mL DMF中，并依次加入DIPEA(134.8mg,1.045mmol),HATU(317.6mg，0.836mmol),在室温下搅拌30min，再加入4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-2-甲基苯胺(100mg,0.418mmol)继续反应4h，直至反应结束。向反应液加入20mL饱和氯化铵，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层。有机层用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用石油醚：乙酸乙酯＝2：1作为洗脱液，得白色固体产物79.8mg，收率为43％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.86(s,1H),8.33(d,J＝6.6Hz,1H),7.99(s,1H),7.70–7.55(m,2H),7.54–7.45(m,2H),7.13(t,J＝8.4Hz,2H),6.95(s,1H),6.86(d,J＝7.7Hz,1H),6.79(t,J＝7.0Hz,1H),6.62(d,J＝7.0Hz,1H),2.16(s,3H),1.58–1.44(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.35,169.10,158.78(d,J＝236.5Hz),153.51,145.90,139.80,135.32,134.36,133.10,132.49,126.94,122.96,120.45,116.41,115.68,115.45,114.83,112.06,110.09,30.31,18.17,16.73.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C25H22FN4O3]+:445.1670,found:445.1674.
实施例4
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(3-氟-4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-4。
化合物A-1-4的制备方法如下：
步骤A：8-(2-氟-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇(300mg,2.238mmol)溶于4mL DMF中，依次加入3,4-二氟硝基苯(355.8mg,2.238mmol)和碳酸钾(463.2mg,3.357mmol)于60℃下反应6h。反应完毕后，加饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，有机层用30mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物330mg，收率为54.1％。
步骤B：3-氟-4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯胺的制备
向8-(2-氟-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶(200mg,0.732mmol)加入5mL甲醇中，然后加入Pd/C(20mg,10％,w％)。将反应液置于氢气氛围下室温搅拌4h，反应结束后，抽滤，收集滤液并减压浓缩，得白色固体粗品146.2mg，收率82.3％，直接用于下一步反应。
步骤C：N-(3-氟-4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(137.4mg,0.616mmol)溶于3mL DMF中，并依次加入DIPEA(132.5mg,1.027mmol)，HATU(312.3mg,0.822mmol),在室温下搅拌30min，再加入3-氟-4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)苯胺(100mg,0.411mmol)继续反应4h，直至反应结束。反应液加入20mL饱和氯化铵，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层。有机层用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，最后通过减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用石油醚：乙酸乙酯＝2：1作为洗脱液，得白色固体产物71.7mg，收率为39％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(s,1H),10.01(s,1H),8.30(d,J＝6.7Hz,1H),8.00(s,1H),7.81(d,J＝13.5Hz,1H),7.61(dd,J＝8.8,5.1Hz,2H),7.53(s,1H),7.37(d,J＝8.9Hz,1H),7.21–7.08(m,3H),6.75(t,J＝7.2Hz,1H),6.47(d,J＝7.5Hz,1H),1.45–1.41(m,4H).13CNMR(101MHz,DMSO)δ168.60,168.31,158.68(d,J＝240.1Hz),153.11(d,J＝244.5Hz),146.35,139.01,137.73(d,J＝11.8Hz),137.20(d,J＝9.7Hz),135.63(d,J＝2.5Hz),133.12,122.82(d,J＝7.9Hz),122.62,122.47,117.10,115.57,115.35,114.92,111.95,109.44(d,J＝22.9Hz),107.26,32.25,15.75.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C24H19F2N4O3]+:449.1420,found:449.1421.
实施例5
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-3-甲基苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-5。
化合物A-1-5的制备方法如下：
步骤A：8-(2-甲基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-8-醇(300mg,2.238mmol)溶于4mL DMF中，依次加入2-氟-5-硝基甲苯(346.8mg,2.238mmol)、碳酸钾(463.2mg,3.357mmol)，于60℃下反应6h。反应完毕后，加饱和氯化铵淬灭，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层，有机层用30mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，最后通过减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用PE:EA＝2:1作为洗脱液，得淡黄色固体产物241mg，收率为40％。
步骤B：4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-3-甲基苯胺的制备
将8-(2-甲基-4-硝基苯氧)咪唑[1,2-a]吡啶(200mg,0.743mmol)溶于5mL甲醇中，加入Pd/C(20mg,10％,w％)后将反应液置于氢气氛围下室温搅拌4h，反应结束后，抽滤收集滤液并减压浓缩，得白色固体粗品150.9mg，收率85％，直接用于下一步反应。
步骤C：N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-3-甲基苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(139.8mg,0.627mmol)溶于3mL DMF中，并依次加入DIPEA(134.8mg,1.045mmol)，HATU(317.6mg,0.836mmol),在室温下搅拌30min，再加入4-(咪唑[1,2-a]吡啶-8-基氧)-3-甲基苯胺(100mg,0.418mmol)继续反应4h，直至反应结束。反应液加入20mL饱和氯化铵，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层。有机层用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用石油醚：乙酸乙酯＝2：1作为洗脱液，得白色固体产物78mg，收率为42％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(d,J＝4.8Hz,2H),8.25(d,J＝6.7Hz,1H),7.98(s,1H),7.64–7.57(m,3H),7.53(s,1H),7.46(d,J＝9.5Hz,1H),7.12(t,J＝8.8Hz,2H),6.93(d,J＝8.7Hz,1H),6.72(t,J＝7.1Hz,1H),6.26(d,J＝7.5Hz,1H),2.13(s,3H),1.47–1.40(m,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.66,168.45,158.68(d,J＝239.9Hz),149.12,146.97,139.31,136.01,135.59(d,J＝2.5Hz),132.90,129.68,123.83,122.82(d,J＝7.7Hz),121.87,120.44,120.04,115.46(d,J＝22.2Hz),114.85,112.12,106.67,31.81,16.25,15.89.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C25H22FN4O3]+:445.1670,found:445.1668.
实施例6
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-6。
化合物A-1-6的制备方法如下：
步骤A：(E)-N,N-二甲基-N’-(吡啶-2-基)甲酰亚胺的制备
将2-氨基吡啶(1g,10.63mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(2.529g,21.26mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并后用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得浅黄色液体1.33g，收率为84％。
步骤B：咪唑[1,2-a]吡啶-3-基(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.637g,6.71mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N,N-二甲基-N’-(吡啶-2-基)甲酰亚胺(1g,6.71mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到白色固体758mg，收率42.3％。
步骤C：(4-氨基苯基)(咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将咪唑[1,2-a]吡啶-3-基(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.123mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(212.2mg,3.369mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品201mg，收率76％，直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(d,J＝7.0Hz,1H),8.24(s,1H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.73(d,J＝8.7Hz,2H),7.65–7.58(m,1H),7.25(t,J＝6.8Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,2H),6.10(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.39,153.86,148.18,143.34,131.86,129.27,128.67,125.91,123.48,117.79,115.21,113.30.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C14H12N3O]+:238.0975,found:238.0972.
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.422mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(142.4mg,0.591mmol)，三乙胺(127.8mg,1.27mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体90mg，收率为48.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),9.99(s,1H),9.59(d,J＝6.9Hz,1H),8.26(s,1H),7.90–7.81(m,5H),7.71–7.57(m,3H),7.30(t,J＝6.9Hz,1H),7.12(t,J＝8.7Hz,2H),1.51–1.40(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ183.03,168.78,168.48,158.70(d,J＝240.1Hz),148.70,145.15,143.14,135.63(d,J＝2.5Hz),133.80,130.21,128.79,123.31,122.89(d,J＝7.9Hz),119.94,117.86,115.89,115.44(d,J＝22.2Hz),32.40,15.93.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C25H20FN4O3]+:443.1514,found:443.1516.
步骤D中的中间体——1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯的制备
将1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸(1g)加入8mL二氯亚砜中，于60℃下加热反应，2h后反应结束。减压浓缩得灰白色固体，直接用于下一步反应。
实施例7
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-7。
化合物A-1-7的制备方法如下：
步骤A：(E)-N,N-二甲基-N’-(6-甲基吡啶-2-基)甲酰亚胺的制备
将2-氨基-6-甲基吡啶(1g,9.26mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(2.203g,18.52mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得浅黄色液体1.141g，收率为75.6％。
步骤B：(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.495g,6.13mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N,N-二甲基-N’-(6-甲基吡啶-2-基)甲酰亚胺(1g,6.13mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到白色固体524mg，收率30％。
步骤C：(4-氨基苯基)(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.067mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(201.6mg,3.201mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品182mg，收率68％，直接下一步反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(d,J＝6.8Hz,1H),8.18(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝7.0Hz,1H),7.14(t,J＝6.9Hz,1H),6.67(d,J＝8.7Hz,2H),6.08(s,2H),2.59(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.51,153.84,148.33,142.76,131.81,127.86,127.27,126.34,126.01,123.94,115.13,113.27,16.92.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C15H14N3O]+:252.1131,found:252.1129.
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(5-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.398mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(142.4mg,0.591mmol)，三乙胺(127.8mg,1.27mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体70mg，收率为38％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.15(s,1H),8.70(s,1H),8.03(s,1H),8.00(d,J＝5.7Hz,2H),7.73(d,J＝8.4Hz,2H),7.65(d,J＝8.9Hz,1H),7.49(d,J＝7.0Hz,1H),7.44(dd,J＝9.2,4.9Hz,2H),7.03(t,J＝8.7Hz,2H),6.92(d,J＝7.1Hz,1H),2.65(s,3H),1.77(q,J＝4.9Hz,2H),1.63(q,J＝4.8Hz,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ181.35,169.65,168.71,159.85(d,J＝245.0Hz),150.67,145.71,141.91,139.90,134.22,132.84,131.46,129.32,125.64,123.01(d,J＝7.6Hz),119.71,116.04,115.92,115.70,115.17,29.31,22.51,17.94.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C26H22FN4O3]+:457.1670,found:457.1673.
实施例8
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-8。
化合物A-1-8的制备方法如下：
步骤A：(E)-N,N-二甲基-N’-(4-甲基吡啶-2-基)甲酰亚胺的制备
将2-氨基-4-甲基吡啶(1g,9.26mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(2.203g,18.52mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得浅黄色液体1.296g，收率为82％。
步骤B：(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.496g,6.134mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N,N-二甲基-N’-(4-甲基吡啶-2-基)甲酰亚胺(1g,6.134mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到黄色固体1120mg，收率65％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(d,J＝7.0Hz,1H),8.36(d,J＝8.5Hz,2H),8.22(s,1H),8.06(d,J＝8.5Hz,2H),7.71(s,1H),7.23(d,J＝7.1Hz,1H),2.47(s,overlapping,3H).HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C15H12N3O3]+:282.0873,found:282.0875.
步骤C：(4-氨基苯基)(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.123mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(201.6mg,3.369mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品193mg，收率72％，直接下一步反应。
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(7-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(134.2mg,0.557mmol)，三乙胺(120.6mg,1.194mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩得到粗品。柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体78mg，收率为43％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.99(s,1H),9.47(d,J＝7.0Hz,1H),8.19(s,1H),7.88–7.77(m,4H),7.65(s,1H),7.64–7.57(m,2H),7.17–7.07(m,3H),2.44(s,3H),1.51–1.38(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.71,168.76,168.48,158.69(d,J＝240.3Hz),149.14,145.40,143.01,141.40,135.64,133.91,130.09,127.93,123.05,122.88(d,J＝7.6Hz),119.93,118.14,116.40,115.44(d,J＝22.Hz),32.39,21.35,15.92.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C26H22FN4O3]+:457.1670,found:457.1672.
实施例9
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-9。
化合物A-1-9的制备方法如下：
步骤A：(E)-N’-(4-甲氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺的制备
将4-甲氧基吡啶-2-胺(1g,8.06mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(1.918g,16.12mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，减压浓缩甲醇后加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并后用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得白色固体1.154g，收率为80％。
步骤B：(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.362g,5.586mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N’-(4-甲氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(1g,5.586mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到黄色固体962mg，收率58％。
步骤C：(4-氨基苯基)(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.01mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(190.8mg,3.03mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品132mg，收率49％，直接下一步反应。
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(7-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.374mmol)混悬于3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(126.2mg,0.523mmol)，三乙胺(113.3mg,1.122mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体97mg，收率为55％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.46(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.81(d,J＝9.0Hz,2H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.47–7.41(m,2H),7.04–6.96(m,3H),6.82–6.76(m,1H),3.91(s,3H),1.71–1.65(m,2H),1.65–1.59(m,2H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.37,168.74,168.45,161.29,158.68(d,J＝240.0Hz),150.39,144.57,143.08,135.65,133.71,130.08,129.62,122.79,119.92,115.45(d,J＝23.9Hz),109.69,96.07,56.63,32.44,15.86.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C26H22FN4O4]+:473.1620,found:473.1618.
实施例10
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-10。
化合物A-1-10的制备方法如下：
步骤A：(E)-N’-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺的制备
将3-甲氧基吡啶-2-胺(1g,8.06mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(1.918g,16.12mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得浅黄色固体1.168g，收率为81％。
步骤B：(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.362g,5.586mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N’-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(1g,5.586mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到浅黄色固体928mg，收率54％。
步骤C：(4-氨基苯基)(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.01mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(190.8mg,3.03mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品137mg，收率51％，直接下一步反应。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.23(d,J＝6.9Hz,1H),8.11(s,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,2H),6.97(t,J＝7.3Hz,1H),6.81–6.70(m,3H),4.15(s,2H),4.05(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.49,153.90,148.85,142.21,142.00,131.88,125.93,124.36,121.01,115.19,113.28,106.37,56.56.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C15H14N3O2]+:268.1081,found:268.1085.
