CN116381230A - 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用 - Google Patents

一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116381230A
CN116381230A CN202310067203.1A CN202310067203A CN116381230A CN 116381230 A CN116381230 A CN 116381230A CN 202310067203 A CN202310067203 A CN 202310067203A CN 116381230 A CN116381230 A CN 116381230A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fenvalerate
test strip
pad
hapten
conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310067203.1A
Other languages
English (en)
Inventor
刘兴举
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING SAFEDA TECHNOLOGY CO LTD
Original Assignee
BEIJING SAFEDA TECHNOLOGY CO LTD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BEIJING SAFEDA TECHNOLOGY CO LTD filed Critical BEIJING SAFEDA TECHNOLOGY CO LTD
Priority to CN202310067203.1A priority Critical patent/CN116381230A/zh
Publication of CN116381230A publication Critical patent/CN116381230A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C253/00—Preparation of carboxylic acid nitriles
    • C07C253/30—Preparation of carboxylic acid nitriles by reactions not involving the formation of cyano groups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587—Nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2430/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving synthetic organic compounds as analytes
    • G01N2430/10—Insecticides
    • G01N2430/12—Pyrethroids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测氰戊菊酯的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，所述反应膜上具有包被有氰戊菊酯半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明还提供了一种应用上述氰戊菊酯试纸条检测蔬菜、水果中氰戊菊酯残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

Description

一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用
技术领域
本发明涉及一种检测农药中氰戊菊酯的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条，其特别适用于蔬菜、水果中氰戊菊酯残留的检测。
背景技术
氰戊菊酯，是一种有机物，化学式为C25H22ClNO3，为黄色油状液体，不溶于水，是一种广谱、高效的杀虫剂，以触杀和胃毒作用为主，无内吸和熏蒸作用，对鳞翅目幼虫效果良好，对同翅目、直翅目、半翅目等害虫也有较好的效果，但对螨无效，广泛应用于棉花害虫、果树害虫、蔬菜害虫的防治。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，氰戊菊酯在3类致癌物清单中。GB 2763-2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中氰戊菊酯对不同蔬菜和水果中的最大残留限量也不同，分别在0.05mg/kg-10mg/kg之间。
检测氰戊菊酯的方法有气相色谱法、气相色谱法-串联质谱法、超高效液相色谱-质谱/质谱法、液相色谱-质谱/质谱法等。与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。而免疫化学法检测氰戊菊酯的前提是需要具备针对氰戊菊酯的抗体，本申请发明了氰戊菊酯人工抗原制备方法，并将其应用于快速检测试纸条中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的氰戊菊酯残留检测试纸条。
本发明所提供的检测氰戊菊酯残留的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)；所述反应膜上具有包被有氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物。
所述氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物是由氰戊菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
所述氰戊菊酯单克隆抗体是以氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由氰戊菊酯单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。
所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。
所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：
1)制备喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；
2)制备具有包被有氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。
具体地说，步骤包括：
1)半抗原制备：经过一系列化学反应得到氰戊菊酯半抗原；
2)将氰戊菊酯半抗原与载体蛋白偶联，得到氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物；
3)用氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到氰戊菊酯单克隆杂交瘤细胞株；
4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；
5)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
6)将步骤3)制备的氰戊菊酯单克隆抗体加入步骤5)制备的胶体金中，得到氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物；
7)将氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；
8)将氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；
9)将样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白(体积分数)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；
10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下可保存12个月。
本发明的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测蔬菜、水果中氰戊菊酯残留的方法，它包括步骤：
(1)用试纸条进行检测；
(2)分析检测结果。
本发明的氰戊菊酯快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及竞争抑制免疫层析分析技术，将氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的氰戊菊酯在流动过程中，与结合物释放垫上的氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有氰戊菊酯残留。
检测时，样品经处理后滴入试纸条孔内，当氰戊菊酯在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)内各出现一条红色条带；如果氰戊菊酯在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与氰戊菊酯全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。
本发明的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本发明试纸条检测氰戊菊酯残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。
附图说明
图1为氰戊菊酯半抗原合成图。
图2为试纸条剖面结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。
实施例1氰戊菊酯检测试纸条的制备
该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：
1)制备喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；
2)制备具有包被有氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸条。
下面分步详细叙述：
1、氰戊菊酯半抗原的制备
取化合物a 2.84g，加1,2-二氯乙烷100ml溶解，加N,N-二甲基甲酰胺1ml，室温充分搅拌，滴加含有草酰氯2.4g的1,2-二氯乙烷溶液30ml，室温搅拌反应3h，停止反应，旋蒸蒸干，得到黄色油状物，加吡啶120ml溶解，加化合物b 2.7h，充分搅拌，室温反应4h，停止反应，旋蒸蒸干，除去吡啶，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯(v/v,5/1)洗脱分离，得到化合物c3.11g，收率63.3％。取化合物c3.11g，加二氯甲烷100ml，溶解，加三氟乙酸50ml，室温搅拌4h，停止反应，旋蒸蒸干，上硅胶柱，正己烷/乙酸乙酯(v/v,3/1)洗脱分离，得到化合物d1.81g，即为半抗原产物，收率65.57％。
2、免疫原的制备
取化合物d 32.52mg，加2mlDMF溶解澄清，加NHS12.89mg，EDC21.5mg，充分溶解混匀，室温反应2h，得到半抗原活化液A液；取牛血清白蛋白(BSA)100mg，加0.1M CB9.5 9ml溶解，得到B液，将A液逐滴滴加到B液中，室温反应6h，停止反应，0.02M PBS透析纯化3天，每天换液3次，离心分装，得到氰戊菊酯-BSA偶联物，即为免疫原。
3、包被原的制备
取化合物d 19.37mg，加2mlDMF溶解澄清，加NHS7.68mg，EDC12.97mg，充分溶解混匀，室温反应2h，得到半抗原活化液A液；取卵清白蛋白(OVA)100mg，加0.1M CB9.5 9ml溶解，得到B液，将A液逐滴滴加到B液中，室温反应6h，停止反应，0.02M PBS透析纯化3天，每天换液3次，离心分装，得到氰戊菊酯-OVA偶联物，即为包被原。
以化合物a为起始原料，与草酰氯反应，羧基变成酰氯，进而与化合物b进行酯化反应，得到化合物c，再经三氟乙酸脱除叔丁酯，得到氰戊菊酯的异丙基处引入羧基的半抗原产物，与载体蛋白偶联，免疫动物制备抗体。
4、氰戊菊酯单克隆抗体的制备
(1)动物免疫
将步骤2得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。
(2)细胞融合和克隆化
取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8:1(数量配比)比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
(3)细胞冻存和复苏
将杂交瘤细胞用冻存液制成1×106个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
(4)单克隆抗体的制备与纯化
增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。
所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20％(质量分数)，碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2％(质量分数)；所述细胞培养基的pH为7.4。
5、羊抗鼠抗抗体的制备
以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。
6、氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的制备
(1)胶体金的制备
用双蒸去离子水将1％氯金酸稀释成0.01％(质量分数)，取100ml置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入2.5ml 1％柠檬酸三钠，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。
(2)氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的制备
在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾溶液调胶体金的pH值至7.0，按每毫升胶体金溶液中加入20～50μg的标准向胶体金溶液中加入氰戊菊酯单克隆抗体，继续搅拌混匀30min，加入10％BSA，使其在胶体金溶液中的终浓度为1％(体积分数)，静置10min。12000r/min、4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。
复溶缓冲液：含酪蛋白0.02％～0.1％(质量分数)、吐温-80 0.05％～0.2％(质量分数)、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。
7、结合物释放垫的制备
将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为0.5％)、pH为7.2、0.5mol/L的磷酸盐缓冲液中，均匀浸湿1h，37℃烘3h备用。用Isoflow喷膜仪将制备好的氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物均匀喷涂在结合物释放垫上，每1cm结合物释放垫喷涂0.01ml氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物后，置于37℃环境中(湿度＜20％)60min后取出，置于干燥环境(湿度＜20％)中保存备用。
8、反应膜的制备
将氰戊菊酯半抗原-卵清蛋白偶联物包被到反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。
包被过程：用磷酸缓冲液将氰戊菊酯半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测线(T线)，包被量为0.8μl/cm；用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠抗抗体稀释到200μg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线(C线)，包被量为1.0μl/cm。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。
9、样品吸收垫的制备
将样品吸收垫置于含0.5％牛血清白蛋白(体积分数)、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用。
10、试纸条的组装
将样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次按顺序粘贴在PVC底板上；结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖，结合物释放垫的末端与反应膜的始端连接，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与PVC底板的始端对齐，吸水垫的末端与PVC底板的末端对齐；所述反应膜上有检测线和质控线，检测线(T线)和质控线(C线)均为与所述试纸条的长相垂直的条状带；检测线位于靠近结合物释放垫的末端的一侧；质控线位于远离结合物释放垫的末端的一侧；将试纸条用机器切成3mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，4～30℃条件下可保存12个月。
实施例2样品中氰戊菊酯残留的检测
1、用试纸条进行检测
用吸管吸取待检样品溶液垂直滴加3滴于加样孔，液体流动时开始计时，反应5～10min，判定结果。
2、分析检测结果
通过胶体金分析仪(简称“分析仪”)读取结果：
阴性(-)：表示样品中待测物质浓度低于检测限；
阳性(+)：表示样品中待测物质浓度等于或高于检测限；
无效：表示需要重新测试。
实施例3样品检测实例
1、检测限试验
取空白结球甘蓝、苹果样本，在其中分别添加氰戊菊酯至终浓度为0.01、0.02、0.04mg/kg，取试纸条进行检测，每个样本重复测定三次。
用试纸条检测结球甘蓝、苹果样本时，当其中氰戊菊酯添加浓度为0.01mg/kg时，分析仪显示为阴性；当其中氰戊菊酯添加浓度为0.02、0.04mg/kg时，分析仪显示为阳性。
2、假阳性率、假阴性率试验
取已知氰戊菊酯含量为0.02mg/kg的结球甘蓝、苹果阳性样本各20份和含量小于0.01mg/kg的结球甘蓝、苹果阴性样本各20份，用三批试纸条进行检测，计算其阴阳性率。结果见表1。
表1结球甘蓝、苹果检测样本结果
Figure BDA0004062530970000061
Figure BDA0004062530970000071
结果表明：用3个批次生产的试纸条检测阳性结球甘蓝、苹果样本时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100％，假阴性率为0；检测20份阴性结球甘蓝、苹果样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100％，假阳性率为0。说明本发明的检测氰戊菊酯的试纸条可以对结球甘蓝、苹果中氰戊菊酯残留进行快速检测。
3、特异性试验
测定与苯醚氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、联苯菊酯的交叉反应率，结果见表2。
Figure BDA0004062530970000072
表2特异性试验
药物名称 交叉反应率
氰戊菊酯 100％
苯醚氰菊酯 ＜1％
氯氰菊酯 ＜1％
溴氰菊酯 ＜1％
联苯菊酯 ＜1％

