CN116535503A - 抗生长分化因子15的抗体分子及其应用 - Google Patents

抗生长分化因子15的抗体分子及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了包含针对人生长分化因子15蛋白(GDF15)的抗体或其片段。本发明还提供所述抗体或其片段在制备治疗疾病或病症的药物中的用途。本发明提供的抗体或其片段能够以高亲和力和特异性结合人GDF15，阻断GDF15与其受体GFRAL的相互作用，且相比于同类抗体具有更长的体内半衰期。

Description

抗生长分化因子15的抗体分子及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及特异性结合生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)的抗体分子及其抗原结合片段，以及所述抗体分子及其抗原结合片段的应用。
背景技术
生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)是转化生长因子β(trans-forming growth factorβ,TGFβ)超家族成员之一，在人体内负责调节食物摄入、能量消耗和体重以应对代谢和毒素引起的压力等。GDF15的受体为胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)家族受体α样(GDNF-familyreceptorα-like,GFRAL)蛋白，当与其受体GFRAL结合时，可以激活位于脑干后极区和孤束核的神经元，因为这些区域有其受体GFRAL的表达；然后它触发位于臂旁核和中央杏仁核内的神经元的激活，形成了对压力条件的进食反应。正是由于这些功能，GDF15作为治疗肥胖症及相关代谢疾病的潜在疗法的靶标已引起人们的关注。
一直以来体内循环GDF15含量水平还与癌症、心力衰竭或慢性肾病患者的较低体重指数(BMI)和恶病质相关。最近研究的数据表明当其结合位于脑干区表达GFRAL的神经元及触发位于臂旁核和中央杏仁核内的神经元的激活后会导致食欲抑制，最终体重减轻。因此其成为治疗恶病质相关体重减轻及肥胖等疾病的潜在靶点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种以高亲和力和特异性结合人生长分化因子15蛋白(GDF15)的新抗体，例如单克隆抗体，作为用于治疗诸如恶病质等疾病或症状的新治疗剂。
针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种抗GDF15的抗体或其片段，并基于该抗体或其片段，提供其用途。本发明所述抗体分子的“片段”涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合片段。
本发明提供以下技术方案。
一方面，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其片段能够特异性结合GDF15，特别是人GDF15。根据本发明的具体实施方式，本发明的抗体为采用人GDF15的胞外区作为免疫原而得到的鼠抗体，以及基于所述鼠抗体得到的人源化抗体。
具体而言，本发明提供一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含选自以下的互补决定区(CDR)组合(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)：
(1)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.24(HILWDDVKRYNPALKS)、SEQID NO.25(MAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.26(KASQNVDTNVA)、SEQ ID NO.27(SASYRSS)、SEQ ID NO.28(QQYHSYPT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(2)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.29(HIRWDDVKRYNPALKS)、SEQID NO.25(MAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.30(KASQNVDTDVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.32(HQYNSYPT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(3)依次示于SEQ ID NO.33(TAGMTVG)、SEQ ID NO.34(HIWWNDDKYYNPALKS)、SEQID NO.35(IATMNYAMDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.36(RASQSVSTSSFSYMH)、SEQ ID NO.37(YASNLES)、SEQ ID NO.38(QHSWEIPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(4)依次示于SEQ ID NO.39(TSGMGVD)、SEQ ID NO.40(HIYWDDDKRYNPSLKS)、SEQID NO.41(RAWDAMDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.42(KARQNVGTNVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.43(QQYNSYPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(5)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.44(HIWWNDDKYYNPSLKS)、SEQID NO.45(GAYDFFDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.26(KASQNVDTNVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.46(QQYNTYPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；和
(6)依次示于SEQ ID NO.47(TSGIGIT)、SEQ ID NO.48(TIWWDDDNRYNPSLKS)、SEQID NO.49(SAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.50(KASQNVGTNVA)、SEQ ID NO.51(SASYRNS)、SEQ ID NO.52(QQYNSHPVT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
本发明提供的所述抗体或其片段为抗GDF15、特别是人GDF15的抗体或其片段，其能够以高亲和力和特异性结合所述GDF15。所述抗体或其片段包含的轻重链CDR的组合来自本发明的特定抗体(参见实施例部分)，基于该特定抗体包含的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定其中包含的CDR。根据本发明的具体实施方式，采用Kabat以及任何其他定义方法例如IMGT、ABM、Chotia等都可划分该特定抗体的可变区氨基酸序列中的CDR。因此，以本领域其他已知方法划分得到的轻重链CDR及其组合也被涵盖在本发明的范围内。
优选地，在本发明提供的抗体或其片段中，所述重链可变区可包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或，所述轻链可变区可包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。本发明上下文中就序列所用的“至少75％同一性”为例如至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％同一性等≥75％的任何百分比的同一性。
进一步优选地，在本发明提供的所述抗体或其片段中，所述重链可变区和轻链可变区分别包含：
(1)SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
特别地，本发明的抗体或其片段至少包含重链可变区和轻链可变区，二者均包括上文所述的CDR以及间隔的框架区(framework region)，所包含好的结构域的排列方式为：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。进一步可选地，所述“至少75％同一性”导致的氨基酸序列上的至多25％差异可存在于重链可变区或轻链可变区的任意框架区中，或者存在于本发明的抗体或其片段中重链可变区和轻链可变区以外的任意结构域或序列中。所述差异可以由任何位置的氨基酸缺失、添加或置换产生。
本发明提供的抗体为结合GDF15、特别是人GDF15的鼠抗、嵌合抗体或者完全或部分人源化抗体；所述片段为半抗体或者所述抗体的抗原结合片段，包括scFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv片段。优选地，所述抗体为单克隆抗体或单链抗体。
除了可变区之外，所述抗体或其片段还包含人或鼠的恒定区，优选包含人或鼠的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL)；优选地，所述抗体或其片段包含重链和轻链；更优选地，所述抗体或其片段包含选自IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。根据本发明的具体实施方式，所述抗体为单克隆抗体，优选为鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体。根据本发明的具体实施方式，所述单克隆抗体为IgG，特别是IgG1。
进一步优选地，本发明提供的抗体或其片段包含重链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。或者，所述重链恒定区包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或包含轻链恒定区，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
另一方面，本发明还提供一种核酸分子，其包含编码本发明所述的抗体或其片段的核苷酸序列，或者包含编码所述抗体或其片段中包含的重链CDR、轻链CDR、轻链可变区、重链可变区、重链或轻链的核苷酸序列。
再一方面，本发明提供包含上文所述的核酸分子的载体。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
又一方面，本发明提供包含上文所述的核酸分子或载体的宿主细胞，或者被上文所述的核酸分子或载体转化或转染的宿主细胞。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。
本发明提供的抗体或其片段可以利用本领域已知的任何方法获得。例如，在允许本发明提供的宿主细胞表达所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者所述抗体的重链和/或轻链以组装成所述抗体的情况下，培养所述宿主细胞。任选地，所述方法还包括回收产生的抗体的步骤。
另一方面，本发明还提供一种组合物，所述组合物包含本发明所述的抗体或其片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞。优选地，所述组合物为药物组合物，其还任选地包含药学上可接受的载体、辅料或赋形剂。
本发明提供的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物具有增加受试者的食欲、食物摄入、体重、肌肉质量等中的一种或多种的活性，同时也具有抗肿瘤的作用。因此，本发明还提供以下技术方案。
再一方面，本发明还提供所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症是由GDF15的表达介导的或与所述GDF15的表达相关；和/或，所述疾病或病症为肿瘤(例如癌症)、心力衰竭、慢性肾病、厌食、少肌症或恶病质。
因此相应地，本发明还提供一种治疗疾病或病症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用本发明提供的抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物，所述疾病或病症是由GDF15的表达介导的或与所述GDF15的表达相关；和/或，所述疾病或病症为肿瘤(例如癌症)、心力衰竭、慢性肾病、厌食、少肌症或恶病质。
优选地，所述受试者为哺乳类动物；更优选地，所述受试者为人。
本发明还提供一种检测或诊断疾病或病症的方法，所述方法包括使本发明的抗体分子或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物与来自受试者的样品相接触，所述疾病或病症是由GDF15的表达介导的或与所述GDF15的表达相关；或者，所述疾病或病症为肿瘤(例如癌症)、心力衰竭、慢性肾病、厌食、少肌症或恶病质。优选地，所述受试者为哺乳类动物；更优选地，所述受试者为人。
此外，本发明提供包含所述抗体或其片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物的试剂盒。所述试剂盒用于上文所述的治疗或者检测或诊断。可选地，所述试剂盒还可包括使用说明书。
本发明提供了一种人GDF15的新型抗体，其可以以高亲和力和特异性结合人GDF15，阻断GDF15与其受体GFRAL的相互作用。实验证明，本发明提供的抗体相比于已知同类抗体，具有更高的GDF15亲和力和特异性、更长的体内半衰期、更优的阻断效果。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1显示了杂交瘤细胞培养上清与人GDF15结合的ELISA检测结果。
图2显示了杂交瘤细胞培养上清与猴GDF15结合的ELISA检测结果。
图3显示了杂交瘤细胞培养上清阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测结果。
图4显示了抗体与人GDF15结合的ELISA检测结果。
图5显示了抗体与猴GDF15结合的ELISA检测结果。
图6显示了抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测结果
图7显示了抗体在PBS和血浆中放置后与人GDF15结合的ELISA检测结果。
图8显示了抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的竞争性ELISA检测结果。
图9显示了在表达GFRAL的报告细胞上检测抗体阻断GDF15功能的检测结果。
图10显示了在表达GFRAL的报告细胞上检测抗体中和GDF15的检测结果；其中10-1：Ponsegromab；10-2：53E5(hz)。
图11显示了抗体与GDF15、GDF1、GDF3的结合特异性的检测结果。
图12显示了抗体与PBMC的结合特异性的检测结果。
图13显示了抗体在小鼠体内的PK实验结果；其中13-1：AV380-hIgG1；13-2：Ponsegromab；13-3：53E5(hz)。
图14显示了在小鼠中检测的抗体的恶病质抑制效果。
图15显示了在小鼠中检测的抗体中和GDF15的效果。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例1杂交瘤细胞的制备
用包含GDF15蛋白(Genbank登记号NM_004864.3)的胞外区与小鼠IgG2a-FC(Genbank登记号AAH31470.1)的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠。佐剂采用Quick Antibody-Mouse 5W水溶性佐剂，加强免疫以后2周测效价，选取效价高的小鼠进行免疫冲击，3天之后取小鼠血清；小鼠解剖后取脾脏，分离脾细胞。
将脾细胞与培养的骨髓瘤细胞进行融合，铺96孔板，同时加入选择性培养基进行筛选，7天后换液，10天后进行ELISA检测，选择OD值大于阴性对照10倍以上的再进行流式细胞仪检测。
挑选双阳的细胞，通过细胞有限稀释法进行亚克隆铺板，挑选单克隆细胞。将挑选出的单克隆细胞，取培养上清，进行ELISA检测及流式细胞术检测，挑选双阳的细胞扩大培养。Protein G重力柱亲和层析纯化细胞上清，获得杂交瘤抗体。
实施例2杂交瘤抗体与人GDF15结合的ELISA检测
把包含人GDF15蛋白(Genbank登记号NM_004864.3)的胞外区与人的IgG1-FC(Genbank登记号CAC20454.1)的融合蛋白用包被液稀释至1μg/ml，然后以50μl/孔加入酶标板孔中，置4℃过夜。弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗板3次，每次3-5分钟，拍干。每孔加入200μl封闭液4℃过夜。用洗涤液洗板3次，此时包被板可在-20℃或4℃保存备用。
向孔中分别加入待检抗体(来自杂交瘤的纯化后抗体，命名见表1)、阳性参考抗体AV380-mIgG1(序列来自Aveo Oncology；重链和轻链可变区分别见SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2；重链和轻链恒定区分别见SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4)以及空白对照(PBS)，抗体按照20ug/mL起始，3.16倍稀释，10个梯度。在37℃孵育1小时，洗涤，拍干。然后向每孔中加入酶标二抗，为1:10000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(SIGMA，货号A9044-2ml)，每孔100μl，37℃孵育2小时，洗涤，拍干。向每孔中加入新鲜配制的底物显色液TMB 100μl，37℃孵育30分钟。
AV380-mIgG1序列如下：
重链可变区VH(SEQ ID NO.1)：
EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGQINPNNGGIFFNQKFKGKATLTVDKSSNTAFMEVRSLTSEDTAVYYCAREAITTVGAMDYWGQGTSVTVSS
轻链可变区VL(SEQ ID NO.2)：
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSENLHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYDAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSSPYTFGGGTKLEIK
重链恒定区(SEQ ID NO.3)：
AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
轻链恒定区(SEQ ID NO.4)：
RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
加入2mol/L H2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值。结果见表1-1、表1-2和图1中的1-1和1-2。
表1-1杂交瘤抗体与人GDF15结合的ELISA检测结果
样品 EC50(μg/ml)
AV380-mIgG1 0.03134
50G3 0.05563
53E5 0.04546
53D10 0.06025
53A8 0.03780
表1-2杂交瘤抗体与人GDF15结合的ELISA检测结果
样品 EC50(μg/ml)
AV380-mIgG1 0.02958
2A2 0.04602
34G9 0.1094
实施例3杂交瘤抗体与猴GDF15(cynoGDF15)结合的ELISA检测
实验过程参照实施例2，不同之处在于，将融合蛋白替换为包含猴GDF15蛋白(Genbank登记号EHH29815.1)的胞外区与人的IgG1-FC(Genbank登记号CAC20454.1)的融合蛋白。结果见表2-1、表2-2和图2中的2-1和2-2。
表2-1杂交瘤抗体与猴GDF15结合的ELISA检测结果
表2-2杂交瘤抗体与猴GDF15结合的ELISA检测结果
样品 EC50(μg/ml)
AV380-mIgG1 0.02577
2A2 0.08271
34G9 0.1574
实施例4杂交瘤抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测
把包含GFRAL蛋白(Genbank登记号NM_207410.2)的胞外区与人的IgG1-FC(Genbank登记号CAC20454.1)的融合蛋白用包被液稀释至1μg/ml，然后以50μl/孔加入酶标板孔中，置4℃过夜。弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。每孔加入200μl封闭液4℃过夜。用洗涤液洗3次，此时包被板可在-20℃或4℃保存备用。
向孔中分别加入待检抗体、阳性参考抗体AV380-mIgG1以及空白对照(PBS)，抗体按照20μg/mL起始，3.16倍稀释，10个梯度。同时加入GDF15-mFC蛋白(GDF15：Genbank登记号NM_004864.3；mFC：Genbank登记号AAH31470.1)，按照20ng/孔，与待测抗体混匀。在37℃孵育1小时，洗涤，拍干。然后向每孔中加入酶标二抗，为1:10000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(SIGMA，货号A9044-2ml)，每孔50-100μl，37℃孵育2小时，洗涤，拍干。向每孔中加入新鲜配制的底物显色液TMB100μl，37℃孵育30分钟。加入2mol/L H2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值。
结果见表3-1、表3-2和图3中的3-1和3-2。
表3-1.杂交瘤抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测结果
表3-2.杂交瘤抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测结果
样品(以杂交瘤细胞编号示出) IC50(μg/ml)
AV380-mIgG1 0.1395
2A2 0.08984
34G9 0.09157
上述鼠抗的可变区序列如下(其中重链和轻链CDR以加粗和下划线示出，其根据Kabat定义方法得到)：
A1(鼠抗53E5)
>53E5-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.7/23/24/25)
>53E5-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.8/26/27/28)
A2(鼠抗53A8)
>53A8-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.9/23/29/25)
>53A8-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.10/30/31/32)
A3(鼠抗34G9)
>34G9-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.11/33/34/35)
>34G9-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.12/36/37/38)
A4(鼠抗2A2)
>2A2-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.13/39/40/41)
>2A2-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.14/42/31/43)
A5(鼠抗50G3)
>50G3-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.15/23/44/45)
>50G3-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.16/26/31/46)
A6(鼠抗53D10)
>53D10-H(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.17/47/48/49)
>53D10-L(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.18/50/51/52)
实施例5鼠抗与人GDF15结合的亲和力检测
实验方法：
1.选用同种属的Capture Surface Dip。
2.取96孔板，每孔加入200μl SD缓冲液(1×PBS+0.02％Tween20+0.1％BSA)，放入ForteBio Octet中，预循环。
3.固定抗体，抗体浓度采用10μg/ml。
4.GDF15(百普赛斯，GD5-H5149)分别稀释200nm、100nm、50nm、25nm、12.5nm、6.25nm 6个梯度，加入相应孔中。
5.上机检测。
结果见表4。
表4.鼠抗与人GDF15结合的亲和力检测结果
实施例6鼠抗的人源化改造
为A1(鼠抗53E5)选取了人源的序列IGHV4-39和IGKV1-39，分别作为重链与轻链人源化改造的模板。对A1单抗进行同源建模，进行Fab区域的结构模拟。进行同源建模计算，最后得到预测的A1的Fab结构。
通过对预测的Fab结构及重链与IGHV4-39序列进行比对分析，将该VH中除了CDR区及2V、24F、50L、51A、69L、73K、75S、78S、80I、98V、99Q保留原始鼠的氨基酸外，其它的鼠的氨基酸全部替换成相应的IGHV4-39模板人的氨基酸。
通过对预测的Fab结构及轻链与IGKV1-39序列进行比对分析，将该VL中除了CDR区及42Q、43S、46A保留原始鼠的氨基酸外，其它的鼠的氨基酸全部替换成相应的IGKV1-39模板人的氨基酸。
得到的人源化序列如下(其中重链和轻链CDR以加粗和下划线示出，其根据KABAT定义方法得到)：
>53E5-H人源化序列(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.19/23/24/25)
>53E5-L人源化序列(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.20/26/27/28)
为A2(鼠抗53A8)选取了人源的序列IGHV4-39和IGKV1-39，分别作为重链与轻链人源化改造的模板。对A2单抗进行同源建模，进行Fab区域的结构模拟。进行同源建模计算，最后得到预测的A2的Fab结构。
通过对预测的Fab结构及重链与IGHV4-39序列进行比对分析，将该VH中除了CDR区及2V、24F、50L、51A、69L、73K、78S、80I、99Q为原始鼠的氨基酸外，其它的鼠的氨基酸全部替换成相应的IGHV4-39模板人的氨基酸。
通过对预测的Fab结构及轻链与IGKV1-39序列进行比对分析，将该VL中除了CDR区及42Q、43S、46A保留原始鼠的氨基酸外，其它的鼠的氨基酸全部替换成相应的IGKV1-39模板人的氨基酸。
得到的人源化序列如下(其中重链和轻链CDR以加粗和下划线示出，其根据KABAT定义方法得到)：
>53A8-H人源化序列(VH/HCDR-1/HCDR-2/HCDR-3：SEQ ID NO.21/23/29/25)
>53A8-L人源化序列(VL/LCDR-1/LCDR-2/LCDR-3：SEQ ID NO.22/30/31/32)
以SEQ ID NO.5所示序列作为重链恒定区，SEQ ID NO.6所示序列作为轻链恒定区，对于上述人源化序列，重新设计引物，合成相应的抗体重链和轻链的编码基因，连入真核表达载体中，重组载体转化大肠杆菌感受态细胞，37℃培养过夜，挑单克隆菌株测序鉴定。挑选序列正确的菌株，获得重组载体，转染哺乳动物表达细胞293F，于37℃、5％CO2表达培养7天。收取上清，从中纯化获得人源化抗体，命名为“鼠抗名(hz)”。
>CH1-CH3重链恒定区(SEQ ID NO.5)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>CL1轻链恒定区(SEQ ID NO.6)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
实施例7人源化抗体与人GDF15结合的ELISA检测
实验过程参照实施例2，不同之处在于，包被蛋白为GDF15-HIS(百普赛斯，CAT#:GD5-H5149)，包被板的每孔中加入待检抗体(人源化抗体)、阴性参考抗体(hIgG1)以及阳性参考抗体Ponsegromab(Pfizer；Drug Bank：D11909)和AV380-hIgG1(将AV380-mIgG1的重链和轻链恒定区替换为人IgG的恒定区即SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6)。结果见表5和图4。
表5人源化抗体与人GDF15结合的ELISA检测结果
样品 EC50(μg/ml) OD450.Max
53E5(hz) 0.08331 1.053
53A8(hz) 0.08266 1.051
AV380-hIgG1 0.08233 1.066
Ponsegromab 0.09599 1.100
实施例8人源化抗体与猴GDF15(cynoGDF15)结合的ELISA检测
实验过程参照实施例2，不同之处在于，包被蛋白为cynoGDF15-mFC(GDF15：Genbank登记号EHH29815.1；mFC：Genbank登记号AAH31470.1)，包被板的每孔中加入待检抗体(人源化抗体)、阴性参考抗体(hIgG1)以及阳性参考抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1。结果见表6和图5。
表6人源化抗体与猴GDF15结合的ELISA检测结果
样品 EC50(μg/ml) OD450.Max
53E5(hz) 0.08159 1.032
53A8(hz) 0.07749 1.03
AV380-hIgG1 0.07407 1.000
Ponsegromab 0.06973 1.067
实施例9人源化抗体阻断GDF15蛋白与其受体GFRAL结合的ELISA检测
实验过程参照实施例4，不同之处在于，包被板的每孔中加入待检抗体(人源化抗体)、阴性参考抗体(hIgG1)以及阳性参考抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1。结果见表7和图6。
表7.人源化抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的ELISA检测结果
样品 IC50(μg/ml) OD450.Max
53E5(hz) 0.2525 1.049
53A8(hz) 0.2831 1.104
AV380-hIgG1 0.2311 10.965
Ponsegromab 0.5037 1.019
实施例10人源化抗体与人GDF15结合的亲和力检测
实验过程参照实施例5，不同之处在于，GDF15抗体替换为待检抗体(人源化抗体)、阴性参考抗体(hIgG1)以及阳性参考抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1。结果见表8。
表8.人源化抗体与人GDF15结合的亲和力检测结果
抗体 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
53E5(hz) 2.93E-10 9.23E+05 2.71E-04
53A8(hz) 2.66E-10 9.67E+05 2.57E-04
AV380-hIgG1 8.45E-11 8.17E+05 6.91E-05
Ponsegromab <1.0E-12 7.11E+05 <1.0E-07
实施例11人源化抗体的稳定性检测
1.冻融
取适量抗体，调整浓度至10mg/mL，-80℃冻存10min后，取出放置于冰水混合物中，缓慢融化。重复前述步骤5次后，使用SEC-HPLC检测蛋白聚集程度，ELISA检测蛋白结合活性变化。
2.低pH处理
取适量抗体，使用超滤管将抗体保存缓冲液调整为pH3.6，并把浓度调整至5mg/mL。放置于室温处理2-4h后，使用SEC-HPLC检测蛋白聚集程度，ELISA检测蛋白结合活性变化。
3. 40℃加速实验
取适量抗体，调整浓度至10mg/mL，置于40℃处理1和2周。使用SEC-HPLC检测蛋白聚集程度，ELISA检测蛋白结合活性变化。结果见表9。
表9人源化抗体的稳定性检测结果
4.血浆稳定性实验
取200ul血浆和PBS，分别加入待测抗体200μg(终浓度1mg/ml)，封闭好后37℃放置2周。ELISA检测蛋白结合活性变化。结果见表10和图7。
表10人源化抗体与人GDF15结合的ELISA检测结果
抗体 EC50(μg/ml)
53E5(hz)(PBS) 0.1272
53E5(hz)(血浆) 0.03725
53A8(hz)(PBS) 0.1125
53A8(hz)(血浆) 0.04129
实施例12人源化抗体阻断GDF15与受体GFRAL结合的ELISA检测
将GFRAL胞外区稳定表达在HEK293荧光素酶报告细胞株中，其中荧光素酶基因的表达由SRE表达元件控制，构建HEK293 SRE-LUC2-cRET-GFRAL报告细胞株。
阻断实验1：
GFRAL-HIS蛋白(百普赛斯，GFA-H52H3)以1μg/ml的浓度溶解在PBS中，提前一天包被ELISA 96孔平板。第二天，用含2％BSA的PBS封闭平板。将53E5(hz)、对照抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1以起始浓度20μg/ml，3.16倍梯度稀释10个浓度，同时加入GDF15-mFc蛋白混合，使其终浓度为0.3μg/ml，室温孵育1小时后，加入包被有GFRAL-HIS的96孔板中，室温孵育1小时后，洗涤，然后加入HRP-anti-mouse IgG，室温孵育1小时后，检测HRP酶活性信号(OD450)，HRP酶活性信号代表结合到GFRAL上的GDF15-mFc蛋白的相对含量。绘制OD450值和抗体浓度相关曲线，使用log(激动剂)vs.反应-可变斜率(四参数)Logistic模型拟合剂量-效应曲线，计算IC50。实验结果显示53E5(hz)比对照抗体对GDF15有更强的阻断能力。结果见表11和图8。
表11.人源化抗体阻断GDF15与其受体GFRAL结合的竞争性ELISA检测结果
阻断实验2：
HEK293 SRE-LUC2-cRET-GFRAL报告细胞提前1天培养在96孔板中。第二天，将53E5(hz)、对照抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1以起始浓度1ug/ml，用培养基3.16倍梯度稀释10个浓度，同时加入GDF15-His(百普赛斯，GD5-H5149)，使其终浓度为5ng/ml，室温孵育1小时后，加入培养有报告细胞的培养孔中，刺激荧光素酶的表达。继续培养6小时后，每孔加入50μL的Bright-Glo试剂溶液，将培养板振动3-5min使细胞裂解。使用Multi-modeMicroplate Reader读取冷光值。绘制荧光素酶活性增长倍数(不加GDF15蛋白的孔的酶活性倍数)和抗体浓度相关曲线，使用log(激动剂)vs.反应-可变斜率(四参数)Logistic模型拟合剂量-效应曲线，计算IC50。实验结果显示53E5(hz)和对照抗体Ponsegromab对GDF15的功能有相似的抑制效果。结果见表12和图9。
表12.在表达GFRAL的报告细胞上检测人源化抗体阻断GDF15功能的检测结果
样品 IC50(μg/ml) Bottom
53E5(hz) 0.02254 1.096
AV380-hIgG1 0.04471 1.033
Ponsegromab 0.03211 1.066
阻断实验3：
HEK293 SRE-LUC2-cRET-GFRAL报告细胞提前1天培养在96孔板中。第二天，将53E5(hz)和对照抗体Ponsegromab分别用培养基配制浓度为4、3、2、0.5、0.1μg/ml的溶液，每个浓度的抗体各取5份，分别加入不同浓度的GDF15-His(百普赛斯，GD5-H5149)，使其终浓度为100、31.6、10、3.16、1ng/ml，室温孵育1小时后，加入培养有报告细胞的培养孔中，刺激荧光素酶的表达。继续培养6个小时后，每孔加入50μL的Bright-Glo试剂溶液，将培养板振动3-5min使细胞裂解。使用Multi-mode Microplate Reader读取冷光值。绘制荧光素酶活性增长倍数(不加GDF15蛋白的孔的酶活性倍数)和抗体浓度相关曲线，使用log(激动剂)vs.反应-可变斜率(四参数)Logistic模型拟合剂量-效应曲线，计算EC50。
实验结果显示53E5(hz)比对照抗体Ponsegromab有更强的中和GDF15的效果。结果见图10中的10-1和10-2。本实验中，固定抗体的浓度，然后和不同浓度的GDF15蛋白共孵育，检测未中和GDF15刺激报告细胞的信号，图中表示的EC50为抗体为0.1μg/ml的数值。
实施例13人源化抗体的结合特异性的检测
结合特异性实验1：
将GDF15(百普赛斯，GD5-H5149)、GDF1(R&D，6937-GD-010)、GDF3(R&D，5754-G3-010)蛋白分别以1μg/ml浓度溶解在PBS中，提前一天包被ELISA 96孔平板。第二天，用含2％BSA的PBS封闭96孔平板1小时，去除封闭液后，以4μg/ml加入GDF15抗体53E5(hz)、对照抗体Ponsegromab和无关hIgG1，室温孵育1小时后，洗涤，然后加入HRP-anti-human IgG，室温孵育1小时后，检测HRP酶活性信号(OD450)。OD450值为抗体结合量的相对信号。实验结果显示抗体53E5(hz)与GDF1、GDF3无特异性结合，而对照抗体Ponsegromab与GDF1、GDF3弱结合。结果见图11。
结合特异性实验2：
复苏冻存的PBMC，在PBMC中分别加入10、1、0.1μg/ml的GDF15抗体53E5(hz)、对照抗体Ponsegromab和AV380-hIgG1，或CD3抗体OKT3作为阳性对照，另取1管不加抗体作为阴性对照，4℃孵育30分钟后，去除抗体，加入PE anti-human IgG流式分析抗体，4℃孵育30分钟后，离心后，加入抗体稀释液，加入7AAD去除死细胞，流式分析抗体结合信号。PBMC上，PE的平均荧光强度(MFI)代表抗体结合在细胞上的信号；绘制抗体浓度和MFI的曲线。实验结果显示抗体53E5(hz)与PBMC无特异性结合。结果见图12。
实施例14动物体内PK实验
10-12周龄的BALB/c雌性小鼠尾静脉注射GDF15抗体53E5(hz)、对照抗体AV380-hIgG1与Ponsegromab，注射剂量为10mg/kg和1mg/kg小鼠体重。静脉采血时间为10分钟、1小时、6小时、1天、3天、5天、7天、14天，制备血清。待收集完所有时间点的血清后，ELISA检测血清中的抗体浓度。
具体过程如下，4℃过夜包被GDF15-HIS抗原，50ng每孔，2％BSA封闭液封闭2h。将血清样品分别稀释50倍和500倍；标准品(即注射的抗体)1μg/mL起始，3.16倍稀释，12个浓度。去除封闭液，加入配制的血清样品和标准品，室温孵育1小时；洗涤后加入HRP-anti-human IgG，室温孵育1小时；洗涤后，检测HRP酶活性信号(OD450)。绘制OD450值和标准品浓度曲线，根据拟合的标准曲线计算血清中抗体浓度。绘制抽血时间与血清中抗体浓度相关曲线，计算抗体在小鼠体内半衰期。结果见图13。
实施例15 GDF15抗体体内功能实验
实验1.检测GDF15抗体抑制恶病质的效率。
8～10周大的雌性SCID小鼠皮下注射5x106HT1080细胞(含50％matrigel)，每天测量体重，用游标卡尺每天测量肿瘤大小(肿瘤的长和宽)，计算肿瘤体积(＝0.5x长x宽x高)，小鼠去瘤体重为小鼠带瘤体重减去肿瘤重量(肿瘤重量按体积*1mg/mm3计算)，小鼠体重降到第0天体重的93％时(本实验为第18天)，将小鼠进行随机分组，每组10只，腹腔注射hIgG(阴性对照)或人源化抗体53E5(hz)和对照抗体AV380-hIgG1与Ponsegromab，注射剂量为10mg/kg小鼠体重，每3天注射一次。绘制小鼠去瘤体重和接种肿瘤后的天数相关曲线，结果见图14。实验结果显示53E5(hz)和对照抗体Ponsegromab有相似的恶病质抑制效果。
实验2.检测GDF-15抗体体内中和GDF15的效率。
BALB/c普通小鼠第0天和第8天分别腹腔注射(I.P.)GDF15-mFc融合蛋白(0.25mg/kg体重)，第2天腹腔注射hIgG(3mg/kg体重，阴性对照)或不同剂量的人源化抗体53E5(hz)和对照抗体Ponsegromab(3、1、0.3mg/kg体重)，每天测量体重。待实验结束时，绘制小鼠体重和注射GDF15-mFc融合蛋白后的天数相关曲线，结果见图15。实验结果显示53E5(hz)和对照抗体Ponsegromab在体内抑制GDF15功能有相似的效果。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110> 康源博创生物科技（北京）有限公司
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<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> VH
<400> 1
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
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Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Ser Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
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Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
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Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
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Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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260 265 270
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<223> VH
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<223> VL
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<223> VL
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<223> VL
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<223> VL
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<220>
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<220>
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<400> 44
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1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> LCDR-3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> HCDR-1
<400> 47
Thr Ser Gly Ile Gly Ile Thr
1 5
<210> 48
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> HCDR-2
<400> 48
Thr Ile Trp Trp Asp Asp Asp Asn Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> HCDR-3
<400> 49
Ser Ala Trp Asp Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> LCDR-1
<400> 50
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> LCDR-2
<400> 51
Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<220>
<223> LCDR-3
<400> 52
Gln Gln Tyr Asn Ser His Pro Val Thr
1 5

Claims (11)

1.一种抗体或其片段，所述抗体或其片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)包含选自以下的互补决定区(CDR)组合(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)：
(1)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.24(HILWDDVKRYNPALKS)、SEQ IDNO.25(MAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.26(KASQNVDTNVA)、SEQ ID NO.27(SASYRSS)、SEQ ID NO.28(QQYHSYPT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(2)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.29(HIRWDDVKRYNPALKS)、SEQ IDNO.25(MAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.30(KASQNVDTDVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.32(HQYNSYPT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(3)依次示于SEQ ID NO.33(TAGMTVG)、SEQ ID NO.34(HIWWNDDKYYNPALKS)、SEQ IDNO.35(IATMNYAMDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.36(RASQSVSTSSFSYMH)、SEQ ID NO.37(YASNLES)、SEQ ID NO.38(QHSWEIPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(4)依次示于SEQ ID NO.39(TSGMGVD)、SEQ ID NO.40(HIYWDDDKRYNPSLKS)、SEQ IDNO.41(RAWDAMDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.42(KARQNVGTNVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.43(QQYNSYPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；
(5)依次示于SEQ ID NO.23(TSGMGVG)、SEQ ID NO.44(HIWWNDDKYYNPSLKS)、SEQ IDNO.45(GAYDFFDY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.26(KASQNVDTNVA)、SEQ ID NO.31(SASYRYS)、SEQ ID NO.46(QQYNTYPYT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3；和
(6)依次示于SEQ ID NO.47(TSGIGIT)、SEQ ID NO.48(TIWWDDDNRYNPSLKS)、SEQ IDNO.49(SAWDWFAY)的H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3；和，依次示于SEQ ID NO.50(KASQNVGTNVA)、SEQ ID NO.51(SASYRNS)、SEQ ID NO.52(QQYNSHPVT)的L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和/或，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段，其特征在于，所述重链可变区和轻链可变区分别包含：
(1)SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列；和，SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所述抗体或其片段，其特征在于，所述抗体为鼠抗、嵌合抗体或者完全或部分人源化抗体；所述抗原结合片段为半抗体或者所述抗体的scFv、dsFv、(dsFv)2、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv片段；
优选地，所述抗体为单克隆抗体或单链抗体；
优选地，所述抗体或其片段还包含人或鼠的恒定区，优选包含人或鼠的重链恒定区(CH)和/或轻链恒定区(CL)；优选地，所述抗体或其片段包含重链和轻链；更优选地，所述抗体或其片段包含选自IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。
5.根据权利要求1至4中任一项所述抗体或其片段，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体，优选为鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体；进一步优选地，所述单克隆抗体为IgG，特别是IgG1。
6.一种核酸分子，其包含编码权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段中包含的重链CDR、轻链CDR、轻链可变区、重链可变区、重链或轻链的核苷酸序列。
7.一种载体，其包含权利要求6所述的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其包含权利要求6所述的核酸分子和/或权利要求7所述的载体。
9.一种组合物，其包含权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体和/或权利要求8所述的宿主细胞；
优选地，所述组合物为药物组合物，其还包含任选的药学上可接受的辅料。
10.权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞和/或权利要求9所述的组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，所述疾病或病症是由GDF15的表达介导的或与所述GDF15的表达相关；
和/或，所述疾病或病症为肿瘤(例如癌症)、心力衰竭、慢性肾病、厌食、少肌症或恶病质。
11.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段、权利要求6所述的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞和/或权利要求9所述的组合物；
可选地，所述试剂盒还包含使用说明书。
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