CN116490499A

CN116490499A - Myc家族原癌基因蛋白的调节剂

Info

Publication number: CN116490499A
Application number: CN202180072924.0A
Authority: CN
Inventors: W·格林利; S·J·沙特尔沃思; K·威尔逊
Original assignee: Naro Medical
Current assignee: Naro Medical
Priority date: 2020-08-26
Filing date: 2021-08-25
Publication date: 2023-07-25

Abstract

本文公开了在调节Myc家族蛋白方面具有效能的化合物及组合物。此类化合物及组合物可用于治疗增殖性疾病如癌症，或治疗需要调节Myc家族蛋白的疾病。本文也公开了使用所述化合物及组合物的方法。

Description

MYC家族原癌基因蛋白的调节剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年8月26日提交的美国临时申请第63/070,753号和2020年8月26日提交的美国临时申请第63/070,762号的优先权和权益，其中的每个以全文引用的方式并入本文中。

背景技术

MYC原癌基因家族包含三个成员：C-MYC、MYCN和MYCL。这些癌基因分别编码c-Myc、N-Myc和L-Myc癌蛋白，其中c-Myc、N-Myc和L-Myc癌蛋白属于调节超过整个基因组的15％的转录的“超转录因子”家族。小鼠模型中的近期研究已表明，癌基因Myc蛋白的调节可潜在地引起癌症治疗的发展，这是由于已证明即使Myc的短暂失活也引起肿瘤消退。然而，直接靶向Myc蛋白的药物和治疗的发展遇到两个主要挑战。第一，Myc蛋白缺少用于结合小分子的定义明确的活性位点，因此提供对于官能性调节或抑制其活性的挑战。第二，Myc蛋白主要位于细胞核中，通过用抗体靶向核Myc蛋白在技术上具有挑战性。这些挑战催生了用于间接调节Myc蛋白的策略。

例如，N-Myc的扩增和过表达可导致肿瘤发生。过量N-Myc与多种肿瘤，例如神经母细胞瘤相关。MYCN也可经由体细胞突变而在肿瘤中被激活。

C-Myc也可在各种癌症，诸如宫颈癌、结肠癌、乳癌、肺癌和胃癌中组成性地表达。此类组成性表达会引起参与细胞增殖的其他基因的表达增加。

例如N-Myc基因在患者中的扩增常常导致不良健康结果。然而，由于不易于靶向Myc蛋白，因此仍难以找到直接调节Myc蛋白的策略。

因此，存在对用于治疗各种病痛、疾病和病症(例如癌症)的Myc蛋白的小分子治疗调节剂的持续需求。

发明内容

本公开提供适用作Myc蛋白调节剂的化合物和组合物，和其使用方法。此外，本公开考虑使用所公开的化合物和组合物作为治疗诸如癌症的增殖性疾病或治疗需要调节Myc家族蛋白的疾病中的Myc蛋白的直接调节剂。

例如，本公开提供一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体、和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、NR^ACH₂、NR^AC(O)和C(O)；

Y选自下组：NH、N-CH₃、O、S、CH₂、CF₂、CH(CH₃)、C(CH₃)₂和C(CH₂CH₂)；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

L¹选自下：-NR^A-C(O)-、-CHR^L-NR^A-C(O)-、-NR^A-C(O)-CHR^L-、-C(O)-NR^A-、-CHR^L-C(O)-NR^A-、-C(O)-NR^A-CH₂-、-S(O)_w-、-NR^A-S(O)_w-、-CHR^L-NR^A-S(O)_w-、-NR^A-S(O)_w-CHR^L-、-S(O)_w-NR^A-、-CH₂-S(O)_w-NR^A-、-S(O)_w-NR^A-CHR^L-、-CHR^L-C(O)-、-C(O)-和键，其中w为0、1或2；

Z为具有至少一个氮的4-10元杂环，其中该氮和L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R¹选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、螺C₅-C₁₀双环烷基、杂环基、氰基、卤基、杂芳基和H；其中C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、杂环基或杂芳基可被一个、两个或三个各自独立地选自卤基和C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)的取代基取代；

R²选自下组：H、F、-C(O)-O-甲基、-C(O)OH、-O-甲基、甲基、C₃-C₇环烷基和杂环基；

R⁶选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苯甲基、杂芳基、C_1-3亚烷基-苯基、C_1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基、苯氧基和H；其中R⁶可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R^P的取代基取代；

R^A选自下组：H、C₁-C₄烷基、-C(O)-C_1-4烷基、S(O)_w-C_1-4烷基(其中w为0、1或2)、C_3-6环烷基和杂环基；其中C₁-C₄烷基和C_3-6环烷基可任选地被一个、两个或三个各自选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷氧基、-S(O)_w-甲基、-S(O)_w-乙基(其中w为0、1或2)和杂环基；其中杂环基可任选地被一个或两个各自选自甲基、乙基和卤基的取代基取代；

R^L在每次出现时独立地选自下组：键、H和甲基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)；

R^P选自由下组：卤基、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤基、氰基、羟基和C_1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C_1-4烷基、C(O)-O-C_1-4烷基、C(O)-O-C_3-6环烷基、-C(＝N)-NR'R'、-C(O)-NR'R'、-S(O)_w-NR'R'、-S(O)_w-C_1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR'R'、氧代基、苯基、苯氧基、C_3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C_1-6烷基或卤基取代；且其中C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自以下的取代基取代：卤基、氰基、羟基、杂芳基、杂环基和NR'R'；以及

R'在每次出现时独立地选自下组：H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C_1-3烷基或卤基取代)、苯基和和C_3-6环烷基，或两个R'连同其所连接的氮一起形成杂环基，该杂环基可任选地被甲基、卤基、氰基、氧代基或羟基取代。

本文亦公开式Iaa的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、CH₂、C(CH₃)₂、CF₂、C(CH₂)₂、NR^ACH₂、NR^AC(O)和C(O)；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

L¹选自下组：-NR^A-C(O)-、-CHR^L-NR^A-C(O)-、-NR^A-C(O)-CHR^L-、-C(O)-NR^A-、-CHR^L-C(O)-NR^A-、-C(O)-NR^A-CH₂-、-S(O)_w-、-NR^A-S(O)_w-、-CHR^L-NR^A-S(O)_w-、-NR^A-S(O)_w-CHR^L-、-S(O)_w-NR^A-、-CH₂-S(O)_w-NR^A-、-S(O)_w-NR^A-CHR^L-、-CHR^L-C(O)-、-C(O)-和键，其中w为0、1或2；

Z选自各自具有至少一个氮的6至10元螺杂环、6至10元稠合双环杂环和6至10元桥接环杂烷基，其中氮和L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R^A选自下组：H、C₁-C₄烷基、-C(O)-C_1-4烷基、S(O)_w-C_1-4烷基(其中w为0、1或2)、C_3-6环烷基和杂环基；其中C₁-C₄烷基和C_3-6环烷基可任选地被一个、两个或三个各自选自以下的取代基取代：卤基、C_1-4烷氧基、-S(O)_w-甲基、-S(O)_w-乙基(其中w为0、1或2)和杂环基；且其中杂环基可任选地被一个或两个各自选自甲基、乙基和卤基的取代基取代；

R^P选自下组：卤基、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤基、氰基、羟基和C_1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C_1-4烷基、C(O)-O-C_1-4烷基、C(O)-O-C_3-6环烷基、-C(＝N)-NR'R'、-C(O)-NR'R'、-S(O)_w-NR'R'、-S(O)_w-C_1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR'R'、氧代基、苯基、苯氧基、C_3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C_1-6烷基或卤基取代；其中C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自以下的取代基取代：卤基、氰基、羟基、杂芳基、杂环基和NR'R'；以及

R'在每次出现时独立地选自下组：H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C_1-3烷基或卤基取代)、苯基和C_3-6环烷基，或两个R'连同其所连接的氮一起形成杂环基，该杂环基可任选地被甲基、卤基、氰基、氧代基或羟基取代。

在另一方面，本文提供一种式III的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

Z选自下组：稠合双环烷基、C₃-C₇单环环烷基、C₅-C₉桥接环烷基和螺C₅-C₁₀双环烷基，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R¹选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、螺C₅-C₁₀双环烷基、杂环基、氰基、卤基和杂芳基；其中C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、杂环基或杂芳基可被一个、两个或三个各自独立地选自卤基和C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)的取代基取代；

R⁶和R⁶'连同连接至R⁶和R⁶'的氮一起形成4至8元单环杂环基或8至10元双环杂环基；其中单环杂环基或双环杂环基可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R^P的取代基取代；

如本文中所描述，包含所公开化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物的药物组合物，例如所公开的药物组合物可包括至少一种或更多种药学上可接受的载剂、稀释剂、稳定剂、赋形剂、分散剂、悬浮剂和/或增稠剂。本公开也提供一种制造本文描述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物的方法。

也提供一种调节Myc家族蛋白(即，C-Myc、N-Myc、L-Myc或人类Myc)的量和活性的方法，例如可通过使细胞与有效量的如本文描述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物接触来调节细胞中Myc家族蛋白的活性。

本公开也提供一种治疗有需要的受试者的Myc家族蛋白相关疾病的方法，该方法包含施用治疗有效量的本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其包括任何实施例、表或图中的实施方案。在一些实施方案中，受试者为人类受试者且疾病为增殖性疾病，诸如癌症。

具体实施方式

定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解相同的含义。

应理解，本文提供的定义并不意欲相互排斥。因此，一些化学部分可属于超过一个术语的定义内。

如本文中所用，术语“烷氧基”指和氧连接的直链或支链烷基(烷基-O-)。示例性烷氧基包括但不限于具有1至6个或2至6个碳原子的烷氧基，在本文中分别称作C_1-6烷氧基和C_2-6烷氧基。示例性烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、三级丁氧基、二级丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。

如本文中所用，术语“烷基”指饱和直链或支链烃。示例性烷基包括但不限于1至6个、1至4个或1至3个碳原子的直链或支链烃，在本文中分别称作C_1-6烷基、C_1-4烷基和C_1-3烷基。示例性烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、三级丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基等。

如本文中所使用，术语“烯基”指具有至少一个碳-碳双键的不饱和直链或支链烃。示例性烯基包括但不限于2至6个或3至4个碳原子的直链或支链基团，在本文中分别称作C_2-6烯基和C_3-4烯基。示例性烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基等。

如本文中所使用，术语“亚烷基”指二基(di-radical)烷基。实例包括亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、2-甲基亚丙基(-CH₂-CH(CH₃)-CH₂-)、亚己基(-(CH₂)₆-)等。

如本文中所使用的术语“炔基”指具有至少一个碳-碳参键的不饱和直链或支链烃。示例性炔基包括但不限于2至6个或3至6个碳原子的直链或支链基团，在本文中分别称作C_2-6炔基和C_3-6炔基。示例性炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、甲基丙炔基等。

如本文中所用，术语“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“芳基亚烷基”和“烷基亚芳基”分别指二基烯基、炔基、芳基、芳基烷基和烷基芳基。

如本文所用，术语“迭氮基”指基团-N₃。

如本文所用，术语“羧基(carboxyl)”、“羧基(carboxy)”或“羧酸酯/羧酸盐”指-CO₂H或其盐。

如本文所使用，术语“胺甲酰基”指NH₂CO-。

如本文中所用，术语“环烷基”或“碳环基”指例如3至10个、3至6个或4至6个碳的饱和或部分不饱和烃基(在本文中分别称为C_3-10环烷基或C_4-6环烷基)，且其可为单环或双环结构，例如4至9元或4至6元饱和环结构，其包括桥接、稠合或螺环环。示例性环烷基包括但不限于金刚烷基、环己基、环戊基、环戊烯基、环丁基、环丙基和二氢茚基。

如本文所用，基团可互换使用且指环己基。

如本文所用，术语“氰基”和“甲腈”指基团-CN。

如本文所用，术语“甲酰基”指基团-C(O)H。

如本文所用，术语“胍基”指基团-NHC(＝NH)NH₂。

如本文所用，术语“卤基”和“卤素”以常规意义用于指代氯、溴、氟或碘取代基。

如本文所用，术语“羟基(hydroxy)”和“羟基(hydroxyl)”指基团-OH。

如本文所用，术语“杂芳基”或“杂芳族基团”指含有一个或多个杂原子，例如一至三个杂原子，诸如氮、氧和硫的单环芳族5至6元环系统。在可能的情况下，该杂芳基环可经由碳或氮连接至相邻基团。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、恶唑、异噻唑、异恶唑、咪唑、吡唑、三唑、吡啶或嘧啶等。

术语“杂环基(heterocyclyl/heterocyclic group)”为本领域公认的且指例如饱和或部分不饱和的4至10元单环或双环结构，或例如4至9元或4至6元饱和环结构，包括桥接、稠合或螺环环，且其环结构包括一至三个杂原子，诸如氮、氧和硫。在可能的情况下，杂环基环可经由碳或氮连接至相邻基团。杂环基的实例包括但不限于吡咯啶、哌啶、吗啉、硫代吗啉、哌嗪、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃或二氢呋喃等。

如本文所用，术语“硝基”指基团-NO₂。

如本文所用，术语“氧代基”指基团(＝O)或(O)。

如本文所用，术语“异构体”指包含相同数目和类型的原子或组分，但具有原子的不同结构排列和连接的化合物。

如本文所用，术语“互变异构体”指容易自一种异构体形式转化为另一种异构体形式且平衡存在的两种或更多种结构异构体中的一种。

本发明的化合物可含有一或多个手性中心，且因此以立体异构体形式存在。当在本文中使用时，术语“立体异构体”由所有对映异构体或非对映异构体组成。取决于立体源碳原子周围的取代基的构型，这些化合物可由符号“(+)”、“(-)”、“R”或“S”指定，但本领域技术人员将认识到，结构可隐含地表示手性中心。本公开涵盖这些化合物和其混合物的各种立体异构体。在命名法中，对映异构体或非对映异构体的混合物可指定为“(±)”，但本领域技术人员将认识到，结构可隐含地指代手性中心。

本公开的化合物可含有一个或多个双键，且因此以由碳-碳双键周围的取代基的排列产生的几何异构体形式存在。符号表示一键，其可为如本文中所描述的单键、双键或参键。碳-碳双键周围的取代基指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”根据IUPAC标准使用。除非另外规定，否则描绘双键的结构涵盖“E”和“Z”异构体两者。碳-碳双键周围的取代基可替代地称作“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示双键的相同侧上的取代基，且“反式”表示双键的相对侧上的取代基。

本公开的化合物可含有碳环或杂环，且因此以由环周围的取代基的排列所产生的几何异构体形式存在。碳环或杂环周围的取代基可称作“顺式”或“反式”，其中术语“顺式”表示环平面的相同侧上的取代基，且术语“反式”表示环平面的相对侧上的取代基。取代基位于环平面的相同和相对侧上的化合物的混合物指定为“顺式/反式”。

本公开的化合物的个别对映异构体和非对映异构体可由含有不对称或立体中心的可商购起始物质以合成方式制备，或通过制备外消旋混合物，随后通过本领域技术人员熟知的解析方法来制备。这些解析方法由以下例示：(1)将对映异构体的混合物连接至手性助剂，通过再结晶或层析来分离所得非对映异构体的混合物，及助剂释放光学纯产物，(2)使用光学活性解析剂形成盐，(3)在手性液相层析柱上直接分离光学对映异构体的混合物，或(4)使用立体选择性化学或酶试剂进行动力学解析。外消旋混合物也可通过熟知方法解析为其组分对映异构体，该熟知方法诸如手性液相层析或使化合物在手性溶剂中结晶。立体选择性合成(在生成新立构中心期间或在转化预先存在的立构中心期间，单反应物形成立体异构体的不相同混合物的化学或酶反应)为本领域中所熟知。立体选择性合成涵盖对映和非对映立体选择性转化两者，且可涉及手性助剂的使用。例如，参见Carreira和Kvaerno,Classics in Stereoselective Synthesis,Wiley-VCH:Weinheim,2009。

本文中所公开的化合物可与药学上可接受的溶剂(诸如水、乙醇等)以溶剂化以及非溶剂化形式存在，且本公开意欲包涵溶剂化和非溶剂化形式两者。在一个实施方案方案中，所公开化合物为非晶形的。在一个实施方案中，所公开化合物为单一多晶型物。在另一实施方案中，所公开化合物为多晶型物的混合物。在另一实施方案中，所公开化合物呈结晶形式。

本公开也包涵同位素标记的本公开化合物，其与本文中所记载的那些相同，除一或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常所见的原子质量或质量数的原子替换以外。可并入本公开的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，诸如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。例如，本公开的化合物可具有一或多个被氘置换的H原子。

某些同位素标记的所公开化合物(例如，经³H和¹⁴C标记的那些化合物)适用于化合物和/或底物组织分布分析。氚化(即，³H)和碳-14(即，¹⁴C)同位素因其容易制备及可侦测性而尤其较佳。此外，用诸如氘(即，²H)的较重同位素取代可获得某些由更高代谢稳定性产生的治疗优势(例如增加的活体内半衰期或降低的剂量需求)且因此在一些情况下为较佳的。同位素标记的本公开化合物可一般通过类似于本文实例中所公开的那些程序的以下程序，通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。

如本文中所用，在描述要素的上下文中，诸如“一(a/an)”及「该”的单数冠词和类似指示物应解释为涵盖单数和复数两者，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。除非本文另外指示，否则本文对值范围的记载仅意欲充当单独提及属于该范围内的各独立值(包括该范围的上限和下限)的简写方法，且各独立值并入本说明书中，如同在本文中单独记载一般。除非本文中另外指示或另外与上下文明显矛盾，否则本文中所描述的所有方法可以任何适合的次序执行。除非另有说明，否则本文所提供的任何及所有实例或示例性语言(即“诸如”)的使用仅意欲更好地说明实施方案，而不对权利要求的范围构成限制。

在一些实施方案中，除非另外具体说明，否则在定量值之前使用术语“约”时，本公开也包括特定定量值本身。除非另外指示或推断，否则如本文所用，术语“约”指相对于标称值的±10％偏差。除非另有说明或自上下文中理解，否则当提供关于组合物中组分或材料的量的百分比时，该百分比应理解为基于重量的百分比。

除非另有说明或自上下文中理解，否则若提供的例如聚合物的分子量不是绝对值，则该分子量应理解为平均分子量。

应理解，步骤次序或用于执行某些动作的次序并不重要，只要本公开保持可操作即可。此外，可同时进行两个或更多个步骤或动作。

如本文中所用，不在两个字母或符号之间的短划(“-”)指取代基的结合点或连接点。举例而言，-NH₂经由氮原子被连接。

如本文所用，术语“活性剂”、“药物”、“药理学活性剂”和“活性医药成分”可互换使用以指代在向受试者施用时通过局部或全身性作用或两者诱导所需药理学或生理学作用的化合物或组合物。

如本文所用，术语“前药”指在活体内转化以得到化合物或本文所描述的化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的化合物。转化可通过各种机制(即，酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或还原代谢)在各种位置(即，在肠腔中或在转运至肠、血液或肝脏时)发生。

如本文所用，术语“调节剂”指增加或减少目标物的含量或目标物的功能的化合物或组合物，该目标物可为但不限于Myc家族蛋白，诸如c-Myc、N-Myc、L-Myc和人类Myc。

如本文所用，术语“降解剂”指减小目标物的量或目标物的活性的化合物或组合物。在一些实施方案中，目标物可为但不限于包含c-Myc、N-Myc、L-Myc和人类Myc的Myc家族蛋白。

如本文所用，术语“降解”指减小目标物的量或目标物的活性的方法或过程。在一些实施方案中，目标物可为但不限于包含c-Myc、N-Myc、L-Myc和人类Myc的Myc家族蛋白。

如本文所用，术语“Myc家族蛋白”指如本文中所述的蛋白c-Myc、N-Myc或L-Myc中的任一种。在一些实施方案中，Myc蛋白为c-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白为N-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白为L-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白为人类c-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白为人类N-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc蛋白为人类L-Myc蛋白。在一些实施方案中，Myc家族蛋白为人类Myc家族蛋白。

如本文中所用，术语“N-Myc”和“MycN”可可互换使用且指蛋白“V-Myc髓细胞瘤病毒相关癌基因，神经母细胞瘤衍生的”且包括该蛋白的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，MycN指与Entrez Gene 4613、OMIM 164840、UniProt P04198和RegSeq NP_005369的一个或多个数据库条目相关联的蛋白。

如本文所用，术语“c-Myc”指蛋白“V-Myc髓细胞瘤病毒癌基因”且包括该蛋白的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，c-Myc指与Entrez Gene 4609、OMIM 190080、UniProt P01106和RegSeq NP_002458的一个或多个数据库条目相关联的蛋白。

如本文所用，术语“L-Myc”指蛋白“V-Myc髓细胞瘤病毒癌基因同源物，肺癌衍生的”且包括该蛋白的野生型和突变体形式。在一些实施方案中，L-Myc指与Entrez Gene4610、OMIM 164850、UniProt P12524和RegSeq NP_001028253的一个或多个数据库条目相关联的蛋白。

术语“个人”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换地使用，且指动物，包括但不限于：人类和非人类灵长类动物，包括猿猴和人类；啮齿动物，包括大鼠和小鼠；牛科动物；马科动物；绵羊；猫科动物；犬科动物等。“哺乳动物”意指任何哺乳动物物种中的一个或多个成员，且包括例如犬科动物、猫科动物、马科动物、牛科动物、绵羊、啮齿目等以及灵长类，即非人类灵长类动物和人类。非人类动物模型，即哺乳动物、非人类灵长类动物、鼠类、兔类等可用于实验研究。

如本文中所用，术语“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等是指获得所需药理学和/或生理学效果，诸如减小肿瘤负荷。该效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可具预防性，且/或就部分或完全治愈疾病和/或因该疾病所致的副作用而言可具治疗性。如本文中所用，“治疗”涵盖对哺乳动物(特定地人类)的疾病的任何治疗，且包括：(a)预防可能易患疾病但尚未诊断为患有其的受试者中出现该疾病或该疾病症状(即，包括可能与原发性疾病相关或由原发性疾病引起的疾病)；(b)抑制疾病，即遏制其发展；及(c)缓解疾病，即使疾病消退(即，减小肿瘤负荷)。在一些实施方案中，本文所描述的某些方法治疗与Myc家族蛋白，诸如c-Myc、N-Myc、L-Myc或人类Myc的信号路径相关联的癌症。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指对于向受试者施用而言为可接受的盐。应理解，此类具有相对离子的盐对于给定剂量方案将具有可接受的哺乳动物安全性。此类盐可衍生自药学上可接受的无机碱或有机碱及药学上可接受的无机酸或有机酸，且可包含有机相对离子和无机相对离子。本文所述的化合物的中性形式可通过使化合物与碱或酸接触及分离所得盐而转化为相应的盐形式。

盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬胺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、氟庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等。

盐的其他实例包括本公开的化合物的阴离子与合适阳离子，诸如N⁺、NH₄ ⁺及NW₄ ⁺(其中W可为C₁-C₈烷基)的化合物，及其类似物。对于治疗用途，本公开的化合物的盐可为药学上可接受的。然而，非医药学上可接受的酸与碱的盐也可用于例如药学上可接受的化合物的制备或纯化中。

本质上呈碱性的本公开组合物中所包括的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。可用以制备此类碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸为形成无毒酸加成盐的那些酸，即含有药理学上可接受的阴离子的盐，包括(但不限于)苹果酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。

本公开的组合物中所包括的本质上呈酸性的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。此类盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，且特别的钙盐、镁盐、钠盐、锂盐、锌盐、钾盐和铁盐。

本公开的组合物中所包括的包括碱性或酸性部分的化合物也可与各种胺基酸形成药学上可接受的盐。本公开的化合物可同时含有酸性基和碱性基；例如一个胺基和一个羧酸基。在此类情况下，该化合物可以酸加成盐、两性离子或碱性盐的形式存在。

如本文所用，术语“测定”、“测量”、“评估”以及“分析”可互换地使用且包括定量及定性测定两者。

如本文中所用，词组“信号路径”指细胞组分(胞内和细胞外两者)之间的一系列相互作用，其使活有机体中的一或多种其他组分发生变化，可致使对额外组分的后续改变。任选地，由一种信号路径赋予的变化可传播至其他信号路径组分。细胞组分的实例包括但不限于蛋白、核酸、肽、脂质和小分子。

如本文中所用，术语“有效量”和“治疗有效量”可互换使用且指当向哺乳动物或其他受试者施用以治疗疾病、病状或病症时足以影响该疾病、病状或病症的此类治疗的化合物的量。“有效量”或“治疗有效量”将视化合物、疾病和其严重程度以及待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。

如本文中所用，术语“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载剂”和“药学上可接受的佐剂”指可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂，其一般为安全、无毒且在生物学上或其他方面皆非不期望的，且包括兽用以及人类医药用途可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。如说明书和权利要求中所使用，此词组“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂”包括一种和超过一种的此类赋形剂、稀释剂、载剂和佐剂。

如本文所用，术语“药物组合物”意在涵盖适合于向受试者，诸如哺乳动物，尤其人类施用的组合物。一般而言，“药物组合物”为无菌的，且不含能够在受试者体内引起非所需反应的污染物(即，药物组合物中的化合物为医药级)。药物组合物可设计以经由许多不同的施用途径向有需要的受试者或患者施用，其中施用途径包括经口、经颊(buccal)、经直肠、肠胃外、腹膜内、真皮内、气管内(intracheal)、肌肉内、皮下等。

一般而言，对某一元素诸如氢或H的提及或描绘意欲包括该元素的所有同位素。例如，若R基团定义为包括氢或H，则其也包括氘和氚。因此，包含诸如氚、¹⁴C、³²P和³⁵S的放射性同位素的化合物在本技术的范畴内。基于本文的公开内容，用于将此类标记插入本技术的化合物中的程序对于本领域技术人员将为显而易见的。

除非明确地指示特定立体化学，否则预期化合物的所有手性、非对映异构和外消旋形式。因此，如自描绘中显而易见的，本文所述的化合物包括在任何或所有不对称原子处的增浓或解析的光学异构体。(R)-对映异构体和(S)-对映异构体的外消旋混合物，和包含(R)-对映异构体和(S)-对映异构体的对映增浓的立体异构混合物，以及个别光学异构体可分离或合成，以便基本上不含其对映异构体或非对映异构体配偶体，且这类立体异构体均在本技术的范围内。

本文所述的化合物可以溶剂合物，尤其水合物的形式存在，且除非另外规定，否则意欲涵盖所有此类溶剂合物和水合物。水合物可在制造化合物或包含化合物的组合物的过程中形成，或水合物可由于化合物的吸湿性而随时间推移形成。本技术的化合物也可以有机溶剂合物的形式存在，包括DMF、醚和醇溶剂合物等。任何特定溶剂合物的鉴别及制备均在合成有机化学或药物化学的普通技术人员的技能范围内。

如本文所述，本文提及本公开化合物、组合物和方法的各种实施方案。所描述的各种实施方案意欲提供各种说明性实例，且不应解释为对替代物种的描述。相反，应注意，本文所提供的对各种实施方案的描述可具有重迭范围。本文所论述的实施方案仅为说明性的且并不意欲限制本技术的范围。

化合物

本公开大体上是关于调节(例如，降解)MycN和/或MycC，且因此可具有显着抗肿瘤特性的化合物。本公开化合物和其药物组合物可用于需要调节Myc蛋白的量和活性的多种应用中，包括用作强效抗肿瘤剂。

因此，本文部分地提供一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、NR^ACH₂、NR^AC(O)和C(O)；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

Z为具有至少一个氮的4至10元杂环，其中该氮和L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R⁶选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苯甲基、杂芳基、C_1-3亚烷基-苯基、C_1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基、苯氧基和H；其中R⁶可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R的取代基取代；

R^P选自下组：卤基、氰基、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基(任选地被一个、两个或三个各自选自卤基、氰基、羟基和C_1-3烷氧基的取代基取代)、-C(O)-C_1-4烷基、C(O)-O-C_1-4烷基、C(O)-O-C_3-6环烷基、-C(＝N)-NR'R'、-C(O)-NR'R'、-S(O)_w-NR'R'、-S(O)_w-C_1-4烷基(其中w为0、1或2)、-NR'R'、氧代基、苯基、苯氧基、C_3-6环烷基、杂环基、-O-杂环基和杂芳基；其中杂环基、杂芳基或苯基可任选地被羟基、C_1-6烷基或卤基取代；且其中C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基和C_3-6环烷基可各自任选地被一个、两个或三个各自选自以下的取代基取代：卤基、氰基、羟基、杂芳基、杂环基和NR'R'；以及

示例性公开的化合物可由式I-A表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、CH₂、C(CH₃)₂、CF₂和C(CH₂)₂；

Y选自下组：NH、N-CH₃、O、S、CH₂、CF₂、C(CH₃)₂和C(CH₂CH₂)；

L¹选自下组：-NR^A-C(O)-、-CHR^L-NR^A-C(O)-、-NR^A-C(O)-CHR^L-、-C(O)-NR^A-、-CHR^L-C(O)-NR^A-、-C(O)-NR^A-CH₂-、-NR^A-S(O)_w-、-CHR^L-NR^A-S(O)_w-、-NR^A-S(O)_w-CHR^L-、-S(O)_w-NR^A-、-CH₂-S(O)_w-NR^A-和-S(O)_w-NR^A-CHR^L-，其中w为0、1或2；

Z为具有至少一个氮的4至10元杂环，其中该氮与L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH和-C(O)-O-C_1-4烷基；

R⁶选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苯甲基、杂芳基、C_1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基和苯氧基；其中R⁶可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R^P的取代基取代；

在一些实施方案中，例如W为N，且本公开的化合物具有式Ia：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R¹为5至6元杂环基或C_3-6环烷基。例如，R¹选自下组：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。在一些实施方案中，R¹为环丙基。在一些实施方案中，其中R¹为环戊基。

在其他实施方案中，R¹选自下组：甲基和乙基。

在一些实施方案中，X为NR^A。

在一些实施方案中，Z选自下组：4至6元单环杂环、6至10元螺杂环、6至10元稠合双环杂环和6至10元桥接环杂烷基。

示例性公开的化合物为式Iaa的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

示例性公开的化合物可由式II表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，所涵盖化合物由式IIa表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，所涵盖化合物由式IIb表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，所涵盖化合物由式IIc表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在其他实施方案中，本文所公开的化合物由式IId表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，本文所公开的化合物由式IIe表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在其他实施方案中，本文所公开的化合物由式IIf表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R^A选自H和甲基。

在一些实施方案中，R⁶选自下组：8至10元双环环烷基和8至10元双环杂环基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。

在一些实施方案中，R⁶选自下组：单环或桥接C_3-6环烷基、单环或桥接杂环基、双环或稠合杂环基和杂芳基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。

在一些实施方案中，R⁶选自下组：二氢茚基、环己基、环丁基和环戊基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。例如，R⁶为二氢茚基。

在一些实施方案中，R⁶选自下组：杂环基、苯基和杂芳基。

在其他实施方案中，R₆由以下式子表示：

其中R⁶⁶选自下组：H、卤基和氰基；且aa为0、1或2。在一些实施方案中，R⁶选自下组：

例如，R⁶选自下组：

在一些实施方案中，R⁶选自下组：

例如，R⁶选自下组：

在其他实施方案中，R⁶为甲基。

在一些实施方案中，R²为H。

本文也公开了一种由式III表示的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

示例性公开的化合物由式III-A表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、CH₂、C(CH₃)₂、CF₂和C(CH₂)₂；

Z选自下组：稠合双环烷基、C₃-C₇单环环烷基、C₅-C₉桥接环烷基和螺C₅-C₁₀双环烷基，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH和-C(O)-O-C_1-4烷基；

在一些实施方案中，例如，W为N且本发明的化合物具有式IIIa：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R¹为5至6元杂环基或C_3-6环烷基。例如，R¹选自下组：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。在一些实施方案中，R¹为环丙基。

在其他实施方案中，R¹选自下组：甲基和乙基。

在一些实施方案中，X为NR^A。

在一些实施方案中，Z选自下组：环己基、环戊基和环丁基。

在一些实施方案中，Z为C₅-C₉桥接环烷基。

在一些实施方案中，Z为螺C₅-C₁₀双环烷基。

在一些实施方案中，Z为稠合双环烷基。

在一些实施方案中，Z选自下组：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

R³选自下组：H、C₁-C₄烷基、CO₂H和-C(O)-O-C_1-4烷基；

R⁴为H或C_1-C₄烷基；或R³和R⁴一起形成-CH₂-或-CH₂CH₂-。

示例性公开的化合物可由式IV表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，本文所公开的化合物由式IVa表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R⁶和R⁶'连同连接至R⁶和R⁶'的氮一起形成任选地被取代的杂环基，其选自下组：

其中*指示和-C(O)-键合。

在一些实施方案中，R²为H。

所涵盖的化合物例如可选自下组：

/>

和其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

本文也公开由式V表示的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

R^L在每次出现时独立地选自下组：H和甲基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)；

示例性公开的化合物可由式V-A表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、CH₂、C(CH₃)₂、CF₂和C(CH₂)₂；

R⁶选自下组：C₁-C₆烷基、C₃-C₁₀环烷基、杂环基、苯并稠合杂环基、苯基、苯甲基、杂芳基、C_1-3亚烷基-杂芳基、-C(O)-杂芳基和苯氧基；其中R⁶可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R^P取代基取代；

在一些实施方案中，例如W为N且本公开的化合物具有式Va：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R¹为5至6元杂环基或C_3-6环烷基。例如，R¹选自下组：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。在一些实施方案中，R¹为环丙基。在一些实施方案中，R¹为环戊基。

在其他实施方案中，R¹选自下组：甲基和乙基。

在一示例性实施方案中，Z选自下组：环己基、环戊基和环丁基。

在一些实施方案中，Z为C₅-C₉桥接环烷基。

在一些实施方案中，Z为螺C₅-C₁₀双环烷基。

在一些实施方案中，Z为稠合双环烷基。

在一些实施方案中，Z选自下组：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

R³选自下组：H、C₁-C₄烷基、CO₂H和-C(O)-O-C_1-4烷基；

R⁴为H或C₁-C₄烷基；或

R³和R⁴一起形成-CH₂-或-CH₂CH₂-。

本文也公开了由式VI表示的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

R³选自下组：H、C₁-C₄烷基、CO₂H和-C(O)-O-C_1-4烷基；且

R⁴选自H或C₁-C₄烷基。

示例性公开的化合物可由式VIa表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在其他实施方案中，化合物可由式VIb表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，化合物可由式VIc表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，化合物可由式VId表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在另一些实施方案中，化合物可由式VIe表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在其他实施方案中，化合物可由式VIf表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，化合物可由式VIg表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，化合物可由式VIh表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。在一些实施方案中，化合物可由式VIi表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在其他实施方案中，化合物可由式VIj表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

本文也公开了由式VIk表示的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，化合物可由式VIl表示：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

在一些实施方案中，R⁶选自下组：杂环基、苯基和杂芳基。

在一些实施方案中，R⁶由下式表示：

其中R⁶⁶选自下组：H、卤基和氰基；且aa为0、1或2。例如，R⁶选自下组：

在其他实施方案中，R⁶选自下组：

在一些实施方案中，R²选自下组：H、-C(O)-O-甲基和C(O)OH。

举例而言，所涵盖的化合物可选自下组：

/>

及其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

本文所描述的所公开化合物可以盐形式存在，且化合物的盐形式为药学上可接受的盐和/或本文所描述的化合物可以前药形式存在。主题化合物的任何方便的(convenient)前药形式可例如根据Rautio等人(“Prodrugs:design and clinicalapplications”,Nature Reviews Drug Discovery 7,255-270(2008年2月))所述的策略和方法来制备。本文所描述的化合物可以溶剂合物形式存在。

在一些实施方案中，化合物或其前药形式以药学上可接受的盐形式提供。含有胺官能基或含氮杂芳基的化合物在本质上可为碱性的且可与任何数目的无机酸和有机酸反应以形成对应药学上可接受的盐。常用于形成此类盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸以及相关无机酸。常用于形成此类盐的有机酸包括对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、碳酸、丁二酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸以及相关有机酸。因此，此类药学上可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、单氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-l,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟丁酸盐、乙醇酸盐、顺丁烯二酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、杏仁酸盐、马尿酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐及相关盐。

应理解，本发明意欲涵盖盐、溶剂合物、水合物、前药和立体异构体的所有变化形式。

药物组合物和调配物

本文所述的化合物、前药和组合物可适用作用于向有需要的受试者施用的药物组合物。

因此，提供药物组合物，其可包含至少一种本文所述的化合物、其药学上可接受的盐或其前药，和至少一种药学上可接受的载剂、稀释剂、稳定剂、赋形剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。例如，所公开的药物组合物可包括本文所述的所公开化合物、药学上可接受的盐或前药中的一种或多种。所涵盖的组合物可包括治疗有效量的化合物、其药学上可接受的盐或其前药，例如，所公开的药物组合物可调配用于向有需要的受试者肠胃外施用，调配用于向有需要的受试者静脉内施用或调配用于向有需要的受试者皮下施用。

治疗方法

如上文所述，本公开的实施方案包括本文所述的化合物、前药和药物组合物用于治疗有需要的受试者的Myc蛋白相关的增殖性疾病的用途。此类增殖性疾病包括癌症，例如选自下组的癌症：头颈癌、神经系统癌、脑癌、神经母细胞瘤、肺癌/纵隔癌、乳癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆道癌、胰脏癌、小肠癌、大肠癌、结肠直肠癌、妇科癌症、生殖泌尿癌、卵巢癌、甲状腺癌、肾上腺癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、小儿恶性肿瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、骨髓瘤、白血病和来自未知原发性部位的转移。

在一些实施方案中，所涵盖的治疗方法包括治疗癌症，即Myc蛋白相关癌症，例如其中Myc蛋白选自下组：N-Myc蛋白、c-MYc蛋白、L-Myc蛋白、人类N-Myc蛋白、人类c-Myc蛋白和人类L-Myc蛋白。

例如，本文提供一种治疗癌症的方法，该癌症选自下组：神经母细胞瘤、小细胞肺癌、乳癌或造血癌症。

在一些实施方案中，所公开的癌症治疗方法进一步包含第二疗法，其中第二疗法为抗肿瘤疗法，例如所涵盖的方法可进一步包含施用抗肿瘤疗法，诸如选自以下的一或多种药剂：DNA拓朴异构酶I或II抑制剂、DNA损伤剂、免疫治疗剂(例如，抗体、细胞因子、免疫检查点抑制剂或癌症疫苗)、抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、微管靶向剂、电离辐射、有丝分裂调节因子或有丝分裂检查点调节因子的抑制剂、DNA损伤信号转导子的抑制剂和DNA损伤修复酶的抑制剂。例如，额外抗肿瘤疗法可选自下组：免疫疗法(例如，免疫癌疗法)、放射疗法、光动力疗法、基因导向的酶前药疗法(GDEPT)、抗体导向的酶前药疗法(ADEPT)、基因疗法和控制饮食。

本公开也涵盖本文所描述的化合物、前药和药物组合物用以调节Myc蛋白(活体外或患者体内)的量和活性的用途，其中Myc蛋白可为例如N-Myc蛋白、c-MYc蛋白、L-Myc蛋白、人类N-Myc蛋白、人类c-Myc蛋白和/或人类L-Myc蛋白。

例如，本公开提供一种调节Myc蛋白的量(例如，浓度)和/或活性，诸如(例如，降解Myc蛋白或调节Myc蛋白的降解速率)的方法，其包含使Myc蛋白与有效量的本文中所描述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物接触，包括实施方案或来自任何实例、表或图式。

所涵盖的方法包括调节Myc家族蛋白的蛋白-蛋白相互作用的方法或减小Myc蛋白的量和活性等级的方法。

调节Myc蛋白的量和活性的所公开方法可包括联合施用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐以及治疗有效量的第二药剂，例如治疗剂。

实施例

下文为进行本公开的特定实施方案的实施例。这些实施例仅出于说明的目的提供，且不意欲以任何方式限制本公开的范围。已作出努力以确保所使用数字(即，量、温度等)的精确性，但一些实验性误差和偏差当然应为允许的。

一般实验

最终化合物通过HPLC/MS分析来确认并测定为≥90％重量纯度。¹H和¹³C NMR光谱记录于CDCl₃(残留内标CHCl₃＝δ7.26)、DMSO-d₆(残余内标CD₃SOCD₂H＝δ2.50)、甲醇-d₄(残余内标CD₂HOD＝δ3.20)或丙酮-d₆(残余内标CD₃COCD₂H＝δ2.05)中。所报告的化学位移(δ)以百万分率(ppm)给出，且偶合常数(J)以赫兹(Hz)为单位。自旋多重性报告为s＝单峰，bs＝宽单峰，bm＝宽多重峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，dd＝双二重峰，ddd＝双双二重峰，dt＝双三重峰，td＝三二重峰，tt＝三三重峰和m＝多重峰。

用梯度洗脱进行HPLC-MS分析。通过硅胶柱在正相和逆相中执行中压液相层析(MPLC)。应了解，以盐形式(例如，TFA盐)报告的化合物可具有或可不具有1:1化学计量，和/或例如所报告的效能浓度或其他分析结果可例如略微地较高或较低。

实施例1：合成化合物1和2

步骤-1：合成2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酸乙酯

向哌啶-4-酮(5g，50.5mmol)在无水DMF(50mL)中的溶液中添加碳酸钾(13.9g，101.01mmol)和2-溴乙酸乙酯(6.02mL，50.5mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，得到2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酸乙酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LC纯度：90.71％；m/z:186.2[M+H]⁺(分子式：C₉H₁₅NO₃，计算的分子量：185.02)。

步骤2：合成2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯

向2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酸乙酯(7.7g，41.62mmol)在甲醇(80mL)中的溶液中添加甲胺盐酸盐(3.62g，54.10mmol)和2滴乙酸。在RT下搅拌反应混合物2h。在0℃下添加氰基硼氢化钠(5.16g，83.42mmol)且在RT下搅拌反应混合物12h。通过TLC监测反应进程。在减压下浓缩反应混合物，获得残余物。将残余物溶解于二氯甲烷中的30％甲醇中，且用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，获得2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(5.2g，62.6％)。LC纯度：97.97％；m/z:201.2[M+H]⁺(分子式：C₁₀H₂₀N₂O₂，计算的分子量：200.98)。

步骤3：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2g，8.51mmol)在正丁醇(20mL)中的溶液中添加2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(3.4g，17.01mmol)、DIPEA(4.45mL，25.5mmol)和碘化铜(200mg)。在微波反应器中，在140℃下加热反应混合物3h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至环境温度且浓缩以移除溶剂。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400)以及二氯甲烷中0至5％甲醇的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(1g，30.3％)。LC纯度：63.8％；m/z:400.3[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₂₉N₇O₂，计算的分子量：399.50)。

步骤-4：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(0.950g，2.3mmol)在THF:MeOH:H₂O(1:1:1)(15mL)中的溶液中添加单水合氢氧化锂(0.199g，4.7mmol)。在50℃下加热反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却且在减压下浓缩，以获得残余物。通过逆相制备型HPLC来纯化残余物，以得到2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(430mg，51.6％)。LC纯度：98.02％；m/z:372[M+H]⁺(分子式：C₁₈H₂₅N₇O₂，计算的分子量：371.45))。

步骤-5：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(0.150g，0.4mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加三乙胺(0.2mL，2mmol)，随后添加EDC.HCl(0.115g，0.6mmol)和HOBt(0.027g，0.2mmol)。在RT下搅拌反应混合物15min。接着添加3-(三氟甲基)苯胺(0.052g，0.32mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(30mg，20.78％)。LC纯度：99.28％；m/z:515.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₉F₃N₈O，计算的分子量：514.6)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.11(s,1H),7.85(t,J＝7.6Hz,2H),7.5(t,J＝8Hz,1H),7.42(d,J＝8Hz,1H),6.24-6.19(m,1H),6.14(s,1H),4.67-4.61(m,1H),3.28(s,2H),3.15-3.10(m,2H),3.05(s,3H),2.48-2.43(m,2H),2.12-2.05(m,2H),2.03-1.92(m,1H),1.75-1.70(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

步骤-6：合成N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(0.150g，0.4mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.2mL，2mmol)，随后添加EDC.HCl(0.115g，0.6mmol)和HOBt(0.027g，0.026mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min。接着添加2-胺基-2,3-二氢-1H-茚-5-甲腈(0.062g，0.32mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应物用水稀释且用DCM萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以获得呈游离碱形式的N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酰胺(40mg，19.4％)。LC纯度：99.51％；m/z:512.3[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₃N₉O，计算的分子量：511.63)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.85(d,J＝5.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.44(d,J＝8Hz,1H),6.23-6.15(m,2H),4.75-4.68(m,1H),4.61(s,1H),3.40-3.32(m,2H),3.07(s,3H),3.05-2.97(m,6H),2.36-2,30(m,2H),1.94-1.87(m,3H),1.67-1.62(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.77-0.74(m,2H)。

实施例2：合成化合物3

步骤-1：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(0.250g，0.67mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中添加3-(甲基磺酰基)苯胺(0.115g，0.67mmol)、三乙胺(0.46mL，3.35mmol)，随后添加T₃P(乙酸乙酯中50％溶液)(1.28mL，2.02mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过UPLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用甲醇中的30％DCM萃取。在减压下浓缩有机层，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺(100mg，28.32％)。LC纯度:97.85％；m/z:356.6[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₂N₈O₃S，计算分子量：524.64)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.38(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(t,J＝8Hz,1H),6.58-6.32(m,2H),4.32-4.26(m,2H),3.96-3.89(m,2H),3.39-3.32(m,2H),3.14(s,6H),2.36-2.23(m,2H),2.14-2.07(m,2H),2.05-1.95(m,1H),1.73-1.64(m,1H),1.08-1.03(m,2H),0.80-0.76(m,2H)。

实施例3：合成化合物4

步骤-1：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(1g，4.0mmol)在正丁醇(n-BuOH)(5mL)中的溶液中添加CuI(76mg，0.4mmol)和DIPEA(2.15mL，1.2mmol)。搅拌反应混合物5min且接着添加2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(1.2g，6.0mmol)。在微波反应器中，在140℃下搅拌反应混合物3h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释且用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥及浓缩以移除溶剂，以提供粗化合物。通过biotage Isolera，使用230-400硅胶用石油醚中0至10％乙酸乙酯洗脱来纯化粗物质，以产生2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(1.2g，75％产率)。LC纯度：65.54％；m/z:414.2[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₃₁N₇O₂，计算的分子量：413.53)。

步骤-2：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(1.2g，2.9mmol)在THF:MeOH:H₂O(3mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H₂O(610mg，14.5mmol)且在60℃下加热反应物3h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至室温以及浓缩，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(1.2g，粗物质)。LC纯度：85.18％；m/z:386.3[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₇N₇O₂,，计算的分子量：385.47)。

步骤-3：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

在0℃下向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(100mg，0.26mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA(0.1mL，0.76mmol)，随后添加HATU(198mg，0.52mmol)。在RT下搅拌反应混合物5min，且接着添加3-(三氟甲基)苯胺(42mg，0.26mmol)。将反应混合物加热至室温并搅拌16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水以及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(10mg，7.3％)。LC纯度：97.16％；m/z:529.3[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₁F₃N₈O，计算分子量：528.58)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.07(s,1H),7.82-7.76(m,2H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,1H),5.98(d,J＝6.0Hz,1H),5.91(s,1H),3.40(s,3H),3.25(s,2H),3.11-3.08(m,3H),3.05(s,3H),2.44-2.37(m,2H),2.07-1.93(m,3H),1.72-1.70(m,2H),1.04-1.00(m,2H),0.80-0.77(m,2H)。

实施例4：合成化合物5

步骤-1：合成2-溴-N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)乙酰胺

向2-甲基-2H-四唑-5-胺(0.600g，6.06mmol)在无水THF(10mL)中的经冷却的0℃溶液中添加DMAP(0.073g，0.606mmol)、三乙胺(1.26mL，9.09mmol)，随后逐滴添加2-溴乙酰氯(0.58mL，6.06mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释且用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以得到2-溴-N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)乙酰胺(700mg，粗物质)。粗物质不经进一步纯化即按原样用于下一步骤中。LC纯度：76.4％；m/z:222.4[M+H]⁺(分子式：C₄H₆BrN₅O，计算的分子量：220.2)。

步骤-2：合成N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酰胺

向2-溴-N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)乙酰胺(0.700g，3.18mmol)在ACN(10mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.09g，7.95mmol)和哌啶-4-酮(0.315g，3.18mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释且用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酰胺(500mg，粗物质)。粗物质不经进一步纯化即用于下一步骤中。LC纯度：74.9％；m/z:239.1[M+H]⁺(分子式：C₉H₁₄N₆O₂，计算的分子量：238.25)。

步骤-3：合成N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酰胺

向N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-氧代基哌啶-1-基)乙酰胺(0.490g，2.05mmol)在甲醇(6mL)中的溶液中添加甲胺盐酸盐(0.181g，2.67mmol)和乙酸(0.1mL)。在RT下搅拌反应混合物2h。接着，在0℃下添加氰基硼氢化钠(0.259g，4.1mmol)且在RT下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。在反应完成后，在减压下浓缩反应混合物，以移除甲醇。通过逆相制备型HPLC来纯化粗物质，以得到N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酰胺(130mg，24.16％)。LC纯度：96.1％；m/z:254.1[M+H]⁺(分子式：C₁₀H₁₉N₇O，计算的分子量：253.1)。

步骤-4：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)乙酰胺

向8mL微波小瓶中的N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-2-(4-(甲胺基)哌啶-1-基)乙酰胺(120mg，0.47mmol)在正丁醇(2mL)中的溶液中添加2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(33mg，0.14mmol)和DIPEA(0.2mL，1.14mmol)。在微波反应器中，在140℃下加热反应混合物2h。通过LCMS监测反应(剩余50％起始材料)。浓缩反应混合物以获得粗产物，通过逆相制备型HPLC来纯化该粗产物，以获得呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(2-甲基-2H-四唑-5-基)乙酰胺(10mg，4.6％)。LC纯度：99.22％；m/z:453.3[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₂₈N₁₂O，计算的分子量：452.53)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.84(d,J＝6Hz,1H),6.18(d,J＝5.6Hz,2H),4.65-4.57(m,1H),4.30(s,3H),3.35-3.32(m,2H),3.14-3.08(m,2H),3.05(s,3H),2.49-2.44(m,2H),2.08-2.02(m,2H),1.96-1.91(m,1H),1.75-1.72(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

实施例5：合成化合物6

合成2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

向2-溴乙酸(0.250g，1.81mmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加3-(甲基磺酰基)苯胺(309mg，1.81mmol)、三乙胺(0.5mL，3.62mmol)，随后添加T₃P(乙酸乙酯中50％溶液)(1.7mL，2.71mmol)。在RT下搅拌反应物16h。通过UPLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗产物。通过Biotage-Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至11％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗产物，以产生2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺(220mg，41.66％)。LC纯度：75.28％；m/z＝292[M-H]^-(分子式：C₉H₁₀BrNO₃S，计算的分子量：292.15)。

步骤-1：合成4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(587mg，2.5mmol)在正丁醇(10mL)中的溶液中添加4-胺基哌啶-1-甲酸三级丁酯(1g，5mmol)。在微波反应器中，在160℃下加热反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至室温且浓缩，以移除正丁醇。所获得的残余物用二氯甲烷和石油醚磨碎，以获得4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(400mg，20％)，其不经纯化即用于下一步骤中。LC纯度：65.74％；m/z:300.3[M-Boc]⁺(分子式：C₂₀H₂₉N₇O₂，计算的分子量：399.50)。

步骤-2：合成N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺

将4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(100mg，0.25mmol)在DCM(1mL)中的溶液冷却至0℃且添加1,4二恶烷(1mL)中的4M盐酸。在室温下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应，耗尽起始材料后，将反应混合物浓缩以获得呈HCl盐形式的N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺(100mg，定量产率)。LC纯度：88.25％；m/z:300.2[M+H]⁺(分子式：C₁₅H₂₁N₇，计算的分子量：299.38)

步骤-3：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

向N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺(100mg，0.334mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加K₂CO₃(92mg，0.668mmol)和2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺(97mg，0.334mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且过滤所得固体。将固体用石油醚洗涤，且在真空下干燥，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺(25mg，18％)。LC纯度：98.60％；m/z:511.3[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₀N₈O₃S，计算的分子量：510.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.34(s,1H),7.93(d,J＝5.2Hz,1H),7.91-7.80(m,1H),7.72-7.69(m,1H),7.63-7.59(m,1H),6.20-6.10(m,2H),3.82-3.78(m,1H),3.27(m,2H),3.14(s,3H),3.03-2.97(m,2H),2.48-2.43(m,2H),2.09-2.05(m,2H),1.94-1.91(m,1H),1.90-1.69(m,2H),0.99-0.83(m,2H),0.75-0.67(m,2H)。

实施例6：合成化合物7

步骤-1：合成甲基(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)胺基甲酸三级丁酯

向(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)胺基甲酸三级丁酯(0.300g，1.41mmol)在无水DMF(6mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(0.488g，3.5mmol)。在RT下搅拌反应混合物10min。接着，在0℃下逐滴添加碘甲烷(0.17mL，2.83mmol)。使反应混合物升温至室温并搅拌16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得甲基(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)胺基甲酸三级丁酯(400mg，定量产率)。LC纯度：99.58％；m/z:241.3[M+H]⁺(分子式：C₁₃H₂₄N₂O₂，计算的分子量：240.35)。

步骤-2：合成N,2-二甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-胺

向甲基(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)胺基甲酸三级丁酯(0.400g，1.66mmol)在冷却至0℃的无水DCM(2mL)中的的经搅拌溶液中添加TFA(2mL)。在室温下搅拌反应物1h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将所得混合物浓缩、用石油醚磨碎且在高真空下浓缩，以产生呈TFA盐形式的N,2-二甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-胺(300mg，定量产率)。LC纯度：97.9％；m/z:141.3[M+H]⁺(分子式：C₈H₁₆N₂，计算的分子量：140.23)。

步骤-3：合成N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

向20mL微波小瓶中的N,2-二甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-胺(0.300g，2.14mmol)在正丁醇(5mL)中的溶液中添加2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(0.251g，1.07mmol)和DIPEA(1.12mL，6.42mmol)。在微波反应器中，在140℃下加热反应混合物2h。通过LCMS监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至室温且浓缩以移除正丁醇。通过逆相制备型HPLC来纯化粗物质，以获得呈游离碱形式的N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺(80mg，11.09％)。LC纯度：97.64％；m/z:340.3[M+H]⁺(分子式：C₁₈H₂₅N₇，计算的分子量：339.45)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.85(d,J＝5.6Hz,1H),6.16(d,J＝6Hz,1H),6.06(s,1H),4.78(s,1H),3.50(s,2H),2.70(s,2H),2.30(s,6H),1.98-1.91(m,3H),1.59-1.57(m,2H),0.98-0.94(m,2H),0.79-0.74(m,2H)。

实施例7：合成化合物8

步骤-1：合成2-溴-N-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙酰胺

向1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-胺(200mg，2.03mmol)在二氯甲烷(3mL)中的经冷却(0℃)溶液中逐滴添加三甲胺(0.48mL，3.45mmol)和2-溴乙酰氯(0.19mL，2.23mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将所得反应混合物通过添加水进行淬灭且用DCM萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，以获得2-溴-N-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙酰胺(150mg，33％)，其不经纯化即用于下一步骤中。LC纯度：88.9％；m/z:221.0[M+2)+H]⁺(分子式：C₅H₇BrN₄O，计算放入分子量：219.04)。

步骤-2：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙酰胺

向N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.638mmol)在无水DMF(4mL)中的经搅拌溶液中添加K₂CO₃(176mg，1.276mmol)和2-溴-N-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙酰胺(140mg，0.638mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程，完全耗尽起始材料后，将反应混合物浓缩，用水稀释且使用二氯甲烷中10％甲醇萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩。通过逆相制备型HPLC来纯化粗化合物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙酰胺(23mg，8％)。LC纯度：99.5％；m/z:452.1[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₂₉N₁₁O，计算的分子量：451.54)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.15(s,1H),7.86(d,J＝4.8Hz,1H),6.25-6.14(m,2H),4.66-4.58(m,1H),4.11(s,3H),3.29(s,2H),3.11-3.09(m,2H),3.05(s,3H),2.47-2.42(m,2H),2.07-2.03(m,2H),1.94-1.91(m,1H),1.74-1.71(m,2H),1.02-0.98(m,2H),0.79 -0.74(m,2H)。

实施例8：合成化合物9

合成2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)丙烯酰胺

向3-(甲基磺酰基)苯胺(500mg，2.9mmol)在DCM中的经冷却(0℃)溶液中逐滴添加三乙胺(0.6mL，4.35mmol)和2-溴丙酰氯(540mg，3.1mmol)。在RT下搅拌反应混合物2h。通过LCMS监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，以获得残余物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)柱层析及石油醚中0至40％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化残余物，以获得2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)丙烯酰胺(400mg，44％)。LC纯度：65％；m/z:308.0[M+2H]⁺(分子式：C₁₀H₁₂BrNO₃S，计算的分子量306.17)。

步骤-1：合成4-(甲胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯

向4-氧代基哌啶-1-甲酸三级丁酯(2g，10.0mmol)在甲醇(20mL)中的经搅拌溶液中添加催化性乙酸(0.2mL)和甲胺盐酸盐(1g，15mmol)。在RT下搅拌反应物2h。接着将反应混合物冷却至0℃且逐份添加氰基硼氢化钠(1.2g，20mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过LCMS监测起始材料的完成。通过添加饱和碳酸钠溶液来使反应混合物淬灭，且用DCM萃取。将有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得4-(甲胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(2.1g，97％)，其不经纯化即用在下一步骤中。LC纯度：97.43％；m/z:215.3[M+H]⁺(分子式：C₁₁H₂₂N₂O₂，计算的分子量：214.31)。

步骤-2：合成4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.08g，4.6mmol)和4-(甲胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(2g，9.3mmol)在正丁醇(20mL)中的混合物中添加DIPEA(2.3mL，13.94mmol)。在微波反应器中，在150℃下加热反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至室温且浓缩以移除正丁醇。所获得的残余物用二氯甲烷和石油醚磨碎，以获得4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(700mg，粗物质)，其不经纯化即用在下一步骤中。LC纯度：8％；m/z:414.4[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₃₁N₇O₂，计算的分子量：413.53)。

步骤-3：合成N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺

向4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(700mg，1.69mmol)在DCM(10mL)中的冷却(0℃)溶液中添加1,4二恶烷(8mL)中的4M盐酸。在室温下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应，且起始材料耗尽后，浓缩反应混合物，以获得残余物。将残余物用DCM洗涤且浓缩，以获得呈HCl盐形式的N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺(450mg)。LC纯度：98.7％；m/z:314.0[M+H]⁺(分子式：C₁₆H₂₃N₇，计算的分子量：313.41)。

步骤-4：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)丙烯酰胺

向N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.638mmol)在无水DMF(4mL)中的经搅拌溶液中添加K₂CO₃(176mg，1.276mmol)和2-溴-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)丙烯酰胺(195mg，0.638mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程，且起始材料完全耗尽后，将反应混合物浓缩，用水稀释且使用二氯甲烷中10％甲醇萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩。通过逆相制备型HPLC来纯化粗化合物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)丙烯酰胺(24mg，7％)。LC纯度：97.4％；m/z:539.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₄N₈O₃S，计算的分子量：538.67)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.34(s,1H),7.93-7.86(m,2H),7.71-7.59(m,2H),6.23-6.12(m,2H),3.38-3.33(m,1H),3.14(s,3H),3.13-3.03(m,5H),2.68-2.61(m,1H),2.48-2.44(m,1H),2.09-1.98(m,3H),1.89-1.90(m,2H),1.57-1.36(m,4H),0.97-0.94(m,2H),0.77-0.74(m,2H)。

实施例9：合成化合物10

步骤-1：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)乙酸(70mg，0.485mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加TEA(0.2mL，1.45mmol)，随后添加T₃P(1mL，1.45mmol，EtOAc中50％)。在RT下搅拌反应混合物5min，接着添加1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-胺(180mg，0.485mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释且用水洗涤。将有机层经无水Na₂SO₄干燥且浓缩以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-N-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙酰胺(11mg，4.6％)。LC纯度：97.16％；m/z:493.3[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₂N₁₀O₂，计算的分子量：492.59)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.87(d,J＝5.6Hz,1H),7.69-7.61(m,2H),6.15(d,J＝6.0Hz,1H),6.13(s,1H),5.45-5.40(m,1H),5.10(t,J＝7.2Hz,2H),4.87(t,J＝6.4Hz,2H),4.70-4.60(m,1H),3.24(s,2H),3.11-3.07(m,2H),3.04(s,3H),2.51-2.46(m,2H),2.15-2.02(m,2H),1.95-1.90(m,1H),1.80-1.73(m,2H),1.02-0.98(m,2H),0.77-0.74(m,2H)。

实施例10：合成化合物11

步骤-1：合成((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(335mg，1.024mmol)在无水THF(30mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(1.29mL，9.220mmol)。在0℃下搅拌反应混合物1h，接着添加THF(5mL)中的苯甲酸次氯酸酐(0.133mL，1.024mmol)。在0℃下搅拌反应混合物0.5h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将所得有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗产物。通过biotage isolera使用230-400目二氧化硅用乙酸乙酯中0至100％石油醚洗脱来纯化所获得粗产物，以产生((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(100mg，22.22％)。LC纯度：75.13％；m/z:448.3[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₂₉N₇O2，计算的分子量：447.5)。

步骤-2：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)异吲哚啉-2-甲酰胺

向((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(90mg，0.201mmol)在无水DMF(1mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.084mL，0.604mmol)。在65℃下将反应混合物搅拌至室温，保持1h。将反应物冷却至室温且添加异吲哚啉(23.95mg，0.201mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16h。在起始材料完全转化后(通过UPLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化粗产物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)异吲哚啉-2-甲酰胺(15mg，15.78％)。LC纯度：97.60％；m/z:473.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₂N₈O，计算的分子量：472.6)。¹H NMR(400MHz,MeOD):δ7.73(d,J＝6.8Hz,1H),7.35-7.29(m,4H),6.38-6.36(m,2H),4.69(s,4H),4.66-4.55(m,1H),3.72-3.64(m,1H),3.10(s,3H),2.19-2.17(m,2H),2.05-2.00(m,1H),1.88-1.86(m,4H),1.61-1.51(m,2H),1.07-1.05(m,2H),0.79-0.73(m,2H)。

实施例11：合成化合物12

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-5,6-二氟异吲哚啉-2-甲酰胺

向((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(80mg，0.178mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.075mL，0.536mmol)。在65℃下搅拌反应混合物1h。使反应物冷却至室温且添加5,6-二氟异吲哚啉(34.18mg，0.223mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16h。在起始材料完成转化后(通过UPLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-5,6-二氟异吲哚啉-2-甲酰胺(20mg，22.22％)。LC纯度：97.45％；m/z:509.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₀F₂N₈O，计算的分子量：508.58)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ11.92(s,1H),9.31(s,1H),7.85(d,J＝5.6Hz,1H),7.46-7.41(m,2H),6.18-6.04(m,3H),4.58(s,4H),4.57-4.51(m,1H),3.53-3.46(m,1H),2.96(s,3H),1.95-1.85(m,3H),1.70-1.62(m,4H),1.47-1.37(m,2H),0.93-0.90(m,2H),0.71-0.67(m,2H)。

实施例12：合成化合物13

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-6,7-二氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺

向((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(80mg，0.178mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.075mL，0.536mmol)。在65℃下搅拌反应混合物1h。将反应物冷却至室温且添加6,7-二氟-1,2,3,4-四氢异喹啉(30.24mg，0.178mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16h。在起始材料完全转化后(通过UPLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-6,7-二氟-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酰胺(25mg，26.88％)。LC纯度：99.20％；m/z:522.9[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₂F₂N₈O，计算的分子量：522.60)。¹H NMR(400MHz,MeOD):δ7.86(d,J＝5.6Hz,1H),7.12-7.06(m,2H),6.20-6.16(m,2H),4.63(s,2H),3.66-3.63(m,3H),3.01(s,3H),2.85-2.82(m,2H),2.09-2.06(m,2H),1.95-1.91(m,1H),1.79-1.75(m,4H),1.54-1.50(m,3H),1.01-0.96(m,2H),0.77-0.74(m,2H)。

实施例13：合成化合物14

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-甲酰胺

向((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(130mg，0.290mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.12mL，0.872mmol)。在65℃下搅拌反应混合物1h。将反应物冷却至室温并添加2-(三氟甲基)-5,6-二氢-8H-7l2-[1,2,4]三唑并[5,1-c]吡嗪(55.5mg，0.290mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16h。在起始材料完全转化后(通过UPLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得粗化合物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)来纯化粗化合物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(三氟甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-7(8H)-甲酰胺(40mg，25.31％)。LC纯度：99.89％；m/z:546.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₀F₃N₁₁O，计算的分子量：545.58)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.72(d,J＝7.6Hz,1H),6.50-6.29(m,2H),4.79(s,2H),4.57-4.51(m,1H),4.30(t,J＝5.2Hz,2H),4.01(t,J＝5.6Hz,2H),3.75-3.62(m,1H),3.09(s,3H),2.16-2.13(m,2H),1.98-1.95(m,1H),1.88-1.82(m,4H),1.53-1.49(m,2H),1.05-1.00(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

实施例14：合成化合物15F1和15F2

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步骤-1：合成3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸三级丁酯

向3-(2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸三级丁酯(200mg，0.888mmol)在乙腈(3mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(122.6mg，0.888mmol)，随后在0℃下逐滴添加碘甲烷(0.05mL，0.924mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过LCMS监测)，经由硅藻土层过滤出反应混合物。在减压下浓缩有机层，以产生3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸三级丁酯(200mg，94.33％)。LC纯度：52.47％,30.69％；m/z:240.2[M+H]⁺(分子式：C₁₀H₁₇N₅O₂，计算的分子量：239.28)。

步骤-2：合成5-(氮杂环丁-3-基)-2-甲基-2H-四唑

向3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酸三级丁酯(200mg，0.836mmol)在二氯甲烷(3mL)中的经搅拌溶液中添加二恶烷(2mL)中的4M HCl。接着，在室温下搅拌反应混合物1h。反应完成后(通过TLC监测)，在减压下浓缩混合物，以获得5-(氮杂环丁-3-基)-2-甲基-2H-四唑(150mg，定量产率)。LC纯度：39.6&59％；m/z:140.2[M+H]⁺(分子式：C₅H₉N₅，计算的分子量：139.16)。

步骤-3：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺

向((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸苯酯(200mg，0.447mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.18mL，1.342mmol)。在65℃下搅拌反应混合物1h。将反应物冷却至室温并添加5-(氮杂环丁-3-基)-2-甲基-2H-四唑(62.1mg，0.447mmol)。将反应混合物加热至85℃，保持16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。有机层经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(15F1，12mg)和(15F2，14mg)。

化合物15F1资料：LC纯度：99.46％；m/z:493.3[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₃₂N₁₂O，计算的分子量：492.59)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.88(d,J＝5.8Hz,1H),6.13-6.09(m,2H),4.44-4.24(m,3H),4.22-4.02(m,3H),3.56(s,3H),3.66-3.55(m,1H),3.01(s,3H),2.07-2.04(m,2H),1.93-1.90(m,1H),1.89-1.73(m,4H),1.51-1.47(m,2H),0.99-0.95(m,2H),0.75-0.72(m,2H)。

化合物15F2资料：LC纯度：99.31％；m/z:493.3[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₃₂N₁₂O，计算的分子量：492.59)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.88(d,J＝5.8Hz,1H),6.13-6.09(m,2H),4.44-4.24(m,3H),4.22-4.02(m,3H),3.56(s,3H),3.66-3.55(m,1H),3.01(s,3H),2.07-2.04(m,2H),1.93-1.90(m,1H),1.89-1.73(m,4H),1.51-1.47(m,2H),0.99-0.95(m,2H),0.75-0.72(m,2H)。

实施例15：合成化合物16

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

在微波反应器中在120℃下加热2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(100mg，0.42mmol，1.0当量)、2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-胺)(107mg，0.85mmol，2.0当量)和乙基双(丙-2-基)胺(0.22mL，1.27mmol，3.0当量)和乙醇(6.0mL)的混合物，保持12h。在减压下移除挥发物，以获得泡沫产品(foam)，在碱性条件下通过逆相HPLC将其纯化，以获得呈固体状的所需化合物(14mg，0.04mmol，10％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.15min,m/z＝326.2[M+H]⁺。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),9.31(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),6.19(d,J＝41.0Hz,2H),4.68(d,J＝1.8Hz,1H),2.75(s,2H),2.32(s,3H),1.86(tt,J＝8.7,4.9Hz,1H),1.79(d,J＝4.2Hz,2H),1.37(dd,J＝4.3,1.8Hz,2H),0.90(dt,J＝8.7,3.2Hz,2H),0.69–0.63(m,2H)。

实施例16：合成化合物17和18

N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺和N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-(1-环丙基哌啶-4-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

在微波反应器中在120℃，功率＝50下加热2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(100mg，0.38mmol，1.0当量)、1-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺(117mg，0.76mmol，2.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(198μL，1.14mmol，3.0当量)在乙醇(3mL)中的混合物，保持15h。接着在减压下移除溶剂且通过逆相制备型HPLC来纯化粗残余物，以获得呈固体状的两种产物：17(43.0mg，0.113mmol，29.7％)UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.76min,m/z＝382.5[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),9.43(br,1H),7.83(d,J＝5.6Hz,1H),6.39(br,1H),6.10(br,1H),4.65-4.54(m,1H),3.05(s,3H),2.90(s,3H),2.31-2.21(m,2H),2.02(s,2H),1.76-1.49(m,11H),0.42(dt,J＝6.1,3.0Hz,2H),0.30(p,J＝4.0Hz,2H)。18(21mg，0.062mmol，16％)UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.31min,m/z＝342.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),9.35(s,1H),7.85(d,J＝5.8Hz,1H),6.22(s,2H),4.44(d,J＝13.1Hz,2H),3.08-2.87(m,4H),2.28(s,3H),1.99(s,2H),1.80(d,J＝12.3Hz,2H),1.74-1.50(m,6H),1.12(q,J＝13.1,11.1Hz,2H)。

实施例17：合成化合物19

N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基-N2-(2-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

将多聚甲醛(20mg，0.42mmol，1.5当量)添加至N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(100mg，0.28mmol，1.0当量)在MeOH(6mL)中的溶液中。在50℃下搅拌所得混合物18h。随后通过额外加入NaBH₃CN(53mg，0.85mmol，3.0当量)进行处理。在室温下搅拌所得混合物2h。在减压下移除溶剂且通过逆相HPLC(酸性条件)来纯化粗残余物。将所得材料装载至SCX柱上，用甲醇洗涤，接着使用甲醇中的氨洗脱。在减压下移除溶剂，以获得呈固体状的所需化合物(45mg，0.12mmol，42％)。UPLC-MS(碱性方法，4min)rt 1.55min,m/z＝382.5＝[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H),6.11(s,1H),5.76(s,1H),3.91(d,J＝10.4Hz,3H),3.17(s,3H),2.90(s,1H),2.32(s,2H),2.22-2.14(m,2H),2.10(s,6H),1.92(d,J＝11.3Hz,4H),1.69-1.54(m,6H)。

实施例18：用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的一般步骤

向N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)(150mg，0.27mmol，1.0当量)在THF(6.0mL)中的溶液中添加碳酸钾(149mg，1.08mmol，4.0当量)，且在室温下搅拌所得混合物1h。用烷基/苯甲基卤化物(1.0当量)在THF(2mL)中的溶液处理混合物，随后在70℃下加热20h。将反应混合物用水(20mL)稀释，用1M NaOH(10mL)碱化且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤且在真空下浓缩，以获得粗产物，通过硅胶自动快速柱层析(4g Tellos滤筒)用MeOH在DCM中的溶剂梯度洗脱来纯化该粗产物，以获得所需产物。

实施例19：合成化合物20

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-{2-[(氧杂-4-基)甲基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}嘧啶-2,4-二胺

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根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤来制备化合物20，以获得呈固体状的所需产物(41mg，0.2mmol，36％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.47min,m/z 424.4[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:11.94(s,1H),9.33(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),6.18(s,2H),5.04(p,J＝8.9Hz,1H),3.80(dd,J＝11.1,2.8Hz,1H),3.27-3.19(m,4H),3.06(s,2H),2.96(s,3H),2.25(s,2H),2.23(s,2H),2.21(d,J＝6.7Hz,2H),1.86(tt,J＝8.5,4.9Hz,1H),1.54(d,J＝12.5Hz,2H),1.50-1.40(m,1H),1.10(qd,J＝11.6,4.1Hz,2H),0.95-0.88(m,2H),0.69-0.63(m,2H)。

实施例20：合成化合物21

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-(环丙基甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用(溴甲基)环丙烷来制备化合物21，以获得呈固体状的所需产物(44mg，0.12mmol，43％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.50min,m/z＝380.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.94(s,1H),9.34(s,1H),7.84(d,J＝5.7Hz,1H),6.17(s,2H),5.05(p,J＝8.8Hz,1H),3.22(s,2H),3.07(s,2H),2.96(s,3H),2.24(d,J＝8.8Hz,4H),2.18(d,J＝6.6Hz,2H),1.90-1.80(m,1H),0.96-0.88(m,2H),0.73-0.63(m,3H),0.39-0.31(m,2H),0.06(d,J＝4.1Hz,2H)。

实施例21：合成化合物22

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷来制备化合物22，以获得呈固体状的所需产物(22mg，0.05mmol，19％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.39min,m/z＝428.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ7.84(d,J＝5.9Hz,1H),6.14(s,2H),5.05-4.91(m,1H),3.59-3.46(m,8H),3.36(s,3H),3.03(s,3H),2.67(t,J＝5.6Hz,2H),2.46-2.29(m,4H),1.90(td,J＝8.4,4.4Hz,1H),0.98(d,J＝7.7Hz,2H),0.76-0.68(m,2H)。

实施例22：合成化合物23

2-(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用2-氯-N-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺来制备化合物23，以获得呈固体状的所需产物(35mg，0.07mmol，52％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.46min,m/z＝537.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),10.08(s,1H),9.36(s,1H),8.30-8.28(m,1H),7.92(dt,J＝6.8,2.2Hz,1H),7.84(d,J＝5.7Hz,1H),7.63-7.55(m,2H),6.19(s,2H),5.07(p,J＝8.9Hz,1H),3.44(s,2H),3.30(s,2H),3.24(s,2H),3.19(s,3H),2.97(s,3H),2.31(d,J＝8.9Hz,4H),1.83(td,J＝8.6,4.3Hz,1H),0.89-0.82(m,2H),0.72-0.57(m,2H)。

实施例23：合成化合物24

2-(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)-N-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用2-氯-N-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺来制备化合物24，以获得呈固体状的所需产物(46mg，0.09mmol，48％)。UPLC-MS(碱性方法，2min):rt 1.45min,537.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),10.17(s,1H),9.40(s,1H),7.93-7.79(m,5H),6.20(s,2H),5.08(p,J＝9.0Hz,1H),3.44(s,2H),3.30(s,2H),3.26(s,2H),3.17(s,3H),2.98(s,3H),2.31(d,J＝8.8Hz,4H),1.83(td,J＝8.5,4.3Hz,1H),0.86(d,J＝7.9Hz,2H),0.68-0.60(m,2H)。

实施例24：合成化合物25

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-(2-氟苯甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用1-(溴甲基)-2-氟苯来制备化合物25，以获得呈固体状的所需产物(13mg，0.03mmol，17％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.80min,m/z:434.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.92(s,1H),9.36(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),7.41-7.32(m,1H),7.32-7.25(m,1H),7.19-7.09(m,2H),6.17(s,2H),3.28(s,2H),3.15(s,2H),2.96(s.3H).2.27(s,3H),2.25(s,2H),1.79(tt,J＝8.6,5.0Hz,1H),0.88-0.79(m,1H),0.66-0.58(m,2H)。

实施例25：合成化合物26

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(2-(3,5-二氟苯甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

根据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的一般步骤，使用1-(溴甲基)-3,5-二氟苯来制备化合物26，以获得呈固体状的所需产物(6mg，0.01mmol，7.5％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.87min,m/z:452.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.90(s,1H),9.34(s,1H),7.83(d,J＝5.6Hz,1H),7.07(tt,J＝9.4,2.4Hz,1H),6.98(d,J＝6.5Hz,2H),6.16(s,2H),5.05(p,J＝8.8Hz,1H),3.55(s,2H),3.28(s,2H),3.15(s,2H),2.96(s,3H),2.29(s,2H),2.26(s,2H),1.80(tt,J＝8.6,4.9Hz,1H),0.87-0.80(m,2H),0.62(dt,J＝6.6,3.2Hz,2H)。

实施例26：合成化合物27

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-(3-(三氟甲氧基)苯甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用1-(溴甲基)-3-(三氟甲氧基)苯来制备化合物27，以获得呈固体状的所需产物(32mg，0.06mmol，35％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 2.03min,m/z:500.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.91(s,1H),9.37(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),7.47-7.40(m,1H),7.30(d,J＝7.7Hz,1H),7.24-7.20(m,2H),6.16(s,1H),5.05(p,J＝8.7Hz,1H),3.58(s,2H),3.27(s,2H),3.14(s,2H),2.96(s,3H),2.28(s,2H),2.26(s,2H),1.78(tt,J＝8.7,5.1Hz,1H),0.85-0.76(m,2H),0.65-0.58(m,2H)。

实施例27：合成化合物28

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-(3-(甲基磺酰基)苯甲基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用1-(溴甲基)-3-(甲基磺酰基)苯来制备化合物28，以获得呈固体状的所需产物(15mg，0.03mmol，26％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.52min,m/z494.2[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),9.33(s,1H),7.86-7.77(m,3H),7.64-7.56(m,2H),6.17(s,2H),5.06(p,J＝8.8Hz,1H),3.65(s,2H),3.29(s,2H),3.20(s,3H),3.16(s,2H),2.96(s,3H),2.28(d,J＝8.7Hz,4H),1.78(td,J＝8.5,4.3Hz,1H),0.87-0.78(m,2H),0.66-0.56(m,2H)。

实施例28：合成化合物29

N2-(2-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)丙基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用2-(3-氯丙基)苯并[d]恶唑来制备化合物29，以获得呈固体状的所需产物(4g，0.01mmol，3％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.74min,m/z 485.3[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),9.33(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),7.66(tt,J＝7.6,2.6Hz,2H),7.37-7.29(m,2H),6.18(s,2H),5.03(p,J＝8.7Hz,1H),3.20(s,2H),3.06(s,2H),2.95(s,3H),2.92(d,J＝7.3Hz,2H),2.43(t,J＝6.8Hz,2H),2.26-2.16(m,4H),1.86(td,J＝8.5,4.3Hz,1H),1.78(p,J＝7.2Hz,2H),1.24(s,1H),0.91(d,J＝8.0Hz,2H),0.69-0.61(m,2H)。

实施例29：合成化合物30

2-(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-酮

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-烷基化的实施例18的一般步骤，使用1-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-酮盐酸盐来制备化合物30，以获得呈固体状的所需产物(2.5mg，0.01mmol，4％)。UPLC-MS:(碱性方法，4min)rt＝1.26min,m/z 466.4[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),9.32(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),6.18(s,2H),5.04(p,J＝8.8Hz,1H),3.39(s,4H),3.30(s,2H),3.21(s,2H),3.15(s,2H),2.96(s,3H),2.30-2.18(m,8H),2.16(s,3H),1.85(td,J＝8.6,4.4Hz,1H),0.92(d,J＝8.3Hz,2H),0.65(dt,J＝6.7,3.3Hz,2H)。

实施例30：利用羧酸对N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)进行N-酰化的一般步骤

向N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.46mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)中的经搅拌溶液中添加N,N-二异丙基乙胺，随后添加1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(59mg，0.46mmol，1.0当量)及六氟-λ⁵-磷酸(phosphanuide)1-[双(二甲胺基)亚甲基]-1H-1λ⁵-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-鎓-1-基鎓-3-酸盐(210mg，0.55mmol，1.2当量)。将反应混合物搅拌过夜且接着通过逆相制备型HPLC来纯化，以获得所需产物。

实施例31：利用酰氯对N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)进行N-酰化的一般步骤

向N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)(100mg，0.18mmol，1.0当量)在THF(5.3mL)中的溶液中添加碳酸钾(100mg，0.72mmol，4.0当量)且在室温下搅拌所得混合物1h。接着将混合物冷却至0℃且用酰氯(acid chloride)(1.0当量)在THF(1mL)中的溶液处理。接着移除冰浴且持续搅拌直至反应完成，如通过LCMS分析所确定(1至18h)。使反应混合物分配在水(25mL)与乙酸乙酯(3×25mL)之间，将合并的有机物经Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩至干燥。通过逆相HPLC层析用碱性调节剂纯化粗残余物，以获得所需化合物。

实施例32合成化合物31

(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)(1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲酮

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-酰化的实施例30的一般步骤，使用1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸来制备化合物31，以获得呈固体状的所需产物(57mg，0.13mmol，29％)。UPLC-MS(Basic Method,4min):rt 1.28min,m/z435.3[M+H]⁺.¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),9.37(s,1H),8.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.86(dd,J＝5.7,1.6Hz,1H),6.20(s,2H),5.10(p,J＝8.9Hz,1H),4.68(s,1H),4.51(s,1H),4.17(s,1H),4.07(s,3H),4.02(s,1H),3.00(s,3H),2.42(dd,J＝8.9,3.3Hz,4H),1.89(tt,J＝8.6,4.2Hz,1H),0.92(ddt,J＝10.6,6.3,3.1Hz,2H),0.71–0.63(m,2H)。

实施例33合成化合物32

(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2氮杂螺[3.3]庚-2-基)(四氢-2H-哌喃-4-基)甲酮

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根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-酰化的实施例31的一般步骤，使用四氢-2H-哌喃-4-羰基氯来制备化合物32，以获得呈固体状的所需产物(40mg，0.09mmol，51％)。UPLC-MS(Basic Method,4min)rt 1.32min,m/z 438.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(d,J＝8.7Hz,1H),9.38(s,1H),7.87–7.80(m,1H),6.19(s,2H),5.07(p,J＝8.8Hz,1H),4.30(s,1H),4.14(s,1H),3.96(s,1H),3.85(ddd,J＝10.8,6.8,3.3Hz,2H),3.80(s,1H),3.31(dt,J＝6.4,3.5Hz,2H),2.98(s,3H),2.43(dd,J＝8.8,6.4Hz,1H),2.37(d,J＝8.8Hz,4H),1.87(dd,J＝8.9,4.6Hz,1H),1.51(qd,J＝8.6,8.2,4.0Hz,4H),0.93(d,J＝8.1Hz,2H),0.67(tt,J＝6.5,3.1Hz,2H)。

实施例34合成化合物33

(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)(4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-基)甲酮

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-酰化的实施例31的一般步骤，使用4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-羰基氯来制备化合物33，以获得呈固体状的所需产物(14mg，0.03mmol，17％)。UPLC-MS(Basic Method,4min):rt 1.46min,m/z452.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),9.35(s,1H),7.85(s,1H),6.18(s,2H),5.14–5.01(m,1H),4.34(s,1H),4.20(d,J＝4.9Hz,2H),4.05(s,1H),3.01–2.96(m,3H),2.78(s,3H),2.42(d,J＝8.6Hz,4H),1.88(s,1H),0.93(s,1H),0.84(d,J＝6.9Hz,1H),0.66(d,J＝11.9Hz,2H)。

实施例35合成化合物34

(6-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2氮杂螺[3.3]庚-2-基)(3-(三氟甲基)苯基)甲酮

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-酰化的实施例31的一般步骤，使用3-(三氟甲基)苯甲酰氯来制备化合物34，以获得呈固体状的所需产物(39mg，0.08mmol，44％)。UPLC-MS(Basic Method,4min):rt 1.76min,m/z 498.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.39(s,1H),7.98–7.79(m,4H),7.70(t,J＝7.7Hz,1H),6.17(s,2H),5.08(dt,J＝23.5,8.7Hz,1H),4.47(s,1H),4.32(s,1H),4.22(s,1H),4.06(s,1H),2.98(d,J＝8.2Hz,3H),2.41(d,J＝8.6Hz,4H),1.91–1.70(m,1H),0.94(d,J＝8.2Hz,1H),0.74(s,1H),0.71–0.65(m,1H),0.62–0.56(m,1H)。

实施例36用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-磺酰化的一般步骤

在环境温度下将碳酸钾(100mg，0.72mmol，4.0当量)添加至N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)(100mg，0.18mmol，1.0当量)在THF(5mL)中的溶液中，且搅拌所得混合物1h。接着在0℃下一次性添加磺酰氯(1.0当量)且在环境温度下搅拌所得混合物30min。将反应混合物用水(20mL)稀释，通过1M NaOH(10mL)碱化且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤且在真空下浓缩，以获得粗产物，通过硅胶自动快速柱层析(4g Tellos滤筒)用MeOH/DCM的溶剂梯度洗脱来纯化该粗产物，以获得所需产物。

实施例37合成化合物35

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-{2-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)磺酰基]-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-磺酰化的实施例36的一般步骤，使用1-甲基-1H-吡唑-4-磺酰氯)来制备化合物35，以获得呈固体状的所需产物(53mg，0.11mmol，63％)。UPLC-MS(Basic Method,4min):rt 1.39min,m/z470.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.35(s,1H),8.44(s,1H),7.89(d,J＝0.7Hz,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),6.16(s,2H),4.95(p,J＝8.8Hz,1H),3.93(s,3H),3.79(s,2H),3.64(s,2H),2.92(s,3H),2.28–2.18(m,2H),2.11(td,J＝8.6,2.8Hz,2H),1.86(td,J＝8.5,4.4Hz,1H),0.94(dd,J＝8.4,2.3Hz,2H),0.73–0.61(m,2H)。

实施例38合成化合物36

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-((5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)磺酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

根据依据用于N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)的N-磺酰化的实施例36的一般步骤，使用5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-磺酰氯来制备化合物36，以获得呈固体状的所需产物(54mg，0.11mmol，59％)。UPLC-MS(碱性方法,4min):rt 1.40min,m/z 510.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.95(s,1H),9.36(s,1H),7.82(d,J＝5.7Hz,1H),7.75(s,1H),6.17(s,2H),4.93(t,J＝8.6Hz,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),3.95(s,2H),3.81(s,2H),2.92(s,3H),2.76(t,J＝6.2Hz,2H),2.27–2.17(m,2H),2.11(t,J＝9.9Hz,2H),1.92–1.81(m,5H),0.96–0.89(m,2H),0.68–0.60(m,2H)。

实施例39合成化合物37

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺

在微波反应器中，在130℃下加热2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(200mg，0.849mmol，1.0当量)、1-甲基哌啶-4-胺(3.2mL，26mmol，30当量)的混合物，保持30min。在碱性条件下通过逆相HPLC层析直接纯化反应混合物，以获得呈固体状的所需化合物(43mg，0.14mmol，16％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.18min,m/z 314.0[M+H]⁺。¹H-NMR(400MHz,DMSO)δ11.94(s,1H),9.40(s,1H),7.76(s,1H),6.68-5.75(m,3H),3.62(s,1H),2.75(s,2H),2.16(s,3H),1.88(d,J＝41.2Hz,5H),1.47(d,J＝12.5Hz,2H),0.90(s,2H),0.67(s,2H)。

实施例40合成化合物38

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(1-环丙基哌啶-4-基)-N2-甲基嘧啶-2,4二胺

/>

在125℃下加热2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(250mg，1.06mmol，1.0当量)、1-环丙基-N-甲基哌啶-4-胺(245mg，1.6mmol，1.5当量)、正丁醇(2.7mL)及N,N-二异丙基乙胺(0.37mL，2.12mmol，2.0当量)的混合物4h。将反应混合物用水(20mL)稀释且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得黑色油状物，通过逆相HPLC用碱性调节剂将该黑色油状物纯化，以获得呈固体状的所需化合物(41mg，0.12mmol，11％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.54min,m/z 354.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.95(s,1H),9.35(s,1H),7.83(d,J＝5.7Hz,1H),6.33-5.97(m,2H),4.63-4.50(m,1H),3.04(d,J＝11.1Hz,2H),2.90(s,3H),2.26(t,J＝11.3Hz,2H),1.87(tt,J＝8.7,5.0Hz,1H),1.73-1.49(m,5H),0.98-0.89(m,2H),0.72-0.66(m,2H),0.43(dt,J＝6.1,3.0Hz,2H),0.32-0.27(m,2H)。

实施例41合成化合物39

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(1-(3-(甲基磺酰基)苯甲基)哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺

将碳酸钾(153mg，1.11mmol，4.0当量)添加至N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)(150.0mg，0.277mmol，1.0当量)在无水DMF(3.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物10min。在0℃下将1-(溴甲基)-3-甲烷磺酰基苯(76mg，0.31mmol，1.1当量)添加至反应物中，且在0℃下搅拌所得混合物1h。将反应混合物用水(20mL)稀释，通过饱和水性NaHCO₃溶液(10mL)碱化且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以得到呈残余物形式的粗产物。将此材料溶解于MeOH(5mL)中且装载至SCX滤筒上，用MeOH(20mL)洗涤该材料。接着用MeOH(20mL)中的2M NH₃冲洗SCX滤筒。浓缩该洗脱液，以获得呈油状的化合物，通过逆相HPLC层析用碱性调节剂将其纯化，以获得所需化合物(42.5mg，0.09mmol，32％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.49min,m/z 482.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.92(s,1H),9.36(s,1H),7.87-7.80(m,3H),7.71-7.66(m,1H),7.62(t,J＝7.6Hz,1H),6.29-6.00(m,2H),4.62-4.50(m,1H),3.62(s,2H),3.22(s,3H),2.98-2.90(m,5H),2.11(t,J＝11.5Hz,2H),1.90-1.71(m,3H),1.57(d,J＝11.8Hz,2H),0.98-0.91(m,2H),0.71-0.65(m,2H)。

实施例42合成化合物40

N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-(1-(3,5-二氟苯甲基)哌啶-4-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

将碳酸钾(102mg，0.74mmol，4.0当量)添加至N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)(100mg，0.19mmol，1.0当量)在无水DMF(2.0mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物10min。在0℃下将1-(溴甲基)-3,5-二氟苯(26μL，0.20mmol，1.1当量)添加至反应物中且在0℃下搅拌所得混合物1h。将反应混合物用水(20mL)稀释，通过饱和NaHCO₃溶液(10mL)碱化，接着用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得呈残余物形式的粗产物。将此材料溶解于甲醇中且装载至SCX滤筒上，将其用甲醇(20mL)洗涤且接着用MeOH(20mL)中的2M NH₃洗脱。在减压下将洗脱液浓缩至干燥且通过逆相HPLC纯化用碱性调节剂来纯化残余物，以获得呈固体状的所需化合物(34mg，0.08mmol，42％)。UPLC-MS(碱性方法，4min)：rt 1.95min，m/z 440.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ11.93(s，1H)，9.34(s，1H)，7.83(d，J＝5.7Hz，1H)，7.17-6.99(m，3H)，6.28-6.03(m，2H)，4.62-4.48(m，1H)，3.54(s，2H)，2.97-2.87(m，5H)，2.10(t，J＝11.4Hz，2H)，1.90-1.72(m，3H)，1.56(d，J＝11.7Hz，2H)，0.94(d，J＝8.2Hz，2H)，0.71-0.63(m，2H)。

实施例43：用于制备式I化合物的一般示例性方案

i)DMSO，DIPEA，60℃，20h；ii)三级丁醇，DIPEA，回流，20h；

iii)三氟乙酸、二氯甲烷、rt、18h；iv)THF、K₂CO₃、烷基/苯甲基卤化物；v)THF、K₂CO₃、酰氯；vi)THF、K₂CO₃、磺酰氯

i)DMSO，DIPEA，60℃，20h；ii)正丁醇，DIPEA，回流，28h；

iii)三氟乙酸、二氯甲烷，0℃，30min；iv)DMF、K₂CO₃、苯甲基卤化物；

实施例44：合成化合物41

根据实施例43中所示的一般方案由N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2，4-二胺制备化合物41。

实施例45：合成化合物42

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根据实施例43中所示的一般方案由N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺制备化合物42。

实施例46：合成化合物43

由2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺及N-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)甲胺制备化合物43。产量：80mg。纯度(HPLC)98.4％,MS(m/e 342)。

实施例47：合成化合物44

由2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺及N,1-二甲基哌啶-4-胺制备化合物44。产量：25mg。纯度(LCMS)96.5％,MS(m/e 328)。

实施例48：合成化合物45

根据实施例43中所示的一般方案由N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺制备化合物45。

合成中间物

合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺

依序用5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(0.79mL，7.38mmol，1.10当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.8mL，10.07mmol，1.50当量)处理2,4-二氯嘧啶(1.0g，6.7mmol，1.0当量)在无水DMSO(10.0mL)中的溶液，且在60℃下搅拌所得溶液20h。将反应混合物冷却至环境温度且倒入冰水中，得到悬浮液，将其搅拌5min。过滤混合物，以获得固体，将该固体用水(50mL)洗涤，随后在减压下干燥至恒重，以得到呈固体状的所需化合物(1.29g，5.47mmol，81％)。UPLC-MS(碱性方法,2min):rt 0.87,m/z 236.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.19(s,1H),10.29(s,1H),8.15(s,1H),1.89(tt,J＝8.5,5.1Hz,1H),0.97–0.84(m,2H),0.72–0.64(m,2H)。

合成2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺

依序用5-环戊基-1H-吡唑-3-胺(502mg，3.2mmol，1.10当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.79mL，4.5mmol，1.50当量)处理2,4-二氯嘧啶(450mg，3.0mmol，1.0当量)在无水DMSO(10.0mL)中的溶液，且在60℃下搅拌所得溶液20h。将反应混合物冷却至环境温度且倒入冰水中，得到悬浮液，将其搅拌5min。过滤混合物，以获得固体，将该固体用水(50mL)洗涤，随后在真空下干燥至恒重，以得到呈固体状的所需化合物(675mg，2.56mmol，85％)。UPLC-MS(碱性方法,2min):rt 0.98min,m/z＝263.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.19(s,1H),10.31(s,1H),8.16(s,1H),3.02(q,J＝8.3Hz,1H),2.05–1.94(m,2H),1.74–1.66(m,2H),1.58(ddt,J＝20.3,15.7,7.0Hz,4H)。

合成6-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯

在微波反应器中在120℃，功率＝50下加热2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.5g，6.37mmol，1.0当量)、6-(甲胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯(2.9g，12.73mmol，2.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(3.3mL，19.09mmol，3.0当量)在乙醇(15mL)中的混合物15h(以3个各自为0.5g的批料执行反应)。在减压下移除溶剂且通过Teledyne(二氧化硅)DCM:MeOH 0至15％经15CV纯化粗残余物，以获得呈固体状的所需产物(2.5g，5.88mmol，92％)。UPLC-MS(碱性方法,2min):rt 1.11min,426.4[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.00(s,1H),9.51(s,1H),7.84(d,J＝5.8Hz,1H),6.20(s,1H),5.02(t,J＝8.9Hz,1H),3.97(s,2H),3.80(s,2H),2.97(s,3H),2.34(d,J＝8.8Hz,4H),1.86(dq,J＝8.8,5.2,4.5Hz,1H),1.37(s,9H),0.97–0.89(m,2H),0.72–0.63(m,2H)。

合成N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)嘧啶-2,4-二胺

向6-({4-[(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基]嘧啶-2-基}(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯(385mg，0.85mmol，1.0当量)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL，6.53mmol，7.69当量)。在室温下搅拌所得溶液18h。接着在减压下将反应混合物浓缩至干燥且将残余物装载至SCX柱上，用甲醇洗涤且接着用甲醇中的氨洗脱。在减压下移除溶剂，以获得呈半固体状的所需化合物(300mg，0.85mmol，100％)。UPLC-MS碱性方法,2min):rt 0.88min,m/z 354.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),9.40(s,1H),7.84(d,J＝5.7Hz,1H),6.24(d,J＝53.2Hz,2H),5.12–4.99(m,1H),3.54(s,2H),3.42(s,2H),3.00(d,J＝8.0Hz,1H),2.96(s,3H),2.34–2.19(m,4H),2.06–1.94(m,2H),1.75–1.67(m,2H),1.66–1.51(m,4H)。

合成6-({4-[(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基]嘧啶-2-基}(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯

在回流下加热2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(400mg，1.7mmol，1.0当量)、6-(甲胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯(768mg，3.4mmol，2.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.89mL，5.1mmol，3.0当量)在三级丁醇(15mL)中的混合物20h。使反应物冷却至环境温度且在真空下蒸发至干燥，以得到粗产物。通过二氧化硅自动化柱层析，用DCM中的MeOH(0至15％)梯度洗脱来纯化，获得呈半固体状的所需产物(530mg，1.17mmol，73％)。UPLC-MS(碱性方法，2min):rt 1.11min,m/z 426.4[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.00(s,1H),9.51(s,1H),7.84(d,J＝5.8Hz,1H),6.20(s,1H),5.02(t,J＝8.9Hz,1H),3.97(s,2H),3.80(s,2H),2.97(s,3H),2.34(d,J＝8.8Hz,4H),1.86(dq,J＝8.8,5.2,4.5Hz,1H),1.37(s,9H),0.97–0.89(m,2H),0.72–0.63(m,2H)。

合成N2-{2-氮杂螺[3.3]庚-6-基}-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)

在环境温度下将三氟乙酸(1.7mL，22mmol，7.7当量)添加至6-({4-[(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基]嘧啶-2-基}(甲基)胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸三级丁酯(1.07g，2.5mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的溶液，且搅拌所得溶液18h。在真空下移除溶剂，以获得呈固体状的粗产物，用二乙醚(20mL)磨碎该粗产物，以获得呈固体状的所需产物(1.4g，2.5mmol，90％)。UPLC-MS(碱性方法，2min):rt 0.74min,326.4[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(s,1H)11.05(s,1H),8.68(s,2H),7.85(s,1H),6.34(s,2H),4.75(s,1H),4.07(t,J＝6.2Hz,2H),3.95(t,J＝6.1Hz,2H),3.06(s,3H),2.55–2.45(m,4H),1.93(tt,J＝8.7,4.8Hz,1H),1.02–0.92(m,2H),0.75–0.67(m,2H)。

合成1-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-2,2-二甲基丙-1-酮

向2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.16g，9.19mmol，1当量)及4-(甲胺基)哌啶-1-甲酸三级丁酯(2.95g，13.8mmol，1.5当量)于正丁醇(25mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(3.2mL，18.4mmol，2.0当量)。将反应混合物加热至回流且搅拌28h。将反应混合物用H₂O(100mL)稀释且用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，接着真空浓缩，以获得非晶形固体，通过逆相快速柱层析(C18 400g滤筒)使用5:95MeCN:H₂O至95:5MeCN:H₂O梯度经15个柱体积将其纯化，以获得呈固体状的所需化合物(770mg，1.94mmol，20％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt 1.80min,m/z 414.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.93(s,1H),9.34(s,1H),7.85(d,J＝5.7Hz,1H),6.18(s,2H),4.72(p,J＝7.4Hz,1H),4.09(d,J＝12.8Hz,2H),2.91(s,3H),2.78(s,3H),1.86(tt,J＝8.4,5.0Hz,1H),1.62-1.54(m,4H),1.41(s,9H),0.95-0.87(m,2H),0.67-0.62(m,2H)。

合成N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基-N2-(哌啶-4-基)嘧啶-2,4-二胺；双(三氟乙酸)

在0℃下历时2min向三级丁基1-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)哌啶-1-基)-2,2-二甲基丙-1-酮(755mg，1.83mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(10mL)。将反应物保持在0℃下且搅拌30min。在减压下浓缩反应混合物且将所得胶状物悬浮于二乙醚Et₂O(15mL)中且声波处理直至其变成能自由流动的沉淀物，接着通过过滤将其分离，以获得呈固体状的所需化合物(960mg，1.77mmol，97％)。UPLC-MS(碱性方法，4min):rt:1.10min,m/z 314.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,90℃)δ10.26(s,1H),7.87(d,J＝6.8Hz,1H),6.50(d,J＝6.7Hz,1H),6.14(s,1H),4.64(tt,J＝11.8,4.1Hz,1H),3.54-3.45(m,2H),3.03(s,3H),2.97(td,J＝12.8,3.1Hz,2H),2.04(qd,J＝13.1,4.3Hz,2H),1.97-1.88(m,3H),0.99-0.92(m,2H),0.74-0.69(m,2H)。

实施例101：合成化合物101

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

在0℃下向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)、2,3-二氢-1H-茚-2-羧酸(74.3mg，0.458mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加DIPEA(0.239mL，1.376mmol)，随后添加HATU(348.6mg，0.917mmol)。在室温下搅拌反应物16h。反应完成后(通过LCMS监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩以产生残余物。通过逆相制备型HPLC，使用Sunfire C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化残余物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(50mg，23.14％)。LC纯度：98.87％；m/z:472.2[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₃N₇O，计算的分子量：471.61)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.73(d,J＝6.7Hz,1H),7.20-7.17(m,2H),7.15-7.12(m,2H),6.38-6.36(m,2H),3.75-3.69(m,1H),3.27-3.12(m,5H),3.09(s,3H),2.17-2.14(m,2H),1.96-1.87(m,5H),1.53-1.47(m,3H),1.07-1.05(m,2H),0.93-0.87(m,2H)。

实施例102：合成化合物102

步骤-1：合成2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯

在室温下向THF(20mL)中的2-(4-氧代基环己基)乙酸甲酯(1g，5.882mmol)添加甲胺(5.8mL，11.764mmol，在THF中的2M溶液)、乙酸(0.35mL，5.882mmol)和NaBH(OAc)₃(1.24g，5.882mmol)，且在室温下搅拌反应混合物3h。通过LCMS监测反应进程。起始材料完成后，将反应物用饱和碳酸氢钠淬灭且用DCM萃取，用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯(700mg，粗)。LC纯度：99％；m/z:186.14[M+H]⁺(分子式：C₁₀H₁₉NO₂，计算的分子量：185.27)。

步骤-2：合成2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯

向20mL微波小瓶中的2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯(500mg，2.702mmol)在n-BuOH(5mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.68mL，4.053mmol)、2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(355.4mg，1.351mmol)及碘化铜(50mg)。在微波反应器中，在160℃下加热反应混合物3h。反应完成后(通过LCMS监测)，浓缩反应混合物，以获得粗化合物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱纯化粗产物，以获得2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(250mg，22％)。LC纯度：93.1％；m/z:413.26[M+H]⁺(分子式：C₂₂H₃₂N₆O₂，计算分子量：412.54)。

步骤-3：合成甲基2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸

向2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(250mg，0.606mmol)在水、THF及甲醇(1:1:1，3mL)中的经搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(127.42mg，3.033mmol)。将反应加热至80℃，保持16h。反应完成后(通过LCMS监测)，浓缩反应混合物，以获得2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，粗物质)。LC纯度：90.0％；m/z:399.25[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₃₀N₆O₂，计算的分子量：398.51)。

步骤-4：合成N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向甲基2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，0.52mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.21mL，1.56mmol)及2-胺基-2,3-二氢-1H-茚-5-甲腈(97.48mg，0.52mmol)、T₃P(0.23mL，0.78mmol，EtOAc中的50％溶液)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗化合物。通过逆相制备型HPLC，使用Sunfire C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TF来纯化粗化合物，以产生N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(50mg，18％)。LC纯度：99.2％；m/z:539.32[M+H]⁺(分子式：C₃₁H₃₈N₈O，计算分子量：538.70)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.72(d,J＝7.2Hz,1H),7.61-7.54(m,2H),7.0-6.49(m,1H),6.51-5.34(m,2H),4.68-4.64(m,1H),3.39-3.32(m,1H),3.15-3.08(m,4H),2.97-2.90(m,2H),2.36(d,J＝7.2Hz,1H),2.32-2.11(m,4H),1.84-1.59(m,15H),1.42-1.30(m,1H)。

实施例103：合成化合物103

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

向2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(172mg，0.845mmol)在无水DMF(6mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.23mL，1.69mmol)，随后添加EDC.HCl(214mg，1.12mmol)及HOBt(114mg，0.845mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.563mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗化合物。通过逆相制备型HPLC，使用Sunfire C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗产物，以产生呈固体状的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(25mg，8.2％产率)。LC纯度：99.75％；m/z:542.1[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₄F₃N₇O，计算的分子量：541.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.85(d,J＝6.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.59-7.50(m,3H),6.28(s,1H),6.18(d,J＝5.2Hz,1H),4.62-4.57(m,1H),3.69-3.63(m,1H),3.59(s,2H),3.15-3.06(m,1H),3.01(s,3H),2.11-2.04(m,4H),1.80-1.65(m,10H),1.52-1.42(m,2H)。

实施例104：合成化合物104

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)及2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(140mg，0.687mmol)在无水DMF(6mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.19mL，1.374mmol)，随后添加EDC.HCl(176mg，0.916mmol)及HOBt(62mg，0.458mmol)。搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC，使用X-SELECT C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗化合物，以获得N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(40mg，17％)。LC纯度：99.78％；m/z:514.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₀F₃N₇O，计算分子量：513.57)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.72(d,J＝6.52Hz,1H),7.64(s,1H),7.59-7.51(m,3H),6.38-6.36(m,2H),4.71 -4.66(m,1H),3.68-3.65(m,1H),3.60(s,2H),3.07(s,3H),2.11-2.05(m,2H),1.97-1.85(m,5H),1.48-1.46(m,2H),1.01-0.97(m,2H),0.77-0.75(m,2H)。

实施例105：合成化合物105

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

向2,3-二氢-1H-茚-2-羧酸(48mg，0.295mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.14mL，0.845mmol)及HATU(240mg，0.633mmol)。在环境温度下搅拌反应物30min。接着，添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.422mmol)，且在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。分离的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗物质。通过逆相制备型HPLC，使用Sunfire C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗化合物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(68mg，32％)。LC纯度：99.87％；m/z:500.2[M+H]⁺(分子式：C₂₉H₃₇N₇O，计算分子量：499.66)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.74(s,1H),7.19-7.17(m,2H),7.13-7.11(m,2H),6.50(s,1H),6.36(d,J＝6.8Hz,1H),3.70-3.65(m,1H),3.25-3.10(m,10H),2.16(s,4H),1.89-1.83(m,6H),1.73-1.68(m,4H),1.49-1.45(m,2H)。

实施例106：合成化合物106

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺

向2-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酸(39.66mg，0.225mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.11mL，0.845mmol)，随后添加EDC.HCl(80.7mg，0.422mmol)及HOBt(19mg，0.140mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(100mg，0.281mmol)。在室温下搅拌反应混合物4h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC，使用X BRIDGE C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗物质，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺(60mg，42.85％)。LC纯度：99.64％；m/z:514.3[M+H]⁺(分子式：C₃₀H₃₉N₇O，计算分子量：513.69)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.73(d,J＝6.8Hz,1H),7.19-7.16(m,2H),7.13-7.01(m,2H),6.49(s,1H),5.96(s,1H),3.69(m,1H),3.13-3.06(m,3H),3.05(s,3H),2.89-2.82(m,1H),2.68-2.63(m,2H),2.36(d,J＝7.6Hz,2H),2.15(m,4H),1.86 -1.82(m,6H),1.77-1.70(m,5H),1.44-1.30(m,2H)。

实施例107：合成化合物107

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

向N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N⁴-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加TEA(0.2mL，1.833mmol)、EDC.HCl(175mg，0.916mmol)、HOBt(41.2mg，0.305mmol)及3-(三氟甲基)苯甲酸(92.9mg，0.488mmol)。在室温下搅拌反应混合物5h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，添加水且用DCM萃取混合物。分离有机层，经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗化合物。通过逆相制备型HPLC使用X-bridge C8柱及移动相水/乙腈中的0.1％氨来纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(60mg，19％产率)。LC纯度：99.83％；m/z:500.23[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₄N₈O，计算的分子量：499.54)。

实施例108：合成化合物108

步骤-1：合成2-(5-甲基吡嗪吡嗪-2-基)丙二酸二甲酯

向2-溴-5-甲基吡嗪吡嗪(1.1g，6.358mmol)在1,4-二恶烷(35mL)中的溶液中添加丙二酸二甲酯(2.18mL，19.07mmol)、吡啶-2-甲酸(156mg，1.271mmol)、碘化铜(I)(483mg，2.543mmol)及碳酸铯(6.19g，19.075mmol)。在95℃下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至RT，用乙酸乙酯稀释，用饱和水性氯化钠溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在减压下浓缩，以得到粗产物。通过Biotage Isolera使用230-400目二氧化硅，用石油醚中0至80％乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱来纯化所获得粗产物，以产生呈固体状的2-(5-甲基吡嗪-2-基)丙二酸二甲酯(1.1g，77.46％)。LC纯度：93.28％；m/z:225.1[M+H]⁺(分子式：C₁₀H₁₂N₂O₄，计算的分子量：224.2)。

步骤-2：合成2-(5-甲基吡嗪-2-基)乙酸

向2-(5-甲基吡嗪-2-基)丙二酸二甲酯(1.1g，4.910mmol)在THF(35mL)中的经搅拌溶液中添加2M水性氢氧化钠溶液(9.82mL，19.642mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二乙醚稀释。接着经由添加6M水性盐酸将水性层调节至pH 3，同时将反应混合物的温度维持在25℃。接着用二氯甲烷萃取反应混合物。有机层用盐水洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生呈固体状的2-(5-甲基吡嗪-2-基)乙酸(290mg，39.18％)。LC纯度：96.6％；m/z:153.1[M+H]⁺(分子式：C₇H₈N₂O₂，计算的分子量：152.15)。

步骤-3：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(5-甲基吡嗪-2-基)乙酰胺

向2-(5-甲基吡嗪-2-基)乙酸(260mg，1.712mmol)在无水DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.9mL，6.422mmol)，随后添加EDC.HCl(613mg，3.211mmol)及HOBt(144mg，1.070mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(700mg，2.140mmol)。接着在室温下搅拌反应混合物4h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC使用X-bridge C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％氨来纯化粗化合物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(5-甲基吡嗪-2-基)乙酰胺(90mg，10.88％)。LC纯度：98.75％；m/z:462.1[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₁N₉O，计算分子量：461.57)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.48(s,2H),7.87(d,J＝5.6Hz,1H),6.23-6.16(m,2H),4.61-4.57(m,1H),3.74(s,2H),3.73-3.67(m,1H),3.0(s,3H),2.55(s,3H),2.08-2.06(m,2H),1.95-1.90(m,1H),1.79-1.73(m,4H),1.51-1.47(m,2H),1.0-0.97(m,2H),0.75-0.73(m,2H)。

实施例109：合成化合物109和110

步骤-1：合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺

向2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.0g，8.44mmol)在无水DMF(20mL)中的冷却(0℃)溶液中添加碳酸钾(4.65g，33.76mmol)。在RT下搅拌反应混合物10min。将反应混合物冷却至0℃，随后逐滴添加碘甲烷(0.63mL，10.13mmol)。接着在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程，耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取化合物。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩。通过BiotageIsolera使用硅胶(230-400目)及DCM中0至5％MeOH的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(850mg，40％)。LC纯度：98％；m/z:250.1[M+H]⁺(分子式：C₁₁H₁₂ClN₅，计算的分子量：249.70)。

步骤-2：合成((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(500mg，2.002mmol)在正丁醇(5.0mL)中的溶液中添加DIPEA(0.7mL，4.004mmol)及((1R,4R)-4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(690mg，3.003mmol)。在微波中在160℃下加热反应混合物2h。通过TLC分析监测反应进程。反应完成后，浓缩反应混合物且通过BiotageIsolera，使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化，以获得((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(410mg，46％)。LC纯度：97％；m/z:442.3[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₃₅N₇O₂，计算的分子量：441.58)。

步骤-3：合成N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺

将((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(0.4g)在DCM(4.0mL)中的经充分搅拌溶液冷却至0℃且逐滴添加1,4二恶烷(2.0mL)中的4M盐酸。在完成添加后，在环境温度下搅拌反应混合物3h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物且由此获得的残余物用石油醚洗涤，接着充分干燥，以获得呈HCl盐形式的N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(0.4g，定量)。LC纯度：94％；m/z:342.0[M+H]⁺(分子式：C₁₈H₂₇N₇，计算的分子量：341.46)。

步骤-4：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-1-甲酰胺

向2,3-二氢-1H-茚-1-甲酸(95mg，0.587mmol)在无水DMF(4mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.4mL，2.93mmol)，随后添加EDC.HCl(168mg，0.88mmol)及HOBt(63mg，0.469mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.587mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用冰冷水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以得到粗化合物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗产物，以获得呈固体状的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-1-甲酰胺(55mg，20％)。LC纯度：98.5％；m/z:486.2[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₅F₃N₇O，计算分子量：485.64)。¹H VTNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ12.04(s,1H),8.07(d,J＝8Hz,1H),7.84(d,J＝6Hz,1H),7.23-7.13(m,4H),6.08(s,1H),5.98(s,1H),4.56-4.52(m,1H),3.86-3.83(m,1H),3.36-3.34(m,1H),3.32(s,3H),3.07-3.02(m,1H),3.01(s,3H),2.96-2.94(m,1H),2.25-2.15(m,2H),1.93-1.89(m,3H),1.68-1.62(m,4H),1.41-1.37(m,2H),0.95-0.91(m,2H),0.73-0.70(m,2H)。

步骤-4a：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

向2,3-二氢-1H-茚-2-甲酸(95mg，0.587mmol)在无水DMF(4mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.4mL，2.93mmol)，随后添加EDC.HCl(168mg，0.88mmol)及HOBt(63mg，0.469mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.587mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用冰冷水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗化合物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗产物，以获得呈固体状的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(25mg，9％)。LC纯度：98.2％；m/z:486.0[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₅F₃N₇O，计算分子量：485.64)。¹H VTNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ12.07(s,1H),7.84(d,J＝6Hz,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,1H),7.19-7.10(m,4H),6.08(d,J＝5.6Hz,1H),5.92(s,1H),4.54-4.50(m,1H),3.59-3.54(m,1H),3.35(s,3H),3.16-3.10(m,2H),3.05-3.03(m,3H),2.94(s,3H),1.93-1.87(m,3H),1.64-1.63(m,4H),1.36-1.32(m,2H),0.95-0.91(m,2H),0.73-0.69(m,2H)。

实施例110：合成化合物111

步骤-1：合成2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺

将2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2.0g，8.511mmol)在无水DMF(20.0mL)中的溶液冷却至0℃且逐份添加NaH(60％纯)(0.2g，8.511mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(1.16mL，8.511mmol)。移除冰浴且在室温下搅拌反应混合物1h。通过添加冷水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且在真空下浓缩，以得到残余物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中20至30％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺(0.45g，15％)。LC纯度：74％；m/z:356.1[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₁₈ClN₅O，计算分子量：355.83)。

步骤-2：合成2-氯-N-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺

将2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺(450mg，1.26mmol)在无水DMF(9.0mL)中的溶液冷却至0℃且添加NaH(60％纯)(46mg，1.89mmol)。搅拌反应混合物15分钟且接着添加碘甲烷(0.08mL，1.26mmol)。移除冰浴且在室温下搅拌反应混合物1h。通过添加冷水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且在真空下浓缩，以得到残余物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中20至30％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗产物，以获得2-氯-N-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺(270mg，58％)。LC纯度：95％；m/z:370.3[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₀ClN₅O，计算的分子量：369.85)。

步骤-3：合成((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)(4-甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N-(4-甲氧基苯甲基)嘧啶-4-胺(250mg，0.68mmol)在正丁醇(5.0mL)中的溶液中添加DIPEA(0.24mL，1.36mmol)及((1R,4R)-4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(310mg，1.36mmol)。在微波中在160℃下加热反应混合物2h。通过TLC分析监测反应进程。在反应完成后，浓缩反应混合物，以得到残余物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中20至30％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化残余物，以获得呈胶质固体状的((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)(4-甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(250mg，66％)。LC纯度：87％；m/z:562.3[M+H]⁺(分子式：C₃₁H₄₃N₇O₃，计算的分子量：561.73)。

步骤-4：合成N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺

在80℃下加热((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)(4-甲氧基苯甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(250mg，0.445mmol)在三氟乙酸(5.0mL)中的溶液且搅拌6h。通过TLC分析监测反应进程。在反应完成后，在减压下浓缩反应混合物，以得到残余物。用石油醚洗涤由此获得的残余物且充分干燥，以获得呈TFA盐形式的N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(300mg，定量产率)。LC纯度：71％；m/z:342.2[M+1]⁺(分子式：C₁₈H₂₇N₇，计算分子量：341.46)。

步骤-5：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

向2,3-二氢-1H-茚-2-甲酸(71mg，0.440mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.51mL，3.666mmol)，随后添加EDC.HCl(210mg，1.10mmol)及HOBt(59mg，0.440mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(250mg，0.733mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用冰冷水、盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以得到粗化合物。通过逆相制备型HPLC，使用X-SELECT C18柱及移动相水/乙腈中的0.1％TFA/来纯化粗化合物，以获得N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(45mg，12％)。LC纯度：97％；m/z:486.0[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₉N₇O，计算的分子量：485.64)。

实施例111：合成化合物112

步骤-1：N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-1-甲酰胺

向N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N⁴-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加TEA(0.2mL，1.833mmol)、EDC.HCl(175mg，0.916mmol)、HOBt(41.2mg，0.305mmol)及2,3-二氢-1H-茚-1-甲酸(79.18mg，0.488mmol)。在室温下搅拌反应混合物5h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，添加水且用DCM萃取。分离的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩。通过逆相制备型HPLC(及移动相水/乙腈中的0.1％TFA/)来纯化粗化合物，以得到N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(60mg，20.3％)。LC纯度：99.60％；m/z:472.28[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₃N₇O，计算的分子量：471.67)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.72(d,J＝7.2Hz,1H),7.25-7.14(m,4H),6.38-6.23(m,2H),4.67-4.58(m,1H),3.97-3.93(m,1H),3.89-3.73(m,1H),3.14-3.11(m,1H),3.08(s,3H),2.95-2.91(m,1H),2.37-2.30(m,2H),2.17-2.09(m,2H),1.88-1.83(m,5H),1.55-1.50(m,2H),1.06-1.00(m,2H),0.79-0.76(m,2H)。

实施例112：合成化合物113F1和113F2

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(三氟甲基)环己烷-1-甲酰胺

在0℃下向(1R,3R)-3-(三氟甲基)环己烷-1-甲酸(119mg，0.611mmol)在DMF(6mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA(0.65mL，3.66mmol)，随后添加HATU(697mg，1.83mmol)。搅拌反应混合物5min且添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(400mg，1.22mmol)。使反应混合物升温至室温且搅拌1h。通过TLC监测反应。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗化合物，接着通过逆相制备型HPLC来纯化该粗化合物，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(三氟甲基)环己烷-1-甲酰胺的两种非对映异构体(113F1＝30mg，113F2＝30mg，10％)。113F1：LC纯度：94.05％；m/z:505.9[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₄F₃N₇O，计算的分子量：505.59)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.87(s,1H),6.32-6.15(m,2H),4.66-4.57(m,1H),3.62-3.56(m,1H),3.00(s,3H),2.26-2.23(m,2H),2.05-1.96(m,6H),1.94-1.81(m,5H),1.65-1.57(m,5H),1.38-1.35(m,1H),1.00-0.98(m,2H),0.75-0.72(m,2H)。113F2：LC纯度：95.75％；m/z:505.9[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₄F₃N₇O，计算的分子量：505.59)。

实施例113：合成化合物114

步骤-1：合成2-(3-氰基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N⁴-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加TEA(0.02mL，0.183mmol)、EDC.HCl(175mg，0.916mmol)、HOBt(41.2mg，0.305mmol)及2-(3-氰基苯基)乙酸(78.7mg，0.488mmol)。在室温下搅拌反应混合物5h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，添加水且用DCM萃取。将经分离的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的2-(3-氰基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(90mg，32％)。LC纯度：99.76％；m/z:471.26[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₀N₈O，计算分子量：470.58)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.86(s,1H),7.68-7.62(m,3H),7.52(t,J＝7.6Hz,1H),6.23-6.14(m,2H),4.56-4.50(m,1H),3.66-3.61(m,1H),3.57(s,2H),2.99(s,3H),2.06-2.03(m,2H),1.94-1.89(m,1H),1.78-1.72(m,4H),1.49-1.43(m,2H),1.03-0.98(m,2H),0.75-0.73(m,2H)。

实施例114：合成化合物115

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.610mmol)及2-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酸(131mg，0.610mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.17mL，1.22mmol)，随后添加EDC.HCl(176mg，0.916mmol)及HOBt(41mg，0.305mmol)。搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗化合物，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺(60mg，18.8％)。LC纯度：99.65％；m/z:524.3[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₃N₇O₃S，计算分子量：523.66)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.92(s,1H),9.32(s,1H),8.10(d,J＝7.6Hz,1H),7.85-7.78(m,3H),7.59(t,J＝7.6Hz,2H),6.32-6.12(m,2H),4.52-4.42(m,1H),3.54(s,3H),3.20(s,3H),2.91(s,3H),1.92-1.84(m,3H),1.65-1.61(m,4H),1.34-1.23(m,2H),0.92-0.90(m,2H),0.67-0.63(m,2H)。

实施例115：合成化合物116

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-4-甲基四氢-2H-哌喃-4-甲酰胺

向4-甲基四氢-2H-哌喃-4-甲酸(106mg，0.733mmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加TEA(0.41mL，3.0543mmol)、HOBt(82mg，0.6108mmol)及EDC.HCl(210mg，1.099mmol)，在室温下搅拌反应物30min。接着，添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.6108mmol)。在室温下搅拌反应物8h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，添加水且用DCM萃取混合物。将分离有机层且经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗物质，通过逆相制备型HPLC来纯化粗化合物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-4-甲基四氢-2H-哌喃-4-甲酰胺(40mg，14.8％)。LC纯度：97.52％；m/z:454.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₅N₇O₂，计算的分子量：453.6)。

实施例116：合成化合物117

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺

向咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸(0.099g，0.61mmol)在无水DMF(6mL)中的溶液中添加DIPEA(0.31mL，1.83mmol)，随后添加HATU(0.464g，1.22mmol)。搅拌反应混合物15min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(0.200mg，0.61mmol)。在室温下搅拌反应混合物12h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(30mg，10.4％)。LC纯度：99.26％；m/z:472.9[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₉N₉O，计算分子量：471.57)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.50-8.48(m,1H),8.31(s,1H),8.37(d,J＝6Hz,1H),7.61-7.58(m,1H),7.42-7.38(m,1H),7.01-6.97(m,1H),6.29-6.17(m,2H),4.66-4.62(m,1H),3.98-3.92(m,1H),3.04(s,3H),2.24-2.12(m,2H),1.97-1.91(m,1H),1.87-1.85(m,4H),1.78-1.69(m,2H),1.03-0.99(m,2H),0.77-0.75(m,2H)。

实施例117：合成化合物118

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-甲酰胺

向1-甲基-1H-吲唑-5-甲酸(77.5mg，0.440mmol在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.23mL，1.651mmol)，随后添加EDC.HCl(157mg，0.825mmol)及HOBt(37.15mg，0.275mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(180mg，0.550mmol)。在室温下搅拌反应混合物4h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以得到粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化所获得粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-甲酰胺(40mg，15.38％)。LC纯度：99.75％；m/z:486.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₁N₉O，计算分子量：485.60)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.30(s,1H),8.11(s,1H),7.93-7.89(m,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,1H),6.18-6.12(m,2H),4.57-4.50(m,1H),4.10(s,3H),3.99-3.92(m,1H),3.04(s,3H),2.20-2.17(m,2H),2.03-1.99(m,1H),1.96-1.78(m,4H),1.70-1.63(m,2H),1.00-0.95(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例118：合成化合物119

步骤-1：合成(1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯

在0℃下向(1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(2g，7.7mmol)在DMF(20mL)中的经搅拌溶液中逐份添加氢化钠(0.778g，15.5mmol，矿物油中60％)。在0℃下搅拌反应混合物30min。接着在0℃下逐滴添加碘甲烷(1.2mL，15.5mmol)。使反应混合物升温至室温且搅拌16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用冰淬灭且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得(1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.1g，定量产率)。LC纯度：99.67％；m/z:272[M+H]⁺(分子式：C₁₄H₂₅NO₄，计算的分子量：271.36)。

步骤-2：合成(1R,4R)-4-(甲胺基)环己烷-1-甲酸甲酯

在0℃下向(1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(2.1g，7.74mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加20mL三氟乙酸。在室温下搅拌反应混合物1h。完全耗尽起始材料后(通过TLC监测)，在减压下浓缩反应混合物，以得到呈TFA盐形式的(1R,4R)-4-(甲胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(3.58g，定量产率)。此物质不经进一步纯化即用于下一步骤中。LC纯度：89.21％；m/z:172.2[M+H]⁺(分子式：C₉H₁₇NO₂，计算的分子量：171.24)。

步骤-3：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯

向100mL密封管中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(2g，8.5mmol)在正丁醇(20mL)中的溶液中添加(1R,4R)-4-(甲胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(3.63g，21.27mmol)及DIPEA(4.45mL，25.5mmol)。在110℃下加热反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至环境温度且浓缩，以移除溶剂。通过BiotageIsolera使用中性氧化铝及DCM中0至10％甲醇的梯度洗脱来纯化由此获得的粗产物，以获得(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(1g，32.25％)。LC纯度：83.27％；m/z:371[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₆N₆O₂，计算的分子量：370.46)。

步骤-4：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸

向(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸甲酯(1g，2.699mmol)在溶剂甲醇:THF:水的混合物(8:8:8mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H₂O(453mg，10.797mmol)。将反应混合物加热至80℃，保持16h。通过TLC监测反应完成。浓缩反应混合物，以得到粗化合物。将粗化合物用1N HCl溶液中和且接着用甲醇在二氯甲烷中的10％溶液萃取，以得到(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸(800mg，83％)。LC纯度：79.85％；m/z:357.0[M+H]⁺(分子式：C₁₈H₂₄N₆O₂，计算的分子量：356.43)。

步骤-5：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)环己烷-1-甲酰胺

在0℃下向(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸(200mg，0.561mmol)在无水DCM(3mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.23mL，1.683mmol)，随后添加T₃P(0.45mL，1.402mmol，乙酸乙酯中的50％溶液)及2,3-二氢-1H-茚-2-胺(75mg，0.561mmol)。在室温下搅拌反应物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗化合物，以提供呈TFA盐形式的(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)环己烷-1-甲酰胺(30mg，11.3％)。LC纯度：95.67％；m/z:472.2[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₃N₇O，计算分子量：471.61)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.72(d,J＝6.8Hz,1H),7.24-7.20(m,2H),7.17-7.14(m,2H),6.37-6.33(m,2H),4.61-4.57(m,1H),3.32-3.24(m,2H),3.06(s,3H),2.84(d,J＝16,15.6Hz,2H),2.23-2.13(m,2H),1.98-1.87(m,5H),1.75-1.66(m,4H),1.07-0.92(m,2H),0.78-0.62(m,2H).

实施例119：合成化合物120

步骤-1：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-((2,3-二氢-1H-茚-2-基)甲基)环己烷-1-甲酰胺

向(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸(200mg，0.561mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.24mL，1.404mmol)，随后添加HATU(320mg，0.842mmol)。在RT下搅拌反应混合物15min，且接着添加(2,3-二氢-1H-茚-2-基)甲胺(0.08mL，0.561mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以得到残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈TFA盐形式的(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-((2,3-二氢-1H-茚-2-基)甲基)环己烷-1-甲酰胺(50mg，18.38％)。LC纯度：99.70％；m/z:486.3[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₅N₇O，计算分子量：485.64)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.73(d,J＝7.2Hz,1H),7.19-7.16(m,2H),7.12-7.09(m,2H),6.37(s,1H),6.34(d,J＝7.2Hz,1H),3.27(d,J＝6.4Hz,2H),3.07(s,3H),3.06-3.02(m,2H),2.72-2.67(m,3H),2.30-2.26(m,1H),1.33-1.30(m,1H),1.99-1.88(m,5H),1.86-1.73(m,4H),1.06-1.01(m,2H),0.78-0.76(m,2H)。

实施例120：合成化合物121

步骤1：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯

向20mL微波小瓶中的2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯(530mg，2.864mmol)在正丁醇(6mL)中的溶液中添加DIPEA(0.74mL，4.296mmol)、2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(336.6mg，1.432mmol)及碘化铜(53mg)。在MW反应器中在160℃下加热反应物2h。反应完成后(通过TLC监测)，浓缩反应混合物，以获得粗化合物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗化合物，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(240mg，21％)。LC纯度：95.5％；m/z:385.23[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₂₈N₆O₂，计算分子量：384.28)。

步骤-2：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(240mg，0.625mmol)在水、THF及甲醇(1:1:1，3mL)中的经搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(131.2mg，3.125mmol)。在70℃下加热反应物1.5h。反应完成后(通过TLC监测)，浓缩反应混合物，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，粗物质)。LC纯度：89.4％；m/z:371.22[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₆N₆O₂，计算分子量：370.46)。

步骤-3：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，0.54mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加TEA(0.22mL，1.621mmol)、T₃P(0.24ml，0.81mmol，乙酸乙酯中50％溶液)且在室温下搅拌反应物15分钟。接着添加2,3-二氢-1H-茚-2-胺(71.82mg，0.54mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。所得有机层用盐水溶液洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗物质。通过逆相制备型HPLC纯化粗化合物，以得到呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺(50mg，19％)。LC纯度：98.78％；m/z:486.29[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₅N₇O，计算分子量：485.64)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.85(s,1H),7.22-7.13(m,4H),6.27-6.13(s,2H),3.33-3.24(m,3H),3.00(s,3H),2.98-2.83(m,2H),2.37-2.12(m,3H),1.91-1.76(m,8H),1.52-1.47(m,1H),1.39-1.33(m,1H),0.99-0.96(m,2H),0.75-0.71(m,2H)。

实施例121：合成化合物122

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺

向2-甲基-2H-四唑-5-甲酸(78.2mg，0.611mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.31mL，1.834mmol)，随后添加HATU(464mg，1.223mmol)且搅拌反应混合物15min，接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺(70mg，26.92％)。LC纯度：99.92％；m/z:438.3[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₂₇N₁₁O，计算的分子量：437.51)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.87(s,1H),6.33-6.16(m,2H),4.64-4.60(m,1H),4.45(s,3H),4.01-3.95(m,1H),3.11(s,3H),2.23-2.00(m,2H),1.99-1.89(m,5H),1.72-1.64(m,2H),1.02-0.99(m,2H),0.76-0.72(m,2H)。

实施例122：合成化合物123

步骤-1：合成2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸三级丁酯

在0℃下向4-氯-2-(三氟甲基)吡啶(1g，5.524mmol)、乙酸三级丁酯(1.5mL，11.049mmol)及^tBuXPhos Pd G1(75.8mg，0.110mmol)在无水THF(10mL)中的经搅拌溶液中缓慢地逐滴添加LiHMDS(16.5mL，16.574mmol，1M在THF中)。使反应混合物缓慢至室温且搅拌反应物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用饱和NH₄CI溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取且用水洗涤有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以产生2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸三级丁酯(1.2g，83.33％)。LC纯度：52％；m/z:262.1[M+H]⁺(分子式：C₁₂H₁₄NO₂F₃，计算的分子量：261.14)。

步骤-2：合成2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸

向2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸三级丁酯(160mg，0.613mmol)的经搅拌溶液中添加二恶烷中的HCl(2mL，4M溶液)。在50℃下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，在减压下浓缩反应混合物，以得到2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸(80mg，64.0％)，其不经进一步纯化即直接用中下一步骤中。(分子式：C₈H₆NO₂F₃，计算的分子式：205.14)。

步骤-3：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酰胺

向2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酸(80.2mg，0.391mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.2mL，1.467mmol)，随后添加EDC.HCl(140.18mg，0.733mmol)及HOBt(33.02mg，0.244mmol)。在室温下搅拌反应混合物15分钟，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(160mg，0.489mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA/)来纯化粗化合物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酰胺(20mg，7.96％)。LC纯度：94.6％；m/z:515.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₉F₃N₈O，计算的分子量：514.56)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.79-7.74(m,2H),7.60(d,J＝4.8Hz,1H),6.40-6.36(m,2H),4.66-4.50(m,1H),3.72-3.69(m,1H),3.66(s,2H),3.08(s,3H),2.17-2.12(m,2H),1.98-1.94(m,1H),1.90-1.85(m,4H),1.49-1.41(m,2H),1.03-0.92(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例123：合成化合物124

步骤-1：合成2-(2-氰基吡啶-4-基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向2-(2-氰基吡啶-4-基)乙酸(79.2mg，0.489mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25mL，1.834mmol)，随后添加EDC.HCl(175mg，0.917mmol)及HOBt(41.2mg，0.305mmol)。在室温下搅拌反应混合物15分钟，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，混合物用二氯甲烷稀释，用水、盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以得到粗化合物。通过逆相制备型HPLC及移动相水/乙腈中的0.1％TFA/来纯化粗物质，以产生2-(2-氰基吡啶-4-基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(100mg，35.71％)。LC纯度：99.74％；m/z:472.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₉N₉O，计算的分子量：471.57)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.62(d,J＝5.2Hz,1H),7.81(s,1H),7.72(d,J＝7.2Hz,1H),7.61-7.59(m,1H),6.39-6.26(m,2H),4.55-3.95(m,1H),3.70-3.68(m,1H),3.65(s,2H),3.08(s,3H),2.16-2.11(m,2H),1.98-1.93(m,1H),1.88-1.82(m,4H),1.49-1.45(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例124：合成化合物125

步骤-1：合成2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸甲酯

在-78℃下向6-甲基吡啶甲腈(500mg，4.237mmol)在无水THF(5mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加LiHMDS(6.35mL，6.355mmol，1M在THF中)，且将反应混合物搅拌1h。接着在-78℃下将碳酸二甲酯(0.42mL，5.084mmol)添加至反应混合物中且在环境温度下搅拌反应混合物2.5h。通过TLC监测反应进程，接着用饱和NH₄CI溶液将反应混合物淬灭且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以产生2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸甲酯(450mg，60.40％)。LC纯度：77.05％；m/z:177.1[M+H]⁺(分子式：C₉H₈N₂O₂，计算的分子量：176.18)。

步骤-2：合成2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸

向2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸甲酯(400mg，2.272mmol)在THF、甲醇及水(1:1:1，5mL)中的经搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(47.68mg，1.136mmol)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过UPLC监测反应进程。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物，以获得2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸(300mg，81.52％)。LC纯度：59.44％；m/z:163.0[M+H]⁺(分子式：C₈H₆N₂O₂，计算的分子量：162.15)。

步骤-3：合成2-(6-氰基吡啶-2-基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向2-(6-氰基吡啶-2-基)乙酸(99.08mg，0.611mmol)中无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.32mL，2.293mmol)，随后添加EDC.HCl(219.03mg，1.146mmol)及HOBt(51.60mg，0.382mmol)。在室温下搅拌反应混合物15分钟，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(250mg，0.764mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生2-(6-氰基吡啶-2-基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(40mg，11.11％)。LC纯度：98.62％；m/z:472.3[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₉N₉O，计算的分子量：471.57)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.31(d,J＝7.2Hz,1H),7.99-7.95(m,1H),7.83-7.67(m,2H),6.40-6.37(m,2H),4.83-4.81(m,1H),3.79(s,2H),3.75-3.67(m,1H),3.08(s,3H),2.20-2.13(m,2H),1.98-1.95(m,1H),1.85-1.80(m,4H),1.54-1.44(m,2H),1.06-1.05(m,2H),0.79-0.75(m,2H)。

实施例125：合成化合物126

步骤-1：合成2-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向2-(5-氰基-2-甲氧基苯基)乙酸(70mg，0.366mmol)在无水DMF(2mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.19mL，1.376mmol)，随后添加EDC.HCl(131mg，0.688mmol)及HOBt(30.9mg，0.229mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min，接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)。接着在室温下搅拌反应混合物7h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗产物，以产生2-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(40mg，17.46％)。LC纯度：99.53％；m/z:501.9[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₂N₈O₂，计算的分子量：500.61)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.73-7.67(m,2H),7.57-7.54(m,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),6.37-6.34(m,2H),4.64-4.60(m,1H),3.92(s,3H),3.70-3.68(m,1H),3.55(s,2H),3.08(s,3H),2.16 -2.10(m,2H),1.96-1.91(m,1H),1.86-1.82(m,4H),1.49-1.31(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.78 -0.74(m,2H)。

实施例126：合成化合物127

步骤-1：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-(3-(三氟甲基)苯甲基)环己烷-1-甲酰胺

向(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸(200mg，0.561mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.23mL，1.685mmol)，随后添加T₃P(0.7mL，1.123mmol，EtOAc中的50％溶液)。在室温下搅拌反应混合物10min，接着添加(3-(三氟甲基)苯基)甲胺(0.8mL，0.561mmol)。在室温下搅拌反应混合物12h。反应完成后(通过UPLC监测)，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗物质，以产生(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-(3-(三氟甲基)苯甲基)环己烷-1-甲酰胺(30mg，10.71％)。LC纯度：99.57％；m/z:514.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₀N₇OF₃，计算的分子量：513.57)。

实施例127：合成化合物128和129

步骤-1：合成2-氯-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯

向2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(2g，9.661mmol)在DMSO(10mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(3.36mL，19.322mmol)及5-环丙基-1H-吡唑-3-胺(1.3g，10.627mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过UPLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水淬灭且将固体过滤，用石油醚洗涤且在真空下干燥，以产生2-氯-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.5g，53％)。LC纯度：94.84％；m/z:294.0[M+H]⁺(分子式：C₁₂H₁₂ClN₅O₂，计算的分子量：293.71)。

步骤-2：合成2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯

向20mL微波小瓶中的2-氯-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.5g，5.107mmol)及((1R,4R)-4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(2.9g，12.76mmol)在DMSO(15mL)中的混合物中添加DIPEA(1.78mL，10.214mmol)。在微波中，在140℃下加热反应混合物4h。将反应混合物用冰冷水淬灭且用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥且蒸发，以得到粗物质。通过Biotage Isolera使用230-400目二氧化硅，用石油醚中的0至60％乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱来纯化所获得粗物质，以产生2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.2g，48.5％)。LC纯度：54.66％m/z:486.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₅N₇O₄，计算的分子量：485.59)。

步骤-3：合成2-(((1R,4R)-4-胺基环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯

向2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.029mmol)在无水DCM(10mL)中的冷却的0℃溶液中添加TFA(5mL)。在室温下搅拌反应物3h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将所得混合物浓缩，用石油醚磨碎且在高真空下再次浓缩，以产生呈TFA盐形式的2-(((1R,4R)-4-胺基环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，定量产率)。LC纯度：66.94％；m/z:386.2[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₇N₇O₂，计算的分子量：385.47)。

步骤-4：合成6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)-2-(甲基((1R,4R)-4-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺基)环己基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯

在0℃下向2-(((1R,4R)-4-胺基环己基)(甲基)胺基)-6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(700mg，1.816mmol在无水DMF(7mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA(0.79mL，4.54mmol)，随后添加HATU(1.03g，2.724mmol)及2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(185mg，0.908mmol)。在室温下搅拌反应混合物6h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC来纯化粗化合物，以提供呈固体状的6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)-2-(甲基((1R,4R)-4-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺基)环己基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(400mg，38.8％)。LC纯度：95.95％；m/z:572.2[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₂F₃N₇O₃，计算的分子量：571.61)。

步骤-5：合成6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)-2-(甲基((1R,4R)-4-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺基)环己基)胺基)嘧啶-4-甲酸

向6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)-2-(甲基((1R,4R)-4-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺基)环己基)胺基)嘧啶-4-甲酸甲酯(150mg，0.262mmol)在溶剂甲醇:THF:水的混合物(2:2:2mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H₂O(22mg，0.524mmol)。将反应混合物加热至80℃，保持6h。通过UPLC监测反应完成。浓缩反应混合物，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC及移动相水/乙腈中的0.1％TFA来纯化粗产物，以产生6-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)-2-(甲基((1R,4R)-4-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺基)环己基)胺基)嘧啶-4-甲酸(30mg，20.5％)。LC纯度：98.64％；m/z:558.3[M+H]⁺(分子式：C₂₇H₃₀F₃N₇O₃，计算的分子量：557.58)。

实施例128：合成化合物130

步骤-1：合成1-环戊基-4-硝基-1H-咪唑

向4-硝基-1H-咪唑(5g，44.27mmol)咋在ACN(200mL)中的溶液中添加碳酸钾(12.2g，88.54mmol)及溴代环戊烷(5.6mL，53.097mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，经硅藻土层过滤反应混合物且浓缩滤液，以得到残余物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化残余物，以获得1-环戊基-4-硝基-1H-咪唑(5g，62％产率)。LC纯度：97.1％；m/z:182.09[M+H]⁺(分子式：C₈H₁₁N₃O₂，计算的分子量：181.20)。

步骤-2：合成1-环戊基-1H-咪唑-4-胺

在N₂氛围下向1-环戊基-4-硝基-1H-咪唑(5g，27.624mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中添加Pd/C(1.0g)。在氢气氛围下在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，经由硅藻土层过滤反应混合物且浓缩滤液，以获得1-环戊基-1H-咪唑-4-胺(4.5g，粗物质)。LC纯度：44.6％；m/z:152.11[M+H]⁺(分子式：C₈H₁₃N₃，计算的分子量：151.21)。

步骤-3：合成2-氯-N-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)嘧啶-4-胺

向1-环戊基-1H-咪唑-4-胺(4.5g，29.801mmol)在DMSO(45mL)中的溶液中添加2,4-二氯嘧啶(5.2g，35.76mmol)及DIPEA(10.3mL，72.846mmol)。在60℃下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗产物。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗产物，以获得2-氯-N-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)嘧啶-4-胺(5.0g，64％)。LC纯度：73.4％；m/z:265.01[M+H]⁺(分子式：C₁₂H₁₄ClN₅，计算的分子量：263.73)。

步骤-4：合成((1R,4R)-4-((4-((1-环戊基-1H-咪唑-4-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯

在110℃下搅拌2-氯-N-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)嘧啶-4-胺(500mg，1.901mmol)、((1R,4R)-4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(650mg，2.851mmol)及DIPEA(0.99mL，5.703mmol)在正丁醇(5mL)中的混合物16h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释且用DCM萃取。分离的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至100％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化所获得粗产物，以获得((1R,4R)-4-((4-((1-环戊基-1H-咪唑-4-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(300mg，34％产率)。LC纯度：79.1％；m/z:456.30[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₇N₇O₂，计算的分子量：455.61)。

步骤-5：合成N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺

将((1R,4R)-4-((4-((1-环戊基-1H-咪唑-4-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(300mg，0.659mmol在DCM(3mL)中的溶液冷却至0℃且添加1,4二恶烷(3mL)中的4M HCl。在室温下搅拌所得混合物1h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，在真空下浓缩反应混合物，以产生N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺(300mg，定量产率)。LC纯度：78.4％；m/z:356.25[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₉N₇，计算的分子量：355.49)。

步骤-6：合成N-((1R,4R)-4-((4-((1-环戊基-1H-咪唑-4-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

向N²-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N⁴-(1-环戊基-1H-咪唑-4-基)-N²-甲基嘧啶-2,4-二胺(300mg，0.845mmol)在无水DMF(1mL)中的混合物中添加TEA(0.35mL，2.535mmol)、EDC.HCl(242.09mg，1.267mmol)、HOBt(57.037mg，0.422mmol)及2,3-二氢-1H-茚-2-甲酸(136.90mg，0.845mmol)。在室温下搅拌反应混合物5h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((1-环戊基-1H-咪唑-4-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(50mg，11％)。LC纯度：99.16％；m/z:500.31[M+H]⁺(分子式：C₂₉H₃₇N₇O，计算的分子量：499.66)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.82(d,J＝6.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.37(s,1H),7.20-7.12(m,4H),6.04(d,J＝6.0Hz,1H),4.60(t,J＝6.8Hz,2H),3.70-3.62(m,1H),3.25-3.14(m,6H),3.04(s,1H),2.26-2.20(m,2H),2.10-2.07(m,2H),1.93-1.90(m,5H),1.81-1.75(m,6H),1.50-1.47(m,2H)。

实施例129：合成化合物131

步骤-1：合成3-环戊基-5-氧代基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯

向3-环戊基-3-氧代基丙酸乙酯(2g，10.86mmol)在乙醇(20mL)中的经搅拌溶液中添加肼基甲酸三级丁酯(2.86g，21.73mmol)。将反应混合物加热至80℃，保持16h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，在减压下浓缩反应混合物，以获得残余物。由此获得的残余物用石油醚磨碎，以产生3-环戊基-5-氧代基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1.8g，65.9％)。LC纯度：91.68％；m/z:153.2[M-Boc]⁺(分子式：C₁₃H₂₀N₂O₃，计算的分子量：252.31)。

步骤-2：合成5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯

向3-环戊基-5-氧代基-4,5-二氢-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1.8g，7.14mmol)中ACN(25mL)中的溶液中添加2,4-二氯嘧啶(1.26g，8.57mmol)及碳酸钾(2.95g，21.42mmol)。在80℃下加热反应物，保持3h。通过TLC监测反应完成。将反应混合物浓缩以移除乙腈，用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在减压下浓缩。通过Biotage-Isolera，使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至30％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1.2g，46.15％)。LC纯度：96.02％；m/z:265[M-Boc]⁺(分子式：C₁₇H₂₁ClN₄O₃，计算的分子量：364.83)。

步骤-3：合成5-((2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1g，2.74mmol)在正丁醇(10mL)中的溶液中添加((1R,4R)-4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(1.25g，5.49mmol)及DIPEA(1.43mL，8.22mmol)。使反应混合物在160℃下经历微波加热，保持2h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，使反应物冷却至室温且浓缩以移除正丁醇。通过Biotage-Isolera，使用硅胶(230-400目)及乙酸乙酯中0至30％石油醚的梯度洗脱来纯化所获得残余物，以获得5-((2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1g，66.6％)。LC纯度：93.57％；m/z:457[M-Boc]⁺(分子式：C₂₉H₄₄N₆O₅，计算的分子量：556.71)。

步骤-4：合成(1R,4R)-N1-(4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氧基)嘧啶-2-基)-N1-甲基环己烷-1,4-二胺

向5-((2-(((1R,4R)-4-((三级丁氧基羰基)胺基)环己基)(甲基)胺基)嘧啶-4-基)氧基)-3-环戊基-1H-吡唑-1-甲酸三级丁酯(1g，1.79mmol)在无水DCM(10mL)中的经搅拌及冷却(0℃)溶液中添加二恶烷中的HCl(10mL，4M溶液)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将所得混合物浓缩，用石油醚磨碎且在高真空下浓缩，以产生呈HCl盐形式的(1R,4R)-N1-(4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氧基)嘧啶-2-基)-N1-甲基环己烷-1,4-二胺(1g，定量产率)。LC纯度：95.73％；m/z:357[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₈N₆O，计算的分子量：356.47)。

步骤-5：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氧基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

向2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸(0.114g，0.56mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.39mL，2.8mmol)，随后添加EDC.HCL(0.160g，0.84mmol)及HOBt(0.037g，0.28mmol)。搅拌反应物15min。接着添加(1R,4R)-N1-(4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氧基)嘧啶-2-基)-N1-甲基环己烷-1,4-二胺(0.200g，0.56mmol)。在室温下搅拌反应物5h。通过TLC监测反应完成，且消耗起始材料后，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷萃取。将所得有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗化合物。通过逆相制备型HPLC及移动相水/乙腈中的0.1％TFA/来纯化粗产物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)氧基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺(40mg，13.2％)。LC纯度：99.14％；m/z:543.3[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₃F₃N₆O₂，计算的分子量：542.61)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.20(d,J＝6.8Hz,1H),7.63(s,1H),7.58-7.51(m,3H),6.6(d,J＝5.6Hz,1H),5.99(s,1H),4.19(s,1H),3.58(s,3H),3.17-3.08(m,4H),2.13-2.08(m,4H),1.84-1.66(m,10H),1.30(s,2H)。

实施例130：合成化合物132

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺

向3-(甲基磺酰基)苯甲酸(97.8mg，0.489mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25mL，1.834mmol)，随后添加EDC.HCl(175mg，0.917mmol)及HOBt(41.2mg，0.305mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min。接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物5h，且反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以得到残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺(120mg，38.71％)。LC纯度：99.63％；m/z:510.3[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₁N₇O₃S，计算的分子量：509.63)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.39(s,1H),8.17-8.13(m,2H),7.79-7.74(m,2H),6.38-6.37(m,2H),4.59-4.67(m,1H),3.95-3.92(m,1H),3.18(s,3H),3.09(s,3H),2.19-2.16(m,2H),1.98-1.93(m,1H),1.86-1.81(m,4H),1.67-1.65(m,2H),1.01-0.99(m,2H),0.76 -0.74(m,2H)。

实施例131：合成化合物133

步骤-1：合成4-硝基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑

向20mL微波小瓶中的4-硝基-1H-咪唑(1.0g，8.849mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液中添加Cs₂CO₃(5.7g，17.698mmol)及3-碘氧杂环丁烷(4.8g，26.548mmol)。在微波反应器中，在120℃下加热反应混合物1h。通过LCMS监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水稀释且用DCM萃取。将分离的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩，以得到4-硝基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑(600mg，粗物质)。LC纯度：93.5％；m/z:170.1[M+H]⁺(分子式：C₆H₇N₃O₃，计算的分子量：169.14)。

步骤-2：合成1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-胺

向4-硝基-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑(200mg，1.183mmol)在甲醇MeOH(3mL)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(100mg)。在室温下在氢气球压力下搅拌反应物4h。通过TLC监测反应混合物，且完全耗尽起始材料后，经硅藻土层过滤反应混合物且用甲醇洗涤。浓缩所得滤液，以获得1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-胺(120mg，粗物质)。LC纯度：83.1％；m/z:140.1[M+H]⁺(分子式：C₆H₉N₃O，计算的分子量：139.16)。

步骤-3：合成2-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙酰胺

向2-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，0.540mmol)在吡啶(1mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(515.7mg，2.7mmol)，且在室温下搅拌反应混合物15分钟。接着，添加1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-胺(150.2mg，1.081mmol)。在80℃下搅拌反应混合物16h。通过UPLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物浓缩，用水稀释且用DCM萃取。所得有机层用盐水洗涤，接着经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以获得呈游离碱形式的2-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(1-(氧杂环丁-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙酰胺(12mg，4.5％)。LC纯度：97.07％；m/z:492.28[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₃N₉O₂，计算的分子量：491.60)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.87-7.85(m,1H),7.65-7.60(m,2H),6.10(d,J＝6.0Hz,2H),5.45-5.39(m,1H),5.09(t,J＝7.2Hz,2H),4.87(t,J＝6.4Hz,2H),3.06(s,3H),2.58(d,J＝7.6Hz,1H),2.41-2.33(m,3H),1.93-1.80(m,8H),1.30-1.25(m,1H),1.00-0.97(m,2H),0.75-0.73(m,2H)。

实施例132：合成化合物134

向20mL微波小瓶中的2-氯-N-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(317mg，1.35mmol)在正丁醇(5mL)中的溶液中添加CuI(51mg，0.27mmol)及DIPEA(0.72mL，4.05mmol)。搅拌反应混合物5min且接着添加2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯(500mg，2.7mmol)。在微波中在160℃下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至室温，用水稀释且用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得粗产物。通过Biotage Isolera，使用230-400硅胶用石油醚中0至10％乙酸乙酯洗脱来纯化粗产物，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(230mg，44.4％)。LC纯度：75.85％；m/z:385.2[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₂₈N₆O₂，计算的分子量：384.48)。

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(230mg，0.598mmol)在THF:MeOH:H₂O(3mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H₂O(50mg，1.19mmol)且将反应混合物加热至60℃，保持16h。通过TLC监测反应。反应完成后，将反应混合物冷却至室温且浓缩，以获得2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，粗物质)。LC纯度：76.26％；m/z:371.3[M+H]⁺(分子式：C₁₉H₂₆N₆O₂，计算的分子量：370.46)。

步骤-3：合成2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(200mg，0.540mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中逐滴添加三乙胺(0.23mL，1.62mmol)，随后添加T₃P(0.515mL，1.62mmol，50％溶液在乙酸乙酯中)。搅拌反应混合物5min且接着添加5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-胺(91mg，0.540mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以获得残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈游离碱形式的2-(4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-N-(5,6-二氟-2,3-二氢-1H-茚-2-基)乙酰胺(13mg，5％)。LC纯度：95.37％；m/z:521.9[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₃F₂N₇O，计算的分子量：521.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.84(s,1H),7.15-7.10(m,2H),6.20-6.09(m,2H),4.67-4.64(m,2H),3.33-3.32(m,2H),3.00(s,3H),2.86-2.79(m,2H),2.38-2.35(m,2H),2.14-2.12(m,1H),1.93-1.88(m,2H),1.80-1.77(m,5H),1.52-1.47(m,2H),1.01-0.97(m,2H),0.75-0.72(m,2H)。

实施例133：合成化合物135

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-5-(甲基磺酰基)吡啶甲酰胺

向5-(甲基磺酰基)吡啶甲酸(98.3mg，0.489mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25mL，1.834mmol)，随后添加EDC.HCl(175.2mg，0.917mmol)及HOBt(41.2mg，0.530mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物6h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-5-(甲基磺酰基)吡啶甲酰胺(30mg，9.64％)。LC纯度：96.47％；m/z:511.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₀N₈O₃S，计算分子量：510.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ9.15-9.14(m,1H),8.53-8.50(m,1H),8.34-8.32(m,1H),7.89(d,J＝6Hz,1H),6.13-6.12(m,2H),4.62-4.10(m,1H),3.99-3.98(m,1H),3.26(s,3H),3.04(s,3H),2.20-2.17(m,2H),2.03-1.93(m,1H),1.87-1.81(m,4H),1.70-1.68(m,2H),1.00-0.98(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例134：合成化合物136

步骤-1：合成3-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)苯甲酰胺

向3-氰基苯甲酸(90mg，0.611mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中添加TEA(0.25mL，1.833mmol)，随后添加EDC.HCl(175mg，0.916mmol)及HOBt(82.4mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min。接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以提供呈游离碱形式的3-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)苯甲酰胺(30mg，10.7％)。LC纯度：94.77％；m/z:457.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₂₈N₈O，计算的分子量：456.55)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.18(s,1H),8.13-8.11(m,1H),7.90-7.86(m,2H),7.66(t,J＝8Hz,1H),6.19(d,J＝6Hz,1H),6.09(s,1H),3.94-3.82(m,1H),3.05(s,3H),2.18-2.15(m,2H),1.93-1.81(m,6H),1.65-1.53(m,2H),1.00-0.99(m,2H),0.77-0.74(m,2H)。

实施例135：合成化合物137

步骤-1：合成5-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)吡啶甲酰胺

向5-氰基吡啶甲酸(72.4mg，0.489mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25mL，1.834mmol)，随后添加EDC.HCl(175.2mg，0.917mmol)及HOBt(41.2mg，0.305mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min，且添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗化合物，以产生呈TFA盐形式的5-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)吡啶甲酰胺(45mg，16.12％)。LC纯度：99.67％；m/z:472.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₂₇N₉O，计算的分子量：471.61)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.99(s,1H),8.40-8.38(m,1H),8.28-8.26(m,1H),7.74(d,J＝6Hz,1H),6.38-6.37(m,2H),3.99-3.94(m,1H),3.11(s,3H),2.21-2.17(m,2H),2.00-1.92(m,5H),1.72-1.65(m,3H),1.07-1.05(m,2H),0.78-0.66(m,2H)。

实施例136：合成化合物138

步骤-1：合成2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺

向在0℃下冷却的2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(1.5g，5.703mmol)在无水DMF(6mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(1.57g，11.40mmol)。在0℃下搅拌反应物10min。接着逐滴添加碘甲烷(0.8g，5.703mmol)且在0℃下搅拌反应混合物1h。通过HPLC监测反应且显示50％转化。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，且用水及盐水溶液洗涤。将有机层经无水Na₂SO₄干燥，接着浓缩。通过使用Biotage Isolera(230-400硅胶)及石油醚中20％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化残余物，以得到2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(320mg，20.25％)。LC纯度：91.85％；m/z:278.1[M+H]⁺(分子式：C₁₃H₁₆ClN₅，计算的分子量：277.76)。

步骤-2：合成2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯

向20mL微波小瓶中的2-(4-(甲胺基)环己基)乙酸甲酯(400mg，2.162mmol)在正丁醇(5mL)中的溶液中添加CuI(123mg，0.648mmol)及2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(300mg，1.081mmol)。在微波反应器中，在160℃下加热反应混合物3h。通过TLC监测反应进程，且完全耗尽起始材料后，将反应混合物冷却至室温且浓缩，以获得粗产物。通过Biotage Isolera(230-400硅胶)及石油醚中0至50％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(200mg，43.4％产率)。LC纯度：82.9％；m/z:427.3[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₃₄N₆O₂，计算的分子量：426.57)。

步骤-3：合成2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸

向2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸甲酯(180mg，0.422mmol)在水、THF、甲醇的混合物(1:1:1，3mL)中的经搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(18mg，0.422mmol)且将反应混合物加热至80℃，保持16h。通过TLC监测反应完成。浓缩反应混合物，以获得2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(150mg，86％)。LC纯度：91.2％；m/z:413.2[M+H]⁺(分子式：C₂₂H₃₂N₆O₂，计算的分子量：412.54)。

步骤-4：合成N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺

向2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酸(180mg，0.436mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.22mL，1.308mmol)及HATU(328mg，0.654mmol)。在环境温度下搅拌反应物30min。接着添加2-胺基-2,3-二氢-1H-茚-5-甲腈(69mg，0.436mmol)，且在环境温度下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，添加水且用二氯甲烷萃取混合物。将有机层分离且经无水硫酸钠干燥且浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化粗产物，以产生N-(5-氰基-2,3-二氢-1H-茚-2-基)-2-(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)乙酰胺(70mg，29％)。LC纯度：99.6％；m/z:553.3[M+H]⁺(分子式：C₃₂H₄₀N₈O，计算的分子量：552.73)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.63-7.60(m,2H),7.56-7.54(m,1H),7.44-7.41(m,1H),6.21(d,J＝6.4Hz,1H),6.15(s,1H),4.67-4.65(m,1H),3.53(s,3H),3.37-3.34(m,2H),3.17-3.09(m,4H),2.96-2.90(m,2H),2.37-2.35(m,2H),2.16-2.11(m,3H),1.90-1.64(m,14H),1.30-1.15(m,1H)。

实施例137：合成化合物139

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-甲酰胺

向1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-甲酸(162.2mg，0.916mmol)在无水DMF(6mL)中的溶液中添加TEA(0.38mL，2.752mmol)，随后添加EDC.HCl(262mg，1.376mmol)及HOBt(124mg，0.916mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(300mg，0.916mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以提供呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-5-甲酰胺(45mg，10％)。LC纯度：99.34％；m/z:487.3[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₀N₁₀O，计算的分子量：486.58)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.50(s,1H),8.06(dd,J＝8.8,8.4Hz,1H),7.89(d,J＝5.6Hz,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,1H),6.15-6.13(m,2H),4.57 -4.62(m,1H),4.37(s,3H),3.97-3.89(m,1H),3.05(s,3H),2.21-2.18(m,2H),1.95-1.82(m,5H),1.72-1.65(m,2H),1.00-0.96(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例138：合成化合物140

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(58mg，0.458mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中添加TEA(0.2mL，1.374mmol)，随后添加EDC.HCl(134mg，0.688mmol)及HOBt(61.9mg，0.458mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以提供呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(50mg，25％)。LC纯度：99.56％；m/z:437.4[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₂₈N₁₀O，计算的分子量：436.52)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.30(s,1H),7.73(d,J＝7.2Hz,1H),6.55-6.29(m,2H),4.16(s,3H),3.97-3.91(m,1H),3.11(s,3H),2.24-2.20(m,2H),2.00-1.98(m,1H),1.97-1.87(m,5H),1.67-1.57(m,2H),1.07-1.02(m,2H),0.79-0.75(m,2H)。

实施例139：合成化合物141

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-甲酰胺

向咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-甲酸(74.6mg，0.458mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.23mL，1.376mmol)，随后添加HATU(261mg，0.687mmol)。在室温下搅拌反应物10min。接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以提供呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-甲酰胺(20mg，9.2％)。LC纯度：98.83％；m/z:473.1[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₂₈N₁₀O，计算的分子量：472.56)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ9.80(dd,J＝7.2,7.2Hz,1H),8.74-8.73(m,1H),8.41(s,1H),7.88(d,J＝6Hz,1H),7.25-7.23(m,1H),6.18(d,J＝5.6Hz,1H),6.07(s,1H),4.69 -4.61(m,1H),3.98-3.94(m,1H),3.05(s,3H),2.20-2.17(m,2H),1.96-1.84(m,5H),1.71-1.63(m,2H),1.00-0.96(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例140：合成化合物142

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酰胺

向[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酸(200mg，0.550mmol)在无水DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.28mL，1.650mmol)，随后添加HATU(418mg，1.10mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(717mg，0.440mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过UPLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷中10％甲醇萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酰胺(50mg，19.3％)。LC纯度：99.43％；m/z:473.3[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₂₈N₁₀O，计算的分子量：472.56)。¹HNMR(400MHz,MeOD):δ8.89(d,J＝6.4Hz,1H),7.89-7.74(m,3H),7.32(t,J＝6.8Hz,1H),6.41-6.35(m,2H),4.65-4.58(m,1H),4.04-3.98(m,1H),3.12(s,3H),2.25-2.18(m,2H),2.05-1.94(m,5H),1.74-1.64(m,2H),1.06-0.97(m,2H),0.79-0.67(m,2H)。

实施例141：合成化合物143

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺

向2,3-二氢-1H-茚-2-甲酸(0.052g，0.32mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.35mL，2mmol)，随后添加HATU(0.235g，0.6mmol)。搅拌反应混合物15min。接着，添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(0.150g，0.4mmol)。在室温下搅拌反应物1h。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用DCM稀释且用水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化粗产物，以获得N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(40mg，19.2％)。LC纯度：97.66％；m/z:514.3[M+H]⁺(分子式：C₃₀H₃₉N₇O，计算的分子量：513.69)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.19-7.11(m,4H),6.27(d,J＝6.8Hz,1H),6.13(s,1H),4.52-4.49(m,1H),3.77-3.71(m,1H),3.33(s,3H),3.28-3.21(m,6H),3.18-3.11(s,3H),2.14-2.11(m,4H),1.88-1.82(m,6H),1.78-1.65(m,4H),1.65-1.49(m,2H)。

实施例142：合成化合物144

步骤-1：合成(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-((2-甲基-2H-四唑-5-基)甲基)环己烷-1-甲酰胺

向(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己烷-1-甲酸(200mg，0.561mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.23mL，1.685mmol)，随后添加EDC.HCl(160.9mg，0.842mmol)及HOBt(37.92mg，0.280mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min。接着添加(2-甲基-2H-四唑-5-基)甲胺(66.96mg，0.449mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的(1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)-N-((2-甲基-2H-四唑-5-基)甲基)环己烷-1-甲酰胺(30mg，12％)。LC纯度：97.90％；m/z:452.3[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₂₉N₁₁O，计算分子量：451.54)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.85(d,J＝6Hz,1H),6.15-6.21-6.14(m,2H),4.70-4.62(m,3H),4.35(s,3H),2.99(s,3H),2.30-2.25(m,1H),2.04-2.02(m,2H),1.94-1.89(m,1H),1.84-1.82(m,2H),1.77-1.66(m,4H),1.01-1.00(m,2H),0.66-0.44(m,2H)。

实施例143：合成化合物145

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺

向2-甲基-2H-四唑-5-甲酸(72mg，0.563mmol)在DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(0.29mL，1.689mmol)及HATU(321mg，0.844mmol)。在RT下搅拌反应物10min。接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.563mmol)。在RT下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，将反应混合物用水淬灭，用二氯甲烷萃取且接着浓缩。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺(25mg，10％)。LC纯度：99.26％；m/z:466.1[M+H]⁺(分子式：C₂₂H₃₁N₁₁O，计算的分子量：465.57)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ7.88(d,J＝6.0Hz,1H),6.25-6.15(m,2H),4.64-4.61(m,1H),4.46(s,3H),4.00-3.94(m,1H),3.13-3.09(m,1H),3.02(s,3H),2.16-2.13(m,4H),1.85-1.82(m,6H),1.77-1.66(m,6H)。

实施例144：合成化合物146

步骤-1：合成2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸乙酯

向5-甲基-2H-四唑(500mg，5.949mmol)在乙腈(5mL)中的冷却(0℃)溶液中添加碳酸钾(1.64g，11.899mmol)，随后添加2-溴乙酸乙酯(0.99mL，8.924mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以产生2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸乙酯(700mg，69.30％)。LC纯度：99.30％；m/z:171.1[M+H]⁺(分子式：C₆H₁₀N₄O₂，计算的分子量：170.17)。

步骤-2：合成2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸

向2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸乙酯(700mg，4.117mmol)在THF、甲醇、水(1:1:1，10mL)中的经搅拌溶液中添加单水合氢氧化锂(518.3mg，12.352mmol)。在室温下搅拌反应混合物1h。反应完成后(通过TLC监测)，在减压下浓缩反应混合物，以获得2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸(400mg，68.49％)。LC纯度：88.24％；m/z:143.2[M+H]⁺(分子式：C₄H₆N₄O₂，计算的分子量：142.12)。

步骤-3：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酰胺

向2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酸(104mg，0.733mmol)在无水DMF(3mL)中的经搅拌溶液中添加三乙胺(0.25mL，1.834mmol)，随后添加EDC.HCl(175.2mg，0.917mmol)及HOBt(41.2mg，0.305mmol)。在室温下搅拌反应混合物15min，且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过UPLC监测)，反应混合物用二氯甲烷稀释且用水洗涤。在减压下浓缩水层，以产生粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-(5-甲基-2H-四唑-2-基)乙酰胺(9mg，3.27％)。LC纯度：99.37％；m/z:452.0[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₂₉N₁₁O，计算的分子量：451.54)。¹H NMR(400MHz,MeOD):δ7.87(d,J＝5.6Hz,1H),6.20(s,1H),6.13(d,J＝6.8Hz,1H),4.89(s,2H),4.67-4.58(m,1H),3.75-3.69(m,1H),3.02(s,3H),2.53(s,3H),2.12-2.09(m,2H),1.95-1.91(m,1H),1.80-1.74(m,4H),1.57-1.50(m,2H),1.03-0.99(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例145：合成化合物147

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺

在0℃下向2-甲基-2H-四唑-5-甲酸(75mg，0.580mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中逐滴添加DIPEA(0.3mL，1.75mmol)，随后添加HATU(445mg，1.17mmol)。搅拌反应混合物5min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.580mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩以移除溶剂，以提供粗化合物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-2-甲基-2H-四唑-5-甲酰胺(30mg，11.36％)。LC纯度：99.58％；m/z:452.3[M+H]⁺(分子式：C₂₁H₂₉N₁₁O，计算的分子量：451.54)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.78(d,J＝8.0Hz,1H),5.97(d,J＝6.0Hz,1H),5.92(s,1H),4.61-4.58(m,1H),4.45(s,3H),4.01-3.95(m,1H),3.41(s,3H),3.01(s,3H),2.14-2.05(m,2H),1.98-1.92(m,1H),1.84-1.79(m,4H),1.71-1.61(m,2H),1.03-0.97(m,2H),0.79-0.75(m,2H)。

实施例146：合成化合物148

步骤-1：合成2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺

向2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺(3g，11.4mmol)在无水DMF中的溶液中添加碳酸钾(3.14g，22.8mmol)。在RT下搅拌反应混合物10min。将反应混合物冷却至0℃，随后逐滴添加碘甲烷(0.71mL，11.4mmol)。接着在RT下搅拌反应混合物2h。通过TLC监测反应进程(残留40％SM)。用水稀释反应混合物，且用乙酸乙酯萃取有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至20％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(1.1g，35.48％)。LC纯度：93.2％；m/z:276.2[M-H]^-(分子式：C₁₃H₁₆ClN₅，计算的分子量：277.76)。

步骤-2：合成(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯

向20mL微波小瓶中的(4-(甲胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(1g，4.38mmol)在正丁醇(10mL)中的溶液中添加2-氯-N-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺(0.607g，2.19mmol)、DIPEA(2.29mL，25.5mmol)及碘化铜(100mg)。在微波反应器中，在160℃下加热反应混合物2h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物冷却至环境温度且浓缩，以移除溶剂。通过Biotage Isolera使用硅胶(230-400目)及石油醚中0至60％乙酸乙酯的梯度洗脱来纯化粗物质，以获得(4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(614mg，30.7％)。LC纯度：96.3％；m/z:470.[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₉N₇O₂，计算的分子量：469.3)。

步骤-3：合成N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺

将((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)胺基甲酸三级丁酯(0.614g，1.39mmol)在无水DCM(2mL)中的经搅拌溶液冷却至0℃且添加二恶烷中的HCl(6mL，4M溶液)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过TLC监测反应进程。完全耗尽起始材料后，浓缩所得反应混合物且用石油醚磨碎，且接着在高真空下浓缩以产生呈HCl盐形式的N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(600mg，定量产率)。LC纯度：95.63％；m/z:370.3[M+H]⁺(分子式：C₂₀H₃₁N₇，计算的分子量：369.2)。

步骤-4：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺

向3-(甲基磺酰基)苯甲酸(0.135g，0.67mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(0.35mL，2.01mmol)，随后添加HATU(0.386g，1.01mmol)。搅拌反应混合物15min。接着，添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环戊基-1H-吡唑-3-基)-N2,N4-二甲基嘧啶-2,4-二胺(0.250g，0.67mmol)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过UPLC监测反应进程。将反应混合物用水稀释，且用二氯甲烷萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相制备型HPLC方法纯化粗物质，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环戊基-1H-吡唑-3-基)(甲基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯甲酰胺(80mg，21.44％)。LC纯度：96.94％；m/z:552.3[M+H]⁺(分子式：C₂₈H₃₇N₇O₃S，计算的分子量：551.71)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.41(s,1H),8.18-8.12(m,2H),7.79-7.74(m,2H),6.06(s,1H),5.98(d,J＝6Hz,1H),4.57-4.49(m,1H),3.98-3.92(m,1H),3.43(s,3H),3.17(s,3H),3.15-3.12(m,1H),3.04(s,3H),2.17-2.11(m,4H),1.86-1.80(m,6H),1.79-1.69(m,6H)。

实施例147：合成化合物149

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向1-(氧杂环丁-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(103mg，0.611mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加TEA(0.3mL，1.8mmol)，随后添加EDC.HCl(232mg，1.22mmol)及HOBt(123mg，0.917mmol)。搅拌反应混合物5min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤且经无水Na₂SO₄干燥且浓缩以移除溶剂，以提供残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(氧杂环丁-3-基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(30mg，10.27％)。LC纯度：99.28％；m/z:479.1[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₃₀N₁₀O₂，计算的分子量：478.56)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.57(s,1H),7.88(d,J＝5.2Hz,1H),6.15-6.09(m,2H),5.92-5.86(m,1H),5.23-5.14(m,2H),5.09-5.05(m,2H),4.70-4.60(m,1H),3.95-3.90(m,1H),3.03(s,3H),2.17-2.14(m,2H),1.96-1.92(m,1H),1.85-1.80(m,4H),1.68-1.64(m,2H),1.02-1.00(m,2H),0.77-0.75(m,2H)。

实施例148：合成化合物150

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合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺

向1-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(84mg，0.427mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加DIPEA(0.32mL，1.832mmol)，随后添加HATU(464mg，1.221mmol)。在室温下搅拌反应混合物10min。接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.610mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。将有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以获得呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(65mg，23％)。LC纯度：97.95％；m/z:507.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₄N₁₀O₂，计算的分子量：506.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.37(s,1H),7.86(d,J＝5.2Hz,1H),6.19-6.17(d,J＝6.4Hz,2H),4.72-4.67(m,4H),4.43-4.41(d,J＝5.2Hz,2H),3.98-3.91(m,1H),3.04(s,3H),2.18-2.15(m,2H),1.97-1.90(m,1H),1.86-1.77(m,4H),1.69-1.62(m,2H),1.31-1.24(m,4H),1.00-0.98(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例149：合成化合物151

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-6-甲酰胺

向1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-6-甲酸(108mg，0.611mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加TEA(0.3mL，1.83mmol)，随后添加T₃P(0.6mL，1.83mmol，50％在EtOAc中)。搅拌反应混合物5min且接着添加N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩以移除溶剂，以提供粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,2,3]三唑-6-甲酰胺(24mg，8.08％)。LC纯度：98.11％；m/z:487.3[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₀N₁₀O，计算分子量：486.58)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.25(s,1H),8.06-8.04(m,1H),7.90-7.87(m,2H),6.15(d,J＝5.6Hz,1H),6.05(s,1H),4.61-4.57(m,1H),4.40(s,3H),4.03-3.98(m,1H),3.05(s,3H),2.22-2.13(m,2H),1.94-1.83(m,5H),1.72-1.65(m,2H),1.0-0.95(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例150：合成化合物152

/>

步骤-1：合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)甲磺酰胺

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水DMF(4.0mL)中的溶液中添加DMAP(催化性)、三乙胺(0.43mL，3.054mmol)，随后添加(3-(三氟甲基)苯基)甲磺酰氯(790mg，3.054mmol)。在室温下搅拌所得反应混合物16h。通过TLC及LCMS分析监测起始材料的消耗。在减压下浓缩反应混合物，以获得粗产物，通过制备型HPLC(0.1％TFA/水/乙腈)纯化该粗产物，以获得标题化合物N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)甲磺酰胺(25mg，7％)。LC纯度：98.06％；m/z:550.0[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₀N₇O₂S，计算的分子量：549.62)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.74(d,J＝8Hz,1H),7.71-7.62(m,3H),7.63-7.59(m,1H),6.36-6.33(m,2H),4.89(s,2H),3.16-3.14(m,1H),3.05(s,3H),2.13(m,2H),1.77-1.74(m,5H),1.68-1.45(m,3H),1.07-1.02(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

实施例151：合成化合物153

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-甲基环戊-3-烯-1-磺酰胺

在氮气氛围下在0℃下，向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水THF(4mL)中的溶液中添加TEA(0.25mL，1.83mmol)，随后逐滴添加2,3-二氢-1H-茚-2-磺酰氯(330mg，1.52mmol)。在室温下搅拌反应混合物4h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，蒸发溶剂，以获得粗产物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化粗产物，以获得N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-甲基环戊-3-烯-1-磺酰胺(25mg，8.06％)。LC纯度：98.96％；m/z:508.2[M+H]⁺(分子式：C₂₆H₃₃N₇O₂S，计算的分子量：507.66)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.71(d,J＝7.2Hz 1H),7.26-7.17(m,4H),6.36-6.21(m,2H),4.58(s,1H),4.12-4.08(m,1H),3.42-3.27(m,5H),3.06(s,3H),2.07-1.98(m,3H),1.82-1.76(m,4H),1.49-1.45(m,2H),1.06-1.01(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

实施例152：合成化合物154

合成3-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)苯磺酰胺

在氮气氛围下在0℃下，向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水THF(4mL)中的溶液中添加TEA(0.17mL，1.22mmol)，随后逐滴添加3-氰基苯磺酰氯(123mg，0.611mmol)。在室温下搅拌反应混合物6h。通过TLC监测反应。反应完成后，蒸发溶剂以获得粗化合物，通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化该粗化合物，以产生3-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)苯磺酰胺(25mg，8.33％)。LC纯度：99.11％；m/z:493.2[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₂₈N₈O₂S，计算的分子量：492.60)。(VT)¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.24(s,1H),8.23-8.17(m,1H),7.99-7.76(m,1H),7.78(t,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),6.32-6.15(m,2H),4.59-4.54(m,1H),3.21-3.15(m,1H),3.03(s,3H),1.98-1.92(m,3H),1.78-1.69(m,4H),1.50-1.40(m,2H),1.05-1.02(m,2H),0.77-0.73(m,2H)。

实施例153：合成化合物155

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯磺酰胺

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(200mg，0.611mmol)在无水THF(3mL)中的溶液中添加TEA(0.25mL，1.833mmol)。将反应物冷却至0℃且逐份添加3-(甲基磺酰基)苯磺酰氯(310mg，1.223mmol)。在0℃下搅拌反应物3h。反应完成后(通过UPLC监测)，将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且浓缩，以产生粗产物。通过逆相制备型HPLC纯化粗产物，以产生呈游离碱形式的N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-3-(甲基磺酰基)苯磺酰胺(30mg，9.09％)。LC纯度：99.44％；m/z:546.1[M+H]⁺(分子式：C₂₄H₃₁N₇O₄S₂，计算的分子量：545.68)。¹H VTNMR(400MHz,CD₃OD):δ8.45(s,1H),8.24-8.19(m,2H),7.88-7.84(m,2H),6.15-6.10(m,2H),4.62 -4.57(m,1H),3.20(s,3H),3.18-3.14(m,1H),2.94(s,3H),1.93-1.88(m,3H),1.71-1.59(m,4H),1.52-1.44(m,2H),0.99-0.97(m,2H),0.74-0.70(m,2H)。

实施例154：合成化合物156

步骤-1：合成6-((4-甲氧基苯甲基)硫代)烟腈

向6-氯烟腈(500mg，3.6231mmol)在无水DMF(8mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸铯(1.4g，4.3478mmol)，随后添加苯基甲硫醇(0.42mL，3.6231mmol)。在室温下搅拌反应物16h。在60℃下再搅拌所得溶液6h。通过UPLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水及盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤且在减压下浓缩，以获得呈固体状的6-((4-甲氧基苯甲基)硫代)烟腈(900mg，粗物质)。粗产物不经进一步纯化即用中下一步骤中。LC纯度：96.21％；m/z:257.0[M+H]⁺(分子式：C₁₄H₁₂N₂OS，计算的分子量：256.32)。

步骤-2：合成5-氰基吡啶-2-磺酰氯

在0℃下，向6-((4-甲氧基苯甲基)硫代)烟腈(300mg，2.027mmol)在DCM(9mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加水性HCl溶液(2mL)及水(4mL)，随后历时15min在相同温度下逐滴添加次氯酸钠(3mL，14.5％)。通过UPLC监测反应进程，且在真空下直接蒸发反应混合物，以得到5-氰基吡啶-2-磺酰氯(280mg，粗物质)。此物质不经进一步纯化即直接用中下一步骤中。LC纯度：(分子式：C₆H₃ClN₂O₂S，计算的分子量：202.61)。

步骤-3：合成5-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)吡啶-2-磺酰胺

向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(3-环丙基-2H-吡咯-5-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.458mmol)在无水THF(6mL)中的冷却(0℃)溶液中添加TEA(0.2mL，1.374mmol)，随后逐滴添加5-氰基吡啶-2-磺酰氯(278mg，1.374mmol)。在室温下搅拌反应物16h。通过UPLC监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水稀释且用二氯甲烷中的10％甲醇萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩，以获得残余物。通过逆相制备型HPLC纯化残余物，以获得呈游离碱形式的5-氰基-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)吡啶-2-磺酰胺(25mg，11％)。LC纯度：98.81％；m/z:494[M+H]⁺(分子式：C₂₃H₂₇N₉O₂S，计算分子量：493.59)。¹H VTNMR(400MHz,MeOD):δ9.04(s,1H),8.42(d,J＝6Hz,1H),8.15(d,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝5.6Hz,1H),6.15-6.05(m,2H),4.57-4.51(m,1H),3.32-3.21(m,1H),2.95(s,3H),2.03-1.89(m,3H),1.73-1.64(m,4H),1.52-1.48(m,2H),1.04-0.97(m,2H),0.74-0.70(m,2H)。

实施例155：合成化合物157

合成N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(3-(甲基磺酰基)苯基)甲磺酰胺

在氮气氛围下，向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(150mg，0.45mmol)在无水THF(2mL)中的冷却(0℃)溶液中添加TEA(0.2mL，1.3mmol)，随后逐份添加(3-(甲基磺酰基)苯基)甲磺酰氯(260mg，0.91mmol)。在室温下搅拌反应混合物6h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，蒸发反应混合物以获得粗化合物，通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化该粗化合物，以产生N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)-1-(3-(甲基磺酰基)苯基)甲磺酰胺(12mg，3.9％产率)。LC纯度：98.69％；m/z:560.2[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₃N₇O₄S₂，计算的分子量：559.70)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ8.09(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.73-7.67(m,2H),6.35-6.21(s,2H),4.51(s,2H),3.33-3.32(m,2H),3.16(s,3H),3.05(s,3H),2.16-2.12(m,2H),1.98-1.91(m,1H),1.80-1.74(m,4H),1.48-1.44(m,2H),1.07-1.02(m,2H),0.78-0.72(m,2H).

实施例156：合成化合物158

步骤-1：合成(3-氰基苯基)甲磺酰氯

在0℃下在氮气氛围下，向(3-氰基苯基)甲磺酸(100mg，0.46mmol)在无水DCM(2mL)中的溶液中添加草酰氯(0.2mL，1.39mmol)，随后添加无水DMF(0.2mL)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，浓缩反应混合物，以获得(3-氰基苯基)甲磺酰氯(120mg，粗物质)，其直接用中下一步骤中。LC纯度：未记录(分子式：C₈H₆ClNO₂S，计算的分子量：215.65)。

步骤-2：合成1-(3-氰基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)甲磺酰胺

在氮气氛围下，向N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺(152mg，0.464mmol)及TEA(0.2mL，1.38mmol)在无水DMF(2mL)中的冷却(0℃)溶液中添加(3-氰基苯基)甲磺酰氯(120mg，0.556mmol)。在室温下搅拌反应混合物1h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，蒸发反应混合物，以获得残余物。通过逆相制备型HPLC(水/乙腈中的0.1％TFA)纯化所获得的残余物，以获得1-(3-氰基苯基)-N-((1R,4R)-4-((4-((5-环丙基-1H-吡唑-3-基)胺基)嘧啶-2-基)(甲基)胺基)环己基)甲磺酰胺(25mg，10.8％)。LC纯度：95.79％；m/z:507.1[M+H]⁺(分子式：C₂₅H₃₀N₈O₂S，计算的分子量：506.63)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD):δ7.84(s,1H),7.79-7.73(m,3H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),6.37-6.21(m,2H),4.44(s,2H),3.32-3.20(m,1H),3.06(s,3H),2.16-2.13(m,2H),1.99-1.95(m,2H),1.82-1.77(m,4H),1.53-1.44(m,2H),1.07-1.02(m,2H),0.78-0.74(m,2H)。

实施例157：合成化合物159

由N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺制备化合物159。产量：12mg。纯度(HPLC)98.6％,MS(m/e 438)。

实施例158：合成化合物160

实施例159：合成化合物161

由N2-((1R,4R)-4-胺基环己基)-N4-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基)-N2-甲基嘧啶-2,4-二胺制备化合物161。产量：60mg。纯度(HPLC)98.6％,MS(m/e 438)。

实施例160：MycN蛋白的降解

细胞培养

在T150烧瓶中，在含有洛斯维·帕克纪念研究所(Roswell Park MemorialInstitute；RPMI)1640培养基(Thermo Fisher，目录号11875-085)、10％胎牛血清(FBS，Thermo Fisher：目录号10437-028)、1％青霉素/链霉素(Thermo Fisher：目录号10378016)及1％两性霉素(Amophotericin)B(Thermo Fisher，目录号15290026)的总计30mL中接种2×10⁶个L-363(人类白血病细胞株)或SKNBE2(神经母细胞瘤细胞株)细胞。通过再接种L-363或SKNBE2细胞使细胞每72小时分裂，且记录继代数目。值得注意的系，不使用高于40个继代的细胞培养物，且大部分实验通过小于30个继代的细胞进行。

西方墨点法

在6孔细胞培养盘中，接种总计3mL的1×10⁶个细胞/毫升的L-363或SKNBE2细胞，产生总计3×10⁶个细胞/孔。向含有3mL L-363或SKNBE2细胞株的各孔中添加6uL MycN调节化合物(1mM)且自左至右摇晃所得培养盘且不涡旋。6小时后，将细胞置放中15mL法尔康管(falcon tube)中且在摆动的桶离心机中在4℃下在500Gs下旋转。接着小心地移除培养基而不破坏沉淀物。接着将沉淀物用3mL冷冻的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤且进行旋转循环。接着移除PBS且将沉淀物溶解在200uL补充有蛋白酶及磷酸酶抑制剂(Thermo Fisher：目录号A32959)的放射免疫沉淀(RIPA)溶解缓冲液(Thermo Fisher：目录号899000)中。接着，使细胞溶解物在4℃下在13000G下在离心机中旋转10分钟。接着将上清液小心地转移至新的埃彭道夫管(eppendorf tube)中(约180uL)而不破坏沉淀物。接着根据制造商的协议(Thermo Fisher：目录号23227)通过使用二喹啉甲酸(BCA分析)来测定细胞溶解物的蛋白质浓度。

凝胶流动及转移

在4至20％聚丙烯酰胺凝胶(Biorad.目录号5671094)中每孔装载大致25ug至30ug细胞溶解物。在染料向前流动脱离凝胶后，根据制造商的协议使用transblot turbo系统(Biorad：目录号1704150)将凝胶转移至硝化纤维素膜(Biorad：目录号1704159)。转移30分钟后，在室温下用5％BSA将膜阻挡，保持1小时。接着洗掉BSA且添加选定的初级抗体(1:500)，且将膜与初级抗体一起在4℃下孵育过夜。次日早晨，移除初级抗体且用1X-TBST将膜洗涤10分钟且再重复三次。在最后一次洗涤后，以1:5000稀释度添加二级抗体(MolecularDevices.目录号R8209或R8208)且在室温下孵育1小时。在与二级抗体一起孵育后，用1X-TBST将膜洗涤10分钟且再重复三次。在最后一次洗涤后，用去离子水将膜洗涤两次且干燥至少两小时。当膜完全干燥时，使用Molecular Devices Spectra Max西方系统来观察条带。保存西方影像且通过ImageJ软件测量条带密度。

表1.通过各种化合物对MycN蛋白的降解％

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标注：****：降解80-100％

***：降解50-79％

**：降解20-49％

*：降解<20％

实施例161：MycN蛋白的降解

针对L363细胞(悬浮液)，将1E6细胞接种至6孔培养盘的各孔中。针对SK-N-BE(2)细胞(黏附)，将5E5细胞接种在6孔培养皿的各孔中。将细胞培养24小时，接着用0.1、0.5、1.0、3.0及6.0mM最终分析浓度下的示例性化合物加DMSO对照处理。将所有化合物在DMSO中稀释至10mM。将细胞用化合物处理24小时，接着针对两种细胞类型，将含有细胞的培养基自各孔移除至15ml离心管中，且也将剩余的黏附SK-NBE(2)细胞自各孔刮取至适当试管中。将试管离心，将细胞用PBS洗涤，接着再离心以使细胞沈淀。将RIPA缓冲混合液添加至冰上的细胞中，保持5min。细胞溶解物通过离心来澄清且储存在-80度下直至需要。对各溶解物执行BCA分析以测定蛋白质浓度。

对于抗体的验证研究，使用多种浓度的溶解物及抗体(溶解物：2、1、0.2mg/ml；抗体：1/50、1/200稀释)。测定适当的溶解物浓度及抗体浓度时，以JESS技术(ProteinSimple,San Jose,CA-https://www.proteinsimple.com/jess.html)对样本进行筛检。

在化学荧光通道中检测目标蛋白抗体(n-myc及c-myc)且使用近红外(NIR)标记的二级抗体检测负载的对照物(微管蛋白及GAPDH)。

细胞增殖/存活率测量

对于SK-N-EB2黏附细胞，将1.9ml培养基中的5E5细胞接种至6孔培养皿中且孵育24小时。将示例性化合物添加(100ul，在培养基中1/20稀释)至各孔(最终分析浓度：6、3、1及0.5mM)以及DMSO对照孔中且孵育24小时。自培养盘上刮取细胞，离心，用PBS洗涤，离心，接着将RIPA缓冲混合液添加至细胞(100ul)，离心且储存在-80下用中稍后分析。对于L363悬浮细胞，将1E6细胞接种至24孔培养皿(950ul培养基)中且孵育24小时。将示例性化合物(50ul，在培养基中1/20稀释)添加至各孔(最终分析浓度：6、3、1及0.5mM)以及DMSO对照孔中且孵育24小时。将细胞抽吸至试管中，离心，用PBS洗涤，离心，接着将RIPA缓冲混合液添加至细胞(100ul)，离心且储存在-80下用中用于稍后分析。

对中西方墨点法，对所有样本进行BCA(总蛋白)分析，这些样本接着在各西方墨点法操作中以5种化合物加对照(DMSO)的批次进行，n-myc及c-myc在化学荧光通道中以独立实验进行。微管蛋白及GAPDH两者作为负载对照在近红外通道中的所有通路中进行。

对于细胞毒性(cytotox)，SK-N-EB2或L363细胞均以384孔格式进行。对于SK-N-EB2细胞，在添加化合物(10ul，1/4稀释，10mM最高的最终浓度，1/2稀释)前24小时，将5000个细胞/孔(在30μl培养基中)培育24小时。对于L363细胞，在添加化合物(10ul，10mM，1/2稀释)前24小时，将2000个细胞/孔(30μl培养基)孵育24小时。在两种情况下，根据制造商说明书添加Promega Cell Titer GLO，且立即在亮度计中读取培养盘。

表2.通过各化合物对MycN蛋白的降解％

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标注：****：降解80-100％

***：降解50-79％

**：降解20-49％

*：降解<20％

ND–未降解

应了解，以盐形式(例如，TFA盐)报导的化合物可具有或可不具有1:1化学计量，和/或例如所报导的效能浓度或其他分析结果可例如略微地较高或较低。

除非另外指明，否则本公开的实践将采用此项技术的技能范围内的有机化学、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术及药理学的常规方法。尽管已参考较佳实施方案及各种替代实施方案及具体地展示及描述本公开，但应理解，在不偏离本公开的精神及范围的情况下，熟习相关技术者可在其中作出形式及细节的各种变化。

出于所有目的，本说明书正文内引用的所有参考文献、所公布专利及专利申请均通过引用整体并入本文中。

Claims

1.一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

X选自下组：NR^A、O、S、NR^ACH₂、NR^AC(O)和C(O)；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

Z为具有至少一个氮的4至10元杂环，其中所述氮和L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R'在每次出现时独立地选自下组：H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C_1-3烷基或卤基取代)、苯基和C_3-6环烷基，或两个R'连同其所连接的氮一起形成杂环基，其中所述杂环基可任选地被甲基、卤基、氰基、氧代基或羟基取代。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中W为N，所述化合物具有式Ia：

3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R¹为5至6元杂环基或C_3-6环烷基。

4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中R¹选自下组：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。

5.如权利要求4所述的化合物，其中R¹为环丙基。

6.如权利要求4所述的化合物，其中R¹为环戊基。

7.如权利要求1或2所述的化合物，其中R¹选自下组：甲基和乙基。

8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为NR^A。

9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中Z选自下组：4至6元单环杂环、6至10元螺杂环、6至10元稠合双环杂环和6至10元桥接环杂烷基。

10.一种式Iaa的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

Z选自各自具有至少一个氮的6至10元螺杂环、6至10元稠合双环杂环和6至10元桥接环杂烷基，其中所述氮和L1结合，其中Z可任选地被一个或两个各自独立地选自下组的取代基取代：卤基、羟基、C₁-C₄烷基(任选地被一个、两个或三个卤素取代)、-C(O)OH、-C(O)-O-C_1-4烷基和氧代基；

R'在每次出现时独立地选自下组：H、甲基、乙基、杂环基(任选地被C_1-3烷基或卤基取代)、苯基和C_3-6环烷基，或两个R'连同其所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基可任选地被甲基、卤基、氰基、氧代基或羟基取代。

11.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式II表示：

12.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IIa表示：

13.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IIb表示：

14.如权利要求1和3-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IIc表示：

15.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IId表示：

16.如权利要求1和3-10所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IIe表示：

17.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IIf表示：

18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中R^A选自H和甲基。

19.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶选自下组：8至10元双环环烷基和8至10元双环杂环基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。

20.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶选自下组：单环或桥接C_3-6环烷基、单环或桥接杂环基、双环或稠合杂环基、和杂芳基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。

21.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶选自下组：二氢茚基、环己基、环丁基和环戊基，其中R⁶任选地被一个或两个各自选自下组的取代基取代：氰基、卤基、苯基、-C(＝N)-NR'R'、C_1-4烷基(任选地被甲氧基或一个、两个或三个氟原子或杂环基取代)、C_1-4烷氧基(任选地被一个、两个或三个氟原子取代)、S(O)₂-CH₃、-O-杂环基、杂环基和杂芳基。

22.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶选自下组：杂环基、苯基和杂芳基。

23.如权利要求21所述的化合物，其中R⁶为二氢茚基。

24.如权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中R⁶由下式表示：

其中R⁶⁶选自下组：H、卤基和氰基；aa为0、1或2。

25.如权利要求24所述的化合物，其中R⁶选自下组：

26.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶选自下组：

27.如权利要求26所述的化合物，其中R⁶选自下组：

28.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶为甲基。

29.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中R⁶为甲基。

30.如权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R²为H。

31.一种式III的化合物：

或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中：

W选自下组：N、C-H和C-F；

R^H选自下组：H、C_1-3烷基、-C(O)-C_1-3烷基和C(O)-O-C_1-3烷基；

R⁶和R⁶'连同连接至R⁶和R⁶'的氮一起形成4至8元单环杂环基或8至10元双环杂环基；其中所述单环杂环基或双环杂环基可任选地被一个、两个或三个各自独立地选自R^P的取代基取代；

32.如权利要求31所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中W为N，所述化合物具有式IIIa：

33.如权利要求31或32所述的化合物，其中R¹为5至6元杂环基或C_3-6环烷基。

34.如权利要求31-33中任一项所述的化合物，其中R¹选自下组：2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-氧杂环丁基、环己基、环丙基、环丁基和环戊基。

35.如权利要求34所述的化合物，其中R¹为环丙基。

36.如权利要求31或32所述的化合物，其中R¹选自下组：甲基和乙基。

37.如权利要求31-36中任一项所述的化合物，其中X为NR^A。

38.如权利要求31-37中任一项所述的化合物，其中Z选自下组：环己基、环戊基和环丁基。

39.如权利要求31-37中任一项所述的化合物，其中Z为C₅-C₉桥接环烷基。

40.如权利要求31-37中任一项所述的化合物，其中Z为螺C₅-C₁₀双环烷基。

41.如权利要求31-37中任一项所述的化合物，其中Z为稠合双环烷基。

42.如权利要求31-37中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中Z选自下组：

其中：

R³选自下组：H、C₁-C₄烷基、CO₂H和-C(O)-O-C_1-4烷基；

R⁴为H或C₁-C₄烷基；或

R³和R⁴一起形成-CH₂-或-CH₂CH₂-。

43.如权利要求42所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IV表示：

44.如权利要求42所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，其中所述化合物由式IVa表示：

45.如权利要求31-44中任一项所述的化合物，其中R⁶和R⁶'连同连接至R⁶和R⁶'的氮一起形成选自下组的任选地被取代的杂环基：

其中*指示和-C(O)-键合。

46.如权利要求31-45中任一项所述的化合物，其中R²为H。

47.一种化合物，其选自下组：

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和其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物。

48.一种药物组合物，其包含如权利要求1-47中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物，以及至少一种药学上可接受的载剂或稀释剂。

49.如权利要求48所述的药物组合物，其中所述组合物被调配用于肠胃外施用。

50.如权利要求48所述的药物组合物，其中所述组合物被调配用于静脉内施用。

51.如权利要求48所述的药物组合物，其中所述组合物被调配用于皮下施用。

52.一种治疗增殖性疾病的方法，包括：向患有增殖性疾病的受试者施用治疗有效量的权利要求1-47中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物或治疗有效量的权利要求48-51中任一项所述的药物组合物。

53.如权利要求52所述的方法，其中所述增殖性疾病为癌症。

54.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症选自下组：头颈癌、神经统癌、脑癌、神经母细胞瘤、肺癌/纵隔癌、乳癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆道癌、胰脏癌、小肠癌、大肠癌、结肠直肠癌、妇科癌症、生殖泌尿癌、卵巢癌、甲状腺癌、肾上腺癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、小儿恶性肿瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、骨髓瘤、白血病和来自未知原发性部位的转移。

55.一种调节有需要的受试者的细胞中的MycN的方法，包括：向有需要的受试者施用一定用量的权利要求1-47中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体和/或N-氧化物或者权利要求48-51中任一项所述的药物组合物，所述用量能有效地引起受试者细胞中的MycN调节。

56.如权利要求52至55中任一项所述的方法，还包括向受试者施用第二疗法。

57.如权利要求56所述的方法，其中所述第二疗法为抗肿瘤疗法。

58.如权利要求57所述的方法，其中所述抗肿瘤疗法为施用选自以下的一或多种药剂：DNA拓朴异构酶I或II抑制剂、DNA损伤剂、免疫治疗剂、抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、微管靶向剂、电离辐射、有丝分裂调节因子或有丝分裂检查点调节因子的抑制剂、DNA损伤信号转导子的抑制剂和DNA损伤修复酶的抑制剂。

59.如权利要求57所述的方法，其中所述抗肿瘤疗法选自下组：免疫疗法、放射疗法、光动力疗法、基因导向的酶前药疗法(GDEPT)、抗体导向的酶前药疗法(ADEPT)、基因疗法和控制饮食。