CN116392567B - 一种改善睾丸功能障碍的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种改善睾丸功能障碍的中药组合物及其制备方法和应用。本发明以党参、黄芪、山药、当归、白术、茯苓、白芍、补骨脂、川芎、莲子、芡实、砂仁、草寇、茴香、肉桂、吴茱萸、胡椒、生姜、黑附子和甘草为原料制备中药组合物，诸药相合，脾、胃、肾三脏同调，气血津液得复，肾精化生有源。动物实验表明，本发明提供的中药组合物能够上调PI3K、p‑Akt、Bcl‑2的表达，改善睾丸功能障碍，改善激素分泌，调节机体雄性生殖内分泌环境，进而提高精液参数。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种改善睾丸功能障碍的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
糖尿病是现代最主要的公共卫生问题之一，糖尿病患者中90％为2型糖尿病(T2DM)。研究表明糖尿病可导致精子质量异常(Kong Z L,Sudirman S,Hsu Y C,etal.Fucoxanthin-Rich Brown Algae Extract Improves Male Reproductive Functionon Streptozotocin-Nicotinamide-Induced Diabetic Rat Model[J].Int J Mol Sci,2019,20(18).)，在约一半的男性糖尿病患者中，睾丸功能障碍的发病率高达95％，有50％以上的糖尿病患者有不同程度的不育(李文梅.糖尿病男性血清生殖激素与精液质量的临床研究[J].糖尿病新世界,2020,23(05):23-25.)，少弱精症患者约占男性不育人群的75％(李新阳，孙自学.基于网络药理学和分子对接探讨益肾通络补气方对少弱精症大鼠雌激素受体的影响[J].中成药,2021,43(11):3216-3221.)。
因为生殖细胞对药物的敏感性，探索天然有效且低副作用的治疗手段，改善及治疗糖脂代谢紊乱导致的少弱精症显得尤为重要。目前对于2型糖尿病导致的少弱精症的关注尚且较少，西医主要以手术方式，通过降糖和抗氧化进行治疗，但是此种方法会产生较大副作用；中医具有个性化、疗效好、副作用少的优势，但是尚未形成有效改善肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍的方案。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种中药组合物，改善激素分泌，调节机体雄性生殖内分泌环境，改善精液参数，改善睾丸功能障碍。
为了解决上述问题，本发明提供了一种改善睾丸功能障碍的中药组合物，包括如下原料：党参、黄芪、山药、当归、白术、茯苓、白芍、补骨脂、川芎、莲子、芡实、砂仁、草寇、茴香、肉桂、吴茱萸、胡椒、生姜、黑附子和甘草。
优选的，包括如下质量份的原料：党参10～40份、黄芪15～100份、山药10～40份、当归6～25份、白术6～40份、茯苓10～30份、白芍10～30份、补骨脂6～15份、川芎6～20份、莲子6～20份、芡实6～20份、砂仁3～10份、草寇3～10份、茴香6～20份、肉桂3～15份、吴茱萸6～10份、胡椒6～15份、生姜6～15份、黑附子6～15份和甘草6～10份。
本发明还提供了一种改善睾丸功能障碍的中药组合物的制备方法，包括：将上述技术方案所述的原料混合后提取。
优选的，所述提取的方式包括水提。
优选的，所述水提的方法包括：
将制备所述中药组合物原料的混合物与水按照136～500g：400～1000mL的质量体积比混合，浸泡30min，大火煮开后，改文火煮40～60min，过滤。
本发明还提供了上述技术方案所述的中药组合物在制备改善睾丸功能障碍产品中的应用。
优选的，所述产品包括药品或食品；
所述睾丸功能障碍包括糖尿病引发的睾丸功能障碍。
优选的，所述糖尿病引发的睾丸功能障碍包括肥胖二型糖尿病诱发的睾丸功能障碍。
本发明还提供了上述技术方案所述的中药组合物在制备改善睾丸形态和或提高精液参数的产品中的应用。
本发明还提供了一种改善睾丸功能障碍的药物，包括上述技术方案所述的中药组合物和药学上可接受的辅料。
有益效果：
本发明以党参、黄芪、山药、当归、白术、茯苓、白芍、补骨脂、川芎、莲子、芡实、砂仁、草寇、茴香、肉桂、吴茱萸、胡椒、生姜、黑附子和甘草为原料制备中药组合物，党参、黄芪、山药、白芍为君药，补气养阴，生津养血，补后天以养先天；白术、茯苓、芡实和补骨脂为臣药，化脾胃湿浊，温补肾阳；当归、川芎、莲子、砂仁、茴香、肉桂、胡椒、生姜、草寇、吴茱萸和黑附子为佐药，当归和川芎，行血活血，改善微循环，恢复生精功能；莲子，清心火；肉桂、附子温运阳气，鼓动气血，引火归元，肾阳蒸化肾水滋养五脏之阴；胡椒、砂仁、小茴香和生姜行气温中，脾气得健，精微运化得复；甘草为使药，调和诸药。本发明合理选择原料，诸药相合，脾、胃、肾三脏同调，气血津液得复，肾精化生有源。动物实验表明，本发明提供的中药组合物能够上调PI3K、p-Akt、Bcl-2的表达，改善睾丸功能障碍，改善激素分泌，调节机体雄性生殖内分泌环境，进而提高精液参数。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为不同处理方式对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠体重的影响；
图2为不同处理方式对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠血糖的影响；
图3-1为对照组对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸形态的影响(200倍图)；
图3-2为模型组对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸形态的影响(200倍图)；
图3-3为二甲双胍组对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸形态的影响(200倍图)；
图3-4为组合物高剂量组对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸形态的影响(200倍图)；
图3-5为组合物低剂量组对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸形态的影响(200倍图)；
图4为不同处理方式对肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠睾丸中PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种改善睾丸功能障碍的中药组合物，包括如下原料：党参、黄芪、山药、当归、白术、茯苓、白芍、补骨脂、川芎、莲子、芡实、砂仁、草寇、茴香、肉桂、吴茱萸、胡椒、生姜、黑附子和甘草。
本发明所述中药组合物的制备原料包括党参；所述党参的质量份数优选为10～40份，进一步优选为15～35份，更优选为20～30份，最优选为25份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括黄芪；以所述党参的质量份数为基准，所述黄芪的质量份数优选为15～100份，进一步优选为20～80份，更优选为30～60份，最优选为40～50份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括山药；以所述党参的质量份数为基准，所述山药的质量份数优选为10～40份，进一步优选为15～35份，更优选为20～30份，最优选为25份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括白芍；以所述党参的质量份数为基准，所述白芍的质量份数优选为10～30份，进一步优选为15～25份，更优选为20份。
本发明以党参、黄芪、山药和白芍共为君药，补气养阴，生津养血，补后天以养先天。
本发明所述中药组合物的制备原料包括白术；以所述党参的质量份数为基准，所述白术的质量份数优选为6～40份，进一步优选为10～35份，更优选为20～30份，最优选为25份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括茯苓；以所述党参的质量份数为基准，所述茯苓的质量份数优选为10～30份，进一步优选为15～25份，更优选为20份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括芡实；以所述党参的质量份数为基准，所述芡实的质量份数优选为6～20份，进一步优选为8～15份，更优选为10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括补骨脂；以所述党参的质量份数为基准，所述补骨脂的质量份数优选为6～15份，进一步优选为8～10份。
本发明以白术、茯苓、芡实和补骨脂共为臣药，化脾胃湿浊；温补肾阳。
本发明所述中药组合物的制备原料包括当归；以所述党参的质量份数为基准，所述当归的质量份数优选为6～25份，进一步优选为8～20份，更优选为10～15份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括川芎；以所述党参的质量份数为基准，所述川芎的质量份数优选为6～20份，进一步优选为8～15份，更优选为10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括莲子；以所述党参的质量份数为基准，所述莲子的质量份数优选为6～20份，进一步优选为8～15份，更优选为10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括砂仁；以所述党参的质量份数为基准，所述砂仁的质量份数优选为3～10份，进一步优选为5～8份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括茴香；以所述党参的质量份数为基准，所述茴香的质量份数优选为6～20份，进一步优选为8～15份，更优选为10份。本发明所述茴香优选为小茴香。
本发明所述中药组合物的制备原料包括肉桂；以所述党参的质量份数为基准，所述肉桂的质量份数优选为3～15份，进一步优选为8～10份。本发明所述胡椒优选为白胡椒。
本发明所述中药组合物的制备原料包括胡椒；以所述党参的质量份数为基准，所述胡椒的质量份数优选为6～15份，进一步优选为8～10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括生姜；以所述党参的质量份数为基准，所述生姜的质量份数优选为6～15份，进一步优选为8～10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括草寇；以所述党参的质量份数为基准，所述草寇的质量份数优选为3～10份，进一步优选为5～9份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括吴茱萸；以所述党参的质量份数为基准，所述吴茱萸的质量份数优选为6～10份，进一步优选为8～10份。
本发明所述中药组合物的制备原料包括黑附子；以所述党参的质量份数为基准，所述黑附子的质量份数优选为6～15份，进一步优选为8～15份。
本发明以当归、川芎、莲子、砂仁、茴香、肉桂、胡椒、生姜、草寇、吴茱萸和黑附子共为佐药，当归和川芎，行血活血，改善微循环，恢复生精功能；莲子，清心火；肉桂、黑附子温运阳气，鼓动气血，引火归元，肾阳蒸化肾水滋养五脏之阴；胡椒、砂仁、小茴香和生姜行气温中，脾气得健，精微运化得复。
本发明所述中药组合物的制备原料包括甘草；以所述党参的质量份数为基准，所述甘草的质量份数优选为6～10份，进一步优选为8份。
本发明以甘草为使药，调和诸药。
本发明合理选择原料，诸药相合，脾、胃、肾三脏同调，气血津液得复，肾精化生有源。
本发明优选还提供了一种改善睾丸功能障碍的中药组合物的制备方法，包括：将上述技术方案所述的原料混合后提取。
本发明将所述技术方案所述的原料混合后提取。在本发明中，所述提取的方式优选包括水提。
在本发明中，所述水提的方法优选包括：将制备所述中药组合物原料的混合物与水按照136～500g：400～1000mL的质量体积比混合，浸泡30min，大火煮开后，改文火煮40～60min，过滤，得到提取物，即为本发明所述的中药组合物。本发明所述混合物与水的质量体积比优选为140～450g：450～900mL，进一步优选为200～400g：500～800mL，更优选为250～350g：600～700mL，最优选为300g：650mL。
本发明优选还提供了上述技术方案所述的中药组合物在制备改善睾丸功能障碍产品中的应用。
在本发明中，所述产品优选包括药品或食品；所述睾丸功能障碍优选包括糖尿病引发的睾丸功能障碍，进一步优选包括2型糖尿病引发的睾丸功能障碍。
小鼠试验表明，本发明提供的中药组合物能够上调小鼠体内PI3K、p-Akt、Bcl-2的表达，显著升高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶，并下调丙二醛，可以有效改善雄性动物体内的氧化应激水平，抑制ROS水平升高导致的生殖细胞凋亡和氧化应激对精子发生过程的干扰，由此来升高肥胖2型糖尿病小鼠睾酮水平，改善精液参数。本发明提供的中药组合物还可以显著增加葡萄糖摄取；胰岛敏感性增强，且效果与二甲双胍相近，对于2型糖尿病也有一定的改善作用。
本发明还提供了上述技术方案所述的中药组合物在制备改善睾丸形态和或提高精液参数的产品中的应用。
本发明还提供了一种改善睾丸功能障碍的药物，包括上述技术方案所的中药组合物和药学上可接受的辅料。
在本发明中，所述药物的剂型优选包括水剂、颗粒剂和冻干剂中的任意一种。本发明对所述药学上可接受的辅料的类型没有严格要求，根据药物的剂型常规选择即可。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种改善睾丸功能障碍的中药组合物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种改善睾丸功能障碍的中药组合物的制备方法，由如下步骤组成：
(1)备料：
党参20g、黄芪30g、山药20g、当归20g、白术10g、茯苓10g、白芍10g、川芎10g、莲子10g、芡实10g、补骨脂10g、砂仁5g、草寇10g、茴香20g、肉桂10g、吴茱萸10g、白胡椒10g、生姜10g、黑附子10g和甘草10g。
(2)将步骤(1)所有原料放入陶瓷锅，加入400mL水，浸泡30分钟，大火煮开后，改文火煮40～60分钟，过滤，即得到200mL左右的中药组合物。
应用例1
1.材料
1.1实验动物
4周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠30只，体重(20±2)g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，实验动物合格证号(10752309202100163)。
1.2实验条件
实验场所为宁夏医科大学实验动物中心SPF实验室，温度22～23℃，湿度50％～60％，12h昼夜交替，自由摄食饮水，环境安静，实验室环境符合清洁级动物饲养条件。
1.3药物
实施例1得到的中药组合物、高脂饲料(购于美国Research Diets公司，货号：D12492)和盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司，规格0.5g)。
1.4主要试剂
PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2抗体均购于美国Cell Signaling Technology公司；睾酮、超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒均购自于Elabsicience公司。
2.方法
2.1动物分组和模型建立
实验动物适应性饲养一周后，随机分为对照组(Con)、模型组(T2DM)、组合物高剂量组(YPBS-H)、组合物低剂量组(YPBS-L)、二甲双胍组(Metformin，Met)，每组6只；对照组(Con)6只给予普通饲料，其余处理组给予60％高脂饲料喂养，期间每7天记录一次体重，结果如图1中A所示。
根据图1中A可以看出，模型组、组合物高剂量组、组合物低剂量组和二甲双胍组小鼠体重明显上升，显著肥胖；并且在实验过程中发现模型小鼠随机血糖>11.1mmol/L，OGTT和ITT检测血糖显著高于对照组，精子数量、精子活力、精子活率显著的低于对照组，精子畸形率显著高于对照组，表示肥胖2型糖尿病小鼠模型造模成功。
2.2给药方式
步骤2.1各处理组小鼠喂养16周后已经造模成功，对各处理组小鼠进行给药处理，具体如下：
对照组(Con)：给与生理盐水；
模型组(T2DM)：给与生理盐水；
组合物高剂量组(YPBS-H)：按照4g/Kg/d/只的剂量给予实施例1得到的中药组合物；
组合物低剂量组(YPBS-L)：按照2g/Kg/d/只的剂量给予实施例1得到的中药组合物。
二甲双胍组(Metformin，Met)：按照200mg/Kg/d/只的剂量给予二甲双胍。
给药期间饲喂普通饲料，正常饮水，观察小鼠体重变化，采用GraphPad Prism8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表1和图1中B所示。
表1各组小鼠体重曲线下面积(AUC)和治疗第30天体重的比较
注：与对照组比，*P＜0.01；与模型组比，△P＜0.01；与二甲双胍组比，▲P＜0.05，下同。
根据表1和图1中B可以看出，造模16周时治疗，与对照组相比，模型组、二甲双胍组、组合物高剂量组和低剂量组小鼠体重和曲线下面积显著增加(P<0.05)，但模型组、二甲双胍组、组合物高剂量组、组合物低剂量组之间无明显差异(P>0.05)。与模型组相比，二甲双胍组、组合物高剂量和低剂量组小鼠体重和曲线下面积显著下降，且二甲双胍组低于组合物高剂量和低剂量组(P＜0.05)。治疗第30天，模型组小鼠体重显著高于对照组，与模型组相比，二甲双胍组、组合物高剂量组、组合物低剂量组体重显著下降，且二甲双胍组小鼠体重低于组合物低剂量组(P＜0.05)，但与组合物高剂量组相比无统计学意义(P＞0.05)。本发明提供的中药组合物能够改善肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠体重。
2.3步骤2.2各处理组给药30d后，分别进行如下检测：
2.3.1口服葡萄糖耐量试验(OGTT)和胰岛素抵抗试验(ITT)
OGTT实验：将小鼠禁食15h后进行称重，分别测空腹血糖(FPG)，然后根据小鼠体重计算出葡萄糖用量，检测灌胃后15min、30min、60min和120min时血糖变化，采用GraphPadPrism 8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表2和图2中A所示。
ITT实验：将小鼠禁食5小时后进行称重，然后计算出胰岛素注射量，分别测FPG，予腹腔注射胰岛素，检测注射胰岛素后15min、30min、60min和120min血糖变化，采用GraphPadPrism 8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表2和图2中B所示。
表2各组小鼠OGTT-AUC、ITT-AUC、FPG的比较
根据表2和图2可以看出，在口服葡萄糖耐量试验中，分别检测FPG和灌胃后15、30、60和120min时的血糖，模型组血糖水平显著高于对照组，组合物高剂量组和二甲双胍组的葡萄糖摄取显著改善，模型组小鼠OGTT-AUC明显升高(P<0.05)，表明糖尿病状态的形成；与模型组相比，二甲双胍组和组合物高剂量组OGTT-AUC明显减少(P＜0.05)，表明其增加了葡萄糖的摄取。在胰岛素耐量试验中，分被检测FPG和注射胰岛素后15、30、60和120min时的血糖，具有类似结果，但组合物高剂量组优于二甲双胍组(P＜0.05)。本发明中药组合物能提高胰岛功能的敏感性，增加葡萄糖摄取。此外，与模型组相比，组合物高剂量组和二甲双胍组显著降低小鼠空腹血糖(P<0.05)。
2.3.2睾丸形态的检测
取小鼠睾丸组织进行HE染色，结果如图3-1～图3-5所示。
根据图3-1～图3-5可以看出，对照组(图3-1)小鼠睾丸组织结构清晰，生精小管内各级生精细胞排列整齐，基底面可见精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞等，腔内可见成熟精子。模型组(图3-2)小鼠睾丸组织结构混乱，各级生精细胞排列混乱，且数量显著减少，腔内出现大面积空洞。与模型组相比，二甲双胍组(图3-3)、组合物高剂量组(图3-4)和低剂量组(图3-5)小鼠睾丸形态明显改善，各级生精细胞数量明显增加，生精小管空腔结构明显改善。
2.3.3精液参数分析
各处理组取一侧附睾，放入12孔板，予500μL生理盐水稀释，组织剪充分剪碎，放入37℃恒温箱孵育，200目筛过滤，取20μL滤液于细胞计数板上，镜下观察，分别统计精子数量，通过尹红苯胺黑和Diff-Quick法染色分别统计精子活率、精子活力和畸形率，采用GraphPadPrism 8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表3～4所示。
表3各组小鼠精液参数和睾酮水平的比较
根据表3可以看出，对照组相比，模型组小鼠睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数显著下降(P＜0.01)，与模型组相比，组合物高剂量组和低剂量组睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数显著升高(P＜0.05)。精液参数方面，与对照组相比，模型组小鼠精子数量、精子活率、精子活力显著下降，精子畸形率显著升高(P＜0.01)；与模型组相比，组合物高剂量组显著逆转了这一状况(P＜0.05)，但组合物高剂量组精子活力高于二甲双胍组(P＜0.05)。本发明提供的中药组合物能够提高肥胖2型糖尿病小鼠精子数量，精子数量和活力明显升高，畸形率降低，有效改善糖尿病小鼠雄性生殖功能损害，改善精液参数，高剂量组效果尤其显著，
2.3.4氧化应激参数和睾酮检测
比色法检测血清中超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平，ELISA法检测血清中睾酮(T)的水平，均根据说明书操作，数据采用GraphPad Prism 8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表4所示。
表4各组小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH-Px和T的含量
PI3K/AKT在胰岛素信号、细胞凋亡、增殖、分化和中介代谢等多种生物学过程的调控中发挥关键作用。PI3K/AKT作为经典的胰岛素信号通路，也是T2DM治疗的重要靶点。在糖尿病中PI3K/AKT通路受损被认为是活性氧(ROS)水平升高导致胰岛素抵抗的主要原因，长期高血糖会导致过量ROS产生，导致氧化应激，促进生殖细胞死亡，干扰精子发生过程，氧化应激是精子功能障碍最重要的发病机制之一；睾酮对精子发生至关重要，研究表明糖尿病可降低血清中睾酮的水平。
根据表4可以看出，与对照组相比，模型组小鼠血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平显著下降，丙二醛水平显著升高(P＜0.01)；与模型组相比，组合物高剂量组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶显著升高，丙二醛显著下降(P＜0.05)。本发明提供的中药组合物能够提高肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的含量，降低丙二醛含量，改善肥胖2型糖尿病睾丸功能障碍小鼠氧化应激水平。
模型组小鼠睾酮水平低于对照组，组合物高剂量组睾酮水平显著高于模型组(P＜0.01)，且优于二甲双胍组(P＜0.05)，经本发明中药组合物治疗后可以升高肥胖2型糖尿病小鼠睾酮水平。
2.3.5Western Blot检测睾丸中PI3K、p-AKT、Bcl-2的表达
