CN116370520A - 中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用，属于兽药领域，所述中药组合物的活性成分包括板蓝根、人工牛黄、甘草、冰片、猪胆粉和玄明粉，本发明的中药组合物对预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病有良好的治疗效果，治愈率达70％以上，具有抗菌、保肝作用，并能有效改善肝损伤程度，提高对虾的存活率，减少损失。

Description

中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏 死病产品中的应用

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，具体涉及中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用。

背景技术

众所周知，我国是世界上的水产养殖大国，养殖品种众多且发展迅速。随着养殖密度和产量逐年增大，养殖环境和条件却难以持续改善，造成疾病的多发，然而我国渔药行业发展相对滞后，新渔药的研制相对较缓慢，各企业对研制新渔药积极性不高，新渔药的短缺导致传统渔药越来越难以胜任目前人们对高质量水产品的要求，同时水产病害的发生仍然严重制约着我国水产养殖业的健康发展和壮大。对虾(Penaeus orientalis)在我国养殖广泛，以凡纳滨对虾(南美白对虾)为例，凡纳滨对虾是我国自上世纪80年代由美国引进的优良品种，由于其具有个体大，生长快，肉质鲜美，温度和盐度适应范围广等优点，在我国发展迅速，现已成为我国第一大海水养殖虾种(占海水养殖虾总产量的80.5％)，第二大淡水养殖虾种(占淡水养殖虾总产量的19.1％)。然而，其集约化高密度养殖难免会造成对虾养殖环境的恶化，在受到病原感染时，很容易引起多种疾病的发生。其中，对虾急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease，AHPND)是对虾养殖中最为常见的，危害较大的疾病之一，该病由副溶血弧菌引起，患病对虾肝胰腺色浅发白，萎缩变小，肌肉发白，甲壳发软，空肠空胃或肠道内食物不连续。若未得到及时有效地治疗，急性肝胰腺坏死病会迅速恶化，使对虾肝胰腺失去功能，最终导致对虾发病死亡，给对虾养殖造成严重损失，严重制约着对虾养殖业的发展。对虾肝胰腺坏死病尚无安全绿色有效的控制方法，部分区域通过大剂量使用抗生素来进行治疗，由于抗生素会对对虾肝胰腺产生代谢负担及二次伤害，导致治疗效果无法达到预期。因此，开发一种防治对虾急性肝胰腺坏死病且安全有效的绿色药物十分必要。

传统的中药制剂通常为直接粉碎或超微粉碎工艺，直接粉碎的中药，由于有效成分仍然会被大量的细胞壁、纤维质成分所包裹，有效成分难以快速释放，因此对疾病的防治效果不理想，而超微粉碎虽然将大部分的细胞壁和纤维质进行了破坏，有效成分大部分可以释放出来，但粉碎后的细胞壁、纤维质等杂质没有被去除掉，导致有效成分含量较低，养殖动物在生病的情况下更加难以摄入足够量的药物，导致疾病的防治效果不理想。

发明内容

发明目的

本发明的目的在于提供一种对虾急性肝胰腺坏死病具有良好的治疗效果的中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用。

该中药组合物与申请人在先研发的甘胆口服液的组方相近，甘胆口服液功能主治为清热解毒，凉血宣肺，止咳平喘，主治鸡传染性支气管炎与鸡毒支原体感染引起的肺热咳喘，犬传染性气管支气管炎引发的咳嗽，牛肺热咳喘等病症，其主要是对呼吸器官的肺部产生作用。发明人在研发过程中发现其对预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病有良好的治疗效果，并能有效改善肝损伤程度，提高对虾的存活率。

解决方案

为实现本发明目的，本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种中药组合物在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分包括板蓝根、人工牛黄、甘草、冰片、猪胆粉和玄明粉。

进一步地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根80-120份、人工牛黄20-40份、甘草30-50份、冰片10-30份、猪胆粉10-30份、玄明粉20-40份。

第二方面，本发明提供了一种用于预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病的中药组合物，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根80-120份、人工牛黄20-40份、甘草30-50份、冰片10-30份、猪胆粉10-30份、玄明粉20-40份。

第三方面，本发明提供一种用于预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病的虾饲料，包括第二方面所述的中药组合物。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-120份、人工牛黄34-40份、甘草40-50份、冰片20-30份、猪胆粉20-30份、玄明粉30-40份。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-110份、人工牛黄34-38份、甘草40-45份、冰片20-25份、猪胆粉20-25份、玄明粉30-35份。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-105份、人工牛黄34-36份、甘草40-42份、冰片20-22份、猪胆粉20-22份、玄明粉30-32份。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100份、人工牛黄34份、甘草40份、冰片20份、猪胆粉20份、玄明粉30份。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的剂型为口服液、粉剂、喷剂、膏剂、注射剂、胶囊剂中的任意一种。

上述第一方面中，所述产品为药物或饲料，可选地，所述饲料为虾饲料，可选地，所述虾饲料为对虾饲料；

上述第一、第二或第三方面中，所述对虾急性肝胰腺坏死病为病原菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病，可选地，所述病原菌为副溶血弧菌。

上述第一或第三方面中，所述中药组合物占虾饲料重量的0.2％-0.5％；

上述第一或第三方面中，所述中药组合物为口服液，可选地，口服液中中药组合物的生药量为0.1～0.8g/mL，可选地为0.2～0.5g/mL，可选地为0.2～0.3g/mL，可选地为0.244g/mL；可选地，所述虾饲料中，含有2.0-5.0mL中药组合物口服液/kg虾饲料。

上述第一或第三方面中，所述中药组合物为粉剂，可选地，粉剂中中药组合物的生药量为0.1～0.8g/g粉剂，可选地为0.2～0.5g/g粉剂，可选地为0.2～0.3g/g粉剂，可选地为0.244g/g粉剂；可选地，所述虾饲料中，含有2.0-5.0g中药组合物为粉剂/kg虾饲料。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物为中药经提取后获得的清膏，可选地，清膏在测量温度为50℃的相对密度为1.00-1.20g/mL，可选地相对密度为1.05～1.15g/mL，可选地，清膏的pH为6.5～7.5，可选地，清膏的pH为7。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物还包括药学上可接受的辅料；可选地，所述辅料包括丙二醇、聚山梨酯60、吐温80、吐温20、甘油和水中的一种或几种。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的剂型为口服液，可选地，口服液的生药量为0.1～0.8g/mL，可选地为0.2～0.5g/mL，可选地为0.2～0.3g/mL，可选地为0.244g/mL。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的剂型为粉剂，粉剂中的辅料还包括选自葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉和氯化钠中的一种或几种。可选地，粉剂的生药量为0.1～0.8g/g粉剂，可选地为0.2～0.5g/g粉剂，可选地为0.2～0.3g/g粉剂，可选地为0.244g/g粉剂。

上述第一、第二或第三方面中，所述中药组合物的剂型为膏剂，所述膏剂中的辅料还包括选自葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉、氯化钠、明胶和黄原胶中的一种或几种。

上述第一、第二或第三方面中，所述组合物的制备方法包括：

1)板蓝根、甘草、玄明粉加水煎煮至少一次，合并煎液，过滤，滤液浓缩；

2)乙醇溶解冰片和猪胆粉，加入至步骤1)的物料中；

3)人工牛黄用碱液溶解，并将步骤2)的物料人工牛黄液中；

4)在步骤3)中加入辅料B，搅拌使其溶解，调节pH值，加水，搅匀，过滤，获得药液。

上述制备方法中，步骤1)中，滤液浓缩后，放冷，加乙醇适量，静置，过滤，滤液回收乙醇，获得浓缩药液。可选地，乙醇加入量使乙醇的体积分数为55％～70％。

上述制备方法中，步骤2)中，冰片和猪胆粉溶解后缓慢加入步骤1)的物料中。可选地，步骤2)中，采用2～5倍体积的乙醇溶解冰片和猪胆粉。

上述制备方法中，步骤3)中，步骤2)的物料缓慢加入人工牛黄液中。可选地，碱液为氢氧化物溶液，可选地为10％氢氧化物溶液，可选地为10％氢氧化钠溶液。

上述制备方法中，步骤4)中，pH为6.5～7.5，可选地pH为7；可选地，辅料B包括丙二醇、聚山梨酯60、吐温80、吐温20、甘油和水中的一种或几种。

进一步地，还包括以下步骤A)、B)中的一种；

A)在步骤4的物料中加入辅料D，搅拌均匀，低温烘干，粉碎，得粉剂；可选地，辅料D包括葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉和氯化钠中的一种或几种。

B)在步骤4的物料中加入适量辅料E，搅拌均匀，得膏剂；可选地，辅料E包括葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉、氯化钠、明胶和黄原胶中的一种或几种。

有益效果

(1)本发明的中药组合物对预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病有良好的治疗效果，治愈率达70％以上，具有抗菌、保肝作用，并能有效改善肝损伤程度，提高对虾的存活率，减少损失。

(2)本发明的中药组合物复方制剂制作过程采用的为中药提取后配制，制剂中的有效成分含量高、杂质少、适口性好，可以被对虾充分快速吸收，迅速发挥药效，避免了对虾消化道结构简单，对原药材难以直接进行消化吸收的难题。

(3)本发明对不同剂型的制备工艺进行了深入研究，解决了养殖过程中对不同剂型的使用需求，使该组方可以全方位的用于对虾急性肝胰腺坏死病的防治过程中。

附图说明

一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

图1本发明测试例1的体外抑菌试验，其中，A为实施例1抑菌效果(从左到右的管编号依次是：1、2、3～9、10、阳性、阴性)，B为聚维酮碘溶液抑菌效果(从左到右的管编号依次是：1、2、3～9、10、阳性、阴性)，C为20％乙醇溶液抑菌效果(从左到右的管编号依次是：1、2、3～9、10、阳性、阴性)。

图2本发明测试例3的3.5.2的给药结束后24h(第8天)的对虾的肝胰腺组织病理观察和结果，其中，A.空白对照组，对虾肝胰腺小管排列整齐，边界清晰，管腔大小基本一致，肝小管未见破裂，细胞核清晰可见，无病变情况；B.攻毒对照组，肝胰腺受损严重，肝胰腺小管排列紊乱，间隙增大，边界模糊，管腔变大或消失，部分肝小管破裂，细胞膨大，肝胰腺小管被血细胞浸润包围，部分数个细胞融合成一片；C.试验Ⅰ组，肝胰腺受损较严重；D.试验Ⅱ组，肝胰腺受损较严重；E.试验Ⅲ组、F.试验Ⅳ组、G.试验Ⅴ组、H.试验Ⅵ组，肝胰腺组织均正常，无明显病变情况。

图3本发明测试例3的3.5.2的停药7日后(第14天)的对虾的肝胰腺组织病理观察和结果，其中，A.空白对照组，对虾肝胰腺小管排列整齐，边界清晰，管腔大小基本一致，肝小管未见破裂，细胞核清晰可见，无病变情况；B.攻毒对照组，肝胰腺受损严重；C.试验Ⅰ组，肝胰腺受损有一定缓解，D.试验Ⅱ组，肝胰腺受损有一定缓解；E.试验Ⅲ组、F.试验Ⅳ组、G.试验Ⅴ组、H.试验Ⅵ组，肝胰腺组织均正常，无明显病变情况。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

实施例1

板蓝根100g、人工牛黄34g、甘草40g、冰片20g、猪胆粉20g和玄明粉30g。

本实施例的复方制剂的制备工艺：将板蓝根、甘草、玄明粉加水煎煮3次，合并煎液，滤过，滤液浓缩为密度为1.15～1.20(测量温度为50℃)的清膏，放冷，加入2倍体积的乙醇(使含醇量达到55％～70％均可以)，静置，滤过，滤液回收乙醇，得药液，备用；冰片、猪胆粉加入2倍体积的乙醇使其溶解，缓慢加入至上述药液中，备用；人工牛黄用适量碱液(2～5倍重量的碱液均可以，例如，本实施例中加入2倍重量的10％氢氧化钠溶液)溶解，并将上述合并液缓慢加入其中，再加入适量丙二醇和聚山梨酯60(例如，本实施例中加入量为药液重量的2％)，搅拌使溶解，调节pH值至7.0左右，加水至1000ml，搅匀，滤过，即得口服液，生药量为0.244g/mL，其中，口服液中残留有约10～20％左右的乙醇。