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(8-甲氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.374mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(126.2mg,0.523mmol)，三乙胺(113.3mg,1.122mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体93mg，收率为53％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),9.98(s,1H),9.18(d,J＝5.8Hz,1H),8.15(s,1H),7.88–7.80(m,4H),7.66–7.58(m,2H),7.24–7.06(m,4H),3.98(s,3H),1.51–1.41(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ183.19,168.76,168.45,158.68(d,J＝240.0Hz),148.79,143.80,143.18,142.63,135.65,133.81,130.22,124.15,122.86(d,J＝8.3Hz),121.04,119.91,115.94,115.44(d,J＝22.1Hz),107.37,56.56,32.42,15.91.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C26H22FN4O4]+:473.1620,found:473.1617.
实施例11
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-11。
化合物A-1-11的制备方法如下：
步骤A：(E)-N’-(4-乙氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺的制备
将4-乙氧基吡啶-2-胺(1g,7.24mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(1.723g,14.48mmol)，滴加完毕，回流反应12h。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得浅黄色固体1.089g，收率为78％。
步骤B：(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.263g,5.18mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N’-(4-乙氧基吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(1g,5.18mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到浅黄色固体805mg，收率50％。
步骤C：(4-氨基苯基)(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,0.964mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(182.2mg,2.892mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品170mg，收率63％，直接下一步反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(d,J＝7.6Hz,1H),8.10(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.20(d,J＝2.4Hz,1H),6.91(dd,J＝7.6,2.4Hz,1H),6.66(d,J＝8.5Hz,2H),6.01(s,2H),4.19(q,J＝6.9Hz,2H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ181.91,159.50,153.59,150.44 143.99,131.56,129.32,126.11,122.93,113.26,109.10,96.63,64.61,14.69.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C16H16N3O2]+:282.1237,found:282.1235.
步骤D：N-(4-(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(7-乙氧基咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.356mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(120.1mg，0.498mmol)，三乙胺(107.8mg，1.068mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体81.3mg，收率为47％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.98(s,1H),9.41(d,J＝7.6Hz,1H),8.13(s,1H),7.85–7.76(m,1H),7.61(dd,J＝8.5,5.1Hz,1H),7.24(s,1H),7.12(t,J＝8.7Hz,1H),6.96(d,J＝7.6Hz,1H),4.18(q,J＝7.0Hz,1H),1.51–1.40(m,1H),1.37(t,J＝6.9Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.25,168.76,168.52,160.07,158.70(d,J＝240.0Hz),151.07,145.82,142.87,135.62,133.99,129.97,129.39,122.91,122.80,119.93,115.44(d,J＝29.1Hz),109.53,96.85(d,J＝9.7Hz),64.71,32.32,15.96,14.62.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C27H24FN4O4]+:487.1776,found:487.1779.
实施例12
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-12。
化合物A-1-12的制备方法如下：
步骤A：(E)-N’-(5-氟吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺的制备
将5-氟吡啶-2-胺(1g,8.92mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(2.122g,17.84mmol)，滴加完毕，回流反应12h。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得灰白色固体1.266g，收率为85％.
步骤B：(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.459g,5.98mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N’-(5-氟吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲酰亚胺(1g,5.98mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到灰白色固体988mg，收率58％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),8.41–8.32(m,3H),8.08(d,J＝8.4Hz,2H),8.00(dd,J＝9.8,5.2Hz,1H),7.86(t,J＝9.0Hz,1H).HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C14H9FN3O3]+:286.0622,found:286.0624.
步骤C：(4-氨基苯基)(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)(4-硝基苯基)甲酮(300mg,1.05mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(198.4mg,3.15mmol)，Pd/C(30mg,10％,w％)，70℃下反应5h，直至反应结束。在抽滤漏斗上铺上一层硅藻土，接着对反应液进行抽滤，收集滤液并减压浓缩，得淡黄色固体粗品128.5mg，收率48％，直接下一步反应。
步骤D：N-(4-(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)-N-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(6-氟咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.392mmol)加入3mLDCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(132.2mg,0.548mmol)，三乙胺(118.7mg,1.176mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体79mg，收率为44％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),9.98(s,1H),9.60(s,1H),8.32(s,1H),7.95(dd,J＝9.8,5.3Hz,1H),7.89–7.82(m,4H),7.81–7.74(m,1H),7.65–7.58(m,2H),7.12(t,J＝8.7Hz,2H),1.49–1.41(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ183.03,168.80,168.48,158.70(d,J＝240.4Hz),154.39(d,J＝235.9Hz),146.31,145.46,143.33,135.60,133.37,130.24,124.29,123.04–122.72(m),119.96,118.60,116.01,115.52(d,J＝11.6Hz),115.31(d,J＝6.6Hz),32.38,15.95.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C25H19F2N4O3]+:461.1420,found:461.1424.
实施例13
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺，命名为A-1-13。
化合物A-1-13的制备方法如下：
步骤A：(E)-N,N-二甲基-N’-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲酰亚胺的制备
将4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1g,6.172mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(1.468g,12.34mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得灰白色固体1.071g，收率为80％。
步骤B：(4-硝基苯基)(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.124g,4.61mmol)溶于50mL乙醇中，加入(E)-N,N-二甲基-N’-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲酰亚胺(1g,4.61mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到白色固体834mg，收率54％。
步骤C：(4-氨基苯基)(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮的制备
将(4-硝基苯基)(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(800mg,2.388mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(451.3mg,7.164mmol),Pd/C(80mg)，70℃下反应6h，直至反应结束。垫硅藻土抽滤，收集滤液，减压浓缩，得淡黄色固体粗品473.4mg，收率65％，未进行纯化直接用于下一步反应。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.62(d,J＝7.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.34(s,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,2H),7.50(dd,J＝7.3,1.3Hz,1H),6.69(d,J＝8.6Hz,2H),6.20(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ182.35,154.34,146.26,143.97,132.18,130.10,128.36(d,J＝33.7Hz),125.25,124.50,123.67(d,J＝272.3Hz),115.86(d,J＝4.9Hz),113.33,110.29.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C15H11F3N3O]+:306.0849,found:306.0852.
步骤D：N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二羧酰胺的制备
将(4-氨基苯基)(7-(三氟甲基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(100mg,0.327mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(110mg,0.457mmol)，三乙胺(99mg,0.981mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体76mg，收率为46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),9.98(s,1H),9.69(d,J＝7.3Hz,1H),8.43(s,1H),8.39(s,1H),7.88(q,J＝8.6Hz,4H),7.61(dd,J＝8.9,5.1Hz,2H),7.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.12(t,J＝8.6Hz,2H),1.50–1.41(m,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ183.39,168.81,168.44,158.68(d,J＝240.2Hz),146.89,145.74,143.59,135.63(d,J＝2.5Hz),133.14,130.48,130.23,129.15(d,J＝33.6Hz),124.22,123.52(d,J＝272.9Hz),122.86(d,J＝7.8Hz),119.93,115.95,115.43(d,J＝22.1Hz),110.97,32.44,15.92.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C26H19F4N4O3]+:511.1388,found:511.1390.
实施例14
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为甲基3-(4-(1-((4-氟苯基)氨基甲酰)环丙烷-1-羧酰胺)苯酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯，命名为A-1-14。
化合物A-1-14的制备方法如下：
步骤A：甲基(E)-6-(((二甲基胺基)亚甲基)氨基)烟酸酯的制备
将2-氨基异烟酸甲酯(1g,6.572mmol)加入30mL甲醇中，滴加DMF-DMA(1.564g,13.14mmol)，滴加完毕，回流反应12小时。反应完毕后，旋干甲醇，加入50mL水，并用DCM(20mL×3)萃取水层，将有机层合并并用50mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得灰白色固体1.142g，收率为84％。
步骤B：甲基3-(4-硝基苯甲酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯的制备
将2-溴-4-硝基苯乙酮(1.178g,4.83mmol)溶于50mL乙醇中，加入甲基(E)-6-(((二甲基胺基)亚甲基)氨基)烟酸酯(1g,4.83mmol)，回流反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至常温，有固体析出，抽滤，滤饼用乙醇洗涤，得到白色固体769mg，收率49％。
步骤C：甲基3-(4-氨基苯甲酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯的制备
将甲基3-(4-硝基苯甲酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯(600mg,1.864mmol)加入50mL乙醇中，依次加入甲酸铵(348.9mg,5.538mmol)，Pd/C(60mg)，70℃下反应6h，直至反应结束。垫硅藻土抽滤，收集滤液，减压浓缩，得淡黄色固体粗品324.4mg，收率59％，未进行纯化直接用于下一步反应。
步骤D：甲基3-(4-(1-((4-氟苯基)氨基甲酰)环丙烷-1-羧酰胺)苯酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯的制备
将甲基3-(4-氨基苯甲酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯(100mg,0.338mmol)加入3mL DCM中，依次加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酰氯(114mg,0.473mmol)，三乙胺(102.4mg,1.014mmol)，室温下反应4h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液，并用二氯甲烷(20mL×3)萃取水层，合并有机层。有机层用20mL饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥,减压浓缩，得到粗品。粗品通过柱色谱法分离纯化，洗脱剂为二氯甲烷：乙酸乙酯＝4：1，得固体81mg，收率为48％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.52(s,1H),9.62(d,J＝6.7Hz,1H),9.44(s,1H),8.38(s,1H),8.21(s,1H),7.81(d,J＝7.4Hz,2H),7.74–7.60(m,3H),7.47–7.34(m,2H),7.03–6.88(m,2H),3.94(s,3H),1.64(d,J＝26.7Hz,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ183.97,170.04,169.53,164.88,159.69(d,J＝244.4Hz),147.73,145.43,141.85,134.04,133.11,130.52,130.12,128.45,124.12,123.12(d,J＝8.5Hz),120.03,119.40,115.63,115.41,114.28,52.93,29.24,17.57.HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C27H22FN4O5]+:501.1569,found:501.1565.