取适量蛋白样品加入到电泳槽浓缩胶内，电泳，转模，牛奶封闭，洗膜后加入一抗(PI3K(兔抗)、AKT(兔抗)、p-AKT(兔抗)、Bcl-2(兔抗)、β-actin(鼠抗)浓度均以1：1000稀释)，4℃冰箱过夜，次日，洗膜，二抗(鼠二抗(1：5000)和兔二抗(1：2000))封闭后，洗膜，显影，分析灰度值，数据采用GraphPad Prism 8.4统计软件进行分析，实验结果计数资料以率/百分比(％)表示，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异具有统计学意义，结果如表5和图4所示。
表5各组小鼠睾丸中PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达情况
PI3K/AKT与少弱精症有关，PI3K被认为是获能诱导精子活力、过度活化和顶体反应的关键调节因子。PI3K/AKT参与了雄性生殖的多个阶段，包括调控精子发生过程中的下丘脑-垂体-性腺HPG轴，调控精原细胞和体细胞的增殖和分化。如果PI3K的活性被抑制，精子就会发生凋亡级联反应，其特征之一是运动能力的快速丧失。AKT除在控制细胞存活和凋亡中起关键作用外，它还参与精子发生和精子活力的调控。Bcl-2作为AKT的下游基因，其调控细胞周期促进细胞增殖，抑制凋亡，它还可以维持精子活力的状态。
根据表5和图4可以看出，与对照组相比，模型组PI3K、p-Akt、Bcl-2表达显著下调(P＜0.05)，经中药组合物治疗后，PI3K、p-Akt、Bcl-2的表达显著上调(P＜0.05)。本发明提供的中药组合物能够提高肥胖2型糖尿病睾丸功能PI3K、p-Akt、Bcl-2基因表达，抑制生精细胞的凋亡。
根据上述内容可以看出，本发明提供的中药组合物能够通过促进葡萄糖摄取，增加胰岛功能敏感性，促进PI3K、p-Akt、Bcl-2基因表达，来改善小鼠睾丸形态和精液参数的功能，改善睾丸功能障碍。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种改善睾丸功能障碍的中药组合物，其特征在于，按照质量份计，所述中药组合物的制备原料如下：党参10～40份、黄芪15～100份、山药10～40份、当归6～25份、白术6～40份、茯苓10～30份、白芍10～30份、补骨脂6～15份、川芎6～20份、莲子6～20份、芡实6～20份、砂仁3～10份、草寇3～10份、茴香6～20份、肉桂3～15份、吴茱萸6～10份、胡椒6～15份、生姜6～15份、黑附子6～15份和甘草6～10份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，按照质量份计，所述中药组合物的制备原料如下：党参20份、黄芪30份、山药20份、当归20份、白术10份、茯苓10份、白芍10份、川芎10份、莲子10份、芡实10份、补骨脂10份、砂仁5份、草寇10份、茴香20份、肉桂10份、吴茱萸10份、白胡椒10份、生姜10份、黑附子10份和甘草10份。
3.一种改善睾丸功能障碍的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括：将权利要求1或2所述的制备原料混合后提取。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述提取的方式包括水提。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述水提的方法包括：
将权利要求1或2所述制备原料的混合物与水按照136～500g：400～1000mL的质量体积比混合，浸泡30min，大火煮开后，改文火煮40～60min，过滤。
6.权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3～5任一项所述的制备方法得到的中药组合物在制备改善睾丸功能障碍药品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述睾丸功能障碍包括糖尿病引发的睾丸功能障碍。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述糖尿病引发的睾丸功能障碍包括肥胖二型糖尿病诱发的睾丸功能障碍。
9.权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3～5任一项所述的制备方法得到的中药组合物在制备改善睾丸形态和/或提高精液参数的药品中的应用。
10.一种改善睾丸功能障碍的药物，其特征在于，包括权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3～5任一项所述的制备方法得到的中药组合物和药学上可接受的辅料。
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