CN116621974A - 新型冠状病毒SARS-CoV-2广谱中和纳米抗体及其应用 - Google Patents

新型冠状病毒SARS-CoV-2广谱中和纳米抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了新型冠状病毒SARS‑CoV‑2广谱中和纳米抗体及其应用。具体地公开了能有效抑制多种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2突变株的纳米抗体。本发明利用噬菌体抗体库技术，成功获得了特异性结合SARS‑CoV‑2刺突蛋白RBD的广谱中和纳米抗体A2。本发明纳米抗体与RBD区域结合亲和力高；并且，可与多种主要的流行株均具有良好的广谱中和作用，广谱中和活性好。本发明纳米抗体可以在原核细胞大肠杆菌中表达后纯化，并且纯度较高，有利于生产；其次，本发明纳米抗体在雾化前后理化性质没有改变，在作为预防和治疗吸入药物以及临床诊断等领域具有良好的应用前景和重要意义。

Description

新型冠状病毒SARS-CoV-2广谱中和纳米抗体及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，涉及新型冠状病毒SARS-CoV-2广谱中和纳米抗体及其应用。具体涉及一种有效抑制多种新型冠状病毒SARS-CoV-2突变株的广谱中和纳米抗体。
背景技术
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种单链RNA病毒、其呈球形、表面有突起，有四种主要的结构蛋白：刺突蛋白(Spike protein，S)，核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)，膜蛋白(Membrane protein，M)，包膜蛋白(Envelope protein，E)。其中，S蛋白是形成病毒“冠状”形态的主要蛋白之一，与病毒的传染力密切相关。S蛋白包含S1、S2和受体结合域(receptor-binding domain，RBD)。由S1和S2结构域组成的S蛋白暴露在SARS-CoV-2的病毒外壳上，在病毒附着、融合、进入和传播中起重要作用。具体而言，S1的受体结合域(RBD)与SARS-CoV-2的细胞受体血管紧张素转化酶-2(angiotensin-converting enzyme 2，ACE2)结合，从而导致病毒进入细胞。随着时间的推移，新型冠状病毒也在不断地进化，病毒刺突蛋白位点的不断突变使其免疫逃逸能力不断地增强，但在刺突蛋白三聚体内部的隐藏位点基本不变，因此，对于SARS-CoV-2突变株中S蛋白及RBD中高度保守位点的研究，有助于设计病毒疫苗和开发新的抗冠状病毒广谱中和抗体药物。
20世纪90年代初，Hamers-Casterman和她的团队在骆驼体内发现了一种没有轻链的纯重链抗体，其中的可变重链结构域(VHH)保留了完整的抗原结合能力，现称为纳米抗体。纳米抗体可以使用原核细胞等表达系统进行表达，可以极大的降低抗体生产成本；纳米抗体是已知的能与抗原稳定结合的最小功能性单域抗体，在一些特殊的靶点中和与抗原的结合要优于单克隆抗体；纳米抗体还具有显著的稳定性，这些特点使其作为抗体药物具有显著优势，如可选择多种给药途径，药物进入机体后可迅速扩散到全身，并具有良好的组织渗透性等优点。纳米抗体的研究和开发在药物应用和临床诊断等领域具有十分广阔的前景和重要的意义。
特定靶点的特异性纳米抗体可以通过筛选纳米抗体噬菌体文库来获取。通过免疫羊驼(Alpaca)、骆驼(Camel)、美洲驼(Llama)而获得的纳米抗体不仅可以提高获得的多样性，并且所获得的纳米抗体可以系统地识别原生蛋白构象中的不连续氨基酸片段和抗原的保守区域。
SARS-CoV-2作为一种单链RNA病毒，相比DNA病毒有着更高的变异性，而S蛋白上关键位点的变异，有可能影响其与受体的结合，从而改变病毒的特性：如感染率、致死性、免疫逃逸效应等。随着SARS-CoV-2病毒突变株的产生，位点已成千上百的出现，这导致单克隆抗体药物失效或中和能力大大降低。纳米抗体由于体积小、特异性强等优势可以进入刺突蛋白三聚体界面内部与隐形表位结合，从而改变刺突蛋白三聚体状态使其失活，对病毒具有一定的中和作用。这些可以与隐形或高度保守表位结合的纳米抗体可以与多种SARS-CoV-2突变株结合，具有一定的广谱中和作用。
纳米抗体具有稳定性高、亲和力强、特异性强，生产成本低、人源化简单等特点，使其成为抗体治疗和诊断的新兴力量。此外，临床标本分析表明，SARS-CoV-2在呼吸道多个部位的病毒拷贝数最高，而血液中的病毒数较少，因此生物治疗药物直接通过呼吸途径输送到感染部位将是一个有吸引力的替代系统给药途径，纳米抗体由于体积小而理化性质优异，可开发为雾化吸入制剂，理论上适用于呼吸系统疾病的治疗。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种能够有效抑制多种新型冠状病毒SARS-CoV-2突变株活性的广谱中和纳米抗体及其应用，目的在于解决所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文主要技术主题。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体包括重链可变区(VHH)，所述重链可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，氨基酸序列分别如下：
互补决定区CDR1：AASGYTTT；
互补决定区CDR2：IYTDGTST；
互补决定区CDR3：AADLAYVGSWYNPASFDY。
即包括氨基酸序列分别如SEQ ID No.1所示的第23-30位的互补决定区CDR1、如SEQ ID No.1所示的第48-55位的互补决定区CDR2和如SEQ ID No.1所示的第94-111位的互补决定区CDR3。
所述纳米抗体可为特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)受体结合区(receptor binding domain，RBD)的广谱中和纳米抗体。所述纳米抗体由重链可变区组成，又称为VHH抗体。
进一步地，本发明所述纳米抗体还包括框架区。
所述纳米抗体A2的框架区FR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第1-22位所示；FR2的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第31-47位所示；FR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第56-93位所示；FR4的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第112-122位所示。
上述的纳米抗体，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明还提供了与所述纳米抗体相关的生物材料，所述生物材料为以下的任意一种：
(1)编码所述纳米抗体重链可变区的核酸分子；
(2)含有(1)所述核酸分子的表达盒；
(3)含有(1)所述核酸分子的重组载体、或含有(2)所述表达盒的重组载体；
(4)含有(1)所述核酸分子的重组微生物、或含有(2)所述表达盒的重组微生物、或含有(3)所述重组载体的重组微生物；
(5)含有(1)所述核酸分子的细胞系、或含有(2)所述表达盒的细胞系、或含有(3)所述重组载体的细胞系。
上述的生物材料中，所述核酸分子为核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的DNA分子。
SEQ ID No.2所示的DNA分子编码SEQ ID No.1所示的单域抗体A2。
具有改善的亲和力和/或效价的本发明所述单域抗体的变体可通过采用在本领域已知的方法来获得，并包括在本发明的范围内。例如，氨基酸置换可用于获得具有进一步改善的亲合力的抗体。或者，核苷酸序列的密码子优化也可用来改善用于产生抗体的表达系统中的翻译效率。此外，包含通过对本发明的任何核酸序列应用定向进化法而优化抗体特异性或中和活性的序列的多核苷酸也属于本发明的范围内。
本文所述载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒、噬菌体(如λ噬菌体或M13丝状噬菌体等)、黏粒(即柯斯质粒)、人工染色体(如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)、P1人工染色体(PAC)或Ti质粒人工染色体(TAC)等)、病毒载体(如逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒或疱疹病毒(如单纯疱疹病毒等)。在本发明的一个实施例中，载体具体可为pMECS。
本文所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。其中，细菌可来自埃希氏菌属(Escherichia)，欧文氏菌(Erwinia)，根癌农杆菌属(Agrobacterium)、黄杆菌属(Flavobacterium)，产碱菌属(Alcaligenes)，假单胞菌属(Pseudomonas)，芽胞杆菌属(Bacillus)等。在本发明的一个实施例中，微生物具体可为大肠杆菌wk6。
所述细胞(宿主细胞)是指可用于导入载体的细胞，其包括但不限于：真核细胞(如酵母细胞、曲霉菌)、动物细胞(如哺乳动物细胞、昆虫细胞)、植物细胞或原核细胞。
在本发明的一个实施例中，所述重组载体具体可为pMECS-A2。
所述重组载体pMECS-A2是采用A2的DNA分子的替换表达载体pMECS的PstI和NotI酶切位点之间的DNA分子，得到表达与组氨酸融合的纳米抗体A2的重组原核表达载体pMECS-A2。A2的DNA分子是在SEQ ID No.2的5’端(SEQ ID No.2的第1位)和3’(SEQ ID No.2的第364位)末端分别加入PstI和NotI酶切位点。
在本发明的实施例中，所述重组微生物(重组菌)具体为WK6/pMECS-A2。
重组微生物WK6/pMECS-A2含有SEQ ID No.2所示的DNA分子，表达氨基酸序列是含有组氨酸标签的纳米抗体A2。所述重组微生物WK6/pMECS-A2是将所述重组载体pMECS-A2电转导入大肠杆菌WK6得到的重组菌。
利用IPTG诱导表达17h后，冻融法收集抗体蛋白，并通过镍柱纯化抗体，本发明的纳米抗体经纯化后纯度大于90％，如图3所示。
在本发明的实施例3中，本发明纳米抗体经生物膜干涉技术(Bio-LayerInterferometry，BLI)对生物分子相互作用进行检测分析，抗体对多种SARS-CoV-2病毒具有较高的亲和力。
在本发明的实施例中，本发明纳米抗体能够中和SARS-CoV-2假型病毒及其多种突变株。
所述中和的纳米抗体可作为药物用于改善、预防或治疗SARS-CoV-2感染引起的疾病、或抑制SARS-CoV-2的感染。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有所述的纳米抗体和药学上可接受的载体。
所述药学上可接受的载体可为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂。
其中，所述药物组合物具有抑制或中和SARS-CoV-2活性的中和抗病毒作用。所述药物组合物用于改善、预防或治疗SARS-CoV-2感染引起的疾病和/或用于抑制SARS-CoV-2感染。
进一步地，本发明的药物组合物包含第一抗体和第二抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体为本发明的单域抗体，而第二抗体为中和SARS-CoV-2病毒感染的任何抗体或其抗原结合片段。
在本发明的实施例中，本发明纳米抗体通过雾化给药装置(玉研仪器，YAN30012)，抗体理化性质前后并未发生变化。
本发明还提供了所述的纳米抗体和/或所述的生物材料在制备抑制或中和SARS-CoV-2活性的药物中的应用。
上述应用中，所述抑制或中和SARS-CoV-2活性的药物用于改善、预防或治疗SARS-CoV-2感染引起的疾病和/或用于抑制SARS-CoV-2感染。
本发明还提供了所述的纳米抗体和/或所述的生物材料在制备用于检测SARS-CoV-2和/或SARS-CoV-2的刺突蛋白的产品中的应用。
本发明的纳米抗体通过检测抗SARS-CoV-2疫苗的抗原是否含有具有正确构象的特异性表位来监测所述疫苗的质量的用途也设想处于本发明的范围内。
所述用于检测SARS-CoV-2水平和/或SARS-CoV-2的刺突蛋白的产品包括利用酶联免疫吸附法、免疫荧光检测法、放射免疫法、发光免疫测定法、胶体金免疫层析法、凝集法或免疫比浊法等检测抗原抗体结合的产品。
本发明还提供了所述的纳米抗体和/或所述的生物材料在制备用于诊断或辅助诊断SARS-CoV-2感染引起的疾病的产品中的应用。
上述应用中，所述SARS-CoV-2感染引起的疾病为呼吸系统感染。所述呼吸系统感染可为呼吸道感染和/或肺部感染。
上述应用中，所述产品可为试剂或试剂盒。
所述试剂或试剂盒含有本文任一所述单域抗体或其组合。所述试剂盒可为化学发光免疫试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、胶体金免疫试剂盒、或荧光免疫试剂盒，但不限于此。
本文中，术语“特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白的单域抗体”和“抗RBD单域抗体”具有相同的含义，可互换使用。
本文中，术语“中和抗体”是指一种能中和，即防止、抑制、减小、阻碍或干扰病原体引发和/或保持宿主内感染的能力的抗体。如本文所述，这些抗体可单独地或以组合形式，在经适当配制后用作预防剂或治疗剂，与活性疫苗接种联合使用，用作诊断工具或用作生产工具。
本发明通过噬菌体展示技术，通过多轮筛选富集具有RBD蛋白抗原特异性的噬菌体，并鉴定阳性克隆和得到相应编码序列，并在大肠杆菌WK6中表达并通过亲和层析法纯化，成功获得了特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白中受体结合与(receptor bindingdomain，RBD)的广谱中和纳米抗体A2。本发明纳米抗体与RBD区域结合亲和力高；并且，可与多种主要的流行株(WT株、Alpha突变株、Beta突变株、Gamma突变株、Delta突变株、Omicron突变株)均具有良好的广谱中和作用，广谱中和活性好。本发明纳米抗体可以在原核细胞大肠杆菌中表达后纯化，并且纯度较高，有利于生产；其次，本发明纳米抗体在雾化前后理化性质没有改变，在作为预防和治疗吸入药物以及临床诊断等领域具有良好的应用前景和重要意义。
附图说明
图1为纳米抗体A2框架区与互补决定区分布图。
图2为pMECS-A2纳米抗体图谱。
图3为纳米抗体A2纯化后免疫印迹图。
图4为纳米抗体A2与WT、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron(B1.1.529)、Omicron(BA.5)、Omicron(BQ.1.1)假型病毒亲和力统计结果。
图5为纳米抗体A2与WT、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron(B1.1.529)、Omicron(BA.5)、Omicron(BQ.1.1)假型病毒入侵的中和活性统计结果。
图6为A2纳米抗体雾化前后的western blot实验验证图。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：动物免疫及噬菌体文库筛选
从北京义翘神州科技有限公司购置SARS-CoV-2(2019-nCoV)Spike S1-HisRecombinant Protein(货号：40591-V08H)，SARS-CoV-2Spike S1+S2(T19R，G142D，E156G，HR157-158deletion，L452R，T478K，D614G，P681R，D950N)Protein(ECD，His Tag)(货号：40589-V08B16)，SARS-CoV-2Spike S1+S2(G75V，T76I，R246N，(247，253)deletion，L452Q，F490S，D614G，T859N)Protein(ECD，His Tag)(货号：40589-V08B23)三种蛋白抗原；通过使用弗氏完全佐剂+各抗原0.15g进行免疫骆驼，每次免疫间隔两周，共免疫5次。免疫后血清稀释5000倍测定的OD450值＞1，且大于阴性血清OD450值2倍，判定免疫正常；后进行淋巴细胞分离及总RNA提取，进行两轮巢式pcr扩增出VHH，将pHEN噬菌粒载体酶切并与酶切后的VHH片段链接；将链接产物电转转入TG1感受态细胞，立即加入2YT培养基复苏，共计得到100ml复苏产物，37℃复苏60min，进行文库构建；从平板上随机挑取24个单菌落做菌液PCR，琼脂糖凝胶电泳观察到23个以上的300bp左右的目的条带，插入率大于95％，抗体文库阳性率合格。随后进行文库筛选，经2轮筛选获得含抗体基因的噬菌体富集。从每个文库挑选多个克隆进行PE-ELISA鉴定，将获得的阳性克隆进行测序，最终获得200多种序列不同的纳米抗体。挑选上清液初筛具有阻断活性的纳米抗体，利用大肠杆菌表达后进行亲和力和中和活性检测。筛选出具有高亲和力和良好中和活性的纳米抗体A2，依次由框架区FR1、互补决定区CDR1、框架区FR2、互补决定区CDR2、框架区FR3、互补决定区CDR3和框架区FR4组成，具体信息如图1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码纳米抗体A2的核酸分子如SEQ IDNo.2所示。
实施例2
1、表达单域抗体B11的原核表达载体的构建
采用A2的DNA分子的替换表达载体pMECS的PstI和NotI酶切位点之间的DNA分子，得到表达与组氨酸融合的纳米抗体A2的重组原核表达载体pMECS-A2。图谱如图2所示。A2的DNA分子是在SEQ ID No.2的5’端(SEQ ID No.2的第1位)和3’(SEQ ID No.2的第364位)末端分别加入PstI和NotI酶切位点。
2、抗RBD纳米抗体的表达与纯化
将构建好的pMECS-A2载体(如图2所示)，电转到WK6感受态细胞中，得到重组菌WK6/pMECS-A2。将重组菌WK6/pMECS-A2接种于5ml LB液体培养基中，37℃、220rpm条件下培养至OD600＝0.6，然后将菌液加入含有MgCl2、葡萄糖和AMP+(氨苄青霉素)的500ml 2YT培养基中，并加入终浓度为0.3mM的IPTG，在28℃、220rpm进行培养表达，17h后离心收集菌体，保存于-80℃备用。
将得到的菌体通过冻融方法获得上清，并将得到的上清液通过NI-NTA琼脂糖色谱柱，随后用10个柱体积的PBS缓冲液洗去未结合的蛋白，最后用15ml清洗液(500mM咪唑缓冲液(PBS))进行洗脱蛋白，每5ml收集1管，经过WB实验(孵育HIS抗体)鉴定得到纯化后的抗RBD纳米抗体A2(如图3所示)。
将上述纯化后的抗RBD纳米抗体装入7KD透析袋中，经过PBS过夜透析得到PBS缓冲液的纳米抗体。
实施例3：抗RBD广谱中和A2纳米抗体的亲和力测定
待测抗体：实施例2中纯化的A2纳米抗体。
利用生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry，BLI)进行A2纳米抗体与多种突变株RBD区域抗原抗体亲和力检测，该技术是基于光干涉原理的非标记技术。具有操作简单、检测时间短、样品耗量少、无需人工标签可直接参与分析、检测等优点。通过对光干涉信号的实时监测，BLI技术能够广泛应用于生物分子相互作用的分析和快速检测。
在测定SARS-CoV-2RBD蛋白与A2纳米抗体相互作用时，首先将抗原RBD蛋白包被于芯片传感器上，使纳米抗体A2作为流动相，从而进行亲和常数的测定。
互作实验：将RBD抗原中加入相同摩尔的生物素化试剂；将加入生物素化试剂的RBD抗原完全加入脱盐柱中；加入200μl 1×PBS流穿，去除多余的生物素，收集生物素化RBD抗原所在流穿液；取生物素化RBD抗原所在流穿液，稀释后进行亲和力检测。通过SA芯片特异性捕获生物素化的RBD抗原，信号达4.5nM后，分别与不同浓度(200nm、100nm、50nm、25nm、12.5nm)的A2纳米抗体进行结合。
程序设定如表1所示；并通过软件fortebio data analysis 12.0分析，计算结合常数(ka)，解离常数(kd)及亲和力常数(KD)。
表1
步骤 程序 描述 时间(s)
1 Baseline Baseline 60
2 Association Association 100
3 Dissociation Dissociation 200
4 Custom Custom 3
结果如图4和表2所示。KD值越低说明抗原与抗体亲和能力越强，本发明研究中的A2纳米抗体，与所检测的多种RBD蛋白亲和力常数在0.001nmol/L至58.6nmol/L之间。本发明的A2纳米抗体总体上对于SARS-CoV-2多种突变株的RBD具有理想的亲和力。
表2
实施例4：抗RBD广谱A2纳米抗体的SARS-CoV-2假型病毒中和活性测定
待测抗体：实施例2中纯化的A2纳米抗体。
SARS-CoV-2假型病毒是一种以逆转录病毒的复制核心元件与SARS-CoV-2病毒的包膜刺突糖蛋白(即S蛋白)组装形成的新型病毒颗粒。假型病毒与真病毒相比，只能一次性感染细胞、宿主范围广、滴度高、不易被血清补体灭活，可以代替真病毒进行中和检测。假型病毒感染细胞的能力取决于其外面包裹的糖蛋白的种类与特性，是研究SARS-CoV-2的中和抗体抑制效率、受体利用和入侵感染机制的理想工具。
SARS-CoV-2突变株的假病毒购自北京义翘神州科技有限公司，包括SARS-CoV-2(2019-nCoV)(B.1.617.2)Spike Pseudovirus(货号：PSV011)、SARS-CoV-2(B.1.1.529)Spike Pseudovirus(货号：PSV016)、SARS-CoV-2B.1.1.529sublineage BA.4/BA.5/BA.5.2(Omicron)Spike Pseudovirus(货号：PSV022)。
将购买的SARS-CoV-2假病毒分别与不同稀释度的纳米抗体(起始浓度100μg/ml，2倍10个梯度稀释)混合后，加入预先接种的含293T-ACE2细胞的96孔板中，继续孵育48小时。SARS-CoV-2假型病毒含有荧光素酶报告基因，通过检测荧光素酶报告基因等方法可以测定假病毒的感染能力与水平。使用Promega公司的Bright-GloTM荧光素酶检测试剂盒(货号：pro-E2610)，按产品说明书裂解细胞并对细胞裂解液中的报告基因活性进行检测，将荧光素酶原始读值数据转换为百分比数据进行做图。
结果如图5所示，结果显示，本发明所获得的纳米抗体A2对SARS-CoV-2主要流行株(Alpha突变株、Beta突变株、Gamma突变株、Delta突变型株、Omicron突变株)均具有明显的抑制作用，对SARS-CoV-2假型病毒具有较强的抑制活性和中和活性，表明本发明的纳米抗体具有广谱抑制多种突变株SARS-CoV-2假型病毒感染的能力，是具有广谱作用的中和抗体。具体半数抑制浓度(IC50)见表3。
表3
SARS-CoV-2假病毒 IC50(ug/ml)
SARS-CoV-2WT 14.98
Alpha 13.82
Beta 2.59
Gamma 3.88
Delta 4.3
Omicron(B1.1.529) 3.34
Omicron(BA.5) 23.64
Omicron(BQ.1.1) 46.19
实施例5：A2广谱中和纳米抗体经雾化后性能判断
将通过雾化给药装置(玉研仪器)的纳米抗体在无菌1.5ml EP管中收集150μl，将雾化前和雾化后的纳米抗体样品进行Western Blot实验验证，加样10μl，二抗孵育同浓度的抗His抗体，结果如图6所示，经雾化后的纳米抗体与雾化前纳米抗体条带一致，未见降解。
取上述步骤中剩余的100μl雾化后纳米抗体与同体积雾化前纳米抗体进行ELISA亲和力测定检测，以PBS缓冲液作为阴性对照，表4中A、B、C为平行实验，结果如表4所示。
表4
A B C
A2抗体雾化前 0.438 0.535 0.625
A2抗体雾化后 0.444 0.538 0.649
阴性对照 0.17
由表4中的数据得出，经雾化后的纳米抗体与雾化前纳米抗体亲和力一致，性能未见改变。
以上所述仅为本发明的较佳实例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.特异性结合SARS-CoV-2刺突蛋白的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，氨基酸序列分别如下：
互补决定区CDR1：AASGYTTT；
互补决定区CDR2：IYTDGTST；
互补决定区CDR3：AADLAYVGSWYNPASFDY。
2.如权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。
3.与权利要求1或2所述纳米抗体相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为以下的任意一种：
(1)编码权利要求1或2所述纳米抗体重链可变区的核酸分子；
(2)含有(1)所述核酸分子的表达盒；
(3)含有(1)所述核酸分子的重组载体、或含有(2)所述表达盒的重组载体；
(4)含有(1)所述核酸分子的重组微生物、或含有(2)所述表达盒的重组微生物、或含有(3)所述重组载体的重组微生物；
(5)含有(1)所述核酸分子的细胞系、或含有(2)所述表达盒的细胞系、或含有(3)所述重组载体的细胞系。
4.如权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述核酸分子为核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示的DNA分子。
5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求1或2所述的纳米抗体和药学上可接受的载体。
6.权利要求1或2所述的纳米抗体和/或权利要求3或4所述的生物材料在制备抑制或中和SARS-CoV-2活性的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制或中和SARS-CoV-2活性的药物用于改善、预防或治疗SARS-CoV-2感染引起的疾病和/或用于抑制SARS-CoV-2感染。
8.权利要求1或2所述的纳米抗体和/或权利要求3或4所述的生物材料在制备用于检测SARS-CoV-2和/或SARS-CoV-2的刺突蛋白的产品中的应用。
9.权利要求1或2所述的纳米抗体和/或权利要求3或4所述的生物材料在制备用于诊断或辅助诊断SARS-CoV-2感染引起的疾病的产品中的应用。
10.根据权利要求7或9所述的应用，其特征在于，所述SARS-CoV-2感染引起的疾病为呼吸系统感染。
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