实施例15
本实施例提供一种含咪唑并[l,2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物，具体地，该化合物为N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-((2-吗啉乙基)羧酰胺)咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二酰胺，命名为A-1-15。
化合物A-1-15的制备方法如下：
步骤A：3-(4-(1-((4-氟苯基)氨基甲酰)环丙烷-1-羧酰胺)苯酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸的制备
将甲基3-(4-(1-((4-氟苯基)氨基甲酰)环丙烷-1-羧酰胺)苯酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸酯(200mg,0.4mmol)加入甲醇(4mL)：水(2mL)的混合溶剂中，再加入LiOH(73.6mg,3.2mmol)，40℃下反应2h，直至反应结束。旋干溶剂，加水稀释，并用2N盐酸调节PH至3-4，析出固体，抽滤，滤饼用少量水洗涤，干燥，得黄色固体粗品190mg，用于下一步反应。
步骤B：N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-((2-吗啉乙基)羧酰胺)咪唑[1,2-a]吡啶-3-羰基)苯基)环丙烷-1,1-二酰胺的制备
将3-(4-(1-((4-氟苯基)氨基甲酰)环丙烷-1-羧酰胺)苯酰基)咪唑[1,2-a]吡啶-7-羧酸(100mg,0.205mmol)溶于3mL DMF中，并依次加入DIPEA(53mg,0.411mmol)，HATU(104.1mg,0.274mmol),在室温下搅拌30min，再加入N-(2-氨乙基)吗啉(17.8mg,0.137mmol)继续反应4h，直至反应结束。向反应液加入20mL饱和氯化铵，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机层。有机层用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗品。通过柱色谱法纯化粗品，用EA：EtOH＝5：1作为洗脱液，得白色固体产物19mg，收率为23％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.09(s,1H),9.67(d,J＝7.1Hz,1H),8.60(s,1H),8.24(s,1H),8.14(s,1H),7.86(d,J＝8.6Hz,2H),7.72(d,J＝8.7Hz,2H),7.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.48–7.43(m,2H),7.03(t,J＝8.4Hz,2H),3.79–3.72(m,4H),3.66–3.58(m,2H),2.73–2.68(m,2H),2.65–2.54(m,4H),1.81–1.73(m,2H),1.66–1.58(m,2H).HRMS(ESI+)[M+H]+calculated for[C32H32FN6O5]+:599.2413,found:599.2415.
实验例
1、化合物的体外蛋白活性测定
化合物用DMSO溶解浓度为1mM的母液，采用Lantha screen Assay体外筛选化合物对激酶的抑制活性，并以Giltertinib作为参照化合物，对化合物进行检测。
1.1制备1X激酶缓冲液
1X激酶缓冲液
50mM HEPES,pH7.5
10mM MgCl2
4mM DTT
0.01％ Tween-20
0.01％ BSA
1.2配制化合物
用100％ DMSO将化合物稀释至反应中最终所需最高浓度的100倍。对于在1μM测试的化合物，则在该步骤中制备100μM的化合物DMSO溶液。将所有配制好化合物转移到96孔储存板上的一个孔中，转移10μl至在下一个90μl的100％ DMSO孔中，依次稀释化合物，以此类推，共5个浓度。向同一个96孔板中的两个空孔中添加100μl的100％ DMSO，用于无化合物对照和无酶对照。将孔板标记为源孔板。将40μl化合物从源板转移到新的384孔回声板作为中间板。将每个孔的200nl从384孔回声板转移到384孔检测板上，一式两份。例如，384孔回声板的A1被转移到384孔检测板的A1和A2。384孔回声板的A2被转移到384孔检测板的A3和A4，以此类推。
1.3激酶反应
准备2X的激酶溶液
准备FLT3-ITD在1X激酶缓冲液中的溶液，其浓度为检测中每种试剂最终浓度的2倍。在检测板的每个孔中加入10μl激酶溶液，除了不含酶的对照孔(加入5μl用1X激酶缓冲液代替)，摇动平板。在室温下孵育10分钟。
准备好2X的底物溶液
在1X激酶反应缓冲液中制备含Fluorescein-Poly GT和ATP的底物溶液，其浓度为测定中所需要的每种试剂最终浓度的2倍，向检测板的每个孔中加入10μl底物溶液，开始反应。
激酶反应
盖上检测板，在室温下孵化60分钟。
1.4激酶检测
在抗体稀释缓冲液中制备终浓度2倍的检测溶液。向检测板的每个孔中添加20μl检测溶液，以停止反应。用离心机简单混合，并在室温下孵育60分钟，然后读取荧光。
1.5数据读取
在Envision上收集数据，激发波长为340nm，发射波长为520nm和495nm。
1.6曲线拟合
从Envision中复制RFU的值。计算RFU 520nm/RFU 495nm的比值将比率值转换为百分比抑制值。
抑制百分比＝(max-样本比率)/(max-min)*100。
"min"是指无酶对照组的比率，"max"是指DMSO对照组的比率。数据在MS Excel中显示，曲线由XLFit excel插件5.4.0.8版拟合。
IC50计算公式为：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)^HillSlope
计算结果如表1所示。
表1化合物对FLT3和FLT3-ITD抑制作用
2、化合物的细胞增殖活性测定
