CN116348146A - 作为放射疗法的辅助的树突细胞活化疗法 - Google Patents

Abstract

本文提供了涉及施用树突细胞活化疗法作为针对放射疗法或基于能量的疗法的辅助疗法以治疗个体中的肿瘤或癌症的方法。

Description

作为放射疗法的辅助的树突细胞活化疗法

交叉引用

本申请要求于2020年8月6日提交的美国临时申请第63/062,185号的权益，该申请通过引用整体并入本文。

发明内容

放射疗法通常用作癌症的治疗。放射疗法利用电离辐射来损伤靶细胞的遗传物质，导致受影响细胞的死亡和损伤。然而，在许多情况下，放射疗法不足以根除癌症和/或肿瘤的所有残余，也不足以预防癌症的远侧转移。

树突状细胞是处理抗原物质并将其在细胞表面上呈递给免疫系统的T细胞的抗原呈递细胞。当T细胞与肿瘤特异性抗原一起被树突细胞呈递时，T细胞随后能够在免疫系统靶向和杀死肿瘤细胞的能力中起关键作用。本公开描述了树突细胞活化分子的用途，其改善放射治疗的有效性，并建立全身性抗癌/肿瘤免疫。在这些方法中，树突细胞活化分子在放射治疗后施用。与单独用放射或树突细胞活化分子治疗相比，以及与同时用放射和树突细胞活化分子治疗相比，这改善了癌症或肿瘤治疗。

在一个方面，本文描述了一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。还描述了一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向个体施用树突细胞活化分子，其中个体已经接受一定剂量的放射疗法，并且其中在已经施用放射疗法后至少1天施用树突细胞活化分子。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少2天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少3天施用。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括多个放射疗法剂量。在某些实施方案中，放射疗法是外部射束放射疗法。在某些实施方案中，外部射束放射疗法选自：三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法、中子束疗法及其组合。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括至少约2Gy。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括至少约2Gy且不超过约20Gy。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少3天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少5天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少7天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子诱导未成熟树突细胞的成熟。在某些实施方案中，树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺(murabutide)、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母(C.albicans)、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。在某些实施方案中，CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。在某些实施方案中，抗CD40激动性抗体包括达西组单抗(dacetuzumab)、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗(lucatumumab)、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗(selicrelumab)、ASKP1240或SEA-CD40。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。在某些实施方案中，将树突细胞活化分子施用于用放射疗法的剂量治疗的肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤或癌症是实体组织肿瘤或癌症。在某些实施方案中，实体瘤或癌症是乳腺的实体瘤或癌症、前列腺的实体瘤或癌症或黑色素瘤。

在一个方面，本文描述了一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中一定剂量的基于能量的疗法选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。还描述了一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向个体施用树突细胞活化分子，其中个体已经施用了一定剂量的基于能量的疗法，其中基于能量的疗法的剂量选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。在某些实施方案中，基于能量的疗法的剂量包括基于能量的疗法的多个剂量。在某些实施方案中，基于能量的疗法是不可逆电穿孔(IRE)。在某些实施方案中，基于能量的疗法是微波疗法。在某些实施方案中，基于能量的疗法是低强度聚焦超声(LOFU)。在某些实施方案中，LOFU在治疗区域中以10W/cm²至1000W/cm²的强度施用。在某些实施方案中，基于能量的疗法是高强度聚焦超声(HIFU)。在某些实施方案中，基于能量的疗法是冷冻疗法。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量之后至少3天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量之后至少5天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少7天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。在某些实施方案中，树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。在某些实施方案中，CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。在某些实施方案中，抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、ChiLob7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240或SEA-CD40。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。在某些实施方案中，将树突细胞活化分子施用于正在用基于能量的疗法的剂量治疗的肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤或癌症是实体组织肿瘤或癌症。在某些实施方案中，实体瘤或癌症是乳腺的实体瘤或癌症、前列腺的实体瘤或癌症或黑色素瘤。

在一个方面，本文描述了一种在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少2天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少3天施用。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括多个放射疗法剂量。在某些实施方案中，放射疗法是外部射束放射疗法。在某些实施方案中，外部射束放射疗法选自：三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法、中子束疗法及其组合。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括至少约2Gy。在某些实施方案中，放射疗法的剂量包括至少约2Gy且不超过约20Gy。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少3天施用。在某些实施方案中，其中树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少5天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法的剂量后至少7天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。在某些实施方案中，其中树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂及其组合。在某些实施方案中，CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。在某些实施方案中，抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240或SEA-CD40。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。在某些实施方案中，将树突细胞活化分子施用于用放射疗法剂量治疗的肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是实体瘤。在某些实施方案中，实体瘤是乳腺肿瘤、前列腺肿瘤或黑色素瘤。

附图说明

图1A示出了在放射治疗的同时接受αCD40的小鼠的实验方案。

图1B示出了对照小鼠和在放射治疗的同时接受αCD40的小鼠中肿瘤体积随时间的变化。

图1C示出了在仅接受放射的个体小鼠和在放射治疗的同时接受αCD40的小鼠中肿瘤体积随时间的变化。

图2A示出了在肿瘤特异性T细胞受损的小鼠中治疗荷瘤小鼠的实验方案，该小鼠在放射治疗的同时接受αCD40。

图2B示出了在未接受治疗的肿瘤特异性T细胞受损小鼠、仅接受放射的小鼠和在放射治疗的同时接受αCD40的小鼠中肿瘤体积随时间的变化。

图2C示出了在未接受治疗的个体肿瘤特异性T细胞受损小鼠、仅接受放射的小鼠和在放射治疗的同时接受αCD40的小鼠中肿瘤体积随时间的变化。

图3A示出了在放射治疗后接受αCD40治疗的携带RES499肿瘤的小鼠的实验方案。

图3B示出了与未接受治疗的小鼠或仅接受放射治疗的小鼠相比，在放射治疗后接受αCD40治疗的小鼠的存活增加。

图3C示出了在放射后接受αCD40治疗的个体小鼠、仅接受放射治疗的小鼠和未治疗的小鼠中肿瘤大小随时间的变化。

图3D示出了在放射治疗后接受αCD40治疗的小鼠、仅接受放射的小鼠和未治疗的小鼠的肿瘤注射后100天的存活情况。

图3E示出了肿瘤再攻击实验的实验方案。

图3F示出了在放射治疗后接受αCD40治疗的再次攻击的小鼠、仅接受放射治疗的小鼠和未治疗的小鼠中的肿瘤发生率。

图4A示出了RES499癌细胞系的发展。

图4B示出了接受放射和αCTLA-4治疗两者的小鼠中RES499来源的肿瘤的生长。

图4C示出了与亲本细胞相比，RES499细胞中升高的IFNγ信号传导导致PDL1的表达增加。

图4D示出了用于在检查点阻断(αCTLA4)抗性细胞系(RES499)中评估远端肿瘤(abscopal tumor)生长的实验方案。

图4E示出了接受放射治疗的小鼠、除了放射治疗之外还接受αCTLA-4或αCD40治疗的小鼠和未治疗的小鼠的远端肿瘤中的平均肿瘤生长。

图4F示出了在对照小鼠、经照射的小鼠和接受αCD40治疗和放射两者的小鼠中的原发性和远端肿瘤中的个体肿瘤生长。

图5A-5D示出了治疗对CD103⁺树突细胞中的共刺激分子表达和1型炎症的效果。

图5E-5H示出了治疗对骨髓来源的抑制细胞中的共刺激分子表达和1型炎症的效果。

图5I-5K示出了αCD40治疗对髓样细胞、树突细胞和骨髓来源的抑制细胞中的诱导型一氧化氮合成酶的效果。

图6A-6C示出了引流淋巴结中CD11b⁺群的活化相关共刺激。

图6D示出了与接受仅放射疗法的小鼠相比，在放射疗法后接受αCD40的小鼠中IL6减少。

图6E-6F示出了在放射疗法后接受αCD40的小鼠的粒细胞性骨髓衍生的抑制细胞中MHC II类的浸润和水平。

图6G-6H示出了在放射疗法后接受αCD40的小鼠中单核细胞骨髓衍生的抑制细胞中MHC II类的浸润和水平。

图7A-7B示出了在放射疗法后的αCD40治疗对CD4/CD8比率的效果。

图7C示出了在放射疗法后的αCD40治疗对调节性T细胞的效果。

图7D-7E示出了在放射疗法后的αCD40治疗对IFNγ⁺ CD8细胞的效果。

图7F-7G示出了在放射疗法后的αCD40治疗对效应CD8T细胞增殖的效果。

图8A示出了在放射疗法后的αCD40治疗对引流淋巴结(draining lymph node)中CD4/CD8比率的效果。

图8B示出了在放射疗法后的αCD40治疗对Ki67⁺细胞的效果。

图8C示出了在放射疗法后的αCD40治疗对CD44⁺ CD8细胞百分比的效果。

图8D示出了在放射疗法后的αCD40治疗对T细胞的效果。

图8E示出了在放射疗法后的αCD40治疗对自然杀伤细胞的效果。

图8F示出了在放射疗法后的αCD40治疗对Foxp3⁺ CD4细胞的Foxp3⁺ CD4。

图8G示出了在放射疗法后的αCD40治疗对IFN⁺ CD8细胞百分比的效果。

图8H示出了在放射疗法后的αCD40治疗对中枢记忆的效果。

图9A示出了用于测试转移性癌症模型中放射疗法后αCD40治疗的效果的实验方案。

图9B示出了转移性癌症模型中放射后αCD40治疗的小鼠的存活情况。

图9C示出了在如图9C中的转移性癌症模型中放射后用αCD40治疗的小鼠的不同治疗类型分组的存活率的比较。

图10A示出了用于治疗黑色素瘤癌症模型中用αCD40治疗的小鼠在放射后的存活情况的实验方案。

图10B示出了用αCD40治疗的B16F10细胞(上图)或RES499细胞(下图)接种的个体小鼠在放射后的肿瘤体积。

图11示出了用PAM和其他疗法治疗癌症患者的过程。

图12A描述了用于测试抗CD40疗法和照射对肿瘤浸润性T细胞衰竭的效果的实验方案。

图12B描述了治疗后小鼠中细胞类型的流式细胞仪分析。

图12C描述了每个治疗组中GrBz+Ki67+细胞的百分比的比较。

图13A描述了用于测试免疫细胞耗竭(depletion)的效果的实验方案。

图13B描述了CD8细胞耗竭对肿瘤体积的影响。

图13C描述了Ly6C和CD11b细胞的耗竭对肿瘤体积的影响。

具体实施方式

本文公开了一种通过在用放射疗法或能量疗法治疗后至少1天向个体施用树突细胞活化分子来治疗个体中的肿瘤或癌症的方法。放射疗法和能量疗法通过杀死或损伤癌细胞来治疗个体的肿瘤和癌症。加入树突细胞活化分子可激活个体免疫系统的树突细胞并有助于治疗肿瘤或癌症。

在一个方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在另一方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用树突细胞活化分子，其中个体已经接受一定剂量的放射疗法，并且其中在已经施用放射疗法后至少1天施用树突细胞活化分子。

在一个方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中一定剂量的基于能量的疗法选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。在另一个方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用树突细胞活化分子，其中个体已经施用了一定剂量的基于能量的疗法，其中基于能量的疗法的剂量选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

本申请还公开了一种在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法。在一个方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在另一方面，本文描述了一种方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中一定剂量的基于能量的疗法选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

某些定义

在以下描述中，阐述了某些具体细节以便提供对各种实施方案的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可以在没有这些细节的情况下实践所提供的实施方案。除非上下文另有要求，否则在整个说明书和随后的权利要求书中，词语“包含(comprise)”及其变体，例如“包含(comprises、comprising)”应以开放的、包含的意义来解释，即“包括但不限于”。如说明书和所附权利要求中使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。还应当注意，除非上下文另外明确指出，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的意义使用。此外，本文提供的标题仅是为了方便，并不解释所要求保护的实施方案的范围或含义。

“基本上由…组成”当用于定义组合物和方法时，应意指排除对所述目的的组合具有任何实质意义的其他要素。因此，基本上由本文定义的要素组成的组合物不排除不会实质上影响所要求保护的发明的基本和新颖特征的其他材料或步骤。用于治疗或预防给定疾病的组合物可基本上由所述活性成分组成，不包括另外的活性成分，但包括其他非物质组分，例如赋形剂、载体或稀释剂。“由……组成”应意指排除多于痕量元素的其他成分和实质方法步骤。由这些过渡术语中的每一个定义的实施方案在本公开的范围内。

如本文所用，术语“约”是指接近所述量10％的量。

如本文所用，术语“个体”、“患者”或“对象”可互换使用，并且是指被诊断患有、怀疑患有或处于发展所述组合物和方法可用于治疗的至少一种疾病的风险中的个体。在一些实施方案中，个体是哺乳动物。在某些实施方案中，哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、狗、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊、美洲驼、羊驼或牦牛。在一个实施方案中，个体是人。

如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指对个体的生理或疾病状态的干预，其被设计或旨在改善与所述生理或疾病状态相关的至少一种体征或症状。本领域技术人员将认识到，给定患有疾病的个体的异质群体，并非所有个体将同等地或完全地响应给定治疗。

术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽，包括提供的抗体和抗体链和其他肽，例如接头和结合肽，可以包括氨基酸残基、包括天然和/或非天然氨基酸残基。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面，多肽可含有对天然或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性。这些修饰可以是有意的，如通过定点诱变，或可以是偶然的，如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增的错误。

术语“放疗(radiotherapy)”或“放射疗法(radiation therapy)”是指用电离放射治疗个体。放射疗法的示例性类型包括但不限于三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法和中子束疗法。

术语“基于能量的疗法”是指用能量形式治疗个体，包括但不限于电流、电磁波和温度。基于能量的治疗的示例性类型包括但不限于不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

术语“免疫细胞”是指在免疫应答中起作用并且源自造血前体的细胞。免疫细胞包括但不限于淋巴细胞，如B细胞和T细胞；自然杀伤细胞；髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、树突细胞和粒细胞。

术语“树突细胞”是指造血源免疫系统的抗原呈递细胞。树突细胞可以通过II类MHC、CD11c和CD86的表达来表征。树突细胞包括但不限于活化的树突细胞、未活化的树突细胞、成熟的树突细胞和未成熟的树突细胞。

术语“树突细胞活化分子”是指与暴露于活化剂之前的树突细胞活性相比增加树突细胞的免疫活性的分子。树突细胞免疫活性的改变可包括但不限于抗原呈递、向淋巴结迁移、与T细胞和B细胞相互作用、T细胞引发、细胞因子释放和趋化因子释放的改变。树突细胞活化分子的实例包括但不限于CD40L、抗CD40激动剂抗体、TLR激动剂、NOD样受体激动剂、RIG-1受体激动剂、MDA-5受体激动剂、C型凝集素受体激动剂、STING激动剂、共刺激分子或细胞因子受体。可用于实施本文所述方法的其他合适的活化分子包括RANKL肽、TNF肽、IL-1肽、富含CpG的DNA序列、脂多糖(LPS)、RIG1解旋酶配体、RNA、dsDNA或其变体(例如，包含一个或多个插入、取代或缺失的多肽或DNA序列)。

本文所用的术语“抗体”是指包含至少一个抗体衍生的抗原结合位点(例如，VH/VL区或Fv或CDR)的多肽，并且包括完整抗体和任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”或其抗原结合片段)或其单链。抗体包括已知形式的抗体。例如，抗体可以是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体或嵌合抗体。“全抗体(whole antibody)”是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)的糖蛋白，其中每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区组成；以及每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区组成。VH和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，按以下顺序排列：从氨基末端到羧基末端的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。“抗原结合片段”包括但不限于Fab、Fab'、F(ab’)₂、scFv、Fv、重组IgG和重链抗体。

除非另有说明，本文所用的术语“肿瘤”或“癌症”是指赘生性细胞生长，包括癌前和癌细胞和组织。肿瘤通常表现为病变或肿块。如本文所用，“治疗”肿瘤意指疾病的一种或多种症状，诸如肿瘤本身、肿瘤的血管化或表征疾病的其他参数被减少、改善、抑制、置于缓解状态或维持在缓解状态。“治疗”肿瘤还指通过治疗可以消除、减少或预防肿瘤的一个或多个标志。这种标志的非限制性实例包括基底膜和近端细胞外基质的不受控制的降解、内皮细胞迁移、分裂和组织成新的功能性毛细血管，以及这种功能性毛细血管的持久性。

放射疗法

放射疗法类型

本文所述的方法包括或基本上由向有需要的个体施用放射疗法和树突细胞活化剂组成。本文所述的任何放射疗法可单独或组合施用。本文所述的放射疗法可单独或作为多个剂量施用。

通常，放射疗法、放射免疫疗法或预靶向放射免疫疗法用于治疗肿瘤学性质的疾病。“放疗”或放射疗法是指用电离放射治疗癌症和其他疾病。电离放射沉积的能量通过破坏其遗传物质而损伤或破坏被治疗区域(靶组织)中的细胞，使得这些细胞不可能继续生长。放疗可用于治疗局部实体瘤，例如皮肤、舌、喉、脑、乳腺、肺、肝、肾、胰腺或子宫颈的癌症。它也可用于治疗白血病和淋巴瘤，即分别为造血细胞和淋巴系统的癌症。在本文公开的方法的某些方面，放射疗法用于治疗肿瘤。

电离放射广泛用于治疗实体瘤。可以使用几种类型的电离放射，包括X射线和γ射线。可以使用机器将放射聚焦在肿瘤上，或通过将放射性植入物直接放置到肿瘤中或附近的体腔中来应用放疗。此外，放射性标记的抗体可用于靶向肿瘤细胞。其他放疗技术也可用于本文所述的方法中，包括术中照射、粒子束放射，以及使用放射致敏剂来使肿瘤细胞对放射更敏感，或使用放射防护剂来保护正常细胞。

通常使用的一种类型的放射疗法包括光子，例如X射线。根据其所具有的能量大小，射线可用于破坏身体表面或更深部位的癌细胞。X射线束的能量越高，X射线进入靶组织的深度就越深。线性加速器和电子感应加速器是产生越来越高能量的X射线的机器。使用机器将放射(例如，X射线)聚焦在癌症部位上被称为外部射束放疗。在所述方法的一个实施方案中，使用外部射束放疗。

三维适形放射疗法、强度调制放射疗法和图像引导放射疗法是允许更精确地靶向肿瘤同时避免更多周围健康问题的外部射束放疗的方法。提高的精度允许更高水平的放射，这在缩小和杀死肿瘤方面更有效。在三维适形放射疗法中，使用靶向信息将放射束整形为肿瘤的形状。在图像引导放射疗法中，计算机控制的线性加速器用于靶向肿瘤内的特定区域。该方法通过在多个小体积中控制射束的强度，允许放射剂量更紧密地匹配肿瘤的形状。图像引导放射疗法在放射疗法期间使用成像以提高治疗的精度和准确度。成像方法包括但不限于基准标记、超声、MRI、x射线图像、CT扫描、3D体表标测、电磁应答器或彩色纹身。图像引导的放射疗法在位于身体的运动区域(例如，肺)中的肿瘤中尤其有用。在所述方法的一个实施方案中，使用三维适形放射疗法。在所述方法的另一个实施方案中，使用强度调制的放射疗法。在所述方法的另一个实施方案中，使用图像引导的放射疗法。

高剂量放疗，例如立体定向消融放疗(SABR)或立体定向身体放射疗法(SBRT)，是外部射束放射疗法的另一种方法。与常规放疗相比，使用15-20Gy范围内的更高剂量。一种类型的SABR是立体定向放射外科手术(SRS)，其已经用于小的颅内肿瘤，这通过允许超出肿瘤目标的亚毫米递送精度和陡峭的剂量梯度的技术而成为可能。SABR(或SBRT)已经被开发用于脑外的肿瘤，并且包括实际上每个主要身体部位的肿瘤(例如，肺肿瘤)。在一个实施方案中，外部射束放射疗法是立体定向消融放疗。

外部射束放疗的另一种方法是术中照射，其中在手术期间将大剂量的外部放射导向肿瘤和周围组织。在一个实施方案中，外部射束放射是术中照射。

γ射线是放疗中使用的光子的另一种形式。当某些元素(例如，镭、铀和钴60)在分解或衰变时释放放射时，自然产生γ射线。在一个实施方案中，外部射束放射是伽马射线放射。

另一种方法是粒子束放射疗法。这种类型的疗法与光子放疗的不同之处在于其涉及使用快速移动的亚原子粒子来治疗局部癌症。这包括但不限于质子束疗法、中子束疗法、介子束疗法和重离子束疗法。与X射线或γ射线相比，一些粒子(中子、离子和重离子)沿着它们穿过组织的路径沉积更多的能量，从而对它们所撞击的细胞造成更多的损伤。这种类型的放射通常被称为高线性能量转移(高LET)放射。放射增敏剂使肿瘤细胞更可能被损伤，并且放射防护剂保护正常组织免受放射的影响。在一个实施方案中，外部射束放射选自质子束疗法、中子束疗法、介子束疗法和重离子束疗法。在一个实施方案中，所使用的外部射束放射是质子射束疗法。在另一实施方案中，所使用的外部射束疗法是中子束疗法。在另一实施方案中，所使用的外部射束疗法是介子束疗法。在另一实施方案中，所使用的外部射束疗法是重离子束疗法。在一个实施方案中，外部射束放射疗法选自：三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法、中子束疗法及其组合。

另一种用于将放射递送至癌细胞的技术是将放射性植入物直接放置在肿瘤或体腔中。这被称为内部放疗。近距离放射疗法、间质内照射和腔内照射是内部放疗的类型。在这种治疗中，放射剂量集中在小的区域中，并且患者在医院停留几天。内部放疗经常用于舌癌、子宫癌和宫颈癌。在一个实施方案中，使用内部放疗。在另一个实施方案中，内部放疗选自包含以下项的列表：近距离放射疗法、间质内照射和腔内照射或其组合。

放射疗法的剂量

在某些情况下，总照射剂量可以在几个疗程(即，剂量分级)上扩展，并且可以间隔至少6小时、数天或甚至数周。常规的确定性放射治疗包括多次治疗，通常20-40次，低剂量(<2-3Gy)延长数周。在某些情况下，例如上面讨论的高剂量放疗，剂量大于15-20Gy并且给予至多5次治疗。

本文公开的方法的某些方面包括用放疗治疗患者。在一个实施方案中，该方法包括多个剂量的放射疗法。在一个实施方案中，该方法包括至少2个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少3个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少4个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少5个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少6个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少7个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少8个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少9个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少10个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少11个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少12个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少13个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少14个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少15个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少20个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少25个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少30个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少35个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少40个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少45个剂量的放射疗法。在另一个实施方案中，该方法包括至少50个剂量的放射疗法。

在本文所述方法的一个方面，放射疗法使用电离放射来治疗对象的癌症。在一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约2Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约3Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约4Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约5Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约6Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约7Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约8Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约9Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约10Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约15Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约20Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约25Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约30Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约40Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约50Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约60Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约70Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约80Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约90Gy。在另一个实施方案中，放射疗法的剂量为至少约100Gy。

在一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为5Gy至100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约10Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约20Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约30Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约40Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约50Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约60Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约70Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约80Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约90Gy至约100Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约100Gy。

在一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约20Gy至约50Gy。在一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约20Gy至约50Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约20Gy至约50Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在三个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在四个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在五个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在二至四个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy。

在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在三个情景的每一个下的约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在四个情景的每一个下的约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在五个情景的每一个下的约5Gy至约20Gy。在某些实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约20Gy至约50Gy、在二至四个情景的每一个下的约10Gy至约30Gy、或在五个情景的每一个下的约5Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约30Gy至约40Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约30Gy至约40Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约15Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约15Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在三个情景的每一个下的约15Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在四个情景的每一个下的约15Gy至约20Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约8Gy至约12Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在两个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在三个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在四个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在五个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。在另一个实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在六个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。在某些实施方案中，治疗周期的总放射剂量为在一个情景下的约30Gy至约40Gy、在三个情景的每一个下的约15Gy至约20Gy或在五个情景的每一个下的约8Gy至约12Gy。

本文所述的方法还可以与高剂量放射后的消融后调节(PAM)组合。PAM可以以约0.1Gy至约2Gy、约0.1Gy至约1Gy、约0.2Gy至约2Gy、约0.1Gy至约0.8Gy、约0.1Gy至约0.6Gy、约0.2Gy至约0.6Gy、约0.4Gy至约0.6Gy施用。PAM可以以约0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8或1.0Gy施用。PAM可以以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多的剂量施用。

基于能量的疗法

本文所述的方法包括或基本上由向有需要的个体施用基于能量的疗法和树突细胞活化剂组成。本文所述的任何基于能量的疗法可单独或组合施用。本文所述的基于能量的疗法可单次或多次施用。

可以施用多种基于能量的疗法来治疗癌症。这些方法使用电磁波、电磁电流或温度来杀死或损伤癌症或肿瘤细胞。这些包括但不限于不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。在本文公开的方法的一个方面，基于能量的疗法的剂量选自不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

本文公开的方法的某些方面涉及用基于能量的疗法治疗患者。在一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量包括基于能量的疗法的多个剂量。在一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少2个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少3个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少4个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少5个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少6个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少7个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少8个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少9个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括至少10个剂量。在另一个实施方案中，基于能量的疗法的剂量可以包括多于10个剂量。

不可逆电穿孔(IRE)是一种使用电流来损伤和破坏癌细胞来治疗肿瘤的方法。将电极置于肿瘤周围并通过电极输送电流。电流的应用导致细胞膜的透化，导致癌细胞的凋亡。在一个实施方案中，基于能量的疗法是不可逆电穿孔(IRE)。

通过聚焦超声(FUS)治疗局部肿瘤是一种图像引导的微创疗法，其使用一定范围的输入能量用于原位肿瘤消融。FUS在生物组织中的应用与热和空化效应的产生有关，根据所传递的能量引起靶细胞生理学的变化。高强度聚焦超声(HIFU)已在临床上用于热消融局部肿瘤。FUS治疗模式产生的大量热能导致目标焦点处组织的快速凝固性坏死。虽然几项研究已经报道了一些免疫调节作用，包括淋巴细胞浸润增加、淋巴器官中产生IFNγ的肿瘤特异性T细胞的产生以及树突细胞成熟和迁移到肿瘤中，但是由HIFU治疗引起的热诱导的凝固性坏死也可以减弱免疫刺激分子在肿瘤微环境中的释放。因此，尽管能够停止已建立的原发性肿瘤的进展，但HIFU可能不能防止由存活的肿瘤细胞引起的局部和远端转移。在一个实施方案中，基于能量的治疗是高强度聚焦超声(HIFU)。

在一些实施方案中，在治疗区域以约100W/cm²至约10000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约1000W/cm²至约2000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约2000W/cm²至约3000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约3000W/cm²至约4000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约4000W/cm²至约5000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约5000W/cm²至约6000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约6000W/cm²至约7000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约7000W/cm²至约8000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约8000W/cm²至约9000W/cm²的强度施用HIFU。在一些实施方案中，在治疗区域以约9000W/cm²至约10000W/cm²的强度施用HIFU。

低能量非消融性聚焦超声或LOFU是一种使用凹面换能器将超声聚焦在治疗区域中产生的超声治疗。用LOFU治疗癌症的方法和系统描述于US 202003/98084和U.S.10,974,077中，其通过引用并入本文。LOFU在肿瘤细胞中产生温和的机械和热应力，同时避免空化和凝固性坏死，这两者都导致组织损伤。在肿瘤中诱导非消融性“声波”应激反应，其增加热休克蛋白的表达而实际上不直接杀死它们。在一个实施方案中，基于能量的疗法是低强度聚焦超声(LOFU)。

在一些实施方案中，LOFU涉及在治疗区中以10W/cm2至1000W/cm2空间峰值时间平均强度(Ispta)的声功率施加超声，其中超声连续施加0.5秒至5秒的时间，其中频率为0.01MHz至10MHz，机械指数小于4。机械指数(MI)是在以MHz为单位的中心频率的平方根上以MPa为单位的稀薄压力(rarefaction pressure)。所施加的超声的能量和强度旨在落在超声的能量和强度之间，该超声的能量和强度主要诱导消融效应或主要诱导诊断效应。

在一些实施方案中，LOFU包括在治疗区域中产生10W/cm²至1000W/cm²空间峰值时间平均强度(I_spta)之间的声功率的换能器。超声连续施加0.5秒至5秒的时间或脉冲持续时间为1ms至100ms的脉冲，其中频率为0.01MHz至10MHz。在一些实施方案中，频率范围为0.05MHz至5MHz。在一些实施方案中，频率范围为0.1MHz至2MHz。在一些实施方案中，治疗区中的任何超声波束的最小直径为约1cm。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以10W/cm²至1000W/cm²施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以10W/cm² I_spta至100W/cm²I_spta施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以100W/cm² I_spta至200W/cm² I_spta施用。在一个实施方案中，在治疗区域以300W/cm² I_spta至400W/cm² I_spta施用LOFU。在一个实施方案中，在治疗区域以400W/cm² I_spta至500W/cm² I_spta施用LOFU。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以500W/cm² I_spta至600W/cm² I_spta施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以600W/cm² I_spta至700W/cm² I_spta施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以700W/cm² I_spta至800W/cm² I_spta施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以800W/cm²I_spta至900W/cm² I_spta施用。在一个实施方案中，LOFU在治疗区域中以900W/cm² I_spta至1000W/cm²I_spta施用。在一个实施方案中，施加超声0.5秒至1秒。在一个实施方案中，施加超声1秒至2秒。在一个实施方案中，施加超声2秒至3秒。在一个实施方案中，施加超声4秒至5秒。在一个实施方案中，以0.01MHz至1MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以1MHz至2MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以2MHz至3MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以3MHz至4MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以4MHz至5MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以5MHz至6MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以6MHz至7MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以7MHz至8MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以8MHz至9MHz的频率施加超声。在一个实施方案中，以9MHz至10MHz的频率施加超声。

微波疗法和射频疗法都是产生局部加热区域以破坏肿瘤的方法。在射频疗法中，高频电流通过放置在肿瘤中的电极。这产生了小的加热区域。在微波疗法中，放置在肿瘤中的针产生微波，然后产生小的加热区域。在两种治疗方法中，局部加热区域内的癌细胞被损伤或毁坏。在一个实施方案中，基于能量的疗法是微波疗法。在另一个实施方案中，基于能量的疗法是射频疗法。

相反，冷冻疗法是一种使用极冷来破坏癌组织的基于能量的疗法。通常通过向局部位点施加液氮或加压氩气来产生强冷。遇到寒冷的细胞和组织被杀死。这种方法可用于体内和体外肿瘤。在一个实施方案中，基于能量的疗法是冷冻疗法。

树突细胞活化分子

本文所述的方法包括或基本上由以下组成：向有此需要的个体施用(a)施用放射疗法、基于能量的疗法或其组合；和(b)树突细胞活化剂。本文所述的任何放射疗法或基于能量的疗法可单独或组合施用。本文所述的基于放射或能量的疗法可单次或多次施用。

施用时间

树突细胞活化疗法的施用可以在与用放射或能量治疗的肿瘤相关的T细胞已经从治疗的影响中恢复的时间施用。不受理论的束缚，施用基于放射或能量的疗法不成比例地损害快速分裂的细胞，例如免疫细胞，并且施用基于放射或能量的疗法和树突细胞活化剂之间的间隔可能有益于随后的免疫应答。

关于随后施用的时间安排，放射或能量的治疗被认为是在第0天施用，治疗后的第二天包括治疗后的1天。另外，施用后天数由治疗的时间上最近的剂量计算。因此，例如，如果个体被施用多个剂量的基于放射或能量的治疗，则树突细胞活化治疗的施用间隔基于在施用树突细胞活化治疗之前的多个剂量的最后一个剂量来计算。

在本文公开的方法的一个方面，该方法包括在放射治疗后施用树突细胞活化分子。在一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少1天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少2天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少3天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少4天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少5天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少6天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少7天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少8天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少9天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少10天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少11天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少12天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少13天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后至少14天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射疗法后超过14天施用。

在一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后1天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后2天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后3天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后4天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后5天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后6天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后7天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后8天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后9天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后10天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后11天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后12天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后13天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后1天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后2天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后3天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后4天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后5天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后6天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后7天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后8天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后9天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后1天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后2天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后3天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后4天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后5天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后6天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后1天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后2天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后3天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在放射治疗后4天至5天之间施用。

在本文公开的方法的一个方面，该方法包括在基于能量的疗法的剂量之后施用树突细胞活化分子。在一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少1天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少2天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少3天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少4天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少5天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少6天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少7天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少8天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少9天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少10天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少11天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少12天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少13天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后至少14天施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后超过14天施用。

在一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后1天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后2天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后3天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后4天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后5天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后6天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后7天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后8天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后9天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后10天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后11天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后12天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后13天至14天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后1天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后2天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后3天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后4天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后5天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后6天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后7天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后8天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后9天至10天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后1天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后2天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后3天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后4天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后5天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后6天至7天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后1天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后2天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后3天至5天之间施用。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量后4天至5天之间施用。

树突细胞活化分子类型

树突细胞在免疫系统靶向和杀死肿瘤细胞的能力中起关键作用，但在大多数组织中相对稀少。树突细胞活化分子增加树突细胞的总数、激活树突细胞的抗原呈递功能、增加共刺激分子表达、细胞因子分泌或以其他方式增加它们引发适应性T细胞免疫的能力。树突细胞活化分子可用于本文所述的方法中。如实施例中所述，通过在放射或能量治疗后施用树突细胞活化分子来增加树突细胞的总数或活化其免疫刺激功能可提高个体免疫系统靶向和杀死癌细胞的能力。

癌细胞可以将树突细胞保持在未成熟状态，以防止它们对癌症起作用。未成熟树突细胞可促进对癌细胞的耐受性，而成熟树突细胞可强烈促进抗癌免疫。树突细胞成熟的促进可导致癌细胞凋亡的增加。在一个实施方案中，树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。在一个实施方案中，树突细胞活化分子增加一种或多种树突细胞共刺激分子的表达选自CD70、CD80、CD86、CD40、OX40、4-1BBL及其组合。在一个实施方案中，树突细胞活化分子增加选自IL-12、IL-4、IL-15或IL-17、TNFα及其组合的一种或多种树突细胞细胞因子的表达或分泌。

根据本公开的方法的树突细胞活化剂可以是病原体相关的分子模式(PAMP)或合成形式。PAMP是一类微生物中保守的小分子，包括但不限于聚糖、乙二醇结合物、细菌鞭毛蛋白、脂磷壁酸、肽聚糖和双链RNA。PAMP激活在抗原呈递细胞中表达的称为模式识别受体的多种先天免疫受体，并启动可归因于B细胞和T细胞的适应性免疫应答。树突细胞表达多种模式识别受体，并且响应于它们与PAMP的结合而被活化。模式识别受体包括但不限于toll样受体、NOD样受体、RIG-1受体、MDA-5受体和STING途径。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体或STING途径来激活树突细胞活化。

Toll样受体是一类参与先天免疫系统的受体。它们存在于树突细胞上，用toll样受体激动剂或合成形式活化toll样受体导致树突细胞的活化。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过toll样受体激活树突细胞活化。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子为来自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。

NOD样受体是一类在树突细胞内发现的模式识别受体，其结合PAMP并在先天免疫系统中起作用。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过NOD样受体激活树突细胞活化。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。

RIG-1和MDA-5受体也识别PAMP。具体地，RIG-1受体和MDA-5受体都参与先天免疫系统对病毒的识别。RIG-1受体通常结合小于2000个碱基对的单链或双链RNA链，而MDA-5受体通常结合大于2000个碱基对的病毒衍生的单链或双链RNA链。当被激活时，这些受体促进干扰素信号传导和先天免疫系统的其他应答。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过RIG-1或MDA5受体激活树突细胞活化。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。

C型凝集素受体参与PAMP的识别，特别是那些来源于真菌和分枝杆菌的PAMP。当PAMP与C型凝集素受体结合时，先天免疫系统被激活。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过C型凝集素受体激活树突细胞活化。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。

STING途径参与先天性免疫和PAMP检测。STING途径的活化导致I型干扰素的表达。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过STING途径激活树突细胞活性。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。

共刺激分子是存在于抗原呈递细胞(包括树突细胞)上的细胞表面分子，当T细胞与抗原/MHC复合物相互作用时，其可放大或以其他方式影响T细胞接收的活化信号。它们可以影响T细胞命运和分化。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过共刺激分子激活树突细胞活化。在一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。

CD40是在树突细胞上表达的TNF家族受体。CD40信号传导导致共刺激配体、细胞因子的表达、增强的抗原呈递和运输至引流淋巴结。在一个实施方案中，CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。CD40激动剂抗体的实例包括但不限于达西珠单抗(也称为SGN-40，SeattleGenetics)、CP-870,893(宾夕法尼亚大学/Hoffmann-LaRoche)、ADC-1013(AlligatorBioscience AB)、2141-v11(洛克菲勒大学)、APX005M(Apexigen，Inc)、Chi Lob 7/4(癌症研究UKK)、BG9588(NIAMS)、CFZ533(Novartis)、PG10(PanGenetics UK Limited)、BMS-986004(Bristol-Myer Squibbs)，卢卡木单抗(也称为HCD122，Novartis)、HCD122(Novartis)、JNJ-64457107(Janssen Research&Development)、塞鲁单抗(也称为RO7009789)、Hoffman-La(Roche)、ASKP1240(Astellas Pharma Global Development)、CDX-1140和SEA-CD40(Seattle Genetics)。

包括CD40激动性抗体的抗体可直接施用至所治疗的肿瘤或施用至所治疗的肿瘤附近。在一些实施方案中，抗CD40激动剂抗体可以以约0.1毫克至约5毫克的剂量在通过基于能量或基于放射的疗法治疗的肿瘤处或附近施用。在一些实施方案中，抗CD40激动剂抗体可以以约0.1毫克至约0.2毫克、约0.1毫克至约0.5毫克、约0.1毫克至约1毫克、约0.1毫克至约2毫克、约0.1毫克至约3毫克、约0.1毫克至约4毫克、约0.1毫克至约5毫克、约0.2毫克至约0.5毫克、约0.2毫克至约1毫克、约0.2毫克至约2毫克、约0.2毫克至约3毫克、约0.2毫克至约4毫克、约0.2毫克至约5毫克、约0.5毫克至约1毫克、约0.5毫克至约2毫克、约0.5毫克至约3毫克、约0.5毫克至约4毫克、约0.5毫克至约5毫克、约1毫克至约2毫克、约1毫克至约3毫克、约1毫克至约4毫克、约1毫克至约5毫克、约2毫克至约3毫克、约2毫克至约4毫克、约2毫克至约5毫克、约3毫克至约4毫克、约3毫克至约5毫克或约4毫克至约5毫克的剂量在通过基于能量的或基于放射的疗法治疗的肿瘤处或附近施用。在一些实施方案中，抗CD40激动剂抗体可以在正通过基于能量的或基于放射的疗法治疗的肿瘤处或附近施用约0.1毫克、约0.2毫克、约0.5毫克、约1毫克、约2毫克、约3毫克、约4毫克或约5毫克的剂量施用。在一些实施方案中，抗CD40激动剂抗体可以以至少约0.1毫克、约0.2毫克、约0.5毫克、约1毫克、约2毫克、约3毫克或约4毫克的剂量在通过基于能量或基于放射的疗法治疗的肿瘤处或附近施用。在一些实施方案中，抗CD40激动剂抗体可以以至多约0.2毫克、约0.5毫克、约1毫克、约2毫克、约3毫克、约4毫克或约5毫克的剂量在通过基于能量或基于放射的疗法治疗的肿瘤处或附近施用。个体可通过静脉内施用0.01mg/kg至5mg/kg、0.1mg/kg至5mg/kg、0.01mg/kg至2mg/kg、0.01mg/kg至5mg/kg、0.01mg/kg至1mg/kg的抗CD40激动性抗体。

树突细胞既产生细胞因子又可被细胞因子激活。细胞因子可以控制未成熟树突细胞的成熟并激活树突细胞。在一个实施方案中，树突细胞活化分子通过细胞因子受体激活树突细胞活性。在另一个实施方案中，树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。

树突细胞活化分子可直接应用于接受放射治疗或能量治疗的肿瘤部位。在一个实施方案中，将树突细胞活化分子施用于用放射疗法的剂量治疗的肿瘤。在另一个实施方案中，将树突细胞活化分子施用于用能量疗法的剂量治疗的肿瘤。树突细胞活化剂也可以通过静脉内或皮下施用而全身施用。

肿瘤和/或癌症的治疗

本文所述的方法可用于治疗癌症和/或肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤是实体瘤。在某些实施方案中，癌症是血癌。在一个实施方案中，肿瘤是前列腺肿瘤。在一个实施方案中，肿瘤是黑色素瘤。在一个实施方案中，肿瘤是免疫疗法抗性肿瘤。在一个实施方案中，肿瘤是免疫疗法抗性黑色素瘤。在一个实施方案中，肿瘤是转移性癌症。在一个实施方案中，肿瘤是转移性乳腺癌。在所述方法的一个实施方案中，肿瘤是前列腺、乳腺、鼻咽、咽、肺、骨、脑、唾液腺、胃、食道、睾丸、卵巢、子宫、子宫内膜、肝、小肠、阑尾、结肠、直肠、膀胱、胆囊、胰腺、肾、膀胱、子宫颈、阴道、外阴、前列腺、甲状腺或皮肤、头或颈、神经胶质瘤或软组织肉瘤的肿瘤。在所述方法的一个实施方案中，肿瘤是前列腺癌。在一个实施方案中，肿瘤是恶性肿瘤。

在一个实施方案中，癌症是白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、成髓细胞性早幼粒细胞骨髓单核细胞性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和边缘区B细胞淋巴瘤、真性红细胞增多淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金病、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、实体瘤、肉瘤和癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、肝血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、Wilms肿瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、鼻咽癌、食道癌、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑和中枢神经系统(CNS)癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠直肠癌、结缔组织癌、消化系统癌、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌、上皮内瘤、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌(小细胞、大细胞)、黑色素瘤、成神经细胞瘤；口腔癌(例如，唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌；呼吸系统癌症、肉瘤、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌和泌尿系统癌症。

本文还描述了使用基于放射和/或能量的疗法的组合的方法，以及树突细胞活化分子是治疗对检查点抑制剂疗法具有抗性的癌症或肿瘤的方法。目前的检查点抑制剂疗法使用抗体如帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗、西米普利单抗(cemiplimab)、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、伊匹单抗来靶向PD-1、PD-L1、PD-L2或CTLA4。

本文还描述了树突细胞活化分子在治疗个体中癌症或肿瘤的方法中的用途，其中个体已经接受了一定剂量的基于放射或能量的疗法。

本文还描述了树突细胞活化分子，其用于制备在个体中治疗癌症或肿瘤的药物，其中个体已经接受了一定剂量的基于放射或能量的疗法。

在一个方面，本文描述了一种在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是抗CD40激动性抗体。

在一个方面，本文描述了一种在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是抗CD40激动性抗体。在某些实施方案中，基于能量的疗法的剂量选自不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

在一个方面，本文描述了一种在个体中逆转在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞耗竭的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是抗CD40激动性抗体。

在一个方面，本文描述了一种在个体中逆转在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞耗竭的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中树突细胞活化分子在施用放射疗法后至少1天施用。在某些实施方案中，树突细胞活化分子是抗CD40激动性抗体。在某些实施方案中，基于能量的疗法的剂量选自不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

在一个实施方案中，通过本文所述的方法治疗肿瘤使肿瘤的大小或体积减小约10％、20％、25％、30％、40％、50％或更多。在一个实施方案中，通过本文所述的方法治疗肿瘤使不是用基于放射或能量的疗法治疗的肿瘤的肿瘤的大小或体积减小约10％、20％、25％、30％、40％、50％或更多。在一个实施方案中，通过本文所述的方法治疗肿瘤防止了本文所述的肿瘤或癌症的转移。

药学上可接受的赋形剂、载体和稀释剂

在某些实施方案中，本公开的树突细胞活化分子包含在包含一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体和稀释剂的药物组合物中。在某些实施方案中，本公开的树突细胞活化分子悬浮在无菌溶液中施用。在某些实施方案中，溶液包含约0.9％ NaCl或约5％右旋糖。在某些实施方案中，溶液还包含以下的一种或多种：缓冲溶液，例如乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐和羟甲基氨基甲烷(Tris)；表面活性剂，例如聚山梨酯80(吐温80)、聚山梨酯20(吐温20)和泊洛沙姆188；多元醇/二糖/多糖，例如葡萄糖、右旋糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40；氨基酸，例如甘氨酸或精氨酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸、甲硫氨酸；或螯合剂，例如EDTA或EGTA。

在某些实施方案中，本公开的树突细胞活化分子被运输/储存冻干并在施用前重构。在某些实施方案中，冻干的抗体制剂包含填充剂，例如甘露醇、、山梨醇、蔗糖、海藻糖、葡聚糖40或其组合。冻干制剂可以包含在由玻璃或其他合适的非反应性材料组成的小瓶中。树突细胞活化分子在配制时，无论是否重构，都可以在一定pH(通常小于7.0)下缓冲。在某些实施方案中，pH可以为4.5-6.5、4.5-6.0、4.5-5.5、4.5-5.0或5.0-6.0。

编号的实施方案

编号的实施方案1包括在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法，该方法包括向个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中一定剂量的基于能量的疗法选自：不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。编号的实施方案2包括实施方案1的方法，其中基于能量的疗法的剂量包括基于能量的疗法的多个剂量。编号的实施方案3包括实施方案1或2的方法，其中基于能量的疗法是不可逆电穿孔(IRE)。编号的实施方案4包括实施方案1或2的方法，其中基于能量的疗法是微波疗法。编号的实施方案5包括实施方案1或2的方法，其中基于能量的疗法是低强度聚焦超声(LOFU)。编号的实施方案6包括实施方案1或2的方法，其中基于能量的疗法是高强度聚焦超声(HIFU)。编号的实施方案7包括实施方案1或2的方法，其中基于能量的疗法是冷冻疗法。编号的实施方案8包括实施方案1-7中任一项的方法，其中树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量之后至少3天施用。编号的实施方案9包括实施方案1-7中任一项的方法，其中树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量之后至少5天施用。编号的实施方案10包括实施方案1-7中任一项的方法，其中树突细胞活化分子在基于能量的疗法的剂量之后至少7天施用。编号的实施方案11包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。编号的实施方案12包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。编号的实施方案13包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。编号的实施方案14包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。编号的实施方案15包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。编号的实施方案16包括实施方案1-10中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。编号的实施方案17包括实施方案1-10中任一项的方法，树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。编号的实施方案18包括实施方案17的方法，其中CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。编号的实施方案19包括实施方案17的方法，其中抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240或SEA-CD40。编号的实施方案20包括实施方案1-19中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。编号的实施方案21包括实施方案1-19中任一项的方法，其中树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。编号的实施方案22包括实施方案1-21中任一项的方法，其中将树突细胞活化分子施用至用基于能量的疗法的剂量治疗的肿瘤。

实施例

以下说明性实施例是本文所述的组合物和方法的实施方案的代表，并不意味着以任何方式进行限制。

实施例1-放射和αCD40的同时施用降低了放射治疗的功效

使用表达人PSA的TPSA鼠植入非转移性肿瘤模型来评估与放射治疗(RT)同时施用αCD40的效果。一些试验组也用低强度聚焦超声(LOFU)治疗。

在小鼠的右胁腹注射0.9×10⁶个肿瘤细胞。在第14-17天，将具有可触知肿瘤的小鼠随机分成不同的治疗组。治疗组为对照(未经照射的)、RT(10Gy×2)、RT(10Gy×2)+αCD40、RT(10Gy×2)+LOFU和LOFU+RT+αCD40。如图1A所示，在第14天和第16天用RT和LOFU(5W99.5％)治疗小鼠，同时用αCD40治疗(第14天、第16天和第18天；3×100μg/每只小鼠)。每3-4天测量肿瘤。对于肿瘤测量，使用数字卡尺测量垂直肿瘤直径并将肿瘤大小计算为lxbxhx3.14/6；其中l是肿瘤的最长尺寸，而b和h是其他两个垂直尺寸。

图1B描述了前100天内每次治疗的平均肿瘤体积，而图1C描述了前100天内每只小鼠的肿瘤体积。如图1B所示，在所有经照射的小鼠中，肿瘤生长在肿瘤注射后25天显著减少或完全消退。然而，大多数小鼠在原发部位重新生长肿瘤。当将RT和RT+LOFU组与αCD40+RT和RT+LOFU治疗的动物比较时，发现αCD40降低了放疗的功效。

实施例2-在PSA转基因小鼠中与放射治疗同时施用αCD40

在本实施例中，评估了在PSA转基因小鼠中同时施用αCD40和放射治疗(RT)的效果。一些试验组也用低强度聚焦超声(LOFU)治疗。

实验性治疗如图2A所示。在缺乏PSA特异性CD8细胞的PSA转基因小鼠右胁腹注射0.9×10⁶个肿瘤细胞。在第14-17天，将具有可触知肿瘤的小鼠随机分成不同的组：对照(未经照射的)、RT(10Gy×2)、RT(10Gy×2)+αCD40、RT(10Gy×2)+LOFU和LOFU+RT+αCD40。如图1A所示，在第14天和第16天用RT和LOFU(5W 99.5％)治疗小鼠，同时用αCD40治疗(第14天、第16天和第18天；3×100μg/每只小鼠)。每3-4天测量肿瘤。

图2B描述了每次治疗的肿瘤体积的生长，而图2C说明了个体小鼠中的肿瘤生长。在PSA转基因小鼠中，与LOFU和RT治疗组相比，同时施用αCD40导致显著的肿瘤生长(p<0.05)。当将RT+LOFU组与αCD40+RT和RT+LOFU治疗的动物比较时，发现αCD40降低了放疗的功效(p>0.05)。

实施例3-消融后施用αCD40增强了放疗在检查点阻断(αCTLA4)抗性肿瘤中的局部和全身功效

本实施例评估了在由电离放射(IR)组成的放射治疗后施用αCD40治疗免疫疗法抗性黑色素瘤细胞的效果。

小鼠的治疗方案如图3A所示。在小鼠右胁腹皮下注射0.2×10⁶个RES499免疫疗法(αCTLA-4)抗性鼠黑色素瘤细胞。注射后7天，将小鼠随机分成不同的治疗组：对照(未经照射的)、IR(20Gy×3)和IR(20Gy×3)+αCD40。在注射后7、8和9天用20Gy的3个级分(每天1个级分)照射小鼠。在注射后12、14和18天施用αCD40(3×100μg)。

当顺序施用时，αCD40有效地增强RES499荷瘤小鼠的长期存活情况和治愈情况。如图3B所示，所有未治疗的小鼠在肿瘤注射后50天之前死亡。在肿瘤注射后100天，用仅放射治疗的小鼠中少于50％存活。在第100天，先后接受放射治疗和αCD40治疗的小鼠中超过50％存活。此外，如图3C所示，在所有经照射的小鼠中，肿瘤生长在肿瘤注射后25天显著减少或完全消退。然而，大多数小鼠在原发部位重新生长肿瘤。在注射后100天，用αCD40治疗的经照射的小鼠比用仅放射治疗的小鼠具有更高的存活率。如图3D所示，IR(20Gy×3)+αCD40组中67％的小鼠在第90天无肿瘤，而相比之下IR组中36％无肿瘤。

如图3E所示，在第120天，用RES499细胞再次攻击无肿瘤小鼠。再攻击后的肿瘤发生率基于初始治疗而变化。如图3F所示，年龄匹配的未治疗小鼠在第7天显示出100％的发病率，而用仅放射治疗的小鼠和在放射后接受αCD40治疗的小鼠在肿瘤再攻击后第25天分别显示出50％和25％的发病率。

本实施例显示用αCD40治疗增强了具有免疫疗法抗性肿瘤的小鼠中与放疗相关的存活情况和治愈情况。再攻击实验显示针对免疫疗法抗性肿瘤的适应性记忆反应增加。

实施例4-放疗联合序贯αCD40减少了远端RES499黑色素瘤肿瘤的生长

本实施例评估了在放射(IR)后的αCD40施用延迟对放疗和αCTLA-4疗法有抗性的肿瘤的远端肿瘤生长的能力。

如图4A所示，RES499肿瘤系由对放疗联合αCTLA-4疗法的全身效应无响应的肿瘤产生。如图4B所示，这些细胞对IR和αCTLA-4疗法具有抗性，其中肿瘤大小在接受放射和αCTLA-4疗法两者的小鼠中快速增加。这些细胞的抗性是由于升高的IFNγ信号传导。如图4C所示，这些细胞中升高的IFNγ信号传导导致肿瘤细胞中PDL1的表达增加。

C57BL/6小鼠在第0天在右胁腹皮下注射0.2×10⁶个RES499黑色素瘤细胞(索引肿瘤；经照射的)以及在第4天左胁腹皮下注射0.1×10⁶个RES499黑色素瘤细胞(远端肿瘤；未经照射的)。在第7-9天，当原发性肿瘤可触知时，将动物随机分配到不同的治疗组。对于治疗，从第7-9天用3个20Gy的级分(每天1个级分)照射小鼠。如图4D所示，在第12天、第14天和第18天施用αCD40(3×100μg)。

图4E显示了治疗对远端肿瘤中的平均肿瘤体积的影响。接受放射治疗和αCD40治疗两者的小鼠的肿瘤生长速率比接受仅放射或连同αCTLA-4治疗的放射的小鼠低得多。

图4F显示了30天内治疗小鼠和对照小鼠中的索引(原发性)肿瘤的总肿瘤生长。与未治疗的肿瘤生长相比，响应于消融放射剂量，在所有经照射的小鼠中原发性索引肿瘤生长有所减少(p<0.0001)。在接受仅放射的小鼠中，远端肿瘤显示了大量肿瘤生长。然而，接受IR和αCD40治疗的组合的小鼠的远端肿瘤生长显著减少(p<0.001)。在第30天，与用仅IR治疗的小鼠相比，用IR和αCD40两者治疗的小鼠中的远端肿瘤生长减少高达64％(p<0.0001)。

该实验表明，IR和αCD40治疗的组合显著降低了免疫疗法抗性肿瘤系中原发性和远端肿瘤的生长。

实施例5-αCD40诱导肿瘤中CD103⁺树突细胞中的共刺激分子和1型炎症

本实施例评估了全身αCD40疗法联合放射(IR)对肿瘤浸润宿主细胞的效果。

在第二剂αCD40之后三天，切除肿瘤，死后用IV型胶原酶和DNase的混合物消化。在37℃下消化30分钟后，使细胞通过70μm过滤器。对细胞进行细胞表面和胞质蛋白染色。然后通过流式细胞术分析细胞，并将zombie IR(Thermo Fisher)作为活力染料。

如图5A-5D所示，与IR治疗组相比，衍生自接受αCD40和IR组合的小鼠的肿瘤浸润性CD103⁺树突细胞(DC)中的共刺激标志物(4-1BBL、CD40和CD86)和1型炎症(TNF-α)显著增加(p<0.5)。

激动剂CD40抗体也影响骨髓来源的未成熟抑制细胞(Ly6C高CD11b⁺)。如图5E-5F所示，与用仅放射治疗的小鼠相比，当衍生自用放射和αCD40两者治疗的小鼠时，骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)显示共刺激标记物CD80和4-1BBL的增加。此外，用放射和αCD40两者治疗还导致MDSC中1型炎症标志物的增加，如图5G中TNFα水平的增加所示。最后，这些小鼠也表现出抗原呈递的增加，如图5H所示的MHC⁺MDSC的百分比增加所证实。

诱导型一氧化氮合成酶(INOS)是骨髓和DC的细胞杀伤效应物。与用仅放射治疗相比，用αCD40治疗显著增加了CD103⁺DC、MDSC和髓样细胞总库中的INOS水平(图5I-5K)。NOS的胞质水平的增加表明先天宿主细胞的肿瘤杀伤功能增加。

实施例6-αCD40诱导共刺激分子并下调引流淋巴结中的免疫抑制功能

本实施例评估了全身αCD40疗法联合放射(IR)对引流淋巴结(DLN)中浸润宿主细胞的效果。

在第二剂αCD40之后三天，收获DLN并且使细胞通过40μm过滤器。对细胞进行细胞表面和胞质蛋白染色。然后通过流式细胞术分析细胞，并将zombie IR(Thermo Fisher)作为活力染料。

如图6A-6B所示，在总CD11b⁺白细胞及其亚群中，活化相关的共刺激分子CD86和CD40有所增加(p<0.01-0.001)。如图6C所示，与未治疗的小鼠相比，接受αCD40治疗的小鼠中PDL1水平增加，并且在经照射的小鼠与接受放射和αCD40两者治疗的小鼠之间，PDL1水平显著增加。此外，αCD40治疗还影响DLN中的免疫抑制功能。与用仅放射治疗的小鼠相比，用放射和αCD40治疗的小鼠中CD11b⁺细胞中的IL6水平显著降低(图6D，p<0.01)。IL6信号传导在驱动放射的免疫抑制作用中是关键的。

如图6E所示，粒细胞性MSDC(PM-MDSC)显示用放射和αCD40两者治疗后DLN中的CD11b⁺细胞百分比降低。如图6F所示，与用仅放射治疗的组相比，这些细胞还显示出抗原呈递能力的增加(p<0.0001)。此外，与接受仅放射的小鼠相比，用αCD40和放射两者治疗的小鼠中MHCII高髓样MDSC的浸润增加(图6G-6H)。结果表明，虽然联合治疗促进了DC和髓样细胞的活化和功能感受态(functional competence)，但未成熟和抑制性抑制细胞被切换到它们的活化和抗原呈递状态。

实施例7-αCD40联合IR治疗增强了远端肿瘤中的CD8效应物功能

本实施例评估了序贯αCD40治疗对CD8效应物功能的效果。

在αCD40+IR治疗的肺中的T细胞的表征显示，当与仅IR治疗的组相比时，效应细胞毒性CD8 T细胞的频率和功能感受态增加。

通过测量CD8细胞的频率和作为有效抗肿瘤免疫应答标志物的CD4/CD8比率，评估肿瘤中的CD8比例。αCD40治疗影响肿瘤中的CD8比例。当与接受仅放射的小鼠相比时，衍生自接受联合治疗的小鼠的肿瘤中的CD8数目显著减少。这都随着CD8频率的增加以及CD4/CD8比率的降低而增加(图7A-7B，p<0.01)。此外，如图7C所示，当与接受仅放射的小鼠相比时，在衍生自接受αCD40治疗和放射两者的小鼠的肿瘤中也观察到CD4辅助细胞中调节T细胞比例的降低。

使用功能性IFNγ⁺细胞的频率和增加的增殖细胞评估CD8细胞的功能。如图7D-7E中所示，αCD40治疗增加了IFNγ⁺ CD8细胞的百分比和IFNγ⁺ CD8细胞的平均荧光强度(MFI)两者。当比较未经照射的小鼠和比较经照射的小鼠时，都发生这种增加。接受放射和αCD40治疗的小鼠具有IFNγ⁺ CD8细胞的最大百分比和IFNγ⁺细胞的最高MFI。此外，如图7F-7G所示，放射后施用αCD40增加了指示高度增殖CD8细胞的Ki67⁺高细胞的比例。IFNγ⁺ CD8的频率和IFNγ⁺ CD8细胞的增殖的增加证明肿瘤中的骨髓活化与功能性CD8细胞的同时增加相关。

实施例8-αCD40和IR联合治疗增强了引流淋巴结中的CD8效应物功能

本实施例评估了αCD40治疗联合放射对引流淋巴结(DLN)的远端肿瘤中的CD8效应物功能的效果。

αCD40和放射治疗对小鼠中CD8效应物功能的效果在远端肿瘤DLN中测量。如图8A所示，与接受仅放射的小鼠相比，接受αCD40和放射两者的小鼠中CD4/CD8比率降低。

这是由于细胞的高度活化状态，该状态通过图8B-8C中描述的Ki67⁺细胞和CD44⁺细胞的增加来确定。此外，图8D-8E中描述的CD8和天然杀伤(NK)细胞的DLN浸润的增加也提示产生了有效的抗肿瘤免疫。与接受仅放射的小鼠相比，接受αCD40治疗和放射治疗的小鼠中DLN区室的CD45⁺库(pool)中的T细胞比例显著降低(p<0.0001，图8D)。增加的CD8⁺比例提示效应物CD8功能增加。这通过IFNγ⁺细胞的增加(如图8G中所示)和增殖Ki67⁺ CD8细胞的显著增加(p<0.01)(如图8B所示)进一步加强。此外，DLN中Ki67高CD8⁺细胞的增加提示了有效的抗原呈递。如图8F所示，与接受仅放射的组相比，接受αCD40治疗和放射两者的组中FOXP3⁺ CD4细胞的活化显著增加。当比较肿瘤细胞与已经接受αCD40治疗的肿瘤细胞时，FOXP3⁺细胞也显著增加。如图8H所示，接受αCD40和放射治疗的小鼠显示CD62L⁺ CD44⁺细胞增加，表明中枢记忆增加。与IR组相比，IR+αCD40组中CD8 T细胞功能的增加表明通过CD40激动作用的骨髓活化通过增强的CD8增殖和感受态转化为有效的抗肿瘤免疫功能。

实施例9-IR消融后序贯施用αCD40抑制了荷瘤小鼠中的转移性疾病和相关死亡

本实施例使用鼠正交异性乳腺肿瘤细胞系4T1评估αCD40施用联合放射治疗对转移性癌症的效果。放射治疗包括电离放射(IR)和消融后调节(PAM，每天4剂0.5Gy IR剂量)。

将0.2×10⁶个4T1细胞注射到BALB/c小鼠(与4T1同源)的乳腺脂肪垫中。在第7天，将具有可触知肿瘤的小鼠随机分成5组：对照(未经照射的)、IR(20Gy×3)+PAM(0.5Gy×4)和IR(20Gy×3)+PAM+αCD40。在第7-9天照射小鼠并在IR后(第10、14和18天)给予αCD40。在第10-13天给予0.5Gy×4剂量(PAM)。多次记录肿瘤体积和存活情况。治疗方案如图9A所示。

如图9B-9C所示，当与放疗联合时，αCD40显著抑制转移性事件并改善总体小鼠存活情况。IR+PAM+αCD40组中15只小鼠的73％存活至肿瘤细胞注射后的100天。所有未经照射的小鼠在肿瘤细胞注射后的40天前死亡。

本实施例表明，在转移性模型中，用放射和αCD40的序贯治疗可有效治疗转移性疾病并抑制死亡。

实施例10-用消融后调节(PAM)和附加疗法治疗癌症

本实施例使用鼠黑色素瘤系B16F10和RES499(检查点抗性系)评估了αCD40施用联合放射治疗对远端(未经照射的)肿瘤生长的效果。放射治疗包括电离放射(IR)。

C57BL/6小鼠在第0天在右胁腹皮下注射0.2×10⁶个RES499和B16黑色素瘤细胞(索引肿瘤；经照射的)以及在第4天左胁腹皮下注射0.1×10⁶个RES499细胞(远端肿瘤；未经照射的)。在第7-9天，当原发性肿瘤可触知时，将动物随机分配到不同的治疗组。对于治疗，从第7-9天用3个20Gy的级分(每天1个级分)照射小鼠。如图10A所示，在第12天、第14天和第18天施用αCD40(3×100μg)。也多次记录了索引和原发性肿瘤的肿瘤体积和存活情况。治疗方案如图10A所示。

与仅放射治疗的小鼠相比，用αCD40治疗的小鼠显示了较低的肿瘤体积和较高的存活率(图10B)。在使用B16F10的鼠黑色素瘤模型(图10B，上图)和使用RES499的检查点抗性系鼠黑色素瘤模型中(图10B，下图)都观察了到这种效果。

本实施例表明，在黑色素瘤模型和检查点抗性肿瘤中，用放射和αCD40疗法的序贯治疗可有效抑制肿瘤生长。

实施例11-用消融后调节(PAM)和附加疗法治疗癌症

患有癌症的患者可遵循图11中所示的疾病和治疗进展。患者被诊断患有癌症。用标准低分割疗法(hypo-fractionated therapy)治疗患者，然后用PAM和附加疗法联合治疗。附加疗法可以是αCD40疗法。然后监测患者。如果发生转移性疾病，则用PAM和附加疗法治疗整个转移性部位。与常规治疗方法相比，这可以改善存活情况。

实施例12-抗CD40疗法在经或未经照射的小鼠中将肿瘤浸润性T细胞(PD1intEomesS低)的耗竭逆转至GrBZ+Ki67+亚群

本实施例评估了抗CD40疗法对肿瘤浸润细胞衰竭的效果。实验方案如图12A所示。C57BL/6小鼠在第0天在右胁腹(索引肿瘤；经照射的)以及在第4天左胁腹(远端肿瘤；未经照射的)皮下注射0.2×10⁶个RES499细胞。在第7-9天，当原发性肿瘤可触知时，将动物随机分配到不同的治疗组。对于治疗，从第7-9天开始用20Gy的3个级分(每天1个级分)照射小鼠。在第12天、第14天和第18天施用αCD40(3×100ug)。

IR已经显示在放疗期间诱导T细胞耗竭。仅IR组显示早期耗竭细胞(PD1intEomeshi)中功能亚型的最小群体(GrB+KI67high)。在IR+抗CD40组中，耗竭群体的功能亚型显著增加(p<0.05)。早期耗竭由PD1中间和EOMES低CD8细胞(PD1intEomeshi)标记。抗CD40+IR联合组增加了库中的Ki67(增殖)高GRZ+(粒酶分泌)群体，表明了耗竭表型的逆转(图12B-12C)。

实施例13-介导抗CD40和IR治疗的免疫细胞的耗竭。

进行耗竭实验以研究免疫细胞的不同亚群在介导抗CD40和IR联合的治疗效果中的作用。实验方案如图13A所示。在第0-4天注射抗CD8抗体、抗CD11b抗体、抗LY6C抗体，并且在每第4天注射直到实验终止。

对于免疫表型研究，在肿瘤接种后第17天，死后切除肿瘤，并使用IV型胶原酶和DNase的混合物解离。在37℃下消化30分钟后，使细胞通过70μm过滤器。对细胞进行细胞表面和胞质蛋白染色，并如前所述通过流式细胞术进行分析，并将zombie IR(ThermoFisher)作为活力染料。

为了研究CD8 T细胞在IR+抗CD40联合组的治疗功效中的作用，使用抗CD8抗体来耗竭C57BL6小鼠中的CD8细胞。如图13B所示(中间图)，IR+抗CD40联合中的肿瘤生长延迟在抗CD8耗竭的小鼠中部分逆转。

纯合无胸腺裸小鼠缺乏T细胞并且受到细胞介导免疫的缺乏的困扰。纯合裸鼠也显示B细胞发育的部分缺陷。如图13B(下图)所示，在裸鼠实验中也观察到类似的结果，其中与单独IR组相比，联合的效果不显著。这些结果表明IR+抗CD40联合的治疗效果是部分由CD8细胞介导。

为了进一步观察哪个抗原呈递和加工群体库对联合组(IR+抗CD40)的治疗益处有贡献，在C57BL6小鼠中LY6C和CD11b群体被耗竭。已知Ly6C高髓样细胞与树突细胞一起是关键的交叉呈递APC。虽然在IgG对照组中观察到的肿瘤生长延迟在CD11b耗竭的小鼠中部分逆转，但Ly6c耗竭完全逆转(p<0.05)了肿瘤生长延迟(图13C)。Ly6C+髓样细胞被证明在交叉呈递中是高效的。

虽然本文已经示出和描述了本发明的优选实施例，但是对于本领域的技术人员显而易见的是，这些实施例仅作为示例提供。在不脱离本发明的情况下，本领域的技术人员将想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实施本发明时可以采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案。

本说明书中提及的所有出版物、专利申请、授权专利和其他文献通过引用并入本文，如同每个单独的出版物、专利申请、授权专利或其他文献被具体地和单独地指明通过引用以其整体并入。在通过引用并入本文的文本中包含的定义在与本公开中的定义相矛盾时被排除。

Claims (84)

1.一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少1天施用。

2.一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用树突细胞活化分子，其中所述个体已经接受一定剂量的放射疗法，并且其中在已经施用所述放射疗法后至少1天施用所述树突细胞活化分子。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少2天施用。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少3天施用。

5.根据权利要求1或4中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的所述剂量包括放射疗法的多个剂量。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述放射疗法是外部射束放射疗法。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述外部射束放射疗法选自：三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法、中子束疗法及其组合。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的所述剂量包括至少约2Gy。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的所述剂量包括至少约2Gy且不超过约20Gy。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少3天施用。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少5天施用。

12.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少7天施用。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子诱导未成熟树突细胞的成熟。

14.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。

15.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。

16.根据权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。

17.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。

18.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。

19.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240、CDX-1140或SEA-CD40。

22.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。

23.根据权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中将所述树突细胞活化分子施用于用所述放射疗法的所述剂量治疗的肿瘤。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或所述癌症是实体组织肿瘤或癌症。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述实体组织肿瘤或癌症是乳腺的实体组织肿瘤或癌症、前列腺的实体组织肿瘤或癌症或黑色素瘤。

27.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或癌症对检查点抑制剂疗法具有抗性。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述检查点抑制剂疗法包括抗PD1、抗PDL1或抗CTLA4。

29.一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用一定剂量的基于能量的疗法和树突细胞活化分子，其中所述一定剂量的所述基于能量的疗法选自不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

30.一种治疗个体中的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用树突细胞活化分子，其中所述个体已经施用了一定剂量的基于能量的疗法，其中所述一定剂量的所述基于能量的疗法选自不可逆电穿孔(IRE)、微波、低强度聚焦超声(LOFU)、高强度聚焦超声(HIFU)、射频能量和冷冻疗法。

31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述基于能量的疗法的所述剂量包括基于能量的疗法的多个剂量。

32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述基于能量的疗法是不可逆电穿孔(IRE)。

33.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述基于能量的疗法是微波疗法。

34.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述基于能量的疗法是低强度聚焦超声(LOFU)。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述LOFU在治疗区域中以10W/cm²至1000W/cm²的强度施用。

36.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述基于能量的治疗是高强度聚焦超声(HIFU)。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述HIFU在治疗区域以1,000W/cm²至10,000W/cm²的强度施用。

38.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述基于能量的疗法是冷冻疗法。

39.根据权利要求29至38中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述基于能量的疗法的所述剂量后至少3天施用。

40.根据权利要求29至38中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述基于能量的疗法的所述剂量后至少5天施用。

41.根据权利要求29至38中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述基于能量的疗法的所述剂量后至少7天施用。

42.根据权利要求29至41任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。

43.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。

44.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。

45.根据权利要求29至41任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。

46.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。

47.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。

48.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。

49.根据权利要求48所述的方法，其中所述CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240、CDX-1140或SEA-CD40。

51.根据权利要求29至41中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。

52.根据权利要求29至41任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。

53.根据权利要求29至52中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子施用于用所述基于能量的疗法的所述剂量治疗的肿瘤。

54.根据权利要求29至52中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或所述癌症是实体组织肿瘤或癌症。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述实体组织肿瘤或癌症是乳腺的实体组织肿瘤或癌症、前列腺的实体组织肿瘤或癌症或黑色素瘤。

56.根据权利要求29至52中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或癌症对检查点抑制剂疗法具有抗性。

57.根据权利要求56所述的方法，其中所述检查点抑制剂疗法包括抗PD1、抗PDL1或抗CTLA4。

58.一种在个体中增加向在所治疗的肿瘤远侧的肿瘤中的T细胞浸润的方法，所述方法包括向所述个体施用一定剂量的放射疗法和树突细胞活化分子，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少1天施用。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少2天施用。

60.根据权利要求58所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在施用所述放射疗法后至少3天施用。

61.根据权利要求58至60中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的剂量包括放射疗法的多个剂量。

62.根据权利要求58至61中任一项所述的方法，其中所述放射疗法是外部射束放射疗法。

63.根据权利要求58至62中任一项所述的方法，其中所述外部射束放射疗法选自：三维适形放射疗法、强度调制放射疗法、图像引导放射疗法、立体定向放射疗法、术中放射疗法、质子束疗法、中子束疗法及其组合。

64.根据权利要求58至62中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的所述剂量包括至少约2Gy。

65.根据权利要求58至62中任一项所述的方法，其中所述放射疗法的所述剂量包括至少约2Gy且不超过约20Gy。

66.根据权利要求58至65中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少3天施用。

67.根据权利要求58至65中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少5天施用。

68.根据权利要求58至65中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子在所述放射疗法的所述剂量后至少7天施用。

69.根据权利要求58至68任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子激活未成熟树突细胞的成熟。

70.根据权利要求58至68中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子通过toll样受体、NOD样受体、RIG-1或MDA-5受体、C型凝集素受体、共刺激分子、细胞因子受体或STING途径来激活树突细胞活化。

71.根据权利要求58至68中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的toll样受体激动剂：CpG寡核苷酸、SD-101、LFX453、咪喹莫特、卡介苗(BCG)、单磷酰脂质A、聚ICLC、GSK1795091及其组合。

72.根据权利要求58至69任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的NOD样受体激动剂：细菌肽聚糖、iE-DAP的酰化衍生物(C12-iE-DAP)、D-γ-Glu-mDAP(iE-DAP)、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)、胞壁酰二肽(MDP)、胞壁酰三肽、L18-MDP、M-TriDAP、莫拉布胺、PGN-ECndi、PGN-ECndss、PGN-SAndi、N-乙醇酰化胞壁酰二肽、莫拉布胺及其组合。

73.根据权利要求58至69中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的RIG-1或MDA-5受体激动剂：poly(I:C)、Poly(dA:dT)、Poly(dG:dC)、3p-hpRNA、5′ppp-dsRNA及其组合。

74.根据权利要求58至69中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的C型凝集素受体激动剂：β-1,3-葡聚糖、酵母聚糖、热杀死的白色假丝酵母、索状因子和海藻糖-6,6-二山嵛酸酯及其组合。

75.根据权利要求58至69中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的共刺激分子激动剂：CD40激动剂、CD80激动剂、CD86激动剂、OX40激动剂及其组合。

76.根据权利要求75所述的方法，其中所述CD40激动剂是抗CD40激动性抗体。

77.根据权利要求76所述的方法，其中所述抗CD40激动性抗体包括达西组单抗、CP-870,893、ADC-1013、2141-v11、APX005M、Chi Lob 7/4、BG9588(NIAMS)、CFZ533、PG10、BMS-986004、卢卡木单抗、HCD122、JNJ-64457107、塞鲁单抗、ASKP1240或SEA-CD40。

78.根据权利要求58至69中任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的细胞因子：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)及其组合。

79.根据权利要求58至69任一项所述的方法，其中所述树突细胞活化分子是选自以下的STING激动剂：2',3'-cGAMP(CAS编号，1441190-66-4)、4-[(2-氯-6-氟苯基)甲基]-N-(呋喃-2-基甲基)-3-氧代-1,4-苯并噻嗪-6-甲酰胺、MK-1454、ADU-S100/MIW815、SRCB-0074、SYNB1891、E-7766或SB11285及其组合。

80.根据权利要求58至79中任一项所述的方法，其中将所述树突细胞活化分子施用于用所述放射疗法的所述剂量治疗的肿瘤。

81.根据权利要求58至80中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或所述癌症是实体组织肿瘤或癌症。

82.根据权利要求81所述的方法，其中所述实体组织肿瘤或癌症是乳腺的实体组织肿瘤或癌症、前列腺的实体组织肿瘤或癌症或黑色素瘤。

83.根据权利要求58至80中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或癌症对检查点抑制剂疗法具有抗性。

84.根据权利要求83所述的方法，其中所述检查点抑制剂疗法包括抗PD1、抗PDL1或抗CTLA4。

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