CN116322692A - 自分泌运动因子抑制剂化合物 - Google Patents

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CN116322692A CN202180068494.5A CN202180068494A CN116322692A CN 116322692 A CN116322692 A CN 116322692A CN 202180068494 A CN202180068494 A CN 202180068494A CN 116322692 A CN116322692 A CN 116322692A
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Abstract

化合物的组合物。本公开内容还提供使用所述化合物和组合物抑制ATX的方法。还提供制备所述化合物和组合物以及所述化合物的合成前体的方法。

Description

自分泌运动因子抑制剂化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年10月6日提交的美国临时申请号63/088,219的权益，在此通过引用将其全部内容并入。
背景技术
自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)(也被称为外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶2(ENPP-2)或溶血磷脂酶D)为属于ENPP家族的酶的蛋白质。作为具有溶血磷脂酶D(lysoPLD)活性的ENPP家族的酶的唯一成员，ATX负责将溶血磷脂酰胆碱(LPC)水解为溶血磷脂酸(LPA)。LPA为具有不同脂肪酰基链长的生物活性脂质家族，其向LPA受体发出信号以调节各种细胞事件。LPA和LPA受体活性归因于广泛范围的生理作用，诸如血压调节、血小板活化、细胞生长和平滑肌收缩。LPA和LPA受体活性也与各种其他生理学病症、障碍和疾病，诸如增殖性疾病、癌症、炎症、自身免疫性疾病和纤维化相关。
发明内容
本公开内容提供自分泌运动因子(ATX)抑制剂化合物和包括所述化合物的组合物。本公开内容还提供使用所述化合物和组合物抑制ATX的方法。还提供制备所述化合物和组合物以及所述化合物的合成前体的方法。
在第一方面，ATX抑制剂化合物具有式(I)：
Figure BDA0004163574540000021
或其药学上可接受的盐，
其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环(例如饱和单环碳环，例如环烷基)、任选地被取代的单环或双环杂环(例如饱和单环杂环，例如，氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶)、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环(例如，氮杂环丁烷、吗啉、哌啶(pieridine)或哌嗪)；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2(例如，-CH2NH2)和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
在一些实施方案中，式(I)的化合物为式(Ia)的化合物：
Figure BDA0004163574540000031
其中：
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
R3选自R4C(O)-、R4C(O)CH2-、R5R6N-和R5R6HC-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
在一些实施方案中，式(I)的化合物为式(Ib)的化合物：
Figure BDA0004163574540000032
其中：
X1为C-H或N；且
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，
a)R3为
Figure BDA0004163574540000041
b)R3为
Figure BDA0004163574540000042
c)R3为
Figure BDA0004163574540000043
d)R3为
Figure BDA0004163574540000044
其为任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-(例如，(C2-C5)杂环烷基-)；或
e)R3为
Figure BDA0004163574540000045
其为任选地被取代的单环或双环(C3-C8)碳环-(例如，(C3-C6)环烷基-)，或任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-(例如，(C2-C5)杂环烷基-)；
其中：
R4选自HO-、H2N-、R15R16N-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环和任选地被取代的单环或双环杂环；
R12选自-H、-NH2、-OH、-CH2C(O)R4、-C(O)R4、-CHR15R16、-NR15R16、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)；
R13和R14独立地选自-H、-CH2C(O)R17、-CH2R17、-C(O)R17、-R18C(O)R17、-CH2R18C(O)R17、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)，其中R17和R18独立地选自任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)；且
R15和R16独立地选自H-、任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C3-C6)环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的3元至10元饱和单环杂环或碳环和任选地被取代的3元至10元饱和双环杂环或碳环，其中任选的取代基选自羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基(例如，被(C1-C5)烷基取代的氨基)和(C1-C5)烷基；或R15和R16被环状连接以形成3元至6元单环饱和杂环，其任选地被羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基(例如，被(C1-C5)烷基取代的氨基)或(C1-C5)烷基取代。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，
R3为
Figure BDA0004163574540000051
R4选自R32-、R32HN-、R32N(R33)-和R32HN-R36-；
R32和R33独立地选自H-、任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮)；
R36选自任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶)；且
R32、R33和R36基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基(例如，-CH3)、-(C1-C3)烷氧基、-(C3-C6)环烷基、(C2-C5)杂环烷基(例如，氮杂环丁烷)和-N(R37)R38，其中R37和R38独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基(例如，环丙基或环丁基)和(C2-C5)杂环烷基(例如，氮杂环丁烷)。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，
R3为
Figure BDA0004163574540000052
R14选自R34-、R34CH2-、R34C(O)R35-和R34C(O)R35CH2-；
每个R34和R35独立地选自任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪)；且
R34和R35基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基(例如，-CH3)、-(C1-C3)烷氧基和-(C1-C3)烷基；且
R13为-H。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，R3为
Figure BDA0004163574540000061
在一些实施方案中，R3选自：
Figure BDA0004163574540000062
在某些实施方案中，
R12选自H-、H2N-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-NH-、R31-N(CH3)C(O)-、R31-C(O)N(CH3)-、R31-N(CH3)-和R31-O-；
R31选自任选地被取代的环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮)；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)，以及(C2-C5)杂环烷基-(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮)。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，R3为
Figure BDA0004163574540000063
在另外的实施方案中，R3为
Figure BDA0004163574540000064
在另外的实施方案中，
R12选自H-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-N(CH3)C(O)-和R31-C(O)N(CH3)-；
R31选自任选地被取代的(C1-C3)烷基-、任选地被取代的环烷基-(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基-)和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶)；且
R31基团的任选的取代基团选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-和被取代的(C1-C3)烷基。
在式(I)的一些实施方案中，化合物具有式(Ic)：
Figure BDA0004163574540000071
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-。在式(Ic)的一些实施方案中，R31为任选地被取代的(C3-C5)杂环烷基。
在式(Ic)的一些实施方案中，化合物具有式(Id)：
Figure BDA0004163574540000072
其中：
X1和X4独立地为N或CH；且
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
在式(I)的一些实施方案中，化合物具有式(Ie)：
Figure BDA0004163574540000081
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
在式(Ie)的一些实施方案中，化合物具有式(If)：
Figure BDA0004163574540000082
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
在第二方面，本公开内容提供一种药物组合物，其包含如本文中所描述的ATX抑制剂化合物或其药学上可接受的盐(例如，式(I)至式(If)的化合物)，和药学上可接受的赋形剂。
在第三方面，本公开内容提供一种使用所述化合物和组合物抑制ATX的方法。在一些实施方案中，该方法包括使包含ATX的样品与有效量的如本文中所描述的ATX抑制剂化合物或其药学上可接受的盐(例如，式(I)至式(If)的化合物)接触以抑制ATX。
具体实施方式
4.1.ATX抑制剂化合物
如上文所概述，本公开内容提供用于抑制自分泌运动因子(ATX)的化合物和组合物。所述化合物可包括稠合的双环结构，其包括与诸如吡啶环(例如，其中咪唑并N1原子为吡啶环的部分)、哒嗪环(pyridiazine)、吡嗪环或嘧啶环的六元杂环稠合的五元咪唑环(例如，在1,2位处稠合的咪唑环)。在一些实施方案中，稠合双环结构为咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]嘧啶或咪唑并[1,2-a]吡嗪。稠合双环结构在3位被氨基取代，所述氨基被五元杂环诸如2-取代的噻唑环、
Figure BDA0004163574540000091
唑环或咪唑环取代，该五元杂环自身在4位进一步被任选地被取代的苯环取代。
在本公开内容的ATX抑制剂化合物中，稠合双环结构可在6位被六元杂环诸如吡啶-3-基、嘧啶-5-基、哒嗪-3-基或吡嗪-2-基取代，该六元杂环自身在对位进一步被各种对位取代基(para substituent)(例如，如本文中所描述)取代。
更具体地，在第一方面，本公开内容提供一种式(I)的化合物：
Figure BDA0004163574540000101
或其药学上可接受的盐，
其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环(例如饱和单环碳环，例如环烷基)、任选地被取代的单环或双环杂环(例如饱和单环杂环，例如，氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶)、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环(例如，氮杂环丁烷、吗啉、哌啶(pieridine)或哌嗪)；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2(例如，-CH2NH2)和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
在式(I)的一些实施方案中，X1为N。在式(I)的一些实施方案中，X2为N。在式(I)的一些实施方案中，X3为N。
在式(I)的一些实施方案中，X1为N，X2为C-H且X3为C-H。
在式(I)的一些实施方案中，X1为C-H，X2为C-H且X3为C-H。
在式(I)的一些实施方案中，Y为S。在一些实施方案中，Y为O。在一些实施方案中，Y为NH。
在式(I)的一些实施方案中，Z1为N。在式(I)的一些实施方案中，Z2为N。在式(I)的一些实施方案中，Z3为N。在式(I)的一些实施方案中，Z1至Z3中的一个和仅一个为N。
在式(I)的一些实施方案中，Z1为C-H，Z2为C-H且Z3为C-H。
在式(I)的一些实施方案中，n为0。在式(I)的一些实施方案中，n为1。在式(I)的一些实施方案中，n为1且R10取代基位于对位。在式(I)的一些实施方案中，n为2。
在一些实施方案中，式(I)的化合物为式(Ia)的化合物：
Figure BDA0004163574540000111
其中：
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
R3选自R4C(O)-、R4C(O)CH2-、R5R6N-和R5R6HC-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，X1为N。在式(I)至式(Ia)的一些其他实施方案中，X1为C-H。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为H。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为甲基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为卤素。在式(I)至式(Ia)的某些实施方案中，R1为F。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷氧基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R1为甲氧基。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R7为(C1-C3)烷基-。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R7为H3CH2C-。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R7为H3C-。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R8为(C1-C3)烷基-。在式(I)至式(Ia)的另一实施方案中，R8为-CH2CH3。在式(I)至式(Ia)的另一实施方案中，R8为-CH3。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9选自-卤素、-CN、-OH、-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、-(C1-C6)烷基-NH2(例如，-CH2NH2)和-(C1-C6)烷基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为卤素。在某些情况下，卤素为F或Cl。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-OH。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-OCH3。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为氨基或被取代的氨基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-(C1-C6)烷基-NH2。在式(I)至式(Ia)的某些情况下，R9为-CH2NH2。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-(C1-C6)烷基。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为CH3。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-CH2CH3。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为H。在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，R9为-CN。
在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-卤素。在式(Ia)的另一实施方案中，R11为-F。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-CN。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-OH。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-(C1-C6)烷氧基。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-NH2或-NR5R6。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-CH2NH2。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-(C1-C6)烷基。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-CH3。在式(Ia)的一些实施方案中，R11为-CH2CH3。
在一些实施方案中，式(I)的化合物为式(Ib)的化合物：
Figure BDA0004163574540000131
其中：
X1为C-H或N；且
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基。
在式(Ib)的一些实施方案中，X1为N。在式(Ib)的一些其他实施方案中，X1为C-H。
在式(Ib)的一些实施方案中，R1为H。在式(Ib)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷基。在式(Ib)的一些实施方案中，R1为甲基。在式(Ib)的一些实施方案中，R1为卤素。在式(Ib)的某些实施方案中，R1为F。在式(Ib)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷氧基。在式(Ib)的一些实施方案中，R1为甲氧基。
在式(I)至式(Ib)的化合物的一些实施方案中，
(a)R3为
Figure BDA0004163574540000141
(b)R3为
Figure BDA0004163574540000142
(c)R3为
Figure BDA0004163574540000143
(d)R3为
Figure BDA0004163574540000144
其为任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-(例如，(C2-C5)杂环烷基)；或
(e)R3为
Figure BDA0004163574540000145
其为任选地被取代的单环或双环(C3-C8)碳环-(例如，(C3-C6)环烷基-)，或任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-(例如，(C2-C5)杂环烷基-)；
其中：
R4选自HO-、H2N-、R15R16N-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环和任选地被取代的单环或双环杂环；
R12选自-H、-NH2、-OH、-CH2C(O)R4、-C(O)R4、-CHR15R16、-NR15R16、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)；
R13和R14独立地选自-H、-CH2C(O)R17、-CH2R17、-C(O)R17、-R18C(O)R17、-CH2R18C(O)R17、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)，其中R17和R18独立地选自任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环(例如，-(C3-C6)环烷基)和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环(例如，-(C2-C5)杂环烷基)；且
R15和R16独立地选自H-、任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C3-C6)环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的3元至10元饱和单环杂环或碳环和任选地被取代的3元至10元饱和双环杂环或碳环，其中任选的取代基选自羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基(例如，被(C1-C5)烷基取代的氨基)和(C1-C5)烷基；或R15和R16被环状连接以形成3元至6元单环饱和杂环，其任选地被羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基(例如，被(C1-C5)烷基取代的氨基)或(C1-C5)烷基取代。
在式(I)至式(Ib)的化合物的一些实施方案中，
R3为
Figure BDA0004163574540000151
R4选自R32、R32HN-、R32N(R33)-和R32HN-R36-；
R32和R33独立地选自H-、任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；且
R36选自任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)和任选地被取代的饱和杂环(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶)；且
R32、R33和R36基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基(例如，-CH3)、-(C1-C3)烷氧基、-(C3-C6)环烷基、-(C2-C5)杂环烷基(例如，氮杂环丁烷)和-N(R37)R38，其中R37和R38独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基(例如，环丙基或环丁基)和(C2-C5)杂环烷基(例如，氮杂环丁烷)。
在一些实施方案中，R33为-(C1-C3)烷基且R32为任选地被取代的环烷基，或任选地被取代的饱和杂环。在一些实施方案中，R32为任选地被取代的环烷基，其为任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，R32为任选地被取代的杂环，其为任选地被取代的氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮。
在一些实施方案中，R4为被-OH取代(例如，在3位处)的氮杂环丁烷环、吡咯烷环或哌啶环。在一些实施方案中，R4为R32HN-R36-，其中R36为氮杂环丁烷且R32选自氮杂环丁烷、环丁基、环丙基、乙基和甲基。在一些实施方案中，R4为R32HN-，其中R32选自H、-(C1-C3)烷基(例如，甲基)、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、环戊基、环丁基和环丙基，且R32任选地被例如-CN或-OH取代。
在一些实施方案中，R4选自：
Figure BDA0004163574540000161
在式(Ib)的一些实施方案中，化合物选自表1的化合物11至16、47至65和87。
在式(I)至式(Ib)的化合物的一些实施方案中，
R3为
Figure BDA0004163574540000162
R14选自R34-、R34CH2-、R34C(O)R35-和R34C(O)R35CH2-；
每个R34和R35独立地选自任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；
R34和R35基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基(例如，-CH3)、-(C1-C3)烷氧基和-(C1-C3)烷基；且
R13为-H。在一些实施方案中，任选地被取代的环烷基为任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，任选地被取代的杂环为任选地被取代的氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮。
在一些实施方案中，R14选自：
Figure BDA0004163574540000171
在式(Ib)的一些实施方案中，化合物选自表1的化合物21、22和34至41。
在式(I)至式(Ib)的化合物的一些实施方案中，
R3为
Figure BDA0004163574540000172
在另一实施方案中，R3选自：
Figure BDA0004163574540000173
Figure BDA0004163574540000174
其中：
R12选自H-、H2N-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-NH-、R31-N(CH3)C(O)-、R31-C(O)N(CH3)-、R31-N(CH3)-和R31-O-；
R31选自任选地被取代的环烷基、任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)，和(C2-C5)杂环烷基-(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮)。在一些实施方案中，任选地被取代的环烷基为任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，任选地被取代的饱和杂环为任选地被取代的氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮。
在一些实施方案中，R12选自：
Figure BDA0004163574540000181
在式(Ib)的一些实施方案中，化合物选自表1的化合物1至10、17至20、23至33、42至46、66至80和。
在式(Ib)的一些实施方案中，化合物选自表1的化合物81至86、88至98、105至115和118至127。
在式(I)至式(Ib)的化合物的一些实施方案中，R3为
Figure BDA0004163574540000191
在另一实施方案中，R3为
Figure BDA0004163574540000192
在另一实施方案中，
R12选自H-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-N(CH3)C(O)-和R31-C(O)N(CH3)-；
R31选自任选地被取代的(C1-C3)烷基-、任选地被取代的环烷基-和任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-和被取代的(C1-C3)烷基-。在一些实施方案中，任选地被取代的环烷基为任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，任选地被取代的杂环为任选地被取代的氮杂环丁烷、任选地被取代的吡咯烷或任选地被取代的哌啶。
在另一实施方案中，R12选自：
Figure BDA0004163574540000193
在式(Ib)的一些实施方案中，化合物选自表1的化合物99至104。
在式(I)至式(Ia)的一些实施方案中，化合物具有式(Ie)：
Figure BDA0004163574540000194
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
在式(Ie)的化合物的一些实施方案中，R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)。
在式(Ie)的一些实施方案中，化合物具有式(If)：
Figure BDA0004163574540000201
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R7为(C1-C3)烷基-。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R7为H3CH2C-。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R7为H3C-。
在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R8为(C1-C3)烷基-。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R8为-CH2CH3。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R8为-CH3。
在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9选自-卤素、-CN、-OH、-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、-(C1-C6)烷基-NH2(例如，-CH2NH2)和-(C1-C6)烷基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为卤素。在某些情况下，卤素为F或Cl。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-OH。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-OCH3。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为氨基或被取代的氨基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-(C1-C6)烷基-NH2。在某些情况下，R9为-CH2NH2。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-(C1-C6)烷基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为CH3。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-CH2CH3。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为H。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R9为-CN。
在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-卤素。在式(Ie)至式(If)的另一实施方案中，R11为-F。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-CN。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-OH。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-(C1-C6)烷氧基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-NH2或-NR5R6。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-CH2NH2。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-(C1-C6)烷基。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-CH3。在式(Ie)至式(If)的一些实施方案中，R11为-CH2CH3。
在式(I)至式(Ib)的一些实施方案中，化合物具有式(Ic)：
Figure BDA0004163574540000211
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31为任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-或任选地被取代的(C3-C7)环烷基。在式(Ic)的一些实施方案中，R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-、(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)和(C2-C5)杂环烷基-(例如，氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、吗啉-3-酮或哌啶-2-酮)。
在式(Ic)的一些实施方案中，化合物具有式(Id)：
Figure BDA0004163574540000221
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，X1为N。在式(Ic)至式(If)的一些其他实施方案中，X1为C-H。
在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为H。在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷基。在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为甲基。在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为卤素。在式(Ic)至式(If)的某些实施方案中，R1为F。在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为被取代的-(C1-C3)烷氧基。在式(Ic)至式(If)的一些实施方案中，R1为甲氧基。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000231
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000232
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000233
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000234
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000241
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000242
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000243
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000244
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000245
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000251
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000252
或其盐。
在一些实施方案中，式(Id)的化合物具有以下结构：
Figure BDA0004163574540000253
或其盐。
本公开内容的(例如，式(I)至式(If)中的任一个的)ATX抑制剂化合物可具有选自表1中所列的那些中的任一个或其药学上可接受的盐的结构。
本文还公开了式(II)的化合物：
Figure BDA0004163574540000254
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
R20和R21各自独立地选自H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
或R20和R21与其所连接的硼原子一起形成任选地被取代的杂环；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
在某些实施方案中，式(II)的化合物为：
Figure BDA0004163574540000261
本文还公开了式(III)的化合物：
Figure BDA0004163574540000262
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3a选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、卤素、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
在某些实施方案中，式(III)的化合物为以下化合物之一：
Figure BDA0004163574540000271
Figure BDA0004163574540000281
Figure BDA0004163574540000291
在某些实施方案中，本公开内容的(例如，式(II)至式(III)中的任一个的)化合物可具有选自表1A中所列的那些中的任一者或其药学上可接受的盐的结构。
4.1.1.同位素标记的类似物
本公开内容也涵盖同位素标记的化合物，其与本文所描述的那些化合物相同，不同之处在于一或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子(“同位素体”)置换。本公开内容的化合物也可在构成此类化合物的一或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。可并入本文所描述的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，诸如分别为2H(“D”)、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。例如，本文所描述的化合物可具有一或多个被氘置换的H原子。
一般而言，对某一元素，诸如氢或H的提及或描绘意味着包括该元素的所有同位素。例如，若R基团被定义为包括氢或H，则其也包括氘和氚。因此，包含放射性同位素诸如氚、14C、32P和35S的化合物在本技术的范围内。基于本文的公开内容，将此类标记插入本技术的化合物中的程序对于本领域技术人员将为显而易见的。
除非另外说明，否则本文所描述的化合物旨在包括不同之处仅在于存在一或多个同位素富集原子的化合物。例如，除氢被氘或氚置换或碳被13C或14C富集碳置换之外，具有本发明结构的化合物在本公开内容的范围内。
在一些实施方案中，某些同位素标记的化合物(诸如被3H和14C标记的化合物)可适用于化合物和/或底物组织分布分析。氚化(3H)和碳-14(14C)同位素可因其易于制备和可检测性而是特别优选的。此外，用较重的同位素诸如氘取代可获得由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，诸如体内半衰期延长或剂量需求减少，且因此在某些情况下可为优选的。同位素标记的化合物一般可遵循与本文中，例如实例部分中所公开的那些程序类似的程序，通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
在一些实施方案中，本公开内容中所公开的化合物为本文所描述的化合物中的任一个或其盐的氘化类似物。式(I)至式(If)的化合物的氘化类似物为其中一或多个氢原子被氘取代的化合物。在一些实施方案中，氘化类似物为包括氘化R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9或R10基团的式(I)的化合物。在式(I)的化合物的氘化类似物的某些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自包括至少一个氘原子的任选地被取代的(C1-C6)烷基、任选地被取代的(C1-C6)烷氧基、任选地被取代的(C1-C6)亚烷基-杂环烷基、任选地被取代的单环或双环碳环和任选地被取代的单环或双环杂环。在式(I)的化合物的氘化类似物的某些实施方案中，R1、R7、R8、R9和R10独立地选自任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的(C1-C3)烷氧基和任选地被取代的(C1-C3)亚烷基-杂环(例如，-(CH2)m-吗啉、-(CH2)m-哌嗪和-(CH2)m-哌啶)。在式(I)的氘化类似物的一些实施方案中，R1、R7、R8、R9和R10独立地为-CD3。在式(I)的氘化类似物的一些实施方案中，R1、R7、R8、R9和R10独立地为-CD2-CD3。在式(I)的化合物的氘化类似物的一些实施方案中，其中任选的取代基为包括至少一个氘原子的任选地被取代的杂环烷基(例如
Figure BDA0004163574540000311
)。
使用诸如描述于以下中的各种方法来合成被氘取代的化合物：Dean,Dennis C.编.Recent Advances in the Synthesis and Applications of RadiolabeledCompounds for Drug Discovery and Development.[In:Curr.,Pharm.Des.,2000；6(10)]2000,第110页；George W.；Varma,Rajender S.The Synthesis of RadiolabeledCompounds via Organometallic Intermediates,Tetrahedron,1989,45(21),6601-21；和Evans,E.Anthony.Synthesis of radiolabeled compounds,J.Radioanal.Chem.,1981,64(1-2),9-32。
氘化起始物质可容易地获得，且经受本文所描述的合成方法以提供含氘化合物的合成。大量含氘试剂和构建单元可商购自化学供货商，诸如Aldrich Chemical Co.。
4.1.2.氟化类似物
在一些实施方案中，本公开内容中所公开的化合物为本文中所描述的化合物中的任一个或其盐的氟化类似物。式(I)至式(If)的化合物的氟化类似物为其中一或多个氢原子或取代基被氟原子取代的化合物。在一些实施方案中，氟化类似物为包括氟化R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9或R10基团的式(I)的化合物。在式(I)的化合物的氟化类似物的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自包括至少一个氟原子的任选地被取代的(C1-C6)烷基、任选地被取代的(C1-C6)烷氧基、任选地被取代的(C1-C6)亚烷基-杂环烷基、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的芳基和任选地被取代的杂芳基。在式(I)的化合物的氟化类似物的一些实施方案中，脂族或芳族C-H键的氢原子被氟原子置换。在式(I)的化合物的氟化类似物的一些实施方案中，任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基的至少一个氢被氟原子置换。在式(I)的化合物的氟化类似物的一些实施方案中，羟基取代基(-OH)或氨基取代基(-NH2)被氟原子置换。在式(I)的化合物的氟化类似物的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自F、CF3、CF2CF3、CHF2、OCF3、OCHF2和OCF2CF3。
4.1.3.异构体
如本文中所使用的术语“化合物”意味着包括具有所描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。
本文所描述的化合物可具有不对称中心、几何中心(例如，双键)或两者。除非特别指示特定立体化学或异构形式，否则旨在为结构的所有手性、非对映异构、外消旋形式和所有几何异构形式。在一些实施方案中，本文所描述的化合物具有一或多个手性中心。应理解，若未明确指示绝对立体化学，则各手性中心可独立地具有R-构型或S-构型或其混合物。因此，如从描绘中显而易见的那样，本文所描述的化合物包括在任何或所有不对称原子处的富集或拆分的光学异构体。R-对映异构体和S-对映异构体的外消旋混合物，和包含R-对映异构体和S-对映异构体的对映体富集立体异构混合物，以及单独的光学异构体可被分离或合成，以便实质上不含其对映异构体或非对映异构物配偶体，且这些立体异构体均在本技术的范围内。
含有不对称取代的原子的本公开内容的化合物可以光学活性或外消旋形式被分离。如何制备光学活性形式为本领域中熟知的，诸如通过拆分外消旋形式、通过自光学活性起始物质合成或通过使用手性助剂。
由碳-碳双键周围的取代基排列或环烷基或杂环周围的取代基排列产生的几何异构体也可存在于本公开内容的化合物中。烯烃、C＝N双键或其他类型的双键的几何异构体可存在于本文所描述的化合物中，且所有此类稳定的异构体均被包括在本公开内容中。具体地，本公开内容的化合物的顺式和反式几何异构体也可存在，且可以异构体的混合物形式或以分离的异构体形式被分离。
本公开内容的化合物也包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键的交换以及伴随的质子迁移而产生。互变异构形式包括处于具有相同成分式(empiricalformula)和总电荷的异构质子化状态的质子转移互变异构体。质子转移互变异构体的实例包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、酰胺-亚胺酸对、烯胺-亚胺对和其中一质子可占据杂环系统的两个或更多个位置的环状形式，诸如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡或通过适当取代而在空间上锁定为一种形式。
4.1.4.盐和其他形式
在一些实施方案中，本文所描述的化合物以盐形式存在。在一些实施方案中，所述化合物以药学上可接受的盐形式提供。
被包括在本发明组合物中的本质上为碱性的化合物能够与各种无机酸和有机酸形成多种多样的盐。可用于制备此类碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸为形成无毒酸加成盐的那些酸，所述无毒酸加成盐即含有药理学上可接受的阴离子的盐，包括(但不限于)苹果酸盐、草酸盐、氯化物盐、溴化物盐、碘化物盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐(glucaronate)、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。
含有胺官能基或含氮杂芳基的化合物可本质上为碱性且可与任何数目的无机酸和有机酸反应以形成对应的药学上可接受的盐。常用于形成此类盐的无机酸包括氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及相关无机酸。常用于形成此类盐的有机酸包括对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、富马酸、马来酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸，以及相关有机酸。此类药学上可接受的盐因此包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物盐、溴化物盐、碘化物盐、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐(decanoate)、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐(caprate)、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐、马尿酸盐、葡糖酸盐、乳糖酸盐和相关盐。
盐的实例包括但不限于：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、flucoheptanoate、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐等。
盐的其他实例包括与适合阳离子诸如N+、NH4 +和NW4 +(其中W可为C1-C8烷基)等复合的本公开内容的化合物的阴离子。对于治疗用途，本公开内容的化合物的盐可为药学上可接受的。然而，非药学上可接受的酸和碱的盐也可用于例如药学上可接受的化合物的制备或纯化。
被包括在本发明组合物中的本质上为酸性的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。此类盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，且特别地，钙盐、镁盐、钠盐、锂盐、锌盐、钾盐和铁盐。
包括碱性或酸性部分的化合物也可与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。本公开内容的化合物可含有酸基和碱基两者；例如一个氨基和一个羧酸基。在此种情况下，该化合物可以作为酸加成盐、两性离子或碱盐存在。
本文所描述的化合物可以各种形式存在，包括那些化合物、药学上可接受的盐的结晶、粉末和无定形形式，包括例如所述化合物的多晶型物、假多晶型物、溶剂化物、水合物、非溶剂化多晶型物(包括无水物)、构象多晶型物和无定形形式，以及其混合物。
本文所描述的化合物可以作为溶剂化物，尤其是水合物存在，且除非另外规定，否则旨在为所有此类溶剂化物和水合物。水合物可在制造化合物或包含化合物的组合物期间形成，或水合物可由于化合物的吸湿性而随时间推移形成。本技术的化合物也可以作为有机溶剂化物存在，包括DMF、醚和醇溶剂化物等。任何特定溶剂化物的鉴别和制备均在合成有机化学或药物化学的普通技术人员的技能范围内。
在一些实施方案中，本文所描述的化合物以溶剂化物形式存在。在一些实施方案中，当溶剂化物的溶剂组分为水时，本文所描述的化合物以水合物形式存在。
4.1.5.前药
本公开内容的方面包括ATX抑制剂化合物中的任一种的前药衍生物。在一些实施方案中，本文所描述的化合物以前药形式存在。主题化合物的任何方便的前药形式可例如根据Rautio等人(“Prodrugs:design and clinical applications”,Nature ReviewsDrug Discovery 7,255-270(2008年2月))所描述的策略和方法制备。
应理解，本文所描述和表1中所示的化合物的盐、溶剂化物、水合物、前药和/或立体异构体的所有变体意味着被本公开内容所涵盖。
在一些实施方案中，化合物由表1中的化合物之一的结构表示。本公开内容意味着涵盖表1的化合物，或其盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物和/或同位素标记的形式。
Figure BDA0004163574540000361
Figure BDA0004163574540000371
Figure BDA0004163574540000381
Figure BDA0004163574540000391
Figure BDA0004163574540000401
Figure BDA0004163574540000411
Figure BDA0004163574540000421
Figure BDA0004163574540000431
Figure BDA0004163574540000441
Figure BDA0004163574540000451
4.1.6.化合物合成
本公开内容的化合物可根据本领域中已知的标准方法合成[参见例如Morrison和Boyd的“Organic Chemistry”,第6版,Prentice Hall(1992)]。本公开内容的一些化合物和/或中间体可为可商购可得的，文献中已知的，或可由本领域技术人员使用标准程序容易获得的。本公开内容的一些化合物可使用本文所描述的方案、实施例或中间体合成。在未充分描述化合物、中间体或其变体的合成的情况下，本领域技术人员可认识到，反应时间、试剂的当量数和/或温度可根据本文所描述的反应进行修改，以制备所呈现的化合物或中间体或其变体，且可能需要或期望不同的处理(work-up)和/或纯化技术来制备此类化合物、中间体或变体。
可通过本领域技术人员已知的方法，例如通过核磁共振(NMR)光谱法和/或质谱法来验证合成化合物的适当结构。因此，本公开内容还提供合成前体或中间体化合物。在一些实施方案中，化合物或前体中间体化合物(例如，表1中所列的化合物的合成中的前体)由表1A中的化合物之一或其受保护样式的结构表示。本公开内容意味着涵盖表1A的化合物，或其盐、单一立体异构体、立体异构体的混合物和/或同位素标记的形式。
Figure BDA0004163574540000461
Figure BDA0004163574540000471
4.2.组合物
本公开内容的化合物可以被包括在包括一或多种化合物和至少一种赋形剂(例如，药学上可接受的赋形剂)的组合物中。此类组合物可包括ATX抑制剂。
本文所描述的化合物可用于药物组合物中以在期望抑制ATX的多种治疗应用中向有此需要的受试者施用。在一些实施方案中，本公开内容的化合物可以被配制为药物组合物。
因此，在第二方面，本公开内容提供药物组合物，其包含至少一种本文所描述的化合物、其药学上可接受的盐或其前药，和至少一种药学上可接受的赋形剂。短语“药学上可接受的赋形剂”是指除本文中所描述的本发明的化合物以外的任何成分(例如，能够使活性化合物悬浮或溶解的媒介物)且具有在患者中实质上无毒性和无炎性的特性。赋形剂可包括例如：抗黏剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料(颜料)、软化剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、膜形成剂或包衣、香料(flavor)、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、扩散剂或分散剂、甜味剂和水合用水。在一些实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的如本文中所描述的化合物、其药学上可接受的盐或其前药。
在一些实施方案中，药物组合物被配制用于口服递送。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于向有此需要的受试者胃肠外施用。在一些胃肠外实施方案中，药物组合物被配制用于向有此需要的受试者静脉内施用。在一些胃肠外实施方案中，药物组合物被配制用于向有此需要的受试者皮下施用。
4.3.抑制ATX的方法
本公开内容的方面包括使用本文所描述的ATX抑制剂化合物抑制ATX的方法。此类方法可包括通过使此类系统与ATX抑制化合物(例如，具有根据表1或表1A的那些化合物中的任一种或其药学上可接受的盐的结构的ATX抑制剂化合物)接触来调节(例如，抑制)生物系统中的ATX的方法。生物系统可包括(但不限于)细胞、组织、器官、体液、生物体、非哺乳动物受试者和哺乳动物受试者(例如，人类)。
在一些实施方案中，抑制ATX的方法包含使包含ATX的生物系统或样品与有效量的如本文中所描述的化合物中的任一种或其药学上可接受的盐，或如本文中所描述的药物组合物接触以抑制ATX。在某些实施方案中，生物系统或样品为体外的。在另一实施方案中，生物系统或样品为体内的。
ATX抑制剂可抑制ATX在样品中的酶活性，例如通过实例12中所描述的hATX/ENPP2抑制测定所评估。根据这样的方法的ATX抑制剂可具有小于1000nM，诸如200nM或更小，或20nM或更小的ATX抑制的IC50值(例如，如通过实例12的测定所评估)。生物系统可包括受试者(例如，人类受试者)。
在一些实施方案中，本公开内容提供抑制有此需要的受试者中的ATX活性的方法。在一些情况下，在受试者中抑制的ATX活性的百分比可为至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或至少99.9％。在一些情况下，ATX活性的此抑制水平和/或最大抑制可通过施用之后约1小时至施用之后约3小时、施用之后约2小时至施用之后约4小时、施用之后约3小时至施用之后约10小时、施用之后约5小时至施用之后约20小时或施用之后约12小时至施用之后约24小时来达成。ATX活性的抑制可持续贯穿至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少2周、至少3周、至少4周、至少8周、至少3个月、至少6个月或至少1年的时间段。在一些情况下，此抑制水平可通过每日施用达成。此种每日施用可包括施用至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少2周、至少3周、至少4周、至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少1年或至少5年。在一些情况下，可向受试者施用本公开内容的化合物或组合物持续这样的受试者的终身。
在一些实施方案中，本公开内容提供调节受试者中的LPA或LPA相关的活性的方法。在一些情况下，在受试者中调节的LPA或LPA相关活性的百分比可为至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或至少99.9％。
在一些实施方案中，本公开内容的化合物可用于用以评估ATX抑制的测定中和/或调节LPA或LPA相关生物活性。一些测定可包括诊断测定。在一些情况下，化合物可被包括在药物发现的方法中。在一些实施方案中，本公开内容的方法包括使用本公开内容的ATX抑制化合物评估其他化合物对ATX的抑制。此类方法可包括将ATX抑制化合物与一或多个可检测的标签(例如，荧光染料)结合并测量在其他化合物的存在下ATX离解(经由可检测的标签检测)。可检测的标签可包括荧光化合物。
4.3.1.治疗适应症
在一些实施方案中，本公开内容的方法包括使用本文所公开的化合物和/或组合物治疗治疗适应症的方法。术语“治疗适应症”是指可通过一些形式的治疗或其他治疗干预(例如，通过ATX抑制剂施用)缓解、稳定、改善、治愈或以其他方式解决的任何症状、病症、障碍或疾病。所关注的治疗适应症可包括(但不限于)炎性适应症、自身免疫适应症、增殖性疾病、癌症和纤维化。在某些实施方案中，纤维化发生在肝脏中，例如肝纤维化。与ATX和/或LPA生物活性和/或功能障碍相关的治疗适应症在本文中被称为“ATX相关的适应症”。在一些实施方案中，本公开内容的方法可包括通过施用本文所公开的化合物和/或组合物(例如，ATX抑制剂化合物)治疗ATX相关的适应症。
术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等是指病理过程的减轻或缓解。在本公开内容的上下文中，就其涉及下文所列举的其他病症中的任一种而言，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等意味着减轻或缓解与这样的病症相关的至少一种症状，或减缓或逆转这样的病症的进展或预期进展。
4.4.定义
除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。
应理解，本文所提供的定义并不旨在相互排斥。因此，一些化学部分可属于超过一个术语的定义内。
符号
Figure BDA0004163574540000511
是指为单键或双键的共价键。
当与化学部分诸如烷基、烯基或炔基结合使用时，术语“Cx-Cy”意味着包括链中含有x至y个碳的基团。例如，术语“C1-C6烷基”是指含有1至6个碳的被取代或未被取代的饱和烃基，包括直链烷基和支链烷基。在一些实施方案中，术语“(Cx-Cy)亚烷基”是指亚烷基链中具有x至y个碳的被取代或未被取代的亚烷基链。例如，“(Cx-Cy)亚烷基”可选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基和亚己基，其中的任一者任选地被取代。
术语“烷基”是指非支链或支链饱和烃链。在一些实施方案中，如本文中所使用的烷基具有1至20个碳原子((C1-C20)烷基)、1至10个碳原子((C1-C10)烷基)、1至8个碳原子((C1-C8)烷基)、1至6个碳原子((C1-C6)烷基)、1至5个碳原子((C1-C5)烷基)或1至3个碳原子((C1-C5)烷基)。实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、正己基、2-己基、3-己基和3-甲基戊基。当命名具有特定数目的碳的烷基残基时，可涵盖具有该数目的碳的所有几何异构体。例如，“丁基”可包括正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基，且“丙基”可包括正丙基和异丙基。除非本说明书中另外具体说明，否则烷基链任选地被一或多个取代基，诸如本文所描述的那些取代基取代。
术语“亚烷基”是指将分子的其余部分与游离基基团连接的直链二价烃链，其仅由碳和氢组成，不含不饱和度，且优选地具有1至20个碳原子((C1-C20)亚烷基)、1至10个碳原子((C1-C10)亚烷基)、1至6个碳原子((C1-C6)亚烷基)或1至5个碳原子((C1-C5)亚烷基)。实例包括(但不限于)亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基等。亚烷基链通过单键连接至分子的其余部分并通过单键连接至游离基基团。亚烷基链与分子的其余部分和与游离基基团的连接点分别通过末端碳。除非本说明书中另外具体说明，否则亚烷基链任选地被一或多个取代基诸如本文所描述的那些取代基取代。实例包括亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)、2-甲基亚丙基(-CH2-CH(CH3)-CH2-)、亚己基(-(CH2)6-)等。
术语“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键的脂族烃基，包括直链、支链和环状烯基。在一些实施方案中，烯基具有2-10个碳原子(C2-10烯基)。在另一实施方案中，烯基在链中具有2-4个碳原子(C2-4烯基)。示例性烯基包括(但不限于)乙烯基、丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、庚烯基、辛烯基、环己基-丁烯基和癸烯基。烷基烯基为键合至如本文中所定义的烯基的如本文中所定义的烷基。烯基可未被取代或通过可用的碳原子被一个或多个上文关于烷基所定义的基团取代。
术语“炔基”是指具有2至6个碳原子且优选2至3个碳原子，且具有至少1个和优选1至2个炔属(C≡C-)不饱和位点的直链或支链单价烃基。此类炔基的实例包括(但不限于)乙炔基(C≡CH)和炔丙基(CH2C≡CH)。
术语“芳基”是指具有至少一个烃芳族环的单环或多环基团，其中至少一个烃芳族环的所有环原子均为碳。芳基可包括具有单个芳族环的基团(例如，苯基)和具有多个稠合芳族环的基团(例如，萘基、蒽基)。芳基可进一步包括具有与一或多个非芳族烃环稠合的一或多个芳族烃环的基团(例如，芴基；2,3-二氢-1H-茚；1,2,3,4-四氢萘)。在某些实施方案中，芳基包括具有与非芳族环稠合的芳族烃环的基团，其中非芳族环包含至少一个独立地选自N、O和S的环杂原子。例如，在一些实施方案中，芳基包括具有与非芳族环稠合的苯环的基团，其中非芳族环包含至少一个独立地选自N、O和S的环杂原子(例如，色原烷；硫代色原烷；2,3-二氢苯并呋喃；吲哚啉)。在一些实施方案中，如本文中所使用的芳基具有6至14个碳原子((C6-C14)芳基)或6至10个碳原子((C6-C10)芳基)。在芳基包括稠环的情况下，芳基可通过价数准许的稠环的任何原子连接至本文所描述的式的一个或多个取代基或部分。
术语“环烷基”是指单环或多环饱和烃。在一些实施方案中，环烷基具有3至20个碳原子((C3-C20)环烷基)、3至8个碳原子((C3-C8)环烷基)、3至6个碳原子((C3-C6)环烷基)或3至5个碳原子((C3-C5)环烷基)。在一些实施方案中，环烷基具有3至8个碳原子，其具有单个或多个环状环，包括稠环、桥环和螺环系统。适合的环烷基的实例包括(但不限于)金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、八氢并环戊二烯基(octahydropentalenyl)、八氢-1H-茚、十氢萘、立方烷、双环[3.1.0]己烷和双环[1.1.1]戊烷等。
术语“碳环”是指饱和、不饱和或芳族环系统，其中环系统的各原子均为碳。碳环包括3元至10元单环、6元至12元双环和6元至12元桥环。双环碳环的各环可选自饱和环、不饱和环和芳族环。在示例性实施方案中，芳族环(例如，苯基)可与饱和或不饱和环(例如，环己烷、环戊烷或环己烯)稠合。在价数准许的情况下，双环碳环包括饱和双环、不饱和双环和芳族双环的任何组合。双环碳环包括环大小诸如4-5稠环系统、5-5稠环系统、5-6稠环系统、6-6稠环系统、5-7稠环系统、6-7稠环系统、5-8稠环系统和6-8稠环系统的任何组合。示例性碳环包括环戊基、环己基、环己烯基、金刚烷基、苯基、茚满基和萘基。
术语“杂环”是指包含一或多个杂原子的饱和环、不饱和环或芳族环。示例性杂原子包括N、O、Si、P、B和S原子。杂环包括3元至10元单环、6元至12元双环和6元至12元桥环。在价数准许的情况下，双环杂环包括饱和双环、不饱和双环和芳族双环的任何组合。在示例性实施方案中，芳族环(例如，吡啶基)可与饱和或不饱和环(例如，环己烷、环戊烷、吗啉、哌啶或环己烯)稠合。双环杂环包括环大小诸如4-5稠环系统、5-5稠环系统、5-6稠环系统、6-6稠环系统、5-7稠环系统、6-7稠环系统、5-8稠环系统和6-8稠环系统的任何组合。
术语“杂芳基”是指在环内具有4至10个碳原子和1至4个杂原子的芳族基团，所述杂原子选自氧、氮和硫。此类杂芳基可具有单个环(即吡啶基或呋喃基)或多个缩合环(即中氮茚基或苯并噻吩基)，其中缩合环可为或可不为芳族的和/或含有杂原子，前提条件为连接点是通过芳族杂芳基的原子。在一个实施方案中，杂芳基的氮和/或硫环原子任选地被氧化以提供N氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。优选的杂芳基包括5元或6元杂芳基，诸如吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。
术语“杂烷基”是指其中碳原子和任何所连接的氢原子中的一个或多个独立地被相同或不同的杂原子基团置换的烷基取代基。例如，1、2或3个碳原子可独立地被相同或不同的杂原子取代基置换。
术语“被取代的”是指具有置换化合物的一个或多个碳或可取代的杂原子(例如，NH或NH2)上的氢的取代基的部分。应理解，“取代”或“被……取代”包括以下隐含的前提条件：此种取代符合被取代的原子和取代基的准许价数，且该取代产生稳定化合物。例如，稳定化合物包括但不限于不自发地进行转化(诸如通过重排、环化、消除等)的化合物。在某些实施方案中，被取代是指具有置换相同碳原子上的两个氢原子的取代基的部分，诸如用氧代、亚氨基或硫代取代单个碳上的两个氢原子。术语“被取代”被考虑以包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广泛的方面，可允许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、分支链和非分支链、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。可允许的取代基对于适当的有机化合物而言可以是一个或多个且可以是相同或不同。
本领域技术人员应理解，适当时，取代基本身可被取代。除非明确地被陈述为“未被取代的”，否则在本文中对化学部分的提及应被理解为包括被取代的变体。例如，除非另外规定，否则对“杂芳基”基团或部分的提及隐含地包括被取代的变体和未被取代的变体两者。
当提及化合物特征时，短语“任选地被取代的”可与短语“未被取代的或被取代的”互换使用，且是指当给定原子或基团上可存在或可不存在非氢取代基时，并且因此，该描述包括存在非氢取代基的结构和不存在非氢取代基的结构。例如，“任选地被取代的烷基”涵盖如本文中所定义的“烷基”和“被取代的烷基”两者。本领域技术人员应理解，对于含有一或多个取代基的任何基团，这样的基团不旨在引入空间上不切实际、合成上不可行和/或内在不稳定的任何取代或取代模式。
在一些实施方案中，取代基可包括本文所描述的任何取代基，例如：卤素、羟基、氧代(＝O)、硫代(＝S)、氰基(-CN)、硝基(-NO2)、亚氨基(＝N-H)、肟基(＝N-OH)、肼基(＝N-NH2)、-Rb-ORa、-Rb-OC(O)-Ra、-Rb-OC(O)-ORa、-Rb-OC(O)-N(Ra)2、-Rb-N(Ra)2、-Rb-C(O)Ra、-Rb-C(O)ORa、-Rb-C(O)N(Ra)2、-Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2、-Rb-N(Ra)C(O)ORa、-Rb-N(Ra)C(O)Ra、-RbN(Ra)S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tORa(其中t为1或2)和-Rb-S(O)tN(Ra)2(其中t为1或2)。在另一示例性实施方案中，取代基包括烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中的任一者可任选地被以下取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代、硫代、氰基、硝基、亚氨基、肟基、肼、-RbORa、-Rb-OC(O)-Ra、-Rb-OC(O)-ORa、-Rb-OC(O)-N(Ra)2、-Rb-N(Ra)2、-Rb-C(O)Ra、-Rb-C(O)ORa、-Rb-C(O)N(Ra)2、-Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2、-Rb-N(Ra)C(O)ORa、-Rb-N(Ra)C(O)Ra、-Rb-N(Ra)S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tORa(其中t为1或2)和-Rb-S(O)tN(Ra)2(其中t为1或2)；且其中每个Ra、Rb和Rc独立地选自氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基和杂芳基烷基；且其中在价数准许时，每个Ra、Rb和Rc可任选地被以下取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代、硫代、氰基、硝基、亚氨基、肟基、肼、-RbORa、-Rb-OC(O)-Ra、-Rb-OC(O)-ORa、-Rb-OC(O)-N(Ra)2、-Rb-N(Ra)2、-Rb-C(O)Ra、-Rb-C(O)ORa、-Rb-C(O)N(Ra)2、-Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2、-Rb-N(Ra)C(O)ORa、-Rb-N(Ra)C(O)Ra、-Rb-N(Ra)S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tRa(其中t为1或2)、-Rb-S(O)tORa(其中t为1或2)和-Rb-S(O)tN(Ra)2(其中t为1或2)。
术语“异构体”是指包含相同数目和类型的原子、基团或组分，但具有原子的不同结构排列和连接的两种或更多种化合物。
术语“互变异构体”是指容易从一种异构体形式转化为另一种异构体形式并平衡存在的两种或更多种结构异构体之一。
“立体异构体”是指由通过相同键键合的相同原子构成但具有不可互换的不同三维结构的化合物。本发明考虑各种立体异构体及其混合物并且包括“对映异构体”，其是指其分子是彼此不可重叠的镜像的两种立体异构体。
本公开内容的化合物的单个对映异构体和非对映异构体可由含有不对称或立体异构源中心的市售可得的起始物质合成制备，或通过制备外消旋混合物，随后通过本领域普通技术人员熟知的拆分方法来制备。通过以下举例说明这些拆分方法：(1)将对映异构体的混合物连接至手性助剂，通过重结晶或色谱法分离所得非对映异构体的混合物，和从助剂中释放光学纯产物，(2)采用光学活性拆分剂形成盐，(3)在手性液相色谱法柱上直接分离光学对映异构体的混合物，或(4)使用立体选择性化学或酶试剂进行动力学拆分。外消旋混合物也可通过熟知的方法，诸如手性相气相色谱法或使化合物在手性溶剂中结晶而被拆分成它们各自的对映异构体。立体选择性合成(在新立构中心产生期间或在预先存在的立构中心转化期间单一反应物形成不相等的立体异构体混合物的化学或酶反应)为本领域熟知的。立体选择性合成涵盖对映立体选择性和非对映立体选择性转化两者。参见例如Carreira和Kvaerno,Classics in Stereoselective Synthesis,Wiley-VCH:Weinheim,2009。
符号＝表示可为如本文中所描述的单键、双键或三键的键。碳-碳双键周围的取代基被指定为呈“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”根据IUPAC标准使用。除非另外规定，否则描绘双键的结构涵盖“E”和“Z”异构体两者。
碳-碳双键周围的取代基可替代地可以被称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示双键的相同侧上的取代基而“反式”表示双键的相对侧上的取代基。碳环周围的取代基的排列也可被指定为“顺式”或“反式”。术语“顺式”表示在环平面的相同侧上的取代基，而术语“反式”表示在环平面的相对侧上的取代基。取代基位于环平面的相同侧和相对侧上的化合物的混合物被指定为“顺式/反式”。
除非本文另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述要素的上下文中，诸如“一个/种(a)”、一个/种(an)”和“所述/该(the)”和类似指示物的单数冠词应被解释为涵盖单数和复数两者。除非本文另外指示，否则本文中对值范围的列举仅旨在充当单独提及落入该范围内的各独立值(包括该范围的上限和下限)的简写方法，且各独立值被并入本说明书中，就好像它是在本文中单独列举的一样。除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾，否则本文所描述的所有方法可以任何适合的次序进行。除非另外说明，否则本文中所提供的任何和所有实例或示例性语言(即，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明实施方案，且不会对权利要求的范围造成限制。
在一些实施方案中，除非另外特别说明，否则在定量值之前使用术语“约”时，本公开内容也包括特定定量值本身。除非另外指示或推断，否则如本文中所使用，术语“约”是指与标称值的±10％变化。除非另外说明或自上下文所理解，否则在提供关于组合物中的组分或物质的量的百分比时，该百分比应被理解为基于重量的百分比。
除非另外说明或自上下文所理解，否则在提供例如聚合物的分子量而非绝对值时，则该分子量应被理解为平均分子量。
应理解，步骤次序或用于执行某些动作的次序并不重要，只要本公开内容保持可操作即可。此外，可同时进行两个或更多个步骤或动作。
不在两个字母或符号之间的短划线(“–”)符号是指取代基的键合点或连接点。举例而言，-NH2经由氮原子连接。
术语“药学上可接受的盐”是指对于向受试者施用而言为可接受的盐。应理解，此类具有反离子的盐对于给定剂量方案将具有可接受的哺乳动物安全性。这样的盐也可衍生自药学上可接受的无机碱或有机碱和药学上可接受的无机酸或有机酸，且可包含有机反离子和无机反离子。本文所描述的化合物的中性形式可通过使该化合物与碱或酸接触并分离所得盐而转化为对应盐形式。
术语“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载体”和“药学上可接受的辅助剂(adjuvant)”可互换使用，并且是指可用于制备药物组合物的赋形剂、稀释剂、载体或辅助剂，其一般为安全的、无毒的且在生物学上或其他方面皆为非不期望的，且包括对于兽医学用途以及人类医药用途而言为可接受的赋形剂、稀释剂、载体和辅助剂。短语“药学上可接受的赋形剂”包括一种和超过一种这样的赋形剂、稀释剂、载体和/或辅助剂。
术语“药物组合物”意味着涵盖适合用于向受试者，诸如哺乳动物，尤其人类施用的组合物。一般而言，“药物组合物”为无菌的，且优选不含能够引发受试者体内不希望的反应的污染物(即，药物组合物中的化合物为医药级)。药物组合物可以被设计以经由许多不同的施用途径向有此需要的受试者或患者施用，所述施用途径包括口服、经颊、经直肠、胃肠外、腹膜内、皮内、气管内、肌肉内、皮下等。
4.5.额外的实施方案
在以下编号条款中进一步描述本公开内容的方面：
条款1.一种式(I)的化合物：
Figure BDA0004163574540000591
或其药学上可接受的盐或异构体，其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
条款2.如条款1的化合物，其中X1为N，X2为C-H，且X3为C-H。
条款3.如条款1的化合物，其中X1为C-H，X2为C-H，且X3为C-H。
条款4.如条款1至3中任一项的化合物，其中Y为S。
条款5.如条款1至4中任一项的化合物，其中Z1为C-H，Z2为C-H，且Z3为C-H。
条款6.如条款1至5中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ia)：
Figure BDA0004163574540000601
其中：
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
R3选自R4C(O)-、R4C(O)CH2-、R5R6N-和R5R6HC-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
条款7.如条款6的化合物，其中X1为N。
条款8.如条款6的化合物，其中X1为C-H。
条款9.如条款1至8中任一项的化合物，其中R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。
条款10.如条款9的化合物，其中R7为H3C-。
条款11.如条款1至10中任一项的化合物，其中R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。
条款12.如条款11的化合物，其中R8为-CH2CH3。
条款13.如条款1至12中任一项的化合物，其中R9为-CN。
条款14.如条款1至13中任一项的化合物，其中R11为-卤素。
条款15.如条款14的化合物，其中R11为-F。
条款16.如条款1至15中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ib)：
Figure BDA0004163574540000611
其中：X1为C-H或N；且R1为-H、-卤素或任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基。
条款17.如条款1至16中任一项的化合物，其中：
a)R3为
Figure BDA0004163574540000612
b)R3为
Figure BDA0004163574540000613
c)R3为
Figure BDA0004163574540000614
d)R3为
Figure BDA0004163574540000615
其为任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-；或
e)R3为
Figure BDA0004163574540000616
其为任选地被取代的单环或双环(C3-C8)碳环-或任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-；
其中：
R4选自HO-、H2N-、R15R16N-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环和任选地被取代的单环或双环杂环；
R12选自-H、-NH2、-OH、-CH2C(O)R4、-C(O)R4、-CHR15R16、-NR15R16、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环；且
R13和R14独立地选自-H、-CH2C(O)R17、-CH2R17、-C(O)R17、-R18C(O)R17、-CH2R18C(O)R17、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环，其中R17和R18独立地选自任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环；且
R15和R16独立地选自H-、任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C3-C6)环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的3元至10元饱和单环杂环或碳环和任选地被取代的3元至10元饱和双环杂环或碳环，其中任选的取代基选自羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基和(C1-C5)烷基；或R15和R16被环状连接以形成3元至6元单环饱和杂环，其任选地被羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基或(C1-C5)烷基取代。
条款18.如条款1至17中任一项的化合物，其中：
R3为
Figure BDA0004163574540000621
R4选自R32、R32HN-、R32N(R33)-和R32HN-R36-；
R32和R33独立地选自H-、任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；
R36选自任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；且
R32、R33和R36基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基、-(C1-C3)烷氧基、-(C3-C6)环烷基、(C2-C5)杂环烷基和-N(R37)R38，其中R37和R38独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基和(C2-C5)杂环烷基。
条款19.如条款18的化合物，其中R4选自：
Figure BDA0004163574540000631
条款20.如条款19的化合物，其中所述化合物选自表1的化合物11至16、47至65和87。
条款21.如条款1至17中任一项的化合物，其中：
R3为
Figure BDA0004163574540000632
R14选自R34-、R34CH2-、R34C(O)R35-和R34C(O)R35CH2-；
每个R34和R35独立地选自任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；
R34和R35基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基、-(C1-C3)烷氧基和-(C1-C3)烷基；且
R13为-H。
条款22.如条款21的化合物，其中R14选自：
Figure BDA0004163574540000641
条款23.如条款22的化合物，其中所述化合物选自表1的化合物21、22和34至41。
条款24.如条款1至17中任一项的化合物，其中R3为
Figure BDA0004163574540000642
条款25.如条款24的化合物，其中R3选自：
Figure BDA0004163574540000643
条款26.如条款24或25的化合物，其中：
R12选自H-、H2N-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-NH-、R31-N(CH3)C(O)-、R31-C(O)N(CH3)-、R31-N(CH3)-和R31-O-；
R31选自任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-、(C3-C6)环烷基-和(C2-C5)杂环烷基-。
条款27.如条款24至26中任一项的化合物，其中R12选自：
Figure BDA0004163574540000651
条款28.如条款24至27中任一项的化合物，其中所述化合物选自表1的化合物1至10、17至20、23至33、42至46、66至86、88至98、105至115和118至127。
条款29.如条款1至5中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ie)：
Figure BDA0004163574540000661
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
条款30.如条款29的化合物，其中R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)。
条款31.如条款29或30的化合物，其中所述化合物具有式(If)：
Figure BDA0004163574540000662
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
条款32.如条款29至31中任一项的化合物，其中R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。
条款33.如条款32的化合物，其中R7为H3C-。
条款34.如条款29至33中任一项的化合物，其中R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。
条款35.如条款34的化合物，其中R8为-CH2CH3。
条款36.如条款29至35中任一项的化合物，其中R9为-CN。
条款37.如条款29至36中任一项的化合物，其中R11为-卤素。
条款38.如条款37的化合物，其中R11为-F。
条款39.如条款24或29的化合物，其中所述化合物具有式(Ic)：
Figure BDA0004163574540000671
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-。
条款40.如条款39的化合物，其中R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)。
条款41.如条款39或40的化合物，其中所述化合物具有式(Id)：
Figure BDA0004163574540000681
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
条款42.如条款29至41中任一项的化合物，其中X1为N。
条款43.如条款29至41中任一项的化合物，其中X1为C-H。
条款44.如条款41至43中任一项的化合物，其中所述化合物选自：
Figure BDA0004163574540000691
Figure BDA0004163574540000701
条款45.如条款1至17中任一项的化合物，其中R3为
Figure BDA0004163574540000702
条款46.如条款45的化合物，其中R3为
Figure BDA0004163574540000703
条款47.如条款45或46的化合物，其中：
R12选自H-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-N(CH3)C(O)-和R31-C(O)N(CH3)-；
R31选自任选地被取代的(C1-C3)烷基-、任选地被取代的环烷基-和任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-、(C1-C3)烷氧基-和被取代的(C1-C3)烷基-。
条款48.如条款46至47中任一项的化合物，其中R12选自：
Figure BDA0004163574540000704
条款49.如条款45至48中任一项的化合物，其中所述化合物选自表1的化合物99至104。
条款50.一种药物组合物，其包含：根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的赋形剂。
条款51.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的化合物，其中所述化合物为根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
条款52.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的药物组合物，其中所述药物组合物为根据条款50的药物组合物。
条款53.化合物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制自分泌运动因子(ATX)，其中所述化合物为根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
条款54.药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制自分泌运动因子(ATX)，其中所述药物组合物为根据条款50的药物组合物。
条款55.一种抑制自分泌运动因子的方法，所述方法包含使包含自分泌运动因子的生物系统与有效量的根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐接触以抑制自分泌运动因子。
条款56.如条款55的方法，其中所述生物系统被包含在体外样品中。
条款57.如条款55的方法，其中该生物系统为体内的。
条款58.一种在有此需要的受试者中抑制自分泌运动因子的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，或根据条款50的药物组合物。
条款59.一种在有此需要的受试者中治疗ATX相关的适应症的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，或根据条款50的药物组合物。
条款60.如条款59的方法，其中所述ATX相关的适应症选自炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病、癌症和纤维化。
条款61.如条款60的方法，其中所述纤维化发生在肝脏中，例如所述纤维化为肝纤维化。
条款62.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的化合物，其中所述化合物为根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
条款63.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的药物组合物，其中所述药物组合物为根据条款50的药物组合物。
条款64.化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗ATX相关的适应症，其中所述化合物为根据条款1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
条款65.药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗ATX相关的适应症，其中所述药物组合物为根据条款50的药物组合物。
条款66.如条款64或65的用途，其中所述ATX相关的适应症选自炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病、癌症和纤维化。
条款67.如条款66的用途，其中所述纤维化发生在肝脏中，例如所述纤维化为肝纤维化。
条款68.一种式(II)的化合物：
Figure BDA0004163574540000721
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
R20和R21各自独立地选自H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；或R20和R21与其所连接的硼原子一起形成任选地被取代的杂环；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
条款69.如条款68的化合物，其中所述化合物为：
Figure BDA0004163574540000731
条款70.一种式(III)的化合物：
Figure BDA0004163574540000732
或其药学上可接受的盐或异构体，其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3a选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、卤素、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
条款71.如条款70的化合物，其中所述化合物选自表1A的化合物128至132和134至149。
如本文中所描述，本文涉及本发明化合物、组合物和方法的各种实施方案。所描述的各种实施方案意味着提供各种说明性实例，且不应解释为对可替代的物种的描述。相反，应注意，对本文所提供的各种实施方案的描述可具有重叠的范围。本文中所讨论的实施例仅为说明性的且并不意味着限制本技术的范围。
5.实施例
提供以下实施例以说明本公开内容，且所述实施例不以任何方式被解释为限制本发明技术的范围。功能上等效的任何方法均在本技术的范围内。根据前述描述和随附附图，除本文所描述的那些之外，本技术的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这样的修改落入了所附权利要求的范围内。
除非另外说明，否则所有温度均以摄氏度为单位。已经努力确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应允许一些实验误差和偏差。
所有实验符合对有意识动物进行研究的伦理指南且完全符合以色列中央动物护理委员会(the central Israeli animal care commission)的要求。
在以下实施例中，如果没有定义缩写，则所述缩写具有通常所接受的含义。
aq.＝水性
LC-MS＝液相色谱法-质谱法
MS＝质谱法
THF＝四氢呋喃
NaHCO3＝碳酸氢钠
Cs2CO3＝碳酸铯
NaH＝氢化钠
o/n＝过夜
HATU＝1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0004163574540000751
3-氧化物六氟磷酸盐
r.t.＝室温
LAH＝氢化锂铝
DCM＝二氯甲烷
DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
DIEA＝二异丙基乙胺
equiv.＝当量
EtOAc或EA＝乙酸乙酯
EtOH＝乙醇
EDCI＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
g＝克
h＝小时
HCl＝氢氯酸
HPLC＝高效液相色谱法
HOAc＝乙酸
HOBT＝羟基苯并三唑
M＝摩尔
MeOH＝甲醇
mg＝毫克
mL＝毫升
mmol＝毫摩尔
mp＝熔点
m/z＝质荷比
NaCl＝氯化钠
Na2CO3＝碳酸钠
NMR＝核磁共振
NaOH＝氢氧化钠
Na2SO4＝硫酸钠
ppm＝百万分率
TFA＝三氟乙酸
TLC＝薄层色谱法
TsOH＝对甲苯磺酸
UV＝紫外
wt％＝重量百分比
μM＝微摩尔
5.1.通用合成方法
化合物表征
最终化合物通过HPLC/MS分析确认且被测定为按重量计>90％纯。1H和13C NMR光谱记录于CDCl3(残余内标CHCl3＝δ7.26)、DMSO-d6(残余内标CD3SOCD2H＝δ2.50)、甲醇-d4(残余内标CD2HOD＝δ3.20)或丙酮-d6(残余内标CD3COCD2H＝δ2.05)中。所报导的化学位移(δ)系以百万分率(ppm)给出，且偶合常数(J)以赫兹(Hz)为单位。自旋多重度被报道为s＝单峰、bs＝宽单峰、bm＝宽多重峰、d＝双重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、p＝五重峰、dd＝双重双重峰(doubletof doublet)、ddd＝双重双重双重峰(doublet of doublet of doublet)、dt＝双重三重峰(doublet of triplet)、td＝三重双重峰(triplet of doublet)、tt＝三重三重峰(triplet of triplet)和m＝多重峰。
用梯度洗脱进行HPLC-MS分析。通过硅胶柱在正相和反相两者中进行中压液相色谱法(MPLC)。
5.2.实施例1-胺基连接的嘧啶型化合物的合成
通用方案1
Figure BDA0004163574540000771
5.2.1.化合物128的合成
Figure BDA0004163574540000772
将2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(2g，4.38mmol)、2-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(1.16g，4.82mmol)、Pd(PPh3)4(1.01g，876.55μmol)、Na2CO3(1.86g，17.53mmol)的混合物溶解在二氧杂环己烷(40mL)和水(10mL)中，并在N2下在80℃下搅拌6h。将混合物冷却至室温，然后用水(100mL)稀释，用EA(50mL×2)萃取。有机层经Na2SO4干燥且蒸发，通过硅胶(PE：EA＝1:1)纯化残余物以得到呈棕色固体的化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(2g，88.29％产率)。MS:m/z＝490.2(M+1,ESI+)。
5.2.2.化合物21的合成
Figure BDA0004163574540000781
向2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(150mg，270.93μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(33.19mg，325.11μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(153.32mg，406.39μmol)和DIEA(140.06mg，1.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌6h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用EA(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物21，2-((2-乙基-6-(2-((1-(1-羟基环丙烷-1-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(51mg，29.53％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,2H),8.63(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.45-7.40(m,3H),6.30(s,1H),4.32(s,2H),4.03-4.00(m,1H),3.63(s,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.91-1.88(d,2H),1.42(s,2H),1.28-1.17(m,5H),0.90-0.87(m,2H),0.76-0.73(m,2H)；MS:m/z＝638.2(M+1,ESI+)。
5.2.3.化合物22的合成
Figure BDA0004163574540000791
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，1.02mmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(245.26mg，1.22mmol)在MeCN(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(997.50mg，3.06mmol)，将反应混合物在90℃下搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈棕色固体的4-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(550mg，82.44％产率)。MS:m/z＝654.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，458.88μmol)在MeOH(3mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物22，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(20mg，7.87％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,2H),8.59(s,1H),8.10-8.07(m,2H),7.67(s,2H),7.43-7.39(t,2H),7.32-7.30(d,1H),3.81-3.79(m,1H),3.63(s,3H),2.98-2.95(d,2H),2.70-2.64(dd,2H),2.55(s,1H),1.86-1.80(m,4H),1.39-1.36(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝554.2(M+1,ESI+)。
5.2.4.化合物34的合成
Figure BDA0004163574540000801
步骤一：
向2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800mg，1.63mmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(562.42mg，3.27mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIEA(633.09mg，4.9mmol)，将所得混合物在80℃下搅拌5h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过柱色谱法纯化，得到呈黄色固体的3-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(680mg，66.65％产率)。MS:m/z＝626.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(680mg，1.09mmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(3g，26.31mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下除去过量的溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物34，2-((6-(2-(氮杂环丁烷-3-基氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，70.03％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.67(s,1H),8.15-8.08(m,3H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.81-4.74(m,1H),4.15-4.10(t,2H),3.98-3.94(t,2H),3.63(s,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝526.1(M+1,ESI+)。
5.2.5.化合物35的合成
Figure BDA0004163574540000811
向化合物34，2-((6-(2-(氮杂环丁烷-3-基氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(120mg，228.31μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(46.62mg，456.62μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HOBT(61.70mg，456.62μmol)、EDCI(87.53mg，456.62μmol)和DIEA(118.03mg，913.24μmol)，将所得混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物35，2-((2-乙基-6-(2-((1-(1-羟基环丙烷-1-羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(70mg，50.29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,2H),8.66(s,1H),8.11-8.07(m,3H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),5.98(s,1H),4.74-4.70(t,1H),4.58-4.52(m,1H),4.30(s,1H),4.17-4.13(t,1H),3.82(s,1H),3.63(s,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H),1.03-1.00(dd,2H),0.78-0.75(dd,2H)；MS:m/z＝610.1(M+1,ESI+)。
5.2.6.化合物36的合成
Figure BDA0004163574540000812
步骤一：
向化合物34，2-((6-(2-(氮杂环丁烷-3-基氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(160mg，304.41μmol)和1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(122.51mg，608.83μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HOBT(82.27mg，608.83μmol)、EDCI(116.71mg，608.83μmol)和DIEA(157.37mg，1.22mmol)，将所得混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过柱色谱法纯化，得到呈黄色固体的3-(3-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg，83.42％产率)。MS:m/z＝709.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(3-((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，211.62μmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1.5g，13.15mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物36，2-((6-(2-((1-(氮杂环丁烷-3-羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(68mg，52.79％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.66(s,1H),8.34(s,1H),8.11-8.07(m,3H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.60-4.56(m,1H),4.35-4.31(t,1H),4.18-4.14(t,1H),3.93-3.73(m,6H),3.63(s,3H),3.56-3.50(m,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝609.1(M+1,ESI+)。
5.2.7.化合物37的合成
Figure BDA0004163574540000831
向化合物34，2-((6-(2-(氮杂环丁烷-3-基氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，380.52μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加三光气(56.46mg，190.26μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加DIEA(147.54mg，1.14mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(55.63mg，761.03μmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加到反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物37，2-((2-乙基-6-(2-((1-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(105mg，44.17％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.66(s,1H),8.09-8.03(m,3H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),5.60-5.58(d,1H),4.56-4.53(m,1H),4.39-4.35(m,1H),4.10-4.07(t,2H),3.99-3.95(t,2H),3.76(s,2H),3.63(s,3H),3.59-3.55(m,2H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.23(t,3H)；MS:m/z＝625.1(M+1,ESI+)。
5.2.8.化合物38甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540000832
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(900mg，1.84mmol)和3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(411.24mg，2.21mmol)在二氧杂环己烷(15mL)中的溶液中添加DIEA(951.23mg，7.36mmol)，将所得混合物在100℃下搅拌16h。在冷却至室温之后，将反应混合物倒入水(150mL)中并用EA(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过柱色谱法纯化，得到呈黄色固体的3-(((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(820mg，69.66％产率)。MS:m/z＝640.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.25mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加TFA(142.59mg，1.25mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物38甲酸盐，2-((6-(2-((氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(400mg，59.28％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,2H),8.63(s,1H),8.38(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.63-7.60(t,1H),7.44-7.40(t,2H),3.87-3.82(t,2H),3.67-3.63(m,5H),3.53-3.50(t,2H),3.02-2.97(m,1H),2.69-2.64(dd,3H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝540.2(M+1,ESI+)。
5.2.9.化合物39的合成
Figure BDA0004163574540000851
向化合物38，2-((6-(2-((氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(160mg，296.50μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加三光气(54.99mg，185.31μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加DIEA(191.28mg，1.48mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(43.86mg，0.6mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物39，2-((2-乙基-6-(2-(((1-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(24mg，12.69％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,2H),8.63(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.62-7.59(t,1H),7.44-7.40(t,2H),5.57(s,1H),4.36(s,1H),3.96-3.93(t,2H),3.85-3.81(t,2H),3.63(s,3H),3.58-3.53(m,4H),3.50-3.47(t,2H),2.79-2.75(m,1H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝639.2(M+1,ESI+)。
5.2.10.化合物40的合成
Figure BDA0004163574540000852
步骤一：
向化合物34，2-((6-(2-((氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，555.94μmol)和1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(123.05mg，611.53μmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加HOBT(90.14mg，667.13μmol)、EDCI(127.89mg，667.13μmol)和DIEA(287.40mg，2.22mmol)，将所得混合物在25℃下搅拌3h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用EA(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过柱色谱法纯化，得到呈棕色固体的3-(3-(((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，87.28％产率)。MS:m/z＝723.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(3-(((5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，484.21μmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(2mL)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。在减压下除去过量的溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物40，2-((6-(2-(((1-(氮杂环丁烷-3-羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(30mg，9.95％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,2H),8.63(s,1H),8.09(s,2H),7.68(s,2H),7.64-7.62(t,1H),7.44-7.40(t,2H),4.06-4.02(t,1H),3.89-3.74(m,3H),3.69-3.54(m,6H),3.50-3.41(m,5H),2.81(s,1H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝623.1(M+1,ESI+)。
5.2.11.化合物41的合成
Figure BDA0004163574540000871
向化合物34，2-((6-(2-((氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(41.62mg，407.69μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HOBT(60.09mg，444.75μmol)、EDCI(85.26mg，444.75μmol)和DIEA(191.60mg，1.48mmol)，将所得混合物在25℃下搅拌3h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用EA(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过柱色谱法纯化以得到呈白色固体的化合物41，2-((2-乙基-6-(2-(((1-(1-羟基环丙烷-1-羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(70mg，30.28％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,2H),8.64(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.66-7.64(t,1H),7.44-7.40(t,2H),5.94(s,1H),4.48-4.44(t,1H),4.18-4.15(m,1H),3.90-3.86(t,1H),3.63-3.60(m,4H),3.54-3.51(t,2H),2.85-2.78(m,1H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H),0.99-0.98(d,2H),0.74-0.73(d,2H)；MS:m/z＝624.2(M+1,ESI+)。
5.3.实施例2-氮杂环丁烷连接的嘧啶型化合物的合成通用方案2
Figure BDA0004163574540000881
5.3.1.化合物129盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540000882
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1g，2.04mmol)和氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(386.66mg，2.25mmol)在DMF(20mL)中的混合物中添加Cs2CO3(1.99g，6.12mmol)并在25℃下搅拌3h。将反应混合物用水(100mL)稀释，用DCM(30mL×3)萃取并经Na2SO4干燥。蒸发有机层以得到呈棕色固体的(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，86.13％产率)。MS:m/z＝626.3(M+1,ESI+)。
向(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，1.92mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HCl(3M于EA中，12.79mL)，将混合物在25℃下搅拌3h。然后浓缩，用EA(30mL)洗涤残余物，收集固体以得到呈白色固体的化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(1g，99.00％产率)。MS:m/z＝526.3(M+1,ESI+)。
5.3.2.化合物130的合成
Figure BDA0004163574540000891
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1.2g，2.45mmol)和氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(321.99mg，2.94mmol)在MeCN(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(2.39g，7.35mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物130，2-((2-乙基-6-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(850mg，65.91％产率)。MS:m/z＝527.1(M+1,ESI+)。
5.3.3.化合物131的合成
Figure BDA0004163574540000901
向化合物130，2-((2-乙基-6-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800.00mg，1.52mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加戴斯-马丁(Dess-Martin)(1.29g，3.04mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(680mg，85.33％产率)。MS:m/z＝525.4(M+1,ESI+)。
5.3.4.化合物132的合成
Figure BDA0004163574540000902
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800mg，1.63mmol)和氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯盐酸盐(369.79mg，2.45mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(2.13g，6.53mmol)，将所得混合物在100℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过柱色谱法纯化残余物，得到呈棕色固体的1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(800mg，86.16％产率)。MS:m/z＝569.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(800mg，1.41mmol)在THF(10mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加NaOH(112.55mg，2.81mmol)并在25℃下搅拌16h。将反应混合物用2NHCl酸化至7的pH，用EA(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(10mL×3)和盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过柱色谱法纯化残余物以得到呈棕色固体的化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(440mg，56.41％产率)。MS:m/z＝555.2(M+1,ESI+)。
5.3.5.化合物3的合成
Figure BDA0004163574540000911
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，612.3μmol)和氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(158.18mg，918.5μmol)在MeCN(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(598.49mg，183.7μmol)，将反应混合物在80℃下搅拌2h。过滤并浓缩，通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈黄色固体的(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(210mg，54.81％产率)。MS:m/z＝626.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(210mg，335.6μmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TFA(328.98mg，3.36mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌4h。浓缩并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物3，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(80mg，45.35％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,2H),8.64(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.23-4.19(t,2H),3.82-3.78(m,1H),3.68-3.63(m,5H),2.70-2.64(dd,2H),2.17(t,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝526.1(M+1,ESI+)。
5.3.6.化合物23的合成
Figure BDA0004163574540000921
步骤一：
向溶解在DMF(3mL)中的化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(150mg，285.39μmol)、(2R,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(72.59mg，313.93μmol)、HOBT(46.27mg，342.46μmol)和EDCI(65.65mg，342.46μmol)的混合物中添加DIEA(147.53mg，1.14mmol)并在25℃下搅拌2h。将混合物用水(30mL)稀释，用EA(10mL×3)萃取并经Na2SO4干燥。然后蒸发有机层以得到呈棕色油状的(2R,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(160mg，81.21％产率)。MS:m/z＝739.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(160mg，216.56μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HCl(3M于EA中，1.08mL)，将混合物在25℃下搅拌2h。此后，蒸发反应混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物23，(2R,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(10mg，7.24％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.62(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.70-4.58(m,2H),4.30-4.26(t,2H),4.16(s,1H),3.97-3.95(m,2H),3.75-3.68(m,1H),3.63(s,3H),2.88-2.84(m,1H),2.74-2.64(m,3H),2.02-1.90(m,2H),1.71-1.64(m,1H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝639.4(M+1,ESI+)。
5.3.7.化合物24的合成
Figure BDA0004163574540000931
步骤一：
向溶解在DMF(3mL)中的化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(150mg，285.39μmol)、(2S，4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(72.59mg，313.93μmol)、HOBT(46.27mg，342.46μmol)和EDCI(65.65mg，342.46μmol)的混合物中添加DIEA(147.53mg，1.14mmol)并在25℃下搅拌6h。将混合物用水(30mL)稀释，用EA(10mL×3)萃取并经Na2SO4干燥。然后蒸发有机层以得到呈棕色油状的(2S,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，71.14％产率)。MS:m/z＝739.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，203.02μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HCl(3M于EA中，1.02mL)，将混合物在25℃下搅拌2h。蒸发所得混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物24，(2S,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(70mg，54.26％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.58-8.56(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.62-4.59(m,2H),4.32-4.27(m,2H),4.12-4.08(m,1H),3.98-3.93(m,2H),3.63(s,3H),3.50-3.47(dd,1H),2.88-2.84(dd,1H),2.70-2.64(m,3H),2.15-1.97(m,2H),1.65-1.59(m,1H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝639.4(M+1,ESI+)。
5.3.8.化合物25的合成
Figure BDA0004163574540000951
步骤一：
向溶解在DMF(3mL)中的化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(150mg，285.39μmol)、(2R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(72.59mg，313.93μmol)、HOBT(46.27mg，342.46μmol)和EDCI(65.65mg，342.46μmol)的混合物中添加DIEA(147.53mg，1.14mmol)并在25℃下搅拌4h。将混合物用水(30mL)稀释，用EA(10mL×3)萃取并经Na2SO4干燥。然后蒸发有机层以得到呈棕色油状的(2R,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(155mg，73.51％产率)。MS:m/z＝739.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(155mg，209.79μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HCl(3M于EA中，1.05mL)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。蒸发所得混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物25，(2R,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(24mg，17.91％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.66(s,1H),8.59-8.57(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.63-4.58(m,2H),4.32-4.27(m,2H),4.12-4.08(m,1H),3.98-3.93(m,2H),3.63(s,3H),3.52-3.48(dd,1H),2.89-2.85(dd,1H),2.70-2.64(m,3H),2.15-1.95(m,2H),1.66-1.60(m,1H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝639.4(M+1,ESI+)。
5.3.9.化合物26的合成
Figure BDA0004163574540000961
步骤一：
向溶解在DMF(3mL)中的化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(150mg，285.39μmol)、(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(72.59mg，313.93μmol)、HOBT(46.27mg，342.46μmol)和EDCI(65.65mg，342.46μmol)的混合物中添加DIEA(147.53mg，1.14mmol)并在25℃下搅拌2h。将混合物用水(30mL)稀释，用EA(10mL×3)萃取并经Na2SO4干燥。然后蒸发有机层以得到呈棕色油状的(2S,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(166mg，78.73％产率)。MS:m/z＝739.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(166mg，224.68μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HCl(3M于EA中，1.12mL)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。蒸发所得混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物26，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(70mg，46.14％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.65(s,1H),8.57-8.55(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.63-4.60(m,2H),4.29-4.26(m,2H),4.15(s,1H),3.98-3.93(m,2H),3.70-3.63(m,4H),2.84-2.80(dd,1H),2.72-2.64(m,3H),1.92-1.87(m,2H),1.69-1.63(m,1H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝639.4(M+1,ESI+)。
5.3.10.化合物27甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540000971
步骤一：
向化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，762.53μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(157.59mg，915.03μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(323.22mg，1.53mmol)。将混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(30mL)淬灭并用DCM(30mL×3)萃取，将合并的有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(260mg，50.08％产率)。MS:m/z＝681.6(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(260.00mg，381.91μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(435.45mg，3.82mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物27甲酸盐，2-((6-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(70mg，29.28％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,2H),8.64(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.19-4.17(m,2H),3.93(s,2H),3.72-3.63(m,10H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝581.2(M+1,ESI+)。
5.3.11.化合物27的合成
Figure BDA0004163574540000981
通过制备型HPLC纯化化合物27甲酸盐，2-((6-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(34mg，0.054mmol)以得到呈白色固体的化合物27，2-((6-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(13mg，41.26％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.64(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.18-4.14(t,2H),3.72-3.38(m,13H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝581.3(M+1,ESI+)。
5.3.12.化合物28的合成
Figure BDA0004163574540000991
将化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(159.39mg，303.84μmol)和1-氨基环丙烷-1-甲腈盐酸盐(72.05mg，607.69μmol)在DCM(10mL)中的混合物在25℃下搅拌1h。然后将NaBH(OAc)3(193.19mg，911.53μmol)逐份添加至上述溶液中。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将所得溶液用饱和NH4Cl(30mL)淬灭并用DCM(30mL×3)萃取，将合并的有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物28，2-((6-(2-(3-((1-氰基环丙基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(72mg，40.12％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.66(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.30-4.27(m,2H),4.21-4.18(d,1H),3.91-3.88(m,3H),3.63(s,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H),1.20-1.17(dd,2H),1.01-0.98(dd,2H)；MS:m/z＝591.2(M+1,ESI+)。
5.3.13.化合物29的合成
Figure BDA0004163574540000992
向化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(80mg，142.33μmol)和1-氰基环丙烷-1-羧酸(23.72mg，213.50μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HOBT(29.06mg，213.50μmol)、EDCI(40.93mg，213.50μmol)和DIEA(73.58mg，569.33μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌10h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物29，1-氰基-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)环丙烷-1-甲酰胺(13mg，14.77％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77-8.73(m,3H),8.66(s,1H),8.09(s,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.65(s,1H),4.28(s,2H),4.06(s,2H),3.63(s,3H),2.71-2.67(m,2H),1.57-1.53(m,4H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝619.1(M+1,ESI+)。
5.3.14.化合物30的合成
Figure BDA0004163574540001001
向化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(180mg，343.14μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(50.89mg，411.76μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(145.45mg，686.27μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌24h。将所得混合物用饱和NH4Cl(30mL)淬灭并用DCM(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物30，2-((2-乙基-6-(2-(3-((1-(羟甲基)环丙基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，30.33％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,2H),8.64(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.55-4.52(t,1H),4.24-4.21(t,2H),3.82-3.75(m,3H),3.63(s,3H),3.27-3.25(d,2H),2.93(bs,1H),2.69-2.64(dd,2H),1.28-1.24(t,3H),0.43-0.41(d,4H)；MS:m/z＝596.3(M+1,ESI+)。
5.3.15.化合物31的合成
Figure BDA0004163574540001011
向化合物129盐酸盐，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(80mg，142.33μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(21.80mg，213.50μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HOBT(29.06mg，213.50μmol)、EDCI(40.93mg，213.50μmol)和DIEA(73.58mg，569.33μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物31，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(15mg，17.24％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.73(d,2H),8.63(s,2H),8.07(s,2H),7.67(s,2H),7.42-7.38(t,2H),6.19(s,1H),4.70(s,1H),4.28-4.24(m,2H),4.07-4.06(m,2H),3.63(s,3H),2.68-2.62(m,2H),1.27-1.23(t,3H),1.00(s,2H),0.82(s,2H)；MS:m/z＝610.1(M+1,ESI+)。
5.3.16.化合物32的合成
Figure BDA0004163574540001021
向化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(200mg，360.62μmol)和1-氨基环丙烷-1-甲腈盐酸盐(42.60mg，361.01μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(204.08mg，540.93μmol)和DIEA(186.43mg，1.44mmol)并在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(100mL)中，用EA(30mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物32，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-氰基环丙基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(46mg，20.62％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.76(s,2H),8.66(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.20-4.16(t,2H),4.08-4.05(t,2H),3.63(s,3H),3.45-3.40(m,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.49-1.45(dd,2H),1.28-1.25(t,3H),1.17-1.14(dd,2H)；MS:m/z＝619.2(M+1,ESI+)。
5.3.17.化合物33的合成
Figure BDA0004163574540001022
向化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(200mg，360.62μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇(31.42mg，360.62μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(204.08mg，540.93μmol)和DIEA(186.43mg，1.44mmol)并在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(100mL)中，用EA(30mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物33，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-(羟甲基)环丙基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(114mg，50.68％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.65(s,1H),8.29(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.72-4.69(t,1H),4.15-4.11(t,2H),4.07-4.03(t,2H),3.63(s,3H),3.41-3.36(m,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H),0.67-0.64(m,2H),0.57-0.54(m,2H)；MS:m/z＝624.2(M+1,ESI+)。
5.3.18.化合物70盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001031
步骤一：
向化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(340mg，613.06μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(184.17mg，1.07mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(346.93mg，919.58μmol)和DIEA(237.70mg，1.84mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(50mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的3-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，69.12％产率)。MS:m/z＝709.6(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，423.25μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(2g，17.54mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物70盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(175mg，64.10％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),9.38(s,1H),9.22-9.21(d,1H),9.13(s,1H),8.87(s,2H),8.40-8.37(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.67-4.61(m,1H),4.28-4.24(t,2H),4.16-4.13(t,2H),4.06-3.93(m,4H),3.67(s,3H),3.57-3.50(m,1H),2.91-2.85(dd,2H),1.36-1.33(t,3H)；MS:m/z＝609.1(M+1,ESI+)。
5.3.19.化合物70的合成
Figure BDA0004163574540001041
在0℃下，向化合物70盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(130mg，0.2mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物70，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(100mg，81.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(s,1H),8.76(s,2H),8.66(s,1H),8.08(s,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),7.22(s,1H),4.63-4.58(m,1H),4.23-4.05(m,4H),3.87-3.69(m,2H),3.63(s,3H),3.50-3.48(m,2H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝609.3(M+1,ESI+)。
5.3.20.化合物71盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001051
步骤一：
向化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(340mg，613.06μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(184.17mg，1.07mmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加HATU(346.93mg，919.58μmol)和DIEA(237.70mg，1.84mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(50mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，69.04％产率)。MS:m/z＝737.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，407.13μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(2g，17.54mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物71盐酸盐，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(120mg，43.16％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,2H),9.14(s,1H),8.90(s,2H),8.49-8.48(d,1H),8.41-8.39(d,1H),8.15-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.28-4.24(t,2H),4.15-4.12(t,2H),3.86(s,1H),3.68(s,3H),3.60-3.53(m,1H),3.25-3.22(d,2H),2.95-2.86(m,4H),1.92-1.89(d,2H),1.73-1.65(m,2H),1.37-1.33(t,3H)；MS:m/z＝637.1(M+1,ESI+)。
5.3.21.化合物71的合成
Figure BDA0004163574540001061
在0℃下，向化合物71盐酸盐，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(80mg，0.12mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物71，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(25mg，33％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.65(s,1H),8.24-8.22(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.19-4.15(t,2H),4.07-4.04(t,2H),3.80(s,1H),3.63(s,3H),3.50-3.42(m,1H),3.16-3.13(d,2H),2.84-2.79(t,2H),2.70-2.64(dd,2H),1.84-1.82(m,2H),1.55-1.52(m,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)。
5.3.22.化合物80盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001071
向化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1g，1.91mmol)和1-甲基氮杂环丁烷-3-胺2HCl(454.82mg，2.86mmol)在DCE(10mL)中的溶液中添加DIEA(385.80mg，3.81mmol)并在25℃下搅拌0.5h，然后逐份添加Ti(i-PrO)4(1.08g，3.81mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h并将NaBH3CN(359.392mg，5.72mmol)添加至上述溶液中，将反应混合物在40℃下搅拌另外3h。过滤并在减压下蒸发滤液，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈灰白色固体的化合物80盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(3-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(40mg，3.53％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.02(s,1H),8.94(s,2H),8.37-8.34(d,1H),8.12-8.09(d,1H),8.02-7.98(t,2H),7.21-7.17(t,2H),4.75-4.36(m,10H),3.75(s,3H),3.13(s,2H),3.08(s,1H),2.99-2.94(dd,2H),1.44-1.40(t,3H)；MS:m/z＝595.3(M+1,ESI+)。
5.3.23.化合物80的合成
Figure BDA0004163574540001072
在0℃下，向化合物80盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(3-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(34mg，0.054mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物80，2-((2-乙基-6-(2-(3-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(15mg，46.87％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.67(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),3.77-3.74(m,4H),3.63(s,3H),3.54-3.48(m,5H),3.16(s,2H),2.70-2.64(m,2H),2.20(s,3H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝596.0(M+1,ESI+)。
5.3.24.化合物81盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001081
向化合物3，2-((6-(2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(120mg，228.31μmol)和(2S,4R)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-羧酸(33.14mg，228.31μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加HATU(129.20mg，342.46μmol)和DIEA(88.52mg，684.93μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化以得到呈淡黄色固体的化合物81盐酸盐，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(55mg，35.03％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),9.96-9.95(d,1H),9.16(s,1H),8.91(s,2H),8.42-8.40(d,1H),8.15-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.68-4.66(m,1H),4.42-4.40(d,4H),4.17-4.12(m,2H),3.82-3.79(m,1H),3.68(s,3H),3.08-3.05(d,1H),2.91-2.86(m,5H),2.48-2.43(m,1H),2.10-2.02(m,1H),1.37-1.34(t,3H)；MS:m/z＝653.1(M+1,ESI+)。
5.3.25.化合物81的合成
Figure BDA0004163574540001091
在0℃下，向化合物81盐酸盐，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(19mg，0.027mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物81，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-基)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-甲酰胺(5mg，27.78％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.65(s,1H),8.43-8.41(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.85-4.841(d,1H),4.66-4.60(m,1H),4.30-4.25(m,2H),4.20-4.16(m,1H),3.99-3.96(m,2H),3.63(s,3H),3.26-3.22(m,1H),2.96-2.92(t,1H),2.70-2.64(m,2H),2.24(s,3H),2.19-2.15(m,1H),1.87-1.85(m,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝653.0(M+1,ESI+)。
5.3.26.化合物105的合成
Figure BDA0004163574540001101
向化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，476.58μmol)和环丙胺(43.43mg，498.52μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(202.01mg，953.16μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将有机物用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物105，2-((6-(2-(3-(环丙基氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(86mg，31.90％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.64(s,1H),8.10-8.05(m,2H),7.68(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.22-4.18(t,2H),3.81-3.70(m,3H),3.63(s,3H),2.98(bs,1H),2.69-2.63(dd,2H),2.09-2.05(m,1H),1.28-1.23(t,3H),0.39-0.34(m,2H),0.25-0.20(m,2H)；MS:m/z＝566.1(M+1,ESI+)；HRMS:566.2247。
5.3.27.化合物106的合成
Figure BDA0004163574540001102
向化合物131，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，476.58μmol)和环丁胺(50.84mg，714.87μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(303.02mg，1.43mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将有机物用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物106，2-((6-(2-(3-(环丁基氨基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(92mg，33.30％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(s,2H),8.64(s,1H),8.09-8.07(t,2H),7.68(s,2H),7.43-7.39(t,2H),4.18-4.14(t,2H),3.74-3.63(m,6H),3.18-3.14(m,1H),2.70-2.64(dd,3H),2.07-2.03(m,2H),1.71-1.51(m,4H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝580.2(M+1,ESI+)；HRMS:580.2404。
5.3.28.化合物125的合成
Figure BDA0004163574540001111
向化合物132，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(380mg，685.18μmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(76.92mg，822.22μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(387.75mg，1.03mmol)和DIEA(265.66mg，2.06mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×2)萃取，将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物125，2-((6-(2-(3-(氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(255mg，62.69％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.67(s,1H),8.09(s,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.20-4.16(m,2H),4.11-4.05(m,4H),3.89-3.86(t,2H),3.64(s,3H),3.54-3.40(m,1H),2.70-2.65(dd,2H),2.22-2.18(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝594.1(M+1,ESI+)；HRMS:594.2195。
5.4.实施例3-氮杂环丁烷连接的吡啶化合物的合成通用方案3
方案3
Figure BDA0004163574540001121
5.4.1.化合物133的合成
Figure BDA0004163574540001122
向2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(12g，26.30mmol)和B2pin2(8.68g，34.19mmol)在二氧杂环己烷(200mL)中的溶液中添加KOAc(7.74g，78.89mmol)和Pd(dppf)Cl2(962.06mg，1.31mmol)，将反应混合物在N2下在90℃下搅拌6h。将反应混合物冷却至室温并用饱和NH4Cl(200mL)淬灭，用EA(100mL×3)萃取并将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过反相柱色谱法纯化残余物以得到呈浅黄色固体的化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(7.5g，67.70％产率)。MS:m/z＝422.1(M+1,ESI+)。
5.4.2.1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯的合成
Figure BDA0004163574540001131
向5-溴-2-氯-吡啶(1.3g，6.76mmol)和氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯盐酸盐(1.54g，10.13mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(6.60g，20.27mmol)，将反应混合物在140℃下搅拌5h。将混合物倒入水(200mL)中并用EA(40mL×3)萃取，将有机层用盐水(200mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色油状的1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(300mg，16.38％产率)。MS:m/z＝271.0(M+1,ESI+)。
5.4.3.化合物134的合成
Figure BDA0004163574540001132
步骤一：
向1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(300mg，1.11mmol)和化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(466.14mg，1.11mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(4mL)中的混合物中添加Na2CO3(351.85mg，3.32mmol)和Pd(PPh3)4(127.87mg，110.66μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(60mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(210mg，33.43％产率)。MS:m/z＝568.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸甲酯(210mg，369.96μmol)在MeOH(9mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(88.60mg，3.70mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。在减压下浓缩反应混合物，并将残余物倒入2N HCl(20mL)中并用EA(10mL×2)萃取，将有机层用盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物134，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(195mg，95.21％产率)。MS:m/z＝554.1(M+1,ESI+)。
5.4.4.1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇的合成
Figure BDA0004163574540001141
向氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(3.3g，45.15mmol)和5-溴-2-氯-吡啶(8.69g，45.15mmol)在DMF(50mL)中的混合物中添加K2CO3(18.72g，135.44mmol)，将反应混合物在120℃下搅拌3h。将混合物倒入水(500mL)中，用EA(100mL×3)萃取。将有机物用盐水(300mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(600mg，5.80％产率)。MS:m/z＝229.0(M+1,ESI+)。
5.4.5.化合物148的合成
Figure BDA0004163574540001151
步骤一：
向1-(5-溴吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇(600mg，2.62mmol)和化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(1.10g，2.62mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(4mL)中的混合物中添加Na2CO3(832.83mg，7.86mmol)和Pd(PPh3)4(302.67mg，261.92μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(60mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-((2-乙基-6-(6-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(660mg，47.94％产率)。MS:m/z＝526.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-((2-乙基-6-(6-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(660mg，1.26mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加戴斯-马丁(1.07g，2.51mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。蒸发混合物并通过柱色谱法纯化以得到呈黄色固体的化合物148，2-((2-乙基-6-(6-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(450mg，68.44％产率)。MS:m/z＝524.0(M+1,ESI+)。
5.4.6.化合物97的合成
Figure BDA0004163574540001161
向化合物134，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(195mg，352.23μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇(36.82mg，422.68μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(199.33mg，528.35μmol)和DIEA(136.57mg，1.06mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物97，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)-N-(1-(羟甲基)环丙基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(95mg，43.31％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.47-8.46(d,1H),8.27(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.67(s,2H),7.44-7.39(t,2H),6.47-6.45(d,1H),4.71-4.68(t,1H),4.06-4.02(t,2H),3.96-3.93(t,2H),3.63(s,3H),3.42-3.38(m,3H),2.69-2.63(dd,2H),1.28-1.24(t,3H),0.67-0.53(m,4H)；MS:m/z＝623.2(M+1,ESI+)；HRMS:623.2351。
5.4.7.化合物124的合成
Figure BDA0004163574540001162
向化合物134，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-羧酸(510mg，921.23μmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(57.86mg，1.01mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(525.42mg，1.38mmol)和DIEA(357.18mg，2.76mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物124，2-((6-(6-(3-(氮杂环丁烷-1-羰基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(277mg，50.73％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.48-8.47(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.95-7.92(dd,1H),7.67(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.48-6.44(d,1H),4.11-4.07(t,4H),3.99-3.95(t,2H),3.89-3.85(t,2H),3.64(s,3H),3.57-3.52(m,1H),2.69-2.64(dd,2H),2.24-2.16(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝593.3(M+1,ESI+)；HRMS:593.2245。
5.4.8.化合物109的合成
Figure BDA0004163574540001171
向化合物148，2-((2-乙基-6-(6-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(450mg，859.46μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(159.32mg，1.29mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(364.31mg，1.72mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(50mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将有机物用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物109，2-((2-乙基-6-(6-(3-((1-(羟甲基)环丙基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(155mg，30.33％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.45-8.44(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.91-7.89(dd,1H),7.64(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.43-6.41(d,1H),4.54-4.51(t,1H),4.17-4.13(t,2H),3.83-3.78(m,1H),3.65-3.63(m,5H),3.27-3.26(d,2H),2.86(bs,1H),2.69-2.63(dd,2H),1.28-1.24(t,3H),0.45-0.39(m,4H),；MS:m/z＝595.2(M+1,ESI+)；HRMS:595.2396。
5.5.实施例4-CH2-羰基连接的嘧啶型化合物的合成通用方案4
Figure BDA0004163574540001181
5.5.1.化合物135的合成
Figure BDA0004163574540001182
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(4g，9.50mmol)和2-(5-溴嘧啶-2-基)乙酸甲酯(2.19g，9.50mmol)在二氧杂环己烷(40mL)和H2O(8mL)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(109.73mg，94.95μmol)和Na2CO3(2.01g，18.99mmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌5h。将反应混合物冷却至室温并用饱和NH4Cl(200mL)淬灭，用EA(100mL×3)萃取并将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸甲酯(3g，59.89％产率)。MS:m/z＝528.1(M+1,ESI+)。
向2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸甲酯(3g，5.69mmol)在THF(20mL)和H2O(20mL)中的溶液中添加LiOH(900mg，37.58mmol)，将所得混合物在40℃下搅拌1h。冷却至室温并将反应混合物用2N HCl酸化至2的pH，用EA(20mL×3)萃取并将合并的有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(2.5g，77.89％产率)。MS:m/z＝514.0(M+1,ESI+)。
5.5.2.化合物52的合成
Figure BDA0004163574540001191
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(100mg，194.72μmol)和氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(21.35mg，292.09μmol)在DCM(6mL)中的溶液中添加HATU(111.06mg，292.09μmol)和DIEA(75.50mg，584.17μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(20mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物52，2-((2-乙基-6-(2-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(89mg，80.1％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,2H),8.89(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.82(dd,1H),7.78-7.76(dd,1H),7.44-7.40(t,2H),5.73-5.72(d,1H),4.48-4.36(m,2H),4.06-4.02(dd,1H),3.96-3.92(dd,1H),3.79(s,2H),3.64(s,3H),3.61-3.57(dd,1H),2.71-2.66(dd,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝569.1(M+1,ESI+)。
5.5.3.化合物53甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001201
步骤一：
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(800mg，1.56mmol)和氮杂环丁烷-3-酮盐酸盐(132.87mg，1.87mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加DIEA(603.99mg，4.67mmol)和T3P(1.49g，2.34mmol，50％纯度)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，用EA(50mL×2)萃取，用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-((2-乙基-6-(2-(2-氧代-2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，45.32％产率)。MS:m/z＝567.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-((2-乙基-6-(2-(2-氧代-2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，705.96μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(121.58mg，705.96μmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐份添加NaBH(OAc)3(448.86mg，2.12mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，用DCM(50mL×3)萃取，用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-((1-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(180mg，35.27％产率)。MS:m/z＝723.6(M+1,ESI+)。
步骤三：
向3-((1-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(170mg，235.19μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加TFA(26.82mg，235.19μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物53甲酸盐，2-((6-(2-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(59mg，40.29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,2H),8.91(s,1H),8.73(s,1H),8.62(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.89-7.80(m,2H),7.44-7.40(t,2H),4.35-4.32(t,1H),4.01-3.75(m,10H),3.65-3.55(m,6H),2.73-2.68(dd,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝623.2(M+1,ESI+)。
5.5.4.化合物53的合成
Figure BDA0004163574540001221
通过制备型HPLC纯化化合物53甲酸盐，2-((6-(2-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(85mg，0.127mmol)以得到呈白色固体的化合物53，2-((6-(2-(2-(3-(氮杂环丁烷-3-基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(6mg，7.59％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.89(s,1H),8.08(s,2H),7.84-7.76(dd,2H),7.43-7.40(t,2H),4.28(s,1H),3.94-3.52(m,13H),3.34(s,3H),2.69-2.68(d,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝623.3(M+1,ESI+)。
5.5.5.氮杂环丁烷-3-基(甲基)氨基甲酸苯甲酯的合成
Figure BDA0004163574540001222
步骤一：
在0℃下，向3-(甲基氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10.74mmol)在DMF(20mL)中的溶液中逐份添加NaH(859.12mg，21.48mmol，60％纯度)并在此温度下搅拌0.5h，然后将CbzOSu(4.01g，16.11mmol)添加至上述溶液中并在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(200mL)中并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈白色固体的3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.3g，10.30mmol)。MS:m/z＝265.1(M-56+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.3g，10.30mmol)在DCM(25mL)中的溶液中添加TFA(7.70g，67.53mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。在减压下蒸发反应混合物，得到呈黄色固体的氮杂环丁烷-3-基(甲基)氨基甲酸苯甲酯(2.12g，93.44％产率)。MS:m/z＝221.2(M+1,ESI+)。
5.5.6.化合物54的合成
Figure BDA0004163574540001231
向氮杂环丁烷-3-基(甲基)氨基甲酸苯甲酯(643.37mg，2.92mmol)和化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(1g，1.95mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HATU(1.11g，2.92mmol)和DIEA(754.99mg，5.84mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(200mL)中并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的(1-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基)(甲基)氨基甲酸苯甲酯(1.1g，79.13％产率)。MS:m/z＝716.3(M+1,ESI+)。
向(1-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)氮杂环丁烷-3-基(甲基)氨基甲酸苯甲酯(300.00mg，419.11μmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(300mg，10％纯度)，将反应混合物在H2下在25℃下搅拌16h。过滤并在减压下蒸发滤液，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物54，2-((2-乙基-6-(2-(2-(3-(甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(26mg，10.67％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.89(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.82(dd,1H),7.78-7.76(dd,1H),7.44-7.40(t,2H),4.30-4.26(t,1H),3.97-3.92(m,1H),3.88-3.85(dd,1H),3.79-3.77(d,2H),3.64(s,3H),3.55-3.51(dd,1H),3.46-3.32(m,1H),2.71-2.66(dd,2H),2.28(s,1H),2.19(s,3H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝582.2(M+1,ESI+)。
5.5.7.化合物55的合成
Figure BDA0004163574540001241
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和(S)-吡咯烷-3-醇(27.99mg，321.30μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加T3P(139.40mg，438.13μmol)和DIEA(113.25mg，876.26μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(200mL)中并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物55，(S)-2-((2-乙基-6-(2-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(40mg，22.96％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,2H),8.90(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.82(dd,1H),7.78-7.76(d,1H),7.44-7.39(t,2H),5.02-4.93(dd,1H),4.32-4.25(d,1H),4.00-3.94(m,2H),3.64-3.59(m,4H),3.43-3.39(m,2H),3.30-3.23(m,1H),2.71-2.66(dd,2H),2.02-1.72(m,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝583.1(M+1,ESI+)。
5.5.8.化合物56的合成
Figure BDA0004163574540001251
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(27.99mg，321.30μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加T3P(139.40mg，438.13μmol)和DIEA(113.25mg，876.26μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(200mL)中并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物56，(R)-2-((2-乙基-6-(2-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(80mg，45.92％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,2H),8.90(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.82(dd,1H),7.78-7.76(d,1H),7.44-7.39(t,2H),5.02-4.93(dd,1H),4.32-4.25(d,1H),4.00-3.94(m,2H),3.65-3.59(m,4H),3.41-3.34(m,2H),3.30-3.23(m,1H),2.72-2.66(dd,2H),2.01-1.72(m,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝583.1(M+1,ESI+)。
5.5.9.化合物57的合成
Figure BDA0004163574540001261
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和哌啶-4-醇(32.50mg，321.30μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加T3P(139.40mg，438.13μmol)和DIEA(113.25mg，876.26μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(200mL)中并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物57，2-((2-乙基-6-(2-(2-(4-羟基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(70mg，40.04％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,2H),8.90(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.83(dd,1H),7.78-7.76(d,1H),7.44-7.40(t,2H),4.73-4.72(d,1H),4.05(s,2H),3.91-3.88(m,1H),3.77-3.65(m,5H),3.23-3.18(t,1H),3.05-2.99(t,1H),2.71-2.66(dd,2H),1.70(s,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝597.1(M+1,ESI+)。
5.5.10.化合物58的合成
Figure BDA0004163574540001262
步骤一：
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(250mg，486.81μmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90.67mg，486.81μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(185.18mg，486.81μmol)和DIEA(62.92mg，486.81μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的4-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，90.39％产率)。MS:m/z＝682.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，366.69μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加含3M HCl的EA(2mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物58，2-((2-乙基-6-(2-(2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(96mg，45.01％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,2H),8.90(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.85-7.83(dd,1H),7.78-7.76(d,1H),7.44-7.40(t,2H),4.04(s,2H),3.65(s,3H),3.43-3.37(m,4H),2.71-2.61(m,7H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝582.2(M+1,ESI+)。
5.5.11.化合物59的合成
Figure BDA0004163574540001281
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(140mg，272.61μmol)和吗啉(35.62mg，408.92μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(155.48mg，408.92μmol)和DIEA(105.70mg，817.84μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物59，2-((2-乙基-6-(2-(2-吗啉代-2-氧代乙基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，39.11％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,2H),8.90(s,1H),8.09(s,2H),7.85-7.83(d,1H),7.78-7.76(d,1H),7.44-7.40(t,2H),4.08(s,2H),3.65(s,3H),3.57-3.46(m,8H),2.71-2.67(m,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝583.1(M+1,ESI+)。
5.5.12.化合物60的合成
Figure BDA0004163574540001282
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和NH4Cl(31.25mg，584.17μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(166.59mg，438.13μmol)和DIEA(113.25mg，876.26μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物60，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(50mg，33.40％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.88(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.84-7.76(dd,2H),7.53(s,1H),7.44-7.39(t,2H),7.04(s,1H),3.78(s,2H),3.65(s,3H),2.72-2.66(dd,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝513.1(M+1,ESI+)。
5.5.13.化合物61的合成
Figure BDA0004163574540001291
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和甲胺盐酸盐(23.5mg，350.87μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(165.29mg，438.13μmol)和DIEA(151mg，1.17mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物61，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-甲基乙酰胺(35mg，22.76％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.87(s,1H),8.08-8.02(m,3H),7.84-7.76(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.78(s,2H),3.64(s,3H),2.71-2.66(dd,2H),2.61-2.59(d,3H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝527.3(M+1,ESI+)。
5.5.14.化合物62的合成
Figure BDA0004163574540001301
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和环丙胺(20.01mg，350.50μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(165.29mg，438.13μmol)和DIEA(151mg，1.17mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物62，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-环丙基乙酰胺(30mg，18.59％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.88(s,1H),8.21(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.84-7.76(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.73(s,2H),3.64(s,3H),2.71-2.61(m,3H),1.29-1.26(t,3H),0.63-0.59(m,2H),0.43-0.39(m,2H)；MS:m/z＝553.3(M+1,ESI+)。
5.5.15.化合物63的合成
Figure BDA0004163574540001311
步骤一：
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(250mg，486.81μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(83.84mg，486.81μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(277.48mg，729.78μmol)和DIEA(188.75mg，1.46mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的3-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(270mg，80.07％产率)。MS:m/z＝668.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(250mg，374.39μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加含3M HCl的EA(2mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物63，N-(氮杂环丁烷-3-基)-2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(47mg，22.12％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.88(s,1H),8.67-8.65(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.84-7.76(m,2H),7.44-7.39(t,2H),4.51-4.45(m,1H),3.79(s,2H),3.64(s,3H),3.58-3.54(t,2H),3.45-3.41(t,2H),2.71-2.66(dd,2H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝568.4(M+1,ESI+)。
5.5.16.化合物64的合成
Figure BDA0004163574540001321
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和1-氨基环丙烷-1-甲腈盐酸盐(69mg，584.17μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(166.59mg，438.13μmol)和DIEA(113.25mg，876.26μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物64，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-氰基环丙基)乙酰胺(42mg，24.89％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,2H),9.08(s,1H),8.90(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.86-7.76(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.81(s,2H),3.64(s,3H),2.72-2.66(dd,2H),1.50-1.46(dd,2H),1.29-1.26(t,3H),1.16-1.12(dd,2H)；MS:m/z＝578.1(M+1,ESI+)。
5.5.17.化合物65的合成
Figure BDA0004163574540001322
步骤一：
向化合物135，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酸(150mg，292.09μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(87.75mg，438.13μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(165.29mg，438.13μmol)和DIEA(151.00mg，1.17mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的4-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，49.20％产率)。MS:m/z＝696.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，143.88μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加含3M HCl的EA(2mL)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物65，2-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)乙酰胺(67mg，78.27％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.88(s,1H),8.10-8.07(m,3H),7.84-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.77(s,2H),3.64(s,3H),3.58(s,1H),3.32-3.20(m,3H),2.90-2.87(d,2H),2.71-2.66(dd,2H),2.46-2.40(t,2H),1.69-1.66(d,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝596.3(M+1,ESI+)。
5.6.实施例5-羰基连接的嘧啶型化合物的合成
通用方案5
Figure BDA0004163574540001341
5.6.1.化合物136的合成
Figure BDA0004163574540001342
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(3.1g，7.36mmol)和5-溴嘧啶-2-羧酸甲酯(1.60g，7.36mmol)在二氧杂环己烷/H2O(60mL/10mL)中的溶液中添加Na2CO3(2.34g，22.08mmol)和Pd(PPh3)4(425.19mg，367.95μmol)。将反应混合物在Ar下在100℃下搅拌3h。将所得溶液倒入水(200mL)中并用EA(50mL×3)萃取。将水层用2N HCl(100mL)酸化，并用EA(50mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到呈黄色固体的化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(2.3g，62.57％产率)。MS:m/z＝500.0(M+1,ESI+)。
5.6.2.氮杂环丁烷-3-酮盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001343
向3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(10.00g，58.41mmol)在EA(50mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，58.41mL)。将反应混合物在25℃下搅拌5h。蒸发所得溶液以得到呈浅黄色固体的氮杂环丁烷-3-酮盐酸盐(4.57g，72.75％产率)。
5.6.3.化合物137的合成
Figure BDA0004163574540001351
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(750.00mg，1.50mmol)和氮杂环丁烷-3-酮盐酸盐(177.61mg，1.65mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加DIEA(582.15mg，4.50mmol)和T3P(1.43g，2.25mmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。将所得溶液用饱和NH4Cl(80mL)淬灭并用EA(80mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物137，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(610mg，73.52％产率)。MS:m/z＝553.1(M+1,ESI+)。
5.6.4.化合物11的合成
Figure BDA0004163574540001352
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(1g，2.00mmol)和氮杂环丁烷-3-醇(146.33mg，2.00mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加DIEA(776.19mg，6.01mmol)和T3P(1.91g，3.00mmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物11，2-((2-乙基-6-(2-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，36.03％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(s,2H),9.00(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.92-7.90(dd,1H),7.80-7.78(dd,1H),7.44-7.40(t,2H),5.79-5.78(d,1H),4.59-4.50(m,2H),4.32-4.27(m,1H),4.17-4.14(dd,1H),3.84-3.80(dd,1H),3.66(s,3H),2.72-2.67(dd,2H),1.30-1.26(m,3H)；MS:m/z＝555.1(M+1,ESI+)。
5.6.5.化合物12的合成
Figure BDA0004163574540001361
向化合物137，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(280mg，506.71μmol)和环丙胺(37.61mg，658.73μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(214.79mg，1.01mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物12，2-((6-(2-(3-(环丙基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(52.6mg，17.49％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),9.00(s,1H),8.09(s,2H),7.91-7.89(d,1H),7.80-7.77(d,1H),7.43-7.39(t,2H),4.53-4.49(t,1H),4.24-4.14(m,2H),3.81-3.79(t,1H),3.65(s,4H),3.01(s,1H),2.70-2.60(d,2H),2.02(s,1H),1.29-1.26(t,3H),0.35-0.33(d,2H),0.21(s,2H)；MS:m/z＝594.1(M+1,ESI+)。
5.6.6.化合物13的合成
Figure BDA0004163574540001371
向化合物137，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(290mg，538.44μmol)和环丁胺(49.78mg，699.97μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(228.23mg，1.08mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物13，2-((6-(2-(3-(环丁基氨基)氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(50.4mg，15.40％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),9.00(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.92-7.89(dd,1H),7.80-7.78(d,1H),7.44-7.40(t,2H),4.49-4.45(t,1H),4.21-4.17(t,1H),4.09-4.05(m,1H),3.76-3.73(m,1H),3.65(s,3H),3.63-3.57(m,1H),3.15-3.09(m,1H),2.72-2.67(dd,3H),2.05-1.98(m,2H),1.70-1.49(m,4H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝608.1(M+1,ESI+)。
5.6.7.化合物14的合成
Figure BDA0004163574540001381
向化合物137，2-((2-乙基-6-(2-(3-氧代氮杂环丁烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500.00mg，904.84μmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(101.58mg，1.09mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(287.66mg，1.36mmol)。将混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物14，2-((6-(2-([1,3'-双氮杂环丁烷]-1'-羰基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(53mg，9.87％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),8.99(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.92-7.89(dd,1H),7.81-7.78(d,1H),7.44-7.40(t,2H),4.39-4.35(t,1H),4.13-4.04(m,2H),3.80-3.76(dd,1H),3.65(s,3H),3.41-3.35(m,1H),3.16-3.12(t,4H),2.72-2.67(dd,2H),2.00-1.93(m,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝594.1(M+1,ESI+)。
5.6.8.化合物15的合成
Figure BDA0004163574540001382
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨
基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(260mg，520.50μmol)和哌啶-4-醇(52.65mg，520.50μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加T3P(496.84mg，780.75μmol，50％纯度)和DIEA(201.81mg，1.56mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×3)萃取，将合并的有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物15，2-((2-乙基-6-(2-(4-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(83mg，27.37％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,2H),8.96(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.90-7.87(dd,1H),7.80-7.78(dd,1H),7.44-7.40(t,2H),4.81-4.80(d,1H),4.05-4.00(m,1H),3.77-3.72(m,1H),3.65(s,3H),3.30-3.27(m,2H),3.06-2.99(m,1H),2.72-2.67(dd,2H),1.83-1.81(m,1H),1.69-1.66(m,1H),1.45-1.26(m,5H)；MS:m/z＝583.1(M+1,ESI+)。
5.6.9.化合物16的合成
Figure BDA0004163574540001391
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(130mg，260.25μmol)和1-氨基环丙烷-1-甲腈盐酸盐(46.28mg，390.38μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIEA(134.54mg，1.04mmol)和T3P(331.23mg，520.50μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×3)萃取，将合并的有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物16，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-(1-氰基环丙基)嘧啶-2-甲酰胺(50.7mg，34.57％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),9.38(s,2H),9.00(s,1H),8.09(s,2H),7.93-7.90(d,1H),7.82-7.80(d,1H),7.44-7.40(t,2H),3.66(s,3H),2.72-2.67(dd,2H),1.58(s,2H),1.34-1.26(m,5H)；MS:m/z＝564.1(M+1,ESI+)。
5.6.10.化合物47的合成
Figure BDA0004163574540001401
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(200mg，400.39μmol)和吡咯烷(34.17mg，480.46μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(155.24mg，1.20mmol)和T3P(382.18mg，600.58μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物47，2-((2-乙基-6-(2-(吡咯烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(70.0mg，31.64％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(s,2H),8.97(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.91-7.88(dd,1H),7.81-7.78(dd,1H),7.44-7.40(t,2H),3.66(s,3H),3.52-3.49(t,2H),3.34-3.31(m,2H),2.72-2.67(dd,2H),1.90-1.82(m,4H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝553.3(M+1,ESI+)。
5.6.11.(5-溴嘧啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮的合成
Figure BDA0004163574540001411
向5-溴嘧啶-2-羧酸(1g，4.93mmol)和吡咯烷(419mg，5.91mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加DIEA(1.9g，14.79mmol)和T3P(592mg，7.4mmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。将所得溶液用饱和NH4Cl(150mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈无色油状的(5-溴嘧啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(630mg，50％产率)。
5.6.12.化合物47盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001412
将化合物133，(5-溴嘧啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(400mg，1.56mmol)、(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(985mg，2.34mmol)、Pd(PPh3)4(180mg，156μmol)和Na2CO3(496mg，4.68mmol)的混合物溶解在二氧杂环己烷(40mL)和水(10mL)中，并在N2下在80℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，然后用水(100mL)稀释，用EA(50mL×2)萃取。将有机层经Na2SO4干燥并蒸发，通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈棕色固体的化合物47盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(吡咯烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(250mg，29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,2H),9.31(s,1H),8.46-8.44(d,1H),8.19-8.17(d,1H),8.04-8.01(t,2H),7.42-7.38(t,2H),3.68(s,3H),3.53-3.50(t,2H),3.34-3.31(t,2H),2.90-2.85(dd,2H),1.91-1.83(m,4H),1.37-1.33(t,3H)；MS:m/z＝553.2(M+1,ESI+)。
5.6.13.化合物48的合成
Figure BDA0004163574540001421
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(200mg，400.39μmol)和(S)-吡咯烷-3-醇(41.86mg，480.46μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(155.24mg，1.20mmol)和T3P(382.18mg，600.58μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物48，(S)-2-((2-乙基-6-(2-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(71mg，31.19％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,2H),8.97(s,1H),8.09(s,2H),7.91-7.89(d,1H),7.81-7.78(d,1H),7.44-7.40(t,2H),5.05-4.99(dd,1H),4.35-4.26(d,1H),3.66(s,3H),3.62-3.38(m,4H),2.72-2.67(dd,2H),2.00-1.76(m,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝569.3(M+1,ESI+)。
5.6.14.化合物49的合成
Figure BDA0004163574540001431
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(200mg，400.39μmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(41.86mg，480.46μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(155.24mg，1.20mmol)和T3P(382.18mg，600.58μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物49，(R)-2-((2-乙基-6-(2-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，27.31％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,2H),8.98(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.91-7.89(dd,1H),7.81-7.78(d,1H),7.44-7.40(t,2H),5.05-4.99(dd,1H),4.35-4.26(d,1H),3.66(s,3H),3.62-3.38(m,4H),2.73-2.67(dd,2H),1.99-1.77(m,2H),1.30-1.27(t,3H)；MS:m/z＝569.3(M+1,ESI+)。
5.6.15.化合物50的合成
Figure BDA0004163574540001432
步骤一：
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(200mg，400.39μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯盐酸盐(91.91mg，440.43μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加DIEA(155.24mg，1.20mmol)和T3P(382.18mg，600.58μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，76.41％产率)。MS:m/z＝654.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(190.00mg，290.64μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(165.69mg，1.45mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物50，N-(氮杂环丁烷-3-基)-5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-甲酰胺(85mg，52.83％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,2H),9.26-9.24(d,1H),8.99(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.91-7.89(d,1H),7.82-7.80(d,1H),7.44-7.39(t,2H),4.75-4.69(m,1H),3.66-3.55(m,7H),2.73-2.67(dd,2H),1.30-1.27(t,3H)；MS:m/z＝554.1(M+1,ESI+)。
5.6.16.化合物51的合成
Figure BDA0004163574540001451
步骤一：
向化合物136，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-羧酸(200mg，400.39μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯盐酸盐(113.74mg，480.46μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加DIEA(155.24mg，1.20mmol)和T3P(382.18mg，600.58μmol，50％纯度)。将反应混合物在25℃下搅拌3h。将所得溶液用饱和NH4Cl(50mL)淬灭并用EA(50mL×2)萃取，将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(215mg，78.76％产率)。MS:m/z＝682.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(215mg，315.35μmol)在二氧杂环己烷(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的二氧杂环己烷(525.58μL，1.57mmol)。将混合物在25℃下搅拌5h。蒸发所得溶液并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物51，5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-(哌啶-4-基)嘧啶-2-甲酰胺(65mg，35.52％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,2H),8.97(s,1H),8.63-8.61(d,1H),8.10-8.07(t,2H),7.91-7.88(dd,1H),7.82-7.80(d,1H),7.44-7.40(t,2H),3.86-3.84(m,1H),3.66(s,3H),2.96-2.93(d,2H),2.73-2.67(dd,2H),2.55-2.51(t,3H),1.75-1.72(d,2H),1.53-1.44(m,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝582.3(M+1,ESI+)。
5.7.实施例6-羰基连接的吡啶型化合物的合成
通用方案6
Figure BDA0004163574540001461
5.7.1.(5-溴吡啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮的合成
Figure BDA0004163574540001462
向5-溴吡啶甲酸(1.5g，7.43mmol)和吡咯烷(633.74mg，8.91mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加HATU(4.24g，11.14mmol)和DIEA(2.88g，22.28mmol，3.88mL)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl(300mL)淬灭并用EA(50mL×3)萃取，将有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色油状的(5-溴吡啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(760mg，40.12％产率)。MS:m/z＝255.0(M+1,ESI+)。
5.7.2.化合物87的合成
Figure BDA0004163574540001463
向化合物133，(5-溴吡啶-2-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(200mg，783.97μmol)和(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(297.23mg，705.58μmol)在二氧杂环己烷(10mL)和水(2mL)中的混合物中添加Na2CO3(249.28mg，2.35mmol)和Pd(PPh3)4(45.30mg，39.20μmol)，将反应混合物在100℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×3)萃取，将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物87，2-((2-乙基-6-(6-(吡咯烷-1-羰基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(110mg，25.44％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.04-9.03(d,1H),8.88(s,1H),8.34-8.32(dd,1H),8.11-8.08(t,2H),7.86-7.75(m,3H),7.44-7.40(t,2H),3.65-3.64(m,5H),3.53-3.50(t,2H),2.72-2.66(dd,2H),1.85-1.83(m,4H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝552.1(M+1,ESI+)；HRMS:552.1976。
5.8.实施例7-哌嗪连接的嘧啶型化合物的合成
通用方案7
Figure BDA0004163574540001471
5.8.1.4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0004163574540001481
步骤一：
向5-溴-2-氯嘧啶(20g，103.40mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(28.89g，155.10mmol)在二氧杂环己烷(200mL)中的溶液中添加K2CO3(28.58g，206.79mmol)。将混合物在110℃下搅拌4h。将混合物倒入水(600mL)中并用EA(600mL×2)萃取。将有机层用水(300mL×2)和盐水(300mL×1)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(27g，76.08％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,2H),3.70-3.67(m,4H),3.40-3.38(m,4H),1.42(s,9H)；MS:m/z＝343.1(M+1,ESI+)。
步骤二
向4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10g，29.14mmol)和B2pin2(8.14g，32.05mmol)在二氧杂环己烷(300mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(2.13g，2.91mmol)和KOAc(11.44g，116.54mmol)。将混合物在N2下在90℃下搅拌16h。将混合物倒入水(600mL)中并用EA(200mL×2)萃取。将有机层用水(600mL×2)和盐水(600mL×1)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.7g，32.54％产率)。MS:m/z＝391.1(M+1,ESI+)。
5.8.2.化合物4盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001491
步骤一：
向2-((6-溴-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800mg，1.75mmol)和4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(821.05mg，2.10mmol)在DME/H2O(16mL/4mL)中的混合物中添加Na2CO3(371.62mg，3.51mmol)和Pd(PPh3)4(101.29mg，87.66μmol)。将反应混合物在N2下在90℃下搅拌1.5h。将混合物倒入水(40mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1g，89.16％产率)。MS:m/z＝640.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g，1.88mmol)在EA(10mL)中的混合物中添加含3M HCl的EA(3M，20mL)并在25℃下搅拌3h。过滤混合物并用EA洗涤固体滤饼，然后在减压下干燥以得到呈黄色固体的化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(1g，98.79％产率)。MS:m/z＝540.3(M+1,ESI+)。
5.8.3.化合物4的合成
Figure BDA0004163574540001501
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，612.3μmol)和哌嗪(791.13mg，918.5μmol)在MeCN(20mL)中的溶液中添加K2CO3(254mg，183.7μmol)，将反应混合物在80℃下搅拌2h。过滤并浓缩，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(120mg，36.32％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.39(t,2H),3.71-3.68(t,4H),3.64(s,3H),2.74-2.70(m,4H),2.68-2.64(q,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝540.2(M+1,ESI+)。
5.8.4.化合物5的合成
Figure BDA0004163574540001502
步骤一：
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(100mg，185.31μmol)、(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(51.42mg，222.38μmol)、HOBT(37.56mg，277.97μmol)和EDCI(53.29mg，277.97μmol)在DMF(8mL)中的混合物中添加DIEA(95.80mg，741.25μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌6h。将混合物倒入水(40mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(105mg，75.26％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS:m/z＝753.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(130mg，172.68μmol)在EA(5mL)中的混合物中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)并在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化以得到呈白色固体的化合物5，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(51mg，45.53％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.67(s,1H),8.09(s,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.70-4.69(d,1H),4.17(s,1H),4.05-4.01(t,1H),3.81-3.45(m,13H),3.07-3.02(dd,1H),2.70-2.64(q,2H),1.86-1.75(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝653.2(M+1,ESI+)。
5.8.5.化合物5盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001511
步骤一：
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(700mg，1.30mmol)、(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(360mg，1.56mmol)、HOBT(263mg，1.95mmol)和EDCI(373mg，1.95mmol)在DMF(15mL)中的混合物中添加DIEA(670mg，5.19mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌6h。将混合物倒入水(150mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(850mg，87％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS:m/z＝753.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.13mmol)在EA(10mL)中的混合物中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)并在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化以得到呈白色固体的化合物5盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(485mg，62.3％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),9.15(s,1H),8.93(s,2H),8.69(s,1H),8.44-8.42(d,1H),8.15-8.13(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.77(s,1H),4.44(s,1H),3.90-3.83(m,4H),3.69-3.61(m,7H),3.37-3.34(m,1H),3.13(s,1H),2.92-2.87(dd,2H),2.46-2.41(m,1H),2.01-1.94(m,1H),1.38-1.34(t,3H)；MS:m/z＝653.3(M+1,ESI+)。
5.8.6.化合物6的合成
Figure BDA0004163574540001531
步骤一：
向(2R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(72.25mg，312.45μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加DIEA(107.68mg，833.20μmol)、HOBT(42.22mg，312.45μmol)和EDCI(59.83mg，312.45μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。然后将化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(120mg，208.30μmol)添加到反应混合物中。将所得混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过硅胶柱(PE:EA＝1:1)纯化，得到呈棕色油状的(2R,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，粗物质)。MS:m/z＝753.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，199.24μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C1810μm OBD19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物6，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2R,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(15mg，11.53％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.65(s,1H),8.08(s,2H),7.70(s,2H),7.43-7.39(t,2H),4.55(s,1H),4.41(s,1H),3.81-3.49(m,13H),2.83-2.80(d,1H),2.68-2.56(m,3H),2.24(s,1H),1.47(s,1H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝653.2(M+1,ESI+)。
5.8.7.化合物6盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001541
步骤一：
向(2R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(360mg，1.56mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加DIEA(670mg，5.19mmol)、HOBT(263mg，1.95mmol)和EDCI(373mg，1.95mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。然后将化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(700mg，1.30mmol)添加至反应混合物中。将所得混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(150mL)中并用EA(40mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过硅胶柱(PE:EA＝1:1)纯化，得到(2R,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(400mg，39.1％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS:m/z＝753.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.53mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C1810μm OBD19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物6盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2R,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(212mg，57.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),9.54(s,1H),9.09(s,1H),8.90(s,2H),8.53(s,1H),8.37-8.35(d,1H),8.12-8.10(d,1H),8.03-8.00(t,2H),7.42-7.38(t,2H),4.64-4.60(m,1H),4.39(s,1H),4.05-4.03(t,1H),3.95-3.92(m,2H),3.81-3.80(m,2H),3.70-3.53(m,6H),3.19-3.16(m,3H),2.90-2.84(dd,2H),2.66-2.60(m,1H),1.83-1.79(m,1H),1.35-1.31(t,3H)；MS:m/z＝653.3(M+1,ESI+)。
5.8.8.化合物7的合成
Figure BDA0004163574540001551
步骤一：
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(150mg，260.38μmol)和(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(60.22mg，260.42μmol)在DCM(6mL)中的混合物中添加DIEA(134.61mg，1.04mmol)和HATU(148.50mg，390.56μmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的(2S,4S)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，粗物质)。MS:m/z＝753.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4S)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，199.24μmol)在EA(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物7，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4S)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(24mg，18.46％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.66(s,1H),8.09(s,2H),7.70(s,2H),7.43-7.39(t,2H),4.51(s,1H),4.14(s,1H),3.82-3.50(m,13H),2.83-2.80(d,1H),2.70-2.56(m,3H),2.24(s,1H),1.47(s,1H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝653.2(M+1,ESI+)。
5.8.9.化合物8的合成
Figure BDA0004163574540001561
步骤一：
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(0.12g，208.30μmol)和DIEA(107.69mg，833.20μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加(2R,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(57.80mg，249.96μmol)、EDCI(59.90mg，312.45μmol)和HOBT(42.22mg，312.45μmol)。将所得混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的(2R,4S)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(156mg，99.48％产率)。MS:m/z＝753.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4S)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(120mg，159.39μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物8，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2R,4S)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(31mg，29.80％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.67(s,1H),8.11-8.07(m,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.71-4.70(d,1H),4.18(s,1H),4.06-4.02(t,1H),3.82-3.68(m,4H),3.63-3.49(m,8H),3.07-3.03(dd,1H),2.70-2.64(q,2H),2.56-2.52(dd,1H),1.88-1.75(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝653.2(M+1,ESI+)。
5.8.10.化合物9的合成
Figure BDA0004163574540001571
步骤一：
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(100mg，185.31μmol)、1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(44.75mg，222.38μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HOBT(37.56mg，277.97μmol)、EDCI(53.29mg，277.97μmol)和DIEA(95.80mg，741.2μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌6h。将反应混合物倒入水(40mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(100mg，74.65％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS:m/z＝723.3(M+1,ESI+)。
步骤二
向3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(110.00mg，152.18μmol)在EA(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物9，2-((6-(2-(4-(氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(20mg，21.10％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.66(s,1H),8.09(s,2H),7.70(s,2H),7.44-7.39(t,2H),3.76-3.63(m,11H),3.52-3.49(m,5H),2.70-2.63(m,3H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝623.2(M+1,ESI+)。
5.8.11.化合物10的合成
Figure BDA0004163574540001591
向化合物4盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(100mg，173.58μmol)和1-(羟甲基)环丙烷-1-羧酸(24.19mg，208.30μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加DIEA(89.74mg，694.34μmol)、EDCI(49.91mg，260.38μmol)和HOBT(35.44mg，260.38μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物倒入水(40mL)中并用DCM(10mL×2)萃取。将有机层用水(20mL×2)和盐水(40mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物10，2-((2-乙基-6-(2-(4-(1-(羟甲基)环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(31mg，28.18％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.66(s,1H),8.08(s,2H),7.70(s,2H),7.42(s,2H),4.86(s,1H),3.78(s,4H),3.63(s,7H),3.47(s,2H),2.66(s,2H),1.28-1.24(t,3H),0.75-0.70(d,4H)；MS:m/z＝638.1(M+1,ESI+)。
5.8.12.化合物42的合成
Figure BDA0004163574540001592
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，370.63μmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加三光气(54.99mg，185.31μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加TEA(112.51mg，1.11mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将吡咯烷(52.72mg，741.25μmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物42，2-((2-乙基-6-(2-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(35mg，14.89％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.67(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),3.80-3.77(t,4H),3.63(s,3H),3.31-3.28(m,4H),3.25-3.23(m,4H),2.70-2.64(dd,2H),1.77-1.74(t,4H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝637.4(M+1,ESI+)。
5.8.13.化合物43的合成
Figure BDA0004163574540001601
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，370.63μmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加三光气(54.99mg，185.31μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加TEA(112.51mg，1.11mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将(R)-吡咯烷-3-醇(64.58mg，741.25μmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物43，(R)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(100mg，41.34％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.67(s,1H),8.09-8.07(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.92(s,1H),4.22(s,1H),3.83-3.74(m,4H),3.63(s,3H),3.52-3.45(m,2H),3.28-3.18(m,5H),3.13-3.10(d,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.82-1.71(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝653.6(M+1,ESI+)；HRMS:653.2564。
5.8.14.化合物43盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001611
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(600mg，1.11mmol)在DCM(15mL)中的混合物中添加三光气(165mg，556μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加TEA(338mg，3.33mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将(R)-吡咯烷-3-醇(194mg，2.22mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters XbridgeC1810μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物43盐酸盐，(R)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(290mg，34.27％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),8.87(s,2H),8.39-8.36(dd,2H),8.13-8.11(d,1H),8.03-7.99(t,2H),7.42-7.38(t,2H),4.22(s,1H),3.87-3.76(m,4H),3.66(s,3H),3.52-3.45(m,2H),3.31-3.18(m,5H),3.13-3.10(d,1H),2.90-2.85(dd,J1＝7.6Hz,2H),1.84-1.71(m,2H),1.35-1.31(t,3H)；MS:m/z＝653.3(M+1,ESI+)。
5.8.15.化合物44的合成
Figure BDA0004163574540001621
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，370.63μmol)在DCM(10mL)中的混合物中添加三光气(54.99mg，185.31μmol)并在0℃下搅拌0.5h，然后添加TEA(112.51mg，1.11mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将(3S)-吡咯烷-3-醇(64mg，734.62μmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌0.5h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物44，(S)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(39mg，16.59％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.67(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.89-4.88(d,1H),4.22(s,1H),3.84-3.74(m,4H),3.63(s,3H),3.52-3.45(m,2H),3.29-3.18(m,5H),3.12-3.09(d,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.80-1.73(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝653.2(M+1,ESI+)。
5.8.16.化合物138的合成
Figure BDA0004163574540001631
步骤一：
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，926.56μmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加NaH(111.18mg，2.78mmol，60％纯度)，将反应混合物在室温下搅拌30min。然后添加2-溴乙酸乙酯(232.11mg，1.39mmol)并在室温下搅拌3h。将反应混合物用水(200mL)淬灭并用EA(20mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(344mg，59.33％产率)。MS:m/z＝626.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(344mg，549.77μmol)在THF(5mL)和H2O(10mL)中的溶液中添加LiOH(19.75mg，824.65μmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用EA(20mL×3)萃取。将水层用2N HCl调整至PH 5-6并用DCM(20mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到化合物138，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(300mg，91.46％产率)。MS:m/z＝598.3(M+1,ESI+)。
5.8.17.化合物45的合成
Figure BDA0004163574540001641
向化合物138，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(150mg，250.98μmol)和(R)-吡咯烷-3-醇盐酸盐(31.02mg，250.98μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(286.29mg，752.93μmol)和DIEA(162.18mg，1.25mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到化合物45，(R)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(95mg，58.53％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.97-4.88(dd,1H),4.30-4.29(d,1H),3.78(s,4H),3.63(s,3H),3.58-3.52(m,2H),3.28-3.23(m,1H),3.16-3.09(m,2H),2.70-2.64(dd,2H),2.50-2.49(m,3H),1.95-1.68(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.2(M+1,ESI+)。
5.8.18.化合物45盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001642
向化合物138，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(1.2g，2mmol)和(R)-吡咯烷-3-醇盐酸盐(248mg，2mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HATU(2.29g，6.02mmol)和DIEA(1.3g，10mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(80mL)淬灭并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C1810μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到化合物45盐酸盐，((R)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(270mg，17.3％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),9.15(s,1H),8.95(s,2H),8.43-8.41(d,1H),8.14-8.12(d,1H),7.99(s,2H),7.41-7.36(t,2H),4.71-4.68(m,2H),4.38-4.25(m,3H),3.67-3.38(m,9H),3.35-3.25(m,5H),2.90-2.85(dd,2H),1.95-1.81(m,2H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝667.2(M+1,ESI+)。
5.8.19.化合物46的合成
Figure BDA0004163574540001651
向化合物138，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(150mg，250.98μmol)和(S)-吡咯烷-3-醇盐酸盐(46.52mg，376.47μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加HATU(286.29mg，752.93μmol)和DIEA(162.18mg，1.25mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到化合物46，(S)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(105mg，62.87％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.99-4.90(dd,1H),4.30-4.29(d,1H),3.78(s,4H),3.63(s,3H),3.60-3.52(m,2H),3.40-3.36(m,2H),3.29-3.23(m,1H),3.16-3.11(m,2H),2.70-2.64(dd,2H),2.55-2.51(m,3H),1.91-1.71(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.2(M+1,ESI+)。
5.8.20.化合物46盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001661
向化合物138，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(1.2g，2mmol)和(S)-吡咯烷-3-醇盐酸盐(248mg，2mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HATU(2.29g，6.02mmol)和DIEA(1.3g，10mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C1810μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到化合物46盐酸盐，(S)-2-((2-乙基-6-(2-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(201mg，12.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.18(s,1H),8.97(s,2H),8.46-8.43(d,1H),8.16-8.14(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.73-4.70(m,2H),4.41-4.30(m,3H),3.69-3.39(m,9H),3.37-3.27(m,5H),2.92-2.87(dd,2H),1.94-1.81(m,2H),1.38-1.34(t,3H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.8.21.化合物66盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001671
步骤一：
在0℃下，向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(550mg，1.02mmol)在DCM(6mL)中的混合物中添加三光气(120.98mg，407.69μmol)并搅拌0.5h，然后添加DIEA(395.18mg，3.06mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(175.53mg，1.02mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌1h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(600mg，79.78％产率)。MS:m/z＝738.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(600mg，813.18μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(2g，17.54mmol)并在25℃下搅拌1h。在减压下蒸发所得混合物，然后通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物66盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(220mg，42.42％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),9.24(s,1H),9.11(s,1H),8.89(s,2H),8.41-8.39(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.64(s,1H),7.42-7.38(t,2H),4.59-4.55(t,1H),4.03-3.98(m,4H),3.80(s,4H),3.67(s,3H),3.46(s,4H),2.91-2.85(dd,2H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝638.2(M+1,ESI+)。
5.8.22.化合物66甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001681
步骤一：
在0℃下，向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(230mg，0.427mmol)在DCM(6mL)中的混合物中添加三光气(38mg，0.128mmol)并搅拌0.5h，然后添加DIEA(165mg，1.28mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(73mg，0.427mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌1h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，63.7％产率)。MS:m/z＝738.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，271μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(666mg，90μmol)并在25℃下搅拌1h。在减压下蒸发所得混合物，然后通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.1％ FA在水中；B：CH3CN，5％至95％)在FA条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物66甲酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺甲酸盐(150mg，81.1％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.66(s,1H),8.42(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.54-4.48(m,1H),3.93-3.88(t,2H),3.77-3.70(m,8H),3.63(s,3H),3.43-3.40(m,4H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝638.2(M+1,ESI+)。
5.8.23.化合物66的合成
Figure BDA0004163574540001691
在0℃下，向化合物66甲酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺甲酸盐(120mg，0.175mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈黄色固体的化合物66，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺(75mg，66.96％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.39(t,2H),7.08-7.06(d,J＝6.8Hz,1H),3.74-3.51(m,13H),2.70-2.64(dd,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝638.3(M+1,ESI+)。
5.8.24.化合物67盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001701
步骤一：
在0℃下，向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(550mg，1.02mmol)在DCM(6mL)中的混合物中添加三光气(120.98mg，407.69μmol)并搅拌0.5h，然后添加DIEA(395.18mg，3.06mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(204.13mg，1.02mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌2h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(540mg，69.18％产率)。MS:m/z＝766.5(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(540mg，705.05μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(2g，17.54mmol)并在25℃下搅拌1h。在减压下蒸发所得混合物，然后通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物67盐酸盐，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(240mg，51.13％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,3H),8.88(s,2H),8.41-8.39(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),6.67(s,2H),3.78-3.67(m,8H),3.43(s,4H),3.25-3.22(d,2H),2.91-2.85(dd,2H),1.89-1.86(m,2H),1.74-1.66(m,2H),1.36-1.33(t,3H)；MS:m/z＝666.4(M+1,ESI+)。
5.8.25.化合物67的制备
Figure BDA0004163574540001711
通过制备型HPLC纯化化合物67盐酸盐，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(180mg，0.253mmol)以得到呈白色固体的化合物67，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺(122mg，72.62％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,2H),8.66(s,1H),8.10-8.07(m,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.30(d,2H),3.75-3.73(m,4H),3.63(s,3H),3.51-3.46(m,8H),2.93-2.90(d,2H),2.70-2.64(dd,2H),2.49-2.42(m,2H),1.68-1.65(d,2H),1.25(t,3H)；MS:m/z＝666.1(M+1,ESI+)。
5.8.26.化合物67甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001721
步骤一：
在0℃下，向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(230mg，0.427mmol)在DCM(6mL)中的混合物中添加三光气(51mg，170.5μmol)并搅拌0.5h，然后添加DIEA(165mg，1.28mmol)并在0℃下搅拌另外0.5h。此后，将4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(85mg，0.427mmol)添加至上述反应混合物中并在25℃下搅拌1h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用DCM(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，76.7％产率)。MS:m/z＝766.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250mg，326μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TFA(95mg，978μmol)并在25℃下搅拌1h。在减压下蒸发所得混合物，然后通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.1％FA在水中；B：CH3CN，5％至95％)在FA条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物67甲酸盐，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺甲酸盐(155mg，66.8％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,2H),8.66(s,1H),8.39(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.50(s,1H),3.74-3.63(m,9H),3.40-3.38(m,5H),3.16(s,2H),2.79-2.64(m,4H),1.83-1.81(m,2H),1.54(s,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝666.3(M+1,ESI+)。
5.8.27.化合物1的合成
Figure BDA0004163574540001731
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，520.75μmol)和1-氰基环丙烷-1-羧酸(57.85mg，520.75μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(294.70mg，781.13μmol)和DIPEA(269.21mg，2.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用EA(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物1，2-((6-(2-(4-(1-氰基环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(65mg，18.51％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(s,2H),8.69(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.72-7.71(dd,2H),7.44-7.40(t,2H),3.87-3.63(m,10H),2.95-2.90(d,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.64-1.60(m,2H),1.54-1.51(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝633.5(M+1,ESI+)。
5.8.28.化合物2的合成
Figure BDA0004163574540001741
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，370.62μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(45.40mg，444.74μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(211.39mg，555.93μmol)和DIEA(143.70mg，1.11mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(100mL)中，用EA(20mL×3)萃取，用盐水(100mL)洗涤并经Na2SO4干燥。将合并的有机层在减压下浓缩，通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物2，2-((2-乙基-6-(2-(4-(1-羟基环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(90mg，38.93％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.68(s,1H),8.11-8.10(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.40(s,1H),3.81-3.64(m,11H),2.71-2.64(dd,2H),1.29-1.25(t,3H),0.97-0.94(m,2H),0.81-0.78(m,2H)；MS:m/z＝624.2(M+1,ESI+)。
5.8.29.化合物78盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001742
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，520.75μmol)和(2S,4R)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-羧酸(104.91mg，722.72μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(314.61mg，833.91μmol)和DIPEA(215.55mg，1.67mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用EA(50mL×2)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物78盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4R)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(100mg，25.57％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),9.12(s,1H),8.92(s,2H),8.42-8.39(d,1H),8.15-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),5.04-4.98(m,1H),4.40(s,1H),3.88-3.77(m,5H),3.67-3.56(m,7H),3.08-3.05(m,1H),2.90-2.85(m,5H),2.50-2.45(m,1H),2.09-2.02(m,1H),1.36-1.33(t,3H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.8.30.化合物78的合成
Figure BDA0004163574540001751
通过制备型HPLC纯化化合物78盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4R)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(60mg，0.077mmol)以得到呈白色固体的化合物78，2-((2-乙基-6-(2-(4-((2S,4R)-4-羟基-1-甲基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(25mg，49.02％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.67(s,1H),8.10-8.07(m,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.89-4.88(m,1H),4.22(s,1H),3.85-3.82(m,2H),3.70-3.60(m,8H),3.48-3.42(m,2H),3.25-3.21(m,1H),2.70-2.64(dd,2H),2.22(s,3H),2.15-2.11(m,1H),2.00-1.95(m,1H),1.89-1.84(m,1H),1.26-1.23(t,3H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.8.31.化合物79盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001761
向化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，520.75μmol)和1-甲基氮杂环丁烷-3-羧酸(83.21mg，722.72μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HOBT(112.68mg，833.91μmol)、EDCI(159.86mg，833.91μmol)和DIPEA(215.55mg，1.67mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将水(50mL)添加至反应混合物中，然后用EA(50mL×2)萃取。有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物79盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(210mg，56.14％产率)。1H NMR(400MHz,D2O+DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.86(s,2H),8.40-8.37(d,1H),8.14-8.12(d,1H),7.97(s,2H),7.39-7.35(t,2H),4.48-4.41(m,2H),4.07-3.95(m,3H),3.85(s,4H),3.68(s,3H),3.62(s,2H),3.41(s,2H),2.91-2.83(m,5H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)。
5.8.32.化合物79的合成
Figure BDA0004163574540001771
在0℃下，向化合物79盐酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(130mg，0.193mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物79，2-((2-乙基-6-(2-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(70mg，57％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,2H),8.64(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,1H),7.44-7.40(t,2H),4.18-4.14(t,2H),3.72-3.33(m,9H),2.77-2.64(m,4H),2.26(s,3H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝637.0(M+1,ESI+)。
5.8.33.化合物82盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001772
向1-甲基氮杂环丁烷-3-胺2HCl(176.85mg，1.11mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加CDI(90.14mg，555.94μmol)和DIEA(112.51mg，1.11mmol)并在25℃下搅拌3h。然后将化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，555.94μmol)添加至上述反应溶液中，并将反应混合物在25℃下搅拌16h。将水(100mL)添加至反应混合物中，然后用EA(30mL×3)萃取。将有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物82盐酸盐，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(220mg，57.50％产率)。1H NMR(400MHz,D2O+DMSO-d6)δ9.04(s,1H),8.86(s,2H),8.40-8.38(dd,1H),8.15-8.12(d,1H),7.99-7.96(t,2H),7.40-7.35(t,2H),4.61-4.48(m,1H),4.42-4.28(m,2H),4.11-4.04(m,2H),3.82(s,4H),3.68(s,3H),3.47(s,4H),2.93-2.87(m,5H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝652.2(M+1,ESI+)。
5.8.34.化合物82的合成
Figure BDA0004163574540001781
在0℃下，向化合物82盐酸盐，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(60mg，0.078mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物82，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-甲酰胺(8mg，15.68％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.66(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),6.91-6.89(d,1H),4.22-4.17(m,1H),3.76-3.70(m,4H),3.63-3.56(m,5H),3.40-3.38(m,4H),2.97(s,2H),2.70-2.64(m,2H),2.31(s,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝652.0(M+1,ESI+)。
5.8.35.(4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)(环丙基)甲酮的合成
Figure BDA0004163574540001791
步骤一：
向哌嗪(2.67g，31.02mmol)和5-溴-2-氯嘧啶(3g，15.51mmol)在MeCN(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(15.16g，46.53mmol)，将反应混合物在80℃下搅拌2h。过滤并浓缩混合物。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的5-溴-2-哌嗪-1-基-嘧啶(1.4g，37.13％产率)。MS:m/z＝243.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向环丙烷羧酸(389.54mg，4.52mmol)和5-溴-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(1g，4.11mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加HATU(2.35g，6.17mmol)和DIEA(1.59g，12.34mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(150mL)中并用EA(50mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)(环丙基)甲酮(530mg，41.41％产率)。MS:m/z＝311.1(M+1,ESI+)。
5.8.36.化合物110的合成
Figure BDA0004163574540001801
向(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(406.12mg，964.08μmol)和(4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)(环丙基)甲酮(300mg，964.08μmol)在二氧杂环己烷(10mL)和水(2mL)中的混合物中添加Na2CO3(306.55mg，2.89mmol)和Pd(PPh3)4(557.03mg，482.04μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(60mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈白色固体的化合物110，2-((6-(2-(4-(环丙烷羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(154mg，26.29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,2H),8.68(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.39(t,2H),,3.85-3.77(m,6H),3.64(s,3H),3.61-3.56(m,2H),2.71-2.65(dd,2H),2.03-1.99(m,1H),1.29-1.25(t,3H),0.79-0.70(m,4H)；MS:m/z＝608.1(M+1,ESI+)；HRMS:608.2351。
5.8.37.1-环丙基氮杂环丁烷-3-羧酸的合成
Figure BDA0004163574540001802
步骤一：
向氮杂环丁烷-3-羧酸乙酯(4g，30.97mmol)在MeOH(20mL)和EtOH(20mL)中的溶液中添加(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(10.80g，61.94mmol)、乙酸(371.96mg，6.19mmol)和NaBH3CN(3.89g，61.94mmol)，将反应混合物在75℃下搅拌16h。浓缩混合物，然后将其倒入水(100mL)中并用EA(50mL×2)萃取。将有机层用水(100mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色油状的1-环丙基氮杂环丁烷-3-羧酸乙酯(1.4g，26.71％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.18(d,2H),3.68-3.56(m,2H),3.53-3.42(m,2H),3.29(d,1H),1.96-1.86(m,1H),1.29(t,3H),0.40(m,4H)；MS:m/z＝169.9(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-环丙基氮杂环丁烷-3-羧酸乙酯(800mg，4.73mmol)在MeOH(10mL)和水(5mL)中的溶液中添加LiOH(566.09mg，23.64mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。通过2M HCl将混合物的PH调整至5至6并浓缩。将残余物用MeOH(5mL×4))洗涤。浓缩有机层以得到呈黄色油状的1-环丙基氮杂环丁烷-3-羧酸(330mg，49.45％产率)。MS:m/z＝142.1(M+1,ESI+)。
5.8.38.化合物111的合成
Figure BDA0004163574540001811
向1-环丙基氮杂环丁烷-3-羧酸(156.96mg，1.11mmol)和化合物4，2-((2-乙基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(400mg，741.25μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(422.77mg，1.11mmol)和DIEA(287.40mg，2.22mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物111，2-((6-(2-(4-(1-环丙基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(197mg，40.10％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.67(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),3.77-3.74(t,4H),3.63(s,3H),3.54-3.52(t,2H),3.46-3.43(m,3H),3.40-3.32(m,2H),3.27-3.26(m,2H),2.70-2.64(dd,2H),1.81-1.79(m,1H),1.28-1.25(t,3H),0.32-0.28(m,2H),0.19-0.15(m,2H)；MS:m/z＝663.2(M+1,ESI+)；HRMS:663.2775。
5.9.实施例8-哌嗪连接的吡啶型化合物的合成
通用方案8
Figure BDA0004163574540001821
5.9.1.1-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪的合成
Figure BDA0004163574540001822
向5-溴-2-氯吡啶(10g，51.96mmol)和哌嗪(89.52mg，103.93mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加Cs2CO3(50.79mg，155.89mmol)，将反应混合物在120℃下搅拌3h。将混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭并用EA(50mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色油状的1-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪(6.4g，50.87％产率)。MS:m/z＝243.8(M+1+2,ESI+)。
5.9.2.化合物139的合成
Figure BDA0004163574540001831
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(2g，4.75mmol)和1-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪(1.15g，4.75mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(4mL)中的混合物中添加Na2CO3(1.51g，14.24mmol)和Pd(PPh3)4(548.63mg，474.77μmol)，将反应混合物在100℃下搅拌2h。用DCM(100mL)稀释混合物。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1.8g，70.39％产率)。MS:m/z＝539.2(M+1,ESI+)。
5.9.3.化合物149的合成
Figure BDA0004163574540001841
步骤一：
向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)和2-溴乙酸乙酯(93.01mg，556.96μmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加K2CO3(192.44mg，1.39mmol)，将反应混合物在70℃下搅拌2h。过滤并浓缩混合物，通过柱色谱法纯化残余物以得到呈白色固体的2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(220mg，75.87％产率)。MS:m/z＝625.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(220mg，352.15μmol)在MeOH(9mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加LiOH(84.34mg，3.52mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物，并将残余物倒入2N HCl(20mL)中并用EA(10mL×2)萃取，将有机层用盐水(20mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的粗产物化合物149，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(185mg，88.04％产率)。MS:m/z＝597.2(M+1,ESI+)。
5.9.4.化合物85的合成
Figure BDA0004163574540001851
在0℃下，向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三光气(55.09mg，185.65μmol)，将混合物在0℃下搅拌30min。然后添加TEA(234.83mg，2.32mmol)和吡咯烷(33.01mg，464.13μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌5h。将混合物用水(50mL)淬灭并用DCM(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物85，(2-((2-乙基-6-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(150mg，50.83％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.55-8.54(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.99-7.96(m,1H),7.72-7.66(dd,2H),7.44-7.40(t,2H),6.93-6.90(d,1H),3.64(s,3H),3.56-3.53(t,4H),3.31-3.25(m,8H),2.69-2.64(dd,2H),1.77-1.74(t,4H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝636.3(M+1,ESI+)；HRMS:636.2663。
5.9.5.化合物86盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001852
向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，371.31μmol)和1-甲基氮杂环丁烷-3-羧酸(51.30mg，445.57μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加T3P(354.43mg，556.96μmol，50％纯度)和DIEA(143.97mg，1.11mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×3)萃取。将有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物86盐酸盐，2-((2-乙基-6-(6-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(62mg，24.84％产率)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.95(s,1H),8.45(s,1H),8.37-8.31(t,2H),8.09-8.00(m,3H),7.39-7.37(d,1H),7.22-7.18(t,2H),4.59-4.51(m,2H),4.22-4.18(m,3H),3.84-3.79(m,6H),3.75(s,3H),3.68(s,2H),2.99-2.94(m,5H),1.44-1.40(t,3H)；MS:m/z＝636.2(M+1,ESI+)；HRMS:636.2669。
5.9.6.化合物86的合成
Figure BDA0004163574540001861
在0℃下，向化合物86盐酸盐，2-((2-乙基-6-(6-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(14mg，0.018mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物86，2-((2-乙基-6-(6-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(5mg，41.67％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.55-8.54(d,1H),8.10-8.07(t,2H),8.00-7.97(m,1H),7.72-7.65(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.94-6.92(d,1H),3.63(s,3H),3.53-3.36(m,11H),3.10-3.07(m,2H),2.69-2.63(m,2H),2.16(s,3H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝636.0(M+1,ESI+)。
5.9.7.化合物91的合成
Figure BDA0004163574540001871
向化合物149，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酸(185mg，310.05μmol)和(S)-吡咯烷-3-醇(185.87mg，1.86mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(175.46mg，465.08μmol)和DIEA(120.21mg，930.15μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物91，(S)-2-((2-乙基-6-(6-(4-(2-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(100mg，48.44％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H)8.53-8.52(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.96-7.93(dd,1H),7.72-7.66(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.91-6.89(d,1H),5.00-4.92(dd,1H),4.31-4.24(d,1H),3.65(s,3H),3.61-3.54(m,6H),3.44-3.34(m,1H),3.31-3.20(m,1H),3.16-3.12(m,2H),2.70-2.65(dd,2H),2.57-2.55(m,4H),1.83-1.73(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝666.2(M+1,ESI+)；HRMS:666.2771。
5.9.8.化合物92的合成
Figure BDA0004163574540001881
在0℃下，向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加三光气(55.09mg，185.65μmol)，将反应混合物在0℃下搅拌30min。然后添加TEA(234.83mg，2.32mmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(40.44mg，464.13μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。将混合物用水(50mL)淬灭并用DCM(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物92，(R)-2-((2-乙基-6-(6-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(145mg，47.93％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.55-8.54(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.99-7.96(dd,1H),7.73-7.65(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.93-6.91(d,1H),4.89(s,1H),4.22(s,1H),3.64(s,3H),3.60-3.45(m,6H),3.30-3.20(m,5H),3.12-3.10(d,1H),2.69-2.64(dd,2H),1.83-1.71(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝652.2(M+1,ESI+)；HRMS:652.2617。
5.9.9.化合物92盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001891
在0℃下，向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，928μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加三光气(110mg，370μmol)，将反应混合物在0℃下搅拌30min。然后添加TEA(470mg，4.64mmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(81mg，928μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。将混合物用水(50mL)淬灭并用DCM(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物92盐酸盐，(R)-2-((2-乙基-6-(6-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(205mg，29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H),8.50(s,1H),8.41-8.35(m,2H),8.14-8.12(dd,J＝9.2Hz,1H),8.04-8.00(t,2H),7.42-7.35(m,3H),4.23(s,1H),3.83-3.72(m,4H),3.68(s,3H),3.52-3.45(m,2H),3.41-3.27(m,5H),3.13-3.11(d,J＝10.8Hz,1H),2.91-2.85(dd,J1＝7.2Hz,J2＝14.4Hz,2H),1.85-1.72(m,2H),1.36-1.33(t,3H)；MS:m/z＝652.1(M+1,ESI+)。
5.9.10.化合物93的合成
Figure BDA0004163574540001901
向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)和1-(羟甲基)环丙烷-1-羧酸(64.67mg，556.96μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(262.65mg，696.20μmol)和DIEA(179.95mg，1.39mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物93，2-((2-乙基-6-(6-(4-(1-(羟甲基)环丙烷-1-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(105mg，35.53％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.56-8.55(d,1H),8.11-8.07(t,2H),8.00-7.97(dd,1H),7.73-7.66(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.96-6.94(d,1H),4.89-4.86(t,1H),3.64-3.56(m,11H),3.48-3.47(d,2H),2.69-2.64(dd,2H),1.29-1.25(t,3H),0.77-0.69(m,4H)；MS:m/z＝637.2(M+1,ESI+)；HRMS:637.2510。
5.9.11.化合物94的合成
Figure BDA0004163574540001902
步骤一：
在0℃下，向4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(102.25mg，510.54μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加三光气(55.09mg，185.65μmol)，将反应混合物在0℃下搅拌30min。然后，添加化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)和TEA(234.83mg，2.32mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。将混合物倒入水(100mL)中并用DCM(30mL×3)萃取，将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(195mg，70.42％产率)。MS:m/z＝765.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(195.00mg，254.93μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(290.67mg，2.55mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。在减压下浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物94，4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺(123mg，72.58％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.55-8.54(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.98-7.95(dd,1H),7.73-7.66(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.95-6.93(d,1H),6.30-6.29(d,1H),3.64(s,3H),3.52-3.38(m,10H),2.92-2.89(d,2H),2.69-2.64(dd,2H),2.47-2.41(m,2H),1.68-1.65(d,2H),1.32-1.23(t,5H)；MS:m/z＝665.3(M+1,ESI+)；HRMS:665.2931。
5.9.12.化合物95的合成
Figure BDA0004163574540001921
步骤一：
向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)和(2S,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(128.79mg，556.96μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(262.65mg，696.20μmol)和DIEA(179.95mg，1.39mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈黄色固体的(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，57.31％产率)。MS:m/z＝752.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4R)-2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，266.00μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(303.30mg，2.66mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物95，2-((2-乙基-6-(6-(4-((2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(115mg，66.33％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(s,1H),8.56-8.55(d,1H),8.11-8.08(t,2H),8.00-7.97(dd,1H),7.73-7.66(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.96-6.93(d,1H),4.20-4.19(t,1H),4.08-4.04(t,1H),3.65-3.40(m,13H),3.09-3.05(dd,1H),2.70-2.55(dd,3H),1.89-1.77(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝652.1(M+1,ESI+)；HRMS:652.2610。
5.9.13.化合物96盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001931
步骤一：
在0℃下，向化合物139，2-((2-乙基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，464.13μmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加三光气(55.09mg，185.65μmol)，将反应混合物在0℃下搅拌30min。然后添加TEA(234.83mg，2.32mmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(87.93mg，510.54μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。将混合物倒入水(50mL)中并用DCM(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈黄色固体的3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(190mg，55.56％产率)。MS:m/z＝737.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(190.00mg，257.85μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(294.00mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。在减压下浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物96盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(125mg，72.01％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32-9.22(m,2H),9.10(s,1H),8.56-8.55(d,1H),8.37-8.35(d,1H),8.24-8.22(d,1H),8.11-8.08(d,1H),8.04-8.00(t,2H),7.66-7.65(d,1H),7.42-7.38(t,2H),7.23-7.21(d,1H),4.60-4.55(m,1H),4.04-3.99(dd,4H),3.94-3.82(m,7H),3.60-3.51(m,4H),2.90-2.84(dd,2H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)；HRMS:637.2620。
5.9.14.化合物96的合成
Figure BDA0004163574540001941
在0℃下，向化合物96盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺盐酸盐(90mg，0.120mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物96，N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酰胺(60mg，78.22％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56-8.52(m,2H),8.10-8.07(t,2H),7.98-7.95(m,1H),7.73-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.96-6.93(d,1H),3.72-3.43(m,12H),2.69-2.64(m,3H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝637.0(M+1,ESI+)。
5.9.15.(4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪-1-基)(环戊基)甲酮的合成
Figure BDA0004163574540001951
向环戊烷甲酸(450mg，3.94mmol)和5-溴-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(954.53mg，3.94mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加T3P(3.76g，5.91mmol，50％纯度)和DIEA(1.53g，11.83mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪-1-基)(环戊基)甲酮(630mg，47.24％产率)。MS:m/z＝338.1(M+1,ESI+)。
5.9.16.化合物112的合成
Figure BDA0004163574540001952
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(498.17mg，1.18mmol)和(4-(5-溴吡啶-2-基)哌嗪-1-基)(环戊基)甲酮(400mg，1.18mmol)在二氧杂环己烷(8mL)和水(2mL)中的混合物中添加Na2CO3(376.02mg，3.55mmol)和Pd(PPh3)4(136.65mg，118.26μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(60mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈白色固体的化合物112，2-((6-(6-(4-(环戊烷羰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(160mg，21.33％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60-8.55(m,2H),8.10(s,2H),8.00-7.97(m,1H),7.72-7.66(dd,2H),7.44-7.39(t,2H),6.94-6.92(d,1H),3.65-3.53(m,11H),3.03-2.99(m,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.78-1.52(m,8H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝635.2(M+1,ESI+)；HRMS:635.2710。
5.10.实施例9-哌啶连接的嘧啶型化合物的合成
通用方案9
Figure BDA0004163574540001961
5.10.1.化合物140的合成-方法1
Figure BDA0004163574540001971
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1g，2.04mmol)和哌啶-4-酮盐酸盐(415.12mg，3.06mmol)在MeCN(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(2.66mg，8.16mmol)，将反应混合物在80℃下搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(440mg，39.01％产率)。MS:m/z＝553.1(M+1,ESI+)。
5.10.2.化合物140的合成-方法2
Figure BDA0004163574540001972
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，1.02mmol)和哌啶-4-醇(150mg，1.48mmol)在MeCN(50mL)中的溶液中添加Cs2CO3(980mg，3.01mmol)，将所得混合物在70℃下搅拌16h。在减压下浓缩混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-((2-乙基-6-(2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(440mg，77.74％产率)。MS:m/z＝555.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-((2-乙基-6-(2-(4-羟基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(470mg，847.40μmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加戴斯-马丁(940mg，2.22mmol)并在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(463mg，98.93％产率)。MS:m/z＝553.4(M+1,ESI+)。
5.10.3.化合物141盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540001981
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，1.02mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(613.15mg，3.06mmol)在MeCN(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(997.50mg，3.06mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌24h。过滤反应混合物，在减压下浓缩滤液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(572.1mg，85.73％产率)。MS:m/z＝654.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(572.1mg，855.43μmol)在EA(5mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(3M，5mL)，将反应混合物在25℃下搅拌1h。在减压下除去过量的溶剂以得到呈黄色固体的化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(501.2mg，96.82％产率)。MS:m/z＝554.3(M+1,ESI+)。
5.10.4.化合物142的合成
Figure BDA0004163574540001991
步骤一：
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(700mg，1.43mmol)和哌啶-4-羧酸甲酯盐酸盐(384.99mg，2.14mmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(1.40g，4.29mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下蒸发反应混合物，并通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(750mg，87.98％产率)。MS:m/z＝597.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(750mg，1.26mmol)在THF(10mL)和H2O(10mL)中的溶液中添加LiOH(90.31mg，3.77mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌3h。将反应混合物用2M HCl调整至pH 5-6并用DCM(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(600mg，81.93％产率)。MS:m/z＝583.3(M+1,ESI+)。
5.10.5.1-(哌啶-4-基氨基)环丙烷-1-甲腈的合成
Figure BDA0004163574540002001
步骤一：
向1-苯甲基哌啶-4-酮(1g，5.28mmol)和1-氨基环丙烷-1-甲腈盐酸盐(939.73mg，7.93mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加AcOH(两滴)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。然后添加NaBH4(2.00g，52.84mmol)并在25℃下搅拌3h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过硅胶柱纯化，得到呈黄色油状的1-((1-苯甲基哌啶-4-基)氨基)环丙烷-1-甲腈(1.05g，77.74％产率)。MS:m/z＝256.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-((1-苯甲基哌啶-4-基)氨基)环丙烷-1-甲腈(500mg，1.96mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中添加Pd/C(231.89mg，1.96mmol)，将反应混合物在H2下在25℃下搅拌5h。过滤反应混合物并在减压下蒸发滤液，得到呈黄色油状的1-(哌啶-4-基氨基)环丙烷-1-甲腈(600mg，粗物质)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS:m/z＝166.2(M+1,ESI+)。
5.10.6.化合物17的合成
Figure BDA0004163574540002011
向化合物128，2-((6-(2-氯嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(150mg，306.15μmol)和1-(哌啶-4-基氨基)环丙烷-1-甲腈(101.17mg，612.3μmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(299.25mg，918.45μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。过滤反应混合物，在减压下浓缩滤液并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物17，2-((6-(2-(4-((1-氰基环丙基)氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(42mg，22.17％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.64(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.51-4.47(d,2H),3.63(s,3H),3.45(d,1H),3.18-3.12(t,2H),3.04(s,1H),2.70-2.64(dd,2H),1.93-1.89(dd,2H),1.28-1.17(m,7H),0.95-0.92(m,2H)；MS:m/z＝619.4(M+1,ESI+)。
5.10.7.化合物18的合成
Figure BDA0004163574540002012
向化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(150mg，271.43μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇盐酸盐(50.32mg，407.15μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(115.05mg，542.86μmol)。将混合物在25℃下搅拌24h。将所得溶液用饱和NH4Cl(30mL)淬灭并用DCM(30mL×3)萃取，将合并的有机层用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物18，2-((2-乙基-6-(2-(4-((1-(羟甲基)环丙基)氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(81mg，47.84％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,2H),8.64(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.51-4.48(t,3H),3.63(s,3H),3.36-3.34(d,2H),3.11-3.05(m,3H),2.70-2.64(dd,2H),2.20(bs,1H),1.85-1.82(d,2H),1.29-1.11(m,5H),0.40(s,4H)；MS:m/z＝624.3(M+1,ESI+)。
5.10.8.化合物19的合成
Figure BDA0004163574540002021
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(250mg，423.65μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(64.87mg，635.47μmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HATU(241.62mg，635.47μmol)和DIEA(164.26mg，1.27mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物19，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(120mg，44.46％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.73-7.70(m,3H),7.44-7.40(t,2H),6.17(s,1H),4.68-4.64(d,2H),3.93(s,1H),3.63(s,3H),3.04-2.99(t,2H),2.70-2.64(dd,2H),1.78-1.74(dd,2H),1.53-1.44(m,2H),1.28-1.25(t,3H),1.02-0.99(dd,2H),0.82-0.79(dd,2H)；MS:m/z＝638.3(M+1,ESI+)。
5.10.9.化合物20的合成
Figure BDA0004163574540002031
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(250mg，423.65μmol)和1-氰基环丙烷-1-羧酸(63.54mg，571.92μmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加HATU(217.46mg，571.92μmol)和DIEA(147.83mg，1.14mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物20，1-氰基-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)环丙烷-1-甲酰胺(130mg，23.38％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(s,2H),8.66(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.97-7.95(d,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.68-4.64(d,2H),3.92-3.90(m,1H),3.63(s,3H),3.01-2.95(t,2H),2.70-2.64(dd,2H),1.75-1.73(d,2H),1.55-1.46(m,6H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝647.2(M+1,ESI+)。
5.10.10.化合物68甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002041
步骤一：
将化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，361.91μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(74.80mg，434.29μmol)在DCM(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。然后将NaBH(OAc)3(153.41mg，723.82μmol)添加至上述溶液中并在25℃下搅拌另外3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(145mg，56.52％产率)。MS:m/z＝709.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(140mg，197.50μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。在减压下蒸发反应混合物并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.1％FA在水中；B：CH3CN，5％至95％)在FA条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物68甲酸盐，2-((6-(2-(4-(氮杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(75mg，58.14％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.64(s,1H),8.20(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.54-4.51(d,2H),4.00(s,2H),3.78-3.63(m,7H),3.06-3.00(t,2H),2.70-2.64(dd,3H),1.77-1.74(d,2H),1.28-1.25(t,3H),1.15-1.13(d,2H)；MS:m/z＝609.2(M+1,ESI+)。
5.10.11.化合物68盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002051
步骤一
将化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800mg，1.45mmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(74.80mg，434.29μmol)在DCM(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。然后将NaBH(OAc)3(612mg，1.74mmol)添加至上述溶液中并在25℃下搅拌另外3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，78.4％产率)。MS:m/z＝709.3(M+1,ESI+)。
步骤二
向3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.13mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。在减压下浓缩反应混合物并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物68HCl，2-((6-(2-(4-(氮杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(125mg，15.41％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.87(s,2H),8.36-8.34(d,1H),8.11-8.08(d,1H),8.02-7.99(m,2H),7.21-7.17(t,2H),4.90(s,2H),4.64-4.54(m,3H),4.46-4.41(m,2H),3.75(s,3H),3.66-3.60(m,1H),3.23-3.16(t,2H),2.99-2.94(dd,2H),2.24-2.21(d,2H),1.81-1.73(m,2H),1.44-1.40(t,3H)；MS:m/z＝609.2(M+1,ESI+)。
5.10.12.化合物69甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002061
步骤一：
将化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，361.91μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(86.98mg，434.29μmol)在DCM(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。然后将NaBH(OAc)3(153.41mg，723.82μmol)添加至上述溶液中并在25℃下搅拌另外3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，56.17％产率)。MS:m/z＝737.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(135mg，183.20μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。在减压下浓缩反应混合物并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.1％ FA在水中；B：CH3CN，5％至95％)在FA条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物69甲酸盐，2-((2-乙基-6-(2-(4-(哌啶-4-基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈甲酸盐(75mg，60％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,2H),8.66(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.71(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.75-4.72(d,2H),3.63(s,3H),3.46-3.32(m,5H),3.02-2.89(m,5H),2.70-2.65(dd,2H),2.14-2.05(m,4H),1.69-1.66(d,2H),1.43-1.40(d,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)。
5.10.13.化合物69盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002071
步骤一：
将2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(360mg，652μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(156mg，782μmol)在DCM(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。然后将NaBH(OAc)3(207mg，978μmol)添加至上述溶液中并在25℃下搅拌另外3h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，66.7％产率)。MS:m/z＝737.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，435μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(5mL)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。在减压下浓缩反应混合物并通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物，得到呈白色固体的2-((2-乙基-6-(2-(4-(哌啶-4-基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(250mg，77.1％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,2H),9.44(s,1H),9.10-9.05(m,2H),8.87(s,2H),8.40-8.37(d,1H),8.13-8.11(d,1H),8.03-7.99(t,2H),7.42-7.38(t,2H),4.83-4.80(d,2H),3.67(s,3H),3.51(s,2H),3.37-3.34(d,2H),3.03-2.85(m,6H),2.27-2.24(d,2H),2.18-2.15(d,2H),1.97-1.89(dd,2H),1.69-1.61(dd,2H),1.36-1.32(t,3H)；MS:m/z＝637.4(M+1,ESI+)。
5.10.14.化合物72盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002081
步骤一：
向化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(300mg，514.89μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(88.68mg，514.89μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(587.33mg，1.54mmol)和DIEA(332.72mg，2.57mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到3-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，92.25％产率)。MS:m/z＝737.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，474.99μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(2mL)并在25℃下搅拌3h。在减压下蒸发反应混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物72盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(160mg，52.90％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(s,1H),9.42(s,1H),9.12(s,1H),8.98-8.97(d,1H),8.87(s,2H),8.42-8.39(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.71-4.58(m,3H),4.04-3.91(m,4H),3.68(s,3H),3.08-3.02(t,2H),2.91-2.86(m,2H),1.83-1.80(m,2H),1.53-1.45(m,2H),1.37-1.33(t,3H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)。
5.10.15.化合物72的合成
Figure BDA0004163574540002091
在0℃下，向化合物72盐酸盐，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.178mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物72，N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺(100mg，88.5％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.64(s,1H),8.55-8.53(m,1H),8.08-8.06(t,2H),7.70(s,1H),7.44-7.40(t,2H),4.70-4.52(m,3H),4.08-4.04(m,2H),3.94-3.88(m,2H),3.63(s,3H),3.03-2.97(m,2H),2.70-2.64(m,2H),1.79-1.76(m,2H),1.51-1.43(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝609.3(M+1,ESI+)。
5.10.16.化合物73盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002101
步骤一：
向化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(300mg，514.89μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(154.68mg，772.33μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(587.33mg，1.54mmol)和DIEA(332.72mg，2.57mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，76.14％产率)。MS:m/z＝765.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，392.20μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(2mL)并在25℃下搅拌3h。在减压下蒸发反应混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物73盐酸盐，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(160mg，61.37％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,2H),9.12(s,1H),8.87(s,2H),8.42-8.39(d,1H),8.21-8.19(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.73-4.70(d,2H),3.80-3.78(d,1H),3.68(s,3H),3.23-2.86(m,8H),1.88-1.45(m,9H),1.37-1.33(t,3H)；MS:m/z＝665.3(M+1,ESI+)。
5.10.17.化合物73的制备
Figure BDA0004163574540002111
通过制备型HPLC纯化化合物73盐酸盐，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.171mmol)以得到呈白色固体的化合物73，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺(70mg，61.40％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.73-7.69(m,3H),7.44-7.40(t,2H),4.70-4.67(d,2H),3.63(s,3H),3.58-3.52(m,1H),2.96-2.89(m,4H),2.70-2.64(dd,2H),2.47-2.41(m,2H),1.72-1.69(d,2H),1.64-1.62(d,2H),1.49-1.45(m,2H),1.28-1.18(m,7H)；MS:m/z＝665.1(M+1,ESI+)。
5.10.18.化合物74甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002121
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(200mg，361.24μmol)和(2R,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(108.59mg，469.61μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HOBT(73.22mg，541.85μmol)、EDCI(103.87mg，541.85μmol)和TEA(109.66mg，1.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(2R,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(220mg，79.41％产率)。MS:m/z＝767.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R，4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(220mg，286.87μmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(956.25μL)并在25℃下搅拌16h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物73甲酸盐，(2R,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(103mg，53.85％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.25(s,1H),8.09(s,2H),7.94(s,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.57-4.54(d,2H),4.17(s,1H),3.85-3.84(d,1H),3.72-3.68(t,1H),3.63(s,3H),3.13-3.07(t,2H),2.84-2.62(m,4H),1.93(s,1H),1.78-1.75(d,2H),1.67-1.66(d,1H),1.37-1.35(d,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝667.5(M+1,ESI+)。
5.10.19.化合物74的合成
Figure BDA0004163574540002131
通过制备型HPLC纯化化合物74甲酸盐，(2R,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(99mg，0.139mmol)以得到呈白色固体的化合物74，(2R,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(56mg，60.47％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.01(m,3H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.56-4.53(d,2H),4.21(s,1H),3.85-3.74(m,2H),3.63(s,3H),3.15-3.08(t,2H),2.91-2.64(m,4H),1.98-1.77(m,4H),1.38-1.22(m,5H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.10.20.化合物75甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002132
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(200mg，361.24μmol)和(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(108.59mg，469.61μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HOBT(73.22mg，541.85μmol)、EDCI(103.87mg，541.85μmol)和TEA(109.66mg，1.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(2S,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，75.81％产率)。MS:m/z＝767.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4S)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，273.84μmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(912.78μL)并在25℃下搅拌16h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物75甲酸盐，(2S,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(57mg，29.23％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.24(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.94(s,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.55-4.52(d,2H),4.11(s,1H),3.87-3.86(d,1H),3.63(s,3H),3.53-3.52(d,1H),3.17-3.11(t,2H),2.89-2.87(t,1H),2.70-2.64(m,3H),2.15-2.13(m,1H),1.80-1.77(d,2H),1.60(s,1H),1.41-1.32(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.5(M+1,ESI+)。
5.10.21.化合物75的合成
Figure BDA0004163574540002151
通过制备型HPLC纯化化合物75甲酸盐，(2S,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(49mg，0.069mmol)以得到呈白色固体的化合物75，(2S,4S)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(29mg，63.31％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.09(t,2H),7.91-7.89(m,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.67-4.51(m,2H),4.11-4.09(m,1H),3.85-3.74(m,1H),3.63(s,3H),3.50-3.49(m,1H),3.16-3.10(m,2H),2.86-2.63(m,4H),2.14(s,1H),1.80-1.77(m,3H),1.39-1.22(m,5H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.10.22.化合物76甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002152
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(200mg，361.24μmol)和(2R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(108.59mg，469.61μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HOBT(73.22mg，541.85μmol)、EDCI(103.87mg，541.85μmol)和TEA(109.66mg，1.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(2R,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，75.81％产率)。MS:m/z＝767.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2R,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，273.84μmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(912.78μL)并在25℃下搅拌16h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物76甲酸盐，(2R,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(58mg，31.77％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.66(s,1H),8.32(s,1H),8.11-8.07(m,3H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.55-4.52(d,2H),4.16-4.15(t,1H),3.91-3.84(m,1H),3.65-3.64(m,4H),3.18-3.12(m,2H),2.95-2.91(m,1H),2.78-2.74(m,1H),2.70-2.65(dd,2H),2.23-2.16(m,1H),1.81-1.78(d,2H),1.68-1.63(m,1H),1.42-1.32(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.5(M+1,ESI+)。
5.10.23.化合物76的合成
Figure BDA0004163574540002161
通过制备型HPLC纯化化合物76甲酸盐(2R，4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(51mg，0.072mmol)以得到呈白色固体的化合物76，(2R,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(45mg，94.34％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.86-7.84(d,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.61-4.51(m,3H),4.09-4.07(m,1H),3.85-3.74(m,1H),3.63(s,3H),3.13-3.09(m,2H),2.85-2.81(m,1H),2.70-2.60(m,3H),2.14-2.07(m,1H),1.81-1.77(m,2H),1.60-1.54(m,1H),1.40-1.31(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.1(M+1,ESI+)。
5.10.24.化合物77甲酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002171
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(200mg，361.24μmol)和(2R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(108.59mg，469.61μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HOBT(73.22mg，541.85μmol)、EDCI(103.87mg，541.85μmol)和TEA(109.66mg，1.08mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(2S,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，72.20％产率)。MS:m/z＝767.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(2S,4R)-2-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(180mg，234.72μmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(912.78μL)并在25℃下搅拌16h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物77甲酸盐，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(92mg，58.79％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.66(s,1H),8.29(s,1H),8.11-8.07(m,3H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.56-4.53(d,2H),4.22(s,1H),3.87-3.81(m,2H),3.63(s,3H),3.15-3.09(t,2H),2.96-2.93(m,1H),2.82-2.79(m,1H),2.70-2.65(dd,2H),2.02-1.97(m,1H),1.80-1.67(m,3H),1.41-1.33(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.2(M+1,ESI+)。
5.10.25.化合物77的合成
Figure BDA0004163574540002181
通过制备型HPLC纯化化合物77甲酸盐，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺甲酸盐(84mg，0.118mmol)以得到呈白色固体的化合物77，(2S,4R)-N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(75mg，95.42％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.88-7.86(d,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.67-4.54(m,3H),4.15(s,1H),3.85-3.82(m,1H),3.63(s,3H),3.12-3.06(t,2H),2.81-2.64(m,4H),1.90-1.64(m,4H),1.39-1.32(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝667.2(M+1,ESI+)。
5.10.26.化合物83盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002191
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(300mg，508.47μmol)和1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(109.03mg，541.85μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HATU(618.09mg，1.63mmol)和DIEA(350.15mg，2.71mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并用DCM(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，87.66％产率)。MS:m/z＝737.4(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，474.99μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(3.08g，2.00mL)并在25℃下搅拌3h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈淡黄色固体的化合物83盐酸盐，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(160mg，50.04％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),9.20(s,1H),9.13(s,1H),8.87(s,2H),8.50-8.48(d,1H),8.42-8.40(d,1H),8.14-8.12(d,1H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.55-4.52(d,2H),3.98-3.94(m,5H),3.69-3.61(m,4H),3.28-3.23(t,2H),2.92-2.86(dd,2H),1.84-1.82(d,2H),1.38-1.34(m,5H)；MS:m/z＝637.3(M+1,ESI+)。
5.10.27.化合物83的合成
Figure BDA0004163574540002201
在0℃下，向化合物83盐酸盐，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐(130mg，0.174mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物83，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-甲酰胺(70mg，63.6％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.80-7.78(m,1H),7.70(s,2H),7.44-7.40(t,2H),4.55-4.52(d,2H),3.88-3.84(m,2H),3.73-3.69(t,1H),3.63(s,3H),3.54-3.48(m,2H),3.12-3.07(m,2H),2.70-2.64(m,2H),1.81-1.78(m,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝637.1(M+1,ESI+)。
5.10.28.化合物84盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002211
步骤一：
向化合物141盐酸盐，2-((6-(2-(4-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(300mg，508.47μmol)和1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-羧酸(186.35mg，812.78μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HATU(618.09mg，1.63mmol)和DIEA(350.15mg，2.71mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并用DCM(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，72.38％产率)。MS:m/z＝765.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，392.20μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加TFA(2.54g，1.65mL)并在25℃下搅拌3h。浓缩反应混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈淡黄色固体的化合物84盐酸盐，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(200mg，72.72％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(s,1H),9.12(s,1H),9.04(s,1H),8.86(s,2H),8.41-8.39(d,1H),8.14-8.09(m,2H),8.01(s,2H),7.42-7.38(t,2H),4.57-4.54(d,2H),3.87(s,1H),3.68(s,3H),3.22-3.16(m,4H),2.91-2.80(m,4H),2.43(s,1H),1.81-1.72(m,6H),1.37-1.33(m,5H)；MS:m/z＝665.4(M+1,ESI+)。
5.10.29.化合物84的合成
Figure BDA0004163574540002221
通过制备型HPLC纯化化合物84盐酸盐，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐(140mg，0.181mmol)以得到呈白色固体的化合物84，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺(110mg，91.66％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.70-7.66(m,3H),7.44-7.40(t,2H),4.55-4.52(d,2H),3.84-3.80(m,1H),3.63(s,3H),3.13-3.08(t,2H),2.98-2.95(d,2H),2.70-2.64(dd,2H),2.50-2.45(m,2H),2.19-2.13(m,1H),1.78-1.75(d,2H),1.58-1.41(m,4H),1.33-1.16(m,6H)；MS:m/z＝666.1(M+1,ESI+)。
5.10.30.化合物107的合成
Figure BDA0004163574540002222
向化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，452.39μmol)和环丙胺(38.74mg，678.58μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(191.76mg，904.77μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将有机物用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物107，2-((6-(2-(4-(环丙基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，23.08％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(s,2H),8.60(s,1H),8.06-8.03(t,2H),7.64(s,2H),7.39-7.34(t,2H),4.47-4.43(m,2H),3.59(s,3H),3.06-3.01(t,2H),2.73-2.60(m,3H),2.09-2.02(m,2H),1.84-1.81(d,2H),1.24-1.13(m,5H),0.33-0.29(m,2H),0.16-0.13(m,2H)；MS:m/z＝594.1(M+1,ESI+)；HRMS:594.2558。
5.10.31.化合物108的合成
Figure BDA0004163574540002231
向化合物140，2-((2-乙基-6-(2-(4-氧代哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，452.39μmol)和环丁胺(48.26mg，678.58μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(191.76mg，904.77μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(30mL)中，用DCM(10mL×3)萃取。将有机物用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物108，2-((6-(2-(4-(环丁基氨基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(86mg，31.28％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,2H),8.64(s,1H),8.10-8.08(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.50-4.46(m,2H),3.64(s,3H),3.26-3.22(m,1H),3.08-3.03(t,2H),2.70-2.65(m,3H),2.10-2.06(m,2H),1.77-1.50(m,6H),1.29-1.25(t,3H),1.18-1.10(m,2H)；MS:m/z＝608.2(M+1,ESI+)；HRMS:608.2716。
5.10.32.化合物115的合成
Figure BDA0004163574540002241
向化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(400mg，686.52μmol)和吡咯烷(48.83mg，686.52μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(391.55mg，1.03mmol)和DIEA(266.18mg，2.06mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×2)萃取，将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物115，2-((2-乙基-6-(2-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(205mg，46.97％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.69(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.72-4.69(d,2H),3.63(s,3H),3.53-3.49(t,2H),3.27-3.24(t,2H),3.02-2.96(m,2H),2.78-2.64(m,3H),1.91-1.85(m,2H),1.79-1.70(m,4H),1.52-1.42(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝636.2(M+1,ESI+)；HRMS:636.2655。
5.10.33.化合物115盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002251
向化合物142，2-((2-乙基-6-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(125mg，0.2mmol)在MeOH(8mL)中的溶液中添加2M HCl(0.6mL，1.2mmol)并在25℃下搅拌2h。在减压下蒸发混合物以得到呈淡黄色固体的化合物115盐酸盐，2-((2-乙基-6-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(140mg，95.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(s,1H),8.83(s,2H),8.35-8.33(m,1H),8.11-8.00(m,3H),7.42-7.38(t,2H),4.74-4.71(d,2H),3.66(s,3H),3.53-3.50(t,2H),3.27-3.23(t,2H),3.06-2.99(m,2H),2.89-2.75(m,3H),1.92-1.72(m,6H),1.52-1.41(m,2H),1.34-1.30(t,3H)；MS:m/z＝636.2(M+1,ESI+)。
5.10.34.化合物123的合成
Figure BDA0004163574540002252
向化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(670mg，1.15mmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(129.10mg，1.38mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(650.74mg，1.72mmol)和DIEA(445.85mg，3.45mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取，将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物123，2-((6-(2-(4-(氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(350mg，48.96％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.69-4.66(d,2H),4.21-4.17(t,2H),3.84-3.80(t,2H),3.64(s,3H),3.02-2.95(m,2H),2.70-2.65(dd,2H),2.54-2.49(m,1H),2.22-2.15(m,2H),1.68-1.65(m,2H),1.48-1.37(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝622.2(M+1,ESI+)；HRMS:622.2509。
5.10.35.化合物127的合成
Figure BDA0004163574540002261
向化合物142，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-4-羧酸(570mg，978.29μmol)和吗啉(102.27mg，1.17mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(553.62mg，1.47mmol)和DIEA(379.30mg，2.93mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×2)萃取，将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物127，2-((2-乙基-6-(2-(4-(吗啉-4-羰基)哌啶-1-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(260mg，40.78％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,2H),8.65(s,1H),8.11-8.08(t,2H),7.70(s,2H),7.44-7.39(t,2H),4.71-4.68(d,2H),3.64(s,3H),3.58-3.54(m,6H),3.44-3.43(m,2H),3.04-2.93(m,3H),2.71-2.65(dd,2H),1.71-1.68(m,2H),1.54-1.45(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝652.2(M+1,ESI+)；HRMS:652.2616。
5.11.实施例10-哌啶连接的吡啶型化合物的合成
通用方案10
Figure BDA0004163574540002271
5.11.1.1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-醇的合成
Figure BDA0004163574540002272
向5-溴-2-氯吡啶(3g，15.59mmol)和哌啶-4-醇(1.73g，17.15mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加Cs2CO3(15.24g，46.77mmol)，将反应混合物在130℃下搅拌5h。将混合物倒入水(300mL)中并用EA(100mL×2)萃取，将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-醇(2.1g，52.39％产率)。MS:m/z＝257.0(M+1,ESI+)。
5.11.2.化合物143的合成
Figure BDA0004163574540002281
步骤一：
向1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-醇(915.57mg，3.56mmol)和化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(1.5g，3.56mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(4mL)中的混合物中添加Na2CO3(1.13g，10.68mmol)和Pd(PPh3)4(205.74mg，178.04μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(60mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-((2-乙基-6-(6-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1.2g，60.87％产率)。MS:m/z＝554.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-((2-乙基-6-(6-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(1.2g，2.17mmol)在DCM(25mL)中的溶液中添加戴斯-马丁(919.30mg，2.17mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。蒸发混合物并通过柱色谱法纯化以得到呈黄色固体的化合物143，2-((2-乙基-6-(6-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(960mg，80.29％产率)。MS:m/z＝552.2(M+1,ESI+)。
5.11.3.(1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
Figure BDA0004163574540002291
向哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.77g，8.83mmol)和5-溴-2-氯吡啶(1.7g，8.83mmol)在DMF(30mL)中的混合物中添加K2CO3(3.66g，26.50mmol)，将反应混合物在120℃下搅拌5h。将混合物倒入水(300mL)中并用EA(100mL×2)萃取，将有机层用水(200mL×2)和盐水(200mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(570mg，18.11％产率)。MS:m/z＝356.1(M+1,ESI+)。
5.11.4.化合物144的合成
Figure BDA0004163574540002292
步骤一：
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(378.38mg，898.23μmol)和(1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(320mg，898.23μmol)在二氧杂环己烷(10mL)和水(2mL)中的混合物中添加Na2CO3(285.61mg，2.69mmol)和Pd(PPh3)4(51.90mg，44.91μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取，将有机层用盐水(30mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(295mg，50.31％产率)。MS:m/z＝653.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(295mg，451.91μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(257.63mg，2.26mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。将混合物倒入NaHCO3水溶液(50mL)中并用DCM(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈白色固体的化合物144，2-((6-(6-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(230mg，76.46％产率)。MS:m/z＝553.3(M+1,ESI+)。
5.11.5.1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成
Figure BDA0004163574540002301
向哌啶-4-羧酸甲酯(7.44g，51.96mmol)和5-溴-2-氯吡啶(5g，25.98mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加K2CO3(10.77g，77.95mmol)，将反应混合物在120℃下搅拌5h。将混合物倒入水(500mL)中并用EA(100mL×3)萃取，有机层用水(300mL×2)和盐水(300mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱纯化残余物，得到呈黄色固体的1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(2.6g，33.45％产率)。MS:m/z＝299.1(M+1,ESI+)。
5.11.6.化合物145的合成
Figure BDA0004163574540002311
步骤一：
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(3g，7.12mmol)和1-(5-溴吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(2.34g，7.83mmol)在二氧杂环己烷(50mL)和水(10mL)中的混合物中添加Na2CO3(2.26g，21.36mmol)和Pd(PPh3)4(411.47mg，356.08μmol)，将反应混合物在N2下在100℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(2.7g，63.65％产率)。MS:m/z＝596.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(2.7g，4.53mmol)在MeOH(30mL)和水(10mL)中的溶液中添加LiOH(542.74mg，22.66mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。浓缩混合物并将其调整至5-6的pH，然后倒入水(100mL)中并用EA(40mL×3)萃取。将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈黄色固体的化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(1.8g，68.27％产率)。MS:m/z＝582.1(M+1,ESI+)。
5.11.7.化合物88的合成
Figure BDA0004163574540002321
向化合物143，2-((2-乙基-6-(6-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，453.20μmol)和(1-氨基环丙基)甲醇(43.43mg，498.52μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加NaBH(OAc)3(115.26mg，543.84μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。蒸发混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物88，2-((2-乙基-6-(6-(4-((1-(羟甲基)环丙基)氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(139mg，49.25％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),8.50(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.92-7.89(dd,1H),7.71-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.90-6.88(d,1H),4.51-4.48(t,1H),4.21-4.18(d,2H),3.64(s,3H),3.35-3.34(m,2H),3.04-2.91(m,3H),2.69-2.64(dd,2H),2.23(s,1H),1.83-1.81(d,2H),1.29-1.14(m,4H),0.39(s,4H)；MS:m/z＝623.3(M+1,ESI+)；HRMS:623.2717。
5.11.8.化合物89盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002322
步骤一：
向化合物143，2-((2-乙基-6-(6-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，453.20μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(78.05mg，453.20μmol)在DCM(8mL)中的悬浮液中添加NaBH(OAc)3(115.26mg，543.84μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。过滤并浓缩混合物。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，65.46％产率)。MS:m/z＝708.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向3-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(210.00mg，296.67μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(169.13mg，1.48mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物89盐酸盐，2-((6-(6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(160mg，83.72％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,2H),10.11-10.10(d,1H),9.31(s,1H),9.22(s,1H),8.48-8.41(m,3H),8.15-8.13(d,1H),8.02(s,2H),7.51-7.49(d,1H),7.43-7.39(t,2H),4.63-4.60(d,2H),4.43-4.35(m,3H),4.17(s,2H),3.70(s,3H),3.50(s,1H),3.27-3.21(t,2H),2.92-2.86(dd,2H),2.17-2.14(m,2H),1.75-1.72(m,2H),1.38-1.34(t,3H)；MS:m/z＝608.3(M+1,ESI+)；HRMS:608.2712。
5.11.9.化合物89的合成
Figure BDA0004163574540002331
在0℃下，向化合物89盐酸盐，2-((6-(6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(90mg，0.125mmol)在H2O(3mL)中的混合物中添加2M NaHCO3(1.05mL，2.1mmol)并搅拌0.5h。然后用DCM(5mL×2)萃取。将有机层用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到呈白色固体的化合物89，2-((6-(6-(4-(氮杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(80mg，81.63％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54-8.49(m,2H),8.10-8.07(t,2H),7.92-7.89(m,1H),7.71-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.91-6.89(d,1H),4.23-4.20(m,2H),3.76-3.63(m,8H),2.94-2.88(t,2H),2.69-2.63(m,4H),1.74-1.72(t,2H),1.28-1.25(t,3H)；MS:m/z＝609.1(M+1,ESI+)。
5.11.10.化合物90的合成
Figure BDA0004163574540002341
步骤一：
向化合物143，2-((2-乙基-6-(6-(4-氧代哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(250mg，453.20μmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(90.77mg，453.20μmol)在DCM(8mL)中的悬浮液中添加NaBH(OAc)3(115.26mg，543.84μmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。过滤并浓缩混合物，通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(215mg，64.47％产率)。MS:m/z＝736.3(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-((1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(215.00mg，292.15μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(166.56mg，1.46mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。在减压下浓缩混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物90，2-((2-乙基-6-(6-(4-(哌啶-4-基氨基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(135mg，72.68％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55-8.49(m,2H),8.11-8.07(t,2H),7.92-7.89(dd,1H),7.71-7.64(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.90-6.88(d,1H),4.23-4.20(d,2H),3.63(s,3H),2.95-2.78(m,4H),2.69-2.64(dd,2H),2.60-2.54(m,1H),2.45-2.39(t,2H),1.82-1.79(d,2H),1.72-1.70(d,2H),1.29-1.16(t,3H),1.24-1.03(m,4H)；MS:m/z＝636.4(M+1,ESI+)；HRMS:636.3033。
5.11.11.化合物98的合成
Figure BDA0004163574540002351
向化合物144，2-((6-(6-(4-氨基哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(235mg，353.02μmol)和1-羟基环丙烷-1-羧酸(36.04mg，353.02μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(174.50mg，458.93μmol)和DIEA(136.88mg，1.06mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌3h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物98，N-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(85mg，37.81％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57-8.52(m,2H),8.11-8.07(t,2H),7.95-7.92(dd,1H),7.72-7.65(m,3H),7.44-7.40(t,2H),6.94-6.92(d,1H),6.16(s,1H),4.34-4.31(d,2H),3.92-3.86(m,1H),3.64(s,3H),2.95-2.89(t,2H),2.69-2.64(dd,2H),1.76-1.73(d,2H),1.58-1.49(m,2H),1.28-1.25(t,3H),1.02-0.99(m,2H),0.82-0.79(m,2H)；MS:m/z＝637.2(M+1,ESI+)；HRMS:637.2509。
5.11.12.化合物113的合成
Figure BDA0004163574540002361
向吡咯烷(47.07mg，661.90μmol)和化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(350mg，601.72μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(343.19mg，902.59μmol)和DIEA(233.30mg，1.81mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物113，2-((2-乙基-6-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(193mg，50.53％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.51(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.72-7.65(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.93-6.90(d,1H),4.39-4.36(d,2H),3.64(s,3H),3.52-3.49(t,2H),3.27-3.24(t,2H),2.94-2.88(m,2H),2.75-2.64(m,3H),1.91-1.84(m,2H),1.79-1.68(m,4H),1.57-1.47(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝635.3(M+1,ESI+)；HRMS:635.2703。
5.11.13.化合物113盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002371
向化合物145，吡咯烷(67mg，945μmol)和1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，860μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(490mg，1.29mmol)和DIEA(333mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物113盐酸盐，2-((2-乙基-6-(6-(4-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(230mg，35.93％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H),8.42-8.37(m,3H),8.14-8.12(d,1H),8.04-8.00(t,2H),7.49-7.38(m,3H),4.50-4.47(d,2H),3.68(s,3H),3.54-3.51(t,2H),3.30-3.25(m,4H),2.90-2.83(m,3H),1.91-1.60(m,8H),1.36-1.33(t,3H)；MS:m/z＝635.3(M+1,ESI+)。
5.11.14.化合物114的合成
Figure BDA0004163574540002381
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(400mg，687.68μmol)和(R)-吡咯烷-3-醇(65.90mg，756.45μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(392.22mg，1.03mmol)和DIEA(266.63mg，2.06mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物114，(R)-2-((2-乙基-6-(6-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(223mg，49.83％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48-8.47(m,2H),8.10-8.07(m,2H),7.89-7.86(dd,1H),7.67-7.62(m,2H),7.39-7.35(t,2H),6.89-6.86(d,1H),4.86-4.76(dd,1H),4.36-4.24(m,3H),3.64(s,3H),3.61-3.58(m,1H),3.38-3.22(m,3H),2.97-2.91(m,2H),2.76-2.63(m,3H),1.98-1.69(m,4H),1.61-1.51(m,2H)1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝651.2(M+1,ESI+)；HRMS:651.2653。
5.11.15.化合物114盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002382
向化合物145，(R)-吡咯烷-3-醇(82mg，945μmol)和1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，860μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(490mg，1.29mmol)和DIEA(333mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(80mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(WatersXbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈淡黄色固体的化合物114盐酸盐，(R)-2-((2-乙基-6-(6-(4-(3-羟基吡咯烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(205mg，31.34％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),8.46(s,1H),8.35-8.24(m,2H),8.10-8.07(d,1H),8.04-8.01(t,2H),7.42-7.31(m,3H),4.46-4.16(m,4H),3.67-3.58(m,5H),3.41-3.16(m,5H),2.89-2.76(m,3H),1.97-1.54(m,6H),1.35-1.33(t,3H)；MS:m/z＝651.2(M+1,ESI+)。
5.11.16.化合物118的合成
Figure BDA0004163574540002391
步骤一：
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(300mg，515.76μmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(105.67mg，567.34μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(294.16mg，773.65μmol)和DIEA(199.98mg，1.55mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×3)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱纯化残余物，得到呈黄色固体的4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280mg，72.39％产率)。MS:m/z＝750.1(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280mg，373.38μmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(212.87mg，1.87mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌5h。浓缩混合物并通过制备型HPLC纯化以得到呈白色固体的化合物118，2-((2-乙基-6-(6-(4-(哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(172mg，70.89％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.51(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.71-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.92-6.90(d,1H),4.37-4.33(d,2H),3.64(s,3H),3.45-3.44(m,2H),3.36-3.34(m,2H),2.95-2.87(m,3H),2.70-2.60(m,6H),1.66-1.52(m,4H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝650.3(M+1,ESI+)；HRMS:650.2822。
5.11.17.化合物119的合成
Figure BDA0004163574540002401
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(300mg，515.76μmol)和哌啶-4-醇(62.60mg，618.92μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(291.87mg，773.65μmol)和DIEA(199.98mg，1.55mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×3)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物119，2-((2-乙基-6-(6-(4-(4-羟基哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(90mg，26.25％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.51(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.71-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.92-6.90(d,1H),4.74-4.73(d,1H),4.36-4.33(d,2H),3.91-3.78(m,2H),3.71-3.64(m,1H),3.63(s,3H),3.24-3.19(m,1H),2.99-2.90(m,4H),2.69-2.64(dd,2H),1.77-1.75(m,1H),1.65-1.62(m,3H),1.56-1.50(m,2H),1.35-1.20(m,6H)；MS:m/z＝665.2(M+1,ESI+)；HRMS:665.2819。
5.11.18.化合物120的合成
Figure BDA0004163574540002411
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(300mg，515.76μmol)和氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(45.24mg，618.92μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(291.87mg，773.65μmol)和DIEA(199.98mg，1.55mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱纯化残余物以得到呈白色固体的化合物120，2-((2-乙基-6-(6-(4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(120mg，36.54％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.51(d,1H),8.11-8.07(t,2H),7.93-7.91(dd,1H),7.71-7.64(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.92-6.90(d,1H),5.71-5.69(d,1H),4.46-4.33(m,4H),4.01-3.99(m,1H),3.97-3.88(m,1H),3.63(s,3H),3.56-3.52(m,1H),2.93-2.87(m,2H),2.69-2.63(dd,2H),1.65-1.62(m,2H),1.51-1.45(m,2H),1.28-1.24(t,3H)；MS:m/z＝637.2(M+1,ESI+)；HRMS:637.2505。
5.11.19.化合物121的合成
Figure BDA0004163574540002421
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，859.61μmol)和哌啶(87.83mg，1.03mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(486.46mg，1.29mmol)和DIEA(333.29mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：10mmol NH4HCO3在水中；B：CH3CN，5％至95％)在NH4HCO3条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物121，2-((2-乙基-6-(6-(4-(哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(200mg，35.86％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.52-8.51(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.69-7.65(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.92-6.89(d,1H),4.37-4.33(d,2H),3.64(s,3H),3.48-3.41(m,4H),2.96-2.90(m,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.65-1.50(m,8H),1.41-1.40(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝649.2(M+1,ESI+)；HRMS:649.2870。
5.11.20.化合物121盐酸盐的合成
Figure BDA0004163574540002431
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，859.61μmol)和哌啶(87.83mg，1.03mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(486.46mg，1.29mmol)和DIEA(333.29mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC(Waters Xbridge C18 10μm OBD 19*250mm，A：0.05％ HCl在水中；B：CH3CN，5％至95％)在HCl条件下纯化残余物以得到呈白色固体的化合物121盐酸盐，2-((2-乙基-6-(6-(4-(哌啶-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈盐酸盐(170mg，26.07％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,1H),8.45(s,1H),8.35-8.25(m,2H),8.10-8.00(m,3H),7.42-7.32(m,3H),4.44-4.41(d,2H),3.67(s,3H),3.50-3.40(m,4H),3.25-3.19(t,2H),3.06-3.01(m,1H),2.89-2.83(m,2H),1.76-1.40(m,10H),1.35-1.31(t,3H)；MS:m/z＝649.4(M+1,ESI+)。
5.11.21.化合物122的合成
Figure BDA0004163574540002441
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，859.61μmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(96.50mg，1.03mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(486.46mg，1.29mmol)和DIEA(333.29mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×3)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶柱纯化残余物以得到呈白色固体的化合物122，2-((6-(6-(4-(氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(110mg，20.61％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.52-8.51(d,1H),8.12-8.08(t,2H),7.93-7.91(dd,1H),7.72-7.66(m,2H),7.44-7.39(t,2H),6.92-6.89(d,1H),4.37-4.34(d,2H),4.20-4.16(t,2H),3.84-3.80(t,2H),3.65(s,3H),2.93-2.87(t,2H),2.70-2.65(dd,2H),2.49-2.45(m,1H),2.22-2.15(m,2H),1.65-1.63(m,2H),1.53-1.43(m,2H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝621.2(M+1,ESI+)；HRMS:621.2560。
5.11.22.化合物126的合成
Figure BDA0004163574540002442
向化合物145，1-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨
基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(500mg，859.61μmol)和吗啉(82.38mg，945.57μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(490.27mg，1.29mmol)和DIEA(333.29mg，2.58mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌2h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×2)萃取，将有机层用盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物126，2-((2-乙基-6-(6-(4-(吗啉-4-羰基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(272mg，48.62％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(s,1H),8.52-8.51(d,1H),8.11-8.08(t,2H),7.94-7.91(dd,1H),7.72-7.66(m,2H),7.44-7.40(t,2H),6.93-6.91(d,1H),4.37-4.34(d,2H),3.64(s,3H),3.58-3.53(m,6H),3.44-3.43(m,2H),2.95-2.89(m,3H),2.70-2.64(dd,2H),1.68-1.65(m,2H),1.59-1.49(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝651.2(M+1,ESI+)；HRMS:651.2662。
5.12.实施例11-反向哌啶连接的嘧啶型化合物的合成通用方案11
Figure BDA0004163574540002451
5.12.1.4-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的合成
Figure BDA0004163574540002461
步骤一：
向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(20g，64.68mmol)和5-溴-2-碘嘧啶(27.64g，97.02mmol)在二氧杂环己烷(100mL)和H2O(20mL)中的溶液中添加Na2CO3(20.57g，194.04mmol)和Pd(PPh3)4(3.74g，3.23mmol)，将反应混合物在80℃下搅拌16h。将混合物倒入水(300mL)中并用EA(100mL×2)萃取。将有机层用水(300mL×2)和盐水(300mL×1)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的4-(5-溴嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(10g，45.44％产率)。MS:m/z＝340.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(5-溴嘧啶-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(8g，23.51mmol)在MeOH(80mL)中的溶液中添加雷尼镍(Raney Ni)(1.38g，23.51mmol)。将反应混合物在H2下在25℃下搅拌16h。过滤并在减压下浓缩滤液。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈无色油状的4-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，19.88％产率)。MS:m/z＝342.3(M+1,ESI+)。
5.12.2.化合物146的合成
Figure BDA0004163574540002471
步骤一：
向化合物133，(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)硼酸(2.26g，5.36mmol)和4-(5-溴嘧啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g，6.43mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Na2CO3(1.70g，16.07mmol)和Pd(PPh3)4(309.52mg，267.85μmol)，将反应混合物在80℃下搅拌16h。将混合物倒入水(200mL)中并用EA(80mL×2)萃取。将有机层用水(200mL×2)和盐水(200mL×1)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物，得到呈白色固体的4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.3g，67.22％产率)。MS:m/z＝639.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，1.57mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加含3M HCl的EA(5.2mL，15.7mmol)，并将混合物在25℃下搅拌16h。将溶液用NaHCO3水溶液调整至pH 8并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL×1)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(810mg，96.06％产率)。MS:m/z＝539.2(M+1,ESI+)。
5.12.3.化合物147的合成
Figure BDA0004163574540002481
步骤一：
向化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(800mg，1.49mmol)和2-溴乙酸乙酯(744.10mg，4.46mmol)在MeCN(10mL)中的溶液中添加K2CO3(153.95mg，1.11mmol)，将反应混合物在60℃下搅拌2h。在减压下浓缩反应混合物并通过柱色谱法纯化残余物，得到呈黄色固体的2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(920mg，粗物质)。MS:m/z＝625.2(M+1,ESI+)。
步骤二：
向2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(920mg，1.47mmol)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加LiOH(176.34mg，7.36mmol)，将反应混合物在25℃下搅拌16h。在减压下浓缩混合物并通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈黄色固体的化合物147，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸(750mg，85.35％产率)。m/z＝597.0(M+1,ESI+)。
5.12.4.化合物99的合成
Figure BDA0004163574540002491
向化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，928μmol)和环丙烷羧酸(159.83mg，1.86mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(420.25mg，1.11mmol)和DIEA(360mg，2.79mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物99，2-((6-(2-(1-(环丙烷羰基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(170mg，30.19％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,2H),8.87(s,1H),8.11-8.07(t,2H),7.84-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),4.44-4.32(m,2H),3.65(s,3H),3.21-3.13(m,2H),2.77-2.66(m,3H),2.04-1.95(m,3H),1.77-1.59(m,2H),1.30-1.26(t,3H),0.75-0.67(m,4H)；MS:m/z＝607.3(M+1,ESI+)；HRMS:607.2404。
5.12.5.化合物100的合成
Figure BDA0004163574540002492
向化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(500mg，928μmol)和环丁烷羧酸(185.87mg，1.86mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(420.25mg，1.11mmol)和DIEA(360mg，2.79mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物100，2-((6-(2-(1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(180mg，31.24％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.87(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.83-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),4.44-4.41(d,1H),3.79-3.75(d,1H),3.65(s,3H),3.38-3.34(m,1H),3.15-3.06(m,2H),2.76-2.66(m,3H),2.19-2.04(m,4H),1.98-1.85(m,3H),1.76-1.56(m,3H),1.30-1.26(t,3H)；MS:m/z＝621.3(M+1,ESI+)；HRMS:621.2561。
5.12.6.化合物101的合成
Figure BDA0004163574540002501
向化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，557μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加CDI(135.46mg，835.44μmol)，将反应物在室温下搅拌1h并将氮杂环丁烷盐酸盐(156.32mg，1.67mmol)添加至上述溶液中。将反应混合物在65℃下搅拌16h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物101，2-((6-(2-(1-(氮杂环丁烷-1-羰基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，17.90％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.86(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.83-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.90-3.79(m,3H),3.64-3.61(m,4H),3.08-3.01(m,1H),2.90-2.82(m,2H),2.74-2.66(m,5H),2.17-2.09(m,1H),1.94-1.91(d,2H),1.80-1.64(m,2H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝622.3(M+1,ESI+)；HRMS:622.2509。
5.12.7.化合物102的合成
Figure BDA0004163574540002511
向化合物146，2-((2-乙基-6-(2-(哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(300mg，557μmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加CDI(135.46mg，835.44μmol)，将反应物在室温下搅拌1h并将吡咯烷(118.83mg，1.67mmol)添加至上述溶液中。将反应混合物在80℃下搅拌16h。将混合物倒入水(100mL)中并用EA(30mL×2)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物102，2-((2-乙基-6-(2-(1-(吡咯烷-1-羰基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(68mg，19.20％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),8.86(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.83-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.75-3.72(d,2H),3.64(s,3H),3.28-3.25(t,4H),3.08-3.02(m,1H),2.87-2.82(t,2H),2.71-2.66(dd,2H),1.95-1.92(d,2H),1.79-1.70(m,6H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝636.4(M+1,ESI+)；HRMS:636.2662。
5.12.8.化合物103的合成
Figure BDA0004163574540002521
向化合物147，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸(150mg，251.39μmol)和氮杂环丁烷盐酸盐(28.71mg，306.84μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(189.69mg，502.78μmol)和DIEA(98mg，755μmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物103，2-((6-(2-(1-(2-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(62mg，38.75％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.86(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.83-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),4.21-4.17(t,2H),3.86-3.83(t,2H),3.64(s,3H),2.96-2.79(m,5H),2.72-2.66(dd,2H),2.22-2.14(m,4H),1.93-1.81(m,4H),1.29-1.25(t,3H)；MS:m/z＝636.1(M+1,ESI+)；HRMS:636.2666。
5.12.9.化合物104的合成
Figure BDA0004163574540002522
向化合物147，2-(4-(5-(3-((5-氰基-4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)(甲基)氨基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸(300mg，502.78μmol)和吡咯烷(107.28mg，1.51mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(379.37mg，1.01mmol)和DIEA(196mg，1.51mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物倒入水(50mL)中并用EA(20mL×2)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物以得到呈白色固体的化合物104，2-((2-乙基-6-(2-(1-(2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基)哌啶-4-基)嘧啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(甲基)氨基)-4-(4-氟苯基)噻唑-5-甲腈(90mg，27.55％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.13(s,2H),8.86(s,1H),8.10-8.07(t,2H),7.83-7.75(m,2H),7.44-7.39(t,2H),3.64(s,3H),3.50-3.46(t,2H),3.29-3.26(t,2H),3.11(s,2H),2.96-2.86(m,3H),2.70-2.66(dd,2H),2.22(s,2H),1.93-1.71(m,8H),1.29-1.26(t,3H)；MS:m/z＝650.2(M+1,ESI+)；HRMS:650.2820。
5.13.实施例12-示例性化合物在hATX/ENPP2生物化学测定中的活性
此实施例描述来自使用16:0-LPC作为底物的hATX/ENPP2测定的本公开内容中所描述的化合物的生物化学数据(IC50值范围)。将主题化合物与作为参考化合物的化合物GPLG-1690进行比较。GPLG-1690(齐利昔司他(Ziritaxestat))为具有以下结构的已知化合物：
Figure BDA0004163574540002531
实验程序
将20nL的化合物的稀释系列(总共12个浓度)(自10mM最高浓度开始，1/3稀释)通过
Figure BDA0004163574540002541
550Liquid Handler转移至所述孔。
以2.5nM的最终浓度使用hENPP2。将该酶稀释在总体积为5μL的50mM Tris-HCl pH8.0、140mM NaCl、5mM CaCl2、0.01％ Triton X-100中。将酶的水溶液添加至所述孔中并与不同浓度的化合物在室温下温育15min。通过添加5μL的80μM LPC(16:0)和10μL的含有200μM Amplex Red、10U/mL胆碱氧化酶和4U/mL HRP的检测混合物开始反应。
利用在530nm的激发动态测量在590nm的荧光。使用曲线(从60至70min的反应时间)的斜率来计算化合物的IC50值。
数据
来自hATX/ENPP2测定的参考化合物GPLG-1690和示例性化合物1至115和118至127的IC50值列于下表2中。hATX/ENPP2 IC50(nM)范围：(A)是指IC50≤20nM；(B)是指20<IC50≤200nM；且(C)是指IC50>200nM。
Figure BDA0004163574540002542
Figure BDA0004163574540002551
Figure BDA0004163574540002561
如上所示，大部分主题化合物在hATX/ENPP2测定中显示出与参考化合物GPLG-1690相比更好或相当的活性。
5.14.实施例13-示例性化合物在LPA测定中的抑制活性
自分泌运动因子(ATX)在溶血磷脂酸(LPA)信号传导中发挥重要作用。进行体外LPA测定以确定测试化合物对大鼠或小鼠血浆中的LPA 18:2水平的降低的IC50值。此实施例描述来自使用小鼠和大鼠血浆的LPA测定的示例性化合物的测定数据(IC50值范围)。测定作为参考化合物的化合物GPLG-1690。
实验程序
以各种浓度制备测试化合物的10mM DMSO储备溶液和测试化合物的4倍连续稀释液。用1×PBS(pH 7.5)缓冲液稀释化合物的经稀释溶液。将38μL的大鼠或小鼠血浆样品与2μL的化合物的经稀释溶液或2％ DMSO溶液混合在96孔平板中(最终0.1％ DMSO)。在37℃下温育2小时之后，将120μL含有IS(250ng/mL的LPA 17:0)的MeOH添加至各孔中。将混合物涡旋1min，并然后离心30min(4000rpm，4℃)。将100μL上清液转移至含有100μL纯水的96孔平板并将平板振荡10min。将5μL上清液注射至LC-MS/MS系统中。将不针对LPA 18:2准备校准曲线并基于峰面积比(LPA 18:2/LPA 17:0)进行所有定量。对于化合物的每种浓度，将LPA数据使用下式表示为降低的百分比(降低％)：
100-[((LPA比率-温育0小时之后对照样品中的LPA比率)/(温育2小时之后对照样品中的LPA比率-温育0小时之后对照样品中的LPA比率))*100]。
数据
来自小鼠和大鼠血浆中的LPA测定的参考化合物GPLG-1690和各种主题化合物的IC50值列于下表3中。IC50(nM)范围：(A)是指IC50≤200nM；(B)是指200<IC50≤800nM；且(C)是指IC50>800nM。
Figure BDA0004163574540002571
如上所示，大部分主题化合物在LPA测定中显示出与参考化合物GPLG-1690相比更好的抑制活性。
5.15.实施例14-药代动力学数据
此实施例描述来自使用小鼠的研究获得的本公开内容的各种化合物的药代动力学(PK)数据。计算以下PK参数：
·使用线性/对数梯形法则计算生物利用度(F％)
·根据PO组的血浆浓度vs时间的曲线直接获取峰值血浆浓度(Cmax(ng/mL))
·曲线下面积，例如从时间0至无穷大的浓度曲线下面积(AUC0-inf(ng*h/mL))。
实验程序
在向雄性C57BL/6小鼠分别以2mg/kg和10mg/kg静脉内(IV)和口服(PO)施用之后，在经设计的取样时间点收集血液样品。将所有血液样品转移至含有K2-EDTA作为抗凝剂的预冷却的市售聚乙烯微量离心管中。通过离心处理样品以获得血浆。将血浆样品转移至在干冰上预冷却的聚丙烯管中并然后在干冰上快速冷冻并保持在-70±10℃直至LC-MS/MS分析。使用基于蛋白质沉淀的合格生物分析方法分析小鼠血浆样品，随后进行LC-MS/MS分析。使用Phoenix WinNonlinTM对每种化合物的各血浆浓度数据进行非房室药代动力学分析。标称剂量用于药代动力学参数计算。
数据
各种主题化合物的PK参数列于下表4中。
Figure BDA0004163574540002581
Figure BDA0004163574540002591
等同方案和通过引用并入
尽管已经参考优选实施方案和各种替代实施方案具体显示并描述了本发明，但是相关领域的技术人员应理解，可以在其中作出形式和细节的各种变化，而不脱离本发明的精神和范围。
为了所有目的，在本说明书的主体内引用的所有参考文献、授权专利和专利申请均通过引用整体并入本文。

Claims (71)

1.一种式(I)的化合物：
Figure FDA0004163574530000011
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
2.根据权利要求1的化合物，其中X1为N，X2为C-H，且X3为C-H。
3.根据权利要求1的化合物，其中X1为C-H，X2为C-H，且X3为C-H。
4.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中Y为S。
5.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中Z1为C-H，Z2为C-H，且Z3为C-H。
6.根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ia)：
Figure FDA0004163574530000021
其中：
R1选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
R3选自R4C(O)-、R4C(O)CH2-、R5R6N-和R5R6HC-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
7.根据权利要求6的化合物，其中X1为N。
8.根据权利要求6的化合物，其中X1为C-H。
9.根据权利要求1至8中任一项的化合物，其中R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。
10.根据权利要求9的化合物，其中R7为H3C-。
11.根据权利要求1至10中任一项的化合物，其中R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。
12.根据权利要求11的化合物，其中R8为-CH2CH3。
13.根据权利要求1至12中任一项的化合物，其中R9为-CN。
14.根据权利要求1至13中任一项的化合物，其中R11为-卤素。
15.根据权利要求14的化合物，其中R11为-F。
16.根据权利要求1至15中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ib)：
Figure FDA0004163574530000041
其中：
X1为C-H或N；且
R1为-H、-卤素或任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基。
17.根据权利要求1至16中任一项的化合物，其中：
a)R3为
Figure FDA0004163574530000042
b)R3为
Figure FDA0004163574530000043
c)R3为
Figure FDA0004163574530000044
d)R3为
Figure FDA0004163574530000045
其为任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-；或
e)R3为
Figure FDA0004163574530000046
其为任选地被取代的单环或双环(C3-C8)碳环-或任选地被取代的单环或双环(C2-C9)杂环-；
其中：
R4选自HO-、H2N-、R15R16N-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环和任选地被取代的单环或双环杂环；
R12选自-H、-NH2、-OH、-CH2C(O)R4、-C(O)R4、-CHR15R16、-NR15R16、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环；且
R13和R14独立地选自-H、-CH2C(O)R17、-CH2R17、-C(O)R17、-R18C(O)R17、-CH2R18C(O)R17、任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环，其中R17和R18独立地选自任选地被取代的-(C1-C5)烷基、任选地被取代的单环或双环-(C3-C8)碳环和任选地被取代的单环或双环-(C2-C9)杂环；且
R15和R16独立地选自H-、任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C3-C6)环烷基-C(O)-、任选地被取代的(C1-C5)烷基-、任选地被取代的3元至10元饱和单环杂环或碳环和任选地被取代的3元至10元饱和双环杂环或碳环，其中所述任选的取代基选自羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基和(C1-C5)烷基；或R15和R16被环状连接以形成3元至6元单环饱和杂环，其任选地被羟基、HOCH2-、氰基、卤素、被取代的氨基或(C1-C5)烷基取代。
18.根据权利要求1至17中任一项的化合物，其中：
R3为
Figure FDA0004163574530000051
R4选自R32、R32HN-、R32N(R33)-和R32HN-R36-；
R32和R33独立地选自H-、任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；
R36选自任选地被取代的(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；且
R32、R33和R36基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基、-(C1-C3)烷氧基、-(C3-C6)环烷基、(C2-C5)杂环烷基和-N(R37)R38，其中R37和R38独立地选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基和(C2-C5)杂环烷基。
19.根据权利要求18的化合物，其中R4选自：
Figure FDA0004163574530000061
20.根据权利要求19的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004163574530000062
Figure FDA0004163574530000071
Figure FDA0004163574530000081
Figure FDA0004163574530000091
21.根据权利要求1至17中任一项的化合物，其中：
R3为
Figure FDA0004163574530000092
R14选自R34-、R34CH2-、R34C(O)R35-和R34C(O)R35CH2-；
每个R34和R35独立地选自任选地被取代的-(C1-C3)烷基、任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；
R34和R35基团的任选的取代基独立地选自-CN、-OH、-CH2OH、-(C1-C3)烷基、-(C1-C3)烷氧基和-(C1-C3)烷基；且
R13为-H。
22.根据权利要求21的化合物，其中R14选自：
Figure FDA0004163574530000101
23.根据权利要求22的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004163574530000102
Figure FDA0004163574530000111
24.根据权利要求1至17中任一项的化合物，其中R3为
Figure FDA0004163574530000112
25.根据权利要求24的化合物，其中R3选自：
Figure FDA0004163574530000113
26.根据权利要求24或25的化合物，其中：
R12选自H-、H2N-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-NH-、R31-N(CH3)C(O)-、R31-C(O)N(CH3)-、R31-N(CH3)-和R31-O-；
R31选自任选地被取代的环烷基和任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-、(C3-C6)环烷基-和(C2-C5)杂环烷基-。
27.根据权利要求24至26中任一项的化合物，其中R12选自：
Figure FDA0004163574530000121
28.根据权利要求24至27中任一项的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004163574530000131
Figure FDA0004163574530000141
Figure FDA0004163574530000151
Figure FDA0004163574530000161
Figure FDA0004163574530000171
Figure FDA0004163574530000181
Figure FDA0004163574530000191
Figure FDA0004163574530000201
Figure FDA0004163574530000211
29.根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(Ie)：
Figure FDA0004163574530000212
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-；
R11为-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、-NR5R6、-CH2NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2或3。
30.根据权利要求29的化合物，其中R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)。
31.根据权利要求29或30的化合物，其中所述化合物具有式(If)：
Figure FDA0004163574530000221
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
32.根据权利要求29至31中任一项的化合物，其中R7为任选地被取代的(C1-C6)烷基-。
33.根据权利要求32的化合物，其中R7为H3C-。
34.根据权利要求29至33中任一项的化合物，其中R8为任选地被取代的-(C1-C6)烷基。
35.根据权利要求34的化合物，其中R8为-CH2CH3。
36.根据权利要求29至35中任一项的化合物，其中R9为-CN。
37.根据权利要求29至36中任一项的化合物，其中R11为-卤素。
38.根据权利要求37的化合物，其中R11为-F。
39.根据权利要求24或29的化合物，其中所述化合物具有式(Ic)：
Figure FDA0004163574530000231
其中：
X1和X4独立地为N或C-R1；
R1选自H、卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；且
R31选自任选地被取代的(C2-C5)杂环烷基和任选地被取代的(C3-C7)环烷基-。
40.根据权利要求39的化合物，其中R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-(例如，H3C-)、(C1-C3)烷氧基-、被取代的(C1-C3)烷基-和(C3-C6)环烷基-(例如，环丙基)。
41.根据权利要求39或40的化合物，其中所述化合物具有式(Id)：
Figure FDA0004163574530000241
其中：
X1和X4独立地为N或CH；
R41为H-或HO-；且
q为0、1或2；其中
当q为0或1时，X5为CH2；且
当q为2时，X5为NH、O或CH(OH)。
42.根据权利要求29至41中任一项的化合物，其中X1为N。
43.根据权利要求29至41中任一项的化合物，其中X1为C-H。
44.根据权利要求41至43中任一项的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004163574530000242
Figure FDA0004163574530000251
45.根据权利要求1至17中任一项的化合物，其中R3为
Figure FDA0004163574530000252
46.根据权利要求45的化合物，其中R3为
Figure FDA0004163574530000253
47.根据权利要求45或46的化合物，其中：
R12选自H-、R31-C(O)-、R31-C(O)CH2-、R31-NHC(O)-、R31-C(O)NH-、R31-N(CH3)C(O)-和R31-C(O)N(CH3)-；
R31选自任选地被取代的(C1-C3)烷基-、任选地被取代的环烷基-和任选地被取代的饱和杂环；且
R31基团的任选的取代基选自NC-、HO-、HOCH2-、(C1-C3)烷基-、(C1-C3)烷氧基-和被取代的(C1-C3)烷基-。
48.根据权利要求46至47中任一项的化合物，其中R12选自：
Figure FDA0004163574530000261
49.根据权利要求45至48中任一项的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0004163574530000262
50.一种药物组合物，其包含：
根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的赋形剂。
51.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的化合物，其中所述化合物为根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
52.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的药物组合物，其中所述药物组合物为根据权利要求50的药物组合物。
53.化合物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制自分泌运动因子(ATX)，其中所述化合物为根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
54.药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制自分泌运动因子(ATX)，其中所述药物组合物为根据权利要求50的药物组合物。
55.一种抑制自分泌运动因子的方法，所述方法包含使包含自分泌运动因子的生物系统与有效量的根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐接触以抑制自分泌运动因子。
56.根据权利要求55的方法，其中所述生物系统被包含在体外样品中。
57.根据权利要求55的方法，其中所述生物系统在体内。
58.一种在有此需要的受试者中抑制自分泌运动因子的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求50的药物组合物。
59.一种在有此需要的受试者中治疗ATX相关的适应症的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求50的药物组合物。
60.根据权利要求59的方法，其中所述ATX相关的适应症选自炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病、癌症和纤维化。
61.根据权利要求60的方法，其中所述纤维化发生在肝脏中。
62.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的化合物，其中所述化合物为根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
63.一种用于抑制自分泌运动因子(ATX)的药物组合物，其中所述药物组合物为根据权利要求50的药物组合物。
64.化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗ATX相关的适应症，其中所述化合物为根据权利要求1至49中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
65.药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗ATX相关的适应症，其中所述药物组合物为根据权利要求50的药物组合物。
66.根据权利要求64或65的用途，其中所述ATX相关的适应症选自炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病、癌症和纤维化。
67.根据权利要求66的用途，其中所述纤维化发生在肝脏中。
68.一种式(II)的化合物：
Figure FDA0004163574530000291
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
R20和R21各自独立地选自H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；或R20和R21与其所连接的硼原子一起形成任选地被取代的杂环；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
69.根据权利要求68的化合物，其中所述化合物为：
Figure FDA0004163574530000292
70.一种式(III)的化合物：
Figure FDA0004163574530000301
或其药学上可接受的盐或异构体，
其中：
X1、X2和X3独立地选自C-R1和N；
Z1、Z2和Z3独立地选自C-R1和N；
每个R1独立地选自-H、-卤素、任选地被取代的-(C1-C6)烷基和任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基；
Y选自S、O和N-R2，其中R2选自-H和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R3a选自任选地被取代的R4-C(O)-(C1-C3)烷基-、R4C(O)-、卤素、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、R5R6HC-和R5R6N-；
R4选自H2N-、HO-、R5R6N-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的(C1-C10)烷氧基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的环烷基-(C1-C6)亚烷基-和任选地被取代的杂环-(C1-C6)亚烷基-；
R5和R6独立地选自H-、H2N-、HO-、任选地被取代的(C1-C10)烷基-、任选地被取代的单环或双环碳环、任选地被取代的单环或双环杂环、任选地被取代的R4C(O)-(C1-C10)烷基-、R4C(O)-、R4-和被取代的氨基；
或R5和R6与其所连接的氮原子或碳原子一起被环状连接以形成任选地被取代的碳环或任选地被取代的杂环；
R7选自H-和任选地被取代的(C1-C6)烷基-；
R8选自-H、-卤素和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；
R9和每个R10独立地选自-H、-卤素、-CN、-OH、任选地被取代的-(C1-C6)烷氧基、-NH2、被取代的氨基、任选地被取代的-(C1-C6)烷基-NH2和任选地被取代的-(C1-C6)烷基；且
n为0、1、2、3、4或5。
71.根据权利要求70的化合物，其中所述化合物为：
Figure FDA0004163574530000311
Figure FDA0004163574530000321
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