将适量对数生长期的细胞悬液均匀接种于96孔板中，培养箱中预培养24h(在37C,5％CO2的条件下)。化合物用DMSO溶解，配置浓度为10mM的母液，用培养基稀释，向培养板中加入不同浓度的化合物，继续培养24h(在37C,5％ CO2的条件下)。每孔加入10μLCCK8溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)，置于培养箱内孵育3-4h，用酶标仪测定450nm处的OD值。计算化合物抑制率，计算公式：细胞存活率＝[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100％；抑制率＝[(Ac-As)/(Ac-Ab)]*100％。As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液)；Ac:对照孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物)；Ab：空白孔吸光度(含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物)。通过Graphpad Prism软件计算出每个化合物的IC50值，计算结果如表2所示。
表2化合物对不同细胞的增殖抑制活性
/>
由表1和表2可知，本发明的化合物A-1-1至A-1-15中，大部分化合物对FLT3具有抑制作用，特别是化合物A-1-15和化合物A-1-11；部分化合物对FLT3-ITD具有抑制作用，特别是化合物A-1-15。另外，虽然有的化合物对FLT3和FLT3-ITD的抑制作用不显著，例如化合物A-1-3和化合物A-1-4，但是，化合物A-1-3和化合物A-1-4均对MV4-11细胞和THP-1细胞的增殖具有较好的抑制作用。而且，另一方面，细胞活性评价上，化合物A-1-5、化合物A-1-11和化合物A1-1-14等均对HepG2细胞和A549细胞具有较好的抑制活性，这些细胞类型通常都是酪氨酸激酶高表达，例如c-Kit、c-MET、VEGFR、PDGFR、EGFR等，因此，本发明的化合物可能是潜在的多靶点酪氨酸激酶抑制剂。
综上所述，本发明的化合物对酪氨酸激酶具有高抑制活性，对不同恶性肿瘤细胞系具有突出的抗增殖活性，能够用于预防或者治疗可通过抑制酪氨酸激酶进行调节的疾病，例如肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结直肠癌、白血病等多种恶性肿瘤疾病。
以上的仅是本发明的实施例，该发明不限于此实施案例涉及的领域，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述，所属领域普通技术人员知晓申请日或者优先权日之前发明所属技术领域所有的普通技术知识，能够获知该领域中所有的现有技术，并且具有应用该日期之前常规实验手段的能力，所属领域普通技术人员可以在本申请给出的启示下，结合自身能力完善并实施本方案，一些典型的公知结构或者公知方法不应当成为所属领域普通技术人员实施本申请的障碍。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和本发明的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种具有如式(Ⅰ)所示结构的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐：
式(Ⅰ)中，R1和R2各自独立地为氢、卤素、三氟甲基、羟基、羟甲基、三氟甲氧基、乙酰基、C1-C4直链或支链的烷基；
R3、R4、R5和R6各自独立地为氢、卤素、三氟甲基、羟基、氰基、硝基、氨基、羟甲基、三氟甲氧基、羧基、巯基、C1-C12直链或支链的烷基、C2-C12直链或支链的不饱和烃基、C3-C12环烃基、C3-C12杂环基、-SOR7、-SO2R7、-COR7、-COOR7、-CONR7R8、-SO2NR7R8、-OCOR7、-NR7R8、-OR7、-SR7、-SCOR7、-N(R7)COR8、-POR7R8、-PR7R8；
R7和R8各自独立地为氢、甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基、氨基、羟甲基、巯基、C2-C12直链或支链的烷基、C2-C12直链或支链的取代烷基、C2-C12直链或支链的不饱和烃基、C3-C12环烃基、C3-C12杂环基；
X为CH2、O或C＝O中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物为下述化合物中的一种：
3.根据权利要求1所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物的药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，所述无机盐为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐为甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。
4.一种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含如权利要求1-3中任一项所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物所制成的制剂包括用于口服给药的固体制剂、用于口服给药的液体制剂、用于胃肠外注射的制剂和用于局部给药的制剂。
6.如权利要求1-3中任一项所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗酪氨酸蛋白激酶介导的疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述酪氨酸蛋白激酶介导的疾病包括肝癌、肺癌、肾癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和白血病。
8.如权利要求2所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物的制备方法，其特征在于：所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物为化合物A-1-15时，咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物合成路线如下所示：
9.如权利要求2所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物的制备方法，其特征在于：所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物为化合物A-1-11时，咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物合成路线如下所示：
10.如权利要求2所述的咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物的制备方法，其特征在于：所述咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物为化合物A-1-8时，咪唑并[l,2-a]吡啶类化合物合成路线如下所示：
CN202310588059.6A 2023-05-24 2023-05-24 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途 Pending CN116655626A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310588059.6A CN116655626A (zh) 2023-05-24 2023-05-24 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310588059.6A CN116655626A (zh) 2023-05-24 2023-05-24 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116655626A true CN116655626A (zh) 2023-08-29

Family

ID=87721722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310588059.6A Pending CN116655626A (zh) 2023-05-24 2023-05-24 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116655626A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI725266B (zh) Fgfr4抑制劑、其製備方法與藥學上的應用
CN107709320B (zh) 一种吡啶并氮杂环化合物及其制备方法和用途
TWI527800B (zh) 作為聚（二磷酸腺苷酸－核醣）聚合酶（ｐａｒｐ）之抑制劑之１－（芳基甲基）喹唑啉－２，４（１ｈ，３ｈ）－二酮及其應用
JP6767875B2 (ja) Ｔｇｆ−ベータ阻害剤としての２，３−二置換ピリジン化合物および使用方法
KR102359993B1 (ko) 피리미도[5,4-b]인돌리진 또는 피리미도[5,4-b]피롤리진 화합물, 그의 제조방법 및 용도
CN103930425B (zh) 蝶啶酮衍生物及其作为egfr、blk、flt3抑制剂的应用
WO2013033981A1 (zh) 一类2,7-萘啶衍生物及其制备方法和应用
AU2014241152A1 (en) Benzimidazolone derivatives as bromodomain inhibitors
CA2813329A1 (en) Crystalline (r)-(e)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-dichloropyridin-4-yl)ethoxy)-1h-indazol-3-yl)vinyl)-1h-pyrazol-1-yl)ethanol
EP3936504A1 (en) Pyrazolo[1,5-a]pyridine derivatives, preparation method therefor and use thereof
TWI601724B (zh) 咪唑並喹啉類衍生物及其可藥用鹽、其製備方法及其在醫藥上的應用
CN108530444B (zh) 一种新型nampt和ido双重抑制剂及其制备方法和医药用途
CN103214481B (zh) 新型咪唑并[1,2-a]吡啶类化合物、其制备方法、包含此类化合物的药物组合物及其用途
CN108164525B (zh) 一种抗肿瘤化合物的制备方法和用途
CN117105936A (zh) 一种作为FLT3抑制剂的咪唑并[1,2－a]吡啶化合物及其制备方法和用途
CN115710281B (zh) 一种异噁唑并[5,4-b]吡啶类FLT3抑制剂及其制备方法与用途
WO2013138396A1 (en) Dihydropyridopyrimidine and dihydronaphthyridine derivatives as tyrosine kinase inhibitors of especially vegf and pdgf
CN104151311B (zh) 一类稠环化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
CN116655626A (zh) 一种含咪唑并[l，2-a]吡啶骨架的环丙二酰胺化合物及其制备方法和用途
CN113135913B (zh) 3-取代基-6-吡啶类取代基-六元并五元杂环类衍生物及其制法与用途
JP7318009B2 (ja) マクロライド誘導体、その製造方法および用途
EP2825166A1 (en) Method of treating ophthalmic conditions with kinase inhibitors
TW201738227A (zh) 一種稠環化合物、其製備方法和應用及其中間體化合物
CN113461687B (zh) 2,8-氮杂-[4,5]十螺环酮衍生物及其制备方法和用途
CN116003406B (zh) 杂芳环氮氧化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination