CN116463344B - 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法 - Google Patents

一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116463344B
CN116463344B CN202310296390.0A CN202310296390A CN116463344B CN 116463344 B CN116463344 B CN 116463344B CN 202310296390 A CN202310296390 A CN 202310296390A CN 116463344 B CN116463344 B CN 116463344B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
shhtomm22
shrna
tomm22
vector
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202310296390.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116463344A (zh
Inventor
张晓荣
程满
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Biophysics of CAS
Original Assignee
Institute of Biophysics of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Biophysics of CAS filed Critical Institute of Biophysics of CAS
Priority to CN202310296390.0A priority Critical patent/CN116463344B/zh
Publication of CN116463344A publication Critical patent/CN116463344A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116463344B publication Critical patent/CN116463344B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于癌症治疗领域，提供了具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。本发明提供的shRNA包括shHTOMM22#1或shHTOMM22#2，shRNA抑制载体包括上述的shRNA和基础载体。shRNA抑制载体的制备方法包括以下步骤：将shRNA的正向引物和反向引物混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。本发明通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，显著抑制癌细胞增殖；通过裸鼠成瘤实验，确定TOMM22的敲低对肿瘤生长具有显著抑制效果。

Description

一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法
技术领域
本发明属于癌症治疗技术领域，具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。
背景技术
肝癌是导致病人死亡的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，在我国肝癌死亡率仅次于胃癌，居我国恶性肿瘤死亡率第二位。据统计，我国每年新增肝癌人数30万人，而每年肝癌死亡人数达11万。
因此，寻找有效且副作用和缓的抗癌物质就显得更为迫切。
目前，已经公开的针对Hep3b的治疗方法包括：使用棕榈酸作为人肝癌细胞株Hep3B，LM3的生长抑制剂；使用吡咯并嘧啶酯Ⅰ、吡咯并嘧啶酯Ⅱ和吡咯并嘧啶酯Ⅲ抑制肝癌Hep3b细胞中LncRNA CCAT1的表达；使用异戊烯基黄酮类化合物对Hep3B细胞具有细胞毒作用和促凋亡作用，从而抑制其表达；使用千金藤素抑制HepG2、Hep3B和Huh7的增殖以及使用辛伐他汀和博舒替尼作为肝癌细胞抑制剂的方法。
通过WB、RT-qPCR和免疫组化对临床肝癌样本分析中发现，在肝癌中TOMM22表达量显著高于正常组织，并且TOMM22的表达量同生存率呈负相关，因此，猜想，TOMM22的异常高表达会促进肝癌的进程。通过siRNA敲低TOMM22可能会抑制肝癌细胞的生长，进而有望成为治疗肝癌的药物。
但是现有技术中，并未发现有针对TOMM22表达的研究，如其可以适用于肿瘤生长的抑制，则对于本领域具有积极的意义。
发明内容
本发明的一个目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供的一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。
为了实现上述目的，本发明首先提供了一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法，使用抑制TOMM22表达的shRNA抑制肿瘤，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；
所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；
SEQ ID NO.1
CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
SEQ ID NO.2
AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
SEQ ID NO.3
CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
SEQ ID NO.4
AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
所述shHTOMM22#1的靶点为TOMM22序列的第373-393位；所述shHTOMM22#2的靶点为TOMM22序列的第316-336位。
进一步的，本发明还提供了一种抑制TOMM22表达的shRNA，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；
所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；
SEQ ID NO.1
CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
SEQ ID NO.2
AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
SEQ ID NO.3
CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
SEQ ID NO.4
AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
所述shHTOMM22#1的靶点为TOMM22序列的第373-393位；所述shHTOMM22#2的靶点为TOMM22序列的第316-336位。
进一步的，本发明还提供了一种抑制TOMM22表达的shRNA抑制载体，包括所述的shRNA和基础载体。
优选的，所述基础载体为pLKO.1质粒。
进一步的，本发明还提供了一种抑制载体的制备方法，包括：
将所述的shRNA的正向引物和反向引物混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。
优选的，所述酶切所用的酶包括EcoRI和AgeI。
优选的，所述EcoRI和AgeI为限制性内切酶，切割DNA产生粘性末端。
优选的，所述连接所用的酶为T4 DNA连接酶。
优选的，所述T4 DNA连接酶可以将所述限制性内切酶切割后的，具有互补的粘性末端进行连接，产生重组DNA。
进一步的，本发明还提供了抑制TOMM22表达的试剂在制备治疗肝癌的药物中的应用。
优选的，所述抑制TOMM22表达的试剂包括所述的shRNA。
优选的，所述抑制TOMM22表达的试剂包括所述的抑制载体。
本发明具有如下的有益效果：
本发明通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，显著抑制癌细胞增殖；通过裸鼠成瘤实验，确定TOMM22的敲低对肿瘤生长具有显著抑制效果，且本发明的研发成本较低，体内稳定性好，特异性强，不对正常的人体组织产生干扰，比靶向治疗中的单克隆抗体的生产成本低，具有较好的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为转染肝癌细胞中TOMM22的敲低效果图；
图2为对7-21天小鼠活体成像检测图；
图3为28天小鼠体内肿瘤组织对比图；
图4为小鼠体内瘤重图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
TCGA数据显示，在肝癌患者的癌组织中，TOMM22的表达显著高于癌旁组织，因此拟通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，通过裸鼠皮下成瘤实验，检测TOMM22的敲低对肝癌细胞的生长是否有抑制效果。为了实时动态地观测肿瘤组织的生长，在肿瘤细胞中稳定表达荧光素酶，在荧光素为底物的情况下，通过小动物活体成像Lumina3检测小鼠在不同时期肿瘤的生长情况，最后解剖出肿瘤，称量肿瘤的重量，确定TOMM22的敲低对肝癌细胞的生长是否有抑制效果。
实例1：shRNA的构建
一种抑制TOMM22表达的shRNA，
所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；
所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；
SEQ ID NO.1
CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
SEQ ID NO.2
AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
SEQ ID NO.3
CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
SEQ ID NO.4
AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
此外，设计了对照组引物shScramble，所述shScramble的正向引物如SEQ ID NO.5所示,所述shScramble的反向引物如SEQ ID NO.6所示；
SEQ ID NO.5
CCGGCCTAAGGTTAAGTCGCCCTCGCTCGAGCGAGGGCGACTTAACCTTAGGTTTTTG；
SEQ ID NO.6
AATTCAAAAACCTAAGGTTAAGTCGCCCTCGCTCGAGCGAGGGCGACTTAACCTTAGG。
实例2
将上述的每对正向引物和反向引物退火，形成两端含有AgeI和EcoRI的粘性末端，将退火后的片段用T4 DNA连接酶同用AgeI和EcoRI酶切后的pLKO.1质粒进行连接，通过菌落PCR和测序确定阳性克隆，从而获得载体质粒。
实例3
(1)将萤光素酶-杀稻瘟菌素和psPAX2、pMD2G质粒共转染293T细胞(淋巴细胞)，48h后收取病毒上清，利用超速离心机浓缩病毒。本步骤内病毒滴度为将1×108TU/mL病毒，以200倍稀释使用。
(2)将浓缩后的病毒加入Hep3b肝癌细胞中，同时加入聚凝胺。感染24h后，加入10μg/mL杀稻瘟菌素进行筛选，直到无细胞死亡，剩下的细胞即为表达荧光素酶的阳性细胞。
(3)将稳转荧光素酶的细胞悬浮液中加入终浓度为0.5mM的D-荧光素钠，用GloMax20/20Luminometer发光检测仪检测或将加入有D-荧光素的细胞培养皿直接在小动物活体成像仪lumina3上检测。同空白细胞相比，通过检测所构建的细胞是否有明显的发光。
实例4：构建稳定表达shRNA的肝癌细胞系
(1)将pHAGE-shHTOMM22#1、pHAGE-shHTOMM22#2和pHAGE-shScramble分别和psPAX2、pMD2G质粒共转293T细胞，48后收取病毒上清，利用超速离心机浓缩病毒。
(2)将浓缩后的病毒加入表达荧光素酶的Hep3b肝癌细胞中，同时加入聚凝胺。感染24h后，加入2μg/mL嘌呤霉素进行筛选，直到无细胞死亡，剩下的细胞即为稳定整合shRNA的阳性细胞。
(3)通过荧光定量PCR和WB鉴定稳定转染的细胞中TOMM22的敲低效果。
如图1，shTOMM22#1以及shTOMM22#2中的TOMM22的表达受到了抑制，而β-ACTIN和HSP60不受影响，这表明本发明的shRNA特异性较好。
本步骤包装病毒时的具体条件为：30cm培养皿，psPAX 15μg,pMD2G10μg,pLKO.125μg.PEI转染按DNA:PEI＝1:4(m/m)比例混合去内毒素DNA和1mg/ml PEI溶液。
实例5：小鼠皮下成瘤验证实验
(1)用15cm培养皿培养筛选出的稳定转染荧光素酶和shRNA的细胞。
(2)将细胞用磷酸缓冲盐溶液洗3遍，用磷酸缓冲盐溶液重悬细胞，使得每毫升磷酸缓冲盐溶液中有3×107细胞。
(3)将5周的18只雄性BALB/c裸鼠分成三组，分别为shScramble组，shHTOMM#1组和shHTOMM#2组。在每只小鼠上肢腋下注射3×106个细胞。
(4)饲养1个月，前三周在小鼠腹腔中注射200μL 15mg/mL的D-荧光素钠，用小动物活体成像仪lumina3进行检测，第四周处死小鼠，摘取肿瘤组织，进行称重，称重结果如下表。
实验结果可知：
在饲养第一、二、三和四周，shScramble组的肿瘤大小明显大于shHTOMM#1组和shHTOMM#2组。而且，shHTOMM#2组的序号为6的小鼠没有肿瘤组织，这表明敲低TOMM22能够抑制人肝癌细胞生长。
本发明通过调控TOMM22的表达，肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，通过裸鼠皮下成瘤实验，确定了TOMM22的敲低对肝癌细胞的生长具备抑制效果，从而为肝癌治疗提供了一种新的路径。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质范围。

Claims (6)

1.一种抑制TOMM22表达的shRNA在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于,所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
所述shHTOMM22#1的正义链如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反义链如SEQ IDNO.2所示；
所述shHTOMM22#2的正义链如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反义链如SEQ IDNO.4所示；
SEQ ID NO.1
CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
SEQ ID NO.2
AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
SEQ ID NO.3
CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
SEQ ID NO.4
AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
2.一种抑制TOMM22表达的shRNA抑制载体在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，包括shRNA和基础载体；
所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
所述shHTOMM22#1的正义链如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反义链如SEQ IDNO.2所示；
所述shHTOMM22#2的正义链如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反义链如SEQ IDNO.4所示；
SEQ ID NO.1
CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
SEQ ID NO.2
AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
SEQ ID NO.3
CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
SEQ ID NO.4
AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基础载体为pLKO.1质粒。
4.权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述抑制载体的制备方法包括：
权利要求1所述的shRNA的正义链和反义链混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述酶切所用的酶包括EcoRI和AgeI。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述连接所用的酶为T4 DNA连接酶。
CN202310296390.0A 2023-03-24 2023-03-24 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法 Active CN116463344B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310296390.0A CN116463344B (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310296390.0A CN116463344B (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116463344A CN116463344A (zh) 2023-07-21
CN116463344B true CN116463344B (zh) 2024-02-20

Family

ID=87176261

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310296390.0A Active CN116463344B (zh) 2023-03-24 2023-03-24 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116463344B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023004079A2 (en) * 2021-07-21 2023-01-26 Mercy Bioanalytics, Inc. Compositions and methods for detection of liver cancer

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020081528A1 (en) * 2018-10-16 2020-04-23 The Trustees Of Princeton University Method and system for treating cancer utilizing tinagl 1

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023004079A2 (en) * 2021-07-21 2023-01-26 Mercy Bioanalytics, Inc. Compositions and methods for detection of liver cancer

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Identification and Characterization of the Mitochondrial Targeting Sequence and Mechanism in Human Citrate Synthase;Tsung-Lin Cheng等;Journal of Cellular Biochemistry;第1004页右栏第2段 *
The prognostic value and clinical significance of mitophagy-related genes in hepatocellular carcinoma;Wei Xu等;Frontiers in Genetics;摘要、第6页右栏第2段、表2、图2和4 *
Tsung-Lin Cheng等.Identification and Characterization of the Mitochondrial Targeting Sequence and Mechanism in Human Citrate Synthase.Journal of Cellular Biochemistry.2009,第1004页右栏第2段. *
Wei Xu等.The prognostic value and clinical significance of mitophagy-related genes in hepatocellular carcinoma.Frontiers in Genetics.2022,摘要、第6页右栏第2段、表2、图2和4. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN116463344A (zh) 2023-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2975125B1 (en) Microvesicle, and manufacturing method for same
CN115969980B (zh) Rna解旋酶dhx33抑制剂在制备用于治疗胃癌的药物中的应用
CN116463344B (zh) 一种降低tomm22表达抑制肿瘤的方法
CN113528528B (zh) 一种促进耐伊马替尼慢性髓细胞白血病细胞K562/G01凋亡shRNA及其应用
CN110960546B (zh) MicroRNAs在制备索拉非尼治疗肝癌的增强剂中的应用
CN110917357B (zh) 人gsdmb基因的用途及相关产品
CN110904104B (zh) 人hist1h2bk基因的用途及相关产品
CN113476606A (zh) Upk1a-as1抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用
WO2022127788A1 (zh) 乐伐替尼和Aurora-A激酶抑制剂在制备抑制癌症的药物中的应用
CN103667424A (zh) 人eif3h基因的用途及其相关药物
WO2018160699A1 (en) Biomarkers for diagnosis, prediction and/or prognosis of pancreatic cancer and uses thereof
CN116617245B (zh) Utp11抑制剂及其在肿瘤抑制中的用途
CN115317625B (zh) 一种小干扰rna在制备改善鼻咽癌预后的药物中的应用
CN107184984A (zh) Rpl10的抑制剂在制备治疗卵巢癌的药物中的应用
CN110938630B (zh) 人b3gnt5基因的用途及相关产品
CN113908280A (zh) Trim11抑制剂和二甲双胍的组合物在治疗肝细胞癌中的应用
CN116440275A (zh) Mobat1在制备治疗癌症的试剂中用途
CN116656674A (zh) 一种靶向circRNA的反义核苷酸及其抗肺动脉高压用途
CN100430412C (zh) 核酸分子rtn4bsr6及其在制备抗癌药物中的应用
CN113913513A (zh) 人dsn1基因的用途及相关产品
CN115969971A (zh) 组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用
CN115317501A (zh) 用于敲减ripk1的小干扰RNA在制备PGCCs抑制剂中的应用
CN107868782A (zh) 核酸分子ctl4hsh3、其制备方法及应用
CN117414429A (zh) Rel抑制剂在制备抗肺鳞癌药物中的应用
CN107881171A (zh) 核酸分子ctl4hsh12、其制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant