CN116421672A - 一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用 - Google Patents

一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用。所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；其中，所述细菌选自具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌中的至少一种；所述组合物对牙龈卟啉单胞菌的部分抑菌浓度指数为0.32‑0.50；所述组合物对具核梭杆菌的部分抑菌浓度指数为0.28‑0.48；姜厚朴与葡萄皮渣提取物用主要通过抑制牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生物被膜，同时，姜厚朴与葡萄皮渣提取物的联用也对抑制、清除生物被膜的形成，解决牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌耐药性、致病性等问题产生协同作用。

Description

一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用。
背景技术
口腔异味，俗称口臭，是由多因素引起的一种生理或病理现象，对人们的日常生活、交际造成不良影响，已成为影响社会交往和造成心理障碍的原因之一。
目前治疗口臭中防治有关致病微生物面临以下问题：具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌易黏附于牙齿和舌苔表面形成耐药性更强的牙菌斑生物被膜，且难以通过机械疗法根除。因此，清除致口臭菌生物被膜是治疗口臭的关键之一。目前治疗口臭的主要手段是使用含化学抗菌剂的漱口水抑制或杀灭致口臭菌，如氯己定、三氯生、西吡氯铵等抗菌剂，但长期使用此类漱口水可能会导致味觉改变，黏膜染色，灼烧感和腮腺肿胀，口腔菌群失调，细菌耐药性增强等不良后果。
国内外许多研究已经证明，中药或天然植物提取物对口臭有治疗或者辅助治疗的作用。将中药提取物应用于口臭治疗能保持口腔中原有的微生态环境，可发挥对病原菌的直接抑制作用而不产生耐药性，制备相对简便，毒副作用小，且效果持续时间长不会产生耐药性，但姜厚朴与葡萄皮渣提取物对口腔菌群生物被膜有抑制或消除作用方面的研究尚未见报道。
基于此，本发明提供了一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用技术手段，来解决上述技术方案的不足。
发明内容
本发明针对以上技术问题，公开了一种抑制清除细菌生物被膜的组合物及应用，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物，所述姜厚朴与所述葡萄皮渣提取物用主要通过抑制牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生物被膜、群体感应，从而阻碍群体感应对生物被膜形成的调控作用，同时，姜厚朴与葡萄皮渣提取物的联用也对抑制、清除生物被膜的形成，解决牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌耐药性、致病性等问题产生协同作用，从而有效抑制或杀灭口腔致臭菌。
本发明旨在提供一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，其是通过如下技术方案得以实现的。
一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；
其中，所述细菌选自具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌中的至少一种；
所述组合物包括质量分数如下的组分：
姜厚朴提取物 0.075-0.9％
葡萄皮渣提取物 0.15-8％
溶剂 余量。
进一步地，所述姜厚朴提取物中厚朴总酚含量≥90wt％。
进一步地，所述葡萄皮渣提取物中的白藜芦醇含量≥10wt％。
进一步地，所述组合物对牙龈卟啉单胞菌的部分抑菌浓度指数为0.32-0.50；
进一步地，所述组合物对具核梭杆菌的部分抑菌浓度指数为0.28-0.48。
进一步地，所述溶剂选自水、醇类中的至少一种。
优选地，所述溶剂为水。
本发明进一步提供了所述组合物在调节细菌群体感应中的应用。
本发明进一步提供了一种抑制清除细菌生物被膜的抗菌剂，包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物。
进一步地，所述抗菌剂在制备具有清除口腔异味的牙膏或漱口水中的应用。
本发明所提供的一种抑制清除细菌生物被膜的组合物具有以下有益效果：
1、本发明采用姜厚朴与葡萄皮渣提取物联用作为抑菌或杀菌剂，两种植物提取物均为无毒、无刺激的天然抑菌剂，在不影响口腔微生物生态平衡的同时，能够有效抑制或杀灭口腔致臭菌，清除牙菌斑。
2、姜厚朴与葡萄皮渣提取物用主要通过抑制牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生物被膜、群体感应，从而阻碍群体感应对生物被膜形成的调控作用，同时，姜厚朴与葡萄皮渣提取物的联用也对抑制、清除生物被膜的形成，解决牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌耐药性、致病性等问题产生协同作用。
附图说明
图1为CCK-8法检测各组药物对Pg各阶段生物被膜细菌代谢活性统计图；
图2为结晶紫法检测各组药物对Pg各阶段生物被膜总量统计图；
图3为SEM观察药物对牙龈卟啉单胞菌不同阶段生物被膜的形态结构图；
图4为CCK-8法检测各组药物对Fn各阶段生物被膜细菌代谢活性统计图；
图5为结晶紫法检测各组药物对Fn各阶段生物被膜总量统计图；
图6为SEM观察药物对具核梭杆菌不同阶段生物被膜的形态结构图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明的技术方案，列举如下实施例。实施例中所出现的原料、反应和后处理手段，除非特别声明，均为市面上常见原料，以及本领域技术人员所熟知的技术手段。
本发明实施例所述的菌体，采用牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)(标准株，ATCC 33277)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)标准株，ATCC 25586)；
本发明实施例所述的培养基采用脑心浸液琼脂培养基(BHI-S，pH7.4)、脑心浸液液体培养基(BHI，pH7.4)。
本发明实施例所述姜厚朴提取物购买自北京本草方源药业集团有限公司，批号：20210109，其中厚朴总酚含量为90wt％。
本发明实施例所述葡萄皮提取物购买自陕西百川生物科技有限公司，批号：BCSW221028-1，其中白藜芦醇含量为10wt％。
本发明所述脑心浸液琼脂培养基、脑心浸液液体培养基的成分和浓度如下表1所示；
成分 脑心浸液琼脂培养基 脑心浸液液体培养基
培养基颗粒(g) 5.2 7.7
氯化血红素(μg/mL) 5.0 5.0
维生素K1(μg/mL) 10.0 10.0
无菌脱纤维羊血(％) 1％ /
去离子水(mL) 100 200
所述姜厚朴提取物储备液为姜厚朴提取物冻干粉，用无菌水溶解配置成浓度为2560mg/mL的药物贮备液；
所述葡萄皮提取物贮备液为葡萄皮提取物粉末，用无菌水溶解配置成浓度为2560mg/mL的药物贮备液。
所述氯己定贮备液为取氯己定粉末，用二甲基亚砜溶解配置成浓度为2560mg/mL的药物贮备液。
本发明测试例中的牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的制备方法如下：
在无菌工作台中，将牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌甘油冻存菌株分别接种于BHI-S琼脂平板上，置于37℃恒温培养箱中厌氧培养60h，将培养有成熟受试菌株的培养基中加入无菌生理盐水，振荡并冲洗菌落，得到牙龈卟啉单胞菌悬液和具核梭杆菌悬液；
通过比浊法，以无菌生理盐水稀释调整菌悬液与0.5号比浊管的浊度相一致，即菌液浓度为1.5×108CFU/mL。再用BHI液体培养基将上述菌悬液浓度调节至1.0×106CFU/mL，作为实验菌悬液。
实施例1
一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；
所述姜厚朴提取物的浓度为2560-1.25mg/mL；
所述葡萄皮渣提取物的浓度为2560-1.25mg/mL；
所述姜厚朴提取物和所述葡萄皮渣提取物通过采用微量二倍稀释法使用BHI液体培养基稀释至所述浓度。
实施例2
一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；
所述姜厚朴提取物的浓度为0.15-18mg/mL；
所述葡萄皮渣提取物的浓度为5.46-700mg/mL；
所述姜厚朴提取物和所述葡萄皮渣提取物通过采用微量二倍稀释法使用BHI液体培养基稀释至所述浓度。
实施例3
一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；
所述姜厚朴提取物的浓度为0.75-1.13mg/mL；
所述葡萄皮渣提取物的浓度为70-80mg/mL；
所述姜厚朴提取物和所述葡萄皮渣提取物通过采用微量二倍稀释法使用BHI液体培养基稀释至所述浓度。
测试例1
测定组合物对牙龈卟啉单胞菌与具核梭杆菌的最小抑菌浓度
将200μL浓度为1×106CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌悬液和具核梭杆菌悬液分别向无菌96微孔板中接种，牙龈卟啉单胞菌置于37℃恒温培养箱中厌氧培养72h，具核梭杆菌在相同条件下培养48h；
使用无菌移液枪吸取并去掉各孔培养基和浮游菌，取200μL无菌PBS轻轻冲洗3遍；
采用微量二倍稀释法使用BHI液体培养基将氯己定药物储备液稀释至浓度范围为：2560-10μg/mL，将实施例1所述姜厚朴提取物和所述葡萄皮渣提取物和稀释后的氯己定药物储备液分别各取200μL分别加入到接种有牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的96孔板中，且设生长对照孔(仅含培养基和牙龈卟啉单胞菌或具核梭杆菌)和阴性对照孔(仅含液体培养基)，置于37℃恒温培养箱中厌氧培养24h后观察结果。
结果判定标准：以肉眼未见浑浊的最低药物浓度即为最低抑膜浓度(MBIC)，结果如表2所示；
为了明确药敏性试验操作是在可接受的标准内进行，测试结果可信，在每次测定时应进行质量控制，质量控制QC株采用脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis，ATCC 25285)，质控药物为甲硝唑，在平行操作条件下，最小抑菌浓度(MIC)为0.25-2μg/mL范围内，如此则视为测定结果有效可信。
表2药物对牙龈卟啉单胞菌与具核梭杆菌的MBIC值(n＝3)
Figure BDA0004164082920000051
从表2可知，姜厚朴提取物对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的生物被膜具有一定的清除作用，其中姜厚朴提取物对牙龈卟啉单胞菌的生物被膜清除作用最佳。
测试例2
测定姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联合药敏浓度
将200μL浓度为1×106CFU/mL牙龈卟啉单胞菌悬液和具核梭杆菌悬液分别向无菌96微孔板中接种，牙龈卟啉单胞菌置于37℃恒温培养箱中厌氧培养72h，具核梭杆菌在相同条件下培养48h。使用无菌移液枪吸取并去掉各孔培养基和浮游菌，取200μL无菌PBS轻轻冲洗三遍。
根据测试例1结果选定姜厚朴提取物的MBIC值，取其2MIC值为第一个浓度，分别加入100μL姜厚朴提取物至无菌96微孔板A1-G1列；
在无菌96微孔板A-G行、2-10列分别加入50μLBHI液体培养基，使用无菌移液枪从第一列中吸取50μL到第2列进行二倍稀释，依次横向倍比稀释至第8列(1/64MIC)，弃掉第8列中的50μL；
将葡萄皮提取物稀释成7个浓度(1MIC-1/64MIC)，分别加入50μL至无菌96微孔板A-G行；
另外设立生长对照组孔(含牙龈卟啉单胞菌悬液或具核梭杆菌悬液和培养基)和阴性对照组孔(只含液体培养基)，除阴性对照孔外，向各孔中加入100μL菌悬液(1.0×106CFU/mL)，用BHI液体培养基将每孔体积调至200μL；
在37℃厌氧条件下培养24h后观察结果，通过肉眼观察，以无菌落生长的药物孔相应的浓度为其MBIC联合，结果如表3所示；
结果评价标准：以部分抑菌浓度指数(FICI)为联合药敏试验的判断依据：FICI≤0.5为协同作用；0.5<FICI≤1为相加作用；1<FICI≤2为无关作用。
FICI＝MBICA药联用/MBICA药单用+MBICB药联用/MBICB药单用
表3姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联合药敏试验结果(n＝3)
Figure BDA0004164082920000061
由结果可知，姜厚朴提取物与葡萄皮提取物的联合用药对牙龈卟啉单胞菌(Pg)和具核梭杆菌(Fn)的FICI值均＜0.5，说明两者联用均有协同作用，抑菌效果更佳(FICI≤0.5为协同作用)。对牙龈卟啉单胞菌，姜厚朴提取物联用后的MIC为单用的1/8，葡萄皮提取物联用后的MIC为单用的1/4；对具核梭杆菌，姜厚朴提取物联用后的MIC为单用的1/8，葡萄皮提取物联用后的MIC为单用的1/4，均说明联用后可减少任一单药的用药量。
测试例3
药物对受试菌黏附、聚集、成熟期生物被膜作用
将1×106CFU/mL的供试菌液取200μL接种至平底96孔板中，于37℃恒温厌氧分别培养牙龈卟啉单胞菌36h、60h、84h；分别培养具核梭杆菌24h、42h、60h后结束培养(每隔24h更换一次培养基)，分别得到黏附、聚集和成熟期的牙龈卟啉单胞菌和黏附、聚集和成熟期具核梭杆菌的生物被膜；
所述牙龈卟啉单胞菌的黏附期为培养36h、聚集期为培养60h、成熟期为培养84h；
所述培养具核梭杆菌的黏附期为培养24h、聚集期为培养42h、成熟期为培养60h。
按上述方法建立各时期的生物被膜后，吸弃培养基，用PBS漂洗；
分别加入200μL药物供试液，牙龈卟啉单胞菌给药分组：0.75mg/mL姜厚朴提取物组、80mg/mL的葡萄皮提取物组，0.75mg/mL姜厚朴提取物+80mg/mL的葡萄皮提取物联合组、10μg/mL氯己定组作为阳性对照，以加入200μL的培养基为生长对照组；
具核梭杆菌给药分组：1.13mg/mL姜厚朴提取物组、70mg/mL的葡萄皮提取物组，1.13mg/mL姜厚朴提取物+70mg/mL的葡萄皮提取物联合组、5.62μg/mL氯己定组作为阳性对照，以加入200μL的培养基为生长对照组，均放置37℃恒温培养箱中厌氧培养24h，吸弃培养基和药液，PBS漂洗，进行测定，测试结果如图1-图6所示。
请参阅图1，药物在牙龈卟啉单胞菌黏附期(A1)、聚集期(B1)、成熟期(C1)生物被膜进行干预，结果显示联合组均可有效降低生物被膜内细菌代谢活性(P＜0.0001)，其代谢活性与生长对照组相比分别下降了88.23％、96.10％和90.85％。在成熟期(84h)，药物联合组的效果均优于各单药组(P＜0.0001)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的8.21倍，为葡萄皮提取物单用的10.50倍。与阳性对照组氯己定比较，联合组效果更佳(P＜0.0001)。
在黏附期(36h)与聚集期(60h)时，药物联合组的效果也优于各单药组(P＜0.01)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的3.92倍和13.12倍，为葡萄皮提取物单用的8.53倍和23.07倍，与阳性对照组氯己定比较，联合组效果没有显著性差异(P＞0.05)。
可见姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联用后可有效抑制牙龈卟啉单胞菌生物被膜形成各阶段的膜内细菌代谢活性，并且比两种药物单独使用的效果好。
请参阅图2，药物在牙龈卟啉单胞菌黏附期(A2)、聚集期(B2)、成熟期(C2)生物被膜进行干预，结果显示联合组均可有效降低生物被膜基质总量(P＜0.0001)，其代谢活性与生长对照组相比分别下降了64.23％、78.34％和88.23％。
在聚集期(60h)，药物联合组的效果均优于各单药组(P＜0.05)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的3.53倍，为葡萄皮提取物单用的3.37倍。
在黏附期(36h)与成熟期(84h)的效果也优于各单药组，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的1.54倍和2.49倍，为葡萄皮提取物单用的2.09倍、和2.97倍。与阳性对照组氯己定比较，联合组效果没有显著性差异(P＞0.05)。
可见姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联用后可有效减少牙龈卟啉单胞菌生物被膜形成各阶段的基质总量，并且比两种药物单独使用的效果好。
请参阅图3，药物对牙龈卟啉单胞菌黏附期、聚集期、成熟期生物被膜微观结构；
在黏附期时(36h)，与生长对照组相比，在各组药物分别作用下细菌数量均相对减少，菌体结构发生不同程度的改变。在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，细菌数量减少且结构发生轻微变形，但仍可进行正常的细胞分裂分化。而联合组中除了细菌数量大幅减少之外，几乎没有成型的细菌存在。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量相对减少且部分菌体发生严重变形。
在聚集期时(60h)，生长对照组中的细菌逐渐聚集成块，细菌外部可见胞外基质黏连。在药物作用下，细菌数量相对减少，细菌菌体出现变形、破裂。其中，在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，细菌数量相对减少，但仍可见部分聚集成块的细菌团块。而联合组中细菌数量大幅减少且细菌团块消失，细菌菌体出现明显变形、破裂，有内容物流出痕迹。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量大幅减少且菌体表面可见明显破裂。
在成熟期时(84h)，生长对照组中的细菌形成了胞外基质黏连的致密生物被膜而且具有立体的三维结构。在药物作用下，细菌数量和菌体分别发生不同程度的减少和变形。在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，菌体表面发生轻微破裂和变形，但致密的生物被膜结构仍然存在。而联合组中细菌数量大幅减少且细菌团块破碎，生物被膜三维结构被严重破坏，留下菌体大量死亡的痕迹。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量大幅减少，生物被膜结构被破坏，仅剩少量菌体团块，且菌体形态明显破裂变形。
请参阅图4，药物在具核梭杆菌黏附期(D1)、聚集期(E1)、成熟期(F1)生物被膜进行干预，结果显示联合组均可有效降低生物被膜内细菌代谢活性(P＜0.0001)，其代谢活性与生长对照组相比分别下降了93.27％、90.25％和93.32％。在成熟期(60h)，药物联合组的效果均优于各单药组(P＜0.001)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的7.33倍，为葡萄皮提取物单用的9.71倍。
在黏附期(24h)与聚集期(42h)，药物联合组的效果也较优于各单药组(P＜0.01)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的5.26倍和3.82倍，为葡萄皮提取物单用的10.18倍和4.84倍。与阳性对照组氯己定比较，联合组效果没有显著性差异(P＞0.05)。
可见姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联用后可有效抑制具核梭杆菌生物被膜形成各阶段的膜内细菌代谢活性，并且比两种药物单独使用的效果好。
请参阅图5，药物在牙龈卟啉单胞菌黏附期(D2)、聚集期(E2)、成熟期(F2)生物被膜进行干预，结果显示联合组均可有效降低生物被膜基质总量(P＜0.0001)，其代谢活性与生长对照组相比分别下降了95.69％、78.27％和79.06％。
在黏附期(24h)与成熟期(60h)，药物联合组的效果均优于各单药组(P＜0.001)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的7.93倍和2.48倍，为葡萄皮提取物单用的9.62倍和2.94倍。在成熟期(84h)的效果也较优于各单药组(P＜0.05)，其作用效果分别为姜厚朴提取物单用的2.50倍，为葡萄皮提取物单用的2.86倍。与阳性对照组氯己定比较，联合组效果没有显著性差异(P＞0.05)。
可见姜厚朴提取物与葡萄皮提取物联用后可有效减少具核梭杆菌生物被膜形成各阶段的基质总量，并且比两种药物单独使用的效果好。
请参阅图6，药物对具核梭杆菌黏附期、聚集期、成熟期生物被膜微观结构；
在黏附期时(24h)，生长对照组中分散着长条杆状菌，与生长对照组相比，在各组药物分别作用下细菌数量均相对减少。在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，细菌数量减少，但形态结构未发生改变，仍可进行正常的细胞分裂分化。而联合组中除了细菌数量大幅减少之外，没有成型的细菌存在，只剩下菌体破裂后的痕迹。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量减少且菌体发生严重破裂。
在聚集期时(42h)，生长对照组中的细菌外部有胞外基质黏连聚集成团。在药物作用下，细菌数量相对减少，细菌菌体出现不同程度的变形、破裂。其中，在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，细菌数量相对减少，但仍可见部分聚集成块的细菌团块。而联合组中细菌团块消失，仅存单个菌体且菌体出现明显变形、破裂。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量大幅减少且菌体破裂皱缩不成形。
在成熟期时(60h)，生长对照组中的细菌形成了立体具有一定厚度的致密生物被膜。在药物作用下，细菌数量和菌体分别发生不同程度的减少和变形。在姜厚朴提取物和葡萄皮提取物的处理下，细菌生长受到抑制，变短且数量减少，但致密的生物被膜结构仍然存在。而联合组中细菌数量大幅减少，生物被膜的立体结构被严重破坏且厚度降低，大量菌体破裂。在阳性对照氯己定的作用下，细菌数量大幅减少，生长被抑制，形态由细长变短小，生物被膜结构被破坏。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (9)

1.一种抑制清除细菌生物被膜的组合物，其特征在于，所述组合物包括姜厚朴提取物和葡萄皮渣提取物；
其中，所述细菌选自具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌中的至少一种；
所述组合物包括质量分数如下的组分：
姜厚朴提取物0.075-0.9％
葡萄皮渣提取物0.15-8％
溶剂余量。
2.如权利要求1所述抗具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的组合物，其特征在于，
所述姜厚朴提取物中厚朴总酚含量≥90wt％。
3.如权利要求1所述抗具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的组合物，其特征在于，
所述葡萄皮渣提取物中的白藜芦醇含量≥10wt％。
4.如权利要求1所述抗具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的组合物，其特征在于，
所述组合物对牙龈卟啉单胞菌的部分抑菌浓度指数为0.32-0.50。
5.如权利要求1所述抗具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的组合物，其特征在于，
所述组合物对具核梭杆菌的部分抑菌浓度指数为0.28-0.48。
6.如权利要求1所述抗具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的组合物，其特征在于，
所述溶剂选自水、醇类中的至少一种。
7.权利要求1所述组合物在调节细菌群体感应中的应用。
8.一种抑制清除细菌生物被膜的抗菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的组合物。
9.如权利要求8所述抑制清除细菌生物被膜的抗菌剂，所述抗菌剂在制备具有清除口腔异味的牙膏或漱口水中的应用。
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