CN116449029A - 一种用于定量检测抑制素a的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及试剂盒技术领域，具体公开了一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin‑A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin‑A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin‑A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin‑A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：（5‑7）:10。本发明试剂盒通过包覆有Inhibin‑A抗体的改性微粒混悬液与酶标的Inhibin‑A抗体配合，通过添加缓冲液和壳聚糖处理液配合协助，改性微粒通过纳米二氧化硅经过改性后，能够提高检测的灵敏度，由于纳米二氧化硅比表面积大，起到协效检测效率。

Description

一种用于定量检测抑制素A的试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及试剂盒技术领域，具体涉及一种用于定量检测抑制素A的试剂盒及其制备方法。
背景技术
抑制素(Inhibin，INH)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一，为α-亚单位和β-亚单位通过二硫键连接而成的异质二聚体糖蛋白激素。β-亚单位又有βA和βB两种形式，与α-亚单位分别形成抑制素A(INH A，αβA)和抑制素B(INH B，αβB)。
现有的抑制素A的试剂盒检测效率差，容易受温度和湿度的影响，导致检测的灵敏度差，基于此，本发明对其进一步的改进处理。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种用于定量检测抑制素A的试剂盒及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
本发明提供了一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：（5-7）:10。
优选地，所述缓冲液为pH7.0-8.0、5-100mmol/L Tris-HCl缓冲液。
优选地，所述改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到5-9倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量10-20%的草酸钠、3-6%的硅烷偶联剂KH560，以350-400r/min的转速搅拌20-30min，搅拌温度为55-65℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过100-150目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
优选地，所述海藻酸钠溶液的质量分数为20-25%。
优选地，所述超声分散的功率为300-350W，超声时间为20-30min。
优选地，所述盐酸溶液的质量分数为5-10%。
优选地，所述壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到3-6倍的水中，然后加入壳聚糖总量10-15%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到3-6倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本发明的发明人发现改性微粒采用纳米二氧化硅代替，产品的灵敏度和稳定性均变差，同时未添加壳聚糖处理液，测试稳定性显著降低，此外，改性微粒、壳聚糖处理液的制备方法不同，产品的测试效率不同，只有采用本发明的方法制备的试剂盒，测试灵敏度优异以及测试稳定性强。
优选地，所述十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为10-15%。
优选地，所述十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为12.5%。
本发明还提供了一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明试剂盒通过包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液与酶标的Inhibin-A抗体配合，通过添加缓冲液和壳聚糖处理液配合协助，改性微粒通过纳米二氧化硅经过改性后，能够提高检测的灵敏度，由于纳米二氧化硅比表面积大，起到协效检测效率，而壳聚糖处理液能够增强原料之间的溶透性，通过石墨烯改性协效，增强试剂盒检测的稳定性，提高检测效率。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：（5-7）:10。
本实施例的缓冲液为pH7.0-8.0、5-100mmol/L Tris-HCl缓冲液。
本实施例的改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到5-9倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量10-20%的草酸钠、3-6%的硅烷偶联剂KH560，以350-400r/min的转速搅拌20-30min，搅拌温度为55-65℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过100-150目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
本实施例的海藻酸钠溶液的质量分数为20-25%。
本实施例的超声分散的功率为300-350W，超声时间为20-30min。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为5-10%。
本实施例的壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到3-6倍的水中，然后加入壳聚糖总量10-15%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到3-6倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为10-15%。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为12.5%。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
实施例1.
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：5:10。
本实施例的缓冲液为pH7.0、5mmol/L Tris-HCl缓冲液。
本实施例的改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到5倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量10%的草酸钠、3%的硅烷偶联剂KH560，以350r/min的转速搅拌20min，搅拌温度为55℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过100目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
本实施例的海藻酸钠溶液的质量分数为20%。
本实施例的超声分散的功率为300W，超声时间为20min。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为5%。
本实施例的壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到3倍的水中，然后加入壳聚糖总量10%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到3倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为10%。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为12.5%。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
实施例2.
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：7:10。
本实施例的缓冲液为pH8.0、100mmol/L Tris-HCl缓冲液。
本实施例的改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到9倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量20%的草酸钠、6%的硅烷偶联剂KH560，以400r/min的转速搅拌30min，搅拌温度为65℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过150目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
本实施例的海藻酸钠溶液的质量分数为25%。
本实施例的超声分散的功率为350W，超声时间为30min。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为10%。
本实施例的壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到6倍的水中，然后加入壳聚糖总量15%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到6倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为15%。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
实施例3.
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：6:10。
本实施例的缓冲液为pH7.5、50mmol/L Tris-HCl缓冲液。
本实施例的改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到7倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量15%的草酸钠、4.5%的硅烷偶联剂KH560，以370r/min的转速搅拌25min，搅拌温度为60℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过125目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
本实施例的海藻酸钠溶液的质量分数为22.5%。
本实施例的超声分散的功率为320W，超声时间为25min。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为7.5%。
本实施例的壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到4.5倍的水中，然后加入壳聚糖总量12.5%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到4.5倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为12.5%。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
实施例4.
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：6:10。
本实施例的缓冲液为pH7.2、20mmol/L Tris-HCl缓冲液。
本实施例的改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到6倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量12%的草酸钠、4%的硅烷偶联剂KH560，以360r/min的转速搅拌22min，搅拌温度为56℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过110目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
本实施例的海藻酸钠溶液的质量分数为22%。
本实施例的超声分散的功率为310W，超声时间为22min。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为6%。
本实施例的壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到4倍的水中，然后加入壳聚糖总量12%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到4倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为13%。
本实施例的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到本发明的试剂盒。
对比例1.
与实施例3不同是改性微粒采用纳米二氧化硅代替。
对比例2.
与实施例3不同是改性微粒的制备中未采用盐酸溶液处理。
对比例3.
与实施例3不同是未添加壳聚糖处理液。
对比例4.
与实施例3不同是壳聚糖处理液的制备中未加入石墨烯添加剂。
对比例5.
与实施例3不同是壳聚糖处理液的制备中未加入羟基氨基酸。
将20ul的（血清/血浆的待测样本）进行检测，然后进行灵敏度检测，LOB：准备5份接近0值的临床样本，每个样本重复3次，总共做4天，得到60个数据；将试剂盒置于35℃、湿度10%的环境下放置1h测试；
实施例1-3及对比例1-5性能测量结果如下
从实施例1-3及对比例1-5中得出，实施例3的产品具有优异的灵敏度测试效率，同时在热、湿度下，灵敏度效果稳定性强；
通过对比例1-5可看出，改性微粒采用纳米二氧化硅代替，产品的灵敏度和稳定性均变差，同时未添加壳聚糖处理液，测试稳定性显著降低，此外，改性微粒、壳聚糖处理液的制备方法不同，产品的测试效率不同，只有采用本发明的方法制备的试剂盒，测试灵敏度优异以及测试稳定性强。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，包括以下重量份原料：包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液，其中包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的物质的质量比为3:1：（5-7）:10。
2.根据权利要求1所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为pH7.0-8.0、5-100mmol/L Tris-HCl缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述改性微粒的制备方法为：
S01：将纳米二氧化硅先加入到5-9倍的海藻酸钠溶液中，然后再加入纳米二氧化硅总量10-20%的草酸钠、3-6%的硅烷偶联剂KH560，以350-400r/min的转速搅拌20-30min，搅拌温度为55-65℃；
S02：然后再水洗、干燥，再送入到研磨机中研磨过100-150目；
S03：最后送入到盐酸溶液中超声分散，最后水洗、干燥，得到改性微粒。
4.根据权利要求3所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述海藻酸钠溶液的质量分数为20-25%。
5.根据权利要求3所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述超声分散的功率为300-350W，超声时间为20-30min。
6.根据权利要求3所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述盐酸溶液的质量分数为5-10%。
7.根据权利要求1所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述壳聚糖处理液的制备方法为：
S11：将壳聚糖加入到3-6倍的水中，然后加入壳聚糖总量10-15%的羟基氨基酸，搅拌均匀；
S12：将石墨烯加入到3-6倍的十二烷基硫酸钠溶液中，搅拌混合均匀，最后水洗、干燥，得到石墨烯添加剂；
S13：石墨烯添加剂、S11产物按照重量比1:8的量混合，搅拌充分，得到壳聚糖处理液。
8.根据权利要求7所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为10-15%。
9.根据权利要求7所述的一种用于定量检测抑制素A的试剂盒，其特征在于，所述十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为12.5%。
10.一种如权利要求1-9任一项所述用于定量检测抑制素A的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将包覆有Inhibin-A抗体的改性微粒混悬液、酶标的Inhibin-A抗体、缓冲液和壳聚糖处理液的原料依次搅拌混合均匀，得到试剂盒。
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