CN116555268B - 靶向rna结合蛋白stau2的寡核苷酸及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种靶向RNA结合蛋白STAU2的寡核苷酸及其应用，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与shRNA中的至少一种。该寡核苷酸能够通过靶向沉默胰腺癌细胞及胰腺癌细胞异种移植瘤动物模型中STAU2基因或者下调STAU2基因的表达来调控胰腺癌细胞的增殖、转移和侵袭能力，最终改善或治疗胰腺癌，具有广泛的应用前景。

Description

靶向RNA结合蛋白STAU2的寡核苷酸及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种靶向RNA结合蛋白STAU2的寡核苷酸及其应用。
背景技术
胰腺癌（Pancreatic Adenocarcinoma, PAAD）是所有常见的实体恶性肿瘤中最致命的，具有“三高三低”的特点，即“发病率逐年升高、术后复发率高、死亡率高”和“早期诊断率低、手术切除率低、药物有效率低”，严重威胁人民的健康。生存率较低，5年生存率为9.2%。手术是唯一可以根治胰腺癌的手段，但患者早期诊断率低，就诊时多为局部晚期或伴远处转移，失去手术机会，手术比例不足20%。化疗作为胰腺癌的主要治疗手段，其疗效已达到瓶颈且易发生耐药。
近年的研究主要集中在新药物的开发如纳米脂质体伊立替康联合5FU/LV二线治疗非亚裔及亚裔PAAD患者，总生存时间分别为6.1个月和8.9个月；靶向联合化疗如马赛替尼联合吉西他滨治疗伴神经性疼痛的局部晚期或转移性PAAD较单药吉西他滨降低死亡风险54%；部分罕见突变位点的靶向治疗如拉罗替尼、恩曲替尼治疗NTRK融合的患者，BRAC1/2突变患者应用奥拉帕利作为含铂化疗后的维持治疗等，但适用人群极其有限。不断上升的发病率和持续的低生存率凸显了探索有效生物标志物、寻找特异性治疗靶点、开发干预药物的重要性。
STAU2（Staufen doubLe-stranded RNA-binding protein 2）是一种RNA结合蛋白，与RNA二级结构结合，参与调控核糖核蛋白复合物中部分mRNA转运、剪接、翻译和mRNA稳定性，是在细胞内调节RNA的代谢和功能的重要蛋白之一。有报道证明STAU2能促进癌症的发生与发展。STAU2基因定位于8号染色体p21.11上，ensembL数据库显示STAU2基因有29条转录本。
我们先前的研究中发现STAU2在胰腺癌中高表达且造成预后不良，并验证STAU2是胰腺癌中的一个关键致癌蛋白，其高表达促进胰腺癌的生长、迁移和侵袭，有望成为潜在的诊断生物标志物和治疗的靶点。但目前尚未有相关能够靶向STAU2且能够治疗胰腺癌的相关的抑制剂的报道。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种靶向STAU2且能够治疗胰腺癌的寡核苷酸。
本发明还要解决的技术问题是提供了寡核苷酸在制备靶向沉默癌细胞中STAU2基因或者下调癌细胞中STAU2基因的表达能力的药物中的用途。
本发明还要解决的技术问题是提供了一种靶向RNA结合蛋白STAU2治疗胰腺癌的组合物或药物制剂。
本发明最后要解决的技术问题是提供了所述的组合物或药物制剂在制备靶向沉默胰腺癌细胞中STAU2基因或者下调胰腺癌细胞中STAU2基因的表达药物的用途。
技术方案：为实现以上发明目的，本发明第一方面提供了一种靶向RNA结合蛋白STAU2的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与shRNA寡核苷酸中的至少一种，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO .1所示，所述shRNA寡核苷酸包括shSTAU2_1、shSTAU2_2或shSTAU2_3中的一种，所述shSTAU2_1的序列如SEQ ID NO .4所示，所述shSTAU2_2的序列如SEQ ID NO .5所示，所述shSTAU2_3的序列如SEQ ID NO .6所示。
其中，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：5’-ATTCATAAGGAGTTCCCTGGC-3'。
其中，所述shRNA寡核苷酸中shSTAU2_1的序列为5 '-GCCAGGGAACTCCTTATGAAT-3'，如SEQ ID NO .4所示；shSTAU2_2的序列为5 '-CCAACCTTCAAGCTCTTTCTT- 3 '，如SEQ IDNO .5所示；shSTAU2_3的序列为5 '-CCCAAAGATATGAACCAACCT-3 '，如SEQ ID NO .6所示。
其中，所述寡核苷酸还包括2'-甲氧乙氧基修饰或核酸链骨架修饰。
本发明内容还包括所述的寡核苷酸在制备靶向沉默癌细胞中STAU2基因或者下调癌细胞中STAU2基因的表达能力药物中的用途。
本发明还包括靶向沉默异种移植瘤动物模型中STAU2基因或者下调癌细胞中STAU2基因的表达。
其中，所述癌细胞包括但不仅限于胰腺癌细胞。
其中，所述用途包括抑制癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。
本发明内容还包括一种靶向RNA结合蛋白STAU2治疗胰腺癌的组合物或药物制剂，包括所述的寡核苷酸与药用载体。
其中，所述药用载体包括糖、聚胺、氨基酸、肽和脂质中的至少一种。
本发明内容还包括所述的组合物或药物制剂在制备靶向沉默胰腺癌细胞中STAU2基因或者下调胰腺癌细胞中STAU2基因的表达药物的用途。
其中，所述用途包括采用所述的组合物或药物制剂抑制癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。
有益效果：与现有技术相比，本发明具备以下优点：本发明的反义寡核苷酸和shRNA可以显著抑制STAU2 RNA和蛋白表达，而且可以显著抑制癌细胞的增殖、转移和侵袭，可以抑制Wnt/β-Catenin和EMT通路中C-Myc、SNAI1、N-Cad、E-Cad、β-Catenin和VIM等关键因子的表达，最终改善或治疗胰腺癌，本发明还证明该反义寡核苷酸能降低体内肿瘤细胞增殖速率，而且在体内依然具有良好的耐受性和安全性。本发明对于开发新型抗胰腺癌药物具有重要意义，具有广阔的前景和巨大的经济价值。
附图说明
图1为本发明的实施例1中Control-ASO和STAU2-ASO处理对PANC-1细胞的STAU2（A）RNA表达水平及（B）蛋白表达水平的影响；
图2为本发明的实施例2中Control-ASO和STAU2-ASO处理PANC-1细胞0、1、2、3、4、5天后，使用CCK8方法检测PANC-1细胞增殖的变化图；
图3为本发明的实施例2中Control-ASO和STAU2-ASO处理PANC-1细胞48h的（A）迁移与侵袭的显微镜图及（B）细胞数量统计图；
图4为本发明的实施例3中Control-ASO和STAU2-ASO处理PANC-1细胞的侵袭迁移相关通路标志蛋白相对表达量；
图5为本发明的实施例4中Control-ASO、STAU2-ASO处理的PANC-1细胞异种移植BALB/c裸鼠的（A）移植瘤大小、（B）肿瘤体积变化、（C）肿瘤相对增值率、（D）Control-ASO、STAU2-ASO肿瘤的HE及Ki67染色；
图6为本发明的实施例5中Control-ASO、STAU2-ASO转染处理的PANC-1细胞异种移植BALB/c裸鼠的（A）裸鼠照片；（B）第1、3、5、7、9、11、13天称重的体重变化；（C）重要脏器的HE染色图；
图7为本发明的实施例6中Control-ASO、STAU2-ASO转染处理的PANC-1细胞异种移植BALB/c裸鼠侵袭迁移相关通路标志蛋白相对表达量；
图8为本发明的实施例7中shNC、shSTAU2_1、shSTAU2_2、shSTAU2_3 转染PANC-1细胞后的STAU2 RNA相对表达量。
具体实施方式
如本文所用之术语：
“由 ……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由 ……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由 ……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1~5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1~4”、“1~3”、“1~2”、“1~2和4~ 5”、“1~3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括（A和B）和（A或B）；
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求（即出现次数）无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
如本文所用，术语“反义寡核苷酸”、“antisense-oLigonucLeotides”、“AS-Ons”、“ASO”含义相同。
术语“shRNA”、“short hairpin RNA”及“短发卡RNA”含义相同。
反义寡核苷酸是指那些能与特定的DNA、RNA以碱基互补配对的方式结合，并阻止其转录与翻译的短核苷酸片段。shRNA可以通过RNA干扰，高效、特异性地阻断体内同源基因的表达，促使同源mRNA降解，诱使细胞细胞表现出特定基因缺失的表型。
在本发明的实施方案中，提供一种靶向STAU2治疗胰腺癌的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与shRNA中的至少一种，其中，所述反义寡核苷酸的序列如 SEQ IDNO.1所示，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.4-6所示。
具体的，所述反义寡核苷酸与shRNA均具有在体内靶向沉默STAU2基因或者下调STAU2基因的表达。
可选的，在本发明中，所述寡核苷酸采用核糖修饰技术及核酸链骨架修饰技术修饰过。所述的修饰基本不改变寡核苷酸的活性，更佳地，所述修饰可提高寡核苷酸的稳定性、活性或治疗效果。
本发明中使用的核糖修饰为2'-甲氧乙氧基（2'-O-methoxyethy，2'-MOE）。2'-MOE可以增加ASO对核酸酶抗性，从而提高血浆稳定性、增加组织半衰期，从而延长药物作用，并且还可以增强ASO对互补RNA的结合亲和力，并在一定程度上降低免疫原性，减少副作用。
基于核酸链骨架的修饰技术发展出的药物在可溶性，抗核酸酶降解等方面大有改善，且易于大量合成。寡核苷酸的核酸链骨架修饰方法有多种，包括硫代法，例如将脱氧核苷酸链硫代修饰为硫代脱氧核苷酸链。该方法是将DNA骨架上的磷酸键的氧原子用硫原子替代，可抵抗核酸酶降解，提高半衰期。
应理解，任何能够保持所述寡核苷酸的大部分或全部活性的修饰都包含在本发明中。
将本发明所述的寡核苷酸转移到体内后，它们能够明显下调相关STAU2基因的表达。
本发明的核苷酸序列均由苏州泓迅生物科技股份有限公司合成提供。
下面结合实验，进一步说明本发明的技术方案。
材料与方法：
（1）细胞培养：选取购自上海富衡生物科技有限公司的人胰腺癌细胞系PANC-1（货号：FH0286）于温度为37℃、质量浓度为5%的CO2孵箱条件下，采用质量浓度为10%的FBS（胎牛血清，兰州荣晔生物科技有限责任公司，货号：RY-F22）的DMEM培养基（购自维森特生物技术（南京）有限公司，货号：319-005-CL，含4.5 g/L葡萄糖，含L-谷氨酰胺、酚红和丙酮酸钠）在T25培养瓶中传代培养。
（2）构建ASO模型：在六孔板中每孔接种1×105个PANC-1细胞，随机将细胞分别分为两组：Control-ASO和STAU2-ASO细胞组。根据TuschL规则并控制GC含量和靶点位置和碱基特异性通过Gene TooLs网站设计得到目标序列，STAU2-ASO序列（SEQ ID NO.1）为5’-ATTCATAAGGAGTTCCCTGGC-3'；Control-ASO阴性对照组序列（SEQ ID NO.2）为5’-ATCTCGAGTCCAACGGTTAGT-3'。细胞汇合度长至70%时，每孔加入Control-ASO和STAU2-ASO的体积分别为4μL，以及4μL脂质体Lipo8000转染试剂，用无FBS的DMEM 培养基117μL进行稀释得到两组混合液，混合液总体积为125μL，将该混合液室温放置20min。随后，六孔板中每孔中加入体积为2mL的无FBS的DMEM培养基，将脂质体包裹后的STAU2-ASO以及Control-ASO混合液滴加进细胞培养板中，培养6h后将每个培养皿中液体弃掉，加入含有10%FBS的DMEM培养基，在温度为37℃、质量浓度为 5%的CO2培养条件下继续培养。在细胞中加入脂质体Lipo8000转染试剂，使用无FBS的DMEM培养基稀释得到两组寡核苷酸混合液，将该混合液室温放置20min。随后六孔板中每孔加入无FBS的DMEM培养基，将脂质体包裹后的STAU2-ASO以及Control-ASO混合液滴加进细胞培养板中，培养6h后将每个培养皿中液体弃掉，加入10%的FBS的DMEM培养基，在温度为37℃、质量浓度为5%的CO2培养条件下继续培养。
（3）反转录及RT-qPCR反应：培养48h后收集细胞，使用购自南京凯基生物科技发展有限公司的1×PBS（10mM，pH7.4，含NaCL，KCL，Na2HPO4和KH2PO4，不含Ca、Mg离子，下同）洗两遍，每孔加入胰酶，收集细胞后，使用购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司的RNA-easyIsoLation Reagent（货号：R701-01）提取细胞内总RNA，测定RNA浓度并进行反转录反应。反转录反应体系（购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司的HiScript III RT SuperMix forqPCR (+gDNA wiper)，货号：R323-01）如表1所示。
表1
在温度为42℃条件下孵育2min后，37℃反转录15min，再在85℃加热5s失活反应，最后在温度为4℃条件下孵育直至冷却得到模板cDNA。
STAU2引物序列如SEQ ID NO.7-8所示，具体为：
STAU2_FP：5'-GCTCTGAAGCGAAATATGCCTGTC-3'；
STAU2_RP：5'-TTTAAGCTCCTGTAAGACGGTGGTCG-3'。
实时荧光定量PCR反应体系（实时荧光定量PCR试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司的）及条件如表2所示。
表2
蛋白免疫印迹分析：收集细胞后1×PBS润洗，于1.5 mL离心管中离心并弃去上清液。在离心管中加入RIPA蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂以及磷酸酶抑制剂，吹打至细胞裂解。4°C下充分裂解10分钟。4 °C温度下使用14000×g转速离心15分钟，取出离心管后收集的上清液即为蛋白溶液。采用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量，并按照说明书进行具体操作。使用酶标仪检测吸收波长为562 nm处的光密度，根据标准曲线计算出蛋白的浓度（所得细胞中Control-ASO组总蛋白浓度为7.12μg/μL，STAU2-ASO组总蛋白浓度为3.52μg/μL；动物模型组织Control-ASO组总蛋白浓度为8.42μg/μL，STAU2-ASO组总蛋白浓度为7.66μg/μL）。依据所需检测的蛋白大小，按比例配置8-12% SDS-PAGE凝胶。根据蛋白浓度配制相等质量蛋白样品，按要求加入4×LDS上样缓冲液和1×PBS至体积一致，将样品在沸水中加热5分钟后在12000×g转速下离心5分钟，即完成样品配置。将蛋白样品按规定体积加入到SDS-PAGE凝胶孔中，以持续80V的电压进行电泳，直至蛋白marker分开后，调至180V以使不同条带完全分离。电泳结束后，采用湿法转膜，将膜置于转膜液中，以200mA的电流在4°C条件下转膜2小时。转膜后，将膜放于封闭液中，在室温水平摇床上封闭一小时。然后将膜与特定抗体在4°C条件下水平摇床上孵育过夜，孵育结束后用封闭液洗涤。之后将膜与特定的二抗在室温条件下水平摇床上孵育1小时。孵育结束后，用封闭液洗涤，随后可以显色曝光。
人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠异种移植瘤小鼠模型：使用日龄35-42天、体重为16-20g的雄性裸鼠共6只。收集生长旺盛期人胰腺癌细胞PANC-1，在无菌条件下制备成细胞悬液，以0.1 mL接种于裸小鼠腋下，细胞数约5x106/只。用游标卡尺测量移植瘤裸小鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至80-100 mm3后将动物随机分组，分Control-ASO和STAU2-ASO两组，每组3只。
实施例1
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对PAAD细胞PANC-1的STAU2 RNA及蛋白表达水平的调控能力：在PAAD细胞系PANC-1内通过上述材料与方法（2）的实验方法建立Control-ASO和STAU2-ASO模型。使用上述材料与方法（3）的qRT-PCR方法分别检测转染Control-ASO和STAU2-ASO后的PANC-1细胞的STAU2 RNA和蛋白表达水平的变化，具体如图1A所示，转染STAU2-ASO后的PANC-1细胞的STAU2 RNA表达水平远低于对照组（Control-ASO），**p<0.01，图1B所示，转染STAU2-ASO后的PANC-1细胞的STAU2 蛋白表达水平远低于对照组（Control-ASO），STAU2-ASO模型建立成功。
结论：反义寡核苷酸STAU2-ASO可以显著抑制STAU2 RNA和蛋白表达。
实施例2
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对PAAD肿瘤细胞PANC-1的增殖和迁移侵袭能力的影响：图2表示Control-ASO和STAU2-ASO处理PANC-1细胞后0、1、2、3、4、5天后，使用CCK8方法检测加入STAU2-ASO后PANC-1细胞增殖的变化图（**p<0.01），通过图2可知，转染STAU2-ASO后，随着培养时间的延长，PANC-1细胞的增殖能力减弱。本实施例使用Transwell技术检测了STAU2-ASO模型中PANC-1细胞的迁移和侵袭能力，具体步骤为：按照材料与方法（2）的实验方法建立Control-ASO和STAU2-ASO模型48h后，将处理后的PANC-1以5×104个的数量转种在每个Transwell小室中（检测侵袭能力的小室内含有基质胶），12h后收集细胞在显微镜下观察，图3A为Control-ASO、STAU2-ASO转染PANC-1细胞48h后的细胞迁移与侵袭的显微镜图，图3B为Control-ASO、STAU2-ASO转染PANC-1细胞的数量统计图，***p<0.001，****p<0.0001。显微镜下观察发现，STAU2-ASO转染后PANC-1细胞的迁移能力降低，同时侵袭能力也降低，统计图结果显示显著性。
结论：STAU2-ASO能够显著抑制PAAD细胞系PANC-1细胞的增殖和迁移侵袭能力。
实施例3
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对胰腺癌细胞Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子的相关表达的影响。
SNAI1是转录因子，在癌症中促进肿瘤细胞增殖；E-Cad、N-Cad、β-Catenin和VIM为肿瘤转移相关因子，以上都是Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子；VINCULIN为内参因子。按照材料与方法（2）中的方法构建的STAU2-ASO模型以及使用材料与方法（4）中的蛋白免疫印迹分析方法检测SNAI1、N-Cad、E-Cad、β-Catenin与 VIM的蛋白表达。图4示出了Control-ASO和STAU2-ASO模型中PANC-1细胞的Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子的表达水平，可知STAU2-ASO能够调控Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子SNAI1、N-Cad、E-Cad、β-Catenin和VIM的表达来调控PAAD的增殖、迁移、侵袭能力。
结论：采用反义寡核苷酸靶向下调STAU2基因的表达，可以抑制Wnt/B-Catenin和EMT通路中SNAI1、N-Cad、B-Catenin和VIM，上调通路中E-Cad等关键因子的表达，最终改善或治疗胰腺癌。
实施例4
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对胰腺癌异种移植瘤动物模型的抑制活性。按照材料与方法（5）中的方法构建人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠异种移植瘤小鼠模型，利用该模型评价了STAU2-ASO对人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠异种移植瘤模型的抗肿瘤活性及其作用强度。STAU2-ASO隔天以10nmoL/只的剂量瘤内注射给药，对照组给予同样剂量的Control-ASO注射，给药13天。图5A、B显示，Control-ASO组肿瘤体积达到900mm3以上，STAU2-ASO组肿瘤体积约为300mm3，STAU2-ASO显著抑制肿瘤体积。STAU2-ASO对人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的相对增殖率T/C（%）为37.8%，抑瘤率为62.1%。解剖小鼠取出肿瘤进行Ki-67染色以及HE染色（图5D），STAU2-ASO组阳性率降低，反义寡核苷酸能降低体内肿瘤细胞增殖速率。
结论：反义寡核苷酸对人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠异种移植瘤生长增殖有显著抑制作用，抑瘤率为62.1%。
实施例5
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对胰腺癌异种移植瘤动物模型的安全性。
按照实施例4的给药剂量进行同样的方式给药，给药期间两组裸鼠模型体重均未见明显下降，且组间无显著性差异（图6A、图6B）。对于重要的脏器心、肝、脾、肺、肾等，使用4%多聚甲醛固定后进行HE染色，显微镜下观察。图6C表示Control-ASO、STAU2-ASO组模型各脏器组织形态良好无明显坏死和炎症迹象，且组间无明显差异。
结论：反义寡核苷酸在体内依然具有良好的耐受性和安全性。
实施例6
本实施例涉及检测反义寡核苷酸对胰腺癌异种移植瘤模型Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子的相关表达的影响：按照材料与方法（4）中的检测方法检测了Wnt/β-Catenin和EMT相关因子的表达水平，图7为检测结果，从Control-ASO和STAU2-ASO组异种移植瘤动物模型中的Wnt/β-Catenin和EMT相关因子的表达水平，可知STAU2-ASO能够调控动物模型胰腺癌肿瘤的Wnt/β-Catenin和EMT通路中关键因子C-Myc、SNAI1、N-Cad、E-Cad、β-Catenin和Vim的表达来调控PAAD的增殖、迁移、侵袭能力。
结论：反义寡核苷酸靶向下调动物模型中STAU2基因的表达，可以抑制Wnt/B-Catenin和EMT通路中SNAI1、N-Cad、B-Catenin和VIM，上调通路中E-Cad等关键因子的表达，最终改善或治疗胰腺癌。
实施例7
本实施例涉及检测shRNA对胰腺癌细胞系PANC-1细胞的STAU2表达水平的调控能力：在PAAD细胞系PANC-1内通过与构建STAU2-ASO模型相同的实验方法建立shNC（对照组）和shSTAU2_1、shSTAU2_2、shSTAU2_3干扰模型。其中shNC的序列为5 '-GTTCTCCGAACGTGTCACGTT-3 '，如SEQ ID NO.3所示；shSTAU2_1的序列为5 '-GCCAGGGAACTCCTTATGAAT-3 '，如SEQ ID NO .4所示；shSTAU2_2的序列为5 '-CCAACCTTCAAGCTCTTTCTT- 3 '，如SEQ ID NO .5所示；shSTAU2_3的序列为5 '-CCCAAAGATATGAACCAACCT-3 '，如SEQ ID NO .6所示。使用qRT-PCR方法分别检测转染shNC和shSTAU2_1、shSTAU2_2、shSTAU2_3后的 PANC-1细胞的STAU2RNA表达水平的变化，具体如图8所示（**p<0.01，***p<0.001），转染shSTAU2_1、 shSTAU2_2、shSTAU2_3后的PANC-1细胞的STAU2 RNA表达水平显著低于对照组（shNC），shSTAU2_1、shSTAU2_2、shSTAU2_3干扰模型建立成功。
结论：shSTAU2_1、shSTAU2_2、shSTAU2_3均能够抑制PANC-1细胞的 STAU2 RNA的表达水平。

Claims (8)

1.一种靶向RNA结合蛋白STAU2的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括反义寡核苷酸与shRNA寡核苷酸中的一种，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO .1所示，所述shRNA寡核苷酸包括shSTAU2_1、shSTAU2_2或shSTAU2_3中的一种，所述shSTAU2_1的序列如SEQ ID NO .4所示，所述shSTAU2_2的序列如SEQ ID NO .5所示，所述shSTAU2_3的序列如SEQ ID NO .6所示。
2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括2ʹ-甲氧乙氧基修饰或核酸链骨架修饰。
3.一种靶向RNA结合蛋白STAU2治疗胰腺癌的组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的寡核苷酸与药用载体。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述药用载体包括糖、聚胺、氨基酸、肽和脂质中的至少一种。
5.一种靶向RNA结合蛋白STAU2治疗胰腺癌的药物制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的寡核苷酸与药用载体。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于，所述药用载体包括糖、聚胺、氨基酸、肽和脂质中的至少一种。
7.权利要求1或2所述的寡核苷酸、权利要求3或4所述的组合物、权利要求5或6所述的药物制剂在制备治疗胰腺癌的药物中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述用途包括抑制癌细胞的增殖、转移与侵袭能力。
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CN115851946A (zh) * 2022-11-24 2023-03-28 中山大学孙逸仙纪念医院 CaMK I作为治疗靶点在制备胰腺癌治疗药物中的应用

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Systematic Identification of the RNA-Binding Protein STAU2 as a Key Regulator of Pancreatic Adenocarcinoma;Xiao Wang et al;Cancers;第14卷(第15期);第1-27页 *

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