CN116392420A - 一种乌发组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及化妆品的技术领域，具体公开了一种乌发组合物及其制备方法和应用。该乌发组合物包括：何首乌提取物；鳢肠提取物；川穹提取物；桑葚提取物；薄荷提取物；苯氧乙醇；乙基己基甘油；水；醇试剂；所述乌发组合物还包括大腹皮提取物和天南星提取物。其制备方法如下：将何首乌提取物、鳢肠提取物、薄荷提取物、川穹提取物和桑葚提取物分别与水、苯氧乙醇、乙基己基甘油三者充分混匀，获得相应的溶液；将包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，获得第一混合液；将其他溶液与第一混合液混合均匀，同时加入其余试剂，获得乌发组合物。本申请的乌发组合物具有较好的乌发效果。
Description
技术领域
本申请涉及化妆品的技术领域，更具体地说，涉及一种乌发组合物及其制备方法和应用。
背景技术
头发具有保护、修饰以及其他生理功能。近年来，随着社会的不断发展，城市生活节奏加快，人们的日常工作逐渐从体力劳动向脑力劳动转变，工作和竞争压力增大，饮食作息不规律，上述因素都有可能导致头发的生长出现异常，从而过早出现白发、脱发等问题。白发虽然不会直接危及生命，但是会影响人的外在形象，给人带来不容忽视的心理压力和精神负担。
中医认为，白发的形成与肝肾不足、血气虚弱有关。现代医学认为，白发的产生是由于黑色素的生成受阻，受阻的原因有酪氨酸酶活性降低、黑素细胞减少等。酪氨酸酶基因家族对黑色素的合成起主要的调控作用，包括酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)及酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)。而黑素细胞特异性酪氨酸酶基因家族蛋白则受小眼相关转录因子(MITF)的调节，MITF是黑素细胞生长和存活的基本要素，调节与黑色素生成有关的基因转录，被称为“黑素细胞主调节器”。因此，研究一种切实有效的乌发方法具有重要意义。
目前，市场上的乌发产品包括染发剂、洗发水和护发素等。其中，染发剂以氧化型染发剂和模拟黑色素生成过程的染发剂居多，上述染发剂中没有直接添加染料，而是加入染料中间体、改性剂、偶合剂或生成黑色素中间体。采用氨水使头发膨胀和软化，毛鳞片打开，从而使染料中间体、改性剂、偶合剂或生成黑色素中间体更好的扩散渗透到皮质层，上述物质发生氧化、耦合和缩合反应，形成较大的染料分子，染料分子被封闭在头发纤维内，从而使头发染上颜色。使用上述染发剂可以使被染头发的色调具有良好的持久性。但头发以每月12mm的速度生长，新生长的头发依然是白发，因此是一种治标不治本的乌发产品。
因此，开发一种能够从根源上促进黑色素生成、乌发效果好的乌发产品，是亟待解决的问题。
发明内容
本申请提供一种乌发组合物及其制备方法和应用。该乌发组合物能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量，具有较好的乌发效果。
本申请提供的一种乌发组合物，采用如下的技术方案：
一种乌发组合物，所述乌发组合物包括以下重量份的组分：
何首乌提取物0.8-1.6份；
鳢肠提取物0.3-0.7份；
川穹提取物0.3-1份；
桑葚提取物0.6-1.2份；
薄荷提取物0.6-1.5份；
苯氧乙醇1.2-1.5份；
乙基己基甘油1.2-1.5份；
水70-80份；
醇试剂15-21份；
所述乌发组合物还包括大腹皮提取物和天南星提取物。
本申请向乌发组合物中添加大腹皮提取物、天南星提取物，通过何首乌提取物与大腹皮提取物、天南星提取物的协同配合，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量，具有较好的乌发效果。
何首乌提取物为蓼科植物何首乌的干燥块根。何首乌对生发黑发有神奇的作用，食用何首乌最直观的表现就是乌发，它真正能起到延缓人体衰老的作用，主要是因为它具有很好的造血功能，能够促进血液循环，可以帮助头皮毛囊营养得到调理，同时，何首乌中有对抗自由基的物质，自由基是人体衰老的一个重要原因。除此之外，何首乌还具有一定的保肝护肝的作用，对身体内分泌有很好的调节作用。而且，何首乌对脂肪肝、肝功能有显著的修护作用。何首乌中的某些物质可以抑制肝内氧化脂和转氨酶的升高，从根本上降低脂肪酸的含量，从而慢慢调理肝功能。
鳢肠是一种草药，味甘酸，性凉，入肝肾二经，无毒。滋补肝肾、凉血止血，可治各种吐血，鼻出血，咳血，肠出血，尿血，痔疮出血，血崩等症。捣汁涂眉发，能促进毛发生长，内服有乌发、黑发功效。鳢肠提取物对还原酶有抑制作用，可用于因雄性激素偏高而引起的头发脱落、粉刺等疾患，可刺激生发，鳢肠旱莲草提取物对酪氨酸酶有活化作用，可增加黑色素的分泌，有助于白发的防治；鳢肠提取物尚可用作过敏抑制剂和保湿剂。
川芎提取物是伞形科植物川芎根茎的提取物，是活血祛瘀的常用代表药。据中医理论而言，川芎的药性药味属辛、温药物。它归经于肝、胆、心包经，故对其脏腑及经络具有较明显功效。川芎提取物也具有祛风止痛功效，而且药性易于升散上行头部，是治疗头痛的重要中药，可以治疗各类头痛、头晕。
桑葚有治疗肾虚白发的好处。桑葚中含有亚油酸、硬脂酸以及油酸等脂肪酸，具有分解脂肪、降低血脂以及防止血管硬化等作用，对腰酸腿疼、少年白发以及神经衰弱等病症具有一定的治疗效果。但是，桑葚中还含有透明质酸，过量食用后容易导致溶血性肠炎。桑葚提取物，性寒；味甘、酸；归心、肝、肾经，是一种补益药。功能主治补血滋阴，生津润燥。用于眩晕耳鸣，心悸失眠，须发早白，津伤口渴，内热消渴，血虚便秘。
薄荷提取物是多年生草本宿根植物薄荷的提取物。薄荷具有疏风散热的作用，因此，当患者因风热感冒、温病初起出现鼻塞、发热、流涕等症状时，可以选择薄荷进行治疗。此外，薄荷具有清利头目以及利咽的作用，目赤肿痛、头痛眩晕、咽喉肿痛的患者均可以使用薄荷来缓解症状。薄荷还具有透疹的作用，对麻疹不透、风疹瘙痒的患者具有一定的治疗效果。薄荷还具有疏肝行气的功效，对情绪波动大、胸闷的患者具有一定的治疗作用。
大腹皮为棕榈科植物槟榔的干燥果皮。味辛，性微温。归脾、胃、大肠、小肠经。行气宽中，行水消肿。用于湿阻气滞，脘腹胀闷，大便不爽，水肿胀满，脚气浮肿，小便不利。大腹皮提取物为大腹皮干燥果皮的提取物。
天南星是天南星科天南星属植物。天南星为历史悠久的中药之一，能解毒消肿、祛风定惊、化痰散结。主治面神经麻痹、半身不遂、小儿惊风、破伤风、癫癎。外用治疗疮肿毒、毒蛇咬伤、灭蝇蛆。用胆汁处理过的称胆南星，主治小儿痰热、惊风抽搐。天南星提取物为天南星干燥块茎的提取物。
经过试验分析，使用何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物中的任意一种或两种时，黑素细胞的增殖率、酪氨酸酶活性以及黑素含量均较低。而将何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物三者配合使用时，提供的乌发组合物能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量，具有较好的乌发效果。
优选地，所述大腹皮提取物的重量份为1-3份；所述天南星提取物的重量份为0.14-0.26份。
优选地，所述何首乌提取物的重量份为1-1.4份；所述大腹皮提取物的重量份为1.5-2.5份；所述天南星提取物的重量份为0.17-0.23份。
在一个具体的实施方式中，何首乌提取物的重量份可以是0.8份、1份、1.2份、1.4份、1.6份。
在一些具体的实施方式中，何首乌提取物的重量份可以是0.8-1份、0.8-1.2份、0.8-1.4份、1-1.2份、1-1.4份、1-1.6份、1.2-1.4份、1.2-1.4份、1.4-1.6份。
在一个具体的实施方式中，大腹皮提取物的重量份可以是1份、1.5份、2份、2.5份、3份。
在一些具体的实施方式中，大腹皮提取物的重量份可以是1-1.5份、1-2份、1-2.5份、1.5-2份、1.5-2.5份、1.5-3份、2-2.5份、2-3份、2.5-3份。
在一个具体的实施方式中，天南星提取物的重量份可以是0.14份、0.17份、0.2份、0.23份、0.26份。
在一些具体的实施方式中，天南星提取物的重量份可以是0.14-0.17份、0.14-0.2份、0.14-0.23份、0.17-0.2份、0.17-0.23份、0.17-0.26份、0.2-0.23份、0.2-0.26份、0.23-0.26份。
优选地，所述何首乌提取物和所述大腹皮提取物的总重量份是所述天南星提取物的重量份的16-21倍。
优选地，所述何首乌提取物和所述大腹皮提取物的总重量份是所述天南星提取物的重量份的18.5-21倍。
在一个具体的实施方式中，何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份可以是天南星提取物的重量份的16倍、17倍、18倍、18.5倍、18.8倍、21倍。
在一些具体的实施方式中，何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份可以是天南星提取物的重量份的16-17倍、16-18倍、16-18.5倍、16-18.8倍、17-18倍、17-18.5倍、17-18.8倍、17-21倍、18-18.5倍、18-18.8倍、18-21倍、18.5-18.8倍、18.5-21倍、18.8-21倍。
本申请对乌发组合物中何首乌提取物、大腹皮提取物和天南星提取物的复配比例做了进一步探究。经过试验分析，将乌发组合物中三者的复配比例控制在上述范围内，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
优选地，醇试剂包括乙醇、丁二醇、丙二醇中的任意一种或至少两种的组合。
其中，乙醇的重量份为14-18份。
其中，丁二醇的重量份为0.5-1.5份。
其中，丙二醇的重量份为0.5-1.5份。
第二方面，本申请提供一种乌发组合物的制备方法，采用如下的技术方案：
一种乌发组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将何首乌提取物、鳢肠提取物、薄荷提取物、川穹提取物和桑葚提取物分别与水、苯氧乙醇、乙基己基甘油三者充分混匀，获得相应的溶液；
(2)将步骤(1)获得的包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，利用缓冲溶液调节pH至5-6，置于70-90℃的条件下搅拌0.5-1.5h，获得第一混合液；
(3)将步骤(1)获得的其他溶液与步骤(2)获得的第一混合液混合均匀，同时加入其余试剂，获得乌发组合物。
优选地，所述步骤(2)中，将包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，置于80℃的条件下搅拌1h，获得第一混合液。
在一个具体的实施方式中，温度条件可以是70℃、75℃、80℃、85℃、90℃。
在一些具体的实施方式中，温度条件可以是70-75℃、70-80℃、70-85℃、75-80℃、75-85℃、75-90℃、80-85℃、80-90℃、85-90℃。
在一个具体的实施方式中，搅拌时间可以是0.5h、1h、1.5h。
在一些具体的实施方式中，搅拌时间可以是0.5-1h、1-1.5h。
本申请提供的乌发组合物的制备方法中，第一混合液的制备方式尤为作用。在制备乌发组合物时，需要首先将何首乌提取物与大腹皮提取物、天南星提取物先混合后，再与其它组分混合。尤其是第一混合液的制备过程中，将其置于一定温度条件下搅拌，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
第三方面，本申请提供一种乌发化妆品，采用如下技术方案：
一种乌发化妆品，其包括上述乌发组合物。
在一个具体的实施方式中，所述乌发化妆品包括乌发精华液、乌发精油、乌发喷雾、乌发乳液、乌发霜、洗发水、护发素或发膜中的任意一种。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
本申请提供了一种乌发组合物，通过何首乌提取物与大腹皮提取物、天南星提取物的协同配合，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。另外，利用本申请提供的制备方法制得的乌发组合物能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
具体实施方式
本申请中，何首乌提取物购自西安瑞林生物科技有限公司；鳢肠提取物购自西安通泽生物科技有限公司；川穹提取物购自陕西琼华生物科技有限公司；桑葚提取物购自陕西森元生物科技有限公司；薄荷提取物购自陕西夏州生物科技有限公司；大腹皮提取物购自西安天瑞生物技术有限公司；天南星提取物购自西安嘉和生物技术有限公司。其余组分均可以通过市售获得。
本申请提供了一种乌发组合物，包括以下重量份的组分：何首乌提取物0.8-1.6份；鳢肠提取物0.3-0.7份；川穹提取物0.3-1份；桑葚提取物0.6-1.2份；薄荷提取物0.6-1.5份；苯氧乙醇1.2-1.5份；乙基己基甘油1.2-1.5份；水70-80份；醇试剂15-21份；所述乌发组合物还包括大腹皮提取物和天南星提取物。其中，包括乙醇、丁二醇、丙二醇中的任意一种或至少两种的组合。其中，乙醇的重量份为14-18份。其中，丁二醇的重量份为0.5-1.5份。其中，丙二醇的重量份为0.5-1.5份。上述乌发组合物中，大腹皮提取物的重量份为1-3份；天南星提取物的重量份为0.14-0.26份。
进一步地，何首乌提取物的重量份为1-1.4份；大腹皮提取物的重量份为1.5-2.5份；天南星提取物的重量份为0.17-0.23份。
进一步地，何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份是天南星提取物的重量份的16-21倍。再进一步地，何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份是天南星提取物的重量份的18.5-21倍。
本申请还提供了上述乌发组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将何首乌提取物、鳢肠提取物、薄荷提取物、川穹提取物和桑葚提取物分别与水、苯氧乙醇、乙基己基甘油三者充分混匀，获得相应的溶液；
(2)将步骤(1)获得的包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，利用缓冲溶液调节pH至5-6，置于70-90℃的条件下搅拌0.5-1.5h，获得第一混合液；
缓冲溶液的配置如下：取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5，用水稀释至1000ml；
(3)将步骤(1)获得的其他溶液与步骤(2)获得的第一混合液混合均匀，同时加入其余试剂，获得乌发组合物。
进一步地，步骤(2)中，将包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，置于80℃的条件下搅拌1h，获得第一混合液。
此外，本申请提供了一种乌发化妆品。该乌发化妆品包括上述乌发组合物。乌发化妆品包括乌发精华液、乌发精油、乌发喷雾、乌发乳液、乌发霜、洗发水、护发素或发膜中的任意一种。
以下结合实施例、对比例以及检测试验对本申请作进一步详细说明。
实施例
实施例1-17
实施例1-17分别提供了一种乌发组合物。上述实施例的区别之处在于：乌发组合物中各组分的添加情况，具体如表1所示。
上述乌发组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)按照各组分的添加量，向何首乌提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成5ml的何首乌提取物溶液；
向鳢肠提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成4ml的鳢肠提取物溶液；
向川穹提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成1ml的川穹提取物溶液；
向桑葚提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成1ml的桑葚提取物溶液；
向薄荷提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成4ml的薄荷提取物溶液。
(2)将步骤(1)获得的何首乌提取物溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，并加入水配置成50ml的水溶液，利用缓冲溶液将水溶液调节pH至5-6，获得第一混合液；
缓冲溶液的配置如下：取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5，用水稀释至1000ml。
(3)将步骤(1)获得的其他溶液与步骤(2)获得的第一混合液混合均匀，同时加入其余试剂，获得乌发组合物。
表1实施例1-17提供的乌发组合物中各组分添加情况
实施例18-24
实施例18-24分别提供了一种乌发组合物。上述实施例与实施例14的不同之处在于：步骤(2)中第一混合液的制备方法不同，具体如表2所示。
实施例18与实施例14的不同之处具体如下：
步骤(2)中，将步骤(1)获得的何首乌提取物溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，并加入水配置成50ml的水溶液，利用缓冲溶液将水溶液调整pH至5-6，置于70℃的条件下搅拌1h，获得第一混合液。
实施例19-22与实施例18的不同之处在于温度条件不同。
实施例23-24与实施例20的不同之处在于搅拌时间不同。
表2实施例14、18-24提供的乌发组合物中第一混合液的制备条件的区别
对比例
对比例1-21
对比例1-21分别提供了一种乌发组合物。其与实施例14的不同之处在于：乌发组合物中何首乌提取物、大腹皮提取物以及天南星提取物的添加情况，具体如表3所示。
表3对比例1-21提供的乌发组合物中三种组分的添加情况
对比例22
对比例22提供了一种乌发组合物。本对比例与实施例14的不同之处在于：将天南星提取物用等量的胆南星提取物替换。其中，胆南星提取物购自安天瑞生物技术有限公司。
对比例23
对比例23提供了一种乌发组合物。本对比例与实施例14的不同之处在于：乌发组合物的制备方法不同。
上述乌发组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)按照各组分的添加量，向何首乌提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成5ml的何首乌提取物溶液；
向鳢肠提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成4ml的鳢肠提取物溶液；
向川穹提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成1ml的川穹提取物溶液；
向桑葚提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成1ml的桑葚提取物溶液；
向薄荷提取物中加入苯氧乙醇0.24g、乙基己基甘油0.3g，充分混匀，并加入水配置成4ml的薄荷提取物溶液。
(2)将步骤(1)获得的何首乌提取物溶液、鳢肠提取物溶液、川穹提取物溶液、桑葚提取物溶液、薄荷提取物溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，并加入醇试剂和剩余水，混合均匀，获得乌发组合物。
性能检测试验
以实施例1-24、对比例1-23制备的乌发组合物为检测对象，进行下列检测试验。
一、卫生指标和感官理化指标测试
依据《QB/T1857-2004》润肤膏霜非强制性国家标准对上述乌发组合物的卫生指标和感官理化指标进行检测。测试结果如表4所示。由表4可知，上述实施例1-24提供的乌发组合物的各项卫生指标和感官指标经过检测均符合相关规定。
表4卫生指标和感官理化指标测试结果
二、安全性测试
(1)细胞毒性试验
HaCaT细胞为人永生表皮细胞系，HaCaT细胞的细胞毒性测试数据可作为对皮肤安全性的参考数据。测试方法具体如下：
将对数生长期的HaCaT细胞接种于96孔板中，每孔100μL细胞悬液，细胞浓度为5×104/mL，37℃、5％CO2条件下培养24h使细胞贴壁生长；将96孔板中的细胞分为48组，分别对应实施例1-24以及对比例1-23(实验组)和空白对照组，每组设置6个复孔。
吸出旧的培养基，PBS清洗后，以每孔0.1％的浓度分别向实验组中加入实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物，空白对照组不添加乌发组合物；将实验组和空白对照组均置于37℃、5％CO2条件下培养48h后，再加入终浓度为5mg/mL的MTT 10μL，继续培养4h；终止培养，吸弃上清，向每个孔中加入50μL DMSO，置于培养箱中10min，使结晶物充分溶解，在酶标仪570nm处测定各孔的光密度值(OD值)，取3次测试结果的平均值进行计算。
计算细胞存活率＝(OD实验–OD0)/(OD对照–OD0)×100％。其中，OD 0为DMSO的OD值。试验结果如表5所示。
(2)3D皮肤刺激性试验
按照OECD 439标准测试方法进行试验。测试方法具体如下：
将实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物局部接触约0.38cm2的皮肤模型表面15min，作为实验组。阴性对照组为PBS，阳性对照组为SDS(十二烷基磺酸钠)，处理方法与实验组相同。
接触15min后用PBS冲洗皮肤模型，浸入维持培养基(2mL)中，在饱和湿度、37℃、5％CO2条件下孵育42h；然后浸入MTT(2mL，0.3mg/mL，溶剂为测试培养基)中，饱和湿度、37℃、5％CO2条件下孵育3h；MTT反应完成后的皮肤模型浸入500μL酸化异丙醇的离心管中，混匀后在室温避光条件下过夜，然后从离心管中取出200μL液体样品置于96孔板中，在酶标仪570nm处读取各孔的OD值，取3次测试结果的平均值进行计算。
计算相对细胞活力＝(OD实验–OD0)/(OD阴性对照–OD0)×100％。其中，OD 0为酸化异丙醇溶液的OD值。试验结果如表5所示。
表5安全性测试结果
从表5可以看出，实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物不影响HaCaT细胞的生长和增殖，对3D皮肤模型温和无刺激性。证明本申请提供的乌发组合物对人体皮肤温和无刺激性，无不良反应，安全性好。
三、细胞水平的乌发功效测试
(1)CCK-8法测定黑素细胞增殖率
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基(阴性对照组)或分别含0.1％浓度的实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物的新鲜培养基(实验组)培养24h后用于检测黑素细胞增殖率。测试方法具体如下：
预先配制体积分数含10％CCK-8的检测液。去除96孔板每孔中的培养基，用PBS润洗细胞2次，吸尽PBS，在96孔板每孔中加入100μL上述检测液，注意不要在孔中生成气泡以免影响OD值的读数。后将96孔板在37℃、5％CO2条件下孵育4h，在酶标仪450nm处读取各孔的OD值，取3次测试结果的平均值进行计算。
计算细胞增殖率＝(OD实验–OD0)/(OD阴性对照–OD0)×100％。其中，OD0为含CCK-8的检测液的OD值。试验结果如表6所示。
(2)多巴氧化法测酪氨酸酶活性
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基(阴性对照组)或分别含0.1％浓度的实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物的新鲜培养基培养24h后用于检测黑素细胞中的酪氨酸酶活性。测试方法具体如下：
预先配制质量分数1％L-DOPA(左旋多巴)溶液和质量分数1％TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶液。去除96孔板每孔中的培养基，用PBS润洗细胞2次，吸尽PBS，然后用质量分数0.1％胰酶消化，再用质量分数含10％胎牛血清的PBS中和，收集液体于离心管中；然后在室温下于1000r/min下离心3min，弃上清，加入200μL质量分数1％TritonX-100溶液，振荡15min，加入质量分数1％L-DOPA溶液以稀释至1mL。后将液体移至96孔板中，每孔100μL液体，在37℃、5％CO2条件下孵育1h，在酶标仪490nm处读取各孔的OD值，取3次测试结果的平均值进行计算。
计算酪氨酸酶活性＝(OD实验–OD0)/(OD阴性对照–OD0)×100％。其中，OD 0为200μLTritonX-100溶液加L-DOPA溶液稀释至1mL的溶液的OD值。试验结果如表6所示。
(3)氢氧化钠法测黑素含量
96孔板中的黑素细胞用新鲜培养基(阴性对照组)或分别含0.1％浓度的实施例1-24以及对比例1-23提供的乌发组合物的新鲜培养基培养24h后用于检测黑素细胞中的黑素含量。测试方法具体如下：
预先配制1g/L NaOH溶液(质量分数含10％DMSO)。去除96孔板每孔中的培养基，用PBS润洗细胞2次，吸尽PBS，然后用质量分数0.5％胰酶消化，再用质量分数含10％胎牛血清的PBS中和，收集液体于离心管中；然后在室温下于1000r/min下离心3min，弃上清，加入1mL浓度为1g/L的NaOH溶液(质量分数含10％DMSO)，用移液器吹打混匀，于60℃恒温孵育1h，在酶标仪470nm处读取各孔的OD值，取3次测试结果的平均值进行计算。
计算黑素含量＝(OD实验–OD0)/(OD阴性对照–OD0)×100％。其中，OD 0为NaOH溶液的OD值。试验结果如表6所示。
表6乌发功效测试结果
由表6可知，本申请提供的乌发组合物，通过向乌发组合物中添加大腹皮提取物、天南星提取物，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。尤其是通过何首乌提取物与大腹皮提取物、天南星提取物的协同配合，进一步促进了黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
通过对比实施例14和对比例1-21的测试结果可知，当乌发组合物中仅包括何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物中的任意一种或两种时，黑素细胞的增殖率、酪氨酸酶活性以及黑素含量均较低。而同时包含何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物三者的实施例14的乌发组合物，黑素细胞的增殖率、酪氨酸酶活性以及黑素含量均较高。说明使用何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物中的任意一种或两种时，黑素细胞的增殖率、酪氨酸酶活性以及黑素含量均较低，而将何首乌提取物、大腹皮提取物、天南星提取物三者配合使用时，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。
通过对比实施例1-5的测试结果可知，将何首乌提取物的添加量控制在0.8-1.6份的范围内，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。进一步地，将何首乌提取物的添加量控制在1-1.4份的范围内，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
通过对比实施例3、实施例6-11的测试结果可知，将大腹皮提取物的添加量控制在1-3份的范围内，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。进一步地，将大腹皮提取物的添加量控制在1.5-2.5份的范围内，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
通过对比实施例3、实施例12-17的测试结果可知，将天南星提取物的添加量控制在0.14-0.26份的范围内，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。进一步地，将天南星提取物的添加量控制在0.17-0.23份的范围内，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
通过对比实施例1-2、6-8、11-13、15-17与实施例3-5、9-10、14的测试结果可知，将何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份控制在天南星提取物的重量份的16-21倍，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。进一步地，通过对比实施例3-5与实施例9-10、14的测试结果可知，将何首乌提取物和大腹皮提取物的总重量份控制在天南星提取物的重量份的18.5-21倍，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
通过对比实施例14、实施例18-22的测试结果可知，当乌发组合物的制备方法中第一混合液通过在70-90℃下搅拌制得时，能够明显促进黑素细胞的增殖，提高酪氨酸酶活性，同时提高黑素含量。进一步地，当乌发组合物的制备方法中第一混合液通过在80℃下搅拌1h制得时，能够进一步促进黑素细胞的增殖，同时进一步提高酪氨酸酶活性和黑素含量。
由此可见，本申请提供的乌发组合物能够通过促进黑素细胞的增殖以及酪氨酸酶活性和黑素含量，来提高乌发效果，能够有效从根源上改善白发和灰发。
四、动物水平的乌发功效测试
测试方法具体如下：
(1)建立动物模型
取健康黑花色豚鼠80只，用剪刀剪去25cm2背部黑毛区长毛，不可损伤皮肤。随机分为8组(1-6组：分别对比实施例6、实施例14、实施例20以及对比例1、对比例22、对比例23提供的乌发组合物组；7组：模型对照组；8组：正常对照组)，每组10只，每组均用5％过氧化氢外涂豚鼠受试区40天，每天2次，每次用2mL，使其毛发变为白色。
(2)实验方法
以上8组豚鼠造模成功后，1-6组涂抹本申请相应实施例或对比例提供的乌发组合物，7组涂抹不含有乌发组合物的水，8组不做处理；每日涂抹1次，每次2mL，连续涂抹15天。在1天、5天、10天和15天分别进行观察。
对以上8组的改善效果进行观察，选取用药部位中心9cm2处为观察单位判定效果。结果如表7所示。
表7动物水平的乌发功效测试结果
由表7可知，第一组-第三组用药15天后黑毛≥72％，对白毛的改善效果十分显著。第七组和第八组处理15天后效果相当，黑毛比例均明显小于第一组-第三组，黑毛为26％左右，对白毛的改善效果不明显。第四组-第六组用药15天后黑毛≥35％，与第一组-第三组相比，对白毛的改善效果亦不明显。由此可见，本申请提供的乌发组合物具有显著的乌发效果，能够有效改善白发和灰发，逆转因外界氧化因素导致的白发产生。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种乌发组合物，其特征在于，所述乌发组合物包括以下重量份的组分：
何首乌提取物0.8-1.6份；
鳢肠提取物0.3-0.7份；
川穹提取物0.3-1份；
桑葚提取物0.6-1.2份；
薄荷提取物0.6-1.5份；
苯氧乙醇1.2-1.5份；
乙基己基甘油1.2-1.5份；
水70-80份；
醇试剂15-21份；
所述乌发组合物还包括大腹皮提取物和天南星提取物。
2.根据权利要求1所述的乌发组合物，其特征在于，所述大腹皮提取物的重量份为1-3份；所述天南星提取物的重量份为0.14-0.26份。
3.根据权利要求2所述的乌发组合物，其特征在于，所述何首乌提取物的重量份为1-1.4份；所述大腹皮提取物的重量份为1.5-2.5份；所述天南星提取物的重量份为0.17-0.23份。
4.根据权利要求3所述的乌发组合物，其特征在于，所述何首乌提取物和所述大腹皮提取物的总重量份是所述天南星提取物的重量份的16-21倍。
5.根据权利要求4所述的乌发组合物，其特征在于，所述何首乌提取物和所述大腹皮提取物的总重量份是所述天南星提取物的重量份的18.5-21倍。
6.根据权利要求1所述的乌发组合物，其特征在于，所述醇试剂包括乙醇、丁二醇、丙二醇中的任意一种或至少两种的组合。
7.一种权利要求1-6中任一项所述的乌发组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
（1）将何首乌提取物、鳢肠提取物、薄荷提取物、川穹提取物和桑葚提取物分别与水、苯氧乙醇、乙基己基甘油三者充分混匀，获得相应的溶液；
（2）将步骤（1）获得的包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，置于70-90℃的条件下搅拌0.5-1.5h，获得第一混合液；
（3）将步骤（1）获得的其他溶液与步骤（2）获得的第一混合液混合均匀，同时加入其余试剂，获得乌发组合物。
8.根据权利要求7所述的乌发组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，将包含何首乌提取物的溶液与大腹皮提取物、天南星提取物充分混合，置于80℃的条件下搅拌1h，获得第一混合液。
9.一种乌发化妆品，其特征在于，所述乌发化妆品包括如权利要求1-6中任一项所述的乌发组合物。
10.根据权利要求9所述的乌发化妆品，其特征在于，所述乌发化妆品包括乌发精华液、乌发精油、乌发喷雾、乌发乳液、乌发霜、洗发水、护发素或发膜中的任意一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN202310323259.9A CN116392420A (zh) | 2023-03-30 | 2023-03-30 | 一种乌发组合物及其制备方法和应用 |
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| CN202310323259.9A CN116392420A (zh) | 2023-03-30 | 2023-03-30 | 一种乌发组合物及其制备方法和应用 |
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2023
- 2023-03-30 CN CN202310323259.9A patent/CN116392420A/zh active Pending
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| CN117959232B (zh) * | 2024-03-29 | 2024-06-11 | 珠海博御中医药研究有限公司 | 一种乌发精华液组合物及其制备方法和应用 |
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