实施例2

本实施例与实施例1的区别在于，在制备的清膏中加入2倍重量的淀粉和葡萄糖，淀粉和葡萄糖比例为1：1，搅拌均匀，低温烘干，粉碎，用淀粉和葡萄糖补足重量至1000g，混合均匀，即得粉剂，生药量为0.244g/g粉剂。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于原料的配比不同：板蓝根105g、人工牛黄36g、甘草42g、冰片22g、猪胆粉22g和玄明粉32g。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于，在于原料的配比不同：板蓝根100g、人工牛黄38g、甘草40g、冰片25g、猪胆粉20g和玄明粉35g。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于，在于原料的配比不同：板蓝根110g、人工牛黄34g、甘草45g、冰片20g、猪胆粉25g和玄明粉30g。

对比例1

本对比例为板蓝根单剂口服液。

制备方法：将板蓝根1000g加水煎煮3次，合并煎液，滤过，滤液浓缩为密度为1.15～1.20(测量温度为50℃)的清膏，放冷，加2倍体积乙醇，静置，滤过，滤液回收乙醇，得药液，加入适量丙二醇和聚山梨酯60(例如，本对比例中加入量为药液重量的2％)，搅拌使溶解，调节pH值至7.0左右，加水至1000ml，搅匀，滤过，即得板蓝根口服液，生药量为1g/mL。

对比例2

本对比例为人工牛黄单剂，为人工牛黄直接粉碎制得。

对比例3

本对比例为甘草单剂口服液，制备方法参考对比例1，甘草口服液的生药量为1g/mL。

对比例4

本对比例为冰片单剂，为冰片直接粉碎制得。

对比例5

本对比例为猪胆粉单剂，为猪胆粉直接粉碎制得。

对比例6

本对比例为玄明粉单剂，为玄明粉直接粉碎制得。

对比例7

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了板蓝根。

对比例8

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了人工牛黄。

对比例9

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了甘草。

对比例10

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了冰片。

对比例11

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了猪胆粉。

对比例12

本实施例与实施例1的区别在于，在于省略了玄明粉。

以下测试例中，病原检测采用副溶血弧菌生化鉴定试剂盒进行检测。

测试例1：实施例1的药剂的体外抑菌试验报告

1.1材料与试药

供试菌：试验用副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)来源于中国海洋微生物菌种保藏管理中心。

供试品：实施例1。

对照药物：聚维酮碘溶液，规格：10％的聚维酮碘，商购获得。

2216E液体培养基，2216E琼脂培养基，0.03M pH7.2磷酸盐缓冲液，无菌蒸馏水，商购获得。

1.2试验方法

1.2.1供试菌液的制备

开封副溶血弧菌冻干菌种后，以2216E液体液体培养基增菌培养后接种到2216E琼脂培养基平皿上划线培养，28℃过夜培养后选择典型的单个菌落接种到2216E液体液体培养基中培养，经28℃培养18～24h后，进行活菌计数，然后用0.03M pH7.2磷酸盐缓冲液稀释至含菌量为1×10⁵～1×10⁶CFU/ml，作为供试菌液。

1.2.2最小抑菌浓度(MIC)测定

1.2.2.1实施例1药剂的最小抑菌浓度(MIC)测定：取无菌试管12支，分别加入2ml2216E液体液体培养基，以无菌操作吸取过滤除菌后的实施例1药剂2ml加入到第1管中，混匀后从第1管吸取2ml加入到第2管中，依次倍比稀释至第10管，第10管混匀后弃去2ml，第11、12管均不加入药剂，用微量移液器吸取供试菌液0.1mL加入到第1～11管中，第12管为阴性对照，混匀后，置于28℃培养箱培养18～24h后，观察结果。结果判定以肉眼观察，以药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验菌最小抑菌浓度(MIC)。

1.2.2.2聚维酮碘溶液的最小抑菌浓度(MIC)测定：取无菌试管12支，参照2.2.1的方法处理聚维酮碘溶液，观察结果。

1.2.2.3 20％乙醇溶液的最小抑菌浓度(MIC)测定：取无菌试管12支，参照2.2.1的方法处理20％乙醇溶液，观察结果。

1.2.3最小杀菌浓度(MBC)测定

将1.2.2试验中MIC测定时澄清试管的液体培养基接种于2216E琼脂平板，做好标记，28℃培养18～24h，观察结果，以平板上无菌生长的试管内的药物浓度，为该药的最小杀菌浓度。

1.3试验结果

1.3.1最小抑菌浓度(MIC)测定结果

在28℃温箱中培养24h后，取出试管，肉眼观察实施例1和聚维酮碘溶液抑菌效果，判断细菌生长情况，结果显示，对副溶血弧菌，实施例1的MIC为1/4，聚维酮碘溶液的MIC为1/16。20％乙醇溶液对副溶血弧菌无抑制作用。见表1和图1。

表1实施例1最小抑菌浓度(MIC)试验结果

注：“－”表示试管中液体澄清，“+”表示试管中液体浑浊。

1.3.2最小杀菌浓度(MBC)测定结果

28℃培养24h后，取出平板肉眼观察，对于实施例1来说，其对副溶血弧菌的MBC为1/2，对于聚维酮碘溶液来说，其对副溶血弧菌的MBC为1/8，乙醇溶液在试验浓度下对副溶血弧菌无杀灭作用。见表2。

表2实施例1最小杀菌浓度(MBC)试验结果

注：“－”表示未见有菌生长，“+”表示有菌生长。

表1、表2的结果表明，实施例1对副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC)为1/4，最小杀菌浓度(MBC)为1/2，而乙醇只是作为实施例1中的助溶剂，对实施例1的体外杀菌效果无影响，对照药物聚维酮碘溶液的MIC为1/16，最小杀菌浓度(MBC)为1/8，说明实施例1对引起对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌具有一定的抑制作用，但效果不如对照药物聚维酮碘溶液。

测试例2：不同药剂对副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果

为了进一步研究不同药剂对副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果，将实施例和对比例的药剂进行了检测。

2.1试验材料与饲养管理

2.1.1试验仪器和试剂

HX-2000便携式多参数水质分析仪；BS-180全自动生化分析仪；TSJ-1C真空自动组织脱水机；BMJ-1B生物组织包埋机系统；HM325手动轮转切片机；KPJ-1A烤片机；ZPJ-1A展片机；LVG-5AG-F8型洁净工作台；YXLB-LS-100Sll型高压蒸汽灭菌器；ZWY-2HC恒温振荡器；BIC-300生化培养箱；2216E液体培养基；TCBS琼脂；苏木素染液；切片石蜡；丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒；天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒；3％氯化钠三糖铁(TSI)琼脂；副溶血弧菌生化鉴定试剂盒；革兰氏染色液试剂盒；蛋白胨；氯化钠；胰蛋白胨；大豆蛋白胨；高锰酸钾等，均商购可得。

2.1.2实验动物

凡纳滨对虾1500尾来源于唐山曹妃甸某对虾养殖公司，健壮，为人工养殖的对虾。试验开始前，对虾进行1周的暂养，整个试验期间饲喂普通对虾颗粒饲料，饲料购自于山东某饲料公司，20kg/袋。

2.1.3试验菌株

试验用副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)来源于中国海洋微生物菌种保藏管理中心。

攻毒菌液制备：配制2216E液体培养基，500mL三角瓶20％装液量，无菌透气膜封口，121℃灭菌15分钟，冷却至室温后接种1mL活化复壮后的副溶血弧菌种子，28℃，140r/min，培养18-24h，即得初始菌液。

制备菌悬液：①初始菌液4000r/min条件下离心10min；②弃去上清，用无菌生理盐水冲洗沉淀；③重复操作步骤①-②2次；④使用无菌生理盐水定容至原体积；⑤采用倾注平板法对制备的菌悬液进行活菌计数，⑥根据活菌计数结果使用无菌生理盐水将菌悬液稀释为相应浓度的菌悬液，备用。

2.1.4养殖环境

试验在150L同规格水族缸中进行，水族缸自带独立自清洁系统，每3天更换一次过滤棉和滤料。试验前利用高锰酸钾进行消毒处理，彻底清洗干净后加入自配海水(用海水晶、自来水进行海水的配制，用盐度计调节海水盐度)，通气三日。每日进行各水族缸水质的监测，利用加热棒控制水温在27±2℃；利用增氧泵控制溶解氧不低于5.0mg/L；使用碳酸氢钠和盐酸调整pH在7.8-8.2范围内；控制海水盐度为32±2‰。海水配制使用海水晶。

2.2试验方法和结果

2.2.1建模剂量确认

以1.0×10⁵cfu/mL菌液，注射量0.1mL为最佳攻毒剂量。

2.2.2试验分组及感染方案

暂养方法：选择规格一致、体格健壮、采食活跃、无病无伤的对虾，进行一周的暂养(投喂普通对虾颗粒饲料)。连续投喂，每日8:30，12:30，16:30，20:30分别投喂一次，经过暂养期间的统计与计算，饲料日投喂量按对虾体重的5％比较合适，此时对虾可在40-60分钟左右摄食完毕。

试验分组：将试验用对虾暂养一周后，进行随机分组，包括空白对照组、攻毒对照组和各试验组(饲喂含有实施例或对比例药剂的组)。

感染方案：除空白对照组外，攻毒对照组和各试验组均采用对虾第2、3腹节侧面处作肌肉注射副溶血弧菌菌液的方式进行人工感染，菌液浓度为1.0×10⁵cfu/mL，注射剂量0.1mL/尾，空白对照组注射相同剂量的无菌生理盐水。

攻毒后的喂养方式：攻毒后4小时，各组投喂对应的饲料，每日8:30，12:30，16:30，20:30分别投喂一次，饲料日投喂量为对虾体重的5％，连用7日，停药后观察1周，观察周内以普通饲料喂养。

给药阶段的各组药饵制备方法：

空白对照组所喂饲料：取50mL纯化水，加入10g面粉，加热搅拌至粘稠状态，搅拌均匀后，加入1kg饲料中，充分搅拌，平铺到塑料纸上，常温风干，装袋密封保存，备用。

攻毒对照组所喂饲料：同空白对照组。

各试验组所喂药饵：取50mL纯化水，加入10g面粉，加热搅拌至粘稠状态，分别加入各试验组的药剂，搅拌均匀后，分别加入1kg饲料中，充分搅拌，平铺到塑料纸上，常温风干，装袋密封保存，制得试验组饲料。

投喂方法：

投喂前将鱼缸的自清洁系统关闭，投喂1小时后，打开自清洁系统，将残饵粪便清除。

2.2.3一般临床观察

试验期间，每日观察和记录对虾的外观体征、游泳情况、摄食情况、发病情况及死亡情况。

2.2.4疗效判断

观察对虾肝胰腺颜色、大小，胃肠道内食物饱满等情况，以对虾出现急性肝胰腺坏死病典型症状，作为标准判断对虾是否发病。症状观测标准主要参考SC/T-7233-2020《急性肝胰腺坏死病诊断规程》制定。发病、治愈(正常)、感染死亡情况参照表3进行判定。第8天统计发病率、治愈率和感染死亡率，具体计算公式如下：

发病率(％)＝发病对虾数/受试对虾数×100％。

治愈率(％)＝治愈对虾数/受试对虾数×100％。

感染死亡率(％)＝感染死亡对虾数/受试对虾数×100％。

表3对虾发病判定表

用Microsoft Excel管理试验数据，采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理，应用单因素方差分析(ANOVA)项下的“Duncan(D)”方法对试验结果进行统计学分析，数据分析结果认为P<0.05有统计学意义。

2.3方剂初筛

试验分组：将试验用对虾暂养一周后选择320尾，随机分为16组，包括空白对照组、攻毒对照组和各试验组，每组20尾，感染方法采用2.2.2的感染方案。

各试验组的药剂分别在10g面粉/50mL纯化水的面糊中的添加量为：

实施例1、对比例1、对比例3、对比例7～12的药剂为口服液，添加量分别为2mL。

实施例2、对比例2、对比例4～6为粉剂，添加量分别为2g。

参照2.2.2的攻毒后的喂养方式和投喂方法进行投喂，各组处理情况见表4。

表4试验分组及各组处理方法

临床观察结果

整个养殖期间，水质稳定，水温控制在：27±2℃；溶解氧≥5.0mg/L；pH7.8-8.2；盐度：30-35‰。

攻毒前：整个试验期间，空白对照组对虾的活动未见任何异常，对虾游泳正常，摄食良好，甲壳坚硬，胃肠道内食物饱满，虾体洁净透亮，肝胰腺呈棕褐色，大小正常，边缘清晰，体色无发白等情况，触碰时反应明显，立即弹跳躲避。

攻毒后：

各感染试验组对虾逐渐出现游动不活泼，食欲下降等症状；感染12h陆续可观察到对虾体色出现白浊，肝胰腺颜色变浅发白，部分对虾的肝胰腺出现萎缩，肠道内食物不连续，攻毒24h达到发病高峰期。

攻毒对照组及各感染给药组在感染后陆续出现死亡，2-3天死亡数最多。部分组给药后症状出现好转，给药7天，多组病虾症状明显改善，甚至恢复正常状态。攻毒对照组由于没有给与治疗，对虾症状未见改善。

2.3.2剖检观察和结果

观察方法：试验期间，观察记录对虾死亡情况，剖检病死对虾查看器官病变情况，并分离病原。试验结束对每组存活的对虾进行剖检观察，肉眼观察肝胰腺有无异常并做记录。

结果：对死亡对虾进行剖检发现，对虾体色发白，肝胰腺颜色变浅发白，萎缩变小。

初筛疗效判断

给药结束后24h(第8天)，按照2.2.4的疗效判断方法，计算各组对虾的治愈情况，见表5。

表5给药结束后24h(第8天)各组对虾的治愈情况

由表5可知，攻毒对照组未出现治愈对虾，治愈率为0％。空白对照组未出现发病对虾，整个试验过程没有发病及死亡。各给药组攻毒后，所有对虾均出现发病症状，随着给药的进行，各试验组对虾症状出现好转，在给药7天后，部分对虾被完全治愈，病症消失，其中，实施例1和2治疗效果良好，治愈率达80％以上，其它对比例单剂或组方的治疗效果相对实施例1和2要差一些，治愈率为25-70％。

虽然部分组分如甘草、板蓝根等虽然有一些保肝、抗菌等方面的报道，但其针对对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果参差不齐(如对比例8、11，虽均含有甘草、板蓝根，但治疗效果并不理想)，而按照实施例1～5的组方，对对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果显著提高，治愈率达80％以上，有的甚至达90％以上，取得了意想不到的良好效果。

为了进一步研究，本发明的组方对对虾急性肝胰腺坏死病的治疗效果，发明人进行了进一步测试，如下：

测试例3：实施例1的药剂对副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果

观察实施例1对副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病的治疗效果，明确实施例1的保肝功能。

采用2.1和2.2的试验材料和饲养管理。

试验分组：将试验用虾暂养一周后选择480尾，随机分为8组，空白对照组、攻毒对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组8个组，每组3个平行，每个平行1个试验缸，每缸20尾，感染方法采用2.2.2的感染方案。

各试验组的药剂分别在10g面粉/50mL纯化水的面糊中的添加量为：

将实施例1的药剂按0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL的添加量分别加入到面糊(10g面粉/50mL纯化水)中，分别得到含实施例1药剂0.5mL/kg、含实施例1药剂1.0mL/kg饲料、含实施例1药剂2.0mL/kg饲料、含实施例1药剂3.0mL/kg饲料、含实施例1药剂4.0mL/kg饲料、含实施例1药剂5.0mL/kg饲料。

参照2.2.2的攻毒后的喂养方式和投喂方法进行投喂，各组处理情况见表6。

表6试验分组及各组处理方法

3.1一般临床观察

整个养殖期间，水质稳定，水温控制在：27±2℃；溶解氧≥5.0mg/L；pH7.8-8.2；盐度：30-35‰。

临床观察：试验期间，每日观察和记录对虾的外观体征、游泳情况、摄食情况、死亡时间和死亡数(触碰时无明显反应)。

观察结果

攻毒前：整个试验期间，空白对照组对虾的活动未见任何异常，对虾游泳正常，摄食良好，甲壳坚硬，胃肠道内食物饱满，虾体洁净透亮，肝胰腺呈棕褐色，大小正常，边缘清晰，体色无发白等情况，触碰时反应明显，立即弹跳躲避。

攻毒后：

各感染试验组对虾逐渐出现游动不活泼，食欲下降等症状；感染12h陆续可观察到对虾体色出现白浊，肝胰腺颜色变浅发白，部分对虾的肝胰腺出现萎缩，肠道内食物不连续，攻毒24h达到发病高峰期。

攻毒对照组及各感染给药组在感染后陆续出现死亡，2-3天死亡数最多。其中试验Ⅲ-Ⅵ四组死亡数目较少，且在给药3天后逐渐有所好转，试验第7天，存活对虾大部分已经恢复正常状态。攻毒对照组、试验Ⅰ、Ⅱ组两组病情较严重，大部分对虾症状未见改善。

停药7日后(第14天)，试验Ⅰ、Ⅱ组两组病情有一定好转，试验Ⅲ-Ⅵ四组基本恢复正常。攻毒对照组症状未见改善。

3.2剖检观察和结果

观察方法：试验期间，观察记录对虾死亡情况，剖检病死对虾查看器官病变情况，并分离病原。试验结束对每组存活的对虾进行剖检观察，肉眼观察肝胰腺有无异常并做记录。

结果：对死亡对虾进行剖检发现，对虾体色发白，肝胰腺颜色变浅发白，萎缩变小。试验结束后，攻毒对照组、试验Ⅰ、Ⅱ组两组对虾部分仍有病变情况，其余各组对虾虾体透亮，肠道饱满，肝胰腺颜色及形状正常。

3.3发病率结果

给药结束后24h(第8天)各组对虾发病情况见表7：空白对照组发病率为0，攻毒对照组发病率高达100％。其它各治疗组Ⅰ-Ⅵ组发病率均显著低于攻毒对照组(P<0.05)，且随着给药剂量的增加，发病率有明显降低的趋势。其中试验Ⅰ、Ⅱ组发病率仍然较高，分别为73.33％、66.67％，且两者之间差异不显著(P>0.05)；试验Ⅲ-Ⅵ组的发病率分别为18.33％、16.67％、15.00％、13.33％，显著低于试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)，但Ⅲ-Ⅵ四组间发病率差异不显著(P>0.05)，发病率均较低。

表7给药结束后24h(第8天)各组对虾发病情况

3.4治愈率和感染死亡率结果

给药结束后24h(第8天)各组对虾治愈情况见表8、各组对虾死亡情况见表9。

表8给药结束后24h(第8天)各组对虾治愈情况

表8结果表明：攻毒对照组未出现治愈对虾，治愈率为0％。各给药组随着给药剂量的增加治愈率明显提高，试验Ⅰ-Ⅵ组治愈率分别为：26.67％、33.33％、81.67％、83.33％、85.00％、86.67％。其中试验Ⅲ-Ⅵ组治愈率均较高，在80％以上，试验Ⅰ、Ⅱ两组治愈率仅30％左右，显著低于试验Ⅲ-Ⅵ四组(P<0.05)。

表9各组对虾死亡情况

表9结果表明：空白对照组在整个试验过程中无死亡；攻毒对照组感染死亡率为46.67％。与攻毒对照组相比，各给药组感染死亡率均有所降低，且随着给药剂量的增加，死亡率由明显降低的趋势。其中试验Ⅲ-Ⅵ组感染死亡率显著低于攻毒对照组(P<0.05)，该四组的感染死亡率分别为：11.67％、11.67％、10.00％、10.00％。试验Ⅰ、Ⅱ组死亡率分别为40.00％、36.67％，与攻毒对照组相比有所降低，但差异不显著(P>0.05)。试验期间各组死亡的对虾经病原检测结果均为副溶血弧菌阳性。

3.5血淋巴生化指标检测和病理观察

给药结束后24h(第8天)、停药7日后(第14天)，分别从各组随机抽取9尾对虾(即每次每缸随机取3尾)，采集血淋巴进行生化检测和固定肝胰腺组织进行病理观察。

3.5.1血淋巴生化指标检测和结果

血淋巴生化指标检测：用注射器从围心腔采集血淋巴，采用含抗凝剂真空采血管，收集抗凝血，离心，分离上清。采用全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。

血淋巴生化指标检测结果：各组对虾血淋巴ALT含量见表10，各组对虾血淋巴ALT含量见表11。

表10各组对虾血淋巴ALT含量(n＝9)

注：同列数据肩标小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)，含相同字母或不标字母表示差异不显著(P>0.05)。

表10对虾血淋巴ALT含量的结果表明：与空白对照组相比，攻毒对照组对虾的血淋巴ALT含量显著升高，表明在攻毒后，对虾肝胰腺组织出现损伤。与攻毒对照组相比，各给药组ALT含量均有下降趋势，且随着给药剂量的增加，下降趋势越明显。其中试验Ⅲ-Ⅵ四组ALT含量显著低于攻毒对照组(P<0.05)，与空白对照组差异不显著(P>0.05)，表明实施例1给药7天后，肝胰腺损伤情况有明显改善，并接近健康虾。试验Ⅰ、Ⅱ组含量与攻毒对照组差异不显著(P>0.05)，显著高于空白对照组，表明该组方药剂在低剂量使用时，肝胰腺损伤仍较严重。

表11各组对虾血淋巴AST含量(n＝9)

注：同列数据肩标小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)，含相同字母或不标字母表示差异不显著(P>0.05)。

表11的对虾血淋巴AST含量结果表明：对虾血淋巴AST含量变化趋势跟ALT基本一致，试验Ⅰ、Ⅱ组含量显著高于空白对照组(P<0.05)，与攻毒对照组差异不显著(P>0.05)，试验Ⅲ-Ⅵ四组与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)，显著低于攻毒对照组(P<0.05)。随着给药剂量的增加，患病对虾血淋巴AST含量明显降低。试验Ⅲ-Ⅵ四组含量显著低于试验Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)，且四组间无显著差距(P>0.05)。

各组对虾血淋巴生化指标检测结果表明，含实施例1药剂2.0-5.0mL/kg饲料的添加剂量可以抑制患病对虾肝胰腺损伤引起的ALT和AST的异常升高，改善肝损伤程度。

3.5.2肝胰腺组织病理观察和结果

肝胰腺组织病理观察方法：固定肝胰腺组织，制作石蜡切片，进行HE染色，中性树胶封片后进行镜检观察，检测肝胰腺病理变化。

肝胰腺组织病理观察，给药结束后24h(第8天)、停药7日后(第14天)的病理结果如图2、图3所示。

图2中：空白对照组对虾肝胰腺小管排列整齐，边界清晰，管腔大小基本一致，肝小管未见破裂，细胞核清晰可见，无病变情况；攻毒对照组、试验Ⅰ、Ⅱ组肝胰腺均有不同程度受损，其中攻毒对照组最为严重：肝胰腺小管排列紊乱，间隙增大，边界模糊，管腔变大或消失，部分肝小管破裂，细胞膨大，肝胰腺小管被血细胞浸润包围，部分数个细胞融合成一片；试验Ⅲ-Ⅵ四组肝胰腺组织均正常，无明显病变情况。

图3中，攻毒对照组对虾肝胰腺仍存在病变，且较为严重，试验Ⅰ、Ⅱ组肝胰腺病变情况有一定缓解，但未完全恢复，其它各组肝胰腺组织均正常。

综上，人工感染致病性副溶血弧菌引起对虾急性肝胰腺坏死病后，攻毒后对虾血淋巴AST、ALT含量显著升高(P<0.05)，投喂含有不同剂量(尤其是2.0-5.0mL/kg)的实施例1的饲料，连用7天，可改善发病虾临床症状，尤其是2.0-5.0mL/kg剂量可显著抑制肝胰腺损伤导致的血淋巴中ALT、AST含量的异常升高(P<0.05)，修复肝胰腺损伤，改善肝胰腺细胞受损情况，体现了较好的保肝功能，降低了对虾的发病率和感染死亡率，有效降低感染死亡率至12％以下，有较高的治愈率，治愈率可达80％以上，对对虾急性肝胰腺坏死病有良好的治疗作用。其中试验Ⅲ-Ⅵ四组效果明显优于试验Ⅰ、Ⅱ两组，而试验Ⅲ-Ⅵ四组间治疗效果基本相当。

说明实施例1具有良好的保肝功能，以2.0-5.0mL/kg饲料的剂量添加到饲料中，对副溶血弧菌感染引起的对虾急性肝胰腺坏死病治疗效果显著，治愈率在80％以上。

测试例4：本发明各实施例在养殖过程中治疗对虾肝胰腺坏死病试验报告

天津某对虾养殖场有8个池塘的部分对虾出现了肝胰腺色浅发白，萎缩变小等急性肝胰腺坏死病典型症状，山东潍坊某对虾养殖场有9个池塘出现相同症状，每个池塘随机选取5尾具有典型临床症状的对虾进行病原检测，结果均为副溶血弧菌阳性，因此可以确诊这17个池塘均发生了副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病，可以作为候选试验塘。随后在确诊池塘随机抽检30尾对虾，对发病对虾进行统计，并计算抽检发病率。部分池塘的发病率较高，出现大面积死亡，说明该病不经有效干预难以自愈，致死率高，经济损失较大。

上述虾养殖场中，日常定期保养包括：调水、改底和消毒，虽然日常消毒，但仍然产生了副溶血弧菌导致的对虾肝胰腺坏死病。

每个试验基地选择抽检发病率相近的6个池塘开展治疗试验，经选择，各纳入池塘的抽检发病率均在33％～50％之间，详见下表12。患病对虾临床症均出现肝胰腺色浅发白，萎缩变小。

表12用药前各试验池对虾急性肝胰腺坏死病检测结果

用药后的发病率结果：

在上述发病池塘的对虾喂养饲料中，分别添加实施例1、2的药剂，制备含有药剂的饲料。实施例1的添加方式参照测试例2的2.2.2的方法添加，饲料中的添加剂量为2.0mL/kg，连用7天；实施例2的药剂为粉剂，直接添加到饲料中搅拌混匀，实施例2的药剂在饲料中的添加剂量为2g/kg，连用7天。

用药一段时间后，各试验池发病率结果见下表13、14：用药第8天时，两个养殖场试验基地中，使用实施例1药剂的组和使用实施例2药剂的组的抽检发病率与用药前相比均显著降低(P<0.05)，降低了约30％，表明实施例1和实施例2均表现出良好的治疗效果。第14天时抽检发病率进一步降低，但与第八天相比差异不显著(P>0.05)，说明。天津养殖场用药前、第8天与第14天使用实施例2药剂的池塘组抽检发病率分别为：41.11％、10.00％和6.67％；实施例一组发病率分别为：40.00％、11.11％和7.78％。山东养殖场用药前、第8天与第14天实施例二组发病率分别为：42.22％、8.89％和5.56％；实施例一组发病率分别为：41.11％、10.00％和7.78％。

表13天津试验池对虾抽检发病率(％)

注：同行数据相比右上角小写字母相同或不标字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。

表14山东试验池对虾抽检发病率(％)

注：同行数据相比右上角小写字母相同或不标字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。

治愈率结果：

两个养殖场自用药起第8天与第14天时各组的治愈率结果见下表15、16：与实施例1组相比，实施例2组治愈率有一定提高，但差异不显著(P>0.05)。其中天津养殖场第8天实施例2组和实施例1组治愈率分别为75.06％和72.54％；第14天实施例2组和实施例1组治愈率分别为83.22％和80.63％。山东养殖场第8天实施例2组和实施例1组治愈率分别为79.37％和75.96％；第14天实施例2组和实施例1组治愈率分别为86.90％和82.02％，说明通过喂养拌药饵料不仅能治愈对虾肝胰腺坏死病，而且提高了对虾的免疫力和恢复力，在停药后仍能持续恢复。

表15天津试验池对虾治愈率(％)

注：同列数据相比右上角小写字母相同或不标字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。

表16山东试验池对虾治愈率(％)

注：同列数据相比右上角小写字母相同或不标字母表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。

小结：对虾急性肝胰腺坏死病一般临床表现为：对虾游动不活泼，食欲下降，体色白浊，肝胰腺出现色浅发白，萎缩变小，甲壳发软，空肠空胃或肠道内食物不连续等，是对虾养殖中较为常见的，危害较大的疾病之一。本试验结果表明以推荐剂量实施例1(2.0mL/kg饲料)或实施例2(2.0g/kg饲料)对患此病对虾进行拌饵投喂，连续投喂7日，用药后抽检发病率显著低于用药前抽检发病率，临床治疗效果良好；实施例2死亡率、治愈率与实施例1组相比均差异不显著，且治愈率相对较高，均在70％以上，表明实施例1跟实施例2均有良好的治疗效果，且两者效果相当。同时，本试验也进一步验证了最佳推荐用药剂量(2.0mL/kg饲料或2.0g/kg饲料)的本发明中药复方制剂可较好地治疗对虾急性肝胰腺坏死病。

以上结果表明，推荐剂量的本发明中药复方制剂的各实施例(2.0mL/kg饲料2.0g/kg饲料)拌饵投喂，连用7日，可有效治疗对虾急性肝胰腺坏死病，治愈率较高，达70％以上，具有改善、修复肝胰腺损伤的能力，在停药7日(喂药起第14天)治愈率进一步提高，可达82％以上，说明本发明的中药组合物复方药剂能提高对虾的免疫力和持续改善、修复肝胰腺损伤的能力，具有保肝、修复受损肝组织的功能，提高对虾的存活率，降低损失。

综上，本发明的中药组合物复方制剂，虽然对引起对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌的体外抑制效果并不显著，但在将其拌入虾饲料中喂养患急性肝胰腺坏死病的对虾后，起到了明显的治疗作用，相对板蓝根单剂、甘草单剂和其它复方药剂具有更好的治疗效果。本发明的中药组合物复方制剂安全有效、绿色环保。虽然抗生素类药物可能对副溶血弧菌等病原菌具有较好的抑制作用，但容易加重肝胰腺损伤，导致病原菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病治疗难度较高。

本发明的中药复方制剂制作过程采用的为中药提取后配制，制剂中的有效成分含量高、杂质少、适口性好，可以被对虾充分快速吸收，迅速发挥药效，避免了对虾消化道结构简单，对原药材难以直接进行消化吸收的难题。

本发明还提供了一种新剂型，并验证了新剂型的有效性，与传统中药剂型相比有显著的效果优势。开展了大量的临床组方筛选与药效评价，确定了最佳的组方，并对不同剂型的制备工艺进行了深入研究，解决了养殖过程中对不同剂型的使用需求，使该组方可以全方位的用于对虾急性肝胰腺坏死病的防治过程中。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种中药组合物在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分包括板蓝根、人工牛黄、甘草、冰片、猪胆粉和玄明粉。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根80-120份、人工牛黄20-40份、甘草30-50份、冰片10-30份、猪胆粉10-30份、玄明粉20-40份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-120份、人工牛黄34-40份、甘草40-50份、冰片20-30份、猪胆粉20-30份、玄明粉30-40份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-110份、人工牛黄34-38份、甘草40-45份、冰片20-25份、猪胆粉20-25份、玄明粉30-35份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-105份、人工牛黄34-36份、甘草40-42份、冰片20-22份、猪胆粉20-22份、玄明粉30-32份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100份、人工牛黄34份、甘草40份、冰片20份、猪胆粉20份、玄明粉30份。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的剂型为口服液、粉剂、喷剂、膏剂、注射剂、胶囊剂中的任意一种；

和/或，所述产品为药物或饲料，可选地，所述饲料为虾饲料，可选地，所述虾饲料为对虾饲料；

和/或，所述对虾急性肝胰腺坏死病为病原菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病，可选地，所述病原菌为副溶血弧菌。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述中药组合物为中药经提取后获得的清膏，可选地，清膏在测量温度为50℃的相对密度为1.00-1.20g/mL，可选地相对密度为1.05～1.15g/mL，可选地，清膏的pH为6.5～7.5，可选地，清膏的pH为7。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述中药组合物还包括药学上可接受的辅料；可选地，所述辅料包括丙二醇、聚山梨酯60、吐温80、吐温20、甘油和水中的一种或几种；

可选地，所述中药组合物的剂型为口服液，可选地，口服液的生药量为0.1～0.8g/mL，可选地为0.2～0.5g/mL，可选地为0.2～0.3g/mL，可选地为0.244g/mL；

可选地，所述中药组合物的剂型为粉剂，粉剂中的辅料还包括选自葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉和氯化钠中的一种或几种；可选地，粉剂的生药量为0.1～0.8g/g粉剂，可选地为0.2～0.5g/g粉剂，可选地为0.2～0.3g/g粉剂，可选地为0.244g/g粉剂；

可选地，所述中药组合物的剂型为膏剂，所述膏剂中的辅料还包括选自葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉、氯化钠、明胶和黄原胶中的一种或几种。

6.根据权利要求1至5任一所述的应用，其特征在于，所述组合物的制备方法包括：

1)板蓝根、甘草、玄明粉加水煎煮至少一次，合并煎液，过滤，滤液浓缩；

2)乙醇溶解冰片和猪胆粉，加入至步骤1)的物料中；

3)人工牛黄用碱液溶解，并将步骤2)的物料人工牛黄液中；

4)在步骤3)中加入辅料B，搅拌使其溶解，调节pH值，加水，搅匀，过滤，获得药液。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤1)中，滤液浓缩后，放冷，加乙醇，静置，过滤，滤液回收乙醇，获得浓缩药液；可选地，乙醇加入量使乙醇的体积分数为55％～70％；

和/或，步骤2)中，冰片和猪胆粉溶解后缓慢加入步骤1)的物料中；可选地，步骤2)中，采用2～5倍体积的乙醇溶解冰片和猪胆粉；

和/或，步骤3)中，步骤2)的物料缓慢加入人工牛黄液中；可选地，碱液为氢氧化物溶液，可选地为10％氢氧化物溶液，可选地为10％氢氧化钠溶液；

和/或，步骤4)中，pH为6.5～7.5，可选地pH为7；可选地，辅料B包括丙二醇、聚山梨酯60、吐温80、吐温20、甘油和水中的一种或几种。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，还包括以下步骤A)、B)中的一种；

A)在步骤4的物料中加入辅料D，搅拌均匀，低温烘干，粉碎，得粉剂；可选地，辅料D包括葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉和氯化钠中的一种或几种；

B)在步骤4的物料中加入适量辅料E，搅拌均匀，得膏剂；可选地，辅料E包括葡萄糖、脱脂奶粉、糊精、淀粉、辅美粉、玉米芯粉、氯化钠、明胶和黄原胶中的一种或几种。

9.一种用于预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根80-120份、人工牛黄20-40份、甘草30-50份、冰片10-30份、猪胆粉10-30份、玄明粉20-40份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-120份、人工牛黄34-40份、甘草40-50份、冰片20-30份、猪胆粉20-30份、玄明粉30-40份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-110份、人工牛黄34-38份、甘草40-45份、冰片20-25份、猪胆粉20-25份、玄明粉30-35份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100-105份、人工牛黄34-36份、甘草40-42份、冰片20-22份、猪胆粉20-22份、玄明粉30-32份；

可选地，所述中药组合物的活性成分包括如下重量份的组合物：板蓝根100份、人工牛黄34份、甘草40份、冰片20份、猪胆粉20份、玄明粉30份。

10.一种用于预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病的虾饲料，其特征在于，包括权利要求9所述的中药组合物；

可选地，所述中药组合物占虾饲料重量的0.2％-0.5％；

可选地，所述中药组合物为口服液，可选地，口服液中中药组合物的生药量为0.1～0.8g/mL，可选地为0.2～0.5g/mL，可选地为0.2～0.3g/mL，可选地为0.244g/mL；可选地，所述虾饲料中，含有2.0-5.0mL中药组合物口服液/kg虾饲料；

可选地，所述中药组合物为粉剂，可选地，粉剂中中药组合物的生药量为0.1～0.8g/g粉剂，可选地为0.2～0.5g/g粉剂，可选地为0.2～0.3g/g粉剂，可选地为0.244g/g粉剂；可选地，所述虾饲料中，含有2.0-5.0g中药组合物粉剂/kg虾饲料。

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