Claims (7)

1.一种检测氰戊菊酯的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，其特征在于所述反应膜上具有包被有氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物，所述氰戊菊酯半抗原的制备方法如下：
取化合物a 2.84g，加1,2-二氯乙烷100ml溶解，加N,N-二甲基甲酰胺1ml，室温充分搅拌，滴加含有草酰氯2.4g的1,2-二氯乙烷溶液30ml，室温搅拌反应3h，停止反应，旋蒸蒸干，得到黄色油状物，加吡啶120ml溶解，加化合物b 2.7h，充分搅拌，室温反应4h，停止反应，旋蒸蒸干，除去吡啶，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯(v/v,5/1)洗脱分离，得到化合物c3.11g，收率63.3％。取化合物c3.11g，加二氯甲烷100ml，溶解，加三氟乙酸50ml，室温搅拌4h，停止反应，旋蒸蒸干，上硅胶柱，正己烷/乙酸乙酯(v/v,3/1)洗脱分离，得到化合物d1.81g，即为半抗原产物，收率65.57％。
2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上。
3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。
4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物由氰戊菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述氰戊菊酯单克隆抗体是以氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：
1)制备喷涂有氰戊菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；
2)制备具有包被有氰戊菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。
7.一种检测蔬菜、水果中氰戊菊酯残留的方法，其包括步骤：
1)用权利要求1-5任一项所述的试纸条进行检测；
2)分析检测结果。
CN202310067203.1A 2023-02-06 2023-02-06 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用 Pending CN116381230A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310067203.1A CN116381230A (zh) 2023-02-06 2023-02-06 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310067203.1A CN116381230A (zh) 2023-02-06 2023-02-06 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116381230A true CN116381230A (zh) 2023-07-04

Family

ID=86966239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310067203.1A Pending CN116381230A (zh) 2023-02-06 2023-02-06 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116381230A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109239336B (zh) 一种检测异丙威的试纸条及其应用
CN111239399B (zh) 一种检测丙溴磷的试纸条及方法
CN110850090A (zh) 一种检测联苯菊酯的试纸条及其应用
CN105807055B (zh) 一种检测二氯喹啉酸的试纸条及其制备方法和应用
CN110441518B (zh) 一种检测赤霉素的试纸条及方法
CN109061147B (zh) 一种检测二甲戊灵的试纸条及其制备方法和应用
CN106918705B (zh) 检测甲氰菊酯的试纸及其应用
CN112067811B (zh) 一种检测互隔交链孢霉素的试纸条及其应用
CN108535474A (zh) 一种检测氯菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用
CN112067814B (zh) 一种检测苯醚甲环唑的试纸条及方法
CN109682961B (zh) 一种检测苯醚氰菊酯的试纸条及其应用
CN108931640B (zh) 一种检测有机磷农药的试纸条及其应用
CN111735951B (zh) 一种检测甲氰菊酯的试纸条及其应用
CN111751535B (zh) 一种检测硫丹的试纸条及其应用
CN110551220A (zh) 一种滴滴涕单克隆抗体的制备及其应用
CN111896738B (zh) 一种检测蛇形菌素的试纸条及其应用
CN111965360B (zh) 一种检测腐霉利的试纸条及方法
CN113030463B (zh) 一种检测疫苗中蛋白a等杂质的试纸条及其应用
CN112114147B (zh) 一种检测吡唑醚菌酯的试纸条及方法
CN116381230A (zh) 一种检测农药中氰戊菊酯的胶体金试纸条及其应用
CN112698026B (zh) 一种检测噻虫胺的试纸条及其应用
CN112462070B (zh) 一种检测甲草胺的试纸条及其应用
CN109061145B (zh) 一种检测氟节胺的试纸条及其制备方法和应用
CN114019166B (zh) 一种检测龙葵素的试纸条及其应用
CN113759110B (zh) 一种检测霜霉威的试纸条及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination