CN116606727B - 核酸检测装置及核酸检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种核酸检测装置及核酸检测方法。核酸检测装置包括承载本体、检测本体及运动本体。承载本体包括基板部及桥状部，桥状部设置于基板部的上表面，且桥状部上设置有一个样品垫。桥状部和基板部之间形成有通道，运动本体可拆卸式地设置于通道中，运动本体包括至少一个吸水区及至少一个非吸水区。核酸检测方法为使用样品垫进行核酸扩增以及使用核酸检测装置进行核酸检测的方法。本发明解决现行缺乏可居家使用，且具备核酸扩增功能及核酸检测功能的装置的问题。
Description
技术领域
本发明涉及核酸检测领域，尤其涉及一种核酸检测装置及核酸检测方法。
背景技术
核酸扩增及核酸检测目前已广泛应用于体外诊断及生命科学研究等领域，并且随着科学技术的发展，用于进行核酸扩增及核酸检测的装置逐渐开始往小型化、低成本及便捷化的方向发展。然而，现行用于核酸扩增装置一般都需要严格控制的核酸扩增反应期间的温度，因此核酸扩增装置中需要设置有温度控制装置，导致核酸扩增装置的体积难以缩减，使得核酸扩增装置体积及成本难以缩减，并且核酸扩增完成后还需要进一步进行核酸检测，才能确认核酸扩增的结果。由于前述理由，市面上大多只提供仅具有核酸检测功能的装置，例如病毒快筛等，但这类型快筛可能因为使用者为感染初期病毒量不够高，容易出现伪阴性的问题，因此现行市面上缺乏可居家使用，且具备核酸扩增功能及核酸检测功能的核酸检测装置，这是有待解决的问题。
发明内容
本发明的一目的在于解决现行缺乏可居家使用，且具备核酸扩增功能及核酸检测功能的核酸检测装置的问题。
基于本发明的目的，本发明提供一种核酸检测装置，包括承载本体、检测本体及运动本体，其中承载本体包括基板部及桥状部；其中桥状部设置于基板部的上表面，且桥状部与基板部之间形成有一个通道；其中检测本体包括起始垫、至少一条控制线及至少一条检测线；其中检测本体设置于基板部的上表面，且检测本体的起始垫位于通道中；其中桥状部设置有窗口，用于检视检测本体的至少一条控制线及至少一条检测线所显示的检测结果；其中在桥状部对应检测本体的起始垫处设置有样品垫；其中运动本体可拆卸式地设置于通道中，且运动本体包括至少一个吸水区及至少一个非吸水区。
于本发明的一实施例中，样品垫包括核酸吸附层。
于本发明的一实施例中，样品垫进一步包括核酸萃取层，核酸萃取层堆迭于核酸吸附层的上表面。
于本发明的一实施例中，样品垫进一步包括核酸扩增试剂。
于本发明的一实施例中，核酸萃取装置进一步包括导引本体，其中导引本体的一端连接运动本体的上表面，导引本体覆盖承载本体的桥状部的该样品垫的上表面；其中导引本体上设置有多个开孔，多个开孔中的各个开孔用于暴露样品垫的上表面，其中多个开孔中的至少一个开孔对应运动本体的吸水区，其中多个开孔中的至少一个开孔对应运动本体的非吸水区。
于本发明的一实施例中，其中多个开孔中对应运动本体的吸水区的至少一个开孔中，进一步设置有核酸萃取层。
本发明提供一种核酸检测方法，步骤依序包括提供核酸检测装置步骤、样品添加步骤、核酸扩增步骤及核酸检测步骤；其中提供核酸检测装置步骤为提供前述的核酸检测装置；其中样品添加步骤为使运动本体的吸水区对应到样品垫后，将待测样品添加至样品垫，其中待测样品中包括目标核酸；其中核酸扩增步骤为使运动本体的非吸水区对应到样品垫后，使样品垫中的目标核酸与核酸扩增试剂作用，以形成目标核酸的扩增子；其中核酸检测步骤为将运动本体由通道抽离后，按压桥状部由此使样品垫与起始垫接触后，将洗脱液添加至样品垫，使样品垫中的目标核酸的扩增子随着洗脱液流动至检测本体的起始垫后，再由起始垫流向检测本体的所述的至少一条控制线及所述的至少一条检测线，其中目标核酸的扩增子会在所述的至少一条检测线被捕获。
于本发明的一实施例中，完成样品添加步骤后，进一步包括第一清洗步骤，第一清洗步骤为使运动本体的吸水区对应到样品垫后，将第一清洗液添加至样品垫。
于本发明的一实施例中，完成核酸扩增步骤后，进一步包括第二清洗步骤，第二清洗步骤为使运动本体的吸水区对应到样品垫后，将第二清洗液添加至样品垫。
于本发明的一实施例中，完成样品添加步骤后，进一步包括第一清洗步骤，且完成核酸扩增步骤后，进一步包括第二清洗步骤；第一清洗步骤为使运动本体的吸水区对应到样品垫后，将第一清洗液添加至样品垫；第二清洗步骤为使运动本体的吸水区对应到样品垫后，将第二清洗液添加至样品垫。
综上所述，本发明提供的核酸检测装置及核酸检测方法可以方便使用者于居家环境中完成从添加待测样品、核酸扩增到核酸检测的完整流程，解决现行缺乏可居家使用，且具备核酸扩增功能及核酸检测功能的核酸检测装置的问题。
附图说明
图1为核酸检测装置于一实施例的立体示意图。
图2为图1的俯视示意图。
图3为图2移除导引本体的示意图。
图4为图3移除桥状部及运动本体的示意图。
图5为图1中的承载本体及检测本体的立体示意图。
图6为图2中A-A剖面线处的剖面图。
图7为承载本体的第一态样的侧视示意图。
图8为承载本体的第二态样的侧视示意图。
图9为承载本体的第三态样的侧视示意图。
图10为承载本体的第四态样的侧视示意图。
图11为本发明的核酸检测方法的步骤图。
符号说明：
1：核酸检测装置
2：承载本体
3：检测本体
4：运动本体
5：导引本体
6：指引标记
20：基板部
22：桥状部
30：起始垫
32：结合垫
34：反应膜
36：吸收垫
40：运动基板
50：第一图案标记
51：第二图案标记
52：第三图案标记
54：第一文字标记
55：第二文字标记
56：第三文字标记
57：第四文字标记
58：第五文字标记
59：第六文字标记
220：样品垫
222：通道
224：窗口
340：控制线
342：检测线
2200：核酸萃取层
2202：核酸吸附层
22a：第一侧壁
22b：连接面
22c：第二侧壁
A1：第一吸水区
A2：第二吸水区
A-A：剖面线
AP1：第一吸水垫
AP2：第二吸水垫
B：非吸水区
Bu1：第一卡扣部
Bu2：第二卡扣部
O1：第一开孔
O2：第二开孔
O3：第三开孔
S10：提供核酸检测装置步骤
S20：样品添加步骤
S25：第一清洗步骤
S30：核酸扩增步骤
S35：第二清洗步骤
S40：核酸检测步骤
WP：防水垫。
具体实施方式
于整个说明书中所述的「一实施例」表示结合实施例所描述的特定特点、结构或特征包括于至少一个实施例中。因此于整个说明书的各个位置所述的「一实施例」无需全都指相同实施例。另外，特定特点、结构或特征可在一个或多个实施例中以任何方式组合。
于整个说明书中所述的「第一」、「第二」、「第三」、「第四」、「第五」及「第六」等描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或者暗示相对重要性。
请参阅图1、图4、图5、图6、图7、图8、图9及图10，本发明提供一种核酸检测装置1，包括承载本体2、检测本体3及运动本体4。承载本体2包括基板部20及桥状部22。桥状部22设置于基板部20的上表面，并且桥状部22与基板部20之间形成有一个通道222。检测本体3包括起始垫30、至少一条控制线340及至少一条检测线342。检测本体3设置于承载本体2的基板部20的上表面，且检测本体3的起始垫30位于通道222中。桥状部22的一端设置有窗口224，窗口224用于让检测本体3穿过桥状部22的一端。桥状部22在对应检测本体3的起始垫30处设置有样品垫220。运动本体4可拆卸式地设置于通道222中，且运动本体4包括至少一个吸水区及至少一个非吸水区B。
请参阅图1、图2、图3、图5、图6及图7，于本发明的一实施例中，承载本体2的基板部20用于承载桥状部22、检测本体3及运动本体4。桥状部22包括第一侧壁22a、连接面22b及第二侧壁22c，第一侧壁22a的一侧连接于基板部20的上表面，且靠近起始垫30的位置，第一侧壁22a的另一侧与连接面22b的一侧连接，连接面22b的另一侧与第二侧壁22c的一侧连接，第二侧壁22c的另一侧连接于基板部20的上表面，且靠近所述的至少一条控制线340及所述的至少一检测线342的位置，第二侧壁22c与基板部20的连接处设置有一个窗口224，窗口224用于让检测本体3穿过第二侧壁22c。连接面22b对应检测本体3的起始垫30处设置有样品垫220。
请参阅图1、图2、图3及图4，于本发明的一实施例中，其中检测本体3为侧向流体免疫层析试纸，检测本体3以黏贴的方式固定于承载本体2的基板部20的上表面。检测本体3包括起始垫30、结合垫32、反应膜34及吸收垫36，起始垫30设置于检测本体3的一端，吸收垫36设置于检测本体3的另一端，起始垫30的一端与结合垫32的一端连接，结合垫32的另一端与反应膜34的一端连接，反应膜34的另一端与吸收垫36的一端连接。反应膜34上包括至少一条控制线340及至少一条检测线342。
请参阅图1、图2、图3、图4、图5、图6及图7，于本发明的一实施例中，检测本体3经由窗口224穿过第二侧壁22c，因此检测本体3的至少一条控制线340及至少一条检测线342会位于桥状部22外，让使用者可以看到检测本体3的至少一条控制线340及至少一条检测线342。因此在桥状部22上设置窗口224的主要功能为让使用者可以看到检测本体3的至少一条控制线340及至少一条检测线342，由此方便使用者判读检测结果。
前述承载本体2的态样并非限制承载本体2仅可为前述的态样，以下将前述承载本体2的态样称为承载本体2的第一态样，并另举例承载本体2的其他态样，分别代表承载本体2的第二态样、第三态样及第四态样的实施例。承载本体2的第二态样、第三态样及第四态样与承载本体2的第一态样的差异在于桥状部22的结构及窗口224位于桥状部上的位置，以下分别叙述承载本体2的各个态样，并请参阅图1至图10。
请参阅图7，图7即为承载本体2的第一态样的侧视示意图，细节可参酌先前描述的段落，并进一步搭配图1至图6。
请参阅图8，图8为承载本体2的第二态样的侧视示意图，桥状部22的一端及另一端皆设置于基板部20的上表面，承载本体2的第二态样与第一态样的差异在于桥状部22遮盖住整个检测本体3，桥状部22对应检测本体3的起始垫30处设置有样品垫220，桥状部22在对应检测本体3的至少一条控制线340及至少一条检测线342的位置设置有窗口224。
请参阅图9，图9为承载本体2的第三态样的侧视示意图，承载本体2的第三态样与承载本体2的第二态样基本一致，差异在于桥状部22上设置样品垫220处呈现凹槽的态样，由此缩短样品垫220与检测本体3的起始垫30之间的距离。
请参阅图10，图10为承载本体2的第四态样的侧视示意图，桥状部22的一端设置于基板部20的上表面，桥状部22呈现阶梯状，由此缩短样品垫220与检测本体3的起始垫30之间的距离，此外桥状部22的另一端设置有第一卡扣部Bu1，而基板部20的一端设置有第二卡扣部Bu2，其中第一卡扣部Bu1用于和第二卡扣部Bu2扣合，当使第一卡扣部Bu1和第二卡扣部Bu2扣合时，桥状部22会往样品垫220方向靠近，进而使样品垫220与检测本体3的起始垫30接触。
于上述各个承载本体2的实施态样中，其中承载本体2的第一态样中所述的窗口224为开孔。其中承载本体2的第二态样、第三态样及第四态样中，窗口224的态样可为开孔或透光材料，其中透光材料举例如透明塑胶、保鲜膜或透明玻璃板等，但实际实施时不限于此，亦可为其他具有透光性质的材料，让使用者可以从桥状部22外检视检测本体3上的至少一条控制线340及至少一条检测线342所显示的检测结果。
请参阅图1、图2、图3、图5及图6，于本发明的一实施例中，其中运动本体4包括运动基板40，且运动基板40包括至少一个吸水区及至少一个非吸水区B，其中吸水区指运动本体4上设置吸水垫的区域，其中非吸水区B指运动本体4上设置防水垫WP的区域，而吸水垫及防水垫WP皆是以黏贴方式设置于运动基板40的上表面，运动本体4可以沿着通道222的方向移动，使运动本体4的吸水区对应到样品垫220，或使运动本体4的非吸水区B对应到样品垫220，即通过运动本体4的移动，使样品垫220堆迭于吸水垫或防水垫WP的上表面，另外运动本体4也可以从通道222中抽离。前述仅为示范例，实际实施时不限于此，运动本体4的非吸水区B亦可为指无设置吸水垫的区域，因此当非吸水区B对应到样品垫220时，由于样品垫220未与吸水垫接触，因此添加于样品垫220的液体会留存于样品垫220中。其中移动运动本体4的方式，可为以手捏取或使用夹取工具来夹取运动本体4位于通道222外的部分，并推动或拉动运动本体4，以使运动本体4沿着通道222方向进行移动，其中所述的夹取工具举例如镊子或长尾夹等工具，本发明并不特别限制。
请参阅图6，于本发明的一实施例中，样品垫220包括核酸萃取层2200及核酸吸附层2202，核酸萃取层2200堆迭于核酸吸附层2202的上表面；于本发明的另一实施例中，样品垫220仅包括核酸吸附层2202。
请参阅图1、图2、图5及图6，于本发明的一实施例中，核酸检测装置1进一步包括导引本体5，导引本体5的一端连接运动本体4的上表面，当运动本体4设置于通道222中时，导引本体5覆盖于样品垫220的上表面，导引本体5上设置有多个开孔，用于暴露样品垫220的上表面，其中多个开孔中的至少一个开孔对应运动本体4的吸水区，且多个开孔中的至少一个开孔对应运动本体4的非吸水区B。
请参阅图1、图2及图6，于本发明的一实施例中，在导引本体5的多个开孔中对应运动本体4的吸水区的至少一个开孔中进一步设置有核酸萃取层2200，而多个开孔中的其他开孔则用于暴露样品垫220的上表面。
请参阅图1、图2、图3、图5及图6，于本发明的一实施例中，进一步包括多个提示标记，多个提示标记标示于导引本体5及承载本体2上，其中提示标记为提示本发明的核酸检测方法的步骤顺序的标记，可为文字标记、图案标记或其组合，各个提示标记的标示方式可为以印刷、压印、打孔、贴纸标示或使用荧光笔进行划记等标示方法，本发明并不特别限制。其中当多个提示标记为以打孔方式标记时，桥状部22的连接面22b上可进一步包括指引标记6，指引标记6用于与多个提示标记搭配，由此提示使用者当前样品垫220所对应到的运动本体4的位置，其中指引标记6可为文字标记、图案标记或其组合，指引标记6可为以印刷、压印、打孔、贴纸标示或使用荧光笔进行划记等标示方式，因此当提示标记未与指引标记6重迭时，指引标记6会被覆盖于导引本体5下方，而若提示标记与指引标记6重迭，则提示标记会暴露指引标记6。
请参阅图1至图11，本发明提供一种核酸检测方法，步骤依序包括提供核酸检测装置步骤S10、样品添加步骤S20、核酸扩增步骤S30及核酸检测步骤S40中；其中提供核酸检测装置步骤S10为提供本发明的核酸检测装置1；其中样品添加步骤S20为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将待测样品添加至样品垫220，其中待测样品中包括目标核酸；其中核酸扩增步骤S30为使运动本体4的非吸水区B对应到样品垫220后，使样品垫220中的目标核酸与核酸扩增试剂作用，以形成目标核酸的扩增子；其中核酸检测步骤S40为将运动本体4由通道222抽离后，按压桥状部22使样品垫220与起始垫30接触后，将洗脱液添加至样品垫220，使样品垫220中的目标核酸的扩增子随着洗脱液流动至检测本体3的起始垫30后，再由起始垫30流向检测本体3的所述的至少一条控制线340及所述的至少一条检测线342，其中目标核酸的扩增子会在所述的至少一条检测线342被捕获。
请参阅图1至图11，于本发明的一实施例中，完成样品添加步骤S20之后，进一步包括第一清洗步骤S25，第一清洗步骤S25为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第一清洗液添加至样品垫220。
请参阅图1至图11，于本发明的一实施例中，完成核酸扩增步骤S30之后，进一步包括第二清洗步骤S35，第二清洗步骤S35为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第二清洗液添加至样品垫220。
请参阅图1至图11，于本发明的一实施例中，完成样品添加步骤S20后，进一步包括第一清洗步骤S25，且完成核酸扩增步骤S30后，进一步包括第二清洗步骤S35；其中第一清洗步骤S25为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第一清洗液添加至样品垫220；其中第二清洗步骤S35为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第二清洗液添加至样品垫220。
请参阅图1至图11，于本发明的一实施例中，于核酸扩增步骤S30中所述的「使样品垫220中的目标核酸与核酸扩增试剂作用」为将核酸扩增试剂添加至样品垫220，使核酸扩增试剂与样品垫220中的目标核酸作用，以形成目标核酸的扩增子；于本发明的另一实施例中，于核酸扩增步骤S30中所述的「使样品垫220中的目标核酸与核酸扩增试剂作用」为样品垫220进一步包括有核酸扩增试剂，其中核酸扩增试剂可为以冻干的形式留存于样品垫220，因此于完成样品添加步骤S20后，即可使运动本体4的非吸水区B对应到样品垫220，让样品垫220中的目标核酸与样品垫220中的核酸扩增试剂作用，以形成目标核酸的扩增子。
以下提出各个实施例，并搭配图式进行具体说明，各个实施例中的具体内容如以下段落所述，其中所述的各个实施例包括实施例1、实施例2及实施例3。
于以下各个实施例中，待测样品以根癌农杆菌(学名：Agrobacteriumtumefaciens)菌液或根癌农杆菌基因体核酸作为示范例，以下根癌农杆菌统一简称为农杆菌。但待测样品的实际实施时不限于此，待测样品可以是微生物个体、组织、细胞、细菌、真菌、藻类、原生动物或原生菌类等生物或病毒。此外，待测样品亦可为游离核酸，其中游离核酸可为DNA或RNA，本发明并不特别限制，其中游离核酸可为事先对微生物个体、组织、细胞、细菌、真菌、藻类、原生动物或原生菌类等生物或病毒进行核酸萃取所形成的核酸，其中核酸萃取举例可为使用裂解液使前述的生物或病毒释出核酸，或将前述的生物或病毒添加至含有干燥的裂解液的膜层使其释出核酸，其中膜层举例如玻璃纤维(glass fiber)膜、滤纸、凝胶、不织布、纤维素(cellulose)膜、聚酯纤维(Polyester)膜或聚丙烯膜，本发明并不特别限制。
于以下各个实施例中，目标核酸以农杆菌的virG基因作为示范例，其中所针对的农杆菌的virG基因上的部分核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，并请参阅下方的表1，表1显示序列名称及对应的核苷酸序列，但实际实施时不限于此，可根据实务上的需求选定所欲检测的目标核酸，本发明并不限制，其中目标核酸可为DNA或RNA。
请参阅图4及图6，于以下各个实施例中，核酸扩增反应皆采用重组酶聚合酶扩增技术，因此核酸扩增试剂为重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)试剂，其中重组酶聚合酶扩增试剂中包括重组酶(recombinase)、单股DNA结合蛋白(asingle-stranded DNA-binding protein,SSB)、股替代聚合酶(strand-displacingpolymerase)、正向引子及反向引子，正向引子及反向引子用于结合至SEQ ID NO:1作为核酸扩增的起始点，其中正向引子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，并请参阅下方的表1，表1显示序列名称及对应的核苷酸序列，且正向引子核苷酸序列的5’端连接有化学标记物，其中化学标记物为生物素(biotin)，反向引子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，并请参阅下方的表1，表1显示序列名称及对应的核苷酸序列，且反向引子的5’端连接有荧光标记物，其中荧光标记物为荧光异硫氰酸盐(fluorescein isothiocyanate,FITC)，因此后续对目标核酸进行核酸扩增反应后，由于正向引子及反向引子会留在目标核酸的扩增子上，即目标核酸的扩增子上会带有荧光标记物及化学标记物，以利后续使用检测本体3对目标核酸的扩增子进行检测，其中由于目标核酸的扩增子带有荧光标记物，因此后续也可根据检测本体3的检测线342是否产生荧光讯号进行判断，若有产生荧光讯号，则表示有检测到目标核酸的扩增子，但实际实施时不限于此，荧光标记物亦可为其他常用于进行引子标记的荧光物质，化学标记物亦可为其他常用于进行引子标记的化学碱基修饰，而正向引子及反向引子可根据所欲检测的目标物质进行相应的设计，另外于实际实施时，正向引子上亦可标记荧光标记物，反向引子上亦可标记化学标记物，本发明不特别限制；其中重组酶会结合至正向引子或反向引子，并识别待测样品中的目标核酸上的同源DNA(homologous DNA)序列，同时引导正向引子或反向引子形成D环(D-loop)与单股DNA区间，而单股DNA结合蛋白会结合至单股DNA区间以稳定结构，接着股替代聚合酶会以正向引子或反向引子结合的位置作为起始点进行核酸扩增反应，并经由重复前述核酸扩增反应持续产生目标核酸的扩增子(amplicon)，但实际实施时不限于此，核酸扩增反应亦可为滚环核酸扩增(Rolling CircleAmplification,RCA)技术、解旋酶依赖性扩增(Helicase-Dependent Amplification,HDA)技术、股替代扩增(Strand Displacement Amplification,SDA)技术、切口酶恒温扩增反应(Nicking Enzyme Amplification Reaction,NEAR)技术、核酸序列依赖性扩增(Nucleicacid sequence-Based amplification,NASBA)技术、指数扩增反应(exponentialamplification reaction,EXPAR)技术或恒温环型核酸扩增(Loop mediated isothermalamplification,LAMP)技术等等温核酸扩增技术，并根据使用的等温核酸扩增技术使用对应的等温核酸扩增试剂，即滚环核酸扩增试剂、解旋酶依赖性扩增试剂、股替代扩增试剂、切口酶恒温扩增反应试剂、核酸序列依赖性扩增试剂、指数扩增反应试剂或恒温环型核酸扩增试剂等等温核酸扩增试剂，同时若待测样品为RNA，或待测样品经由核酸萃取层2200裂解后产生RNA，可于核酸扩增反应中进一步添加核酸反转录反应试剂。
表1：SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2及SEQ ID NO:3对应的核苷序列酸，核苷序列酸由左至右的方向为5’端往3’端的方向
请参阅图6，于以下各个实施例中，核酸萃取层2200为含有干燥的裂解液的玻璃纤维(glass fiber)膜，其中裂解液为细菌裂解液，但实际实施时不限于此，核酸萃取层2200亦可为滤纸、凝胶、不织布、纤维素(cellulose)膜、聚酯纤维(Polyester)膜、聚丙烯膜，而裂解液可根据待测样品进行调整，因此亦可为其他类型的裂解液，以裂解细胞、病毒、真菌、原生动物、藻类等其他种类的待测样品，使待测样品释出核酸。
请参阅图6，于以下各个实施例中，核酸吸附层2202为二氧化硅膜(silicamembrane)，但实际实施时不限于此，核酸吸附层2202亦可为带有二氧化硅微粒之薄膜、带有硅藻土(Diatomaceous Earth)之薄膜、滤纸、whatman 903滤纸、纤维素(cellulose)膜、Fusion 5滤纸、聚醚砜(polyethersulfone/PES)膜、尼龙(Nylon)膜。
于以下各个实施例中，第一清洗液及第二清洗液皆为无水乙醇，但实际实施时不限于此，第一清洗液及第二清洗液亦可为异丙醇或95％v/v乙醇，并且第一清洗液与第二清洗液可为不同清洗液，举例如第一清洗液体为异丙醇，第二清洗液为无水乙醇。
请参阅图1、图4、图5、图6及图7，于以下各个实施例中，核酸检测装置1的承载本体2为前述第一态样，作为承载本体2的示范例，基板部20为长方形片体，而桥状部22的第一侧壁22a、连接面22b及第二侧壁22c共同形成U字形片体，因此基板部20和桥状部22之间形成有一个通道222，检测本体3的起始垫30位于通道222中，并且桥状部22的连接面22b上设置有样品垫220，样品垫220的正下方即对应到检测本体3的起始垫30，而检测本体3的另一端则经由窗口224穿过第二侧壁22c，并且窗口224的底缘即为基板部20的上表面，使检测本体3可以平放在基板部20的上表面，并使控制线340及检测线342位于通道222外，方便使用者进行观察，但实际实施时不限于此，基板部20的形状亦可为圆形或正方形等其他形状，可以根据实务需求进行调整，本发明并不特别限定，桥状部22亦可为第一侧壁22a、连接面22b及第二侧壁22c共同连接形成的弧形片体，此外其他同样可以形成桥状结构，且可与基板部20之间形成通道222的均等改变或变化，皆仍应属本发明的范畴；其中桥状部22的材料为纸材料中的白纸板，但实际实施时不限于此，亦可为其他类型的纸材料，例如淋膜纸、牛皮纸、图画纸等纸质材料，此外桥状部22亦可为可挠性材料，举例如可挠性塑胶、可挠性玻璃或橡胶等具有可挠性的材料，其中可挠性塑胶举例如聚乙烯(polyethelyne,PE)或聚对苯二甲酸乙二酯(polyethylene terephthalate,PET)等。由于桥状部22可以弯折，因此当运动本体4由通道222抽离后，可以通过按压连接面22b的方式让桥状部22的第一侧壁22a及第二侧壁22c弯折，或使桥状部22的连接面22b朝起始垫30的方向弯折，由此使连接面22b的样品垫220与检测本体3的起始垫30接触；其中样品垫220是以嵌设方式固定于连接面22b，其中所述的嵌设方式为于运动本体4的一端预留一个贯穿孔，并以黏接方式使样品垫220固定于贯穿孔中，同时暴露样品垫220的上表面及下表面，但实际实施时不限于此，也可以使用双面胶、泡棉胶黏贴或是以夹具固定的方式使样品垫220固定于贯穿孔中；其中样品垫220包括核酸萃取层2200及核酸吸附层2202，其中核酸萃取层2200堆迭于核酸吸附层2202的上表面。
请参阅图4、图6及图7，于以下各个实施例中，检测本体3为侧向流体免疫层析试纸(lateral flow immunochromatography paper)，检测本体3以黏贴的方式固定于承载本体2的上表面；其中检测本体3包括起始垫30、结合垫32、反应膜34及吸收垫36，起始垫30设置于检测本体3的一端，吸收垫36设置于检测本体3的另一端，起始垫30的一端堆迭于与结合垫32的一端，结合垫32的另一端堆迭于与反应膜34的一端，吸收垫36的一端堆迭于反应膜34的另一端；其中起始垫30用于接收洗脱液及目标核酸的扩增子，并使目标核酸的扩增子随着洗脱液流向结合垫32，其中由于以下各个实施例中，核酸吸附层2202为二氧化硅膜，二氧化硅膜会吸附目标核酸的扩增子，因此后续可通过洗脱液改变二氧化硅膜的酸碱值或盐类浓度，由此使目标核酸的扩增子由二氧化硅膜释出，并随着洗脱液流向检测本体3的起始垫30，其中洗脱液为无核酸酶水(nuclease-free water)，但实际实施时不限于此，亦可为低盐缓冲液，举例如pH值为8.0的TE缓冲液(Tris-EDTA buffer,TE buffer)，TE缓冲液中包括的三羟甲基胺基甲烷(Tris)及乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)，其中三羟甲基胺基甲烷的浓度可为10mM，其中乙二胺四乙酸的浓度可为1mM，但实际实施时不限于此，可以依据实务需求调整低盐缓冲液中各个成分的浓度及pH值，且不限于TE缓冲液，亦可为其他洗脱核酸时会使用到的缓冲液。
请参阅图4，于以下各个实施例中，起始垫30为玻璃纤维膜，但实际实施时不限于此，亦可为滤纸、不织布、纤维素(cellulose)膜、聚酯纤维(Polyester)膜或聚丙烯膜。
请参阅图4，于以下各个实施例中，结合垫32中包括有显色物质，其中结合垫32为玻璃纤维膜，其中显色物质为抗化学标记物抗体的载体粒子，包括抗化学标记物抗体及载体粒子，其中抗化学标记物抗体连接于载体粒子的表面，其中抗化学标记物抗体为抗生物素抗体，其中载体粒子为奈米金粒子。由于目标核酸的扩增子上带有化学标记物，因此显色物质中的抗化学标记物抗体会结合至目标核酸上的化学标记物，但实际实施时不限于此，结合垫32亦可为滤纸、不织布、纤维素(cellulose)膜、聚酯纤维(Polyester)膜、聚丙烯膜；其中显色物质中的载体粒子不限于奈米金粒子，亦可为荧光微珠、彩色聚苯乙烯(Polystyrene)微珠、磁性微珠、碳奈米微粒、硒奈米微粒或银奈米微粒等载体；其中显色物质中的载体粒子的表面不限于连接抗化学标记物抗体，亦可为抗化学标记物核酸适体(aptamer)、抗荧光标记物抗体或抗荧光标记物核酸适体；于本发明的另一实施例中，显色物质亦可为有机荧光基团或纺织染料。
请参阅图4，于以下各个实施例中，反应膜34为硝化纤维膜(nitrocellulosemembrane)，反应膜34利用毛细现象使流至结合垫32的洗脱液往吸收垫36的方向移动，其中目标核酸的扩增子及显色物质亦会随着洗脱液往吸收垫36的方向移动，但实际实施时不限于此，反应膜34亦可为聚偏氟乙烯膜(poly(vinylidene fluoride),PVDF)、醋酸纤维素(cellulose acetate)或尼龙(Nylon)膜。
请参阅图4，于以下各个实施例中，反应膜34的检测线342的数量为一条，检测线342上包括抗荧光标记物抗体，其中抗荧光标记物抗体为抗荧光异硫氰酸盐抗体，由于目标核酸的扩增子上带有荧光标记物，因此目标核酸的扩增子会被检测线342的抗荧光标记物抗体捕捉而固定于检测线342，并且由于目标核酸上结合有显色物质，因此会形成可以用视觉观察到的显色带，但实际实施时不限于此，反应膜34的检测线342的数量亦可为多条，检测线342上不限于抗荧光标记物抗体，亦可以根据所欲捕捉的目标核酸上的标记物进行调整，且不限于抗体亦可为核酸适体，举例可将抗荧光标记物抗体改为抗化学标记物抗体、抗荧光标记物核酸适体或抗化学标记物核酸适体。
请参阅图4，于以下各个实施例中，反应膜34的控制线340的数量为一条，控制线340上包括二级抗体，其中二级抗体用于捕捉显色物质中的抗化学标记物抗体，由此使显色物质被固定于控制线340，形成可以用视觉观察到的显色带，但实际实施时不限于此，反应膜34的控制线340的数量亦可为多个，反应膜34的控制线340上的二级抗体可以根据所欲捕捉的显色物质的态样进行调整，举例可为捕捉显色物质中的抗荧光标记物抗体、抗化学标记物核酸适体或抗荧光标记物核酸适体。
请参阅图4，于以下各个实施例中，吸收垫36为高吸水性纸材，其中高吸水性纸材举例如滤纸，用于吸收由反应膜34流至吸收垫36的洗脱液，但实际实施时不限于此，吸收垫36亦可为不织布、吸水凝胶等高吸水性材料。
请参阅图1、图3、图5及图6，于以下各个实施例中，运动本体4的运动基板40为长方形片体，且运动基板40上设置有两个吸水垫及一个防水垫WP，以下将两个吸水垫分别称为第一吸水垫AP1及第二吸水垫AP2，防水垫WP设置于第一吸水垫AP1及第二吸水垫AP2之间，运动本体4上设置第一吸水垫AP1的区域及设置第二吸水垫AP2的区域皆为吸水区，运动本体4上设置防水垫WP的区域为非吸水区B，其中将运动本体4上设置第一吸水垫AP1的区域称为第一吸水区A1，以及将运动本体4上设置第二吸水垫AP2的区域称为第二吸水区A2，而吸水垫及防水垫WP皆是以黏贴方式设置于运动本体4的上表面，运动本体4为可拆卸式地设置于通道222中，而由于检测本体3设置于基板部20的上表面，因此运动本体4位于通道222中的部分会堆迭于检测本体3的上表面。当运动本体4可拆卸式地设置于通道222中时，运动本体4可以沿着通道222的方向移动，使运动本体4的第一吸水区A1、非吸水区B或第二吸水区A2对应到样品垫220，即使样品垫220堆迭于第一吸水垫AP1的上表面、防水垫WP的上表面或第二吸水垫AP2的上表面，并且运动本体4也可以从通道222中抽离；其中运动基板40的长度大于通道222的长度，因此当运动本体4于通道222中进行移动时，仅会有局部的运动本体4容置通道222中，方便使用者以手捏取的方式或使用夹取工具来夹取的方式抓住运动本体4位于通道222外的部分，借此移动运动本体4。由于样品垫220固定于桥状部22的连接面22b，因此于添加待测样品、第一清洗液、核酸扩增试剂或第二清洗液时，样品垫220皆维持在固定位置，仅需移动运动本体4以使吸水区或非吸水区B对应到样品垫220后，即可直接对着样品垫220添加待测样品、第一清洗液、核酸扩增试剂或第二清洗液，相较于移动样品垫220以对应到吸水区或非吸水区B的结构设计，本发明可以减少使用者须不断重新确认样品垫220当前所在位置的负担，达到减少使用者添加待测样品、第一清洗液、核酸扩增试剂或第二清洗液时弄错添加位置的功效。
请参阅图1、图2、图3、图5、图6及图11，于以下各个实施例中，核酸检测装置1包括有导引本体5，导引本体5为长方形片体，导引本体5的一端与运动本体4的一端相黏接，导引本体5的多个开孔包括第一开孔O1、第二开孔O2及第三开孔O3，其中第一开孔O1的正下方对应运动本体4的第一吸水区A1，其中第二开孔O2的正下方对应运动本体4的非吸水区B的一部分，其中第三开孔O3的正下方对应运动本体4的第二吸水区A2；导引本体5进一步包括多个提示标记，且桥状部22进一步包括指引标记6，其中多个提示标记包括第一图案标记50、第二图案标记51、第三图案标记52、第四图案标记53、第一文字标记54、第二文字标记55、第三文字标记56、第四文字标记57、第五文字标记58及第六文字标记59，其中第一图案标记50、第二图案标记51、第三图案标记52及第四图案标记53皆为以打孔方式标示于导引本体5的箭头图案；其中导引本体5的第一文字标记54、第二文字标记55、第三文字标记56、第四文字标记57、第五文字标记58及桥状部22的第六文字标记59皆为以印刷方式标示的提示文字，多个提示标记用于提示各个开孔所对应的步骤顺序。其中第一图案标记50指向第一开孔O1，第二图案标记51指向第二开孔O2，第四图案标记53指向第三开孔O3。其中第一开孔O1旁标示有第一文字标记54及第二文字标记55，第二开孔O2旁标示有第三文字标记56，第三开孔O3旁标示有第五文字标记58。其中第四文字标记57标示于导引本体5上对应运动本体4的非吸水区B的另一部分的位置，而第三图案标记52指向第四文字标记57。其中于承载本体2的连接面22b的样品垫220旁标示有第六文字标记59。其中第一文字标记54、第二文字标记55、第三文字标记56、第四文字标记57、第五文字标记58及第六文字标记59于图1及图2中皆以文字框表示，于图1及图2中各个文字框中填入的文字如下所述，其中第一文字标记54的文字为「步骤一：添加待测样品」，其中第二文字标记55的文字为「步骤二：添加第一清洗液」，其中第三文字标记56的文字为「步骤三：添加核酸扩增试剂」，其中第四文字标记57的文字为「步骤四：等待核酸扩增反应」，其中第五文字标记58的文字为「步骤五：添加第二清洗液后抽出运动本体4」，其中第六文字标记59的文字为「步骤六，按压后添加洗脱液」，其中第一文字标记54为提示进行样品添加步骤S20，其中第二文字标记55为提示进行第一清洗步骤S25，其中第三文字标记56及第四文字标记57为提示进行核酸扩增步骤S30，其中第五文字标记58为提示进行第二清洗步骤S35，其中第六文字标记59为提示进行核酸检测步骤S40。使用者可以手捏取运动本体4和导引本体5的相黏接的一端，并通过推动或拉动运动本体4的方式，使运动本体4沿着通道222的方向进行移动，或是将运动本体4由通道222中抽离，并且于执行各步骤时，当运动本体4的吸水区或非吸水区B对应到样品垫220后，可以手指或夹取工具进一步按压连接面22b，强化连接面22b的样品垫220与运动本体4的吸水区或非吸水区B的接触，再进行添加待测样品、第一清洗液、核酸扩增试剂或第二清洗液，由此稳固样品垫220的位置，并且通过让样品垫220与吸水区充分接触，可以确保吸水区可以完整吸收残余的液体。前述仅为示范例，实际实施时不限于此，于本发明的另一实施例中，样品垫220可为仅包括核酸吸附层2202，而多个开孔中对应运动本体4的吸水区的至少一个开孔中设置有核酸萃取层2200，例如于所述的第一开孔O1中设置核酸萃取层2200，其中核酸萃取层2200可为以黏接方式使核酸萃取层2200固定于第一开孔O1中，并暴露核酸萃取层2200的上表面及下表面，因此当第一开孔O1对应到样品垫220时，第一开孔O1中的核酸萃取层2200的下表面会和核酸吸附层2202的上表面接触。前述各项举例皆仅为示范例，实际实施时不以此为限，对本发明前述内容所做之均等变化与改变，皆应仍属本发明的涵盖范围。
实施例1：以农杆菌基因体核酸来评估本发明提供的核酸检测方法的工作温度、工作时间及核酸检测范围
于实施例1中，以农杆菌基因体核酸作为待测样品的示范例，并以农杆菌的virG基因作为所欲检测的目标核酸的示范例，并且于实施例1中为将核酸吸附层2202作为独立元件进行核酸扩增测试，并搭配检测本体3进行核酸检测测试。
于实施例1中核酸扩增反应为将核酸扩增试剂添加至核酸吸附层2202，以形成目标核酸的扩增子，并且于核酸扩增反应的期间使用多温度加热冷却振荡器作为温度控制装置，以控制核酸扩增反应的温度，并使用手持式温度数据记录器进行反应温度的量测及记录。
实施例1的实验步骤如下，首先于培养皿上放置核酸吸附层2202，并将培养皿放置至多温度加热冷却振荡器上，再来将待测样品添加至核酸吸附层2202，使待测样品中的核酸被核酸吸附层2202吸附，接着将核酸吸附层2202静置等待核酸吸附层2202自然干燥，再来将核酸扩增试剂添加至核酸吸附层2202，并以多温度加热冷却振荡器控制核酸扩增反应的温度，由此对核酸吸附层2202中的目标核酸进行核酸扩增反应，形成目标核酸的扩增子，同时在进行核酸扩增反应的期间，以手持式温度数据记录器量测及记录核酸扩增反应的温度，接着完成核酸扩增反应后，以镊子将核酸吸附层2202放置至运动本体4的吸水区后，将第二清洗液添加至核酸吸附层2202，由此洗去残留在核酸吸附层2202中的核酸扩增试剂，再来将核酸吸附层2202静置等待核酸吸附层2202自然干燥，接着以镊子将核酸吸附层2202放置至检测本体3的起始垫30后，将洗脱液添加至核酸吸附层2202，使核酸吸附层2202中的目标核酸的扩增子随着洗脱液流动至起始垫30后，再由起始垫30流经结合垫32后，接着再与反应膜34进行反应，其中目标核酸的扩增子会被反应膜34的检测线342所捕获；以下将核酸扩增反应的温度称为「工作温度」，核酸扩增反应的时间称为「工作时间」。其中待测样品分别以农杆菌基因体核酸中106拷贝数、104拷贝数、102拷贝数、10拷贝数、1拷贝数及0拷贝数的农杆菌基因体核酸进行测试，工作温度分别以20℃、23℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃及50℃进行测试，工作时间分别为5分钟、15分钟、25分钟、35分钟、45分钟及55分钟，每个实验条件皆进行三重复实验，并以三重复实验中的每个检测本体3上的检测线342及控制线340皆呈现阳性反应，才判断检测结果为阳性结果，所述的阳性反应即检测本体3的检测线342及控制线340皆有显色时，才判断为成功检测到目标核酸，若有三重复实验中有任一次实验中的检测本体3仅有控制线340显色且检测线342未显色，即判断检测结果为阴性结果，其中于同一测试条件下若判断为阳性结果，即代表三重复实验皆为阳性反应者，以“P”表示，并以逗号分隔后附上检测结果呈现阳性结果时所需的农杆菌基因体核酸的最低拷贝数的数值，而若各组别皆呈现为阴性结果则以“N”表示，实施例1的实验结果如下方的表2所示。
于下方的表2中，直行栏位表示不同的工作温度，横列栏位表示不同的工作时间，举例如表2的直行栏位为5分钟且横列栏位为35℃交叉处显示为“P，106”，代表于工作时间为5分钟且工作温度为35℃的条件下，三重复实验中检测本体3皆呈现阳性反应，因此判断为阳性结果，而所需的农杆菌基因体核酸的最低拷贝数为106拷贝数，代表仅在待测样品为106拷贝数的农杆菌基因体核酸时，才会获得阳性结果，而农杆菌基因体核酸为104拷贝数、102拷贝数、10拷贝数、1拷贝数及0拷贝数则为阴性结果；另外举例如表2的直行栏位为15分钟且横列栏位为30℃交叉处显示为“P，10”，代表于工作时间为15分钟且工作温度为30℃的条件下，三重复实验中检测本体3皆呈现阳性反应，因此判断为阳性结果，而所需的农杆菌基因体核酸的最低拷贝数为10拷贝数，代表当待测样品为10拷贝数的农杆菌基因体核酸时，即可获得阳性结果，且由于在10拷贝数的农杆菌基因体核酸时即可获得阳性结果，因此当待测样品为更高拷贝数的农杆菌基因体核酸时亦为阳性结果，即表示于106拷贝数、104拷贝数及102拷贝数的农杆菌基因体核酸时亦为阳性结果，只有当待测样品为1拷贝数及0拷贝数的农杆菌基因体核酸时为阴性结果；以上为两项举例，其他则依此类推。
下方的表2的实验结果显示，当工作温度为23℃且工作时间为45分钟时，待测样品至少需为104拷贝数的农杆菌基因体核酸才可获得阳性结果，即代表三重复实验皆为阳性反应者。当工作温度为23℃且工作时间为55分钟时，待测样品仅需为102拷贝数的农杆菌基因体核酸即可检测到目标核酸，显示于相同工作温度下，延长工作时间有助于检测到更低拷贝数的农杆菌基因体核酸，即提升检测目标核酸的灵敏度；另外当工作时间固定为55分钟时，于工作温度23～50℃皆可检测到农杆菌基因体核酸，其中当工作温度为23℃时，可检测到待测样品为102拷贝数的农杆菌基因体核酸中的目标核酸，而当温度为25～50℃时，待测样品中仅需为1拷贝数的农杆菌基因体核酸，即可检测到目标核酸，显示于相同工作时间下，随着工作温度的增加同样可以提升检测目标核酸的灵敏度；此外随着工作温度的增加，可以加速核酸扩增反应，举例当待测样品为1拷贝数的农杆菌基因体核酸时，于25℃的工作温度下需要45分钟才能观察到阳性结果，但当工作温度为30℃时，仅需25分钟即可观察到阳性结果，而当工作温度为35℃或40°C时，仅需15分钟即可观察到阳性结果，当工作温度为45℃时，更是于5分钟即可观察到阳性结果。实施例1的实验结果显示，可以获得目标核酸的扩增子的工作温度为23～50℃，工作时间为5～55分钟，并且可以检测到1拷贝数的农杆菌基因体核酸中的目标核酸，因此以下会以此实验结果进行进一步的验证；另外特别说明，前述的工作温度的范围及工作时间的范围并非用于对本发明进行限定，而实际实施时的工作温度的范围及工作时间的范围会根据核酸扩增试剂进行调整。
表2：实施例1的实验结果
实施例2：以农杆菌核酸来验证本发明方法可在室温环境下施行
实施例2的实验步骤与实施例1的实验步骤基本一致，差异仅在于核酸扩增反应改为于室温环境下进行，因此工作温度即为核酸扩增反应进行时当下的室温温度，并且工作时间固定为45分钟，并进行三重复实验，其中工作温度同样以手持式温度数据记录器量测及记录核酸扩增反应的温度，并以测量到的最高温度及最低温度作为工作温度的范围，实验结果如表3所示，表3呈现为三重复实验结果中各次测得的工作温度，以及于106拷贝数、104拷贝数、102拷贝数、10拷贝数、1拷贝数及0拷贝数的农杆菌基因体核酸作为待测样品时，检测本体3是否呈现阳性反应，若呈现阳性反应以“O”表示，阴性反应则以“X”表示，其中0拷贝数的农杆菌基因体核酸的组别是作为阴性对照组。实验结果显示，当待测样品为10拷贝数的农杆菌基因体核酸时，虽然于第2次的测试中未获得阳性反应，但于第1次及第3次的测试中皆为阳性反应，并且当待测样品为102拷贝数的农杆菌基因体核酸时，三重复实验实验结果皆呈现阳性反应，即判断为阳性结果，而此结果与实施例1中工作温度为25℃且工作时间为45分钟时，可检测到待测样品为1拷贝数的农杆菌基因体核酸中的目标核酸的结果相仿，因此实施例2的实验结果显示，在不依赖温度控制装置控制工作温度，并且放置至温度会产生变化的室温环境中，同样可以完成核酸扩增反应，且检测目标核酸的灵敏度与使用温度控制装置的效果相当。另外特别说明，前述的工作温度的范围及工作时间的范围并非用于对本发明进行限定，并且由于实施例2已证实无须温度控制亦可完成核酸扩增反应，同时实施例1证实随着工作温度的增加可以缩短核酸扩增反应的时间，因此实际实施时使用者亦可使用居家加热用品辅助进行加热，其中居家加热用品举例如暖暖包或蒸气眼罩等，举例如于核酸扩增步骤S30执行期间将基板部20堆迭于暖暖包上，由此使暖暖包散发的热量传递至样品垫220，借此提升核酸扩增反应的速度，缩短所需的工作时间。另外特别说明，前述的工作温度的范围及工作时间的范围同样并非用于对本发明进行限定。
表3：实施例2的实验结果
实施例3:以农杆菌验证本发明方法可实现样品之核酸萃取、扩增与检测
请参阅图11，实施例3的实验方法为根据本发明提供的核酸检测方法，并且核酸检测方法中包括第一清洗步骤S25及第二清洗步骤S35，因此步骤依序包括提供核酸检测装置步骤S10、样品添加步骤S20、第一清洗步骤S25、核酸扩增步骤S30、第二清洗步骤S35及核酸检测步骤S40，其中待测样品为农杆菌菌液，农杆菌菌液中的农杆菌的浓度以100μL中的菌落形成单位(Colony-forming unit,CFU)进行表示，因此单位为CFU/100μL，其中CFU的计算是将适当稀释的100μL农杆菌菌液涂于培养基上进行培养，基于每一个细菌在培养基上会生长形成单一菌落，并计算培养基上的菌落数量，每菌落形成单位称为1CFU，于实施例3中农杆菌菌液中的农杆菌的浓度分别为1.5×106CFU/100μL、1.5×104CFU/100μL、150CFU/100μL、15CFU/100μL、1.5CFU/100μL及0CFU/100μL，以下针对核酸检测方法各步骤分段进行陈述，并提供进一步的具体说明，并请参阅图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7及图11。
于提供核酸检测装置步骤S10为提供本发明的核酸检测装置1，其中核酸检测装置1的具体态样如前所述。
于样品添加步骤S20为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将待测样品添加至样品垫220，其中待测样品中包括目标核酸；于实施例3中具体为使用者依据第一文字标记54的指示，同步移动运动本体4及导引本体5，使第一图案标记50与指引标记6重迭，此时样品垫220会对应到第一开孔O1，同时样品垫220也会对应到第一吸水区A1，其中由于待测样品为农杆菌菌液，因此将农杆菌菌液添加至样品垫220后，农杆菌菌液中的农杆菌会先被核酸萃取层2200中的裂解液所裂解，而暴露农杆菌的核酸，之后农杆菌的核酸会被核酸吸附层2202所吸附，而残余液体则在第一吸水区A1被吸收。
于第一清洗步骤S25为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第一清洗液添加至样品垫220；于实施例3中具体为使用者依据第二文字标记55的指示，使样品垫220维持对应到第一开孔O1，同时样品垫220也会对应到第一吸水区A1，接着再添加第一清洗液至样品垫220，使残留于样品垫220中的杂质随着第一清洗液流出，并在第一吸水区A1被吸收。
于核酸扩增步骤S30为使运动本体4的非吸水区B对应到样品垫220后，使样品垫220中的目标核酸与核酸扩增试剂作用，以形成目标核酸的扩增子；于实施例3中具体为使用者依据第三文字标记56的指示，同步移动运动本体4及导引本体5，使第二图案标记51与指引标记6重迭，此时样品垫220会对应到第二开孔O2，同时样品垫220也会对应到运动本体4的非吸水区B，接着再添加核酸扩增试剂至样品垫220，再来依据第四文字标记57的指示，同步移动运动本体4及导引本体5，使第三图案标记52与指引标记6重迭，此时样品垫220会被导引本体5所覆盖，同时样品垫220也会对应到非吸水区B，接着依据第四文字标记57的指示等待核酸扩增反应进行，于本实施例中核酸扩增反应的工作时间为45分钟，使样品垫220中的目标核酸与核酸扩增试剂充分作用，以形成目标核酸的扩增子，而目标核酸的扩增子会被核酸吸附层2202所吸附。
于第二清洗步骤S35为使运动本体4的吸水区对应到样品垫220后，将第二清洗液添加至样品垫220；于实施例3中具体为使用者依据第五文字标记58的指示，同步移动运动本体4及导引本体5，使第四图案标记53与指引标记6重迭，此时样品垫220会对应到第三开孔O3，同时样品垫220也会对应到第二吸水区A2的吸水垫，接着再添加第二清洗液至样品垫220，使残留于样品垫220中的核酸扩增试剂随着第二清洗液流出，并在第二吸水区A2被吸收。
于核酸检测步骤S40中，为将运动本体4由通道222抽离后，按压桥状部22让桥状部22弯折，并使样品垫220与检测本体3的起始垫30接触，接着将洗脱液添加至样品垫220，使样品垫220中的目标核酸的扩增子随着洗脱液流动至检测本体3的起始垫30后，再由起始垫30流向检测本体3的至少一条控制线340及至少一条检测线342，其中目标核酸的扩增子会在所述的至少一条检测线342被捕获；于实施例3中具体为使用者将运动本体4及导引本体5抽出，使运动本体4由通道222抽离，并使导引本体5离开承载本体2的连接面22b的上表面后，由于桥状部22可以弯折，所以可以通过手指按压桥状部22的连接面22b，由此使样品垫220与起始垫30接触，接着将洗脱液添加至样品垫220，使样品垫220中的目标核酸的扩增子随着洗脱液流动至检测本体3的起始垫30后，再由起始垫30流经结合垫32，使结合垫32中的显色物质结合至目标核酸的扩增子，再来结合有显色物质的目标核酸的扩增子会于检测线342被捕捉，而形成可被视觉观察到的显色带，达到检测待测样品中的目标核酸的功效，而未反应的显色物质则会于控制线340被捕捉，残余的液体最后会被吸收垫36所吸收。
实施例3的实验结果如表4所示，表4呈现为三重复实验结果中各次测得的工作温度，以及以农杆菌菌液作为待测样品时，检测本体3是否呈现阳性反应，若呈现阳性反应以“O”表示，阴性反应则以“X”表示，其中农杆菌菌液中的农杆菌的浓度分别为1.5×106CFU/100μL、1.5×104CFU/100μL、150CFU/100μL、15CFU/100μL、1.5CFU/100μL、0CFU/100μL，其中农杆菌菌液中的农杆菌的浓度为0CFU/100μL的组别是作为阴性对照组；实验结果显示当待测样品为农杆菌菌液中的农杆菌的浓度为1.5CFU/100μL时，三重复实验结果皆呈现阳性反应，即获得阳性结果，且于农杆菌菌液中的农杆菌的浓度为0CFU/100μL的组别中三重复实验皆为阴性反应，代表根据本发明的核酸检测方法并未产生伪阳性反应，证实本发明使用本发明的核酸检测装置1及核酸检测方法，于未控制温度的室温环境中，确实完成对目标核酸的核酸扩增反应，并获得目标核酸的扩增子，且成功检测到目标核酸的扩增子。
表4：实施例3的实验结果
综上所述，本发明提供的核酸检测装置及核酸检测方法确实可以于无温度控制的室温环境下，完成对待测样品中的目标核酸的核酸扩增，以获得目标核酸的扩增子，并且经由检测扩增子来确认目标核酸的存在，同时通过本发明提供的核酸检测装置的机构设置，可以方便使用者于居家环境中完成从添加待测样品步骤、核酸扩增步骤到核酸检测步骤的流程，解决现行缺乏可居家使用，且具备核酸扩增功能及核酸检测功能的核酸检测装置的问题。
各个实施例仅用于说明本发明的内容，而非意图限定本发明的实施范围，因此依本发明权利要求所进行的均等变化与改变，皆应仍属本发明的涵盖范围。
Claims (10)
1.一种核酸检测装置，其特征在于，包括一承载本体、一检测本体及一运动本体，其中该承载本体包括一基板部及一桥状部；其中该桥状部设置于该基板部的一上表面，该桥状部与该基板部之间形成一通道；其中该检测本体包括一起始垫、至少一控制线及至少一检测线；其中该检测本体设置于该基板部的该上表面，且该检测本体的该起始垫位于该通道中；其中该桥状部设置有一窗口，用于检视该检测本体的该至少一控制线及该至少一检测线所显示的一检测结果；其中在该桥状部对应该检测本体的该起始垫处设置有一样品垫；其中该运动本体可拆卸式地设置于该通道中，且该运动本体包括至少一吸水区及至少一非吸水区；
该桥状部与该基板部共同限制该运动本体的移动位置，让该运动本体沿着该通道的方向移动，就能使该运动本体的吸水区对应到该样品垫，或使该运动本体的该非吸水区对应到样品垫。
2.如权利要求1所述的核酸检测装置，其特征在于，该样品垫包括一核酸吸附层。
3.如权利要求2所述的核酸检测装置，其特征在于，该样品垫还包括一核酸萃取层，该核酸萃取层堆迭于该核酸吸附层的一上表面。
4.如权利要求1所述的核酸检测装置，其特征在于，该样品垫还包括一核酸扩增试剂。
5.如权利要求1所述的核酸检测装置，其特征在于，还包括一导引本体，该导引本体的一端连接该运动本体的上表面，该导引本体覆盖于该承载本体的该桥状部的该样品垫的一上表面；其中该导引本体上设置有多个开孔，其中该多个开孔中的至少一个该开孔对应该运动本体的该吸水区，且该多个开孔中的至少一个该开孔对应该运动本体的该非吸水区。
6.如权利要求5所述的核酸检测装置，其特征在于，该多个开孔中对应该运动本体的该吸水区的至少一个该开孔中，还设置有一核酸萃取层。
7.一种核酸检测方法，其特征在于，步骤依序包括：
一提供核酸检测装置步骤：提供如权利要求1所述的该核酸检测装置；
一样品添加步骤：使该运动本体的该吸水区对应到该样品垫后，将一待测样品添加至该样品垫，其中该待测样品中包括一目标核酸；
一核酸扩增步骤：使该运动本体的该非吸水区对应到该样品垫后，使该样品垫中的该目标核酸与一核酸扩增试剂作用，以形成该目标核酸的一扩增子；一核酸检测步骤：将该运动本体由该通道抽离后，按压该桥状部使该桥状部上样品垫与该检测本体的该起始垫接触，接着将一洗脱液添加至该样品垫，使该样品垫中的该目标核酸的该扩增子随着该洗脱液流动至该检测本体的该起始垫后，再由该起始垫流向该检测本体的该至少一控制线及该至少一检测线，其中该目标核酸的该扩增子会在该至少一检测线被捕获。
8.如权利要求7所述的核酸检测方法，其特征在于，在完成该样品添加步骤后，还包括一第一清洗步骤，该第一清洗步骤为使该运动本体的该吸水区对应到该样品垫后，将一第一清洗液添加至该样品垫。
9.如权利要求7所述的核酸检测方法，其特征在于，在完成该核酸扩增步骤后，还包括一第二清洗步骤，该第二清洗步骤为使该运动本体的该吸水区对应到该样品垫后，将一第二清洗液添加至该样品垫。
10.如权利要求7所述的核酸检测方法，其特征在于，在完成该样品添加步骤后，还包括一第一清洗步骤，且完成该核酸扩增步骤后，还包括一第二清洗步骤；该第一清洗步骤为使该运动本体的该吸水区对应到该样品垫后，将一第一清洗液添加至该样品垫；该第二清洗步骤为使该运动本体的该吸水区对应到该样品垫后，将一第二清洗液添加至该样品垫。
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